RU2782185C1 - Добавочный раствор для хранения отмытых размороженных эритроцитов - Google Patents
Добавочный раствор для хранения отмытых размороженных эритроцитов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2782185C1 RU2782185C1 RU2021107379A RU2021107379A RU2782185C1 RU 2782185 C1 RU2782185 C1 RU 2782185C1 RU 2021107379 A RU2021107379 A RU 2021107379A RU 2021107379 A RU2021107379 A RU 2021107379A RU 2782185 C1 RU2782185 C1 RU 2782185C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- erythrocytes
- sodium
- washed
- defrosted
- Prior art date
Links
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 title claims abstract description 67
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 15
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Natural products NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229960000643 Adenine Drugs 0.000 claims abstract description 12
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims abstract description 12
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 11
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 11
- MSJMDZAOKORVFC-SEPHDYHBSA-L Sodium fumarate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)\C=C\C([O-])=O MSJMDZAOKORVFC-SEPHDYHBSA-L 0.000 claims abstract description 10
- 239000001744 Sodium fumarate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229940005573 sodium fumarate Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 235000019294 sodium fumarate Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K Trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 6
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000011778 trisodium citrate Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 4
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 13
- 229940061607 Dibasic Sodium Phosphate Drugs 0.000 claims description 12
- DEJJDJCXTZJXEJ-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-(6-aminopurin-1-yl)butanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCN1C=NC2=NC=NC2=C1N DEJJDJCXTZJXEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001031 Glucose Drugs 0.000 abstract description 14
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 abstract description 14
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 abstract description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 11
- 239000000654 additive Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000996 additive Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002631 hypothermal Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 abstract description 3
- -1 monosubstituted sodium phosphate Chemical class 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 77
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 24
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 13
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 13
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 11
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 9
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 8
- 230000002949 hemolytic Effects 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 description 6
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 6
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N Adenosine triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 5
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 5
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 5
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 210000003324 RBC Anatomy 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000306 component Substances 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 210000000265 Leukocytes Anatomy 0.000 description 2
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 description 2
- 210000001090 Spherocytes Anatomy 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 2
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000002338 cryopreservative Effects 0.000 description 2
- 239000008150 cryoprotective solution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic Effects 0.000 description 2
- 239000000815 hypotonic solution Substances 0.000 description 2
- 238000004900 laundering Methods 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- XOHUEYCVLUUEJJ-UHFFFAOYSA-N 2,3-DPG Chemical compound OP(=O)(O)OC(C(=O)O)COP(O)(O)=O XOHUEYCVLUUEJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIRDTQYFTABQOQ-GAWUUDPSSA-N 9-β-D-XYLOFURANOSYL-ADENINE Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-GAWUUDPSSA-N 0.000 description 1
- OIRDTQYFTABQOQ-SXVXDFOESA-N Adenosine Natural products Nc1ncnc2c1ncn2[C@@H]3O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]3O OIRDTQYFTABQOQ-SXVXDFOESA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007502 Anemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000601 Blood Cells Anatomy 0.000 description 1
- 230000037227 Blood Loss Effects 0.000 description 1
- 210000001772 Blood Platelets Anatomy 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K [O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229950008597 drug INN Drugs 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- RBNPOMFGQQGHHO-UHFFFAOYSA-M glycerate Chemical compound OCC(O)C([O-])=O RBNPOMFGQQGHHO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002727 hyperosmolar Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 239000003186 pharmaceutical solution Substances 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged Effects 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-IGMARMGPSA-N protium Chemical compound [1H] YZCKVEUIGOORGS-IGMARMGPSA-N 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic Effects 0.000 description 1
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 238000010583 slow cooling Methods 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising Effects 0.000 description 1
- 231100000803 sterility Toxicity 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000000576 supplementary Effects 0.000 description 1
- 230000002522 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к растворам для ресуспендирования и хранения компонентов заготовленной донорской крови и, в частности, для ресуспендирования и хранения размороженных после криоконсервирования, отмытых от криоконсерванта эритроцитов. Добавочный раствор для хранения отмытых размороженных эритроцитов включает соль натрия, глюкозу и аденин, а в качестве соли натрия - фумарат натрия и смесь одно- и двузамещенных фосфатов натрия, а также сахарозу для повышения осмолярности раствора, причем компоненты взяты в следующем соотношении (в миллимолях на литр): 46,3±6,9 фумарата натрия, 12,2±4,5 однозамещенного фосфата натрия, 10,5±3,6 двузамещенного фосфата натрия, 40,4±0,1 глюкозы, 1,47±0,01 аденина и 88,8±1,7 сахарозы. Раствор может дополнительно включать 4,3±0,5 мМоль/л цитрата натрия. Предлагаемый добавочный раствор эффективен при гипотермическом хранении отмытых размороженных эритроцитов, сохраняет их количество и функциональную активность во всем периоде хранения. 1 з.п. ф-лы, 3 табл., 2 пр.
