RU2790442C2 - New lactobacillus plantarum strain, compositions containing it, and related method and its use - Google Patents

New lactobacillus plantarum strain, compositions containing it, and related method and its use Download PDF

Info

Publication number
RU2790442C2
RU2790442C2 RU2021118078A RU2021118078A RU2790442C2 RU 2790442 C2 RU2790442 C2 RU 2790442C2 RU 2021118078 A RU2021118078 A RU 2021118078A RU 2021118078 A RU2021118078 A RU 2021118078A RU 2790442 C2 RU2790442 C2 RU 2790442C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
lactobacillus plantarum
strain
kccm11962p
bifidobacterium longum
cells
Prior art date
Application number
RU2021118078A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2021118078A (en
RU2021118078A3 (en
Inventor
Тон-Хюн КИМ
Мюн Чо ХАН
Original Assignee
Юниверсити-Индастри Кооперейшн Груп Оф Кюн Хее Юниверсити
Навифарм Ко, Лтд
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Юниверсити-Индастри Кооперейшн Груп Оф Кюн Хее Юниверсити, Навифарм Ко, Лтд filed Critical Юниверсити-Индастри Кооперейшн Груп Оф Кюн Хее Юниверсити
Publication of RU2021118078A publication Critical patent/RU2021118078A/en
Publication of RU2021118078A3 publication Critical patent/RU2021118078A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2790442C2 publication Critical patent/RU2790442C2/en

Links

Images

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: group of inventions relates to Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P strain and its use. Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P strain is proposed, having activity inducing IL-10 expression. A living cell of the specified strain, a non-living cell of the specified strain, or a product of cultivation of the specified strain are used in a pharmaceutical or food composition. A method for the prevention or treatment of allergic diseases caused by a hypersensitivity reaction type 1 is also proposed, including a stage of administration of Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P.
EFFECT: due to an immune-regulatory effect and effect of inhibition of inflammatory reactions, the specified strain can be efficiently used for the prevention or treatment of allergic diseases caused by a hypersensitivity reaction type 1, inflammatory diseases, immunopathological diseases, as well as in the production of a drug for the prevention or treatment of allergic diseases caused by a hypersensitivity reaction type 1.
15 cl, 30 dwg, 19 tbl, 11 ex

Description

Область техники, к которой относится изобретениеThe field of technology to which the invention belongs

Настоящее изобретение относится к новым молочнокислым бактериям и, более конкретно, к новым молочнокислым бактериям и различным их применениям в пищевых продуктах и лекарственных средствах, которые могут ингибировать аллергические реакции посредством различных физиологических активностей, таких как иммунорегуляторный эффект, эффект ингибирования воспалительных реакций и др.The present invention relates to novel lactic acid bacteria, and more particularly to novel lactic acid bacteria and various uses thereof in foods and drugs, which can inhibit allergic responses through various physiological activities such as immunoregulatory effect, inflammatory response inhibition effect, etc.

Предпосылки создания изобретенияPrerequisites for the creation of the invention

Реакция гиперчувствительности относится к реакции, которая наносит вред организму человека, вызывая в живом организме человека чрезмерную иммунную реакцию на непатоген, вместо того, чтобы проявлять к нему иммунологическую толерантность. Реакцию гиперчувствительности условно классифицируют на четыре типа в соответствии с механизмом ее действия. Реакция гиперчувствительности 1-го типа протекает таким образом, что специфический антиген связывается с Ig, который в основном связан с Fc-рецептором тучной клетки. Такую реакцию также называют реакцией гиперчувствительности немедленного типа, поскольку реакция протекает сразу после взаимодействия с антигеном. Реакция гиперчувствительности 1-го типа, как правило, вызывается крупнодисперсными антигенами, которые вдыхаются в процессе дыхания. В качестве крупнодисперсных антигенов выступает пыльца растений и т.д. В качестве заболеваний или симптомов, вызываемых реакцией гиперчувствительности 1-го типа, выступают острая крапивница, атопический дерматит, аллергический ринит, бронхиальная астма и т.д. Реакция гиперчувствительности 2-го типа вызывается малыми молекулами, которые ковалентно связываются с поверхностным компонентом клеток человека и таким образом создают модифицированную структуру, которую иммунная система распознает как гетерогенный материал. При реакции гиперчувствительности 2-го типа B-клетки продуцируют IgG против нового эпитопа, после чего IgG связывается с модифицированной клеткой и таким образом вызывает разрушение клетки посредством активности системы комплемента и фагоцитоза. Реакция гиперчувствительности 3-го типа вызывается растворимыми иммунными комплексами, которые образуются посредством связывания растворимого белкового антигена и IgG, который вырабатывается против растворимого белкового антигена. При реакции гиперчувствительности 3-го типа часть иммунных комплексов прикрепляется к небольшому участку стенки кровеносного сосуда или легочной альвеолы в легком, активируя таким образом систему комплемента, что запускает воспалительную реакцию, наносящую повреждение ткани и ухудшающую физиологическую функцию ткани. Реакция гиперчувствительности 4-го типа вызывается продуктами антигенспецифических эффекторных Т-клеток и также называется отсроченной реакцией гиперчувствительности, поскольку она проявляется через один-три дня после взаимодействия с антигеном.A hypersensitivity reaction refers to a reaction that harms the human body by causing an excessive immune response in the living human body to a non-pathogen instead of developing immunological tolerance to it. The hypersensitivity reaction is conditionally classified into four types according to the mechanism of its action. A type 1 hypersensitivity reaction proceeds in such a way that a specific antigen binds to Ig, which is mainly associated with the mast cell Fc receptor. This reaction is also called an immediate hypersensitivity reaction, since the reaction occurs immediately after interaction with the antigen. A type 1 hypersensitivity reaction is usually caused by coarse antigens that are inhaled during breathing. Plant pollen, etc., acts as coarse antigens. The diseases or symptoms caused by type 1 hypersensitivity reaction are acute urticaria, atopic dermatitis, allergic rhinitis, bronchial asthma, etc. A type 2 hypersensitivity reaction is caused by small molecules that covalently bind to the surface component of human cells and thus create a modified structure that the immune system recognizes as a heterogeneous material. In a type 2 hypersensitivity reaction, B cells produce IgG against the new epitope, after which the IgG binds to the modified cell and thus causes cell destruction through the activity of the complement system and phagocytosis. A type 3 hypersensitivity reaction is caused by soluble immune complexes that are formed by the binding of a soluble protein antigen and IgG that is produced against a soluble protein antigen. In a type 3 hypersensitivity reaction, part of the immune complexes attach to a small area of the wall of a blood vessel or pulmonary alveolus in the lung, thus activating the complement system, which triggers an inflammatory response that causes tissue damage and impairs the physiological function of the tissue. A type 4 hypersensitivity reaction is caused by products of antigen-specific effector T cells and is also called a delayed hypersensitivity reaction because it occurs one to three days after exposure to an antigen.

Реакция гиперчувствительности 1-го типа является немедленной реакцией, опосредуемой IgE. Антитела IgE продуцируются плазмоцитами, в основном присутствующими в слизистых оболочках органов дыхания и пищеварения. Такие вырабатываемые антитела IgE обладают очень высокой аффинностью с поверхностными рецепторами тучных клеток и базофилов и, следовательно, преимущественно связываются с этими клетками. Это является сенсибилизированным состоянием, в котором большинство поверхностных рецепторов тучных клеток и базофилов связаны с антителами IgE. При взаимодействии с аллергеном в сенсибилизированном состоянии аллерген связывается с антителом IgE, вызывая таким образом реакцию между рецепторами, после чего гранула в тучной клетке сливается с клеточной мембраной, таким образом секретируя такие химические медиаторы, как гистамин, цистеиниллейкотриен, простагландин и тромбоксан. Такие химические медиаторы вызывают аллергическую реакцию немедленного типа, увеличивая проницаемость сосудов, расширяя кровеносные сосуды, сокращая гладкие мышцы и ускоряя секреторные функции железы.Type 1 hypersensitivity reaction is an immediate IgE-mediated reaction. IgE antibodies are produced by plasma cells, mainly present in the mucous membranes of the respiratory and digestive organs. These produced IgE antibodies have a very high affinity for surface receptors on mast cells and basophils, and therefore preferentially bind to these cells. This is a sensitized condition in which most of the surface receptors on mast cells and basophils are associated with IgE antibodies. When interacting with an allergen in a sensitized state, the allergen binds to the IgE antibody, thus causing a reaction between the receptors, after which the granule in the mast cell fuses with the cell membrane, thus secreting chemical mediators such as histamine, cysteinyl leukotriene, prostaglandin and thromboxane. Such chemical mediators cause an immediate type of allergic reaction by increasing vascular permeability, dilating blood vessels, contracting smooth muscles and accelerating the secretory functions of the gland.

Аллергический ринит, одно из заболеваний, в основе которого лежит указанная реакция гиперчувствительности 1-го типа, относится к симптоматическому расстройству, которое приводит к появлению симптомов в носу, глазах, ушах, горле и т.п., вызывая опосредованное IgE воспаление после взаимодействия с аллергеном. Такой аллергический ринит подразделяют на интермиттирующий AR или персистирующий AR на основании длительности симптомов по руководствам от Allergic Rhinitis and Its Impact on Asthma Working Group и снова подразделяют на легкий, умеренный и тяжелый. Распространенность аллергического ринита обычно составляет приблизительно 10-30% у взрослых и приблизительно 40% у маленьких детей с небольшой разницей в зависимости от направителей сообщения из различных стран. Факторами риска развития аллергического ринита являются аллергены в помещении и на улице, а также случай, при котором уровень IgE в сыворотке крови составляет 100 МЕ/мл или больше в возрасте до шести лет. Аллергический ринит может быть причиной осложнения в форме синусита, отита среднего уха или конъюнктивита. При хроническом прогрессировании такое заболевание может усугубить астму и синусит и, как следствие, обуславливать нарушение сна, затруднение внимания или дезадаптацию в социальной жизни. Астма, одно из заболеваний, в основе которого лежит указанная реакция гиперчувствительности 1-го типа, относится к заболеванию, при котором такие симптомы, как респираторный дистресс, кашель, легочная обструкция и т.д., возникают периодически или нерегулярно, а также относится к типичному аллергическому заболеванию, в основе которого лежит сочетание генетических и внешних факторов. Другими словами, такая астма возникает в таком случае, когда унаследованная от родителей аллергическая конституция и вызывающие астму внешние факторы задействованы во взаимодействии друг с другом, таким образом вызывая нарушение иммунной системы, и является в основном хронической и рецидивирующей.Allergic rhinitis, one of the diseases based on this type 1 hypersensitivity reaction, refers to a symptomatic disorder that results in symptoms in the nose, eyes, ears, throat, etc., causing IgE-mediated inflammation after interaction with allergen. Such allergic rhinitis is subdivided into intermittent AR or persistent AR based on duration of symptoms according to guidelines from Allergic Rhinitis and Its Impact on Asthma Working Group, and again subdivided into mild, moderate, and severe. The prevalence of allergic rhinitis is usually about 10-30% in adults and about 40% in young children, with little difference depending on the sender of the report from different countries. Risk factors for developing allergic rhinitis include indoor and outdoor allergens and the occurrence of a serum IgE level of 100 IU/mL or more before the age of six years. Allergic rhinitis can cause complications such as sinusitis, otitis media, or conjunctivitis. With chronic progression, this disease can exacerbate asthma and sinusitis and, as a result, cause sleep disturbance, difficulty in attention, or maladjustment in social life. Asthma, one of the diseases based on this type 1 hypersensitivity reaction, refers to a disease in which symptoms such as respiratory distress, cough, pulmonary obstruction, etc. occur intermittently or irregularly, and also refers to typical allergic disease, which is based on a combination of genetic and environmental factors. In other words, such asthma occurs when the allergic constitution inherited from the parents and the external factors causing asthma are involved in interaction with each other, thus causing the immune system to be disturbed, and is mainly chronic and recurrent.

Были исследованы различные терапевтические способы лечения аллергических заболеваний, вызванных реакцией гиперчувствительности 1-го типа. Например, для лечения применяют противоаллергические лекарственные средства, антагонисты гистаминовых рецепторов (антигистаминные средства), стероиды и т.д. Тем не менее известно, что все приведенные далее варианты обладают значительными побочными эффектами: антигистаминные средства, которые ингибируют передачу сигнала от периферических нервов, конкурируя с гистамином за связывание с гистаминовыми рецепторами; противоаллергические лекарственные средства, которые пытаются уменьшить симптомы, ослабляя активность клеток, продуцирующих химические медиаторы; и стероиды, которые уменьшают воспаление путем ослабления иммунной реакции, большинство из которых не оказывают надежного терапевтического эффекта.Various therapeutic methods for the treatment of allergic diseases caused by a type 1 hypersensitivity reaction have been investigated. For example, antiallergic drugs, histamine receptor antagonists (antihistamines), steroids, etc. are used for treatment. However, all of the following options are known to have significant side effects: antihistamines, which inhibit signal transduction from peripheral nerves by competing with histamine for binding to histamine receptors; anti-allergic drugs, which try to reduce symptoms by dampening the activity of cells that produce chemical mediators; and steroids, which reduce inflammation by dampening the immune response, most of which do not provide a reliable therapeutic effect.

В то же время молочнокислые бактерии являются продуктом, который был впервые получен Мечниковым, который предпринял попытку подкисления кишечного содержимого с целью предупреждения роста гнилостных организмов и, таким образом, достижения терапевтического эффекта. В случае же рода Lactobacillus, который считается типичным представителем молочнокислых бактерий, к настоящему времени обнаружено более 165 его видов. В виде живой формы пробиотических молочнокислых бактерий, которые применяли для лечения аллергических заболеваний, по имеющимся сведениям существует штамм Lactobacillus acidophilus L-92 от аллергических симптомов, вызываемых пыльцой гималайского кедра в Японии.At the same time, lactic acid bacteria are a product that was first obtained by Mechnikov, who attempted to acidify the intestinal contents in order to prevent the growth of putrefactive organisms and thus achieve a therapeutic effect. In the case of the genus Lactobacillus , which is considered a typical representative of lactic acid bacteria, more than 165 of its species have been discovered to date. As a live form of probiotic lactic acid bacteria, which has been used to treat allergic diseases, Lactobacillus acidophilus L-92 strain is reportedly available for allergic symptoms caused by Himalayan cedar pollen in Japan.

В пищеварительном тракте человека находится множество молочнокислых бактерий, которые полезны для человеческого организма, и в настоящее время проходят исследования по применению молочнокислых бактерий, выделенных из пищеварительного тракта человека, с целью создания лекарственных препаратов или функциональных пищевых продуктов. В частности, прием терапевтических средств от аллергических заболеваний может быть необходим в течение длительного периода времени, и, следовательно, данные средства должны обладать такими характеристиками, как простота приема и высокий уровень безопасности. Молочнокислые бактерии относятся к группе кандидатов, которые особенно подходят для лечения указанных выше заболеваний, а также удовлетворяют требованиям для такого лечения.There are many lactic acid bacteria in the human digestive tract that are beneficial to the human body, and research is currently underway on the use of lactic acid bacteria isolated from the human digestive tract to create drugs or functional foods. In particular, therapeutic agents for allergic diseases may be needed for a long period of time, and therefore, these agents should have characteristics such as ease of administration and a high level of safety. Lactic acid bacteria belong to a group of candidates that are particularly suitable for the treatment of the above diseases, and also meet the requirements for such treatment.

Подробное описание настоящего изобретенияDetailed description of the present invention

Техническая задачаTechnical task

Настоящее изобретение применимо к традиционному уровню техники, и целью настоящего изобретения является получение новых молочнокислых бактерий, обладающих иммунорегуляторным эффектом и эффектом ингибирирования воспалительных реакций.The present invention is applicable to the conventional art, and the purpose of the present invention is to provide novel lactic acid bacteria having an immunoregulatory effect and an effect of inhibiting inflammatory responses.

Также другой целью настоящего изобретения является обеспечение различных применений новых молочнокислых бактерий в пищевых и лекарственных продуктах.It is also another object of the present invention to provide various uses for the novel lactic acid bacteria in food and drug products.

В частности, целью настоящего изобретения является получение новых молочнокислых бактерий Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76.In particular, the aim of the present invention is to obtain new lactic acid bacteria Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76.

Другой целью настоящего изобретения является получение фармацевтической композиции для предупреждения или лечения аллергических заболеваний, содержащей Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смеси.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of allergic diseases containing Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 or mixtures thereof.

Другой целью настоящего изобретения является получение пищевой композиции для предупреждения или облегчения тяжести аллергических заболеваний, содержащей Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смеси.Another object of the present invention is to provide a food composition for preventing or alleviating the severity of allergic diseases, containing Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 or mixtures thereof.

Еще одной целью настоящего изобретения является получение фармацевтической композиции для предупреждения или лечения иммунопатологических заболеваний или воспалительных заболеваний, содержащей Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смеси.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of immunopathological diseases or inflammatory diseases, containing Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 or mixtures thereof.

Также, еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение способа предупреждения или лечения аллергических заболеваний, включающего стадию введения индивидууму Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смесей.Also, another object of the present invention is to provide a method for preventing or treating allergic diseases, comprising the step of administering to an individual Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76, or mixtures thereof.

Дополнительно, еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение применения Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смесей при предупреждении или лечении аллергических заболеваний.Additionally, another object of the present invention is to provide the use of Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 or mixtures thereof in the prevention or treatment of allergic diseases.

Более того, еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение применения Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смесей при получении лекарственного средства для предупреждения или лечения аллергических заболеваний.Moreover, another object of the present invention is to provide the use of Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 or mixtures thereof in the preparation of a medicament for the prevention or treatment of allergic diseases.

Кроме того, еще одной целью настоящего изобретения является получение композиции, содержащей Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смеси, для применения при предупреждении или лечении аллергических заболеваний.In addition, another object of the present invention is to provide a composition containing Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P or mixtures thereof, for use in the prevention or treatment of allergic diseases.

Решение технической задачиSolving a technical problem

В одном аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрен Bifidobacterium longum IM55 (депозитарий: Корейский центр культур микроорганизмов (KCCM), дата депонирования: 20 января 2017 года, и регистрационный номер: KCCM11961P).In one aspect, in order to achieve the above objects, the present invention provides Bifidobacterium longum IM55 (depository: Korea Microorganism Culture Center (KCCM), deposit date: January 20, 2017, and accession number: KCCM11961P).

Bifidobacterium longum IM55 по настоящему изобретению характеризуется тем, что является новой молочнокислой бактерией Bifidobacterium longum, выделенной и идентифицированной из экскрементов человека. Bifidobacterium longum IM55 of the present invention is characterized by being a novel lactic acid bacterium Bifidobacterium longum isolated and identified from human feces.

Последовательность 16S rDNA для идентификации и классификации Bifidobacterium longum IM55 по настоящему изобретению является такой же, как и последовательность под SEQ ID NO: 1, которая прилагается к настоящему описанию. Таким образом, Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P по настоящему изобретению может содержать последовательность 16S rDNA под SEQ ID NO: 1.The 16S rDNA sequence for the identification and classification of Bifidobacterium longum IM55 according to the present invention is the same as the sequence under SEQ ID NO: 1, which is attached to the present description. Thus, Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P of the present invention may contain the 16S rDNA sequence of SEQ ID NO: 1.

Как видно из результата анализа указанной последовательности 16S rDNA под SEQ ID NO: 1, такая последовательность была на 99% гомологична последовательности известных штаммов Bifidobacterium longum, что демонстрирует наивысшее молекулярно-филогенетическое родство с Bifidobacterium longum. Таким образом, указанная молочнокислая бактерия была идентифицирована как Bifidobacterium longum, затем получила название Bifidobacterium longum IM55, а затем была депонирована в KCCM 20 января 2017 года (регистрационный номер: KCCM11961P).As can be seen from the result of the analysis of the specified 16S rDNA sequence under SEQ ID NO: 1, this sequence was 99% homologous to the sequence of known strains of Bifidobacterium longum , which demonstrates the highest molecular phylogenetic relationship with Bifidobacterium longum . Therefore, said lactic acid bacterium was identified as Bifidobacterium longum , then named Bifidobacterium longum IM55, and then deposited with KCCM on January 20, 2017 (accession number: KCCM11961P).

В настоящем изобретении указанный Bifidobacterium longum IM55 в качестве источника углерода может использовать D-глюкозу, D-маннит, D-лактозу, D-сахарозу, D-мальтозу, салицин, D-ксилозу, L-арабинозу, цитрат железа с эскулином, D-рафинозу и D-сорбит.In the present invention, said Bifidobacterium longum IM55 can use D-glucose, D-mannitol, D-lactose, D-sucrose, D-maltose, salicin, D-xylose, L-arabinose, iron citrate with esculin, D- raffinose and D-sorbitol.

В другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрен Lactobacillus plantarum IM76 (депозитарий: Корейский центр культур микроорганизмов (KCCM), дата депонирования: 20 января 2017 года, и регистрационный номер: KCCM11962P).In another aspect, in order to achieve the above objects, the present invention provides Lactobacillus plantarum IM76 (depository: Korea Microorganism Culture Center (KCCM), deposit date: January 20, 2017, and registration number: KCCM11962P).

Lactobacillus plantarum IM76 по настоящему изобретению характеризуется тем, что является новой молочнокислой бактерией Lactobacillus plantarum, выделенной и идентифицированной из кимчхи, которое является традиционным ферментированным пищевым продуктом. Lactobacillus plantarum IM76 of the present invention is characterized by being a novel lactic acid bacterium Lactobacillus plantarum isolated and identified from kimchi, which is a traditional fermented food.

Последовательность 16S rDNA для идентификации и классификации Lactobacillus plantarum IM76 по настоящему изобретению является такой же, как и последовательность под SEQ ID NO: 2, которая прилагается к настоящему описанию. Таким образом, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P по настоящему изобретению может содержать последовательность 16S rDNA под SEQ ID NO: 2.The 16S rDNA sequence for the identification and classification of Lactobacillus plantarum IM76 according to the present invention is the same as the sequence under SEQ ID NO: 2, which is attached to the present description. Thus, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P of the present invention may contain the 16S rDNA sequence of SEQ ID NO: 2.

Как видно из результата анализа указанной последовательности 16S rDNA под SEQ ID NO: 2, такая последовательность была на 99% гомологична последовательности известных штаммов Lactobacillus plantarum, что демонстрирует наивысшее молекулярно-филогенетическое родство с Lactobacillus plantarum. Таким образом, указанная молочнокислая бактерия была идентифицирована как Lactobacillus plantarum, затем получила название Lactobacillus plantarum IM76, а затем была депонирована в KCCM 20 января 2017 года (регистрационный номер: KCCM11962P).As can be seen from the result of the analysis of the specified 16S rDNA sequence under SEQ ID NO: 2, this sequence was 99% homologous to the sequence of known strains of Lactobacillus plantarum , which demonstrates the highest molecular phylogenetic relationship with Lactobacillus plantarum . Therefore, said lactic acid bacterium was identified as Lactobacillus plantarum , then named Lactobacillus plantarum IM76, and then deposited with KCCM on January 20, 2017 (accession number: KCCM11962P).

В настоящем изобретении указанный Lactobacillus plantarum IM76 в качестве источника углерода может использовать L-арабинозу, D-рибозу, D-галактозу, D-глюкозу, D-фруктозу, D-маннозу, маннит, сорбит, N-ацетилглюкозамин, амигдалин, арбутин, эскулин, салицин, целлобиозу, мальтозу, лактозу, мелибиозу, сахарозу, трегалозу, рафинозу, гентиобиозу, D-туранозу и глюконат.In the present invention, said Lactobacillus plantarum IM76 can use L-arabinose, D-ribose, D-galactose, D-glucose, D-fructose, D-mannose, mannitol, sorbitol, N-acetylglucosamine, amygdalin, arbutin, esculin as a carbon source. , salicin, cellobiose, maltose, lactose, melibiose, sucrose, trehalose, raffinose, gentiobiose, D-turanose and gluconate.

В другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения аллергических заболеваний, содержащая Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смеси.In another aspect, to achieve these objects, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of allergic diseases, containing Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P, or mixtures thereof.

В настоящем изобретении термин «аллергическое заболевание» означает заболевание, нарушение или ненормальное состояние, которое индуцируется гиперергией к определенному материалу человеческого организма, то есть чрезмерной реакцией иммунной системы на привнесенный извне материал. Указанный привнесенный извне материал может быть аллергеном, т.е. антигеном, который становится причиной аллергического заболевания. Указанная аллергия может означать реакцию гиперчувствительности, вызываемую таким образом, что посредством привнесенного извне материала высвобождается такой медиатор воспаления, как гистамин, и таким образом это приводит к появлению заболевания, и указанная реакция гиперчувствительности может быть реакцией гиперчувствительности 1-го типа, реакцией гиперчувствительности 2-го типа, реакцией гиперчувствительности 3-го типа или реакцией гиперчувствительности 4-го типа. В настоящем изобретении указанное аллергическое заболевание может представлять собой заболевание, вызванное IgE-опосредованной реакцией гиперчувствительности 1-го типа, и, в частности, оно может быть выбрано из группы, состоящей из ринита, атопии, астмы, атопического дерматита, аллергического конъюнктивита, аллергического отита среднего уха, крапивницы и анафилактического шока. Более конкретно, указанное аллергическое заболевание в настоящем изобретении может представлять собой ринит, атопию или астму.In the present invention, the term "allergic disease" means a disease, disorder or abnormal condition that is induced by hyperergy to a certain material in the human body, that is, an overreaction of the immune system to the material introduced from outside. Said externally introduced material may be an allergen, i. e. an antigen that causes an allergic disease. Said allergy may mean a hypersensitivity reaction caused in such a way that an inflammatory mediator such as histamine is released by an externally introduced material, and thus it leads to the appearance of a disease, and said hypersensitivity reaction may be a type 1 hypersensitivity reaction, a type 2 hypersensitivity reaction type 3 hypersensitivity reaction, or type 4 hypersensitivity reaction. In the present invention, said allergic disease may be a disease caused by IgE-mediated type 1 hypersensitivity reaction, and in particular, it may be selected from the group consisting of rhinitis, atopy, asthma, atopic dermatitis, allergic conjunctivitis, allergic otitis middle ear, urticaria and anaphylactic shock. More specifically, said allergic disease in the present invention may be rhinitis, atopy or asthma.

Помимо эффекта контроля, предупреждения, облегчения тяжести и лечения описанных выше аллергических заболеваний композиция по настоящему изобретению также демонстрирует отличный эффект при контроле, предупреждении, облегчении тяжести и лечении аллергических заболеваний и их осложнений путем нормализации микроорганизмов кишечника, модифицированных вследствие аллергических заболеваний.In addition to the effect of controlling, preventing, alleviating and treating the above-described allergic diseases, the composition of the present invention also shows an excellent effect in controlling, preventing, alleviating the severity and treating allergic diseases and their complications by normalizing intestinal micro-organisms modified due to allergic diseases.

«Bifidobacterium longum IM55» по настоящему изобретению является таким, как описано выше." Bifidobacterium longum IM55" of the present invention is as described above.

