RU2794975C2 - Advanced compound for the treatment of heart failure - Google Patents
Advanced compound for the treatment of heart failure Download PDFInfo
- Publication number
- RU2794975C2 RU2794975C2 RU2020122587A RU2020122587A RU2794975C2 RU 2794975 C2 RU2794975 C2 RU 2794975C2 RU 2020122587 A RU2020122587 A RU 2020122587A RU 2020122587 A RU2020122587 A RU 2020122587A RU 2794975 C2 RU2794975 C2 RU 2794975C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mir
- treatment
- oligonucleotide
- prevention
- cardiac
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Настоящее изобретение относится к олигонуклеотиду, который представляет собой эффективный ингибитор микроРНК miR-132, и к его применению в медицине, в особенности, для профилактики или лечения нарушений сердечной деятельности и/или фиброзных нарушений.The present invention relates to an oligonucleotide that is an effective inhibitor of miR-132 miRNA and its use in medicine, especially for the prevention or treatment of cardiac and/or fibrotic disorders.
Сердечная недостаточность представляет собой одну из основных патологий в мире, ведущих к смертности. Инфаркт миокарда (ИМ) – это наиболее важная причина сердечной недостаточности, поскольку ИМ вызывает последующее прогрессирующее ремоделирование сердца, что приводит к сердечной недостаточности с плохим прогнозом. Применяемые в настоящее время терапевтические фармакологические варианты лечения сердечной недостаточности включают ангиотензин-модулирующие средства, β-блокаторы, диуретики, антагонисты альдостерона, комбинированный с блокатором рецепторов ангиотензина-II ингибитор неприлизина, вазодилататоры или инотропные средства. Хотя для всех этих средств ряд клинических исследований показали значительное снижение смертности, вызванной сердечной недостаточностью, 5-летняя смертность остается на недопустимом уровне, равном почти 50%. Таким образом, существует большая потребность в разработке новых и более эффективных терапевтических подходов при сердечной недостаточности.Heart failure is one of the major pathologies in the world leading to mortality. Myocardial infarction (MI) is the most important cause of heart failure because MI causes subsequent progressive remodeling of the heart, leading to heart failure with a poor prognosis. Currently used therapeutic pharmacological options for the treatment of heart failure include angiotensin-modulating agents, β-blockers, diuretics, aldosterone antagonists, neprilysin inhibitor combined with an angiotensin-II receptor blocker, vasodilators or inotropic agents. Although a number of clinical studies have shown significant reductions in mortality due to heart failure for all these agents, the 5-year mortality remains at an unacceptable level of almost 50%. Thus, there is a great need to develop new and more effective therapeutic approaches for heart failure.
Патологический гипертрофический рост кардиомиоцитов может привести к развитию ремоделирования сердца, сердечной недостаточности и внезапной остановке сердца. Гипертрофический рост кардиомиоцитов представляет собой ответ на повышенную нагрузку на стенку сердца, вызванную перегрузкой сердечного объема и/или давления. Первоначально, гипертрофия сердца представляет собой компенсаторный механизм, направленный на снижение напряжения на стенке и увеличение объёмной скорости кровотока в сердце. Однако длительная гипертрофия сердца прогрессирует до сократительной дисфункции, сердечной декомпенсации и, наконец, сердечной недостаточности (Hill and Olson, 2008; Barry and Townsend, 2010). Переход от физиологической к патологической гипертрофии может происходить в зависимости от многих факторов, включая потерю миоцитов в результате апоптоза или некроза, изменения в аутофагии, дефекты сократительной реакции, нарушение регуляции гомеостаза кальция, десенсибилизацию адренергических рецепторов или фиброз сердца (Hill and Olson, 2008; Barry and Townsend, 2010). Гипертрофическую передачу сигналов в значительной степени опосредует сигнальный путь инсулина (DeBosch and Muslin, 2008; Barry and Townsend, 2010). Как инсулин, так и инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1) активируют про-гипертрофические пути в кардиомиоцитах через рецептор IGF-1, который активирует фосфоинозитин-3-киназу (PI3K) (McMullen et al., 2004). Активность PI3K приводит к активации серин/треонинкиназы Akt посредством ее фосфорилирования, и активные Akt фосфорилируют антигипертрофические факторы транскрипции FoxO, что приводит к их дестабилизации и предотвращению ядерной локализации (Datta et al., 1999; Skurk et al., 2005; Ronnebaum and Patterson, 2010). Напротив, ацетилирование факторов FoxO сиртуином-1 (Sirt-1) приводит к их стабилизации и ядерной транслокации (Frescas et al., 2005). Стабилизированные факторы транскрипции FoxO локализуются в ядре для регуляции экспрессии антигипертрофических генов. Антигипертрофические функции белков FoxO в значительной степени опосредованы подавлением про-гипертрофического сигнального пути кальциневрина посредством экспрессии антигипертрофических генов-мишеней факторов FoxO, таких как атрогин-1 (Ni et al., 2006; Ronnebaum and Patterson, 2010; Glas, 2010). Кроме того, транскрипционные факторы FoxO также вызывают апоптоз и регулируют аутофагию в кардиомиоцитах (Ronnebaum and Patterson, 2010).Pathological hypertrophic growth of cardiomyocytes can lead to the development of cardiac remodeling, heart failure and sudden cardiac arrest. Hypertrophic growth of cardiomyocytes is a response to increased stress on the heart wall caused by an overload of cardiac volume and/or pressure. Initially, cardiac hypertrophy is a compensatory mechanism aimed at reducing wall stress and increasing the volumetric blood flow velocity in the heart. However, long-term cardiac hypertrophy progresses to contractile dysfunction, cardiac decompensation, and finally heart failure (Hill and Olson, 2008; Barry and Townsend, 2010). The transition from physiological to pathological hypertrophy can occur depending on many factors, including loss of myocytes through apoptosis or necrosis, changes in autophagy, defects in contractile response, dysregulation of calcium homeostasis, desensitization of adrenergic receptors, or cardiac fibrosis (Hill and Olson, 2008; Barry and Townsend, 2010). Hypertrophic signaling is largely mediated by the insulin signaling pathway (DeBosch and Muslin, 2008; Barry and Townsend, 2010). Both insulin and insulin-like growth factor-1 (IGF-1) activate pro-hypertrophic pathways in cardiomyocytes via the IGF-1 receptor, which activates phosphoinositin 3-kinase (PI3K) (McMullen et al., 2004). PI3K activity leads to the activation of serine/threonine kinase Akt through its phosphorylation, and active Akt phosphorylates the antihypertrophic transcription factors FoxO, which leads to their destabilization and prevention of nuclear localization (Datta et al., 1999; Skurk et al., 2005; Ronnebaum and Patterson, 2010). On the contrary, acetylation of FoxO factors by sirtuin-1 (Sirt-1) leads to their stabilization and nuclear translocation (Frescas et al., 2005). Stabilized transcription factors FoxO localize in the nucleus to regulate the expression of antihypertrophic genes. The antihypertrophic functions of FoxO proteins are largely mediated by suppression of the pro-hypertrophic calcineurin signaling pathway through the expression of antihypertrophic target genes of FoxO factors such as atrogin-1 (Ni et al., 2006; Ronnebaum and Patterson, 2010; Glas, 2010). In addition, FoxO transcription factors also induce apoptosis and regulate autophagy in cardiomyocytes (Ronnebaum and Patterson, 2010).
Было показано, что микроРНК играют ключевую роль в неблагоприятном ремоделировании сердца. В WO 2013/034653 описано, что miR-132 и/или miR-212 могут вызывать гипертрофию сердца и, таким образом, представляют собой потенциальные терапевтические мишени для лечения сердечной недостаточности.MicroRNAs have been shown to play a key role in adverse cardiac remodeling. WO 2013/034653 describes that miR-132 and/or miR-212 can induce cardiac hypertrophy and thus are potential therapeutic targets for the treatment of heart failure.
В WO 2016/042561 описан способ лечения связанного с липидами нарушения путем введения субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотидного агента, который в значительной степени комплементарен нуклеотидной последовательности человеческой miR-132.WO 2016/042561 describes a method for treating a lipid-related disorder by administering to a subject a therapeutically effective amount of a polynucleotide agent that is substantially complementary to the human miR-132 nucleotide sequence.
Авторы настоящего изобретения идентифицировали новый аналог олигонуклеотида, который представляет собой эффективный ингибитор экспрессии miR-132 в кардиомиоцитах. Аналог олигонуклеотида, в дальнейшем обозначаемый как CDR132L, представляет собой миксмер, состоящий из структурных блоков ДНК и LNA, имеющих межнуклеозидные фосфоротиоатные связи. Он не обладает значительной токсичностью в клеточной линии печени человека и изолированных кардиомиоцитах новорожденных крыс. Кроме того, было показано, что CDR132L демонстрирует превосходные эффекты по сравнению с другими аналогами олигонуклеотидов, имеющими ту же нуклеотидную последовательность, но другое распределение структурных блоков LNA.The present inventors have identified a novel oligonucleotide analog that is an effective inhibitor of miR-132 expression in cardiomyocytes. The oligonucleotide analog, hereinafter referred to as CDR132L, is a mixer consisting of DNA and LNA building blocks having internucleoside phosphorothioate bonds. It has no significant toxicity in human liver cell lines and isolated neonatal rat cardiomyocytes. In addition, CDR132L has been shown to exhibit superior effects compared to other oligonucleotide analogues having the same nucleotide sequence but a different distribution of LNA building blocks.
