RU2810601C2 - Composition and method of prevention, removal of symptoms or therapeutic effect on liver damage - Google Patents
Composition and method of prevention, removal of symptoms or therapeutic effect on liver damage Download PDFInfo
- Publication number
- RU2810601C2 RU2810601C2 RU2022102310A RU2022102310A RU2810601C2 RU 2810601 C2 RU2810601 C2 RU 2810601C2 RU 2022102310 A RU2022102310 A RU 2022102310A RU 2022102310 A RU2022102310 A RU 2022102310A RU 2810601 C2 RU2810601 C2 RU 2810601C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- liver
- ruminococcus
- fatty liver
- less
- alcoholic fatty
- Prior art date
Links
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims abstract description 46
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 62
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 title description 47
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 title description 42
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 title description 42
- 241000291327 Ruminococcus faecis Species 0.000 claims abstract description 81
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 claims abstract description 67
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 45
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims abstract description 37
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims abstract description 34
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 22
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 claims abstract description 19
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 101150077804 TIMP1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102000005353 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1 Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 210000004534 cecum Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 54
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 53
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 46
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 45
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 24
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 24
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 22
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 20
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 19
- 241000192031 Ruminococcus Species 0.000 description 18
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 18
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 17
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 15
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 15
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 15
- 241000123753 Ruminococcus bromii Species 0.000 description 14
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 14
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 10
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 10
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 10
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 10
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 10
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 9
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 8
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 8
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 8
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 7
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 7
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 7
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 7
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 description 7
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 7
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 7
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 6
- 101150008656 COL1A1 gene Proteins 0.000 description 5
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 5
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 5
- SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N Lithocholsaeure Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 5
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 5
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 5
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 5
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 5
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 5
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 5
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 4
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 4
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 4
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 4
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 4
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 4
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 4
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 4
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 4
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 4
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000007692 rcm medium Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 4
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 4
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011814 C57BL/6N mouse Methods 0.000 description 3
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 3
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 238000007446 glucose tolerance test Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 2
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000219745 Lupinus Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 2
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 235000021391 short chain fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000004666 short chain fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 230000007863 steatosis Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 description 2
- 229960001661 ursodiol Drugs 0.000 description 2
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 235000006491 Acacia senegal Nutrition 0.000 description 1
- 208000022309 Alcoholic Liver disease Diseases 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 108010072220 Cyclophilin A Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000012868 Overgrowth Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100034539 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A Human genes 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 206010000059 abdominal discomfort Diseases 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000013564 activation of immune response Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229960001714 calcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003340 calcium silicate Drugs 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000005289 dietary characteristics Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 235000020805 dietary restrictions Nutrition 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MVPICKVDHDWCJQ-UHFFFAOYSA-N ethyl 3-pyrrolidin-1-ylpropanoate Chemical compound CCOC(=O)CCN1CCCC1 MVPICKVDHDWCJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000012528 insulin ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229920000554 ionomer Polymers 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 102000005861 leptin receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010019813 leptin receptors Proteins 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000011093 media selection Methods 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000007671 pyg medium Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000013424 sirius red staining Methods 0.000 description 1
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940045902 sodium stearyl fumarate Drugs 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Abstract
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИTECHNICAL FIELD
Настоящее изобретение относится к композиции для предотвращения, снятия симптомов или терапевтического воздействия на поражение печени, а также к способу предотвращения, снятия симптомов или оказания терапевтического воздействия на поражение печени.The present invention relates to a composition for preventing, relieving symptoms or treating liver damage, as well as a method for preventing, relieving symptoms or providing therapeutic effects on liver damage.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND ART
Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) характеризуется нарушением обмена веществ в печени, приводящим к нарушениям от простого стеатоза до неалкогольного стеатогепатита, которые являются инвазивной формой ткани, что в конечном итоге приводит к прогрессирующему фиброзу и циррозу печени. По данным большинства эпидемиологических исследований распространенность НАЖБП в мире оценивается на уровне 24-30% и растет параллельно с ожирением и метаболическим синдромом.Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is characterized by a metabolic disorder in the liver leading to disorders ranging from simple steatosis to non-alcoholic steatohepatitis, which are tissue invasive forms, ultimately leading to progressive liver fibrosis and cirrhosis. According to most epidemiological studies, the prevalence of NAFLD in the world is estimated at 24-30% and is growing in parallel with obesity and metabolic syndrome.
В последнее время возрастающий интерес направлен преимущественно на выявление и осознание специфической роли кишечной микробиоты при различных болезнях обмена веществ. Дисбиоз кишечника, который относится к аномальным изменениям кишечной микробиоты по сравнению с нормальной микробиотой, связан с уменьшением количества бактерий, производящих полезные короткоцепочечные жирные кислоты (КЦЖК), изменением состава желчных кислот, активацией иммунных реакций на липополисахарид (ЛПС), увеличением производства этанола в результате избыточного роста производящих этанол бактерий, и преобразованием фосфатидилхолина в холин и триметиламин. Известно, что изменения кишечной микрофлоры, влияющие на ось «кишечник-печень», способствуют прогрессированию хронических заболеваний печени, таких как НАЖБП и цирроз печени, а также прогрессирующего фиброза. Тем не менее, восстановление количества кишечной микрофлоры, избыточно развившейся или подавленной в болезненном состоянии, не всегда облегчает тяжесть заболевания. Это объясняется тем, что изменения кишечной микрофлоры в болезненном состоянии могут быть результатом, а не причиной физиологических изменений, вызванных болезнью.Recently, increasing interest has been directed primarily at identifying and understanding the specific role of the intestinal microbiota in various metabolic diseases. Gut dysbiosis, which refers to abnormal changes in the intestinal microbiota compared to the normal microbiota, is associated with a decrease in the number of bacteria producing beneficial short-chain fatty acids (SCFAs), changes in bile acid composition, activation of immune responses to lipopolysaccharide (LPS), increased ethanol production as a result overgrowth of ethanol-producing bacteria, and the conversion of phosphatidylcholine to choline and trimethylamine. Changes in the gut microbiota affecting the gut-liver axis are known to contribute to the progression of chronic liver diseases such as NAFLD and cirrhosis, as well as progressive fibrosis. However, restoring the amount of intestinal microflora that is overdeveloped or suppressed in a disease state does not always alleviate the severity of the disease. This is because changes in the intestinal microflora in a disease state may be the result, rather than the cause, of physiological changes caused by the disease.
Поэтому существует потребность в эффективном способе предотвращения, терапевтического воздействия и диагностики НАЖБП, позволяющем определять гистологическую тяжесть НАЖБП и достоверно определять изменения кишечной микрофлоры.Therefore, there is a need for an effective method for the prevention, therapeutic intervention and diagnosis of NAFLD, which allows determining the histological severity of NAFLD and reliably detecting changes in the intestinal microflora.
РАСКРЫТИЕDISCLOSURE
ТЕХНИЧЕСКАЯ ЗАДАЧАTECHNICAL PROBLEM
Настоящее изобретение направлено на решение вышеуказанных проблем, и его задачей является разработка композиции для предотвращения, снятия симптомов или терапевтического воздействия на поражение печени, например, неалкогольной жировой болезни печени.The present invention is aimed at solving the above problems and its object is to develop a composition for the prevention, relief of symptoms or therapeutic effect on liver damage, for example, non-alcoholic fatty liver disease.
ТЕХНИЧЕСКОЕ РЕШЕНИЕTECHNICAL SOLUTION
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к композиции для предотвращения, снятия симптомов или терапевтического воздействия на поражение печени, содержащей штамм Ruminococcus spp. One embodiment of the present invention relates to a composition for the prevention, relief of symptoms or therapeutic effects on liver damage containing a strain of Ruminococcus spp.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции для культивирования штамма Ruminococcus spp., содержащей источник углерода и источник азота.Another embodiment of the present invention relates to a composition for cultivating a strain of Ruminococcus spp. containing a carbon source and a nitrogen source.
Следующий вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу предотвращения, снятия симптомов или терапевтического воздействия на поражение печени, содержащему введение композиции для предотвращения, снятия симптомов или терапевтического воздействия на поражение печени в соответствии с настоящим изобретением нуждающемуся в этом субъекту.Another embodiment of the present invention relates to a method for preventing, relieving symptoms or treating liver damage, comprising administering a composition for preventing, relieving symptoms or treating liver damage in accordance with the present invention to a subject in need thereof.
Далее настоящее изобретение будет раскрыто в деталях.The present invention will now be described in detail.
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к композиции для предотвращения, снятия симптомов или терапевтического воздействия на поражение печени, содержащей штамм Ruminococcus spp. Композиция может быть фармацевтической композицией или пищевой композицией. Композиция может дополнительно содержать масляную кислоту.One embodiment of the present invention relates to a composition for the prevention, relief of symptoms or therapeutic effects on liver damage containing a strain of Ruminococcus spp. The composition may be a pharmaceutical composition or a food composition. The composition may additionally contain butyric acid.
Поражение печени может представлять собой одно или несколько, выбранное из группы, состоящей из жировой печени, гепатита, фиброза печени и цирроза печени. Поражение печени может быть неалкогольным. В частности, гепатит может представлять собой неалкогольный стеатогепатит, а жировая печень может представлять собой неалкогольную жировую печень. Неалкогольная жировая печень может представлять собой, в частности, неалкогольную жировую печень без ожирения, неалкогольную жировую печень с ожирением или диабетическую неалкогольную жировую печень. Диабетическая неалкогольная жировая печень может быть вызвана диабетом 2 типа.The liver lesion may be one or more selected from the group consisting of fatty liver, hepatitis, liver fibrosis and cirrhosis. Liver damage may be non-alcoholic. In particular, hepatitis may be non-alcoholic steatohepatitis, and fatty liver may be non-alcoholic fatty liver. The non-alcoholic fatty liver may be, inter alia, a non-obese non-alcoholic fatty liver, an obese non-alcoholic fatty liver or a diabetic non-alcoholic fatty liver. Diabetic non-alcoholic fatty liver can be caused by type 2 diabetes.
У пациентов с диабетом 2 типа вероятность развития неалкогольного стеатогепатита (НАСГ) составляет 40%, а у пациентов с диабетом 2 типа, имеющих неалкогольную жировую печень, распространенность неалкогольного стеатогепатита повышена (80,2% против 64,4%; p < 0,001) и фиброза печени (40,3% против 17,0%; p < 0,001) по сравнению с пациентами с неалкогольной жировой печенью без диабета 2 типа. Поэтому существует необходимость в разработке терапевтического средства для пациентов с неалкогольной жировой печенью, имеющих диабет 2 типа. Поражение печени при диабете 2 типа трудно поддается лечению, поскольку прогноз хуже по сравнению со случаем отсутствия диабета 2 типа, тем не менее композиция, предложенная настоящим изобретением, способна оказывать терапевтическое действие на поражение печени при диабете 2 типа.Patients with type 2 diabetes have a 40% chance of developing nonalcoholic steatohepatitis (NASH), and patients with type 2 diabetes who have nonalcoholic fatty liver have an increased prevalence of nonalcoholic steatohepatitis (80.2% vs. 64.4%; p < 0.001) and liver fibrosis (40.3% vs. 17.0%; p < 0.001) compared with patients with non-alcoholic fatty liver without type 2 diabetes. Therefore, there is a need to develop a therapeutic agent for patients with non-alcoholic fatty liver who have type 2 diabetes. Liver damage in type 2 diabetes is difficult to treat because the prognosis is worse compared to the case without type 2 diabetes, however, the composition proposed by the present invention can have a therapeutic effect on liver damage in type 2 diabetes.
Композиция способна предотвращать, снимать симптомы или оказывать терапевтическое действие на поражение печени независимо от инсулина. Учитывая подтверждение действия композиции, предложенной настоящим изобретением, на поражение печени на животной модели с инсулинорезистентностью, настоящие примеры демонстрируют значительное уменьшение поражения печени, то есть было подтверждено, что композиция, в соответствии с настоящим изобретением, снимает симптомы и оказывает терапевтическое действие на поражение печени независимо от инсулина.The composition is capable of preventing, relieving symptoms or providing a therapeutic effect on liver damage independent of insulin. Given the confirmation of the effect of the composition of the present invention on liver damage in an animal model of insulin resistance, the present examples demonstrate a significant reduction in liver damage, that is, the composition of the present invention was confirmed to relieve symptoms and have a therapeutic effect on liver damage independently from insulin.
Композиция, предложенная настоящим изобретением, введенная субъекту с поражением печени, показала значительно улучшенный результат лечения поражения печени. Субъект с поражением печени может иметь одну или несколько из следующих характеристик (1) - (5):The composition proposed by the present invention, administered to a subject with liver damage, showed a significantly improved result in the treatment of liver damage. A subject with liver damage may have one or more of the following characteristics (1) - (5):
(1) повышенное состояние концентрации АЛТ в крови, например, более чем в 1 раз, в 1,1 раза и более, в 1,2 раза и более, в 1,3 раза и более, в 1,4 раза и более, в 1,5 раза и более, в 1,6 раза и более, в 1,7 раза и более, в 1,8 раза и более, в 1,9 раза и более, в 2 раза и более, в 2,1 раза и более, в 2,2 раза и более, в 2,3 раза и более, в 2,4 раза и более, в 2,5 раза и более, в 2,6 раза и более, в 2,7 раза и более, в 2,8 раза и более, в 2,9 раза и более, в 3 раза и более, в 3,5 раза и более, в 4 раза и более, в 4,5 раза и более, в 5 раз и более, в 5,5 раз и более, в 6 раз и более, в 6,5 раз и более, в 7 раз и более, в 7,5 раз и более, в 8 раз и более, в 8,5 раз и более, в 9 раз и более, в 9,5 раз и более, или в 10 раз и более от концентрации АЛТ в крови в нормальной контрольной группе.(1) an increased state of ALT concentration in the blood, for example, more than 1 times, 1.1 times or more, 1.2 times or more, 1.3 times or more, 1.4 times or more, 1.5 times or more, 1.6 times or more, 1.7 times or more, 1.8 times or more, 1.9 times or more, 2 times or more, 2.1 times or more, 2.2 times or more, 2.3 times or more, 2.4 times or more, 2.5 times or more, 2.6 times or more, 2.7 times or more more, 2.8 times or more, 2.9 times or more, 3 times or more, 3.5 times or more, 4 times or more, 4.5 times or more, 5 times or more more, 5.5 times or more, 6 times or more, 6.5 times or more, 7 times or more, 7.5 times or more, 8 times or more, 8.5 times or more more, 9 times or more, 9.5 times or more, or 10 times or more of the ALT concentration in the blood in the normal control group.
(2) повышенное состояние концентрации АСТ в крови, например, более чем в 1 раз, в 1,1 раза и более, в 1,2 раза и более, в 1,3 раза и более, в 1,4 раза и более, в 1,5 раза и более, в 1,6 раза и более, в 1,7 раза и более, в 1,8 раза и более, в 1,9 раза и более, в 2 раза и более, в 2,1 раза и более, в 2,2 раза и более, в 2,3 раза и более, в 2,4 раза и более, в 2,5 раза и более, в 2,6 раза и более, в 2,7 раза и более, в 2,8 раза и более, в 2,9 раза и более, в 3 раза и более, в 3,5 раза и более, в 4 раза и более, в 4,5 раза и более, в 5 раз и более, в 5,5 раз и более, в 6 раз и более, в 6,5 раз и более, в 7 раз и более, в 7,5 раз и более, в 8 раз и более, в 8,5 раз и более, в 9 раз и более, в 9,5 раз и более, или в 10 раз и более от концентрации АСТ в крови в нормальной контрольной группе.(2) an increased state of AST concentration in the blood, for example, more than 1 times, 1.1 times or more, 1.2 times or more, 1.3 times or more, 1.4 times or more, 1.5 times or more, 1.6 times or more, 1.7 times or more, 1.8 times or more, 1.9 times or more, 2 times or more, 2.1 times or more, 2.2 times or more, 2.3 times or more, 2.4 times or more, 2.5 times or more, 2.6 times or more, 2.7 times or more more, 2.8 times or more, 2.9 times or more, 3 times or more, 3.5 times or more, 4 times or more, 4.5 times or more, 5 times or more more, 5.5 times or more, 6 times or more, 6.5 times or more, 7 times or more, 7.5 times or more, 8 times or more, 8.5 times or more more, 9 times or more, 9.5 times or more, or 10 times or more of the AST concentration in the blood in the normal control group.
