RU2811365C2 - Лечение сердечной недостаточности у человека - Google Patents
Лечение сердечной недостаточности у человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2811365C2 RU2811365C2 RU2022100450A RU2022100450A RU2811365C2 RU 2811365 C2 RU2811365 C2 RU 2811365C2 RU 2022100450 A RU2022100450 A RU 2022100450A RU 2022100450 A RU2022100450 A RU 2022100450A RU 2811365 C2 RU2811365 C2 RU 2811365C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oligonucleotide
- heart failure
- dose
- administered
- mir
- Prior art date
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 104
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 title claims abstract description 89
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 111
- 108091028080 MiR-132 Proteins 0.000 claims abstract description 55
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 43
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 claims abstract description 40
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 31
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 27
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims abstract description 21
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 208000020446 Cardiac disease Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims abstract description 14
- OLXZPDWKRNYJJZ-UHFFFAOYSA-N 5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-ol Chemical group C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 OLXZPDWKRNYJJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical group O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 206010007558 Cardiac failure chronic Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 108091069024 Homo sapiens miR-132 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 108091090568 miR-39 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 108091056739 miR-39-1 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 108091039160 miR-39-2 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims abstract description 7
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 claims abstract description 6
- YKBGVTZYEHREMT-UHFFFAOYSA-N 2'-deoxyguanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1CC(O)C(CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 2'‐deoxycytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 0.000 claims abstract description 6
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- CKTSBUTUHBMZGZ-UHFFFAOYSA-N Deoxycytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1OC(CO)C(O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N desoxyinosine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 36
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 34
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 31
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims description 31
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 27
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 19
- 102400001263 NT-proBNP Human genes 0.000 claims description 17
- 108010008064 pro-brain natriuretic peptide (1-76) Proteins 0.000 claims description 17
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 15
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 claims description 15
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 14
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 14
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 13
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 claims description 13
- 206010006578 Bundle-Branch Block Diseases 0.000 claims description 12
- 206010007572 Cardiac hypertrophy Diseases 0.000 claims description 10
- 208000006029 Cardiomegaly Diseases 0.000 claims description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 10
- 108091070482 Caenorhabditis elegans miR-39 stem-loop Proteins 0.000 claims description 9
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 claims description 9
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 9
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 9
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 claims description 9
- 108010001517 Galectin 3 Proteins 0.000 claims description 8
- 230000009787 cardiac fibrosis Effects 0.000 claims description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 8
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 claims description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 8
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 claims description 7
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 claims description 7
- 208000003037 Diastolic Heart Failure Diseases 0.000 claims description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims description 7
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 7
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 7
- 102000008873 Angiotensin II receptor Human genes 0.000 claims description 6
- 108050000824 Angiotensin II receptor Proteins 0.000 claims description 6
- 101800000407 Brain natriuretic peptide 32 Proteins 0.000 claims description 6
- 206010006580 Bundle branch block left Diseases 0.000 claims description 6
- 206010006582 Bundle branch block right Diseases 0.000 claims description 6
- 208000008253 Systolic Heart Failure Diseases 0.000 claims description 6
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 6
- 201000001715 left bundle branch hemiblock Diseases 0.000 claims description 6
- 201000007916 right bundle branch block Diseases 0.000 claims description 6
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 claims description 5
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 claims description 5
- 229940097320 beta blocking agent Drugs 0.000 claims description 5
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 claims description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 5
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 claims description 5
- 102000000802 Galectin 3 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100039558 Galectin-3 Human genes 0.000 claims description 4
- 101001030243 Homo sapiens Myosin-7 Proteins 0.000 claims description 4
- 108010084498 Myosin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 4
- 102000005604 Myosin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 4
- 102100038934 Myosin-7 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims description 4
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims description 4
- 229940123518 Sodium/glucose cotransporter 2 inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 239000002792 enkephalinase inhibitor Substances 0.000 claims description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 4
- 108010016165 Matrix Metalloproteinase 2 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100027732 Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 2 Human genes 0.000 claims description 3
- 101710109123 Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 2 Proteins 0.000 claims description 3
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003087 receptor blocking agent Substances 0.000 claims description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 101710129690 Angiotensin-converting enzyme inhibitor Proteins 0.000 claims description 2
- 102000002723 Atrial Natriuretic Factor Human genes 0.000 claims description 2
- 101800001288 Atrial natriuretic factor Proteins 0.000 claims description 2
- 101800001890 Atrial natriuretic peptide Proteins 0.000 claims description 2
- 101710086378 Bradykinin-potentiating and C-type natriuretic peptides Proteins 0.000 claims description 2
- 102100036213 Collagen alpha-2(I) chain Human genes 0.000 claims description 2
- JVHXJTBJCFBINQ-ADAARDCZSA-N Dapagliflozin Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1CC1=CC([C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)=CC=C1Cl JVHXJTBJCFBINQ-ADAARDCZSA-N 0.000 claims description 2
- 101000875067 Homo sapiens Collagen alpha-2(I) chain Proteins 0.000 claims description 2
- 102000000070 Sodium-Glucose Transport Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010080361 Sodium-Glucose Transport Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 2
- 229940125400 channel inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- 229960003834 dapagliflozin Drugs 0.000 claims description 2
- 230000001882 diuretic effect Effects 0.000 claims description 2
- 229960003345 empagliflozin Drugs 0.000 claims description 2
- OBWASQILIWPZMG-QZMOQZSNSA-N empagliflozin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CC=C(Cl)C(CC=2C=CC(O[C@@H]3COCC3)=CC=2)=C1 OBWASQILIWPZMG-QZMOQZSNSA-N 0.000 claims description 2
- ACRHBAYQBXXRTO-OAQYLSRUSA-N ivabradine Chemical compound C1CC2=CC(OC)=C(OC)C=C2CC(=O)N1CCCN(C)C[C@H]1CC2=C1C=C(OC)C(OC)=C2 ACRHBAYQBXXRTO-OAQYLSRUSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003825 ivabradine Drugs 0.000 claims description 2
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 claims 3
- 101710151806 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 claims 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 claims 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 claims 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 30
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 abstract description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 abstract description 12
- 208000019269 advanced heart failure Diseases 0.000 abstract description 4
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 62
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 37
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 37
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 37
- 108091052728 miR-132 stem-loop Proteins 0.000 description 35
- 108091027019 miR-132-1 stem-loop Proteins 0.000 description 35
- 108091041017 miR-132-2 stem-loop Proteins 0.000 description 35
- 108091045692 miR-132-3 stem-loop Proteins 0.000 description 35
- 108091073227 miR-132-4 stem-loop Proteins 0.000 description 35
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 33
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 29
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 28
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 20
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 18
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 18
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 16
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 14
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 14
- 230000006870 function Effects 0.000 description 13
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 12
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 12
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 12
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 11
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000013461 design Methods 0.000 description 11
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 10
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 10
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 9
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 101000877681 Homo sapiens Forkhead box protein O3 Proteins 0.000 description 8
- 101000930963 Homo sapiens Forkhead box protein O3B Proteins 0.000 description 8
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 8
- 230000003510 anti-fibrotic effect Effects 0.000 description 8
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 8
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 7
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229950004398 broxuridine Drugs 0.000 description 7
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 7
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 7
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 7
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 6
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 101150046266 foxo gene Proteins 0.000 description 6
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 6
- 102100036313 Forkhead box protein O3B Human genes 0.000 description 5
- 101000627872 Homo sapiens 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 description 5
- 238000003646 Spearman's rank correlation coefficient Methods 0.000 description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- -1 e.g. Proteins 0.000 description 5
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 5
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 5
- 210000005246 left atrium Anatomy 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 5
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 4
- 102000013519 Lipocalin-2 Human genes 0.000 description 4
- 108010051335 Lipocalin-2 Proteins 0.000 description 4
- 229940083712 aldosterone antagonist Drugs 0.000 description 4
- 230000002236 anti-hypertrophic effect Effects 0.000 description 4
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 4
- 230000003205 diastolic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 244000309715 mini pig Species 0.000 description 4
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 4
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 4
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 4
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 3
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 3
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 3
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 3
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 3
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 3
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 3
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 239000002170 aldosterone antagonist Substances 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000009091 contractile dysfunction Effects 0.000 description 3
- 230000008828 contractile function Effects 0.000 description 3
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 230000035487 diastolic blood pressure Effects 0.000 description 3
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 3
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 3
- 206010003658 Atrial Fibrillation Diseases 0.000 description 2
- 238000011814 C57BL/6N mouse Methods 0.000 description 2
- 101150008975 Col3a1 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 description 2
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 description 2
- 206010052337 Diastolic dysfunction Diseases 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 2
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 2
- 206010049694 Left Ventricular Dysfunction Diseases 0.000 description 2
- 108010007859 Lisinopril Proteins 0.000 description 2
- 102000000424 Matrix Metalloproteinase 2 Human genes 0.000 description 2
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 2
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 2
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 2
- YIQKLZYTHXTDDT-UHFFFAOYSA-H Sirius red F3B Chemical compound C1=CC(=CC=C1N=NC2=CC(=C(C=C2)N=NC3=C(C=C4C=C(C=CC4=C3[O-])NC(=O)NC5=CC6=CC(=C(C(=C6C=C5)[O-])N=NC7=C(C=C(C=C7)N=NC8=CC=C(C=C8)S(=O)(=O)[O-])S(=O)(=O)[O-])S(=O)(=O)O)S(=O)(=O)O)S(=O)(=O)[O-])S(=O)(=O)[O-].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+] YIQKLZYTHXTDDT-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- FPKBIYKAYFGTKG-UHFFFAOYSA-N [5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[2-[[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-[[[2-[[[2-[[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl] [3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methyl hydrogen phosphate Chemical compound Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O FPKBIYKAYFGTKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 2
- 206010002906 aortic stenosis Diseases 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013184 cardiac magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 229940030606 diuretics Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 208000021302 gastroesophageal reflux disease Diseases 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 229960002394 lisinopril Drugs 0.000 description 2
- RLAWWYSOJDYHDC-BZSNNMDCSA-N lisinopril Chemical compound C([C@H](N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 RLAWWYSOJDYHDC-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 206010028537 myelofibrosis Diseases 0.000 description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 2
- 231100001079 no serious adverse effect Toxicity 0.000 description 2
- 231100000062 no-observed-adverse-effect level Toxicity 0.000 description 2
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 229960003073 pirfenidone Drugs 0.000 description 2
- ISWRGOKTTBVCFA-UHFFFAOYSA-N pirfenidone Chemical compound C1=C(C)C=CC(=O)N1C1=CC=CC=C1 ISWRGOKTTBVCFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003649 pro-hypertrophic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 2
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 2
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 2
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 238000011870 unpaired t-test Methods 0.000 description 2
- 238000002562 urinalysis Methods 0.000 description 2
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 2
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N (+-)-Isoprenaline Chemical compound CC(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 108060003345 Adrenergic Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000017910 Adrenergic receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 201000010053 Alcoholic Cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000022309 Alcoholic Liver disease Diseases 0.000 description 1
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 description 1
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 206010058029 Arthrofibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 1
- 208000032845 Atrial Remodeling Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 1
- XPCFTKFZXHTYIP-PMACEKPBSA-N Benazepril Chemical compound C([C@@H](C(=O)OCC)N[C@@H]1C(N(CC(O)=O)C2=CC=CC=C2CC1)=O)CC1=CC=CC=C1 XPCFTKFZXHTYIP-PMACEKPBSA-N 0.000 description 1
- 239000002083 C09CA01 - Losartan Substances 0.000 description 1
- 239000004072 C09CA03 - Valsartan Substances 0.000 description 1
- 239000002053 C09CA06 - Candesartan Substances 0.000 description 1
- 102000004631 Calcineurin Human genes 0.000 description 1
- 108010042955 Calcineurin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical group [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010007556 Cardiac failure acute Diseases 0.000 description 1
- 206010007637 Cardiomyopathy alcoholic Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000002330 Congenital Heart Defects Diseases 0.000 description 1
- 108010002947 Connectin Proteins 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000116 DAPI staining Methods 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010013710 Drug interaction Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100040669 F-box only protein 32 Human genes 0.000 description 1
- 101710191029 F-box only protein 32 Proteins 0.000 description 1
- 208000024720 Fabry Disease Diseases 0.000 description 1
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 101001059454 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MARK2 Proteins 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000038455 IGF Type 1 Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010031794 IGF Type 1 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000024934 IgG4-related mediastinitis Diseases 0.000 description 1
- 208000014919 IgG4-related retroperitoneal fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010022095 Injection Site reaction Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010065973 Iron Overload Diseases 0.000 description 1
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 1
- 208000002805 Mediastinal fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108091028108 MiR-212 Proteins 0.000 description 1
- 208000003250 Mixed connective tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 102100031455 NAD-dependent protein deacetylase sirtuin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100036836 Natriuretic peptides B Human genes 0.000 description 1
- 101710187802 Natriuretic peptides B Proteins 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000003510 Nephrogenic Fibrosing Dermopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010067467 Nephrogenic systemic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 description 1
