RU2793318C1

RU2793318C1 - Treatment of wounds and burns

Info

Publication number: RU2793318C1
Application number: RU2021133155A
Authority: RU
Inventors: Светлана Николаевна Лебедева; Дмитрий Валерьевич Шалбуев; Туяна Булатовна Тумурова; Сэсэгма Дашиевна Жамсаранова
Filing date: 2021-11-16
Publication date: 2023-03-31

Abstract

FIELD: pharmaceutical industry.

SUBSTANCE: invention discloses an agent for the treatment of wounds and burns, characterized by the following: it is a collagen in the form of a gel with an MM of 301.0–366.0 kDa and a protein mass fraction of 6.68–7.08%.

EFFECT: achievement of a complex anti-inflammatory, antioxidant, regenerating effect on the wound, contributing to the wound healing in a short time.

1 cl, 3 dwg, 6 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается средств животного происхождения, стимулирующих репарационные процессы кожной ткани в результате термического поражения и обладающих комплексными противовоспалительным, регенерирующим и антиоксидантным эффектами, и может применяться в медицине и ветеринарии.SUBSTANCE: invention relates to pharmaceutical industry and relates to means of animal origin, stimulating skin tissue repair processes as a result of thermal damage and having complex anti-inflammatory, regenerating and antioxidant effects, and can be used in medicine and veterinary medicine.

Ожоги являются одним из широко распространенных поражений кожи, и ежегодно в РФ 420-450 тыс. пострадавших обращаются за медицинской помощью. При этом 70% из них могут проходить лечение в амбулаторных условиях, поскольку имеют незначительные по площади поверхностные ожоги [1-3].Burns are one of the most widespread skin lesions, and annually in the Russian Federation 420-450 thousand victims seek medical help. At the same time, 70% of them can be treated on an outpatient basis, since they have minor superficial burns [1-3].

Выбор методов, средств и тактики лечения пациентов с ожогами остаются актуальной проблемой современной комбустиологии и постоянно совершенствуются [4, 5].The choice of methods, means and tactics for the treatment of patients with burns remains an urgent problem of modern combustiology and is constantly being improved [4, 5].

Анализ фармацевтического рынка противоожоговых лекарственных препаратов для наружного применения РФ показал, что на российском фармацевтическом рынке зарегистрировано более 50 наименований действующих веществ (МНН) и более 80 торговых наименований дерматологических препаратов различной формы выпуска (мази, растворы, кремы, аэрозоли, порошки, пасты, гели и т.д.) и состава (компоненты растительного, животного, минерального и синтетического происхождения) [6]. Несмотря на такое обилие противоожоговых средств проблема получения новых препаратов остается актуальной.An analysis of the pharmaceutical market of anti-burn drugs for external use in the Russian Federation showed that more than 50 active ingredient names (INN) and more than 80 trade names of dermatological preparations of various forms of release (ointments, solutions, creams, aerosols, powders, pastes, gels) are registered on the Russian pharmaceutical market. etc.) and composition (components of plant, animal, mineral and synthetic origin) [6]. Despite such an abundance of anti-burn drugs, the problem of obtaining new drugs remains relevant.

Исследования последних лет направлены на получение средств на основе коллагена и оценку возможности их использования для производства лекарственных и косметических средств [7-9].Recent studies are aimed at obtaining collagen-based products and evaluating the possibility of their use for the production of medicines and cosmetics [7-9].

Такие средства служат биопластическим материалом и матрицей для формирования собственной соединительной ткани [10, 11].Such agents serve as a bioplastic material and a matrix for the formation of their own connective tissue [10, 11].

Основными достоинствами коллагеновых средств являются биоразлагаемость, биосовместимость, слабая антигенность, способность образовывать комплексы с лекарственными препаратами и стимулировать регенерацию [12, 13].The main advantages of collagen preparations are biodegradability, biocompatibility, weak antigenicity, the ability to form complexes with drugs and stimulate regeneration [12, 13].

Известен коллагенсодержащий продукт широкого медицинского и косметического назначения «Кололень» и способ его получения. Данный продукт представляет собой гелеобразную массу, в состав которой входит коллаген с ММ 2,0-20 кДа (75-80%), рН продукта 2,5-3,5 [14].Known collagen-containing product for a wide medical and cosmetic purpose "Kololen" and a method for its production. This product is a gel-like mass, which includes collagen with an MM of 2.0–20 kDa (75–80%), product pH 2.5–3.5 [14].

Однако недостатком данного продукта является низкое значение рН (возможно иссушение кожи, рН нормальной кожи 5,2-5,7) и для экстрагирования коллагена используется агрессивный компонент - уксусная кислота.However, the disadvantage of this product is the low pH value (drying of the skin is possible, the pH of normal skin is 5.2-5.7) and an aggressive component, acetic acid, is used to extract collagen.

Известен гидролизат коллагена, применяемый для улучшения здоровья кожи, волос и/или ногтей человека, получаемый ферментативным гидролизом при воздействии эндопептидаз и молекулярным весом менее 3500 Да. Данный продукт может быть использован перорально (как биологически активная добавка), так и для местного применения (в качестве компонент кремов, мазей, лосьонов и шампуней) [15].Known hydrolyzate of collagen used to improve the health of human skin, hair and/or nails, obtained by enzymatic hydrolysis when exposed to endopeptidases and a molecular weight of less than 3500 Da. This product can be used orally (as a dietary supplement) and for topical application (as a component of creams, ointments, lotions and shampoos) [15].

Недостатком известного аналога является то, что для его получения используются эндопротеазы с различной специфичностью, не менее 2-х типов. Применение нескольких типов эндопептидаз для получения препарата пептидов усложняет его реализацию в промышленном масштабе и ограничивает область применения.The disadvantage of the known analogue is that endoproteases with different specificity, at least 2 types, are used to obtain it. The use of several types of endopeptidases to obtain a peptide preparation complicates its implementation on an industrial scale and limits its scope.

