RU2783304C1 - Способ дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных узловых образований щитовидной железы - Google Patents
Способ дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных узловых образований щитовидной железы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2783304C1 RU2783304C1 RU2021136832A RU2021136832A RU2783304C1 RU 2783304 C1 RU2783304 C1 RU 2783304C1 RU 2021136832 A RU2021136832 A RU 2021136832A RU 2021136832 A RU2021136832 A RU 2021136832A RU 2783304 C1 RU2783304 C1 RU 2783304C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- thyroid
- fas
- malignant
- marker
- differential diagnosis
- Prior art date
Links
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 230000003211 malignant Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 210000001685 Thyroid Gland Anatomy 0.000 title abstract description 34
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title abstract description 10
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 30
- 208000009453 Thyroid Nodule Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 230000002380 cytological Effects 0.000 claims abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims abstract description 13
- 206010059512 Apoptosis Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims abstract description 11
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims abstract description 5
- 208000009955 Thyroid Neoplasms Diseases 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 9
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 22
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 201000010198 papillary carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 6
- SANWDUBXTJBJBT-UHFFFAOYSA-N 4-[3-(4-carbamimidoylphenoxy)-2-[(4-carbamimidoylphenoxy)methyl]pentoxy]benzenecarboximidamide Chemical compound C=1C=C(C(N)=N)C=CC=1OCC(COC=1C=CC(=CC=1)C(N)=N)C(CC)OC1=CC=C(C(N)=N)C=C1 SANWDUBXTJBJBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000005783 Autoimmune Thyroiditis Diseases 0.000 description 5
- 210000000805 Cytoplasm Anatomy 0.000 description 5
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 5
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 5
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 5
- 230000002055 immunohistochemical Effects 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 230000003902 lesions Effects 0.000 description 5
- 229920001239 microRNA Polymers 0.000 description 5
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 5
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 5
- 210000004940 Nucleus Anatomy 0.000 description 4
- 230000002062 proliferating Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 4
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 3
- 108020004388 MicroRNAs Proteins 0.000 description 3
- 102100019730 TP53 Human genes 0.000 description 3
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 3
- 200000000014 benign neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000010882 preoperative diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 2
- 210000003719 B-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 2
- 210000000601 Blood Cells Anatomy 0.000 description 2
- 210000001165 Lymph Nodes Anatomy 0.000 description 2
- 206010058046 Post procedural complication Diseases 0.000 description 2
- 206010043709 Thyroid disease Diseases 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L cacl2 Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 2
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 2
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cells Anatomy 0.000 description 2
- NKCXQMYPWXSLIZ-PSRDDEIFSA-N (2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-5-amino-2-[[2-[[(2S)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]propanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-m Chemical compound O=C([C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NKCXQMYPWXSLIZ-PSRDDEIFSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 2qpq Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010001488 Aggression Diseases 0.000 description 1
- 102100004328 BRAF Human genes 0.000 description 1
- 101700004551 BRAF Proteins 0.000 description 1
- 210000003855 Cell Nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000037250 Clearance Effects 0.000 description 1
- 102100016439 FAS Human genes 0.000 description 1
- 101700079540 FAS Proteins 0.000 description 1
- 102000015212 Fas Ligand Protein Human genes 0.000 description 1
- 108010039471 Fas Ligand Protein Proteins 0.000 description 1
- 210000001280 Germinal Center Anatomy 0.000 description 1
- 210000004907 Glands Anatomy 0.000 description 1
- 206010018498 Goitre Diseases 0.000 description 1
- 102100001047 HMGA2 Human genes 0.000 description 1
- 108010085780 HMGA2 Protein Proteins 0.000 description 1
- WZUVPPKBWHMQCE-VYIIXAMBSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@@]2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-VYIIXAMBSA-N 0.000 description 1
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 1
- 206010054949 Metaplasia Diseases 0.000 description 1
- 206010061289 Metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920000460 Mitochondrial DNA Polymers 0.000 description 1
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000008636 Neoplastic Process Diseases 0.000 description 1
- 229920002248 Nuclear DNA Polymers 0.000 description 1
- 206010033701 Papillary thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 1
- SOROUYSPFADXSN-SUWVAFIASA-N Talampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(=O)OC2C3=CC=CC=C3C(=O)O2)(C)C)=CC=CC=C1 SOROUYSPFADXSN-SUWVAFIASA-N 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001058 adult Effects 0.000 description 1
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000035512 clearance Effects 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 201000008325 diseases of cellular proliferation Diseases 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 1
- 201000004260 follicular adenoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005160 follicular thyroid carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000003872 goiter Diseases 0.000 description 1
- 238000002657 hormone replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000015689 metaplastic ossification Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic Effects 0.000 description 1
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000000771 oncological Effects 0.000 description 1
- 230000000849 parathyroid Effects 0.000 description 1
- 201000003868 postsurgical hypothyroidism Diseases 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary Effects 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургической эндокринологии, и может быть использовано для дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественной или злокачественной природы узловых образований щитовидной железы. Выполняют тонкоигольную аспирационную биопсию узловых образований щитовидной железы под контролем УЗИ. Готовят цитологический препарат. Проводят иммуноцитохимический анализ экспрессии маркера пролиферации Ki-67 и маркера апоптоза Fas-R. Вычисляют индекс злокачественности Z по формуле Z=Fas-R/(Ki-67+1), где Fas-R - среднее количество позитивных клеток, окрашенных маркером апоптоза, Ki-67 - среднее количество позитивных клеток, окрашенных маркером пролиферации, по 10 полям зрения в препарате. При Z менее 1,1 судят о низком риске злокачественного роста узлового образования щитовидной железы. При Z более 2,8 делают заключение о высоком риске злокачественности узлового образования щитовидной железы. При Z в пределах 1,1-2,8 судят о среднем риске злокачественного роста опухоли и рекомендуют повторную тонкоигольную аспирационную биопсию. Способ обеспечивает повышение точности и информативности предоперационной дифференциальной диагностики природы узловых образований щитовидной железы. 1 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургической эндокринологии, и может быть использовано для дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественной или злокачественной природы узловых образований щитовидной железы, определяющей выбор тактики ведения пациентов.
