RU2813670C1 - Способ дифференциальной диагностики типа рака желудка методом иммуногистохимического тестирования - Google Patents
Способ дифференциальной диагностики типа рака желудка методом иммуногистохимического тестирования Download PDFInfo
- Publication number
- RU2813670C1 RU2813670C1 RU2023120468A RU2023120468A RU2813670C1 RU 2813670 C1 RU2813670 C1 RU 2813670C1 RU 2023120468 A RU2023120468 A RU 2023120468A RU 2023120468 A RU2023120468 A RU 2023120468A RU 2813670 C1 RU2813670 C1 RU 2813670C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- subtype
- gastric cancer
- cdx2
- positive
- cadherin
- Prior art date
Links
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 title claims abstract description 68
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 66
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 63
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108091034120 Epstein–Barr virus-encoded small RNA Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108010083123 CDX2 Transcription Factor Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 102000006277 CDX2 Transcription Factor Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 101001133081 Homo sapiens Mucin-2 Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102100034263 Mucin-2 Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 101000972282 Homo sapiens Mucin-5AC Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102100022496 Mucin-5AC Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102100034157 DNA mismatch repair protein Msh2 Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 101001134036 Homo sapiens DNA mismatch repair protein Msh2 Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 229910015837 MSH2 Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 108010026664 MutL Protein Homolog 1 Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102100021147 DNA mismatch repair protein Msh6 Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 101000968658 Homo sapiens DNA mismatch repair protein Msh6 Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 108010074346 Mismatch Repair Endonuclease PMS2 Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 101000934372 Homo sapiens Macrosialin Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102100025136 Macrosialin Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108090000599 Claudin-3 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 102000008071 Mismatch Repair Endonuclease PMS2 Human genes 0.000 claims abstract 3
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 claims abstract 2
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 claims abstract 2
- 102000013609 MutL Protein Homolog 1 Human genes 0.000 claims abstract 2
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 claims abstract 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 49
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 39
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 claims description 22
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 16
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 claims description 12
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 claims description 12
- 102100028843 DNA mismatch repair protein Mlh1 Human genes 0.000 claims description 9
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 6
- 102100038423 Claudin-3 Human genes 0.000 claims description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 claims 1
- 108090000600 Claudin-1 Proteins 0.000 abstract description 2
- 108090000601 Claudin-4 Proteins 0.000 abstract description 2
- 101710192602 Latent membrane protein 1 Proteins 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 102000004162 Claudin-1 Human genes 0.000 abstract 1
- 102000004106 Claudin-3 Human genes 0.000 abstract 1
- 102000004161 Claudin-4 Human genes 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 20
- 208000032818 Microsatellite Instability Diseases 0.000 description 19
- 239000000463 material Substances 0.000 description 15
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 14
- 108010078814 Tumor Suppressor Protein p53 Proteins 0.000 description 10
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 10
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 102100025354 Macrophage mannose receptor 1 Human genes 0.000 description 7
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 7
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 7
- 208000031448 Genomic Instability Diseases 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 6
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 5
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 5
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 5
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 4
- 101000972278 Homo sapiens Mucin-6 Proteins 0.000 description 4
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 4
- 102100037480 Mismatch repair endonuclease PMS2 Human genes 0.000 description 4
- 102100022493 Mucin-6 Human genes 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 102100034580 AT-rich interactive domain-containing protein 1A Human genes 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 101000924266 Homo sapiens AT-rich interactive domain-containing protein 1A Proteins 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 101150080074 TP53 gene Proteins 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 201000006585 gastric adenocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000006607 hypermethylation Effects 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 3
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 108091029523 CpG island Proteins 0.000 description 2
- 230000026641 DNA hypermethylation Effects 0.000 description 2
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 2
- 101000577853 Homo sapiens DNA mismatch repair protein Mlh1 Proteins 0.000 description 2
- -1 PIK3A Proteins 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 2
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 2
- 101150084399 37 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100274572 Arabidopsis thaliana CLH2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101150041972 CDKN2A gene Proteins 0.000 description 1
- 208000009458 Carcinoma in Situ Diseases 0.000 description 1
- 208000037051 Chromosomal Instability Diseases 0.000 description 1
- 102100040836 Claudin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100038447 Claudin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108010009392 Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor p16 Proteins 0.000 description 1
- 102100024458 Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A Human genes 0.000 description 1
- 102100032218 Cytokine-inducible SH2-containing protein Human genes 0.000 description 1
- 230000007067 DNA methylation Effects 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 206010061968 Gastric neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010051066 Gastrointestinal stromal tumour Diseases 0.000 description 1
- 101000943420 Homo sapiens Cytokine-inducible SH2-containing protein Proteins 0.000 description 1
- 101000605639 Homo sapiens Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform Proteins 0.000 description 1
- 208000015710 Iron-Deficiency Anemia Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 101150110531 MLH1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000035346 Margins of Excision Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 206010027457 Metastases to liver Diseases 0.000 description 1
- 208000002454 Nasopharyngeal Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 1
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000003993 Phosphatidylinositol 3-kinases Human genes 0.000 description 1
- 102100038332 Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform Human genes 0.000 description 1
- 241001510071 Pyrrhocoridae Species 0.000 description 1
- 101150111584 RHOA gene Proteins 0.000 description 1
- 230000006093 RNA methylation Effects 0.000 description 1
- 102100023085 Serine/threonine-protein kinase mTOR Human genes 0.000 description 1