Известен гидролизат коллагена для применения в качестве биологически активной добавки, полученный ферментативным гидролизом (нейтральной эндопротеазы из Bacillus subtilis) костного желатина типа В, состоящий из пептидов, имеющих молекулярный вес от 1500 до 13500Да, средний молекулярный вес которых находится в пределах от 4500 до 6000 Да [16].A collagen hydrolyzate is known for use as a dietary supplement, obtained by enzymatic hydrolysis (neutral endoprotease from Bacillus subtilis) of type B bone gelatin, consisting of peptides having a molecular weight of 1500 to 13500 Da, the average molecular weight of which is in the range from 4500 to 6000 Da [16].

Данный гидролизат коллагена обладает высоким стимулирующим действием для предотвращения и/или лечения остеопороза, но недостатком этого продукта является узкая направленность, а для его получения используется ферментативный метод.This collagen hydrolyzate has a high stimulating effect for the prevention and/or treatment of osteoporosis, but the disadvantage of this product is a narrow focus, and an enzymatic method is used to obtain it.

Известен пептидный препарат из коллагена для регенерации тканей кожи, способ его получения и применения. Препарат состоит из фракции активных пептидов с ММ от 3600-10000 Да, который может быть использован для регенерации кожи животных и человека [17].Known peptide preparation of collagen for the regeneration of skin tissues, the method of its production and use. The drug consists of a fraction of active peptides with an MM of 3600-10000 Da, which can be used for skin regeneration in animals and humans [17].

Недостатком известного аналога является то, что для получения гидролизата применяется ферментный препарат (эндопептидаза, например, трипсин).The disadvantage of the known analogue is that an enzyme preparation (endopeptidase, for example, trypsin) is used to obtain the hydrolyzate.

Известен продукт получения полностью гидролизованного коллагена для получения высокоочищенной смеси из 15 свободных аминокислот. Известное изобретение относится к пищевой промышленности (для перорального применения) и медицине (лечение опорно-двигательного аппарата, косметология), а полученный продукт содержит 92% свободных аминокислот и 5% короткоцепочечных пептидов [18].Known product for obtaining fully hydrolyzed collagen to obtain a highly purified mixture of 15 free amino acids. The known invention relates to the food industry (for oral use) and medicine (treatment of the musculoskeletal system, cosmetology), and the resulting product contains 92% free amino acids and 5% short-chain peptides [18].

Недостатком известного аналога является то, что для его получения используются агрессивные компоненты в высоких концентрациях - 16-17%) соляная кислота, 2Н щелочь, а процесс получения очень трудоемкий.The disadvantage of the known analogue is that aggressive components are used in high concentrations - 16-17%) hydrochloric acid, 2N alkali, and the production process is very laborious.

Известно бактерицидное противоожоговое биодеградируемое средство на основе фармацевтической композиции коллагена (90,0-97,0%) с лактоферрином (3,0-10,0%) для аппликативного применения. При получении готового средства применяется длительная сублимационная сушка (в течение 24 часов), а также возможно помещение готового продукта в пары формальдегида, а затем выдерживание в вакуум-камере (в течение 24 часов) [19].Known bactericidal burn biodegradable agent based on the pharmaceutical composition of collagen (90.0-97.0%) with lactoferrin (3.0-10.0%) for applicative use. Upon receipt of the finished product, long-term sublimation drying is used (within 24 hours), and it is also possible to place the finished product in formaldehyde vapor, and then keep it in a vacuum chamber (for 24 hours) [19].

Недостатком известного средства является трудоемкость получения и стоимость средства.The disadvantage of the known means is the complexity of obtaining and the cost of funds.

Известен способ получения продуктов растворения коллагена, включающий измельчение и промывку коллагенсодержащего сырья, его щелочно-солевую обработку, солевую промывку сульфатом натрия, нейтрализацию, повторную промывку продукта и его растворение в кислотном агенте. При растворении в качестве кислотного агента используют кисломолочную композицию, обладающую величиной титруемой кислотности 250-300°Т, концентрацией молочной кислоты не менее 25-30 г/дм 3 и активной реакцией среды рН не более 4,0, при этом обработку проводят при температуре (24±2)°С, ЖК=1 и переменном механическом воздействии, продолжительности растворения в течение 11-13 суток. По данному способу описан продукт растворения коллагена, обладающий характеристиками, представленными в таблице 1 [20].A known method of obtaining collagen dissolution products, including grinding and washing of collagen-containing raw materials, its alkaline-salt treatment, salt washing with sodium sulfate, neutralization, re-washing of the product and its dissolution in an acidic agent. When dissolved as an acid agent, a fermented milk composition is used, which has a titratable acidity of 250-300°T, a lactic acid concentration of at least 25-30 g/dm 24±2)°C, LC=1 and variable mechanical action, duration of dissolution within 11-13 days. According to this method, a collagen dissolution product is described, which has the characteristics presented in table 1 [20].

Недостатками известного средства является то, что оно может быть использовано для получения продуктов растворения коллагена на основе отходов кожевенного производства и некондиционного кожевенного сырья, но оно не предназначено для коррекции ожоговых поражений кожи, индуцированных термическими воздействиями.The disadvantages of the known tool is that it can be used to obtain collagen dissolution products based on leather waste and substandard leather raw materials, but it is not intended for the correction of skin burns induced by thermal effects.

Известен способ получения биоактивного коллагенового продукта включающий отмоку коллагенсодержащего сырья, щелочно-солевую обработку, солевую промывку сульфатом натрия, нейтрализацию, повторную промывку продукта в чистой воде, механическое измельчение, растворение в кислотном агенте. При растворении в качестве кислотного агента используют кисломолочную композицию и комбинированную сыворотку в соотношении 1:1, обладающего величиной титруемой кислотности 270-310°Т и активной реакцией среды до 4,0, причем обработку проводят при температуре 36±2°С, продолжительность растворения составляет 4-6 суток [21].A known method for producing a bioactive collagen product includes soaking collagen-containing raw materials, alkaline-salt treatment, salt washing with sodium sulfate, neutralization, repeated washing of the product in pure water, mechanical grinding, dissolution in an acid agent. When dissolved as an acid agent, a fermented milk composition and combined whey are used in a ratio of 1: 1, which has a titratable acidity value of 270-310 ° T and an active reaction of the medium up to 4.0, and the treatment is carried out at a temperature of 36 ± 2 ° C, the duration of dissolution is 4-6 days [21].