Высокая заболеваемость и динамика патоморфоза рака щитовидной железы требует совершенствования диагностических подходов (Vargas-Pinto S., Minerva A., Arenas R. Lobectomy Compared to Total Thyroidectomy for Low-Risk Papillary Thyroid Cancer: A Systematic Review. Journal of Surgical Research. 2019).
На сегодняшний день среди хирургов сложились две противоположные точки зрения по поводу хирургического вмешательства на ранних стадиях рака щитовидной железы (ЩЖ) - радикальное и менее радикальное. Использование тонкоигольной аспирационной биопсии (ТАПБ) с цитологическим исследованием биоптата позволило чаще выявлять больных с ранними стадиями папиллярного рака, у которых вопрос объема операций высоко актуален (Осипенко С.К. Диагностическая и лечебная тактика при "фолликулярной опухоли" щитовидной железы. Вестник хирургии им. И.И. Грекова. 2015; 2: 77-80). Стандартный метод дооперационной диагностики, основанный на цитологическом исследовании препаратов, полученных ТАПБ, предполагает разделение узловых образований ЩЖ на 6 диагностических категорий, используя классификацию поражений ЩЖ по системе Bethesda (Е. Cibas, Syed Z. Ali, The Bethesda System for Reporting Thyroid Cytopathology. Thyroid: official journal of the American Thyroid Association, 2009).
Однако, остается группа пациентов, у которых результаты цитологического исследования ТАПБ не позволяют дифференцировать доброкачественные и злокачественные новообразования на основании клеточных характеристик, в том числе из-за субъективности оценки, что определяет различную хирургическую и терапевтическую тактику их ведения. Такое исследование требует большого опыта от исполнителя и относительно часто приводит к ошибкам, и в 30% случаев заключение оказывается неопределенным, поскольку цитологических признаков недостаточно для разделения доброкачественных и злокачественных фолликулярных опухолей. В соответствии с клиническими рекомендациями, большинство пациентов с неопределенным цитологическим заключением, в том числе все, относящиеся к категории Bethesda III и IV, направляются на диагностическую операцию или молекулярное тестирование. При этом от 70% до 80% узловых образований ЩЖ, по результатам послеоперационного гистологического исследования, оказываются доброкачественными, а сама операция -ненужной (Haugen B.R., Alexander Е.K., Bible K.С. et al. American Thyroid Association Management Guidelines for Adult Patients with Thyroid Nodules and Differentiated Thyroid Cancer: The American Thyroid Association Guidelines Task Force on Thyroid Nodules and Differentiated Thyroid Cancer. Thyroid. 2016 Jan; 26 (1): 1-133). Риск послеоперационных осложнений и послеоперационный гипотиреоз, требующий пожизненной заместительной гормональной терапии, существенно снижают качество жизни.
В настоящее время все большее распространение в исследовании щитовидной железы приобретает иммуногистохимическое исследование, что позволяет оценить степень пролиферативной активности клеток ЩЖ (Стяжкина С.Н. Возможности иммуногистохимического исследования для оценки пролиферативной активности ткани щитовидной железы. Современные проблемы науки и образования. 2017; 2: 21). Возможность диагностировать образцы с неопределенной цитологией на доброкачественные и злокачественные, позволит снизить количество хирургических вмешательств и, соответственно, последующий риск осложнений. В связи с необходимостью совершенствования подходов к дооперационному типированию патологий ЩЖ, актуальной задачей является разработка способов диагностики узловых образований ЩЖ с использованием биомаркеров.
