RU2798991C1

RU2798991C1 - Method of modeling loaded metabolism with combined subchronic exposure to heavy metals

Info

Publication number: RU2798991C1
Application number: RU2022132779A
Authority: RU
Inventors: Ольга Владимировна Маршинская; Татьяна Витальевна Казакова; Шамиль Гафиуллович Рахматуллин
Filing date: 2022-12-14
Publication date: 2023-06-30

Abstract

FIELD: experimental biology, ecology, toxicology.

SUBSTANCE: invention is a method of modeling loaded metabolism with combined subchronic exposure to heavy metals. The method includes the introduction of cadmium chloride CdCl₂ at a dosage of 7.5 mg/l, manganese chloride MnCl₂ at a dosage of 2.5 mg/l and lead acetate Pb(CH₃COO)₂ × 3H₂O into drinking water into adult male Wistar rats at a dosage of 25 mg/l for 30 days.

EFFECT: use of the invention will reduce the course of the metabolic processes of the body with the combined action of heavy metals, in particular cadmium, manganese and lead.

1 cl, 4 dwg, 2 tbl, 1 ex

Description

Изобретение относится к экспериментальной биологии, экологии, токсикологии и может быть использовано при исследовании сочетанного действия тяжелых металлов, в частности, кадмия, марганца и свинца на функциональное состояние организма.The invention relates to experimental biology, ecology, toxicology and can be used in the study of the combined effect of heavy metals, in particular cadmium, manganese and lead on the functional state of the body.

В мировом масштабе загрязнение окружающей среды тяжелыми металлами продолжает расти и воздействие на человека и животных через воздух, продукты питания или питьевую воду становится все более глобальным явлением. Наибольшую потенциальную опасность для здоровья населения промышленно развитых городов представляет собой низкоуровневое сочетанное воздействие тяжёлых металлов. Как известно, такие металлы, как кадмий, свинец и марганец являются одними из наиболее опасных токсикантов окружающей среды, способных оказывать канцерогенное, мутагенное, тератогенное или невротоксичное действие на живой организм [1]. Экспериментальные и эпидемиологические исследования указывают на то, что последствия многофакторного влияния, вызванные несколькими тяжелыми металлами, могут сильно отличаться от эффектов, возникающих на фоне однофакторной токсической экспозиции [2-4]. Рядом авторов сообщалось о синергетических, аддитивных и антагонистических взаимодействиях между металлами [5, 6].On a global scale, environmental pollution by heavy metals continues to grow and exposure to humans and animals through air, food or drinking water is becoming an increasingly global phenomenon. The greatest potential health hazard in industrialized cities is low-level combined exposure to heavy metals. As is known, metals such as cadmium, lead, and manganese are among the most dangerous environmental toxicants that can have a carcinogenic, mutagenic, teratogenic, or neurotoxic effect on a living organism [1]. Experimental and epidemiological studies indicate that the effects of multifactorial exposure caused by several heavy metals can be very different from the effects that occur against the background of a single-factor toxic exposure [2-4]. A number of authors have reported synergistic, additive, and antagonistic interactions between metals [5, 6].

Таким образом, оценка комбинированных эффектов, вызванных путем одновременного воздействия малых доз нескольких металлов, имеет большое теоретическое значение и практическую ценность для разработки профилактических и терапевтических мер. В связи с этим, необходима разработка способов моделирования «нагруженного метаболизма», наиболее приближенных к реальным условиям. Следует отметить, что в большинстве экспериментальных исследований, как правило, используют высокие дозы отдельных ксенобиотиков, что значительно отличается от естественных концентраций и путей поступления в организм [7, 8]. Однако исследования с использованием низкоуровневого воздействия комбинации тяжелых металлов становятся все более актуальными и приближенными к реальному воздействию [9-11].Thus, the assessment of combined effects caused by simultaneous exposure to low doses of several metals is of great theoretical importance and practical value for the development of preventive and therapeutic measures. In this regard, it is necessary to develop methods for modeling "loaded metabolism" that are closest to real conditions. It should be noted that in most experimental studies, as a rule, high doses of individual xenobiotics are used, which differs significantly from natural concentrations and routes of entry into the body [7, 8]. However, studies using low-level exposure to a combination of heavy metals are becoming more relevant and close to real exposure [9-11].