Эффективность CDR132L была протестирована на нескольких моделях на животных. В модели гипертрофии сердца у трансгенных мышей CDR132L приводил к обратному ремоделированию сердца, связанному со сниженной экспрессией miR-132. В мышиной модели сердечной недостаточности после ИМ было обнаружено, что обработка CDR132L снижает дисфункцию левого желудочка после ИМ и загружает независимые параметры систолической сократительной функции. Кроме того, введение CDR132L приводило к улучшению сердечной функции и уменьшению экспрессии miR-132, передачи сигналов сердечного стресса и гипертрофии после ИМ. Было обнаружено, что на модели свиней с сердечной недостаточностью после ИМ лечение с помощью CDR132L предотвращает дезадаптивное ремоделирование и улучшает функцию левого желудочка. Кроме того, CDR132L нормализует тканевую экспрессию маркеров патологической сердечной недостаточности, таких как BNP, ANP, и обеспечивает сдвиг в изоформах тяжелой цепи миозина (соотношение MYH7/6). The efficacy of CDR132L has been tested in several animal models. In a transgenic mouse model of cardiac hypertrophy, CDR132L resulted in reverse cardiac remodeling associated with reduced miR-132 expression. In a mouse model of post-MI heart failure, CDR132L treatment was found to reduce post-MI left ventricular dysfunction and load independent parameters of systolic contractile function. In addition, administration of CDR132L resulted in improved cardiac function and decreased miR-132 expression, cardiac stress signaling, and post-MI hypertrophy. In a pig model of post-MI heart failure, treatment with CDR132L was found to prevent maladaptive remodeling and improve left ventricular function. In addition, CDR132L normalizes tissue expression of markers of pathological heart failure, such as BNP, ANP, and provides a shift in myosin heavy chain isoforms (MYH7/6 ratio).
В дополнительном исследовании авторы настоящего изобретения идентифицировали антифибротические терапевтические эффекты для олигонуклеотидного аналога CDR132L на мышиной модели in vivo инфаркта миокарда и на моделях in vitro фиброза печени и фиброза легких. In an additional study, the present inventors identified antifibrotic therapeutic effects for the CDR132L oligonucleotide analog in an in vivo mouse model of myocardial infarction and in vitro models of liver fibrosis and pulmonary fibrosis.
Таким образом, олигонуклеотид CDR132L полезен в качестве активного агента в медицине, в особенности, в профилактике или лечении нарушений сердечной деятельности и/или фиброзных нарушений.Thus, the CDR132L oligonucleotide is useful as an active agent in medicine, especially in the prevention or treatment of cardiac disorders and/or fibrotic disorders.
Соответственно, первый аспект настоящего изобретения обеспечивает олигонуклеотидный аналог, включающий последовательность формулы I:Accordingly, the first aspect of the present invention provides an oligonucleotide analogue comprising the sequence of formula I:
5’-ATGGCTGTAGACTGTT-3’5'-ATGGCTGTAGACTGTT-3'
в которой A, T, G и C представляют собой дезоксирибонуклеотидные структурные блоки иin which A, T, G and C are deoxyribonucleotide building blocks and
в которой, по меньшей мере, один структурный блок G или T представляет собой мостиковый нуклеотидный структурный блок и/или морфолино-нуклеотидный структурный блок.wherein at least one G or T building block is a bridging nucleotide building block and/or a morpholino nucleotide building block.
В конкретном воплощении, олигонуклеотид включает или имеет последовательность формулы II:In a specific embodiment, the oligonucleotide comprises or has the sequence of formula II:
5’-A+TG+GC+TG+TA+GACTG+T+T-3’5'-A+TG+GC+TG+TA+GACTG+T+T-3'
в которой A, T, G и C представляют собой дезоксирибонуклеотидные структурные блоки иin which A, T, G and C are deoxyribonucleotide building blocks and
в которой +G и +T представляют собой мостиковые нуклеотидные структурные блоки и/или морфолино-нуклеотидные структурные блоки, в особенности, в которой +G и +T представляют собой структурные блоки LNA.in which +G and +T are bridging nucleotide building blocks and/or morpholino-nucleotide building blocks, in particular, in which +G and +T are LNA building blocks.
Олигонуклеотидный аналог формулы I или формулы II может включать, по меньшей мере, одну модифицированную межнуклеозидную связь, например, межнуклеозидную связь, которая стабилизирована против расщепления нуклеазой, например, фосфоротиоатную или фосфородиамидатную связь. В конкретных воплощениях все межнуклеозидные связи представляют собой модифицированные связи, в особенности, фосфоротиоатные связи. An oligonucleotide analogue of Formula I or Formula II may include at least one modified internucleoside bond, eg an internucleoside bond that is stabilized against nuclease cleavage, eg a phosphorothioate or phosphorodiamidate bond. In specific embodiments, all internucleoside bonds are modified bonds, especially phosphorothioate bonds.
В более конкретном воплощении, изобретение относится к олигонуклеотиду CDR132L, как описан в настоящем документе.In a more specific embodiment, the invention relates to a CDR132L oligonucleotide as described herein.
Олигонуклеотид CDR132L имеет последовательность формулы III:Oligonucleotide CDR132L has the sequence of formula III:
5’-dA*+T*dG*+G*dC*+T*dG*+T*dA*+G*dA*dC*dT*dG*+T*+T-3’ 5’-dA*+T*dG*+G*dC*+T*dG*+T*dA*+G*dA*dC*dT*dG*+T*+T-3’
в которой dA представляет собой 2’-дезоксиаденозин, dG представляет собой 2’-дезоксигуанозин, dC представляет собой 2’-дезоксицитидин и Т представляет собой тимидин,in which dA is 2'-deoxyadenosine, dG is 2'-deoxyguanosine, dC is 2'-deoxycytidine and T is thymidine,
в которой +T представляет собой структурный блок LNA-T и +G представляет собой структурный блок LNA-G и в которой * представляет собой фосфоротиоатную связь.in which +T is a building block of LNA-T and +G is a building block of LNA-G and in which * represents a phosphorothioate bond.
Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, включающей в качестве активного агента олигонуклеотидный аналог, включающий последовательность формул I, II или III и фармацевтически приемлемый носитель.An additional aspect of the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising, as an active agent, an oligonucleotide analogue comprising a sequence of formulas I, II or III and a pharmaceutically acceptable carrier.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к медицинскому применению аналога олигонуклеотида, включающего последовательность формулы I, II или III. В определенных воплощениях медицинское применение относится к применению для лечения или профилактики нарушения, связанного с, сопровождаемого и/или вызванного патологической экспрессией miR-132. В определенных воплощениях медицинское применение относится к лечению или профилактике сердечных нарушений, в особенности, нарушений, связанных с гипертрофией сердца. В определенных воплощениях медицинское применение относится к лечению фиброзных нарушений, например, нарушений, связанных с, сопровождаемых и/или вызванных патологическим фиброзом, в особенности, сердечных фиброзных нарушений, легочных фиброзных нарушений или печеночных фиброзных нарушений.Another aspect of the present invention relates to the medical use of an oligonucleotide analogue comprising a sequence of formula I, II or III. In certain embodiments, medical use refers to use for the treatment or prevention of a disorder associated with, accompanied by, and/or caused by abnormal expression of miR-132. In certain embodiments, the medical use relates to the treatment or prevention of cardiac disorders, in particular disorders associated with cardiac hypertrophy. In certain embodiments, the medical use relates to the treatment of fibrotic disorders, eg, disorders associated with, accompanied by, and/or caused by pathological fibrosis, especially cardiac fibrotic disorders, pulmonary fibrotic disorders, or hepatic fibrotic disorders.
Олигонуклеотид формулы I, II или III может состоять из структурных блоков дезоксирибонуклеотида ДНК и структурных блоков с мостиковыми нуклеотидами и/или морфолино-нуклеотидных структурных блоков (DNA). Термин «мостиковый нуклеотид» относится к модифицированному рибонуклеотиду, в котором фрагмент рибозы включает двух- или трехатомный мостик, соединяющий 2'- и 4'-атом углерода. Например, мостик может включать структуру 2'-O-CH2-4', 2'-O-CH2-CH2-4', 2'-O-CH(CH3)-4' или соответствующую структуру, в которой O заменен на S или NH. В конкретном воплощении, по меньшей мере, один мостиковый нуклеотидный структурный блок представляет собой структурный блок с запертой нуклеиновой кислотой (LNA), имеющий мостик 2'-O-CH2-4'. Морфолино-нуклеотидный структурный блок относится к модифицированному нуклеотиду, в котором рибоза или дезоксирибоза заменены морфолино-фрагментом.An oligonucleotide of formula I, II or III may be composed of deoxyribonucleotide DNA building blocks and bridged nucleotide building blocks and/or morpholino nucleotide building blocks (DNA). The term "bridged nucleotide" refers to a modified ribonucleotide in which the ribose moiety includes a two or three atom bridge connecting the 2' and 4' carbon atom. For example, the bridge may include the structure 2'-O-CH 2 -4', 2'-O-CH 2 -CH 2 -4', 2'-O-CH(CH 3 )-4', or an appropriate structure in which O replaced by S or NH. In a specific embodiment, at least one bridging nucleotide building block is a locked nucleic acid (LNA) building block having a 2'-O-CH 2 -4' bridge. A morpholino nucleotide building block refers to a modified nucleotide in which the ribose or deoxyribose is replaced by a morpholino moiety.
Олигонуклеотид формулы I, II или III имеет длину, по меньшей мере, 16 структурных блоков, например, длину от 16 до 20 структурных блоков. В конкретном воплощении олигонуклеотид формулы I, II или III имеет длину 16 структурных блоков. The oligonucleotide of formula I, II or III is at least 16 building blocks long, eg 16 to 20 building blocks long. In a specific embodiment, the oligonucleotide of formula I, II or III is 16 building blocks long.