Description
Заявляемое изобретение относится к медицине, а именно к растворам для ресуспендирования и хранения компонентов заготовленной донорской крови (добавочным растворам), и, в частности, для ресуспендирования и хранения отмытых размороженных эритроцитов (ОРЭ). Взвесь эритроцитов в добавочном растворе находит применение в гемотрансфузионной терапии анемий и острой кровопотери.
Криоконсервация - это единственная современная технология, которая поддерживает биологическую функцию клеток ex vivo и обеспечивает длительное хранение биопродукта. Существует два способа криоконсервирования эритроцитов: безаппаратный («ручной») и аппаратный, с использованием специально разработанного устройства Haemonetics АСР 215 фирмы Haemonetics Corp., США.
При безаппаратном способе эритроциты смешивают с криоконсервантом на основе глицерина и замораживают в медицинском холодильнике при температурах от -30°С до -80°С или в жидком азоте/его парах при -196°С/-150±10°С (в зависимости от метода) [Инструкция по криоконсервированию клеток крови (Утв. Минздравом РФ 29.05. 1995), действующая]. Эритроциты, замороженные при -40°С, могут храниться до 1 года, при более низкой температуре - до 10 лет и более, не теряя морфофункциональной сохранности. Безаппаратным способом криоконсервирования эритроцитов пользуются в клиниках и региональных центрах крови, не имеющих оборудования для аппаратной криоконсервации и холодильных установок высокой мощности.
В большинстве международных центров крови наиболее распространенным методом криоконсервирования является аппаратный способ с использованием высокой концентрации глицерина (40%) в сочетании с медленным охлаждением (~1°С/мин) и хранением при температуре ниже - 65°С. Закрытая автоматизированная система аппарата, одноразовые комплекты полимерных систем, снабженные барьерными антибактериальными фильтрами, обеспечивают непрерывность процесса деглицеринизации и стерильность подготовленного к переливанию гемокомпонента. Основным и весьма существенным недостатком автоматического метода является высокая стоимость как аппарата Haemonetics АСР-215, так и комплектующего оборудования и расходных материалов.
Для использования в трансфузиях криоконсервированная эритроцитная масса должна быть быстро разморожена оттаиванием на водяной бане [J.P. Acker, D.C. Marks and W.P. Sheffield//J of Blood Transfusion - V. 2016, Article D 4860284, P. 28] или с использованием специального аппарата для размораживания и подогрева компонентов крови, отмыта от криоконсерванта и ресуспендирована (взвешена) в добавочном растворе, разрешенном для трансфузии.
При ручном способе ресуспендирование ОРЭ обычно производят в растворе Ресин, включающем 70 г/л сахарозы, 3 г/л хлористого натрия, 2 г/л гидрофосфата натрия и 1 г/л дигидрофосфата натрия. Ресуспендированные ОРЭ должны быть использованы в течение 1 суток из-за опасности бактериальной контаминации в процессе размораживания и отмывания.
