RU2812604C1 - Способ диагностики хронического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами - Google Patents
Способ диагностики хронического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами Download PDFInfo
- Publication number
- RU2812604C1 RU2812604C1 RU2023102144A RU2023102144A RU2812604C1 RU 2812604 C1 RU2812604 C1 RU 2812604C1 RU 2023102144 A RU2023102144 A RU 2023102144A RU 2023102144 A RU2023102144 A RU 2023102144A RU 2812604 C1 RU2812604 C1 RU 2812604C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- microorganisms
- urethritis
- opportunistic
- level
- urethra
- Prior art date
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 150
- 208000000143 urethritis Diseases 0.000 title claims abstract description 106
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 78
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 title claims abstract description 45
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 claims description 39
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 28
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 25
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 claims description 18
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 11
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 7
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 25
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 22
- 241000902900 cellular organisms Species 0.000 description 20
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 14
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 11
- 238000011161 development Methods 0.000 description 10
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 8
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 8
- 241000191992 Peptostreptococcus Species 0.000 description 7
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 7
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 6
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 6
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 5
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 5
- 210000003622 mature neutrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 201000007094 prostatitis Diseases 0.000 description 5
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 5
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 241000204051 Mycoplasma genitalium Species 0.000 description 4
- 208000019802 Sexually transmitted disease Diseases 0.000 description 4
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 4
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 4
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 4
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 3
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 description 3
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 3
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 3
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 3
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 3
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 3
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 3
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 3
- 241001147691 Staphylococcus saprophyticus Species 0.000 description 3
- 206010043431 Thinking abnormal Diseases 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 3
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 3
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 3
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 3
- 241001156739 Actinobacteria <phylum> Species 0.000 description 2
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 description 2
- 241001633064 Atopobium vaginae Species 0.000 description 2
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 2
- 208000004926 Bacterial Vaginosis Diseases 0.000 description 2
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 2
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 2
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 2
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000186394 Eubacterium Species 0.000 description 2
- 241000207201 Gardnerella vaginalis Species 0.000 description 2
- 241001454354 Kingella Species 0.000 description 2
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 241001453171 Leptotrichia Species 0.000 description 2
- 241000204048 Mycoplasma hominis Species 0.000 description 2
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 2
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 241000186429 Propionibacterium Species 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- 241000224527 Trichomonas vaginalis Species 0.000 description 2
- 241000202898 Ureaplasma Species 0.000 description 2
- 241000202921 Ureaplasma urealyticum Species 0.000 description 2
- 208000037009 Vaginitis bacterial Diseases 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 2
- 208000020426 gonococcal urethritis Diseases 0.000 description 2
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 2
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 244000039328 opportunistic pathogen Species 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 210000003899 penis Anatomy 0.000 description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 241000186425 Acidipropionibacterium jensenii Species 0.000 description 1
- 241000186044 Actinomyces viscosus Species 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 description 1
- 241001136167 Anaerotignum propionicum Species 0.000 description 1
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 206010003267 Arthritis reactive Diseases 0.000 description 1
- 206010069918 Bacterial prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 241000186560 Blautia coccoides Species 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 206010061041 Chlamydial infection Diseases 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000186427 Cutibacterium acnes Species 0.000 description 1
- 241001657508 Eggerthella lenta Species 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 1
- 241000186588 Erysipelatoclostridium ramosum Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000589565 Flavobacterium Species 0.000 description 1
- 241001453172 Fusobacteria Species 0.000 description 1
- 241000605909 Fusobacterium Species 0.000 description 1
- 241000207202 Gardnerella Species 0.000 description 1
- 206010018612 Gonorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 241000606766 Haemophilus parainfluenzae Species 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 241000192017 Micrococcaceae Species 0.000 description 1
- 241000203736 Mobiluncus Species 0.000 description 1
- 241000588621 Moraxella Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 241001478320 Neisseria flava Species 0.000 description 1
- 241001136170 Neisseria subflava Species 0.000 description 1
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 208000029082 Pelvic Inflammatory Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000206591 Peptococcus Species 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- NLUBIQOCQWHOCR-UHFFFAOYSA-N Plasmologen Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCCOC=C/CCCCCCC=C/CCCCCCCC NLUBIQOCQWHOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000605861 Prevotella Species 0.000 description 1
- 241000186428 Propionibacterium freudenreichii Species 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 241000187603 Pseudonocardia Species 0.000 description 1
- 241000316848 Rhodococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 241000424747 Sneathia Species 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 241000191984 Staphylococcus haemolyticus Species 0.000 description 1
- 241000194018 Streptococcaceae Species 0.000 description 1
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 1
- 241001134658 Streptococcus mitis Species 0.000 description 1
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 description 1
- 241000950638 Symphysodon discus Species 0.000 description 1
- 206010046443 Urethral discharge Diseases 0.000 description 1
- 206010046482 Urethritis chlamydial Diseases 0.000 description 1
- 241001148134 Veillonella Species 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- 208000013507 chronic prostatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 231100000502 fertility decrease Toxicity 0.000 description 1
- 210000003953 foreskin Anatomy 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 208000001786 gonorrhea Diseases 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- HOQADATXFBOEGG-UHFFFAOYSA-N isofenphos Chemical compound CCOP(=S)(NC(C)C)OC1=CC=CC=C1C(=O)OC(C)C HOQADATXFBOEGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000027939 micturition Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 1
- 201000005737 orchitis Diseases 0.000 description 1
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 229940055019 propionibacterium acne Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 210000004706 scrotum Anatomy 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 229940037649 staphylococcus haemolyticus Drugs 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 239000006163 transport media Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть для выявления хронического уретрита у мужчин. В клиническом материале – мазке из уретры - с помощью газовой хроматографии масс-спектрометрии идентифицируют и количественно оценивают молекулярные компоненты микробного происхождения. И при повышении уровня не менее 3 условно-патогенных микроорганизмов, в соответствии с таблицей 3, представленной в описании, при повышении суммарного уровня этих показателей как минимум на 50% выше здоровой группы, диагностирую хронический уретрит, обусловленный условно-патогенными микроорганизмами. Способ позволяет повысить точность диагностики хронического уретрита за счет оценки совокупности наиболее значимых показателей. 3 з.п. ф-лы, 14 ил., 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к молекулярно-биологическим методам исследования, и может быть использовано для выявления хронического идиопатического уретрита у мужчин.
Среди инфекции мочевых путей особое место занимают уретриты, которые остаются распространенным заболеванием среди сексуально активных людей и имеет как инфекционный, так и неинфекционный генез.
Уретрит определяется как инфекционно-воспалительное заболевание мочеиспускательного канала, вызванного венерическим заболеванием (ЗППП), и обычно классифицируется как гонококковый уретрит (ГУ) или негонококковый уретрит (НГУ) [Федеральные клинические рекомендации. Дерматовенерология 2015: Болезни кожи. Инфекции, передаваемые половым путем. - 5-е изд., перераб. и доп. - М.: Деловой экспресс, 2016. - 768 с.; Terris M.K., Kemper M., Sajadi K.P. Urethritis. Medscape Dec 12, 2018].
Негонококковый уретрит является распространенной инфекцией передаваемой половым путем (ИППП) у мужчин. В дополнение к симптомам уретрита патогенные микроорганизмы могут вызывать такие осложнения, как простатит и эпидидимит, а также реактивный и гнойный артрит [The bacterial microbiota in first-void urine from men with and without idiopathic urethritis. Maria Frølund, Arne Wikström, Peter Lidbrink, Waleed Abu Al-Soud, Niels Larsen, Christoffer Bugge Harder, Søren Johannes Sørensen, Jørgen Skov Jensen, Peter Ahrens. Published: July 27, 2018 https://doi.org/10.1371/journal.pone.0201380]. При передаче партнерам-женщинам возбудители могут вызывать воспалительные заболевания органов малого таза и последующее бесплодие. Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium и Trichomonas vaginalis являются хорошо известными причинами возникновения НГУ. Кроме того, предполагается, что вирус простого герпеса типа 1 и 2 (HSV-1 и -2), аденовирус, вызывает уретрит вместе с U. urealyticum, когда эта бактерия присутствует в высоких нагрузках. Тем не менее, в 35% случаев НГУ ни один из этих известных организмов не обнаружен, что указывает на наличие идиопатической формы уретрита и, по мнению некоторых авторов это указывает на наличие дополнительных, но еще возможно не идентифицированных патогенов, что связанно с ограниченными возможностями существующих методов лабораторной диагностики [The bacterial microbiota in first-void urine from men with and without idiopathic urethritis. Maria Frølund, Arne Wikström, Peter Lidbrink, Waleed Abu Al-Soud, Niels Larsen, Christoffer Bugge Harder, Søren Johannes Sørensen, Jørgen Skov Jensen, Peter Ahrens. Published: July 27, 2018].
