RU2785429C2 - Пневмококковые полисахариды и их применение в иммуногенных конъюгатах полисахарид-белок-носитель - Google Patents
Пневмококковые полисахариды и их применение в иммуногенных конъюгатах полисахарид-белок-носитель Download PDFInfo
- Publication number
- RU2785429C2 RU2785429C2 RU2020112308A RU2020112308A RU2785429C2 RU 2785429 C2 RU2785429 C2 RU 2785429C2 RU 2020112308 A RU2020112308 A RU 2020112308A RU 2020112308 A RU2020112308 A RU 2020112308A RU 2785429 C2 RU2785429 C2 RU 2785429C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- polysaccharide
- carrier protein
- conjugate
- kda
- immunogenic composition
- Prior art date
Links
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 title claims abstract description 272
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 title claims abstract description 272
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 265
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 265
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 47
- 239000000969 carrier Substances 0.000 title claims abstract description 45
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 122
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 claims abstract description 18
- 229940031000 Streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims description 74
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 74
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 73
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 73
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 53
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims description 36
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 35
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 claims description 35
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 33
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 32
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 26
- 229960002885 Histidine Drugs 0.000 claims description 19
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K Aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 16
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminum Chemical group [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 12
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K Aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H Aluminium sulfate Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 2
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims 4
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 abstract description 49
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 14
- 239000002775 capsule Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 41
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 35
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 30
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 21
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 20
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 18
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 18
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 17
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 17
- 229940068977 Polysorbate 20 Drugs 0.000 description 17
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 17
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 17
- -1 pre immunization Proteins 0.000 description 17
- 229960002668 sodium chloride Drugs 0.000 description 17
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 15
- JRNVZBWKYDBUCA-UHFFFAOYSA-N N-Chlorosuccinimide Chemical compound ClN1C(=O)CCC1=O JRNVZBWKYDBUCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 13
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 13
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 13
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 13
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 13
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 13
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M Sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 12
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 12
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 11
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 11
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 11
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 11
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 11
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K Tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 10
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 10
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 10
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-M AC1L4ZKD Chemical compound [O-]I(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 9
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 9
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 9
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 9
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 9
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 9
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 8
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 8
- 229940068968 Polysorbate 80 Drugs 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 8
- 125000004432 carbon atoms Chemical group C* 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 8
- 230000001603 reducing Effects 0.000 description 8
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229940041514 Candida albicans extract Drugs 0.000 description 7
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 7
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N HEPES Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229920000272 Oligonucleotide Polymers 0.000 description 7
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Tris Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 7
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 7
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 7
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 7
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 7
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 7
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 7
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 6
- 229960004063 Propylene glycol Drugs 0.000 description 6
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 6
- YYGNTYWPHWGJRM-RUSDCZJESA-N Squalene Natural products C(=C\CC/C(=C\CC/C=C(\CC/C=C(\CC/C=C(\C)/C)/C)/C)/C)(\CC/C=C(\C)/C)/C YYGNTYWPHWGJRM-RUSDCZJESA-N 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 6
- 150000002009 diols Chemical group 0.000 description 6
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 239000002609 media Substances 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 6
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 6
- ODGROJYWQXFQOZ-UHFFFAOYSA-N sodium;boron(1-) Chemical compound [B-].[Na+] ODGROJYWQXFQOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 6
- 210000002421 Cell Wall Anatomy 0.000 description 5
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 5
- 102000004851 Immunoglobulin G Human genes 0.000 description 5
- 108090001095 Immunoglobulin G Proteins 0.000 description 5
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N MOPS Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N Sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K [O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 238000011118 depth filtration Methods 0.000 description 5
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 5
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 5
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 5
- 230000000171 quenching Effects 0.000 description 5
- 239000003638 reducing agent Substances 0.000 description 5
- YOQDYZUWIQVZSF-UHFFFAOYSA-N sodium borohydride Substances [BH4-].[Na+] YOQDYZUWIQVZSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000019798 tripotassium phosphate Nutrition 0.000 description 5
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N AI2O3 Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 108010008785 Diphtheria toxin fragment B Proteins 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 229960000502 Poloxamer Drugs 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 4
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 229960004418 Trolamine Drugs 0.000 description 4
- PRXRUNOAOLTIEF-XDTJCZEISA-N [2-[(2R,3S,4R)-4-hydroxy-3-[(Z)-octadec-9-enoyl]oxyoxolan-2-yl]-2-[(Z)-octadec-9-enoyl]oxyethyl] (Z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@@H](O)[C@@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-XDTJCZEISA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 4
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 4
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N iso-propanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000005080 one-dimensional TOCSY Methods 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000002633 protecting Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 238000005549 size reduction Methods 0.000 description 4
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 229940086735 succinate Drugs 0.000 description 4
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 238000001551 total correlation spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 229940029612 triethanolamine Drugs 0.000 description 4
- JYCQQPHGFMYQCF-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethanol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(OCCO)C=C1 JYCQQPHGFMYQCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 2qpq Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- MBLVMDCQDCVKNE-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)pyridin-1-ium-1-carbonitrile;tetrafluoroborate Chemical compound F[B-](F)(F)F.CN(C)C1=CC=[N+](C#N)C=C1 MBLVMDCQDCVKNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002449 Glycine Drugs 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 3
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L MgCl2 Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- ODUCDPQEXGNKDN-UHFFFAOYSA-N Nitroxyl Chemical compound O=N ODUCDPQEXGNKDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 description 3
- 229940031439 Squalene Drugs 0.000 description 3
- QYTDEUPAUMOIOP-UHFFFAOYSA-N TEMPO Chemical group CC1(C)CCCC(C)(C)N1[O] QYTDEUPAUMOIOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 3
- 208000001877 Whooping Cough Diseases 0.000 description 3
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 3
- 229940047712 aluminum hydroxyphosphate Drugs 0.000 description 3
- FHMMJIDFTOXTRG-UHFFFAOYSA-H aluminum;hydroxy phosphate Chemical compound [Al].[Al].OOP([O-])([O-])=O.OOP([O-])([O-])=O.OOP([O-])([O-])=O FHMMJIDFTOXTRG-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic Effects 0.000 description 3
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 3
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 150000002243 furanoses Chemical group 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037240 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 3
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 125000001434 methanylylidene group Chemical group [H]C#[*] 0.000 description 3
- 238000001012 micellar electrokinetic chromatography Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 3
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic Effects 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 3
- 229920002114 octoxynol-9 Polymers 0.000 description 3
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N oxane Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000005702 pertussis Diseases 0.000 description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCN1C(=O)C=CC1=O PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LINZYZMEBMKKIT-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) N-quinolin-6-ylcarbamate Chemical compound C=1C=C2N=CC=CC2=CC=1NC(=O)ON1C(=O)CCC1=O LINZYZMEBMKKIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N (3β)-Cholest-5-en-3-ol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-morpholin-4-ium-4-ylpropane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCOCC1 NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XCBLFURAFHFFJF-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(2-hydroxyethyl)azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)CS(O)(=O)=O XCBLFURAFHFFJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101700023105 3L21 Proteins 0.000 description 2
- VTOWJTPBPWTSMK-UHFFFAOYSA-N 4-morpholin-4-ylbutane-1-sulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCCN1CCOCC1 VTOWJTPBPWTSMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N Adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019737 Animal fat Nutrition 0.000 description 2
- 206010003997 Bacteraemia Diseases 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 206010060945 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 229940098773 Bovine Serum Albumin Drugs 0.000 description 2
- 108091003117 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108010034055 CRM45 fragment of diphtheria toxin Proteins 0.000 description 2
- 102100006400 CSF2 Human genes 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate dianion Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000759568 Corixa Species 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 229940009976 Deoxycholate Drugs 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 101700032127 ETX1 Proteins 0.000 description 2
- 101700029730 ETX2 Proteins 0.000 description 2
- 231100000655 Enterotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 108010062933 Haemophilus influenzae glpQ protein Proteins 0.000 description 2
- QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N Isoniazid Chemical compound NNC(=O)C1=CC=NC=C1 QRXWMOHMRWLFEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229920002884 Laureth 4 Polymers 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 206010027253 Meningitis pneumococcal Diseases 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-XIXRPRMCSA-N Mesotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-XIXRPRMCSA-N 0.000 description 2
- 210000004080 Milk Anatomy 0.000 description 2
- PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N N-Bromosuccinimide Chemical compound BrN1C(=O)CCC1=O PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQZMLBORDGWNPD-UHFFFAOYSA-N N-iodosuccinimide Chemical compound IN1C(=O)CCC1=O LQZMLBORDGWNPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940066429 Octoxynol Drugs 0.000 description 2
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 2
- 208000004593 Pneumococcal Meningitis Diseases 0.000 description 2
- 229960001973 Pneumococcal vaccines Drugs 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 229940044519 Poloxamer 188 Drugs 0.000 description 2
- 229940068918 Polyethylene Glycol 400 Drugs 0.000 description 2
- FJVZDOGVDJCCCR-UHFFFAOYSA-M Potassium periodate Chemical compound [K+].[O-]I(=O)(=O)=O FJVZDOGVDJCCCR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N Rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 2
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 2
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 2
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 2
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 2
- 101700057439 TOXA Proteins 0.000 description 2
- 108060008443 TPPP Proteins 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N Trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010001801 Tumor Necrosis Factor-alpha Proteins 0.000 description 2
- JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N [(2R)-3-[2-[[(2S)-2-[[(4R)-4-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[(3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxypropanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-amino-5-oxopentanoyl]amino]propanoyl]amino]ethoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-2-hexadecanoyloxypropyl] hexad Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COP(O)(=O)OCCNC(=O)[C@H](C)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1NC(C)=O JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000001058 adult Effects 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-M aminoacetate Chemical compound NCC([O-])=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000004429 atoms Chemical group 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 2
- 101710023118 btfP Proteins 0.000 description 2
- 230000003139 buffering Effects 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L cacl2 Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 108010031071 cholera toxoid Proteins 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement Effects 0.000 description 2
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 239000004643 cyanate ester Substances 0.000 description 2
- 239000011928 denatured alcohol Substances 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-M deoxycholate Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-M 0.000 description 2
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N dimethyl ether Chemical class COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 2
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000002964 excitative Effects 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 2
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 2
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229940062711 laureth-9 Drugs 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-L maleate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)\C=C/C([O-])=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-L 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 229960005225 mifamurtide Drugs 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid A Drugs 0.000 description 2
- 230000001459 mortal Effects 0.000 description 2
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 2
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 2
- TWLXDPFBEPBAQB-UHFFFAOYSA-I orthoperiodate(5-) Chemical compound [O-]I([O-])([O-])([O-])([O-])=O TWLXDPFBEPBAQB-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 230000036961 partial Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 2
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 101700032180 psaA Proteins 0.000 description 2
- 150000003214 pyranose derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory Effects 0.000 description 2
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- AGGHKNBCHLWKHY-UHFFFAOYSA-N sodium;triacetyloxyboron(1-) Chemical compound [Na+].CC(=O)O[B-](OC(C)=O)OC(C)=O AGGHKNBCHLWKHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 2
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 2
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N trehalose 6,6'-dimycolate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C(CCCCCCCCCCC3C(C3)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O2)O)O1)O)OC(=O)C(C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)CCCCCCCCCCC1CC1CCCCCCCCCCCCCCCCCC XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N water-d2 Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 2
- NKUZQMZWTZAPSN-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2-bromoacetate Chemical compound BrCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O NKUZQMZWTZAPSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WGMMKWFUXPMTRW-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-[(2-bromoacetyl)amino]propanoate Chemical compound BrCC(=O)NCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O WGMMKWFUXPMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoate Chemical compound C1=CC(NC(=O)CI)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMRWNKZVCUKKSR-UHFFFAOYSA-N 1,2-Butanediol Chemical compound CCC(O)CO BMRWNKZVCUKKSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000000179 1,2-aminoalcohols Chemical group 0.000 description 1
- HTFVKMHFUBCIMH-UHFFFAOYSA-N 1,3,5-triiodo-1,3,5-triazinane-2,4,6-trione Chemical compound IN1C(=O)N(I)C(=O)N(I)C1=O HTFVKMHFUBCIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HHBCEKAWSILOOP-UHFFFAOYSA-N 1,3-dibromo-1,3,5-triazinane-2,4,6-trione Chemical compound BrN1C(=O)NC(=O)N(Br)C1=O HHBCEKAWSILOOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 0.000 description 1
- QZTKDVCDBIDYMD-UHFFFAOYSA-N 2,2'-[(2-amino-2-oxoethyl)imino]diacetic acid Chemical compound NC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O QZTKDVCDBIDYMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWBTYPJTUOEWEK-UHFFFAOYSA-N 2,3-Butanediol Chemical compound CC(O)C(C)O OWBTYPJTUOEWEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FKMHSNTVILORFA-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCO FKMHSNTVILORFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJTVSSFTXWNIRG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(2-hydroxyethyl)amino]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+](CCO)CCS([O-])(=O)=O AJTVSSFTXWNIRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-[4-(2-hydroxy-3-sulfonatopropyl)piperazine-1,4-diium-1-yl]propane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSXUNHYXJWDLDK-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1-sulfonic acid Chemical compound CC(O)CS(O)(=O)=O HSXUNHYXJWDLDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- 238000003979 3D HSQC-TOCSY Methods 0.000 description 1
- 101700012833 3S11 Proteins 0.000 description 1
- OTLNPYWUJOZPPA-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 OTLNPYWUJOZPPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N Adipic acid dihydrazide Chemical compound NNC(=O)CCCCC(=O)NN IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910018626 Al(OH) Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000510 Ammonia Drugs 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N Ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001212 BACTERIAL VACCINES Drugs 0.000 description 1
- 108010071023 Bacterial Outer Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N Benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N Bicine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N Bis-tris methane Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- KKAXNAVSOBXHTE-UHFFFAOYSA-N Boranamine Chemical class NB KKAXNAVSOBXHTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007848 Bronsted acid Substances 0.000 description 1
- MTNGROIEEUCDSK-UHFFFAOYSA-N CC[IH]N1C(=O)C1=O Chemical compound CC[IH]N1C(=O)C1=O MTNGROIEEUCDSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010053406 CRM 107 Proteins 0.000 description 1
- 210000001736 Capillaries Anatomy 0.000 description 1
- 229940107161 Cholesterol Drugs 0.000 description 1
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 1
- 108009000280 Complement Activation Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 229940099500 Cystamine Drugs 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N Cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940119025 Cysteamine Drugs 0.000 description 1
- CEJLBZWIKQJOAT-UHFFFAOYSA-N Dichloroisocyanuric acid Chemical compound ClN1C(=O)NC(=O)N(Cl)C1=O CEJLBZWIKQJOAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N Diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010013023 Diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 238000001061 Dunnett's test Methods 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N Ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N Gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N Glutathione Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 229960003180 Glutathione Drugs 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Chemical group 0.000 description 1
- RBNPOMFGQQGHHO-UHFFFAOYSA-N Glyceric acid Chemical compound OCC(O)C(O)=O RBNPOMFGQQGHHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N HEPPS Chemical compound OCCN1CCN(CCCS(O)(=O)=O)CC1 OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GIZQLVPDAOBAFN-UHFFFAOYSA-N HEPPSO Chemical compound OCCN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 GIZQLVPDAOBAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940025294 Hemin Drugs 0.000 description 1
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K Hemin Chemical compound CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 description 1
- 229940042795 Hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- AWAFMFHOLVZLFG-UHFFFAOYSA-N IN1C(=O)C1=O Chemical compound IN1C(=O)C1=O AWAFMFHOLVZLFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000745 Immune Sera Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 229940027941 Immunoglobulin G Drugs 0.000 description 1