(3) пониженное состояние концентрации вторичных желчных кислот в слепой кишке, например, менее чем в 1 раз, в 0,9 раза и менее, в 0,8 раза и менее, в 0,7 раза и менее, в 0,6 раза и менее, в 0,5 раза и менее, в 0,4 раза и менее, в 0,3 раза и менее, в 0,2 раза и менее, или в 0,1 раза и менее от концентрации вторичных желчных кислот в слепой кишке в нормальной контрольной группе.(3) a reduced state of the concentration of secondary bile acids in the cecum, for example, less than 1 times, 0.9 times or less, 0.8 times or less, 0.7 times or less, 0.6 times or less, 0.5 times or less, 0.4 times or less, 0.3 times or less, 0.2 times or less, or 0.1 times or less of the concentration of secondary bile acids in the blind intestine in the normal control group.
(4) повышенное состояние экспрессии маркерного гена фиброза, например, сверхэкспрессирование более чем в 1 раз, в 1,1 раза и более, в 1,2 раза и более, в 1,3 раза и более, в 1,4 раза и более, в 1,5 раза и более, в 1,6 раза и более, в 1,7 раза и более, в 1,8 раза и более, в 1,9 раза и более, в 2 раза и более, в 2,1 раза и более, в 2,2 раза и более, в 2,3 раза и более, в 2,4 раза и более, в 2,5 раза и более, в 2,6 раза и более, в 2,7 раза и более, в 2,8 раза и более, в 2,9 раза и более, в 3 раза и более, в 3,5 раза и более, в 4 раза и более, в 4,5 раза и более, в 5 раз и более, в 5,5 раз и более, в 6 раз и более, в 6,5 раз и более, в 7 раз и более, в 7,5 раз и более, в 8 раз и более, в 8,5 раз и более, в 9 раз и более, в 9,5 раз и более, в 10 раз и более, в 11 раз и более, в 12 раз и более, в 13 раз и более, в 14 раз и более, в 15 раз и более, в 16 раз и более, в 17 раз и более, в 18 раз и более, в 19 раз и более, или в 20 раз и более по сравнению с экспрессией маркерного гена фиброза в нормальной контрольной группе, причем маркерный ген фиброза может представлять собой один или несколько, выбранных из группы, состоящей из Col1a1 и/или Timp1 и/или α-SMA.(4) increased fibrosis marker gene expression state, such as overexpression of more than 1-fold, 1.1-fold or more, 1.2-fold or more, 1.3-fold or more, 1.4-fold or more , 1.5 times or more, 1.6 times or more, 1.7 times or more, 1.8 times or more, 1.9 times or more, 2 times or more, 2, 1 time or more, 2.2 times or more, 2.3 times or more, 2.4 times or more, 2.5 times or more, 2.6 times or more, 2.7 times or more, 2.8 times or more, 2.9 times or more, 3 times or more, 3.5 times or more, 4 times or more, 4.5 times or more, 5 times or more, 5.5 times or more, 6 times or more, 6.5 times or more, 7 times or more, 7.5 times or more, 8 times or more, 8.5 times or more, 9 times or more, 9.5 times or more, 10 times or more, 11 times or more, 12 times or more, 13 times or more, 14 times or more, 15 times or more, 16 times or more, 17 times or more, 18 times or more, 19 times or more, or 20 times or more compared with the expression of the fibrosis marker gene in the normal control group, and the fibrosis marker gene may be one or more selected from the group consisting of Col1a1 and/or Timp1 and/or α-SMA.
(5) повышение состояние отношения массы печени к массе тела, например, более чем в 1 раз, в 1,1 раза и более, в 1,2 раза и более, в 1,3 раза и более, в 1,4 раза и более, в 1,5 раза и более, в 1,6 раза и более, в 1,7 раза и более, в 1,8 раза и более, в 1,9 раза и более, в 2 раза и более, в 2,1 раза и более, в 2,2 раза и более, в 2,3 раза и более, в 2,4 раза и более, в 2,5 раза и более, в 2,6 раза и более, в 2,7 раза и более, в 2,8 раза и более, в 2,9 раза и более или в 3 раза и более по сравнению с отношением массы печени к массе тела в нормальной контрольной группе.(5) increasing the ratio of liver weight to body weight, for example, more than 1 times, 1.1 times or more, 1.2 times or more, 1.3 times or more, 1.4 times and more, 1.5 times or more, 1.6 times or more, 1.7 times or more, 1.8 times or more, 1.9 times or more, 2 times or more, 2 ,1 times or more, 2.2 times or more, 2.3 times or more, 2.4 times or more, 2.5 times or more, 2.6 times or more, 2.7 times or more, 2.8 times or more, 2.9 times or more, or 3 times or more compared with the ratio of liver weight to body weight in the normal control group.
Под нормальной контрольной группой понимают контрольную группу, не имеющую поражения печени.The normal control group refers to the control group without liver damage.
Кроме того, поражение печени субъекта может представлять собой одно или более, выбранное из группы, состоящей из жировой печени, гепатита, фиброза печени и цирроза печени. Поражение печени может быть неалкогольным поражением печени. В частности, гепатит может представлять собой неалкогольный стеатогепатит, а жировая печень может представлять собой неалкогольную жировую печень. Неалкогольная жировая печень может представлять собой неалкогольную жировую печень без ожирения, неалкогольную жировую печень с ожирением или диабетическую неалкогольную жировую печень, но не ограничиваясь этим.In addition, the subject's liver lesion may be one or more selected from the group consisting of fatty liver, hepatitis, liver fibrosis, and cirrhosis. Liver damage may be non-alcoholic liver disease. In particular, hepatitis may be non-alcoholic steatohepatitis, and fatty liver may be non-alcoholic fatty liver. The non-alcoholic fatty liver may be, but is not limited to, non-alcoholic fatty liver, non-obese non-alcoholic fatty liver, or diabetic non-alcoholic fatty liver.
Композиция, в соответствии с настоящим изобретением, может быть введена субъекту с диабетом, в частности, композиция, в соответствии с настоящим изобретением, может предотвращать, снимать симптомы или оказывать терапевтическое воздействие на поражение печени независимо от инсулина, поэтому она может быть введена субъекту с диабетом 2 типа.The composition according to the present invention can be administered to a subject with diabetes, in particular, the composition according to the present invention can prevent, relieve symptoms or have a therapeutic effect on liver damage independent of insulin, so it can be administered to a subject with diabetes 2 types.
В настоящих примерах, в качестве результата, подтверждающего эффект терапевтического воздействия на поражение печени, например, при неалкогольной жировой печени, композиции, в соответствии с настоящим изобретением, терапевтический эффект, в частности, способность к снижению концентрации АЛТ в крови, снижению концентрации АСТ в крови, снижению отношения массы печени к массе тела и т.п., значительно превосходит терапевтический эффект, демонстрируемый на модели без диабета 2 типа, что означает, что композиция, в соответствии с настоящим изобретением, обладает превосходным терапевтическим эффектом, в частности, на субъектах с диабетом 2 типа.In the present examples, as a result confirming the effect of therapeutic action on liver damage, for example, non-alcoholic fatty liver, the composition according to the present invention, the therapeutic effect, in particular, the ability to reduce the concentration of ALT in the blood, reduce the concentration of AST in the blood , reduction of liver weight to body weight ratio, etc., significantly exceeds the therapeutic effect demonstrated in a model without type 2 diabetes, which means that the composition in accordance with the present invention has excellent therapeutic effect, in particular in subjects with type 2 diabetes.
В частности, терапевтический эффект у субъектов с диабетом 2 типа более значительный, и различия в инсулинорезистентности влияли на различия в чувствительности, связанной со снятием симптомов или терапевтическим воздействием Ruminococcus на поражение печени.In particular, the therapeutic effect in subjects with type 2 diabetes was greater, and differences in insulin resistance contributed to differences in sensitivity associated with symptom relief or therapeutic effects of Ruminococcus on liver damage.
Композиция, соответствии с настоящим изобретением, может быть введена субъекту с поражением печени для достижения одной или нескольких из следующих характеристик (1) - (5):The composition according to the present invention can be administered to a subject with liver damage to achieve one or more of the following characteristics (1) - (5):
(1) снижение концентрации АЛТ в крови, например, концентрация АЛТ в крови после введения композиции составляет менее 100%, 99% и менее, 98% и менее, 97% и менее, 96% и менее, 95% и менее, 94% и менее, 93% и менее, 92% и менее, 91% и менее, 90% и менее, 80% и менее, 70% и менее, 65% и менее, 60% и менее, 59% и менее, 58% и менее, 50% и менее, 45% и менее, или 40% и менее от 100% концентрации АЛТ в крови контрольной группы, не получавшей композицию (в одном из примеров (ФИГ. 1b, при совместном введении метионин-холин-дефицитной диеты (MCD) и штамма Ruminococcus faecis уровень АЛТ составил 39,21% по сравнению с введением только метионин-холин-дефицитной диеты).(1) a decrease in the concentration of ALT in the blood, for example, the concentration of ALT in the blood after administration of the composition is less than 100%, 99% or less, 98% or less, 97% or less, 96% or less, 95% or less, 94% and less, 93% and less, 92% and less, 91% and less, 90% and less, 80% and less, 70% and less, 65% and less, 60% and less, 59% and less, 58% and less, 50% or less, 45% or less, or 40% or less of 100% of the ALT concentration in the blood of the control group not receiving the composition (in one example (FIG. 1b, when co-administered with a methionine-choline-deficient diet (MCD) and Ruminococcus faecis strain, the ALT level was 39.21% compared to the administration of methionine-choline-deficient diet only).
(2) снижение концентрации АСТ в крови, например, концентрация АСТ в крови после введения композиции составляет менее 100%, 99% и менее, 98% и менее, 97% и менее, 96% и менее, 95% и менее, 94% и менее, 93% и менее, 92% и менее, 91% и менее, 90% и менее, 80% и менее, 70% и менее, 65% и менее, 64% и менее, 63% и менее, 62% и менее, 61% и менее, 60% и менее или 59% и менее от 100% концентрации АСТ в крови контрольной группы, не получавшей композицию (в одном из примеров (ФИГ. 1b, при совместном введении метионин-холин-дефицитной диеты и штамма Ruminococcus faecis уровень АСТ составил 57,52% по сравнению с введением только метионин-холин-дефицитной диеты).(2) a decrease in the concentration of AST in the blood, for example, the concentration of AST in the blood after administration of the composition is less than 100%, 99% or less, 98% or less, 97% or less, 96% or less, 95% or less, 94% and less, 93% and less, 92% and less, 91% and less, 90% and less, 80% and less, 70% and less, 65% and less, 64% and less, 63% and less, 62% and less, 61% or less, 60% or less, or 59% or less of 100% AST concentration in the blood of the control group that did not receive the composition (in one example (FIG. 1b, when co-administered a methionine-choline-deficient diet and strain Ruminococcus faecis, the AST level was 57.52% compared to the introduction of only methionine-choline-deficient diet).
(3) увеличение концентрации вторичных желчных кислот (например, вторичной желчной кислоты слепой кишки), например, концентрация вторичных желчных кислот при введении композиции составляет более 100%, 105% и более, 110% и более, 115% и более, 120% и более, 125% и более, 130% и более, 135% и более, 140% и более, 145% и более, 150% и более, 160% и более, 170% и более, 180% и более, 190% и более или 200% и более от 100% концентрации вторичных желчных кислот в контрольной группе, не получавшей композицию (в одном из примеров (ФИГ. 1i, при совместном введении метионин-холин-дефицитной диеты и штамма Ruminococcus faecis концентрация литохолевой кислоты составила 217,50%, а концентрация дезоксихолевой кислоты составила 143,37% по сравнению с введением только метионин-холин-дефицитной диеты).(3) increasing the concentration of secondary bile acids (for example, cecal secondary bile acid), for example, the concentration of secondary bile acids upon administration of the composition is more than 100%, 105% or more, 110% or more, 115% or more, 120% or more more, 125% or more, 130% or more, 135% or more, 140% or more, 145% or more, 150% or more, 160% or more, 170% or more, 180% or more, 190% or more more than or 200% or more of 100% of the concentration of secondary bile acids in the control group that did not receive the composition (in one example (FIG. 1i, when co-administered a methionine-choline-deficient diet and a strain of Ruminococcus faecis, the concentration of lithocholic acid was 217.50 %, and the concentration of deoxycholic acid was 143.37% compared to the introduction of only methionine-choline-deficient diet).
(4) снижение экспрессии фиброзного гена, например, при введении композиции экспрессия связанного с фиброзом гена, например, одного или нескольких из Col1a1, Timp1 и α-SMA, составляет менее 100%, 99% и менее, 98% и менее, 97% и менее, 96% и менее, 95% и менее, 94% и менее, 93% и менее, 92% и менее, 91% и менее, 90% и менее, 80% и менее, 78% и менее, 75% и менее, 70% и менее, 65% и менее или 60% и менее от 100% экспрессии в контрольной группе, не получавшей композицию (в одном из примеров ФИГ. 1h, при совместном введении метионин-холин-дефицитной диеты и штамма Ruminococcus faecis было достигнуто 90,60% экспрессии Col1a1, 77,17% экспрессии α-SMA и 58,50% экспрессии Timp1 по сравнению с введением только метионин-холин-дефицитной диеты).(4) reduction in fibrosis gene expression, for example, upon administration of the composition, the expression of a fibrosis-related gene, for example, one or more of Col1a1, Timp1 and α-SMA, is less than 100%, 99% or less, 98% or less, 97% and less, 96% and less, 95% and less, 94% and less, 93% and less, 92% and less, 91% and less, 90% and less, 80% and less, 78% and less, 75% or less, 70% or less, 65% or less, or 60% or less of 100% expression in the control group not receiving the composition (in one example, FIG. 1h, when co-administered with a methionine-choline-deficient diet and a strain of Ruminococcus faecis 90.60% of Col1a1 expression, 77.17% of α-SMA expression and 58.50% of Timp1 expression were achieved compared to the administration of methionine-choline-deficient diet alone).