Клиническим догматом было то, что моча от здоровых молодых людей считалась стерильной пока не достигла уретры, которая, как известно, колонизируется различными бактериями. Традиционно образцы мочи исследовали различными культуральными методами, которые, хотя и хорошо подходят для обнаружения определенных патогенных микроорганизмов, могут не учитывать другие более привередливые виды бактерий. Усовершенствованные количественные методы с использованием дополнительных сред и условий инкубации показали, что многие бактерии могут культивироваться из мочевого пузыря даже у здоровых женщин [The bacterial microbiota in first-void urine from men with and without idiopathic urethritis. Maria Frølund, Arne Wikström, Peter Lidbrink, Waleed Abu Al-Soud, Niels Larsen, Christoffer Bugge Harder, Søren Johannes Sørensen, Jørgen Skov Jensen, Peter Ahrens. Published: July 27, 2018]. Можно предположить, что и у мужчин более усовершенствованные методы идентификации могут обнаружить до сих пор неопознанные патогены в моче.
Недавние анализы человеческого микробиома показали богатую и разнообразную микробиоту почти в каждой исследованной среде обитания, что может свидетельствовать о том, что уретра также может содержать более разнообразную микробиоту, чем считалось ранее. Было показано, что микробиота образцов мочи первого мочевого пузыря точно отражает микробиоту дистального отдела мочеиспускательного канала, взятого путем взятия мазков из мочеиспускательного канала [The bacterial microbiota in first-void urine from men with and without idiopathic urethritis. Maria Frølund, Arne Wikström, Peter Lidbrink, Waleed Abu Al-Soud, Niels Larsen, Christoffer Bugge Harder, Søren Johannes Sørensen, Jørgen Skov Jensen, Peter Ahrens. Published: July 27, 2018].
В этой связи, одной из актуальных проблем современной медицины являются исследования роли урогенитальных заболеваний у мужчин, обусловленные условно-патогенной микробиотой. По данным Н.А.Лопаткина и соавторов уретриты, обусловленные условно-патогенными микроорганизмами, занимают от 30 до 50% в структуре всех инфекционных уретритов (Аполихин О.И. Урология [Текст] / О.И.Аполихин, Н.А.Лопаткин, А.Г.Пугачев. // ГЭОТАР-Медиа. - 2007. - 520 с.).
Зарубежные исследователи (Hanno P.M., Malkowicz S.В., Wein A.J. (ed.) Clinical Manual of Urology, 3rd Edition. McGraw-Hill, N.Y. 2001; Aral S.O., Fenton K.A., Holmes K.K., Sexually transmitted diseases in the USA: temporal trends. Sex Transm. Infect. 2007; 83: 257-66) констатируют факт увеличения числа негонококковых нехламидийных уретритов (НГНХУ) в структуре ИППП развитых стран - Великобритании, США, что связано не только с ростом числа уретритов, обусловленных условно-патогенными микроорганизмами, но и высокой эффективностью современных методов лабораторной диагностики, позволяющих выявлять возбудителей инфекционно-воспалительных процессов даже при низких концентрациях последних в клиническом образце, что характерно для ассимптомных форм воспаления.
Противоречивые результаты исследований убедительно доказывают необходимость изучения состава нормобиоты уретры мужчин с применением более чувствительных и специфических методов амплификации нуклеиновых кислот, позволяющих идентифицировать также труднокультивируемые микроорганизмы, нередко вызывающие дисбиотические процессы в урогенитальном тракте (Мазо Е.Б. Хронический инфекционный простатит// Материалы пленума правления Российского Общества урологов. Саратов, 2004. С.267-289; Krieger J. N. et al. Epidemiology of prostatitis: new evidence for a world-wide problem. Wld J. Urol. 2003; 21 (2): 70-74. Krieger J.N., Ross S.O., Riley D.Е. Chronic prostatitis: epidemiology and role of infection. Urology 2002; 60 (6, suppl.): 8-12; discus.: 13). По данным исследователей А.П.Горбунова и Н.И.Скидан (Горбунов А.П., Скидан Н.И. Клиническое течение негонококковых уретритов ассоциированных с условно-патогенной микрофлорой у мужчин // Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии. № 1, 2009. С. 32-38) при микробиологическом исследовании отделяемого уретры мужчин с (НГНХУ) в диагностически значимых титрах выявляли представителей семейства Micrococcaceae - Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus haemolyticus и Streptococcaceae, Enterococcus spp., Streptococcus agalacticae, негемолитический Streptococcus, гемолитический Streptococcus. Небольшую группу составили факультативные грамотрицательные палочки, бактерии семейства Enterobactehaceae, представленные Е.coli и Klebsiella spp. Из группы прочих возбудителей идентифицировали Gardnerella vaginalis, Corynebacterium spp., Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum и Candida albicans. В качестве возможных возбудителей инфекционно-воспалительного процесса в урогенитальном тракте в литературе описаны Bacteroides, Haemophilus influenza, Haemophilus parainfluenzae, Neisseria meningitides, Staphylococcus saprophyticus, Gardnerella vaginalis, Clostridium difficile, Corinebacterium genitalium. Однако, при проведении контрольных исследований нередко оказывается, что данные возбудители чаще выявляются у здоровых лиц, чем у больных (НГНХУ). Кроме перечисленных микроорганизмов при (НГНХУ) определялись Streptococcus (Str.) pneumoniae, Str. viridans, Str. mitis, Str. sanguis, Str. anginosus, Str. agalactiae, Enterococcus faecium, N. subflava, N. per.flava и N. flava, Staphylococcus (Staph.) aureus, Staph. epidermidis, Corynebacterium pseudodiphtheriae, бактерии, входящие в роды Enterobacter Spp., Proteus Spp., Branhamella Spp., Moraxella Spp., Pseudomonas Spp. и их ассоциации.
Таким образом, вопросы этиологии (НГНХУ) остаются окончательно нерешенными, что приводит к несвоевременной клинической диагностике, не всегда корректной интерпретации полученных результатов лабораторных исследований, нерациональной терапии, что в свою очередь увеличивает полипрагмазию и ятрогению на разных этапах диагностического и лечебного процесса, повышает риск развития осложнений с нарушениями репродуктивной функции.
Уретрит, обусловленный условно-патогенной микробиотой не имеет специфических, патогномоничных клинических симптомов.
Известно, что диагностика острых форм уретритов с выраженными клиническими симптомами не представляет особых трудностей. Проблемой остается хронические уретриты с мало и ассимптомным течением без выявления возбудителей при лабораторной диагностике, число которых в последние годы увеличивается. Данная форма уретрита характеризуется скудностью субъективных и объективных клинических симптомов, а в ряде случаев и их отсутствием, не позволяющим своевременно диагностировать патологический процесс. В этой связи, очень часто медики сталкиваются с поздним обращением пациентов и с развитием осложнений со стороны органов мошонки и предстательной железы вплоть до нарушения фертильности у мужчин. В большинстве случаев ассимптомные формы уретритов протекают длительно и диагностируются уже на стадии развития осложнений с нарушением репродуктивной функции (Е.Е.Брагина, Р.А.Абдумаликов. «Руководство по сперматологии». Москва, 2002 г.; Локшин К.Л. Негонококковые уретриты у мужчин. Трудный пациент № 3, том 7, 2009 г. Bradshaw С. et al. Etiologies of Nongonococcal Urethritis: Bacteria, Viruses, and the Association with Orogenital Exposure // J. Infect. Dis. 2006; 193: P. 336-45; Lanjouw E, Ossewaarde JM, Stary A, Boag F, van der Meijden WI European guideline for the management of Chlamydia trachomatis infections. Int J STD AIDS. 2010 Nov; 21(11): 729-37.2010.)
В клинической практике, нередко при наличии жалоб и клинических симптомов, по данным лабораторных методов диагностики не всегда удается выяснить причину уретрита и как отмечено выше в 35% случаев НГУ ни один из этих известных микроорганизмов не обнаруживается, что указывает на «идиопатическую» форму уретрита. По мнению некоторых авторов это указывает на наличие дополнительных, но еще не идентифицированных патогенов, обусловленное ограниченными возможностями лабораторных методов диагностики. В этой связи, проблема диагностики хронического уретрита, вызванного условно-патогенной микробиотой, усугубляется отсутствием стандартов лабораторной диагностики, объективными ограничениями стандартных методов обследования и отсутствием специфических патогномоничных клинических симптомов.
Так, распространенное микроскопическое исследование, наряду с многочисленными достоинствами, имеет ряд объективных ограничений, затрудняющих полноценную объективную диагностику и дифференциальную диагностику форм уретритов. Метод не позволяет объективно определять качественно-количественный состав биоты уретры (Анкирская А.С., Муравьева В.В. Опыт микробиологической диагностики оппортунистических инфекций влагалища. / Клин. микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2001. - № 2. - Т.3 - с.101-105; Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций.- М.: Мед. книга, Н. Новгород: Издательство НГМА, 2003.- 336 с.).
Микроскопия мазков, окрашенных метиленовым синим и по Граму, позволяет определять не более 10-ти морфотипов (лактобациллы, гарднереллы, бактероиды, мобилункус, фузобактерии, лептотрихии, вейлонеллы, дрожжеподобные грибы, грамположительные кокки, колиформные палочки) различных микроорганизмов, лейкоцитарную реакцию - ее наличие, степень выраженности, проявление фагоцитоза, его завершенность. По данным Г.А.Дмитриева (2003) чувствительность микроскопии составляет от 45% до 70%, специфичность до 70%, что в значительной степени определяется качеством преаналитического этапа исследования и профессиональной квалификацией врача клинической лабораторной диагностики.