- 210000004283 Incisor Anatomy 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 229940047124 Interferons Drugs 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 229940047122 Interleukins Drugs 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 125000002066 L-histidyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[C@](C(=O)[*])([H])N([H])[H])=C1[H] 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 229940067606 Lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000002841 Lewis acid Substances 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229960003151 Mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- 241000872931 Myoporum sandwicense Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-hydroxy-Succinimide Chemical group ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 1
- 208000009025 Nervous System Disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 1
- 108091005503 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- MXRIRQGCELJRSN-UHFFFAOYSA-N O.O.O.[Al] Chemical compound O.O.O.[Al] MXRIRQGCELJRSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VQWNELVFHZRFIB-UHFFFAOYSA-N ODN 1826 Chemical group O=C1NC(=O)C(C)=CN1C(O1)CC(O)C1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC(C(O1)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(O)=O)CC1N1C=C(C)C(=O)NC1=O VQWNELVFHZRFIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940098514 Octoxynol-9 Drugs 0.000 description 1
- 229940092253 Ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000237988 Patellidae Species 0.000 description 1
- 102000035443 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005771 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 210000003800 Pharynx Anatomy 0.000 description 1
- AQSJGOWTSHOLKH-UHFFFAOYSA-N Phosphite Chemical group [O-]P([O-])[O-] AQSJGOWTSHOLKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940067631 Phospholipids Drugs 0.000 description 1
- 208000009362 Pneumococcal Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010058859 Pneumococcal bacteraemia Diseases 0.000 description 1
- 206010061353 Pneumococcal infection Diseases 0.000 description 1
- 206010035728 Pneumonia pneumococcal Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 229940044476 Poloxamer 407 Drugs 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920000604 Polyethylene Glycol 200 Polymers 0.000 description 1
- 229920002556 Polyethylene Glycol 300 Polymers 0.000 description 1
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 102000017033 Porins Human genes 0.000 description 1
- 108010013381 Porins Proteins 0.000 description 1
- 239000004146 Propane-1,2-diol Substances 0.000 description 1
- 229940055023 Pseudomonas aeruginosa Drugs 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 108010077397 Pseudomonas aeruginosa toxA protein Proteins 0.000 description 1
- 108010033725 Recombinant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007312 Recombinant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001243925 Sia Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- JNYAEWCLZODPBN-CTQIIAAMSA-N Sorbitan Chemical class OCC(O)C1OCC(O)[C@@H]1O JNYAEWCLZODPBN-CTQIIAAMSA-N 0.000 description 1
- 239000004147 Sorbitan trioleate Substances 0.000 description 1
- 229960000391 Sorbitan trioleate Drugs 0.000 description 1
- 108010007006 Streptococcus pneumoniae plY protein Proteins 0.000 description 1
- 241001505901 Streptococcus sp. 'group A' Species 0.000 description 1
- 241000193990 Streptococcus sp. 'group B' Species 0.000 description 1
- 231100000765 Toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108010062476 Transferrin-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010912 Transferrin-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- ZKWDCFPLNQTHSH-UHFFFAOYSA-N Tribromoisocyanuric acid Chemical compound BrN1C(=O)N(Br)C(=O)N(Br)C1=O ZKWDCFPLNQTHSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRIZYWQGELRKNT-UHFFFAOYSA-N Trichloroisocyanuric acid Chemical compound ClN1C(=O)N(Cl)C(=O)N(Cl)C1=O YRIZYWQGELRKNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPKOPBFLPLFWAD-UHFFFAOYSA-N Trinitrotoluene Chemical compound CC1=CC=C([N+]([O-])=O)C([N+]([O-])=O)=C1[N+]([O-])=O FPKOPBFLPLFWAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Trioxopurine Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940116269 Uric Acid Drugs 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Vitamin C Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- LWZFANDGMFTDAV-BURFUSLBSA-N [(2R)-2-[(2R,3R,4S)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]-2-hydroxyethyl] dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O LWZFANDGMFTDAV-BURFUSLBSA-N 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2S,3R,4S,5R,6R)-4-[(2S,3R,4S,5R,6R)-4-[(2R,3R,4S,5R,6R)-4-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O Chemical class [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YEBLHMRPZHNTEK-UHFFFAOYSA-N [dimethylamino-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxymethylidene]-dimethylazanium;tetrafluoroborate Chemical compound F[B-](F)(F)F.CN(C)C(=[N+](C)C)ON1C(=O)CCC1=O YEBLHMRPZHNTEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive Effects 0.000 description 1
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000009632 agar plate Methods 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic Effects 0.000 description 1
- PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose 5-phosphate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 101710037563 alpha-delta-Bgt-2 Proteins 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- MHCAFGMQMCSRGH-UHFFFAOYSA-N aluminum;hydrate Chemical compound O.[Al] MHCAFGMQMCSRGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHHVYBBTKTVOPA-UHFFFAOYSA-K aluminum;sodium;phosphate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-]P([O-])([O-])=O GHHVYBBTKTVOPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- YVKMMZAFUFUAAX-UHFFFAOYSA-N aluminum;tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.[Al] YVKMMZAFUFUAAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial Effects 0.000 description 1
- 230000003497 anti-pneumococcal Effects 0.000 description 1
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional Effects 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M bisulfite Chemical group OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CROBTXVXNQNKKO-UHFFFAOYSA-N borohydride Chemical group [BH4-] CROBTXVXNQNKKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QHXLIQMGIGEHJP-UHFFFAOYSA-N boron;2-methylpyridine Chemical compound [B].CC1=CC=CC=N1 QHXLIQMGIGEHJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPEPQDBAIMZCGV-UHFFFAOYSA-N boron;5-ethyl-2-methylpyridine Chemical compound [B].CCC1=CC=C(C)N=C1 VPEPQDBAIMZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RJTANRZEWTUVMA-UHFFFAOYSA-N boron;N-methylmethanamine Chemical compound [B].CNC RJTANRZEWTUVMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2S)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 101700067277 chxA Proteins 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory Effects 0.000 description 1
- 230000001808 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 101700041767 ctxA Proteins 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- IUDSCMPRPHGDII-UHFFFAOYSA-N cyanoboranuide Chemical class [BH3-]C#N IUDSCMPRPHGDII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N cystamine Chemical compound CCSSCCN OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 229940043237 diethanolamine Drugs 0.000 description 1
- GMHSTJRPSVFLMT-UHFFFAOYSA-L disodium PIPES Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)CCN1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 GMHSTJRPSVFLMT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- WBZKQQHYRPRKNJ-UHFFFAOYSA-L disulfite Chemical group [O-]S(=O)S([O-])(=O)=O WBZKQQHYRPRKNJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GRWZHXKQBITJKP-UHFFFAOYSA-L dithionite(2-) Chemical group [O-]S(=O)S([O-])=O GRWZHXKQBITJKP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N ethanesulfonic acid Chemical compound CCS(O)(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- SFNALCNOMXIBKG-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol monododecyl ether Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCO SFNALCNOMXIBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002194 fatty esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000005350 fused silica glass Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004340 gradient COSY Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 101700068005 hbhA Proteins 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin family Proteins 0.000 description 1
- SYECJBOWSGTPLU-UHFFFAOYSA-N hexane-1,1-diamine Chemical compound CCCCCC(N)N SYECJBOWSGTPLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical group OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N hydroxylamine group Chemical group NO AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotection Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 150000007517 lewis acids Chemical class 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A Chemical class O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 125000001288 lysyl group Chemical group 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 1
- 201000009906 meningitis Diseases 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 1
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing Effects 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 229920000847 nonoxynol Polymers 0.000 description 1
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 1
- 125000002868 norbornyl group Chemical group C12(CCC(CC1)C2)* 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000007335 nucleophilic acyl substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000238 one-dimensional nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000000625 opsonophagocytic Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000007248 oxidative elimination reaction Methods 0.000 description 1
- DEXYJUXHQAHAHH-UHFFFAOYSA-N oxoazanium Chemical class O=[NH2+] DEXYJUXHQAHAHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N pentaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCO JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- PYOZTOXFQNWBIS-UHFFFAOYSA-N phenol;sodium Chemical compound [Na].OC1=CC=CC=C1 PYOZTOXFQNWBIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- ACVYVLVWPXVTIT-UHFFFAOYSA-M phosphinate Chemical group [O-][PH2]=O ACVYVLVWPXVTIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical group OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710031800 phtx Proteins 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 108010040473 pneumococcal surface protein A Proteins 0.000 description 1
- 229920001992 poloxamer 407 Polymers 0.000 description 1
- 229920000371 poly(diallyldimethylammonium chloride) polymer Polymers 0.000 description 1
- 108091008117 polyclonal antibodies Proteins 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920002523 polyethylene Glycol 1000 Polymers 0.000 description 1
- 229920000023 polynucleotide Polymers 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 description 1
- 150000007519 polyprotic acids Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating Effects 0.000 description 1
- 230000002335 preservative Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000009516 primary packaging Methods 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 101700034429 prsG Proteins 0.000 description 1
- LPGWNCNRGQANGC-UHFFFAOYSA-N pyridin-1-ium-1-ylboranuide Chemical compound [BH3-][N+]1=CC=CC=C1 LPGWNCNRGQANGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000006485 reductive methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 231100000185 significant adverse effect Toxicity 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009890 sinusitis Diseases 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- 238000000235 small-angle X-ray scattering Methods 0.000 description 1
- 238000001998 small-angle neutron scattering Methods 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- PHPHRWZFQRLJIA-UZUGEDCSSA-M sodium;(2S,3R,4S,5S,6R)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol;chloride Chemical compound [Na+].[Cl-].OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O PHPHRWZFQRLJIA-UZUGEDCSSA-M 0.000 description 1
- HWEXKRHYVOGVDA-CHBZFOKHSA-M sodium;1,1,2,2,3,3-hexadeuterio-3-trimethylsilylpropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].C[Si](C)(C)C([2H])([2H])C([2H])([2H])C([2H])([2H])S([O-])(=O)=O HWEXKRHYVOGVDA-CHBZFOKHSA-M 0.000 description 1
- HQYSIIBSDLWUEX-UHFFFAOYSA-N sodium;tetrakis[3,5-bis(1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-methoxypropan-2-yl)phenyl]boranuide;trihydrate Chemical compound O.O.O.[Na+].COC(C(F)(F)F)(C(F)(F)F)C1=CC(C(OC)(C(F)(F)F)C(F)(F)F)=CC([B-](C=2C=C(C=C(C=2)C(OC)(C(F)(F)F)C(F)(F)F)C(OC)(C(F)(F)F)C(F)(F)F)(C=2C=C(C=C(C=2)C(OC)(C(F)(F)F)C(F)(F)F)C(OC)(C(F)(F)F)C(F)(F)F)C=2C=C(C=C(C=2)C(OC)(C(F)(F)F)C(F)(F)F)C(OC)(C(F)(F)F)C(F)(F)F)=C1 HQYSIIBSDLWUEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 235000019337 sorbitan trioleate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000001370 static light scattering Methods 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 235000011044 succinic acid Nutrition 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002522 swelling Effects 0.000 description 1
- 201000010874 syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- YHJJDHJCZBKHCG-UHFFFAOYSA-B tetraaluminum;trichloride;triphosphate Chemical compound [Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O YHJJDHJCZBKHCG-UHFFFAOYSA-B 0.000 description 1
- DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L thiosulfate(2-) Chemical group [O-]S([S-])(=O)=O DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101700080113 toxB Proteins 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 108020003112 toxins Proteins 0.000 description 1
- 229910052723 transition metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003624 transition metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000004684 trihydrates Chemical class 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000214 vapour pressure osmometry Methods 0.000 description 1
- 238000000196 viscometry Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- LRBFVXSJYHCJKD-UHFFFAOYSA-N zinc;boron(1-) Chemical compound [B-].[B-].[Zn+2] LRBFVXSJYHCJKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Abstract
Группа изобретений относится к области биохимии и иммунологии, а именно к капсульным полисахаридам из серотипов Streptococcus pneumoniae. Раскрывается конъюгат полисахарид-белок-носитель, в котором полисахарид содержит повторяющееся звено представленной структуры и где белок-носитель представляет собой CRM197; и дополнительно где конъюгат имеет молекулярную массу от 1000 до 10000 кДа. Кроме того, описаны иммуногенные композиции, содержащие вышеуказанный конъюгат полисахарид-белок-носитель и фармацевтически приемлемый носитель, а также способы индукции иммунного ответа на капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae, включающие введение иммунологически эффективных количеств раскрытых иммуногенных композиций. Группа изобретений обеспечивает высокую иммуногенность, что может использоваться в мультивалентных пневмококковых конъюгированных вакцинах. 7 н. и 29 з.п. ф-лы, 14 ил., 1 табл., 8 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к очищенным капсульным полисахаридам из Streptococcus pneumoniae серотипа 24F и к конъюгатам полисахарид-белок, имеющим полисахариды из этого серотипа. Конъюгаты полисахарид-белок из этого серотипа можно включать в мультивалентные пневмококковые конъюгированные вакцины.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ДЛЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Streptococcus pneumoniae, один из примеров инкапсулированной бактерии, является значительной причиной серьезного заболевания в всем мире. В 1997 г. Центры контроля и профилактики заболеваний (CDC) оценивали наличие 3000 случаев пневмококкового менингита, 50000 случаев пневмококковой бактериемии, 7000000 случаев пневмококкового среднего отита и 500000 случаев пневмококковой пневмонии ежегодно в Соединенных Штатах. См. Centers for Disease Control and Prevention, MMWR Morb Mortal Wkly Rep 1997, 46(RR-8):1-13. Кроме того, осложнения этих заболеваний могут являться значительными, где в некоторых исследованиях опубликовано до 8% смертности и 25% неврологических осложнений при пневмококковом менингите. См. Arditi et al., 1998, Pediatrics 102:1087-97.
Доказано, что мультивалентные пневмококковые полисахаридные вакцины, лицензированные в течение многих лет, являются неоценимыми для предотвращения пневмококкового заболевания у взрослых, в частности, пожилых и подверженных высокому риску. Однако дети грудного и раннего возраста плохо отвечают на неконъюгированные пневмококковые полисахариды. Бактериальные полисахариды представляют собой не зависимые от T-клеток иммуногены, вызывающие слабый ответ или не вызывающие ответа у детей грудного возраста. Химическая конъюгация иммуногена бактериального полисахарида с белком-носителем переводит иммунный ответ в зависимый от T-клеток ответ у детей грудного возраста. Дифтерийный анатоксин (DTx, химически детоксифицированный вариант DT) и CRM197 описаны как белки-носители для бактериальных полисахаридных иммуногенов из-за присутствия стимулирующих T-клетки эпитопов в их аминокислотных последовательностях.
Пневмококковая конъюгированная вакцина, Prevnar®, содержащая 7 наиболее часто выделяемых серотипов (4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F и 23F), вызывающих инвазивное пневмококковое заболевание у детей раннего возраста и детей грудного возраста на тот момент, впервые лицензирована в Соединенных Штатах в феврале 2000 г. После универсального применения Prevnar® в Соединенных Штатах, присутствовало значительное уменьшение случаев инвазивного пневмококкового заболевания у детей из-за серотипов, присутствующих в Prevnar®. См. Centers for Disease Control and Prevention, MMWR Morb Mortal Wkly Rep 2005, 54(36):893-7. Однако, существуют ограничения перекрывания серотипов с использованием Prevnar® в определенных районах мира, и некоторые доказательства появления определенных серотипов в Соединенных Штатах (например, 19A и других). См. O'Brien et al., 2004, Am J Epidemiol 159:634-44; Whitney et al., 2003, N Engl J Med 348:1737-46; Kyaw et al., 2006, N Engl J Med 354:1455-63; Hicks et al., 2007, J Infect Dis 196:1346-54; Traore et al., 2009, Clin Infect Dis 48:S181-S189.
Prevnar 13® представляет собой 13-валентную конъюгированную вакцину пневмококковый полисахарид-белок, включающую серотипы 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F. См., например, Публикацию патентной заявки США No. US 2006/0228380 A1, Prymula et al., 2006, Lancet 367:740-48 и Kieninger et al., Safety and Immunologic Non-inferiority of 13-valent Pneumococcal Conjugate Vaccine Compared to 7-valent Pneumococcal Conjugate Vaccine Given as a 4-Dose Series in Healthy Infants and Toddlers, presented at the 48th Annual ICAAC/ISDA 46th Annual Meeting, Washington DC, October 25-28, 2008. См. также Dagan et al., 1998, Infect Immun. 66: 2093-2098 и Fattom, 1999, Vaccine 17:126.
S. pneumoniae разделен на категории из более чем девяноста серотипов, на основании структуры капсульного полисахарида. Список известных структур пневмококковых капсульных полисахаридов представлен в Geno, 2015, Clinical Microbiology Reviews 28:871-899.
Современные мультивалентные пневмококковые конъюгированные вакцины являлись эффективными при уменьшении встречаемости пневмококкового заболевания, ассоциированного с теми серотипами, которые присутствуют в вакцинах. Однако, распространенность пневмококков, экспрессирующих серотипы, не присутствующие в вакцине, увеличилась. Соответственно, существует необходимость идентификации и характеризации появляющихся пневмококковых серотипов для включения в будущие вакцины.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к очищенным капсульным полисахаридам из Streptococcus pneumoniae серотипа 24F, и к конъюгатам полисахарид-белок, имеющим этот серотип. Настоящее изобретение основано, частично, на структурной идентификации капсульных полисахаридов из этого серотипа.
Соответственно, в одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к полисахариду со следующим повторяющимся звеном:
Полисахарид из Streptococcus pneumoniae серотипа 24F можно представлять следующей формулой
где n представляет собой количество повторяющихся звеньев.
В конкретных вариантах осуществления, полисахарид имеет между 5 и 5000 повторяющихся звеньев. В конкретных аспектах, полисахарид имеет между 10 и 3000, 20 и 2000, 50 и 1500, или 100 и 1000 повторяющихся звеньев.
В конкретных вариантах осуществления, полисахарид имеет молекулярную массу от 5 кДа до 5000 кДа. В конкретных аспектах, полисахарид имеет молекулярную массу от 10 кДа до 2000 кДа, от 50 кДа до 1500 кДа или от 100 кДа до 1000 кДа.
Кроме того, настоящее изобретение относится к активированным полисахаридам, полученным в любом из вышеуказанных вариантов осуществления, где полисахарид активируют с использованием химического реагента для получения реакционноспособных групп для конъюгации с линкером или белком-носителем. В конкретных вариантах осуществления, активация происходит на арабинит-1-PO4. В конкретных вариантах осуществления, полисахарид активируют с использованием периодата. В конкретных аспектах этого варианта осуществления, активация происходит в положении 2 арабинит-1-PO4.
Кроме того, настоящее изобретение относится к конъюгатам полисахарид-белок, в котором полисахариды или активированные полисахариды, как представлено выше, конъюгируют с белком-носителем. В конкретных аспектах, белок-носитель выбран из CRM197, фрагмента B дифтерийного токсина (DTFB), DTFB C8, дифтерийного анатоксина (DT), столбнячного анатоксина (TT), фрагмента C TT, коклюшного анатоксина, холерного анатоксина, LT E. coli, ST E. coli и экзотоксина A из Pseudomonas aeruginosa. В одном специфическом аспекте, белок-носитель представляет собой CRM197.
В конкретных аспектах, конъюгаты полисахарид-белок получают с использованием химических реакций восстановительного аминирования в водных условиях или в апротонном растворителе, таком как диметилсульфоксид (DMSO). В конкретном аспекте, конъюгаты полисахарид-белок получают с использованием химических реакций восстановительного аминирования в DMSO.
В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к мультивалентной иммуногенной композиции, содержащей неконъюгированные полисахариды или конъюгаты полисахарид-белок из Streptococcus pneumoniae серотипа 24F, и неконъюгированные полисахариды или конъюгаты полисахарид-белок из одного или нескольких из серотипов Streptococcus pneumoniae 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 6C, 6D, 7B, 7C, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18B, 18C, 19A, 19F, 20, 21, 22A, 22F, 23A, 23B, 23F, 24B, 27, 28A, 31, 33F, 34, 35A, 35B, 35F и 38. В одном субварианте осуществления, мультивалентная иммуногенная композиция содержит неконъюгированные полисахариды или конъюгаты полисахарид-белок-носитель, но не оба. В одном субварианте осуществления, мультивалентная иммуногенная композиция содержит смесь неконъюгированных полисахаридов или конъюгатов полисахарид-белок-носитель. В конкретных субвариантах осуществления, мультивалентная иммуногенная композиция по изобретению имеет вплоть до 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 или 90 серотипов.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг. 1A-B показано графическое представление структуры повторяющегося звена A) полисахарида S. pneumoniae серотипа 24F; и B) повторяющейся структуры активированного периодатом S. pneumoniae серотипа 24F. Следует отметить, что структура, показанная на фигуре 1B, предназначена, чтобы показать преобладающий участок активации (в форме активированного сахарида). Необязательно, чтобы в полисахаридной цепи, все из повторяющихся звеньев являлись активированными, как изображено на фигуре 1B.
На фиг. 2 показан спектр одномерного 1H ЯМР при 600 МГц для капсульного полисахарида из S. pneumoniae серотипа 24F в D2O при 50°C. Отмечены сигналы от внутренних стандартов (DMSO и DSS-d6), остаточной воды (HOD) и других остаточных компонентов процесса очистки; этанола (EtOH), изопропанола (IPA) и ацетата. Минорные сигналы, отмеченные *, обусловлены остатками клеточной стенки S. pneumoniae, такими как C-полисахарид и/или пептидогликаны.
На фиг. 3 показана область идентичности одномерного (1D) 1H ЯМР для использования для идентификации серотипов S. pneumoniae серотипа 24F. Отмечены положения сигнала каждого аномерного протона повторяющихся звеньев из остатка моносахарида.