Разработанный недавно способ безаппаратного криоконсервирования, предотвращающий бактериальную контаминацию в процессе обработки за счет модификации контейнеров для вспомогательных растворов и создания «закрытой системы» [Криоконсервирование эритроцитов при умеренно низких температурах и пролонгированное хранение после размораживания в учреждениях службы крови. Методические рекомендации MP ФМБА России 35 - 22019], позволяет увеличить продолжительность хранения ОРЭ в растворе Ресин до 3 суток, однако хранение в растворе Ресин в течение 3 суток сопровождается некоторым снижением морфофункциональной полноценности клеток, т.к. этот раствор не содержит необходимых для них метаболитов (глюкозы и аденина).
При аппаратном способе (на приборе Haemonetics АСР 215) для ресуспендирования ОРЭ используют раствор SAG-M, содержащий 0,877% хлорида натрия, 0,9% глюкозы, 0,016% аденина (6-аминопурина) и 0,525% маннитола (D-маннита) в 100 г раствора [ФЗС 2011/10524]. Производитель предлагает использовать взвесь ОРЭ в SAG-M в течение 7 суток после приготовления, в России разрешенный срок хранения в растворе SAG-M составляет 72 часа.
Для хранения нативных эритроцитов разработан целый ряд добавочных растворов (AS - additives solutions). Были сделаны многочисленные попытки приспособить известные AS, предназначенные для хранения нативных эритроцитов, для хранения ОРЭ [см., например, Strauss D., Stark Е., Seidel В. // Z. Ges. Inn. Med. -1981. - Vol. 36, No. 13. - P. 443-448; Silbert J.A. // Transfusion - 1983. - Vol.23, No. 1. - P. 8-10; Mazor D., Dvilansky A., Meyerstein N. // Transfusion. - 1990. - Vol. 30, No. 2. - P. 150-153; C.R. Valeri, L.E. Pivacek, G.P. Cassidy et al. // Transfusion - 2000. - Vol.40, No. 11. - P. 1337-1340; J.D. Roback, CD. Josephson, E.K. Waller et al. // Transfus. Med. Rev. - 2014. - V. 28, No. 2. - P. 41-55; A. D'Alessandro, K.C. Hansen, C.C. Silliman et al. // Vox Sang. - 2015. - Vol. 108, No. 2. - P. 131-140]. Однако растворы для нативных эритроцитов не учитывают особенностей жизнедеятельности размороженных, деглицеринизированных, полностью лишенных плазмы, гиперосмолярных красных клеток.
Добавочный раствор для хранения нативных эритроцитов AS-3, включающий 11 г/л декстрозы, 0,3 г/л аденина, 2,76 г/л однозамещенного фосфата натрия, 4,1 г/л хлористого натрия, 5,88 г/л цитрата натрия и 0,42 г/л лимонной кислоты, был исследован при хранении ОРЭ, и он оказался не менее пригодным, чем раствор SAG-M, применяющийся для хранения ОРЭ, полученных аппаратным способом с использованием устройства Haemonetics АСР 215 [M.J. de Grandmont, Е. Ducas, М. Girard et al. // Vox Sang. - 2014. - Vol. 107, No. 3. - P. 239-246; A. D'Alessandro, T. Nemkov, M. Kelher et al. // Transfusion. - 2015. - Vol. 55, No. 6. - P. 1155-68.].
Для успешного применения взвесь эритроцитов должна соответствовать определенным показателям, характеризующим морфофункциональную сохранность эритроцитов, таким как уровень свободного гемоглобина, процент гемолиза (количество разрушенных клеток), процент осмотически неустойчивых эритроцитов, их морфология, содержание аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) и др.
При хранении нативных эритроцитов в виде взвеси в добавочном растворе ставится задача сохранения морфофункциональной активности эритроцитов на срок не менее 21 суток. Криоконсервирование позволяет сохранять морфофункциональную активность эритроцитов достаточно продолжительное время, а после размораживания и отмывания ОРЭ необходимо хранить только то время, которое требуется для доставки взвеси ОРЭ больному, особенно при значительной удаленности медицинских организаций от станций переливания крови (центров крови). Поэтому 6-7 суток хранения взвеси ОРЭ в добавочном растворе считается достаточным сроком, и возникает вопрос о наилучших показателях их морфофункциональной сохранности.