В частности, Bifidobacterium longum IM55, содержащийся в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может представлять собой его живую клетку, его неживую клетку, продукт его культивирования, его лизат или его экстракт, но можно без ограничения использовать любую форму Bifidobacterium longum IM55 при условии, что он может оказывать превентивный или терапевтический эффект при аллергических заболеваниях.In particular, the Bifidobacterium longum IM55 contained in the pharmaceutical composition of the present invention may be a living cell thereof, a non-living cell thereof, a culture product thereof, a lysate thereof, or an extract thereof, but any form of Bifidobacterium longum IM55 may be used without limitation, provided that it can have a preventive or therapeutic effect in allergic diseases.

«Lactobacillus plantarum IM76» по настоящему изобретению является таким, как описано выше." Lactobacillus plantarum IM76" of the present invention is as described above.

В частности, Lactobacillus plantarum IM76, содержащийся в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, может представлять собой его живую клетку, его неживую клетку, продукт его культивирования, его лизат или его экстракт, но можно без ограничения использовать любую форму Lactobacillus plantarum IM76 при условии, что он может оказывать превентивный или терапевтический эффект при аллергических заболеваниях.In particular, Lactobacillus plantarum IM76 contained in the pharmaceutical composition of the present invention may be a living cell thereof, an inanimate cell thereof, a culture product thereof, a lysate thereof, or an extract thereof, but any form of Lactobacillus plantarum IM76 may be used without limitation, provided that it can have a preventive or therapeutic effect in allergic diseases.

В настоящем изобретении смесь Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76 может быть смешана в диапазоне, который позволяет достичь эффекта предупреждения или лечения аллергических заболеваний, и указанное соотношение смеси может находиться в диапазоне без ограничения от 10:1 до 1:10. В частности, соотношение Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76 может составлять 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 или 1:10. Их смесь демонстрирует существенный эффект предупреждения или лечения аллергических заболеваний в результате синергического эффекта, в основе которого лежит смешивание таких молочнокислых бактерий.In the present invention, the mixture of Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76 can be mixed in a range that can achieve the effect of preventing or treating allergic diseases, and said mixture ratio can be in the range of 10:1 to 1:10 without limitation. In particular, the ratio of Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76 may be 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1 :1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 or 1:10. Their mixture shows a significant effect in the prevention or treatment of allergic diseases as a result of the synergistic effect, which is based on the mixing of such lactic acid bacteria.

В настоящем изобретении термин «живая клетка» означает собственно новую молочнокислую бактерию по настоящему изобретению; «неживая клетка» означает молочнокислую бактерию, которая простерилизована посредством нагревания, повышения давления, обработки лекарственными средствами или др.; и «лизат» означает молочнокислую бактерию, которая разрушена посредством ферментативной обработки, гомогенизации, ультразвуковой обработки или др. Также, в настоящем изобретении термин «экстракт» означает продукт, полученный в результате проведения экстракции молочнокислых бактерий с помощью известного экстракционного раствора.In the present invention, the term "living cell" means actually a new lactic acid bacterium according to the present invention; "non-living cell" means a lactic acid bacterium that has been sterilized by heating, pressurizing, medicating, or the like; and “lysate” means a lactic acid bacterium that is destroyed by enzymatic treatment, homogenization, ultrasonic treatment, or the like. Also, in the present invention, the term “extract” means a product obtained by extracting lactic acid bacteria with a known extraction solution.

В настоящем изобретении термин «продукт культивирования» означает продукт, полученный путем культивирования молочнокислых бактерий в известной среде, и указанный продукт может включать новые молочнокислые бактерии. Указанная среда может быть выбрана из известной жидкой среды или твердой среды и может без ограничения представлять собой, например, жидкую среду MRS, жидкую среду GAM, агаровую среду MRS, агаровую среду GAM или агаровую среду BL.In the present invention, the term "culture product" means a product obtained by culturing lactic acid bacteria in a known medium, and said product may include novel lactic acid bacteria. Said medium may be selected from known liquid media or solid media, and may be, for example, MRS liquid medium, GAM liquid medium, MRS agar medium, GAM agar medium, or BL agar medium, for example.

Также в настоящем изобретении термин «предупреждение» означает все действия, которые ингибируют симптом аллергических заболеваний или задерживают его прогрессирование при введении фармацевтической композиции по настоящему изобретению.Also in the present invention, the term "prevention" means all actions that inhibit the symptom of allergic diseases or delay its progression when the pharmaceutical composition of the present invention is administered.

Также в настоящем изобретении термин «лечение» означает все действия, которые улучшают или благоприятным образом изменяют симптом аллергических заболеваний при введении фармацевтической композиции по настоящему изобретению.Also in the present invention, the term "treatment" means all actions that improve or favorably change the symptom of allergic diseases when the pharmaceutical composition of the present invention is administered.

Содержание новых молочнокислых бактерий и т.д., которые являются эффективным компонентом фармацевтической композиции по настоящему изобретению, можно регулировать в различных диапазонах в зависимости от конкретной формы композиции и ее назначения или аспекта ее применения. В фармацевтической композиции по настоящему изобретению содержание эффективного компонента не сильно ограничено и может составлять, например, от 0,01 до 99 вес. %, в частности от 0,1 до 75 вес. %, и, более конкретно, от 0,5 до 50 вес. % в пересчете на общий вес композиции.The content of new lactic acid bacteria, etc., which are an effective component of the pharmaceutical composition of the present invention, can be adjusted in various ranges depending on the specific form of the composition and its purpose or aspect of its use. In the pharmaceutical composition of the present invention, the content of the effective component is not very limited and may be, for example, from 0.01 to 99 wt. %, in particular from 0.1 to 75 wt. %, and more specifically, from 0.5 to 50 wt. %, based on the total weight of the composition.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать по меньшей мере один известный эффективный компонент, обладающий иммунорегуляторным эффектом, эффектом ингибирования воспалительных реакций и эффектом предупреждения или лечения аллергических заболеваний (например, астмы, ринита, атопического дерматита и т.д.).The pharmaceutical composition of the present invention may further contain at least one known effective component having an immunoregulatory effect, an effect of inhibiting inflammatory reactions, and an effect of preventing or treating allergic diseases (for example, asthma, rhinitis, atopic dermatitis, etc.).

В частности, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей хитозан, инулин и цитрусовый пектин.In particular, the pharmaceutical composition of the present invention may further contain at least one substance selected from the group consisting of chitosan, inulin and citrus pectin.

В фармацевтической композиции по настоящему изобретению содержатся указанные хитозан, инулин, цитрусовый пектин или смеси по меньшей мере двух из них, и, следовательно, они могут выступать в качестве пребиотиков при достижении новыми молочнокислыми бактериями эффекта предупреждения и лечения аллергических заболеваний.The pharmaceutical composition of the present invention contains said chitosan, inulin, citrus pectin, or mixtures of at least two of them, and therefore, they can act as prebiotics when the new lactic acid bacteria achieve the effect of preventing and treating allergic diseases.

Также, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать добавки, такие как фармацевтически приемлемые носители, в дополнение к новым молочнокислым бактериям, которые являются эффективным компонентом. Носитель, который может содержаться в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, включает без ограничения лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, аравийскую камедь, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксилбензоат, тальк, стеарат магния, минеральное масло и др.Also, the pharmaceutical composition of the present invention may further contain additives, such as pharmaceutically acceptable carriers, in addition to novel lactic acid bacteria, which are an effective ingredient. The carrier that may be contained in the pharmaceutical composition of the present invention includes, without limitation, lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum arabic, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxylbenzoate, talc, magnesium stearate, mineral oil, etc.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть составлена в виде лекарственной формы для перорального введения или лекарственной формы для парентерального введения с помощью традиционного способа и может быть составлена с применением разбавителей или вспомогательных веществ, таких как наполнители, сухие разбавители, связующие, увлажнители, разрыхлители, поверхностно-активные вещества и т.п., которые обычно применяются для составления в препарат.The pharmaceutical composition of the present invention may be formulated into an oral dosage form or a parenteral dosage form by a conventional method, and may be formulated using diluents or excipients such as fillers, dry diluents, binders, humectants, disintegrants, surface -active substances, etc., which are usually used for formulation in the preparation.

При составлении в твердый препарат для перорального введения к фармацевтической композиции по настоящему изобретению можно отнести препараты в форме таблеток, пилюль, порошка, гранул, капсул и т.п., и такой твердый препарат может содержать по меньшей мере одно вспомогательное вещество, например крахмал, карбонат кальция, сахарозу, лактозу, желатин или др., в его эффективном компоненте. Также, помимо простых вспомогательных веществ твердый препарат может содержать смазывающие вещества и т.п., такие как без ограничения стеарат магния и тальк.When formulated into a solid preparation for oral administration, the pharmaceutical composition of the present invention may include preparations in the form of tablets, pills, powder, granules, capsules, and the like, and such a solid preparation may contain at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin or the like, in its effective component. Also, in addition to simple excipients, the solid preparation may contain lubricants and the like, such as, without limitation, magnesium stearate and talc.

При составлении в жидкий препарат для перорального введения фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать суспендирующие средства, жидкость для приема внутрь, эмульсию, сироп и др., а также может содержать различные вспомогательные вещества, например без ограничения увлажнители, подсластители, ароматизаторы, консерванты и т.д., в дополнение к воде и жидкому парафину, которые зачастую применяют в качестве простых разбавителей.When formulated into a liquid preparation for oral administration, the pharmaceutical composition of the present invention may contain suspending agents, oral liquid, emulsion, syrup, etc., and may also contain various excipients, for example, without limitation, humectants, sweeteners, flavors, preservatives, etc. .d., in addition to water and liquid paraffin, which are often used as simple diluents.

При составлении в препарат для парентерального введения фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать стерилизованный водный раствор, неводный растворитель, суспендирующие средства, эмульсию, лиофилизированные препараты или суппозитории. В качестве неводного растворителя и суспендирующего растворителя можно включить без ограничения следующие вещества: пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительное масло, такое как оливковое масло, подходящий для инъекции сложный эфир, такой как этилолеат, и т.д. В качестве основы для суппозиториев можно использовать следующие вещества: витепсол, макрогол, твин 61, масло какао, лаурин, глицерожелатин и т.д.When formulated into a preparation for parenteral administration, the pharmaceutical composition of the present invention may contain a sterilized aqueous solution, a non-aqueous solvent, suspending agents, an emulsion, lyophilized preparations, or suppositories. As the non-aqueous solvent and the suspending solvent, the following may be included without limitation: propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, an injectable ester such as ethyl oleate, etc. The following substances can be used as the basis for suppositories: witepsol, macrogol, tween 61, cocoa butter, laurin, glycerogelatin, etc.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить перорально или парентерально млекопитающим, в том числе людям, в соответствии с предполагаемым способом. В качестве способа парентерального введения задействуют способы наружного применения на коже, внутрибрюшинной инъекции, ректальной инъекции, подкожной инъекции, внутривенной инъекции, внутримышечной инъекции, интраторакальной инъекции или т.п. Доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению не сильно ограничена, при условии, что ее количество является фармацевтически эффективным, и ее диапазон варьирует в зависимости от веса пациента, его возраста, пола, состояния здоровья, рациона, времени введения, способа введения, скорости выведения и тяжести заболевания. Обычная суточная доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению не сильно ограничена, но может составлять, в частности, от 0,1 до 3000 мг/кг и, более конкретно, от 0,5 до 2000 мг/кг в пересчете на эффективный компонент и ее можно вводить один раз в день или разделить на несколько приемов в день.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally or parenterally to mammals, including humans, in accordance with the intended method. As the parenteral administration method, skin topical application, intraperitoneal injection, rectal injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intrathoracic injection or the like are used. The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, as long as the amount is pharmaceutically effective, and its range varies depending on the patient's weight, age, sex, health status, diet, administration time, route of administration, elimination rate, and severity. diseases. The usual daily dose of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited, but may be in particular 0.1 to 3000 mg/kg, and more specifically 0.5 to 2000 mg/kg in terms of the effective component, and can be administered once a day or divided into several doses per day.

Указанное «фармацевтически эффективное количество» означает количество, достаточное для лечения заболевания с приемлемым соотношением польза/риск, применимым к медицинскому лечению, и его можно определить на основании факторов, в том числе типа заболевания, степени тяжести, активности лекарственного средства, чувствительности к лекарственному средству, времени введения, пути введения, скорости выведения, периода лечения и параллельно применяемого лекарственного средства, а также других факторов, хорошо известных в области фармацевтики.A stated "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat a disease with an acceptable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and can be determined based on factors including disease type, severity, drug activity, drug susceptibility , time of administration, route of administration, rate of elimination, period of treatment and concomitant drug, as well as other factors well known in the pharmaceutical field.

Указанное «введение» означает введение индивидууму любым подходящим способом заранее определенного количества фармацевтической композиции по настоящему изобретению. В этом случае индивидуум относится к животным и, как правило, может быть млекопитающим, на которого лечение с применением новых молочнокислых бактерий по настоящему изобретению может оказывать благоприятный эффект. Предпочтительный пример такого индивидуума может включать приматов, таких как люди. Также, к такому индивидууму можно отнести всех индивидуумов, имеющих симптом аллергических заболеваний или имеющих риск получения такого симптома.Said "administration" means administering to an individual, by any suitable means, a predetermined amount of a pharmaceutical composition of the present invention. In this case, the subject is an animal, and generally may be a mammal, which may benefit from treatment with the novel lactic acid bacteria of the present invention. A preferred example of such an individual may include primates such as humans. Also, such an individual can include all individuals who have a symptom of allergic diseases or are at risk of getting such a symptom.

Дополнительно, в другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрена пищевая композиция для предупреждения или облегчения тяжести аллергических заболеваний, содержащая Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смеси.Additionally, in another aspect, to achieve these objects, the present invention provides a food composition for preventing or alleviating the severity of allergic diseases, containing Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P, or mixtures thereof.

В настоящем изобретении термины «Bifidobacterium longum IM55», «Lactobacillus plantarum IM76», «аллергическое заболевание» и т.п. имеют то же значение, что описано выше.In the present invention, the terms " Bifidobacterium longum IM55", " Lactobacillus plantarum IM76", "allergic disease", etc. have the same meaning as described above.

Пищевую композицию по настоящему изобретению можно применять в качестве функционального пищевого продукта для здорового питания. Упомянутый «функциональный пищевой продукт для здорового питания» означает пищевой продукт, приготовленный и обработанный с применением сырьевого материала или компонента, которые обладают функциональной возможностью, полезной для организма человека в соответствии с Актами о функциональных пищевых продуктах для здорового питания (Health Functional Food Acts), а «функциональная возможность» означает употребление такого пищевого продукта с целью регулирования уровня питательных веществ относительно структур и функций организма человека или получения эффекта, полезного для состояния здоровья, такого как физиологическое действие и т.д.The food composition of the present invention can be used as a functional food for a healthy diet. The referenced “functional health food” means a food prepared and processed using a raw material or component that has a functionality beneficial to the human body in accordance with the Health Functional Food Acts, and "functionality" means the use of such a food product for the purpose of regulating the level of nutrients in relation to the structures and functions of the human body or obtaining an effect beneficial to a health condition, such as a physiological effect, etc.

Пищевая композиция по настоящему изобретению может содержать обычные пищевые добавки, и решение, является ли определенный элемент подходящим в качестве указанных «пищевых добавок» или нет, принимают на основе характеристик и стандартов для такого элемента в соответствии с общими правилами, другими общими способами тестирования, а также с Кодексом пищевых добавок, одобренным Министерством по безопасности пищевых продуктов и лекарственных средств, если отсутствуют другие нормативы.The nutritional composition of the present invention may contain conventional nutritional supplements, and the decision whether a certain element is suitable as said "food additives" or not is made on the basis of the characteristics and standards for such an element in accordance with the general rules, other general testing methods, and also with the Code of Food Additives approved by the Ministry of Food and Drug Safety, unless otherwise specified.

В качестве элементов, перечисленных в указанном «Кодексе пищевых добавок», могут быть, например, химические соединения, такие как кетоны, глицин, цитрат калия, никотиновая кислота, коричная кислота и т.д.; естественные добавки, такие как краситель полученный из хурмы, экстракт солодки, кристаллическая целлюлоза, краситель, полученный из гаоляна, гуаровая камедь и т.д.; и смешанные составы, такие как состав с L-глутаматом натрия, щелочные добавки для лапши, состав из консервантов, состав из смол и т.д.As elements listed in said "Food Additives Code", there may be, for example, chemical compounds such as ketones, glycine, potassium citrate, nicotinic acid, cinnamic acid, etc.; natural additives such as persimmon-derived color, licorice extract, crystalline cellulose, kaoliang-derived color, guar gum, etc.; and mixed formulations such as monosodium L-glutamate formulation, alkaline noodle additives, preservative formulation, resin formulation, etc.

Пищевая композиция по настоящему изобретению может содержать Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смеси в количестве от 0,01 до 99 вес. %, в частности, от 0,1 до 75 вес. % и, более конкретно, от 0,5 до 50 вес. % в пересчете на общий вес композиции.The food composition of the present invention may contain Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 or mixtures thereof in an amount of from 0.01 to 99 wt. %, in particular from 0.1 to 75 wt. % and, more specifically, from 0.5 to 50 wt. %, based on the total weight of the composition.

Также, пищевая композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена и переработана в форму таблетки, капсулы, порошка, гранулы, жидкости, пилюли и т.д., предназначенных для предупреждения и/или облегчения тяжести аллергических заболеваний.Also, the food composition of the present invention can be prepared and processed into the form of a tablet, capsule, powder, granule, liquid, pill, etc., intended to prevent and/or alleviate the severity of allergic diseases.

Например, пищевую композицию в указанной форме таблетки можно приготовить путем гранулирования Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смесей и смесей вспомогательных веществ, связующих, разрыхлителей и других добавок с помощью традиционного способа; затем внося туда смазывающие вещества и т.д.; а затем, производя формование прессованием, или можно приготовить путем непосредственного внесения указанных смесей в установку для формования прессованием. Также функциональный пищевой продукт для здорового питания в указанной форме таблетки при необходимости может содержать корригирующее вещество и т.д. и при необходимости может быть покрыт соответствующим покрывающим средством.For example, a food composition in said tablet form can be prepared by granulating Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 or mixtures thereof and mixtures of excipients, binders, disintegrants and other additives using a conventional method; then adding lubricants there, etc.; and then by performing compression molding, or can be prepared by directly adding these mixtures to the injection molding machine. Also, the functional health food product in said tablet form may contain a corrective agent, etc., if necessary. and, if necessary, can be coated with an appropriate coating agent.

Из пищевых композиций в форме капсулы препарат в форме твердой капсулы можно приготовить путем внесения Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 либо их смесей и смесей добавок, таких как вспомогательные вещества и т.д., или их гранул либо гранул с покрытием в обычную твердую капсулу, а препарат в форме мягкой капсулы можно приготовить путем внесения Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 либо их смесей и смесей добавок, таких как вспомогательные вещества и т.д., в основу капсулы с желатином и т.д. При необходимости указанный препарат в форме мягкой капсулы может содержать пластификаторы, красители, консерванты и т.д., такие как глицерин, сорбит или др.From food compositions in the form of a capsule, a preparation in the form of a hard capsule can be prepared by introducing Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 or mixtures thereof and mixtures of additives such as excipients, etc., or their granules or coated granules into a conventional hard capsule , and a soft capsule preparation can be prepared by incorporating Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 or mixtures thereof and mixtures of additives such as excipients, etc. into a gelatin capsule base, etc. If necessary, said preparation in the form of a soft capsule may contain plasticizers, colorants, preservatives, etc., such as glycerol, sorbitol, or the like.

Пищевую композицию в форме пилюли можно составить путем формования Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смесей и смесей вспомогательных веществ, связующих, разрыхлителей и т.д. посредством соответствующего способа и можно нанести на нее покрытие из белого сахара или других подходящих формирующих покрытие средств или можно покрыть формирующим покрытие пилюли средством с применением, при необходимости, крахмала, талька или соответствующих материалов.A food composition in the form of a pill can be formulated by molding Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 or mixtures thereof and mixtures of excipients, binders, disintegrants, etc. by an appropriate method and may be coated with white sugar or other suitable coating agents, or may be coated with a pill coating agent using starch, talc or appropriate materials, if necessary .

Пищевую композицию в форме гранулы можно приготовить в гранулированной форме с Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смесями и смесями вспомогательных веществ, связующих, разрыхлителей и т.д. посредством подходящего способа, и, при необходимости, она может содержать ароматизаторы, корригирующее вещество и т.д. При проведении последующего гранулометрического теста на функциональном пищевом продукте для здорового питания в форме гранул с ситами № 12 (1680 мкм), № 14 (1410 мкм) и № 45 (350 мкм) все количество проходит через сито № 12, 5% или меньше от общего количества остаются на сите № 14, и 15,0% или меньше от общей суммы может пройти через сито № 45.The food composition in the form of a granule can be prepared in granular form with Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 or mixtures thereof and mixtures of excipients, binders, disintegrants, etc. by a suitable method, and, if necessary, it may contain fragrances, flavoring agent, etc. When conducting a subsequent granulometric test on a functional health food product in the form of granules with No. 12 (1680 µm), No. 14 (1410 µm) and No. 45 (350 µm) sieves, the entire amount passes through a No. of the total remain on the No. 14 sieve, and 15.0% or less of the total can pass through the No. 45 sieve.

Определение таких терминов, как указанные вспомогательные вещества, связующие, разрыхлители, скользящие вещества, корригирующее вещество, ароматизаторы и т.д., включает таковые, которые имеют такие же или схожие функции, как и у описанных в документах, известных из уровня техники (пояснительное издание Корейской фармакопеи, Munseong Publishing, the Korean Association of Colleges of Pharmacy, the 5th revised edition, p.33-48, 1989).The definition of such terms as said adjuvants, binders, disintegrants, lubricants, flavoring agent, flavoring agents, etc., includes those that have the same or similar functions as those described in documents known from the prior art (explanatory Korean Pharmacopoeia, Munseong Publishing, the Korean Association of Colleges of Pharmacy, the 5th revised edition, p.33-48, 1989).

Тип указанного пищевого продукта особо не ограничен. В качестве примера пищевого продукта, к которому можно добавить экстракт по настоящему изобретению, можно привести напитки, жевательные резинки, витаминные комплексы, питьевые продукты и т.д., в том числе пищевые композиции в традиционном смысле, в частности, функциональные пищевые продукты для здорового питания.The type of said food product is not particularly limited. As an example of a food product to which the extract of the present invention can be added, there are beverages, chewing gums, vitamin complexes, drinking products, etc., including food compositions in the traditional sense, in particular, functional food products for healthy nutrition.

Более того, в другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения иммунопатологических заболеваний или воспалительных заболеваний, содержащая Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смеси.Moreover, in another aspect, to achieve these objects, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of immunopathological diseases or inflammatory diseases, containing Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P, or mixtures thereof.

В настоящем изобретении термины, относящиеся к фармацевтической композиции, содержащей «Bifidobacterium longum IM55» и «Lactobacillus plantarum IM76», являются такими же, как описано выше.In the present invention, the terms relating to the pharmaceutical composition containing " Bifidobacterium longum IM55" and " Lactobacillus plantarum IM76" are the same as described above.

В настоящем изобретении термин «иммунопатологическое заболевание» означает заболевание, которое становится проблематичным при возникновении определенной иммунной реакции и, в частности, может представлять собой без ограничения аутоиммунное заболевание, отторжение трансплантата или болезнь «трансплантат против хозяина». Аутоиммунное заболевание может представлять собой болезнь Крона, эритему, ревматоидный артрит, тиреоидит Хашимото, пернициозную анемию, болезнь Аддисона, диабет 1-го типа, волчанку, синдром хронической усталости, синдром фибромиалгии, гипотиреоз и гипертиреоз, склеродермию, болезнь Бехчета, воспалительное заболевание кишечника, рассеянный склероз, миастению гравис, синдром Меньера, синдром Гийена-Барре, синдром Шегрена, лейкоплакию, эндометриоз, псориаз, лейкоплакию, системную склеродермию, астму, язвенный колит или др.In the present invention, the term "immunopathological disease" means a disease that becomes problematic when a certain immune response occurs, and in particular, may be an autoimmune disease, graft rejection, or graft-versus-host disease, without limitation. The autoimmune disease may be Crohn's disease, erythema, rheumatoid arthritis, Hashimoto's thyroiditis, pernicious anemia, Addison's disease, type 1 diabetes, lupus, chronic fatigue syndrome, fibromyalgia syndrome, hypothyroidism and hyperthyroidism, scleroderma, Behcet's disease, inflammatory bowel disease, multiple sclerosis, myasthenia gravis, Meniere's syndrome, Guillain-Barré syndrome, Sjögren's syndrome, leukoplakia, endometriosis, psoriasis, leukoplakia, systemic scleroderma, asthma, ulcerative colitis, or others.

В настоящем изобретении термин «воспалительное заболевание» в совокупности означает заболевания, при которых основным участком поражения являются воспалительные очаги. Воспалительное заболевание по настоящему изобретению может представлять собой по меньшей мере одно, выбранное из группы, включающей артрит, подагру, гепатит, ожирение, кератит, гастрит, энтерит, нефрит, колит, диабет, туберкулез, бронхит, плеврит, перитонит, спондилит, панкреатит, воспалительную боль, уретрит, цистит, вагинит, атеросклероз, септицемию, ожог, дерматит, периодонтит и гингивит. В частности, указанное воспалительное заболевание может представлять собой колит.In the present invention, the term "inflammatory disease" in the aggregate means diseases in which the main site of the lesion are inflammatory foci. The inflammatory disease of the present invention may be at least one selected from the group consisting of arthritis, gout, hepatitis, obesity, keratitis, gastritis, enteritis, nephritis, colitis, diabetes, tuberculosis, bronchitis, pleurisy, peritonitis, spondylitis, pancreatitis, inflammatory pain, urethritis, cystitis, vaginitis, atherosclerosis, septicemia, burns, dermatitis, periodontitis and gingivitis. In particular, said inflammatory disease may be colitis.

Помимо эффекта контроля, предупреждения, облегчения тяжести и лечения описанных выше воспалительных заболеваний композиция по настоящему изобретению также демонстрирует отличный эффект при контроле, предупреждении, облегчении тяжести и лечении воспалительных заболеваний и их осложнений путем нормализации микроорганизмов кишечника, которые модифицированы вследствие воспалительных заболеваний.In addition to the effect of controlling, preventing, alleviating the severity and treating the above-described inflammatory diseases, the composition of the present invention also shows an excellent effect in controlling, preventing, alleviating the severity and treating inflammatory diseases and their complications by normalizing intestinal microorganisms that are modified due to inflammatory diseases.

Более того, в другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрена пищевая композиция для предупреждения или облегчения тяжести иммунопатологических заболеваний или воспалительных заболеваний, содержащая Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смеси.Moreover, in another aspect, to achieve these objects, the present invention provides a food composition for the prevention or alleviation of the severity of immunopathological diseases or inflammatory diseases, containing Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P, or mixtures thereof.