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 description 1
- 206010049813 Non-obstructive cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010061876 Obstruction Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 239000005480 Olmesartan Substances 0.000 description 1
- 102000023984 PPAR alpha Human genes 0.000 description 1
- 206010034464 Periarthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 108010050808 Procollagen Proteins 0.000 description 1
- 206010049171 Pulmonary vein stenosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 206010038748 Restrictive cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010038979 Retroperitoneal fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 102100028904 Serine/threonine-protein kinase MARK2 Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010041191 Sirtuin 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010049418 Sudden Cardiac Death Diseases 0.000 description 1
- 206010071436 Systolic dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 102000004987 Troponin T Human genes 0.000 description 1
- 108090001108 Troponin T Proteins 0.000 description 1
- 208000001910 Ventricular Heart Septal Defects Diseases 0.000 description 1
- 208000033774 Ventricular Remodeling Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 229940125364 angiotensin receptor blocker Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000954 anitussive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003501 anti-edematous effect Effects 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000151 anti-reflux effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003434 antitussive agent Substances 0.000 description 1
- 229940124584 antitussives Drugs 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 239000010425 asbestos Substances 0.000 description 1
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 description 1
- 208000013914 atrial heart septal defect Diseases 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004530 benazepril Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 230000004094 calcium homeostasis Effects 0.000 description 1
- 229960000932 candesartan Drugs 0.000 description 1
- SGZAIDDFHDDFJU-UHFFFAOYSA-N candesartan Chemical compound CCOC1=NC2=CC=CC(C(O)=O)=C2N1CC(C=C1)=CC=C1C1=CC=CC=C1C1=NN=N[N]1 SGZAIDDFHDDFJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002817 coal dust Substances 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 208000028831 congenital heart disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009989 contractile response Effects 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 239000000850 decongestant Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 1
- 238000002592 echocardiography Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 210000002253 embryonic cardiomyocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 201000010048 endomyocardial fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 1
- 231100000573 exposure to toxins Toxicity 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000018578 heart valve disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 239000002471 hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000015210 hypertensive heart disease Diseases 0.000 description 1
- 206010020871 hypertrophic cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 208000016245 inborn errors of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000015978 inherited metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 239000004041 inotropic agent Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000004155 insulin signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000001057 ionotropic effect Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 229940039009 isoproterenol Drugs 0.000 description 1
- 208000011379 keloid formation Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229960004773 losartan Drugs 0.000 description 1
- KJJZZJSZUJXYEA-UHFFFAOYSA-N losartan Chemical compound CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C=2[N]N=NN=2)C=C1 KJJZZJSZUJXYEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 108091053935 miR-212 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091028397 miR-212-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091028945 miR-212-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 208000005907 mitral valve insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 150000002780 morpholines Chemical class 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N mycophenolate mofetil Chemical compound COC1=C(C)C=2COC(=O)C=2C(O)=C1C\C=C(/C)CCC(=O)OCCN1CCOCC1 RTGDFNSFWBGLEC-SYZQJQIISA-N 0.000 description 1
- 229960004866 mycophenolate mofetil Drugs 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 1
- XEPXGZZWVKNRGS-GQYPCLOQSA-N n-[(3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]octanamide Chemical compound CCCCCCCC(=O)NC1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O XEPXGZZWVKNRGS-GQYPCLOQSA-N 0.000 description 1
- 230000001452 natriuretic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- XZXHXSATPCNXJR-ZIADKAODSA-N nintedanib Chemical compound O=C1NC2=CC(C(=O)OC)=CC=C2\C1=C(C=1C=CC=CC=1)\NC(C=C1)=CC=C1N(C)C(=O)CN1CCN(C)CC1 XZXHXSATPCNXJR-ZIADKAODSA-N 0.000 description 1
- 229960004378 nintedanib Drugs 0.000 description 1
- 231100000706 no observed effect level Toxicity 0.000 description 1
- 230000005937 nuclear translocation Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 230000030648 nucleus localization Effects 0.000 description 1
- 208000001797 obstructive sleep apnea Diseases 0.000 description 1
- 229960005117 olmesartan Drugs 0.000 description 1
- VTRAEEWXHOVJFV-UHFFFAOYSA-N olmesartan Chemical compound CCCC1=NC(C(C)(C)O)=C(C(O)=O)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C=2NN=NN=2)C=C1 VTRAEEWXHOVJFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 108091008725 peroxisome proliferator-activated receptors alpha Proteins 0.000 description 1
- 238000001050 pharmacotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000009521 phase II clinical trial Methods 0.000 description 1
- SONNWYBIRXJNDC-VIFPVBQESA-N phenylephrine Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=CC(O)=C1 SONNWYBIRXJNDC-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229960001802 phenylephrine Drugs 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000036316 preload Effects 0.000 description 1
- 208000003476 primary myelofibrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000001536 pro-arrhythmogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002206 pro-fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 229940126409 proton pump inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000000612 proton pump inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960003401 ramipril Drugs 0.000 description 1
- HDACQVRGBOVJII-JBDAPHQKSA-N ramipril Chemical compound C([C@@H](C(=O)OCC)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](C[C@@H]2CCC[C@@H]21)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HDACQVRGBOVJII-JBDAPHQKSA-N 0.000 description 1
- 108091006082 receptor inhibitors Proteins 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 231100000191 repeated dose toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 230000036387 respiratory rate Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 229910052895 riebeckite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 1
- PYNXFZCZUAOOQC-UTKZUKDTSA-N sacubitril Chemical compound C1=CC(C[C@H](C[C@@H](C)C(=O)OCC)NC(=O)CCC(O)=O)=CC=C1C1=CC=CC=C1 PYNXFZCZUAOOQC-UTKZUKDTSA-N 0.000 description 1
- 229960003953 sacubitril Drugs 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002256 spironolactone Drugs 0.000 description 1
- LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N spironolactone Chemical compound C([C@@H]1[C@]2(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCC(=O)C=C4C[C@H]([C@@H]13)SC(=O)C)C[C@@]21CCC(=O)O1 LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000012066 statistical methodology Methods 0.000 description 1
- 238000013179 statistical model Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 1
- 230000006354 stress signaling Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000155 toxicity by organ Toxicity 0.000 description 1
- 230000007675 toxicity by organ Effects 0.000 description 1
- 231100000440 toxicity profile Toxicity 0.000 description 1
- 229960005342 tranilast Drugs 0.000 description 1
- NZHGWWWHIYHZNX-CSKARUKUSA-N tranilast Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1\C=C\C(=O)NC1=CC=CC=C1C(O)=O NZHGWWWHIYHZNX-CSKARUKUSA-N 0.000 description 1
- 238000012301 transgenic model Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 229960004699 valsartan Drugs 0.000 description 1
- SJSNUMAYCRRIOM-QFIPXVFZSA-N valsartan Chemical compound C1=CC(CN(C(=O)CCCC)[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CC=C1C1=CC=CC=C1C1=NN=N[N]1 SJSNUMAYCRRIOM-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000001755 vocal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Abstract
Группа изобретений относится к области медицины, а именно к фармацевтической промышленности. Применение олигонуклеотида, содержащего последовательность формулы III:
5'-dA*+T*dG*+G*dC*+T*dG*+T*dA*+G*dA*dC*dT*dG*+T*+T 3', где dA представляет собой 2'-дезоксиаденозин, dG представляет собой 2'-дезоксигуанозин, dC представляет собой 2'-дезоксицитидин и T представляет собой тимидин, причем +T представляет собой строительный блок LNA-T, и +G представляет собой строительный блок LNA-G, и где * представляет собой фосфоротиоатную связь, в профилактике или лечении сердечного нарушения у человека, при этом сердечное нарушение выбрано из (i) острой или подострой сердечной недостаточности, (ii) хронической и/или ухудшающейся хронической сердечной недостаточности, (iii) стабильной сердечной недостаточности, (iv) менее прогрессирующего состояния сердечной недостаточности или прогрессирующим состоянием сердечной недостаточности, (v) сердечной недостаточности I и/или II стадии по NYHA, I, II и/или III стадии по NYHA или III и/или IV стадии по NYHA, и (vi) левосторонней или правосторонней сердечной недостаточности; применение олигонуклеотида, содержащего последовательность формулы III:
5'-dA*+T*dG*+G*dC*+T*dG*+T*dA*+G*dA*dC*dT*dG*+T*+T-3', где dA представляет собой 2'-дезоксиаденозин, dG представляет собой 2'-дезоксигуанозин, dC представляет собой 2'-дезоксицитидин и T представляет собой тимидин, где +T представляет собой строительный блок LNA-T, и +G представляет собой строительный блок LNA-G, и где * представляет собой тиофосфатную связь, в профилактике или лечении фиброзного нарушения; способ мониторинга терапии олигонуклеотидом, являющимся объектом применения указанного олигонуклеотида, включающий определение количества и/или активности miR-132 в образце, полученном от субъекта, которому вводили олигонуклеотид, при этом определение проводят один или несколько раз в течение курса терапии; применение набора, содержащего: праймер, связывающийся с ДНК, кодирующей miR-132, или с ДНК, которая комплементарна указанной, праймер, связывающийся с ДНК, кодирующей miR-39, или с ДНК, которая комплементарна указанной, необязательно положительный контроль hsa-miR-132, и необязательно положительный контроль miR-39, в указанном способе мониторинга терапии. Использование группы изобретений обеспечивает профилактику и лечение сердечных и/или фиброзных нарушений. 4 н. и 27 з.п. ф-лы, 36 ил., 16 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к олигонуклеотиду, который является эффективным ингибитором микроРНК miR-132, и его применению в медицине, в частности, для профилактики или лечения сердечных нарушений и/или фиброзных нарушений у человека.
Сердечная недостаточность является одной из ведущих патологических причин смертности в мире. Инфаркт миокарда (ИМ) является наиболее важной причиной сердечной недостаточности, поскольку приводит к последующему прогрессирующему неблагоприятному ремоделированию сердца и, в результате, к сердечной недостаточности с плохим прогнозом. Применяемые в настоящее время терапевтические фармакологические варианты лечения сердечной недостаточности включают ангиотензин-модулирующие агенты, β-блокаторы, диуретики, антагонисты альдостерона, блокаторы рецепторов ангиотензина II в сочетании с ингибиторами неприлизина, вазодилататорами, инотропными агентами или ингибиторами SGLT-2. Хотя несколько клинических исследований показали значительное снижение смертности, индуцированной сердечной недостаточностью, для всех этих агентов, пятилетняя смертность остается неприемлемо высокой и составляет почти 50%. Таким образом, существует большая потребность в разработке новых и более эффективных терапевтических подходов к лечению сердечной недостаточности.
Патологический гипертрофический рост кардиомиоцитов может привести к развитию ремоделирования сердца, сердечной недостаточности и внезапной сердечной смерти. Гипертрофический рост кардиомиоцитов является ответом на повышенное напряжение сердечной стенки, вызванное перегрузкой сердца объемом крови и/или давлением. Изначально гипертрофия сердца является компенсаторным механизмом, направленным на уменьшение нагрузки на стенку и увеличение сердечного выброса. Однако длительная гипертрофия сердца прогрессирует до сократительной дисфункции, сердечной декомпенсации и, в конечном итоге, сердечной недостаточности (Hill and Olson, 2008; Barry and Townsend, 2010). Переход от физиологической к патологической гипертрофии может происходить в зависимости от многих факторов, включая утрату миоцитов вследствие апоптоза или некроза, изменения в аутофагии, дефекты сократительной реакции, нарушение регуляции гомеостаза кальция, десенсибилизацию адренергических рецепторов или сердечный фиброз (Hill and Olson, 2008; Barry и Townsend, 2010). Гипертрофическая передача сигналов в значительной степени опосредуется сигнальным путем инсулина (DeBosch and Muslin, 2008; Barry and Townsend, 2010). И инсулин, и инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1) активируют прогипертрофические пути в кардиомиоцитах через рецептор IGF-1, который активирует фосфоинозитин-3-киназу (PI3K) (McMullen et al., 2004). Активность PI3K приводит к активации серин/треонинкиназы Akt через ее фосфорилирование, и активная Akt фосфорилирует антигипертрофические факторы транскрипции FoxO, что приводит к их дестабилизации и предотвращению ядерной локализации (Datta et al., 1999; Skurk et al., 2005; Ronnebaum and Patterson, 2010). В противоположность этому, ацетилирование факторов FoxO с помощью сиртуина-1 (Sirt-1) приводит к их стабилизации и ядерной транслокации (Frescas et al., 2005). Стабилизированные факторы транскрипции FoxO локализуются в ядре, чтобы регулировать экспрессию антигипертрофических генов. Антигипертрофические функции белков FoxO в значительной степени опосредуются посредством супрессии прогипертрофического сигнального пути кальциневрина через экспрессию антигипертрофических генов-мишеней факторов FoxO, таких как атрогин-1 (Ni et al., 2006; Ronnebaum and Patterson, 2010; Glas, 2010). Более того, факторы транскрипции FoxO также вызывают апоптоз и регулируют аутофагию в кардиомиоцитах (Ronnebaum and Patterson, 2010).
Было показано, что микроРНК играют ключевую роль в неблагоприятном ремоделировании сердца. В WO 2013/034653 описано, что miR-132 и/или miR-212 могут индуцировать гипертрофию сердца и, таким образом, являются потенциальными терапевтическими мишенями для лечения сердечной недостаточности.
В WO 2016/042561 описан способ лечения связанного с липидами нарушения путем введения субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотидного агента, который является по существу комплементарным нуклеотидной последовательности miR-132 человека.
Авторы настоящего изобретения идентифицировали новый аналог олигонуклеотида, который является эффективным ингибитором экспрессии miR-132 в кардиомиоцитах. Аналог олигонуклеотида, далее обозначаемый CDR132L, представляет собой миксмер, состоящий из строительных блоков ДНК и LNA, имеющий фосфоротиоатные межнуклеозидные связи.
Доклинические фармакологические исследования с применением CDR132L проводили на мышах и свиньях. В трансгенной мышиной модели гипертрофии сердца CDR132L привел к обратному ремоделированию сердца, ассоциированному со сниженной экспрессией miR-132. На мышиной модели сердечной недостаточности после инфаркта миокарда было обнаружено, что лечение CDR132L уменьшает дисфункцию левого желудочка после инфаркта миокарда и не зависящие от нагрузки параметры систолической сократительной функции. Кроме того, введение CDR132L привело к улучшению сердечной функции и уменьшило экспрессию miR-132, передачу сигнала сердечного стресса и гипертрофию после инфаркта миокарда.
На модели сердечной недостаточности после инфаркта миокарда у свиней было обнаружено, что лечение CDR132L предотвращает дезадаптивное ремоделирование и улучшает функцию левого желудочка. Кроме того, CDR132L нормализует тканевую экспрессию маркеров патологической сердечной недостаточности, таких как BNP, ANP, и обеспечивает сдвиг в изоформах тяжелых цепей миозина (соотношение MYH7/6). На моделях сердечной недостаточности после перенесенного инфаркта миокарда у свиней было обнаружено, что CDR132L излечивает подострую и хроническую сердечную недостаточность.
CDR132L также не обладает значительной токсичностью в отношении линии клеток печени человека и изолированных кардиомиоцитов новорожденных крыс. С помощью исследований токсичности in vivo, проведенных на крысах и мини-свиньях, было обнаружено, что активный агент хорошо переносится даже при высоких дозах 20 и 40 мг/кг, соответственно.
Фармакокинетические исследования, включающие внутривенное или подкожное введение CDR132L здоровым крысам и здоровым свиньям, подтвердили дозозависимость уровней CDR132L в ткани.
Кроме того, было показано, что CDR132L проявляет превосходные эффекты по сравнению с другими аналогами олигонуклеотидов, имеющими такую же нуклеотидную последовательность, но другое распределение строительных блоков LNA.
В дополнительном исследовании авторы настоящего изобретения идентифицировали антифибротические терапевтические эффекты олигонуклеотидного аналога CDR132L на мышиной модели инфаркта миокарда in vivo и на моделях фиброза печени и фиброза легких in vitro.
Кроме того, была обнаружена значимая взаимосвязь между количеством miR-132 в циркулирующих биологических жидкостях и терапевтической эффективностью CDR132L. Таким образом, количество miR-132 в биологической жидкости является важным биомаркером для мониторинга терапии.
На основании приведенных выше результатов был разработан протокол клинического исследования фазы Ib для введения CDR132L пациентам-людям, страдающим хронической сердечной недостаточностью. Между тем, это клиническое исследование Ib фазы было успешно завершено.
Таким образом, олигонуклеотид CDR132L можно применять в качестве активного агента в медицине, в частности, для профилактики или лечения сердечных нарушений и/или фиброзных нарушений.
Соответственно, первый аспект настоящего изобретения обеспечивает аналог олигонуклеотида, содержащий последовательность формулы I:
5’-ATGGCTGTAGACTGTT-3’,
где A, T, G и C представляют собой дезоксирибонуклеотидные строительные блоки, и где по меньшей мере один строительный блок G или T представляет собой строительный блок мостикового нуклеотида. Этот олигонуклеотид является особенно подходящим для профилактики и/или лечения нарушения, более конкретно, сердечного нарушения у человека.
В конкретном варианте осуществления олигонуклеотид содержит или имеет последовательность формулы II:
5’-A+TG+GC+TG+TA+GACTG+T+T-3’,
где A, T, G и C представляют собой дезоксирибонуклеотидные строительные блоки, и где +G и +T представляют собой строительные блоки мостиковых нуклеотидов и/или морфолиновые нуклеотидные строительные блоки, в частности, где +G и +T представляют собой строительные блоки заблокированной нуклеиновой кислоты (LNA). Этот олигонуклеотид является особенно подходящим для профилактики или лечения нарушения, в частности, сердечного или фиброзного нарушения, у человека.
Аналог олигонуклеотида формулы I или формулы II может содержать по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь, например, межнуклеозидную связь, которая стабилизирована против расщепления нуклеазами, например, фосфоротиоатную или фосфородиамидатную связь. В конкретных вариантах осуществления все межнуклеозидные связи представляют собой модифицированные связи, в частности, фосфоротиоатные связи.