На фиг. 4 показан частичный двумерный (2D) спектр ЯМР для корреляции множества связей 1H - 13C для S. pneumoniae серотипа 24F, образующего ковалентные связи между остатками сахара в повторяющейся структуре. Образующие корреляцию гликозидные связи отмечены на фигуре.
На фиг. 5 изображено образование фосфодиэфирных связей в повторяющейся единице капсульного полисахарида S. pneumoniae серотипа 24F.
Фиг. 6 - Верхний спектр; 1D TOCSY активированного полисахарида серотипа 24F с центром возбуждения на пике 5,19 м.д., показывающий отдельную корреляцию с сигналом при 3,86 м.д. Нижний спектр представляет собой стандартный 1D протонный спектр серотипа 24F, идентифицирующий триплет при 5,19 м.д.
Фиг. 7 - Верхний спектр показывает 1D TOCSY активированного полисахарида серотипа 24F полисахарид с центром возбуждения на сигнале 5,19 м.д. Нижняя фигура представляет собой gHSQCAD с коррекцией на множественность. Закрашенные овалы представляют собой метильные и метиновые группы, незакрашенные овалы представляют собой метилены.
На фиг. 8: показаны титры в ELISA антитела IgG (после дозирования 2) для кроликов, иммунизированных с использованием моновалентных серотипов S. pneumoniae, конъюгированных с CRM197 и составленных с адъювантом фосфатом алюминия (APA). Планки погрешностей представляют среднее геометрическое+95% доверительный интервал.
На фиг. 9: показаны титры специфических для серотипа OPA (после дозирования 2) для кроликов, иммунизированных с использованием моновалентных серотипов S. pneumoniae, конъюгированных с CRM197 и составленных с адъювантом фосфатом алюминия (APA). Планки погрешностей представляют среднее геометрическое+95% доверительный интервал.
На фиг. 10 показана защита от интратрахеального заражения S. pneumoniae серотипа 24F для мышей C57BL/6, иммунизированных с использованием моновалентной конъюгированной вакцины 24F-CRM197, составленной с адъювантом фосфатом алюминия (APA). Логарифмический ранговый критерий Мантеля-Кокса значимо показывает для мышей C57BL/6, иммунизированных с использованием вакцины 24F-CRM197/APA, защиту от заражения, по сравнению как с мышами, иммунизированными APA (P=0,0004), так и с наивными мышами (P<0,0001).
На фиг. 11 показана защита от интратрахеального заражения S. pneumoniae серотипа 24F для мышей CD-1, иммунизированных с использованием моновалентной конъюгированной вакцины 24F-CRM197, составленной с адъювантом фосфатом алюминия (APA). Логарифмический ранговый критерий Мантеля-Кокса значимо показывает для мышей CD-1, иммунизированных с использованием вакцины 24F-CRM197/APA, защиту от заражения, по сравнению как с мышами, иммунизированными APA (P=0,0099), так и с наивными мышами (P=0,0076).
На фиг. 12 показана защита от интратрахеального заражения S. pneumoniae серотипа 24F для швейцарских мышей Вебстер, иммунизированных с использованием моновалентной конъюгированной 24F-CRM197, составленной с адъювантом фосфатом алюминия (APA). Логарифмический ранговый критерий Мантеля-Кокса значимо показывает для швейцарских мышей Вебстер, иммунизированных с использованием вакцины 24F-CRM197/APA, защиту от заражения, по сравнению как с мышами, иммунизированными APA (P<0,0001) так и с наивными мышами (P=0,0002).
На фиг. 13 показаны средние геометрические титров специфических для серотипа (S. pneumoniae серотипов 16F, 23A, 23B, 24F, 31) антител, до иммунизации, PD1 и PD2, для кроликов, иммунизированных с использованием мультивалентной пневмококковой конъюгированной вакцины (2 мкг/PnPs). Планки погрешностей представляют 2 стандартных ошибки среднего геометрического титра каждого серотипа (X-ось).
На фиг. 14 показаны титры разведения специфических для серотипа (S. pneumoniae серотипов 16F, 23A, 23B, 24F, 31) OPA, до иммунизации, PD1 и PD2, для кроликов, иммунизированных с использованием мультивалентной пневмококковой конъюгированной вакцины (2 мкг/PnPs). Символы обозначают индивидуальные титры, и планки погрешностей представляют 95% доверительные интервалы (CI) средних геометрических титров (GMT).* p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001, ns=не значимо.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение основано, частично, на идентификации новой структуры (структур) пневмококкового полисахарида посредством технологии ЯМР. Считают, что структура, представленная в настоящем описании, является первой идентификацией или первой правильной идентификацией для S. pneumoniae серотипа 24F.
Полисахарид S. pneumoniae серотипа 24F продуцировали в его соответствующем штамме и очищали. Продуцированные (и очищенные) полисахариды использовали для получения индивидуальных конъюгатов Ps-CRM197. S. pneumoniae серотипа 24F имеет уникальный полисахарид, что приводит к уникальному процессу получения конъюгата. Показано, что полученный конъюгат(ы) являлся иммуногенным в исследованиях на животных.
В рамках изобретения, термин «полисахарид» (Ps) понимают как включающий любой антигенный сахаридный элемент (или антигенную единицу), общепринятый в области иммунологии и бактериальных вакцин, включая, но без ограничения, «сахарид», «олигосахарид», «полисахарид», «липосахарид», «липоолигосахарид (LOS)», «липополисахарид (LPS)», «гликозилат», «гликоконъюгат», «дериватизированный или активированный полисахарид или олигосахарид» и т.п. Если не указано иное, номенклатура полисахаридов в рамках изобретения следует рекомендациям Объединенной комиссии по биохимической номенклатуре IUB-IUPAC (JCBM) 1980. См. JCBN, 1982, J. Biol. Chem. 257:3352-3354.
В рамках изобретения, «иммуногенная композиция» относится к композиции, содержащей антиген, такой как бактериальный капсульный полисахарид или конъюгат полисахарид-белок, имеющий способность вызывать у хозяина, такого как млекопитающее, иммунный ответ, либо гуморальный, либо опосредованный клетками, или оба. Иммуногенная композиция может служить для сенсибилизации хозяина посредством представления антигена в ассоциации с молекулами MHC на поверхности клеток. Кроме того, можно получать антигенспецифические T-клетки или антитела, чтобы обеспечивать будущую защиту иммунизированного хозяина. Иммуногенные композиции, таким образом, могут защищать хозяина от инфекции бактерий, уменьшать тяжесть, или могут защищать хозяина от гибели из-за бактериальной инфекции. Иммуногенные композиции можно также использовать для получения поликлональных или моноклональных антител, которые можно использовать для придания пассивного иммунитета субъекту. Иммуногенные композиции можно также использовать для получения антител, которые являются функциональными, как измерено посредством уничтожения бактерий либо в модели эффективности на животных, либо посредством анализа опсонофагоцитарного уничтожения.
В рамках изобретения, термин «выделенный», применительно к полисахариду, относится к выделению специфического для серотипа S. pneumoniae капсульного полисахарида из очищенного полисахарида с использованием способов очистки, известных в данной области, включающих использование центрифугирования, глубинной фильтрации, преципитации, ультрафильтрации, обработки с использованием активированного угля, диафильтрации и/или хроматографии на колонке. Как правило, выделенный полисахарид относится к частичному удалению белков, нуклеиновых кислот и неспецифического эндогенного полисахарида (C-полисахарида). Выделенный полисахарид содержит менее 10%, 8%, 6%, 4% или 2% белковых загрязнений и/или нуклеиновых кислот. Выделенный полисахарид содержит менее 20% C-полисахарида по отношению к типоспецифическим полисахаридам.
В рамках изобретения, термин «очищенный», применительно к бактериальному капсульному полисахариду, относится к очистке полисахарида из лизата клеток посредством таких способов, как центрифугирование, преципитация и ультрафильтрация. Как правило, очищенный полисахарид относится к удалению клеточного дебриса и ДНК.
В рамках изобретения, термин «Mw» относится к средневзвешенной молекулярной массе и, как правило, она выражена в Да или кДа. Mw учитывает то, что более крупная молекула содержит большую часть общей массы образца полимера, чем более мелкие молекулы. Mw можно определять такими способами, как статическое светорассеяние, малоугловое рассеяние нейтронов, рентгеновское рассеяние и скорость седиментации.
В рамках изобретения, термин «Mn» относится к среднечисловой молекулярной массе и, как правило, она выражена в Да или кДа. Mn рассчитывают посредством получения общей массы образца, деленной на количество молекул в образце, и ее можно определять такими способами, как гель-проникающая хроматография, вискозиметрия посредством (уравнения Марка-Хаувинка), коллигативные способы, такие как осмометрия с использованием давления паров, определение концевой группы или протонный ЯМР. Mw/Mn отражает полидисперсность.
В рамках изобретения, термин «молярное соотношение» представляет собой долю, как правило, выраженную как десятичная дробь до первого или второго знака после запятой. Например, молярное соотношение от 0 или 0,1 до 1,0, выраженное до первого знака после запятой, может включать любое из 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 или 1,0.
В рамках изобретения, сокращение «PnPs» относится к пневмококковому полисахариду.
В рамках изобретения, термин «содержит», при использовании применительно к иммуногенной композиции по изобретению, относится к включению любых других компонентов (подлежащих ограничению выражением «состоящий из» для смеси антигенов), таких как адъюванты и наполнители. Термин «состоящий из» применительно к мультивалентной смеси конъюгатов полисахарид-белок по настоящему изобретению, относится к смеси, содержащей эти конкретные конъюгаты полисахарида S. pneumoniae с белком, а не другие конъюгаты с белком полисахарида S. pneumoniae из другого серотипа.
В рамках изобретения, фраза «участок активации» на сахаре означает, что участок можно химически модифицировать для формирования реакционноспособной группы. Участок активации учитывает предпочтительную тенденцию активирующего средства вступать в реакцию с конкретным участком.
В рамках изобретения, фраза «активированный полисахарид» относится к полисахариду, который был химически модифицированным для образования реакционноспособных групп в полисахаридной цепи. Активированный полисахарид не обязательно означает, что все доступные участки активации были химически модифицированными.
В рамках изобретения, фраза «степень активации» на полисахаридной цепи относится к общему соотношению между количеством активированной химической группы и количеством повторяющихся звеньев на полисахаридной цепи.
Если не указано иное, все диапазоны, представленные в настоящем описании, включают перечисленные нижние и верхние пределы.
Анализ моносахаридов для S. pneumoniae серотипа 24F показал Glc, Rha, GlcN, Rib (рибозу) и Rib-ol-P (рибоза-фосфат) в качестве составляющих (но не было доступно информации о структуре). См. Kamerling, 2000, Pneumococcal polysaccharides: a chemical view, p. 81-114. In Tomasz (ed), Streptococcus pneumoniae molecular biology & mechanisms of disease. Mary Ann Liebert, Inc., Larchmont, NY. Структура, идентифицированная в примерах, согласуется с составом сахаридов, идентифицированным ранее. До настоящего времени нет доступной информации о структуре для полисахаридов серотипа 24A или 24B для сравнения.
Идентификация структуры полисахаридов этого серотипа (серотипов) может позволить их включение в пневмококковые вакцины, либо неконъюгированными, либо в форме конъюгата полисахарид-белок. Конъюгированные вакцины, содержащие стрептококковые и пневмококковые Ps, хорошо известны в данной области. См., например, Патенты США No. 6248570; 5866135; и 5773007.
Капсульные полисахариды
Капсульные полисахариды из Steptococcus pneumoniae из серотипа (серотипов) по изобретению можно получать стандартными способами, известными специалистам в данной области. Например, полисахариды можно выделять из бактерий, и можно осуществлять коррекцию размера до некоторой степени известными способами (см., например, Европейские патенты No. EP497524 и EP497525); и предпочтительно, посредством микрофлуидизации, осуществляемой с использованием гомогенизатора или посредством химического гидролиза. В одном варианте осуществления, штаммы S. pneumoniae, соответствующие каждому серотипу полисахарида, выращивают в среде на основе сои. Затем индивидуальные полисахариды очищают посредством стандартных стадий, включая центрифугирование, преципитацию и ультрафильтрацию. См., например, Публикацию патентной заявки США No. 2008/0286838 и Патент США No. 5847112. Можно корректировать размер полисахаридов для уменьшения вязкости и/или для улучшения фильтруемости последующих конъюгированных продуктов. Химический гидролиз можно проводить с использованием уксусной кислоты. Механическую коррекцию размера можно проводить с использованием разрезания посредством гомогенизации высокого давления.
В некоторых вариантах осуществления, очищенные полисахариды до конъюгации имеют молекулярную массу между 5 кДа и 4000 кДа. Молекулярную массу можно рассчитывать посредством эксклюзионной хроматографии (SEC), в сочетании с детектором многоуглового светорассеяния (MALS) и детектором показателя преломления (RI). В других таких вариантах осуществления, полисахарид имеет среднюю молекулярную массу между 10 кДа и 4000 кДа; между 50 кДа и 4000 кДа; между 50 кДа и 3000 кДа; между 50 кДа и 2000 кДа; между 50 кДа и 1500 кДа; между 50 кДа и 1000 кДа; между 50 кДа и 750 кДа; между 50 кДа и 500 кДа; между 100 кДа и 4000 кДа; между 100 кДа и 3000 кДа; между 5 кДа и 2000 кДа; между 10 кДа и 2000 кДа; между 50 кДа и 2000 кДа; между 100 кДа и 2000 кДа; между 100 кДа и 1500 кДа; между 100 кДа и 1000 кДа; между 100 кДа и 750 кДа; между 100 кДа и 500 кДа; между 100 и 400 кДа; между 200 кДа и 4000 кДа; между 200 кДа и 3000 кДа; между 200 кДа и 2000 кДа; между 200 кДа и 1500 кДа; между 200 кДа и 1000 кДа; или между 200 кДа и 500 кДа. В конкретных вариантах осуществления, полисахарид имеет молекулярную массу от 50 кДа до 5000 кДа. В конкретных аспектах, полисахарид имеет молекулярную массу от 10 кДа до 2000 кДа, от 50 кДа до 1500 кДа, от 75 кДа до 200 кДа.
В конкретных вариантах осуществления, полисахарид S. pneumoniae серотипа 24F имеет между 5 и 2000 повторяющихся звеньев. В конкретных аспектах, полисахарид имеет между 15 и 1500, 20 и 400, 30 и 300, 40 и 250, или 50 и 200 повторяющихся звеньев
Белок-носитель
Полисахариды из одного или нескольких серотипов можно конъюгировать с белком-носителем («Pr») для улучшения иммуногенности у детей, пожилых и/или субъектов с иммунной недостаточностью. Когда более одного серотипа используют в мультивалентной композиции, серотипы можно получать с одинаковым белком-носителем или различными белками-носителями. Каждый капсульный полисахарид одинакового серотипа, как правило, конъюгируют с одинаковым белком-носителем.
В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения, CRM197 используют в качестве белка-носителя. CRM197 представляет собой нетоксичный вариант дифтерийного токсина (DT). Белок-носитель CRM197 представляет собой мутантную форму DT, который сделан нетоксичным посредством одиночной аминокислотной замены в фрагменте A в остатке 52. В одном варианте осуществления, белок-носитель CRM197 выделяют из Corynebacterium diphtheria штамма C7 (β197), выращенного в среде на основе казаминовых кислот и дрожжевого экстракта. В другом варианте осуществления, CRM197 получают рекомбинантным способом, в соответствии со способами, описанными в Патенте США No. 5614382. Как правило, CRM197 очищают посредством комбинации ультрафильтрации, преципитации сульфатом аммония и ионообменной хроматографии. В некоторых вариантах осуществления, CRM197 получают в Pseudomonas fluorescens с использованием технологии Pfenex Expression™ (Pfenex Inc., San Diego, CA).
Другие пригодные белки-носители включают дополнительные инактивированные бактериальные токсины, такие как DT, фрагмент B дифтерийного анатоксина (DTFB), TT (столбнячный анатоксин) или фрагмент C TT, коклюшный анатоксин, холерный анатоксин (например, как описано в Публикации международной патентной заявки No. WO 2004/083251), LT (термолабильный энтеротоксин) E. coli, ST (термостабильный энтеротоксин) E. coli и экзотоксин A из Pseudomonas aeruginosa. Можно использовать также белки наружной мембраны бактерий, такие как комплекс c наружной мембраны (OMPC), порины, связывающие трансферрин белки, пневмококковый поверхностный белок A (PspA; См. Публикацию Международной патентной заявки No. WO 02/091998), пневмококковый белок адгезин (PsaA), пептидаза C5a из стрептококка группы A или группы B, или белок D Haemophilus influenzae, пневмококковый пневмолизин (Kuo et al., 1995, Infect Immun 63; 2706-13), включая ply, детоксифицированный каким-либо способом, например, dPLY-GMBS (См. Публикацию международной патентной заявки No. WO 04/081515) или dPLY-формол, PhtX, включая PhtA, PhtB, PhtD, PhtE и слитые с Pht белки, например, слитые с PhtDE белки, слитые с PhtBE белки (См. Публикации международных патентных заявок No. WO 01/98334 и WO 03/54007). Другие белки, такие как овальбумин, гемоцианин морского блюдечка (KLH), бычий сывороточный альбумин (BSA) или очищенное белковое производное туберкулина (PPD), PorB (из N. meningitidis), PD (белок D Haemophilus influenzae; см., например, Европейский патент No. EP 0 594 610 B), или их иммунологические функциональные эквиваленты, синтетические пептиды (См. Европейские патенты No. EP0378881 и EP0427347), белки теплового шока (См. Публикации международных патентных заявок No. WO 93/17712 и WO 94/03208), белки коклюша (См. Публикацию международной патентной заявки No. WO 98/58668 и Европейский патент No. EP0471177), цитокины, лимфокины, факторы роста или гормоны (См. Публикацию международной патентной заявки No. WO 91/01146), искусственные белки, содержащие множество эпитопов, узнаваемых человеческими CD4+Т-клетками, из антигенов, происходящих из различных патогенов (См. Falugi et al., 2001, Eur J Immunol 31:3816-3824) таких как белок N19 (См. Baraldoi et al., 2004, Infect Immun 72:4884-7), белки захвата железа (См. Публикацию международной патентной заявки No. WO 01/72337), токсин A или B из C. difficile (См. Международную публикацию патента No. WO 00/61761) и флагеллин (См. Ben-Yedidia et al., 1998, Immunol Lett 64:9), также можно использовать в качестве белков-носителей.