Наиболее близким по достигаемому результату к заявляемому раствору является раствор SAG-M фирмы Haemonetics Corp., США, разрешенный для трансфузии [ФЗС 2011/10524], который содержит соль натрия (хлористый натрий), глюкозу, аденин и шестиатомный углеводородный спирт из группы сахаров -маннитол. SAG-M обеспечивает сохранность размороженных отмытых эритроцитов при 4°С до 3-7 дней.
Однако, по мере хранения эритроцитов в этом растворе происходит нарастающее ухудшение их морфофункциональных свойств, так называемые «метаболические нарушения хранения», а именно нарастание гемолиза, снижение осмотической резистентности эритроцитов, снижение уровня АТФ и 2,3-дифосфатглицерата (2,3-ДФГ), накопление продуктов деградации: молочной кислоты, ионов водорода, оксида азота, энзимов, продуктов разрушения липидов и др. Эти нарушения не могут не влиять на качество и жизнеспособность переливаемых эритроцитов.
Результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в сохранении количества и функциональной активности размороженных отмытых эритроцитов в период их хранения в добавочном растворе.
Указанный результат достигается тем, что добавочный раствор для хранения отмытых размороженных эритроцитов, включающий соль натрия, глюкозу и аденин, в качестве соли натрия содержит фумарат натрия и смесь одно- и двузамещенных фосфатов натрия, а для повышения осмолярности раствора - сахарозу (дисахарид из группы олигосахаридов) при следующем соотношении компонентов в миллимолях (мМоль) на 1 литр раствора:
фумарат натрия | 46,3±6,9 |
однозамещенный фосфат натрия | 12,2±4,5 |
двузамещенный фосфат натрия | 10,5±3,6 |
глюкоза | 40,4±0,1 |
аденин | 1,47±0,01 |
сахароза | 88,8±1,7 |
Раствор может включать 4,3±0,5 мМоль/л цитрата натрия. Заявляемый раствор получен растворением компонентов раствора (кроме глюкозы) в 1000 мл бидистиллированной воды; раствор был профильтрован через фильтр миллипор, разлит во флаконы и стерилизован автоклавированием. Для предотвращения карамелизации раствора при автоклавировании глюкоза была введена в стерилизованный раствор добавлением расчетного количества стерильного 40%-ного водного раствора.
В эксперименте на животных (крысы, кролики) выяснено, что заявляемый раствор не токсичен и апирогенен.
Замораживанию подвергалась эритроцитная масса (ЭМ), полученная из консервированной донорской крови и хранившаяся не более 3-х суток. Трубка контейнера с ЭМ стерильно соединялась с трубкой контейнера с криозащитным раствором «Криосин», содержащим 40% глицерина, с помощью устройства для стерильного соединения магистралей. В процессе глицеринизации к эритроцитам медленно, при тщательном перемешивании добавлялся раствор «Криосин» до соотношения 1:1 (с экспозициями в течение 8-10 минут после добавления 1/5, 1/3 и оставшейся части криозащитного раствора). Конец трубки запаивался на расстоянии 10 см. Эквилибриционный период перед помещением контейнера в холодильник составлял 40-60 минут.
Подготовленную к замораживанию эритроцитную взвесь в контейнере объемом 750 мл в горизонтальном положении помещали в медицинский холодильник (-40°С), где осуществлялось ее нерегулируемое медленное замораживание и последующее хранение в течение не более 1 года.
Оттаивание эритроцитов осуществляли на аппарате для размораживания и подогрева крови и ее компонентов. Размораживание проводилось в течение различного времени (в зависимости от объема взвеси) до комнатной температуры. В процессе размораживания каждые 5 минут взвесь в контейнере перемешивали.