Патентный поиск свидетельствует об отсутствии способов моделирования «нагруженного метаболизма» при сочетанном субхроническом воздействии тяжелых металлов. Существующие патенты, как правило, направлены на моделирование различных патологий (коагулопатии, ангиопатии, нефропатии, энцефалопатии) путем токсического воздействия ряда тяжелых металлов [12-14].Patent search indicates the absence of methods for modeling "loaded metabolism" with combined subchronic exposure to heavy metals. Existing patents, as a rule, are aimed at modeling various pathologies (coagulopathy, angiopathy, nephropathy, encephalopathy) through the toxic effects of a number of heavy metals [12-14].

Известен способ моделирования хронической токсической нефропатии, который достигается путем ежедневного введения лабораторным животным с помощью внутрижелудочного зонда ацетата свинца в дозе 40 мг/кг веса в пересчете на металл, где на единицу раствора, равную 0,2 мл, приходится 8 мг свинца, что приводит к выраженным изменениям в структуре почечной ткани [15].A known method of modeling chronic toxic nephropathy, which is achieved by daily administration of lead acetate to laboratory animals using an intragastric probe at a dose of 40 mg/kg of weight in terms of metal, where 8 mg of lead per solution unit equal to 0.2 ml, which leads to to pronounced changes in the structure of the renal tissue [15].

Недостатком данного способа является выбор вводимой дозы препарата животным. При ежедневном введении ацетата свинца (40 мг/кг) в течение 16 дней дозировка токсиканта достигает примерно 1/7ЛД_50,что является достаточной высокой дозой для организма грызунов, вызывая токсическое отравление.The disadvantage of this method is the choice of the administered dose of the drug to animals. With daily administration of lead acetate (40 mg/kg) for 16 days, the dosage of the toxicant reaches approximately 1/7 LD _50, which is a high enough dose for the organism of rodents, causing toxic poisoning.

Известен способ моделирования ангиопатии у экспериментальных животных. Данный способ заключается в том, что животным вводят раствор сульфата кадмия подкожно ежедневно 1 раз в сутки в течение 1 месяца в дозах 0,8, 1,0 или 1,5 мг/кг веса животного в пересчете на металл, где на единицу раствора, равную 0,1 мл, приходится 0,08, 0,1 или 0,15 мг кадмия, что приводит к развитию хронической кадмиевой ангиопатии [16].A known method of modeling angiopathy in experimental animals. This method consists in the fact that the animals are injected with a solution of cadmium sulfate subcutaneously daily 1 time per day for 1 month at doses of 0.8, 1.0 or 1.5 mg/kg of animal weight in terms of metal, where per unit of solution, equal to 0.1 ml, accounts for 0.08, 0.1 or 0.15 mg of cadmium, which leads to the development of chronic cadmium angiopathy [16].

Главным недостатком данного способа является подкожный метод введения соли сульфата кадмия. Во-первых, данный способ воздействия является менее физиологичным, а во-вторых, повторные инъекции в одно и то же место вызывают атрофию жировой ткани, что приводит к нарушению абсорбции препарата. Следует отметить, что пероральное поступление токсического вещества (введение в питьевую воду, внутрижелудочное введение) является наиболее приближенным к естественным условиям интоксикации при загрязнении окружающей среды металлополютантами.The main disadvantage of this method is the subcutaneous method of introducing salts of cadmium sulfate. Firstly, this method of exposure is less physiological, and secondly, repeated injections in the same place cause atrophy of adipose tissue, which leads to impaired absorption of the drug. It should be noted that the oral intake of a toxic substance (introduction into drinking water, intragastric administration) is the closest to the natural conditions of intoxication when the environment is polluted with metal pollutants.