В более конкретном варианте осуществления изобретение относится к олигонуклеотиду CDR132L, как описано в настоящей заявке.
Олигонуклеотид CDR132L имеет последовательность формулы III:
5’-dA*+T*dG*+G*dC*+T*dG*+T*dA*+G*dA*dC*dT*dG*+T*+T-3’,
где dA представляет собой 2’-дезоксиаденозин, dG представляет собой 2’-дезоксигуанозин, dC представляет собой 2’-дезоксицитидин и T представляет собой тимидин, причем +T представляет собой строительный блок LNA-T и +G представляет собой строительный блок LNA-G, и где * представляет собой фосфоротиоатную связь. Этот олигонуклеотид является особенно подходящим для профилактики или лечения нарушения, в частности, сердечного или фиброзного нарушения, у человека.
Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного агента аналог олигонуклеотида, содержащий последовательность формулы I, II или III и фармацевтически приемлемый носитель, в частности, для применения в профилактике или лечении нарушения, в частности, сердечного или фиброзного нарушения, у человека.
Как описано выше, аналог олигонуклеотида, содержащий последовательность формулы I, II или III, является подходящим для медицинского применения.
В некоторых вариантах осуществления медицинское применение относится к применению для лечения или профилактики нарушения, связанного с патологической экспрессией miR-132, сопровождаемого и/или вызванного ею. В некоторых вариантах осуществления медицинское применение относится к лечению или предупреждению сердечных нарушений, в частности, нарушений, связанных с гипертрофией сердца. В некоторых вариантах осуществления медицинское применение относится к лечению фиброзных нарушений, например, нарушений, связанных с патологическим фиброзом, сопровождаемых и/или вызванных им, в частности, фиброзных нарушений сердца, фиброзных нарушений легких или фиброзных нарушений печени.
Олигонуклеотид формулы I, II или III может состоять из строительных блоков дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) и мостиковых нуклеотидных строительных блоков. «Мостиковый нуклеотид» относится к модифицированному рибонуклеотиду, в котором рибозный фрагмент содержит мостик из двух или трех атомов, соединяющий 2’-атом кислорода и 4’-атом углерода. Например, мостик может содержать структуру 2’-O-CH2-4’, 2’-O-CH2-CH2-4’, 2’-O-CH(CH3)-4’ или соответствующую структуру, в которой O заменен на S или NH. В конкретном варианте осуществления по меньшей мере один мостиковый нуклеотидный строительный блок представляет собой строительный блок LNA, имеющий 2’-O-CH2-4’-мостик.
Олигонуклеотид формулы I, II или III имеет длину по меньшей мере 16 строительных блоков, например, длину от 16 до 20 строительных блоков. В конкретном варианте осуществления олигонуклеотид формулы I, II или III имеет длину 16 строительных блоков.
В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид формулы I, II или III содержит 5-10, например, 6-8, в частности, 7 мостиковых нуклеотидных строительных блоков, например, строительных блоков LNA.
В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид формулы I, II или III представляет собой голый олигонуклеотид. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид может быть конъюгирован по меньшей мере с одним гетерологичным фрагментом, например фрагментом, который не способствует связыванию олигонуклеотида с miR-132. Гетерологичный фрагмент может представлять собой фрагмент, который улучшает нацеливание и/или клеточное поглощение, например липидный фрагмент, такой как холестерин или жирная кислота, сахаридный или аминосахаридный фрагмент, такой как фрагмент, содержащий N-галактозамин, пептидный или полипептидный фрагмент, или же нуклеозидный или нуклеотидный фрагмент, такой как аптамер. Гетерологичный фрагмент может быть конъюгирован с 5’- и/или 3’-концом аналога олигонуклеотида посредством ковалентной связи или спейсера.
Олигонуклеотид по настоящему изобретению является подходящим для применения в медицине, включая медицину человека и ветеринарию. В некоторых вариантах осуществления он является полезным для профилактики или лечения нарушения, связанного с патологической экспрессией miR-132, сопровождаемого и/или вызванного ею, например, связанного со сверхэкспрессией miR-132. Было обнаружено, что введение олигонуклеотида значительно снижает экспрессию miR-132 in vitro и in vivo.
В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид можно вводить пациентам, у которых наблюдается сверхэкспрессия miR-132 по сравнению со здоровыми субъектами. В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид можно вводить пациентам, у которых не наблюдается сверхэкспрессия miR-132 по сравнению со здоровыми субъектами, но которые все еще нуждаются в снижении уровня miR-132.
Термин «профилактика» в контексте настоящего изобретения относится к введению олигонуклеотида пациенту, о котором известно, что он имеет повышенный риск развития определенного нарушения. Термин «лечение» в контексте настоящего изобретения относится к введению олигонуклеотида пациенту, у которого уже развились признаки и/или симптомы определенного нарушения. Термин «пациент» относится к субъекту, нуждающемуся во введении олигонуклеотида по изобретению, а именно к человеку или ветеринарному пациенту. В конкретных вариантах осуществления пациентом является человек.
В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид по настоящему изобретению полезен для профилактики или лечения сердечных нарушений, в частности, нарушений, связанных с гипертрофией сердца. Например, олигонуклеотид является полезным для профилактики или лечения сократительной дисфункции, сердечной декомпенсации, сердечной недостаточности, или же для профилактики или лечения ремоделирования сердца после инфаркта миокарда, миокардита, заболеваний клапанов сердца, таких как аортальный стеноз или недостаточность митрального клапана, генетических сердечных нарушений с гипертрофией сердца, например, гипертрофической необструктивной и обструктивной кардиомиопатии или болезни Фабри. Кроме того, олигонуклеотид является полезным для профилактики или лечения сердечного фиброза.
Олигонуклеотид является полезным для введения пациентам, выбранным из:
(i) пациентов с повышенным риском развития сердечной недостаточности,
(ii) пациентов, страдающих (застойной) сердечной недостаточностью, например, пациентов с повышенным риском прогрессирования сердечной недостаточности,
(iii) пациентов, перенесших инфаркт миокарда, и/или
(iv) пациентов с врожденными пороками сердца, связанными с гипертрофией сердца, такими как стеноз аорты и/или легочной вены, дефекты перегородки предсердий или межжелудочковой перегородки сердца.
В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид, в частности, CDR132L, является полезным для введения людям, страдающим острой сердечной недостаточностью, подострой сердечной недостаточностью или хронической и/или ухудшающейся хронической сердечной недостаточностью.
В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид, в частности, CDR132L, является полезным для введения людям, страдающим стабильной сердечной недостаточностью, например, стабильной сердечной недостаточностью неишемического и/или ишемического происхождения.
В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид, в частности, CDR132L, является полезным для введения людям, страдающим сердечной недостаточностью неишемического и/или ишемического происхождения.
В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид, в частности, CDR132L, является полезным для введения людям, страдающим менее запущенной стадией сердечной недостаточности и сердечной недостаточностью поздней стадии.
В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид, в частности, CDR132L, является полезным для введения людям, страдающим сердечной недостаточностью I, II, III и/или IV стадий в соответствии с классификацией Нью-Йоркской кардиологической ассоциации (NYHA), например, пациентам, страдающим сердечной недостаточностью I и/или II стадии согласно NYHA, пациентам, страдающим сердечной недостаточностью I, II и/или III стадии согласно NYHA, или пациентам, страдающим сердечной недостаточностью III и/или IV стадии согласно NYHA.
В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид, в частности, CDR132L, является полезным для введения людям, страдающим сердечной недостаточностью и имеющим имплантированный аппарат искусственного кровообращения, например, устройство поддержки левого желудочка (LVAD).
В конкретном варианте осуществления олигонуклеотид является полезным для профилактики и/или лечения левосторонней сердечной недостаточности, включая систолическую сердечную недостаточность, диастолическую сердечную недостаточность и состояние, связанное с систолической сердечной недостаточностью и/или диастолической сердечной недостаточностью.
Систолическая сердечная недостаточность относится к типу сердечной недостаточности, связанной со сниженной фракцией выброса, в частности, с фракцией выброса 40% или менее, при которой левый желудочек теряет свою способность нормально сокращаться. Введение олигонуклеотида по изобретению при лечении систолической сердечной недостаточности может привести к стабилизации, увеличению и/или нормализации фракции выброса. Олигонуклеотид по изобретению является подходящим для введения пациентам с риском развития систолической дисфункции, например, пациентам, страдающим гипертензией или блокадами коронарных артерий.
Диастолическая сердечная недостаточность относится к типу сердечной недостаточности, связанной с нарушенной релаксацией левого желудочка с увеличением или без увеличения давления заполнения. Во многих случаях диастолическая сердечная недостаточность связана с сохраненной фракцией выброса. Введение олигонуклеотида по изобретению при лечении диастолической сердечной недостаточности может привести к стабилизации, улучшению и/или нормализации релаксации левого желудочка. Соединение по изобретению является подходящим для введения пациентам с риском развития диастолической дисфункции, например, пациентам, страдающим гипертензией, гиперлипидемией, диабетом, синдромом обструктивного апноэ во сне, сердечными болезнями накопления, наследственной сердечной недостаточностью (например, мутациями в гене титина или в генах других структурных генах).
В дополнительном конкретном варианте осуществления соединение является полезным для профилактики и/или лечения правосторонней сердечной недостаточности, в частности, правосторонней сердечной недостаточности, которая возникает в результате левосторонней сердечной недостаточности.
В некоторых вариантах осуществления соединение по настоящему изобретению является полезным для предупреждения или лечения фиброзных нарушений, в частности, нарушений, связанных с патологическим фиброзом, сопровождаемых и/или вызванных им.
Патологический фиброз представляет собой образование избыточной волокнистой соединительной ткани в органе или ткани, в частности, связанное с патологическим состоянием, сопровождаемое и/или вызванное им. Патологический фиброз может возникать во многих различных органах и тканях тела, как правило, в результате воспаления или повреждения.
В определенном варианте осуществления фиброз представляет собой сердечный фиброз, например, состояние, сопровождаемое патологическим фиброзом в сердце. Иллюстративные типы сердечного фиброза включают фиброз предсердий, эндомиокардиальный фиброз или фиброз, возникающий в результате перенесенного инфаркта миокарда.
В дополнительном варианте осуществления фиброз представляет собой легочный фиброз, например, состояние, сопровождающееся патологическим фиброзом в легких. Иллюстративные типы легочного фиброза включают фиброзные нарушения, вызванные профессиональными факторами или факторами окружающей среды, например, воздействием токсинов и загрязнителей, таких как кремнеземная пыль, волокна асбеста, металлическая пыль, угольная пыль, зерновая пыль, птичий и животный помет. Другие типы легочных фиброзных нарушений вызваны радиационной терапией и/или лечением лекарственными средствами, такими как химиотерапевтические лекарственные средства, сердечные лекарственные средства, антибиотики или противовоспалительные лекарственные средства. Еще другие типы легочных фиброзных нарушений вызваны нарушениями, включающими идиопатический легочный фиброз, дерматит, полимиозит, смешанное заболевание соединительной ткани, аутоиммунное заболевание, такое как ревматоидный артрит, склеродермия, синдром Шегрена или системная красная волчанка, саркоидоз, пневмония или вирусная инфекция, гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (GERD).
В дополнительном варианте осуществления фиброз может представлять собой печеночный фиброз, например, состояние, сопровождающееся патологическим фиброзом в печени. Иллюстративные типы печеночного фиброза вызваны вирусной инфекцией, например, вирусом гепатита B и/или C, наследственными нарушениями обмена веществ, аутоиммунным гепатитом, обструкцией желчевыводящих путей, перенасыщением железом, неалкогольной жировой болезнью печени, включая неалкогольную жировую болезнь печени (NAFL) и неалкогольный стеатогепатит (NASH), и алкогольной болезнью печени.
В еще других вариантах осуществления фиброз также может представлять собой сосудистый фиброз, например, артериальную ригидность, кожный фиброз, например, образование келоидов или нефрогенный системный фиброз, артрофиброз, некоторые формы адгезивного капсулита, фиброз мягких тканей, такой как фиброз средостения или фиброз забрюшинного пространства, или фиброз костного мозга, такой как миелофиброз.
В некоторых вариантах осуществления изобретение включает определение количества и/или активности конкретных физиологических параметров у субъекта, подлежащего лечению, до, во время и/или после введения олигонуклеотида по изобретению. Эта сопутствующая диагностическая процедура может содействовать медицинскому применению, как описано выше. Например, диагностическая процедура может содействовать оценке риска, стратификации пациентов, мониторингу во время курса лечения и/или контролю после лечения.
В некоторых вариантах осуществления изобретение включает определение количества и/или активности miR-132 у субъекта, подлежащего лечению, до, во время и/или после введения олигонуклеотида по изобретению. В дополнительных вариантах осуществления изобретение включает определение количества и/или активности по меньшей мере одного маркера, в частности, выбранного из сердечных маркеров и/или маркеров фиброза. В некоторых вариантах осуществления изобретение включает определение количества и/или активности сердечных маркеров, таких как BNP, например, NT-proBNP, ANP или изоформы тяжелых цепей миозина, например, отношение MYH7/6, и/или уровни FoxO3 и/или SERCA2. В конкретных вариантах осуществления изобретение включает определение количества NT-proBNP. В еще других вариантах осуществления изобретение включает определение количества и/или активности маркеров фиброза, таких как коллаген, например, отложений коллагена и/или экспрессии генов маркеров фиброза, таких как – но без ограничения - коллаген 1A1, коллаген 1A2, коллаген 3A1, С-концевой пропептид проколлагена I типа (PICP) и/или галектин-3 (Gal-3), и/или матриксная металлопептидаза (металлопротеиназа), такая как матриксная металлопротеиназа 1 (MMP-1) и/или матриксная металлопротеиназа 2 (MMP-2).
Определение вышеуказанных параметров может быть осуществлено в образцах биологических жидкостей, таких как кровь, плазма или сыворотка, или в образцах тканей в соответствии с известными способами на уровне нуклеиновой кислоты и/или белка, и может дать полезную диагностическую информацию, например, по динамике заболевания и/или ходе, и/или успехе терапии.
Кроме того, авторы изобретения обнаружили с помощью способа на основе PCR, что количество miR132 в сердечной ткани показывает положительную корреляцию с количеством miR132 в циркулирующей биологической жидкости, например, цельной крови, плазме или сыворотке. Таким образом, измерения количества miR132 в образце биологической жидкости, например, образце цельной крови, плазмы или сыворотки указывает на количество miR132 в целевой ткани, в частности, в сердечной ткани.
В некоторых вариантах осуществления изобретение включает определение количества и/или активности miR-132 у субъекта, подвергаемого лечению, например, у человека во время курса терапии. Термин «курс терапии» в этом контексте следует понимать как введение соединения по изобретению, в частности, введение CDR132L нуждающемуся в этом субъекту, в частности, человеку, в течение определенного периода времени, например, периода времени, составляющего по меньшей мере один день, по меньшей мере одну неделю, по меньшей мере две недели или по меньшей мере один месяц. Это определение можно проводить один или несколько раз во время курса терапии. В конкретных вариантах осуществления количество miR-132 определяют количественно в образце биологической жидкости, например, в образце циркулирующей биологической жидкости, таком как образец крови, плазмы или сыворотки. В частности, образец представляет собой образец плазмы. Количество и/или активность miR-132 обратно пропорциональна или отрицательно коррелирует с концентрацией соединения в предполагаемом органе-мишени, в частности, в сердце, а также с его активностью и/или его терапевтической эффективностью. Таким образом, определение позволяет регулировать дозу, подлежащую введению, и/или регулировать интервал между отдельными дозами. Кроме того, определение позволяет стратифицировать (разделять) пациентов по их терапевтическому ответу, например, различать отвечающих от не отвечающих. В частности, определение проводят у пациентов с хроническим заболеванием, например, пациентов с хроническим заболеванием сердца, несколько раз во время курса терапии. Например, определение можно проводить с недельными, двухнедельными и/или месячными интервалами.