В настоящем изобретении термины, относящиеся к пищевой композиции, содержащей «Bifidobacterium longum IM55» и «Lactobacillus plantarum IM76», являются такими же, как описано выше.In the present invention, the terms relating to the food composition containing " Bifidobacterium longum IM55" and " Lactobacillus plantarum IM76" are the same as described above.

Помимо этого, в другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрен способ предупреждения или лечения аллергических заболеваний, включающий стадию введения индивидууму Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смесей.In addition, in another aspect, to achieve these objects, the present invention provides a method for preventing or treating allergic diseases, comprising the step of administering to the individual Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P, or mixtures thereof.

В настоящем изобретении такие термины, как «Bifidobacterium longum IM55», «Lactobacillus plantarum IM76», «введение», «индивидуум», «аллергическое заболевание» и тп., имеют то же значение, что описано выше.In the present invention, terms such as " Bifidobacterium longum IM55", " Lactobacillus plantarum IM76", "introduction", "individual", "allergic disease" and the like have the same meaning as described above.

В дополнение, в другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрено применение Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смесей при предупреждении или лечении аллергических заболеваний.In addition, in another aspect, to achieve these objects, the present invention contemplates the use of Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P, or mixtures thereof, in the prevention or treatment of allergic diseases.

Также в другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрено применение Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смесей при получении лекарственного средства для предупреждения или лечения аллергических заболеваний.Also in another aspect, to achieve these objects, the present invention provides for the use of Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P or mixtures thereof in the preparation of a medicament for the prevention or treatment of allergic diseases.

Дополнительно, в другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрена композиция, содержащая Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смеси, для применения при предупреждении или лечении аллергических заболеваний.Additionally, in another aspect, to achieve these objects, the present invention provides a composition containing Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P, or mixtures thereof, for use in the prevention or treatment of allergic diseases.

Более того, в другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрен способ предупреждения или лечения иммунопатологических заболеваний или воспалительных заболеваний, включающий стадию введения индивидууму Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смесей.Moreover, in another aspect, to achieve these objects, the present invention provides a method for preventing or treating immunopathological diseases or inflammatory diseases, comprising the step of administering to the individual Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P, or mixtures thereof.

В настоящем изобретении такие термины, как «Bifidobacterium longum IM55», «Lactobacillus plantarumIM76», «введение», «индивидуум», «иммунопатологическое заболевание», «воспалительное заболевание» и т.п., имеют то же значение, что описано выше.In the present invention, terms such as " Bifidobacterium longum IM55", " Lactobacillus plantarum IM76", "introduction", "individual", "immunopathological disease", "inflammatory disease" and the like have the same meaning as described above. .

Более того, в другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрено применение Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смесей при предупреждении или лечении иммунопатологических заболеваний или воспалительных заболеваний.Moreover, in another aspect, to achieve these objects, the present invention contemplates the use of Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P, or mixtures thereof, in the prevention or treatment of immunopathological diseases or inflammatory diseases.

Помимо этого, в другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрено применение Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смесей при получении лекарственного средства для предупреждения или лечения иммунопатологических заболеваний или воспалительных заболеваний.In addition, in another aspect, to achieve these objects, the present invention provides for the use of Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P or mixtures thereof in the preparation of a medicament for the prevention or treatment of immunopathological diseases or inflammatory diseases.

В дополнение, в другом аспекте для достижения указанных целей в настоящем изобретении предусмотрена композиция, содержащая Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P или их смеси, для применения при предупреждении или лечении иммунопатологических заболеваний или воспалительных заболеваний.In addition, in another aspect, to achieve these objects, the present invention provides a composition containing Bifidobacterium longum IM55 KCCM11961P, Lactobacillus plantarum IM76 KCCM11962P, or mixtures thereof, for use in the prevention or treatment of immunopathological diseases or inflammatory diseases.

Преимущественные эффектыBeneficial Effects

Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 по настоящему изобретению является безопасным без токсичности для организма человека, обладает превосходными физиологическими активностями, такими как иммунорегуляторный эффект и эффект ингибирования воспалительных реакций, и имеет эффект нормализации микроорганизмов кишечника. Таким образом, Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смеси можно применять в качестве материала для предупреждения, облегчения тяжести или лечения не только аллергических заболеваний, но также и иммунопатологических заболеваний и воспалительных заболеваний. The Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 of the present invention is safe without toxicity to the human body, has excellent physiological activities such as an immunoregulatory effect and an effect of inhibiting inflammatory reactions, and has an effect of normalizing intestinal microorganisms. Thus, Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 or mixtures thereof can be used as a material for preventing, alleviating or treating not only allergic diseases, but also immunopathological diseases and inflammatory diseases.

Краткое описание графических материаловBrief description of graphic materials

На фиг. 1 представлен график, на котором видно, что концентрация IL-10 повышается при обработке макрофагов с помощью Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 (NOR - нормальная контрольная группа; LPS - группа с индуцированными воспалительными реакциями; I55 - группа с индуцированными воспалительными реакциями + введенная доза Bifidobacterium longum IM55 в количестве 1×105 КОЕ/мл; и I76 - группа с индуцированными воспалительными реакциями + введенная доза Lactobacillus plantarum IM76 в количестве 1×105 КОЕ/мл далее обозначают то же самое на фиг. 2-4).In FIG. 1 is a graph showing that the concentration of IL-10 is increased when macrophages are treated with Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 (NOR - normal control group; LPS - inflammatory induced group; I55 - inflammatory induced group + administered the dose of Bifidobacterium longum IM55 in the amount of 1×10 5 CFU/ml, and I76 - the group with induced inflammatory reactions + the administered dose of Lactobacillus plantarum IM76 in the amount of 1×10 5 CFU/ml, hereinafter denote the same in Fig. 2-4).

На фиг. 2 представлен график, на котором видно, что концентрация IL-12 снижается при обработке макрофагов с помощью Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76.In FIG. 2 is a graph showing that IL-12 concentration is reduced when macrophages are treated with Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76.

На фиг. 3 представлен график, на котором видно, что концентрация IL-10 повышается при обработке дендроцитов с помощью Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76.In FIG. 3 is a graph showing that IL-10 concentration increases when dendrocytes are treated with Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76.

На фиг. 4 представлен график, на котором видно, что концентрация TNF-α снижается при обработке дендроцитов с помощью Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76.In FIG. 4 is a graph showing that TNF-α concentration is reduced when dendrocytes are treated with Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76.

На фиг. 5 представлен график, на котором видно, что уровень экспрессии GATA3 ингибируется в результате обработки с помощью Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 при индуцировании дифференцировки Т-клеток в Th2-клетки (NOR - нормальная контрольная группа; ThI - группа с введенной дозой индуктора цитодифференцировки в Th2; I55 - группа с индуцированной цитодифференцировкой в Th2 + введенная доза Bifidobacterium longum IM55 в количестве 1×105 КОЕ/мл; и I76 - группа с индуцированной цитодифференцировкой в Th2 + введенная доза Lactobacillus plantarum IM76 в количестве 1×105 КОЕ/мл далее обозначают то же самое на фиг. 6).In FIG. 5 is a graph showing that the expression level of GATA3 is inhibited by treatment with Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 in inducing T cell differentiation into Th2 cells (NOR, normal control group; ThI, cytodifferentiation inducer dosed group). in Th2; I55 - group with induced cytodifferentiation in Th2 + administered dose of Bifidobacterium longum IM55 in the amount of 1 × 10 5 CFU / ml; and I76 - group with induced cytodifferentiation in Th2 + administered dose of Lactobacillus plantarum IM76 in the amount of 1 × 10 5 CFU / ml further denote the same in Fig. 6).

На фиг. 6 представлен график, на котором видно, что уровень экспрессии IL-5 ингибируется в результате обработки с помощью Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 при индуцировании дифференцировки Т-клеток в Th2-клетки.In FIG. 6 is a graph showing that IL-5 expression level is inhibited by treatment with Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 to induce T cell differentiation into Th2 cells.

На фиг. 7 представлен график, на котором видно, что уровень экспрессии FOXp3 увеличивается в результате обработки с помощью Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 при индуцировании дифференцировки Т-клеток в Treg-клетки (NOR - нормальная контрольная группа; TrI - группа с введенной дозой индуктора цитодифференцировки в Treg; I55 - группа с индуцированной цитодифференцировкой в Treg + введенная доза Bifidobacterium longum IM55 в количестве 1×105 КОЕ/мл; и I76 - группа с индуцированной цитодифференцировкой в Treg + введенная доза Lactobacillus plantarum IM76 в количестве 1×105 КОЕ/мл далее обозначают то же самое на фиг. 8).In FIG. 7 is a graph showing that the level of FOXp3 expression increases as a result of treatment with Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 while inducing T cell differentiation into Treg cells (NOR - normal control group; TrI - cytodifferentiation inducer dosed group in Treg; I55 - group with induced cytodifferentiation in Treg + administered dose of Bifidobacterium longum IM55 in the amount of 1 × 10 5 CFU / ml; and I76 - group with induced cytodifferentiation in Treg + administered dose of Lactobacillus plantarum IM76 in the amount of 1 × 10 5 CFU / ml further denote the same in Fig. 8).

На фиг. 8 представлен график, на котором видно, что уровень экспрессии IL-10 увеличивается в результате обработки с помощью Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 при индуцировании дифференцировки Т-клеток в Treg-клетки.In FIG. 8 is a graph showing that the expression level of IL-10 is increased by treatment with Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 while inducing T cell differentiation into Treg cells.

На фиг. 9 представлен график, на котором видно, что концентрация IL-5 в сыворотке снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой (NOR - нормальная контрольная группа (которой перорально вводили только PBS); CON или AR - группа с индуцированным заболеванием; DX - группа с индуцированным заболеванием + введенная внутрибрюшинно доза дексаметазона в количестве 1 мг/кг по весу; I55 - группа с индуцированным заболеванием + введенная перорально доза Bifidobacterium longum IM55 в количестве 1×109 КОЕ/мышь; и I76 - группа с индуцированным заболеванием + введенная перорально доза Lactobacillus plantarum IM76 в количестве 1×109 КОЕ/мышь далее обозначают то же самое на фиг. 10-17).In FIG. 9 is a graph showing that serum IL-5 concentration is reduced when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an animal model of induced allergic rhinitis and asthma (NOR - normal control group (which was administered orally with PBS only); CON or AR - induced disease group DX - induced disease group + intraperitoneal dose of dexamethasone at 1 mg/kg by weight I55 - induced disease group + oral dose of Bifidobacterium longum IM55 at 1×10 9 CFU/mouse; and I76 - disease induced group + oral dose of Lactobacillus plantarum IM76 in the amount of 1×10 9 cfu/mouse hereafter denote the same in Fig. 10-17).

На фиг. 10 представлен график, на котором видно, что концентрация IgE в сыворотке снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 10 is a graph showing that serum IgE concentration decreases when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an animal model of induced allergic rhinitis and asthma.

На фиг. 11 представлен график, на котором видно, что концентрация IL-4 в сыворотке снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 11 is a graph showing that serum IL-4 concentration decreases when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an animal model of induced allergic rhinitis and asthma.

На фиг. 12 представлен график, на котором видно, что концентрация IL-5 в жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BALF) снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 12 is a graph showing that IL-5 concentration in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) is reduced when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an animal model of induced allergic rhinitis and asthma.

На фиг. 13 представлен график, на котором видно, что концентрация IL-4 в BALF снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 13 is a graph showing that the concentration of IL-4 in BALF is reduced when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an animal model of induced allergic rhinitis and asthma.

На фиг. 14 представлен график, на котором видно, что скорость распределения Th2-клеток в BALF снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 14 is a graph showing that the distribution rate of Th2 cells in BALF is reduced when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is introduced into an allergic rhinitis and asthma induced animal model.

На фиг. 15 представлен график, на котором видно, что скорость распределения эозинофилов в BALF снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 15 is a graph showing that the distribution rate of eosinophils in BALF is reduced when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an allergic rhinitis and asthma induced animal model.

На фиг. 16 представлен график, на котором видно, что концентрация IL-10 в BALF повышается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 16 is a graph showing that the concentration of IL-10 in BALF is increased when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an allergic rhinitis and asthma induced animal model.

На фиг. 17 представлен график, на котором видно, что скорость распределения Treg-клеток в BALF повышается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 17 is a graph showing that the distribution rate of Treg cells in BALF is increased when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an allergic rhinitis and asthma induced animal model.

На фиг. 18 представлен график, на котором видно, что показатель симптомов ринита (чихание и трение носа) снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой (NOR - нормальная контрольная группа (которой перорально вводили только PBS); AR - группа с индуцированным заболеванием; DX - группа с индуцированным заболеванием + введенная внутрибрюшинно доза дексаметазона в количестве 1 мг/кг по весу; I55 - группа с индуцированным заболеванием + введенная перорально доза Bifidobacterium longum IM55 в количестве 1×109 КОЕ/мышь; и I76 - группа с индуцированным заболеванием + введенная перорально доза Lactobacillus plantarum IM76 в количестве 1×109 КОЕ/мышь далее обозначают то же самое на фиг. 19-26).In FIG. 18 is a graph showing that the score of rhinitis symptoms (sneezing and nasal rubbing) is reduced when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an animal model with induced allergic rhinitis and asthma (NOR - normal control group (which were administered only PBS orally) ; AR - induced disease group; DX - induced disease group + intraperitoneal dose of dexamethasone at 1 mg/kg by weight; I55 - induced disease group + oral dose of Bifidobacterium longum IM55 at 1×10 9 CFU/mouse and I76 - disease induced group + oral dose of Lactobacillus plantarum IM76 in the amount of 1×10 9 cfu/mouse hereinafter denote the same in Fig. 19-26).

На фиг. 19 представлен график, на котором видно, что концентрация IL-4 в носовой полости снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 19 is a graph showing that the concentration of IL-4 in the nasal cavity is reduced when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an animal model of induced allergic rhinitis and asthma.

На фиг. 20 представлен график, на котором видно, что концентрация IL-5 в носовой полости снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 20 is a graph showing that the concentration of IL-5 in the nasal cavity is reduced when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an animal model of induced allergic rhinitis and asthma.

На фиг. 21 представлен график, на котором видно, что нарушение функции носовой полости и увеличение размеров эпителиальных клеток в носовой полости снижаются при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 21 is a graph showing that nasal dysfunction and epithelial cell growth in the nasal cavity are reduced when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an animal model of induced allergic rhinitis and asthma.

На фиг. 22 представлен график, на котором видно, что уровень экспрессии GATA3 в легочных тканях снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 22 is a graph showing that the level of GATA3 expression in lung tissues is reduced when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an animal model of induced allergic rhinitis and asthma.

На фиг. 23 представлен график, на котором видно, что уровень экспрессии IL-10 в легочных тканях повышается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 23 is a graph showing that the expression level of IL-10 in lung tissues is increased when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an animal model of induced allergic rhinitis and asthma.

На фиг. 24 представлен график, на котором видно, что уровень экспрессии FOXp3 в легочных тканях повышается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 24 is a graph showing that the expression level of FOXp3 in lung tissues is increased when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an animal model of induced allergic rhinitis and asthma.

На фиг. 25 представлен график, на котором видно, что уровень экспрессии IL-5 в легочных тканях снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 25 is a graph showing that the expression level of IL-5 in lung tissues is reduced when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an allergic rhinitis and asthma induced animal model.

На фиг. 26 представлен график, на котором видно, что степень индуцирования воспаления и отечности в легочных тканях снижается при введении Bifidobacterium longum IM55 или Lactobacillus plantarum IM76 в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 26 is a graph showing that the degree of induction of inflammation and edema in lung tissues is reduced when Bifidobacterium longum IM55 or Lactobacillus plantarum IM76 is administered to an allergic rhinitis and asthma induced animal model.

На фиг. 27 представлен график, на котором видно, что показатель симптомов ринита (чихание и трение носа) и концентрация IL-5 в носовой полости снижаются при введении смеси Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76 (в соотношении 1:1, 1:3 и 1:9) в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой (NOR - нормальная контрольная группа (которой перорально вводили только PBS); AR - группа с индуцированным заболеванием; DX - группа с индуцированным заболеванием + введенная внутрибрюшинно доза дексаметазона в количестве 1 мг/кг по весу; 1:1 - группа, которой вводили перорально дозу смеси Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76 в соотношении 1:1 (всего 1×109 КОЕ/мышь); 1:3 - группа, которой вводили перорально дозу смеси Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76 в соотношении 1:3 (всего 1×109 КОЕ/мышь); и 1:9 - группа, которой вводили перорально дозу смеси Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76 в соотношении 1:9 (всего 1×109 КОЕ/мышь) далее обозначают то же самое на фиг. 28).In FIG. 27 is a graph showing that the symptom score of rhinitis (sneezing and nasal rubbing) and the concentration of IL-5 in the nasal cavity are reduced by the administration of a mixture of Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76 (1:1, 1:3 and 1 ratios): 9) in an animal model with induced allergic rhinitis and asthma (NOR - normal control group (which was administered only PBS orally); AR - induced disease group; DX - induced disease group + intraperitoneally administered dose of dexamethasone in an amount of 1 mg / kg per weight; 1:1 - group, which was administered an oral dose of a mixture of Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76 in a ratio of 1:1 (total 1×10 9 CFU / mouse); 1:3 - group, which was administered an oral dose of a mixture of Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76 at a ratio of 1:3 (total 1×10 9 cfu/mouse), and 1:9 - the group that was orally dosed with a mixture of Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76 at a ratio of 1:9 ( total 1×10 9 cfu/mouse) hereafter denote the same in FIG. 28).

На фиг. 28 представлен график, на котором видно, что уровень экспрессии IL-5 в сыворотке снижается при введении смеси Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76 (в соотношении 1:1, 1:3 или 1:9) в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 28 is a graph showing that serum IL-5 expression level is reduced when a mixture of Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76 (1:1, 1:3, or 1:9 ratio) is introduced into an animal model with induced allergic rhinitis and asthma.

На фиг. 29 представлен график, на котором видно, что концентрация IL-4 и IL-5 в толстой кишке снижается, а концентрация IL-10 в ней повышается при введении Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смесей в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой (NOR - нормальная контрольная группа (которой перорально вводили только PBS); AR - группа с индуцированным заболеванием; DX - группа с индуцированным заболеванием + введенная внутрибрюшинно доза дексаметазона в количестве 1 мг/кг по весу; I55 - группа с индуцированным заболеванием + введенная перорально доза Bifidobacterium longum IM55 в количестве 1×109 КОЕ/мышь; и I76 - группа с индуцированным заболеванием + введенная перорально доза Lactobacillus plantarum IM76 в количестве 1×109 КОЕ/мышь; и PM - группа с индуцированным заболеванием + введенная перорально доза Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76, каждого в количестве 5×108 КОЕ/мышь, далее обозначают то же самое на фиг. 30).In FIG. 29 is a graph showing that the concentration of IL-4 and IL-5 in the colon decreases, and the concentration of IL-10 in it increases when Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76, or mixtures thereof are introduced into an animal model with induced allergic rhinitis and asthma (NOR - normal control group (which was administered only PBS orally); AR - induced disease group; DX - induced disease group + administered intraperitoneal dose of dexamethasone in an amount of 1 mg/kg by weight; I55 - induced disease group + administered oral dose of Bifidobacterium longum IM55 at 1×10 9 CFU/mouse and I76 - induced disease group + oral dose of Lactobacillus plantarum IM76 at 1×10 9 CFU/mouse and PM - induced disease group + oral dose Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76, each at 5×10 8 cfu/mouse, hereinafter referred to as the same in Fig. 30).

На фиг. 30 представлен график, на котором видно, что состав микроорганизмов кишечника изменяется при введении Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76 или их смесей в животную модель с индуцированными аллергическим ринитом и астмой.In FIG. 30 is a graph showing that gut microorganism composition changes when Bifidobacterium longum IM55, Lactobacillus plantarum IM76, or mixtures thereof are administered to an animal model of induced allergic rhinitis and asthma.

Принцип изобретенияInvention principle

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно с помощью иллюстративных вариантов осуществления. Тем не менее, последующие иллюстративные варианты осуществления предложены только для дополнительной ясной иллюстрации технических признаков настоящего изобретения, но их не следует истолковывать как ограничивающие объем защиты настоящего изобретения.Hereinafter, the present invention will be described in more detail using illustrative embodiments. However, the following illustrative embodiments are only offered to further clearly illustrate the technical features of the present invention, and should not be construed as limiting the scope of protection of the present invention.

Пример 1. Выделение и идентификация молочнокислых бактерийExample 1 Isolation and Identification of Lactic Acid Bacteria

(1) Выделение молочнокислых бактерий(1) Isolation of lactic acid bacteria

Экскременты здорового человека мужского/женского пола возрастом 20 лет, живущего в Сеуле, или здорового человека мужского/женского пола возрастом 60 лет, живущего в Гурье, провинции Чолла-Намдо, или приготовленное дома кимчхи из капусты вносили в бульон GAM и суспендировали в нем (Nissui Pharmaceutical, Япония). После этого отбирали его надосадочную жидкость и пересаживали в агаровую среду MRS (Difco, США) или агаровую среду GAM (Nissui Pharmaceutical, Япония). Полученную в результате среду культивировали в анаэробных условиях при 37°С в течение приблизительно 48 часов, после чего из нее выделяли штаммы Lactobacillus spp. и штаммы Bifidobacterium spp., образовавшие колонии.Excrement of a healthy male/female person 20 years old living in Seoul or a healthy male/female person 60 years old living in Gurye, Jeolla-nam-do province or home-made cabbage kimchi was added to the GAM broth and suspended in it ( Nissui Pharmaceutical, Japan). After that, its supernatant was collected and transplanted into MRS agar medium (Difco, USA) or GAM agar medium (Nissui Pharmaceutical, Japan). The resulting medium was cultured under anaerobic conditions at 37° C. for approximately 48 hours, after which strains of Lactobacillus spp. and strains of Bifidobacterium spp. that formed colonies.

(2) Идентификация выделенных молочнокислых бактерий(2) Identification of isolated lactic acid bacteria

Для штаммов, выделенных из человеческих экскрементов или кимчхи из капусты, подтверждали их виды и давали им названия в соответствии с окрашиванием по Граму, физиологическими характеристиками, последовательностями 16S rDNA и др. у этих штаммов. Административные номера и названия штаммов, присвоенные выделенным молочнокислым бактериям, приведены в приведенных далее таблицах 1 и 2. Молочнокислые бактерии, выделенные из человеческих экскрементов, представляли собой 15 видов Bifidobacterium longum (учетные №№ 51-65 из таблицы 1), 10 видов Bifidobacterium adolescentis (учетные №№ 66-75 из таблицы 1) и 10 видов Lactobacillus acidophilus (учетные №№ 90-99 из таблицы 2), тогда как молочнокислые бактерии, выделенные из кимчхи из капусты, представляли собой 14 видов Lactobacillus plantarum (учетные №№ 76-89 из таблицы 2).For strains isolated from human excrement or cabbage kimchi, their species were confirmed and named according to Gram stain, physiological characteristics, 16S rDNA sequences, etc. of these strains. The administrative numbers and names of the strains assigned to the isolated lactic acid bacteria are given in Tables 1 and 2 below. The lactic acid bacteria isolated from human feces were 15 species of Bifidobacterium longum (account Nos. 51-65 from Table 1), 10 species of Bifidobacterium adolescentis (Account Nos. 66-75 from Table 1) and 10 species of Lactobacillus acidophilus (Account Nos. 90-99 from Table 2), while lactic acid bacteria isolated from cabbage kimchi were 14 species of Lactobacillus plantarum (Account Nos. 76 -89 from table 2).

Таблица 1Table 1

Учетный №Account number Название штаммаStrain name Учетный №Account number Название штаммаStrain name 5151 Bifidobacterium longum IM51 Bifidobacterium longum IM51 6464 Bifidobacterium longum IM64 Bifidobacterium longum IM64 5252 Bifidobacterium longum IM52 Bifidobacterium longum IM52 6565 Bifidobacterium longum IM65 Bifidobacterium longum IM65 5353 Bifidobacterium longum IM53 Bifidobacterium longum IM53 6666 Bifidobacterium adolescentis IM66 Bifidobacterium adolescentis IM66 5454 Bifidobacterium longum IM54 Bifidobacterium longum IM54 6767 Bifidobacterium adolescentis IM67 Bifidobacterium adolescentis IM67 5555 Bifidobacterium longum IM55 Bifidobacterium longum IM55 6868 Bifidobacterium adolescentis IM68 Bifidobacterium adolescentis IM68 5656 Bifidobacterium longum IM56 Bifidobacterium longum IM56 6969 Bifidobacterium adolescentis IM69 Bifidobacterium adolescentis IM69 5757 Bifidobacterium longum IM57 Bifidobacterium longum IM57 7070 Bifidobacterium adolescentis IM70 Bifidobacterium adolescentis IM70 5858 Bifidobacterium longum IM58 Bifidobacterium longum IM58 7171 Bifidobacterium adolescentis IM71 Bifidobacterium adolescentis IM71 5959 Bifidobacterium longum IM59 Bifidobacterium longum IM59 7272 Bifidobacterium adolescentis IM72 Bifidobacterium adolescentis IM72 6060 Bifidobacterium longum IM60 Bifidobacterium longum IM60 7373 Bifidobacterium adolescentis IM73 Bifidobacterium adolescentis IM73 6161 Bifidobacterium longum IM61 Bifidobacterium longum IM61 7474 Bifidobacterium adolescentis IM74 Bifidobacterium adolescentis IM74 6262 Bifidobacterium longum IM62 Bifidobacterium longum IM62 7575 Bifidobacterium adolescentis IM75 Bifidobacterium adolescentis IM75 6363 Bifidobacterium longum IM63 Bifidobacterium longum IM63

Таблица 2table 2

Учетный №Account number Название штаммаStrain name Учетный №Account number Название штаммаStrain name 7676 Lactobacillus plantarum IM76 Lactobacillus plantarum IM76 8888 Lactobacillus plantarum IM88 Lactobacillus plantarum IM88 7777 Lactobacillus plantarum IM77 Lactobacillus plantarum IM77 8989 Lactobacillus plantarum IM89 Lactobacillus plantarum IM89 7878 Lactobacillus plantarum IM78 Lactobacillus plantarum IM78 9090 Lactobacillus acidophilus IM90 Lactobacillus acidophilus IM90 7979 Lactobacillus plantarum IM79 Lactobacillus plantarum IM79 9191 Lactobacillus acidophilus IM91 Lactobacillus acidophilus IM91 8080 Lactobacillus plantarum IM80 Lactobacillus plantarum IM80 9292 Lactobacillus acidophilus IM92 Lactobacillus acidophilus IM92 8181 Lactobacillus plantarum IM81 Lactobacillus plantarum IM81 9393 Lactobacillus acidophilus IM93 Lactobacillus acidophilus IM93 8282 Lactobacillus plantarum IM82 Lactobacillus plantarum IM82 9494 Lactobacillus acidophilus IM94 Lactobacillus acidophilus IM94 8383 Lactobacillus plantarum IM83 Lactobacillus plantarum IM83 9595 Lactobacillus acidophilus IM95 Lactobacillus acidophilus IM95 8484 Lactobacillus plantarum IM84 Lactobacillus plantarum IM84 9696 Lactobacillus acidophilus IM96 Lactobacillus acidophilus IM96 8585 Lactobacillus plantarum IM85 Lactobacillus plantarum IM85 9797 Lactobacillus acidophilus IM97 Lactobacillus acidophilus IM97 8686 Lactobacillus plantarum IM86 Lactobacillus plantarum IM86 9898 Lactobacillus acidophilus IM98 Lactobacillus acidophilus IM98 8787 Lactobacillus plantarum IM87 Lactobacillus plantarum IM87 9999 Lactobacillus acidophilus IM99 Lactobacillus acidophilus IM99

Среди штаммов, описанных в приведенной выше таблице 1, было идентифицировано, что Bifidobacterium longum IM55 является грамположительной бациллой, которая не проявляет каталазную активность и не имеет споры. Также было показано, что 16S rDNA Bifidobacterium longum IM55 имеет последовательность под SEQ ID NO: 1. В результате сравнения последовательностей 16S rDNA Bifidobacterium longum IM55 с помощью поиска с применением BLAST было показано, что штамм Bifidobacterium longum, имеющий такую же последовательность 16S rDNA, вообще не давал результатов при поиске и имел последовательность 16S rDNA, на 99% гомологичную последовательности 16S rDNA известного штамма Bifidobacterium longum. Также среди физиологических характеристик Bifidobacterium longum IM55 анализировали доступность источника углерода с помощью теста на ферментацию сахара с применением набора API (название модели: API 20 strep; и производитель: BioMerieux’s, США), при этом его результаты показаны в приведенной далее таблице 3. В приведенной ниже таблице 3 «+» означает, что доступность источника углерода была положительной, а «-» означает, что доступность источника углерода была отрицательной.Among the strains described in Table 1 above, Bifidobacterium longum IM55 was identified as a Gram-positive bacillus that does not exhibit catalase activity and has no spore. The Bifidobacterium longum IM55 16S rDNA was also shown to have the sequence of SEQ ID NO: 1. By comparing the Bifidobacterium longum IM55 16S rDNA sequences by BLAST search, it was shown that the Bifidobacterium longum strain having the same 16S rDNA sequence generally yielded no search results and had a 16S rDNA sequence 99% homologous to the 16S rDNA sequence of a known Bifidobacterium longum strain. Also among the physiological characteristics of Bifidobacterium longum IM55, carbon source availability was analyzed by sugar fermentation test using the API kit (model name: API 20 strep; and manufacturer: BioMerieux's, USA), and the results are shown in the following Table 3. In the following below Table 3, "+" means that the availability of the carbon source was positive, and "-" means that the availability of the carbon source was negative.