Принципиальным недостатком метода является то, что при микроскопии можно выявить только те микроорганизмы, которые обладают достаточными размерами для визуализации при световой микроскопии, и их количество в биопробе должно превышать 105 КОЕ/мл. Кроме того, факультативно-анаэробные бактерии, нередко являющиеся ассоциантами воспалительных процессов, могут проявлять свои патогенные свойства при сравнительно небольшом количестве (менее 105 КОЕ/мл), которое не выявляется при микроскопии. Даже если факультативно-анаэробные бактерии обнаруживаются в препарате, то эти морфотипы схожи у многих видов и родов, тогда как их патогенные свойства и чувствительность к антибиотикам могут значительно отличаться. Ряд анаэробных бактерий, например Atopobium vaginae, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis и т.д., не визуализируются при микроскопии.
При отсутствии объективных лабораторных признаков воспаления в мазках, окрашенных метиленовым синим и по Граму, и отсутствии выраженных клинических симптомов невозможно исключить уретрит со «стертыми» клиническими симптомами или асимптомный. Способ не позволяет провести дифференциальную диагностику форм уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами, и выявить этиологическую структуру инфекционно-воспалительного процесса.
Известен способ диагностики уретритов методом микробиологического (культурального) исследования, позволяющего установить видовой состав аэробных, факультативно-анаэробных и некоторых облигатно-анаэробных бактерий, в том числе обнаруженных при микроскопии дрожжевых грибов рода Candida. После количественной оценки роста микроорганизмов на питательных средах определяется их этиологическая значимость у конкретного пациента (Скала Л.З., Сидоренко С.В., Нехорошева А.Г., Лукин И.Н., Грудинина С.А. Практические аспекты современной клинической микробиологии. - Тверь: ООО Издательство «Триада», 2004.-312 с.).
Так, например, при использовании культуральной диагностики принято считать нормобиотой урогенитального тракта мужчины следующие показатели: 1) общая микробная обсемененность - не превышает 103-105 КОЕ/мл; 2) абсолютно преобладают аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы - стрептококки и стафилококки; 3) другие условно-патогенные микроорганизмы определяются в низком титре (103 КОЕ/мл) или отсутствуют.
До настоящего времени этот метод остается «золотым стандартом» лабораторной диагностики любого инфекционно-воспалительного процесса, в том числе и уретритов обусловленных условно-патогенной биотой.
Однако и он имеет ряд серьезных недостатков. Условно-патогенная микробиота, являющаяся причиной разнообразных воспалительных процессов, главным образом, представлена анаэробными микроорганизмами. Для культивирования анаэробов требуются специальные лаборатории, оснащенные дорогостоящим лабораторным оборудованием для создания анаэробных условий, высококачественные селективные питательные среды и высококвалифицированные врачи микробиологи. Подавляющее большинство лечебных учреждений практического здравоохранения в настоящее время не имеют подобных высокотехнологичных лабораторий. Кроме того, в последние годы с помощью методов молекулярной диагностики были обнаружены этиологически значимые условно-патогенные микроорганизмы, такие как Atopobium vaginae, Ureaplasma urealiticum, Mycoplasma genitalium и др., относящиеся к группе трудно культивируемых.
Другим не маловажным недостатком метода являются также длительные сроки культивирования (в среднем 7 дней) микроорганизмов и необходимость сохранения жизнеспособности микроорганизмов до момента поступления биоматериала в лабораторию, а также отсутствие возможности контроля качества преаналитического этапа, определяющего эффективность любого лабораторного анализа в целом.
Известен способ диагностики дисбаланса микробиоты различных биотопов человека и степени его выраженности - Андрофлора, характеризующийся тем, что с помощью метода полимеразной цепной реакции в «реальном времени» в исследуемой биопробе определяют общее число геномов микроорганизмов, характерных для конкретного биотопа, число геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты, полученные величины сравнивают между собой, определяют соотношение между числом геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты и при превышении числа геномов нормобиоты относительно числа геномов условно-патогенной биоты в 1000 раз констатируют отсутствие дисбаланса, оценивая данный показатель как вариант нормы, а при значении данного показателя менее чем 1000 раз диагностируют дисбаланс и устанавливают степень его выраженности путем определения соотношения между числом геномов нормобиоты и общим числом геномов микроорганизмов, присутствующих в исследуемой пробе, а также между числом геномов условно-патогенной биоты и нормобиоты и при снижении числа геномов нормобиоты относительно общего числа геномов микроорганизмов в 10-100 раз и снижении числа геномов условно-патогенной биоты относительно числа геномов нормобиоты в 100-1000 раз устанавливают легкую степень дисбаланса, а при превышении числа геномов нормобиоты относительно общего числа геномов микроорганизмов более чем в 100 раз, и превышении числа геномов условно-патогенной биоты относительно числа геномов нормобиоты в 10 раз и более или менее этой величины устанавливают выраженную степень дисбаланса (патент РФ №2362808 опубликован 27.07.2009).
Недостатком указанного способа является исследование всего 24 микроорганизмов без определения вирусов, что ограничивает его возможности.
Известен способ определения референтных значений показателей микроорганизмов, исследуемых методом хромато-масс-спектрометрии, включающий определение референтного диапазона норм, значение которых вычислено с применением калибровочного шаблона на основе выборки произвольной группы исследуемых объектов, и выбор аутентичных поставленной задаче групп специфических (селективных) ионов в пробах после анализа всех маркеров стандартной базы данных, отличающийся тем, что определяют референтный диапазон норм по каждому микроорганизму в конкретном биотопе конкретного объекта (обследуемого), выведенный по формуле среднеквадратичного отклонения, для чего полученные показатели проб биологических материалов вычисляют по формуле: корень квадратный из числа, полученного делением квадратичного отклонения совокупности количеств каждого из микроорганизмов, внесенных в таблицу протокола произвольной выборки обследуемых, на количество обследуемых этой выборки без экстремальных значений, определяют встречаемость в конкретном биотопе относительно предварительно рассчитанной как процентное отношение частоты встречаемости при статистической обработке каждого микроорганизма произвольной выборки обследуемых, группируют микроорганизмы по группам «Резидентные» и «Транзиторные» в зависимости от частоты встречаемости микроорганизмов в конкретном биотопе, если встречаемость микроорганизма свыше 50% случаев, то его относят к резидентной группе микроорганизмов, если встречаемость микроорганизма ниже 50% случаев, то его относят к транзиторной группе микроорганизмов, разделяют микроорганизмы по группам, соответствующим группировке на резидентные и транзиторные, вычисляют суммарную нагрузку по каждому виду микроорганизмов: резидентным микроорганизмам, транзиторным микроорганизмам, анаэробным микроорганизмам, микроскопическим грибам, вирусам, вычисляют общую бактериальную или микробную нагрузку, вычисляют процентное соотношение резидентных и транзиторных микроорганизмов от общей бактериальной или микробной нагрузки, вычисляют процентное соотношение анаэробных микроорганизмов от общей бактериальной или микробной нагрузки, определяют допустимый интервал отклонений от нормы для конкретного биотопа конкретного обследуемого (объекта) после сравнения допустимого интервала отклонений, рассчитанного без экстремальных значений, и допустимого интервала отклонений, рассчитанного по всем значениям выборки допустимого интервала отклонений, рассчитанного с применением калибровочного шаблона по стандартной произвольной выборки обследуемых, и находят референтный диапазон для каждой группы микроорганизмов исходя из допустимого интервала отклонений от нормы для конкретного обследуемого.
2. Способ определения референтных значений показателей микроорганизмов по п. 1, отличающийся тем, что отображают после разделения микроорганизмов на группы резидентные и транзиторные в разных разделах таблицы протокола.
3. Способ определения референтных значений показателей микроорганизмов по п. 1, отличающийся тем, что выделяют микроорганизмы в таблице протоколов с помощью окраски резидентных микроорганизмов цветами красного спектра и транзиторных микроорганизмов цветами синего или голубого спектра.
4. Способ определения референтных значений показателей микроорганизмов по п. 1, отличающийся тем, что осуществляют произвольную выборку обследуемых с учетом возраста, или расовой группы, или региона проживания, или режима питания [патент РФ № 2715223, опубликован 02.26.2020].
Недостатком данного изобретения является отсутствие информации об исследовании биотопов урогенитального тракта мужчин для диагностики лечения пациентов с хроническим уретритом, так как в нем речь идет об исследовании микробиоты кишечника, которая несколько отличается от микробного состава уретры, имеющей собственные показатели и состав микрофлоры. Кроме того, в настоящее время в разных областях клинической медицины рассматривается различные варианты деления микроорганизмов: в частности некоторые их классифицируют на патогенные, условно-патогенные и сапрофитные, другие на резидентные и транзиторные (условно-патогенные). Кроме того, некоторые авторы анализ проводят по группам микроорганизмов: бациллы, анаэробы, аэробы, микроскопические грибы, вирусы и т.д. В этой связи всесторонний анализ полученных данных по групповым разновидностям, с учетом общей бактериальной и вирусной является важной целью оценки как качественного, так и реального количественного присутствия каждого компонента микробиоценоза для оценки его индивидуальной роли в патогенезе.