В некоторых вариантах осуществления изобретение включает определение изменений в параметрах ECG во время курса терапии. Параметры ECG, важные для пациентов с сердечной недостаточностью, включают, но без ограничения, измерение QRS, зубцов T, блокады левой ножки пучка Гиса (LBBB) и/или блокады правой ножки пучка Гиса (RBBB); и/или прирост зубца R. Особенно актуальным является измерение QRS.
Согласно дополнительному аспекту изобретения олигонуклеотид можно вводить в режиме «по требованию», например, путем корректировки дозы и/или временного интервала между отдельными дозами в соответствии с измеренным количеством miR132 в образце биологической жидкости. Например, если обнаруживается, что количество miR132 в образце биологической жидкости превышает предварительно определенное значение, вводят новую дозу олигонуклеотида.
Таким образом, настоящее изобретение относится к олигонуклеотиду, как описано выше, для применения в профилактике или лечении сердечного нарушения у человека, где олигонуклеотид вводят в режиме «по требованию», в частности, включающему следующие стадии:
(i) измерение количества miR132 в образце биологической жидкости, например, в образце цельной крови, сыворотки или плазмы от субъекта, подвергаемого лечению олигонуклеотидом,
(ii) введение олигонуклеотида в дозе и/или с временным интервалом между отдельными дозами, как определено в соответствии с измеренным количеством miR132 на стадии (i), в частности, новую дозу олигонуклеотида вводят, если было обнаружено, что количество miR132 в образце биологической жидкости превышает заданное значение, например, базовое значение.
Соединение по изобретению можно вводить в виде фармацевтической композиции, содержащей фармакологически приемлемый носитель. Введение можно осуществлять известными способами, когда соединение вводят в желаемую целевую клетку или орган субъекта, подлежащего лечению.
Соединение можно вводить как таковое или в виде конъюгата с гетерологичным фрагментом, как описано выше.
Для фармацевтических применений композиция может быть представлена в виде раствора, например, инъекционного раствора, эмульсии, суспензии и т.п.
Композицию можно вводить любым подходящим способом, например, парентерально, в частности, путем инъекции, такой как подкожная, внутримышечная, внутривенная или внутриартериальная инъекция, или инфузии, путем перорального или ингаляционного приема и/или путем нанесения на кожу, или путем местного нанесения на целевой орган, например, путем интракоронарной перфузии. Носитель может представлять собой любой подходящий фармацевтический носитель. Предпочтительно используют носитель, который способен увеличивать эффективность проникновения молекул олигонуклеотида в клетки-мишени. Подходящими примерами таких носителей являются липосомы, например, катионные липосомы или предварительно сконструированные экзосомы.
В некоторых вариантах осуществления соединение, в частности, CDR132L, вводят путем внутривенной инъекции или подкожной инъекции.
Соединение вводят в фармацевтически эффективной дозировке в зависимости от пути введения и типа или тяжести заболевания.
В некоторых вариантах осуществления соединение вводят человеку в дозе около 0,1-100 мг/кг массы тела на одно применение, например, около 0,2-50 мг/кг массы тела, около 0,8-20 мг/кг массы тела на одно применение или около 3-10 мг/кг массы тела на одно применение, например, парентерально, в частности, путем инъекции или инфузии, например, путем внутривенной инъекции или путем подкожной инъекции.
В фармакокинетическом исследовании было обнаружено, что соединение имеет длительный период полужизни, составляющий около трех недель, в сердечной ткани и короткий двухфазный период полужизни в плазме. Эти результаты демонстрируют, что соединение является подходящим для множества различных режимов лечения, например, в режиме лечения, предусматривающем нанесения с временными интервалами, составляющими менее чем неделю, и в режиме лечения, предусматривающем нанесения с временными интервалами, составляющими неделю или более.
В некоторых вариантах осуществления олигонуклеотид вводят человеку в режиме, выбранном из ежедневного введения, введения каждый второй день, введения каждый третий день и введения каждый четвертый день, в частности, когда олигонуклеотид вводят парентерально, более конкретно путем внутривенной или подкожной инъекции, например, подкожной самостоятельной инъекции, проводимой самим пациентом.
В этих вариантах осуществления олигонуклеотид можно вводить в дозе, зависящей от массы тела, и/или в фиксированной дозе. Например, олигонуклеотид можно вводить в дозе от 0,01 мг/кг массы тела до 50 мг/кг массы тела, в дозе от 0,02 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела, или в дозе от 0,05 мг/кг массы тела до 5 мг/кг массы тела на одно применение. Альтернативно олигонуклеотид можно вводить в фиксированной дозе от 1 мг до 5000 мг, в фиксированной дозе от 2 мг до 1000 мг или в фиксированной дозе от 5 мг до 500 мг на одно применение.
В других вариантах осуществления олигонуклеотид вводят человеку в режиме, выбранном из еженедельного введения, введения каждую вторую неделю, введения каждую третью неделю, введения каждую четвертую неделю или каждый месяц, введения каждую шестую неделю, введения каждый второй месяц, введения каждый третий месяц, введения каждый шестой месяц и введения один раз в год, в частности, когда олигонуклеотид вводят парентерально, более конкретно путем внутривенной или подкожной инъекции, например, подкожной самостоятельной инъекции пациентом.
В этих вариантах осуществления олигонуклеотид можно вводить в дозе, зависящей от массы тела, или в фиксированной дозе. Например, олигонуклеотид можно вводить в дозе от 0,01 мг/кг массы тела до 50 мг/кг массы тела, в дозе от 0,05 мг/кг массы тела до 20 мг/кг массы тела или в дозе от 0,1 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела на одно применение. Альтернативно олигонуклеотид можно вводить в фиксированной дозе от 1 мг до 5000 мг, в фиксированной дозе от 5 мг до 2000 мг или в фиксированной дозе от 10 мг до 1000 мг на одно применение.
В еще других вариантах осуществления соединение можно вводить человеку в начальной дозе, например, 1 или 2 начальных дозах, и затем по меньшей мере в одной поддерживающей дозе, которая отличается от начальной дозы. Например, начальная доза может быть выше поддерживающей дозы, например, примерно в 1,5 - 3 раза, например, примерно в 2 раза выше поддерживающей дозы. Начальную дозу и/или поддерживающую дозу можно вводить в виде дозы, зависящей от массы тела, или в виде фиксированной дозы. В конкретных вариантах осуществления начальная доза составляет около 3-10 мг/кг, и поддерживающая доза составляет около 1-7,5 мг/кг. Кроме того, поддерживающая доза может быть скорректирована, например, титрованием, исходя из количества miR132 в биологических жидкостях, таких как кровь, плазма или сыворотка.
В клиническом исследовании фазы Ib на людях было обнаружено, что соединение демонстрирует превосходную переносимость и безопасность у людей с сердечной недостаточностью при увеличении однократной и повторных доз в дополнение к стандарту лечения. Фармакокинетический профиль не показывает признаков накопления и высокого уровня линейности доз. Уникальный механизм действия олигонуклеотида при сердечной недостаточности был подтвержден важными фармакодинамическими параметрами и связыванием с мишенью. Никаких серьезных нежелательных явлений и реакций в месте инъекции не наблюдалось, и ни один пациент не выбыл из исследования из-за нежелательных явлений. Соединение хорошо переносилось и не проявляло никаких признаков токсичности в дозах до 10 мг/кг.
Соединение можно вводить в качестве монотерапии или в комбинации с дополнительным лекарственным средством, в частности, с лекарственным средством, подходящим для профилактики или лечения сердечных нарушений или фиброзных нарушений, как описано выше.
Примерами дополнительных лекарственных средств, подходящих для профилактики или лечения сердечных нарушений, являются ангиотензин-модулирующие агенты, β-блокаторы, диуретики, антагонисты альдостерона, вазодилататоры, ионотропные агенты, статины, ингибиторы неприлизина или ингибиторы SGLT-2, или их комбинации, например, комбинация ингибитора неприлизина, например сакубитрила, с блокатором рецепторов ангиотензина II, например валсартаном.
В некоторых вариантах осуществления соединение вводят вместе с (i) по меньшей мере одним диуретиком, (ii) по меньшей мере одним ингибитором ангиотензинпревращающего фермента, (iii) по меньшей мере одним β-блокатором, необязательно (iv) блокатором рецепторов ангиотензина II и/или (v) необязательно ингибитором If-канала, таким как ивабрадин, и необязательно (vi) ингибитором рецепторов ангиотензина/неприлизина, и необязательно (vii) ингибитором натрийглюкозного котранспортера 2-го типа, таким как эмпаглифлозин и дапаглифлозин, и/или необязательно (viii) терапевтическими препаратами на основе стволовых клеток, и/или необязательно (ix) антимикроРНК, нацеленными на различные пути, и/или необязательно (x) ингибитором SGLT-2. Подходящие ингибиторы, терапевтические препараты на основе стволовых клеток и/или микроРНК, нацеленные на различные пути, могут быть выбраны специалистом в данной области. Соединения и ингибиторы согласно (i) - (x) могут быть независимо выбраны и комбинированы любым подходящим образом.
Примерами дополнительных лекарственных средств, подходящих для профилактики или лечения фиброзных нарушений, являются лекарственные средства для профилактики или лечения сердечного фиброза сердца, такие как ингибиторы ACE, например, лизиноприл, блокаторы рецепторов ангиотензина II, например, кандесартан, лозартан или олмесартан, антагонисты альдостерона, например, спиронолактон, и/или ингибиторы TGF β, например, пирфенидон или траниласт, лекарственные средства для профилактики или лечения легочного фиброза, такие как противофиброзные агенты, например, нинтеданиб или пирфенидон, противовоспалительные агенты, например, кортикостероиды, азатиоприн, циклофосфамид и микофенолят мофетил, антирефлюксные агенты, например, ингибиторы протонной помпы или блокаторы H2, и/или противокашлевые агенты, и лекарственные средства для предупреждения и/или лечения фиброза печени, такие как ингибиторы ACE, например, беназеприл, лизиноприл или рамиприл, противовирусные агенты или агонисты PPARα.
Кроме того, изобретение относится к применению соединения по изобретению, как раскрыто выше в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для профилактики или лечения сердечного нарушения.
Кроме того, изобретение относится к применению соединения по изобретению, как раскрыто выше в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для профилактики или лечения фиброзного нарушения.
Кроме того, изобретение относится к способу профилактики или лечения сердечного нарушения, включающего введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, как описано в настоящей заявке.
Кроме того, изобретение относится к способу профилактики или лечения фиброзного нарушения, включающему введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения, как описано в настоящей заявке.
Кроме того, изобретение относится к набору для мониторинга терапии олигонуклеотидом, как описано выше, предназначенному для определения количества и/или активности miR-132 у субъекта, которому был введен олигонуклеотид. Набор может содержать праймер, связывающийся с кодирующей miR-132 ДНК или с ДНК, которая комплементарна указанной, предпочтительно праймер hsa-miR-132, праймер, связывающийся с кодирующей miR-39 ДНК или с ДНК, которая комплементарна указанной, предпочтительно праймер cel-miR-39, и необязательно положительный контроль hsa-miR-132, и необязательно положительный контроль cel-miR-39. Согласно предпочтительному варианту осуществления праймеры hsa-miR-132 и miR-39 используют вместе. Кроме того, набор может содержать дополнительные соединения, например, qPCR Mastermix и воду, свободную от нуклеаз. В предпочтительном варианте осуществления набор включает праймер hsa-miR-132, праймер cel-miR-39, положительные контроли, указанные выше, и qPCR Mastermix, и воду, свободную от нуклеаз. Специалист в данной области может выбрать подходящие праймеры.
Далее настоящее изобретение будет описано более подробно с помощью следующих фигур и примеров.
Пример 1. Подавление экспрессии miR-132 в кардиомиоцитах
Проводили количественный анализ in vitro ингибирующей микроРНК активности многочисленных аналогичных по структуре соединений, полученных из библиотеки анти-miR-132. Подавление экспрессии микроРНК количественно оценивали с помощью тестов TaqMan® и количественной ПЦР в реальном времени.
Исследование проводили на изолированных крысиных кардиомиоцитах после гипертрофической стимуляции путем обработки фенилэфрином/изопротеренолом при концентрациях 10 мкМ. Клетки инкубировали в течение 48 часов в стандартной среде для культивирования клеток. Тестируемые соединения вводили индивидуально при концентрации 100 нМ. Тесты проводили в трех повторах.
Соединение CDR132L, миксмер LNA-ДНК, имеющий фосфоротиоатный остов, было идентифицировано как наиболее эффективное соединение из библиотеки структурных аналогов анти-miR-132.
Структура CDR132L выглядит следующим образом:
5’-dA*+T*dG*+G*dC*+T*dG*+T*dA*+G*dA*dC*dT*dG*+T*+T-3’,
где dA представляет собой 2’-дезоксиаденозин, dG представляет собой 2’-дезоксигуанозин, dC представляет собой 2’-дезоксицитидин и T представляет собой тимидин, причем +T представляет собой строительный блок LNA-T, и +G представляет собой строительный блок LNA-G, и где * представляет собой фосфоротиоатную связь.
Пример 2. Токсикологический анализ
2.1 Цель исследования. Определение профиля токсичности CDR132L
2.2 План исследования
Анализ цитотоксичности in vitro проводили на клетках печени человека (HepG2) и изолированных неонатальных кардиомиоцитах (NRCM). Для оценки цитотоксичности использовали коммерческий колориметрический МТТ-тест. После добавления индивидуальных соединений клетки инкубировали в среде DMEM в течение 48 ч. Эффект CDR132L (красный) сравнивали со скремблированным (scrambled) олигонуклеотидом LNA, используемым в качестве контроля (синий), в диапазоне доз 0,01-100 мкМ. Серым цветом выделен диапазон терапевтических доз.
2.3 Результаты. Не было обнаружено значительной токсичности CDR132L в клетках HepG2 и NRCM в диапазоне терапевтических доз (см. фигуры 1A и 1B).
Пример 3. Обратное ремоделирование левого желудочка при сердечной недостаточности у трансгенных модельных мышей путем введения CDR132L
3.1 Цель исследования. Тестирование эффективности CDR132L в отношении реверсии сердечной недостаточности на мышиной модели сердечной недостаточности.
3.2 План исследования
Модель сердечной гипертрофии: Трансгенные (TG) мыши со сверхэкспрессией сердечной miR-132 (Ucar et al. 2012).
Лечение: еженедельно 20 мг/кг внутрибрюшинно CDR132L или плацебо (см. фиг. 2A).
Группы: однопометники дикого типа (WT) +плацебо, WT+CDR132L, TG +плацебо, TG+CDR132L. n = 6/группу.
Уровни экспрессии miR-132 определяли с помощью qPCR. Статистический тест: непарный t-критерий. (фигура 2B).
**p <0,01, n = 6/группу.
3.3 Результаты
Репрезентативные изображения сердца, полученные методом эхокардиографии (фигура 3А).
CDR132L изменяет гипертрофию, как измерено по массе сердца и конечному диастолическому объему (LVEDV) (фигура 3B).