На этапе деглицеринизации (отмывания) эритроцитов размороженную эритроцитную взвесь стерильно (с помощью аппарата для стерильного соединения полимерных трубок) переводили в контейнер для отмывания эритроцитов. Одну из магистралей контейнера для отмывания соединяли с емкостью, содержащей отмывающий раствор Маннисин №1 (160 г маннита и 7 г хлористого натрия в 1000 мл воды), с помощью аппарата для стерильного соединения полимерных трубок, и медленно, постоянно перемешивая, добавляли весь его объем к взвеси эритроцитов (в соотношении не менее чем 1:1). Не разъединяя (используя зажим), контейнеры центрифугировали при 1250g, 4°С в течение 10 минут. Надосадочную жидкость переводили в контейнер из-под раствора Маннисин №1. Использованную трубку контейнера для отмывания герметизировали.
Вторую магистраль контейнера для отмывания с помощью аппарата для стерильного соединения подсоединяли к емкости, содержащей отмывающий раствор Маннисин №2 (50 г маннита и 7 г хлористого натрия в 1000 мл воды), и медленно, постоянно перемешивая, добавляли весь его объем к эритроцитам. Не разъединяя, контейнеры центрифугировали в том же режиме. Надосадочную жидкость переводили в контейнер из-под раствора Маннисин №2. Использованную трубку контейнера для отмывания герметизировали. Третий этап деглицеринизации проводили аналогично второму, с использованием отмывающего раствора Маннисин №3 (25 г маннита и 7 г хлористого натрия в 1000 мл воды), центрифугирования и перевода надосадочной жидкости в пустой контейнер.
Таким образом, в результате проведения вышеописанных манипуляций получали дозу отмытых размороженных эритроцитов.
Криоконсервирование эритроцитов безаппаратным (ручным) методом при -80°С проводили аналогичным образом. При замораживании эритроцитов при -80°С срок хранения может быть увеличен до 10 лет.
Дозу ОРЭ также заготовляли с использованием технологии глицеринизации -деглицеринизации эритроцитов на аппарате Haemonetics АСР 215 (США).
Изучение эффективности заявляемого добавочного раствора осуществлялось в параллельных экспериментах на ОРЭ одного донора. Сравнение между собой ОРЭ разных доноров некорректно из-за многоступенчатости процесса криоконсервирования и индивидуальных различий в устойчивости эритроцитов разных доноров ко всем его этапам.
В рамках экспериментов размороженные после криоконсервирования и отмытые эритроциты в объеме стандартной дозы были разделены на 2-3 равные части и суспендированы в заявляемом растворе (примеры 1 и 2) и растворе SAG-M (пример 3 контрольный), в соотношении 1:1. Полученные взвеси исследовались в день отмывания, через 1 и 2 недели хранения при 4°С. Аликвоты отбирались с соблюдением условий стерильности.