Известен способ дифференциальной диагностики новообразований щитовидной железы человека (Патент RU 2569154, опубл. 20.11.2015), включающий взятие образца ткани опухоли ЩЖ и прилежащей неизмененной ткани железы в качестве контроля, выделение суммарного пула РНК из образцов, измерение уровня экспрессии диагностируемых микроРНК с последующим сравнительным анализом изменения уровня экспрессии 13 микроРНК, а именно микроРНК-21, -221, -222, -205, -146b, -31, -187, -181b, -375, -199b, -144, -200а, -200b, в опухолевых образцах в сравнении с нормальными тканями методом ОТ-ПЦР в реальном времени, составление заключения о наличии и типе новообразования ЩЖ на основании комплексного критерия, рассчитанного на основе средних значений уровней экспрессии микроРНК в разных типах новообразований ЩЖ, характеризующихся специфическим профилем микроРНК.
К недостаткам данного способа относятся такие, как недостаточная информативность и эффективность для дооперационной диагностики узловых образований ЩЖ, так как способ ориентирован на анализ операционного материала.
Известен способ дифференциальной диагностики опухолей щитовидной железы (Патент РФ №2332172; Опубл. 2008), включающий определение экспрессии белков Ki-67, Bc1-2, р53 в клетках опухоли с помощью специфических моноклональных антител в комплексе с хромогеном, при этом определяют для каждого белка индекс мечения ядер клеток, дополнительно определяют индексы мечения цитоплазмы клеток для белков Вс1-2 и р53, оценивают коэффициент потенциальной возможности к пролиферативной активности по формуле, в которой используют индексы мечения ядер клеток опухоли для каждого из белков соответственно, причем оценивают коэффициент возможной атипии цитоплазмы (КВА) как отношение индекса мечения цитоплазмы клеток для белка Вс1-2 к индексу мечения цитоплазмы клеток для белка р53, и определяют коэффициент активности опухолевого роста и потенциальной злокачественности (КАОРЗ) как произведение КВА и коэффициента потенциальной возможности к пролиферативной активности и при величине 0≤КАОРЗ≤4,35 диагностируют атипическую фолликулярную аденому, а при величине КАОРЗ>4,36 - фолликулярный рак.
Недостатками известного способа является то, что он недостаточно информативен и не обладает необходимой точностью при дифференциальной диагностике, что наиболее важно для врача и пациента.
Известен способ дифференциальной диагностики новообразований щитовидной железы (Патент РФ 2705110. Опубл. 20219), заключающийся в том, что выявляют узловые образования щитовидной железы, проводят пункционную биопсию, последующее цитологическое исследование пунктата и при неопределенных цитологических заключениях выполняют молекулярно-генетическое исследование, производя методом ОТ-ПЦР количественную оценку матричной РНК и микроРНК, и при условии показателей HMGA2 более 0.09, микроРНК-221 более 0,0105 и микроРНК-375 более - 12,1213, определяют фолликулярную опухоль с признаками злокачественности, при условии показателей микроРНК-146b более 0.1721, определяют папиллярный рак, при показателях миРНК-375 более 5.2514, определяют медуллярный рак, а показатель соотношения митохондриальной ДНК/ядерной ДНК более 5716,3013 - В-клеточный рак, наличие мутации V600 в гене BRAF - папиллярный рак и является риском наличия высокой биологической агрессивности данного папиллярного рака.
Основными недостатками данного способа являются недостаточная точность, ограниченные функциональные возможности, так как он не позволяет дифференцировать узлы паращитовидной железы, узловые образования с присутствием клеток Гюртля.
В качестве прототипа выбран способ дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований щитовидной железы (Патент РФ №2614700; Опубл. 2017), включающий тонкоигольную аспирационную биопсию узловых образований щитовидной железы под контролем ультразвукового исследования, промывку и консервацию аспирата, центрифугирование, отбор супернатантов, проведение иммуноцитохимического (ИЦХ) анализа экспрессии Ki-67 и расчет диагностического показателя р по формуле, в которой HS=∑P(i)×i, где i - интенсивность окрашивания, выраженная в баллах от 0 до 3, P(i) - процент клеток, окрашенных с разной интенсивностью, и при величине р>0,5 - образование признают злокачественным, при величине р<0,5 - доброкачественным.
К недостаткам прототипа относятся следующие: не высокая точность и недостаточная информативность, так как измерение уровня экспрессии Ki-67 - маркера пролиферации при опухолевых процессах, который в некоторых случаях позволяет определить злокачественность процесса и склонность опухоли к метастазированию, в клинике эндокринной хирургии динамика экспрессии Ki-67 не является патогномоничным достоверным признаком опухолевого роста в тироцитах, а ИЦХ метод без изготовления клеточного блока (cell-block) в мазке малоинформативен, и по релевантности в клинике уступает методу клеточных блоков (Воробьев С.Л. Морфологическая диагностика заболеваний щитовидной железы. СПб.: Издательско-полиграфическая компания «КОСТА»; 2014), а неоднозначность трактовки не всегда удовлетворяет потребность врача в принятии решения на предоперационном этапе.