Таблица 3Table 3

Источник углеродаcarbon source Название штаммаStrain name Источник углеродаcarbon source Название штаммаStrain name Bifidobacterium longum IM55 Bifidobacterium longum IM55 Bifidobacterium longum IM55 Bifidobacterium longum IM55 L-триптофанL-tryptophan -- ЖелатинGelatin -- МочевинаUrea -- Цитрат железа с эскулиномIron citrate with esculin ++ D-глюкозаD-glucose ++ ГлицеринGlycerol -- D-маннитD-mannitol ++ D-целлобиозаD-cellobiose -- D-лактозаD-lactose ++ D-маннозаD-mannose -- D-сахарозаD-sucrose ++ D-мелицитозаD-melicytosis -- D-мальтозаD-maltose ++ D-рафинозаD-raffinose ++ СалицинSalicin ++ D-сорбитD-sorbitol ++ D-ксилозаD-xylose ++ D-рамнозаD-rhamnose -- L-арабинозаL-arabinose ++ D-трегалозаD-trehalose --

Среди штаммов, описанных в приведенной выше таблице 2, было установлено, что Lactobacillus plantarum IM76 был грамположительной бациллой. Также было показано, что 16S rDNA Lactobacillus plantarum IM76 имеет последовательность под SEQ ID NO: 2. В результате сравнения последовательностей 16S rDNA Lactobacillus plantarum IM76 с помощью поиска с применением BLAST было показано, что штамм Lactobacillus plantarum, имеющий такую же последовательность 16S rDNA, вообще не давал результатов при поиске, и такая последовательность была на 99% гомологична последовательности 16S rDNA известного штамма Lactobacillus plantarum. Также, среди физиологических характеристик Lactobacillus plantarum IM76 анализировали доступность источника углерода с помощью теста на ферментацию сахара с применением набора API (название модели: API 50 CHL; и производитель: BioMerieux’s, США), при этом его результаты показаны в приведенной далее таблице 4. В приведенной ниже таблице 4 «+» означает, что доступность источника углерода была положительной, а «-» означает, что доступность источника углерода была отрицательной.Among the strains described in Table 2 above, Lactobacillus plantarum IM76 was found to be a Gram-positive bacillus. The 16S rDNA of Lactobacillus plantarum IM76 was also shown to have the sequence of SEQ ID NO: 2. By comparing the sequences of the 16S rDNA of Lactobacillus plantarum IM76 by BLAST search, it was shown that a strain of Lactobacillus plantarum having the same 16S rDNA sequence generally did not give results in the search, and this sequence was 99% homologous to the 16S rDNA sequence of a known strain of Lactobacillus plantarum . Also, among the physiological characteristics of Lactobacillus plantarum IM76, the carbon source availability was analyzed by the sugar fermentation test using the API kit (model name: API 50 CHL; and manufacturer: BioMerieux's, USA), and its results are shown in the following Table 4. In In Table 4 below, "+" means that the availability of the carbon source was positive, and "-" means that the availability of the carbon source was negative.

Таблица 4Table 4

Источник углеродаcarbon source Название штаммаStrain name Источник углеродаcarbon source Название штаммаStrain name Lactobacillus plantarum IM76 Lactobacillus plantarum IM76 Lactobacillus plantarum IM76 Lactobacillus plantarum IM76 ГлицеринGlycerol -- СалицинSalicin ++ Эритритerythritol -- ЦеллобиозаCellobiose ++ D-арабинозаD-arabinose -- МальтозаMaltose ++ L-арабинозаL-arabinose ++ ЛактозаLactose ++ D-рибозаD-ribose ++ Мелибиозаmelibiosa ++ D-ксилозаD-xylose -- Сахарозаsucrose ++ L-ксилозаL-xylose -- ТрегалозаTrehalose ++ D-адонитD-adonite -- ИнулинInulin -- Метил-β-D-ксилопиранозидMethyl-β-D-xylopyranoside -- МелецитозаMelecytosis -- D-галактозаD-galactose ++ РафинозаRafinose ++ D-глюкозаD-glucose ++ КрахмалStarch -- D-фруктозаD-fructose ++ ГликогенGlycogen -- D-маннозаD-mannose ++ КсилитXylitol -- L-сорбозаL-sorbose -- ГентиобиозаGentiobiosis ++ L-рамнозаL-rhamnose -- D-туранозаD-turanose ++ ДульцитDulcite -- D-ликсозаD-lyxose -- ИнозитInositol -- D-тагатозаD-tagatose -- МаннитMannitol ++ D-фукозаD-fucose -- СорбитSorbitol ++ L-фукозаL-fucose -- α-метил-D-маннозидα-methyl-D-mannoside -- D-арабитD-arabit -- α-метил-D-глюкозидα-methyl-D-glucoside -- L-арабитL-arabit -- N-ацетилглюкозаминN-acetylglucosamine ++ ГлюконатGluconate ++ АмигдалинAmygdalin ++ 2-Кетоглюконат2-Ketogluconate -- АрбутинArbutin ++ 5-Кетоглюконат5-Ketogluconate -- ЭскулинEsculin ++

Пример 2. Тест на эффект ингибирования воспалительных реакций, вызываемый молочнокислыми бактериямиExample 2 Lactic Acid Bacteria Inflammatory Inhibition Effect Test

(1) Тест на эффект ингибирования воспалительных реакций, вызываемый молочнокислыми бактериями, на макрофагах(1) Test for the effect of inhibition of inflammatory reactions caused by lactic acid bacteria on macrophages

Шестинедельного самца мыши линии C57BL/6J (20-23 г) приобретали у Raonbio Co., Ltd. Мыши внутрибрюшинно вводили 2 мл стерилизованного 4% тиогликолята и спустя 96 часов ее анестезировали. После этого мыши внутрибрюшинно вводили 8 мкл среды RPMI 1640. Спустя 5-10 минут у мыши внутрибрюшинно экстрагировали среду RPMI (в том числе макрофаги), затем среду центрифугировали в условиях 1000 об/мин в течение 10 минут, а затем дважды промывали, снова средой RPMI 1640. Макрофаги высевали в 24-луночный планшет в количестве 0,5×106 клеток на лунку, затем культивировали в течение 24 часов, а затем с него удаляли неприкрепившиеся клетки. Культуральную жидкость с макрофагами обрабатывали тестируемым материалом, т.е. молочнокислыми бактериями, а также индуктором воспалительной реакции, т.е. липополисахаридом (LPS), в течение 90 минут или 24 часов, а затем из них получали надосадочную жидкость и клетки. В этот момент времени концентрация молочнокислых бактерий, которыми производили обработку, составляла 1×104 КОЕ/мл. Также, для сравнения эффектов, оказываемых молочнокислыми бактериями, в качестве тестируемого материала использовали различные пребиотики.A six week old male C57BL/6J mouse (20-23 g) was purchased from Raonbio Co., Ltd. Mice were intraperitoneally injected with 2 ml of sterilized 4% thioglycolate and 96 hours later they were anesthetized. Thereafter, mice were intraperitoneally injected with 8 μl of RPMI 1640 medium. After 5-10 minutes, RPMI medium (including macrophages) was extracted intraperitoneally from mice, then the medium was centrifuged at 1000 rpm for 10 minutes, and then washed twice, again with medium RPMI 1640. Macrophages were seeded in a 24-well plate at 0.5×10 6 cells per well, then cultured for 24 hours, and then non-adherent cells were removed from it. The culture liquid with macrophages was treated with the test material, i.e. lactic acid bacteria, as well as an inducer of an inflammatory reaction, i.e. lipopolysaccharide (LPS), for 90 minutes or 24 hours, and then from them received the supernatant and cells. At this point in time, the concentration of lactic acid bacteria treated was 1×10 4 cfu/ml. Also, to compare the effects of lactic acid bacteria, various prebiotics were used as a test material.

Уровень экспрессии TNF-α из указанной полученной надосадочной жидкости измеряли с помощью набора для ELISA. Также, уровень экспрессии p65 (NF-κB), p-p65 (фосфор-NF-κB) и β-актина измеряли в указанных полученных клетках с помощью способа иммуноблоттинга. В частности, отбирали 50 мкг надосадочной жидкости и подвергали электрофорезу в SDS-содержащем 10% (мас./об.) полиакриламидном геле в течение одного с половиной часа. Подвергнутый электрофорезу образец переносили на нитроцеллюлозную бумагу в условиях 100 В и 400 мА в течение одного часа и 10 минут. Нитроцеллюлозную бумагу, на которую был перенесен образец, подвергали блокированию с помощью 5% обезжиренного молока в течение 30 минут, затем трижды промывали PBS-Tween в течение минут каждый раз, а затем подвергали реакции в течение ночи с добавлением первичных антител (Santa Cruz Biotechnology, США) в соотношении 1:100. После этого такую бумагу промывали три раза в течение десяти минут каждый раз и подвергали реакции с добавлением вторичных антител (Santa Cruz Biotechnology, США) в соотношении 1:1000 в течение одного часа и 20 минут. Затем такую бумагу промывали три раза в течение 15 минут каждый раз, затем давали сформироваться цвету флуоресценции, затем проявляли, а затем измеряли интенсивность хромофорной полосы. Результаты тестирования эффекта ингибирования воспалительной реакции, оказываемого молочнокислыми бактериями на макрофагах, приведены в представленных далее таблицах 5-7.The level of expression of TNF-α from the indicated obtained supernatant was measured using an ELISA kit. Also, the level of expression of p65 (NF-κB), p-p65 (phosphorus-NF-κB) and β-actin was measured in these obtained cells using the method of immunoblotting. In particular, 50 μg of the supernatant was taken and subjected to electrophoresis in an SDS-containing 10% (w/v) polyacrylamide gel for one and a half hours. The electrophoresed sample was transferred to nitrocellulose paper under conditions of 100 V and 400 mA for one hour and 10 minutes. The nitrocellulose paper onto which the sample was transferred was blocked with 5% skim milk for 30 minutes, then washed three times with PBS-Tween for minutes each time, and then reacted overnight with the addition of primary antibodies (Santa Cruz Biotechnology, USA) at a ratio of 1:100. After that, such paper was washed three times for ten minutes each time and subjected to a reaction with the addition of secondary antibodies (Santa Cruz Biotechnology, USA) at a ratio of 1:1000 for one hour and 20 minutes. Then, such paper was washed three times for 15 minutes each time, then allowed to form a fluorescence color, then developed, and then the intensity of the chromophore band was measured. The results of testing the effect of inhibiting the inflammatory response of lactic acid bacteria on macrophages are shown in the following tables 5-7.

Таблица 5Table 5

Тестируемый материал для обработки макрофаговTest material for macrophage processing Степень ингибирования активации NF-κB (p-p65/p65)Degree of inhibition of NF-κB activation (p-p65/p65) Степень ингибирования экспрессии TNF-αDegree of inhibition of TNF-α expression НеобработанныеRaw -- -- Bifidobacterium longum IM51 Bifidobacterium longum IM51 ++ ++ Bifidobacterium longum IM52 Bifidobacterium longum IM52 ++++ ++++ Bifidobacterium longum IM53 Bifidobacterium longum IM53 ++++ ++++ Bifidobacterium longum IM54 Bifidobacterium longum IM54 ++++ ++ Bifidobacterium longum IM55 Bifidobacterium longum IM55 ++++++ ++++++ Bifidobacterium longum IM56 Bifidobacterium longum IM56 ++++ ++++ Bifidobacterium longum IM57 Bifidobacterium longum IM57 ++ ++ Bifidobacterium longum IM58 Bifidobacterium longum IM58 ++ ++ Bifidobacterium longum IM59 Bifidobacterium longum IM59 ++ ++ Bifidobacterium longum IM60 Bifidobacterium longum IM60 ++ ++ Bifidobacterium longum IM61 Bifidobacterium longum IM61 ++ ++ Bifidobacterium longum IM62 Bifidobacterium longum IM62 ++ ++ Bifidobacterium longum IM53 Bifidobacterium longum IM53 ++ ++ Bifidobacterium longum IM64 Bifidobacterium longum IM64 ++ ++ Bifidobacterium longum IM65 Bifidobacterium longum IM65 ++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM66 Bifidobacterium adolescentis IM66 ++++++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM67 Bifidobacterium adolescentis IM67 ++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM68 Bifidobacterium adolescentis IM68 ++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM69 Bifidobacterium adolescentis IM69 ++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM70 Bifidobacterium adolescentis IM70 ++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM71 Bifidobacterium adolescentis IM71 ++ ++

Таблица 6Table 6

Тестируемый материал для обработки макрофаговTest material for macrophage processing Степень ингибирования активации NF-κB (p-p65/p65)Degree of inhibition of NF-κB activation (p-p65/p65) Степень ингибирования экспрессии TNF-αDegree of inhibition of TNF-α expression Bifidobacterium adolescentis IM72 Bifidobacterium adolescentis IM72 ++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM73 Bifidobacterium adolescentis IM73 ++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM74 Bifidobacterium adolescentis IM74 ++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM75 Bifidobacterium adolescentis IM75 ++ ++ Lactobacillus plantarum IM76 Lactobacillus plantarum IM76 ++++++ ++++++ Lactobacillus plantarum IM77 Lactobacillus plantarum IM77 ++ ++++ Lactobacillus plantarum IM78 Lactobacillus plantarum IM78 ++ ++ Lactobacillus plantarum IM79 Lactobacillus plantarum IM79 ++ ++++ Lactobacillus plantarum IM80 Lactobacillus plantarum IM80 ++ ++ Lactobacillus plantarum IM81 Lactobacillus plantarum IM81 ++++++ ++++++ Lactobacillus plantarum IM82 Lactobacillus plantarum IM82 ++ ++ Lactobacillus plantarum IM83 Lactobacillus plantarum IM83 ++ ++ Lactobacillus plantarum IM84 Lactobacillus plantarum IM84 ++ ++ Lactobacillus plantarum IM85 Lactobacillus plantarum IM85 ++ ++ Lactobacillus plantarum IM86 Lactobacillus plantarum IM86 ++ ++ Lactobacillus plantarum IM87 Lactobacillus plantarum IM87 ++++ ++++ Lactobacillus plantarum IM88 Lactobacillus plantarum IM88 ++ ++ Lactobacillus plantarum IM89 Lactobacillus plantarum IM89 ++ ++ Lactobacillus acidophilus IM90 Lactobacillus acidophilus IM90 ++ ++ Lactobacillus acidophilus IM91 Lactobacillus acidophilus IM91 ++++++ ++++++ Lactobacillus acidophilus IM92 Lactobacillus acidophilus IM92 ++ ++ Lactobacillus acidophilus IM93 Lactobacillus acidophilus IM93 ++ ++

Таблица 7Table 7

Тестируемый материал для обработки макрофаговTest material for macrophage processing Степень ингибирования активации NF-κB (p-p65/p65)Degree of inhibition of NF-κB activation (p-p65/p65) Степень ингибирования экспрессии TNF-αDegree of inhibition of TNF-α expression Lactobacillus acidophilus IM94 Lactobacillus acidophilus IM94 ++ ++ Lactobacillus acidophilus IM95 Lactobacillus acidophilus IM95 ++ ++ Lactobacillus acidophilus IM96 Lactobacillus acidophilus IM96 ++ ++ Lactobacillus acidophilus IM97 Lactobacillus acidophilus IM97 ++ ++ Lactobacillus acidophilus IM98 Lactobacillus acidophilus IM98 ++ ++ Lactobacillus acidophilus IM99 Lactobacillus acidophilus IM99 ++ ++ ИнулинInulin ++++ ++++ Цитрусовый пектинCitrus pectin ++++ ++ Каррагенанcarrageenan ++ -- ТрегалозаTrehalose ++ -- ЛактулозаLactulose ++ -- ЦиклодекстринCyclodextrin ++ -- КарбоксиметилцеллюлозаCarboxymethylcellulose ++ ++ ЖелатинGelatin ++ ++ ХитозанChitosan ++++ ++++ Альгиновая кислотаAlginic acid ++ ++ ФруктоолигосахаридFructooligosaccharide ++ ++ Обезжиренный соевый белокdefatted soy protein ++ ++ Яблочный пектинapple pectin ++ ++++ Арабиногалактанarabinogalactan ++ ++++ КсиланXylan ++ --

* Степень ингибирования: -, <10%; +, 10-30%; ++, 30-60%; +++, >60%.* Degree of inhibition: -, <10%; +, 10-30%; ++, 30-60%; +++, >60%.

В итоге проведенных тестов, результаты которых показаны в таблицах 5-7, было установлено, что эффект ингибирования воспалительных реакций на макрофагах различается в зависимости от типов молочнокислых бактерий. В частности, в случае молочнокислых бактерий Bifidobacterium spp. и молочнокислых бактерий Lactobacillus spp. было установлено, что эффект ингибирования воспалительных реакций различается не только в зависимости от вида, но также в зависимости от штаммов, даже если эти штаммы относятся к одному и тому же виду. Среди этих штаммов в случае Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76 было установлено, что степень ингибирования активации NF-kB и степень ингибирования экспрессии TNF-α во всех случаях в тот же момент времени являются высокими.As a result of the tests, the results of which are shown in tables 5-7, it was found that the effect of inhibiting inflammatory reactions on macrophages differs depending on the types of lactic acid bacteria. In particular, in the case of lactic acid bacteria Bifidobacterium spp. and lactic acid bacteria Lactobacillus spp. it was found that the effect of inhibiting inflammatory reactions differs not only depending on the species, but also depending on the strains, even if these strains belong to the same species. Among these strains, in the case of Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76, the degree of inhibition of NF-kB activation and the degree of inhibition of TNF-α expression were found to be high in all cases at the same time.

Также, в случае хитозана, инулина и цитрусового пектина в качестве пребиотиков было установлено, что степень ингибирования активации NF-kB и степень ингибирования экспрессии TNF-α были очень хорошими по сравнению с другими пребиотиками.Also, in the case of chitosan, inulin and citrus pectin as prebiotics, it was found that the degree of inhibition of NF-kB activation and the degree of inhibition of TNF-α expression were very good compared to other prebiotics.

(2) Тест на эффект ингибирования воспалительных реакций, вызываемый молочнокислыми бактериями, на дендроцитах(2) Lactic acid bacteria inhibition effect test on dendrocytes

Иммуноциты выделяли из костного мозга мыши линии C57BL/6 (самец, 20-23 г) с применением RPMI 1640, содержащей 10% FBS, 1% антибиотиков, 1% глутамакса и 0,1% меркаптоэтанола, затем обрабатывали буфером для лизиса RBC, а затем промывали. Указанные клетки разделяли в каждую лунку 24-луночного планшета, затем обрабатывали GM-CSF и IL-4 в соотношении 1:1000, а затем культивировали. На 5-й день культивирования клеткам заменяли среду на новую, затем собирали на 8-й день их культивирования, а затем использовали в качестве дендроцитов. После этого дендроциты высевали в 24-луночный планшет по 0,5×106 клеток на лунку, затем обрабатывали тестируемым материалом, т.е. молочнокислыми бактериями, а также индуктором воспалительной реакции, т.е. липополисахаридом (LPS), в течение 90 минут или 24 часов, а затем из них получали надосадочную жидкость и клетки. В этот момент времени концентрация молочнокислых бактерий, которыми производили обработку, составляла 1×104 КОЕ/мл. Также, для сравнения эффектов, оказываемых молочнокислыми бактериями, в качестве тестируемого материала использовали различные пребиотики.Immunocytes were isolated from the bone marrow of C57BL/6 mouse (male, 20-23 g) using RPMI 1640 containing 10% FBS, 1% antibiotics, 1% glutamax and 0.1% mercaptoethanol, then treated with RBC lysis buffer, and then washed. These cells were divided into each well of a 24-well plate, then treated with GM-CSF and IL-4 in a ratio of 1:1000, and then cultured. On the 5th day of cultivation, the cells were replaced with a new medium, then collected on the 8th day of their cultivation, and then used as dendrocytes. After that, dendrocytes were seeded in a 24-well plate at 0.5×10 6 cells per well, then treated with the test material, i.e. lactic acid bacteria, as well as an inducer of an inflammatory reaction, i.e. lipopolysaccharide (LPS), for 90 minutes or 24 hours, and then from them received the supernatant and cells. At this point in time, the concentration of lactic acid bacteria treated was 1×10 4 cfu/ml. Also, to compare the effects of lactic acid bacteria, various prebiotics were used as a test material.

Измеряли уровень экспрессии IL-10 и IL-12 из указанной полученной надосадочной жидкости посредством набора для ELISA. Также, уровень экспрессии p65 (NF-κB), p-p65 (фосфор-NF-κB) и β-актина измеряли у клеток, которые были получены после обработки тестируемым материалом в течение 90 минут, с помощью того же способа иммуноблоттинга, что и в вышеописанном примере 2.(1). Результаты тестирования эффекта ингибирования воспалительной реакции, оказываемого молочнокислыми бактериями на дендроцитах, приведены в представленных далее таблицах 8-10.Measured the level of expression of IL-10 and IL-12 from the specified obtained supernatant by means of an ELISA kit. Also, the expression level of p65 (NF-κB), p-p65 (phosphorus-NF-κB), and β-actin was measured in cells that were obtained after treatment with the test material for 90 minutes using the same immunoblotting method as in the above example 2.(1). The results of testing the effect of inhibiting the inflammatory response of lactic acid bacteria on dendrocytes are shown in the following tables 8-10.