Другие мутанты DT также можно использовать в качестве белков-носителей, такие как CRM176, CRM228, CRM45 (Uchida et al., 1973, J Biol Chem 218:3838-3844); CRM9, CRM45, CRM102, CRM103 и CRM107, и другие мутации, описанные в Nicholls and Youle in Genetically Engineered Toxins, Ed: Frankel, Maecel Dekker Inc, 1992; делеция или мутация Glu-148 до Asp, Gln или Ser, и/или Ala 158 до Gly, и другие мутации, описанные в Патенте США No. 4709017 или Патенте США No. 4950740; мутация по меньшей мере одного или более остатков Lys 516, Lys 526, Phe 530 и/или Lys 534, и другие мутации, описанные в Патенте США No. 5917017 или Патенте США No. 6455673; или фрагмент, описанный в Патенте США No. 5843711.
При использовании мультивалентных вакцин, второй белок-носитель можно использовать для одного или нескольких антигенов. Второй белок-носитель, предпочтительно, представляет собой белок, который является нетоксичным и нереактогенным, и может быть получен в достаточном количестве и с достаточной чистотой. Второй белок-носитель также конъюгируют или связывают с антигеном, например, полисахаридом S. pneumoniae, для увеличения иммуногенности антигена. Белки-носители должны являться пригодными для стандартных способов конъюгации. В одном варианте осуществления, каждый капсульный полисахарид, не конъюгированный с первым белком-носителем, конъюгируют с одинаковым вторым белком-носителем (например, каждую молекулу капсульного полисахарида конъюгируют с одним белком-носителем). В другом варианте осуществления, капсульные полисахариды, не конъюгированные с первым белком-носителем, конъюгируют с двумя или более белками-носителями (каждую молекулу капсульного полисахарида конъюгируют с одним белком-носителем). В таких вариантах осуществления, каждый капсульный полисахарид такого же серотипа, как правило, конъюгируют с таким же белком-носителем.
Конъюгация
Перед конъюгацией, очищенные полисахариды можно химически активировать, чтобы сделать сахариды способными к реакции с белком-носителем, для получения активированного полисахарида. В рамках изобретения, термин «активированный полисахарид» относится к полисахариду, который был химически модифицированным, как описано ниже, чтобы позволять конъюгацию с линкером или белком-носителем. Очищенные полисахариды можно, необязательно, соединять с линкером. После активации или соединения с линкером, каждый капсульный полисахарид отдельно конъюгируют с белком-носителем для получения гликоконъюгата. Конъюгаты полисахаридов можно получать посредством известных способов соединения.
Кроме того, настоящее изобретение относится к активированным полисахаридам, полученным в любом из вышеуказанных вариантов осуществления, в которых полисахарид активируют с использованием химического реагента для получения реакционноспособных групп для конъюгации с линкером или белком-носителем. В конкретных вариантах осуществления, активация происходит на арабинит-1-PO4. В конкретных вариантах осуществления, полисахарид активируют с использованием периодата. В конкретных аспектах этого варианта осуществления, активация происходит в положении 2 углерода из арабинит-1-PO4. См. на фигуре 1B структуру активированного периодатом полисахарида серотипа 24F. Образование альдегида преимущественно на втором атоме углерода являлось неожиданным, поскольку оно требует избирательного расщепления связи 2,3-атомов углерода с вицинальными диолами, или предпочтительных непрерывных серий окисления атомов углерода с более высокими номерами с вицинальными диолами (или альдегидом), пока, наконец, не произойдет окисления на 2м атоме углерода из сахара арабинита. В конкретных вариантах осуществления, настоящее изобретение относится к активированным полисахаридам и смесям активированных полисахаридов, в которых более чем 50%, 60%, 70% или 80% альдегидных групп (в результате активации периодатом) находятся на арабините. В одном аспекте этого варианта осуществления, активированный полисахарид имеет структуру, как показано на фигуре 1B.
В конкретных вариантах осуществления, полисахарид можно присоединять к линкеру для получения промежуточного соединения полисахарид-линкер, в котором свободный конец линкера представляет собой группу сложного эфира. Линкер, таким образом, представляет собой линкер, в котором по меньшей мере один конец линкера представляет собой группу сложного эфира. Другой конец выбирают таким образом, чтобы он мог вступать в реакцию с полисахаридом для формирования промежуточного соединения полисахарид-линкер.
В конкретных вариантах осуществления, полисахарид можно присоединять к линкеру с использованием первичной аминогруппы в полисахариде. В этом случае линкер, как правило, имеет группу сложного эфира на обоих концах. Это позволяет осуществлять присоединение посредством реакции одной из групп сложного эфира с первичной аминогруппой в полисахариде посредством нуклеофильного ацильного замещения. Реакция приводит к получению промежуточного соединения полисахарид-линкер, в котором полисахарид присоединен к линкеру посредством амидной связи. Линкер, таким образом, представляет собой бифункциональный линкер, предоставляющий первую группу сложного эфира для реакции с первичной аминогруппой в полисахариде и вторую группу сложного эфира для реакции с первичной аминогруппой в молекуле носителя. Типичный линкер представляет собой N-гидроксисукцинимидный сложный диэфир адипиновой кислоты (SIDEA).
В конкретных вариантах осуществления, присоединение можно также осуществлять опосредованно, т.е. с использованием дополнительного линкера, который используют для дериватизации полисахарида перед присоединением к линкеру. Полисахарид присоединяют к дополнительному линкеру с использованием карбонильной группы на восстанавливающем конце полисахарида. Это присоединение включает две стадии: (a1) реакцию карбонильной группы с дополнительным линкером; и (a2) реакцию свободного конца дополнительного линкера с линкером. В этих вариантах осуществления, дополнительный линкер, как правило, имеет аминогруппу на обоих концах, таким образом, позволяя осуществление стадии (a1) посредством реакции одной из первичных аминогрупп с карбонильной группой в полисахариде посредством восстановительного аминирования. Используют первичную аминогруппу, которая является реакционноспособной по отношению к карбонильной группе в полисахариде. Группы гидразида или гидроксиламина являются пригодными. Одинаковая первичная аминогруппа, как правило, присутствует на обоих концах дополнительного линкера. Реакция приводит к промежуточному соединению полисахарид-дополнительный линкер, в котором полисахарид соединен с дополнительным линкером посредством связи C-N.
В конкретных вариантах осуществления, полисахарид можно присоединять к дополнительному линкеру с использованием другой группы в полисахариде, в частности, карбоксильной группы. Это присоединение включает две стадии: (a1) реакцию группы с дополнительным линкером; и (a2) реакцию свободного конца дополнительного линкера с линкером. В этом случае, дополнительный линкер, как правило, имеет первичную аминогруппу на обоих концах, таким образом, позволяя осуществление стадии (a1) посредством реакции одной из первичных аминогрупп с карбоксильной группой в полисахариде посредством активации EDAC. Используют первичную аминогруппу, которая является реакционноспособной по отношению к активированной EDAC карбоксильной группе в полисахариде. Группа гидразида является пригодной. Одинаковая первичная аминогруппа, как правило, присутствует на обоих концах дополнительного линкера. Реакция приводит к промежуточному соединению полисахарид-дополнительный линкер, в котором полисахарид соединен с дополнительным линкером посредством амидной связи.
В одном варианте осуществления, химическую активацию полисахаридов и последующую конъюгацию с белком-носителем посредством восстановительного аминирования можно осуществлять способами, описанными в Патентах США No. 4365170, 4673574 и 4902506, Публикациях патентных заявок США No. 2006/0228380, 2007/184072, 2007/0231340 и 2007/0184071, и Публикациях международных патентных заявок No. WO2006/110381, WO2008/079653 и WO2008/143709). Химические реакции могут включать активацию пневмококкового полисахарида посредством реакции с любым окисляющим средством с первичной гидроксильной группой с альдегидом, таким как TEMPO, в присутствии окислителя (WO2104/097099), или реакции двух вицинальных гидроксильных групп с альдегидами, такими как периодат (включая периодат натрия, периодат калия или периодную кислоту). Реакции приводят к случайному окислению первичных гидроксильных групп или случайному окислительному расщеплению вицинальных гидроксильных групп углеводов с формированием реакционноспособных альдегидных групп.
В этом варианте осуществления, присоединение к белку-носителю происходит посредством восстановительного аминирования посредством прямого аминирования лизильных групп белка. Например, конъюгацию проводят посредством реакции смеси активированного полисахарида и белка-носителя с восстанавливающим средством, таким как цианоборгидрид натрия, в присутствии никеля. Реакцию конъюгации можно осуществлять в водном растворе или в присутствии диметилсульфоксида (DMSO). См., например, Публикации Патентных заявок США No. US2015/0231270 и US2011/0195086, и Европейский патент No. EP 0471 177 B1. Затем не вступившие в реакцию альдегиды кэпируют с использованием добавления сильного восстанавливающего средства, такого как боргидрид натрия.
Восстановительное аминирование включает две стадии, (1) окисление полисахарида с образованием реакционноспособных альдегидов, (2) восстановление имина (шиффова основания), образованного между активированным полисахаридом и белком-носителем, с образованием стабильной аминной связи конъюгата. Перед окислением, полисахарид, необязательно, подвергают уменьшению размера. Можно использовать механические способы (например, гомогенизацию) или химический гидролиз. Химический гидролиз можно проводить с использованием уксусной кислоты. Стадия окисления может включать реакцию с периодатом. Для целей по настоящему изобретению, термин «периодат» включает как периодат, так и периодную кислоту; термин также включает как метапериодат (IO4 -), так и ортопериодат (IO6 5-), и включает различные соли периодата (например, периодат натрия и периодат калия). В одном варианте осуществления, капсульный полисахарид окисляют в присутствии метапериодата, предпочтительно, в присутствии периодата натрия (NaIO4). В другом варианте осуществления капсульный полисахарид окисляют в присутствии ортопериодата, предпочтительно, в присутствии периодной кислоты.
В одном варианте осуществления, окисляющее средство представляет собой стабильное нитроксил- или нитроксид-радикальное соединение, такое как пиперидин-N-окси- или пирролидин-N-окси-соединения, в присутствии окислителя для избирательного окисления первичных гидроксилов (как описано, например, в Публикации международной патентной заявки No. WO 2014/097099). В указанной реакции, фактическим окислителем в каталитическом цикле является N-оксоаммониевая соль. В одном аспекте, указанное стабильное нитроксил- или нитроксид-радикальное соединение представляет собой пиперидин-N-окси- или пирролидин-N-окси-соединения. В одном аспекте, указанное стабильное нитроксил- или нитроксид-радикальное соединение имеет группу TEMPO (2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси) или PROXYL (2,2,5,5-тетраметил-1-пирролидинилокси). В одном аспекте, указанное стабильное нитроксил-радикальное соединение представляет собой TEMPO или его производное. В одном аспекте, указанный окислитель представляет собой молекулу, несущую N- галогеновую группу. В одном аспекте, указанный окислитель выбран из группы, состоящей из N-хлорсукцинимида, N-бромсукцинимида, N-иодсукцинимида, дихлоризоциануровой кислоты, 1,3,5-трихлор-1,3,5-триазинан-2,4,6-триона, дибромизоциануровой кислоты, 1,3,5-трибром-1,3,5-триазинан-2,4,6-триона, дииодизоциануровой кислоты, 1,3,5-трииод-1,3,5-триазинан-2,4,6-триона. Предпочтительно, указанный окислитель представляет собой N-хлорсукцинимид.
В конкретных аспектах, окисляющее средство представляет собой свободный радикал 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси (TEMPO) и N-хлорсукцинимид (NCS) в качестве coокислителя (как описано в Публикации международной патентной заявки No. WO2014/097099). Таким образом в одном аспекте гликоконъюгаты из S. pneumoniae можно получать способом, включающим стадии: a) реакции сахарида с 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси (TEMPO) и N-хлорсукцинимидом (NCS) в водном растворителе для получения активированного сахарида; и b) реакции активированного сахарида с белком-носителем, содержащим одну или несколько аминогрупп (указанный способ обозначен далее в настоящем описании как «TEMPO/NCS-восстановительное аминирование»).
Необязательно, реакцию окисления гасят посредством добавления гасящего средства. Гасящее средство может быть выбрано из вицинальных диолов, 1,2-аминоспиртов, аминокислот, глутатиона, сульфита, бисульфата, дитионита, метабисульфита, тиосульфата, фосфитов, гипофосфитов или фосфористой кислоты (например, глицерина, этиленгликоля, пропан-1,2-диола, бутан-1,2-диола или бутан-2,3-диола, аскорбиновой кислоты).
Второй стадией способа конъюгации в случае восстановительного аминирования является восстановление иминной связи (шиффова основания) между активированным полисахаридом и белком-носителем с образованием стабильной связи конъюгата (так называемое восстановительное аминирование), с использованием восстанавливающего средства. Подходящие восстанавливающие средства включают цианоборгидриды (такие как цианоборгидрид натрия) или боргидрид натрия. В одном варианте осуществления восстанавливающее средство представляет собой цианоборгидрид натрия.
В конкретных вариантах осуществления способов по изобретению, реакцию восстановительного аминирования проводят в апротонном растворителе (или смеси апротонных растворителей). В одном варианте осуществления, реакцию восстановления проводят в растворителе DMSO (диметилсульфоксиде) или в DMF (диметилформамиде). Растворитель DMSO или DMF можно использовать для разведения активированного полисахарида и белка-носителя, если они были лиофилизированы. В одном варианте осуществления, апротонный растворитель представляет собой DMSO.
В конце реакции восстановления, могут присутствовать не вступившие в реакцию альдегидные группы, оставшиеся в конъюгатах, которые можно кэпировать или гасить с использованием пригодного кэпирующего или гасящего средства. В одном варианте осуществления это кэпирующее или гасящее средство представляет собой боргидрид натрия (NaBH4). Подходящие альтернативы включают триацетоксиборгидрид натрия или боргидрид натрия или цинка в присутствии кислот Бренстеда или Льюиса, аминобораны, такие как пиридинборан, 2-пиколинборан, 2,6-диборанметанол, диметиламинборан, t-BuMe'PrN-BH3, бензиламин-BH3 или 5-этил-2- метилпиридинборан (PEMB), или смолу для обмена боргидрида.
Гликоконъюгаты, полученные с использованием восстановительного аминирования в апротонном растворителе, как правило, используют в мультивалентных пневмококковых конъюгированных вакцинах. Таким образом, в конкретных вариантах осуществления мультивалентных композиций, где не все серотипы получены в апротонном растворителе, реакцию восстановления для остальных серотипов проводят в водном растворителе (например, выбранном из PBS (фосфатно-солевого буфера), MES (2-(N-морфолино)этансульфоновой кислоты), HEPES, (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислоты), бис-трис, ADA (N-(2-ацетамидо)иминодиуксусной кислоты), PIPES (пиперазин-N, N′-бис(2-этансульфоновой кислоты)), MOPSO (3-морфолино-2-гидроксипропансульфоновой кислоты), BES (N, N-бис(2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфоновой кислоты), MOPS (3-(N-морфолино)пропансульфоновой кислоты), DIPSO (3-бис(2-гидроксиэтил) амино-2-гидроксипропан-1-сульфоновой кислоты), MOBS (4-(N-морфолино)бутансульфоновой кислоты), HEPPSO (N-(2-гидроксиэтил)пиперазин-N-(2-гидроксипропансульфоновой кислоты)), POPSO (пиперазин-1,4-бис(2-гидрокси-3-пропансульфоновой кислоты)), TEA (триэтаноламина), EPPS (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-пропансульфоновой кислоты), бицина или HEPB, при pH между 6,0 и 8,5, 7,0 и 8,0 или 7,0 и 7,5).
В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгаты по настоящему изобретению содержат полисахарид, имеющий молекулярную массу между 10 кДа и 10000 кДа. В других таких вариантах осуществления, полисахарид имеет молекулярную массу между 25 кДа и 5000 кДа. В других таких вариантах осуществления, полисахарид имеет молекулярную массу между 50 кДа и 1000 кДа. В других таких вариантах осуществления, полисахарид имеет молекулярную массу между 70 кДа и 900 кДа. В других таких вариантах осуществления, полисахарид имеет молекулярную массу между 100 кДа и 800 кДа. В других таких вариантах осуществления, полисахарид имеет молекулярную массу между 200 кДа и 600 кДа. В других таких вариантах осуществления, полисахарид имеет молекулярную массу 100 кДа - 1000 кДа; 100 кДа - 900 кДа; 100 кДа - 800 кДа; 100 кДа - 700 кДа; 100 кДа - 600 кДа; 100 кДа - 500 кДа; 100 кДа - 400 кДа; 100 кДа - 300 кДа; 150 кДа - 1000 кДа; 150 кДа - 900 кДа; 150 кДа - 800 кДа; 150 кДа - 700 кДа; 150 кДа - 600 кДа; 150 кДа - 500 кДа; 150 кДа - 400 кДа; 150 кДа - 300 кДа; 200 кДа - 1000 кДа; 200 кДа - 900 кДа; 200 кДа - 800 кДа; 200 кДа - 700 кДа; 200 кДа - 600 кДа; 200 кДа - 500 кДа; 200 кДа - 400 кДа; 200 кДа - 300; 250 кДа - 1000 кДа; 250 кДа - 900 кДа; 250 кДа - 800 кДа; 250 кДа - 700 кДа; 250 кДа - 600 кДа; 250 кДа - 500 кДа; 250 кДа - 400 кДа; 250 кДа - 350 кДа; 300 кДа - 1000 кДа; 300 кДа - 900 кДа; 300 кДа - 800 кДа; 300 кДа - 700 кДа; 300 кДа - 600 кДа; 300 кДа - 500 кДа; 300 кДа - 400 кДа; 400 кДа - 1000 кДа; 400 кДа - 900 кДа; 400 кДа - 800 кДа; 400 кДа - 700 кДа; 400 кДа - 600 кДа; или 500 кДа - 600 кДа.
В конкретных вариантах осуществления, реакцию конъюгации проводят посредством восстановительного аминирования, где никель используют для большей эффективности реакции конъюгации и чтобы способствовать удалению свободного цианида. Переходные металлы, как известно, формируют стабильные комплексы с цианидом и, как известно, улучшают восстановительное метилирование аминогрупп белка с использованием формальдегида и цианоборгидрида натрия (S Gidley et al., Biochem J. 1982, 203: 331-334; Jentoft et al. Anal Biochem. 1980, 106: 186-190). Посредством включения в комплекс остаточного, ингибирующего цианида, добавление никеля увеличивает использование белка в ходе конъюгации и приводит к образованию более крупных, потенциально, более иммуногенных конъюгатов.