Проведенный патентно-информационный поиск не выявил способов дооперационной дифференциальной диагностики типов узловых образований щитовидной железы с существенными признаками заявляемого способа.
Исходя из вышеприведенного уровня техники, при дифференциальной диагностике узловых образований щитовидной железы проблемой является сложность оценки образцов с неопределенной цитологией на доброкачественные и злокачественные, что влияет на количество хирургических вмешательств и возможный последующий риск специфических послеоперационных осложнений.
Разработка более эффективного способа дооперационной дифференциальной диагностики узловых образований щитовидной железы путем использования дополнительных прогностических значимых критериев оценки опухоли ЩЖ за счет применения технологии пробоподготовки, позволит решить вышеуказанную проблему, а именно повысить достоверность верификации опухолевых поражений и, соответственно, достигнуть сокращения количества необоснованных хирургических вмешательств.
Технический результат заключается в повышении точности и информативности предоперационной дифференциальной диагностики природы узловых образований щитовидной железы, и, как следствие, оптимизации тактики ведения пациентов с улучшением их качества жизни.
Предлагается, как и в прототипе, выполнение тонкоигольной аспирационной биопсии (ТАБП) под контролем ультразвукового исследования (УЗИ) для забора образцов узловых образований ЩЖ, приготовление цитологического препарата, проведение иммуноцитохимического (ИЦХ) анализа экспрессии маркера пролиферации Ki-67.
Сущность заявляемого изобретения заключается в том, что в способе дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных узловых образований щитовидной железы, включающем выполнение тонкоигольной аспирационной биопсии узловых образований щитовидной железы под контролем ультразвукового исследования, приготовление цитологического препарата, проведение иммуноцитохимического анализа экспрессии маркера пролиферации Ki-67, согласно изобретению, дополнительно проводят изготовление цитологического препарата методом клеточного блока и иммуноцитохимическую реакцию с маркером апоптоза Fas-R, измеряют уровни экспрессии Ki-67 и Fas-R, вычисляют индекс злокачественности Z по формуле Z=Fas-R/(Ki-67+1), где Fas-R - среднее количество позитивных клеток, окрашенных маркером апоптоза, Ki-67 - среднее количество позитивных клеток, окрашенных маркером пролиферации, по 10 полям зрения в препарате, и при величине индекса Z менее 1,1 судят о низком риске злокачественного роста узлового образования щитовидной железы, при величине индекса Z более 2,8 делают заключение о высоком риске злокачественности узлового образования щитовидной железы.
Причинно-следственная связь между совокупностью существенных признаков и обеспечиваемым изобретением техническим результатом, состоит в том, что проводят иммуноцитохимическое исследование гистологического препарата из цитологического материала, сформированного методом клеточных блоков, причем ИЦХ реакцию ставят на клеточном блоке с двумя маркерами - маркером пролиферации Ki-67 и с дополнительным маркером апоптоза Fas-R, по соотношению уровней экспрессии которых вычисляют индекс злокачественного потенциала опухоли ЩЖ, что позволяет повысить точность и качество дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований щитовидной железы, так как ИЦХ анализ динамики экспрессии Ki-67 и Fas-R с изготовлением клеточного блока cell-block является более информативным, и по релевантности в клинике значительно лучше по сравнению со способом-прототипом.
Рецепторы CD-95, называемые также FAS-R, важны для иммунного устранения трансформированных клеток. FAS-R - это белки, индукторы апоптоза, которые при взаимодействии с соответствующим лигандом, активируют цепочку внутриклеточных процессов для гибели клетки. У раковых клеток этот сигнальный механизм трансформирован, большинство раковых клеток устойчивы к апоптозу через активацию FAS-R или имеют рецепторные и ферментативные нарушения в этой цепи. (Peter ME, Hadji А, Murmann АЕ, et al. The role of CD95 and CD95 ligand in cancer [published correction appears in Cell Death Differ. 2015 May; 22 (5): 885-6]. Cell Death Differ. 2015; 22 (4): 549-559).
Использование метода клеточных блоков cell-block имеет преимущества, в отличие от мазков, он позволяет проводить обзорные и селективные окраски, получать серийные срезы, сохраняет структуру материала, молекулярные реакции при этом методе дают стабильный хорошо воспроизводимый результат, что позволяет проводить последовательно разные молекулярно-генетические исследования, сводя к минимуму повторные инвазивные манипуляции для пациента.
Выбор диагностических значимых маркеров Fas-R и Ki-67 для использования в комплексе с цитологическими характеристиками мазка для прогностической оценки злокачественного потенциала новообразования является более информативным и способствует повышению эффективности лечения больных с узловыми образованиями ЩЖ.