Представленные модели в целом могут быть использованы для изучения уже сложившегося конкретного заболевания, однако они не являются показательными для изучения состояния предпатологии.The presented models in general can be used to study the already existing specific disease, but they are not indicative for studying the state of pre-pathology.

Технической задачей предлагаемого изобретения является максимальное приближение разработанной модели «нагруженного метаболизма» к низкоуровневому воздействию тяжелых металлов на организм человека в условиях загрязнения окружающей среды.The technical objective of the proposed invention is the maximum approximation of the developed model of "loaded metabolism" to the low-level effects of heavy metals on the human body in conditions of environmental pollution.

Данная модель даст возможность изучить состояние гомеостатических механизмов, а также апробировать в данной модели возможные эффективные профилактические и терапевтические меры.This model will provide an opportunity to study the state of homeostatic mechanisms, as well as to test possible effective preventive and therapeutic measures in this model.

Техническая задача достигается тем, что способ моделирования «нагруженного метаболизма» осуществляется путем сочетанного субхронического воздействия тяжелых металлов.The technical problem is achieved by the fact that the method of modeling "loaded metabolism" is carried out by combined subchronic exposure to heavy metals.

Способ реализован следующим образом.The method is implemented as follows.

С целью моделирования хронического низкоуровневого сочетанного воздействия тяжелых металлов крысы получали вместе с питьевой водой соль кадмия (CdCl₂) в дозировке 7,5 мг/л, марганца (MnCl₂) в дозировке 2,5 мг/л и свинца (Pb(CH₃COO)₂ х 3H₂O в дозировке 25 мг/л. Указанные дозировки в пересчете на концентрацию металла составляли Cd - 4,59 мг/л, Mn - 1,09 мг/л и Pb - 13,65 мг/л. Длительность воздействия составляла 30 дней. Все животные на протяжении эксперимента получали стандартный рацион в виде гранулированного комбикорма.In order to simulate chronic low-level combined exposure to heavy metals, rats received together with drinking water cadmium salt (CdCl ₂ ) at a dosage of 7.5 mg/l, manganese (MnCl ₂ ) at a dosage of 2.5 mg/l and lead (Pb(CH ₃ COO) ₂ x 3H ₂ O at a dosage of 25 mg/l.The indicated dosages in terms of metal concentration were Cd - 4.59 mg/l, Mn - 1.09 mg/l and Pb - 13.65 mg/l. exposure was 30 days.All animals during the experiment received a standard diet in the form of granulated feed.

В ходе эксперимента у животных ежедневно оценивалось потребление воды, еженедельно масса тела. По окончании эксперимента проводилась оценка поведения с помощью тестов «Открытое поле» и «Черно-белая камера»; проводился гематологический и биохимический анализ крови на приборах URIT-2900 Vet Plus (Китай) и CS-T240 (Китай), соответственно; оценка элементного статуса с помощью масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой.During the experiment, the animals were assessed daily water intake, weekly body weight. At the end of the experiment, behavior was assessed using the Open Field and Black and White Camera tests; hematological and biochemical blood tests were performed using URIT-2900 Vet Plus (China) and CS-T240 (China), respectively; elemental status assessment using inductively coupled plasma mass spectrometry.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета программ «STATISTICA 10.0» (StatSoft) и Microsoft Excel 2016. Данные представлены в виде медианы (Me) и 25-75 центилей. Для оценки статистической значимости различий в группах животных использовали непараметрический U-критерий Манна-Уитни. Различия считались достоверными при р<0,05.Statistical processing of the obtained results was carried out using the STATISTICA 10.0 software package (StatSoft) and Microsoft Excel 2016. The data are presented as a median (Me) and 25-75 centiles. The nonparametric Mann-Whitney U-test was used to assess the statistical significance of differences in groups of animals. Differences were considered significant at p<0.05.