В некоторых воплощениях, олигонуклеотид формулы I, II или III включает от 5 до 10, например, от 6 до 8, в особенности, 7 мостиковых нуклеотидных структурных блоков, например, структурные блоки LNA и/или морфолино-нуклеотидные структурные блоки. In some embodiments, the oligonucleotide of formula I, II or III comprises 5 to 10,
В некоторых воплощениях, олигонуклеотид формулы I, II или III представляет собой «голый» олигонуклеотид. В некоторых воплощениях олигонуклеотид может быть конъюгирован, по меньшей мере, с одним гетерологичным фрагментом, например, с фрагментом, который не способствует связыванию олигонуклеотида с miR-132. Гетерологичный фрагмент может быть фрагментом, который улучшает нацеливание и/или клеточное поглощение, например, липидный фрагмент, такой как холестерин или жирная кислота, сахаридный или аминосахаридный фрагмент, такой как N-галактозамин-содержащий фрагмент, пептидный или полипептидный фрагмент или нуклеозидный или нуклеотидный фрагмент, такой как аптамер. Гетерологичный фрагмент может быть конъюгирован с 5'- и/или 3'-концом олигонуклеотидного аналога посредством ковалентной связи или спейсера. In some embodiments, the oligonucleotide of formula I, II or III is a "naked" oligonucleotide. In some embodiments, the oligonucleotide may be conjugated to at least one heterologous moiety, eg, a moiety that does not promote binding of the oligonucleotide to miR-132. The heterologous moiety may be a moiety that improves targeting and/or cellular uptake, for example, a lipid moiety such as cholesterol or a fatty acid, a saccharide or amino saccharide moiety such as an N-galactosamine-containing moiety, a peptide or polypeptide moiety, or a nucleoside or nucleotide moiety. , such as an aptamer. The heterologous fragment may be conjugated to the 5' and/or 3' end of the oligonucleotide analog via a covalent bond or spacer.
Олигонуклеотид по настоящему изобретению подходит для применения в области медицины, включая медицину человека и ветеринарию. В конкретных воплощениях, соединение полезно для предотвращения или лечения нарушения, связанного с патологической экспрессией, сопровождаемой и/или вызванной, например, сверхэкспрессией miR-132. Было обнаружено, что введение соединения значительно снижает экспрессию miR-132 in vitro и in vivo. The oligonucleotide of the present invention is suitable for use in the field of medicine, including human medicine and veterinary medicine. In specific embodiments, the compound is useful for preventing or treating a disorder associated with abnormal expression accompanied by and/or caused by, for example, overexpression of miR-132. It was found that the introduction of the connection significantly reduces the expression of miR-132 in vitro and in vivo.
В некоторых воплощениях, соединение может быть введено пациентам, демонстрирующим сверхэкспрессию miR-132 по сравнению со здоровыми субъектами. В некоторых воплощениях соединение может быть введено пациентам, не демонстрирующим сверхэкспрессию miR-132 по сравнению со здоровыми субъектами, но все еще нуждающимся в снижении уровня miR-132. In some embodiments, the compound may be administered to patients demonstrating overexpression of miR-132 compared to healthy subjects. In some embodiments, the compound may be administered to patients who do not overexpress miR-132 compared to healthy subjects, but still require a reduction in miR-132 levels.
Термин «профилактика» в контексте настоящего изобретения относится к введению соединения пациенту, о котором известно, что он имеет повышенный риск развития определенного нарушения. Термин «лечение» в контексте настоящего изобретения относится к введению соединения пациенту, у которого уже развились признаки и/или симптомы определенного нарушения. Термин «пациент» относится к субъекту, нуждающемуся во введении соединения по изобретению в области медицины человека или ветеринарии. В конкретных воплощениях пациент представляет собой пациента-человека. The term "prophylaxis" in the context of the present invention refers to the administration of a compound to a patient known to be at increased risk of developing a particular disorder. The term "treatment" in the context of the present invention refers to the administration of a compound to a patient who has already developed signs and/or symptoms of a particular disorder. The term "patient" refers to a subject in need of administration of a compound of the invention in the field of human medicine or veterinary medicine. In specific embodiments, the patient is a human patient.
В конкретных воплощениях, соединение по настоящему изобретению полезно для профилактики или лечения сердечных нарушений, в особенности, сердечнососудистых нарушений, связанных с гипертрофией. Например, соединение полезно для профилактики или лечения сократительной дисфункции, декомпенсация сердечной деятельности, сердечной недостаточности или для профилактики или лечения ремоделирования сердца после инфаркта миокарда, миокардита, нарушений деятельности клапанов сердца, таких как аортальный стеноз или недостаточность митрального клапана, генетические сердечные нарушения с гипертрофией сердца, например, гипертрофическая необструктивная и обструктивная кардиомиопатия или болезнь Фабри. In specific embodiments, the compound of the present invention is useful for the prevention or treatment of cardiac disorders, in particular cardiovascular disorders associated with hypertrophy. For example, the compound is useful in the prevention or treatment of contractile dysfunction, cardiac decompensation, heart failure, or in the prevention or treatment of cardiac remodeling after myocardial infarction, myocarditis, valvular disorders such as aortic stenosis or mitral valve insufficiency, genetic cardiac disorders with cardiac hypertrophy such as hypertrophic non-obstructive and obstructive cardiomyopathy or Fabry disease.
Соединение полезно для введения пациентам, которых выбирают из The compound is useful for administration to patients selected from
(i) пациентов с повышенным риском развития сердечной недостаточности, (i) patients at increased risk of developing heart failure,
(ii) пациентов, страдающие (застойной) сердечной недостаточностью, например, пациентов с повышенным риском прогрессирования сердечной недостаточности, (ii) patients suffering from (congestive) heart failure, such as patients at increased risk of progression of heart failure,
(iii) пациентов после инфаркта миокарда и/или (iii) patients after myocardial infarction and/or
(iv) пациентов с врожденными пороками сердца, связанными с гипертрофией сердца, такими как стеноз легочной вены, дефекты предсердной или желудочковой перегородки. (iv) patients with congenital heart disease associated with cardiac hypertrophy, such as pulmonary vein stenosis, atrial or ventricular septal defects.
В конкретных воплощениях, соединение по настоящему изобретению полезно для профилактики или лечения фиброзных нарушений, в особенности, нарушений, связанных с, сопровождаемых и/или вызванных патологическим фиброзом. In specific embodiments, the compound of the present invention is useful for the prevention or treatment of fibrotic disorders, in particular disorders associated with, accompanied by and/or caused by pathological fibrosis.
Патологический фиброз представляет собой образование избыточной волокнистой соединительной ткани в органе или ткани, в особенности, связанное с патологическим состоянием, сопровождаемое и/или вызванное патологическим состоянием. Патологический фиброз может возникать во многих различных органах и тканях организма, как правило, в результате воспаления или повреждения. Pathological fibrosis is the formation of excess fibrous connective tissue in an organ or tissue, especially when associated with, accompanied by, and/or caused by a pathological condition. Pathological fibrosis can occur in many different organs and tissues of the body, usually as a result of inflammation or injury.
В определенном воплощении, фиброз представляет собой фиброз сердца, например, состояние, включающее патологический фиброз в сердце. Типичные типы фиброза сердца включают фиброз предсердий, фиброз эндомиокарда или фиброз, возникший в результате предшествующего инфаркта миокарда. In a specific embodiment, the fibrosis is fibrosis of the heart, for example, a condition including pathological fibrosis in the heart. Typical types of cardiac fibrosis include atrial fibrosis, endomyocardial fibrosis, or fibrosis resulting from a previous myocardial infarction.
В дополнительном воплощении, фиброз представляет собой легочный фиброз, например, состояние, включающее патологический фиброз в легких. Типичные типы легочного фиброза включают фиброзные нарушения, вызванные профессиональными или экологическими факторами, например, воздействием токсинов и загрязняющих веществ, таких как кремнеземная пыль, асбестовые волокна, металлическая пыль, угольная пыль, зерновая пыль, птичий и животный помет. Другие типы легочных фиброзных нарушений вызываются лучевой терапией и/или лечением лекарственными средствами, такими как химиотерапевтические средства, кардиотропные средства, антибиотики или противовоспалительные средства. Другие типы легочных фиброзных нарушений вызываются такими нарушениями, как идиопатический легочный фиброз, дерматит, полимиозит, смешанное заболевание соединительной ткани, аутоиммунное заболевание, такое как ревматоидный артрит, склеродермия, синдром Шегрена или системная красная волчанка, саркоидоз, пневмония, вирусная инфекция или гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ). In a further embodiment, the fibrosis is pulmonary fibrosis, for example, a condition including pathological fibrosis in the lungs. Typical types of pulmonary fibrosis include fibrotic disorders caused by occupational or environmental factors, such as exposure to toxins and pollutants such as silica dust, asbestos fibers, metal dust, coal dust, grain dust, bird and animal droppings. Other types of pulmonary fibrotic disorders are caused by radiation therapy and/or drug treatment such as chemotherapeutic agents, cardiotropic agents, antibiotics, or anti-inflammatory agents. Other types of pulmonary fibrotic disorders are caused by disorders such as idiopathic pulmonary fibrosis, dermatitis, polymyositis, mixed connective tissue disease, autoimmune disease such as rheumatoid arthritis, scleroderma, Sjögren's syndrome or systemic lupus erythematosus, sarcoidosis, pneumonia, viral infection, or gastroesophageal reflux disease (GERD).
В дополнительном воплощении, фиброз может представлять собой фиброз печени, например, условия, включающие патологический фиброз в печени. Обычные типы фиброза печени вызываются вирусной инфекцией, например, вирусами гепатита B и/или C, наследственными нарушениями обмена веществ, аутоиммунным гепатитом, обструкцией желчных путей, перегрузкой железом, неалкогольной жировой болезнью печени, включая неалкогольную жировую болезнь печени (НЖБП) и неалкогольный стеатогепатит (NASH), и алкогольную болезнь печени. In a further embodiment, the fibrosis may be hepatic fibrosis, for example, conditions including pathological fibrosis in the liver. Common types of liver fibrosis are caused by viral infection, such as hepatitis B and/or C viruses, hereditary metabolic disorders, autoimmune hepatitis, biliary obstruction, iron overload, non-alcoholic fatty liver disease, including non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) and non-alcoholic steatohepatitis ( NASH), and alcoholic liver disease.