(5) снижение отношения массы печени к массе тела, например, отношение массы печени к массе тела при введении композиции составляет менее 100%, 99% и менее, 98% и менее, 97% и менее, 96% и менее, 95% и менее, 94% и менее, 93% и менее, 92% и менее, 91% и менее, 90% и менее, 89% и менее, 88% и менее или 87% и менее от 100% отношения массы печени к массе тела в контрольной группе, не получавшей композицию (в одном из примеров (ФИГ. 1g, при совместном введении метионин-холин-дефицитной диеты и штамма Ruminococcus faecis было достигнуто 86,27% отношения массы печени к массе тела по сравнению с введением только метионин-холин-дефицитной диеты).(5) reducing the ratio of liver weight to body weight, for example, the ratio of liver weight to body weight upon administration of the composition is less than 100%, 99% or less, 98% or less, 97% or less, 96% or less, 95% or less less, 94% or less, 93% or less, 92% or less, 91% or less, 90% or less, 89% or less, 88% or less, or 87% or less of 100% liver weight to body weight ratio in the control group not receiving the composition (in one example (FIG. 1g), when co-administered with a methionine-choline-deficient diet and Ruminococcus faecis strain, 86.27% of the liver weight to body weight ratio was achieved compared with the administration of methionine-choline alone -deficiency diet).
К контрольной группе, не получавших композицию, относится не получавшая композицию группа с таким же заболеванием, но которой не вводили композицию в соответствии с настоящим изобретением.The non-composition-treated control group refers to a non-composition-treated group with the same disease but not administered the composition of the present invention.
Вторичная желчная кислота может представлять собой одно или несколько, выбранное из группы, состоящей из дезоксихолевой кислоты (DCA), литохолевой кислоты (LCA) и/или урсодезоксихолевой кислоты (UDCA).The secondary bile acid may be one or more selected from the group consisting of deoxycholic acid (DCA), lithocholic acid (LCA) and/or ursodeoxycholic acid (UDCA).
Фиброзный ген может представлять собой один или несколько, выбранных из группы, состоящей из Col1a1, Timp1 и α-SMA.The fibrotic gene may be one or more selected from the group consisting of Col1a1, Timp1 and α-SMA.
Композиция, в соответствии с настоящим изобретением, может быть введена субъекту с поражением печени и инсулинорезистентностью, например, субъекту с поражением печени на фоне диабета 2 типа, и может определять одну или несколько из следующих характеристик (1) - (3):The composition according to the present invention can be administered to a subject with liver damage and insulin resistance, for example, a subject with liver damage due to type 2 diabetes, and can determine one or more of the following characteristics (1) - (3):
(1) коэффициент снижения уровня АЛТ более чем в 1 раз, в 1,1 раза и более, в 1,2 раза и более, в 1,3 раза и более, в 1,4 раза и более, в 1,5 раза и более, в 1,6 раза и более, в 1,7 раза и более, в 1,8 раза и более, в 1,9 раза и более, в 2 раза и более, в 2,1 раза и более, в 2,2 раза и более, в 2,3 раза и более, в 2,4 раза и более, в 2,5 раза и более или в 2,6 раза и более по сравнению с контрольной группой без инсулинорезистентности,(1) reduction rate of ALT level by more than 1 times, 1.1 times or more, 1.2 times or more, 1.3 times or more, 1.4 times or more, 1.5 times or more, 1.6 times or more, 1.7 times or more, 1.8 times or more, 1.9 times or more, 2 times or more, 2.1 times or more, 2.2 times or more, 2.3 times or more, 2.4 times or more, 2.5 times or more, or 2.6 times or more compared to the control group without insulin resistance,
(2) коэффициент снижения уровня АСТ более чем в 1 раз, в 1,1 раза и более, в 1,2 раза и более, в 1,3 раза и более, в 1,4 раза и более, в 1,5 раза и более, в 1,6 раза и более, в 1,7 раза и более, в 1,8 раза и более, в 1,9 раза и более, в 2 раза и более, в 2,1 раза и более или в 2,2 раза и более по сравнению с контрольной группой без инсулинорезистентности,(2) reduction rate of AST level by more than 1 time, 1.1 times or more, 1.2 times or more, 1.3 times or more, 1.4 times or more, 1.5 times or more, 1.6 times or more, 1.7 times or more, 1.8 times or more, 1.9 times or more, 2 times or more, 2.1 times or more, or 2.2 times or more compared to the control group without insulin resistance,
(3) коэффициент снижения отношения массы печени к массе тела более чем в 1 раз, в 1,1 раза и более, в 1,2 раза и более, в 1,3 раза и более, в 1,4 раза и более, в 1,5 раза и более, в 2 раза и более, в 3 раза и более, в 4 раза и более, в 5 раз и более, в 6 раз и более, в 7 раз и более, в 8 раз и более, в 9 раз и более или в 10 раз и более по сравнению с контрольной группой без инсулинорезистентности.(3) the coefficient of reduction in the ratio of liver weight to body weight by more than 1 times, 1.1 times or more, 1.2 times or more, 1.3 times or more, 1.4 times or more, 1.5 times or more, 2 times or more, 3 times or more, 4 times or more, 5 times or more, 6 times or more, 7 times or more, 8 times or more, 9 times or more or 10 times or more compared to the control group without insulin resistance.
В настоящем изобретении термин «действующее вещество» означает вещество, способное демонстрировать требуемую активность самостоятельно или вместе с носителем, не обладающим активностью само по себе.In the present invention, the term "active substance" means a substance capable of exhibiting the required activity alone or together with a carrier that is not active by itself.
В настоящем изобретении термин «предотвращение» означает подавление или задержку проявления болезни, расстройства или заболевания. Если проявление болезни, расстройства или заболевания подавляют или задерживают в течение предварительно заданного периода, предотвращение можно считать осуществленным.In the present invention, the term “prevention” means suppressing or delaying the manifestation of a disease, disorder or disease. If the manifestation of the disease, disorder or disease is suppressed or delayed for a predetermined period, prevention can be considered to have been achieved.
В настоящем изобретении термин «терапевтическое воздействие» означает частичное или полное снятие симптомов, улучшение, облегчение, подавление или задержку развития определенной болезни, расстройства и/или заболевания или симптома, соответствующего заболеванию, а также снижение тяжести или частоты проявления одного или нескольких симптомов или характеристик.As used herein, the term “therapeutic effect” means the partial or complete relief of symptoms, improvement, alleviation, suppression or delay of the development of a particular disease, disorder and/or disease or symptom corresponding to a disease, as well as a reduction in the severity or frequency of one or more symptoms or characteristics .
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать одно или несколько действующих веществ, проявляющих такую же или подобную функцию, в дополнение к действующему веществу.The pharmaceutical composition according to the present invention may further contain one or more active substances exhibiting the same or similar function in addition to the active substance.
Кроме того, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть приготовлена в форме единичной дозы или приготовлена помещением в контейнере для нескольких доз, объединяя с использованием фармацевтически приемлемого носителя, в соответствии со способом, который может быть точно осуществлен специалистами в области, к которой относится настоящее изобретение. В настоящем изобретении термин «носитель» означает соединение, способствующее введению соединения в клетку или ткань, а термин «фармацевтически приемлемый» означает композицию, являющуюся физиологически приемлемой и при введении человеку, как правило, не вызывающую аллергической реакции, в частности, желудочно-кишечного расстройства, головокружения или иных подобных явлений.Moreover, the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared in unit dose form or prepared by placing it in a multi-dose container, combined using a pharmaceutically acceptable carrier, in accordance with a method that can be accurately carried out by specialists in the field to which the present invention relates . In the present invention, the term "carrier" means a compound that facilitates the introduction of the compound into a cell or tissue, and the term "pharmaceutically acceptable" means a composition that is physiologically acceptable and, when administered to a person, generally does not cause an allergic reaction, in particular gastrointestinal upset. , dizziness or other similar phenomena.
Фармацевтически приемлемый носитель обычно используется в составе лекарственной формы и представляет собой, в частности, лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмал, аравийскую камедь, фосфат кальция, альгинат, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, сироп, метилцеллюлозу, метилгидроксилбензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, минеральное масло или т.п., но не ограничиваясь этим.A pharmaceutically acceptable carrier is typically used in the dosage form and includes, but is not limited to, lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, gum acacia, calcium phosphate, alginate, gelatin, calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methylcellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, mineral oil or the like, but not limited to.
Кроме того, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать добавку, в частности, наполнитель, антикоагулянт, смазывающее вещество, смачивающий агент, ароматизатор, эмульгатор, консервант и т.п., в дополнение к ингредиентам. В настоящем изобретении содержание добавки в фармацевтической композиции, по существу, не ограничено и может быть соответствующим образом отрегулировано в пределах диапазона содержания, используемого в обычном составе лекарственной формы.Moreover, the pharmaceutical composition according to the present invention may further contain an additive, such as an excipient, an anticoagulant, a lubricant, a wetting agent, a flavoring agent, an emulsifier, a preservative and the like, in addition to the ingredients. In the present invention, the content of the additive in the pharmaceutical composition is not substantially limited and can be suitably adjusted within the content range used in the conventional dosage form formulation.
Кроме того, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть изготовлена в пероральной форме. Неограничивающие примеры пероральной формы могут содержать таблетки, пастилки, рассасывающиеся таблетки, водные суспензии, масляные суспензии, порошок, гранулы, эмульсию, твердые капсулы, мягкие капсулы, сироп или эликсиры, или иные подобные варианты. Для получения фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению для перорального применения можно использовать связующее вещество, в частности, лактозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмал, амилопектин, целлюлозу или желатин; эксципиент, в частности, дикальцийфосфат; агент для улучшения распадаемости, в частности, кукурузный крахмал или крахмал батата; допускается использование стеарата магния, стеарата кальция, стеарилфумарата натрия и т.п., а также подсластителя, ароматизатора, сиропа и т.п.. Кроме того, в случае капсул в дополнение к вышеупомянутым веществам может быть дополнительно использован жидкий носитель, в частности, жирное масло и т.п..In addition, the pharmaceutical composition according to the present invention can be prepared in oral form. Non-limiting examples of the oral form may include tablets, lozenges, disintegrating tablets, aqueous suspensions, oily suspensions, powder, granules, emulsion, hard capsules, soft capsules, syrup or elixirs, or other similar options. To prepare the pharmaceutical composition of the present invention for oral administration, a binder, in particular lactose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, amylopectin, cellulose or gelatin, can be used; an excipient, in particular dicalcium phosphate; a disintegrating agent, in particular corn starch or sweet potato starch; the use of magnesium stearate, calcium stearate, sodium stearyl fumarate, etc., as well as a sweetener, flavoring agent, syrup, etc., may be used. Moreover, in the case of capsules, in addition to the above-mentioned substances, a liquid carrier may be additionally used, in particular fatty oil, etc..
В настоящем изобретении термин «эксципиент» означает любое вещество, не являющееся терапевтическим средством и используемое в качестве носителя или среды для доставки терапевтического средства или добавляемое в фармацевтическую композицию. Таким образом, это может улучшить обработку и характеристики хранения или позволить и облегчить формирование единиц дозы композиции.In the present invention, the term "excipient" means any substance, other than a therapeutic agent, used as a carrier or medium for the delivery of a therapeutic agent or added to a pharmaceutical composition. Thus, it may improve processing and storage characteristics or allow and facilitate the formation of dosage units of the composition.
Фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно использовать в различных формах, в частности, пероральных формах, включая жидкость, суспензию, порошок, гранулы, таблетки, капсулы, пилюли, экстракт, эмульсию, сироп, аэрозоль и другие подобные формы, а также инъекциях стерильного инъекционного раствора, и можно вводить перорально или различными способами, включая внутривенное, интраперитонеальное, подкожное, ректальное, местное введение и другие подобные варианты. В настоящем изобретении термин «пероральное введение» означает, что активное вещество вводится в желудочно-кишечный тракт для всасывания, то есть подготовки вещества к усвоению.The pharmaceutical composition according to the present invention can be used in various forms, in particular oral forms, including liquid, suspension, powder, granules, tablets, capsules, pills, extract, emulsion, syrup, aerosol and other similar forms, as well as injection of sterile injection solution , and can be administered orally or by various routes, including intravenous, intraperitoneal, subcutaneous, rectal, topical and other similar options. In the present invention, the term “oral administration” means that the active substance is introduced into the gastrointestinal tract for absorption, that is, to prepare the substance for absorption.
Предпочтительная дозировка фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению может иметь различные диапазоны в зависимости от состояния пациента и массы тела, возраста, пола, состояния здоровья, особенностей диетической конституции, свойств состава, степени развития заболевания, времени введения композиции, способа введения, периода или интервала введения, скорости выведения и лекарственной формы, и может быть соответствующим образом подобрана специалистами в данной области.The preferred dosage of the pharmaceutical composition according to the present invention may have different ranges depending on the patient's condition and body weight, age, gender, health status, dietary characteristics, properties of the composition, degree of disease, time of administration of the composition, route of administration, period or interval of administration, elimination rate and dosage form, and can be adjusted accordingly by those skilled in the art.
В настоящем изобретении термин «эффективная доза фармацевтической композиции» означает количество композиции активного вещества, достаточного для терапевтического воздействия на определенный симптом. Оно может варьироваться в зависимости от способа приготовления, способа введения, времени и/или пути введения фармацевтической композиции, а также может варьироваться в зависимости от различных факторов, включая тип или степень реакции, которая должна быть достигнута посредством введения фармацевтической композиции, тип, возраст, масса тела, общее состояние здоровья, симптомы или степень развития заболевания, пол, диету, выделения субъекта, которому вводится композиция, а также компоненты лекарств или других композиций, одновременно или совместно вводимых соответствующему субъекту, а также от иных подобных факторов, хорошо известных в фармацевтической отрасли; специалисты в данной области могут легко определить и назначить эффективную дозу для необходимого терапевтического воздействия.In the present invention, the term "effective dose of a pharmaceutical composition" means an amount of an active substance composition sufficient to provide a therapeutic effect on a particular symptom. It may vary depending on the method of preparation, route of administration, time and/or route of administration of the pharmaceutical composition, and may also vary depending on various factors, including the type or degree of reaction to be achieved by administration of the pharmaceutical composition, type, age, body weight, general health, symptoms or severity of disease, gender, diet, secretions of the subject to whom the composition is administered, as well as components of drugs or other compositions simultaneously or concomitantly administered to the subject, as well as other similar factors well known in the pharmaceutical art industries; those skilled in the art can easily determine and prescribe the effective dose for the desired therapeutic effect.
Фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно вводить один раз в день, и можно вводить, разделив на несколько введений. Композицию можно вводить в виде отдельного терапевтического средства или в комбинации с другими терапевтическими средствами, а также можно вводить последовательно или одновременно с обычным терапевтическим средством. Принимая во внимание все вышеперечисленные факторы, ее можно вводить в количестве, позволяющем получить максимальный эффект при минимальном количестве без побочных эффектов.The pharmaceutical composition according to the present invention can be administered once a day, and can be administered in divided doses. The composition may be administered as a single therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with a conventional therapeutic agent. Taking into account all the above factors, it can be administered in an amount that allows you to get maximum effect in minimum amount without side effects.