При изучении морфофункционального состояния размороженных отмытых эритроцитов использовали следующие методики:
1) изучение морфологии эритроцитов (подсчет процентного содержания дискоцитов, эхиноцитов, сфероцитов) с помощью светового микроскопа МБИ-6 методом микроскопии в нативной капле (в плазме IV группы);
2) морфологический индекс рассчитывали как сумму произведений процентного содержания отдельных форм эритроцитов и соответствующих коэффициентов
3) (оценивалось 300 клеток). Для дискоцитов использовался коэффициент 1,0; для эхиноцитов - 0,6 и для сфероцитов - 0,0 (модификация метода Usry R.T.);
4) концентрацию свободного гемоглобина (г/л) во взвесях размороженных отмытых эритроцитов определяли спектрофотометрически аммиачным методом при длине волны 540 нм на спектрофотометре СФ-46;
5) количество эритроцитов, остаточных тромбоцитов и лейкоцитов, уровень общего гемоглобина, гематокрит, средний объем эритроцита (MCV), среднее содержание гемоглобина в одном эритроците (МСН) и среднюю концентрацию гемоглобина в одном эритроците (МСНС) определяли на гематологическом анализаторе М10 Medonic M-Series (Bouble Medical AB, Швеция);
6) количество разрушенных клеток (гемолиз) рассчитывали по формуле:
где Hb св. - содержание свободного гемоглобина в надетое;
Ht - гематокритное число;
Hb общ. - содержание общего гемоглобина;
7) содержание осмотически неустойчивых эритроцитов (ОНЭ, %) оценивали по процентному отношению содержания свободного гемоглобина во взвеси 0,05 мл эритроцитов, помещенных в 10 мл гипотонического (0,6%) раствора натрия хлорида к содержанию общего гемоглобина такого же объема красных клеток, полностью гемолизированных в 10 мл раствора аммиака (1:250). Содержание свободного гемоглобина определяли на СФ-46 в надосадочной жидкости, полученной путем центрифугирования взвесей в гипотоническом растворе при 2000 об/мин в течение 10 минут, после 15 мин экспозиции при комнатной температуре;
8) содержание остаточных лейкоцитов в ОРЭ определяли с помощью автоматического анализатора ADAM-rWBC;
9) содержание электролитов (К+, Na+, Cl-), метаболитов (глюкозы, лактата), рН и р50 (показатель, отражающий сродство гемоглобина к кислороду) исследовали на газоанализаторе крови RADIOMETER ABL800 FLEX;
10) осмолярность взвесей определяли на осмометре Vapro 5600 (США);
11) уровень АТФ в отмытых размороженных эритроцитах определяли хемилюминесцентным методом на аппарате Bio Тек Flx800 с использованием биолюминесцентного набора (Adenosine 5-triphosphate Bioluminescent Assay Kit, SIGMA-ALDRICH).
Далее изобретение иллюстрируется примерами, но не ограничено ими.
Пример 1.
8,5 г фумарата натрия, 1,0 г однозамещенного фосфата натрия, 2 г двузамещенного фосфата натрия, 0,2 г аденина и 31,0 г сахарозы были растворены в 1000 мл бидистиллированной воды. После фильтрования и стерилизации автоклавированием в раствор ввели 7,27 г глюкозы добавлением в стерильных условиях стерильного аптекарского 40%-ного раствора (для инъекций).
Концентрация раствора (мМоль/л):
фумарат натрия | 53,2 |
однозамещенный фосфат натрия | 8,3 |
двузамещенный фосфат натрия | 14,1 |
глюкоза | 40,4 |
аденин | 1,5 |
сахароза | 90,5 |
Общая концентрация ионов натрия в растворе 143 мМоль/л, рН раствора 7,06, его осмолярность 351 мосм/л.
Пример 2.
Раствор, включающий 6,3 г фумарата натрия, 2,0 г однозамещенного фосфата, 1,0 г двузамещенного фосфата натрия, 7,27 г глюкозы, 0,2 г аденина, 29,9 г сахарозы и 1,1 г цитрата натрия в 1000 мл воды, был приготовлен так, как описано в примере 1.
Концентрация раствора (мМоль/л):
фумарат натрия | 39,4 |
однозамещенный фосфат натрия | 16,7 |
двузамещенный фосфат натрия | 7,0 |
глюкоза | 40,4 |
аденин | 1,5 |
сахароза | 87,1 |
цитрат натрия | 4,3 |
Общая концентрация ионов натрия 148 мМоль/л, рН раствора 6,90, его осмолярность 350 мОсм/л.
Полученные растворы использовали в опытах по хранению ОРЭ; раствором сравнения служил раствор SAG-M фирмы Haemonetics.
Было проведено 7 серий экспериментов с раствором по примеру 1: на эритроцитах, криоконсервированных при -40°С безаппаратным методом (5 серий), на эритроцитах, криоконсервированных при -80°С безаппаратным методом и при -80°С с использованием аппарата Haemonetics АСР 215.