В еще других воплощении, фиброз также может представлять собой сосудистый фиброз, например, артериальную жёсткость, кожный фиброз, например, келоидное образование или нефрогенный системный фиброз, артрофиброз, некоторые формы спаечного капсулита, фиброз мягких тканей, такой как медиастинальный фиброз или ретроперитонеальный фиброз, или фиброз костного мозга, такой как миелофиброз. In yet other embodiments, the fibrosis can also be vascular fibrosis, such as arterial stiffness, cutaneous fibrosis, such as keloid formation or nephrogenic systemic fibrosis, arthrofibrosis, some form of adhesive capsulitis, soft tissue fibrosis, such as mediastinal fibrosis or retroperitoneal fibrosis, or bone marrow fibrosis such as myelofibrosis.
В конкретных воплощениях, изобретение охватывает определение количества и/или активности определенных физиологических параметров у субъекта, подлежащего лечению, до, во время и/или после введения соединения по изобретению. Эта сопутствующая диагностическая процедура может помочь в медицинском применении, как описано выше. Например, диагностическая процедура может обеспечить помощь в оценке риска, стратификации пациента, мониторинге курса лечения и/или контроле после лечения. In specific embodiments, the invention encompasses determining the amount and/or activity of certain physiological parameters in a subject to be treated before, during and/or after administration of a compound of the invention. This concomitant diagnostic procedure may aid in medical applications as described above. For example, a diagnostic procedure may provide assistance in risk assessment, patient stratification, treatment course monitoring, and/or post-treatment follow-up.
В конкретных воплощениях, изобретение охватывает определение количества и/или активности miR-132 у субъекта, подлежащего лечению, до, во время и/или после введения соединений по изобретению. В других воплощениях, изобретение включает определение количества и/или активности сердечных маркеров, таких как BNP, ANP или изоформы тяжелых цепей миозина, например, соотношения MYH7/6, и/или уровней FoxO3 и/или SERCA2. В еще других воплощениях, изобретение охватывает определение количества и/или активности фиброзных маркеров, таких как коллаген, например, отложение коллагена и/или экспрессия генов-маркеров фиброза, таких как коллаген 1A1, коллаген 1A2, коллаген 3A1, и/или матриксной металлопептидазы, такой как матриксная металлопептидаза 2. In specific embodiments, the invention encompasses determining the amount and/or activity of miR-132 in a subject to be treated before, during and/or after administration of the compounds of the invention. In other embodiments, the invention includes determining the amount and/or activity of cardiac markers such as BNP, ANP, or myosin heavy chain isoforms, for example, MYH7/6 ratio, and/or FoxO3 and/or SERCA2 levels. In still other embodiments, the invention encompasses the determination of the amount and/or activity of fibrotic markers such as collagen, for example, the deposition of collagen and/or the expression of fibrosis marker genes, such as collagen 1A1, collagen 1A2, collagen 3A1, and/or matrix metallopeptidase, such as
Определение вышеуказанных параметров может быть выполнено в образцах жидкости организма, таких как кровь, плазма или сыворотка, или в образцах ткани в соответствии с известными способами на уровне нуклеиновой кислоты и/или белка и может обеспечить полезную диагностическую информацию, например, о ходе и/или успешности лечения.Determination of the above parameters can be performed in body fluid samples such as blood, plasma or serum, or in tissue samples according to known methods at the nucleic acid and/or protein level, and can provide useful diagnostic information, for example, on the course and/or the success of the treatment.
Соединение по изобретению можно вводить в виде фармацевтической композиции, включающей фармакологически приемлемый носитель. Введение может быть осуществлено известными способами, в которых соединение вводят в желаемую целевую клетку или целевой орган субъекта, подлежащего лечению. The compound of the invention may be administered as a pharmaceutical composition comprising a pharmacologically acceptable carrier. The introduction can be carried out by known methods, in which the compound is introduced into the desired target cell or target organ of the subject to be treated.
Соединение можно вводить как таковое или в виде конъюгата с гетерологичным фрагментом, как описано выше. The compound can be administered as such or as a conjugate to a heterologous moiety as described above.
Для фармацевтических применений композиция может находиться в форме раствора, например, раствора для инъекций, эмульсии, ингаляции, суспензии или тому подобного. For pharmaceutical applications, the composition may be in the form of a solution, such as an injection, emulsion, inhalation, suspension, or the like.
Композицию можно вводить любым подходящим способом, например, парентерально, в особенности, путем инъекции, такой как подкожная, внутримышечная, внутривенная или внутриартериальная инъекция, или инфузии, путем перорального или ингаляционного приема и/или путем дермального применения. Носитель может представлять собой любой подходящий фармацевтический носитель. Предпочтительно применяют носитель, который способен повысить эффективность проникновения молекул олигонуклеотидов в клетки-мишени. Липосомы, например, катионные липосомы, или предварительно разработанные экзосомы представляют собой подходящие примеры таких носителей. The composition can be administered by any suitable route, for example parenterally, in particular by injection such as subcutaneous, intramuscular, intravenous or intra-arterial injection, or by infusion, by oral or inhalation administration and/or by dermal application. The carrier may be any suitable pharmaceutical carrier. Preferably, a carrier is used which is capable of increasing the efficiency of penetration of the oligonucleotide molecules into the target cells. Liposomes, eg cationic liposomes, or pre-engineered exosomes are suitable examples of such carriers.
Соединение вводят в фармацевтически эффективной дозировке в зависимости от пути введения и типа или серьезности заболевания. The compound is administered at a pharmaceutically effective dosage depending on the route of administration and the type or severity of the disease.
Соединение можно вводить в виде монотерапии или в сочетании с другим лекарственным средством, в особенности, с лекарственным средством, подходящим для профилактики или лечения сердечных или фиброзных нарушений, как описано выше. The compound can be administered as monotherapy or in combination with another drug, especially a drug suitable for the prevention or treatment of cardiac or fibrotic disorders, as described above.
Ангиотензинмодулирующие средства, β-блокаторы, диуретики, антагонисты альдостерона, вазодилататоры, ионотропные средства, статины или ингибиторы неприлизина или их комбинации, например, комбинация ингибитора неприлизина, например, сакубитрила, с блокатором рецепторов ангиотензина II, например, валсартаном, представляют собой примеры дополнительных лекарственных средств, подходящих для профилактики или лечения сердечных нарушений. Angiotensin modulating agents, β-blockers, diuretics, aldosterone antagonists, vasodilators, ionotropic agents, statins or neprilysin inhibitors, or combinations thereof, e.g. the combination of a neprilysin inhibitor, e.g. sacubitril, with an angiotensin II receptor blocker, e.g. agents suitable for the prevention or treatment of cardiac disorders.
Лекарственные средства, предназначенные для профилактики или лечения фиброза сердца, такие как ингибиторы ACE, например, лизиноприл, блокаторы рецепторов ангиотензина II, например, кандесартан, лозартан или олмесартан, антагонисты альдостерона, например, ингибиторы спиронолактона и/или TGF β, например, пирфенидон или транлиласт, лекарственные средства, предназначенные для профилактики или лечения легочного фиброза, такие как антифиброзные средства, например нинтеданиб или пирфенидон, противовоспалительные средства, например кортикостероиды, азатиоприн, циклофосфамид и микофенолатемофетил, противорефлюксные средства, например, ингибиторы протонного насоса или Н2-блокаторы и/или средства против кашля и лекарственные средства для профилактики и/или лечения фиброза печени, такие как ингибиторы ACE, например, беназеприл, лизиноприл или рамиприл, противовирусные препараты или PPAR α-агонисты, представляют собой примеры дополнительных лекарственных средств, подходящих для предотвращения или лечения фиброзных нарушений. Medicinal products intended for the prevention or treatment of cardiac fibrosis such as ACE inhibitors such as lisinopril, angiotensin II receptor blockers such as candesartan, losartan or olmesartan, aldosterone antagonists such as spironolactone and/or TGFβ inhibitors such as pirfenidone or tranlilast, drugs for the prevention or treatment of pulmonary fibrosis such as anti-fibrotic agents such as nintedanib or pirfenidone, anti-inflammatory agents such as corticosteroids, azathioprine, cyclophosphamide and mycophenolatemofetil, anti-reflux agents such as proton pump inhibitors or H2 -blockers and/ or cough suppressants and drugs for the prevention and/or treatment of liver fibrosis, such as ACE inhibitors, e.g. violations.
Кроме того, изобретение относится к применению соединения по изобретению, как описано выше, для изготовления лекарственного средства для профилактики или лечения сердечного нарушения. In addition, the invention relates to the use of a compound of the invention as described above for the manufacture of a medicament for the prevention or treatment of a cardiac disorder.
Кроме того, изобретение относится к применению соединения по изобретению, как описано выше, для изготовления лекарственного средства для профилактики или лечения фиброзного нарушения. In addition, the invention relates to the use of a compound of the invention as described above for the manufacture of a medicament for the prevention or treatment of a fibrotic disorder.
Кроме того, изобретение относится к способу профилактики или лечения сердечного нарушения, включающему введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества, по меньшей мере, одного соединения как описано в настоящем документе. In addition, the invention relates to a method for preventing or treating a cardiac disorder, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of at least one compound as described herein.
Кроме того, изобретение относится к способу профилактики или лечения фиброзного нарушения, включающему введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества, по меньшей мере, одного соединения, как описано в настоящем документе. In addition, the invention relates to a method for preventing or treating a fibrotic disorder, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of at least one compound as described herein.
Дополнительно, настоящее изобретение будет описано более подробно с помощью следующих чертежей и примеров. Additionally, the present invention will be described in more detail with the help of the following drawings and examples.