Пример. Половозрелые самцы крыс линии Wistar весом 210 ± 20 г вместе с питьевой водой в течение 30 дней получали соль кадмия (CdCl₂) в дозировке 7,5 мг/л, марганца (MnCl₂) в дозировке 2,5 мг/л и свинца (Pb(CH₃COO)₂ х 3H₂O в дозировке 25 мг/л. По истечении времени эксперимента у животных оценивалось функциональное состояние организма, включавшее анализ потребления воды, массы тела, поведения, гематологических и биохимических показателей крови, элементного статуса организма.Example. Sexually mature male Wistar rats weighing 210 ± 20 g, along with drinking water for 30 days, received cadmium salt (CdCl ₂ ) at a dosage of 7.5 mg/l, manganese (MnCl ₂ ) at a dosage of 2.5 mg/l and lead ( Pb (CH ₃ COO) ₂ x 3H ₂ O at a dosage of 25 mg/l After the expiration of the experiment, the functional state of the organism was assessed in animals, including the analysis of water consumption, body weight, behavior, hematological and biochemical parameters of blood, elemental status of the body.

Результаты исследования показали, что крысы, получавшие низкие дозы тяжелых металлов статистически значимо потребляли меньше воды, чем интактные животные (табл. 1). В связи с этим, возможно, что подопытные животные были слегка обезвожены. Масса тела животных, получавших смесь металлов, практически не отличалась от веса животных контрольной группы в течение всего эксперимента. При рассмотрении массовых коэффициентов внутренних органов животных было установлено, что относительный вес печени был достоверно выше в группе крыс, подвергшихся комбинированному низкоуровневому воздействию металлов на 10 % (р=0,03). В отношении других органов (почки, легкие, мозг, сердце, селезенка) отличий от контрольных значений выявлено не было.The results of the study showed that rats treated with low doses of heavy metals consumed significantly less water than intact animals (Table 1). In this regard, it is possible that the experimental animals were slightly dehydrated. The body weight of animals treated with a mixture of metals did not practically differ from the weight of animals in the control group during the entire experiment. When considering the mass coefficients of the internal organs of animals, it was found that the relative weight of the liver was significantly higher in the group of rats exposed to combined low-level exposure to metals by 10% (p=0.03). For other organs (kidneys, lungs, brain, heart, spleen), no differences from control values were found.

В ходе поведенческого анализа было установлено увеличение горизонтальной двигательной активности (ГДА) лабораторных животных опытной группы при сравнении с контролем: уровень ГДА по периферии был статистически значимо больше контрольных значений на 50 % (р=0,01), так же отмечалась тенденция к увеличению ГДА полупериферии и ГДА в центральной области арены. Следует отметить, что суммарная ГДА была достоверно выше в опыте на 67 % (р=0,05) (фигура 1). У животных, подвергшихся воздействию металлов, отмечалось также увеличение вертикальной двигательной активности (ВДА), что характеризовалось достоверно более высоким уровнем ВДА с опорой на 100 % относительно контроля (р=0,05) (фигура 2). Уровень эмоционального напряжения у животных опытной группы был выше относительно контроля. Это сопровождалось статистически достоверно более высокой частотой длинного и суммарного груминга - на 100 % (р=0,003) и 500 % (р=0,02) выше контроля, соответственно. Также отмечалась тенденция к увеличению актов дефекации у животных, подвергавшихся комбинированному воздействию металлов (фигура 3).In the course of the behavioral analysis, an increase in horizontal motor activity (HMA) was found in laboratory animals of the experimental group when compared with the control: the level of HMA in the periphery was statistically significantly higher than the control values by 50% (p=0.01), and there was also a tendency to increase in HMA semi-periphery and GDA in the central area of the arena. It should be noted that the total HDA was significantly higher in the experiment by 67% (p=0.05) (figure 1). In animals exposed to metals, there was also an increase in vertical locomotor activity (VMA), which was characterized by a significantly higher level of VMA based on 100% relative to control (p=0.05) (figure 2). The level of emotional stress in the animals of the experimental group was higher relative to the control. This was accompanied by a statistically significantly higher frequency of long and total grooming - 100% (p=0.003) and 500% (p=0.02) higher than the control, respectively. There was also a tendency to increase the acts of defecation in animals exposed to the combined effects of metals (figure 3).