CDR132L улучшает региональную сократительную функцию в большинстве сегментов левого желудочка (LV) (AB, передний базальный; AM, средний передний; AA, передний верхушечный; PA задний верхушечный; PM, средний задний и PB, задний базальный) (фигура 3C).
Пример 4. Введение CDR132L модельным мышам с сердечной недостаточностью после инфаркта миокарда
4.1 Цель исследования. Тестирование эффективности CDR132L на мышиной модели сердечной недостаточности после инфаркта миокарда.
4.2 План исследования
Мышиная модель инфаркта миокарда (ИМ): постоянное лигирование коронарной артерии (LAD) у мышей C57BL/6N (Kolk et al., 2009).
Группы: ИМ или ложнооперированные, подвергнутые лечению CDR132L или плацебо.
Лечение: 20 мг/кг внутрибрюшинно на день 7 и 14 после ИМ.
Конечная точка исследования: функция LV на день 28 после ИМ. n = 6-7/группу. (фигура 4).
4.3 Результаты
Лечение с помощью CDR132L улучшило дисфункцию левого желудочка после ИМ (фигура 5А). Также, улучшились независимые от нагрузки параметры систолической сократительной функции (фигура 5B) (*p <0,05).
Лечение с помощью CDR132L также улучшило продольную скорость деформации (LSR) и, таким образом, изменило сократительную дисфункцию после ИМ в отдельных сегментах сердца в удаленной области сердца. (*p <0,05) (фигура 6).
Лечение с помощью CDR123L эффективно подавляет экспрессию miR-132 в сердечных тканях, например, в удаленной (неинфарктной) области и периинфарктной зоне (фигура 7А).
На гистологическом уровне CDR132L уменьшает размер кардиомиоцитов в удаленной области сердца после ИМ (фигура 7В).
На тканевом уровне CDR132L снижает экспрессию сигнала сердечного стресса ANP в сердце после ИМ (фигура 7C).
Пример 5. Тестирование CDR132L на модели сердечной недостаточности после перенесенного инфаркта миокарда у свиней
5.1. Цель исследования. Подтверждение эффективности in vivo CDR132L на клинически значимой модели постмиокардиального инфаркта
5.2 План исследования
• модель инфаркта миокарда у свиней, вызванного 90-минутной ишемией (окклюзия LAD) и последующей реперфузией;
• группы: плацебо или CDR132L, n = 6 на группу;
• лечение: дважды, на день 3 и 28 после MI, 0,3 мг/кг внутрикоронарно и 0,5 мг/кг внутривенно, соответственно (фигура 8);
• конечная точка: 8 недель после ИМ. Первичные критерии оценки: ремоделирование EF и LV.
5.3 Результаты
• Лечение с помощью CDR132L предотвращает дезадаптивное ремоделирование и улучшает функцию, что определяется путем измерения конечного диастолического объема, конечного систолического объема, фракции выброса и функции левого желудочка (фигуры 9A-D).
• Лечение с помощью CDR132L улучшает сегментарную сократимость в сегментах, соответствующих жизнеспособному/внеинфарктному миокарду; МРТ сердца в конечной точке: n = 6/группу, красная область: p <0,05 (фигура 9E).
• Лечение с помощью CDR132L предотвращает дезадаптивное ремоделирование и улучшает жизнеспособность LV в апикальной области, как определено с помощью NOGA, электроанатомического картирования в конечной точке: n=6/группу, плацебо по сравнению с CDR132L: p <0,05 (фигура 10).
• CDR132L нормализует экспрессию в тканях маркеров патологической сердечной недостаточности ANP и BNP и обеспечивает сдвиг в изоформах тяжелых цепей миозина, то есть соотношение MYH7/6 (фигура 11).
• На гистологическом уровне лечение с помощью CDR132L эффективно снижает гипертрофию кардиомиоцитов на репрезентативных микрофотографиях отдаленных областей LV (20x окрашивание WGA/DAPI) (фигура 12A) и графическое изображение (фигура 12B), n=6/группу, плацебо по сравнению с CDR132L: р <0,05.
Пример 6. Фармакодинамический профиль/связывание с мишенью CDR132L у свиней
6.1 План исследования
Лечение: однократно, день 0, интракоронарная перфузия 0,5 мг/кг или 5 мг/кг, n=3 свиньи/группу, плацебо по сравнению с CDR132L: p <0,05.
• Анализ методом qPCR микроРНК в тканях в конечной точке (через 24 часа после лечения).
6.2 Результаты
• Лечение с помощью однократной дозы CDR132L дозозависимо подавляет уровни сердечной miR-132 (фигура 13).
Пример 7. Токсикологическое исследование органов
7.1 План исследования
• Лечение: дважды, на день 3 и 28 после MI, 0,3 мг/кг внутрикоронарно и 0,5 мг/кг внутривенно соответственно.
• Серийное взятие крови, конечная точка: через 72 часа после лечения, n=6 свиней/группу, плацебо по сравнению с CDR132L: p <0,05.
7.2 Результаты
• Лечение с помощью CDR132L in vivo не вызывает какой-либо токсичности в органах у свиней (фигура 14).
Последующие исследования токсичности повторных доз проводили на крысах и мини-свиньях. Согласно 4-недельному исследованию токсичности на крысах с использованием внутривенной болюсной инъекции CDR132L в дозах 4, 20 и 100 мг/кг на дни 1 и 28, с последующим 4-недельным периодом восстановления, «уровень отсутствия наблюдаемых побочных эффектов» (NOAEL) у крыс составил 20 мг/кг. Это соответствует эквивалентной дозе для человека 3,23 мг/кг массы тела.
Согласно 4-недельному исследованию токсичности на мини-свиньях с использованием внутривенной болюсной инъекции CDR132L в дозе 4, 20 и 40 мг/кг в дни 1 и 28, с последующим 4-недельным периодом восстановления, «уровень, при котором эффекта не наблюдается» (NOEL) у мини-свиней составил 40 мг/кг. Это соответствует эквивалентной дозе для человека 36,36 мг/кг массы тела.
Пример 8. Сердечные уровни мРНК FoxO3 и SERCA2 у модельных мышей с сердечной недостаточностью
Сердечные уровни мРНК FoxO3 и Serca2 измеряли у контрольных и miR-132 TG мышей, получавших внутрибрюшинную инъекцию контрольного скремблированного олигонуклеотида или CDR132L еженедельно, 4 раза. Все значения представляют собой среднее значение ± SEM (стандартная ошибка среднего). * P <0,05 (фигуры 15A и 15B).
Пример 9. Сравнение различных олигонуклеотидов
Цель этого исследования состоит в оценке терапевтического эффекта нового ингибитора miR-132-3p CDR132L в соответствии с настоящим изобретением с двумя эталонными олигонуклеотидами. Два эталонных олигонуклеотида имеют такую же олигонуклеотидную последовательность и фосфоротиоатный остов, что и CDR132L, но различаются распределением строительных блоков LNA в молекуле. CDR2u1 содержит два строительных блока LNA на 5’ и 3’ конце, в то время как для CDR301 каждый нуклеотид несет строительный блок LNA.
Для тестирования эффективности различные олигонуклеотиды вводили в кардиомиоциты новорожденных крыс (NRCM). Эффекты этого лечения отслеживали с помощью количественной ПЦР в реальном времени (qRT-PCR) после изменений в экспрессии miR-132-3p и ее известного гена-мишени FoxO3 (Forkhead box O3).
Схема эксперимента и результаты показаны на фигуре 16. (A) Общая схема эксперимента. Кардиомиоциты новорожденных крыс высевали в день 0 и обрабатывали олигонуклеотидами CDR132L, CDR2u1 или CDR301 (по 100 нМ каждый) в день 1. В качестве конечной точки клетки собирали для анализа экспрессии генов. (B) Уровни экспрессии miR-132-3p после обработки CDR132L, CDR2u1 или CDR301. (C) Уровни экспрессии гена-мишени miR-132-3p Forkhead box O3 (FoxO3) после обработки CDR132L, CDR2u1 или CDR301. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (SD). P-значения олигонуклеотидов по сравнению с плацебо определяли с помощью двустороннего критерия Стьюдента.
Лечение NRCM с помощью CDR132L и CDR301 привело к значительному снижению уровней miR-132-3p на 96%, тогда как CDR2u1 уменьшил экспрессию микроРНК на 30% (фиг. 16A-B). Кроме того, лечение с помощью CDR132L привело к значительному подавлению гена-мишени Foxo3 miR-132-3p, чего не удалось достичь с помощью CDR2u1 и CDR301 (фиг. 16C).
Таким образом, полученные данные демонстрируют превосходный ингибирующий эффект CDR132L по сравнению с CDR2u1 и CDR301, о чем свидетельствуют значительно пониженные уровни экспрессии miR-132-3p и существенное подавление ее гена-мишени FoxO3.
Пример 10. Эффекты CDR132L при сердечном фиброзе
Целью этого исследования являлась оценка антифибротических терапевтических эффектов CDR132L на модели фиброза in vivo.
Для доказательства антифибротической активности in vivo использовали мышиную модель инфаркта миокарда (MI) путем постоянного лигирования левой передней нисходящей коронарной артерии (LAD) у мышей C57BL/6N. Лечение с помощью CDR132L применяли на день 7 и 14, плацебо (скремблированный олигонуклеотидный аналог CDR132L, 20 мг/кг) и CDR132L (20 мг/кг). Группы включали контрольную оперированную группу (ложнооперированные мыши) и LAD-лигированных мышей (ИМ), получавших плацебо или CDR132L: ложнооперированные + плацебо, ложнооперированные + CDR132L, ИМ + плацебо, ИМ + CDR132L. n = 6-7/группу. Схема эксперимента представлена на фиг. 17. Оценка антифибротического эффекта CDR132L in vivo при сердечной недостаточности после ИМ показана на фиг. 18. Фиброз (показанный в виде % отложения коллагена, обнаруженного по окрашиванию пикросириусом красным (PSR) и экспрессии гена альфа-1 цепи коллагена III типа (Col3a1) относительно β-актина) были ослаблены после ИМ путем лечения с помощью CDR132L. Группы включали контрольную оперированную группу (ложнооперированные мыши) и LAD-лигированных мышей (ИМ), получавших либо плацебо (черный столбец), либо CDR132L (белый столбец): ложнооперированные + плацебо, ложнооперированные + CDR132L, ИМ + плацебо, ИМ + CDR132L. Статистический тест (непарный t-критерий) проводили между мышами ИМ, получавшими плацебо или CDR132L. ** p <0,01, n = 6-7/группу.
В соответствии с результатами гистологического исследования фиброз уменьшился после лечения с помощью CDR132L (фиг. 18A). Это подтверждается на молекулярном уровне снижением экспрессии генов маркеров фиброза, таких как альфа-1 цепь коллагена III типа (Col3a1) (фиг. 18B).
Пример 11. Эффекты CDR132L при фиброзе легких и печени
Антифибротический эффект CDR132L тестировали in vitro на моделях фиброза легких и печени. Для этого первичные фибробласты человека, полученные из печени (первичные фибробласты печени человека, HPLF, PeloBiotech) и легких (нормальные первичные фибробласты легких человека, NHLF, Lonza), стимулировали профибротическими агентами и подвергали лечению с помощью CDR132L. Терапевтические эффекты CDRL132L контролировали, наблюдая за ключевыми процессами фиброзного пути, включая скорость пролиферации и изменение экспрессии генов маркеров фиброза в конечной точке. Кроме того, оценивали экспрессию miR-132-3p, чтобы доказать эффективность лечения с помощью CDR132L.
Для определения пролиферации клеток использовали набор для выявления клеточной пролиферации путем ELISA (иммуноферментный анализ), предоставленный фирмой Roche. Этот колориметрический анализ позволяет количественно оценить пролиферацию клеток на основе измерения BrdU (бромдезоксиуридина), включенного во вновь синтезированную ДНК пролиферирующих клеток. Количество включенного BrdU детектировали и количественно определяли. Значения абсорбции напрямую коррелируют с объемом синтеза ДНК и, таким образом, с количеством пролиферирующих клеток в соответствующих микрокультурах. Экспрессию генов оценивали с помощью количественной ПЦР в реальном времени (qRT-PCR), измеряя уровни экспрессии miR-132-3p и фиброзных маркеров, включая коллаген 1A1 (COL1A1), коллаген 1A2 (COL1A2) и матриксную металлопептидазу 2 (MMP2).
Фиг. 19 относится к модели фиброза печени in vitro: (A) Общая схема эксперимента. Первичные фибробласты печени человека (HPLF), предоставленные фирмой PeloBiotech, высевали в день 0 и обрабатывали фибротическим стимулом (10 нг/мл TGF-β в нормальной ростовой среде (полная среда для фибробластов с добавлением 10% FBS)) и CDR132L (100 нМ) в день 1. В конечной точке оценивали пролиферацию клеток и экспрессию генов маркеров фиброза. (B) Уровни экспрессии miR-132-3p после лечения с помощью CDR132L. (C) Пролиферация, оцененная путем мониторинга включения BrdU во время синтеза ДНК. Реагент BrdU добавляли в среду за 20 ч до конечной точки. (D) Уровни экспрессии маркерных генов фиброза (коллаген 1A1 (COL1A1), коллаген 1A2 (COL1A2) и матриксная металлопептидаза 2 (MMP2)). На (B) и (D) пунктирная линия указывает уровень экспрессии нестимулированных контрольных клеток. Данные представляют собой средние значения ± SD. P-значения CDR132L по сравнению с контролем определяли с помощью двустороннего t-критерия Стьюдента.
Стимуляция HPLF трансформирующим фактором роста бета (TGF-β) (фиг. 19A) привела к небольшой индукции miR-132-3p, которая была значительно снижена путем лечения с помощью CDR132L (фиг. 19B). Кроме того, это соединение уменьшило пролиферацию фибробластов (фиг. 19C) и экспрессию генов фиброза, включая COL1A1, COL1A2 и MMP2 (фиг. 19D).
Фиг. 20 относится к модели in vitro фиброза легких: (A) Общая схема эксперимента. Нормальные фибробласты легких человека (предоставленные компанией Lonza) высевали в день 0 и обрабатывали фиброзным стимулом (высокое содержание FBS (5%) в среде для роста фибробластов и CDR132L (100 нМ) в день 1. В конечной точке наблюдали пролиферацию клеток и экспрессию генов. (B) Уровни экспрессии miR-132-3p после лечения с помощью CDR132L. (C) Пролиферацию оценивали путем мониторинга включения BrdU во время синтеза ДНК. Реагент BrdU добавляли в среду за 20 ч до конечной точки. В (B) пунктирная линия указывает уровень экспрессии нестимулированных контрольных клеток. Данные представляют собой среднее значение ± SD. Р-значения CDR132L по сравнению с контролем определяли с помощью двустороннего t-критерия Стьюдента.
В клетках NHLF после фиброзной стимуляции высоким уровнем FBS (5% по сравнению с нормальными условиями роста при 2% FBS) (фиг. 20A) не наблюдалось повышения miR-132-3p (фиг. 20B). Тем не менее лечение с помощью CDR132L привело к значительному снижению целевой микроРНК (фиг. 20B) и пролиферации фибробластов (фиг. 20C).
Таким образом, полученные данные демонстрируют значительный антифибротический эффект олигонуклеотида CDR132L в фибробластах, происходящих из печени или легких, а также в сердечной ткани. Авторы предполагают, что этот эффект может быть основан на антипролиферативной способности лекарственного средства и/или на его воздействии на экспрессию белка внеклеточного матрикса.
