RU2808299C1 - Способ повышения количества прегнан х рецептора в эксперименте in vitro - Google Patents

Способ повышения количества прегнан х рецептора в эксперименте in vitro Download PDF

Info

Publication number
RU2808299C1
RU2808299C1 RU2023106437A RU2023106437A RU2808299C1 RU 2808299 C1 RU2808299 C1 RU 2808299C1 RU 2023106437 A RU2023106437 A RU 2023106437A RU 2023106437 A RU2023106437 A RU 2023106437A RU 2808299 C1 RU2808299 C1 RU 2808299C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
receptor
pregnane
medium
followed
hours
Prior art date
Application number
RU2023106437A
Other languages
English (en)
Inventor
Юлия Владимировна Абаленихина
Алексей Владимирович Щулькин
Адамиана Аманмамедовна Сеидкулиева
Егор Дмитриевич Рокунов
Фидан Тофиковна Гаджиева
Наталья Михайловна Попова
Елена Николаевна Якушева
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Application granted granted Critical
Publication of RU2808299C1 publication Critical patent/RU2808299C1/ru

Links

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу повышения количества прегнан Х рецептора (PXR). Изобретение позволяет индуцировать количество PRX путем культивирования линии клеток аденокарциномы ободочной кишки человека в Дульбекко модифицированной среде Игла с содержанием глюкозы 4500 мг/л, содержащей L-глутамин 4 мМ, 15% бычьей сыворотки, 100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина в течение 21 суток с последующим добавлением в среду DL-бутионинсульфоксимина до достижения его концентрации в среде 100 и 500 мкМ с последующей инкубацией в течение 24 или 72 часов или 50 мкМ с последующей инкубацией в течение 72 часов. Изобретение позволяет разработать доступный и эффективный способ повышения количества прегнан Х рецептора в эксперименте in vivo. 1 ил.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к биологической химии, фармакологии и клинической фармакологии, и предназначено для индуцирования количества прегнан Х рецептора (PXR).
Прегнан Х рецептор (PXR, steroid and xenobiotic receptor - SXR, NR1I2 - Nuclear Receptor Subfamily 1, Group I, Member 2) является членом суперсемейства ядерных рецепторов и регулирует экспрессию ферментов I фазы биотрансформации (изоферментов цитохрома P450 CYP3A и CYP2B), экспрессию ферментов II фазы биотрансформации (UDP-глюкуронозилтрансферазы 1A1 и сульфотрансферазы), а также переносчиков лекарственных веществ белка множественной лекарственной устойчивости 1, Р-гликопротеина, и активность ряда ферментов углеводного и липидного обменов. Изменение количества PXR в эксперименте in vitro может применяться для изучения роли данного рецептора в фармакокинетике лекарственных веществ.
Известно, что индукторами PXR являются рифампицин, рифаксимин, ампренавир, литохолевая кислота, соломстерол A и B, дексаметазон, никардипин [Chai S.C., Lin W., Li Y., Chen T. 2019. Drug discovery technologies to identify and characterize modulators of the pregnane X receptor and the constitutive androstane receptor. Drug Discov Today. 24 (3), 906-915.], пероксид водорода [Абаленихина Ю.В., Судакова Е.А., Слепнев А.А., Сеидкулиева А.А., Ерохина П.Д., Щулькин А.В., Якушева Е.Н. (2022) Функционирование прегнан Х рецептора в условиях окислительного стресса. Биологические мембраны. 39 (2). 107-115.].
Техническим результатом настоящего изобретения является разработка доступного и эффективного способа повышения количества прегнан Х рецептора в эксперименте in vitro.
С данной целью было выполнено исследование на линии клеток аденокарциномы ободочной кишки человека (Caco-2) (ЦКП «Коллекция культур клеток позвоночных», Санкт-Петербург, Россия).