С использованием раствора по примеру 2 проведено 3 серии экспериментов: на эритроцитах, криоконсервированных при -80°С безаппаратным методом, при -80°С с использованием аппарата Haemonetics АСР 215 (в сравнении с раствором SAG-M) и при -40°С безаппаратным методом.
Взвеси исследовались в день отмывания, через 1 и 2 недели хранения. Результаты отражены в таблицах 1-3.
Данные, полученные при криоконсервировании эритроцитов при -40°С безаппаратным методом, свидетельствуют о том, что взвесь отмытых размороженных эритроцитов в растворе по примеру 1, при сопоставимости по гематокриту и общему гемоглобину со взвесями эритроцитов тех же доноров в растворе SAG-M, содержит статистически достоверно меньшее содержание разрушенных клеток (0,19±0,023 против 0,28±0,025) и осмотически неустойчивых к действию гипотонического раствора клеток (1,3±0,12% против 2,7±0,36%) уже через 1 час после ресуспендирования. На сроках хранения 1 и 2 недели указанные различия сохраняются: процент гемолиза во взвесях в растворе по примеру 1 в 2 раза, а содержание ОНЭ в 3-5 раз ниже, чем в растворе SAG-M.
Статистически значимые различия в MCV (средний объем эритроцитов), особенно на сроках хранения в 1 и 2 недели, указывают на относительный свеллинг красных клеток крови в растворе SAG-M.
После хранения взвесей ОРЭ (криоконсервированных при -80°С безаппаратным методом) в течение 1 недели при 4°С (таблица 2) отмечено статистически значимое различие в уровне гемолиза и осмотически неустойчивых клеток между экспериментальными растворами и SAG-M (р<0,05) в пользу первых. Так, процент гемолиза равнялся 1,51±0,208 и 1,51±0,267 в растворах по примеру 1 и 2 соответственно и в 2 раза выше - в SAG-M (3,56±0,324).
Отмечено более интенсивное закисление среды в растворе SAG-M (с 7,12±0,009 до 6,96±0,014). В экспериментальных растворах за счет эффективного буфера снижение рН через 1 неделю было незначительным. Нарастание уровня внеклеточного калия и лактата было приблизительно одинаковым во всех растворах.
Для сравнения эффективности добавочных растворов по примеру 1 и по примеру 2 была поставлена серия из 4-х экспериментов на ОРЭ, криоконсервированных при температуре -40°С, в процессе их гипотермического хранения (таблица 3).
Анализируя данные, представленные в таблице 3, следует отметить, что через 1 час после соединения ОРЭ с добавочными растворами взвеси эритроцитов в исследуемых растворах практически не различаются по основным показателям морфофункциональной полноценности.
Через 1 неделю хранения оба раствора демонстрируют свою эффективность: допустимый процент гемолиза (0,37±0,025 в растворе по примеру 1 и 0,32±0,039 в растворе по примеру 2) и умеренное нарастание ОНЭ - 4,7±0,90% и 3,9±0,75% соответственно.
По этим показателям, как через 1, так и через 2 недели хранения раствор по примеру 2, возможно, является более адекватным для данной среды. В данной серии экспериментов не отмечено и существенного нарастания внеклеточного калия и лактата (их уровень через 1 неделю хранения ниже, чем в нативной эритроцитной массе 2-х суток хранения).
Гематологические показатели ОРЭ в обоих исследуемых растворах как через 1 час после их соединения, так и через одну и две недели гипотермического хранения не имели значимых различий и укладывались в норму (таблица 3). Отмечено незначительное снижение морфологического индекса в процессе хранения взвесей (с 94,9±1,28 до 83,5±3,13 в растворе по примеру 1), которое происходило за счет увеличения обратимо измененных форм эритроцитов (эхиноцитов).
Из представленных результатов видно, что морфофункциональная сохранность ОРЭ в заявляемом растворе выше, чем в растворе SAG-M по уровням свободного гемоглобина и гемолиза, содержанию АТФ и осмотически неустойчивых эритроцитов, их морфологии, поддержанию рН взвесей.