Задачей настоящего изобретения является расширение арсенала доступных в экономическом плане и удобных для практического применения средств на основе коллагена, имеющего универсальный состав и характеристики, позволяющие использовать его в качестве мазевого средства.The objective of the present invention is to expand the arsenal of economically available and convenient for practical use agents based on collagen, which has a universal composition and characteristics that allow it to be used as an ointment.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является достижение комплексного противовоспалительного, антиоксидантного, регенерирующего действия на рану, способствующее ее ранозаживлению в короткие сроки.The technical result of the invention is the achievement of a complex anti-inflammatory, antioxidant, regenerating effect on the wound, contributing to its wound healing in a short time.

Технический результат достигается тем, что средство для лечения ран и ожогов, согласно изобретения, представляет собой гелеобразную массу белого цвета с приятным кисломолочным запахом с рН 4,0-5,0, в состав которого входит коллаген с ММ 300,0-366,0 Кда и имеет показатели: вязкости - 2375,0-2625,0 сПз; плотности - 1,036-1,256 г/м³, массовой доли белка - 6,68-7,08%, обладающее противовоспалительными, ранозаживляющими и антиоксидантными свойствами.The technical result is achieved by the fact that the agent for the treatment of wounds and burns, according to the invention, is a gel-like mass of white color with a pleasant sour-milk odor with a pH of 4.0-5.0, which includes collagen with MM 300.0-366.0 Kda and has indicators: viscosity - 2375.0-2625.0 cps; density - 1.036-1.256 g/m ³ , mass fraction of protein - 6.68-7.08%, which has anti-inflammatory, wound healing and antioxidant properties.

Технический результат достигается также благодаря тому, что средство для лечения ран и ожогов изготовлено с возможностью использования для регенерации тканей кожи человека и животных.The technical result is also achieved due to the fact that the agent for the treatment of wounds and burns is made with the possibility of being used for the regeneration of human and animal skin tissues.

Заявляемое техническое решение является неочевидным, так как при анализе идентифицированных источников информации не выявлены иные препараты средств с признаками, совпадающими с отличительными преимущественными признаками предлагаемого изобретения, и не установлена известность влияния отличительных признаков на указанный технический результат.The claimed technical solution is not obvious, since the analysis of the identified sources of information did not reveal other drugs with features that coincide with the distinctive advantageous features of the invention, and the influence of the distinctive features on the specified technical result has not been established.

Отличительной особенностью предлагаемого средства для лечения ран и ожогов является быстрое ранозаживление, обусловленное высоким комплексным противовоспалительным, ранозаживляющим и антиоксидантным действием.A distinctive feature of the proposed agent for the treatment of wounds and burns is rapid wound healing, due to the high complex anti-inflammatory, wound healing and antioxidant effects.

Авторами проведен поиск по патентной документации, литературным источникам и не выявлен наиболее близкий аналог для предлагаемого средства для лечения ран и ожогов.The authors conducted a search in patent documentation, literary sources and did not identify the closest analogue for the proposed agent for the treatment of wounds and burns.

По заявляемому изобретению «Средство для лечения ран и ожогов» экспериментально были проведены исследования по получению коллагенового средства по известному изобретению [21].According to the claimed invention "Agent for the treatment of wounds and burns", experimental studies were carried out to obtain a collagen agent according to the known invention [21].

Для изучения свойств полученного коллагенового средства были выработаны три партии. Характеристика полученного коллагенового средства приведена в таблице 2.To study the properties of the obtained collagen agent, three batches were developed. The characteristics of the obtained collagen agent are shown in table 2.

Полученные основные характеристики коллагенового средства в предлагаемом изобретении «Средство для лечения ран и ожогов» и заявленные в формуле изобретения: рН 4,0-5,0; ММ 300,0-366,0 Кда; вязкость - 2375,0-2625,0 сПз; плотность - 1,036-1,256 г/м³; массовая доля белка - 6,68-7,08% являются оптимальными для обеспечения технического результата.The obtained main characteristics of the collagen agent in the present invention "Means for the treatment of wounds and burns" and declared in the claims: pH 4.0-5.0; MM 300.0-366.0 Kda; viscosity - 2375.0-2625.0 cps; density - 1.036-1.256 g / m ³ ; mass fraction of protein - 6.68-7.08% are optimal to ensure the technical result.

Исследованные показатели определяли методами, указанными ниже.The studied indicators were determined by the methods indicated below.

Определение динамической вязкости проводили с использованием вискозиметра Брукфильда [22]. Определение плотности проводили с использованием ареометра [23]. Определение рН осуществляли потенциометрическим методом [24]. Массовую долю сухого вещества и массовую долю влаги определяли путем высушивания в сушильном шкафу [25]. Массовую долю жировых веществ определяли экстракцией органическими растворителями [26]. Определение массовой доли белка проводили по методу Кьельдаля [27]. Для определения молекулярной массы полученных биополимеров использовали уравнение Марка-Хаувинка (1), основанного на изменении величины характеристической вязкости, определяемой, экстраполяцией значений приведенной вязкости к концентрации, равной нулю [28]. Поэтому для нахождения молекулярной массы определяли вязкость водных растворов ПРК с различными концентрациями [29].The dynamic viscosity was determined using a Brookfield viscometer [22]. Density was determined using a hydrometer [23]. The pH was determined by the potentiometric method [24]. The mass fraction of dry matter and the mass fraction of moisture were determined by drying in an oven [25]. The mass fraction of fatty substances was determined by extraction with organic solvents [26]. Determination of the mass fraction of protein was carried out according to the Kjeldahl method [27]. To determine the molecular weight of the obtained biopolymers, the Mark-Houwink equation (1) was used, based on the change in the intrinsic viscosity, determined by extrapolating the values of the reduced viscosity to a concentration equal to zero [28]. Therefore, to find the molecular weight, the viscosity of aqueous solutions of PRK with different concentrations was determined [29].

где К - константа для данной системы;where K is a constant for a given system;

α - величина, характеризующая форму макромолекул в растворе.α is a value that characterizes the shape of macromolecules in solution.