Например, композиция согласно настоящему изобретению может быть введена в суточной дозе, в частности, от 0,001 до 10000 мг, от 0,001 до 5000 мг, от 0,001 до 1000 мг, от 0,001 до 500 мг, от 0,001 до 300 мг, от 0,001 до 100 мг, от 0,001 до 50 мг, от 0,001 до 30 мг, от 0,001 до 10 мг, от 0,001 до 5 мг, от 0,001 до 1 мг, от 0,001 до 0,5 мг, 0,001 до 0,1 мг, от 0,001 до 0,05 мг, от 0,001 до 0,01 мг, от 0,01 до 10 000 мг, от 0,01 до 5000 мг, от 0,01 до 1000 мг, от 0,01 до 500 мг, от 0,01 до 300 мг, от 0,01 до 100 мг, от 0,01 до 50 мг, от 0,01 до 30 мг, от 0,01 до 10 мг, от 0,01 до 5 мг, от 0,01 до 1 мг, от 0,01 до 0,5 мг, от 0,01 до 0,1 мг, от 0,01 до 0,05 мг, от 0,1 до 10000 мг, от 0,1 до 5000 мг, от 0,1 до 1000 мг, от 0,1 до 500 мг, от 0,1 до 300 мг, от 0,1 до 200 мг, от 0,1 до 100 мг, от 0,1 до 50 мг, от 0,1 до 30 мг, от 0,1 до 10 мг, от 0,1 до 5 мг, от 0,1 до 1 мг, от 0,1 до 0,5 мг, от 1 до 10000 мг, от 1 до 5000 мг, от 1 до 1000 мг, от 1 до 500 мг, от 1 до 300 мг, от 1 до 200 мг, от 1 до 100 мг, от 1 до 50 мг, от 1 до 10 мг, от 1 до 5 мг, от 10 до 10000 мг, от 10 до 5000 мг, от 10 до 1000 мг, от 10 до 500 мг, от 10 до 300 мг, от 10 до 200 мг, от 10 до 100 мг, от 10 до 50 мг, от 10 до 40 мг, от 10 до 30 мг, от 10 до 20 мг, от 100 до 10000 мг, от 100 до 5000 мг, от 100 до 1000 мг, от 100 до 500 мг, от 100 до 300 мг или от 100 до 200 мг на 1 кг массы тела, не ограничиваясь этим. В одном из примеров суточная доза композиции согласно настоящему изобретению может составлять от 0,001 до 10 г/день, от 0,001 до 5 г/день, от 0,01 до 10 г/день или от 0,01 до 5 г/день для перорального приема взрослым пациентом. Кроме того, общая суточная доза может быть разделена и при необходимости вводиться непрерывно или дискретно.For example, the composition according to the present invention can be administered in a daily dose, in particular, from 0.001 to 10000 mg, from 0.001 to 5000 mg, from 0.001 to 1000 mg, from 0.001 to 500 mg, from 0.001 to 300 mg, from 0.001 to 100 mg, from 0.001 to 50 mg, from 0.001 to 30 mg, from 0.001 to 10 mg, from 0.001 to 5 mg, from 0.001 to 1 mg, from 0.001 to 0.5 mg, 0.001 to 0.1 mg, from 0.001 to 0.05 mg, from 0.001 to 0.01 mg, from 0.01 to 10,000 mg, from 0.01 to 5000 mg, from 0.01 to 1000 mg, from 0.01 to 500 mg, from 0.01 up to 300 mg, from 0.01 to 100 mg, from 0.01 to 50 mg, from 0.01 to 30 mg, from 0.01 to 10 mg, from 0.01 to 5 mg, from 0.01 to 1 mg, from 0.01 to 0.5 mg, from 0.01 to 0.1 mg, from 0.01 to 0.05 mg, from 0.1 to 10000 mg, from 0.1 to 5000 mg, from 0 ,1 to 1000 mg, from 0.1 to 500 mg, from 0.1 to 300 mg, from 0.1 to 200 mg, from 0.1 to 100 mg, from 0.1 to 50 mg, from 0.1 up to 30 mg, from 0.1 to 10 mg, from 0.1 to 5 mg, from 0.1 to 1 mg, from 0.1 to 0.5 mg, from 1 to 10000 mg, from 1 to 5000 mg, from 1 to 1000 mg, from 1 to 500 mg, from 1 to 300 mg, from 1 to 200 mg, from 1 to 100 mg, from 1 to 50 mg, from 1 to 10 mg, from 1 to 5 mg, from 10 up to 10000 mg, from 10 to 5000 mg, from 10 to 1000 mg, from 10 to 500 mg, from 10 to 300 mg, from 10 to 200 mg, from 10 to 100 mg, from 10 to 50 mg, from 10 to 40 mg, from 10 to 30 mg, from 10 to 20 mg, from 100 to 10000 mg, from 100 to 5000 mg, from 100 to 1000 mg, from 100 to 500 mg, from 100 to 300 mg or from 100 to 200 mg per 1 kg body weight, not limited to this. In one example, the daily dosage of the composition of the present invention may be 0.001 to 10 g/day, 0.001 to 5 g/day, 0.01 to 10 g/day, or 0.01 to 5 g/day for oral administration. adult patient. In addition, the total daily dose can be divided and, if necessary, administered continuously or discretely.
Композиция согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать защитный агент для сублимационной сушки. Защитный агент для сублимационной сушки может представлять собой один или несколько выбранных из группы, состоящей из моносахаридов, дисахаридов, полисахаридов, углеводов, минералов, аминокислот, сахарозы, фосфата кальция, аргинина, хлорида натрия, фруктозы, дигидрофосфата калия, гидроортофосфата калия и трегалозы.The composition of the present invention may further comprise a freeze drying protecting agent. The freeze-drying protecting agent may be one or more selected from the group consisting of monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, carbohydrates, minerals, amino acids, sucrose, calcium phosphate, arginine, sodium chloride, fructose, potassium dihydrogen phosphate, potassium hydrogen orthophosphate and trehalose.
Сахароза может быть добавлена к защитному агенту для сублимационной сушки в количестве от 100 до 300 г/л, от 100 до 250 г/л, от 100 до 200 г/л, от 150 до 300 г/л, от 150 до 250 г/л, от 150 до 200 г/л, от 200 до 300 г/л или от 200 до 250 г/л, и в одном из примеров в количестве 200 г/л.Sucrose can be added to the freeze-drying protecting agent in an amount of 100 to 300 g/L, 100 to 250 g/L, 100 to 200 g/L, 150 to 300 g/L, 150 to 250 g/L l, from 150 to 200 g/l, from 200 to 300 g/l or from 200 to 250 g/l, and in one example in the amount of 200 g/l.
Фосфат кальция может быть добавлен к защитному агенту для сублимационной сушки в концентрации от 5 до 20 г/л, от 5 до 15 г/л, от 5 до 12 г/л, от 5 до 11 г/л, от 7 до 20 г/л, от 7 до 15 г/л, от 7 до 12 г/л, от 7 до 11 г/л, от 10 до 20 г/л, от 10 до 15 г/л, от 10 до 12 г/л или от 10 до 11 г/л, и в одном из примеров в концентрации 10,5 г/л.Calcium phosphate can be added to the freeze-drying protective agent at a concentration of 5 to 20 g/L, 5 to 15 g/L, 5 to 12 g/L, 5 to 11 g/L, 7 to 20 g /l, from 7 to 15 g/l, from 7 to 12 g/l, from 7 to 11 g/l, from 10 to 20 g/l, from 10 to 15 g/l, from 10 to 12 g/l or from 10 to 11 g/l, and in one example at a concentration of 10.5 g/l.
Аминокислота может быть добавлена к защитному агенту для сублимационной сушки в концентрации от 1 до 10 г/л, от 1 до 8 г/л, от 1 до 6 г/л, от 1 до 5 г/л, от 3 до 10 г/л, от 3 до 8 г/л, от 3 до 6 г/л, от 3 до 5 г/л, от 4 до 10 г/л, от 4 до 8 г/л, от 4 до 6 г/л или от 4 до 5 г/л, и в одном из примеров в концентрации 4 г/л.The amino acid can be added to the freeze-drying protective agent at a concentration of 1 to 10 g/L, 1 to 8 g/L, 1 to 6 g/L, 1 to 5 g/L, 3 to 10 g/L l, from 3 to 8 g/l, from 3 to 6 g/l, from 3 to 5 g/l, from 4 to 10 g/l, from 4 to 8 g/l, from 4 to 6 g/l or from 4 to 5 g/l, and in one example at a concentration of 4 g/l.
Хлорид натрия может быть добавлен к защитному агенту для сублимационной сушки в концентрации от 0,1 до 5 г/л, от 0,1 до 3 г/л, от 0,1 до 1 г/л, от 0,5 до 5 г/л, от 0,5 до 3 г/л или от 0,5 до 1 г/л, и в одном из примеров в концентрации 0,8 г/л.Sodium chloride can be added to the freeze-drying protecting agent at a concentration of 0.1 to 5 g/L, 0.1 to 3 g/L, 0.1 to 1 g/L, 0.5 to 5 g /l, from 0.5 to 3 g/l or from 0.5 to 1 g/l, and in one example at a concentration of 0.8 g/l.
Штамм Ruminococcus spp. согласно настоящему изобретению может представлять собой Ruminococcus faecis. В качестве одного примера, штамм Ruminococcus spp. может представлять собой Ruminococcus faecis с учетным номером KCTC 5757. В настоящем описании Ruminococcus faecis с учетным номером KCTC 5757 может представлять собой Ruminococcus faecis KBL1028.Strain Ruminococcus spp. according to the present invention may be Ruminococcus faecis . As one example, a strain of Ruminococcus spp. may be Ruminococcus faecis with accession number KCTC 5757. In the present description, Ruminococcus faecis with accession number KCTC 5757 may be Ruminococcus faecis KBL1028.
Штамм может продолжать расти после 8 часов культивирования, 9 часов культивирования, 10 часов культивирования, 11 часов культивирования, 12 часов культивирования, 13 часов культивирования или 14 часов культивирования в питательной среде с концентрацией источника углерода от 5 до 30% (м/об), концентрацией источника азота от 50 до 90% (м/об), концентрацией минералов от 5 до 15% (м/об) и концентрацией аминокислот от 0,1 до 10% (м/об).The strain can continue to grow after 8 hours of cultivation, 9 hours of cultivation, 10 hours of cultivation, 11 hours of cultivation, 12 hours of cultivation, 13 hours of cultivation or 14 hours of cultivation in a nutrient medium with a carbon source concentration of 5 to 30% (w/v), nitrogen source concentration from 50 to 90% (w/v), mineral concentration from 5 to 15% (w/v) and amino acid concentration from 0.1 to 10% (w/v).
Штамм может иметь высокую эффективность культивирования в среде FMK1028, состав которой соответствует таблице 3. Например, штамм может характеризоваться тем, что поглощение после культивирования в среде FMK1028, состав которой соответствует таблице 3, превышает поглощение после культивирования в одной или нескольких выбранных из группы, состоящей из среды YBHI, среды GAM, среды MRS, среды BL и среды RCM. В одном из примеров количество жизнеспособных клеток штамма на единицу объема после 14 часов культивирования в среде FMK1028, состав которой соответствует таблице 3, в 10 раз и более, в 50 раз и более, в 100 раз и более, в 150 раз и более, в 200 раз и более, в 250 раз и более, в 300 раз и более, в 350 раз и более, в 400 раз и более, в 450 раз и более, в 500 раз и более, в 550 раз и более или в 600 раз и более является выше, чем после культивирования в среде YBHI.The strain may have a high cultivation efficiency in the FMK1028 medium, the composition of which corresponds to Table 3. For example, the strain may be characterized in that the uptake after cultivation in the FMK1028 medium, the composition of which corresponds to Table 3, exceeds the uptake after cultivation in one or more selected from the group consisting from YBHI environment, GAM environment, MRS environment, BL environment and RCM environment. In one example, the number of viable strain cells per unit volume after 14 hours of cultivation in FMK1028 medium, the composition of which corresponds to Table 3, is 10 times or more, 50 times or more, 100 times or more, 150 times or more, 200 times or more, 250 times or more, 300 times or more, 350 times or more, 400 times or more, 450 times or more, 500 times or more, 550 times or more or 600 times and more is higher than after cultivation in YBHI medium.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции для культивирования штамма Ruminococcus spp., содержащей источник углерода и источник азота. Источник углерода может представлять собой один или несколько выбранных из группы, состоящей из глюкозы, сахарозы, фруктозы, лактозы, мальтозы, патоки и галактозы. Источник азота может представлять собой один или несколько выбранных из группы, состоящей из дрожжевого экстракта, соевого пептона, обезжиренного молока, триптона, казаминовых кислот, картофельного пептона, горохового пептона, пшеничного пептона, бобового пептона, папаинового соевого пептона, люпинового пептона.Another embodiment of the present invention relates to a composition for cultivating a strain of Ruminococcus spp. containing a carbon source and a nitrogen source. The carbon source may be one or more selected from the group consisting of glucose, sucrose, fructose, lactose, maltose, molasses and galactose. The nitrogen source may be one or more selected from the group consisting of yeast extract, soy peptone, skim milk, tryptone, casamino acids, potato peptone, pea peptone, wheat peptone, bean peptone, papain soy peptone, lupine peptone.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции для культивирования штамма Ruminococcus spp., содержащей источник углерода и источник азота. Источник углерода может иметь концентрацию от 5 до 30% (м/об), а источник азота может иметь концентрацию от 50 до 90% (м/об). Штамм Ruminococcus spp. описан выше.Another embodiment of the present invention relates to a composition for cultivating a strain of Ruminococcus spp. containing a carbon source and a nitrogen source. The carbon source may have a concentration from 5 to 30% (w/v), and the nitrogen source may have a concentration from 50 to 90% (w/v). Strain Ruminococcus spp. described above.
Источник углерода может представлять собой один или несколько выбранных из группы, состоящей из глюкозы, сахарозы, фруктозы, лактозы, мальтозы, патоки и галактозы.The carbon source may be one or more selected from the group consisting of glucose, sucrose, fructose, lactose, maltose, molasses and galactose.
Источник азота может представлять собой один или несколько выбранных из группы, состоящей из дрожжевого экстракта, соевого пептона, обезжиренного молока, триптона, казаминовых кислот, картофельного пептона, горохового пептона, пшеничного пептона, бобового пептона, папаинового соевого пептона, люпинового пептона.The nitrogen source may be one or more selected from the group consisting of yeast extract, soy peptone, skim milk, tryptone, casamino acids, potato peptone, pea peptone, wheat peptone, bean peptone, papain soy peptone, lupine peptone.
Композиция для культивирования штамма Ruminococcus spp. может способствовать росту после 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов, 13 часов или 14 часов культивирования штамма Ruminococcus spp.Composition for cultivating Ruminococcus spp. can promote growth after 8 hours, 9 hours, 10 hours, 11 hours, 12 hours, 13 hours or 14 hours of cultivation of the Ruminococcus spp strain.
Композиция для культивирования штамма Ruminococcus spp. может дополнительно содержать одно или несколько выбранных из группы, состоящей из минералов, аминокислот, витаминов, нуклеиновых кислот и неорганических солей.Composition for cultivating Ruminococcus spp. may further contain one or more selected from the group consisting of minerals, amino acids, vitamins, nucleic acids and inorganic salts.
Минерал может представлять собой один или несколько выбранных из группы, состоящей из ацетата натрия, хлорида натрия, дигидрофосфата натрия, гидроортофосфата натрия, хлорида калия, сульфата магния и сульфата марганца.The mineral may be one or more selected from the group consisting of sodium acetate, sodium chloride, sodium dihydrogen phosphate, sodium hydrogen phosphate, potassium chloride, magnesium sulfate and manganese sulfate.
Аминокислота может представлять собой L-цистеин, L-лейцин, L-изолейцин, L-валин, L-триптофан, L-треонин, L-фенилаланин и L-метионин.The amino acid may be L-cysteine, L-leucine, L-isoleucine, L-valine, L-tryptophan, L-threonine, L-phenylalanine and L-methionine.
Концентрация источника углерода может составлять от 5 до 30% (м/об), концентрация источника азота может составлять от 50 до 90% (м/об), концентрация минерала может составлять от 5 до 15% (м/об), а концентрация аминокислоты может составлять от 0,1 до 10% (м/об).The carbon source concentration may be from 5 to 30% (w/v), the nitrogen source concentration may be from 50 to 90% (w/v), the mineral concentration may be from 5 to 15% (w/v), and the amino acid concentration may be from 5 to 15% (w/v). can range from 0.1 to 10% (w/v).