Пример 1. Подавление экспрессии miR-132 в кардиомиоцитах Example 1 Suppression of miR-132 Expression in Cardiomyocytes
Был проведен количественный анализ in vitro активности, ингибирующей miRNA, для многих соединений, представляющих собой структурные аналоги, полученные из библиотеки анти-miR-132. Сайленсинг экспрессии miRNA определяли количественно с помощью анализов TaqMan® и количественной ПЦР в реальном времени. Quantitative in vitro miRNA inhibitory activity was performed for many compounds that are structural analogs derived from the anti-miR-132 library. Silencing miRNA expression was quantified using TaqMan® assays and quantitative real-time PCR.
Исследование проводили на изолированных кардиомиоцитах крысы после гипертрофической стимуляции путем обработки фенилэфрином/изопротеренолом в концентрациях 10 мкМ. Клетки инкубировали в течение 48-ми часов в стандартной среде для культивирования клеток. Тестируемые соединения вводили индивидуально в концентрации 100 нМ. Испытания проводили в трех повторностях. The study was performed on isolated rat cardiomyocytes after hypertrophic stimulation by treatment with phenylephrine/isoproterenol at concentrations of 10 μM. Cells were incubated for 48 hours in standard cell culture medium. Test compounds were administered individually at a concentration of 100 nM. The tests were carried out in triplicate.
Соединение CDR132L, миксмер LNA-ДНК, имеющий фосфоротиоатный остов, было идентифицировано как наиболее активное соединение из библиотеки структурных аналогов anti-miR-132. Compound CDR132L, an LNA-DNA mixer having a phosphorothioate backbone, was identified as the most active compound in the library of anti-miR-132 structural analogues.
Структура CDR132L выглядит следующим образом: The structure of the CDR132L is as follows:
5’-dA*+T*dG*+G*dC*+T*dG*+T*dA*+G*dA*dC*dT*dG*+T*+T-3’ 5’-dA*+T*dG*+G*dC*+T*dG*+T*dA*+G*dA*dC*dT*dG*+T*+T-3’
в которой dA представляет собой 2’-дезоксиаденозин, dG представляет собой 2’-дезоксигуанозин, dC представляет собой 2’-дезоксицитидин и Т представляет собой тимидин, in which dA is 2'-deoxyadenosine, dG is 2'-deoxyguanosine, dC is 2'-deoxycytidine and T is thymidine,
в которой +T представляет собой структурный блок LNA-T и +G представляет собой структурный блок LNA-G и в которой * представляет собой фосфоротиоатную связь. in which +T is a building block of LNA-T and +G is a building block of LNA-G and in which * represents a phosphorothioate bond.
Пример 2. Получение токсикологического профиля Example 2 Obtaining a Toxicological Profile
2.1. Цель исследования: Определение профиля токсичности CDR132L 2.1. Objective of the study: Determination of the toxicity profile of CDR132L
2.2. Описание исследования: 2.2. Description of the study:
Анализ цитотоксичности in vitro проводили на клетках печени человека (HepG2) и изолированных неонатальных кардиомиоцитах (NRCM). Для оценки цитотоксичности применяли колориметрический коммерческий анализ МТТ. После добавления отдельных соединений клетки инкубировали в среде DMEM в течение 48-ми часов. Эффект CDR132L (красный) сравнивали со рандомизированным LNA-олигонуклеотидом, примененным в качестве контроля (синий) в диапазоне доз 0,01-100 мкМ. Диапазон терапевтических доз отмечен серым цветом. In vitro cytotoxicity assays were performed on human liver cells (HepG2) and isolated neonatal cardiomyocytes (NRCM). The colorimetric commercial MTT assay was used to evaluate cytotoxicity. After adding individual compounds, the cells were incubated in DMEM for 48 hours. The effect of CDR132L (red) was compared with a randomized LNA oligonucleotide used as a control (blue) over a dose range of 0.01-100 μM. The range of therapeutic doses is marked in gray.
2.3. Результаты: В диапазоне терапевтических доз не было обнаружено значительной токсичности CDR132L в клетках HepG2 и NRCM (см. фиг. 1А и 1В). 2.3. Results: No significant CDR132L toxicity was found in HepG2 and NRCM cells over the therapeutic dose range (see FIGS. 1A and 1B).
Пример 3. Обратное ремоделирование левого желудочка при сердечной недостаточности путем введения CDR132L на модели трансгенной мыши Example 3 Reverse Left Ventricular Remodeling in Heart Failure by Administration of CDR132L in a Transgenic Mouse Model
3.1. Цель исследования: Анализ эффективности CDR132L в обращении сердечной недостаточности на мышиной модели сердечной недостаточности. 3.1. Objective: To analyze the efficacy of CDR132L in reversing heart failure in a mouse model of heart failure.
3.2. Описание исследования: 3.2. Description of the study:
Модель гипертрофии сердца: трансгенные (TG) мыши со сверхэкспрессией miR-132 в сердце (Ucar et al. 2012). Cardiac hypertrophy model: transgenic (TG) mice overexpressing miR-132 in the heart (Ucar et al. 2012).
Обработка: еженедельно 20 мг/кг внутрибрюшинно CDR132L или плацебо (см. фиг. 2А) Treatment: weekly 20 mg/kg ip CDR132L or placebo (see Figure 2A)
Группы: однопометник дикого типа (WT) + плацебо, WT + CDR132L, TG + плацебо, TG + CDR132L. n = 6/группа. Groups: wild-type litter (WT) + placebo, WT + CDR132L, TG + placebo, TG + CDR132L. n = 6/group.
Уровни экспрессии miR-132 определяли с помощью qPCR. Статистический тест: непарный t-критерий (фиг. 2В). miR-132 expression levels were determined using qPCR. Statistical test: unpaired t-test (Fig. 2B).
**p<0,01, n = 6/группа. **p<0.01, n=6/group.
3.3. Результаты: 3.3. Results:
Репрезентативные эхокардиографические изображения сердца (фиг. 3А). Representative echocardiographic images of the heart (Figure 3A).
CDR132L обращает гипертрофию, измеренную по массе сердца и конечному диастолическому объему (LVEDV) (фиг. 3B). CDR132L reversed hypertrophy as measured by heart weight and end-diastolic volume (LVEDV) (FIG. 3B).
CDR132L улучшает локальную сократительную функцию в большинстве сегментов левого желудочка (AB, передний базальный; AM, передний средний; AA, передний верхушечный; PA задний верхушечный; PM, задний средний и PB, задний базальный) (фиг. 3C). CDR132L improves local contractile function in most left ventricular segments (AB, anterior basal; AM, anterior mid; AA, anterior apical; PA posterior apical; PM, posterior media and PB, posterior basal) (Fig. 3C).
Пример 4. Введение CDR132L в мышиной модели сердечной недостаточности после ИМ Example 4 Administration of CDR132L in a Mouse Model of Post-MI Heart Failure
4.1. Цель исследования: Тест эффективности CDR132L на мышиной модели сердечной недостаточности после ИМ 4.1. Purpose of the study: To test the effectiveness of CDR132L in a mouse model of heart failure after MI
4.2. Описание исследования 4.2. Study Description
Модель инфаркта миокарда (ИМ) на мышах: постоянная перевязка коронарной артерии (LAD) у мышей C57BL/6N (Kolk et al., 2009). Mouse model of myocardial infarction (MI): permanent coronary artery ligation (LAD) in C57BL/6N mice (Kolk et al., 2009).
Группы: ИМ или симуляцию, обработанные CDR132L или плацебо Groups: MI or sham treated with CDR132L or placebo
Обработка: 20 мг/кг внутрибрюшинно, на 7 и 14 день после ИМ Treatment: 20 mg/kg ip, on
Конечная точка: функция ЛЖ на 28 день после ИМ. n = 6-7/группа. (фиг. 4). Endpoint: LV function at day 28 post-MI. n = 6-7/group. (Fig. 4).
4.3. Результаты: 4.3. Results:
Обработка CDR132L ослабляет дисфункцию левого желудочка после ИМ (фиг. 5A). CDR132L treatment attenuated left ventricular dysfunction after MI (Fig. 5A).
Не зависящие от нагрузки параметры систолической сократительной функции также были улучшены (фиг. 5B) (*p<0,05). Load-independent parameters of systolic contractile function were also improved (FIG. 5B) (*p<0.05).
Обработка CDR132L также улучшает скорость продольной деформации (LSR) и, таким образом, обращает сократительную дисфункцию после ИМ в отдельных сегментах сердца в отдаленной области сердца. (*p<0,05) (фиг. 6). Treatment with CDR132L also improves the longitudinal strain rate (LSR) and thus reverses contractile dysfunction after MI in selected cardiac segments in the distant heart region. (*p<0.05) (Fig. 6).
Обработка CDR132L эффективно подавляет экспрессию miR-132 в тканях сердца, например, в отдаленной (неинфарктной) области и периинфарктной зоне (фиг. 7A). Treatment with CDR132L effectively suppresses miR-132 expression in cardiac tissues, eg, in the remote (non-infarct) region and peri-infarct zone (FIG. 7A).
На гистологическом уровне, CDR132L уменьшает размер кардиомиоцитов в отдаленной области сердца после ИМ (фиг. 7B).At the histological level, CDR132L reduces the size of cardiomyocytes in the distant region of the heart after MI (Fig. 7B).
На уровне ткани, CDR132L снижает экспрессию сигнала ANP сердечного стресса в сердце после ИМ (фиг. 7C). At the tissue level, CDR132L reduces cardiac stress ANP signal expression in the post-MI heart (Fig. 7C).
Пример 5. Тестирование CDR132L на модели сердечной недостаточности после ИМ у свиней Example 5 Testing of CDR132L in a model of heart failure after myocardial infarction in pigs
5.1. Цель исследования: Доказательство in vivo эффективности CDR132L в клинически значимой модели сердца после ИМ. 5.1. Objective: To prove the in vivo efficacy of CDR132L in a clinically relevant post-MI heart model.
5.2. Условия исследования: 5.2. Research conditions:
• Свинья модель инфаркта миокарда, вызванного 90-минутной ишемией (окклюзия LAD) и последующей реперфузией. • Pig model of 90-minute ischemia-induced myocardial infarction (LAD occlusion) followed by reperfusion.