Пример 12. Протокол и результаты клинического исследования на людях
12.1 Протокол
Обоснование
Современная фармакотерапия сердечной недостаточности в основном ограничивается менее запущенными стадиями заболевания (стадия I и II согласно Нью-Йоркской кардиологической ассоциации; I/II NYHA). Однако лекарственные средства не могут предотвратить прогрессирование до поздних стадий (III и IV согласно NYHA), которые ассоциированы с частыми госпитализациями и одногодичной летальностью, превышающей 70% (13). В крайнем случае, имплантированные помпы (вспомогательные устройства для левого желудочка, LVAD) и, в конечном итоге, трансплантация сердца могут быть единственными вариантами спасения жизни для очень небольшого числа пациентов с сердечной недостаточностью в терминальной стадии.
Таким образом, срочно необходимы новые, эффективные, останавливающие болезнь терапевтические средства, которые снижают смертность и количество госпитализаций, чтобы дать пациентам надежду на исцеление. Подход авторов настоящего изобретения предлагает новую возможность революционизировать медицинскую практику, улучшить уход за пациентами и снизить затраты на лечение сердечной недостаточности.
Механизм действия CDR132L включает следующие ключевые элементы, лежащие в основе его роли в качестве лекарственного средства следующего поколения при сердечной недостаточности:
а) нормализация аберрантных уровней miR-132 в сердце,
b) нормализация кальциевых сигналов и сократимости, а также сердечной функции,
c) улучшение сердечной аутофагии и гомеостаза, и
d) ослабление дезадаптивного ремоделирования сердца.
Результаты доклинических исследований показали, что профиль безопасности CDR132L является подходящим для использования в клинических испытаниях.
Таким образом, в этом исследовании планируется оценить безопасность, фармакокинетику и некоторые фармакодинамические параметры у пациентов со стабильной сердечной недостаточностью ишемического происхождения (NYHA I-III) на основе значительных терапевтических эффектов, продемонстрированных в клинически значимом исследовании на крупных животных. Для этого исследования планируется применить схему увеличения дозы.
Основная цель
• Оценка безопасности одной однократной и одной повторной дозы CDR132L у пациентов со стабильной сердечной недостаточностью ишемического происхождения (стадии I, II и III согласно NYHA).
Вторичная цель
• Характеристика фармакокинетического (PK) профиля CDR132L у пациентов со стабильной сердечной недостаточностью ишемического происхождения.
Поисковая цель
• Определение эффекта CDR132L на фармакодинамические (PD) параметры.
Первичные конечные точки
• Первичной конечной точкой является безопасность CDR132L, измеряемая на основе:
• частоты возникновения и тяжести нежелательных явлений, возникающих в связи с лечением (TEAE),
• доли субъектов с клинически значимыми изменениями в лабораторных тестах на безопасность (гематология, биохимия, коагуляция и анализ мочи),
• доли субъектов с отклонениями показателей морфологии и/или ритма на электрокардиограмме (ECG),
• доли субъектов с клинически значимыми изменениями временных интервалов ECG (интервалы PR, QRS, QT и QTc),
• доли субъектов с клинически значимыми изменениями показателей жизненно важных функций (систолическое артериальное давление, диастолическое артериальное давление и частота пульса),
• доли субъектов с клинически значимыми изменениями маркеров поражения таких органов, как сердце (высокочувствительный сердечный тропонин Т), почки (креатинин) и печень (аспартаттрансаминаза и аланинтрансаминаза) и противоотечных показателей (натрийуретический N-концевой пептид b-типа).
Вторичные конечные точки
Параметры PK, оцененные некомпартментными методами анализа, включая максимальную наблюдаемую концентрацию в плазме (Cmax), время достижения максимальной концентрации в плазме (tmax), площадь под кривой зависимости концентрации в плазме от времени от нулевого момента времени до последней поддающейся определению концентрации в плазме (AUC0-t), площадь под кривой зависимости концентрации в плазме от нулевого момента времени, экстраполированного на бесконечность (AUC0-inf), клиренс крови (CL), константа скорости терминальной элиминации (λz), конечный период полувыведения (t1/2), объем распределения (Vdss).
Поисковые конечные точки
• Параметры PD, включая, но без ограничения, следующие биомаркеры: микроРНК 132 (miR-132) для связывания с мишенью, пронатрийуретический N-концевой пептид b-типа (NT-pro-BNP) для снятия отеков и липокалин, ассоциированный с нейтрофильной желатиназой (NGAL), в качестве маркера ремоделирования сердца. Могут потребоваться дополнительные параметры.
• Идентификация биомаркеров, которые могут (1) предсказать ответ на лечение с помощью CDR132L, (2) объяснить вариабельность PK/PD лекарственного средства, (3) предсказать восприимчивость к лекарственным взаимодействиям или (4) предсказать возникновение проблем с безопасностью. Целью такого поискового исследования будет улучшение понимания внутренних и внешних факторов, которые могут влиять на фармакокинетику CDR132L у людей. Это не будет включать какое-либо секвенирование генома (ДНК) пациентов.
Дизайн исследования
Это рандомизированное двойное слепое плацебоконтролируемое исследование фазы I для оценки безопасности, фармакокинетики и фармакодинамических параметров CDR132L у пациентов со стабильной сердечной недостаточностью ишемического происхождения (стадии I-III согласно NYHA).
В исследование будет включено максимум двадцать восемь пациентов. Ниже приведены четыре планируемых группы с максимальным размером групп. Каждая из этих групп будет включать до 7 пациентов. Пациенты будут рандомизированы на получение внутривенной 15-минутной инфузии CDR132L или плацебо в соотношении до 5:2.
• лечение 1 (n = до 7) - 0,32 мг/кг CDR132L; плацебо;
• лечение 2 (n = до 7) - 1,00 мг/кг CDR132L; плацебо;
• лечение 3 (n = до 7) - 3,00 мг/кг CDR132L; плацебо;
• лечение 4 (n = до 7) - 10,00 мг/кг CDR132L; плацебо.
Пациенты будут подвергнуты скринингу за 41 день до включения в исследование в день 1. До проведения любых скрининговых процедур каждый субъект получит устную и письменную информацию с последующим подписанием формы информированного согласия (ICF). Субъекты будут приняты в исследовательское отделение в день 1 и выписаны в день 4, повторно приняты в день 27 и выписаны в день 31. В день 1 добровольцы получат либо CDR132L, либо плацебо; они получат вторую соответствующую дозу после повторного поступлении в день 27 путем введения второй дозы в день 28. Все пациенты должны получать стандарт лечения (Standard of Care, SoC) для сердечной недостаточности ишемического происхождения в соответствии с последними европейскими рекомендациями (14). CDR132L или плацебо будут назначаться в качестве дополнительной терапии к лечению SoC.
Все субъекты будут посещать отделение для запланированных амбулаторных посещений в дни 10-14, 56, 84 и 112. Все оценки, выполняемые в ходе исследования, подробно описаны в графике оценок исследования (таблица 2 и таблица 3). Особенности дизайна исследования могут быть адаптированы в соответствии с адаптивными признаками (таблица 4). В этом исследовании будет использована стратегия сигнального дозирования, более подробную информацию см. в разделе 3.3.5.
Количество субъектов
Двадцать восемь пациентов со стабильной сердечной недостаточностью ишемического происхождения были отобраны для дозирования групп 1, 2, 3 и 4.
Основные критерии включения в исследование
C18036_CDR132L-FIH01_Протокол клинического исследованияl_v1.0_17Apr2019.
Шаблон протокола клинического исследования (версия 6) 14 марта 2019 г. стр. 16 из 85.
Будут включены субъекты в возрасте от 30 до 80 лет с индексом массы тела (BMI) от 18,0 до 28,0 кг/м2 и подтвержденной стабильной сердечной недостаточностью ишемического происхождения.
Основными критериями исключения являются: сердечная недостаточность неишемического происхождения (гипертоническая болезнь сердца, миокардит, алкогольная кардиомиопатия и сердечная дисфункция из-за быстрой фибрилляции предсердий), текущее или рецидивирующее заболевание, за исключением стабильной сердечной недостаточности (например, гематологическое, неврологическое, эндокринное, иммунологическое, почечное, печеночное, желудочно-кишечное или другое состояние), которое может повлиять на действие, абсорбцию или фармакокинетику CDR132L, или может повлиять на клинические оценки или клинические лабораторные исследования.
Экспериментальное лечение и способ введения
Группа 1. Внутривенная инфузия 0,32 мг/кг CDR132L (15 мин; 20 мл) в дни 1 и 28 (n = 5).
Группа 2. Внутривенная инфузия 1,00 мг/кг CDR132L (15 мин; 20 мл) в дни 1 и 28 (n = 5).
Группа 3. Внутривенная инфузия 3,00 мг/кг CDR132L (15 мин; 20 мл) в дни 1 и 28 (n = 5).
Группа 4. Внутривенная инфузия 10,00 мг/кг CDR132L (15 мин; 20 мл) в дни 1 и 28 (n = 5).
Эталонное лечение и способ введения
Внутривенная инфузия (15 мин; 20 мл) плацебо (n = 8) для соответствия с CDR132L.
Критерии оценки
Анализ безопасности
Оценки безопасности будут включать стандартные лабораторные анализы на безопасность (гематология, коагуляция, биохимия и анализ мочи), показатели жизненно важных функций (систолическое артериальное давление [SBP], диастолическое артериальное давление [DBP], частота дыхания, частота пульса и тимпанальная температура), физическое обследование, ЭКГ в 12 отведениях (RR, PR, QRS, QT, интервалы QTcF и частота сердечных сокращений [HR]), телеметрию, оценку биомаркеров и мониторинг нежелательных явлений.
Фармакокинетический анализ
Следующие фармакокинетические параметры будут рассчитаны на основе измеренных концентраций CDR132L в плазме: максимально наблюдаемая концентрация в плазме (Cmax), время до достижения максимальной концентрации в плазме (tmax), площадь под кривой зависимости концентрации в плазме от времени от нуля до последней поддающейся определению концентрации в плазме (AUC0-t), площадь под кривой зависимости концентрации в плазме от времени от нулевого времени, экстраполированного на бесконечность (AUC0-inf), клиренс крови (CL), константа конечной скорости выведения (λz), конечный период полувыведения (t1/2), объем распределения (Vdss).
Фармакодинамический анализ
Фармакодинамические оценки будут носить исследовательский характер и будут оцениваться путем взятия образцов крови для определения концентрации следующих биомаркеров: микроРНК 132 (miR-132) для связывания с мишенью, пронатрийуретический N-концевой пептид b-типа (NT-pro-BNP) для устранения отеков и липокалин, ассоциированный с нейтрофильной желатиназой (NGAL), в качестве маркера ремоделирования сердца. Могут потребоваться дополнительные параметры.
Статистические методы
План статистического анализа (SAP), содержащий подробную статистическую методологию, будет записан и подписан перед закрытием базы данных. План может быть обновлен, чтобы отразить адаптивные особенности исследования по мере необходимости.
Статистический анализ параметров безопасности
Нежелательные явления (AE), показатели жизненно важных функций, параметры ECG и данные клинических лабораторных исследований будут перечислены и обобщены с использованием описательной статистики.
Количество (и процент) субъектов, у которых имелись какие-либо АЕ, будут обобщены для каждой дозы. Все АЕ будут перечислены по классу системного органа (SOC) и предпочтительному термину (PT), присвоенному событию, с использованием Медицинского словаря нормативной деятельности (MedDRA). Более того, эти события будут обобщены по максимальной интенсивности. Также будет обобщено количество субъектов, у которых были АЕ, связанные с лекарственным средством. Будут перечислены любые серьезные нежелательные явления (SAE) и/или нежелательные явления, которые привели к исключению из исследования.
- Статистический анализ фармакокинетических параметров
Концентрации в плазме будут перечислены и обобщены по временным точкам. Параметры PK будут перечислены для каждого субъекта и обобщены для каждой лечебной группы с использованием описательной статистики. Для предварительной оценки пропорциональности доз для Cmax и AUC будут рассчитаны и описательно обобщены нормализованные по дозе Cmax, AUC0-t и AUC0-inf в плазме. Кроме того, модель мощности с log (параметр PK) в качестве переменной отклика и log (доза) в качестве предиктора будет подгоняться к данным для Cmax, AUC0-t и AUC0-inf в плазме. Наклон 1 в этой модели соответствует пропорциональности дозы. Наклон будет оцениваться с его двухсторонним 90% и 95% CI.
- Статистический анализ фармакодинамических параметров
Данные PD параметров будут перечислены и обобщены: абсолютные значения вместе с отклонениями от базового уровня, с использованием описательной статистики.
Для каждой группы дозирования отношения между концентрацией в плазме и параметрами PD будут исследованы с использованием графического представления каждого PD параметра в зависимости от концентраций в плазме. Эта взаимосвязь будет исследована с использованием пересечения PK и соответствующей популяции PD. Если сводная статистика и графические представления указывают на взаимосвязь между концентрацией в плазме и PD параметром, может быть разработана соответствующая статистическая модель для дальнейшего объяснения этой взаимосвязи.
12.2 Характеристики пациента
28 пациентов со стабильной сердечной недостаточностью (HF) ишемического происхождения (NYHA 1-3) были включены в рандомизированное двойное слепое плацебоконтролируемое исследование. Характеристики пациентов дополнительно включали диабет 2 типа, перенесенный ранее инфаркт миокарда, фибрилляцию предсердий, артериальную гипертензию, чрескожное вмешательство и/или аортокоронарное шунтирование. Фракция выброса левого желудочка находилась в диапазоне от 31% до 56%.
Пациенты получали фоновое лечение сопутствующих заболеваний по усмотрению врача и получали стабильную терапию их индивидуального состояния HF. Большинство пациентов получали двойную/тройную терапию (бета-блокатор в сочетании с ингибитором ACE или блокатором рецепторов ангиотензина и антагонистом минералокортикоидных рецепторов). Два пациента из группы плацебо и 2 пациента из группы исследуемого препарата имели бивентрикулярный кардиостимулятор; 3 пациента из группы исследуемого препарата имели имплантированный кардиовертер-дефибриллятор (ICD).
12.3 Предварительные результаты
Фармакокинетический (PK) профиль
PK-параметры CDR132L у человека подтвердили профиль безопасности без признаков накопления. Высокий уровень линейности дозы Cmax и AUC позволил прогнозировать PK параметры для других доз (например, 5 мг/кг). На основании предварительных результатов исследования фазы Ib можно предположить, что начальная доза для фазы II клинического исследования составляет от 3 до 10 мг/кг с последующей поддерживающей дозой в диапазоне от 3 до 5 мг/кг.
Связывание с мишенью
Уровни циркулирующей miR-132 у пациентов в группе исследуемого препарата были значительно и дозозависимо снижены и оставались низкими с течением времени (до конечной точки исследования на 112-й день).
Результаты ECG
У большинства пациентов в группе исследуемого препарата при скрининге были выявлены отклонения от нормы ECG. Многие из них показали нормализацию или существенное дозозависимое улучшение (например, нормализация зубцов T; сужение QRS или отсутствие блокады левой ножки пучка Гиса (LBBB) и/или блокады правой ножки пучка Гиса (RBBB); нормализация прироста зубца R) при лечении с помощью CDR132L. Ни у кого не было ухудшения ECG по сравнению с исходным уровнем при лечении с помощью CDR132L. На основании данных QT и QTc не было обнаружено никаких намеков на проаритмический потенциал.