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 101710173511 Tensin homolog Proteins 0.000 description 1
- 102100022387 Transforming protein RhoA Human genes 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 208000036878 aneuploidy Diseases 0.000 description 1
- 231100001075 aneuploidy Toxicity 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 101150083915 cdh1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000009096 combination chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000012303 cytoplasmic staining Methods 0.000 description 1
- 230000002435 cytoreductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- CNZOFNMWZBNPLL-OSKRVHINSA-L flot regimen Chemical compound [Pt+4].[O-]C(=O)C([O-])=O.[NH-][C@H]1CCCC[C@@H]1[NH-].FC1=CNC(=O)NC1=O.O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)C(O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 CNZOFNMWZBNPLL-OSKRVHINSA-L 0.000 description 1
- 238000013110 gastrectomy Methods 0.000 description 1
- 201000011587 gastric lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 201000011243 gastrointestinal stromal tumor Diseases 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 201000004933 in situ carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 201000010879 mucinous adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 201000011216 nasopharynx carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000002120 neuroendocrine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 108700042657 p16 Genes Proteins 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 201000010198 papillary carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108010087917 rhoA GTP Binding Protein Proteins 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 201000007423 tubular adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 238000007482 whole exome sequencing Methods 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ классификации молекулярных подтипов рака желудка методом иммуногистохимического тестирования предполагает оригинальный алгоритм пошагового иммуногистохимического тестирования рака желудка, включающий панель из следующих маркеров: MSH2, MSH6, MLH1, PMS2, MUC2, CDX2, MUC5AC, CD10, E-кадгерин, β-катенин, Клаудин-1, Клаудин-3, Клаудин-4, CD44, LMP-1, EBER, р53, PD-L1, CD4, CD8, CD68, CD1a. Способ позволяет выделить 5 молекулярных подтипов рака желудка со значимо различимыми клинико-морфологическими и прогностическими характеристиками. Алгоритм предусматривает выделение на первом этапе MMR-негативного подтипа, на втором этапе EBER-позитивного подтипа, далее – Е-кадгерин-аберрантного подтипа, далее CDX2-позитивного подтипа и CDX2-негативного подтипа, поскольку в данном варианте различия между подтипами имеют наибольшую значимость (р=0,001). Изобретение расширяет арсенал средств диагностики рака желудка. 3 з.п. ф-лы, 6 ил., 1 табл., 2 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области медицины, а именно к способу, используемому для определения принадлежности карцином желудка к молекулярным подтипам с целью персонификации терапии онкологических пациентов и прогноза выживаемости.
Уровень техники
Рак желудка является одним из наиболее распространенных онкологических заболеваний, занимающим значительное место в структуре заболеваемости и смертности. Выявляемость рака желудка в запущенных стадиях остается высокой (IV стадия) – 40,4%. Примерно у такого же числа больных дальнейшее прогрессирование опухоли наблюдается после лечения. В итоге у 85% больных сразу или в течение 3 лет болезнь переходит в метастатическую форму. Это определяет неблагоприятный прогноз заболевания. В связи с большим количеством генерализованных форм рака желудка пересматриваются диагностические аспекты, в частности подходы классификации.
Первые классификации рака желудка, основанные на данных генетики предложены в 2014 (TCGA) и 2015 (ACRG) годах. Для адаптации молекулярно-генетических классификаций к рутинной практике несколькими группами были предложены их иммунофенотипические аналоги (Gonzales R.S., et al. 2016; Setia N., et al. 2016; Diaz Del Arco C., et al. 2018; Di Pinto F, et al. 2020), однако большинство из них выполнены методом тканевых микрочипов и не учитывают гетерогенность опухоли. Лишь в двух работах авторы использовали полноразмерный операционный материал, но эти исследования выполнены на крайне малой выборке пациентов (58 и 60 случаев соответственно), что не позволяет получить надежных и воспроизводимых результатов.
Из уровня техники известна молекулярно-генетическая классификация Атлас карциномого генома (The Cancer Genome Atlas, TCGA), опубликованная в 2014 году ("Cancer Genome Atlas Research Network. Comprehensive molecular characterization of gastric adenocarcinoma." Nature, 2014, 513(7517): 202-9). Исследователи из группы TCGA изучали образцы от 295 пациентов с раком желудка, не подвергавшихся предоперационной химио- и лучевой терапии, путем проведения полноэкзомного секвенирования, анализа количества копий генов, метилирования ДНК, РНК, микросателитной нестабильности и полногеномного секвенирования (на отдельной выборке опухолей).
Группа TCGA предложила систему, которая подразумевает выделение 4 подтипов рака желудка: подтип позитивный на вирус Эпштейна-Барр (Epstein-Barr virus positive, EBV), подтип с микросателлитной нестабильностью (microsatellite instability, MSI), геномно-стабильный подтип (genomic stability, GS) и хромосомно нестабильный подтип (chromosome instability, CIN) [28]. Опухоли из EBV-подтипа составили 9% от исследованных случаев, и характеризовались высоким уровнем метилирования CpG-островков генома, а также наиболее высокими уровнями гиперметилирования ДНК. Данные результаты согласуются с полученными ранее данными о наличии гиперметилирования ДНК в EBV-позитивных раках желудка. Все образцы из данной группы демонстрировали высокий уровень гиперметилирования промотора гена CDKN2A (p16INK4A), однако при этом гиперметилирование гена MLH1 отсутствовало. Также в данной группе была выявлена наиболее высокая частота мутаций PIK3CA (80%), высокая частота мутаций ARID1A (55%). Мутации TP53 выявлялись редко. Другой интересной особенностью данной группы в контексте таргетной терапии была гиперэкспрессия сигнатур (PD-L)1/2 в комбинации с усиленной экспрессией сигнатур иммунной сигнализации. Второй подтип карцином желудка - подтип с микросателлитной нестабильностью (MSI) характеризовался наличием большого количества разнообразным мутаций. Такие опухоли составили 22% от общего числа образцов. Для данного подтипа характерен высокий уровень метилирования CpG-островков генома, включая гиперметилирование промотора MLH1, в отличие от предыдущего подтипа. Мутационный анализ выявил в данном подтипе 37 мутаций генов, среди которых были TP53, KRAS, PIK3A, ARID1A, в то время как другие подтипы рака желудка демонстрировали мутации лишь в 25 генах. Оставшиеся 69% случаев были разделены на основании наличия большого количества аббераций соматических копий генов на GS-подтип (20%) и CIN-подтип (50%). GS-подтип включал в себя преимущественно раки желудка с диффузной морфологией и наибольшую частоту мутаций гена CDH1, что соответствует диффузному подтипу рака желудка по классификации P. Lauren. В GS-подтипе была повышена частота мутаций гена RHOA (ras homolog family member A) и часто встречался химерный ген CLDN18-ARHGAP, а также повышенная экспрессия генов белков клеточной адгезии. Опухоли подтипа CIN составляли 50% от всех образцов. В данной группе выявлена выраженная анеуплоидия, а также амплификация генов рецепторов тирозинкиназ (RTK), высокая доля мутаций TP53 и преимущественно кишечная морфология. Однако известное решение мало применимо в повседневной клинической практике ввиду большой трудоемкости и дороговизне использованных методов. Также остается неясным возможно ли использование новых молекулярных классификаций для коренных изменений в тактике лечения пациентов и улучшения выживаемости данной группы больных. В классификации TCGA нет данных о связи молекулярных подтипов с классическими гистологическими подтипами рака желудка, не выявлено четкой связи между топографией опухоли и молекулярным подтипом, не получена связь с выживаемостью пациентов.