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу культивирования штамма Ruminococcus spp., предусматривающему инокуляцию штамма Ruminococcus spp. в композицию для культивирования штамма Ruminococcus spp., в соответствии с настоящим изобретением, и его культивирование.Another embodiment of the present invention relates to a method for cultivating a strain of Ruminococcus spp. , which involves inoculation of a strain of Ruminococcus spp. into a composition for cultivating a strain of Ruminococcus spp., in accordance with the present invention, and culturing it.
Способ культивирования может способствовать росту после 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов, 13 часов или 14 часов культивирования штамма Ruminococcus spp.The cultivation method can promote growth after 8 hours, 9 hours, 10 hours, 11 hours, 12 hours, 13 hours or 14 hours of cultivation of the Ruminococcus spp strain.
Культивирование может представлять собой статическое культивирование, культивирование клеток с периодической подпиткой или периодическое культивирование, но не ограничиваясь этим.The culture may be, but is not limited to, static culture, fed-batch cell culture, or batch culture.
Следующий вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу предотвращения, снятия симптомов или терапевтического воздействия на поражение печени, содержащему введение композиции для предотвращения, снятия симптомов или терапевтического воздействия на поражение печени в соответствии с настоящим изобретением нуждающемуся в этом субъекту. Композиция может содержать штамм Ruminococcus spp. Композиция для предотвращения, снятия симптомов или терапевтического воздействия на поражение печени, штамм Ruminococcus spp. и т.п. раскрыты выше. Субъект представляет собой субъект с поражением печени, описанный выше. Например, субъект с поражением печени может представлять собой субъекта с инсулинорезистентностью, и в одном из примеров он может представлять собой субъекта с диабетом, в частности, субъекта с диабетом 2 типа.Another embodiment of the present invention relates to a method for preventing, relieving symptoms or treating liver damage, comprising administering a composition for preventing, relieving symptoms or treating liver damage in accordance with the present invention to a subject in need thereof. The composition may contain a strain of Ruminococcus spp . Composition for the prevention, relief of symptoms or therapeutic effects on liver damage, strain Ruminococcus spp. and so on. disclosed above. The subject is the liver lesion subject described above. For example, a subject with liver damage may be a subject with insulin resistance, and in one example, may be a subject with diabetes, in particular a subject with type 2 diabetes.
ПОЛЕЗНЫЕ ЭФФЕКТЫ ИЗОБРЕТЕНИЯUSEFUL EFFECTS OF THE INVENTION
Фармацевтическая композиция для предотвращения или терапевтического воздействия согласно настоящему изобретению может быть эффективно использована для лечения поражения печени, например, неалкогольной жировой болезни печени.The pharmaceutical composition for prevention or therapeutic effect according to the present invention can be effectively used for the treatment of liver damage, such as non-alcoholic fatty liver disease.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS
На ФИГ. 1a изображен процесс экспериментального исследования эффективности терапевтического воздействия на поражение печени путем введения Ruminococcus faecis в животной модели поражения печени, вызванного метионин-холин-дефицитной диетой.In FIG. 1a depicts the process of an experimental study of the effectiveness of therapeutic effects on liver damage by administering Ruminococcus faecis in an animal model of liver damage caused by a methionine-choline-deficient diet.
На ФИГ. 1b изображен результат измерения АЛТ и АСТ после введения Ruminococcus faecis в животной модели поражения печени, вызванного метионин-холин-дефицитной диетой.In FIG. 1b shows the result of measuring ALT and AST after administration of Ruminococcus faecis in an animal model of liver injury induced by a methionine-choline-deficient diet.
На ФИГ. 1c - ФИГ. 1e показано, что по гистологическая тяжесть поражения печени, вызванного метионин-холин-дефицитной диетой, значительно уменьшается у мышей, получавших Ruminococcus faecis, иIn FIG. 1c - FIG. 1e shows that the histological severity of liver damage caused by a methionine-choline-deficient diet is significantly reduced in mice fed Ruminococcus faecis , and
На ФИГ. 1c показано улучшение состояния ткани печени после введения Ruminococcus faecis, определенное при окрашивании гематоксилин-эозином (вверху) и красителем Sirius red (внизу).In FIG. Figure 1c shows the improvement in liver tissue after administration of Ruminococcus faecis, as determined by hematoxylin-eosin (top) and Sirius red (bottom) staining.
На ФИГ. 1d количественно показано снижение патологии при введении Ruminococcus faecis в виде баллов активности НАЖБП.In FIG. Figure 1d quantifies the reduction in pathology with the administration of Ruminococcus faecis in the form of NAFLD activity scores.
На ФИГ. 1e показано распределение коллагена в печени, улучшенное по результатам приема Ruminococcus faecis.In FIG. Figure 1e shows the distribution of collagen in the liver improved by Ruminococcus faecis .
На ФИГ. 1f показано изменение массы тела при метионин-холин-дефицитной диете.In FIG. Figure 1f shows the change in body weight with a methionine-choline-deficient diet.
На ФИГ. 1g показано отношение массы печени к массе тела при введении Ruminococcus faecis (метионин-холин-дефицитная диета + R.faecis) по сравнению с контрольной группой мышей (метионин-холин-дефицитная диета).In FIG. 1g shows the ratio of liver weight to body weight when administered Ruminococcus faecis (methionine-choline-deficient diet + R. faecis ) compared to the control group of mice (methionine-choline-deficient diet).
На ФИГ. 1h показано, что маркеры образования и распространения фиброза уменьшаются при введении Ruminococcus faecis.In FIG. 1h shows that markers of fibrosis formation and spread are reduced with the introduction of Ruminococcus faecis .
На ФИГ. 1i показано, что местный уровень вторичных желчных кислот (дезоксихолевой и литохолевой кислоты), сниженный метионин-холин-дефицитной диетой, повышается при применении Ruminococcus faecis.In FIG. 1i shows that local levels of secondary bile acids (deoxycholic and lithocholic acid), reduced by a methionine-choline-deficient diet, are increased by Ruminococcus faecis .
На ФИГ. 2a изображен процесс экспериментального исследования эффективности терапевтического воздействия на поражение печени путем введения Ruminococcus faecis в животной модели поражения печени, вызванного диетой с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот. In FIG. 2a depicts an experimental study of the effectiveness of therapeutic interventions on liver damage by administration of Ruminococcus faecis in an animal model of liver damage caused by a diet with excess fat and deficiency of choline and L-amino acids.
На ФИГ. 2b показано снижение уровня АЛТ при введении Ruminococcus faecis в животной модели поражения печени, вызванного диетой с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот.In FIG. Figure 2b shows the reduction in ALT levels by administration of Ruminococcus faecis in an animal model of liver injury induced by a diet high in fat and deficient in choline and L-amino acids.
На ФИГ. 2c показано снижение уровня АСТ при введении Ruminococcus faecis в животной модели поражения печени, вызванного диетой с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот.In FIG. Figure 2c shows the reduction in AST levels by administration of Ruminococcus faecis in an animal model of liver injury induced by a diet high in fat and deficient in choline and L-amino acids.
На ФИГ. 2d показано отношение массы печени к массе тела при введении Ruminococcus faecis в животной модели поражения печени, вызванного диетой с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот.In FIG. 2d shows the ratio of liver weight to body weight when administered Ruminococcus faecis in an animal model of liver injury induced by a diet high in fat and deficient in choline and L-amino acids.
На ФИГ. 3a изображен процесс экспериментального исследования эффективности терапевтического воздействия на поражение печени путем введения Ruminococcus faecis в животной модели с генетическим дефицитом лептина.In FIG. 3a depicts an experimental study of the effectiveness of therapeutic effects on liver damage by administration of Ruminococcus faecis in an animal model with genetic leptin deficiency.
На ФИГ. 3b показано снижение уровня АЛТ при введении Ruminococcus faecis в животной модели с генетическим дефицитом лептина.In FIG. Figure 3b shows the reduction in ALT levels by administration of Ruminococcus faecis in an animal model with genetic leptin deficiency.
На ФИГ. 3c показано снижение уровня АСТ при введении Ruminococcus faecis в животной модели с генетическим дефицитом лептина.In FIG. Figure 3c shows the reduction in AST levels following administration of Ruminococcus faecis in an animal model with genetic leptin deficiency.
На ФИГ. 3d показано снижение отношения массы печени к массе тела при введении Ruminococcus faecis в животной модели с генетическим дефицитом лептина.In FIG. Figure 3d shows a decrease in the liver weight to body weight ratio upon administration of Ruminococcus faecis in an animal model with genetic leptin deficiency.
На ФИГ. 3e показан уровень инсулина в сыворотке крови натощак и инсулинорезистентность, измеренная методом ipGTT в животной модели с генетическим дефицитом лептина.In FIG. Figure 3e shows fasting serum insulin levels and insulin resistance measured by the ipGTT method in an animal model with genetic leptin deficiency.
На ФИГ. 4a показано, что содержание Ruminococcus bromii значительно снижено в группе подопытных с фиброзом печени.In FIG. 4a shows that the content of Ruminococcus bromii is significantly reduced in the group of experimental subjects with liver fibrosis.
На ФИГ. 4b показано отношение массы печени к массе тела при введении Ruminococcus bromii.In FIG. Figure 4b shows the ratio of liver weight to body weight when administered with Ruminococcus bromii .
На ФИГ. 4c показан уровень АЛТ при введении Ruminococcus bromii.In FIG. Figure 4c shows the ALT level when Ruminococcus bromii was administered.
На ФИГ. 5a показан результат сравнения потенциала культивирования Ruminococcus faecis и морфологии клеток в среде YBHI, среде RCM, среде BL, среде MRS, среде GAM или среде FMK1028.In FIG. 5a shows the result of comparing the cultivation potential of Ruminococcus faecis and cell morphology in YBHI medium, RCM medium, BL medium, MRS medium, GAM medium or FMK1028 medium.
На ФИГ. 5b показана кривая роста Ruminococcus faecis и количество жизнеспособных клеток на единицу объема.In FIG. Figure 5b shows the growth curve of Ruminococcus faecis and the number of viable cells per unit volume.
На ФИГ. 5c показана кривая роста Ruminococcus faecis, культивированного в биореакторе, и количество жизнеспособных клеток.In FIG. Figure 5c shows the growth curve of Ruminococcus faecis cultured in the bioreactor and the number of viable cells.
ПРИНЦИП ИЗОБРЕТЕНИЯPRINCIPLE OF THE INVENTION
Далее настоящее изобретение будет более подробно раскрыто на следующих примерах. Тем не менее, эти примеры предназначены исключительно для иллюстрации настоящего изобретения и не ограничивают объем настоящего изобретения.The present invention will now be described in more detail using the following examples. However, these examples are intended solely to illustrate the present invention and do not limit the scope of the present invention.
Пример 1: Испытание терапевтического воздействия на поражение печени у экспериментальных животныхExample 1: Testing therapeutic effects on liver damage in experimental animals
(1) Подготовка экспериментальных животных(1) Preparation of experimental animals
Ruminococcus faecis (учетный номер KCTC 5757 [JCM № 15917]) был получен из Корейского научно-исследовательского института биологических наук и биотехнологий, Корейской коллекции типовых культур (KCTC, Jeollabuk-do, Республика Корея), и культивировали в среде YBHI в анаэробных условиях, собрали через 24 часа, дважды промыли фосфатно-солевым буферным раствором (+ 0,5% цистеина), после чего вводили подопытным перорально. Самцы мышей C57BL/6N в возрасте 6 недель (Orient Bio, Gyeonggi-do, Республика Корея) выращены в общем животноводческом комплексе Сеульского национального университета в соответствии с инструкциями университета в качестве экспериментальных животных, и все эксперименты на животных одобрены Институциональным комитетом по содержанию и использованию животных Сеульского национального университета. Ruminococcus faecis (Accession No. KCTC 5757 [JCM No. 15917]) was obtained from the Korea Research Institute of Biological Sciences and Biotechnology, Korea Type Culture Collection (KCTC, Jeollabuk-do, Republic of Korea), and cultured in YBHI medium under anaerobic conditions, collected after 24 hours, washed twice with phosphate-buffered saline (+ 0.5% cysteine), and then administered orally to the test subjects. Male C57BL/6N mice aged 6 weeks (Orient Bio, Gyeonggi-do, Republic of Korea) were raised in the general animal facility of Seoul National University in accordance with the university's instructions as experimental animals, and all animal experiments were approved by the Institutional Care and Use Committee animals from Seoul National University.
Для продолжения эксперимента на животной модели НАЖБП, индуцированной метионин-холин-дефицитной (MCD) диетой, через 1 неделю после адаптации мышей к стандартной кормовой диете в питьевую воду добавили стрептомицин в концентрации 1 г/л для заселения кишечника штаммом Ruminococcus faecis, и полученную воду давали подопытным в течение 1 недели. В течение 5 недель после этого мыши одновременно находились на метионин-холин-дефицитной диете с L-аминокислотами (исследовательская диета, Нью-Брансуик, Нью-Джерси США; каталожный №: A02082002B) с ежедневным пероральным введением суспензии Ruminococcus faecis, изготовленной путем добавления 109 КОЕ в 200 мкл фосфатно-солевого буферного раствора, либо контрольного фосфатно-солевого буферного раствора (плацебо) (ФИГ. 1a). После 5 недель введения мышей усыпляли и проводили биохимический анализ, анатомический анализ, подтверждение экспрессии маркеров фиброза и пролиферации печени, а также анализ желчных кислот.To continue the experiment on an animal model of NAFLD induced by a methionine-choline-deficient (MCD) diet, 1 week after the mice adapted to a standard diet, streptomycin was added to the drinking water at a concentration of 1 g/l to colonize the intestines with the Ruminococcus faecis strain, and the resulting water given to experimental subjects for 1 week. For 5 weeks thereafter, the mice were simultaneously fed a methionine-choline-deficient L-amino acid diet (Research Diet, New Brunswick, NJ USA; catalog no.: A02082002B) with daily oral administration of a Ruminococcus faecis suspension prepared by adding 10 9 CFU in 200 μl of phosphate-buffered saline or control phosphate-buffered saline (placebo) (FIG. 1a). After 5 weeks of administration, mice were euthanized and biochemical analysis, anatomical analysis, confirmation of the expression of liver fibrosis and proliferation markers, and bile acid analysis were performed.
(2) Биохимический анализ(2) Biochemical analysis
Уровни аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ) в сыворотке крови измеряли с помощью биохимического анализатора Fuji DRI-CHEM 3500i (FujiFilm, Токио, Япония). Результаты измерения АЛТ и АСТ показаны на ФИГ. 1b.Serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) levels were measured using a Fuji DRI-CHEM 3500i biochemistry analyzer (FujiFilm, Tokyo, Japan). The measurement results of ALT and AST are shown in FIG. 1b.