Согласно полученным результатам у животных опытной группы был установлен статистически достоверно более низкий уровень эритроцитов (ниже на 10 % при р=0,05) и гемоглобина (ниже на 6 % при р=0,01), а также отмечалась тенденция к снижению уровня лейкоцитов (таблица 2). Практически все изучаемые биохимические параметры крови не отличались от контрольных значений и находились в пределах рекомендуемых норм. Исключением явилось содержание мочевины, уровень, который был достоверно выше у животных опытной группы на 28 % (р=0,02) относительно контроля.According to the results obtained in the animals of the experimental group, a statistically significantly lower level of erythrocytes (lower by 10% at p=0.05) and hemoglobin (lower by 6% at p=0.01) was established, and there was also a tendency to decrease in the level of leukocytes. (table 2). Almost all the studied biochemical blood parameters did not differ from the control values and were within the recommended limits. An exception was the content of urea, the level, which was significantly higher in the animals of the experimental group by 28% (p=0.02) relative to the control.

В ходе проведенного анализа установлено статистически достоверно более высокая концентрация свинца в сыворотке крови лабораторных животных, подвергшихся низкоуровневому сочетанному воздействию металлов, превышающая контрольные значения более чем в 4 раза (р=0,04) (фигура 4). На фоне этого также отмечалось достоверно более высокое содержание сывороточного кадмия (выше более чем в 3 раза при р=0,002), прослеживалась тенденция к повышению уровня марганца.In the course of the analysis, a statistically significantly higher concentration of lead in the blood serum of laboratory animals exposed to low-level combined exposure to metals was found, exceeding the control values by more than 4 times (p=0.04) (figure 4). Against this background, a significantly higher content of serum cadmium was also noted (more than 3 times higher at p=0.002), there was a tendency to increase the level of manganese.

Таким образом, можно сделать заключение, что предложенный способ является патентоспособными и может быть использован для моделирования «нагруженного метаболизма» при сочетанном субхроническом воздействии тяжелых металлов.Thus, it can be concluded that the proposed method is patentable and can be used to model "loaded metabolism" with combined subchronic exposure to heavy metals.

Источники информацииInformation sources

1. Katsnelson B.A. Further development of the theory and mathematical description of combined toxicity: An approach to classifying types of action of three-factorial combinations (a case study of manganese-chromium-nickel subchronic intoxication) / B.A. Katsnelson, V.G. Panov, I.A. Minigaliyeva, A.N. Varaksin, L.I. Privalova, T.V. Slyshkina, S.V. Grebenkina // Toxicology. - 2015. - № 334. - Р. 33-44.1. Katsnelson B.A. Further development of the theory and mathematical description of combined toxicity: An approach to classifying types of action of three-factorial combinations (a case study of manganese-chromium-nickel subchronic intoxication) / B.A. Katsnelson, V.G. Panov, I.A. Minigaliyeva, A.N. Varaksin, L.I. Privalova, T.V. Slyshkina, S.V. Grebenkina // Toxicology. - 2015. - No. 334. - R. 33-44.

2. Zhou F. Toxicity assessment due to prenatal and lactational exposure to lead, cadmium and mercury mixtures / F. Zhou, G. Yin, Y. Gao, D. Liu, J. Xie, L. Ouyang, Y. Fan, H. Yu, Z. Zha, K. Wang, L. Shao, C. Feng, G. Fan // Environment International. - 2019. - № 133. - Р. 105192.2. Zhou F. Toxicity assessment due to prenatal and lactational exposure to lead, cadmium and mercury mixtures / F. Zhou, G. Yin, Y. Gao, D. Liu, J. Xie, L. Ouyang, Y. Fan, H Yu, Z. Zha, K. Wang, L. Shao, C. Feng, G. Fan // Environment International. - 2019. - No. 133. - R. 105192.