Из уровня техники известна ещё одна молекулярно-генетическая классификация рака желудка, предложенная Азиатской ассоциацией по изучению рака (The Asian Cancer Research Group, ACRG), также выделяет 4 подтипа: a) опухоли с MSI; b) опухоли без MSI и c мутацией в TP53, c) опухоли без MSI и без мутации в TP53 и d) опухоли без MSI, содержащие клетки в состоянии эпителиально-мезенхимальной трансформации (R. Cristescu, J. Lee, et al. (2015). "Molecular analysis of gastric cancer identifies subtypes associated with distinct clinical outcomes." Nat Med 21(5): 449-56). В исследование ACRG вошел материал от 300 пациентов с первичными аденокарциномами желудка и выполнено полногеномное секвенирование (49 случаев), анализ уровня экспрессии генов, целевое секвенирование отдельных генов, исследование числа копий генов. В исследовании ACRG предложена альтернативная молекулярная классификация рака желудка. Предполагается разделять все раки желудка на MSI-подтип, микросателлитно-стабильный подтип с признаками эпителиально-мезенхимной трансформации (MSS/EMT-подтип), микросателлитно-стабильный подтип TP53+ (MSS/TP53+) и микросателлитно-стабильный подтип TP53- (MSS/TP53-). Опухоли MSI-подтипа составили 23% исследованных случаев и характеризовались большим количеством мутаций, причем в 44% образцов из этой группы выявлены мутации ARID1A, а в 42% - мутации фосфоинозитид-3 киназы и гомолога тензина (PTEN), являющихся мишенями для рапамицина (mTOR-сигнальный путь). В данном подтипе часто выявлялись мутации генов KRAS (23%) и ALK (16%). Оставшиеся опухоли, не вошедшие в MSI-подтип, были отнесены к микросателлитно-стабильным (MSS) и разделены на основании наличия экспрессии сигнатур характерных для эпителиально-мезенхимной трансформации (EMT). Опухоли, экспрессировавшие данную сигнатуру были отнесены к подтипу MSS/EMT и составили 15% от общего числа случаев. Данный подтип характеризовался наиболее низким числом мутаций генов (низкой мутационной нагрузкой). Опухоли без ЕМТ-сигнатуры подразделялись на основании активности гена TP53 на MSS/TP53+ и MSS/TP53-. В подтип MSS/TP53+ вошли 26% опухолей, причем данные опухоли чаще всех других были EBV-позитивными. Опухоли подтипа MSS/TP53- составили 36% от общей выборки и характеризовались наибольшей распространенностью мутаций гена TP53.
Подтипы рака желудка, выделенные ACRG, в отличие от подтипов TCGA, имели отличные клинические параметры и характеризовались различиями в выживаемости пациентов. К подтипу MSS/EMT относились опухоли от пациентов более молодого возраста, преимущественно с диффузной морфологией, наихудшей выживаемостью, наиболее высоким риском рецидива, в особенности перитонеальной диссеминации. Опухоли подтипа MSI локализовались преимущественно в антральном отделе желудка, чаще диагностировались на I и II стадиях, имели преимущественно кишечную морфологию, характеризовались наилучшей выживаемостью. При наличии рецидивов опухоли MSI подтипа, также как и MSS/TP53- подтипа, были ассоциированы с более высоким риском возникновения метастазов в печени, в сравнении с MSS/EMT и MSS/TP53+ подтипами. Однако классификация ACRG, также как и TCGA, мало применима в повседневной клинической практике ввиду большой трудоемкости и дороговизне использованных методов. В классификации ACRG получена только частичная связь с выживаемостью пациентов.
Из уровня техники известна классификация R. Gonzales с соавт. (R. S. Gonzalez, S. Messing, et al. (2016). "Immunohistochemistry as a surrogate for molecular subtyping of gastric adenocarcinoma." Hum Pathol 56: 16-21), созданная для того чтобы адаптировать молекулярно-генетические классификации к рутинной практике. R. Gonzales с коллегами показали возможность использования ИГХ-маркеров для классифицирования опухолей на CIN (p53) и MSI (белки MMR) и гибридизации in situ для идентификации EBV-ассоциированного подтипа. Исследователи выделили 4 группы опухолей: EBER-позитивные РЖ (7%); микросателлитно-нестабильные РЖ (MLH-негативные), (16%); хромосомно-нестабильные РЖ (p53-позитивные, EBER негативные, сохранный MLH1), (38%); геномно-стабильные (остальные случаи), (38%). Однако, указанная классификация характеризуется низкой достоверностью получаемых результатов, поскольку для анализа использован операционный материал лишь от 58 пациентов, что не позволяет получить статистически значимые результаты. В данной работе не исследованы все потенциальные прогностические маркеры рака желудка, в частности Е-кадгерин, PD-L1, CDX2.