(3) Анатомический анализ (3) Anatomical analysis
После усыпления образцы печени вырезали и фиксировали в 10% растворе формалина (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США). Окрашивание гематоксилином и эозином и красителем Sirius red проводили в исследовательском фонде LOGONE Bio Convergence Research Foundation (Сеул, Республика Корея). Окрашенные изображения целых слайдов анализировали с помощью программы Pannoramic Viewer (3DHISTECH, Будапешт, Венгрия). Для расчета пропорциональной площади коллагена случайным образом выбирали по 8 изображений на группу и анализировали с помощью программного обеспечения ImageJ (NIH, Бетесда, Мэриленд, США; http://imagej.nih.gov/ij).After euthanasia, liver samples were excised and fixed in 10% formalin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Hematoxylin and eosin and Sirius red staining were performed at the LOGONE Bio Convergence Research Foundation (Seoul, Republic of Korea). Stained images of whole slides were analyzed using Pannoramic Viewer (3DHISTECH, Budapest, Hungary). To calculate the proportional collagen area, 8 images per group were randomly selected and analyzed using ImageJ software (NIH, Bethesda, MD, USA; http://imagej.nih.gov/ij).
Кроме того, для определения отношения массы печени к массе тела измеряли массу тела мышей, которым в течение 5 недель вводили Ruminococcus faecis, и массу печени, после рассчитывали отношение массы печени к массе тела. Результат измерения массы тела мышей показан на ФИГ. 1f, а отношение массы печени к массе тела показано на ФИГ. 1g.In addition, to determine the ratio of liver weight to body weight, the body weight of mice injected with Ruminococcus faecis for 5 weeks and the weight of the liver were measured, and the ratio of liver weight to body weight was calculated. The result of measuring the body weight of mice is shown in FIG. 1f, and the ratio of liver weight to body weight is shown in FIG. 1g.
(4) Подтверждение возникновения экспрессии маркеров фиброза печени и пролиферации (4) Confirmation of the occurrence of expression of markers of liver fibrosis and proliferation
Тотальную РНК образцов печени выделили с помощью комплекта easy-spin™ Total RNA Extraction (iNtRON Biotechnology, Gyeonggi-do, Республика Корея) и подвергли обратной транскрипции в кДНК с помощью комплекта High Capacity RNA-to-cDNA (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). Количественную ПЦР проводили с использованием SYBR™ Green qPCR Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) и системы Applied Biosystems™ QuantStudio™ 6 Flex qPCR (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). Последовательности использованных праймеров были следующими.Total RNA from liver samples was isolated using the easy-spin™ Total RNA Extraction kit (iNtRON Biotechnology, Gyeonggi-do, Republic of Korea) and reverse transcribed into cDNA using the High Capacity RNA-to-cDNA kit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA , USA). Quantitative PCR was performed using SYBR™ Green qPCR Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) and the Applied Biosystems™ QuantStudio™ 6 Flex qPCR System (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). The sequences of the primers used were as follows.
Таблица 1Table 1
(5) Анализ желчных кислот(5) Bile acid analysis
После извлечения слепой кишки мыши добавляли 80% метанол, соответствующий 10-кратному объемному отношению, и перемешивали. Для экстракции желчных кислот образцы измельчали с помощью соникатора в течение 3 минут, после чего выдерживали при температуре 4 °С в течение 24 часов. После этого к супернатанту, полученному при центрифугировании, добавляли 1 мл 100% метанола и проводили вторичную экстракцию в ударном дезинтеграторе с 15 частотами в течение 30 минут. Из метанола, в котором была растворена желчная кислота, выпарили все жидкие вещества путем вакуумной сушки при 30 °С в течение 24 часов, а оставшиеся твердые вещества растворили в 55% метаноле. Экстрагированную желчную кислоту поместили в специальную пробирку, после чего измерили масс-спектрометром Micromass® Q-ToF (Waters Technologies, Милфорд, Массачусетс, США).After removing the mouse cecum, 80% methanol corresponding to a 10-fold volume ratio was added and mixed. To extract bile acids, samples were ground using a sonicator for 3 minutes and then kept at 4°C for 24 hours. After this, 1 ml of 100% methanol was added to the supernatant obtained by centrifugation and secondary extraction was carried out in an impact disintegrator with 15 frequencies for 30 minutes. From the methanol in which the bile acid was dissolved, all liquid substances were evaporated by vacuum drying at 30 °C for 24 hours, and the remaining solids were dissolved in 55% methanol. The extracted bile acid was placed in a special tube and then measured by a Micromass® Q-ToF mass spectrometer (Waters Technologies, Milford, MA, USA).
(6) Результаты эксперимента(6) Experimental results
При введении Ruminococcus faecis (метионин-холин-дефицитная диета + R.faecis) уровень АЛТ и АСТ снизился по сравнению с контрольной группой мышей (метионин-холин-дефицитная диета) (ФИГ. 1b).When administered Ruminococcus faecis (methionine-choline-deficient diet + R. faecis ), ALT and AST levels decreased compared to control mice (methionine-choline-deficient diet) (FIG. 1b).
По данным анатомического и гистологического анализа степень НАЖБП, индуцированной метионин-холин-дефицитной диетой, значительно улучшилась у мышей, получавших Ruminococcus faecis (ФИГ. 1c - ФИГ. 1e). Метионин-холин-дефицитная диета вызвала резкую потерю массы тела, что следует из предыдущего документа, а введение Ruminococcus faecis не повлияло на массу тела (ФИГ. 1f). Тем не менее, при введении Ruminococcus faecis (метионин-холин-дефицитная диета + R.faecis) отношение массы печени к массе тела снизилось по сравнению с контрольной группой мышей (метионин-холин-дефицитная диета) (ФИГ. 1g).According to anatomical and histological analysis, the degree of NAFLD induced by methionine-choline-deficient diet was significantly improved in mice fed Ruminococcus faecis (FIG. 1c - FIG. 1e). The methionine-choline-deficient diet caused a dramatic loss of body weight, as seen in the previous paper, and administration of Ruminococcus faecis had no effect on body weight (FIG. 1f). However, when administered Ruminococcus faecis (methionine-choline-deficient diet + R. faecis ), the liver weight-to-body weight ratio decreased compared to the control group of mice (methionine-choline-deficient diet) (FIG. 1g).
Результаты подтверждения экспрессии маркеров возникновения фиброза печени и пролиферации показали, что маркеры возникновения фиброза печени и пролиферации значительно уменьшились у мышей, получавших Ruminococcus faecis (Timp1, p=0,0018; α-SMA, p=0,0330) (ФИГ. 1h).The results of confirming the expression of liver fibrosis and proliferation markers showed that liver fibrosis and proliferation markers were significantly decreased in mice treated with Ruminococcus faecis (Timp1, p=0.0018; α-SMA, p=0.0330) (FIG. 1h) .
Параллельно с изменениями биохимических и гистологических маркеров поражения печени, локальный уровень вторичных желчных кислот (дезоксихолевой и литохолевой кислоты) также снижался при метионин-холин-дефицитной диете и повышался при введении Ruminococcus faecis (ФИГ. 1i).In parallel with changes in biochemical and histological markers of liver damage, local levels of secondary bile acids (deoxycholic and lithocholic acid) were also decreased by the methionine-choline-deficient diet and increased by Ruminococcus faecis (FIG. 1i).
Такой результат свидетельствует о наличии эффекта защиты от фиброза печени в модели мышей, получавших Ruminococcus faecis и метионин-холин-дефицитную диету.This result indicates the presence of a protective effect against liver fibrosis in a mouse model fed with Ruminococcus faecis and a methionine-choline-deficient diet.
Пример 2: Испытание терапевтического воздействия на поражение печени с использованием животной моделиExample 2: Testing Therapeutic Effects on Liver Damage Using an Animal Model
Чтобы подтвердить эффективность в снятии симптомов для Ruminococcus faecis в отношении поражения печени при неалкогольной жировой печени, была использована мышиная модель с диетой с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот (CDAHFD), предотвращающая потерю массы тела и не демонстрирующая инсулинорезистентности.To confirm the symptom-relieving efficacy of Ruminococcus faecis against liver injury in non-alcoholic fatty liver, a choline and L-amino acid-deficient diet (CDAHFD) mouse model was used, preventing weight loss and not demonstrating insulin resistance.
Холин играет роль в накоплении и высвобождении триглицеридов в гепатоцитах в форме ЛПОНП (VLDL), однако холин отсутствует в диете с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот, поэтому речь идет о диетической модели, в которой триглицериды из диеты с избытком жиров накапливаются в гепатоцитах, вызывая жировую печень, причем в отличие от модели с метионин-холин-дефицитной диетой не происходит потери массы тела, а фиброз печени усиливается. Тем не менее, известно, что модель с диетой с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот не вызывает резистентности к инсулину.Choline plays a role in the accumulation and release of triglycerides in hepatocytes in the form of VLDL, however, choline is absent in a diet with excess fat and deficiency of choline and L-amino acids, so this is a dietary model in which triglycerides from a diet with excess fat accumulate in hepatocytes, causing fatty liver, and in contrast to the model with a methionine-choline-deficient diet, there is no loss of body weight, and liver fibrosis increases. However, the high-fat, choline- and L-amino acid-deficient diet model is known to not cause insulin resistance.
В частности, как показано на ФИГ. 2a, через неделю после адаптации мышей C57BL/6N к стандартной кормовой диете, стрептомицин (1 г/л) растворили в питьевой воде и давали подопытным в течение одной недели для заселения кишечника штаммом Ruminococcus faecis. После этого в течение 8 недель подопытных получали диету с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот, не содержащую холина и содержащую 60% жиров, и ежедневно перорально получали 200 мкл суспензии Ruminococcus faecis, изготовленной путем добавления 109 КОЕ в 200 мкл фосфатно-солевого буферного раствора, либо контрольный фосфатно-солевой буферный раствор (плацебо). После 8 недель введения мышей усыпляли и проводили биохимический анализ сыворотки крови и анатомический анализ. В качестве биохимического анализа анализ АЛТ и АСТ выполняли аналогично примеру 1, а отношение массы печени к массе тела измеряли аналогично примеру 1.In particular, as shown in FIG. 2a, one week after adaptation of C57BL/6N mice to a standard chow diet, streptomycin (1 g/L) was dissolved in drinking water and given to the test subjects for one week to colonize the intestines with the Ruminococcus faecis strain. Subjects were then fed a fat-replete, choline- and L-amino acid-deficient diet containing no choline and 60% fat for 8 weeks, and were given a daily oral dose of 200 μl of a Ruminococcus faecis suspension prepared by adding 10 9 CFU to 200 μl of phosphate-containing acid. saline buffer solution, or a control phosphate-buffered saline solution (placebo). After 8 weeks of administration, mice were euthanized and serum biochemical and anatomical analyzes were performed. As a biochemical analysis, ALT and AST analysis were performed as in Example 1, and the ratio of liver weight to body weight was measured as in Example 1.
Как показано на ФИГ. 2b - ФИГ. 2d, уровни АЛТ и АСТ снижались при введении Ruminococcus faecis (ФИГ. 2b и ФИГ. 2c), однако не было отмечено значительной разницы в отношении массы печени к массе тела при введении Ruminococcus faecis (ФИГ. 2d). Это означает, что Ruminococcus faecis оказывает терапевтический эффект при неалкогольном жировом поражении печени, вызванном диетой с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот, а отсутствие значительной разницы в отношении массы печени к массе тела означает, что значительного уменьшения количества жиров, накопленных в печени, не произошло.As shown in FIG. 2b - FIG. 2d, ALT and AST levels were reduced by administration of Ruminococcus faecis (FIG. 2b and FIG. 2c), but there was no significant difference in the liver weight to body weight ratio by administration of Ruminococcus faecis (FIG. 2d). This means that Ruminococcus faecis has a therapeutic effect on non-alcoholic fatty liver disease caused by a diet with excess fat and deficiency of choline and L-amino acids, and the lack of significant difference in the ratio of liver weight to body weight means that there is no significant reduction in the amount of fat accumulated in the liver , Did not happen.
Пример 3: Испытание терапевтического воздействия на поражение печени с использованием модели с генетическим дефицитом лептинаExample 3: Testing Therapeutic Effects on Liver Damage Using a Genetic Leptin Deficiency Model
Для подтверждения возникновения терапевтического эффекта Ruminococcus faecis в отношении неалкогольной жировой болезни печени при наличии инсулинорезистентности, была использована модель с генетическим дефицитом лептина (db/db), вызывающую спонтанный диабет с инсулинорезистентностью и жировой печенью. В качестве контрольной группы модели db/db использовали группу db/m, соответствующую гетерозиготе по аллелю db.To confirm the emergence of a therapeutic effect of Ruminococcus faecis against non-alcoholic fatty liver disease in the presence of insulin resistance, a genetic leptin deficiency ( db/db ) model was used to cause spontaneous diabetes with insulin resistance and fatty liver. The db/m group, corresponding to a heterozygote for the db allele, was used as a control group for the db/ db model.
Под моделью db/db понимают модель, в которой происходит мутация в рецепторе лептина, а также индуцируется ожирение и инсулинорезистентность с итоговым развитием гипергликемии, и которая часто используется в качестве модели диабета 2 типа. Модель db/db известна быстрым индуцированием стеатоза и затрудненным индуцированием стеатогепатита (НАСГ) и фиброза печени. The db/db model is defined as a model in which the leptin receptor is mutated and obesity and insulin resistance are induced, resulting in hyperglycemia, and is often used as a model of type 2 diabetes. The db/db model is known for its rapid induction of steatosis and difficulty inducing steatohepatitis (NASH) and liver fibrosis.
В частности, как показано на ФИГ. 3a, через неделю после адаптации мышей db/db к стандартной кормовой диете, стрептомицин (1 г/л) растворили в питьевой воде и давали подопытным в течение одной недели для заселения кишечника штаммом Ruminococcus faecis. После этого в течение 5 недель подопытные получали обычную диету, и ежедневно перорально получали 200 мкл суспензии Ruminococcus faecis, изготовленной путем добавления 109 КОЕ в 200 мкл фосфатно-солевого буферного раствора, либо контрольный фосфатно-солевой буферный раствор (плацебо). После 5 недель введения мышей усыпляли и проводили биохимический анализ и анатомический анализ. В качестве биохимического анализа анализ АЛТ и АСТ выполняли практически тем же способом, что и в примере 1, а отношение массы печени к массе тела измеряли практически тем же способом, что и в примере 1.In particular, as shown in FIG. 3a, one week after adaptation of db/db mice to a standard chow diet, streptomycin (1 g/L) was dissolved in drinking water and given to the experimental subjects for one week to colonize the intestines with the Ruminococcus faecis strain. Subjects were then fed a normal diet for 5 weeks and received a daily oral dose of 200 μl of a Ruminococcus faecis suspension prepared by adding 10 9 CFU to 200 μl of phosphate-buffered saline or a control phosphate-buffered saline (placebo). After 5 weeks of administration, mice were euthanized and biochemical and anatomical analyzes were performed. As a biochemical analysis, ALT and AST analysis were performed in essentially the same manner as in Example 1, and the liver weight to body weight ratio was measured in essentially the same manner as in Example 1.
Уровень инсулина натощак в сыворотке крови, измеренный с помощью интраперитонеального теста толерантности (ipGTT) к глюкозе у мышей db/db, определяли с помощью комплекта Ultra Sensitive Mouse Insulin ELISA (Crystal Chem, Элк Гров Виллидж, Иллинойс, США). Интраперитонеальный тест толерантности к глюкозе для подтверждения инсулинорезистентности проводили на 3-й неделе введения Ruminococcus faecis, и после 16 часов ограничения питания (за исключением воды) интраперитонеально вводили раствор глюкозы из расчета 1 г глюкозы на 1 кг массы тела. После этого глюкозу крови измеряли с помощью глюкометра Accu-Chek® Performa (Roche Diagnostics, Риш, Швейцария) в предварительно заданное время.Fasting serum insulin levels, measured by intraperitoneal glucose tolerance test (ipGTT) in db/db mice, were determined using an Ultra Sensitive Mouse Insulin ELISA kit (Crystal Chem, Elk Grove Village, IL, USA). An intraperitoneal glucose tolerance test to confirm insulin resistance was performed on the 3rd week of Ruminococcus faecis administration, and after 16 hours of dietary restriction (except for water), a glucose solution was administered intraperitoneally at the rate of 1 g of glucose per 1 kg of body weight. Blood glucose was then measured using an Accu-Chek® Performa glucometer (Roche Diagnostics, Risch, Switzerland) at a predetermined time.