Для расчетов использовали следующие значения констант, где К=1,34×10^-4, α=0,71. Из уравнения Марка-Хаувинка Куна следует, что логарифм характеристической вязкости является линейной функцией логарифма молекулярной массы (2):The following values of constants were used for calculations, where K=1.34×10 ^-4 , α=0.71. It follows from the Mark-Houwink Kuhn equation that the logarithm of intrinsic viscosity is a linear function of the logarithm of molecular weight (2):

На лабораторных животных было изучено ранозаживляющее действие коллагенового средства, а также определены его противовоспалительные и антиоксидантные свойства. Была доказана эффективность применяемого заявляемого средства в терапии ожоговой раны. Его ежедневные аппликации приводили к нормализации функционального потенциала поврежденной кожи, коррекции деструктивных преобразований в ней, ускорению сроков заживления. Заявленное средство проявляет комплексное противовоспалительное, антиоксидантное и регенерирующее действие на рану, способствуя ее заживлению в короткие сроки.The wound healing effect of the collagen agent was studied on laboratory animals, and its anti-inflammatory and antioxidant properties were determined. The effectiveness of the claimed agent used in the treatment of burn wounds has been proven. Its daily applications led to the normalization of the functional potential of damaged skin, the correction of destructive changes in it, and the acceleration of healing time. The claimed agent exhibits a complex anti-inflammatory, antioxidant and regenerating effect on the wound, promoting its healing in a short time.

Предлагаемое изобретение поясняется изображениями, где на фиг. 1, 2, 3 изображены микрофотографические картины кожного покрова белых крыс на 20-ый день после термического ожога; сохраняется небольшая гиперемия с гнойным экссудатом, образование волосяных фолликул:The present invention is illustrated by drawings, where in Fig. 1, 2, 3 are microphotographic pictures of the skin of white rats on the 20th day after thermal burn; slight hyperemia with purulent exudate persists, the formation of hair follicles:

Фиг. 1 - Контроль: 1-лейкоцитарно-некротический струп, 2-гнойный экссудат, 3-клетки полибласты, 4-сосочки дермы, 5-клетки фибробласты.Fig. 1 - Control: 1-leukocytic-necrotic scab, 2-purulent exudate, 3-polyblast cells, 4-dermal papillae, 5-fibroblast cells.

Фиг. 2 - Опытная 1: 1-волосяные фолликулы, 2-роговой слой, 3-шиповатый слой, 4-сосочковый слой, 5-шелушение, 6-новая соединительная ткань.Fig. 2 - Experimental 1: 1-hair follicles, 2-stratum corneum, 3-spiky layer, 4-papillary layer, 5-desquamation, 6-new connective tissue.

Фиг. 3 - Опытная 2: 1-лейкоцитарно-некротический слой, 2-эпителий волосяных фолликул, 3-сосочковый слой, 4-гнойный экссудат. Окраска по Ван-Гизон (ув.об. 10×10).Fig. 3 - Experimental 2: 1-leukocyte-necrotic layer, 2-epithelium of hair follicles, 3-papillary layer, 4-purulent exudate. Coloring according to Van Gieson (10×10 magnification).

Приведенные фигуры 1-3 в описании изобретения поясняют результаты таблиц 3 и 4 примера 1.The given figures 1-3 in the description of the invention explain the results of tables 3 and 4 of example 1.

Полученное коллагеновое средство применяли в эксперименте в качестве мази на модели термического ожога у экспериментальных животных. Экспериментальные исследования были проведены на 32 белых крысах линии Wistar, обоего пола, массой 180-200 г. Животные были распределены на 4 группы по 8 особей в каждой: 1-я - контрольная (животные после моделирования ожога с «естественным заживлением ран»); 2-я - опытная 1 (животные после моделирования ожога обрабатывались коллагеновым средством); 3-я - опытная 2 - группа сравнения, в которой для обработки ран животных после ожога использовали мазь «Левомеколь» и 4-я - группа интактных животных (норма, без термического ожога). Изучаемые средства наносили на область раны ежедневно, один раз в день, по 0,5 г. The resulting collagen agent was used in the experiment as an ointment on a model of thermal burns in experimental animals. Experimental studies were carried out on 32 Wistar white rats, of both sexes, weighing 180-200 g. Animals were divided into 4 groups of 8 individuals each: 1st - control (animals after modeling a burn with "natural wound healing"); 2nd - experimental 1 (animals after modeling the burn were treated with a collagen agent); 3rd - experimental 2 - comparison group, in which Levomekol ointment was used to treat wounds of animals after a burn, and 4th - a group of intact animals (normal, without thermal burns). The studied agents were applied to the wound area daily, once a day, 0.5 g each.

Препарат «Левомеколь» (фармакопейный препарат, производство «Нижфарм», Россия) является комбинированным противомикробным средством для наружного применения, оказывает противовоспалительное действие и стимулирует процессы регенерации. Содержит основные активные вещества, отличные от компонентов заявленного коллагенового средства, а именно: хлорамфеникол и метилурацил [30].The drug "Levomekol" (pharmacopoeial drug, production "Nizhpharm", Russia) is a combined antimicrobial agent for external use, has an anti-inflammatory effect and stimulates regeneration processes. Contains the main active substances that are different from the components of the claimed collagen agent, namely: chloramphenicol and methyluracil [30].

Модель термического ожога воспроизводилась на экспериментальных животных по методу Б.А. Парамонова и соавт. [31]. За день до моделирования ожога на боковой поверхности животного проводили выстригание ножницами видимой накожной части волос (4×4 см). Для воспроизведения модели ожога использовали стеклянную пробирку диаметром 22 мм и длиной 20-25 см, заполненную на 2/3 высоты горячей водой (100°С), с последующим контактом с участком кожи в течение 10 сек. В результате у экспериментальных животных формировался ожог III «а» степени площадью 4-5% от полной поверхности тела.The thermal burn model was reproduced on experimental animals according to the method of B.A. Paramonova et al. [31]. The day before the simulation of the burn on the lateral surface of the animal, the visible cutaneous part of the hair (4×4 cm) was cut with scissors. To reproduce the burn model, a glass test tube with a diameter of 22 mm and a length of 20–25 cm was used, filled to 2/3 of the height with hot water (100°C), followed by contact with the skin area for 10 seconds. As a result, the burns of III "a" degree with an area of 4-5% of the total body surface were formed in experimental animals.