Из уровня техники известна классификация опубликованная F. Di Pinto с соавт (F. Di Pinto, R. Armentano, et al. (2020). "Are Immunohistochemical Markers Useful in Phenotypic Gastric Cancer Classification?" Oncology 98(8): 566-574) в 2020 году. Исследование проведено на 60 случаях с использованием полноразмерного операционного материала и шестью маркерами (MLH-1, p53, HER2, E-cadherin, PD-L1, EBER). Авторы выделили 5 групп рака желудка: EBV-позитивные опухоли (EBV-подтип TCGA), MMR-дефицитные опухоли (MSI подтип TCGA), группа с гиперэкспрессией р53 и/или HER2 (что соответствует хромосомно-нестабильному (CIN) подтипу по классификации TCGA), группа с аберрантной экспрессией Е-кадегрина (что соответствует геномно-стабильному (GS) подтипу по классификации TCGA), а также пятую группу с нормальным паттерном экспрессии всех маркеров. В группу EBV-позитивных опухолей попало два случая, обе опухоли имели диффузный фенотип по P. Lauren и были PD-L1-позитивными. В группу MMR-дефицитных опухолей попало 7 случаев, 2 из которых были PD-L1 позитивными (40%). При этом среди оставшихся MMR-позитивных опухолей экспрессия PD-L1 встречалась лишь в 9,2% случаев. 80% MMR-дефицитных опухолей имели дистальную локализацию и кишечный фенотип по P. Lauren. Различия в экспрессии PD-L1 были статистически значимыми, как и различия в гистологических характеристиках. На этом основании авторы делают вывод о том, что группы EVB-позитивных и MMR-дефицитных опухолей являются кандидатами на таргетную терапию анти-PD-L1 препаратами. Группа с аберрантной экспрессией Е-кадгерина включала 8 случаев, все относились к диффузному фенотипу по P. Lauren, характеризовались большой глубиной инвазии (Т3-Т4) и наличием метастазов в лимфоузлы. В группах с нормальной экспрессией и с гиперэкспрессией р53 и/или HER2 встречались опухоли и с кишечной, и с диффузной морфологией. В данном исследовании авторы подчеркивают важность использования полноразмерных образцов операционного материала от больных раком желудка, а не ТМА. Также авторы указывают, что для определения микросателлитной нестабильности достаточно использовать один маркер (MLH-1) и описывают трудности с интерпретацией экспрессии р53. Однако, при разработке указанной классификации, как и предыдущей, использована маленькая выборка пациентов (60 случаев).
Из уровня техники известны исследования С. Díaz Del Arco (C. Díaz Del Arco, L. Estrada Muñoz, et al. (2018). "Immunohistochemical classification of gastric cancer based on new molecular biomarkers: a potential predictor of survival." Virchows Arch 473(6): 687-695), и E. Birkman (E. M. Birkman, N. Mansuri, et al. (2018). "Gastric cancer: immunohistochemical classification of molecular subtypes and their association with clinicopathological characteristics." Virchows Arch 472(3): 369-382), которые выполнены на крупных выборках пациентов (более 200). С. Díaz Del Arco и соавт. разделили рак желудка на 4 группы: тип 1, микросателлитно-нестабильные РЖ (23.5%); тип 2, E-кадгерин-негативные (6%); тип 3, стабильные (нет гиперэкспрессии р53), (53.5%); тип 4, стабильные (есть гиперэкспрессия р53), (17%). E. Birkman и соавт. выделили 3 группы: EBV-позитивные, микросателлитно-нестабильные РЖ (MSI) и р53-негативные. Однако от каждого пациента исследовался лишь 1 столбик опухоли диаметром по 1 мм. Метод ТМА не учитывает возможную гетерогенность в экспрессии маркеров, что прямо сказывается на интерпретации результатов иммуногистохимического исследования. Это является крупным недостатком данных исследований.
Наиболее близким к заявляемому является способ классификации, предложенный N.Setia и соавт. (N. Setia, A. T. Agoston, et al. (2016). "A protein and mRNA expression-based classification of gastric cancer." Mod Pathol 29(7): 772-84). В исследовании использованы образцы от 146 пациентов с раком желудка, которые были окрашены следующими маркерами: p53, MLH1, PMS2, MSH2, MSH6, E-cadherin, PD-L1, MUC2, CDX2, CD10, MUC5AC, MUC6, HER2, EBER CISH. N.Setia и соавт. выделили 5 групп EBER-позитивные РЖ (5%); РЖ с дефектом системы MMR (16%); РЖ с аберрантной экспрессией E-кадгерина (21%); РЖ с аберрантной экспрессией p53 expression (51%); РЖ c нормальной экспрессией p53, не вошедшие в другие группы (7%). Группа с аберрантной экспрессией р53 дополнительно разделена на кишечный фенотип (33%, 25/75, MUC2 и/или CD10 позитивные), желудочный фенотип (32%, 24/75, MUC5AC и/или MUC6 позитивные), смешанный фенотип (15%, 11/75, MUC2 и/или CD10 позитивные и MUC5AC и/или MUC6 позитивные), и null-фенотип (20%, 15/75, MUC2, CD10, MUC5AC и MUC6 негативные). Исследование N.Setia и соавт. выполнено методом ТМА, хотя авторы попытались компенсировать гетерогенность опухоли, использую столбики большего диаметра и увеличив их число. Исследование N.Setia и соавт. изобилует большим количеством иммуногистохимических маркеров, чего нельзя сказать об остальных работах. Однако при разработке указанной классификации использован метод ТМА, который не учитывает гетерогенность иммуногистохимического окрашивания опухоли. Авторы не получили связи выделенных подтипов с выживаемостью пациентов.
Технической проблемой, решаемой заявляемым изобретением, является создание способа классификации рака желудка, на основании комплекса морфологических и молекулярно-биологических характеристик, определяющих прогноз рака желудка.