Как показано на ФИГ. 3b - ФИГ. 3d, уровни АЛТ и АСТ снизились в результате введения Ruminococcus faecis (ФИГ. 3b и ФИГ. 3c), и, в частности, также значительно снизилось отношение массы печени к массе тела (ФИГ. 3d). Тем не менее, как показано на ФИГ. 3e, терапевтическое воздействие Ruminococcus faecis не повлияло на уровень инсулина натощак в сыворотке крови и инсулинорезистентность, измеренную методом интраперитонеального теста толерантности к глюкозе у мышей db/db.As shown in FIG. 3b - FIG. 3d, ALT and AST levels decreased as a result of administration of Ruminococcus faecis (FIG. 3b and FIG. 3c), and in particular, the ratio of liver weight to body weight also decreased significantly (FIG. 3d). However, as shown in FIG. 3e, therapeutic exposure to Ruminococcus faecis did not affect fasting serum insulin levels and insulin resistance measured by intraperitoneal glucose tolerance test in db/db mice.
Ruminococcus faecis также показал терапевтическую эффективность в отношении неалкогольной жировой болезни печени в модели db/db с инсулинорезистентностью, и этот результат означает, что Ruminococcus faecis терапевтически эффективен при НАЖБП независимо от инсулина и может эффективно использоваться для лечения пациентов с неалкогольной жировой болезнью печени и диабетом 2 типа. Ruminococcus faecis also showed therapeutic efficacy against non-alcoholic fatty liver disease in a db/db model of insulin resistance, and this result means that Ruminococcus faecis is therapeutically effective in NAFLD regardless of insulin and can be effectively used to treat patients with non-alcoholic fatty liver disease and type 2 diabetes. type.
В частности, для подтверждения чувствительности реакции на терапевтическое воздействие в зависимости от различий в инсулинорезистентности в качестве сравнительной модели были выбраны модель db/db и модель диеты с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот. Поскольку в случае модели диеты с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот неалкогольная жировая болезнь печени индуцируется без инсулинорезистентности, она подходит для сравнения терапевтического эффекта в зависимости от инсулинорезистентности по сравнению с моделью db/db, в которой индуцируется инсулинорезистентность. В случае модели с метионин-холин-дефицитной диетой, она не подходит для использования в качестве контроля подтверждения чувствительности реакции на терапевтическое воздействие в зависимости от разницы в инсулинорезистентности, так как подавляла функции организма, в том числе вызывала быструю потерю массы тела.Specifically, the db/db model and the high-fat, choline- and L-amino acid-deficient diet model were selected as comparative models to confirm the sensitivity of treatment response to differences in insulin resistance. Because the high-fat, choline- and L-amino acid-deficient diet model induces nonalcoholic fatty liver disease without insulin resistance, it is suitable for comparing therapeutic effects based on insulin resistance versus the db/db model, in which insulin resistance is induced. In the case of the methionine-choline-deficient diet model, it was not suitable for use as a control to confirm the sensitivity of response to therapeutic intervention depending on the difference in insulin resistance, as it suppressed body functions, including causing rapid weight loss.
Как показано на ФИГ. 3b, при введении Ruminococcus faecis уровень АЛТ снизился примерно на 42,98%, как показано на ФИГ. 3c, уровень АСТ снизился примерно на 41,00%, и как показано на ФИГ. 3d, отношение массы печени к массе тела снизилось примерно на 9,43%. Учитывая, что коэффициент снижения уровня АЛТ примерно в 2,6 раза и более превышал снижение уровня АЛТ примерно на 16,40% в модели диеты с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот (ФИГ. 2b), коэффициент снижения уровня АСТ примерно в 2,2 раза и более превышал снижение уровня АСТ примерно на 18,18% в модели диеты с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот (ФИГ. 2c), и отношение массы печени к массе тела было значительно снижено в модели животных с инсулинорезистентностью, в то время как отношение массы печени к массе тела не было значительно снижено в модели диеты с избытком жиров и дефицитом холина и L-аминокислот (ФИГ. 2d), Ruminococcus faecis имеет различие в инсулинорезистентности или различие в чувствительности, связанной со снятием симптомов или терапевтическим действием на поражение печени, в зависимости от наличия или отсутствия диабета 2 типа, и демонстрирует превосходный терапевтический эффект на субъекте с диабетом 2 типа.As shown in FIG. 3b, when Ruminococcus faecis was administered, the ALT level decreased by about 42.98%, as shown in FIG. 3c, the AST level decreased by about 41.00%, and as shown in FIG. 3d, the ratio of liver weight to body weight decreased by about 9.43%. Considering that the ALT reduction rate was approximately 2.6 times or more greater than the ALT reduction of approximately 16.40% in the high-fat choline and L-amino acid-deficient diet model (FIG. 2b), the AST reduction rate was approximately 2.2 times or more greater than the reduction in AST levels of approximately 18.18% in the high-fat choline-L-amino acid-deficient diet model (FIG. 2c), and the liver weight-to-body weight ratio was significantly reduced in the insulin-resistant animal model , while the liver weight-to-body weight ratio was not significantly reduced in the fat-replete choline and L-amino acid-deficient diet model (FIG. 2d), Ruminococcus faecis has a difference in insulin resistance or a difference in sensitivity associated with relief of symptoms or therapeutic effect on liver damage, depending on the presence or absence of type 2 diabetes, and demonstrates excellent therapeutic effect in a subject with type 2 diabetes.
Пример 4: Терапевтическая эффективность Example 4: Therapeutic Efficacy Ruminococcus bromii Ruminococcus bromii в отношении фиброзаregarding fibrosis
(1) Значительное снижение уровня (1) Significant reduction in level Ruminococcus bromiiRuminococcus bromii в группе с неалкогольной жировой болезнью печени in the group with non-alcoholic fatty liver disease
171 субъект с НАЖБП и 31 субъект без НАЖБП по результатам биопсии были включены в исследование, и НАЖБП была классифицирована гистологически. ДНК из образцов фекалий выделили с помощью комплекта QIAamp DNA Stool Mini Kit (Qiagen, Хильден, Германия). Секвенирование, нацеленное на область V4 гена 16S рРНК, проводили с использованием системы MiSeq (Illumina, Сан-Диего, Калифорния, США), а дополнительный анализ данных секвенирования проводили на конвейере QIIME™ (v 1.8.0; http://qiime.org/). Как показано на ФИГ. 4a, обнаружилось, что содержание Ruminococcus bromii значительно снизилось в группе с заболеванием фиброзом печени.171 subjects with NAFLD and 31 subjects without NAFLD by biopsy were included in the study, and NAFLD was classified histologically. DNA from fecal samples was extracted using the QIAamp DNA Stool Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany). Sequencing targeting the V4 region of the 16S rRNA gene was performed using the MiSeq system (Illumina, San Diego, CA, USA), and additional analysis of sequencing data was performed on the QIIME™ pipeline (v 1.8.0; http://qiime.org /). As shown in FIG. 4a, it was found that the content of Ruminococcus bromii was significantly reduced in the liver fibrosis disease group.
(2) Проверка терапевтической эффективности (2) Testing therapeutic efficacy Ruminococcus bromii Ruminococcus bromii при неалкогольной жировой болезни печениfor non-alcoholic fatty liver disease
Далее было подтверждено, обладает ли Ruminococcus bromii, характеризуемый, как значительно сниженный в группе с неалкогольной жировой болезнью печени, терапевтическим эффектом при неалкогольной жировой печени.It was further confirmed whether Ruminococcus bromii , characterized as being significantly reduced in the non-alcoholic fatty liver disease group, has a therapeutic effect on non-alcoholic fatty liver.
В частности, Ruminococcus bromii (ATCC № 27255) был получен из ATCC (Американской коллекции типовых культур, Манассас, Виргиня, США), и культивировали в модифицированной среде PYG в анаэробных условиях, собрали через 24 часа, дважды промыли фосфатно-солевым буферным раствором (+ 0,5% цистеина), после чего вводили перорально.Specifically, Ruminococcus bromii (ATCC no. 27255) was obtained from ATCC (American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA), and cultured in modified PYG medium under anaerobic conditions, collected after 24 hours, washed twice with phosphate-buffered saline ( + 0.5% cysteine), after which it was administered orally.
Через одну неделю после адаптации мышей C57BL/6N к стандартной кормовой диете, стрептомицин (1 г/л) растворили в питьевой воде и давали в течение одной недели для заселения кишечника штаммом Ruminococcus faecis. В течение 5 недель после этого мыши одновременно находились на метионин-холин-дефицитной диете с L-аминокислотами (исследовательская диета, Нью-Брансуик, Нью-Джерси США; каталожный №: A02082002B) с ежедневным пероральным введением суспензии Ruminococcus bromii, изготовленной путем добавления 109 КОЕ в 200 мкл фосфатно-солевого буферного раствора, либо контрольного фосфатно-солевого буферного раствора (плацебо). После 5 недель введения мышей усыпляли и проводили биохимический анализ, анатомический анализ, подтверждение экспрессии маркеров проявления фиброза и пролиферации, а также анализ желчных кислот.One week after adaptation of C57BL/6N mice to a standard chow diet, streptomycin (1 g/L) was dissolved in drinking water and given for one week to colonize the intestines with a strain of Ruminococcus faecis . For 5 weeks thereafter, the mice were simultaneously fed a methionine-choline-deficient L-amino acid diet (Research Diet, New Brunswick, NJ USA; catalog no.: A02082002B) with daily oral administration of a Ruminococcus bromii suspension prepared by adding 10 9 CFU in 200 μl of phosphate-buffered saline or control phosphate-buffered saline (placebo). After 5 weeks of administration, mice were euthanized and biochemical analysis, anatomical analysis, confirmation of the expression of fibrosis and proliferation markers, and bile acid analysis were performed.
Тем не менее, как показано на ФИГ. 4b - ФИГ. 4c, при введении Ruminococcus bromii (метионин-холин-дефицитная диета + R.bromii) не было обнаружено значительного изменения отношения массы печени к массе тела и изменения уровня АЛТ по сравнению с контрольной группой мышей (метионин-холин-дефицитная диета).However, as shown in FIG. 4b - FIG. 4c, administration of Ruminococcus bromii (methionine-choline-deficient diet + R.bromii ) did not show a significant change in liver weight-to-body weight ratio or change in ALT levels compared to control mice (methionine-choline-deficient diet).
Ruminococcus bromii не показал терапевтической эффективности при неалкогольной жировой печени, из чего следует, что не все виды, показанные как сниженные в группе с неалкогольной жировой болезнью печени, оказывали терапевтическое действие при неалкогольной жировой болезни печени, в частности, даже если вид принадлежит к тому же роду, что и Ruminococcus faecis, не все виды оказывали терапевтическое действие при неалкогольной жировой печени, то есть терапевтическое действие при неалкогольной жировой печени является уникальным эффектом Ruminococcus faecis. Кроме того, хотя Ruminococcus bromii был значительно снижен в группе с неалкогольной жировой болезнью печени, он не показал никакого терапевтического эффекта в отношении неалкогольной жировой печени при введении, поэтому было трудно предсказать, что введение сниженного штамма при неалкогольной жировой печени приведет к снижению тяжести заболевания. Ruminococcus bromii did not show therapeutic efficacy in nonalcoholic fatty liver disease, which implies that not all species shown to be reduced in the nonalcoholic fatty liver disease group were therapeutic in nonalcoholic fatty liver disease in particular, even if the species belongs to the same The same genus as Ruminococcus faecis , not all species had a therapeutic effect on non-alcoholic fatty liver, that is, the therapeutic effect on non-alcoholic fatty liver is a unique effect of Ruminococcus faecis . In addition, although Ruminococcus bromii was significantly reduced in the nonalcoholic fatty liver disease group, it did not show any therapeutic effect on nonalcoholic fatty liver when administered, so it was difficult to predict that administration of the reduced strain in nonalcoholic fatty liver would result in a reduction in disease severity.
Пример 5: Культивирование и производство Example 5: Cultivation and Production Ruminococcus faecis Ruminococcus faecis
(1) Подбор оптимальной среды(1) Selection of the optimal environment
Для подбора оптимальной среды для Ruminococcus faecis (учетный номер KCTC 5757) культивируемость была подтверждена в среде YBHI, включая доступную на рынке среду с сердечно-мозговым экстрактом Bacto™ (BHI) (BD, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США), усиленную клостридиальную среду Difco™ (RCM) (BD, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США), бульон MB cell BL (BL) (Kisan Bio, Сеул, Республика Корея), питательную среду Difco™ Lactobacilli MRS (BD, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США), анаэробную среду MB cell Gifu (GAM) (Kisan Bio, Сеул, Республика Корея), и среду FMK1028, приготовленную в настоящем изобретении. Культивируемость для оптимального выбора среды оценивали по увеличению поглощения и снижению рН после культивирования, а гомогенность клеток подтверждали под микроскопом. Составы среды YBHI и среды FMK1028 приведены ниже в таблицах 2 и 3, соответственно.To select the optimal media for Ruminococcus faecis (Accession No. KCTC 5757), culturability was confirmed in YBHI media, including commercially available Bacto™ Brain Heart Extract (BHI) media (BD, Franklin Lakes, NJ, USA), enhanced clostridial Difco™ medium (RCM) (BD, Franklin Lakes, NJ, USA), MB cell BL broth (BL) (Kisan Bio, Seoul, Republic of Korea), Difco™ Lactobacilli MRS culture medium (BD, Franklin Lakes, NJ Jersey, USA), MB cell Gifu anaerobic medium (GAM) (Kisan Bio, Seoul, Republic of Korea), and FMK1028 medium prepared in the present invention. Cultivability for optimal media selection was assessed by the increase in absorbance and decrease in pH after culture, and the homogeneity of the cells was confirmed under a microscope. The compositions of YBHI medium and FMK1028 medium are given below in Tables 2 and 3, respectively.
Таблица 2table 2
Среда YBHIYBHI environment
Таблица 3Table 3
Среда FMK1028Environment FMK1028
Все среды, используемые для подбора оптимальной среды, перед стерилизацией были скорректированы до pH 6,8. Предварительную культуру Ruminococcus faecis, культивированную в среде YBHI в течение 14 часов, инокулировали таким образом, чтобы конечное соотношение объемов составляло 1% в среде YBHI, среде RCM, среде BL, среде MRS, среде GAM или среде FMK1028, соответственно. После инокуляции, в анаэробных условиях при 37 °С, получали устойчивую культуру, и через 14 часов измеряли поглощение при 600 нм и pH культурального раствора, а также наблюдали морфологию клеток. Поглощение измеряли спектрометром Orion Aquamate 8000 (Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США), а pH измеряли рН/иономером SevenCompact (Mettler Toledo, Колумбус, Огайо, США). Морфологию клеток наблюдали под оптическим микроскопом Optinity KB-320 (Korea Labtech, Gyeonggi-do, Республика Корея).All media used to select the optimal medium were adjusted to pH 6.8 before sterilization. A preculture of Ruminococcus faecis cultured in YBHI medium for 14 hours was inoculated such that the final volume ratio was 1% in YBHI medium, RCM medium, BL medium, MRS medium, GAM medium or FMK1028 medium, respectively. After inoculation, a stable culture was obtained under anaerobic conditions at 37 °C, and after 14 hours, absorbance at 600 nm and pH of the culture solution were measured, and cell morphology was observed. Absorbance was measured with an Orion Aquamate 8000 spectrometer (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA), and pH was measured with a SevenCompact pH/ionomer (Mettler Toledo, Columbus, OH, USA). Cell morphology was observed under an Optinity KB-320 optical microscope (Korea Labtech, Gyeonggi-do, Republic of Korea).