Таблица 8Table 8

Тестируемый материал для обработки дендроцитовTest material for dendrocyte processing Степень ингибирования активации NF-κB (p-p65/p65)Degree of inhibition of NF-κB activation (p-p65/p65) Степень ингибирования экспрессии IL-12Degree of inhibition of IL-12 expression Степень повышения экспрессии IL-10The degree of increase in the expression of IL-10 НеобработанныеRaw -- -- -- Bifidobacterium longum IM51 Bifidobacterium longum IM51 ++ ++ ++ Bifidobacterium longum IM52 Bifidobacterium longum IM52 ++++ -- -- Bifidobacterium longum IM53 Bifidobacterium longum IM53 ++ -- -- Bifidobacterium longum IM54 Bifidobacterium longum IM54 ++ ++ ++ Bifidobacterium longum IM55 Bifidobacterium longum IM55 ++++++ ++++ ++++++ Bifidobacterium longum IM56 Bifidobacterium longum IM56 ++++ ++++ ++++ Bifidobacterium longum IM57 Bifidobacterium longum IM57 ++ ++ ++ Bifidobacterium longum IM58 Bifidobacterium longum IM58 ++ ++ -- Bifidobacterium longum IM59 Bifidobacterium longum IM59 ++ ++ -- Bifidobacterium longum IM60 Bifidobacterium longum IM60 ++ ++ -- Bifidobacterium longum IM61 Bifidobacterium longum IM61 ++ ++ -- Bifidobacterium longum IM62 Bifidobacterium longum IM62 ++ ++ -- Bifidobacterium longum IM53 Bifidobacterium longum IM53 ++ ++ -- Bifidobacterium longum IM64 Bifidobacterium longum IM64 ++ ++ ++ Bifidobacterium longum IM65 Bifidobacterium longum IM65 ++ ++ -- Bifidobacterium adolescentis IM66 Bifidobacterium adolescentis IM66 ++++++ ++++ -- Bifidobacterium adolescentis IM67 Bifidobacterium adolescentis IM67 ++ ++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM68 Bifidobacterium adolescentis IM68 ++ ++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM69 Bifidobacterium adolescentis IM69 ++ ++ -- Bifidobacterium adolescentis IM70 Bifidobacterium adolescentis IM70 ++ ++ -- Bifidobacterium adolescentis IM71 Bifidobacterium adolescentis IM71 ++ ++ --

Таблица 9Table 9

Тестируемый материал для обработки дендроцитовTest material for dendrocyte processing Степень ингибирования активации NF-κB (p-p65/p65)Degree of inhibition of NF-κB activation (p-p65/p65) Степень ингибирования экспрессии IL-12Degree of inhibition of IL-12 expression Степень повышения экспрессии IL-10The degree of increase in the expression of IL-10 Bifidobacterium adolescentis IM72 Bifidobacterium adolescentis IM72 ++ ++ -- Bifidobacterium adolescentis IM73 Bifidobacterium adolescentis IM73 ++ ++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM74 Bifidobacterium adolescentis IM74 ++ ++ ++ Bifidobacterium adolescentis IM75 Bifidobacterium adolescentis IM75 ++ ++ ++ Lactobacillus plantarum IM76 Lactobacillus plantarum IM76 ++++ ++++ ++++ Lactobacillus plantarum IM77 Lactobacillus plantarum IM77 ++ ++ ++ Lactobacillus plantarum IM78 Lactobacillus plantarum IM78 ++ ++ ++ Lactobacillus plantarum IM79 Lactobacillus plantarum IM79 ++ ++ -- Lactobacillus plantarum IM80 Lactobacillus plantarum IM80 ++ ++ ++ Lactobacillus plantarum IM81 Lactobacillus plantarum IM81 ++ ++ ++ Lactobacillus plantarum IM82 Lactobacillus plantarum IM82 ++ ++ -- Lactobacillus plantarum IM83 Lactobacillus plantarum IM83 ++ ++ ++ Lactobacillus plantarum IM84 Lactobacillus plantarum IM84 ++ ++ ++ Lactobacillus plantarum IM85 Lactobacillus plantarum IM85 ++ ++ ++ Lactobacillus plantarum IM86 Lactobacillus plantarum IM86 ++ ++ -- Lactobacillus plantarum IM87 Lactobacillus plantarum IM87 ++++ ++++ ++ Lactobacillus plantarum IM88 Lactobacillus plantarum IM88 ++ ++ -- Lactobacillus plantarum IM89 Lactobacillus plantarum IM89 ++ ++ -- Lactobacillus acidophilus IM90 Lactobacillus acidophilus IM90 ++ ++ ++ Lactobacillus acidophilus IM91 Lactobacillus acidophilus IM91 ++ ++ -- Lactobacillus acidophilus IM92 Lactobacillus acidophilus IM92 ++ ++ -- Lactobacillus acidophilus IM93 Lactobacillus acidophilus IM93 ++ ++ ++

Таблица 10Table 10

Тестируемый материал для обработки дендроцитовTest material for dendrocyte processing Степень ингибирования активации NF-κB (p-p65/p65)Degree of inhibition of NF-κB activation (p-p65/p65) Степень ингибирования экспрессии IL-12Degree of inhibition of IL-12 expression Степень повышения экспрессии IL-10The degree of increase in the expression of IL-10 Lactobacillus acidophilus IM94 Lactobacillus acidophilus IM94 ++ ++ -- Lactobacillus acidophilus IM95 Lactobacillus acidophilus IM95 ++ ++ -- Lactobacillus acidophilus IM96 Lactobacillus acidophilus IM96 ++ ++ -- Lactobacillus acidophilus IM97 Lactobacillus acidophilus IM97 ++ ++ -- Lactobacillus acidophilus IM98 Lactobacillus acidophilus IM98 ++ ++ -- Lactobacillus acidophilus IM99 Lactobacillus acidophilus IM99 ++ ++ ++ ИнулинInulin ++++ ++ ++ Цитрусовый пектинCitrus pectin ++++ ++++ ++++ КаррагенанCarrageenan ++ ++ -- ТрегалозаTrehalose ++ ++ ++ ЛактулозаLactulose ++ ++ -- ЦиклодекстринCyclodextrin ++ ++ -- КарбоксиметилцеллюлозаCarboxymethylcellulose ++ ++ -- ЖелатинGelatin ++ ++ ++ ХитозанChitosan ++++ ++ ++++ Альгиновая кислотаAlginic acid ++ ++ ++ ФруктоолигосахаридFructooligosaccharide ++ ++ -- Обезжиренный соевый белокdefatted soy protein ++ ++ ++ Яблочный пектинapple pectin ++ ++ -- Арабиногалактанarabinogalactan ++ ++ ++ КсиланXylan ++ ++ ++++

* Степень ингибирования: -, <10%; +, 10-30%; ++, 30-60%; +++, >60%;* Degree of inhibition: -, <10%; +, 10-30%; ++, 30-60%; +++, >60%;

* Степень повышения: -, <10%; +, 10-50%; ++, 50-100%; +++, >100%.* Increase degree: -, <10%; +, 10-50%; ++, 50-100%; +++, >100%.

В итоге проведенных тестов, результаты которых показаны в таблицах 8-10, было установлено, что эффект ингибирования воспалительных реакций на дендроцитах различается в зависимости от типов молочнокислых бактерий. В частности, в случае молочнокислых бактерий Bifidobacterium spp. и молочнокислых бактерий Lactobacillus spp. было установлено, что эффект ингибирования воспалительных реакций различается не только в зависимости от вида, но также в зависимости от штаммов, даже если эти штаммы относятся к одному и тому же виду. В частности, часть штаммов демонстрировала результаты, при которых экспрессия IL-12 повышалась. С другой стороны, большинство штаммов демонстрировала результаты, при которых экспрессия IL-10 снижалась. Среди этих штаммов в случае Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76 было установлено, что степень ингибирования активации NF-kB и степень ингибирования экспрессии IL-12 были наиболее высокими, и в то же самое время степень повышения экспрессии IL-10 была наиболее высокой.As a result of the tests, the results of which are shown in tables 8-10, it was found that the effect of inhibiting inflammatory reactions on dendrocytes differs depending on the types of lactic acid bacteria. In particular, in the case of lactic acid bacteria Bifidobacterium spp. and lactic acid bacteria Lactobacillus spp. it was found that the effect of inhibiting inflammatory reactions differs not only depending on the species, but also depending on the strains, even if these strains belong to the same species. In particular, some of the strains showed results in which the expression of IL-12 increased. On the other hand, most of the strains showed results in which the expression of IL-10 was reduced. Among these strains, in the case of Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76, it was found that the degree of inhibition of NF-kB activation and the degree of inhibition of IL-12 expression were the highest, and at the same time, the degree of increase in IL-10 expression was the highest.

Также, в случае хитозана, инулина и цитрусового пектина в качестве пребиотиков было установлено, что степень ингибирования активации NF-kB, степень ингибирования экспрессии IL-12 и степень повышения экспрессии IL-10 были очень хорошими по сравнению с другими пребиотиками.Also, in the case of chitosan, inulin, and citrus pectin as prebiotics, it was found that the degree of inhibition of NF-kB activation, the degree of inhibition of IL-12 expression, and the degree of increase in IL-10 expression were very good compared to other prebiotics.

Из вышеописанного примера 2 видно, что среди различных молочнокислых бактерий Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76 демонстрировали наиболее хороший эффект ингибирования воспалительных реакций. Также, среди различных пребиотиков было установлено, что хитозан, инулин и цитрусовый пектин демонстрировали очень хороший эффект ингибирования воспалительных реакций.From the above example 2, it can be seen that among various lactic acid bacteria, Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76 showed the most good effect of inhibiting inflammatory reactions. Also, among various prebiotics, it was found that chitosan, inulin and citrus pectin showed a very good effect of inhibiting inflammatory responses.

Пример 3. Оценка иммунорегуляторного эффекта, оказываемого молочнокислыми бактериямиExample 3 Evaluation of the immunoregulatory effect of lactic acid bacteria

(1) Степень дифференцировки клеток(1) Degree of cell differentiation

Для контроля, предупреждения, облегчения тяжести или лечения аллергических заболеваний, в частности заболеваний, вызванных реакцией гиперчувствительности 1-го типа, важно снизить выработку IgE-антител и повысить выработку регуляторных Т-клеток (Treg-клеток), высвобождающих IL-10 при иммунной реакции на аллерген. Известно, что аллергическая реакция осложняется не только благодаря медиаторам, образованным тучными клетками, базофилами и т.п., но также благодаря действию цитокинов, секретируемых из этих клеток, и часть симптомов, которые проявляются в виде аллергической реакции, являются следствием действия этих цитокинов. Такие цитокины, как TNF-α, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13 и т.д., образуются в тучных клетках, и эти цитокины играют роль в сборе нейтрофилов и эозинофилов. Также, IL-4 и IL-13, секретируемые из тучных клеток, активируют B-клетки для образования IgE-антител, а IL-5 играет роль в сборе и активации эозинофилов. Цитокины, такие как IL-4 и IL-5, обычно классифицируют на Th2-цитокины, поскольку многие из этих цитокинов секретируются из Th2-клеток, и цитокины, секретируемые из тучных клеток и Th2-клеток, связываются с соответствующими рецепторами и таким образом оказывают свое действие, индуцируя взаимодействие между клетками и усиливая аллергическую реакцию. Также может возникнуть симптом аллергического шока, если TNF-α, типичный провоспалительный цитокин, систематически вырабатывается в большом количестве при аллергическом состоянии.In order to control, prevent, alleviate, or treat allergic diseases, in particular those caused by type 1 hypersensitivity reactions, it is important to reduce the production of IgE antibodies and increase the production of regulatory T cells (Treg cells) that release IL-10 in response to an immune response. to the allergen. It is known that an allergic reaction is complicated not only by mediators formed by mast cells, basophils, etc., but also by the action of cytokines secreted from these cells, and part of the symptoms that appear as an allergic reaction are due to the action of these cytokines. Cytokines such as TNF-α, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, etc. are produced in mast cells and these cytokines play a role in the collection of neutrophils and eosinophils. Also, IL-4 and IL-13 secreted from mast cells activate B cells to produce IgE antibodies, and IL-5 plays a role in recruiting and activating eosinophils. Cytokines such as IL-4 and IL-5 are generally classified as Th2 cytokines because many of these cytokines are secreted from Th2 cells and cytokines secreted from mast cells and Th2 cells bind to their respective receptors and thus exert its action, inducing interaction between cells and enhancing the allergic reaction. A symptom of allergic shock may also occur if TNF-α, a typical pro-inflammatory cytokine, is systematically produced in large amounts in an allergic condition.

Таким образом, для оценки иммунорегуляторного эффекта, оказываемого молочнокислыми бактериями, выделенными из экскрементов или кимчхи из капусты, измеряли влияние молочнокислых бактерий на иммунные реакции клеток селезенки путем измерения степени ингибирования дифференцировки в клетки, секретирующие указанные цитокины и повышающие степень дифференцировки в Treg-клетки.Thus, in order to assess the immunoregulatory effect of lactic acid bacteria isolated from feces or cabbage kimchi, the effect of lactic acid bacteria on the immune responses of spleen cells was measured by measuring the degree of inhibition of differentiation into cells that secrete these cytokines and increase the degree of differentiation into Treg cells.

В частности, у мыши линии C56BL/6J выделяли селезенку, затем ее разрушали, затем суспендировали в среде RPMI 1640, содержащей 10% FCS, а затем выделяли CD4 Т-клетки с применением набора для выделения CD4 Т-клеток (MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия). Выделенные CD4 Т-клетки распределяли в 12-луночном планшете по 5×105 клеток на лунку. После этого клетки культивировали в каждой лунке с добавлением антител к CD3, антител к CD28, IL-2 и IL-12 для индуцировании дифференцировки Т-клеток в Th1-клетки; с добавлением антител к CD3, антител к CD28, IL-2 и IL-4 для индуцировании дифференцировки Т-клеток в Th2-клетки; с добавлением антител к CD3, антител к CD28, IL-6 и TGF-β для индуцировании дифференцировки Т-клеток в Th17-клетки; и с добавлением антител к CD3 и антител к CD28 для индуцировании дифференцировки Т-клеток в Treg-клетки, и вносили в них тестируемый материал, т.е. молочнокислые бактерии, в количестве 1×105 КОЕ на лунку, а затем культивировали в течение четырех дней. Также для сравнения эффектов, оказываемых молочнокислыми бактериями, в качестве тестируемого материала использовали различные пребиотики.In particular, the spleen was isolated from a C56BL/6J mouse, then destroyed, then suspended in RPMI 1640 medium containing 10% FCS, and then CD4 T cells were isolated using a CD4 T cell isolation kit (MiltenyiBiotec, Bergisch-Gladbach , Germany). The isolated CD4 T cells were distributed in a 12-well plate at 5×10 5 cells per well. Thereafter, cells were cultured in each well with the addition of anti-CD3, anti-CD28, IL-2, and IL-12 antibodies to induce T cell differentiation into Th1 cells; with the addition of antibodies to CD3, antibodies to CD28, IL-2 and IL-4 to induce differentiation of T cells into Th2 cells; with the addition of antibodies to CD3, antibodies to CD28, IL-6 and TGF-β to induce differentiation of T cells into Th17 cells; and with the addition of anti-CD3 antibodies and anti-CD28 antibodies to induce differentiation of T cells into Treg cells, and introduced the test material into them, i.e. lactic acid bacteria, in the amount of 1×10 5 CFU per well, and then cultivated for four days. Also, to compare the effects of lactic acid bacteria, various prebiotics were used as a test material.

После этого измеряли эффективность дифференцировки выделенных из селезенки Т-клеток в Th1-клетки, Th2-клетки, Th17-клетки и Treg-клетки. В частности, клетки из культуральной жидкости окрашивали с помощью антител к FOXp3 или антител к IL-17A, после чего распределение Th1-клеток, Th2-клеток, Th17-клеток и Treg-клеток анализировали с помощью устройства для FACS (сортировки флуоресцентно-активированных клеток) (C6 Flow Cytometer® System, Сан-Хосе, Калифорния, США), результаты которой приведены в последующих таблицах 11-13. В приведенных ниже таблицах 11-13 молочнокислые бактерии показаны без их видовых названий, и авторами настоящего изобретения им присвоены названия штаммов.Thereafter, the differentiation efficiency of spleen-derived T cells into Th1 cells, Th2 cells, Th17 cells and Treg cells was measured. In particular, cells from the culture fluid were stained with anti-FOXp3 antibodies or anti-IL-17A antibodies, after which the distribution of Th1 cells, Th2 cells, Th17 cells and Treg cells was analyzed using a FACS (Fluorescent Activated Cell Sorting) device. ) (C6 Flow Cytometer ® System, San Jose, CA, USA), the results of which are shown in the following tables 11-13. In Tables 11-13 below, lactic acid bacteria are shown without their species names, and are assigned strain names by the present inventors.

Таблица 11Table 11

Тестируемый материал для обработки Т-клеток селезенкиTest material for treatment of spleen T cells Степень ингибирования дифференцировкиDegree of inhibition of differentiation Степень повышения дифференцировкиDegree of differentiation enhancement Th1-клеткаTh1 cell Th2-клеткаTh2 cell Th17-клеткаTh17 cell Treg-клеткаTreg cell НеобработанныеRaw -- -- -- -- IM51IM51 ++ ++ ++ ++ IM52IM52 ++++ -- -- -- IM53IM53 ++ -- ++ ++ IM54IM54 ++ ++ ++ ++ IM55IM55 ++++++ ++++++ ++++++ ++++++ IM56IM56 ++++ ++ ++ ++ IM57IM57 ++++ -- ++ ++ IM58IM58 ++++ -- ++ -- IM59IM59 ++ ++ ++ -- IM60IM60 ++ ++ ++ -- IM61IM61 ++++ ++ ++++ ++ IM62IM62 ++++ ++ ++++ ++ IM63IM63 ++ ++ ++ ++ IM64IM64 ++++ ++++ ++ ++ IM65IM65 ++ ++ ++ ++ IM66IM66 ++++++ ++ ++++ ++ IM67IM67 ++++ ++ ++++ ++ IM68IM68 ++++ ++ ++++ ++ IM69IM69 ++ ++ ++ ++ IM70IM70 ++++ ++ ++++ ++ IM71IM71 ++++ ++ ++++ ++

Таблица 12Table 12

Тестируемый материал для обработки Т-клеток селезенкиTest material for treatment of spleen T cells Степень ингибирования дифференцировкиDegree of inhibition of differentiation Степень повышения дифференцировкиDegree of differentiation enhancement Th1-клеткаTh1 cell Th2-клеткаTh2 cell Th17-клеткаTh17 cell Treg-клеткаTreg cell IM72IM72 ++ ++ ++ ++ IM73IM73 ++++ ++ ++ ++ IM74IM74 ++ ++ ++ ++ IM75IM75 ++++++ ++ ++ ++++ IM76IM76 ++++ ++++++ ++++++ ++++++ IM77IM77 ++ ++ ++ ++ IM78IM78 ++ ++ ++++ ++++ IM79IM79 ++ ++ ++++ ++ IM80IM80 ++ ++++ ++ ++ IM81IM81 ++ ++ ++++ ++ IM82IM82 ++ ++ ++ ++ IM83IM83 ++ ++++ ++++ ++ IM84IM84 ++ ++ ++++ ++ IM85IM85 ++ ++ ++ ++ IM86IM86 ++ ++ ++ ++ IM87IM87 ++ ++ ++++ ++ IM88IM88 ++ ++ ++ ++ IM89IM89 ++++ ++ ++++ ++ IM90IM90 ++ ++ ++ ++ IM91IM91 ++ ++ ++ ++ IM92IM92 ++ ++ ++ ++ IM93IM93 ++++ ++ ++++ ++

Таблица 13Table 13

Тестируемый материал для обработки Т-клеток селезенкиTest material for treatment of spleen T cells Степень ингибирования дифференцировкиDegree of inhibition of differentiation Степень повышения дифференцировкиDegree of differentiation enhancement Th1-клеткаTh1 cell Th2-клеткаTh2 cell Th17-клеткаTh17 cell Treg-клеткаTreg cell IM94IM94 ++ ++ ++ ++ IM95IM95 ++ ++ ++ ++ IM96IM96 ++++ ++++ ++++ ++ IM97IM97 ++ ++ ++ ++ IM98IM98 ++ ++ ++ -- IM99IM99 ++ ++ ++ ++ P1P1 ++ ++ ++ ++ P2P2 ++ ++++++ ++++ ++++ P3P3 ++++++ ++++ ++ ++ P4P4 ++ ++ ++ ++ P5P5 ++ ++++ -- ++++ P6P6 ++++ ++ ++++ ++ P7P7 ++++ ++++ ++++ -- P8P8 ++ ++++ ++ ++ P9P9 ++ ++++ ++ ++ P10P10 ++ ++ ++++ ++ P11P11 ++ ++ ++ ++++ P12P12 ++ ++ ++ ++ P13P13 ++ ++ ++ -- P14P14 ++ ++ ++ -- P15P15 ++++ ++ ++++ --

* Степень ингибирования: -, <10%; +, 10-30%; ++, 30-60%; +++, >60%;* Degree of inhibition: -, <10%; +, 10-30%; ++, 30-60%; +++, >60%;

* Степень повышения: -, <10%; +, 10-50%; ++, 50-100%; +++, >100%;* Increase degree: -, <10%; +, 10-50%; ++, 50-100%; +++, >100%;

* P1: инулин; P2: цитрусовый пектин; P3: каррагенан; P4: трегалоза; P5: лактулоза; P6: циклодекстрин; P7: карбоксиметилцеллюлоза; P8: желатин; P9: хитозан; P10: альгиновая кислота; P11: фруктоолигосахарид; P12: обезжиренный соевый белок; P13: яблочный пектин; P14: арабиногалактан; и P15: ксилан.* P1: inulin; P2: citrus pectin; P3: carrageenan; P4: trehalose; P5: lactulose; P6: cyclodextrin; P7: carboxymethyl cellulose; P8: gelatin; P9: chitosan; P10: alginic acid; P11: fructooligosaccharide; P12: defatted soy protein; P13: apple pectin; P14: arabinogalactan; and P15: xylan.

В итоге проведенных экспериментов, результаты которых показаны в таблицах 11-13, было установлено, что степень дифференцировки Т-клеток различается в зависимости от типов молочнокислых бактерий. В частности, в случае молочнокислых бактерий Bifidobacterium spp. степень ингибирования дифференцировки в Th1-клетки, Th2-клетки и Th17-клетки и степень повышения дифференцировки в Treg-клетки различаются в зависимости от типов молочнокислых бактерий, и часть молочнокислых бактерий демонстрировала результаты, при которых степень ингибирования дифференцировки в Th2-клетки и степень повышения дифференцировки в Treg-клетки противоположны таковым у других молочнокислых бактерий. Среди этих молочнокислых бактерий для Bifidobacterium longum IM55 было установлено, что степень ингибирования дифференцировки в Th1-клетки, Th2-клетки и Th17-клетки была наиболее высокой, и в то же время степень повышения дифференцировки в Treg-клетки была наиболее высокой. Также, молочнокислые бактерии Lactobacillus spp. демонстрировали результаты, схожие с результатами у молочнокислых бактерий Bifidobacterium spp., у которых степени ингибирования и повышения дифференцировки клеток различались в зависимости от типа молочнокислых бактерий. Среди этих молочнокислых бактерий для Lactobacillus plantarum IM76 было установлено, что степень ингибирования дифференцировки в Th1-клетки, Th2-клетки и Th17-клетки и степень повышения дифференцировки в Treg-клетки были наиболее высокими.As a result of the experiments, the results of which are shown in tables 11-13, it was found that the degree of differentiation of T cells differs depending on the types of lactic acid bacteria. In particular, in the case of lactic acid bacteria Bifidobacterium spp. the degree of inhibition of differentiation into Th1 cells, Th2 cells and Th17 cells and the degree of enhancement of differentiation into Treg cells differ depending on the types of lactic acid bacteria, and part of the lactic acid bacteria showed results in which the degree of inhibition of differentiation into Th2 cells and the degree of enhancement differentiation into Treg cells is opposite to that of other lactic acid bacteria. Among these lactic acid bacteria, for Bifidobacterium longum IM55, it was found that the degree of inhibition of differentiation into Th1 cells, Th2 cells and Th17 cells was the highest, and at the same time, the degree of enhancement of differentiation into Treg cells was the highest. Also, lactic acid bacteria Lactobacillus spp. showed results similar to those of lactic acid bacteria Bifidobacterium spp., in which the degrees of inhibition and enhancement of cell differentiation differed depending on the type of lactic acid bacteria. Among these lactic acid bacteria, for Lactobacillus plantarum IM76, it was found that the degree of inhibition of differentiation into Th1 cells, Th2 cells and Th17 cells and the degree of enhancement of differentiation into Treg cells were the highest.

(2) Степень экспрессии цитокинов(2) Degree of expression of cytokines

Также измеряли степень экспрессии транскрипционных факторов и цитокинов у Th1-клеток, Th2-клеток, Th17-клеток и Treg-клеток, дифференцированных из Т-клеток селезенки. В частности, уровни экспрессии соответствующим образом анализировали с помощью qRT-PCR в отношении T-bet, IFN-γ и IL-12 из культуральной жидкости в случае индуцирования дифференцировки Th1-клеток; GATA3 и IL-5 из культуральной жидкости в случае индуцирования дифференцировки Th2-клеток; RORγt и IL-17 из культуральной жидкости в случае индуцирования дифференцировки Th17-клеток; и Foxp3 и IL-10 из культуральной жидкости в случае индуцирования дифференцировки Treg-клеток. В последующей таблице 14 показаны результаты таким образом, что последовательность праймера, который применяли для qRT-PCR, соответствует последовательности мишени амплификации. Также, в последующих таблицах 15 и 16 показаны результаты изменения степеней экспрессии транскрипционных факторов и цитокинов у Th1-клеток, Th2-клеток, Th17-клеток и Treg-клеток, дифференцированных из Т-клеток селезенки. В приведенных ниже таблицах 15-16 молочнокислые бактерии показаны без их видовых названий, и авторами настоящего изобретения им присвоены названия штаммов.The degree of expression of transcription factors and cytokines was also measured in Th1 cells, Th2 cells, Th17 cells, and Treg cells differentiated from spleen T cells. In particular, expression levels were suitably analyzed by qRT-PCR for T-bet, IFN-γ and IL-12 from the culture liquid in case of induction of Th1 cell differentiation; GATA3 and IL-5 from culture fluid in case of induction of Th2 cell differentiation; RORγt and IL-17 from culture fluid in case of induction of Th17 cell differentiation; and Foxp3 and IL-10 from culture fluid in case of induction of Treg cell differentiation. The following Table 14 shows the results such that the sequence of the primer that was used for qRT-PCR matches the sequence of the amplification target. Also, the following tables 15 and 16 show the results of changes in the expression levels of transcription factors and cytokines in Th1 cells, Th2 cells, Th17 cells and Treg cells differentiated from spleen T cells. In Tables 15-16 below, lactic acid bacteria are shown without their species names and are assigned strain names by the present inventors.