Раскрытие изобретения
Техническим результатом изобретения является улучшение возможностей определения тактики лечения пациентов с раком желудка, определение прогностических и предиктивных характеристик опухоли, повышение точности назначаемой таргетной терапии и прогноза выживаемости (медианы выживаемости):
1. MMR-негативный подтип встречается в 8,1% случаев рака желудка и характеризуется благоприятным прогнозом (медиана 91 мес.).
2. EBER-позитивный подтип встречается в 9% случаев рака желудка, характеризуется благоприятным прогнозом (медиана 64 мес.).
3. Е-кадгерин-аберрантный подтип встречается в 17,1% случаев рака желудка, характеризуется крайне неблагоприятным прогнозом (медиана 16 мес.).
4. CDX2-позитивный подтип встречается в 49,7% случаев рака желудка; характеризуется относительно благоприятным прогнозом (медиана 47 мес.).
5. CDX2-негативный подтип встречается в 16,1% случаев рака желудка, характеризуется неблагоприятным прогнозом (медиана 23 мес.).
Поставленный технический результат достигается способом классификации молекулярных подтипов рака желудка методом иммуногистохимического тестирования, включает следующие этапы:
- иммуногистохимическое исследование полноразмерного операционного материала от больных раком желудка с маркерами микросателлитной нестабильности (MSH2, MSh6, MLH1, PMS2) для выделения MMR-негативного подтипа;
- исследование полноразмерного операционного материала от больных раком желудка с помощью гибридизации in situ с малыми РНК вируса Эпштейна-Барр (EBER) для выделения на втором этапе EBER-позитивного подтипа;
- иммуногистохимическое исследование полноразмерного операционного материала от больных раком желудка с Е-кадгерином для выявления Е-кадгерин-аберрантного подтипа;
- иммуногистохимическое исследование полноразмерного операционного материала от больных раком желудка с маркером CDX2 для разделения пациентов на две группы: с CDX2-позитивным подтипом опухоли и с CDX2-негативным подтипом опухоли;
- дополнительно любые образцы операционного материала рака желудка исследуются с маркерами PD-L1, HER2, CD44, Clau3 для определения возможностей таргетной терапии опухоли.
Краткое описание чертежей
Изобретение поясняется следующими иллюстративными материалами.
На фиг. 1 представлена схема заявляемого способа.
На фиг. 2 приведены основные характеристики MMR-негативного молекулярного подтипа рака желудка. MMR-негативный подтип встречается в 8,1% случаев рака желудка, чаще включает пациентов старших возрастных групп (медиана 70 лет), с преобладанием женского пола; к нему относятся тубулярные аденокарциномы кишечного типа по P. Lauren, без перстневидных клеток, расположенные в желудке дистально и имеющие блюдцеобразную/чашеподобную макроскопическую форму. Для MMR-негативного подтипа характерна положительная экспрессия MUC2 (р=0,017), CD44 (р=0,01) и PD-L1 (p<0,05), а также повышенная плотность инфильтрации CD8+ клетками по сравнению с CDX2-позитивным (р=0,005) и CD1a+ клетками по сравнению с Е-кадгерин-аберрантным подтипом (р=0,038). MMR-негативный подтип характеризуется благоприятным прогнозом (медиана 91 мес).
На фиг. 3 приведены основные характеристики EBER-позитивного молекулярного подтипа рака желудка. EBER-позитивный подтип встречается в 9% случаев рака желудка, включает пациентов мужского пола; к нему относятся тубулярные аденокарциномы с низкой степенью дифференцировки, без перстневидных клеток, промежуточного подтипа по P. Lauren, расположенные в желудке проксимально. Для EBER-позитивного подтипа характерна нормальная экспрессия р53 (p=0,014), отсутствие повышенной экспрессии CLAU-3 (p<0,05) и MUC-null фенотип (p<0,05), а также положительная экспрессия PD-L1 (p<0,05) и повышенная плотность инфильтрации CD4+, CD8+, CD68+ и СD1a+ клетками по сравнению со всеми остальными подтипами (р=0,000). EBER-позитивный подтип характеризуется благоприятным прогнозом (медиана 64 мес).
На фиг. 4 приведены основные характеристики Е-кадгерин-аберрантного молекулярного подтипа рака желудка. Е-кадгерин-аберрантный подтип встречается в 17,1% случаев рака желудка, чаще включает пациентов женского пола; к нему относятся дискогезивные карциномы и тубулярные аденокарциномы с низкой степенью дифференцировки, с субтотальной/тотальной локализацией, инфильтративно-язвенным и диффузно-инфильтративным ростом рака, более крупными размерами опухолей (более 8 см), диффузного подтипа по P. Lauren. Для Е-кадгерин-аберрантного подтипа характерна аберрантная экспрессия β-катенина (p=0,000). Е-кадгерин-аберрантный подтип характеризуется крайне неблагоприятным прогнозом (медиана 16 мес).
На фиг. 5 приведены основные характеристики CDX2-позитивного молекулярного подтипа рака желудка.CDX2-позитивный подтип встречается в 49,7% случаев рака желудка; к нему относятся опухоли кишечного и промежуточного типа по P. Lauren, расположенные в желудке проксимально и имеющие значимо меньшие размеры. В состав этого подтипа чаще входят папиллярные и муцинозные раки желудка с меньшей глубиной инвазии, без поражения лимфатических узлов и с более низкой клинической стадией. Для CDX2-позитивного подтипа характерна положительная экспрессия MUC2 (p<0,050), CD10 (p=0,019) и MUC-I фенотип (p=0,030). CDX2-позитивный подтип характеризуется относительно благоприятным прогнозом (медиана 47 мес).