Наиболее близким к заявленному техническому решению является изобретение способ дифференциальной диагностики манифестной и асимптомной форм уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами, у мужчин репродуктивного возраста, характеризующийся тем, что проводят клинический осмотр пациента, установления наличия или отсутствия клинических симптомов уретрита и степени их выраженности, после чего методом микроскопии проводят исследование взятых из уретры биопроб, в которых определяют не более 10 морфотипов микроорганизмов, наличие или отсутствие лабораторных признаков воспаления по количеству лейкоцитов в полях зрения и при наличии выраженных клинических симптомов и количестве ПМЯЛ более 5 предполагают наличие манифестной формы уретрита, а при отсутствии или слабой степени выраженности клинических симптомов, и количестве ПМЯЛ менее 5 судят о наличии стертых клинических симптомов уретрита неясной этиологии, затем методом ПЦР у пациента исследуют биоту на наличие облигатных микроорганизмов, при отсутствии которых методом ПЦР в «реальном времени» определяют этиологическую структуру инфекционно-воспалительного процесса, для чего в биопробе из уретры определяют общее число геномов микроорганизмов, число геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты, полученное значение величины общего числа геномов микроорганизмов сравнивают с показателем нормы, установленной для мужчин репродуктивного возраста - 104,5-5,0 число геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты сравнивают с общим числом геномов микроорганизмов и между собой, и при общем числе геномов микроорганизмов не более 104,5-5,0, числе геномов нормобиоты, равном общему числу геномов микроорганизмов или меньшем его не более чем в 10 раз, числе геномов условно-патогенных микроорганизмов меньшем общего числа геномов микроорганизмов более чем в 100 раз и превышении числа геномов нормобиоты относительно числа геномов условно-патогенной биоты более чем в 10 раз или при отсутствии геномов условно-патогенной биоты определяют состояние нормы биоты уретры, оценивая данный показатель как вариант нормы, при общем числе геномов микроорганизмов более 104,5-5,0, числе геномов нормобиоты меньшем его более чем в 10 раз, числе геномов условно-патогенной биоты, равном общему числу геномов или меньшем его менее чем в 10 раз и превышении числа геномов условно-патогенных микроорганизмов числа геномов нормобиоты более чем в 10 раз устанавливают дисбиоз биоты и диагностируют уретрит, обусловленный условно-патогенными микроорганизмами, при этом на фоне выраженных клинических симптомов и количестве ПМЯЛ более 5 в результатах микроскопии диагностируют его манифестную форму, на фоне отсутствия или недостаточной степени выраженности клинических симптомов и количестве ПМЯЛ более 5 в результатах микроскопии диагностируют его асимптомную форму, а при варианте нормы по данным ПЦР на фоне отсутствии каких либо клинических симптомов и количестве ПМЯЛ более 5 в результатах микроскопии биопробы диагностируют норму ( патент РФ №2458993, опубликован 20.08.2012).
К недостаткам данного метода можно отнести то, что ПЦР дает возможность только качественной характеристики (позволяет идентифицировать микроорганизмы до вида), без определения количественной характеристики исследуемого условно-патогенного микроорганизма и их ассоциаций, поэтому невозможно установить этиологию уретрита и дифференцировать формы, даже в совокупности с микроскопией мазков, окрашенных метиленовым синим и по Граму, наличии или отсутствии клинических симптомов. Полноценная и объективная дифференциальная диагностика форм уретритов, обусловленных условно-патогенными микроорганизмами, позволит избежать диагностических ошибок и назначения нерациональной, патогенетически необоснованной терапии, которая усугубляет течение уретрита. Кроме того, в процессе проведения ПЦР возможно получение как ложноположительных, так и ложноотрицательных результатов по разным причинам (Пособие для врачей. Полимеразная цепная реакция в диагностике урогенитальных инфекций. Москва. - 2000. - 16 с.).
Таким образом очевидна необходимость оценки значений показателей микробиоты по максимально широкому спектру показателей для целей диагностики и назначения этиотропной терапии.
Указанные недостатки устраняются в заявляемом изобретении.
Задачей заявляемого изобретения является создание доказательного способа диагностики хронического идиопатического уретрита у мужчин за счет количественной оценки фонового присутствия маркеров микроорганизмов в мазке уретры, исследуемом методом масс-спектрометрии микробных маркеров (МСММ) у здоровых мужчин без жалоб и больных хроническим идиопатическим уретритом с определенными жалобами и симптомами, сопоставление показателей здоровых и больных хроническим уретритом, и определение достоверных диагностических критериев, позволяющих выявить причину заболевания, не диагностированного другими известными способами хронического идиопатического уретрита. Выявить условно-патогенные микроорганизмы, которые могут свидетельствовать о наличии хронического идиопатического уретрита, обусловленного раннее не выявленной условно-патогенной флорой.
Поставленная задача решается тем, что в исследуемом биоматериале - мазок из уретры, методом МСММ по стандартной медицинской технологии (МЗ РФ № НЮ-40006, 17.08.2009) определяют количественно содержание 57 микроорганизмов с одновременной оценкой общей микробной нагрузки, уровня микроорганизмов по видовым принадлежностям и группам, уровня резидентных микроорганизмов, уровня транзиторных условно-патогенных микроорганизмов, уровня вирусов, уровня эндотоксина и сопоставление показателей между здоровым и больным; при анализе исключаются вирусы, патогенные микроорганизмы, идентифицированные и распространенные условно-патогенные микроорганизмы; исходя из распределения и вариабельности фоновых значений делают заключение о значениях по каждому из показателей микроорганизмов у пациентов в мазке из уретры, проводят сопоставление и анализ результатов МСММ с данными клинической картины и микроскопического исследования мазка из уретры и диагноз хронический идиопатический уретрит устанавливают на основании повышения уровня не менее 3-х условно-патогенных микроорганизмов (таблица 3), при повышении суммарного уровня этих показателей на 50% выше здоровой группы.
2. Способ диагностики хронического уретрита у мужчин по п. 1, отличающийся тем, что микроорганизмы отображают в таблицах с указанием их значений у больных хроническим уретритом и здоровых.
Техническим результатом предложенного изобретения является повышение точности диагностики хронического уретрита путем определения величин отклонений от нормы, которые могут свидетельствовать о наличие хронического идиопатического уретрита. Определение достоверных диагностических критериев по выявлению условно-патогенных микроорганизмов в мазке уретры, имеющих значение для развития хронического идеопатического уретрита, полученных с помощью методики МСММ как у здоровых мужчин без жалоб, так, и у пациентов с жалобами и симптомами.
До настоящего времени основной проблемой остаётся решение вопроса об окончательном количественно-качественном составе нормобиоты уретры мужчин, что не позволяет однозначно и достоверно интерпретировать результаты лабораторного обследования, затрудняет своевременную постановку диагноза, приводит к отсроченной и нерациональной терапии уже на стадии развития осложнений. Данные отечественной и зарубежной литературы, касающиеся количественно-качественного состава нормобиоты уретры здоровых мужчин, противоречивы. Так, по данным отечественных авторов в уретре здоровых мужчин выделяют от 10 до 26 видов микроорганизмов, а по данным зарубежных - более 50 (Овчинников Н.М. Гонококк и лабораторная диагностика гонореи. - М.: 1952; Bacteriology of the urethra in normal men and men with nongonococcal urethritis. W.R.Bowie, H.М.Pollock, P.S.Forsyth, J.F.Floyd, E.R.Alexander, S.P.Wang, and K.K.Holmes, J Clin Microbiol. 1977 November; 6(5): 482-488. H.F.Helmholtz. Determination of the bacterial content of the urethra: a new method, with results of a study of 82 men // J. Urol. 1950; 64: P.158.).
С другой стороны, существующие методы лабораторной диагностики, такие как микроскопии, культуральные методы, ПЦР методы имеют ограничения в плане определения количества микроорганизмов и максимально определяют не более 30 их видов.
Одни авторы считают, что нормобиотой уретры здоровых мужчин принято считать факультативно-анаэробные и аэробные микроорганизмы: Peptococcus, Peptostreptococcus, Bacteroides, Eubacterium, Clostridium, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus aureus, Streptococcus mitis, Enterococcus faecalis, Neisseria spp., Escherichia coli, Proteus spp., Corynebacteria, Pseudomonas aeruginosae (The Normal Flora of Humans (Ken Todar's Microbial World 2006), а другие идентифицируют E.coli, P.aeruginosae, Serratia, Klebsiella, Proteus spp. (Деревянко И.И. Бактериальный простатит: этиология, клиника, лечение // Consilium medicum. 2004; Т6. № 7. С.497-9.), часть исследователей предполагает роль грамположительных микроорганизмов Streptococcus faecalis, Staphylococcus saprophyticus и др.