Пригодные альтернативные химические реакции включают активацию сахарида с использованием тетрафторбората 1-циано-4-диметиламинопиридиния (CDAP) с образованием сложного эфира цианата. Активированный сахарид можно, таким образом, присоединять напрямую или посредством группы спейсера (линкера) к аминогруппе на белке-носителе. Например, спейсер может представлять собой цистамин или цистеамин для получения тиолированного полисахарида, который можно присоединять к носителю через тиоэфирную связь, полученную после реакции с активированным малеимидом белком-носителем (например, с использованием GMBS) или с галогенацетилированным белком-носителем (например, с использованием иодацетимида [например, этилиодацетимида HCl] или N-сукцинимидилбромацетата или SIAB, или SIA, или SBAP). Предпочтительно, цианатный сложный эфир (необязательно, полученный посредством химических реакций CDAP) соединяют с гександиамином или дигидразидом адипиновой кислоты (ADH), и амино-дериватизированный сахарид конъюгируют с белком-носителем с использованием химических реакций карбодиимида (например, EDAC или EDC) посредством карбоксильной группы на белке-носителе. Такие конъюгаты описаны в Публикациях международных патентных заявок No. WO 93/15760, WO 95/08348 и WO 96/29094; и Chu et al., 1983, Infect. Immunity 40:245-256.
В других подходящих способах конъюгации используют карбодиимиды, гидразиды, активные сложные эфиры, норборан, п-нитробензойную кислоту, S-NHS, EDC, TSTU. Многие из них описаны в Публикации международной патентной заявки No. WO 98/42721. Конъюгация может включать карбонильный линкер, который может образовываться посредством реакции свободной гидроксильной группы сахарида с CDI (См. Bethell et al., 1979, J. Biol. Chem. 254:2572-4; Hearn et al., 1981, J. Chromatogr. 218:509-18), с последующей реакцией с белком с образованием карбаматной связи. Это может включать восстановление аномерного конца до первичной гидроксильной группы, необязательное введение защиты/снятие защиты первичной гидроксильной группы, реакцию первичной гидроксильной группы с CDI с образованием карбаматного промежуточного соединения CDI и соединение карбаматного промежуточного соединения CDI с аминогруппой на белке.
После конъюгации (реакции восстановления и, необязательно, реакции кэпирования или гашения), гликоконъюгаты можно очищать (обогащать по отношению к количеству конъюгата полисахарид-белок) множеством способов, известных специалисту в данной области. Эти способы включают диализ, способы концентрации/диафильтрации, проточную фильтрацию вдоль потока, ультрафильтрацию, преципитацию/элюцию, хроматографию на колонке (ионообменную хроматографию, ионообменную хроматографию в нескольких режимах, DEAE или хроматографию гидрофобного взаимодействия) и глубинную фильтрацию. См., например, Патент США No. 6146902. В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты очищают посредством диафильтрации или ионообменной хроматографии или эксклюзионной хроматографии.
Один способ характеризации гликоконъюгатов по изобретению осуществляют посредством количества остатков лизина в белке-носителе (например, CRM197), которые становятся конъюгированными с сахаридом, которое может быть охарактеризовано как диапазон конъюгированных остатков лизина (степень конъюгации). Доказательство лизиновой модификации белка-носителя, за счет ковалентных связей с полисахаридами, можно получать посредством анализа аминокислот с использованием общепринятых способов, известных специалисту в данной области. Конъюгация в результате приводит к уменьшению количества выделенных остатков лизина, по сравнению с исходным материалом белка-носителя, использованным для образования материалов конъюгата. В предпочтительном варианте осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата по изобретению составляет между 2 и 15, между 2 и 13, между 2 и 10, между 2 и 8, между 2 и 6, между 2 и 5, между 2 и 4, между 3 и 15, между 3 и 13, между 3 и 10, между 3 и 8, между 3 и 6, между 3 и 5, между 3 и 4, между 5 и 15, между 5 и 10, между 8 и 15, между 8 и 12, между 10 и 15 или между 10 и 12. В одном варианте осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата по изобретению составляет приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9, приблизительно 10, приблизительно 11, приблизительно 12, приблизительно 13, приблизительно 14 или приблизительно 15. В предпочтительном варианте осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата по изобретению составляет между 4 и 7. В некоторых таких вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM197.
Гликоконъюгаты по изобретению можно также характеризовать по соотношению (мас./мас.) сахарида и белка-носителя. В некоторых вариантах осуществления, соотношение полисахарида и белка-носителя в гликоконъюгате (мас./мас.) составляет между 0,5 и 3,0 (например, приблизительно 0,5, приблизительно 0,6, приблизительно 0,7, приблизительно 0,8, приблизительно 0,9, приблизительно 1,0, приблизительно 1,1, приблизительно 1,2, приблизительно 1,3, приблизительно 1,4, приблизительно 1,5, приблизительно 1,6, приблизительно 1,7, приблизительно 1,8, приблизительно 1,9, приблизительно 2,0, приблизительно 2,1, приблизительно 2,2, приблизительно 2,3, приблизительно 2,4, приблизительно 2,5, приблизительно 2,6, приблизительно 2,7, приблизительно 2,8, приблизительно 2,9 или приблизительно 3,0). В других вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (мас./мас.) составляет между 0,5 и 2,0, между 0,5 и 1,5, между 0,8 и 1,2, между 0,5 и 1,0, между 1,0 и 1,5 или между 1,0 и 2,0. В следующих вариантах осуществления, соотношение сахарида и белка-носителя (мас./мас.) составляет между 0,8 и 1,2. В предпочтительном варианте осуществления, соотношение капсульного полисахарида и белка-носителя в конъюгате составляет между 0,9 и 1,1. В некоторых таких вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM197. Гликоконъюгаты и иммуногенные композиции по изобретению могут содержать свободный сахарид, который не является ковалентно конъюгированным с белком-носителем, но, тем не менее, присутствует в композиции гликоконъюгата. Свободный сахарид может являться нековалентно ассоциированным с гликоконъюгатом (т.е. нековалентно связанным с ним, адсорбированным на нем, или заключенным в него или вместе с ним).
В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит менее чем приблизительно 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20% или 15% свободного полисахарида по сравнению с общим количеством полисахарида. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит менее, чем приблизительно 25% свободного полисахарида по сравнению с общим количеством полисахарида. В предпочтительном варианте осуществления гликоконъюгат содержит менее чем приблизительно 20% свободного полисахарида по сравнению с общим количеством полисахарида. В предпочтительном варианте осуществления гликоконъюгат содержит менее чем приблизительно 15% свободного полисахарида, по сравнению с общим количеством полисахарида.
Мультивалентные вакцины на основе конъюгата полисахарид-белок
В конкретных вариантах осуществления изобретения, мультивалентные полисахаридные вакцины содержат неконъюгированные полисахариды или конъюгаты полисахарид-белок из Streptococcus pneumoniae серотипа 24F и капсульные полисахариды из одного или нескольких из S. pneumoniae серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 6C, 6D, 7B, 7C, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 16F, 17F, 18B, 18C, 19A, 19F, 20, 21, 22A, 22F, 23A, 23B, 23F, 24B, 27, 28A, 31, 33F, 34, 35A, 35B, 35F и 38, в форме свободных полисахаридов, компонента конъюгата полисахарид-белок или их комбинации, для получения мультивалентной пневмококковой вакцины. В конкретных вариантах осуществления изобретения, иммуногенная композиция содержит, в основном состоит из или состоит из капсульных полисахаридов из S. pneumoniae серотипов 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 или 44, индивидуально конъюгированных с одним или несколькими белками-носителями. Предпочтительно, сахариды из конкретного серотипа не конъюгированы более чем с одним белком-носителем.
После очистки индивидуальных гликоконъюгатов, получают их соединения для составления иммуногенной композиции по настоящему изобретению. Эти пневмококковые конъюгаты получают отдельными способами, и нерасфасованный препарат составляют в отдельную лекарственную форму.
Фармацевтические/вакцинные композиции
Кроме того, настоящее изобретение относится к композициям, включая фармацевтические, иммуногенные и вакцинные композиции, содержащие, в основном состоящие из, или альтернативно, состоящие из любой из комбинаций серотипов полисахаридов S. pneumoniae, описанных выше, вместе с фармацевтически приемлемым носителем и адъювантом.
Получение составов конъюгатов полисахарид-белок по настоящему изобретению можно осуществлять с использованием известных в данной области способов. Например, составы индивидуальных пневмококковых конъюгатов можно получать с использованием физиологически приемлемого носителя для получения композиции. Примеры таких носителей включают, но без ограничения, воду, забуференный солевой раствор, полиолы (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль) и растворы декстрозы.
В предпочтительном варианте осуществления, вакцинную композицию составляют в L-гистидиновом буфере с хлоридом натрия.
Как определено в настоящем описании, «адъювант» представляет собой вещество, которое служит для увеличения иммуногенности иммуногенной композиции по изобретению. Иммунный адъювант может усиливать иммунный ответ на антиген, который является слабо иммуногенным при введении отдельно, например, не индуцирует или индуцирует слабые титры антитела или опосредованный клетками иммунный ответ, может увеличивать титры антитела против антигена и/или уменьшать дозу антигена, эффективную для достижения иммунного ответа у индивидуума. Таким образом, адъюванты часто вводят для бустер-стимуляции иммунного ответа, и они хорошо известны специалисту в данной области. Пригодные адъюванты для усиления эффективности композиции включают, но без ограничения:
(1) соли алюминия (квасцы), такие как гидроксид алюминия, фосфат алюминия, сульфат алюминия и т.д.;
(2) эмульсионные составы масло-в-воде (в присутствии или в отсутствие других специфических иммуностимулирующих средств, таких как мурамилпептиды (определенные ниже) или компоненты клеточной стенки бактерий), например, такие как (a) MF59 (Публикация международной патентной заявки No. WO 90/14837), содержащий 5% сквален, 0,5% Tween 80 и 0,5% Span 85 (необязательно, содержащий различные количества MTP-PE), составленный в субмикронные частицы с использованием микрофлуидизатора, такого как микрофлуидизатор модели 110Y (Microfluidics, Newton, MA), (b) SAF, содержащий 10% сквален, 0,4% Tween 80, 5% блок-сополимер плюроник L121, и thr-MDP, либо микрофлуидизированный в субмикронной эмульсии, либо встряхиваемый для образования эмульсии с более крупным размером частиц, (c) адъювантная система Ribi™ (RAS), (Corixa, Hamilton, MT), содержащая 2% сквален, 0,2% Tween 80, и один или несколько компонентов клеточной стенки бактерий из группы, состоящей из 3-O-деацилированного монофосфориллипида A (MPL™), описанного в Патенте США No. 4912094, димиколата трегалозы (TDM) и каркаса клеточной стенки (CWS), предпочтительно, MPL+CWS (Detox™); и (d) монтанид ISA;
(3) можно использовать сапониновые адъюванты, такие как Quil A или STIMULON™ QS-21 (Antigenics, Framingham, MA) (см., например, Патент США No. 5057540), или частицы, образованные ими, такие как ISCOM (иммуностимулирующие комплексы, сформированные комбинацией холестерина, сапонина, фосфолипида и амфипатических белков) и Iscomatrix® (имеющий в основном такую же структуру, как ISCOM, но в отсутствие белка);
(4) бактериальные липополисахариды, синтетические аналоги липида A, такие как соединения аминоалкилглюкозаминфосфата (AGP), или их производные или аналоги, которые доступны от Corixa, и которые описаны в Патенте США No. 6113918; один такой AGP представляет собой 2-[(R)-3-тетрадеканоилокситетрадеканоиламино]этил-2-дезокси-4-O-фосфоно-3-O-[(R)-3-тетрадеканоилокситетрадеканоил]-2-[(R)-3-тетрадеканоилокситетрадеканоиламино]-b-D-глюкопиранозид, также известный как 529 (ранее известный как RC529), который составлен в водной форме или в виде стабильной эмульсии;
(5) синтетические полинуклеотиды, такие как олигонуклеотиды, содержащие мотив(ы) CpG (Патент США No. 6207646);
(6) цитокины, такие как интерлейкины (например, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12, IL-15, IL-18 и т.д.), интерфероны (например, гамма-интерферон), гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), макрофагальный колониестимулирующий фактор (M-CSF), фактор некроза опухоли (TNF), костимулирующие молекулы B7-1 и B7-2, и т.д.; и
(7) компоненты комплемента, такие как тример компонента комплемента C3d.
В другом варианте осуществления, адъювант представляет собой смесь из 2, 3 или более из вышеуказанных адъювантов, например, SBAS2 (эмульсия масло-в-воде, также содержащая 3-деацилированный монофосфориллипид A и QS21).
Мурамилпептиды включают, но без ограничения, N-ацетил-мурамил-L-треонил-D-изоглутамин (thr-MDP), N-ацетил-нормурамил-L-аланин-2-(1',2'-дипальмитоил-sn-глицеро-3-гидроксифосфорилокси)-этиламин (MTP-PE) и т.д.
В конкретных вариантах осуществления, адъювант представляет собой соль алюминия. Адъювант на основе соли алюминия может присутствовать в преципитированной на квасцах вакцине или адсорбированной на квасцах вакцине. Адъюванты на основе соли алюминия хорошо известны в данной области и описаны, например, в Harlow, E. and D. Lane (1988; Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory) и Nicklas, W. (1992; Aluminum salts. Research in Immunology 143:489-493). Соль алюминия включает, но без ограничения, гидратированный оксид алюминия, гидрат оксида алюминия, тригидрат оксида алюминия (ATH), гидрат алюминия, тригидрат алюминия, Alhydrogel®, Superfos, Amphogel®, гидроксид алюминия (III), гидроксифосфатсульфат алюминия (адъювант на основе фосфата алюминия (APA)), аморфный оксид алюминия, тригидратированный оксид алюминия или тригидроксиалюминий.
APA представляет собой водную суспензию гидроксифосфата алюминия. APA изготавливают посредством смешивания хлорида алюминия и фосфата натрия в объемном соотношении 1:1 для преципитации гидроксифосфата алюминия. После процесса смешивания, материал подвергают уменьшению размера с использованием смесителя с высоким усилием сдвига для достижения монодисперсного распределения размеров частиц. Затем продукт подвергают диафильтрации против физиологического солевого раствора и стерилизации паром.
В конкретных вариантах осуществления, коммерчески доступный Al(OH)3 (например, Alhydrogel® или Superfos от Denmark/Accurate Chemical and Scientific Co., Westbury, NY) используют для адсорбции белков. Адсорбция белка является зависимой, в другом варианте осуществления, от pI (изоэлектрической точки pH) белка и pH среды. Белок с низкой pI адсорбируется на положительно заряженном ионе алюминия более сильно, чем белок с высокой pI. Соли алюминия могут образовывать депо Ag, которое медленно высвобождает его в течение периода 2-3 недель, могут быть вовлечены в неспецифическую активацию макрофагов и активацию комплемента, и/или стимулировать механизм врожденного иммунитета (возможно, посредством стимуляции образования мочевой кислоты). См., например, Lambrecht et al., 2009, Curr Opin Immunol 21:23.
Моновалентные нерасфасованные водные конъюгаты, как правило, смешивают и разводят. После разведения, партию стерилизуют фильтрацией. Адъювант фосфат алюминия добавляют асептически до целевой конечной концентрации 4 мкг/мл для всех серотипов S. pneumoniae, за исключением серотипа 6B, который разводят до целевой концентрации 8 мкг/мл, и конечной концентрации алюминия 250 мкг/мл. Составом партии с адъювантом можно заполнять ампулы или шприцы.
В конкретных вариантах осуществления, адъювант представляет собой содержащую CpG нуклеотидную последовательность, например, содержащий CpG олигонуклеотид, в частности, содержащий CpG олигодезоксинуклеотид (CpG ODN). В другом варианте осуществления, адъювант представляет собой ODN 1826, который можно получать из Coley Pharmaceutical Group.
«Содержащий CpG нуклеотид», «содержащий CpG олигонуклеотид», «CpG-олигонуклеотид» и сходные термины относятся к молекуле нуклеотида длиной 6-50 нуклеотидов, содержащей неметилированный мотив CpG. См., например, Wang et al., 2003, Vaccine 21:4297. В другом варианте осуществления, предусмотрено любое другое принятое в данной области определение этих терминов. Содержащие CpG олигонуклеотиды включают модифицированные олигонуклеотиды с использованием любых синтетических межнуклеозидных связей, модифицированного основания и/или модифицированного сахара.
Способы использования CpG-олигонуклеотидов хорошо известны в данной области и описаны, например, в Sur et al., 1999, J Immunol. 162:6284-93; Verthelyi, 2006, Methods Mol Med. 127:139-58; и Yasuda et al., 2006, Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 23:89-110.
Введение/дозирование
Композиции и составы по настоящему изобретению можно использовать для защиты или лечения человека, чувствительного к инфекции, например, пневмококковой инфекции, посредством введения вакцины системным или мукозальным способом. В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к способу индукции иммунного ответа на конъюгат капсульного полисахарида S. pneumoniae, включающему введение человеку иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по настоящему изобретению. В другом варианте осуществления, настоящее изобретение относится к способу вакцинации человека против пневмококковой инфекции, включающему стадию введения человеку иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по настоящему изобретению.
Оптимальные количества компонентов для конкретной вакцины можно определять посредством стандартных исследований, включающих наблюдение соответствующих иммунных ответов у субъектов. Например, в другом варианте осуществления, дозу для вакцинации человека определяют посредством экстраполяции данных исследований на животных до данных для человека. В другом варианте осуществления, дозу определяют эмпирически.
«Эффективное количество» композиции по изобретению относится к дозе, необходимой для стимуляции образования антител, значительного снижающих вероятность или тяжесть инфекции микроорганизмом, например, S. pneumoniae, во время последующего заражения.
Способы по изобретению можно использовать для предотвращения и/или уменьшения первичных клинических синдромов, вызванных микроорганизмами, например, S. pneumoniae, включая как инвазивные инфекции (менингит, пневмонию и бактериемию), так и неинвазивные инфекции (острый средний отит и синусит).
Введение композиций по изобретению может включать одно или несколько из: инъекции внутримышечным, внутрибрюшинным, внутрикожным или подкожным способами; или мукозального введения в ротовые/пищеварительные, дыхательные или мочеполовые пути. В одном варианте осуществления, интраназальное введение используют для лечения пневмонии или среднего отита (поскольку носоглоточное носительство пневмококков можно более эффективно предотвращать, таким образом, облегчая инфекцию на ее самой ранней стадии).
Количество конъюгатов в каждой дозе вакцины выбирают как количество, которое индуцирует иммунопротективный ответ без значительных неблагоприятных эффектов. Такое количество можно менять в зависимости от пневмококкового серотипа. Как правило, для конъюгатов на основе полисахарида, каждая доза может содержать 0,1-100 мкг каждого полисахарида, в частности 0,1-10 мкг, и более конкретно, 1-5 мкг. Например, каждая доза может содержать 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500 или 750 нг, или 1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 7,5, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 20, 22, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 мкг каждого полисахарида.