Все манипуляции с животными были проведены согласно требованиям «Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1986) и в соответствии с Директивой 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского союза по охране животных. Содержание и уход за животными осуществляли в соответствии с ГОСТ 33216-2014.All manipulations with animals were carried out in accordance with the requirements of the European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and Other Scientific Purposes (Strasbourg, 1986) and in accordance with Directive 2010/63/EU of the European Parliament and the Council of the European Union on the protection of animals. The animals were kept and cared for in accordance with GOST 33216-2014.

Для сравнительной оценки эффективности ранозаживления коллагенового средства и «Левомеколя» применяли различные показатели: вульнографию (среднюю площадь ран оценивали на 0, 3, 5, 7, 9 и 13-е сутки эксперимента), гистологический анализ образцов кожной ткани (на 6, 13 и 20 сутки с момента ожога), показатели крови: общее содержание лейкоцитов и суммарную антиоксидантную активность - на 6 и 13-е сутки эксперимента.For a comparative assessment of the effectiveness of wound healing of the collagen agent and Levomekol, various indicators were used: vulnography (the average wound area was assessed on days 0, 3, 5, 7, 9 and 13 of the experiment), histological analysis of skin tissue samples (on days 6, 13 and 20 days after the burn), blood parameters: total leukocyte count and total antioxidant activity - on the 6th and 13th days of the experiment.

Для оценки средней площади ран на них накладывали прозрачный трафарет, переносили раневые контуры и вычисляли их площадь [32]. Для гистологического анализа брали образцы кожной ткани, фиксировали их в 10%-ом растворе формалина и, используя общепринятые методы гистологического анализа, оценивали морфологическое состояние кожной ткани при заживлении [33]. Общее содержание лейкоцитов в крови определяли подсчетом в камере Горяева при разведении образца 3%-ой уксусной кислотой, подкрашенной метиленовым синим [34]. Для определения суммарной антиоксидантной активности сыворотки крови животных использовали амперометрический метод (жидкостной хроматограф «Цвет-Яуза-01-AA»). Массовую концентрацию водорастворимых антиоксидантов определяли с использованием градуировочного графика по кверцетину [35].To assess the average area of wounds, a transparent stencil was applied to them, wound contours were transferred, and their area was calculated [32]. For histological analysis, skin tissue samples were taken, fixed in a 10% formalin solution, and, using generally accepted methods of histological analysis, the morphological state of the skin tissue during healing was assessed [33]. The total content of leukocytes in the blood was determined by counting in a Goryaev chamber when the sample was diluted with 3% acetic acid stained with methylene blue [34]. To determine the total antioxidant activity of the blood serum of animals, an amperometric method was used (liquid chromatograph "Tsvet-Yauza-01-AA"). The mass concentration of water-soluble antioxidants was determined using a calibration curve for quercetin [35].

Сущность заявляемого изобретения поясняется на нижеследующих примерах (1-3) конкретного выполнения, показывающих достижение технического результата.The essence of the claimed invention is illustrated in the following examples (1-3) of a specific implementation, showing the achievement of the technical result.

Пример 1Example 1

Изучение ранозаживляющего действия коллагенового средства. Данное действие установлено на определении показателей ранозаживления (площадь ран) и гистологического анализа образцов кожной ткани.Study of the wound-healing action of a collagen agent. This action is based on the determination of wound healing parameters (wound area) and histological analysis of skin tissue samples.

Результаты представлены в таблицах 3, 4 и на фиг. 1-3.The results are presented in tables 3, 4 and in FIG. 1-3.

Из данных, представленных в таблице 3, следует, что площади ран животных 1 и 2 опытных групп, начиная с 3-го дня опыта, статистически значимо отличались от результатов контрольной группы.From the data presented in table 3, it follows that the areas of wounds of animals of 1 and 2 experimental groups, starting from the 3rd day of the experiment, were statistically significantly different from the results of the control group.

Полученные данные свидетельствуют о репаративном действии коллагенового средства, которое сравнимо с эффектом фармакопейного препарата «Левомеколь». Причем окончательное и полное заживление ожоговых ран у крыс, обработанных коллагеновым средством и «Левомеколем» наступало, соответственно, к 19-му и 21 дню, а у животных контрольной группы - к 23-25-му дню.The data obtained indicate the reparative effect of the collagen agent, which is comparable to the effect of the Levomekol pharmacopoeial drug. Moreover, the final and complete healing of burn wounds in rats treated with a collagen agent and Levomekol occurred, respectively, by the 19th and 21st days, and in animals of the control group - by the 23rd-25th day.

Результаты гистологических и морфометрических исследований подтвердили динамику восстановления кожной ткани после экспериментального ожога.The results of histological and morphometric studies confirmed the dynamics of skin tissue recovery after an experimental burn.

Ранозаживление в опытных группах животных характеризовалось более легким течением процесса, купированием распространения некроза в глубокие слои кожи.Wound healing in the experimental groups of animals was characterized by a milder course of the process, stopping the spread of necrosis into the deep layers of the skin.

Для опытной группы 1, в которой при лечении термического ожога экспериментальных животных использовали коллагеновое средство, характерно более равномерное созревание грануляционной ткани, отсутствие гнойно-некротических осложнений в процессе заживления, формирование регенерата, приближающегося по своему строению к нормальной коже крыс (интактным животным).For experimental group 1, in which a collagen agent was used in the treatment of thermal burns of experimental animals, more uniform maturation of granulation tissue, the absence of purulent-necrotic complications in the healing process, and the formation of a regenerate, approaching in its structure to normal skin of rats (intact animals), are characteristic.

Морфометрические данные кожи экспериментальных животных после термического ожога, воздействия коллагенового средства и препарата сравнения «Левомеколь» на 20-й день эксперимента представлены в табл. 4 и на Фиг. 1-3.Morphometric data of the skin of experimental animals after thermal burns, exposure to a collagen agent and the reference drug "Levomekol" on the 20th day of the experiment are presented in Table. 4 and in FIG. 1-3.