Так, например, низкие значения маркера Fas-R и повышенные значения маркера Ki-67 на фоне отсутствия признаков аутоиммунного тиреоидита свидетельствует об активации неопластических процессов, а при наличии цитологических характеристик фолликулярной опухоли, низкие показатели маркера Fas-R и повышенные Ki-67 сигнализируют о большей вероятности наличия фолликулярной карциномы.
Заявляемый способ дооперационной дифференциальной диагностики узловых образований щитовидной железы разработан впервые.
Способ заключается в следующем.
При подозрении на опухоль щитовидной железы под контролем УЗИ выполняют тонкоигольную аспирационную биопсиию, материал направляют для цитологии и изготовления клеточного блока cell-block. Для этого пунктат фиксируют, промывают, взвесь клеток помещают в стеклянную пробирку, добавляют 500 мкл цитратной плазмы и 5 мкл хлорида кальция, инкубируют в термостате 15-20 минут при 37°С, формируя тромбиновый сверток как связующую основу, далее обезвоживают и пропитывают парафином, изготавливают срезы по стандартной методике, и инструкциям гистологических реагентов и приборов.
Для верификации сомнительных цитологических изменений, например, таких как, папиллярные структуры, плазмоцитоидность цитоплазмы, наличие внутриядерных борозд, нагромождение ядер и их укрупнение, проводят иммуноцитохимическую реакцию с двумя маркерами на клеточном блоке cell-block. Ставят реакцию с маркером пролиферации Ki-67 и с апоптотическим маркером Fas-R. Данный этап выполняют по стандартной методике, включающей депарафинизацию, промывку, обработку первичным антителом, обработку системой детекции, демаскировку, окрашивание ядер, промывку и заключение под стекло.
По полученным значениям уровней экспрессии маркера Ki-67 и маркера Fas-R в абсолютных числах определяют злокачественный потенциал опухоли путем вычисления индекса злокачественности Z по формуле:
Z=Fas-R/(Ki-67+1),
где Fas-R - среднее количество позитивных клеток, окрашенных маркером апоптоза, Ki-67 - среднее количество позитивных клеток, окрашенных маркером пролиферации, по 10 полям зрения в препарате.
При величине индекса Z менее 1,1 судят о низком риске злокачественного роста. При этом рекомендуют динамическое наблюдение пациента с повторной ТАПБ в случаях увеличения размеров узла или изменении его эхогенности.
При величине индекса Z более 2,8 делают заключение о высоком риске злокачественного роста.
При гипоэхогенности узла, а также нормальных показателях антител к тиреоидной пироскидазе (АТ-ТПО), антител к тиреоидной пироскидазе (АТ-ТТГ) и величине индекса Z более 2,8 рекомендуют гемитиреоидэктомию с ревизией региональных лимфоузлов.
При подозрении на метастатическое поражение по данным КТ, МРТ - рекомендуют регионарную лимфодиссекцию с тиреоидэктомией.
В случаях изоэхогенных ультразвуковых характеристик узла, наличии биохимических показателей аутоимунного тиреоидита АТ-ТПО, АТ-ТТГ и величине индекса Z более 2,8 рекомендуют проведение жидкостной цитологии для исключения папиллярной карциномы.
Если величина индекса Z составляет 1,1-2,8, то судят о среднем риске злокачественного роста опухоли. Рекомендуют при этом повторную ТАПБ, и в случае подтверждения опухолевой трансформации клеток - оперативное вмешательство, гемитиреоидэктомию.
Использование заявляемого способа дает возможность исключить риск врачебной ошибки в диагностике природы узловых образований щитовидной железы и выборе тактики ведения пациентов в сомнительных случаях.