• Группы: плацебо или CDR132L, n = 6 на группу. • Groups: placebo or CDR132L, n = 6 per group.
• Обработка: дважды, в день 3 и в день 28 после ИМ, 0,3 мг/кг внутрикоронарно и 0,5 мг/кг внутривенно, соответственно (фиг. 8). • Treatment: twice, on
• Конечная точка: 8 недель после ИМ. Основной результат: ремоделирование EF и ЛЖ. • Endpoint: 8 weeks after MI. Main result: EF and LV remodeling.
5.3. Результаты: 5.3. Results:
• Обработка CDR132L предотвращает дезадаптивное ремоделирование и улучшает функцию, как было определено измерением конечного диастолического объема, конечного систолического объема, фракции выброса и функции левого желудочка. (фиг. 9A-D). • CDR132L treatment prevents maladaptive remodeling and improves function as determined by measurement of end diastolic volume, end systolic volume, ejection fraction and left ventricular function. (FIGS. 9A-D).
• Обработка CDR132L улучшает сегментарную сократимость в сегментах, соответствующих выжившему/внеинфарктному миокарду, МРТ сердца в конечной точке: n = 6/группа, красная область: p<0,05 (фиг. 9E). • CDR132L treatment improves segmental contractility in segments corresponding to surviving/non-infarcted myocardium, endpoint cardiac MRI: n = 6/group, red region: p<0.05 (FIG. 9E).
• Обработка CDR132L предотвращает дезадаптивное ремоделирование и улучшает жизнеспособность ЛЖ в апикальной области, как определено с помощью NOGA, электро-анатомическое картирование в конечной точке: n = 6/группа, плацебо против CDR132L: p<0,05 (фиг. 10). • Treatment with CDR132L prevents maladaptive remodeling and improves LV viability in the apical region as determined by NOGA, endpoint electro-anatomical mapping: n = 6/group, placebo versus CDR132L: p<0.05 (Figure 10).
• CDR132L нормализует тканевую экспрессию маркеров патологической сердечной недостаточности в ANP и BNP и обеспечивает сдвиг в изоформах тяжелых цепей миозина, т.е. соотношение MYH7/6 (фиг. 11). • CDR132L normalizes tissue expression of markers of pathological heart failure in ANP and BNP and provides a shift in the isoforms of myosin heavy chains, i.е. MYH7/6 ratio (Fig. 11).
• На гистологическом уровне обработка CDR132L эффективно снижает гипертрофию кардиомиоцитов в отдаленных областях ЛЖ, репрезентативная микрофотография изображений области ЛЖ (WGA/DAPI, окрашивание 20x) (фиг. 12A) и графическое изображение (фиг. 12B), n = 6/группа, плацебо и CDR132L: p<0,05. • At the histological level, CDR132L treatment was effective in reducing cardiomyocyte hypertrophy in distant LV regions, representative micrograph images of the LV region (WGA/DAPI, 20x staining) (Fig. 12A) and graphic image (Fig. 12B), n = 6/group, placebo, and CDR132L: p<0.05.
Пример 6. PD-профиль/связывание с мишенью для CDR132L у свиней Example 6 PD profile/target binding for CDR132L in pigs
6.1. Условия исследования: 6.1. Research conditions:
Обработка: 1x, день 0, внутрикоронарная перфузия 0,5 мг/кг или 5 мг/кг, n = 3 свиньи/группа, плацебо против CDR132L: p<0,05. Treatment: 1x,
• анализ микроРНК ткани с помощью qPCR в конечной точке (24 часа после обработки). • tissue microRNA analysis by qPCR at the endpoint (24 hours post-treatment).
6.2. Результаты: 6.2. Results:
• Однократная доза обработки CDR132L дозо-зависимым образом подавляет сердечные уровни miR-132 (фиг. 13). • A single dose of CDR132L treatment dose-dependently suppresses cardiac miR-132 levels (FIG. 13).
Пример 7. Определение токсикологического профиля органов Example 7 Determination of the toxicological profile of organs
7.1. Условия исследования: 7.1. Research conditions:
• Обработка: дважды, в день 3 и в день 28 после ИМ, 0,3 мг/кг внутрикоронарно и 0,5 мг/кг внутривенно, соответственно. • Treatment: twice, on
• Серийный забор крови, конечная точка: 72 часа после обработки, n = 6 свиней/группа, плацебо против CDR132L: p<0,05. • Serial blood sampling, endpoint: 72 hours post-treatment, n = 6 pigs/group, placebo against CDR132L: p<0.05.
7.2. Результаты: 7.2. Results:
• Обработка CDR132L in vivo не вызывает какой-либо токсичности в органах свиней (фиг. 14). • In vivo treatment of CDR132L did not cause any organ toxicity in pigs (FIG. 14).
Пример 8. Уровни мРНК FoxO3 и SERCA2 в сердце на мышиной модели сердечной недостаточности Example 8 FoxO3 and SERCA2 mRNA levels in the heart in a mouse model of heart failure
Уровни мРНК FoxO3 и Serca2 в сердце измеряли у контрольных мышей и мышей miR-132 TG, получавших внутрибрюшинную инъекцию либо контрольного рандомизированного олигонуклеотида, либо CDR132L, еженедельно, 4 раза. Все значения представляют собой среднее ± SEM. *Р < 0,05 (фиг. 15А и 15В) FoxO3 and Serca2 mRNA levels in the heart were measured in control mice and miR-132 TG mice treated with intraperitoneal injection of either control randomized oligonucleotide or CDR132L, weekly, 4 times. All values are mean ± SEM. *P < 0.05 (FIGS. 15A and 15B)
Пример 9. Сравнение разных олигонуклеотидов Example 9 Comparison of Different Oligonucleotides
Цель этого исследования заключалась в оценке терапевтического эффекта нового ингибитора miR-132-3p CDR132L в соответствии с настоящим изобретением с двумя сравнительными олигонуклеотидами. Два сравнительных олигонуклеотида имели такую же последовательность олигонуклеотидов и фосфоротиоатный остов, что и CDR132L, но отличались по распределению структурных блоков LNA в молекуле. CDR2u1 содержал два структурных блока LNA на 5'- и 3'-конце, в то время как для CDR301 каждый нуклеотид нес структурный блок LNA. The aim of this study was to evaluate the therapeutic effect of the new miR-132-3p CDR132L inhibitor according to the present invention with two comparative oligonucleotides. The two comparative oligonucleotides had the same oligonucleotide sequence and phosphorothioate backbone as CDR132L, but differed in the distribution of LNA building blocks in the molecule. CDR2u1 contained two LNA building blocks at the 5' and 3' ends, while for CDR301 each nucleotide carried an LNA building block.
Для проверки эффективности различные олигонуклеотиды вводили в кардиомиоциты новорожденных крыс (NRCM). Эффекты этой обработки контролировали с помощью количественной ПЦР в реальном времени (qRT-PCR) после изменений в экспрессии miR-132-3p и его известного целевого гена FoxO3 (Forkhead box O3). To test the efficacy, various oligonucleotides were injected into neonatal rat cardiomyocytes (NRCM). The effects of this treatment were monitored by quantitative real-time PCR (qRT-PCR) following changes in the expression of miR-132-3p and its known target gene FoxO3 (Forkhead box O3).
Описание эксперимента и результаты показаны на фиг. 16: (A) Обзор экспериментальных условий. Кардиомиоциты новорожденных крыс высевали в день 0 и обрабатывали олигонуклеотидами CDR132L, CDR2u1 или CDR301 (100 нМ каждый) в день 1. В конечной точке клетки собирали для анализа экспрессии генов. (B) Уровни экспрессии miR-132-3p после обработки CDR132L, CDR2u1 или CDR301. (C) Уровни экспрессии целевого гена miR-132-3p Forkhead box O3 (FoxO3) после обработки CDR132L, CDR2u1 или CDR301. Данные представляют собой среднее ± SD. Значения P олигонуклеотидов в сравнении с плацебо определяли с помощью двустороннего критерия Стьюдента. The description of the experiment and the results are shown in Fig. 16: (A) Review of experimental conditions. Neonatal rat cardiomyocytes were seeded on
Обработка NRCMs CDR132L и CDR301 привела к значительному снижению уровней miR-132-3p на 96%, тогда как CDR2u1 снижал экспрессию miRNA на 30% (фиг. 16A-B). Кроме того, обработка CDR132L привела к значительному снижению целевого гена miR-132-3p Foxo3, чего не удалось достичь с помощью CDR2u1 и CDR301 (фиг. 16C). Treatment with NRCMs CDR132L and CDR301 resulted in a significant decrease in miR-132-3p levels by 96%, while CDR2u1 reduced miRNA expression by 30% (Fig. 16A-B). In addition, treatment with CDR132L resulted in a significant reduction in the target miR-132-3p Foxo3 gene, which was not achieved with CDR2u1 and CDR301 (Fig. 16C).
Таким образом, наши данные демонстрируют превосходный ингибирующий эффект CDR132L по сравнению с CDR2u1 и CDR301, на что указывают значительно сниженные уровни экспрессии miR-132-3p и значительное подавление его целевого гена FoxO3. Thus, our data demonstrate a superior inhibitory effect of CDR132L compared to CDR2u1 and CDR301, as indicated by significantly reduced levels of miR-132-3p expression and significant downregulation of its target gene FoxO3.
Пример 10. Эффекты CDR132L при фиброзе сердца Example 10 Effects of CDR132L on Cardiac Fibrosis
Целью данного исследования было оценить антифибротические терапевтические эффекты CDR132L на модели фиброза in vivo. The aim of this study was to evaluate the antifibrotic therapeutic effects of CDR132L in an in vivo model of fibrosis.