Фармакодинамические (PD) параметры
Положительное влияние на фракцию выброса (EF) было обнаружено у большинства подвергнутых лечению пациентов. На NT-proBNP, как на маркер сердечной безопасности, лечение с помощью CDR132L не оказывало негативного влияния. Пациенты в группе самой высокой дозы (10 мг/кг) показали устойчивое снижение уровней NT-proBNP в день 28 и 122 по сравнению с исходным уровнем. Двукратное лечение с помощью CDR132L (доза 1-10 мг/кг) привело к улучшению EF и/или снижению значений NT-proBNP у >50% всех пациентов. Уменьшение времени изоволюмической релаксации (IVRT), важного маркера релаксации левого желудочка, было обнаружено у пациентов с EF >45%, что указывает на пользу для пациентов с диастолической дисфункцией.
Биомаркеры
Биомаркеры сердечного фиброза С-концевой пропептид проколлагена I типа (PICP) и галектин-3 (Gal-3) показали пониженные уровни у пациентов с HF, получавших лечение с помощью CDR132L, что указывает на антифибротические эффекты. Кроме того, биомаркер фиброза матриксная металлопротеиназа 1 (MMP-1) положительно коррелировал с циркулирующими уровнями miR-132 и снижался у пациентов в группах, получавших более высокие дозы (группы 3 и 4). В конечной точке исследования уровни MMP-1 были ниже предела обнаружения в когорте 4.
Безопасность и переносимость
Серьезных нежелательных явлений (SAE) обнаружено не было. Не было выявлено патологических эффектов или сигналов безопасности по биохимическим и гематологическим параметрам, показателям жизненно важных функций и ECG.
12.4 Заключение
CDR132L хорошо переносился пациентами с сердечной недостаточностью и не проявлял никаких признаков токсичности в дозах до 10 мг/кг.
Пример 13. Мониторинг терапии с помощью CDR132L путем количественной оценки циркулирующей miR-132-3p в плазме
Целью этого исследования являлась оценка уровней miR-132-3p в плазме в качестве биомаркера для мониторинга терапии с помощью CDR132L.
Уровень циркулирующей miR-132-3p измеряли в образцах плазмы плацебоконтролируемой модели сердечной недостаточности (HF), индуцированной инфарктом миокарда (MI) у свиней (фигура 21). Животные перенесли ИМ и были подвергнуты различным схемам лечения с помощью CDR132L, включая два его применения на 3-й день и месяц 1 (внутрикоронарное/внутривенное (ICIV) по сравнению с внутривенным/внутривенным (IVIV)) и три уровня доз CDR132L (низкий: 1 мг/кг, средний: 5 мг/кг или высокий: 10 мг/кг).
Исследование сопровождалось серийным взятием крови до 2-го месяца. В образцах плазмы крови, взятых в конечной точке, циркулирующие уровни miR-132-3p выявляли с помощью количественной ПЦР в реальном времени (qRT-PCR) с использованием зондов TaqMan для miR-132-3p. Данные нормализовали к синтетической микроРНК (cel-miR-39), добавленной во время процедуры экстракции РНК.
Лечение с помощью CDR132L привело к дозозависимому увеличению содержания лекарственного вещества в органе-мишени, сердце, и значительному снижению функциональной miR-132-3p в образцах плазмы. На фиг. 22 показан корреляционный анализ концентрации CDR132L в сердечной ткани (отдаленная область MI LV) всех включенных животных (IVIV и ICIV) и циркулирующих уровней miR-132-3p, нормализованных к cel-miR-39. Данные представляют собой результаты для индивидуальных животных в виде средних значений ± SEM. Значения P оценивали с помощью непараметрического двустороннего U-критерия Манна-Уитни (левая панель). Взаимосвязь выявляли при использовании коэффициента корреляции произведения моментов Пирсона и коэффициента ранговой корреляции Спирмена (правая панель). Соответственно, уровень циркулирующей miR-132-3p сильно коррелировал с концентрацией CDR132L в сердечной ткани подвергнутых лечению животных. Эти данные указывают на то, что уровень циркулирующей miR-132-3p является индикативным маркером присутствия CDR132L в сердечной ткани.
Авторы также оценивали, указывают ли другие установленные биомаркеры на присутствие CDR132L в сердечной ткани. Пронатрийуретический N-концевой пептид b-типа (NT proBNP) хорошо известен как маркер сердечного стресса, который коррелирует с тяжестью сердечной недостаточности. В соответствии с уровнями miR-132-3p, на фигуре 23 показан корреляционный анализ концентрации CDR132L в ткани сердца (отдаленная область MI LV) всех включенных животных (IVIV и ICIV) и уровней NT-proBNP в плазме (пронатрийуретический N-концевой пептид b-типа). Данные представлены для индивидуальных животных в виде средних значений ± SEM. Значения P оценивали с помощью непараметрического двустороннего U-критерия Манна-Уитни (левая панель). Взаимосвязь выявляли при использовании коэффициента корреляции произведения моментов Пирсона и коэффициента корреляции рангового порядка Спирмена (правая панель). Снижение NT-proBNP наблюдали в плазме животных, подвергнутых лечению CDR132L (фигура 23). Однако зависимость от дозы была менее очевидной, а корреляция с сердечным CDR132L менее значимой.
Помимо связи между циркулирующей miR-132 в плазме и CDR132L в сердце, авторы оценили, эффективно ли лекарственное средство ингибирует свою микроРНК-мишень miR-132-3p. Функциональные уровни miR-132-3p были значительно снижены в сердечной ткани (отдаленная область MI LV), и это снижение было тем сильнее, чем выше доза.
На фигуре 24 показан корреляционный анализ функциональных уровней miR-132-3p в сердечной ткани (отдаленная область LV MI) всех включенных животных (IVIV и ICIV) и циркулирующих уровней этой микроРНК, нормализованных к cel-miR-39. Данные представлены для отдельных животных в виде среднего значения ± SEM. Значения P оценивали с помощью непараметрического двустороннего U-критерия Манна-Уитни (левая панель). Взаимосвязь выявляли при использовании коэффициента корреляции произведения моментов Пирсона и коэффициента ранговой корреляции Спирмена (правая панель). Корреляция плазменного и сердечного miR-132-3p не выявила значительной отрицательной связи между обоими параметрами, указывая на то, что уровни miR-132-3p в плазме свидетельствуют об активности CDR132L в отношении его мишени miR-132-3p.
Было показано, что лечение с помощью CDR132L улучшает сердечную функцию после ИМ. Соответственно, авторы проверили, соответствует ли это функциональное улучшение и изменение фракции выброса левого желудочка (EF), сравниваемые между днем 3 после ИМ и месяцем 2 (дельта EF), циркулирующей miR-132-3p. Значительная отрицательная корреляция наблюдалась для обоих параметров, указывая на то, что уровень циркулирующей miR-132-3p является показателем улучшения сердечной функции.
На фигуре 25 показан корреляционный анализ дельта EF (улучшение EF с дня 3 по месяц 2) всех включенных животных (IVIV и ICIV) и циркулирующие уровни этой микроРНК, нормализованные к cel-miR-39. Данные представлены для индивидуальных животных в виде средних значений ± SEM. Значения P оценивали с помощью непараметрического двустороннего критерия U Манна-Уитни (левая панель). Взаимосвязь выявляли при использовании коэффициента корреляции произведения моментов Пирсона и коэффициента ранговой корреляции Спирмена (правая панель).
Отрицательная связь была столь же сильной, как и корреляция между функциональным улучшением и маркером сердечного стресса NT-proBNP.
На фигуре 26 показан корреляционный анализ уровней NT-proBNP в плазме всех включенных животных (IVIV и ICIV) и дельта EF (улучшение EF с дня 3 по месяц 2). Данные представлены для индивидуальных животных в виде средних значений ± SEM. Значения P оценивали с помощью непараметрического двустороннего U-критерия Манна-Уитни (левая панель). Взаимосвязь выявляли при использовании коэффициента корреляции произведения моментов Пирсона и коэффициента ранговой корреляции Спирмена (правая панель).
Кроме того, низкий уровень циркулирующего NT-proBNP линейно соответствует низкому уровню циркулирующей miR-132-3p.
На фигуре 27 показан корреляционный анализ уровней NT-proBNP в плазме всех включенных животных (IVIV и ICIV) и циркулирующих уровней miR-132-3p, нормализованных к cel-miR-39. Данные представлены для индивидуальных животных в виде средних значений ± SEM. Значения P оценивали с помощью непараметрического двустороннего U-критерия Манна-Уитни (левая панель). Взаимосвязь выявляли при использовании коэффициента корреляции произведения моментов Пирсона и коэффициента ранговой корреляции Спирмена (правая панель).
Пример 14. CDR132L при подострой сердечной недостаточности
14.1 Цель исследования. Тестирование эффективности CDR132L на модели подострой сердечной недостаточности (HF) после инфаркта миокарда на свиньях.
14.2 План исследования
• модель HF после инфаркта миокарда с 56-дневным периодом последующего наблюдения у 135 животных;
• домашние свиньи с медленным набором веса (порода «Мангалица»);
• плацебо-контроль и 3 дозовые группы;
1, 5, 10 мг/кг м.т., лечили дважды, на 3 и 28 дни (фигура 28);
• сравнение внутрикоронарного/внутривенного (IC/IV) и внутривенного/внутривенного (IV/IV) введений;
• животные, рассматриваемые для анализа данных: 79 животных.
14.3 Результаты
Изменение фракции выброса Delta EF (EF день 56 - EF день 3).
Примечание. Критерии включения, EF на 3-й день <40%
Значительные изменения EF с 3-го по 56-й день (дельта-EF) после инфаркта миокарда были обнаружены в группах, получавших средние и высокие дозы IV/IV и IC/IV, что указывает на функциональное улучшение (фигура 29).
Корреляция циркулирующих NT-proBNP и дельта EF (день 56 - день 3).
Связанное с HF после инфаркта миокарда повышение NT-proBNP было обращено вспять в группах со средней и высокой дозой на 56-й день. Низкий уровень концентрации циркулирующего NT-proBNP соответствует улучшению сердечной функции, о чем свидетельствует увеличение дельта-EF. NT-proBNP служит потенциальным биомаркером связывания с мишенью (см. Пример 13).
Фиброз (в %) в конечной точке (56-й день) в отдаленной области LV MI.
Примечание. Критерии включения, EF на 3-й день <40%
Значительные изменения в развитии фиброза были обнаружены в группе, получавшей среднюю и высокую дозы, способствуя функциональному улучшению (фигура 30).
Терапевтический ответ (56 день).
Примечание. Критерии включения, EF на 3-й день <40%
Анализ респондентов выявил дозозависимый ответ в улучшении EF. 85,7% животных группы, получавшей высокую дозу IVIV, показали дельта EF >7%, тогда как только 4,6% всех животных, получавших плацебо, показали восстановление >7% (фигура 31).
14.4 Выводы
CDR132L эффективно улучшает сердечную функцию, что основано на результатах МРТ сердца, признанного метода «золотого стандарта», в клинически значимой и установленной модели сердечной недостаточности после перенесенного инфаркта миокарда на крупных животных. Наблюдалась линейная дозовая зависимость для улучшения сердечной функции. Группа, получавшая высокую дозу IVIV, показала увеличение EF на 56-й день на 10,38% по сравнению с 3-м днем (с поправкой на плацебо). Продемонстрированная эффективность CDR132L имеет большое клиническое значение (для сравнения, трансплантация сердечных клеток увеличивает EF в лучшем случае на 3-4%).
Пример 15. CDR132L для лечения хронической сердечной недостаточности
15.1 Цель исследования. Тестирование эффективности CDR132L на модели хронической сердечной недостаточности (HF) после ИМ у свиней
15.2 План исследования
Подтверждение эффективности CDR132L на модели хронической сердечной недостаточности (HF) после ИМ у свиней.
• Хроническая модель HF после ИМ с периодом последующего наблюдения 6 месяцев (фигура 32);
• Домашние свиньи с медленным набором веса (порода «Мангалица»);
• Три лечебных группы:
5 раз в месяц плацебо;
5 раз в месяц CDR132L;
3 раза в месяц CDR132L.
• Доза: 5 мг/кг
• Способ введения: IV
• Животные, рассматриваемые для анализа данных: 29 животных.
15.3. Результаты
Фракция выброса (EF)
Примечание. Критерии включения, EF в 1-й месяц <40%.
Значительные изменения EF, составляющие >7%, в период с 1 по 6 месяц после ИМ были обнаружены во всех лечебных группах по сравнению с плацебо (фигура 33).
Анализ данных пациентов, ответивших на лечение
Примечание. Критерии включения, EF в 1-й месяц <40%.
Наблюдалась сильная корреляция между количеством введений и улучшением EF (дельта EF M6-M1) (фигура 33). 87,5% группы, получавшей 5-кратное лечение, показали дельта EF >7%, тогда как только 2 из 11 животных, получавших плацебо, показали восстановление >3%.
Уровни CDR132L и miR-132-3p через 6 месяцев
Примечание. Критерии включения, EF в 1-й месяц <40%.
Наблюдалось дозозависимое распределение CDR132L в сердечной ткани (отдаленная область LV ИМ). Концентрация CDR132L в ткани соответствует низкому функциональному уровню miR-132-3p (фигура 34).
Конечный систолический объем левого желудочка (LVESV)
Лечение с помощью CDR132L показало положительный эффект на неблагоприятное ремоделирование левого желудочка и значительно ослабило увеличение LVESV после ИМ через 6 месяцев периода последующего наблюдения в обеих лечебных группах по сравнению с плацебо.
Левое предсердие (LA)
Хроническое ремоделирование предсердий после ИМ было уменьшено путем лечения с помощью CDR132L по данным оценки путем визуализации. Объем LA и индекс LA (объем LA, нормализованный к площади поверхности тела) были значительно снижены в обеих лечебных группах по сравнению с плацебо.
Систолическая функция и сократимость
Систолическая функция и сократимость были значительно улучшены путем лечения с помощью CDR132L после перенесенного ИМ, что оценивалось с помощью инвазивного гемодинамического измерения в конечной точке через 6 месяцев. Анализ не зависящих от нагрузки параметров выявил зависимое от лечения с помощью CDR132L улучшение сократимости миокарда (соотношение конечного систолического давления и объема (ESPVR - end-systolic pressure-volume relationship), и ударная работа в ответ на преднагрузку (PRSW - preload recruitable stroke work)), что явно отражалось на улучшении общей систолической функции.
Диастолическая функция
Лечение с помощью CDR132L значительно улучшало диастолическую функцию. Глобальный диастолический параметр (минимальная скорость изменения давления в желудочке) и независимый от нагрузки параметр EDPVR (end-diastolic pressure volume relationship, соотношение конечного диастолического давления и объема), чувствительный маркер жесткости и емкости сердца, были улучшены путем лечения с помощью CDR321L.
15.4 Выводы
CDR132L значительно улучшает сердечную функцию, как показано на модели хронической сердечной недостаточности у свиней. Увеличение EF на 7,14% было продемонстрировано на 6-м месяце у животных, получавших пять ежемесячных введений CDR132L (с поправкой на плацебо). 87,5% животных отвечали на лечение улучшением EF более чем на 7%. Никаких побочных эффектов, связанных с терапией, или изменений в гематологии или лабораторной биохимии не наблюдалось. Продемонстрированная эффективность CDR132L является высоко клинически значимой в качестве варианта лечения хронической сердечной недостаточности.
Кроме того, лечение с помощью CDR132L, проводимое ежемесячно, эффективно улучшает ремоделирование, а также систолическую функцию (например, сократительную способность сердца) и диастолическую функцию (например, расслабление сердца), как показано на модели хронической сердечной недостаточности после инфаркта миокарда.