Однако, по мнению некоторых авторов причинами развития НГУ у мужчин могут быть факультативные и облигатные анаэробные микроорганизмы, обнаруживаемые в урогенитальном биотопе женщин, при одном из самых частых нарушений вагинальной микрофлоры у женщин - бактериальном вагинозе [Тактика ведения пациентов с анаэробным уретритом. Методические рекомендации N2132. Москва 2021; Manhart, L.E. Bacterial vaginosis-associated bacteria in men: association of Leptotrichia/Sneathia spp. with nongonococcal urethritis / L.E. Manhart, Khosropour, С. Liu et al. // Sex Transm Dis. - 2013 - N240(12). - Р.:944-9. doi 24220356].
Некультуральный подход к идентификации микроорганизмов методом МСММ позволяет избежать многих ограничений традиционно применяемых методик. Для диагностики уретрита важны его способность достоверно обнаружить присутствие микроорганизма вне зависимости от его способности расти на искусственных питательных средах. Микробные маркеры - это либо структурные компоненты бактериальных стенок, либо микробные метаболиты, их извлекают непосредственно из клинического материала (мазка уретры) посредством простой и универсальной химической процедуры, что устраняет необходимости в сохранении жизнеспособности микроорганизмов в пробе, тем самым расширяя диагностический диапазон. Извлеченная смесь маркерных веществ микробного происхождения вместе с естественными компонентами биоматериала анализируют с помощью газовой хроматографии масс-спектрометрии (ГХ-МС). Специальная программа разделения многокомпонентной смеси и регистрации специфических ионов, являющая неотъемлемой частью медицинской технологии МСММ, позволяет целевым образом измерить содержание минорных молекул микробного происхождения на фоне подавляющих сигналов матрицы биологического материала. Ядром метода МСММ является математический алгоритм реконструкции микробного сообщества по набору зарегистрированных маркеров.
Метод МСММ стандартизован, разрешен к применению (Разрешение ФС 2010/038 от 24.02.2010) и используется в клинической практике для выявления у уточнения этиологии инфекционно-воспалительных процессов как готовое техническое решение. Метод является высокочувствительным (104-105 клеток/мл), быстрым (2,5 ч на полный цикл исследования), универсальным (бактерии, грибы, вирусы, - все за один анализ образца без повторов), экономичным и имеет широкий диагностический спектр (одновременное количественное определение 57 микроорганизмов). Некультуральный подход дает возможность применения в тех случаях, когда традиционные методы диагностики неэффективны, что особенно актуально при терапии хронического идиопатического уретрита. Метод МСММ в отличие от бактериологических исследований - экспрессный метод: отсутствуют стадии повторных пересевов и биохимических тестов, которые особенно сложны, трудоемки и длительны. Нет необходимости в получении чистой культуры; возможна идентификация некультивируемых форм микроорганизмов. В отличие от иммуносерологических исследований МСММ - прямой метод: отсутствуют ошибочные определения, связанные с индивидуальными вариациями иммунного ответа; он также более чувствительный. В отличие от молекулярно-биологических методов дается адекватная количественная оценка; метод менее дорогой, для его реализации используются доступные любым лабораториям химические реактивы и методики пробоподготовки.
Заявляемое изобретение иллюстрируется следующими таблицами и графическими изображениями:
Таблица 1. Описательные статистики для здоровых мужчин и пациентов с хроническим уретритом по группам микроорганизмов
Таблица 2. Описательные статистики для пациентов с хроническим уретритом и здоровых мужчин по резидентным микроорганизмам
Таблица 3. Описательные статистики для пациентов с хроническим уретритом и здоровых мужчин по транзиторным микроорганизмам
Фиг. 1. Исследование (микроскопия) мазка из уретры пациента Я., 26 лет.
Фиг. 2. Посев на флору мазка из уретры пациента Я., 26 лет.
Фиг. 3. Андрофлора пациента Я., 26 лет. Нормоценоз.
Фиг. 4. Анализ микробиоты пациента Я., 26 лет методом МСММ до лечения.
Фиг. 5. Посев на флору мазка из уретры пациента Я., 26 л. после лечения.
Фиг. 6. Анализ микробиоты пациента Я., 26 л. методом МСММ после лечения.
Фиг. 7. Исследование (микроскопия) мазка из уретры пациента Ф., 42 г.
Фиг. 8. Андрофлора пациента Ф., 42 лет.
Фиг. 9. Анализ микробиоты пациента Ф., 42 г. методом МСММ до лечения.
Фиг. 10. Анализ микробиоты пациента Ф., 42 г. методом МСММ после лечения.
Фиг. 11. Исследование (микроскопия) мазка из уретры исследуемого Н., 44 г.
Фиг. 12. Посев мазка из уретры исследуемого Н., 44 г.
Фиг. 13. Андрофлора исследуемого Н., 44 г.
Фиг. 14. МСММ, исследуемого Н., 44 г.
Подробное описание способа и примеры его клинического выполнения
Способ осуществляется следующим образом.
Пациенту с хроническим идиопатическим уретритом (ХИУ) проводят общеклиническое исследование, включая жалобы, сбор анамнеза, проведение общего объективного осмотра и пальпаторное исследование органов мошонки, при необходимости предстательной железы.
При выполнении клинического осмотра у пациента выясняют характер предъявляемых жалоб: на зуд/жжение в уретре, выделения различного характера и степени выраженности, боль при мочеиспускании, состояние наружного отверстия уретры и головки полового члена, и/или крайней плоти, возможные осложнения со стороны органов урогенитального тракта. При сборе анамнеза, кроме даты начала заболевания выясняют длительность болезни, характер проводимого лечения. Обязательным условием является исключения пациента из исследования, если он принимал антибиотики в ближайшие 3 мес.
После анализа полученных субъективных и объективных данных, устанавливают наличие или отсутствие клинических симптомов уретрита, степень их выраженности, наличие или отсутствие осложнений со стороны органов урогенитального тракта, включая здоровых, обративших без жалоб с целью обследования. Если у исследуемых мужчин без жалоб, выявляли характерные жалобы на уретрит в анамнезе и местные симптомы уретрита их переводили в группу пациентов с уретритом.
Пациентам с хроническим идиопатическим уретритом осуществляют забор содержимого уретры с предварительной обработкой головки полового члена и наружного отверстия уретры водным раствором хлоргексидина. Накануне исследования пациент за сутки воздерживается от половых отношений и на 3 часа от мочеиспускания. Необходимые манипуляции осуществляет врач-уролог и обученный средний медперсонал. Материал брали для микроскопии, посева содержимого уретры, исследование ПЦР (андрофлора) и МСММ.
Всем больным и здоровым методом микроскопии проводят исследование взятых из уретры мазков, окрашенных метиленовым синим и по Грамму. В мазках определяют количества лейкоцитов. У здоровых нормой считали количество лейкоцитов до 5 в полях зрения. При наличии жалоб и местных признаков уретрита, патологией считали количество лейкоцитов более 2 в полях зрения. Независимо от степени выраженности субъективных и/или объективных клинических симптомов и лабораторных признаков воспаления, а также количества лейкоцитов в полях зрения по результатам микроскопии к группе идиопатического уретрита относили больных при отсутствии патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в бакпосеве мазка уретры и андрофлоре.
Кроме того, всем выполняют посев мазка уретры на наличие культивируемых условно-патогенных микроорганизмов, а также сравнительного анализа с методом МСММ. Методом ПЦР - Андрофлора исследуют биоматериал из уретры пациента на наличие инфекционно-воспалительного процесса, обусловленного облигатными патогенами (Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Herpes simplex virus, Human papillomavirus). Эти пациенты были исключены из исследования или (при отсутствии облигатных патогенов) им определяют этиологическую структуру инфекционно-воспалительного процесса для выявления наличия уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами.
Биоматериал из уретры для МСММ получают врачом урологом или другим специалистом, при помощи стерильных, одноразовых уретральных зондов, помещают в пробирку типа Эппендорф с транспортной средой.
Методом МСММ в биопробе из уретры определяют общее число геномов микроорганизмов, число геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты, всего 57 микробиоты и 3 показателя общего значения.
Полученное значение величины общего числа геномов микроорганизмов сравнивают с показателем, полученной для мужчин из группы «здоровых», число геномов нормобиоты и условно-патогенной биоты сравнивают с общим числом геномов микроорганизмов и между собой.
Затем для постановки диагноза хронического идиопатического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами, проводят сопоставление и анализ результатов МСММ с данными клинической картины и микроскопического исследования биопробы из уретры.
Хронический идиопатический уретрит устанавливается на основании повышения уровня не менее 3 условно-патогенных микроорганизмом с наличием жалоб и клинических симптомов в момент исследования или в анамнезе.
Назначают этиологически направленную терапию на основании идентифицированных условно-патогенных микроорганизмов в результатах ПЦР в «реальном времени» согласно разработанным критериям.
Все образцы содержимого уретры обрабатывали на «Микробиологическом анализаторе МАЭСТРО» (ООО «Интерлаб», Россия), который представляет ГХ-МС, оснащенный системой автоматического ввода проб и полным пакетом программного обеспечения необходимого для анализа МСММ, возможно применение зарубежного ГХ-МС (Agilent Technologies, США), вручную настраиваемого под требования медицинской технологии. В результате исследования МСММ каждый отобранный образец характеризуется измеренным численным содержанием 57 микроорганизмов, включая анаэробы, актинобактериии, вирусы и грибы, а также тремя дополнительными показателями: суммарной микробной нагрузкой, резидентные и условно-патогенные микроорганизмы, содержанием эндотоксина и плазмалогена, итого - 60 показателей.