На ФИГ. 5a показан результат сравнения потенциала культуры Ruminococcus faecis и морфологии клеток. Как показано на ФИГ. 5a, поглощение культурального раствора после культивирования в течение 14 часов оказалось наиболее высоким в среде FMK1028 и далее в порядке убывания в среде YBHI, среде GAM, среде MRS, среде BL и среде RCM. pH культурального раствора после культивирования оказался наиболее низким в среде FMK1028 и далее в порядке убывания в среде BL, среде YBHI, среде MRS, среде RCM и среде GAM. В результате наблюдения под микроскопом однородность оказалась наиболее высокой для клеток, полученных в среде FMK1028 и GAM, и далее для клеток, культивированных в среде YBHI.In FIG. Figure 5a shows the result of a comparison between Ruminococcus faecis culture potential and cell morphology. As shown in FIG. 5a, the uptake of the culture solution after culturing for 14 hours was found to be highest in FMK1028 medium and then in descending order in YBHI medium, GAM medium, MRS medium, BL medium and RCM medium. The pH of the culture solution after cultivation was found to be lowest in FMK1028 medium and then in descending order in BL medium, YBHI medium, MRS medium, RCM medium and GAM medium. As a result of microscopic observation, homogeneity was found to be highest for cells obtained in FMK1028 and GAM medium, and further for cells cultured in YBHI medium.
В целом, культивируемость Ruminococcus faecis оказалась наиболее высокой в среде FMK1028, приготовленной в настоящем изобретении.Overall, the cultivability of Ruminococcus faecis was highest in the FMK1028 medium prepared in the present invention.
(2) Кривая роста оптимальной среды и количество жизнеспособных клеток(2) Growth curve of optimal medium and number of viable cells
Кривая роста и количество жизнеспособных клеток измерили с использованием среды FMK1028 с наиболее высоким потенциалом культуры Ruminococcus faecis. В качестве контрольной группы использовали среду YBHI.The growth curve and the number of viable cells were measured using FMK1028 medium with the highest culture potential of Ruminococcus faecis . YBHI medium was used as a control group.
Раствор предварительной культуры Ruminococcus faecis, культивированной в среде YBHI в течение 14 часов, инокулировали таким образом, чтобы соотношение объемов составляло 1% в среде YBHI и FMK1028, соответственно. После инокуляции, в анаэробных условиях при 37 °С выращивали устойчивую культуру в течение 14 часов, поглощение культурального раствора измеряли при 600 нм и отображали с помощью кривой роста.A preculture solution of Ruminococcus faecis cultured in YBHI medium for 14 hours was inoculated such that the volume ratio was 1% in YBHI and FMK1028 medium, respectively. After inoculation, a stable culture was grown under anaerobic conditions at 37 °C for 14 h, and the absorbance of the culture solution was measured at 600 nm and displayed using a growth curve.
Для измерения количества жизнеспособных клеток Ruminococcus faecis, инокулированный в каждой среде, культивировали в течение 14 часов, после чего разводили 10-кратным серийным разведением с использованием среды GAM, и 0,1 мл разведенного раствора собирали и наносили на агаровую пластину среды GAM, после чего культивировали в анаэробных условиях при 37 °С в течение 24 часов. После культивирования колоний на агаровой пластине, в которой было образовано примерно 30 - 300 колоний, их подсчитывали и пересчитывали в количество жизнеспособных клеток на единицу объема культурального раствора (КОЕ/мл). Измеренная кривая роста и количество жизнеспособных клеток на единицу объема показаны на ФИГ. 5b. Как показано на ФИГ. 5b, штамм Ruminococcus faecis достиг стационарной фазы после 8 часов культивирования в среде YBHI в качестве контрольной группы, показав поглощение 2,55. Он показывал кривую роста, аналогичную YBHI, до 8 часов после культивирования в среде FMK1028, но продолжал расти до 14 часов после культивирования, показывая поглощение 6,18. В результате измерения количества жизнеспособных клеток на единицу объема после культивирования в течение 14 часов было подтверждено, что количество жизнеспособных клеток в среде YBHI в 600 раз превышает аналогичный показатель среды FMK1028.To measure the number of viable cells, Ruminococcus faecis , inoculated in each medium, was cultured for 14 hours, after which it was diluted by 10-fold serial dilution using GAM medium, and 0.1 ml of the diluted solution was collected and spread on an agar plate of GAM medium, after which cultured under anaerobic conditions at 37°C for 24 hours. After culturing the colonies on an agar plate, in which approximately 30 - 300 colonies were formed, they were counted and converted into the number of viable cells per unit volume of culture solution (CFU/ml). The measured growth curve and number of viable cells per unit volume are shown in FIG. 5b. As shown in FIG. 5b, the Ruminococcus faecis strain reached stationary phase after 8 hours of culture in YBHI medium as the control group, showing an absorbance of 2.55. It showed a growth curve similar to YBHI until 8 hours after culture in FMK1028 medium, but continued to grow until 14 hours after culture, showing an absorbance of 6.18. By measuring the number of viable cells per unit volume after culturing for 14 hours, it was confirmed that the number of viable cells in YBHI medium was 600 times higher than that of FMK1028 medium.
(3) Массовое разведение и диспергирование с использованием биореактора(3) Mass dilution and dispersion using bioreactor
Время восстановления культивированных клеток было подтверждено с помощью биореактора для массовой культуры и диспергирования Ruminococcus faecis. После инокуляции 16 мл предварительно культивированного раствора Ruminococcus faecis в 8 л среды FMK1028, биореактор (Fermentec, Chungcheongbuk-do, Республика Корея) работал и осуществлял культивирование в анаэробных условиях при 37 °С, 250 об/мин. Кривая роста и количество жизнеспособных клеток в зависимости от времени культивирования измерены и показаны на ФИГ. 5c. На ФИГ. 5c показана кривая роста и количество жизнеспособных клеток Ruminococcus faecis, выращенных в биореакторе.The recovery time of the cultured cells was confirmed using a bioreactor for mass culture and dispersion of Ruminococcus faecis . After inoculating 16 mL of precultured solution of Ruminococcus faecis into 8 L of FMK1028 medium, a bioreactor (Fermentec, Chungcheongbuk-do, Republic of Korea) was operated and cultured under anaerobic conditions at 37 °C, 250 rpm. The growth curve and number of viable cells as a function of culture time are measured and shown in FIG. 5c. In FIG. Figure 5c shows the growth curve and number of viable Ruminococcus faecis cells grown in the bioreactor.
Как показано на ФИГ. 5c, Ruminococcus faecis достиг стационарной фазы после культивирования в течение 8 часов и показал поглощение 8,25 и количество жизнеспособных клеток 5,15 × 109 КОЕ/мл. Через 11 часов после культивирования в стационарной фазе поглощение снизилось до 7,25, а количество жизнеспособных клеток немного уменьшилось и составило 4,95 × 109 КОЕ/мл. В отличие от результата стационарной культуры, представленного на ФИГ. 5b, можно подтвердить, что время достижения стационарной фазы сократилось до 8 часов в результате культивирования с использованием биореактора, а результаты измерения поглощения (6,18 → 8,25) и количества жизнеспособных клеток (1,2 × 109 КОЕ/мл → 5,15 × 109 КОЕ/мл) в стационарной фазе также улучшились по сравнению с результатом культивирования в течение 14 часов в замкнутой среде.As shown in FIG. 5c, Ruminococcus faecis reached stationary phase after culture for 8 hours and showed an absorbance of 8.25 and a viable cell count of 5.15 × 109 CFU/ml. After 11 hours of stationary phase culture, the absorbance decreased to 7.25 and the number of viable cells decreased slightly to 4.95 × 109 CFU/ml. In contrast to the stationary culture result presented in FIG. 5b, it can be confirmed that the time to reach the stationary phase was reduced to 8 hours as a result of cultivation using a bioreactor, and the measurement results of absorbance (6.18 → 8.25) and viable cell count (1.2 × 10 9 CFU/ml → 5 .15 × 10 9 CFU/ml) in the stationary phase also improved compared to the result of cultivation for 14 hours in a closed environment.
Исходя из вышеуказанного результата, Ruminococcus faecis был массово культивирован в биореакторе. Через 8 часов после культивирования клетки, культивируемые в условиях 7000 об/мин в течение 40 минут, были восстановлены с помощью высокоскоростной центрифуги 2236R (Labogene, Лиллерёд, Дания). Восстановленные клетки поместили в стакан объемом 300 мл и перемешивали с защитным агентом для сублимационной сушки в массовом соотношении 1:1 с помощью магнитного стержня и мешалки в течение 20 минут. Состав использованного защитного агента для сублимационной сушки показан ниже в таблице 4. Клетки, смешанные с защитным агентом для сублимационной сушки, заморозили в морозильной камере при сверхнизкой температуре -80 °С в течение 24 часов, подвергли сублимационной сушке в течение 72 часов, затем измельчили в мелкий порошок.Based on the above result, Ruminococcus faecis was mass cultured in the bioreactor. After 8 h of culture, cells cultured at 7000 rpm for 40 min were recovered using a 2236R high-speed centrifuge (Labogene, Lillerod, Denmark). The recovered cells were placed in a 300 ml beaker and mixed with a freeze-drying protective agent in a mass ratio of 1:1 using a magnetic bar and stirrer for 20 minutes. The composition of the freeze-drying protectant used is shown below in Table 4. The cells mixed with the freeze-drying protectant were frozen in a freezer at ultra-low temperature of -80°C for 24 hours, freeze-dried for 72 hours, then crushed into fine powder.
Таблица 4Table 4
Криопротекторные агенты (CPA)Cryoprotective agents (CPAs)
Наконец, количество жизнеспособных клеток, измеренное в процессе массового выращивания и измельчения в биореакторе, показано ниже в таблице 5.Finally, the number of viable cells measured during the mass culture and grinding process in the bioreactor is shown below in Table 5.
Таблица 5Table 5
Claims (4)
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2019-0092689 | 2019-07-30 | ||
| KR10-2020-0087105 | 2020-07-14 | ||
| KR10-2020-0095361 | 2020-07-30 | ||
| KR10-2020-0094922 | 2020-07-30 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2022102310A RU2022102310A (en) | 2023-08-28 |
| RU2810601C2 true RU2810601C2 (en) | 2023-12-27 |
Family
ID=
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017075098A1 (en) * | 2015-10-26 | 2017-05-04 | Crestovo Llc | Compositions and methods for fecal microbiota-related therapy |
| WO2018064165A2 (en) * | 2016-09-27 | 2018-04-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for enhancing immune checkpoint blockade therapy by modulating the microbiome |
| WO2018118941A1 (en) * | 2016-12-19 | 2018-06-28 | Axcella Health Inc. | Amino acid compositions and methods for the treatment of liver diseases |
| WO2018156916A2 (en) * | 2017-02-23 | 2018-08-30 | Intercept Pharmaceuticals, Inc | Pharmaceutical compositions of a bile acid derivative and microbiome and uses thereof |
| WO2019118515A2 (en) * | 2017-12-11 | 2019-06-20 | Vedanta Biosciences, Inc. | Compositions and methods for suppressing pathogenic organisms |
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017075098A1 (en) * | 2015-10-26 | 2017-05-04 | Crestovo Llc | Compositions and methods for fecal microbiota-related therapy |
| WO2018064165A2 (en) * | 2016-09-27 | 2018-04-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for enhancing immune checkpoint blockade therapy by modulating the microbiome |
| WO2018118941A1 (en) * | 2016-12-19 | 2018-06-28 | Axcella Health Inc. | Amino acid compositions and methods for the treatment of liver diseases |
| WO2018156916A2 (en) * | 2017-02-23 | 2018-08-30 | Intercept Pharmaceuticals, Inc | Pharmaceutical compositions of a bile acid derivative and microbiome and uses thereof |
| WO2019118515A2 (en) * | 2017-12-11 | 2019-06-20 | Vedanta Biosciences, Inc. | Compositions and methods for suppressing pathogenic organisms |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| OREN A., GARRITY G. M. List of new names and new combinations previously effectively, but not validly, published // International journal of systematic and evolutionary microbiology. - 2019. - Vol. 69. - No. 1. - P. 5-9. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5554994B2 (en) | Lactic acid bacteria-containing preparation | |
| TWI673057B (en) | Novel Lactobacillus paracasei strain | |
| EP3231436B1 (en) | Pharmaceutical composition for prevention or treatment of metabolic disease, comprising bacteroides acidifaciens as effective ingredient | |
| CN113736697B (en) | Bifidobacterium lactis for preventing or treating colitis and application thereof | |
| JP5203393B2 (en) | Alcoholic liver injury inhibitor | |
| TW201043151A (en) | Agent for preventing or improving obesity | |
| KR102328743B1 (en) | Food composition for preventing or improving obesity or fatty liver disease, comprising a new Pediococcus pentosaceus strain and its whey fermentation product | |
| KR102401535B1 (en) | Composition for Preventing, Improving, or Treating Liver Injury | |
| CN115074276B (en) | Clostridium praecox capable of relieving non-alcoholic fatty liver disease and application thereof | |
| US20200390829A1 (en) | Probiotics and probiotic compositions for regulating body weight | |
| WO2023066973A1 (en) | Probiotic strains for reducing blood cholesterol and/or treating dyslipidemia, and methods for using and producing the same | |
| AU2020320244B2 (en) | Composition and method for preventing, alleviating, or treating liver injury | |
| US10004769B2 (en) | Lactobacillus brevis G-101 strain and use thereof | |
| WO2015182155A1 (en) | Novel lactic acid bacterium and composition including said lactic acid bacterium | |
| RU2810601C2 (en) | Composition and method of prevention, removal of symptoms or therapeutic effect on liver damage | |
| US20190351030A1 (en) | Method for treatment of liver steatosis or non-alcoholic fatty liver by using 2-monoacylglycerol cleaving enzyme | |
| TW202317162A (en) | Use of lactobacillus fermentum strain and natural killer cells for combination therapy for suppressing weight gain and prevention or treatment of metabolic diseases | |
| KR102328742B1 (en) | Food composition for preventing or improving obesity or fatty liver disease, comprising a new Weissella sibaria strain and its whey fermentation product | |
| KR101809616B1 (en) | A probiotic strain from kefir with anti-obesity effect | |
| CA3121419A1 (en) | Phascolarctobacterium faecium for use in the prevention and treatment of obesity and its comorbidities | |
| CA2929197C (en) | Pharmaceutical composition for reducing body fat | |
| KR102293724B1 (en) | Novel Lactobacillus plantarum KNUT 0118 strain and uses thereof | |
| WO2024160988A1 (en) | Fermentation product for use in the treatment of diseases associated with metabolic syndrome and hepatic steatosis | |
| KR20240130121A (en) | Microbial community | |
| TW202400200A (en) | Composition for preventing or treating metabolic disease using combination therapy comprising lactobacilli and metabolism modulator |