На фиг. 6 приведены основные характеристики CDX2-негативного молекулярного подтипа рака желудка. CDX2-негативный подтип встречается в 16,1% случаев рака желудка; к нему относятся опухоли диффузного и промежуточного типа по P. Lauren, расположенные в желудке преимущественно дистально и имеющие значимо более крупные размеры. В состав этого подтипа чаще входят папиллярные карциномы желудка, а также карциномы с большей глубиной инвазии и с более высокой клинической стадией. Для CDX2-негавтиного подтипа характерна положительная экспрессия MUC5АС (p=0,02) и MUC-G фенотип (p=0,045). CDX2-негативный подтип характеризуется неблагоприятным прогнозом (медиана 23 мес).
Осуществление изобретения
В исследовании использованы образцы операционного материала от 310 пациентов с верифицированным диагнозом рака желудка, не получавших в предоперационном периоде химио- или лучевую терапию. Критериями исключения были: карцинома in situ, недостаточное количество материала в парафиновых блоках, верифицированный нейроэндокринный рак, лимфома желудка или гастроинтестинальная стромальная опухоль желудка. Возраст пациентов варьировал от 22 до 85 лет (медиана – 63 года). Медиана наблюдения за пациентами составила 83 мес.
Постановку иммуногистохимических реакций осуществляют с помощью стрептавидин-биотиновых полимерных систем визуализации (пример: UltraVision Quanto, Thermo Fisher Scientific, USA) согласно протоколу производителя в автоматическом иммуностейнере. Депарафинирование, регидратацию и демаскировку антигенов выполняют при помощи буферов с различными рН при температуре 95-98°С в течение 20 минут в модуле предобработки (пример PT-Module, Thermo Fisher Scientific, USA). Примеры буферов: Thermo Dewax and HIER Bufer L (pH 6,0), Thermo Dewax and HIER Bufer M (pH 8,0) и Thermo Dewax and HIER Bufer H (pH 9,0). Выбор буфера производился индивидуально для конкретного антитела в соответствии с инструкцией производителя. Время инкубации антител составляет 20-30 минут в соответствии с инструкцией производителя.
Характеристики используемых антител приведены в таблице 1.
Таблица 1.
| Наименование маркера | Клон | Производитель | Разведение |
| MSH2 | FE-11 | Dako/Agilent Technologies, США | 1:50 |
| MSH6 | EP49 | Dako/Agilent Technologies, США | RTU |
| MLH1 | ES05 | Dako/Agilent Technologies, США | 1:50 |
| PMS2 | EP51 | Dako/Agilent Technologies, США | 1:40 |
| MUC2 | CCP58 | Dako/Agilent Technologies, США | RTU |
| CDX2 | DAK-CDX2 | Dako/Agilent Technologies, США | RTU |
| MUC5AC | CLH2 | Dako/Agilent Technologies, США | RTU |
| CD10 | 56C6 | Dako/Agilent Technologies, США | RTU |
| Е-кадгерин | NCH-38 | Dako/Agilent Technologies, США | 1:100 |
| β-катенин | B-Catenin-1 | Dako/Agilent Technologies, США | 1:200 |
| Claudin 1 | Поликлональные кроличьи ab15098 | Abcam, Великобритания | 1:200 |
| Claudin 3 | Поликлональные кроличьи ab15102 | Abcam, Великобритания | 1:100 |
| Claudin 4 | Поликлональные кроличьи | Thermo Fisher Scientific, СШA | RTU |
| CD44 | DF1485 | Dako/Agilent Technologies, США | 1:25 |
| P53 | DO-7 | Dako/Agilent Technologies, США | RTU |
| PD-L1 | SP142 | Roche Ventana, USA | RTU |
| PD-L1 | SP263 | Roche Ventana, USA | RTU |
| HER2/neu | HercepTest | Dako/Agilent Technologies, США | RTU |
| CD4 | 4B12 | Dako/Agilent Technologies, США | 1:40 |
| CD8 | C8/144B | Dako/Agilent Technologies, США | 1:100 |
| CD68 | PG-M1 | Dako/Agilent Technologies, США | RTU |
| CD1a | 010 | Dako/Agilent Technologies, США | 1:50 |
| LMP-1 | CS.1-4 | Dako/Agilent Technologies, США | 1:100 |
Гибридизация in situ проводится с использованием праймеров к малым вирусным РНК вируса Эпштейна-Барр (пример: INFORM EBER, Roche Ventana, USA) и системы визуализации ISH iVIEW Blue Detection Kit (Roche Ventana, USA). Постановка реакций гибридизации in situ осуществляется с помощью автоматического стейнера (пример: Ventana BenchMark Ultra, Roche Ventana, USA). Реакция считается положительной, если сигнал EBER локализуется в ядре опухолевых клеток, но при этом отсутствует цитоплазматическое окрашивание. При каждой постановке реакций используется положительный контроль в виде тканевого образца EBV-ассоциированной назофарингеальной карциномы.
Постановку реакций с маркером HER2/neu осуществляют с помощью валидированного набора HercepTest (Dako/Agilent Technologies, США) по инструкции производителя. Для определения экспрессии PD-L1 используют антитела производства Roche Ventana, USA клоны SP142 и SP263 и систему детекции OptiView DAB IHC Detection Kit. Постановка реакций с PD-L1 осуществляется с помощью прибора Ventana BenchMark Ultra (Roche Ventana, USA) по стандартному протоколу не позднее чем через 24 часа после изготовления парафиновых срезов.
На фиг. 2-6 приведены основные иммуногистохимические и клинико-морфологические характеристики выделенных молекулярных подтипов рака желудка.
Возможность реализации заявляемого изобретения показана, но не ограничена, в примерах конкретного выполнения.
Пример 1. Пациентка 70 лет обратилась за медицинской помощью по поводу новообразования желудка. На момент постановки диагноза по данным лучевых методов исследования установлена клиническая стадия Т4bN0M0 с наличием инвазии в поджелудочную железу и селезенку.