Статистическое исследование проводили при помощи специальных статистических критериев. При проведении статистического исследования у пациентов с ХИУ оценивалась диагностическая значимость каждого микроба с помощью метода МСММ. Сравнение проводилось по группам здоровых и пациентов с признаками ХУ. Распределения показателей отличались от нормального, в связи с этим был использован U-критерий Манна-Уитни (сравнивались медианы выборок, нижний и верхний квартиль) с уровнем значимости 0,05. Для статистической обработки данных и работы с графикой использовалась среда R.
На 1 этапе проанализировали жалобы, анамнез, данные объективного исследования, микроскопии мазка уретры, посев мазка на флору из уретры, андрофлору.
На 2 этапе проводили анализ МСММ мазков из уретры, при этом ми исключали такие распространенные условно-патогенные микроорганизмы, таких как уреаплазмы, микоплазмы, кандида, вирусы и др., роль которой в развитии уретрита давно доказана, т.е. фактически за счет расширения микробного состава методом МСММ, исследовали более расширенный состав условно-патогенной флоры. Анализ проводился по группам микроорганизмов, между резидентными и транзиторными микроорганизмами, а также определяли суммарную нагрузку. С учетом клинической картины причинами ХИУ мы считали повышение уровня как минимум 3 условно-патогенной флоры и при повышении суммарного уровня этих показателей на 50% выше здоровый группы.
Анализ распределение численности микроорганизмов, определяемых методом МСММ по видовым принадлежностям (Таблица 1) показал, что в группе кокки, бациллы суммарная нагрузка между здоровыми и больным с хроническим уретритом составила 10024,70 ±7906,84 и 11169,21 ±21902,27 соответственно и разница была не достоверной, а среди них из условно-патогенных микроорганизмов уровень Bacillus cereus значительно превышал по сравнению с контрольной группой. В группе анаэробов суммарная нагрузка между здоровыми и больным с хроническим уретритом составила 10024,70 ±7906,84 и 11169,21 ±21902,27 и разница была не достоверной и из условно-патогенных уровень Cl. hystolyticum/Str. Pneumonia достоверно был повышенным по сравнению с контрольной группой, а также выявлено высокие уровни условно-патогенных Peptostreptococcus anaerobius18623 и Peptostreptococcus anaerobius17642 по сравнению с здоровыми.
Следующую группу составили Актинобактерии суммарная нагрузка которой составила 957,42 ± 1321,48 и 746,01 ± 772,60 соответственно по группа без достоверной разницы.
В группе Граммотрицательные палочки суммарная нагрузка между здоровыми и больным с хроническим уретритом составила 166,89 ± 354,14 и 290,56 ± 212,35 и разница была не достоверной и среди условно-патогенных уровень Kingella spp. достоверно был повышенным по сравнению с контрольной группой. Микроскопические грибы в обеих группах достоверной разницы между показателями не выявила.
Суммарная нагрузка микроорганизмов между здоровых и больных составила 14027,94±9455,89 и 12459,10±8172,93 соответственно и разница была не достоверной.
Таким образом, анализ таблицы 1 показывает, что суммарная нагрузка по группам микроорганизмов между здоровыми и больными достоверную разницу не выявила, а среди условно-патогенных выявлена достоверная разница, что указывает на роль этих микроорганизмов в развитии хронического уретрита.
Следующим этапов нами произведена анализ определения уровня микроорганизмов между группами среди резидентных микроорганизмов (Таблица 2.). Суммарная нагрузка между здоровыми и больными составила 11616,06±8643,8 и 12701,97±22342,8 (р=0,0975), т.е. достоверной разницы между показателями не выявлено, хотя показатели некоторых микроорганизмов отличались. В этой группе мы обращали внимание на значительное повышения уровня микроорганизмов, если таковы имеются.
С другой стороны анализ показал, что уровень транзиторных (условно-патогенных) микроорганизмов (Таблица 3.) достоверно отличается между здоровыми и больными идиопатическим уретритом и составил 612,02± 428,49 и 1051,24 ±576,33 (р= 0,0029) соответственно, что имеет важное значение для практического врача. Выявлено, что уровень большинство условно-патогенных микроорганизмов достоверно выше по сравнению с нормой. В процессе анализа выявлено, что у больных ХИУ уровень 2-7 условно-патогенных микроорганизмов был значительно выше пороговых значений у 104 (88%) пациента из 118, а здоровых только у 12 (11%) из 109 отмечалось повышение уровня показателей не более 2 микроорганизма при МСММ исследовании (Таблица 2). Кроме того, у больных ХИУ также отмечалось достоверное повышение уровня в норме не встречаемых микроорганизмов.
Таким образом, с учетом проведенного анализа, выявлено увеличение суммарного содержания условно-патогенных микроорганизмов у больных ХИУ. Эти данные указывают на необходимость проведения антибактериальной терапии. Полученные результаты показали резкое уменьшение или исчезновение клинических симптомов и достоверное снижения уровня условно-патогенных микроорганизмов, что наглядно иллюстрированы в ниже приведенных клинических примерах (Примеры №1,2).
В клинической практике результат анализа МСММ мазка уретры пациента, обратившегося с жалобами, сопоставляется с вычисленными здоровыми, зарегистрированные значения, превышающие референтные, автоматически выделяются цветом в отчете и отражаются в диаграмме для удобства работы врача.
Таким образом, с учетом построенных диаграмм и таблиц с описательными статистиками были определены значения микробиоты уретры. Данные результаты имеют существенную клиническую значимость, так как облегчают врачу задачу постановки диагноза, правильного наблюдения за пациентом, выработки тактики лечения, подбора этиотропных препаратов. Также полученные данные позволяют врачу на первоначальном этапе оценить степень тяжести заболевания и выработать прогноз течения болезни.
Предлагаемый способ определения значений показателей микроорганизмов в уретре позволяет провести высокоточную диагностику хронического идиопатического уретрита, путем сопоставления с данными здоровых мужчин с учетом показателей транзиторных организмов.
Выявление у мужчин с жалобами, но с отсутствием микроорганизмов по данным микроскопии, культуральных и ПЦР методов, фоновых микроорганизмов позволили определить достоверные диагностические критерии, позволяющие врачу заподозрить наличие идиопатического уретрита. Таким образом, врач получает данные указывающие на диагнозе идиопатического уретрита у пациентов и для определения адекватной тактики лечения.
Таким образом, в заключение можно констатировать, что заявляемый новый способ диагностики хронического уретрита у мужчин обладает высокой точностью, информативностью, объективностью и доказательностью, опираясь на количественные и качественные критерии. Использование методики СММ отличается высокой чувствительностью (1×103-1×104 клеток в пробе) и достоверностью, возможностью использования в клинической диагностике. Способность выявлять возбудителей инфекций, которые другими методами не выявляются, а также находящихся в «спящем» состоянии (микроколонии окутаны защитной полисахаридной капсулой) делает метод универсальным в отношении разных групп микроорганизмов: бактерий, грибов, вирусов с возможностью идентификации микроорганизмов до вида. Он позволяет в короткие сроки (полное время анализа составляет 2 ч), провести диагностику идиопатических уретритов, выявить этиологическую структуру на основании объективных и точных результатов исследования пациента, назначить своевременное этиотропное лечение, а также осуществлять динамическое наблюдение за эффективностью проводимой терапии.
Способ может применяться как для диагностики, так и для контроля лечения. Способ доступен в применении и может быть использован в условиях любой практической лаборатории.
Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами.
Пример 1.
Пациент Ш-ев, 27 лет. Диагноз: хронический уретрит. Поступил с жалобами на дискомфорт в области промежности, на периодические рези в области мочеиспускательного канала. Считает себя больным в течении нескольких месяцев. 3 мес назад обследовался по поводу ИППП патология не выявлено. В связи с усилением симптомов заболевания обратился с целью обследования и лечения. С целью верификации диагноза была выполнена микроскопия мазка из уретры, где обнаружено повышение количества лейкоцитов 12-15 (Фиг. 1). Бактериологический посев выявил рост Streptococcus agalactiae в пограничной зоне (Фиг. 2). Андрофлора - нормоценоз (Фиг. 3).
Проведено обследование по заявляемому способу (Фиг. 4). В анализе методом МСММ выявлено повышение уровня 5 условно-патогенных микроорганизмов: Staphylococcus aureus более чем в 8 раз, Peptostreptococcus anaerobius18623 более чем в 2 раза, Candida spp., а также повышение уровня Clostridium difficile и Enterococcus spp. Суммарное содержание транзиторных (условно-патогенных) микроорганизмов увеличено почти в более чем 5 раз по сравнению с здоровой группой. Кроме того, выявлено повышение уровня плазмологен (Фиг. 4).