3. Oladipo O.O. Dyslipdemia induced by chronic low dose co-exposure to lead, cadmium and manganese in rats: the role of oxidative stress / O.O. Oladipo, J.O. Ayo, S.F. Ambali, B. Mohammed, T. Aluwong // Environmental Toxicology and Pharmacology. - 2017. - № 53. - Р. 199-205.3. Oladipo O.O. Dyslipdemia induced by chronic low dose co-exposure to lead, cadmium and manganese in rats: the role of oxidative stress / O.O. Oladipo, J.O. Ayo, S.F. Ambali, B. Mohammed, T. Aluwong // Environmental Toxicology and Pharmacology. - 2017. - No. 53. - R. 199-205.

4. Lee M.S. Umbilical Cord Blood Metal Mixtures and Birth Size in Bangladeshi Children / M.S. Lee, K.D. Eum, M. Golam, Q. Quamruzzaman, M.L. Kile, M. Mazumdar, D.C. Christiani // Environmental Health Perspectives. - 2021. - V. 129. - № 5. - Р. 57006.4. Lee M.S. Umbilical Cord Blood Metal Mixtures and Birth Size in Bangladeshi Children / M.S. Lee, K.D. Eum, M. Golam, Q. Quamruzzaman, M.L. Kile, M. Mazumdar, D.C. Christiani // Environmental Health Perspectives. - 2021. - V. 129. - No. 5. - R. 57006.

5. Lu C. Toxicity interactions between manganese (Mn) and lead (Pb) or cadmium (Cd) in a model organism the nematode C. elegans / C. Lu, K.R. Svoboda, K.A. Lenz, C. Pattison, H. Ma // Environmental Science and Pollution Research. - 2018. - V. 25. - № 16. - Р.15378-15389.5. Lu C. Toxicity interactions between manganese (Mn) and lead (Pb) or cadmium (Cd) in a model organism the nematode C. elegans / C. Lu, K.R. Svoboda, K.A. Lenz, C. Pattison, H. Ma // Environmental Science and Pollution Research. - 2018. - V. 25. - No. 16. - Р.15378-15389.

6. Zhu H. Biochemical and histopathological effects of subchronic oral exposure of rats to a mixture of five toxic elements / H. Zhu, Y. Jia, H. Cao, F. Meng, X. Liu // Food and Chemical Toxicology. - 2014. - № 71. - Р. 166-175.6. Zhu H. Biochemical and histopathological effects of subchronic oral exposure of rats to a mixture of five toxic elements / H. Zhu, Y. Jia, H. Cao, F. Meng, X. Liu // Food and Chemical Toxicology. - 2014. - No. 71. - R. 166-175.

7. Аndjelkovic M. Toxic Effect of Acute Cadmium and Lead Exposure in Rat Blood, Liver, and Kidney / M. Аndjelkovic, A. Buha Djordjevic, E. Antonijevic, B. Antonijevic, M. Stanic, J. Kotur-Stevuljevic, V. Spasojevic-Kalimanovska, M. Jovanovic, N. Boricic, D. Wallace, Z. Bulat / International Journal of Environmental Research and Public Health. - 2019. - V. 16. - № 2. - Р. 274.7. Andjelkovic M. Toxic Effect of Acute Cadmium and Lead Exposure in Rat Blood, Liver, and Kidney / M. Andjelkovic, A. Buha Djordjevic, E. Antonijevic, B. Antonijevic, M. Stanic, J. Kotur-Stevuljevic, V Spasojevic-Kalimanovska, M. Jovanovic, N. Boricic, D. Wallace, Z. Bulat / International Journal of Environmental Research and Public Health. - 2019. - V. 16. - No. 2. - R. 274.

8. Lebedová, J. Impact of acute and subchronic inhalation exposure to PbO nanoparticles on mice / J. Lebedová, Z. Nováková, Z. Večeřa, M. Buchtová, J. Dumková, B. Dočekal, L. Bláhová, P. Mikuška, I. Míšek, A. Hampl, K. Hilscherová // Nanotoxicology. - 2018. - V. 12. - № 4. - Р. 290-304.8. Lebedová, J. Impact of acute and subchronic inhalation exposure to PbO nanoparticles on mice / J. Lebedová, Z. Nováková, Z. Večera, M. Buchtová, J. Dumková, B. Dočekal, L. Bláhová, P. Mikuška , I. Míšek, A. Hampl, K. Hilscherová // Nanotoxicology. - 2018. - V. 12. - No. 4. - R. 290-304.