Оптимальные количества компонентов для конкретной вакцины можно определять с помощью стандартных исследований, включающих наблюдение соответствующих иммунных ответов у субъектов. Например, в другом варианте осуществления, дозу для вакцинации человека определяют посредством экстраполяции данных исследований на животных до данных для человека. В другом варианте осуществления, дозу определяют эмпирически.
В одном варианте осуществления, доза соли алюминия составляет 10, 15, 20, 25, 30, 50, 70, 100, 125, 150, 200, 300, 500 или 700 мкг, или 1, 1,2, 1,5, 2, 3, 5 мг или более. В другом варианте осуществления, доза соли алюминия, описанная выше, присутствует на мкг рекомбинантного белка.
Как правило, получают состав каждой 0,5 мл дозы, содержащий: 2 мкг каждого полисахарида S. pneumoniae, за исключением полисахарида серотипа 6B при 4 мкг; приблизительно 32 мкг белка-носителя CRM197 (например, 32 мкг±5 мкг,±3 мкг,±2 мкг или±1 мкг); адъювант 0,125 мг элементарного алюминия (0,5 мг фосфата алюминия); и хлорид натрия и L-гистидиновый буфер. Концентрация хлорида натрия составляет приблизительно 150 мМ (например, 150 мМ ±25 мМ, ±20 мМ, ±15 мМ, ±10 мМ, или ±5 мМ), и приблизительно 20 мМ (например, 20 мМ ±5 мМ, ±2,5 мМ, ±2 мМ, ±1 мМ, или ±0,5 мМ) L-гистидиновый буфер.
В соответствии с любыми способами по настоящему изобретению, и в одном варианте осуществления, субъект представляет собой человека. В конкретных вариантах осуществления, пациент-человек представляет собой грудного ребенка (в возрасте менее 1 года), ребенка преддошкольного возраста (приблизительно 12-24 месяца), или ребенка дошкольного возраста (приблизительно 2-5 лет). В других вариантах осуществления, пациент-человек представляет собой пожилого пациента (>65 лет). Композиции по этому изобретению являются также пригодными для использования для более старших детей, подростков и взрослых (например, в возрасте 18-45 лет или 18-65 лет).
В одном варианте осуществления способов по настоящему изобретению, композицию по настоящему изобретению вводят в форме однократной инокуляции. В другом варианте осуществления, композицию вводят два раза, три раза или четыре раза, или более, с адекватными промежутками. Например, композицию можно вводить с интервалами 1, 2, 3, 4, 5 или 6 месяцев, или в любой их комбинации. Можно следовать расписанию иммунизации, разработанному для пневмококковых вакцин. Например, общепринятое расписание для детей грудного возраста и детей преддошкольного возраста против инвазивного заболевания, вызванного S. pneumoniae, представляет собой введение в возрасте 2, 4, 6 и 12-15 месяцев. Таким образом, в предпочтительном варианте осуществления, композицию вводят в сериях из 4 доз в возрасте 2, 4, 6 и 12-15 месяцев.
Композиции по настоящему изобретению могут также включать один или несколько белков из S. pneumoniae. Примеры белков S. pneumoniae, пригодных для включения, включают белки, идентифицированные в Публикациях международных патентных заявок No. WO 02/083855 и WO 02/053761.
Составы
Композиции по настоящему изобретению можно вводить субъекту одним или несколькими способами, известным специалисту в данной области, например, парентерально, трансмукозально, чрескожно, внутримышечно, внутривенно, внутрикожно, интраназально, подкожно, внутрибрюшинно, и составлять соответственно.
В одном варианте осуществления, композиции по настоящему изобретению вводят посредством эпидермальной инъекции, внутримышечной инъекции, внутривенной, внутриартериальной, подкожной инъекции, или мукозальной инъекции жидкого препарата в дыхательные пути. Жидкие составы для инъекции включают растворы и т.п.
Композицию по настоящему изобретению можно составлять в форме ампул с однократными дозами, флаконов с множественными дозами или предварительно заполненных шприцев.
В другом варианте осуществления, композиции по настоящему изобретению вводят перорально, и таким образом, составляют в форме, пригодной для перорального введения, т.е. в форме твердого или жидкого препарата. Твердые пероральные составы включают таблетки, капсулы, пилюли, гранулы, драже и т.п. Жидкие пероральные составы включают растворы, суспензии, дисперсии, эмульсии, масла и т.п.
Фармацевтически приемлемые носители для жидких составов представляют собой водные или неводные растворы, суспензии, эмульсии или масла. Примерами неводных растворителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и пригодные для инъекций органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Водные носители включают воду, спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая солевой раствор и забуференные среды. Примерами масел являются масла животного, растительного или синтетического происхождения, например, арахисовое масло, соевое масло, оливковое масло, подсолнечное масло, рыбий жир, другой жир морских животных или липид из молока или яиц.
Фармацевтическая композиция может являться изотоничной, гипертоничной или гипотоничной. Однако часто является предпочтительным, чтобы фармацевтическая композиция для инфузии или инъекции в основном являлась изотоничной при ее введении. Таким образом, для хранения фармацевтическая композиция может, предпочтительно, являться изотоничной или гипертоничной. Если фармацевтическая композиция является гипертоничной для хранения, ее можно разбавлять до изотоничного раствора перед введением.
Регулирующее тоничность средство может представлять собой ионное регулирующее тоничность средство, такое как соль, или неионное регулирующее тоничность средство, такое как углевод. Неограничивающие примеры ионных регулирующих тоничность средств включают NaCl, CaCl2, KCl и MgCl2. Неограничивающие примеры неионных регулирующих тоничность средств включают сахарозу, трегалозу, маннит, сорбит и глицерин.
Является также предпочтительным, чтобы по меньшей мере одна фармацевтически приемлемая добавка представляла собой буфер. Для некоторых целей, например, когда фармацевтическая композиция предназначена для инфузии или инъекции, часто является желательным, чтобы композиция содержала буфер, способный забуферивать раствор при pH в диапазоне 4-10, например, 5-9, например, 6-8.
Буфер можно, например, выбирать из группы, состоящей из Трис, ацетатного, глутаматного, лактатного, малеатного, тартратного, фосфатного, цитратного, карбонатного, глицинатного, L-гистидинового, глицинового, сукцинатного и триэтаноламинного буфера.
Буфер может, кроме того, являться выбранным, например, из приемлемых с точки зрения USP буферов для парентерального использования, в частности, когда фармацевтический состав предназначен для парентерального использования. Например, буфер может быть выбран из группы, состоящей из одноосновных кислот, таких как уксусная, бензойная, глюконовая, глицериновая и молочная кислота; двухосновных кислот, таких как аконитовая, адипиновая, аскорбиновая, угольная, глутаминовая, яблочная, янтарная и виннокаменная кислота, многоосновных кислот, таких как лимонная и фосфорная кислота; и оснований, таких как аммиак, диэтаноламин, глицин, триэтаноламин и Трис.
Носители для парентерального введения (для подкожной, внутривенной, внутриартериальной или внутримышечной инъекции) включают раствор хлорида натрия, раствор Рингера с декстрозой, декстрозу и хлорид натрия, раствор Рингера с лактатом и жирные масла. Носители для внутривенного введения включают жидкости и питательные добавки, добавки электролитов, например, на основе раствора Рингера с декстрозой и т.п. Примерами являются стерильные жидкости, такие как вода и масла, с добавлением или без добавления поверхностно-активного вещества и других фармацевтически приемлемых адъювантов. Как правило, вода, солевой раствор, водные растворы декстрозы и родственных сахаров, гликоли, такие как пропиленгликоли или полиэтиленгликоль, полисорбат 80 (PS-80), полисорбат 20 (PS-20), и полоксамер 188 (P188), являются предпочтительными жидкими носителями, в частности, для пригодных для инъекции растворов. Примерами масел являются масла животного, растительного или синтетического происхождения, например, арахисовое масло, соевое масло, оливковое масло, подсолнечное масло, рыбий жир, другой жир морских животных или липид из молока или яиц.
Составы могут также содержать поверхностно-активное вещество. Предпочтительные поверхностно-активные вещества включают, но без ограничения: поверхностно-активные вещества на основе сложных эфиров полиоксиэтиленсорбитана (обычно обозначаемых как Tween), особенно PS-20 и PS-80; сополимеры этиленоксида (EO), пропиленоксида (PO) и/или бутиленоксида (BO), продаваемые под торговым наименованием DOWFAX™, такие как линейные блок-сополимеры EO/PO; октоксинолы, которые могут являться изменчивыми по количеству повторяющихся групп этокси(окси-l,2-этандиила), при этом особенный интерес представляет октоксинол-9 (тритон X-100, или т-октилфеноксиполиэтоксиэтанол); (октилфенокси)полиэтоксиэтанол (IGEPAL CA-630/NP-40); фосфолипиды, такие как фосфатидилхолин (лецитин); нонилфенолэтоксилаты, такие как серии Tergitol™ NP; жирные эфиры полиоксиэтилена, полученные из лаурилового, цетилового, стеарилового и олеилового спиртов (известные как поверхностно-активные вещества Brij), такие как монолауриловый эфир триэтиленгликоля (Brij 30); и сложные эфиры сорбитана (общеизвестные как SPAN), такие как триолеат сорбитана (Span 85) и монолаурат сорбитана. Предпочтительными поверхностно-активными веществами для включения в эмульсию являются PS-20 или PS-80.
Можно использовать смеси поверхностно-активных веществ, например смеси PS-80/Span 85. Также подходящей является комбинация сложного эфира полиоксиэтиленсорбитана, такого как моноолеат полиоксиэтиленсорбитана (PS-80), и октоксинола, такого как т-октилфеноксиполиэтоксиэтанол (тритон X-100). Другая комбинация, которую можно использовать, включает лаурет 9 плюс сложный эфир полиоксиэтиленсорбитана и/или октоксинол.
Предпочтительные количества поверхностно-активных веществ составляют: сложные эфиры полиоксиэтиленсорбитана (такие как PS-80) 0,01-1% мас./об., в частности, приблизительно 0,1% мас./об.; октил- или нонилфеноксиполиоксиэтанолы (такие как тритон X-100, или другие детергенты в серии тритона) 0,001-0,1% мас./об., в частности, 0,005-0,02% мас./об.; эфиры полиоксиэтилена (такие как лаурет 9) 0,1-20% мас./об., предпочтительно, 0,1-10% мас./об. и в частности, 0,1-1% мас./об. или приблизительно 0,5% мас./об.
В конкретных вариантах осуществления, композиция в основном состоит из L-гистидина (20 мМ), солевого раствора (150 мМ) и 0,2% мас./об. PS-20 при pH 5,8 с 250 мкг/мл APA (адъюванта фосфата алюминия). PS-20 может лежать в диапазоне 0,005-0,1% мас./об., где присутствие PS-20 или PS-80 в составе контролирует агрегацию в ходе имитации изготовления и транспортировки с использованием первичной упаковки. Способ состоит из объединения смеси из вплоть до 44 серотипов полисахаридов S. pneumoniae в L-гистидине, хлориде натрия и PS-20, затем объединения смешанного материала с APA и хлоридом натрия в присутствии или в отсутствие противомикробных консервантов.
Выбор поверхностно-активного вещества может нуждаться в оптимизации для различных продуктов лекарственных средств и веществ лекарственных средств. Для мультивалентных вакцин, содержащих 15 или более серотипов полисахаридов S. pneumoniae, PS-20 и P188 являются предпочтительными. Выбор химических реакций, использованных для получения конъюгата, также может влиять на стабилизацию состава. В частности, как проиллюстрировано ниже, для конъюгатов пневмококковый полисахарид-белок, полученных в водном растворителе или растворителе на основе DMSO и объединенных в мультивалентную композицию, показаны значительные различия стабильности, в зависимости от конкретных систем поверхностно-активных веществ, использованных для получения состава.
Для составов, описанных в настоящем описании, полоксамер обычно имеет молекулярную массу в диапазоне от 1100 Да до 17400 Да, от 7500 Да до 15000 Да или от 7500 Да до 10000 Да. Полоксамер может быть выбран из полоксамера 188 или полоксамера 407. Конечная концентрация полоксамера в составах по изобретению составляет от 0,001 до 5% мас./об., или от 0,025 до 1% мас./об. Система поверхностно-активного вещества, содержащая полоксамер, должна дополнительно содержать полиол. В конкретных аспектах, полиол представляет собой пропиленгликоль и присутствует при конечной концентрации от 1 до 20% мас./об. В конкретных аспектах, полиол представляет собой полиэтиленгликоль 400 и присутствует при конечной концентрации от 1 до 20% мас./об.
Подходящими полиолами для составов являются полимерные полиолы, в частности полиэфирдиолы, включая, но без ограничения, пропиленгликоль и полиэтиленгликоль, монометильные эфиры полиэтиленгликоля. Пропиленгликоль является доступным в диапазоне молекулярных масс мономера от ~425 Да до ~2700 Да. Полиэтиленгликоль и монометильные эфиры полиэтиленгликоля также являются доступными в диапазоне молекулярных масс от ~200 Да до ~35000 Да включая, но без ограничения, PEG200, PEG300, PEG400, PEG1000, PEG MME 550, PEG MME 600, PEG MME 2000, PEG MME 3350 и PEG MME 4000. Предпочтительным полиэтиленгликолем является полиэтиленгликоль 400. Конечная концентрация полиола в составах может составлять 1-20% мас./об. или 6-20% мас./об.
Состав содержит также солевой раствор с забуференным pH. Буфер может, например, являться выбранным из группы, состоящей из буфера на основе Трис, ацетата, глутамата, лактата, малеата, тартрата, фосфата, цитрата, карбоната, глицината, L-гистидина, глицина, сукцината, HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновой кислоты), MOPS (3-(N-морфолино)пропансульфоновой кислоты), MES (2-(N-морфолино)этансульфоновой кислоты) и триэтаноламина. Буфер является способным забуферивать раствор до pH в диапазоне 4-10, 5,2-7,5 или 5,8-7,0. В конкретных аспектах, буфер является выбранным из группы, состоящей из фосфата, сукцината, L-гистидина, MES, MOPS, HEPES, ацетата или цитрата. Буфер может, кроме того, являться выбранным, например, из приемлемых с точки зрения USP буферов для парентерального использования, в частности, когда фармацевтический состав предназначен для парентерального использования. Концентрации буфера могут лежать в диапазоне от 1 мМ до 50 мМ или от 5 мМ до 50 мМ. В конкретных аспектах, буфер представляет собой L-гистидин в конечной концентрации 5 мМ-50 мМ, или сукцинат в конечной концентрации 1 мМ-10 мМ. В конкретных аспектах, L-гистидин присутствует в конечной концентрации 20 мМ±2 мМ.
В то время как солевой раствор (т.е. раствор, содержащий NaCl) является предпочтительным, другие соли, пригодные для состава, включают, но без ограничения, CaCl2, KCl и MgCl2, и их комбинации. Неионные регулирующие тоничность средства, включая, но без ограничения, сахарозу, трегалозу, маннит, сорбит и глицерин, можно использовать вместо соли. Подходящие диапазоны концентрации соли включают, но без ограничения, от 25 мМ до 500 мМ или от 40 мМ до 170 мМ. В одном аспекте солевой раствор представляет собой NaCl, необязательно, присутствующий в концентрации от 20 мМ до 170 мМ.
В предпочтительном варианте осуществления, составы содержат L-гистидиновый буфер с хлоридом натрия.
В другом варианте осуществления, фармацевтическую композицию доставляют в системе с контролируемым высвобождением. Например, средство можно вводить с использованием внутривенной инфузии, чрескожного пластыря, липосом или других способов введения. В другом варианте осуществления, используют полимерные материалы; например, в микросферах или имплантате.
Композиции по настоящему изобретению могут также включать один или несколько белков из S. pneumoniae. Примеры белков S. pneumoniae, пригодных для включения, включают белки, идентифицированные в Публикациях международной патентной заявки No. WO 02/083855 и WO 02/053761.
Аналитические способы
Анализ молекулярной массы и концентрации конъюгатов с использованием анализа HPSEC/УФ/MALS/RI
Образцы конъюгатов инъецируют и разделяют посредством высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (HPSEC). Детекцию осуществляют с использованием серий детекторов ультрафиолетового света (УФ), многоуглового светорассеяния (MALS) и показателя преломления (RI). Концентрацию белка рассчитывают по УФ280 с использованием коэффициента экстинкции. Концентрацию полисахарида подвергают деконволюции из сигнала RI (в который вносят вклад как белок, так и полисахарид) с использованием факторов dn/dc, представляющих собой изменение показателя преломления раствора при изменении концентрации растворенного вещества, выраженной в мл/г. Среднюю молекулярную массу образцов рассчитывают посредством программного обеспечения Astra (Wyatt Technology Corporation, Santa Barbara, CA) с использованием информации для измеренных концентрации и светорассеяния для всего пика образца. Существует множество форм средних значений молекулярной массы для полидисперсных молекул. Например, среднечисловая молекулярная масса Mn, средневзвешенная молекулярная масса Mw, и z-средняя молекулярная масса Mz (Molecules, 2015, 20:10313-10341). Если не указано иное, термин «молекулярная масса», как используют на протяжении этого описания, представляет собой средневзвешенную молекулярную массу.
Определение использования лизина в конъюгированном белке в качестве показателя количества ковалентных связей между полисахаридом и белком-носителем
Анализ аминокислот AccQ-Tag (AAA) от Waters используют для измерения степени конъюгации в образцах конъюгата. Образцы гидролизуют с использованием кислого гидролиза в газовой фазе в рабочей станции Eldex, для расщепления белков-носителей на компоненты их аминокислот. Свободные аминокислоты дериватизируют с использованием 6-аминохинолил-N-гидроксисукцинимидилкарбамата (AQC). Затем дериватизированные образцы анализируют с использованием UPLC с детекцией в УФ на колонке C18. Среднюю концентрацию белка получают с использованием репрезентативных аминокислот, отличных от лизина. Использование лизина во время конъюгации (т.е. потерю лизина) определяют по различию между средним измеренным количеством лизина в конъюгате и ожидаемым количеством лизина в исходном белке.
Тестирование свободного полисахарида
Свободный полисахарид (т.е. полисахарид, не конъюгированный с CRM197) в конъюгате, измеряют посредством сначала преципитации свободного белка и конъюгатов с использованием дезоксихолата (DOC) и соляной кислоты. Затем преципитаты отфильтровывают, и фильтраты анализируют по концентрации свободного полисахарида посредством HPSEC/УФ/MALS/RI. Свободный полисахарид рассчитывают как процент общего полисахарида, измеренный посредством HPSEC/УФ/MALS/RI.