Таблица 14Table 14

Мишень амплификацииAmplification target Тип праймераprimer type Последовательность праймераPrimer sequence T-betTbet Прямой (SEQ ID NO: 3)Straight (SEQ ID NO: 3) 5’-CCTCTTCTATCCAACCAGTATC-3’5'-CCTCTTCTATCCAACCAGTATC-3' Обратный (SEQ ID NO: 4)Reverse (SEQ ID NO: 4) 5’-CTCCGCTTCATAACTGTGT-3’5'-CTCCCGCTTCATAACTGTGT-3' IFN-γIFN-γ Прямой (SEQ ID NO: 5)Straight (SEQ ID NO: 5) 5’-TCAAGTGGCATAGATGTGGAAGAA-3’5'-TCAAGTGGCATAGATGTGGAAGAA-3' Обратный (SEQ ID NO: 6)Reverse (SEQ ID NO: 6) 5’-TGGCTCTGCAGGATTTTCATG-3’5'-TGGCCTCTGCAGGATTTTCATG-3' GATA3GATA3 Прямой (SEQ ID NO: 7)Straight (SEQ ID NO: 7) 5’-GAAGGCATCCAGACCCGAAAC-3’5'-GAAGGCATCCAGACCCGAAAC-3' Обратный (SEQ ID NO: 8)Reverse (SEQ ID NO: 8) 5’-ACCCATGGCGGTGACCATGC-3’5'-ACCCATGGCGGTGACCATGC-3' IL-5IL-5 Прямой (SEQ ID NO: 9)Straight (SEQ ID NO: 9) 5’-AAAGAGAAGTGTGGCGAGGAGAGAC-3’5'-AAAGAGAAGTGTGGCGAGGAGAGAC-3' Обратный (SEQ ID NO: 10)Reverse (SEQ ID NO: 10) 5’-CCTTCCATTGCCCACTCTGTACTCATC-3’5'-CCTTTCCATTGCCCACTCTGTACTCATC-3' RORγtRORγt Прямой (SEQ ID NO: 11)Straight (SEQ ID NO: 11) 5’-ACAGCCACTGCATTCCCAGTTT-3’5'-ACAGCCACTGCATTCCCAGTTT-3' Обратный (SEQ ID NO: 12)Reverse (SEQ ID NO: 12) 5’-TCTCGGAAGGACTTGCAGACAT-3’5'-TCTCGGAAGGACTTGCAGACAT-3' IL-17IL-17 Прямой (SEQ ID NO: 13)Straight (SEQ ID NO: 13) 5’-TTTAACTCCCTTGGCGCAAAA-3’5'-TTTAACTCCCTTGGCGCAAAA-3' Обратный (SEQ ID NO: 14)Reverse (SEQ ID NO: 14) 5’-CTTTCCCTCCGCATTGACAC-3’5'-CTTTCCCTCCCGCATTGACAC-3' FOXp3FOXp3 Прямой (SEQ ID NO: 15)Straight (SEQ ID NO: 15) 5’-CCCATCCCCAGGAGTCTT-3’5'-CCCATCCCCAGGAGTCTT-3' Обратный (SEQ ID NO: 16)Reverse (SEQ ID NO: 16) 5’-ACCATGACTAGGGGCACTGTA-3’5'-ACCATGACTAGGGGCACTGTA-3' IL-10IL-10 Прямой (SEQ ID NO: 17)Straight (SEQ ID NO: 17) 5’-ATGCTGCCTGCTCTTACTGACTG-3’5'-ATGCTGCTGCCTGCTCTTACTGACTG-3' Обратный (SEQ ID NO: 18)Reverse (SEQ ID NO: 18) 5’-CCCAAGTAACCCTTAAAGTCCTGC-3'5'-CCCAAGTAACCCTTAAAGTCCTGC-3' GAPDHGAPDH Прямой (SEQ ID NO: 19)Straight (SEQ ID NO: 19) 5’-TGCAGTGGCAAAGTGGAGAT-3’5'-TGCAGTGGCAAAGTGGAGAT-3' Обратный (SEQ ID NO: 20)Reverse (SEQ ID NO: 20) 5’-TTTGCCGTGAGTGGAGTCAT-3’5'-TTTGCCGTGAGTGGAGTCAT-3'

Таблица 15Table 15

Тестируемый материал для обработки Т-клеток селезенкиTest material for treatment of spleen T cells Степень ингибирования экспрессииDegree of expression inhibition Степень повышения экспрессииDegree of expression increase T-betTbet IFN-γIFN-γ GATA3GATA3 IL-5IL-5 RORγtRORγt IL-17IL-17 FOXp3FOXp3 IL-10IL-10 НеобработанныеRaw -- -- -- -- -- -- -- -- IM51IM51 ++ ++++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ IM52IM52 ++++ ++ -- ++ -- ++ -- -- IM53IM53 ++ ++ -- ++ ++ ++++ ++ -- IM54IM54 ++ ++ ++ ++++ ++ ++ ++++ ++ IM55IM55 ++++++ ++ ++++++ ++++++ ++++++ ++++++ ++++++ ++++++ IM56IM56 ++++ ++ ++ ++++ ++ ++++ ++ ++++ IM57IM57 ++++ ++++ -- ++ ++ ++ ++ ++ IM58IM58 ++++ ++++ -- ++++ ++ ++ -- -- IM59IM59 ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- ++ IM60IM60 ++ ++++ ++ ++++ ++ ++ -- -- IM61IM61 ++++ ++ ++ ++++ ++++ ++++ ++ -- IM62IM62 ++++ ++ ++ ++++ ++++ ++++ ++ ++ IM63IM63 ++ ++++ ++ ++ ++ ++ ++ -- IM64IM64 ++++ ++ ++++ ++++ ++ ++ ++ ++ IM65IM65 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- IM66IM66 ++++ ++ ++ ++ ++++ ++++ ++ ++ IM67IM67 ++ ++ ++ ++ ++++ ++ ++ ++ IM68IM68 ++++ ++++ ++ ++ ++++ ++++ ++ ++ IM69IM69 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- IM70IM70 ++++ ++ ++ ++ ++++ ++++ ++ ++ IM71IM71 ++++ ++ ++ ++ ++++ ++++ ++ ++ IM72IM72 ++ ++++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ IM73IM73 ++++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ IM74IM74 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++

Таблица 16Table 16

Тестируемый материал для обработки Т-клеток селезенкиTest material for treatment of spleen T cells Степень ингибирования экспрессииDegree of expression inhibition Степень повышения экспрессииDegree of expression increase T-betTbet IFN-γIFN-γ GATA3GATA3 IL-5IL-5 RORγtRORγt IL-17IL-17 FOXp3FOXp3 IL-10IL-10 IM75IM75 ++++ ++ ++ ++ ++ ++ ++++ ++ IM76IM76 ++++ ++++ ++++++ ++++++ ++++++ ++++++ ++++++ ++++++ IM77IM77 ++ ++ ++ ++++ ++ ++ ++ ++ IM78IM78 ++ ++ ++ ++ ++++ ++++ ++++ ++ IM79IM79 ++ ++ ++ ++++ ++++ ++++ ++ -- IM80IM80 ++ ++ ++++ ++ ++ ++ ++ ++ IM81IM81 ++ ++ ++ ++ ++++ ++++ ++ ++ IM82IM82 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ IM83IM83 ++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++ ++ IM84IM84 ++ ++ ++ ++ ++++ ++++ ++ ++ IM85IM85 ++ ++++ ++ ++++ ++ ++ ++ ++ IM86IM86 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- IM87IM87 ++ ++ ++ ++ ++++ ++++ ++ ++ IM88IM88 ++ ++++ ++ ++ ++ ++++ ++ -- IM89IM89 ++++ ++ ++ ++ ++++ ++ ++ -- IM90IM90 ++ ++ ++ ++++ ++ ++ ++ ++ IM91IM91 ++ ++ ++ ++++ ++ ++ ++ -- IM92IM92 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- IM93IM93 ++++ ++ ++ ++++ ++++ ++ ++ ++ IM94IM94 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ IM95IM95 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- IM96IM96 ++++ ++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++ -- IM97IM97 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ IM98IM98 ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- -- IM99IM99 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++

* Степень ингибирования: -, <10%; +, 10-30%; ++, 30-60%; +++, >60%;* Degree of inhibition: -, <10%; +, 10-30%; ++, 30-60%; +++, >60%;

* Степень повышения: -, <10%; +, 10-50%; ++, 50-100%; +++, >100%.* Increase degree: -, <10%; +, 10-50%; ++, 50-100%; +++, >100%.

В итоге проведенных измерений, результаты которых показаны в таблицах 15 и 16, было установлено, что степень изменения экспрессии цитокинов различается в зависимости от типов молочнокислых бактерий. В частности, в случае молочнокислых бактерий Bifidobacterium spp. часть молочнокислых бактерий демонстрировала результаты, при которых степень ингибирования экспрессии GATA3 и IL-5 противоположна таковой у других молочнокислых бактерий. Среди этих молочнокислых бактерий для Bifidobacterium longum IM55 было установлено, что степень ингибирования экспрессии T-bet, IFN-γ, GATA3, IL-5, RORγt и IL-17 была наиболее высокой, и в то же время степень повышения экспрессии FOXp3 и IL-10 была наиболее высокой. Также, в случае молочнокислых бактерий Lactobacillus spp. часть молочнокислых бактерий демонстрировала результаты, схожие с таковыми у молочнокислых бактерий Bifidobacterium spp., у которых степень изменения экспрессии цитокинов также отличалась. Среди этих молочнокислых бактерий для Lactobacillus plantarum IM76 было установлено, что степень ингибирования экспрессии T-bet, IFN-γ, GATA3, IL-5, RORγt и IL-17 была наиболее высокой, и в то же время степень повышения экспрессии FOXp3 и IL-10 была наиболее высокой.As a result of the measurements, the results of which are shown in tables 15 and 16, it was found that the degree of change in the expression of cytokines differs depending on the types of lactic acid bacteria. In particular, in the case of lactic acid bacteria Bifidobacterium spp. some lactic acid bacteria showed results in which the degree of inhibition of GATA3 and IL-5 expression was opposite to that of other lactic acid bacteria. Among these lactic acid bacteria, for Bifidobacterium longum IM55, it was found that the degree of inhibition of the expression of T-bet, IFN-γ, GATA3, IL-5, RORγt and IL-17 was the highest, and at the same time, the degree of increase in the expression of FOXp3 and IL- 10 was the highest. Also, in the case of lactic acid bacteria Lactobacillus spp. some lactic acid bacteria showed results similar to those in lactic acid bacteria Bifidobacterium spp., in which the degree of change in cytokine expression also differed. Among these lactic acid bacteria, for Lactobacillus plantarum IM76, it was found that the degree of inhibition of the expression of T-bet, IFN-γ, GATA3, IL-5, RORγt and IL-17 was the highest, and at the same time, the degree of increase in the expression of FOXp3 and IL- 10 was the highest.

Пример 4. Тест на эффект ингибирования воспалительных реакций, вызываемый IM55 или IM76Example 4 Test for Inflammatory Response Inhibitory Effect Induced by IM55 or IM76

Среди молочнокислых бактерий, выделенных в приведенном выше примере 1, проводили тест на эффект ингибирования воспалительных реакций, вызываемый Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76.Among the lactic acid bacteria isolated in the above example 1, a test was carried out for the effect of inhibiting inflammatory reactions caused by Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76.

(1) Тест на эффект ингибирования воспалительных реакций, вызываемый IM55 или IM76, на макрофагах(1) Test for the inhibitory effect of inflammatory responses induced by IM55 or IM76 on macrophages

Семинедельную самку мыши линии BALB/c (20-22 г) приобретали у Raonbio Co., Ltd. и позволяли ей акклиматизироваться в течение семи дней перед экспериментом. Мыши внутрибрюшинно вводили 2 мл 4% тиогликолята, затем, спустя 96 часов, ее умерщвляли. Жидкости из брюшной полости собирали с 10 мл RPMI 1640, затем центрифугировали при 300×g в течение 10 минут, а затем промывали с помощью RPMI 1640. Клетки высевали в 12-луночный микропланшет в количестве 0,5×106 клеток на лунку, затем культивировали в среде RPMI 1640, содержащей 1% антибиотика-фунгицида и 10% FBS, при 37°С в течение 20 часов, а затем трижды промывали. Прикрепившиеся клетки использовали в качестве макрофагов. Для измерения эффекта, оказываемого IM55 или IM76 на экспрессию цитокинов, макрофаги в количестве 1×106 клеток/лунка обрабатывали молочнокислыми бактериями в количестве 1×105 КОЕ/мл, а также индуктором воспалительной реакции, т.е. LPS, в течение 20 часов. Уровень экспрессии каждого цитокина измеряли с помощью того же набора для ELISA, что и в приведенном выше примере 2.(1). В результате измерения было установлено, что экспрессия IL-10 повышалась, а экспрессия IL-12 ингибировалась при введении IM55 или IM76 (фиг. 1 и 2).A seven week old female BALB/c mouse (20-22 g) was purchased from Raonbio Co., Ltd. and allowed her to acclimate for seven days before the experiment. Mice were intraperitoneally injected with 2 ml of 4% thioglycolate, then, after 96 hours, they were sacrificed. Fluids from the abdominal cavity were collected with 10 ml of RPMI 1640, then centrifuged at 300×g for 10 minutes, and then washed with RPMI 1640. Cells were seeded in a 12-well microplate at 0.5×10 6 cells per well, then cultured in RPMI 1640 medium containing 1% antibiotic fungicide and 10% FBS at 37°C for 20 hours and then washed three times. The attached cells were used as macrophages. To measure the effect of IM55 or IM76 on cytokine expression, macrophages at 1×10 6 cells/well were treated with lactic acid bacteria at 1×10 5 CFU/ml, as well as an inflammatory response inducer, i.e. LPS, within 20 hours. The expression level of each cytokine was measured using the same ELISA kit as in Example 2 above (1). As a result of the measurement, it was found that the expression of IL-10 increased and the expression of IL-12 was inhibited by the introduction of IM55 or IM76 (Fig. 1 and 2).

(2) Тест на эффект ингибирования воспалительных реакций, вызываемый IM55 или IM76, на дендроцитах(2) Test for the effect of inhibition of inflammatory responses caused by IM55 or IM76 on dendrocytes

Клетки костного мозга мыши собирали у семинедельной самки мыши линии BALB/c (20-22 г) с помощью RPMI 1640 в соответствии с известным способом (Immunopharmacol. Immunotoxicol., 2016, 38, 447-454). 2×106 собранных клеток высевали в 12-луночный планшет и культивировали в среде RPMI 1640, содержащей rGM-CSF в количестве 20 нг/мл, 10% FBS, 1% антибиотика-фунгицида и гентамицин в количестве 150 мкл/л.Mouse bone marrow cells were collected from a seven-week-old female BALB/c mouse (20-22 g) using RPMI 1640 according to a known method (Immunopharmacol. Immunotoxicol., 2016, 38, 447-454). 2×10 6 harvested cells were plated in a 12-well plate and cultured in RPMI 1640 medium containing 20 ng/ml rGM-CSF, 10% FBS, 1% antibiotic fungicide and gentamicin 150 μl/l.

Для измерения эффекта, оказываемого IM55 или IM76 на экспрессию цитокинов, у указанных клеток заменяли кондиционированную среду на 3-й и 6-й дни культивирования для удаления от них гранулоцитов, а затем обрабатывали молочнокислыми бактериями в количестве 1×105 КОЕ/мл и LPS в количестве 100 нг/мл на 8-й день культивирования. Уровень экспрессии каждого цитокина измеряли с помощью того же набора для ELISA, что и в приведенном выше примере 2.(2). В результате измерения было установлено, что экспрессия IL-10 повышалась, а экспрессия TNF-α ингибировалась при введении IM55 или IM76 (фиг. 3 и 4).To measure the effect of IM55 or IM76 on cytokine expression, these cells were conditioned medium changed on the 3rd and 6th days of cultivation to remove granulocytes from them, and then treated with lactic acid bacteria in the amount of 1×10 5 CFU/ml and LPS in the amount of 100 ng/ml on the 8th day of cultivation. The expression level of each cytokine was measured using the same ELISA kit as in Example 2 above (2). As a result of the measurement, it was found that the expression of IL-10 increased and the expression of TNF-α was inhibited by the introduction of IM55 or IM76 (Fig. 3 and 4).

Из результатов описанного выше примера 4 можно видеть, что новые молочнокислые бактерии, т.е. Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76, демонстрировали отличный эффект ингибирования воспалительных реакций и, следовательно, демонстрировали отличный эффект в отношении предупреждения, облегчения тяжести и лечения воспалительных заболеваний.From the results of Example 4 above, it can be seen that the new lactic acid bacteria, i. Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76 showed an excellent effect in inhibiting inflammatory responses, and therefore showed an excellent effect in preventing, alleviating the severity and treating inflammatory diseases.

Пример 5. Оценка иммунорегуляторного эффекта, оказываемого IM55 или IM76Example 5 Evaluation of the immunoregulatory effect of IM55 or IM76

Степень дифференцировки Т-клеток анализировали посредством способа, схожего с описанным выше в примере 3, для оценки иммунорегуляторного эффекта, оказываемого Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76, среди молочнокислых бактерий, выделенных из тех, которые описаны выше в примере 1.The degree of T cell differentiation was analyzed by a method similar to that described in Example 3 above to evaluate the immunoregulatory effect of Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76 among lactic acid bacteria isolated from those described in Example 1 above.

В частности, у семинедельной самки мыши линии BALB/c (20-22 г) в стерильных условиях выделяли селезенку, затем соответствующим образом разрушали, а затем обрабатывали забуференным в трис хлоридом аммония. Полученные клетки суспендировали в среде RPMI 1640, содержащей 10% FCS, после чего из клеточной суспензии выделяли Т-клетки с применением набора для выделения клеток Pan T Cell Isolation Kit II. Клетки соответствующим образом культивировали с добавлением антител к CD28 (1 мкг/мл), антител к CD3 (1 мкг/мл), rIL-4 (10 мкг/мл) и rIL-2 (10 мкг/мл) для индуцирования дифференцировки выделенных T-клеток (1×105 клеток/лунка) в Th2-клетки; и с добавлением антител к CD28 (1 мкг/мл) и антител к CD3 (1 мкг/мл) для индуцирования дифференцировки T-клеток (1×105 клеток/лунка) в Treg-клетки, и клетки также соответствующим образом культивировали в течение четырех дней с добавлением IM55 или IM76 в количестве 1×105 КОЕ/мл на лунку. Из этих клеток выделяли РНК, после чего уровень экспрессии IL-10, GATA3, FOXp3 и IL-5 анализировали путем проведения qRT-PCR. QRT-PCR проводили такую же, как и в описанном выше примере 3, и с применением того же праймера, что описан в приведенной выше таблице 14.In particular, a spleen was isolated from a seven-week-old female BALB/c mouse (20-22 g) under sterile conditions, then appropriately destroyed, and then treated with tris-buffered ammonium chloride. The resulting cells were suspended in RPMI 1640 medium containing 10% FCS, after which T cells were isolated from the cell suspension using the Pan T Cell Isolation Kit II. The cells were appropriately cultured with the addition of anti-CD28 antibodies (1 µg/ml), anti-CD3 antibodies (1 µg/ml), rIL-4 (10 µg/ml) and rIL-2 (10 µg/ml) to induce differentiation of isolated T cells (1×105 cells/well) into Th2 cells; and with the addition of anti-CD28 antibodies (1 µg/ml) and anti-CD3 antibodies (1 µg/ml) to induce T-cell differentiation (1×105 cells/well) into Treg cells, and the cells were also appropriately cultured for four days with the addition of IM55 or IM76 at 1×105 cfu/ml per well. RNA was isolated from these cells, after which the expression levels of IL-10, GATA3, FOXp3 and IL-5 were analyzed by qRT-PCR. QRT-PCR was performed as in Example 3 above and using the same primer as described in Table 14 above.

В результате анализа в случае обработки IM55 или IM 76 было установлено, что уровень экспрессии GATA3 и IL-5 снижался, ингибируя дифференцировку в Th2-клетки (фиг. 5 и 6), тогда как уровень экспрессии FOXp3 м IL-10 повышался, стимулируя дифференцировку в Treg-клетки (фиг. 7 и 8).As a result of the analysis in the case of treatment with IM55 or IM 76, it was found that the expression level of GATA3 and IL-5 decreased, inhibiting differentiation into Th2 cells (Fig. 5 and 6), while the expression level of FOXp3 and IL-10 increased, stimulating differentiation into Treg cells (FIGS. 7 and 8).

Из результатов описанного выше примера 5 можно видеть, что новые молочнокислые бактерии, т.е. Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76, демонстрировали отличный иммунорегуляторный эффект и, следовательно, демонстрировали отличный эффект в отношении предупреждения, облегчения тяжести и лечения иммунопатологических заболеваний.From the results of Example 5 above, it can be seen that the new lactic acid bacteria, i. Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76 showed an excellent immunoregulatory effect, and therefore showed an excellent effect in preventing, alleviating the severity and treating immunopathological diseases.

Пример 6. Оценка эффекта облегчения тяжести, оказываемого молочнокислыми бактериями в отношении ринита и астмы (1)Example 6 Evaluation of the Severity Relief Effect of Lactic Acid Bacteria on Rhinitis and Asthma (1)

Бронхоальвеолярный лаваж (BAL), который проводят вместе с бронхиальной эндоскопией, широко используется для сбора клеток и других растворимых компонентов из эпителиального слизистого слоя, который покрывает дыхательные пути и легочные альвеолы. Жидкость бронхоальвеолярного лаважа (BALF) содержит не только различные белки в кровотоке, но также белки, секретируемые из клеток различных типов, включая эпителиальные и воспалительные клетки. BALF обычно используют для диагностики бронхиальной астмы, бронхита или заболевания легких или анализа патологических состояний, вызываемых ими. Поэтому для выявления эффекта облегчения тяжести ринита и астмы анализировали признаки, относящиеся к эффектам, направленным против ринита и противоастматическим эффектам, из сыворотки и тканей легких, а также из BALF.Bronchoalveolar lavage (BAL), which is performed in conjunction with bronchial endoscopy, is widely used to collect cells and other soluble components from the epithelial mucosal layer that lines the airways and lung alveoli. Bronchoalveolar lavage fluid (BALF) contains not only various proteins in the bloodstream, but also proteins secreted from various cell types, including epithelial and inflammatory cells. BALF is commonly used to diagnose or analyze the pathological conditions caused by asthma, bronchitis or lung disease. Therefore, in order to detect the effect of alleviating the severity of rhinitis and asthma, signs related to the effects directed against rhinitis and anti-asthma effects were analyzed from serum and lung tissues, as well as from BALF.

(1) Экспериментальный способ(1) Experimental method

Семинедельной самке мыши линии BALB/C (21-23 г) давали акклиматизироваться в течение одной недели в условиях контролируемой среды с влажностью 50%, температурой 25℃ и циклом свет/темнота 12:12 часов. После этого 20 мкг вызывающего аллергию овальбумина (OVA) и 2% гидроксида алюминия (Alum) суспендировали в 0,2% фосфатно-солевом буферном растворе (PBS: pH 7,4) и внутрибрюшинно вводили каждой из мышей в первый день и в 14-й день эксперимента. Затем 100 мкг OVA растворяли в 10 мкл дистиллированной воды и намазывали в полости носа каждой из мышей для индуцирования у них аллергического ринита и астмы на 26-й, 27-й и 28-й дни эксперимента. Между тем, тестируемое лекарственное средство, т.е. молочнокислые бактерии, перорально вводили каждой из мышей один раз в день всего в течение пяти дней с 26-го по 30-й дни эксперимента. Также внутрибрюшинно вводили дозу 1 мкг/кг дексаметазона, который применяли в качестве лекарственного средства положительного контроля вместо молочнокислых бактерий. Дополнительно, в случае мышей из нормальной группы, аллергический ринит и астму у них не индуцировали, а вместо OVA и тестируемого лекарственного средства им перорально вводили только фосфатно-солевой буферный раствор (PBS: pH 7,4). Кроме того, в случае мышей из контрольной группы, у них индуцировали аллергический ринит и астму, а в качестве тестируемого лекарственного средства им перорально вводили только фосфатно-солевой буферный раствор (PBS: pH 7,4). После окончания эксперимента мышей анестезировали, после чего у них собирали кровь, ткани легких и BALF. Из собранной крови выделяли сыворотку путем центрифугирования и использовали ее в качестве аналитического образца.A seven-week-old female BALB/C mouse (21-23 g) was allowed to acclimate for one week in a controlled environment with 50% humidity, 25℃ temperature, and a 12:12 hour light/dark cycle. Thereafter, 20 µg of allergenic ovalbumin (OVA) and 2% aluminum hydroxide (Alum) were suspended in 0.2% phosphate-buffered saline (PBS: pH 7.4) and intraperitoneally administered to each of the mice on day one and day 14. day of the experiment. Then, 100 μg of OVA was dissolved in 10 μl of distilled water and smeared into the nasal cavity of each of the mice to induce allergic rhinitis and asthma in them on the 26th, 27th and 28th days of the experiment. Meanwhile, the drug being tested, i.e. lactic acid bacteria were orally administered to each of the mice once a day for a total of five days from days 26 to 30 of the experiment. Also administered intraperitoneally was a dose of 1 μg/kg of dexamethasone, which was used as a positive control drug in place of lactic acid bacteria. Additionally, in the case of mice from the normal group, allergic rhinitis and asthma were not induced in them, and instead of OVA and test drug, they were orally administered only phosphate-buffered saline (PBS: pH 7.4). In addition, in the case of mice in the control group, allergic rhinitis and asthma were induced in them, and only phosphate buffered saline (PBS: pH 7.4) was orally administered as a test drug. After the end of the experiment, mice were anesthetized, after which they collected blood, lung tissue and BALF. Serum was isolated from the collected blood by centrifugation and used as an analytical sample.

Признаки, связанные с эффектами, направленными против ринита и противоастматическими эффектами, анализировали с применением сыворотки, BALF и тканей легких с помощью различных аналитических способов. Ниже приведен как аналитический способ, так и признаки, которые анализировали с его помощью.Signs associated with anti-rhinitis and anti-asthma effects were analyzed using serum, BALF and lung tissues using various analytical methods. Below are both the analytical method and the features that were analyzed using it.

* Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA): IL-10, IL-5, IL-6, IL-4, IgE и т.д.* ELISA: IL-10, IL-5, IL-6, IL-4, IgE, etc.

* FACS (сортировка флуоресцентно-активированных клеток): распределение T-клеток (Th1: CD4+/IFN-γ+; Th2: CD4+/IL-4+; Treg: CD4+/FOXp3+; Th17: CD4+/IL-17+), распределение эозинофилов (CD11b+, Siglec-F+).* FACS (Fluorescent Activated Cell Sorting): T cell distribution (Th1: CD4 + /IFN-γ + ; Th2: CD4 + /IL-4 + ; Treg: CD4 + /FOXp3 + ; Th17: CD4 + /IL- 17 + ), distribution of eosinophils (CD11b + , Siglec-F + ).

(2) Экспериментальные результаты(2) Experimental results

В результате эксперимента было установлено, что экспрессия IL-5, IgE и IL-4, т.е. признаков, связанных с ринитом и астмой, заметно ингибировалась в сыворотке из группы, получавшей дозу IM55 или IM76 (таблица 17 и фиг. 9-11). Также было установлено, что количество IL-5 и IL-4, т.е. признаков, связанных с ринитом и астмой, заметно снижалось, и соотношение Th2-клеток и эозинофилов также заметно снижалось в BALF (таблица 18 и фиг. 12-15). Более того, было установлено, что экспрессия IL-10, связанного с эффектом предупреждения и лечения ринита и астмы, повышалась, и соотношение Treg-клеток повышалось в BALF (таблица 18 и фиг. 16 и 17).As a result of the experiment, it was found that the expression of IL-5, IgE and IL-4, i.e. signs associated with rhinitis and asthma was markedly inhibited in serum from the IM55 or IM76 dosed group (Table 17 and FIGS. 9-11). It was also found that the amount of IL-5 and IL-4, i.e. signs associated with rhinitis and asthma were markedly reduced, and the ratio of Th2 cells to eosinophils was also markedly reduced in BALF (Table 18 and FIGS. 12-15). Moreover, it was found that the expression of IL-10 associated with the effect of preventing and treating rhinitis and asthma was increased and the ratio of Treg cells was increased in BALF (Table 18 and FIGS. 16 and 17).

Таблица 17Table 17

Классификация экспериментальных группClassification of experimental groups Степень ингибирования:Degree of inhibition: IL-5IL-5 IgEIgE IL-4IL-4 Кон.Con. -- -- -- IM55IM55 ++++++ ++++ ++++++ IM76IM76 ++++ ++ ++++ DxDx ++++ ++++++ ++++++

Таблица 18Table 18

Классификация экспериментальных группClassification of experimental groups Степень ингибирования:Degree of inhibition: Степень повышения:Increase degree: IL-5IL-5 IL-4IL-4 Th2-клеткаTh2 cell ЭозинофилыEosinophils IL-10IL-10 Treg-клеткаTreg cell Кон.Con. -- -- -- -- -- -- IM55IM55 ++++++ ++++++ ++++ ++++++ ++++++ ++++++ IM76IM76 ++++ ++++++ ++++++ ++++++ ++++++ ++ DxDx ++++++ ++++++ ++++++ ++++++ ++++ --

* Степень ингибирования: -, <10%; +, 10-30%; ++, 30-60%; +++, >60%;* Degree of inhibition: -, <10%; +, 10-30%; ++, 30-60%; +++, >60%;

* Степень повышения: -, <10%; +, 10-50%; ++, 50-100%; +++, >100%.* Increase degree: -, <10%; +, 10-50%; ++, 50-100%; +++, >100%.