Клетки линии Caco-2 культивировали при 37°С и 5% содержании СО2 в Дульбекко модифицированной среде Игла (DMEM) с высоким содержанием глюкозы (4500 мг/л) («Sigma-Aldrich», Германия), содержащей L-глутамин (4 мМ) («Sigma-Aldrich», Германия), 15% эмбриональной бычьей сыворотки («Sigma-Aldrich», Германия), 100 ЕД/мл и 100 мкг/мл пенициллина и стрептомицина («SigmaAldrich», Германия) соответственно. После достижения 70-90% конфлюентности клетки снимали с флакона добавлением раствора трипсин-ЭДТА (0,25% трипсина и 0,2% ЭДТА, «Sigma-Aldrich», Германия) и высеивали в 6- луночные планшеты («Corning», США). После образования монослоя клетки использовали в экспериментах.
Для активации PXR в культуральную среду добавляли DL-бутионинсульфоксимин (БСО) («Sigma-Aldrich», Германия) до достижения его концентрации 1, 5, 10, 50, 100 и 500 мкМ и инкубировали 24 и 72 часов. На каждый эксперимент было выполнено по 3 повторения. Контрольным клеткам в эквивалентном объеме в культуральную среду добавляли воду для инъекций.
После окончания экспозиции клетки снимали с лунок раствором трипсин-ЭДТА (Sigma-Aldrich), трижды промывали раствором фосфатного буфера (BioRad, США) и лизировали в NP40 Cell Lysis Buffer Thermo (Thermo Fisher Scientific, США) c добавлением смеси ингибиторов протеиназ (Sigma-Aldrich) в течение 30 минут при +4°С и постоянном перемешивании из расчета 107 клеток на 100 мкл буфера. Полученный лизат центрифугировали при 13000 об/мин в течение 10 минут (AvantiJXN-3, Beckmancoulter, США). В супернатанте определяли относительное количество PXR с помощью метода вестерн-блот.
Полученные результаты анализировали с помощью программного обеспечения GraphPad Prism 8. Результаты представлены в виде среднее значение ± стандартное отклонение (M±SD). Для оценки статистической значимости различий использовали дисперсионный анализ (ANOVA), попарные сравнения выполняли с помощью теста Даннетта. Статистически значимыми считали различия при p<0,05.
Установлено, что относительное количество PXR при инкубации в течение 24 ч и концентрациях БСО 100 и 500 мкМ статистически значимо возрастало на 33,6% (р<0,0001) и 40,5 (р<0,0001) соответственно (Фиг. 1), а при инкубации 72 ч и концентрациях БСО 50, 100 и 500 мкМ на 26,4% (р=0,047), 41,5% (р=0,002) и 36,5% (р=0,06) (Фиг. 1). Другие концентрации БСО не влияли на количество PXR в клетках.
Краткое описание чертежей.
Фиг.1. Относительное количество PXR в клетках линии Сасо-2 в норме (1) и при индукции воздействии D,L-бутионинсульфоксимина в концентрациях 1-500 мкМ (2-7) в течение 24 (А) и 72ч (Б) (M±SD, n=3).
Примечание: * - р<0,05; ** - р≤0,01; **** - р≤0,0001 статистически значимые отличия от показателей контроля.
Таким образом, для повышения количества PXR в клетках аденокарциномы ободочной кишки человека необходимо добавление в Дульбекко модифицированную среду Игла DL-бутионинсульфоксимина до достижения его концентрации в среде 100 и 500 мкМ с последующей инкубацией в течение 24 или 72 часов или 50 мкМ с последующей инкубацией в течение 72 часов.
Способ был использован при изучении фармакокинетики лекарственных веществ - субстратов MDR1 в трех экспериментах.

Claims (1)

  1. Способ повышения количества прегнан Х рецептора, включающий культивирование линии клеток аденокарциномы ободочной кишки человека в Дульбекко модифицированной среде Игла с содержанием глюкозы 4500 мг/л, содержащей L-глутамин 4 мМ, 15% бычьей сыворотки, 100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина в течение 21 суток, отличающийся последующим добавлением в среду DL-бутионинсульфоксимина до достижения его концентрации в среде 100 или 500 мкМ с последующей инкубацией в течение 24 или 72 часов или 50 мкМ с последующей инкубацией в течение 72 часов.
RU2023106437A 2023-03-19 Способ повышения количества прегнан х рецептора в эксперименте in vitro RU2808299C1 (ru)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2808299C1 true RU2808299C1 (ru) 2023-11-29