Для доказательства in vivo антифибротической активности применяли мышиную модель инфаркта миокарда (ИМ) путем постоянного лигирования левой передней нисходящей коронарной артерии (LAD) у мышей C57BL/6N. Обработку CDR132L применяли на 7 и 14 день, плацебо (рандомизированный олиго-аналог CDR132L, 20 мг/кг) и CDR132L (20 мг/кг). Группы включали контрольную оперированную группу (ложнооперированных мышей) и LAD-лигированных мышей (ИМ, инфаркт миокарда), получавших либо плацебо, либо CDR132L: симуляция + плацебо, симуляция + CDR132L, МИ + плацебо, МИ + CDR132L. n = 6-7/группа. Описание эксперимента приведено на фиг. 17. For in vivo evidence of antifibrotic activity, a mouse model of myocardial infarction (MI) was used by permanent ligation of the left anterior descending coronary artery (LAD) in C57BL/6N mice. Treatment with CDR132L was applied on
Оценка антифибротического эффекта CDR132L in vivo при сердечной недостаточности после ИМ показана на фиг. 18. Фиброз (показан как % отложения коллагена, выявленного путем окрашивания пикросириусом красным (PSR) и регистрацией экспрессии гена альфа-1-цепи коллагена типа III (Col3a1) относительно β-актина) был ослаблен после ИМ в результате обработки CDR132L. Группы включали контрольную группу (ложнооперированных мышей) и LAD-лигированных мышей (MI), получавших либо плацебо (черная колонка), либо CDR132L (белая колонка): симуляция + плацебо, симуляция + CDR132L, ИМ + плацебо, ИМ + CDR132L. Статистический тест (непарный t-критерий) проводили между мышами с ИМ, получавшими плацебо или CDR132L. **р<0,01, n = 6-7/группа. An in vivo assessment of the antifibrotic effect of CDR132L in post-MI heart failure is shown in FIG. 18. Fibrosis (shown as % collagen deposition revealed by picrosirius red (PSR) staining and recording of type III collagen alpha-1 chain (Col3a1) gene expression relative to β-actin) was attenuated after MI by treatment with CDR132L. The groups included controls (sham-operated mice) and LAD-ligated mice (MI) treated with either placebo (black column) or CDR132L (white column): sham + placebo, sham + CDR132L, MI + placebo, MI + CDR132L. A statistical test (unpaired t-test) was performed between MI mice treated with placebo or CDR132L. **p<0.01, n=6-7/group.
Согласно гистологическим результатам, фиброз ослабевал после обработки CDR132L (фиг. 18A). Это было подтверждено на молекулярном уровне по пониженной экспрессии генов-маркеров фиброза, таких как альфа-1-цепь коллагена типа III (Col3a1) (фиг. 18B). According to histological results, fibrosis was attenuated after treatment with CDR132L (Fig. 18A). This was confirmed at the molecular level by decreased expression of fibrosis marker genes such as type
Пример 11. Эффекты CDR132L при легочном и печеночном фиброзе Example 11 Effects of CDR132L on Pulmonary and Hepatic Fibrosis
Антифибротический эффект CDR132L протестировали in vitro для легочного и печеночного фиброза. Для этого первичные фибробласты человека, полученные из печени (первичные фибробласты печени человека, HPLF, «PeloBiotech») и легких (нормальные первичные фибробласты легких человека, NHLF, «Lonza») стимулировали про-фиброзными средствами и обрабатывали CDR132L. Терапевтические эффекты CDRL132L контролировали по следующим ключевым процессам в фиброзном пути, включая скорость пролиферации и изменения в экспрессии генов фиброзного маркера в конечной точке. Кроме того, оценивали экспрессию miR-132-3p для подтверждения эффективности обработки CDR132L. The antifibrotic effect of CDR132L was tested in vitro for pulmonary and hepatic fibrosis. For this, primary human fibroblasts derived from the liver (primary human liver fibroblasts, HPLF, PeloBiotech) and lungs (normal primary human lung fibroblasts, NHLF, Lonza) were stimulated with pro-fibrotic agents and treated with CDR132L. The therapeutic effects of CDRL132L were controlled for the following key processes in the fibrotic pathway, including the rate of proliferation and changes in endpoint fibrotic marker gene expression. In addition, miR-132-3p expression was evaluated to confirm the efficiency of CDR132L treatment.
Для определения пролиферации клеток применяли набор ELISA для клеточной пролиферации (иммуноферментный анализ) (предоставленный компанией «Roche»). Этот колориметрический анализ позволяет количественно оценить пролиферацию клеток на основе измерения BrdU (бромдезоксиуридина), включенного во вновь синтезированную ДНК пролиферирующих клеток. Количество включенного BrdU детектировали и количественно определяли. Значения абсорбции напрямую коррелируют с количеством синтезированной ДНК и, тем самым, с количеством пролиферирующих клеток в соответствующих микрокультурах. Экспрессию генов оценивали с помощью количественной ПЦР в реальном времени (qRT-PCR), измеряющей уровни экспрессии miR-132-3p и фиброзных маркеров, включая коллаген 1A1 (COL1A1), коллаген 1A2 (COL1A2) и матриксную металлопептидазу 2 (MMP2). Cell proliferation ELISA kit (enzyme immunoassay) (provided by Roche) was used to determine cell proliferation. This colorimetric assay quantifies cell proliferation based on the measurement of BrdU (bromodeoxyuridine) incorporated into the newly synthesized DNA of proliferating cells. The amount of included BrdU was detected and quantified. The absorbance values are directly correlated with the amount of DNA synthesized and thus with the number of proliferating cells in the respective microcultures. Gene expression was assessed by quantitative real-time PCR (qRT-PCR) measuring expression levels of miR-132-3p and fibrotic markers including collagen 1A1 (COL1A1), collagen 1A2 (COL1A2), and matrix metallopeptidase 2 (MMP2).
Фиг. 19 относится к модели фиброза печени in vitro: (A) Обзор экспериментальных условий. Первичные фибробласты печени человека (предоставленные компанией «PeloBiotech») высевали в день 0 и обрабатывали фиброзным стимулом (10 нг/мл TGF-β в нормальной питательной среде (полная среда для фибробластов с добавлением 10% FBS)) и CDR132L (100 нМ) в день 1. В конечной точке оценивали пролиферацию клеток и экспрессию генов фиброзных маркеров. (B) Уровни экспрессии miR-132-3p после обработки CDR132L. (C) Пролиферация, оцененная путем мониторинга включения BrdU (бромдезоксиуридина) во время синтеза ДНК. Реагент BrdU был добавлен в среду за 20 ч до конечной точки. (D) Уровни экспрессии генов-маркеров фиброза (коллаген 1A1 (COL1A1), коллаген 1A2 (COL1A2) и матриксная металлопептидаза 2 (MMP2)). В (B) и (D) пунктирная линия указывает уровень экспрессии нестимулированных контрольных клеток. Данные представляют собой среднее ± SD. Значения P для CDR132L в сравнении с контролем определяли с помощью двустороннего t-критерий Стьюдента. Fig. 19 refers to an in vitro model of liver fibrosis: (A) Overview of experimental conditions. Primary human liver fibroblasts (provided by PeloBiotech) were seeded on
Стимуляция HPLF трансформирующим фактором роста бета (TGF-β) (фиг. 19A) приводила к небольшой индукции miR-132-3p, которая значительно снижалась при обработке CDR132L (фиг. 19B). Кроме того, это соединение уменьшало пролиферацию фибробластов (фиг. 19C) и экспрессию генов фиброза, включая COL1A1, COL1A2 и MMP2 (фиг. 19D). Stimulation of HPLF with transforming growth factor beta (TGF-β) (FIG. 19A) resulted in a slight induction of miR-132-3p, which was significantly reduced by treatment with CDR132L (FIG. 19B). In addition, this compound reduced fibroblast proliferation (FIG. 19C) and the expression of fibrosis genes including COL1A1, COL1A2 and MMP2 (FIG. 19D).
Фиг. 20 относится к модели фиброза легких in vitro: (A) Обзор экспериментальных условий. Нормальные фибробласты легких человека (предоставленные компанией «Lonza») высевали в день 0 и обрабатывали фиброзным стимулом (высокий FBS (5%) в среде для роста фибробластов и CDR132L (100 нМ) в день 1. В конечной точке оценивали пролиферацию клеток и экспрессию генов. (B) Уровни экспрессии miR-132-3p после обработки CDR132L. (C) Пролиферация, оцененная путем мониторинга включения BrdU (бромдезоксиуридина) во время синтеза ДНК. Реагент BrdU добавляли в среду за 20 ч до конечной точки. В (B) пунктирная линия показывает уровень экспрессии нестимулированных контрольных клеток. Данные представляют собой среднее значение ± SD. Значения P CDR132L в сравнении с контролем определяли с помощью двустороннего t-критерий Стьюдента. Fig. 20 refers to an in vitro model of pulmonary fibrosis: (A) Overview of experimental conditions. Normal human lung fibroblasts (supplied by Lonza) were plated on
В клетках NHLF после стимуляции фиброза высоким FBS (5%-ный FBS по сравнению с 2%-ным FBS в нормальных условиях роста) (фиг. 20A) не наблюдали повышения miR-132-3p (фиг. 20B). Тем не менее, обработка CDR132L привела к значительному снижению целевой микроРНК (фиг. 20B) и пролиферации фибробластов (фиг. 20C). No increase in miR-132-3p was observed in NHLF cells after fibrosis stimulation with high FBS (5% FBS versus 2% FBS under normal growth conditions) (FIG. 20A) (FIG. 20B). However, treatment with CDR132L resulted in a significant decrease in target miRNA (Figure 20B) and fibroblast proliferation (Figure 20C).