Пример 16. Фармакокинетическое исследование
Для дополнительной оценки терапевтического потенциала CDR132L, авторы разработали фармакокинетическое исследование (PK) на крупных животных, чтобы оценить воздействие на ткани и распределение в целевой ткани тестируемого соединения у свиней. Внутривенное (IV) введение является клинически предпочтительным способом введения, однако многие новые терапевтические подходы основаны на альтернативных путях введения, таких как интракоронарная (IC) перфузия, которая часто имеет место в исследованиях генной терапии сердечно-сосудистых заболеваний. Авторы обнаружили дозозависимое воздействие на ткани в образцах сердечной мышцы, сопоставимое с IV и IC введением CDR132L (фиг. 36 a, b). Активность CDR132L подтверждали по реципрокному дозозависимому снижению уровня целевой miR-132 по сравнению с не подвергнутыми лечению контрольными животными. Наблюдалась сильная обратная корреляция между концентрацией анти-miR-132 в сердце и функциональными уровнями miR-132 (фиг. 36 c) независимо от пути введения. Расчетный период полужизни соединения в сердечной ткани составил приблизительно 3 недели (фиг. 36 d) и для плазмы было обнаружено двухфазное выведение соединения с быстрой альфа-фазой и длинной бета-фазой (фиг. 36 e).
Claims (64)
1. Применение олигонуклеотида, содержащего последовательность формулы III:
5'-dA*+T*dG*+G*dC*+T*dG*+T*dA*+G*dA*dC*dT*dG*+T*+T-3',
где dA представляет собой 2'-дезоксиаденозин, dG представляет собой 2'-дезоксигуанозин, dC представляет собой 2'-дезоксицитидин и T представляет собой тимидин,
причем +T представляет собой строительный блок LNA-T, и +G представляет собой строительный блок LNA-G, и где * представляет собой фосфоротиоатную связь,
в профилактике или лечении сердечного нарушения у человека, при этом сердечное нарушение выбрано из (i) острой или подострой сердечной недостаточности, (ii) хронической и/или ухудшающейся хронической сердечной недостаточности, (iii) стабильной сердечной недостаточности, (iv) менее прогрессирующего состояния сердечной недостаточности или прогрессирующего состояния сердечной недостаточности, (v) сердечной недостаточности I и/или II стадии по NYHA, I, II и/или III стадии по NYHA или III и/или IV стадии по NYHA, и (vi) левосторонней или правосторонней сердечной недостаточности.
2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что человек страдает сердечной недостаточностью и имеет имплантированный насос, необязательно вспомогательное устройство для левого желудочка (LVAD).
3. Применение по п. 1 или 2, где олигонуклеотид вводят как таковой или где олигонуклеотид вводят конъюгированным с гетерологичным фрагментом.
4. Применение по любому из пп. 1-3, где олигонуклеотид вводят в комбинации с (i) по меньшей мере одним диуретиком, (ii) по меньшей мере одним ингибитором ангиотензинпревращающего фермента, (iii) по меньшей мере одним β-блокатором и необязательно (iv) блокатором рецептора ангиотензина II, и (v) необязательно ингибитором If-каналов, таким как ивабрадин, и необязательно (vi) ингибитором ангиотензиновых рецепторов и неприлизина, и необязательно (vii) ингибитором натрийглюкозного котранспортера 2-го типа, таким как эмпаглифлозин и дапаглифлозин, и необязательно (viii) терапевтическими средствами на основе стволовых клеток, и необязательно (ix) анти-miRNA, нацеленными на различные пути, и/или необязательно (x) ингибитором SGLT-2.
5. Применение по любому из пп. 1-4, где стабильная сердечная недостаточность имеет неишемическое или ишемическое происхождение.
6. Применение по любому из пп. 1-4, где левосторонняя сердечная недостаточность выбрана из систолической сердечной недостаточности или диастолической сердечной недостаточности, или состоянием, ассоциированным с систолической сердечной недостаточностью и/или диастолической сердечной недостаточностью.
7. Применение по любому из пп. 1-4, где сердечное нарушение представляет собой заболевание, связанное с гипертрофией сердца.
8. Применение олигонуклеотида, содержащего последовательность формулы III:
5'-dA*+T*dG*+G*dC*+T*dG*+T*dA*+G*dA*dC*dT*dG*+T*+T-3',
где dA представляет собой 2'-дезоксиаденозин, dG представляет собой 2'-дезоксигуанозин, dC представляет собой 2'-дезоксицитидин и T представляет собой тимидин,
где +T представляет собой строительный блок LNA-T, и +G представляет собой строительный блок LNA-G, и где * представляет собой тиофосфатную связь,
в профилактике или лечении фиброзного нарушения.
9. Применение по п. 8, где фиброзное нарушение представляет собой фиброз сердца, фиброз печени или фиброз легких.
10. Применение по любому из пп. 1-9, где олигонуклеотид вводят человеку в дозе около 0,1-100 мг/кг массы тела на применение, в частности, в количестве около 3-10 мг/кг массы тела на применение.
11. Применение по любому из пп. 1-10, где олигонуклеотид вводят парентерально, например, путем инъекции или инфузии, необязательно путем внутривенной или подкожной инъекции, или где олигонуклеотид применяют местно.
12. Применение по любому из пп. 1-11, где олигонуклеотид вводят человеку по схеме, выбранной из:
- ежедневного введения,
- введения каждый второй день,
- введения каждый третий день и
- введения каждый четвертый день,
где олигонуклеотид вводят парентерально, в частности путем внутривенной или подкожной инъекции.
13. Применение по п. 12, где олигонуклеотид вводят в дозе, зависящей от массы тела.
14. Применение по п. 12, где олигонуклеотид вводят в дозе от 0,01 мг/кг массы тела до 50 мг/кг массы тела, в дозе от 0,02 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела или в дозе от 0,05 мг/кг массы тела до 5 мг/кг массы тела на применение.
15. Применение по п. 12, где олигонуклеотид вводят в фиксированной дозе.
16. Применение по п. 15, где фиксированная доза составляет от 1 мг до 5000 мг, от 2 мг до 1000 мг или от 5 мг до 500 мг на применение.
17. Применение по любому из пп. 1-11, где олигонуклеотид вводят человеку по схеме, выбранной из:
- еженедельного введения,
- введения каждую вторую неделю,
- введения каждую третью неделю,
- введения каждую четвертую неделю или каждый месяц,
- введения каждую шестую неделю,
- введения каждый второй месяц,
- введения каждый третий месяц,
- введения каждый шестой месяц и
- введения один раз в год,
где олигонуклеотид вводят парентерально, в частности путем внутривенной или подкожной инъекции.
18. Применение по п. 17, где олигонуклеотид вводят в дозе, зависящей от массы тела.
19. Применение по п. 18, где олигонуклеотид вводят в дозе от 0,01 мг/кг массы тела до 50 мг/кг массы тела, в дозе от 0,05 мг/кг массы тела до 20 мг/кг массы тела, в дозе от 0,1 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела или в дозе от 3 мг/кг массы тела до 10 мг/кг массы тела на применение.
20. Применение по п. 15, где олигонуклеотид вводят в фиксированной дозе от 1 мг до 5000 мг, в фиксированной дозе от 5 мг до 2000 мг или в фиксированной дозе от 10 мг до 1000 мг на применение.
21. Применение по любому из пп. 1-20, где олигонуклеотид вводят в начальной дозе, не обязательно в одной или двух начальных дозах, и затем по меньшей мере в одной поддерживающей дозе, которая отличается от начальной дозы.
22. Применение по любому из пп. 1-21, где олигонуклеотид вводят в режиме по требованию, в частности, включающем стадии:
(i) измерение количества miR132 в образце биологической жидкости, необязательно в цельной крови, образце сыворотки или плазмы, или моче субъекта, подвергаемого лечению олигонуклеотидом,
(ii) введение олигонуклеотида в дозе и/или с временным интервалом между отдельными дозами, определенными в соответствии с измеренным количеством miR132 на стадии (i), в частности, где новую дозу олигонуклеотида вводят, если количество miR132 в образце биологической жидкости превышает заданное значение.
23. Применение по любому из пп. 1-22, включающее определение количества и/или активности маркера, в частности сердечного и/или фиброзного маркера, до, во время и/или после введения олигонуклеотида.
24. Применение по п. 23, где маркер выбран из BNP, необязательно NT-proBNP, ANP, изоформ тяжелых цепей миозина, необязательно отношения MYH7/6, FoxO3 SERCA2, отложения коллагена и/или маркера фиброза, такого как коллаген 1A1, коллаген 1A2, коллаген 3A1, С-концевой пропептид проколлагена I типа (PICP), и/или галектина-3 (Gal-3), и/или матриксной металлопротеиназы, такой как матриксная металлопротеиназа 1 (MMP-1) и/или матриксная металлопротеиназа 2 (MMP-2).
25. Применение по п. 24, где маркер выбран из NT-proBNP, С-концевого пропептида проколлагена I типа (PICP) и/или галектина-3 (Gal-3), и/или матриксной металлопротеиназы 1 (ММР-1).
26. Применение по любому из пп. 1-25, включающее определение параметра ECG во время курса терапии, в частности, выбранного из измерения QRS, зубцов T, блокады левой ножки пучка Гиса (LBBB) и/или блокады правой ножки пучка Гиса (RBBB), и/или прироста зубца R, до, во время и/или после введения олигонуклеотида.
27. Способ мониторинга терапии олигонуклеотидом, являющимся объектом применения по любому из пп. 1-26, включающий определение количества и/или активности miR-132 в образце, полученном от субъекта, которому вводили олигонуклеотид, при этом определение проводят один или несколько раз в течение курса терапии.
28. Способ по п. 27, в котором количественно определяют miR-132 в образце циркулирующей биологической жидкости, например, в образце, выбранном из крови, плазмы, сыворотки или их фракций.
29. Способ по любому из пп. 27, 28, в котором на основании результата определения выполняют по меньшей мере одну из следующих процедур:
(i) определение, отвечает ли субъект, подвергаемый лечению, на терапию,
(ii) корректировку дозы олигонуклеотида, подлежащего введению, и
(iii) корректировку временного интервала между дозами олигонуклеотида, подлежащего введению.
30. Применение набора, содержащего:
• праймер, связывающийся с ДНК, кодирующей miR-132, или с ДНК, которая комплементарна указанной,
• праймер, связывающийся с ДНК, кодирующей miR-39, или с ДНК, которая комплементарна указанной,
• необязательно положительный контроль hsa-miR-132, и
• необязательно положительный контроль miR-39,
в способе мониторинга терапии по любому из пп. 27-29.
31. Применение по п. 30, где праймер, связывающийся с ДНК, кодирующей miR-132, или с ДНК, которая комплементарна указанной, представляет собой праймер hsa-miR-132, а праймер, связывающийся с ДНК, кодирующей miR-39, или с ДНК, которая комплементарна указанной, представляет собой праймер cel-miR 39.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP19180308.9 | 2019-06-14 | ||
EP20150700.1 | 2020-01-08 | ||
EP20162110.9 | 2020-03-10 | ||
EP20175240.9 | 2020-05-18 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2022100450A RU2022100450A (ru) | 2023-07-14 |
RU2811365C2 true RU2811365C2 (ru) | 2024-01-11 |
Family
ID=
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013034653A1 (en) * | 2011-09-06 | 2013-03-14 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | The mirna-212/132 family as a therapeutic target |
WO2016042561A3 (en) * | 2014-09-21 | 2016-05-19 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Downregulating mir-132 for the treatment of lipid related disorders |
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013034653A1 (en) * | 2011-09-06 | 2013-03-14 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | The mirna-212/132 family as a therapeutic target |
WO2016042561A3 (en) * | 2014-09-21 | 2016-05-19 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Downregulating mir-132 for the treatment of lipid related disorders |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
AHMET UCAR et al. The miRNA-212/132 family regulates both cardiac hypertrophy and cardiomyocyte autophagy. Nature communications, 2012, vol. 3, no. 1, pp. 1-11. * |
R. HINKEL et al. P5384 LNA-based miR132 inhibition is cardioprotective in a pig model of percutaneous transverse aortic constriction (pTAC). European heart journal, 2017, vol. 38, No. 1, p.5384. * |
SEEMA DANGWAL et al. microRNA Therapeutics in Cardiovascular Disease Models, ANNUAL REVIEW OF PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY, 06.01.2014, vol. 54, No. 1, page 185-200. THOMAS THUM. Facts and updates about cardiovascular non-coding RNAs in heart failure : Facts and updates RNAs. ESC HEART FAILURE, 03.08.2015, vol. 2, No. 3, page 108-111. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Tan et al. | Combination therapy with paricalcitol and trandolapril reduces renal fibrosis in obstructive nephropathy | |
Lucchinetti et al. | Gene Regulatory Control of Myocardial Energy Metabolism Predicts Postoperative Cardiac Function in Patients Undergoing Off-pump Coronary Artery Bypass Graft Surgery: Inhalational versusIntravenous Anesthetics | |
CA2458798C (en) | Method for reducing hypertension and heart failure | |
JP6955443B2 (ja) | 肺動脈性肺高血圧症の処置に関する方法および組成物 | |
US10307401B2 (en) | Compositions and methods for treatment of prostate cancer | |
Usui et al. | Upregulated neurohumoral factors are associated with left ventricular remodeling and poor prognosis in rats with monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension | |
Sabbah et al. | Effects of angiotensin-neprilysin inhibition in canines with experimentally induced cardiorenal syndrome | |
Ning et al. | Biventricular pacing cardiac contractility modulation improves cardiac contractile function via upregulating SERCA2 and miR-133 in a rabbit model of congestive heart failure | |
US20220243204A1 (en) | Treatment of heart failure in human subjects | |
Hauck et al. | p21CIP1/WAF1-dependent inhibition of cardiac hypertrophy in response to Angiotensin II involves Akt/Myc and pRb signaling | |
RU2811365C2 (ru) | Лечение сердечной недостаточности у человека | |
US20220162597A1 (en) | Compound for treatment of heart failure | |
Zhang et al. | Small-molecule integrated stress response inhibitor reduces susceptibility to postinfarct atrial fibrillation in rats via the inhibition of integrated stress responses | |
US20230235403A1 (en) | Long non-coding rna as therapeutic target in cardiac disorders and cardiac regeneration | |
RU2794975C2 (ru) | Усовершенствованное соединение для лечения сердечной недостаточности | |
WO2016058061A1 (en) | microRNA SIGNATURES FOR CARDIAC DISORDERS | |
Zhang et al. | The infarction zone rather than the noninfarcted remodeling zone overexpresses angiotensin II receptor type 1 and is the main source of ventricular atrial natriuretic peptide | |
KR102677043B1 (ko) | 심부전 치료를 위한 개선된 화합물 | |
Sabbah et al. | Intravenous infusion of the β3-adrenergic receptor antagonist APD418 improves left ventricular systolic function in dogs with systolic heart failure | |
Eijgenraam et al. | Disease modifying effect of microRNA-132 inhibition in phospholamban p.(Arg14del) cardiomyopathy in mice | |
RU2022100450A (ru) | Лечение сердечной недостаточности у человека | |
WO2022232650A1 (en) | Methods for reducing agt expression | |
Balakrishnan et al. | Sarcolipin haploinsufficiency prevents dystrophic cardiomyopathy in mdx mice | |
Muller et al. | Renin-Angiotensin | |
BA | BEST ABSTRACTS SITZUNG |