Таким образом, из приведенных выше данных следует, что коллагеновое средство проявляло выраженное ранозаживляющее действие на модели термического ожога, сравнимое с эффектом фармакопейного препарата «Левомеколь».Thus, from the above data it follows that the collagen agent showed a pronounced wound healing effect on the thermal burn model, comparable to the effect of the Levomekol pharmacopoeial drug.

Пример 2Example 2

Противовоспалительное действие коллагенового средства. Влияние коллагенового средства на содержание лейкоцитов в крови крыс при термическом ожоге представлено в таблице 5.Anti-inflammatory effect of collagen. The effect of a collagen agent on the content of leukocytes in the blood of rats with thermal burns is presented in Table 5.

Как следует из полученных данных (табл.5), увеличение количества лейкоцитов в контрольной группе на 6 и 13-й дни эксперимента составило, соответственно, 23,5% и 63,9%) по отношению к норме (интактным животным). Применение изучаемого коллагенового средства и «Левомеколя» в эксперименте способствовало нормализации данного показателя, причем процесс восстановления количества лейкоцитов был наиболее выражен на 13-й день исследования в 1-й опытной группе.As follows from the data obtained (table 5), the increase in the number of leukocytes in the control group on the 6th and 13th days of the experiment was, respectively, 23.5% and 63.9%) relative to the norm (intact animals). The use of the studied collagen agent and Levomekol in the experiment contributed to the normalization of this indicator, and the process of restoring the number of leukocytes was most pronounced on the 13th day of the study in the 1st experimental group.

Пример 3Example 3

Антиоксидантное действие коллагенового средства. Данное действие установлено на определении суммарной антиоксидантной активности (САА) сыворотки крови крыс при термическом ожоге. Данные представлены в таблице 6.Antioxidant action of collagen. This effect was established by determining the total antioxidant activity (CAA) of the blood serum of rats during thermal burns. The data are presented in table 6.

Как следует из данных, представленных в таблице 6, при ожоге (контрольная группа) наблюдалось уменьшение суммарной антиоксидантной активности (САА). И на 6 и 13-е сутки эксперимента снижение составило, соответственно, 17,8%) и 23,5%) по отношению к норме (интактным животным). Применение коллагенового средства, как и препарата сравнения («Левомеколь»), способствовало нормализации показателя САА, причем процесс восстановления данного показателя был наиболее выражен в 1-й опытной группе (при действии коллагенового средства).As follows from the data presented in table 6, with a burn (control group), a decrease in total antioxidant activity (CAA) was observed. And on the 6th and 13th days of the experiment, the decrease was, respectively, 17.8%) and 23.5%) in relation to the norm (intact animals). The use of the collagen agent, as well as the comparison drug (Levomekol), contributed to the normalization of the CAA index, and the process of restoring this indicator was most pronounced in the 1st experimental group (under the action of the collagen agent).

Приведенные примеры применения предполагаемого изобретения (коллагенового средства) показывают его полезность, выражающуюся в эффективности его применения для регенерации тканей кожи при термическом ожоге. Сопоставимая с действием фармакологического препарата «Левомеколь» эффективность полученного коллагенового средства для регенерации тканей кожи является одним из существенных преимуществ предполагаемого изобретения.The given examples of the application of the proposed invention (collagen agent) show its usefulness, expressed in the effectiveness of its use for the regeneration of skin tissues during thermal burns. Comparable with the action of the pharmacological preparation "Levomekol" the effectiveness of the obtained collagen agent for the regeneration of skin tissues is one of the significant advantages of the proposed invention.

Заявленное техническое решение можно реализовать в промышленном производстве (используются продукты крупнотоннажной переработки коллагенсодержащего сырья) и в деятельности организаций здравоохранения посредством использования известных стандартных моделей и методов исследования.The claimed technical solution can be implemented in industrial production (products of large-scale processing of collagen-containing raw materials are used) and in the activities of healthcare organizations through the use of well-known standard models and research methods.

Предлагаемое изобретение «Средство для лечения ран и ожогов» имеет следующие преимущества:The present invention "Means for the treatment of wounds and burns" has the following advantages:

- высокое ранозаживляющее действие;- high wound healing effect;

- высокое противовоспалительное действие;- high anti-inflammatory effect;

- высокие антиоксидантные свойства.- high antioxidant properties.

Приложение 1Annex 1

Список патентной документации и литературных источников:List of patent documentation and literary sources:

1. Гайнутдинов Т.Р. Терапевтическая эффективность противоожоговых препаратов при термическом поражении организма // Ветеринарный врач. -2021. -№3.-С.14-18.1. Gainutdinov T.R. Therapeutic efficacy of anti-burn drugs in thermal damage to the body // Veterinary doctor. -2021. -No.3.-S.14-18.

2. Будкевич Л.И., Мирзоян Г.В., Габитов Р.Б. и др. Биопластический коллагеновый материал «Коллост» при лечении ожоговой травмы // Современные технологии в медицине. - 2020. - №12(1). - С.92-97.2. Budkevich L.I., Mirzoyan G.V., Gabitov R.B. Bioplastic collagen material "Kollost" in the treatment of burn injury // Modern technologies in medicine. - 2020. - No. 12(1). - P.92-97.

3. Толстов А.В., Новиков И.В., Подсевалова И.В., Воронин А.С., Дыдыкин С.С., Алипов В.В. Клинико-морфологическая оценка эффективности разработанного способа местного лечения локальных поверхностных ожогов // Наука и инновации в медицине. - 2020. - №5(4). - С.283-287.3. Tolstov A.V., Novikov I.V., Podsevalova I.V., Voronin A.S., Dydykin S.S., Alipov V.V. Clinical and morphological evaluation of the effectiveness of the developed method of local treatment of local superficial burns // Science and innovations in medicine. - 2020. - No. 5(4). - P.283-287.

4. Сидельская У.Ю. Сравнительная характеристика способов лечения животных с термическими ожогами // Международный научно-исследовательский журнал. - 2017. - №8-2 (62). - С.30-34.4. Sidelskaya U.Yu. Comparative characteristics of methods for treating animals with thermal burns // International Research Journal. - 2017. - No. 8-2 (62). - P.30-34.