Заявляемый способ дифференциальной диагностики был применен у 61 пациента (как мужчины, так и женщины) возрастом от 30 до 75 лет, которые обратились в клинику эндокринной хирургии для тиреоидэктомии. Все пациенты, участвовавшие в исследовании, дали на это письменное добровольное информированное согласие. Во время предоперационного УЗИ-исследования отбиралась ТАПБ по стандартной методике, при заполнении направления на цитологическое исследование указывали описание локализации и ультразвуковых характеристик узла. Материал биопсии доставлялся в лабораторию в шприце в течение 30 минут после взятия, и сразу же после поступления содержимое шприца выдавливали в пробирку-эппендорф, содержащую 0,5 мл сыворотки, и добавляли 50 мкл хлорида кальция, после чего помещали в термостат на 30 минут. Полученный сгусток, содержащий биопсийный материал, фиксировали в 10% забуференном формалине в течение двух часов и подвергали гистологической проводке по стандартной методике из инструкции и руководств пользователя приборов для гистолаборатории фирмы Leica (Австрия) и Millestone (Италия) - вырезная станция Leec LTD, гистологический процессор Logos, заливочная станция, автоматический микротом и микроскоп Leica. Из парафинового блока изготавливали тонкие срезы, окрашивали их гематоксилином и эозином в ручном стандартном протоколе согласно инструкции к реагентам (Биовитрум, Россия). Для иммуногистохимического (ИГХ) исследования использовали срезы с тех же блоков, уложенные на высокоадгезивные стекла. Протокол ИГХ соответствовал рекомендациям, указанным производителями антител и иммуностейнеру Bond Max (Leica, Австрия). Использовали антитела Ki-67 (клон ММ1, RTU; Novocastra, Великобритания) и Fas-R (ab82419, концентрат, разведение 1:200; Abeam, США). Окрашенные препараты просматривали под микроскопом DM 2000 (Leica, Германия) с объективами Plan10x, Plan40x. Расчет индекса соотношения уровней экспрессии маркеров проводили по формуле Z=Fas-R/(Ki-67+1), где Z - индекс злокачественности, Fas-R и Ki-67 - среднее количество позитивных клеток, окрашенных соответствующим маркером, по 10 полям зрения в препарате. Операционный материал, поступивший от этих же больных, фиксировали в формалине и подвергали тем же процедурам, что и материал ТАПБ. Исследование было выполнено в соответствии с требованиями Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (ред. 2013 г).
В 97% случаев результаты реакции по заявляемому способу на предоперационном этапе показали соответствие с послеоперационным диагнозом. Наиболее высокие значения маркера Ki-67 (15-20 клеток в поле зрения) наблюдали у пациентов с токсическим зобом или аутоиммунным тиреоидитом. То есть, данный маркер в изолированном применении не специфичен для онкологической патологии щитовидной железы, а в сочетании с маркером апоптоза FAS-R и вычислении их соотношения он чувствителен и специфичен.
В таблице 1 приведены значения экспрессии маркеров Ki-67 и FAS-R, а также Z-индекса в тироцитах в нозологических группах (m; Me[Min; Max])
На основании анализа количества достоверно положительных, ложно- и достоверно отрицательных диагнозов по четырем нозологическим группам чувствительность заявляемого способа показала 96,80%, и специфичность - 96,17%. Применение предложенного способа дополнительно к стандартным методам исследования, таким как УЗИ и цитологическое исследование позволяет улучшить дооперационную диагностику и осуществить дальнейший выбор адекватного метода лечения.
Использование способа позволяет исследовать на до госпитальном этапе узловые образования ЩЖ с большей точностью и информативностью по сравнению со способом-прототипом, а следовательно, дает возможность не только верифицировать диагноз, но и выбрать оптимальный способ терапии, определить адекватный объем оперативного вмешательства, особенно при многоузловом поражении щитовидной железы.
Способ подтверждается следующими клиническими примерами.
Пример 1.
Пациентка И., 34 года во время планового УЗИ исследования щитовидной железы обнаружен узел 24×13 мм, с нечеткими контурами, гипоэхогенный. Т3 - 2,7 нмоль/л, Т4 - 13,6 пмоль/л, ТТГ - 4,0 МЕ/мл, АТ-ТТГ - 0,5 МЕ/мл, АТ-ТПО - 31 мкМЕ/мл.
Проведена ТАПБ. В цитологических препаратах: на фоне форменных элементов крови с умеренно плотным коллоидом определяются микро-нормофолликулярные и папиллярные скопления из тироцитов со слабо полиморфными, укрупненными и очагово нагромождающимися ядрами округлой и округло-овальной формы и наличием внутриядерных борозд. В фоновом материале - примесь умеренного количества малых лимфоцитов. Заключение: Атипия неясного значения. Категория по системе Bethesda 2017 - III.
Проведена дифференциальная диагностика по заявляемому способу.
При проведении ИЦХ реакции величина индекса Z составила 2,7. Заключение: Подозрение на папиллярную карциному. Средний риск злокачественности - ближе к высокому.
Была проведена повторная ТАПБ: Подозрение на папиллярную карциному. Категория по системе Bethesda 2017 - VI. Проведена гемитиреоидэктомия. При гистологическом исследовании верифицирован диагноз: Папиллярная карцинома правой доли щитовидной железы, диаметр 2,3 см, без признаков прорастания капсулы щитовидной железы. рТ2 L0 V0 PnO.
При использовании данного способа удалось определить характер патологического процесса, выполнить органосохраняющий объем операции. Пациентка после операции чувствует себя хорошо, получает минимальную дозу заместительной терапии.
Пример 2.
Пациентка И., 58 лет во время УЗИ исследования щитовидной железы обнаружен узел 32×10 мм, с нечеткими контурами, изоэхогенный. Т3 - 1,8 нмоль/л, Т4 - 10,5 пмоль/л, ТТГ - 6,8 мкМЕ/мл, АТ-ТТГ - 1,5 мкМЕ/мл, АТ-ТПО - 56 мкМЕ/мл.