Пример 7. Оценка эффекта облегчения тяжести, оказываемого молочнокислыми бактериями в отношении ринита и астмы (2)Example 7 Evaluation of the Severity Relief Effect of Lactic Acid Bacteria on Rhinitis and Asthma (2)

(1) Экспериментальный способ(1) Experimental method

Модели аллергического ринита, индуцированного OVA, создавали с привязкой к известному способу (Oh et al., Immunopharmacol. Immunotoxicol., 2013, 35, 678-686). В частности, мышей случайным образом разделяли на шесть групп (n=8 на группу). Для пяти групп OVA (20 мкг), разведенный в растворе алюмосульфата калия, внутрибрюшинно вводили мышам в 1-й и 14-й дни эксперимента. 100 мкг OVA растворяли в 10 мкл дистиллированной воды и намазывали в полости носа каждой из указанных мышей для индуцирования у них аллергического ринита и астмы на 26-й, 27-й и 28-й дни эксперимента. Между тем тестируемый материал (IM55 (1×109 КОЕ/мышь), IM76 (1×109 КОЕ/мышь), дексаметазон (1 мг/кг) или солевой раствор) вводили мышам раз в день всего в течение пяти дней, начиная с 26-го и по 30-й дни эксперимента. В случае мышей нормальной группы, у них не индуцировали аллергический ринит и астму и вводили только физиологический раствор. У мышей вызывали раздражение путем интраназального введения OVA (10 мкл/ноздря, растворенного в 10 мг/мл солевого раствора) в обе их носовые полости, после чего подсчитывали количество случаев поведения, связанного с чиханьем и трением носа (показатель симптомов ринита), в течение 10 минут на 31-й день эксперимента.Models of allergic rhinitis induced by OVA were created with reference to the known method (Oh et al., Immunopharmacol. Immunotoxicol., 2013, 35, 678-686). In particular, mice were randomly divided into six groups (n=8 per group). For five groups, OVA (20 μg) diluted in potassium aluminosulfate solution was intraperitoneally administered to mice on days 1 and 14 of the experiment. 100 μg of OVA was dissolved in 10 μl of distilled water and smeared into the nasal cavity of each of these mice to induce allergic rhinitis and asthma in them on the 26th, 27th and 28th days of the experiment. Meanwhile, the test material (IM55 (1×10 9 cfu/mouse), IM76 (1×10 9 cfu/mouse), dexamethasone (1 mg/kg) or saline) was administered to mice once a day for a total of five days, starting from the 26th to the 30th day of the experiment. In the case of mice in the normal group, allergic rhinitis and asthma were not induced in them and only saline was administered. Mice were irritated by intranasal administration of OVA (10 μl/nostril, dissolved in 10 mg/ml saline solution) into both of their nasal cavities, after which the number of sneezing and nasal rubbing behaviors (a measure of rhinitis symptoms) was counted for 10 minutes on the 31st day of the experiment.

Выделяли ткани легкого и носовой полости для биопсии, затем фиксировали 4% нейтрально забуференным формалином, а затем замораживали. С помощью криостата из тканей получали поперечные срезы толщиной 10 мкм и окрашивали гематоксилином и эозином (H&E) и ШИК-реакцией (PAS).The tissues of the lung and nasal cavity were isolated for biopsy, then fixed with 4% neutral buffered formalin, and then frozen. Using a cryostat, 10 μm thick transverse sections were obtained from tissues and stained with hematoxylin and eosin (H&E) and PAS (PAS).

Также анализировали признаки, связанные с эффектами, направленными против ринита и противоастматическими эффектами, из носовой полости, сыворотки, BALF и тканей легкого с помощью различных аналитических способов из приведенного выше примера 3 и т.д. В частности, признаки в носовой полости и сыворотке измеряли с помощью набора для ELISA, а признаки, связанные с ринитом и астмой, в BALF и тканях легкого измеряли с помощью qRT-PCR с применением праймеров из приведенной выше таблицы 14.Signs associated with anti-rhinitis and anti-asthma effects from nasal cavity, serum, BALF, and lung tissues were also analyzed by various analytical methods from Example 3 above, etc. In particular, signs in the nasal cavity and serum were measured using an ELISA kit, and signs associated with rhinitis and asthma in BALF and lung tissues were measured using qRT-PCR using primers from Table 14 above.

(2) Экспериментальные результаты(2) Experimental results

При обработке мышей с помощью OVA в носовой полости значительно повышался показатель симптомов ринита (количество случаев поведения, связанного с чиханьем и трением носа) и симптомов аллергического ринита, в том числе экспрессия IL-4 и IL-5. Тем не менее, после обработки с помощью IM55 или IM76 уровень симптомов аллергического ринита и IL-4 и IL-5 в носовой полости носа, вызванных OVA, значимо снижался (фиг. 18-20). Также, в случае обработки с помощью IM55 или IM76 уменьшалась тяжесть нарушения функции носовой полости, вызванного OVA, и уменьшалось увеличение размеров эпителиальных клеток в носовой полости (фиг. 21).When mice were treated with OVA in the nasal cavity, there was a significant increase in the rate of rhinitis symptoms (the number of behaviors associated with sneezing and rubbing the nose) and symptoms of allergic rhinitis, including the expression of IL-4 and IL-5. However, after treatment with IM55 or IM76, the level of symptoms of allergic rhinitis and IL-4 and IL-5 in the nasal cavity caused by OVA was significantly reduced (Fig. 18-20). Also, when treated with IM55 or IM76, the severity of nasal dysfunction caused by OVA was reduced and the increase in the size of epithelial cells in the nasal cavity was reduced (FIG. 21).

Более того, по результатам гистологического исследования, в случае животной модели с индуцированным ринитом у нее индуцировалось возникновение очагов воспаления в легких и отека, повышалась экспрессия IL-5 и GATA3, и снижалась экспрессия IL-10 и FOXp3. Тем не менее, при обработке с помощью IM55 или IM76 ингибировалось нарушение функции тканей легких и увеличение размеров эпителиальных клеток, вызванное OVA, ингибировалась экспрессия GATA3 и IL-5, и повышалась экспрессия FOXp3 и IL-10 (фиг. 22-26).Moreover, according to the results of histological examination, in the case of an animal model with induced rhinitis, it induced the occurrence of foci of inflammation in the lungs and edema, increased expression of IL-5 and GATA3, and decreased expression of IL-10 and FOXp3. However, when treated with IM55 or IM76, OVA-induced lung tissue dysfunction and epithelial cell enlargement was inhibited, GATA3 and IL-5 expression was inhibited, and FOXp3 and IL-10 expression was increased (FIGS. 22-26).

Пример 8. Оценка эффекта облегчения тяжести, оказываемого смешанными молочнокислыми бактериями в отношении ринита и астмы (3)Example 8 Evaluation of the Severity Relief Effect of Mixed Lactic Acid Bacteria on Rhinitis and Asthma (3)

Оценку производили не только для эффекта, оказываемого IM55 или IM76 по отдельности, но также и для эффекта, оказываемого смесями IM55 и IM76 на облегчение тяжести в отношении ринита и астмы. В частности, показатель симптомов ринита, степень (%) распределения эозинофильных клеток в BALF и уровень экспрессии цитокинов в крови анализировали с помощью того же способа, что и в описанном выше примере 3, и т.д.Evaluation was made not only for the effect of IM55 or IM76 alone, but also for the effect of mixtures of IM55 and IM76 on alleviating the severity of rhinitis and asthma. In particular, the symptom score of rhinitis, the degree (%) of distribution of eosinophilic cells in BALF, and the expression level of cytokines in blood were analyzed by the same method as in Example 3 above, etc.

В результате для группы, которой вводили дозу смеси из IM55 и IM76 в соотношении 1:1, 1:3 и 1:9, было обнаружено, что показатель воспалительных симптомов, проверяемый по количеству случаев поведения, связанных с чиханьем и трением носа, снижался и снижался уровень экспрессии IL-5 в носовой полости (фиг. 27). Также было обнаружено, что снижался уровень экспрессии IL-5 в сыворотке (фиг. 28).As a result, for the group dosed with a mixture of IM55 and IM76 at a ratio of 1:1, 1:3, and 1:9, it was found that the inflammatory symptom score, as measured by the number of sneezing and nasal rubbing behaviors, decreased and the level of expression of IL-5 in the nasal cavity decreased (Fig. 27). It was also found that the level of expression of IL-5 in serum was reduced (Fig. 28).

Из результатов эксперимента на модели с индуцированным ринитом в приведенных выше примерах 6-8 можно видеть, что смесь Bifidobacterium longum IM55 и Lactobacillus plantarum IM76 демонстрировала эффект предупреждения, облегчения тяжести и лечения астмы и ринита.From the results of the induced rhinitis model experiment in the above examples 6-8, it can be seen that the mixture of Bifidobacterium longum IM55 and Lactobacillus plantarum IM76 showed the effect of preventing, alleviating the severity and treating asthma and rhinitis.

Пример 9. Эффект нормализации микроорганизмов и облегчения тяжестиExample 9 Effect of Microorganism Normalization and Severity Relief колитаcolitis

Микроорганизмы кишечника, для которых недавно сообщалось, что они оказывают влияние на возникновение и ухудшение аллергических заболеваний, являются важным фактором возникновения аллергических заболеваний. Таким образом, для обнаружения изменения микроорганизмов в толстой кишке в соответствии с введением новых молочнокислых бактерий анализировали экспрессию цитокинов и изменение микроорганизмов кишечника в толстой кишке относительно модели аллергического ринита из описанного выше примера 7.Gut microorganisms, which have recently been reported to influence the onset and worsening of allergic diseases, are an important factor in the onset of allergic diseases. Thus, in order to detect the change of microorganisms in the colon according to the introduction of new lactic acid bacteria, the expression of cytokines and the change of the microorganisms of the intestine in the colon were analyzed relative to the allergic rhinitis model of the above example 7.

В частности, из тканей толстой кишки указанной животной модели выделяли 2 мкг РНК с применением термоциклера Takara и премикса SYBR. С указанной РНК проводили qPCR, и праймер, использованный для qPCR, был таким же, как показано в приведенной выше таблице 14.In particular, 2 μg of RNA was isolated from the colon tissues of this animal model using a Takara thermal cycler and a SYBR premix. qPCR was performed on the indicated RNA, and the primer used for qPCR was the same as shown in Table 14 above.

По результатам анализа, в толстой кишке после обработки OVA экспрессия IL-4 и IL-5 повышалась, а экспрессия IL-10 снижалась. Тем не менее, было установлено, что после обработки с помощью IM55, IM76 или их смесей экспрессия IL-4 и IL-5 снижалась, а экспрессия IL-10 повышалась (фиг. 29).According to the results of the analysis, in the colon after treatment with OVA, the expression of IL-4 and IL-5 increased, while the expression of IL-10 decreased. However, it was found that after treatment with IM55, IM76, or mixtures thereof, the expression of IL-4 and IL-5 decreased and the expression of IL-10 increased (Fig. 29).

Также, после выделения толстой кишки из указанной животной модели выделяли 100 нг общей ДНК из жидкости толстой кишки указанной животной модели с применением термоциклера Takara и премикса SYBER. С указанной ДНК проводили qPCR, и праймер, использованный для qPCR, был таким же, как показано в приведенной далее таблице 19.Also, after isolation of the colon from said animal model, 100 ng of total DNA was isolated from the colonic fluid of said animal model using a Takara thermal cycler and SYBER premix. qPCR was performed on this DNA, and the primer used for qPCR was the same as shown in Table 19 below.

Таблица 19Table 19

Тип бактерийtype of bacteria Тип праймераprimer type Последовательность праймера (5’-3’)Primer sequence (5'-3') FirmicutesFirmicutes Прямой (SEQ ID NO: 21)Straight (SEQ ID NO: 21) GGAGYATGTGGTTTAATTCGAAGCAGGAGYATGTGGTTTAATTCGAAGCA Обратный (SEQ ID NO: 22)Reverse (SEQ ID NO: 22) AGCTGACGACAACCATGCACAGCTGACGACAACCATGCAC BacteroidetesBacteroidetes Прямой (SEQ ID NO: 23)Straight (SEQ ID NO: 23) AACGCGAAAAACCTTACCTACCAACGCGAAAAAACCTTACCTACC Обратный (SEQ ID NO: 24)Reverse (SEQ ID NO: 24) TGCCCTTTCGTAGCAACTAGTGTGCCCTTTCGTAGCAACTAGTG ActinobacteriaActinobacteria Прямой (SEQ ID NO: 25)Straight (SEQ ID NO: 25) TGTAGCGGTGGAATGCGCTGTAGCGGTGGAATGCGC Обратный (SEQ ID NO: 26)Reverse (SEQ ID NO: 26) AATTAAGCCACATGCTCCGCTAATTAAGCCACATGCTCCGCT δ/γ-Proteobacteriaδ/γ-Proteobacteria Прямой (SEQ ID NO: 27)Straight (SEQ ID NO: 27) GCTAACGCATTAAGTRYCCCGGCTAACGCATTAAGTRYCCCG Обратный (SEQ ID NO: 28)Reverse (SEQ ID NO: 28) GCCATGCRGCACCTGTCTGCCATGCRGCACCTGTCT TM7TM7 Прямой (SEQ ID NO: 29)Straight (SEQ ID NO: 29) GCAACTCTTTACGCCCAGTGCAACTCTTTACGCCCAGT Обратный (SEQ ID NO: 30)Reverse (SEQ ID NO: 30) GAGAGGATGATCAGCCAGGAGAGGATGATCAGCCAG

По результатам анализа, при обработке с помощью OVA увеличилась популяция Firmicutes, Proteobacteria и TM7, а популяция Bacteroidetes и Actinobacteria уменьшалась, и, следовательно, увеличивалось соотношение Firmicutes/Bacteroides (F/B) и Proteobacteria/Bacteroidetes (P/B). Тем не менее, было установлено, что при обработке с помощью IM55, IM76 или их смесей группа Proteobacteria, которая увеличивалась под действием OVA, значительно ингибировалась, а группа Bacteroidetes и Actinobacteria, которая уменьшалась при возникновении ринита, восстанавливалась (фиг. 30).According to the results of the analysis, when treated with OVA, the population of Firmicutes, Proteobacteria and TM7 increased, and the population of Bacteroidetes and Actinobacteria decreased, and therefore the ratio of Firmicutes/Bacteroides (F/B) and Proteobacteria/Bacteroidetes (P/B) increased. However, it was found that when treated with IM55, IM76, or mixtures thereof, the Proteobacteria group that increased with OVA was significantly inhibited, and the Bacteroidetes and Actinobacteria group that decreased with rhinitis was restored (FIG. 30).

Из результатов можно видеть, что IM55, IM76 и их смеси не только нормализовали измененные микроорганизмы кишечника, но также демонстрировали эффект контроля, предупреждения, облегчения тяжести и лечения колита.From the results, it can be seen that IM55, IM76 and mixtures thereof not only normalized the altered intestinal micro-organisms, but also showed the effect of controlling, preventing, relieving the severity and treating colitis.

Пример 10. Приготовление фармацевтических композиций, содержащих молочнокислые бактерии и т.д.Example 10 Preparation of Pharmaceutical Compositions Containing Lactic Acid Bacteria, etc.

При приготовлении последующих фармацевтических композиций продукт культивирования Bifidobacterium longum IM55 можно заменить на сам штамм Bifidobacterium longum IM55, его лизат или его экстракт. Также, при приготовлении последующих фармацевтических композиций продукт культивирования Bifidobacterium longum IM55 можно заменить на сам штамм Lactobacillus plantarum IM76, его лизат или его экстракт. Более того, последующая фармацевтическая композиция может дополнительно содержать хитозан.In the preparation of subsequent pharmaceutical compositions, the Bifidobacterium longum IM55 culture product can be substituted for the Bifidobacterium longum IM55 strain itself, its lysate, or its extract. Also, in the preparation of subsequent pharmaceutical compositions, the culture product of Bifidobacterium longum IM55 can be replaced by the Lactobacillus plantarum IM76 strain itself, its lysate or its extract. Moreover, the subsequent pharmaceutical composition may additionally contain chitosan.

<10-1> Приготовление порошка<10-1> Powder preparation

Продукт культивирования Bifidobacterium longum IM55, 20 мгProduct of cultivation of Bifidobacterium longum IM55, 20 mg

Лактоза, 100 мгLactose, 100 mg

Тальк, 10 мгTalc, 10 mg

Указанные компоненты смешивали и помещали в воздухонепроницаемую упаковку для приготовления порошка.These components were mixed and placed in an airtight package to prepare the powder.

<10-2> Приготовление таблетки<10-2> Preparing a tablet

Продукт культивирования Bifidobacterium longum IM55, 10 мгProduct of cultivation of Bifidobacterium longum IM55, 10 mg

Маисовый крахмал, 100 мгMaize starch, 100 mg

Лактоза, 100 мгLactose, 100 mg

Стеарат магния, 2 мгMagnesium stearate, 2 mg

Указанные компоненты смешивали и прессовали для приготовления таблетки в соответствии с традиционным способом приготовления таблеток.These components were mixed and compressed to prepare a tablet according to the conventional tableting process.

<10-3> Приготовления препарата в форме капсулы<10-3> Preparation of a capsule preparation

Продукт культивирования Bifidobacterium longum IM55, 10 мгProduct of cultivation of Bifidobacterium longum IM55, 10 mg

Кристаллическая целлюлоза, 3 мгCrystalline cellulose, 3 mg

Лактоза, 15 мгLactose, 15 mg

Стеарат магния, 0,2 мгMagnesium stearate, 0.2 mg

Указанные компоненты смешивали, а затем вносили в желатиновую капсулу для приготовления препарата в форме капсулы в соответствии с традиционным способом приготовления препаратов в форме капсул.These components were mixed and then filled into a gelatin capsule to prepare a capsule preparation in accordance with the conventional method for the preparation of capsule preparations.

<10-4> Приготовление пилюли<10-4> Preparing a pill

Продукт культивирования Bifidobacterium longum IM55, 10 мгProduct of cultivation of Bifidobacterium longum IM55, 10 mg

Лактоза, 150 мгLactose, 150 mg

Глицерин, 100 мгGlycerin, 100 mg

Ксилит, 50 мгXylitol 50 mg

Указанные компоненты смешивали и готовили в виде пилюли, каждая из которых имела массу 4 г, в соответствии с традиционным способом.These components were mixed and prepared in the form of pills, each of which had a weight of 4 g, in accordance with the traditional method.

<10-5> Приготовление гранул<10-5> Pellet preparation

Продукт культивирования Bifidobacterium longum IM55, 15 мгProduct of cultivation of Bifidobacterium longum IM55, 15 mg

Соевый экстракт, 50 мгSoy extract, 50 mg

Глюкоза, 200 мгGlucose, 200 mg

Крахмал, 600 мгStarch, 600 mg

Указанные компоненты смешивали, после чего к ним добавляли 100 мг 30% этанола, затем сушили при 60℃, затем формовали в гранулы, а затем вносили в упаковку.These components were mixed, after which 100 mg of 30% ethanol was added to them, then dried at 60℃, then molded into granules, and then put into a package.

<10-6> Приготовление инъекции<10-6> Injection preparation

Продукт культивирования Bifidobacterium longum IM55, 10 мгProduct of cultivation of Bifidobacterium longum IM55, 10 mg

Метабисульфит натрия, 3,0 мгSodium metabisulphite, 3.0 mg

Метилпарабен, 0,8 мгMethylparaben, 0.8 mg

Пропилпарабен, 0,1 мгPropylparaben, 0.1 mg

Подходящее количество стерильной дистиллированной воды для инъекцииAppropriate amount of sterile distilled water for injection

Указанные компоненты смешивали, после чего 2 мл смеси вносили в ампулу, затем стерилизовали, а затем готовили в виде инъекционной формы.These components were mixed, after which 2 ml of the mixture was added to the ampoule, then sterilized, and then prepared in the form of an injection form.

Пример 11. Приготовление функциональных пищевых продуктов для здорового питания, содержащих молочнокислые бактерии и т.д.Example 11 Preparation of Functional Healthy Food Products Containing Lactic Acid Bacteria, etc.

При приготовлении последующих функциональных пищевых продуктов для здорового питания продукт культивирования Bifidobacterium longum IM55 можно заменить на сам штамм Bifidobacterium longum IM55, его лизат или его экстракт. Также, при приготовлении последующих функциональных пищевых продуктов для здорового питания продукт культивирования Bifidobacterium longum IM55 можно заменить на сам штамм Lactobacillus plantarum IM76, его лизат или его экстракт. Также, последующие функциональные пищевые продукты для здорового питания могут дополнительно содержать хитозан.In the preparation of subsequent functional foods for a healthy diet, the Bifidobacterium longum IM55 culture product can be replaced by the Bifidobacterium longum IM55 strain itself, its lysate, or its extract. Also, in the preparation of subsequent functional foods for a healthy diet, the culture product of Bifidobacterium longum IM55 can be replaced by the Lactobacillus plantarum IM76 strain itself, its lysate or its extract. Also, subsequent functional foods for a healthy diet may additionally contain chitosan.

<11-1> Приготовление мучного пищевого продукта<11-1> Preparing flour food

0,5 части по весу продукта культивирования Bifidobacterium longum IM55 добавляли в 100 частей по весу муки, после чего полученную смесь использовали для приготовления хлеба, пирога, печенья, крекера и лапши.0.5 parts by weight of the culture product of Bifidobacterium longum IM55 was added to 100 parts by weight of flour, after which the resulting mixture was used to make bread, cake, biscuits, crackers and noodles.

<11-2> Приготовление молочных продуктов<11-2> Cooking dairy products

0,5 части по весу продукта культивирования Bifidobacterium longum IM55 добавляли в 100 частей по весу молока, после чего указанное молоко использовали для приготовления различных молочных продуктов, таких как масло и мороженое.0.5 parts by weight of the culture product of Bifidobacterium longum IM55 was added to 100 parts by weight of milk, after which said milk was used to prepare various dairy products such as butter and ice cream.

<11-3> Приготовление порошка из смешанного зерна<11-3> Mixed grain powder preparation

Нешлифованный рис, ячмень, клейкий рис и слезник, которые предварительно желатинизировали и сушили известным способом, обжаривали, а затем перетирали в порошок с размером частиц 60 меш с помощью мельницы.Brown rice, barley, glutinous rice and teardrop, which had been pregelatinized and dried in a known manner, were fried and then ground into a 60 mesh powder using a mill.

Черные бобы, черный кунжут и семена периллы, которые предварительно обрабатывали паром и сушили известным способом, также обжаривали, а затем перетирали в порошок с размером частиц 60 меш с помощью мельницы.Black beans, black sesame and perilla seeds, which had been pre-steamed and dried in a known manner, were also roasted and then ground to a 60 mesh powder with a mill.

Указанные приготовленные зерна, семена, и орехи, и продукт культивирования Bifidobacterium longum IM55 смешивали в приведенном далее соотношении для приготовления порошка из смешанных зерен.These cooked grains, seeds, and nuts, and the culture product of Bifidobacterium longum IM55 were mixed in the following ratio to prepare a mixed grain powder.

Зерна (30 частей по весу нешлифованного риса, 17 частей по весу слезника и 20 частей по весу ячменя);Grains (30 parts by weight of brown rice, 17 parts by weight of teardrop and 20 parts by weight of barley);

Семена и орехи (7 частей по весу семян периллы, 8 частей по весу черных бобов и 7 частей по весу черного кунжута);Seeds and nuts (7 parts by weight of perilla seeds, 8 parts by weight of black beans and 7 parts by weight of black sesame seeds);

Продукт культивирования Bifidobacterium longum IM55 (1 часть по весу);Culture product of Bifidobacterium longum IM55 (1 part by weight);

Ganoderma lucidum (0,5 части по весу); иGanoderma lucidum (0.5 parts by weight); And

Rehmannia glutinosa (0,5 части по весу)Rehmannia glutinosa (0.5 parts by weight)

<11-4> Приготовление напитка для здорового питания<11-4> Healthy drink preparation

Вводимые в малых дозах ингредиенты, такие как кукурузная патока с высоким содержанием фруктозы (0,5 г), олигосахарид (4 г), сахар (2 г), кулинарная соль (0,5 г) и вода (77 г), а также 1 г продукта культивирования Bifidobacterium longum IM55 смешивали до однородного состояния, затем быстро пастеризовали, а затем упаковывали в каждую из небольших упаковочных емкостей, таких как стеклянная бутылка, ПЭТ-бутылка и т.д., для получения напитка для здорового питания.Low dose ingredients such as high fructose corn syrup (0.5 g), oligosaccharide (4 g), sugar (2 g), cooking salt (0.5 g) and water (77 g), as well as 1 g of the culture product of Bifidobacterium longum IM55 was mixed until homogeneous, then quickly pasteurized, and then packed into each of small packaging containers such as glass bottle, PET bottle, etc. to obtain a healthy drink.

<11-5> Приготовление овощного сока<11-5> Making vegetable juice

2 г продукта культивирования Bifidobacterium longum IM55 добавляли в 1000 мл томатного или морковного сока, для получения овощного сока.2 g of the culture product of Bifidobacterium longum IM55 was added to 1000 ml of tomato or carrot juice to obtain vegetable juice.

<11-6> Приготовление фруктового сока<11-6> Fruit juice preparation

1 г продукта культивирования Bifidobacterium longum IM55 добавляли в 1000 мл яблочного или виноградного сока, для получения фруктового сока.1 g of the culture product of Bifidobacterium longum IM55 was added to 1000 ml of apple or grape juice to obtain fruit juice.

6. Регистрационная информация о молочнокислых бактериях6. Registration information on lactic acid bacteria

Авторы настоящего изобретения депонировали Bifidobacterium longum IM55 с целью патентования в Корейском центре культур микроорганизмов (Korean Culture Center of Microorganisms), сертифицированном депозитарии (адрес: Yulim Building, 45, Hongjenae 2ga-gil, Seodaemun-gu, Сеул, Южная Корея), 20 января 2017 года, и получили регистрационный номер KCCM11961P. Также, авторы настоящего изобретения депонировали Lactobacillus plantarum IM76 с целью патентования в Корейском центре культур микроорганизмов, сертифицированном депозитарии (адрес: Yulim Building, 45, Hongjenae 2ga-gil, Seodaemun-gu, Сеул, Южная Корея), 20 января 2017 года, и получили регистрационный номер KCCM11962P. Депонирование указанных молочнокислых бактерий было выполнено в соответствии с Будапештским договором о международном признании депонирования микроорганизмов для патентной процедуры.The inventors of the present invention deposited Bifidobacterium longum IM55 for patenting at the Korean Culture Center of Microorganisms, a certified depository (Address: Yulim Building, 45, Hongjenae 2ga-gil, Seodaemun-gu, Seoul, South Korea), January 20 2017, and received registration number KCCM11961P. Also, the inventors of the present invention deposited Lactobacillus plantarum IM76 for patenting at the Korea Microorganism Culture Center Certified Depository (Address: Yulim Building, 45, Hongjenae 2ga-gil, Seodaemun-gu, Seoul, South Korea) on January 20, 2017, and received registration number KCCM11962P. The deposit of said lactic acid bacteria was carried out in accordance with the Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for Patent Procedure.

Как показано выше, настоящее изобретение было описано посредством приведенных выше примеров, но не обязательно ограничено ими, и его можно различным образом модифицировать без отступления от объема и сущности настоящего изобретения. Таким образом, объем защиты настоящего изобретения следует понимать как включающий все варианты осуществления, относящиеся к объему патентной формулы изобретения, прилагаемой к настоящему изобретению.As shown above, the present invention has been described by means of the above examples, but is not necessarily limited thereto, and can be modified in various ways without departing from the scope and spirit of the present invention. Thus, the scope of protection of the present invention is to be understood as including all embodiments falling within the scope of the patent claims appended to the present invention.