По результатам обследования были назначены этиотропные препараты. Контроль за ходом лечения осуществлялся проведением повторных анализов. В контрольных анализах в культуральном посеве роста флоры не выявлено (Фиг. 5). На контрольной МСММ выявлено исчезновение или значительное снижение показателей условно-патогенных микроорганизмов, а также снижение уровня повышенных до лечения резидентных микроорганизмов до пороговых значений (Фиг. 6).
Пример 2.
Пациент Ф-ев, 42 г. Диагноз: хронический уретрит. Поступил с жалобами на периодические рези в области мочеиспускательного канала, покраснение наружного отверстия уретры. Считает себя больным в течении более 2 лет. Со слов неоднократно обследовался у уролога, где данных за ИППП и других лабораторных признаков уретрита не выявлено, принимал периодически противогрибковые препарата без улучшения. В связи с усилением симптомов заболевания обратился с целью обследования лечения. С целью верификации диагноза была выполнена микроскопия мазка из уретры, где обнаружено повышение количества лейкоцитов 1-2 (Фиг. 7). Бактериологический посев роста флоры не выявил. Андрофлора - дисбиоз (Фиг. 8).
Проведено исследование МСММ по заявляемому способу (Фиг. 9). В анализе методом МСММ выявлено значительное повышение уровня 4 условно-патогенных микроорганизмов: Staphylococcus aureus более чем в 6 раз, Peptostreptococcus anaerobius18623 более чем в 3 раза, Энтеробактерии 2 вида. Суммарное содержание транзиторных (условно-патогенных) микроорганизмов увеличено почти в более чем 4 раза по сравнению с здоровой группой (Фиг. 9).
По результатам обследования были назначены этиотропные препараты. Контроль за ходом лечения осуществлялся проведением повторных анализов. В контрольных анализах в культуральном посеве роста флоры не выявлено. На контрольной МСММ выявлено исчезновение или значительное снижение показателей условно-патогенных микроорганизмов, а также снижение уровня повышенных до лечения резидентных микроорганизмов до пороговых значений (Фиг. 10).
Пример 3.
Обследуемый Н., 44 года. Диагноз: обследование. Обратился для обследования через мес после случайного полового контакта без предъявления жалоб. С целью обследования выполнена микроскопии мазка из уретры, где обнаружено лейкоциты до 6 в п/з (Фиг. 11). Бактериологический посев мазке уретры роста флоры не выявил (Фиг. 12). Андрофлора - нормоценоз (Фиг. 13).
Проведено исследование МСММ по заявляемому способу (Фиг. 14). В анализе методом МСММ выявлено незначительное повышение уровня только 1 условно-патогенного микроорганизма Staphylococcus aureus в пределах ниже порогового значения (Фиг. 14).
По результатам обследования рекомендовано динамическое наблюдение.
В ходе разработки заявляемого способа диагностики хронического уретрита у мужчин, нами проведено исследование мазка уретры у 118 мужчин, возраст от 20 до 45 лет, средний возраст 30,22 года с различными жалобами или объективными признаками уретрита. Кроме того, обследовано 109 здоровых, обратившихся для обследования. У всех было выполнено исследование мазка из уретры: микроскопия, посев на микрофлору и чувствительность к антибиотикам - рост не выявлен. По данным Андрофлор у 6 пациентов - умереный дисбиоз и у остальных нормоценоз. И только в анализах МСММ выявлено значительное повышение уровня условно-патогенных микроорганизмов. У здоровых мужчин все показатели были в норме.
На основании сопоставления клинико-анамнестических данных, результатов лабораторных исследований и результатов статистического анализа авторами разработаны количественные и качественные критерии, позволяющие диагностировать нормобиоту и состояния дисбаланса биоты при уретрите, обусловленном условно-патогенными микроорганизмами, у мужчин репродуктивного возраста, что позволяет проводить объективную дифференциальную диагностику идиопатического уретрита, обусловленных условно-патогенными микроорганизмами.
В качестве количественного критерия предложен разработанный авторами показатель соотношения между общим числом геномов бактерий, характерных для мужчин репродуктивного возраста, числом геномов нормобиоты и отдельных условно-патогенных микроорганизмов у исследуемого пациента, позволяющий диагностировать нормобиоту или ХИУ. Объективное определение этиологического значения конкретного условно-патогенного микроорганизма или их ассоциации в развитии уретрита позволяет стандартизировать лекарственную терапию согласно принципу показания. Своевременно назначенная терапия позволяет предупредить развитие осложнений, связанных с нарушением репродуктивной функции (простатит, орхит, эпидидимит), и, как их следствие, бесплодия.
Таким образом, впервые разработан способ диагностики хронического уретрита идиопатической формы, обусловленной условно-патогенными микроорганизмами, за исключением известных условно-патогенных у мужчин репродуктивного возраста, который является высокоэффективным и доказательным. Он дает возможность провести достоверную диагностику идиопатического уретрита, обусловленного условно-патогенной биотой, и выявить этиологическую структуру ХИУ.
Способ обладает высокой точностью, информативностью, объективностью и доказательностью, опираясь на количественные и качественные критерии. Он позволяет в короткие сроки, в течение 2-х часов, провести диагностику идиопатического уретрита, выявить этиологическую структуру на основании объективных и точных результатов исследования пациента, назначить своевременное этиотропное лечение, а также осуществлять динамическое наблюдение за эффективностью проводимой терапии.
Заявляемый способ апробирован в клинике на достаточно большом количестве пациентов, показал свою применимость и эффективность и может быть рекомендован к применению в урологической практике.
| Таблица 2. Описательные статистики для пациентов с хроническим уретритом и здоровых мужчин по резидентным микроорганизмам | ||||
| № | Показатель | |||
| 1 | Actinomyces spp. | 74,76 ± 247,66 | 26,79 ± 50,84 | 0,0344 |
| 2 | Actinomyces viscosus | 358,42 ± 539,20 | 347,69 ± 464,78 | 0,6041 |
| 3 | Alcaligenes spp. | 27,69 ± 191,59 | 11,31 ± 46,21 | 0,7761 |
| 4 | Bifidobacterium spp. | 241,96 ± 515,56 | 162,55 ± 357,25 | 0,5535 |
| 5 | Blautia coccoides | 129,53 ± 412,59 | 402,08±1198,23 | 0,9152 |
| 6 | Clostridium perfringens | 21,43 ± 96,53 | 46,94 ± 236,05 | 0,1935 |
| 7 | Clostridium spp. | 1430,54±2340,77 | 939,62± 1996,07 | <0,0001 |
| 8 | Clostridium propionicum | 83,98 ± 277,86 | 160,13 ± 450,89 | 0,7109 |
| 9 | Clostridium ramosum | 656,55± 1404,15 | 1252,66±3894,39 | 0,1321 |
| 10 | Corynebacterium spp. | 25,65 ± 64,43 | 23,76 ± 60,94 | 0,5387 |
| 11 | Eggerthella lenta | 4873,20±19 596,47 | 2837,96±2800,24 | 0,2041 |
| 12 | Eubacterium spp. | 246,78 ± 558,24 | 213,75 ± 351,14 | 0,8587 |
| 13 | Fusobacterium spp. | 2,27 ± 11,90 | 381,7 ± 1155,91 | 0,0007 |
| 14 | Lactobacillus spp. | 1915,47±2698,57 | 2012,42±2387,15 | 0,9852 |
| 15 | Nocardia spp. | 32,99 ± 121,08 | 63,73 ± 266,93 | 0,4272 |
| 16 | Prevotella spp. | 30,48 ± 47,11 | 116,97 ± 508,81 | 0,0208 |
| 17 | Propionibacterium spp | 11,22 ± 27,52 | 23,04 ± 109,41 | 0,7622 |
| 18 | Propionibacterium acnes | 54,83 ± 181,92 | 208,93 ± 654,07 | 0,7300 |
| 19 | Propionibacterium freudenreichii | 851,62± 1195,01 | 822,23± 1086,89 | 0,9900 |
| 20 | Propionibacterium jensenii | 185,74 ± 541,48 | 126,87 ± 278,54 | 0,3408 |
| 21 | Pseudonocardia spp. | 33,21 ± 82,50 | 33,21 ± 93,11 | 0,3047 |
| 22 | Rhodococcus spp. | 141,59 ± 178,46 | 249,27± 1125,18 | 0,6800 |
| 23 | Staphylococcus spp. | 281,14 ± 485,88 | 305,97 ± 769,23 | 0,4594 |
| 24 | Staphylococcus epidermidis | 31,02 ± 114,32 | 32,82 ± 107,06 | 0,9738 |
| 25 | Streptococcus mutans | 465,25 ± 524,62 | 474,03 ± 422,41 | 0,3021 |
| 26 | Streptococcus spp. | 372,3±1302,1 | 122,4 ± 534,27 | 0,0005 |
| 27 | Streptomyces spp. | 33,15 ± 60,94 | 29,44 ± 49,76 | 0,4768 |
| 28 | Streptomyces farmamarensis. | 1,66 ± 11,14 | 0,34 ± 2,85 | 0,5068 |
| Сумма | 12701,97±22342,8 | 11616,06±8643,8 | 0,0975 | |
| Таблица 3. Описательные статистики для пациентов с хроническим уретритом и здоровых мужчин по транзиторным микроорганизмам | ||||
| № | Показатель | |||
| 1 | Bacillus cereus. | 19,68 ± 63,95 | 0,92 ± 7,78 | 0,0028 |
| 2 | Bacterioidis fragilis. | 0,10 ± 0,62 | 53,49 ± 406,05 | 0,2820 |
| 3 | Staphylococcus aureus. | 281,14 ± 485,88 | 305,97 ± 769,23 | 0,4594 |
| 4 | Clostridium difficile. | 27,55 ± 71,12 | 30,18 ± 70,06 | 0,2207 |
| 5 | Cl. hystolyticum/Str. pneumonia. | 104,60±264,78 | 20,93 ± 70,27 | 0,0048 |
| 6 | Enterococcus spp.. | 96,86 ± 134,40 | 75,65 ± 123,96 | 0,0638 |