Проведена ТАПБ. В цитологических препаратах: на фоне форменных элементов крови со скудным комковатым коллоидом определяются кластеры, солидно-шаровидные скопления из тироцитов с признаками В-клеточной трансформации и дистрофическим ядерным полиморфизмом. Определяется наличие единичных трабекулярных и папиллярных структур с нагромождающимися овальными ядрами с неровными ядерными контурами и наличием внутриядерных борозд. Очаговая плоскоклеточная метаплазия. В фоновом материале - примесь макрофагов и единичных эпителиоидных многоядерных клеток, обилие лимфоидных клеток: малых лимфоцитов, клеток герминативных центров, единичных плазмоцитов. Заключение: Атипия неясного значения на фоне аутоимунного тиреоидита. Категория по системе Bethesda 2017 - III.
Пациентке проведена дифференциальная диагностика по заявляемому способу.
При проведении ИЦХ реакции индекс Z составил 3,3 - Заключение: Вероятно, папиллярная карцинома. Высокий риск злокачественности.
Была проведена повторная ТАПБ: Папиллярная карцинома на фоне аутоимунного тиреоидита. Категория по системе Bethesda 2017 - VI. Проведена тиреоидэктомия. При гистологическом исследовании верифицирован диагноз: Папиллярная карцинома левой доли щитовидной железы, диаметр 3,1 см, без признаков прорастания капсулы щитовидной железы. рТ2 L0 V0 PnO.
Применение заявляемого способа диагностики позволило определить характер патологического процесса, была выполнена радикальная операция. Пациентка после операции чувствует себя хорошо, получает заместительную терапию.
Заявляемый способ обеспечивает повышение достоверности верификации опухолевых поражений щитовидной железы и может быть эффективно использован для диагностики опухолей в дооперационном периоде у больных с узловыми заболеваниями ЩЖ для выбора адекватного метода лечения.
Claims (1)
- Способ дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных узловых образований щитовидной железы, включающий выполнение тонкоигольной аспирационной биопсии узловых образований щитовидной железы под контролем ультразвукового исследования, приготовление цитологического препарата, проведение иммуноцитохимического анализа экспрессии маркера пролиферации Ki-67, отличающийся тем, что дополнительно проводят изготовление цитологического препарата методом клеточного блока и иммуноцитохимическую реакцию с маркером апоптоза Fas-R, измеряют уровни экспрессии Ki-67 и Fas-R, вычисляют индекс злокачественности Z по формуле Z=Fas-R/(Ki-67+1), где Fas-R - среднее количество позитивных клеток, окрашенных маркером апоптоза, Ki-67 - среднее количество позитивных клеток, окрашенных маркером пролиферации, по 10 полям зрения в препарате, и при величине индекса Z менее 1,1 судят о низком риске злокачественного роста узлового образования щитовидной железы, при величине индекса Z более 2,8 делают заключение о высоком риске злокачественности узлового образования щитовидной железы, при величине индекса Z в пределах 1,1-2,8 судят о среднем риске злокачественного роста опухоли и рекомендуют повторную тонкоигольную аспирационную биопсию.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2783304C1 true RU2783304C1 (ru) | 2022-11-11 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2805941C1 (ru) * | 2022-07-25 | 2023-10-24 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского" | Способ комплексной дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных узловых образований щитовидной железы |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2285923C2 (ru) * | 2004-11-09 | 2006-10-20 | Ростовский научно-исследовательский онкологический институт МЗ РФ | Способ дифференциальной диагностики узловых образований щитовидной железы у детей и подростков |
| WO2016097059A1 (en) * | 2014-12-17 | 2016-06-23 | Diaxonhit | Compositions and methods for diagnosing thyroid cancer |
| RU2614700C1 (ru) * | 2016-02-26 | 2017-03-28 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России) | Способ дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований щитовидной железы |
| WO2019165351A1 (en) * | 2018-02-23 | 2019-08-29 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Tissue analysis by mass spectrometry |
| RU2706948C1 (ru) * | 2018-12-29 | 2019-11-21 | Любовь Анатолиевна Тимофеева | Способ прогнозирования вероятности злокачественности узла щитовидной железы |
| RU2757347C1 (ru) * | 2021-02-08 | 2021-10-13 | Сергей Евгеньевич Титов | Способ дифференциальной диагностики узловых образований щитовидной железы человека |
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2285923C2 (ru) * | 2004-11-09 | 2006-10-20 | Ростовский научно-исследовательский онкологический институт МЗ РФ | Способ дифференциальной диагностики узловых образований щитовидной железы у детей и подростков |
| WO2016097059A1 (en) * | 2014-12-17 | 2016-06-23 | Diaxonhit | Compositions and methods for diagnosing thyroid cancer |