Регистрационный номерRegistration number

Название депозитария: Корейский центр культур микроорганизмов (международный)Depository Name: Korea Microorganism Culture Center (International)

Регистрационный номер: KCCM11961PRegistration number: KCCM11961P

Дата регистрации: 20170120Registration date: 20170120

Название депозитария: Корейский центр культур микроорганизмов (международный)Depository Name: Korea Microorganism Culture Center (International)

Регистрационный номер: KCCM11962PRegistration number: KCCM11962P

Дата регистрации: 20170120Registration date: 20170120

--->--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙSEQUENCE LIST

<110> ЮНИВЕРСИТИ-ИНДАСТРИ КООПЕРЕЙШН ГРУП ОФ КЮН ХЕЕ ЮНИВЕРСИТИ<110> UNIVERSITY-INDUSTRY COOPERATION GROUP OF KUNH HE UNIVERSITY

НАВИФАРМ КО, ЛТД NAVIFARM CO, LTD

<120> НОВЫЕ МОЛОЧНОКИСЛЫЕ БАКТЕРИИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ<120> NEW LACTIC BACTERIA AND THEIR APPLICATIONS

<130> P17045-NVP<130> P17045-NVP

<150> KR 10-2017-0013632<150> KR 10-2017-0013632

<151> 2017-01-31<151> 2017-01-31

<160> 30<160> 30

<170> KoPatentIn 3.0<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1<210> 1

<211> 1377<211> 1377

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> 16S rDNA Bifidobacterium longum IM55<223> 16S rDNA Bifidobacterium longum IM55

<400> 1<400> 1

gacttgacgg ggcggtgtgt acaaggcccg ggaaacgcat tcaccgcgac gttgctgatt 60gacttgacgg ggcggtgtgt acaaggcccg ggaaacgcat tcaccgcgac gttgctgatt 60

cgcgattact agcgactccg ccttcacgca gtcgagttgc agactgcgat ccgaactgag 120cgcgattact agcgactccg ccttcacgca gtcgagttgc agactgcgat ccgaactgag 120

accggttttc agggatccgc tccgcgtcgc cgcgtcgcat cccgttgtac cggccattgt 180accggttttc agggatccgc tccgcgtcgc cgcgtcgcat cccgttgtac cggccattgt 180

agcatgcgtg aagccctgga cgtaaggggc atgatgatct gacgtcatcc ccaccttcct 240agcatgcgtg aagccctgga cgtaaggggc atgatgatct gacgtcatcc ccaccttcct 240

ccgagttaac cccggcggtc ccccgtgagt tcccggcata atccgctggc aacacggggc 300ccgagttaac cccggcggtc ccccgtgagt tcccggcata atccgctggc aacacggggc 300

gagggttgcg ctcgttgcgg gacttaaccc aacatctcac gacacgagct gacgacgacc 360gagggttgcg ctcgttgcgg gacttaaccc aacatctcac gacacgagct gacgacgacc 360

atgcaccacc tgtgaacccg ccccgaaggg aagccgtatc tctacgaccg tcgggaacat 420atgcaccacc tgtgaacccg ccccgaaggg aagccgtatc tctacgaccg tcgggaacat 420

gtcaagccca ggtaaggttc ttcgcgttgc atcgaattaa tccgcatgct ccgccgcttg 480gtcaagccca ggtaaggttc ttcgcgttgc atcgaattaa tccgcatgct ccgccgcttg 480

tgcgggcccc cgtcaatttc tttgagtttt agccttgcgg ccgtactccc caggcgggat 540tgcgggcccc cgtcaatttc tttgagtttt agccttgcgg ccgtactccc caggcgggat 540

gcttaacgcg ttagctccga cacggaaccc gtggaacggg ccccacatcc agcatccacc 600gcttaacgcg ttagctccga cacggaaccc gtggaacggg ccccacatcc agcatccacc 600

gtttacggcg tggactacca gggtatctaa tcctgttcgc tccccacgct ttcgctcctc 660660

agcgtcagta acggcccaga gacctgcctt cgccattggt gttcttcccg atatctacac 720agcgtcagta acggcccaga gacctgcctt cgccattggt gttcttcccg atatctacac 720

attccaccgt tacaccggga attccagtct cccctaccgc actcaagccc gcccgtaccc 780attccaccgt tacaccggga attccagtct cccctaccgc actcaagccc gcccgtaccc 780

ggcgcggatc caccgttaag cgatggactt tcacaccgga cgcgacgaac cgcctacgag 840ggcgcggatc caccgttaag cgatggactt tcacaccgga cgcgacgaac cgcctacgag 840

ccctttacgc ccaataattc cggataacgc ttgcacccta cgtattaccg cggctgctgg 900ccctttacgc ccaataattc cggataacgc ttgcacccta cgtattaccg cggctgctgg 900

cacgtagtta gccggtgctt attcaacggg taaactcact ctcgcttgct ccccgataaa 960cacgtagtta gccggtgctt attcaacggg taaactcact ctcgcttgct ccccgataaa 960

agaggtttac aacccgaagg cctccatccc tcacgcggcg tcgctgcatc aggcttgcgc 1020agaggtttac aacccgaagg cctccatccc tcacgcggcg tcgctgcatc aggcttgcgc 1020

ccattgtgca atattcccca ctgctgcctc ccgtaggagt ctgggccgta tctcagtccc 1080ccattgtgca atattcccca ctgctgcctc ccgtaggagt ctgggccgta tctcagtccc 1080

aatgtggccg gtcgccctct caggccggct acccgtcgaa gccacggtgg gccgttaccc 1140aatgtggccg gtcgccctct caggccggct acccgtcgaa gccacggtgg gccgttaccc 1140

cgccgtcaag ctgataggac gcgaccccat cccataccgc gaaagctttc ccagaagacc 1200cgccgtcaag ctgataggac gcgaccccat cccataccgc gaaagctttc ccagaagacc 1200

atgcgatcaa ctggagcatc cggcattacc acccgtttcc aggagctatt ccggtgtatg 1260atgcgatcaa ctggagcatc cggcattacc acccgtttcc aggagctatt ccggtgtatg 1260

gggcaggtcg gtcacgcatt actcacccgt tcgccactct caccaccaag caaagcccga 1320gggcaggtcg gtcacgcatt actcacccgt tcgccactct caccaccaag caaagcccga 1320

tggatcccgt tcgacttgca tgtgttaagc acgccgccag cgttcatcct gagccat 1377tggatcccgt tcgacttgca tgtgttaagc acgccgccag cgttcatcct gagccat 1377

<210> 2<210> 2

<211> 1421<211> 1421

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> 16S rDNA Lactobacillus plantarum IM76<223> 16S rDNA Lactobacillus plantarum IM76

<400> 2<400> 2

ctggtattga ttggtgcttg catcatgatt tacatttgag tgagtggcga actggtgagt 60ctggtattga ttggtgcttg catcatgatt tacatttgag tgagtggcga actggtgagt 60

aacacgtggg aaacctgccc agaagcgggg gataacacct ggaaacagat gctaataccg 120aacacgtggg aaacctgccc agaagcgggg gataacacct ggaaacagat gctaataccg 120

cataacaact tggaccgcat ggtccgagct tgaaagatgg cttcggctat cacttttgga 180cataacaact tggaccgcat ggtccgagct tgaaagatgg cttcggctat cacttttgga 180

tggtcccgcg gcgtattagc tagatggtgg ggtaacggct caccatggca atgatacgta 240tggtcccgcg gcgtattagc tagatggtgg ggtaacggct caccatggca atgatacgta 240

gccgacctga gagggtaatc ggccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg 300gccgacctga gagggtaatc ggccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg 300

aggcagcagt agggaatctt ccacaatgga cgaaagtctg atggagcaac gccgcgtgag 360aggcagcagt agggaatctt ccacaatgga cgaaagtctg atggagcaac gccgcgtgag 360

tgaagaaggg tttcggctcg taaaactctg ttgttaaaga agaacatatc tgagagtaac 420tgaagaaggg tttcggctcg taaaactctg ttgttaaaga agaacatatc tgagagtaac 420

tgttcaggta ttgacggtat ttaaccagaa agccacggct aactacgtgc cagcagccgc 480tgttcaggta ttgacggtat ttaaccagaa agccacggct aactacgtgc cagcagccgc 480

ggtaatacgt aggtggcaag cgttgtccgg gatttattgg gcgtaaagcg agcgcaggcg 540ggtaatacgt aggtggcaag cgttgtccgg gatttattgg gcgtaaagcg agcgcaggcg 540

gttttttaag tctgatgtga aagccttcgg ctcaaccgaa gaagtgcatc ggaaactggg 600gttttttaag tctgatgtga aagccttcgg ctcaaccgaa gaagtgcatc ggaaactggg 600

aaacttgagt gcagaagagg acagtggaac tccatgtgta gcggtgaaat gcgtagatat 660aaacttgagt gcagaagagg acagtggaac tccatgtgta gcggtgaaat gcgtagatat 660

atggaagaac accagtggcg aaggcggctg tctggtctgt aactgacgct gaggctcgaa 720atggaagaac accagtggcg aaggcggctg tctggtctgt aactgacgct gaggctcgaa 720

agtatgggta gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca taccgtaaac gatgaatgct 780agtatgggta gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca taccgtaaac gatgaatgct 780

aagtgttgga gggtttccgc ccttcagtgc tgcagctaac gcattaagca ttccgcctgg 840aagtgttgga gggtttccgc ccttcagtgc tgcagctaac gcattaagca ttccgcctgg 840

ggagtacggc cgcaaggctg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga 900ggagtacggc cgcaaggctg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga 900

gcatgtggtt taattcgaag ctacgcgaag aaccttacca ggtcttgaca tactatgcaa 960gcatgtggtt taattcgaag ctacgcgaag aaccttacca ggtcttgaca tactatgcaa 960

atctaagaga ttagacgttc ccttcgggga catggataca ggtggtgcat ggttgtcgtc 1020atctaagaga ttagacgttc ccttcgggga catggataca ggtggtgcat ggttgtcgtc 1020

agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt attatcagtt 1080agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt attatcagtt 1080

gccagcatta agttgggcac tctggtgaga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg 1140gccagcatta agttgggcac tctggtgaga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg 1140

atgacgtcaa atcatcatgc cccttatgac ctgggctaca cacgtgctac aatggatggt 1200atgacgtcaa atcatcatgc cccttatgac ctgggctaca cacgtgctac aatggatggt 1200

acaacgagtt gcgaactcgc gagagtaagc taatctctta aagccattct cagttcggat 1260acaacgagtt gcgaactcgc gagagtaagc taatctctta aagccattct cagttcggat 1260

tgtaggctgc aactcgccta catgaagtcg gaatcgctag taatcgcgga tcagcatgcc 1320tgtaggctgc aactcgccta catgaagtcg gaatcgctag taatcgcgga tcagcatgcc 1320

gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatgag agtttgtaac 13801380

acccaaagtc ggtggggtaa ccttttagga accagccgcc t 1421acccaaagtc ggtggggtaa ccttttagga accagccgcc t 1421

<210> 3<210> 3

<211> 22<211> 22

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер T-bet<223> T-bet forward primer

<400> 3<400> 3

cctcttctat ccaaccagta tc 22cctcttctat ccaaccagta tc 22

<210> 4<210> 4

<211> 19<211> 19

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер T-bet<223> Reverse primer T-bet

<400> 4<400> 4

ctccgcttca taactgtgt 19ctccgcttca taactgtgt 19

<210> 5<210> 5

<211> 24<211> 24

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер FN-гамма<223> Forward primer FN-gamma

<400> 5<400> 5

tcaagtggca tagatgtgga agaa 24tcaagtggca tagatgtgga agaa 24

<210> 6<210> 6

<211> 21<211> 21

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер FN-гамма<223> Reverse primer FN-gamma

<400> 6<400> 6

tggctctgca ggattttcat g 21tggctctgca ggattttcat g 21

<210> 7<210> 7

<211> 21<211> 21

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер GATA3<223> GATA3 forward primer

<400> 7<400> 7

gaaggcatcc agacccgaaa c 21gaaggcatcc agacccgaaa c 21

<210> 8<210> 8

<211> 20<211> 20

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер GATA3<223> GATA3 reverse primer

<400> 8<400> 8

acccatggcg gtgaccatgc 20acccatggcg gtgaccatgc 20

<210> 9<210> 9

<211> 25<211> 25

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер IL-5<223> Forward primer IL-5

<400> 9<400> 9

aaagagaagt gtggcgagga gagac 25aaagagaagt gtggcgagga gagac 25

<210> 10<210> 10

<211> 27<211> 27

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер IL-5<223> IL-5 reverse primer

<400> 10<400> 10

ccttccattg cccactctgt actcatc 27ccttccattg cccactctgt actcatc 27

<210> 11<210> 11

<211> 22<211> 22

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер ROR гамма t<223> Forward primer ROR gamma t

<400> 11<400> 11

acagccactg cattcccagt tt 22acagccactg cattcccagt tt 22

<210> 12<210> 12

<211> 22<211> 22

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер ROR гамма t<223> Reverse primer ROR gamma t

<400> 12<400> 12

tctcggaagg acttgcagac at 22tctcggaagg acttgcagac at 22

<210> 13<210> 13

<211> 21<211> 21

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер IL-17<223> Forward primer IL-17

<400> 13<400> 13

tttaactccc ttggcgcaaa a 21tttaactccc ttggcgcaaa a 21

<210> 14<210> 14

<211> 20<211> 20

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер IL-17<223> IL-17 reverse primer

<400> 14<400> 14

ctttccctcc gcattgacac 20ctttccctcc gcattgacac 20

<210> 15<210> 15

<211> 18<211> 18

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер FOXp3<223> Forward primer FOXp3

<400> 15<400> 15

cccatcccca ggagtctt 18cccatcccca ggagtctt 18

<210> 16<210> 16

<211> 21<211> 21

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер FOXp3<223> Reverse primer FOXp3

<400> 16<400> 16

accatgacta ggggcactgt a 21accatgacta ggggcactgt a 21

<210> 17<210> 17

<211> 23<211> 23

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер IL-10<223> IL-10 forward primer

<400> 17<400> 17

atgctgcctg ctcttactga ctg 23atgctgcctg ctcttactga ctg 23

<210> 18<210> 18

<211> 24<211> 24

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер IL-10<223> IL-10 reverse primer

<400> 18<400> 18

cccaagtaac ccttaaagtc ctgc 24cccaagtaac ccttaaagtc ctgc 24

<210> 19<210> 19

<211> 20<211> 20

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер GAPDH<223> GAPDH forward primer

<400> 19<400> 19

tgcagtggca aagtggagat 20tgcagtggca aagtggagat 20

<210> 20<210> 20

<211> 20<211> 20

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер GAPDH<223> GAPDH reverse primer

<400> 20<400> 20

tttgccgtga gtggagtcat 20tttgccgtga gtggagtcat 20

<210> 21<210> 21

<211> 25<211> 25

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер Firmicutes<223> Firmicutes Forward Primer

<400> 21<400> 21

ggagyatgtg gtttaattcg aagca 25ggagyatgtg gtttaattcg aagca 25

<210> 22<210> 22

<211> 20<211> 20

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер Firmicutes<223> Firmicutes reverse primer

<400> 22<400> 22

agctgacgac aaccatgcac 20agctgacgac aaccatgcac 20

<210> 23<210> 23

<211> 22<211> 22

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер Bacteroidetes<223> Bacteroidetes Forward Primer

<400> 23<400> 23

aacgcgaaaa accttaccta cc 22aacgcgaaaa accttaccta cc 22

<210> 24<210> 24

<211> 22<211> 22

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер Bacteroidetes<223> Bacteroidetes reverse primer

<400> 24<400> 24

tgccctttcg tagcaactag tg 22tgccctttcg tagcaactag tg 22

<210> 25<210> 25

<211> 18<211> 18

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер Actinobacteria<223> Actinobacteria Forward Primer

<400> 25<400> 25

tgtagcggtg gaatgcgc 18tgtagcggtg gaatgcgc 18

<210> 26<210> 26

<211> 21<211> 21

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер Actinobacteria<223> Actinobacteria reverse primer

<400> 26<400> 26

aattaagcca catgctccgc t 21aattaagcca catgctccgc t 21

<210> 27<210> 27

<211> 21<211> 21

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер дельта/гамма-proteobacteria<223> Forward primer delta/gamma proteobacteria

<400> 27<400> 27

gctaacgcat taagtryccc g 21gctaacgcat taagtryccc g 21

<210> 28<210> 28

<211> 18<211> 18

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер дельта/гамма-proteobacteria<223> Delta/gamma proteobacteria reverse primer

<400> 28<400> 28

gccatgcrgc acctgtct 18gccatgcrgc acctgtct 18

<210> 29<210> 29

<211> 19<211> 19

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Прямой праймер TM7<223> TM7 Forward Primer

<400> 29<400> 29

gcaactcttt acgcccagt 19gcaactcttt acgcccagt 19

<210> 30<210> 30

<211> 18<211> 18

<212> ДНК<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220><220>

<223> Обратный праймер TM7<223> TM7 reverse primer

<400> 30<400> 30

gagaggatga tcagccag 18gagaggatga tcagccag 18

<---<---

Claims (15)

1. Штамм KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76, обладающий индуцирующей экспрессию IL-10 активностью.1. KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76 strain with IL-10 expression inducing activity. 2. Штамм KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76 по п. 1, где указанный штамм KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76 содержит последовательность 16S rDNA под SEQ ID NO: 2.2. Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P according to claim 1, wherein said Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P contains the 16S rDNA sequence under SEQ ID NO: 2. 3. Штамм KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76 по п. 1, характеризующийся тем, что указанный штамм KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76 в качестве источника углерода использует L-арабинозу, D-рибозу, D-галактозу, D-глюкозу, D-фруктозу, D-маннозу, маннит, сорбит, N-ацетилглюкозамин, амигдалин, арбутин, эскулин, салицин, целлобиозу, мальтозу, лактозу, мелибиозу, сахарозу, трегалозу, рафинозу, гентиобиозу, D-туранозу и глюконат.3. Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P according to claim 1, characterized in that said Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P uses L-arabinose, D-ribose, D-galactose, D-glucose, D-fructose, D-mannose as a carbon source , mannitol, sorbitol, N-acetylglucosamine, amygdalin, arbutin, esculin, salicin, cellobiose, maltose, lactose, melibiose, sucrose, trehalose, raffinose, gentiobiose, D-turanose and gluconate. 4. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения аллергических заболеваний, вызванных реакцией гиперчувствительности 1-го типа, содержащая одно или более, выбранное из группы, состоящей из фармацевтически эффективного количества живых клеток штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76, неживых клеток штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76 и продукта культивирования штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76, где продукт культивирования включает штамм KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76.4. Pharmaceutical composition for the prevention or treatment of allergic diseases caused by a type 1 hypersensitivity reaction, containing one or more selected from the group consisting of a pharmaceutically effective amount of live cells of Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P, non-living cells of Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P and the product culturing Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P, wherein the culture product comprises Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P. 5. Фармацевтическая композиция по п. 4, где указанные аллергические заболевания, вызванные реакцией гиперчувствительности 1-го типа, представляют собой по меньшей мере одно заболевание, выбранное из группы, включающей ринит, атопию, астму, атопический дерматит, аллергический конъюнктивит, аллергический отит среднего уха, крапивницу и анафилактический шок.5. The pharmaceutical composition according to claim 4, wherein said allergic diseases caused by a type 1 hypersensitivity reaction are at least one disease selected from the group including rhinitis, atopy, asthma, atopic dermatitis, allergic conjunctivitis, allergic otitis media. ear, urticaria and anaphylactic shock. 6. Фармацевтическая композиция по п. 4, где указанная фармацевтическая композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей хитозан, инулин и цитрусовый пектин.6. The pharmaceutical composition according to claim 4, wherein said pharmaceutical composition further comprises at least one substance selected from the group consisting of chitosan, inulin, and citrus pectin. 7. Пищевая композиция для предупреждения или облегчения тяжести аллергических заболеваний, вызванных реакцией гиперчувствительности 1-го типа, содержащая одно или более, выбранное из группы, состоящей из живых клеток штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76, неживых клеток штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76 и продукта культивирования штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76, где продукт культивирования включает штамм KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76, и где количество штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76 составляет от 0,01 до 99 вес.% в пересчете на общий вес композиции.7. Food composition for the prevention or alleviation of the severity of allergic diseases caused by type 1 hypersensitivity reaction, containing one or more selected from the group consisting of live cells of Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P, non-living cells of Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P and a product of cultivation of the strain KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76, wherein the culture product comprises Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P, and wherein the amount of Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P is from 0.01 to 99% by weight based on the total weight of the composition. 8. Пищевая композиция по п. 7, где указанные аллергические заболевания, вызванные реакцией гиперчувствительности 1-го типа, представляют собой по меньшей мере одно заболевание, выбранное из группы, включающей ринит, атопию, астму, атопический дерматит, аллергический конъюнктивит, аллергический отит среднего уха, крапивницу и анафилактический шок.8. A food composition according to claim 7, wherein said allergic diseases caused by a type 1 hypersensitivity reaction are at least one disease selected from the group including rhinitis, atopy, asthma, atopic dermatitis, allergic conjunctivitis, allergic otitis media. ear, urticaria and anaphylactic shock. 9. Пищевая композиция по п. 7, где указанная пищевая композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы, включающей хитозан, инулин и цитрусовый пектин.9. A food composition according to claim 7, wherein said food composition further comprises at least one substance selected from the group consisting of chitosan, inulin, and citrus pectin. 10. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения иммунопатологических заболеваний, содержащая одно или более, выбранное из группы, состоящей из фармацевтически эффективного количества живых клеток штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76, неживых клеток штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76 и продукта культивирования штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76, где продукт культивирования предусматривает штамм KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76. 10. Pharmaceutical composition for the prevention or treatment of immunopathological diseases, containing one or more selected from the group consisting of a pharmaceutically effective amount of live cells of the strain KCCM11962PLactobacillus plantarum IM76, non-living cells of strain KCCM11962PLactobacillus plantarum IM76 and culture product of strain KCCM11962PLactobacillus plantarum IM76 where the culture product provides a strain KCCM11962PLactobacillus plantarum IM76. 11. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения воспалительных заболеваний, содержащая одно или более, выбранное из группы, состоящей из фармацевтически эффективного количества живых клеток штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76, неживых клеток штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76 и продукта культивирования штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76, где продукт культивирования предусматривает штамм KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76.11. Pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases, containing one or more selected from the group consisting of a pharmaceutically effective amount of live cells of Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P, non-living cells of Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P and a product of cultivation of Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P, where the culture product provides for Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P. 12. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения воспалительных заболеваний по п. 11, где указанные воспалительные заболевания представляют собой колит.12. A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases according to claim 11, wherein said inflammatory diseases are colitis. 13. Способ предупреждения или лечения аллергических заболеваний, вызванных реакцией гиперчувствительности 1-го типа, включающий стадию введения индивидууму штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76.13. A method for preventing or treating allergic diseases caused by a type 1 hypersensitivity reaction, comprising the step of administering Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P to an individual. 14. Применение штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76 при предупреждении или лечении аллергических заболеваний, вызванных реакцией гиперчувствительности 1-го типа.14. Use of Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P in the prevention or treatment of allergic diseases caused by type 1 hypersensitivity reaction. 15. Применение штамма KCCM11962P Lactobacillus plantarum IM76 в получении лекарственного средства для предупреждения или лечения аллергических заболеваний, вызванных реакцией гиперчувствительности 1-го типа.15. Use of Lactobacillus plantarum IM76 strain KCCM11962P in the preparation of a medicament for the prevention or treatment of allergic diseases caused by type 1 hypersensitivity reaction.
RU2021118078A 2017-01-31 2018-01-31 New lactobacillus plantarum strain, compositions containing it, and related method and its use RU2790442C2 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2017-0013632 2017-01-31
KR20170013632 2017-01-31

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019127021A Division RU2752157C2 (en) 2017-01-31 2018-01-31 New lactic acid bacteria and application thereof

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2021118078A RU2021118078A (en) 2021-08-31
RU2021118078A3 RU2021118078A3 (en) 2022-01-19
RU2790442C2 true RU2790442C2 (en) 2023-02-21

Family

ID=

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007040446A1 (en) * 2005-10-06 2007-04-12 Probi Ab Use of lactobacillus for treatment of autoimmune diseases
WO2011052996A2 (en) * 2009-10-28 2011-05-05 Cj Cheiljedang Corp. Novel lactobacillus plantarum and composition comprising the same
RU2563525C2 (en) * 2010-01-28 2015-09-20 Аб-Биотикс С.А. Probiotic composition for application in treatment of intestinal inflammation
JP2016136890A (en) * 2015-01-28 2016-08-04 株式会社ヤクルト本社 Enhancement method of interleukin 10 production inducing ability of lactic acid bacteria

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007040446A1 (en) * 2005-10-06 2007-04-12 Probi Ab Use of lactobacillus for treatment of autoimmune diseases
WO2011052996A2 (en) * 2009-10-28 2011-05-05 Cj Cheiljedang Corp. Novel lactobacillus plantarum and composition comprising the same
RU2563525C2 (en) * 2010-01-28 2015-09-20 Аб-Биотикс С.А. Probiotic composition for application in treatment of intestinal inflammation
JP2016136890A (en) * 2015-01-28 2016-08-04 株式会社ヤクルト本社 Enhancement method of interleukin 10 production inducing ability of lactic acid bacteria

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2752157C2 (en) New lactic acid bacteria and application thereof
US10844443B2 (en) Lactobacillus plantarum and composition comprising the same
US10405569B2 (en) Lanctobacillus plantarum HAC01 strain having anti-inflammatory efficacy and metabolic disease alleviating efficacy and use thereof
EP2455450B1 (en) Novel lactobacillus plantarum and composition containing same
JP2022071102A (en) Novel lactic acid bacteria and use thereof
KR101937364B1 (en) Novel lactic acid bacteria having immunoregulatory activities derived from human digestive tract and use thereof
EP4364583A1 (en) Composition comprising three lactobacillus sp. strains, and use thereof
KR102224072B1 (en) Bifidobacterium longum subsp. longum having both abilities of reducing total cholesterol in serum and immune regulation and its application
RU2790442C2 (en) New lactobacillus plantarum strain, compositions containing it, and related method and its use
EP3578637A1 (en) Novel lactic acid bacteria and use thereof
JP2003252772A (en) Agent for prevention, improvement and treatment of age-related metabolic disorder
US20220106559A1 (en) Novel kazachstania turicensis cau y1706 and composition using same
Kang et al. Limosilactobacillus fermentum ATG-V5 stimulates the immune response by enhancing gut microbiome and metabolite in a cyclophosphamide-induced immunosuppression mouse model
KR20070030961A (en) Antiallergic composition