Тестирование свободного белка
Свободный полисахарид, конъюгат полисахарид-CRM197 и свободный CRM197 в образцах конъюгата разделяют посредством капиллярного электрофореза в режиме мицеллярной электрокинетической хроматографии (MEKC). Кратко, образцы смешивают с рабочим буфером MEKC, содержащим 25 мМ борат, 100 мМ SDS, pH 9,3, и разделяют в предварительно подготовленных капиллярах из плавленого диоксида кремния без покрытия. Разделение мониторируют при 200 нм, и свободный CRM197 оценивают количественно с использованием стандартной кривой CRM197. Результаты для свободного белка регистрируют как процент от общего содержания белка, определенного способом HPSEC/УФ/MALS/RI.
При наличии описанных различных вариантов осуществления изобретения со ссылкой на сопутствующее описание и чертежи, следует понимать, что изобретение не является ограниченным этими точными вариантами осуществления, и что специалист в данной области может вносить различные изменения и модификации без отклонения от объема или содержания изобретения, как определено в прилагаемой формуле изобретения.
Следующие примеры иллюстрируют, но не ограничивают изобретение.
ПРИМЕРЫ
ПРИМЕР 1: Получение капсульных полисахаридов S. pneumoniae
Способы культивирования пневмококков хорошо известны в данной области. См., например, Chase, 1967, Methods of Immunology and Immunochemistry 1:52. Способы получения пневмококковых капсульных полисахаридов также хорошо известны в данной области. См., например, Европейский патент No. EP 0 497 524 B1. Процесс, описанный ниже, в основном следует способу, описанному в Европейском патенте No. EP 0 497 524 B1, и является в основном применимым ко всем пневмококковым серотипам, за исключением специфически модифицированных.
Изоляты пневмококкового подтипа 24F получены из Merck Culture Collection. При необходимости, подтипы можно дифференцировать на основании реакции набухания с использованием специфических антисывороток. См., например, Патент США No. 5847112. Полученные изоляты дополнительно подвергали клональному выделению посредством серийного рассева в две стадии на чашки с агаром, состоящим из свободной от компонентов животного происхождения среды, содержащей соевый пептон, дрожжевой экстракт и глюкозу без гемина. Клональные изоляты для каждого серотипа далее размножали в жидкой культуре с использованием свободных от компонентов животного происхождения сред, содержащих соевый пептон, дрожжевой экстракт, HEPES, хлорид натрия, бикарбонат натрия, фосфат калия, глюкозу и глицерин, для получения предварительных главных банков клеток.
Получение каждого серотипа пневмококкового полисахарида состояло из размножения клеток и продукции посредством периодической ферментации, с последующей химической инактивацией перед нижестоящей очисткой. Ампулу с размороженным банком клеток для каждого серотипа подвергали размножению с использованием встряхиваемой колбы или культуральной бутыли, содержащей предварительно стерилизованные свободные от компонентов животного происхождения среды для роста, содержащие соевый пептон или ультрафильтрат соевого пептона, дрожжевой экстракт или ультрафильтрат дрожжевого экстракта, HEPES, хлорид натрия, бикарбонат натрия, фосфат калия и глюкозу. Культуру для размножения клеток выращивали в герметично закрытой встряхиваемой колбе или бутыли для минимизации газообмена, с контролем температуры и встряхивания. После достижения указанной плотности культуры, как измерено по оптической плотности при 600 нм, часть культуры для размножения клеток переносили в ферментер для продукции, содержащий предварительно стерилизованные свободные от компонентов животного происхождения среды для роста, содержащие соевый пептон или ультрафильтрат соевого пептона, дрожжевой экстракт или ультрафильтрат дрожжевого экстракта, хлорид натрия, фосфат калия и глюкозу. Температуру, pH, давление и встряхивание контролировали. Обтекание потоком воздуха также контролировали, поскольку барботаж не использовали.
Периодическую ферментацию останавливали посредством добавления химического инактивирующего средства, фенола, когда глюкоза была почти истощена. Чистый фенол добавляли до конечной концентрации 0,8-1,2% для инактивации клеток и высвобождения капсульного полисахарида из клеточной стенки. Первичная инактивация происходит в течение определенного времени внутри ферментера, где необходимо продолжать контролировать температуру и встряхивание. После первичной инактивации, партию переносили в другой сосуд, где ее поддерживали в течение дополнительного определенного времени при контролируемых температуре и встряхивании для полной инактивации. Это подтверждали либо посредством способов рассева микроорганизмов, либо посредством проверки концентрации фенола и указанного времени. Затем инактивированный бульон подвергали очистке.
Очистка Ps
Очистка пневмококкового полисахарида состоит из нескольких операций центрифугирования, глубинной фильтрации, концентрации/диафильтрациии и стадий преципитации. Все способы осуществляли при комнатной температуре, если не указано иное.
Инактивированный бульон из культур S. pneumoniae из ферментера подвергали флокуляции с катионным полимером (таким как BPA-1000, петролит «Tretolite» и «Spectrum 8160», и поли(этиленимин), «Millipore pDADMAC»). Катионные полимеры связывались с загрязняющими белками, нуклеиновыми кислотами и клеточным дебрисом. После стадии флокуляции и периода выдержки, флокулированные твердые вещества удаляли посредством центрифугирования и множества стадий глубинной фильтрации. Осветленный бульон концентрировали и подвергали диафильтрации с использованием фильтра с MWCO (отсечением по молекулярной массе) 100 кДа - 500 кДа. Диафильтрацию осуществляли с использованием буфера Трис, MgCl2 и буфера фосфата натрия. Диафильтрация удаляла остаточную нуклеиновую кислоту и белок.
Дополнительное удаление загрязнений осуществляли посредством повторной преципитации полисахарида в ацетате натрия и феноле с денатурированным спиртом и/или изопропанолом. В ходе стадии преципитации фенолом, ацетат натрия в фосфатно-солевом натриевом буфере и фенол (разжиженные фенолы или твердые фенолы) загружали в ретентат после диафильтрации. Затем спиртовое фракционирование полисахарида проводили в две стадии. На первой стадии низкий процент спирта добавляли к препарату для преципитации клеточного дебриса и других нежелательных загрязнений, в то время как неочищенный полисахарид оставался в растворе. Загрязнения удаляли посредством центрифугирования с последующей стадией глубинной фильтрации. Затем полисахарид выделяли из раствора посредством добавления дополнительного изопропанола или денатурированного спирта к партии. Преципитированный осадок полисахарида выделяли посредством центрифугирования, растирали в порошок и высушивали в форме порошка, и хранили замороженным при -70°C.
ПРИМЕР 2: Анализы структуры полисахаридов посредством ЯМР
Способ определения структуры полисахарида включал многоступенчатый процесс, осуществляемый, по существу, как описано в Abeygunawardana et al., Determination of the Chemical Structure of Complex Polysaccharides by Heteronuclear NMR Spectroscopy in Advances in Biophysical Chemistry 1993, Vol 3, pages 199-249, JAI Press Inc. Очищенные полисахариды исследовали с использованием стандартных способов 1D и 2D ЯМР. Наконец, полисахариды исследовали по присутствию фосфата с использованием 31P ЯМР.
Определение остатков моносахарида проводили посредством 1H-1H COSY, двухквантновой фильтрующей гомоядерной COSY и полной корреляционной спектроскопии (TOCSY). Химические сдвиги 13C оценивали посредством спектроскопии гетероядерного одноквантового взаимодействия (HSQC) и комбинации HSQC-TOCSY. HSQC с коррекцией на множественность использовали для установления отличий метиленовых и метиновых групп. Связи между остатками определяли посредством комбинации спектроскопии HMBC и NOESY. Аномерную конфигурацию остатков определяли по значениям химических сдвигов аномерных протона и углерода, 3 J H1,H2 и 1 J H1,C1. Аномерную конфигурацию фуранозных колец трудно оценивать по значениям 3 J H1,H2 и 1 J H1,C1, таким образом, соединения дальнего порядка кольцевых протонов от аномерного углерода использовали для этого определения.
1D фосфорная ЯМР-спектроскопия показала, что полисахариды серотипа 24F содержали фосфор в структуре. Определение участка связи фосфора проводили посредством 1H-31P HMBC спектроскопии для очищенного (фиг. 5A) и окисленного периодатом (фиг. 5B) полисахарида.
На основании данных ЯМР на фиг. 2-5, определили, что структура полисахарида S. pneumoniae серотипа 24F является следующей:
где n представляет собой количество повторяющихся звеньев, составляющих полисахарид. См. также фиг. 1A.
Остатки сахара включают рамнозу (Rha), рибозу (Rib), глюкозу (Glc) и арабинит. Один из остатков глюкозы является N-ацетилированным. Рибоза находится в форме фуранозы.
Выделенные курсивом буквы (p и f) относятся к пиранозе (замкнутому кольцу, состоящему из шести атомов) и фуранозе (замкнутому кольцу, состоящему из пяти атомов).
α и β относятся к конфигурации протона, связанного с аномерным углеродом в звене сахара. Аномерный углерод всегда имеет номер 1 при обозначении атомов углерода в звене сахара (обычно, от 1 до 6). α обозначает, что аномерный протон находится в экваториальном положении в 3D структуре. β обозначает, что аномерный протон находится в осевом положении.
Числа, связанные стрелками, обозначают, каким образом индивидуальные звенья сахара связаны друг с другом. Например, номенклатура α-Rha p -(1→3)-α-Glc p - означает, что атом углерода номер 1 рамнозы связан с атомом углерода номер 3 глюкозы (p обозначает, что оба сахара представляют собой пиранозные кольца).
Идентификация основного участка активации на полисахариде S. pneumoniae
серотипа 24F
Обнаружено, что основной участок активации S. pneumoniae серотипа 24F находится на втором атоме углерода боковой цепи арабинита.
Окисленный полисахарид серотипа 24F лиофилизировли, затем повторно растворяли с оксидом дейтерия для анализа ЯМР. Эксперименты ЯМР проводили при 600 МГц при температуре датчика 37°C с использованием криогенно охлаждаемого датчика. Одномерный (1D) протонный спектр получали с использованием импульса 90 градусов с 16 переходами и 10-секундной задержкой между импульсами (включая 3 секунды времени анализа). Данные градиентных COSY и TOCSY получали с использованием 4 и 16 переходов (соответственно) в первом направлении и 512 приращений во втором направлении. 1D TOCSY, с центром на триплете 5,19 м.д., получали с использованием 1024 переходов с временем рециркуляции 10 секунд (включая 3 секунды времени анализа) и временем перемешивания 90 мс. gHSQCAD с коррекцией на множественность получали с использованием 64 переходов и 512 приращений.
По сравнению с неактивированным полисахаридом, в 1D протонном спектре показан дополнительный сигнал (триплет) в аномерной области 5,19 м.д. Данные gCOSY и TOCSY показали кросс-пик от сигнала 5,19 м.д. до сигнала 3,86 м.д. В 1D TOCSY для избирательной полосы 5,19 м.д. показана только отдельная корреляция с триплетом при 3,86 м.д. (фиг. 6). По данным gHSQCAD получены химические сдвиги углерода на 91,13 м.д. (сигнал при 5,19 м.д.) и 70,79 м.д. (сигнал при 3,86 м.д.). Химический сдвиг углерода на 91,13 м.д. немного сдвинут в сторону сильного поля от того места, где, как правило, наблюдают аномерные сигналы, что указывает на гидратированный альдегид. Другой сигнал при 70,69 м.д. идентифицировали как метилен (атомы углерода метилена находились в обратной фазе по сравнению с атомами углерода метина и метила в эксперименте gHSQCAD с коррекцией на множественность; фиг. 7). Эти данные показывают, что протон на 5,19 м.д. (из гидратированного альдегида) является соседним с метиленовой группой (3,86 м.д. для протона и 70,69 м.д. для углерода). Единственным местом, где это может происходить, на основании структуры полисахарида 24F, является атом углерода 2 боковой цепи арабинита.
Образование альдегида преимущественно на втором атоме углерода являлось неожиданным, поскольку оно требует избирательного расщепления связи 2,3-атомов углерода с вицинальными диолами, или предпочтительных непрерывных серий окисления атомов углерода с более высокими номерами с вицинальными диолами (или альдегидом), пока, наконец, не произойдет окисления на 2м атоме углерода из сахара арабинита.
ПРИМЕР 3: Конъюгация полисахарида S. pneumoniae серотипа 24F с CRM197 с использованием восстановительного аминирования в диметилсульфоксиде
Полисахарид растворяли, корректировали размер до целевой молекулярной массы, химически активировали и подвергали замене буфера посредством ультрафильтрации. Активированный полисахарид и очищенный CRM197 индивидуально лиофилизировали и повторно растворяли в диметилсульфоксиде (DMSO). Растворы повторно растворенных полисахарида и CRM197 затем объединяли и конъюгировали, как описано ниже. Полученный конъюгат очищали посредством ультрафильтрации перед конечной фильтрацией через фильтр 0,2 микрон. Несколько параметров способа, таких как pH, температура, концентрация и время, контролировали на каждой стадии для получения конъюгатов с желательными признаками.
Уменьшение размера и окисление полисахарида
Порошок очищенного пневмококкового капсульного Ps растворяли в воде и фильтровали через фильтр 0,45 микрон. Размер растворенного полисахарида уменьшали кислым гидролизом посредством добавления уксусной кислоты до 200 мМ, инкубации при 92°C в течение 50 минут, затем нейтрализации посредством добавления холодного буфера фосфата калия, pH 7, до 400 мМ.
Полисахарид с уменьшенным размером концентрировали и подвергали диафильтрации против воды с использованием мембраны для проточной ультрафильтрации вдоль потока с NMWCO 5.
Затем раствор полисахарида доводили до 22°C и pH 5 с использованием буфера ацетата натрия для минимизации уменьшения размера полисахарида из-за активации. Активацию полисахарида начинали посредством добавления 100 мМ раствора метапериодата натрия. Добавленный метапериодат натрия составлял 0,18-0,21 моль метапериодата натрия на моль повторяющегося звена полисахарида для достижения целевого уровня активации полисахарида (моль альдегида на моль повторяющегося звена полисахарида). Реакцию окисления продолжали в течение 2 часов при 22°C.
Активированный продукт подвергали диафильтрации против 10 мМ фосфата калия, pH 6,4, с последующей диафильтрацией против воды с использованием мембраны для проточной ультрафильтрации вдоль потока с NMWCO 5 кДа. Ультрафильтрацию проводили при 2-8°C.
Конъюгация полисахарида с CRM197
Очищенный CRM197, полученный посредством экспрессии в Pseudomonas fluorescens, как описано ранее (WO 2012/173876 A1), подвергали диафильтрации против буфера 2 мМ фосфата, pH 7,0, с использованием мембраны для проточной ультрафильтрации вдоль потока с NMWCO 5 кДа и фильтровали через фильтр 0,2 микрон.
Получали состав активированных полисахаридов для лиофилизации при 2 мг Ps/мл с концентрацией сахарозы 10% мас./об. Получали состав CRM197 для лиофилизации при 6 мг Pr/мл с концентрацией сахарозы 1% мас./об.
Растворы составов Ps и CRM197 индивидуально лиофилизировали. Лиофилизированные материалы Ps и CRM197 повторно растворяли индивидуально в равных объемах DMSO. В раствор полисахарида добавляли хлорид натрия до конечной концентрации 20-50 мМ. Растворы полисахарида и CRM197 смешивали для достижения концентрации полисахарида 1,4-1,5 г Ps/л (грамм полисахарида/литр) и массового соотношения полисахарида и CRM197 1,5. Массовое соотношение выбирали для контроля соотношения полисахарида и CRM197 в полученном конъюгате. Добавляли цианоборгидрид натрия (1 моль на моль повторяющегося звена полисахарида), и конъюгацию продолжали в течение 2 час при 22°C.
Восстановление с использованием боргидрида натрия
Боргидрид натрия (2 моль на моль повторяющегося звена полисахарида) добавляли после реакции конъюгации и инкубировали в течение 1 час при 22°C. Партию разводили в 150 мМ хлориде натрия с приблизительно 0,025% (мас./об.) полисорбата 20, при приблизительно 4°C. Затем буфер фосфат калия добавляли для нейтрализации pH. Для некоторых партий, партию концентрировали и подвергали диафильтрации при приблизительно 4°C против 150 мМ хлорида натрия, 25 мМ фосфата калия pH 7, с использованием мембраны для проточной ультрафильтрации вдоль потока с NMWCO 30 кДа.
Конечная фильтрация и хранение продукта
Затем партию концентрировали и подвергали диафильтрации против 10 мМ гистидина в 150 мМ хлориде натрия, pH 7,0, с 0,015% (мас./об.) полисорбата 20, при 4°C с использованием мембраны для проточной ультрафильтрации вдоль потока с NMWCO 300 кДа.
Партию ретентата фильтровали через фильтр 0,2 микрон, затем разводили с использованием дополнительного 10 мМ гистидина в 150 мМ хлориде натрия, pH 7,0, с 0,015% (мас./об.) полисорбата 20, распределяли по аликвотам и замораживали при ≤−60°C.
В таблице 1 показаны признаки конъюгата полисахарида S. pneumoniae серотипа 24F, полученного в DMSO
Таблица 1. Признаки конъюгата полисахарида S. pneumoniae серотипа 24F после конъюгации в DMSO
Mw окисленного Ps | Mw конъюгата | Ps:Pr | Использование лизина (моль/моль CRM197) | Свободный Ps/общий Ps | Свободный белок/общий белок |
100 кДа | 4875 кДа | 0,94 | 7,3 | 4,4% | 1,4% |
101 кДа | 3970 кДа | 0,81 | 7,9 | 5,8% | 4,6% |
ПРИМЕР 4: Получение составов моновалентных конъюгатов
Конъюгаты пневмококкового полисахарида-CRM197 получали, как описано в примере 3. Требуемый объем нерасфасованных конъюгатов, необходимый для получения целевой концентрации индивидуальных серотипов, рассчитывали на основании объема партии и концентраций индивидуальных нерасфасованных полисахаридов. Нерасфасованный конъюгат S. pneumoniae серотипа 24F объединяли с наполнителями, стерилизовали фильтрацией и добавляли к APA в условиях перемешивания. Конечная концентрация моновалентной конъюгированной вакцины S. pneumoniae серотипа 24F составляла 4 мкг/мл (мас./об. PnPs) с 20 мМ гистидином, 150 мМ NaCl, 0,2% (мас./об.) PS-20 и 0,250 мг/мл (мас./об. Al) в форме APA.