| RU2614700C1 (ru) * | 2016-02-26 | 2017-03-28 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России) | Способ дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных новообразований щитовидной железы |
| WO2019165351A1 (en) * | 2018-02-23 | 2019-08-29 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Tissue analysis by mass spectrometry |
| RU2706948C1 (ru) * | 2018-12-29 | 2019-11-21 | Любовь Анатолиевна Тимофеева | Способ прогнозирования вероятности злокачественности узла щитовидной железы |
| RU2757347C1 (ru) * | 2021-02-08 | 2021-10-13 | Сергей Евгеньевич Титов | Способ дифференциальной диагностики узловых образований щитовидной железы человека |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| БЕРЁЗКИНА И.С. и др. Исследование галектина-3, Ki-67, убиквитина, HMGA2 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в пункционном материале при узловом зобе. Клиническая и экспериментальная тиреоидология. 2016; 12(2): 19-27. CHOUDHURY M. et al. Diagnostic utility of ki67 and p53 immunostaining on solitary thyroid nodule - a cytohistological and radionuclide scintigraphic study. Indian J Pathol Microbiol. Jul-Sep 2011; 54(3): 472-5. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2805941C1 (ru) * | 2022-07-25 | 2023-10-24 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского" | Способ комплексной дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных узловых образований щитовидной железы |
| RU2826474C1 (ru) * | 2024-02-14 | 2024-09-11 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы "Московский многопрофильный научно-клинический центр имени С.П. Боткина" Департамента здравоохранения города Москвы (ГБУЗ ММНКЦ Боткинская больница ДЗМ) | Способ диагностики карциномы щитовидной железы у пациентов с неоплазиями с неясным злокачественным потенциалом и неинформативным цитологическим заключением |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pinzani et al. | Isolation by size of epithelial tumor cells in peripheral blood of patients with breast cancer: correlation with real-time reverse transcriptase–polymerase chain reaction results and feasibility of molecular analysis by laser microdissection | |
| Borel et al. | Significance of low levels of thyroglobulin in fine needle aspirates from cervical lymph nodes of patients with a history of differentiated thyroid cancer | |
| CN101675341A (zh) | 癌症的生物标志物 | |
| Saggiorato et al. | Galectin-3: presurgical marker of thyroid follicular epithelial cell-derived carcinomas | |
| Dolan et al. | Comparison of immunohistochemical and fluorescence in situ hybridization assessment of HER-2 status in routine practice | |
| WO2000047998A1 (en) | Class characterization of circulating cancer cells isolated from body fluids and methods of use | |
| Makris et al. | Cytological evaluation of biological prognostic markers from primary breast carcinomas | |
| Hofman et al. | Thyroid tumours of uncertain malignant potential: frequency and diagnostic reproducibility | |
| Shanmugalingam et al. | Concordance between core needle biopsy and surgical excision for breast cancer tumor grade and biomarkers | |
| CN111766385B (zh) | 术中快速鉴别肺癌和硬化性肺细胞瘤的免疫组化试剂盒 | |
| Shelfo et al. | The role of nuclear matrix protein 22 in the detection of persistent or recurrent transitional-cell cancer of the bladder | |
| Ohba et al. | Encapsulated papillary thyroid tumor with delicate nuclear changes and a KRAS mutation as a possible novel subtype of borderline tumor | |
| Kipp et al. | Comparison of fluorescence in situ hybridization, p57 immunostaining, flow cytometry, and digital image analysis for diagnosing molar and nonmolar products of conception | |
| JP2008292424A (ja) | 腫瘍の検出方法 | |
| CN110139656A (zh) | 作为膀胱癌的生物标志物的角蛋白17 | |
| Hsu et al. | Nuclear size distinguishes low-from high-grade ovarian serous carcinoma and predicts outcome | |
| Suster et al. | The role of needle core biopsies in the evaluation of thymic epithelial neoplasms | |
| RU2783304C1 (ru) | Способ дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных узловых образований щитовидной железы | |
| US11391738B2 (en) | Method of detecting cancer | |
| RU2805941C1 (ru) | Способ комплексной дооперационной дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных узловых образований щитовидной железы | |
| Tang et al. | Comparison of fluorescence in-situ hybridisation with dual-colour in-situ hybridisation for assessment of HER2 gene amplification of breast cancer in Hong Kong | |
| Matsui et al. | Clinical significance of evaluating hormone receptor and HER2 protein using cell block against metastatic breast cancer: a multi-institutional study | |
| EP1934367A1 (en) | Molecular method for diagnosis of prostate cancer | |
| RU2553378C1 (ru) | Способ дифференциальной диагностики высокодифференцированного рака у больных с узловыми формами заболеваний щитовидной железы | |
| Pavlova et al. | Evaluation of new immunohistochemical approaches for the study of kidney tumors in geriatric |