Family

ID=

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2604067C2 (ru) * 2010-05-13 2016-12-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Пептиды глюкагонового суперсемейства, обладающие активностью относительно ядерных гормональных рецепторов
RU2762046C1 (ru) * 2021-06-11 2021-12-15 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ снижения количества прегнан х рецептора
RU2762853C1 (ru) * 2021-06-11 2021-12-23 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федераци Способ повышения количества прегнан х рецептора
RU2779177C1 (ru) * 2021-11-18 2022-09-05 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ ингибирования гликопротеина-р в эксперименте in vitro

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2604067C2 (ru) * 2010-05-13 2016-12-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Пептиды глюкагонового суперсемейства, обладающие активностью относительно ядерных гормональных рецепторов
RU2762046C1 (ru) * 2021-06-11 2021-12-15 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ снижения количества прегнан х рецептора
RU2762853C1 (ru) * 2021-06-11 2021-12-23 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федераци Способ повышения количества прегнан х рецептора
RU2779177C1 (ru) * 2021-11-18 2022-09-05 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ ингибирования гликопротеина-р в эксперименте in vitro

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ЯКУШЕВА Е.Н., ТИТОВ Д.С. Структура и функционирование белка множественной лекарственной устойчивости 1. Биохимия (Москва). 2018. Т. 83. 8. DOI: 10.1134/S0320972518080043 (см. с. 907-929). *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Chen et al. LncRNA NEAT1 promotes hepatic lipid accumulation via regulating miR-146a-5p/ROCK1 in nonalcoholic fatty liver disease
Song et al. The role of microRNA-26b in human adipocyte differentiation and proliferation
Young et al. Steroid induction of mouse mammary tumor virus: effect upon synthesis and degradation of viral RNA
Ménard et al. Modulation of L-type calcium channel expression during retinoic acid-induced differentiation of H9C2 cardiac cells
Shin et al. NRF2 modulates aryl hydrocarbon receptor signaling: influence on adipogenesis
Chen et al. Low dose of oleanolic acid protects against lithocholic acid–induced cholestasis in mice: Potential involvement of nuclear factor-E2-related factor 2-mediated upregulation of multidrug resistance-associated proteins
Lin et al. MicroRNAs synergistically regulate milk fat synthesis in mammary gland epithelial cells of dairy goats
Tosh et al. Differentiated properties of hepatocytes induced from pancreatic cells
Sharma et al. GPER/GPR30 knockout mice: effects of GPER on metabolism
Wu et al. Lipogenesis in myoblasts and its regulation of CTRP6 by AdipoR1/Erk/PPARγ signaling pathway
Yang et al. NRSF silencing induces neuronal differentiation of human mesenchymal stem cells
Yi et al. MicroRNA-193-5p modulates angiogenesis through IGF2 in type 2 diabetic cardiomyopathy
Hall et al. Influence of follicle-stimulating hormone on glucose transport by cultured Sertoli cells
RU2808299C1 (ru) Способ повышения количества прегнан х рецептора в эксперименте in vitro
Wang et al. Opposing effects of IL-1β/COX-2/PGE2 pathway loop on islets in type 2 diabetes mellitus
Saran et al. Novel bile acid-dependent mechanisms of hepatotoxicity associated with tyrosine kinase inhibitors
Sandberg et al. Glucose-induced lipogenesis in pancreatic β-cells is dependent on SREBP-1
EP1721967A1 (en) Method of differentiating mesenchymal stem cells into steroid-producing cells
Yang et al. Folic acid promotes proliferation and differentiation of porcine pancreatic stem cells into insulin-secreting cells through canonical Wnt and ERK signaling pathway
Zhang et al. Alpha lipoamide inhibits diabetic kidney fibrosis via improving mitochondrial function and regulating RXRα expression and activation
Luo et al. Tent5a modulates muscle fiber formation in adolescent idiopathic scoliosis via maintenance of myogenin expression
Zhou et al. Knocking down Stard3 decreases adipogenesis with decreased mitochondrial ROS in 3T3-L1 cells
Trejo‐Tapia et al. Monoterpenoid oxindole alkaloid production by Uncaria tomentosa (Willd) DC cell suspension cultures in a stirred tank bioreactor
RU2762853C1 (ru) Способ повышения количества прегнан х рецептора
Wang et al. Protective effect of erythropoietin against aristolochic acid-induced apoptosis in renal tubular epithelial cells