5. Алексеев А.А., Бобровников А.Э. Местное консервативное лечение ожогов. Рекомендации для врачей. - М.: Медицинское информационное агентство, 2015. - 142 с. 5. Alekseev A.A., Bobrovnikov A.E. Local conservative treatment of burns. Recommendations for doctors. - M.: Medical Information Agency, 2015. - 142 p.

6. Мельникова О.А., Самкова И.А. Анализ фармацевтического рынка противоожоговых лекарственных препаратов для наружного применения РФ //Научные ведомости. Серия Медицина. Фармация. -2016. -№12 (233). - Вып.34. -С.150- 158.6. Melnikova O.A., Samkova I.A. Analysis of the pharmaceutical market of anti-burn drugs for external use in the Russian Federation // Scientific journals. Series Medicine. Pharmacy. -2016. -No. 12 (233). - Issue 34. -S.150-158.

7. Карасев М.М., Редина М.А., Белоусова О.В. Новейшие достижения фармацевтической разработки, основанные на использовании коллагена // Фармация и фармакология. - 2015. - №5(12). - С.12-17.7. Karasev M.M., Redina M.A., Belousova O.V. The latest achievements of pharmaceutical development based on the use of collagen // Pharmacy and Pharmacology. - 2015. - No. 5 (12). - P.12-17.

8. Майорова А.В., Сысуев Б.Б., Ханалиева И.А., Вихрова И.В. Современный ассортимент, свойства и перспективы совершенствования перевязочных средств для лечения ран // Фармация и фармакология. - 2018. -№1 (6). - С.4-32.8. Mayorova A.V., Sysuev B.B., Khanalieva I.A., Vikhrova I.V. The modern assortment, properties and prospects for improving dressings for the treatment of wounds // Pharmacy and Pharmacology. - 2018. - No. 1 (6). - P.4-32.

9. Патшина М.В., Ворошилин Р.А., Осинцев А.М. Анализ мирового рынка биоматериалов с целью определения потенциальных возможностей сырья животного происхождения // Техника и технология пищевых производств. - 2021. - №51 (2). - С.270-289.9. Patshina M.V., Voroshilin R.A., Osintsev A.M. Analysis of the world market of biomaterials in order to determine the potential of raw materials of animal origin // Technique and technology of food production. - 2021. - No. 51 (2). - P.270-289.

10. Будкевич Л.И., Сошкина В.В., Астамирова Т.С., Королева Т.А., Старостин О.И., Ужевко Ю.С. Инновационные технологии организации и оказания медицинской помощи детям с термическими поражениями в результате чрезвычайных ситуаций // Медицина катастроф. - 2012. - №4(80). - С.29-32.10. L. I. Budkevich, V. V. Soshkina, T. S. Astamirova, T. A. Koroleva, O. I. Starostin, and Yu. Innovative technologies for organizing and providing medical care to children with thermal injuries as a result of emergency situations // Disaster Medicine. - 2012. - No. 4 (80). - S.29-32.

11. Силина Е.В., Ступин В.А., Золотарева Л.С., Комаров А.Н. Применение нативного коллагена в клинической практике для лечения хронических ран // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. - 2017. - №9. - С.78-84.11. Silina E.V., Stupin V.A., Zolotareva L.S., Komarov A.N. The use of native collagen in clinical practice for the treatment of chronic wounds // Khirurgiya. Journal them. N.I. Pirogov. - 2017. - No. 9. - P.78-84.

12. Файзуллин А.Л., Шехтер А.Б., Истранов Л.П., Истранова Е.В., Руденко Т.Г., Гуллер А.Е., Абоянц Р.К., Тимашев П.С., Бутнару Д.В. Биорезорбируемые коллагеновые материалы в хирургии: 50 лет успеха // Сеченовский вестник. - 2020. - №11(1). - С.59-70.12. Fayzullin A.L., Shekhter A.B., Istranov L.P., Istranova E.V., Rudenko T.G., Guller A.E., Aboyants R.K., Timashev P.S., Butnaru D.V. Bioresorbable collagen materials in surgery: 50 years of success // Sechenovskiy Bulletin. - 2020. - No. 11(1). - P.59-70.

13. Остроушко А.П., Андреев А.А., Лаптиева А.Ю., Глухов А.А. Коллаген и его применение при лечении ран // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. - 2021. - №14(1). - С.85-90.13. Ostroushko A.P., Andreev A.A., Laptieva A.Yu., Glukhov A.A. Collagen and its application in the treatment of wounds // Bulletin of Experimental and Clinical Surgery. - 2021. - No. 14(1). - P.85-90.

14. Ru 2240818 С1, МПК А61К 38/39, А61К 35/36, опубликовано: 27.11.2004. Бюл. №33.14. Ru 2240818 C1, IPC A61K 38/39, A61K 35/36, published: 11/27/2004. Bull. No. 33.

15. Ru 2577699 С2, МПК А61К 8/65, A61Q 19/08, опубликовано: 20.03.2016. Бюл. №8.15. Ru 2577699 C2, IPC A61K 8/65, A61Q 19/08, published: 03/20/2016. Bull. No. 8.

16. Ru 2671401 С2, МПК А61К 38/01, А61К 35/32, А61Р 19/10, опубликовано: 31.10.2018. Бюл. №31.16. Ru 2671401 C2, IPC A61K 38/01, A61K 35/32, A61R 19/10, published: 10/31/2018. Bull. No. 31.

17. Ru 2669933 С2, МПК А61К 38/00, А61Р 17/00, опубликовано: 17.10.2018. Бюл. №29.17. Ru 2669933 C2, IPC A61K 38/00, A61R 17/00, published: 10/17/2018. Bull. No. 29.

18. Ru 2680968 C1, МПК C07K 1/12, C07K 2/00, опубликовано: 01.03.2019. Бюл. №7.18. Ru 2680968 C1, IPC C07K 1/12, C07K 2/00, published: 03/01/2019. Bull. No. 7.