При патолого-анатомическом исследовании биопсийного материала была выявлена аденокарцинома низкой степени дифференцировки (G3). При иммуногистохимическом исследовании обнаружены признаки MMR-негативного молекулярного подтипа рака желудка: отсутствие экспрессии пары MSH6/MSH2 в опухолевых клетках, а также высокий уровень экспрессии PD-L1.
Учитывая возраст пациентки и наличие сопутствующей патологии, назначена анти-PD1-терапия в монорежиме 1 раз в 3 нед. После второго введения выполнена биопсия опухоли, в материале которой обнаружилась выраженная инфильтрация опухоли лейкоцитами по сравнению первым исследоанием. После 3-го введения анти-PD-1-препарата также выполнена биопсия зоны новообразования — опухолевые клетки отсутствовали, отмечена выраженная лейкоцитарная инфильтрация.
В настоящее время пациентка закончила двухлетний курс анти-PD-1-терапии пембролизумабом и наблюдается в течение 5 мес. При повторных биопсиях зоны поражения желудка опухолевого роста не обнаружено. Прогноз оценивается как благоприятный.
Пример 2. Пациент 60 лет, обратился за медицинской помощью с жалобами на выраженную утомляемость. В общем анализе крови выявлена железодефицитная анемия, в порядке общего обследования выполнено эндоскопическое исследование желудка и обнаружена крупная изъязвленная опухоль. После дополнительных обследований клиническая стадия была определена как Т4aN3bM0.
При гистологическом исследовании биопсийного материала была выявлена низкодифференцированная тубулярная аденокарцинома, промежуточный подтип по P.Lauren. При иммуногистохимическом исследовании не обнаружены признаки MMR-негативного молекулярного подтипа рака желудка: все маркеры микросателлитной нестабильности MSH6, MSH2, MLH1, PMS2 были положительными в опухолевых клетках. На следующем этапе выполнена гибридизация in situ с малыми вирусными РНК вируса Эпштейна-Барр (EBER), которая дала положительный результат. Дополнительно проведено исследование с антителами к PD-L1, выявлена умеренная экспрессия (2 балла, CPS от 1 до 10%).
Учитывая отсутствие сопутствующей патологии решено начать лечение с полихимиотерапии по схеме FLOT. Уровень экспрессии PD-L1 был расценен как низкий, поэтому назначение дополнительной анти-PD1-терапии не проводилось, хотя пациенты с EBER-позитивным подтипом рака желудка согласно данным литературы демонстрируют хороший ответ на иммунотерапию, даже при отсутствии экспрессии PD-L1. Таким образом, схема лечения пациента была назначена без учета молекулярного подтипа рака желудка. После 6 курсов химиотерапии выполнена циторедуктивная операция в объеме гастрэктомии с лимфаденэктомией D2. По результатам послеоперационной гистологии получен лечебный патоморфоз опухоли 1-2 степени, край резекции положительный (R1). В дальнейшем химиотерапия была продолжена, однако пациент скончался через 5 месяцев после операции от прогрессирования болезни. Назначение терапии без учета молекулярного подтипа рака желудка неблагоприятно отражается на клинических исходах пациентов.
Таким образом, с помощью иммуногистохимического метода разработан новый способ молекулярной классификации рака желудка и выделено 5 молекулярных подтипов, различающихся прогностическими и клинико-морфологическими характеристиками (фиг. 1):
- MMR-негативный подтип (тубулярные аденокарциномы кишечного типа по P. Lauren, медиана возраста 70 лет, женский пол, дистальная локализация, экспрессия MUC2, CD44 и PD-L1) с наиболее благоприятным прогнозом (медиана 91 мес).
- EBER-позитивный подтип (тубулярные аденокарциномы промежуточного типа по P. Lauren, мужской пол, проксимальная локализация, нормальная экспрессия p53, MUC-null фенотип, положительная экспрессия PD-L1, повышенная плотность инфильтрации CD4+, CD8+, CD68+ и СD1a+ клетками) с благоприятным прогнозом (медиана 64 мес.).
- Е-кадгерин-аберрантный подтип (дискогезивные карциномы и низкодифференцированные тубулярные аденокарциномы, субтотальная/тотальная локализация, инфильтративно-язвенный и диффузно-инфильтративный рост, крупные размеры, диффузный подтип по P. Lauren, аберрантная экспрессия β-катенина) с крайне неблагоприятным прогнозом (медиана 16 мес.).
- CDX2-позитивный подтип (аденокарциномы кишечного и промежуточного подтипа по P. Lauren, проксимальная локализация, маленький размер, папиллярные и муцинозные карциномы, положительная экспрессия MUC2, CD10, MUC-I фенотип) и имеет промежуточный прогноз (медиана 47 мес.).
- CDX2-негативный (аденокарциномы промежуточного и диффузного подтипа по P. Lauren, дистальная локализация, крупные размеры, высокая клиническая стадия, положительная экспрессия MUC5AC, MUC-G фенотип) и имеет неблагоприятный прогноз (медиана 23 мес.). CDX2-позитивный и CDX2-негативный подтипы выделены впервые. Целесообразность выделения подтипа, связанного с аберрантной экспрессией р53 и описанного другими авторами, не подтверждена.
Claims (9)
1. Способ дифференциальной диагностики типа рака желудка методом иммуногистохимического тестирования для определения медианы выживаемости, заключающийся в определении молекулярного подтипа опухоли, включающий проведение иммуногистохимического исследования с использованием панели из следующих маркеров: MSH2, MSH6, MLH1, PMS2, CDX2, E-кадгерин, EBER, и
- при получении отрицательных результатов иммуногистохимической реакции с одной из двух пар маркеров MSH2/MSH6 или MLH1/PMS2 - определяют MMR-негативный тип рака желудка и дают благоприятный прогноз с медианой выживаемости 91 мес.; в случае положительного результата хотя бы с одной парой маркеров проводят реакцию с маркером EBER;
- при получении положительных результатов реакции с EBER определяют EBER-позитивный тип рака желудка и дают благоприятный прогноз с медианой выживаемости 64 мес.; в случае отрицательных результатов проводят реакцию с маркером E-кадгерина;
- при получении цитоплазматической реакции с Е-кадгерином определяют Е-кадгерин-аберрантный тип рака желудка и дают неблагоприятный прогноз с медианой выживаемости 16 мес.; при отсутствии реакции с Е-кадгерином проводят реакцию с CDX2;
- в случае получения положительной иммуногистохимической реакции с CDX2 определяют CDX2-позитивный тип рака желудка и делают благоприятный прогноз с медианой выживаемости 47 мес.;
- при получении отрицательной иммуногистохимической реакции с CDX2 определяют CDX2-негативный подтип и делают неблагоприятный прогноз с медианой выживаемости 23 мес.