Таким образом, наши данные демонстрируют значительный антифиброзный эффект олигонуклеотидного аналога CDR132L в фибробластах печени или легких, а также в сердечной ткани. Мы предполагаем, что этот эффект может быть основан на антипролиферативной способности препарата и/или на его влиянии на экспрессию белка внеклеточного матрикса. Thus, our data demonstrate a significant antifibrotic effect of the CDR132L oligonucleotide analog in liver or lung fibroblasts, as well as in cardiac tissue. We hypothesize that this effect may be based on the drug's antiproliferative ability and/or its effect on extracellular matrix protein expression.
Список литературыBibliography
1. Barry, S.P.; Townsend, P.A. (2010). What causes a broken heart-Molecular insights into heart failure. Int Rev Cell Mol Biol 284, 113-179. 1. Barry, S.P.; Townsend, P.A. (2010). What causes a broken heart-Molecular insights into heart failure. Int Rev Cell Mol Biol 284, 113-179.
2. Datta, S.R.; Brunet, A.; Greenberg, M.E. (1999). Cellular survival: a play in three Akts. Genes Dev. 13, 2905-2927. 2. Datta, S. R.; Brunet, A.; Greenberg, M.E. (1999). Cellular survival: a play in three Akts. Gene Dev. 13, 2905-2927.
3. DeBosch, B.J.; Muslin, A.J. (2008). Insulin signaling pathways and cardiac growth. J Mol Cell Cardiol. 44, 855-864. 3. DeBosch, B.J.; Muslin, A.J. (2008). Insulin signaling pathways and cardiac growth. J Mol Cell Cardiol. 44, 855-864.
4. Frescas, D.; Valenti, L.; Accili, D. (2005). Nuclear trapping of the forkhead transcription factor FoxO1 via Sirt1-dependent deacetylation promotes expression of glucogenetic genes. J Biol Chem. 280, 20589-20595. 4. Frescas, D.; Valenti, L.; Accili, D. (2005). Nuclear trapping of the forkhead transcription factor FoxO1 via Sirt1-dependent deacetylation promotes expression of glucogenetic genes. J Biol Chem. 280, 20589-20595.
5. Glas, D.J. (2010). PI3 kinase regulation of skeletal muscle hypertrophy and atrophy. Curr Top Microbiol Immunol. 346, 267-278. 5 Glas, D.J. (2010). PI3 kinase regulation of skeletal muscle hypertrophy and atrophy. Curr Top Microbiol Immunol. 346, 267-278.
6. Gottlieb, R.A.; Gustafsson, A.B. (2011). Mitochondrial turnover in the heart. Biochim Biophys Acta. 1813, 1295-1301. 6. Gottlieb, R.A.; Gustafson, A.B. (2011). Mitochondrial turnover in the heart. Biochim Biophys Acta. 1813, 1295-1301.
7. Kolk, M.V.; Meyberg, D.; DenseT.; Tang-Quam, K. R.; Robbins R.C.; Reichenspurner, H.; Schrepfer. S (2009), J. Vis Exp. 32, pii: 1438. doi: 103791/1438 7. Kolk, M. V.; Meyberg, D.; DenseT.; Tang-Quam, K. R.; Robbins R.C.; Reichenspurner, H.; Schrepfer. S (2009), J. Vis Exp. 32, pii: 1438. doi: 103791/1438
8. McMullen, J.R.; Shioi, T.; Huang, W.Y.; Zhang, L.; Tarnavski, O.; Bisping, E.; Schinke, M.; Kong, S.; Sherwood, M.C.; Brown, J. et al. (2004). The insulin-like growth factor 1 receptor induces physiological heart growth via the phosphoinositide 3-kinase (p110alpha) pathway. J Biol Chem. 279, 4782-4793. 8. McMullen, J.R.; Shioi, T.; Huang, W. Y.; Zhang, L.; Tarnavski, O.; Bisping, E.; Schinke, M.; Kong, S.; Sherwood, M.C.; Brown, J. et al. (2004). The insulin-
9. Ni, Y.G.; Berenji, K.; Wang, N.; Oh, M.; Sachan, N.; Dey, A.; Cheng, J.; Lu, G.; Morris, D.J.; Castrillon, D.H. et al. (2006). Foxo transcription factors blunt cardiac hypertrophy by inhibiting calcineurin signaling. Circulation. 114, 1159-1168. 9. Ni, Y. G.; Berenji, K.; Wang, N.; Oh, M.; Sachan, N.; Dey, A.; Cheng, J.; Lu, G.; Morris, D.J.; Castrillon, D.H. et al. (2006). Foxo transcription factors blunt cardiac hypertrophy by inhibiting calcineurin signaling. circulation. 114, 1159-1168.
10. Ronnebaum, S.M.; Patterson, C. (2010). The foxO family in cardiac function and dysfunction. Annu Rev Physiol. 72, 81-94. 10. Ronnebaum, S.M.; Patterson, C. (2010). The foxO family in cardiac function and dysfunction. Annu Rev Physiol. 72, 81-94.
11. Skurk, C.; Izumiya, Y.; Maatz, H.; Razeghi, P.; Shiojima, I.; Sandri, M.; Sato, K.; Zeng, L.; Schiekofer, S.; Pimentel, D. et al. (2005). The FOXO3a transcription factor regulates cardiac myocyte size downstream of AKT signaling. J Biol Chem. 280, 20814-23. 11 Skurk, C.; Izumiya, Y.; Maatz, H.; Razeghi, P.; Shiojima, I.; Sandri, M.; Sato, K.; Zeng, L.; Schiekofer, S.; Pimentel, D. et al. (2005). The FOXO3a transcription factor regulates cardiac myocyte size downstream of AKT signaling. J Biol Chem. 280, 20814-23.
12. Ucar, A. et al. (2012), Nat. Commun. 3: 1078. doi: 10.1038/ncomms2009. 12. Ucar, A. et al. (2012), Nat. commun. 3:1078. doi:10.1038/ncomms2009.
Claims (35)
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762599050P | 2017-12-15 | 2017-12-15 | |
| EP17207738.0 | 2017-12-15 | ||
| US62/599,050 | 2017-12-15 | ||
| EP17207738 | 2017-12-15 | ||
| PCT/EP2018/085008 WO2019115788A1 (en) | 2017-12-15 | 2018-12-14 | Improved compound for treatment of heart failure |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020122587A3 RU2020122587A3 (en) | 2022-01-10 |
| RU2020122587A RU2020122587A (en) | 2022-01-10 |
| RU2794975C2 true RU2794975C2 (en) | 2023-04-26 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2330861C2 (en) * | 2003-06-04 | 2008-08-10 | Фиброген, Инк. | Antibodies to connective tissue growth factor |
| WO2010105096A2 (en) * | 2009-03-11 | 2010-09-16 | University Of Massachusetts | Modulation of human cytomegalovirus replication by micro-rna 132 (mir132), micro-rna 145 (mir145) and micro-rna 212 (mir212) |
| WO2013034653A1 (en) * | 2011-09-06 | 2013-03-14 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | The mirna-212/132 family as a therapeutic target |
| WO2016042561A2 (en) * | 2014-09-21 | 2016-03-24 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Downregulating mir-132 for the treatment of lipid related disorders |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2330861C2 (en) * | 2003-06-04 | 2008-08-10 | Фиброген, Инк. | Antibodies to connective tissue growth factor |
| WO2010105096A2 (en) * | 2009-03-11 | 2010-09-16 | University Of Massachusetts | Modulation of human cytomegalovirus replication by micro-rna 132 (mir132), micro-rna 145 (mir145) and micro-rna 212 (mir212) |
| WO2013034653A1 (en) * | 2011-09-06 | 2013-03-14 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | The mirna-212/132 family as a therapeutic target |
| WO2016042561A2 (en) * | 2014-09-21 | 2016-03-24 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Downregulating mir-132 for the treatment of lipid related disorders |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kline et al. | Rapamycin inhibits the growth and muscle-sparing effects of clenbuterol | |
| Tan et al. | Combination therapy with paricalcitol and trandolapril reduces renal fibrosis in obstructive nephropathy | |
| Khan et al. | Fibulin-2 is essential for angiotensin II-induced myocardial fibrosis mediated by transforming growth factor (TGF)-β | |
| WO2017170434A1 (en) | Medicine obtained by combining fxr agonist and arb | |
| JP2016520130A (en) | BET inhibition as a novel therapeutic strategy in heart disease | |
| US10307401B2 (en) | Compositions and methods for treatment of prostate cancer | |
| JP2021130704A (en) | Compositions and Methods for Modulating AT2R Activity | |
| US20220162597A1 (en) | Compound for treatment of heart failure | |
| Salido-Medina et al. | BMP7-based peptide agonists of BMPR1A protect the left ventricle against pathological remodeling induced by pressure overload | |
| Wang et al. | Curcumin analog JM-2 alleviates diabetic cardiomyopathy inflammation and remodeling by inhibiting the NF-κB pathway | |
| RU2794975C2 (en) | Advanced compound for the treatment of heart failure | |
| CN114450067B (en) | Treatment of heart failure in human subjects | |
| RU2811365C2 (en) | Treatment of heart failure in humans | |
| Karashima et al. | Blockade of the vascular endothelial growth factor-receptor 2 pathway inhibits the growth of human renal cell carcinoma, RBM1-IT4, in the kidney but not in the bone of nude mice | |
| Zhang et al. | The infarction zone rather than the noninfarcted remodeling zone overexpresses angiotensin II receptor type 1 and is the main source of ventricular atrial natriuretic peptide | |
| WO2022220147A1 (en) | Muscle atrophy inhibition composition | |
| WO2019146621A1 (en) | Medicinal composition for treating diseases associated with increase in expression level of periostin or change in splicing variant thereof | |
| WO2023211864A1 (en) | Use of lat1 inhibitors to treat obesity | |
| WO2008157177A1 (en) | Methods for modulating osteoblast cell differentiation and bone generation through inhibition of a prolyl hydroxylase | |
| US20090054328A1 (en) | Reagents and Methods for Modulating Gene Expression Related to Hypertension | |
| KR20110111712A (en) | Method targeting megalin for diagnosis, prevention or treatment of body weight disorders |