ПРИМЕР 5: Исследование иммуногенности моновалентного конъюгата у новозеландских кроликов-альбиносов
Иммуногенность моновалентных конъюгатов оценивали в модели на новозеландских кроликах-альбиносах (NZWR). Взрослых новозеландских кроликов-альбиносов (NZWR, n=3/группу) внутримышечно (IM) иммунизировали с использованием 0,25 мл соответствующей моновалентной конъюгированной вакцины на сутки 0 и сутки 14 (меняя бок). Моновалентную пневмококковую вакцину дозировали при 1 мкг PnPs (полисахарида S. pneumoniae серотипа 24F, конъюгированного с CRM197) с 62,5 мкг адъюванта фосфата алюминия (APA) для иммунизации. Сыворотки собирали до начала исследования (до иммунизации) и на сутки 14 (после дозирования 1, PD1) и 28 (после дозирования 2, PD2). NZWR обследовал по меньшей мере ежесуточно квалифицированный специалист по уходу за животными, по любым признакам заболевания или недомогания. Вакцинные составы у NZWR, по-видимому, являлись безопасными и хорошо переносимыми. Все эксперименты на животных проводили в строгом соответствии с рекомендациями Руководства по содержанию и использованию лабораторных животных Национальных институтов здравоохранения. Протокол эксперимента на NZWR был одобрен Комитетами по содержанию и использованию лабораторных животных как Merck & Co., Inc (Kenilworth, NJ), так и Covance (Denver, PA).
Сыворотки NZWR тестировали в анализах ELISA для оценки иммуногенности IgG с использованием для покрытия концентрации 1-2 мг/мл соответствующего PnPs. Функциональное антитело определяли посредством анализов опсонофагоцитоза (OPA), на основании описанных ранее способов. См., например, Caro-Aguilar et al., 2017, Vaccine 35:865-72 и Burton et al., 2006, Clin Vaccine Immunol 13(9):1004-9.
Обнаружено, что моновалентные пневмококковые конъюгированные вакцины из S. pneumoniae серотипа 24F являлись иммуногенными у кроликов (фиг. 8) и приводили к образованию функционального антитела, уничтожающего соответствующий бактериальный штамм (фиг. 9).
ПРИМЕР 6: Исследование заражения мышей для моновалентного конъюгата
Для подтверждения иммуногенности гликоконъюгатов S. pneumoniae серотипа 24, их тестировали в модели заражения на мышах. Молодых мышей (в возрасте 6-8 недель) иммунизировали с использованием 0,1 мл моновалентной конъюгированной вакцины 24F-CRM197 на сутки 0, сутки 14 и сутки 28 (n=10/группу). Мышей C57BL/6 и швейцарских мышей Вебстер внутрибрюшинно (IP) иммунизировали с использованием 0,1 мл, инъецированных в одном участке. Мышей CD-1 внутримышечно (IM) иммунизировали с использованием 0,05 мл, инъецированных в двух участках. Моновалентную пневмококковую вакцину дозировали при 0,4 мкг PnPs (полисахарида 24F, конъюгированного с CRM197) с 25 мкг адъюванта фосфата алюминия (APA) на иммунизацию. Мышей обследовали по меньшей мере ежесуточно квалифицированный специалист по уходу за животными, по любым признакам заболевания или недомогания. Вакцинные составы у мышей, по-видимому, являлись безопасными и хорошо переносимыми.
На сутки 52 мышей интратрахеально заражали с использованием S. pneumoniae серотипа 24F. Культуры S. pneumoniae в экспоненциальной фазе центрифугировали, промывали и суспендировали в стерильном PBS. Мышей подвергали анестезии с использованием изофлурана перед заражением. 106 КОЕ S. pneumoniae в 0,1 мл PBS помещали в горло мышей, удерживаемых в вертикальном положении за резцы. Засасывание бактерий индуцировали посредством осторожного вытягивания языка наружу и закрывания ноздрей. Мышей взвешивали ежесуточно и подвергали эвтаназии, если потеря массы превышала 20% от исходной массы. Кровь собирали через 24 часа, 48 часов и 72 часа для оценки бактериемии. Мышей обследовали по меньшей мере два раза в сутки квалифицированный специалист по уходу за животными, по любым признакам заболевания или недомогания. Все эксперименты на животных проводили в строгом соответствии с рекомендациями Руководства по содержанию и использованию лабораторных животных Национальных институтов здравоохранения. Протокол эксперимента на мышах был одобрен Комитетом по содержанию и использованию лабораторных животных Merck & Co., Inc.
Обнаружено, что моновалентная пневмококковая конъюгированная вакцина 24F-CRM197 обеспечивала защиту для всех трех линий мышей после заражения S. pneumoniae 24F. См. фигуры 10-12.
ПРИМЕР 7: Получение составов пневмококковых конъюгированных вакцин для исследования поливалентности на кроликах
Мультивалентную пневмококковую конъюгированную вакцину, состоящую из смеси нерасфасованных препаратов различных конъюгатов (включая серотипы S. pneumoniae 16F, 23A, 23B, 24F и 31), получали с использованием конъюгатов пневмококковый полисахарид-CRM197 и составляли в 20 мМ гистидине, pH 5,8, и 150 мМ хлориде натрия, и 0,1% мас./об. полисорбата-20 (PS-20) при 4 мкг/мл каждого серотипа до общей концентрации полисахарида 84 мкг/мл. Конъюгаты получали посредством индивидуальной конъюгации белка CRM197 с типами пневмококковых полисахаридов (PnPs) (включая серотипы S. pneumoniae 16F, 23A, 23B, 24F и 31). Требуемый объем нерасфасованных конъюгатов, необходимый для получения целевой концентрации индивидуальных серотипов, рассчитывали на основании объема партии и концентраций индивидуальных нерасфасованных полисахаридов. Индивидуальные конъюгаты добавляли в раствор гистидина, хлорида натрия и полисорбата-20 (PS-20) для получения смеси конъюгатов. В сосуде для получения состава, содержащем смесь конъюгатов, осуществляли перемешивание с использованием якоря магнитной мешалки, и подвергали стерильной фильтрации в другой сосуд. Затем составами заполняли пластиковые шприцы, стеклянные шприцы или флаконы и хранили при 2-8oC.
ПРИМЕР 8: Исследование иммуногенности мультивалентной пневмококковой конъюгированной вакцины у новозеландских кроликов-альбиносов
Взрослых новозеландских кроликов-альбиносов (NZWR, n=5/группу) внутримышечно (IM) иммунизировали с использованием 0,5 мл 21-валентной пневмококковой конъюгированной вакцины, описанной в примере 7, на сутки 0 и сутки 14 (меняя бок). Пневмококковую вакцину PCV21 дозировали при 2 мкг каждого конъюгированного PnPs на иммунизацию. Сыворотки собирали до начала исследования (до иммунизации) и на сутки 14 (после дозирования 1, PD1) и 28 (после дозирования 2, PD2). NZWR обследовал по меньшей мере ежесуточно квалифицированный специалист по уходу за животными, по любым признакам заболевания или недомогания. Вакцинные составы у NZWR, по-видимому, являлись безопасными и хорошо переносимыми. Все эксперименты на животных проводили в строгом соответствии с рекомендациями Руководства по содержанию и использованию лабораторных животных Национальных институтов здравоохранения. Протокол эксперимента на NZWR был одобрен Комитетами по содержанию и использованию лабораторных животных как Merck & Co., Inc, так и Covance (Denver, PA).
Сыворотки NZWR оценивали по иммуногенности IgG с использованием мультиплексного анализа электрохемилюминесценции (ECL). Этот анализ разработан для использования с сывороткой кроликов на основе анализа для человека, описанного в Marchese et al. (Optimization and validation of a multiplex, electrochemiluminescence-based detection assay for the quantitation of immunoglobulin G serotype-specific antipneumococcal antibodies in human serum. Clin Vaccine Immunol. 16(3): 387-96 (2009)), с использованием технологии, разработанной в MesoScale Discovery (подразделении MesoScale Diagnostics, LLC, Gaithersburg, MD), в которой используют метку SULFO-TAG™, излучающую свет после электрохимической стимуляции. Меченное SULFO-TAG™ антитело против IgG кролика использовали в качестве вторичного антитела для тестирования образцов сыворотки NZWR. Функциональное антитело определяли посредством мультиплексных анализов опсонофагоцитоза (MOPA), на основании описанных ранее способов, доступных онлайн из Bacterial Respiratory Pathogen Reference Laboratory в University of Alabama at Birmingham, с использованием программного обеспечения Opsotiter® 3 (UAB Research Foundation, Caro-Aguilar et al, 2017, выше, Burton et al., 2006, выше).
Обнаружено, что конъюгаты полисахарид-белок, полученные из S. pneumoniae серотипов 16F, 23A, 23B, 24F и 31, в мультивалентных пневмококковых конъюгированных вакцинах, являлись иммуногенными как после дозирования 1 (PD1), так и после дозирования 2 (PD2), у кроликов (фиг. 13). Они также приводили к образованию функционального антитела, уничтожающего бактериальные штаммы, относящиеся к типам из вакцины (фиг. 14). Кролики, иммунизированные с использованием мультивалентной пневмококковой конъюгированной вакцины в дозе 2 мкг, имели значимо более высокие титры MOPA PD1 для четырех серотипов, по сравнению с сыворотками кроликов до иммунизации (фиг. 14). Кролики, иммунизированные с использованием PCV21 в дозе 2 мкг, имели значимо более высокие титры MOPA PD2 для всех пяти серотипов, по сравнению с сыворотками кроликов до иммунизации (фиг. 14). Данные после логарифмического преобразования анализировали посредством однофакторного ANOVA с использованием критерия Даннетта для определения значимости.
Claims (41)
1. Конъюгат полисахарид-белок-носитель, в котором полисахарид содержит повторяющееся звено следующей структуры:
где белок-носитель представляет собой CRM197, и дополнительно конъюгат полисахарид-белок-носитель имеет молекулярную массу от 1000 кДа до 10000 кДа.
2. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где белок-носитель конъюгирован с полисахаридом на альдегиде активированного повторяющегося звена следующей структуры:
3. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где полисахарид имеет молекулярную массу от 50 кДа до 1,000 кДа.
4. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где полисахарид имеет молекулярную массу от 100 кДа до 800 кДа.
5. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где полисахарид имеет молекулярную массу от 100 кДа до 300 кДа.
6. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где степень конъюгации конъюгата составляет от 2 до 15.
7. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где степень конъюгации конъюгата составляет от 3 до 10.
8. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 9, где степень конъюгации конъюгата составляет от 5 до 10.
9. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где конъюгат полисахарид-белок-носитель имеет массовое соотношение полисахарида и белка-носителя от 0,5 до 3,0.
10. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где конъюгат полисахарид-белок-носитель имеет массовое соотношение полисахарида и белка-носителя от 0,8 до 1,2.
11. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где конъюгат полисахарид-белок-носитель имеет массовое соотношение полисахарида и белка-носителя приблизительно 0,94.
12. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где конъюгат полисахарид-белок-носитель имеет массовое соотношение полисахарида и белка-носителя приблизительно 0,81.
13. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где конъюгат полисахарид-белок-носитель содержит менее чем приблизительно 30% нековалентно ассоциированного полисахарида по сравнению с общим количеством полисахарида.
14. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где конъюгат полисахарид-белок-носитель содержит менее чем приблизительно 25% нековалентно ассоциированного полисахарида по сравнению с общим количеством полисахарида.
15. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где конъюгат полисахарид-белок-носитель содержит менее чем приблизительно 20% нековалентно ассоциированного полисахарида по сравнению с общим количеством полисахарида.
16. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где конъюгат полисахарид-белок-носитель содержит менее чем приблизительно 15% нековалентно ассоциированного полисахарида по сравнению с общим количеством полисахарида.
17. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где степень конъюгации конъюгата составляет от 5 до 10; где массовое соотношение полисахарида и белка-носителя в конъюгате составляет от 0,8 до 1,2; и где конъюгат содержит менее чем приблизительно 15% свободного полисахарида по сравнению с общим количеством полисахарида.
18. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 2, где белок-носитель конъюгирован с полисахаридом на альдегиде у по меньшей мере 50% повторяющихся звеньев.
19. Конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1, где белок-носитель конъюгирован с полисахаридом на альдегиде активированного повторяющегося звена следующей структуры:
где белок-носитель конъюгирован с полисахаридом на альдегиде у по меньшей мере 50% повторяющихся звеньев; где степень конъюгации конъюгата составляет от 5 до 10; где массовое соотношение полисахарида и белка-носителя в конъюгате составляет от 0,8 до 1,2; и где конъюгат содержит менее чем приблизительно 15% свободного полисахарида по сравнению с общим количеством полисахарида.
20. Иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 1 и фармацевтически приемлемый носитель.
21. Иммуногенная композиция по п. 20, дополнительно содержащая один или более дополнительных конъюгатов полисахарид-белок-носитель, где каждый из конъюгатов содержит полисахарид определенного серотипа Streptococcus pneumoniae, конъюгированного с CRM197, и где серотипы Streptococcus pneumoniae выбирают из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 6C, 6D, 7B, 7C, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 21, 22A, 22F, 23A, 23B, 23F, 24F, 27, 28A, 31, 33F, 34, 35A, 35B, 35F и 38.
22. Иммуногенная композиция по п. 21, где иммуногенная композиция составлена для содержания: 0,4-4 мкг/мл каждого полисахарида, за исключением полисахарида серотипа 6B, который, если присутствует, содержит 0,8-8 мкг/мл полисахарида; и белка-носителя CRM197 в количестве приблизительно от 0,5x до 3x общего количества полисахарида.
23. Иммуногенная композиция по п. 22, где иммуногенная композиция составлена для дополнительного содержания 150 мМ хлорида натрия, 20 мМ L-гистидинового буфера и 0,05-2% мас./об. поверхностно-активного вещества.
24. Иммуногенная композиция по п. 23, дополнительно содержащая адъювант.
25. Иммуногенная композиция по п. 24, где адъювант представляет собой адъювант на основе алюминия.
26. Иммуногенная композиция по п. 25, где адъювант выбран из группы, состоящей из фосфата алюминия, сульфата алюминия и гидроксида алюминия.
27. Иммуногенная композиция по п. 26, где адъювант представляет собой фосфат алюминия.
28. Иммуногенная композиция по п. 27, где адъювант фосфат алюминия присутствует в концентрации от 0,05 до 0,5 мг/мл.
29. Способ индукции иммунного ответа на капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae, включающий введение человеку иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по п. 20.
30. Способ индукции иммунного ответа на капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae, включающий введение человеку иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по п. 21.
31. Способ по п. 30, где иммуногенная композиция представляет собой однократную дозу 0,5 мл, составленную для содержания: 2 мкг каждого полисахарида, за исключением полисахарида серотипа 6B, который, если присутствует, составляет 4 мкг; приблизительно 32 мкг белка-носителя CRM197; 0,125 мг адъюванта фосфата алюминия; 150 мМ хлорида натрия, 20 мМ L-гистидинового буфера и 0,2% мас./об. PS-20.
32. Иммуногенная композиция, содержащая конъюгат полисахарид-белок-носитель по п. 19 и фармацевтически приемлемый носитель.
33. Иммуногенная композиция по п. 32, дополнительно содержащая один или более дополнительных конъюгатов полисахарид-белок-носитель, где каждый из конъюгатов содержит полисахарид определенного серотипа Streptococcus pneumoniae, конъюгированного с CRM197, и где серотипы Streptococcus pneumoniae выбирают из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 6C, 6D, 7B, 7C, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15A, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 21, 22A, 22F, 23A, 23B, 23F, 24F, 27, 28A, 31, 33F, 34, 35A, 35B, 35F и 38.
34. Способ индукции иммунного ответа на капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae, включающий введение человеку иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по п. 32.
35. Способ индукции иммунного ответа на капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae, включающий введение человеку иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по п. 33.
36. Способ по п. 35, где иммуногенная композиция представляет собой однократную дозу 0,5 мл, составленную для содержания: 2 мкг каждого полисахарида, за исключением полисахарида серотипа 6B, который, если присутствует, составляет 4 мкг; приблизительно 32 мкг белка-носителя CRM197; 0,125 мг адъюванта фосфата алюминия; 150 мМ хлорида натрия, 20 мМ L-гистидинового буфера и 0,2% мас./об. PS-20.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762555461P | 2017-09-07 | 2017-09-07 | |
US62/555,461 | 2017-09-07 | ||
US201862645252P | 2018-03-20 | 2018-03-20 | |
US62/645,252 | 2018-03-20 | ||
PCT/US2018/049308 WO2019050815A1 (en) | 2017-09-07 | 2018-09-04 | ANTI-PNEUMOCOCCAL POLYSACCHARIDES AND THEIR USE IN IMMUNOGENIC CONJUGATES POLYSACCHARIDE-PROTEIN CARRIER |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2020112308A RU2020112308A (ru) | 2021-10-07 |
RU2020112308A3 RU2020112308A3 (ru) | 2022-03-24 |
RU2785429C2 true RU2785429C2 (ru) | 2022-12-07 |
Family
ID=
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20160007642A1 (en) * | 2014-07-09 | 2016-01-14 | Midori Usa, Inc. | Oligosaccharide compositions and methods for producing thereof |
US20170021006A1 (en) * | 2015-07-21 | 2017-01-26 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof |
WO2017035412A1 (en) * | 2015-08-25 | 2017-03-02 | Kaleido Biosciences, Inc. | Glycan compositions and uses thereof |
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20160007642A1 (en) * | 2014-07-09 | 2016-01-14 | Midori Usa, Inc. | Oligosaccharide compositions and methods for producing thereof |
US20170021006A1 (en) * | 2015-07-21 | 2017-01-26 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof |
WO2017035412A1 (en) * | 2015-08-25 | 2017-03-02 | Kaleido Biosciences, Inc. | Glycan compositions and uses thereof |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
GENO K. AARON et al. Pneumococcal Capsules and Their Types: Past, Present, and Future. Clinical Microbiology Reviews, 2015, 28(3), p. 871-899. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11759510B2 (en) | Pneumococcal polysaccharides and their use in immunogenic polysaccharide-carrier protein conjugates | |
US11964023B2 (en) | Pneumococcal polysaccharides and their use in immunogenic polysaccharide-carrier protein conjugates | |
US20230107713A1 (en) | Pneumococcal polysaccharides and their use in immunogenic polysaccharide-carrier protein conjugates | |
JP7438102B2 (ja) | 肺炎球菌多糖体および免疫原性多糖体-キャリアタンパク質コンジュゲートでのその使用 | |
US11524076B2 (en) | Pneumococcal polysaccharides and their use in immunogenic polysaccharide-carrier protein conjugates | |
RU2785429C2 (ru) | Пневмококковые полисахариды и их применение в иммуногенных конъюгатах полисахарид-белок-носитель | |
RU2801304C2 (ru) | Пневмококковые полисахариды и их применение в иммуногенных конъюгатах полисахарид-белок-носитель | |
RU2801288C2 (ru) | Пневмококковые полисахариды и их применение в иммуногенных конъюгатах полисахарид-белок-носитель | |
RU2784449C2 (ru) | Пневмококковые полисахариды и их применение в иммуногенных конъюгатах полисахарид-белок-носитель |