2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что при определении MMR-негативного типа рака желудка, проводят определение экспрессии MUC2, CD44, PD-L1 для определения чувствительности к терапии с целью подбора терапии.
3. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что при выявлении EBER-позитивного подтипа дополнительно проводят определение экспрессии р53, MUC2, CDX2, MUC5AC, CD10, Клаудин-3, PD-L1, CD4, CD8, CD68, CD1a для определения чувствительности к терапии.
4. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что при выявлении Е-кадгерин аберрантного подтипа дополнительно проводят определение экспрессии β-катенина, при получении аберрантной реакции делают вывод о неблагоприятном прогнозе выживаемости.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2813670C1 true RU2813670C1 (ru) | 2024-02-15 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014014082A1 (ja) * | 2012-07-19 | 2014-01-23 | 東レ株式会社 | 癌の検出方法 |
| RU2646464C2 (ru) * | 2012-07-19 | 2018-03-05 | Торэй Индастриз, Инк. | Метод детекции рака |
| US20220003770A1 (en) * | 2016-02-09 | 2022-01-06 | The General Hospital Corporation | Classification and Treatment of Gastric Cancer |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014014082A1 (ja) * | 2012-07-19 | 2014-01-23 | 東レ株式会社 | 癌の検出方法 |
| RU2646464C2 (ru) * | 2012-07-19 | 2018-03-05 | Торэй Индастриз, Инк. | Метод детекции рака |
| US20220003770A1 (en) * | 2016-02-09 | 2022-01-06 | The General Hospital Corporation | Classification and Treatment of Gastric Cancer |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kalra et al. | Mesothelioma patient derived tumor xenografts with defined BAP1 mutations that mimic the molecular characteristics of human malignant mesothelioma | |
| Alshareeda et al. | Cancer of unknown primary site: real entity or misdiagnosed disease? | |
| Park et al. | FGFR2 assessment in gastric cancer using quantitative real-time polymerase chain reaction, fluorescent in situ hybridization, and immunohistochemistry | |
| Masago et al. | Clinical significance of pretreatment serum amphiregulin and transforming growth factor‐α, and an epidermal growth factor receptor somatic mutation in patients with advanced non‐squamous, non‐small cell lung cancer | |
| Mehta et al. | SMARCA4/BRG1 protein-deficient thoracic tumors dictate re-examination of small biopsy reporting in non-small cell lung cancer | |
| RU2813670C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики типа рака желудка методом иммуногистохимического тестирования | |
| Kataoka et al. | An inflammatory myofibroblastic tumor exhibiting immunoreactivity to KIT: a case report focusing on a diagnostic pitfall | |
| Yokohama et al. | TCL1A gene involvement in T-cell prolymphocytic leukemia in Japanese patients | |
| Shestakova et al. | High-grade B-cell lymphoma with concurrent MYC rearrangement and 11q aberrations: clinicopathologic, cytogenetic, and molecular characterization of 4 cases | |
| Taira et al. | Comprehensive Genomic Profiling for Therapeutic Decision and Identification of Gene Mutation in Uterine Endometrial Dedifferentiated Carcinoma | |
| Pelz et al. | Oral Free Paper Sessions | |
| Azhin Saber et al. | Exploring the Diagnostic Potential of IHC and Next-Generation Sequencing Approaches for Endometrial Carcinoma Detection and Classification | |
| Kuthi | Clinicopathological Features of the Renal Cell Carcinoma Subtypes Diagnosed According to the 2016 WHO Renal Tumor Classification | |
| 清澤大裕 | Morphological, immunohistochemical, and genomic analyses of papillary renal neoplasm with reverse polarity | |
| Nshizirungu et al. | Research Article Reproduction of the Cancer Genome Atlas (TCGA) and Asian Cancer Research Group (ACRG) Gastric Cancer Molecular Classifications and Their Association with Clinicopathological Characteristics and Overall Survival in Moroccan Patients | |
| Yang et al. | Bladder preservation in complicated invasive urothelial carcinoma following treatment with cisplatin/gemcitabine plus tislelizumab: A case report | |
| Thiele | Morphological and Genomic Profiling of Circulating Tumor Cells in Metastatic Colorectal Cancer | |
| Krušlin et al. | Periacinar cleft-like spaces in prostatic needle core biopsies | |
| Jakić-Razumović | Prognostic value of HER-2/neu in breast carcinoma patients | |
| Hayashi et al. | The Identification of Somatic Mutations in Interferon-G Signal Molecules in Human Uterine Leiomyosarcoma | |
| Gaisa et al. | 87. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft fur Pathologie (87 (th) Meeting of the German Society of Pathology)/23. Tagung der Deutschen Gesellschaft fur Zytology (23 (th) Meeting of the German Society of Cytology) | |
| Huang et al. | Clinicopathologic features, tumor immune microenvironment and genomic landscape of EBV-associated intrahepatic cholangiocarcinoma | |
| Elayoty et al. | Study of nucleated red blood cells in evaluation of fetal asphyxia | |
| Marcikić et al. | Combined Homicide-Suicide in Osijek County, East Croatia | |
| Ježek et al. | Fine structure of Leydig cells in patients with non-obstructive azoospermia |