9. Казакова Т.В. Суммарное накопление тяжелых металлов - микроэлементов в шерсти в связи с молочной продуктивностью коров / Т.В. Казакова, Маршинская О.В., Мирошников С.А., Нотова С.В., Завьялов О.А., Фролов А.Н., Тяпугин Е.А. // Животноводство и кормопроизводство. - 2020. - Т.103. - № 2. - С. 8-15.9. Kazakova T.V. Total accumulation of heavy metals - microelements in wool in connection with the milk productivity of cows / T.V. Kazakova, Marshinskaya O.V., Miroshnikov S.A., Notova S.V., Zavyalov O.A., Frolov A.N., Tyapugin E.A. // Animal husbandry and fodder production. - 2020. - T.103. - No. 2. - S. 8-15.

10. Miroshnikov S. The total accumulation of heavy metals in body in connection with the dairy productivity of cows / S. Miroshnikov, S. Notova, T. Kazakova, O. Marshinskaia // Environmental Science and Pollution Research. - 2021. - V. 28. - № 36. - Р. 49852-49863.10. Miroshnikov S. The total accumulations of heavy metals in the body in connection with the dairy productivity of cows / S. Miroshnikov, S. Notova, T. Kazakova, O. Marshinskaia // Environmental Science and Pollution Research. - 2021. - V. 28. - No. 36. - R. 49852-49863.

11. Jia Q. Analysis of search strategies for evaluating low-dose heavy metal mixture induced cognitive deficits in rats: An early sensitive toxicological approach / Q. Jia, Y. Zhang, S. Liu, Z. Li, F. Zhou, L. Shao, C. Feng, G. Fan // Ecotoxicology and environmental safety. - 2020. - № 202. - Р. 110900.11. Jia Q. Analysis of search strategies for evaluating low-dose heavy metal mixture induced cognitive deficits in rats: An early sensitive toxicological approach / Q. Jia, Y. Zhang, S. Liu, Z. Li, F. Zhou, L Shao, C. Feng, G. Fan // Ecotoxicology and environmental safety. - 2020. - No. 202. - R. 110900.

12. Патент на изобретение RU № 2746831 Способ моделирования хронической коагулопатии у животных в эксперименте / Э.М. Гаглоева, В.Б. Брин // Заявка 2020101224 от 10.01.2020, опубл. 21.04.2021, бюл. № 12.12. Patent for invention RU No. 2746831 Method for modeling chronic coagulopathy in animals in experiment / E.M. Gagloeva, V.B. Brin // Application 2020101224 dated 01/10/2020, publ. 04/21/2021, bul. No. 12.

13. Патент на изобретение RU № 2286607 Способ моделирования хронической токсической нефропатии / Л.Р. Датиева, Ф.С. Дзугкоева // Заявка 2005109451 от 01.04.2005, опубл. 27.10.2006, бюл. № 30.13. Patent for invention RU No. 2286607 Method for modeling chronic toxic nephropathy / L.R. Datieva, F.S. Dzugkoeva // Application 2005109451 dated 04/01/2005, publ. 27.10.2006, bul. No. 30.

14. Патент на изобретение RU № 2341828 Способ моделирования отдаленной токсической энцефалопатии / Л.М. Соседова, Н.Л. Якимова, Г.Д. Хамуев, Е.А. Титов, В.С. Рукавишников // Заявка 2007116507 от 02.05.2007, опубл. 20.12.2008, бюл. № 35.14. Patent for invention RU No. 2341828 Method for modeling distant toxic encephalopathy / L.M. Sosedova, N.L. Yakimova, G.D. Khamuev, E.A. Titov, V.S. Rukavishnikov // Application 2007116507 dated 05/02/2007, publ. December 20, 2008, bul. No. 35.