19. Ru 2703284 С1, МПК A61K 31/00, A61K 38/40, A61K 38/39, опубликовано: 16.10.2019. Бюл. №29.19. Ru 2703284 C1, IPC A61K 31/00, A61K 38/40, A61K 38/39, published: 10/16/2019. Bull. No. 29.

20. Ru 2486258 С1, МПК С14С 1/08, опубликовано: 27.06.2013. Бюл. №18.20. Ru 2486258 C1, IPC C14C 1/08, published: 06/27/2013. Bull. No. 18.

21. Ru 2715639, МПК С14С 1/00, A23J 1/10, С07К 14/78, опубликовано: 02.03.2020. Бюл. №7.21. Ru 2715639, IPC C14C 1/00, A23J 1/10, C07K 14/78, published: 03/02/2020. Bull. No. 7.

22. ГОСТ 25271-93. Пластмассы. Смолы жидкие, эмульсин или дисперсии. Определение кажущейся вязкости по Брукфильду. - Москва: ИПК Издательство стандартов, 1994. - 14 с. 22. GOST 25271-93. Plastics. Liquid resins, emulsins or dispersions. Determination of apparent viscosity according to Brookfield. - Moscow: IPK Standards Publishing House, 1994. - 14 p.

23. ГОСТ 18995.1-73. Продукты химические жидкие. Методы определения плотности. - Москва: ИПК Издательство стандартов, 1974. - 4 с. 23. GOST 18995.1-73. Liquid chemical products. Density determination methods. - Moscow: IPK Standards Publishing House, 1974. - 4 p.

24. ОФС 42-0048-07. Ионометрия. 10 с. 24. OFS 42-0048-07. Ionometry. 10 s.

25. ГОСТ 938.1-67. Кожа. Метод определения содержания влаги. - Москва: ИПК Издательство стандартов, 2003. - 4 с. 25. GOST 938.1-67. Leather. Moisture content determination method. - Moscow: IPK Standards Publishing House, 2003. - 4 p.

26. ГОСТ 938.5-68. Кожа. Метод определения содержания веществ, экстрагируемых органическими растворителями. - Москва: ИПК Издательство стандартов, 2003. - 4 с. 26. GOST 938.5-68. Leather. Method for determining the content of substances extracted by organic solvents. - Moscow: IPK Standards Publishing House, 2003. - 4 p.

27. ГОСТ 25011-2017. Мясо и мясные продукты. Методы определения белка. - Москва: Стандартинформ, 2018. - 16 с. 27. GOST 25011-2017. Meat and meat products. Protein determination methods. - Moscow: Standartinform, 2018. - 16 p.

28. Шиян И.С., Припаньковская Я.М. Определение молекулярной массы желатина вискозиметрическим методом // Материалы VIII Международной студенческой научной конференции «Студенческий научный форум» URL:<а href="hittps://scienceforum.ru/2016/article/2016018419">https://scienceforum.ru/2 016/article/2016018419 (дата обращения: 08.11.2021).28. Shiyan I.S., Pripankovskaya Ya.M. Determination of the molecular weight of gelatin by the viscometric method // Proceedings of the VIII International Student Scientific Conference "Student Scientific Forum" URL: 016/article/2016018419 (date of access: 11/08/2021).

29. ГОСТ 10028-67. Методика работы с вискозиметрами типа ВПЖ-2. М., 1967. -3 с. 29. GOST 10028-67. Method of work with viscometers type VPZh-2. M., 1967. -3 p.

30. Инструкция по применению Левомеколь. https:// www. asna.ru/ product/levomekol/instruction/.30. Instructions for use Levomekol. https:// www. asna.ru/product/levomekol/instruction/.

31. Парамонов Б.А., Чеботарев В.Ю. Методы моделирования термических ожогов кожи при разработке препаратов для местного лечения // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2002. - Т. 134 (11). -С.593-597.31. Paramonov B.A., Chebotarev V.Yu. Methods for modeling thermal skin burns in the development of drugs for local treatment. Bulletin of Experimental Biology and Medicine. - 2002. - T. 134 (11). -p.593-597.

32. Савченко Ю.П., Федосов СР. Методы определения размеров раневой поверхности // Вестник хирургии. - 2007. - Т. 166. - №1. - С.102-105.32. Savchenko Yu.P., Fedosov SR. Methods for determining the size of the wound surface // Bulletin of Surgery. - 2007. - T. 166. - No. 1. - P.102-105.

33. Мавликеев М.О. Краткий курс гистологической техники. Учебно-методическое пособие / М.О. Мавликеев, Архипова С.С., Чернова О.Н., Титова А.А., Певнев Г.О., Шафигуллина А.К., Киясов А.П. - Казань: Казан, ун-т, 2020. - 107 с. 33. Mavlikeev M.O. Short course of histological technique. Teaching aid / M.O. Mavlikeev, Arkhipova S.S., Chernova O.N., Titova A.A., Pevnev G.O., Shafigullina A.K., Kiyasov A.P. - Kazan: Kazan, un-t, 2020. - 107 p.

34. Камышникова B.C. Методы клинических лабораторных исследований. 8-е изд. М.: ООО «МЕДпресс-информ», 2015.34. Kamyshnikova B.C. Methods of clinical laboratory research. 8th ed. M.: MEDpress-inform LLC, 2015.

35. Яшин А.Я., Яшин Я.И. Аналитические возможности жидкостного хроматографа «Цвет Яуза» с электрохимическими детекторами // Российский химический журнал (Ж. Хим. об-ва им. Д.И. Менделеева). - 2002. - №46 (4). -С.109-115.35. Yashin A.Ya., Yashin Ya.I. Analytical capabilities of the liquid chromatograph "Tsvet Yauza" with electrochemical detectors // Russian Chemical Journal (D.I. Mendeleev Chemical Society). - 2002. - No. 46 (4). -p.109-115.

Claims

1. An agent for the treatment of wounds and burns, characterized in that it is a collagen in the form of a gel with an MM of 301.0-366.0 kDa and a protein mass fraction of 6.68-7.08%.

2. An agent for the treatment of wounds and burns according to claim 1, characterized in that the agent is made with the possibility of being used for the regeneration of human and animal skin tissues.