| 7 | Flavobacterium spp.. | 1,75 ± 16,94 | 2,54 ± 19,25 | 0,3781 |
| 8 | Helicobacter pylori. | 43,28 ± 351,55 | 5,12 ± 21,62 | 0,4141 |
| 9 | Kingella spp.. | 22,50 ± 90,83 | 1,87 ± 9,39 | 0,0150 |
| 10 | Actinomyces spp.. | 74,76 ± 247,66 | 26,79 ± 50,84 | 0,0344 |
| 11 | Peptostreptococcus anaerobius18623. | 208,61 ± 527,33 | 134,83 ± 340,47 | 0,0392 |
| 12 | Peptostreptococcus anaerobius17642. | 38,06 ± 229,41 | 23,17 ± 153,27 | 0,6360 |
| 13 | Propionibacterium spp. | 11,22 ± 27,52 | 23,04 ± 109,41 | 0,7622 |
| 14 | Acinonetobacter spp. | 3,75 ± 21,10 | 1,85 ± 9,04 | 0,3618 |
| 15 | Pseudomonas aeruginosa. | 1,07 ± 6,31 | 0,01 ± 0,12 | 0,3227 |
| 16 | Энтеробактерии. | 116,31±517,08 | 46,07 ± 351,31 | 0,02466 |
| 17 | Сумма | 1051,24 ±576,33 | 612,02± 428,49 | 0,0029 |
Claims (4)
1. Способ диагностики хронического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами, включающий в себя клинический осмотр пациента, установление наличия или отсутствия клинических симптомов уретрита и степени их выраженности, исследование взятых из уретры биопроб, отличающийся тем, что в исследуемом материале – мазке из уретры - методом масс-спектрометрии микробных маркеров (МСММ), одновременно определяют количественно содержание 57 микроорганизмов с одновременной оценкой общей микробной нагрузки, уровня микроорганизмов по видовым принадлежностям и группам, уровня резидентных микроорганизмов, уровня транзиторных условно-патогенных микроорганизмов, уровня вирусов, уровня эндотоксина и диагноз хронический идиопатический уретрит устанавливают на основании повышения уровня не менее 3-х условно-патогенных микроорганизмов в соответствии с таблицей 3, представленной в описании, при повышении суммарного уровня этих показателей как минимум на 50% выше здоровой группы.
2. Способ диагностики хронического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами по п. 1, отличающийся тем, что диагноз устанавливают после выявления микроорганизмов в случаях, когда посев и ПЦР не дают результатов.
3. Способ диагностики хронического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами по п. 1, отличающийся тем, что диагноз устанавливают на основании повышения уровня не менее 3 условно-патогенных микроорганизмом с наличием жалоб и клинических симптомов в момент исследования или в анамнезе.
4. Способ диагностики хронического уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами по п. 1, отличающийся тем, что диагноз устанавливают на основании повышения уровня не менее 3-х условно-патогенных микроорганизмом в уретре у пациентов с жалобами и клиническими симптомами в момент осмотра или в анамнезе, путем сопоставления данных здоровых мужчин с учетом показателей транзиторных организмов.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2812604C1 true RU2812604C1 (ru) | 2024-01-30 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2153672C1 (ru) * | 1999-10-22 | 2000-07-27 | Московский областной научно-исследовательский клинический институт | Способ дифференциальной диагностики воспалительных процессов в мочеполовых путях у мужчин |
| RU2458993C1 (ru) * | 2011-06-30 | 2012-08-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Российская медицинская академия последипломного образования" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ДПО РМАПО Минздравсоцразвития России) | Способ дифференциальной диагностики манифестной и асимптомной форм уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами, у мужчин репродуктивного возраста |
| RU2605622C2 (ru) * | 2014-12-22 | 2016-12-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ дифференциальной диагностики уретритов у мужчин |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2153672C1 (ru) * | 1999-10-22 | 2000-07-27 | Московский областной научно-исследовательский клинический институт | Способ дифференциальной диагностики воспалительных процессов в мочеполовых путях у мужчин |
| RU2458993C1 (ru) * | 2011-06-30 | 2012-08-20 | Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Российская медицинская академия последипломного образования" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ДПО РМАПО Минздравсоцразвития России) | Способ дифференциальной диагностики манифестной и асимптомной форм уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами, у мужчин репродуктивного возраста |
| RU2605622C2 (ru) * | 2014-12-22 | 2016-12-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ дифференциальной диагностики уретритов у мужчин |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ЕВСТИГНЕЕВА Н.П. и др. Идентификация условно-патогенной микрофлоры методом времяпролетной масс-спектрометрии (MALDI TOF MS) у пациентов с негонококковыми уретритами. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2014, 5, стр. 48-53. * |
| КАДЫРОВ З.А. Микробиота уретры у здоровых мужчн и больных уретритом. Урология. 2021, 6, стр. 136-140. FROLUND M. et al. The bacterial microbiota in first-void urine from men with and without idiopathic urethritis. PLoS ONE. 2018, 13(7): e0201380. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Babu et al. | Comparative study on the vaginal flora and incidence of asymptomatic vaginosis among healthy women and in women with infertility problems of reproductive age | |
| Shipitsyna et al. | Bacterial vaginosis-associated vaginal microbiota is an age-independent risk factor for Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium and Trichomonas vaginalis infections in low-risk women, St. Petersburg, Russia | |
| Bracewell‐Milnes et al. | Investigating the effect of an abnormal cervico‐vaginal and endometrial microbiome on assisted reproductive technologies: a systematic review | |
| Frølund et al. | Urethritis-associated pathogens in urine from men with non-gonococcal urethritis: a case-control study | |
| Cools et al. | A multi-country cross-sectional study of vaginal carriage of group B streptococci (GBS) and Escherichia coli in resource-poor settings: prevalences and risk factors | |
| Donders | Definition and classification of abnormal vaginal flora | |
| Wang et al. | Diagnosis and microecological characteristics of aerobic vaginitis in outpatients based on preformed enzymes | |
| Ling et al. | Diversity of cervicovaginal microbiota associated with female lower genital tract infections | |
| Menard et al. | Self-collected vaginal swabs for the quantitative real-time polymerase chain reaction assay of Atopobium vaginae and Gardnerella vaginalis and the diagnosis of bacterial vaginosis | |
| Horner et al. | Do all men attending departments of genitourinary medicine need to be screened for non-gonococcal urethritis? | |
| Gad¹ et al. | Evaluation of different diagnostic methods of bacterial vaginosis | |
| Kampan et al. | Evaluation of BV® Blue Test Kit for the diagnosis of bacterial vaginosis | |
| Nelson et al. | Self-collected versus provider-collected vaginal swabs for the diagnosis of bacterial vaginosis: an assessment of validity and reliability | |
| Bitew et al. | The prevalence, antibiotic resistance pattern, and associated factors of bacterial vaginosis among women of the reproductive age group from felege hiwot referral hospital, Ethiopia | |
| Muharram et al. | A preliminary assessment of asymptomatic bacteriuria of pregnancy in Brunei Darussalam | |
| Jung et al. | Growth forms of Gardnerella spp. and Lactobacillus spp. on vaginal cells | |
| Sarıer et al. | Results of multiplex polymerase chain reaction assay to ıdentify urethritis pathogens | |
| Yoshimura et al. | Effects of pelvic organ prolapse ring pessary therapy on intravaginal microbial flora | |
| Sezer et al. | Assessment of vaginal and endometrial microbiota by real‐time PCR in women with unexplained infertility | |
| Yasin et al. | Vulvovaginitis prevalence among women in gondar, Northwest Ethiopia: Special emphasis on aerobic vaginitis causing bacterial profile, antimicrobial susceptibility pattern, and associated factors | |
| Elnashar | Impact of endometrial microbiome on fertility | |
| Nickel et al. | The healthy urinary microbiome in asymptomatic participants in the MAPP Network Study: Relation to gender, age, and menopausal status | |
| Nzomo et al. | Bacterial vaginosis and correlates in women of reproductive age in Thika, Kenya | |
| RU2362808C1 (ru) | Способ диагностики дисбаланса микробиоты различных биотопов человека и степени его выраженности | |
| RU2458993C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики манифестной и асимптомной форм уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами, у мужчин репродуктивного возраста |