15. Патент на изобретение RU № 2358327 Способ моделирования хронической токсической нефропатии / А.К. Митциев, В.Б. Брин // Заявка 2008108864 от 06.03.2008, опубл. 10.06.2009, бюл. № 16.15. Patent for invention RU No. 2358327 Method for modeling chronic toxic nephropathy / A.K. Mitsiev, V.B. Brin // Application 2008108864 dated 03/06/2008, publ. 06/10/2009, bul. No. 16.

16. Патент на изобретение RU № 2454731 Способ моделирования кадмиевой ангиопатии у экспериментальных животных при хроническом отравлении / Ж.Р. Битарова, Ф.С. Дзугкоева // Заявка 2011101273 от 12.01.2011, опубл. 27.06.2012, бюл. № 18.16. Patent for invention RU No. 2454731 Method for modeling cadmium angiopathy in experimental animals in chronic poisoning / Zh.R. Bitarova, F.S. Dzugkoeva // Application 2011101273 dated 01/12/2011, publ. 06/27/2012, bul. No. 18.

Таблица 1Table 1 ПоказателиIndicators ГруппыGroups ДостоверностьReliability контрольcontrol опытexperience рR Количество потребляемой воды, мл/сутThe amount of water consumed, ml / day 27,0 (25,0-34,0)27.0 (25.0-34.0) 20,0 (17,0-26,0)20.0 (17.0-26.0) 0,030.03 Масса печени, гWeight of the liver, g 3,72 (3,6-3,86)3.72 (3.6-3.86) 4,08 (3,84-4,39)4.08 (3.84-4.39) 0,030.03

Таблица 2table 2 ПоказателиIndicators ГруппыGroups ДостоверностьReliability контрольcontrol опытexperience рR WBC, 10⁹/лWBC, 10 ⁹ /l 10,8 (9,98-11,84)10.8 (9.98-11.84) 9,38 (9,02-10,21)9.38 (9.02-10.21) 0,670.67 Neo, %Neo, % 26,0 (21,0-27,5)26.0 (21.0-27.5) 30,1 (23,2-33,9)30.1 (23.2-33.9) 0,530.53 Lym, %Lym, % 66,9 (65,5-69,1)66.9 (65.5-69.1) 60,1 (58,8-71,8)60.1 (58.8-71.8) 0,530.53 Mon, %Mon, % 3,3 (2,0-4,3)3.3 (2.0-4.3) 2,6 (1,6-4,7)2.6 (1.6-4.7) 1,01.0 Eos, %Eos, % 1,7 (1,6-2,1)1.7 (1.6-2.1) 2,2 (1,5-3,0)2.2 (1.5-3.0) 0,750.75 Bas, %Bas, % 0,9 (0,5-1,1)0.9 (0.5-1.1) 0,9 (0,8-1,1)0.9 (0.8-1.1) 0,910.91 RBC, 10¹²/лRBC, 10 ¹² /l 8,45 (8,42-8,56)8.45 (8.42-8.56) 7,67 (7,27-8,25)7.67 (7.27-8.25) 0,050.05 HGB, г/лHGB, g/l 143,0 (141,0-144,0)143.0 (141.0-144.0) 134,0 (129,0-134,0)134.0 (129.0-134.0) 0,010.01 PLT, 10⁹/лPLT, 10 ⁹ /l 494,0 (460,0-585,0)494.0 (460.0-585.0) 509,0 (460,0-615,0)509.0 (460.0-615.0) 0,930.93 Мочевина, ммоль/лUrea, mmol/l 5,4 (4,6-7,2)5.4 (4.6-7.2) 6,4 (6,2-8,5)6.4 (6.2-8.5) 0,020.02

Claims

A method for modeling loaded metabolism with combined subchronic exposure to heavy metals, characterized in that adult male Wistar rats are given daily watering with the addition of cadmium chloride CdCl ₂ at a dosage of 7.5 mg/l to drinking water, manganese chloride MnCl ₂ at a dosage of 2.5 mg / l and lead acetate Pb (CH ₃ COO) ₂ × 3H ₂ O at a dosage of 25 mg / l for 30 days.