Таким образом, заявляемый добавочный раствор по изученным показателям эффективен при гипотермическом хранении в нем отмытых размороженных эритроцитов. Отмечено сохранение количества и функциональной активности размороженных отмытых эритроцитов в период их хранения в заявляемом добавочном растворе.
Claims (3)
1. Добавочный раствор для хранения отмытых размороженных эритроцитов, включающий соль натрия, глюкозу и аденин, отличающийся тем, что в качестве соли натрия раствор содержит фумарат натрия и смесь одно- и двузамещенных фосфатов натрия и дополнительно сахарозу при следующем соотношении компонентов в миллимолях (мМоль) на 1 литр раствора:
2. Добавочный раствор по п. 1, отличающийся тем, что он дополнительно содержит цитрат натрия в концентрации 4,3±0,5 мМоль/л.
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2782185C1 true RU2782185C1 (ru) | 2022-10-21 |
Family
ID=
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2012331C1 (ru) * | 1991-06-27 | 1994-05-15 | Гематологический научный центр РАМН | Раствор для консервирования энзимированных эритроцитов, используемых в изосерологических реакциях |
RU2049466C1 (ru) * | 1992-06-09 | 1995-12-10 | Сахаров Роман Сергеевич | Состав для сохранения нативных стандартных эритроцитов |
WO2009126786A2 (en) * | 2008-04-09 | 2009-10-15 | Cerus Corporation | Improved quenching methods for red blood cell pathogen inactivation |
RU2720487C1 (ru) * | 2019-09-25 | 2020-04-30 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства" (ФГБУ РосНИИГТ ФМБА России) | Добавочный раствор для хранения концентрата тромбоцитов |
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2012331C1 (ru) * | 1991-06-27 | 1994-05-15 | Гематологический научный центр РАМН | Раствор для консервирования энзимированных эритроцитов, используемых в изосерологических реакциях |
RU2049466C1 (ru) * | 1992-06-09 | 1995-12-10 | Сахаров Роман Сергеевич | Состав для сохранения нативных стандартных эритроцитов |
WO2009126786A2 (en) * | 2008-04-09 | 2009-10-15 | Cerus Corporation | Improved quenching methods for red blood cell pathogen inactivation |
RU2720487C1 (ru) * | 2019-09-25 | 2020-04-30 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства" (ФГБУ РосНИИГТ ФМБА России) | Добавочный раствор для хранения концентрата тромбоцитов |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
"Раствор стерильный SAG-M. Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2011/10524", 24.11.2015 [он-лайн], [найдено 15.03.2022], найдено в Интернет: https://nevacert.ru/reestry/med-reestr/fsz-2011-10524-12825. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8709707B2 (en) | Compositions substantially free of sodium chloride and methods for the storage of red blood cells | |
AU2005327576B2 (en) | Compositions and methods for the storage of red blood cells | |
US6447987B1 (en) | Prolonged storage of red blood cells | |
US8871434B2 (en) | Red blood cell storage medium for extended storage | |
US7935478B2 (en) | Biological material and methods and solutions for preservation thereof | |
EP0237863B1 (en) | Synthetic, plasma-free, transfusible platelet storage medium. | |
US8968992B2 (en) | Red blood cell storage medium for extended storage | |
US20050277108A1 (en) | Method for extending the useful shelf-life of refrigerated red blood cells by nutrient supplementation | |
Yoshida et al. | The effects of additive solution pH and metabolic rejuvenation on anaerobic storage of red cells | |
IE903603A1 (en) | Procedure for storing red cells with prolonged maintenance¹of cellular concentrations of atp and 2,3 dpg | |
EP1109447B1 (en) | Prolonged storage of red blood cells | |
CN112998009A (zh) | Nk细胞冻存液及其制备方法和应用 | |
Mudge et al. | Comparison of 4 blood storage methods in a protocol for equine pre‐operative autologous donation | |
Kogler et al. | There and back again: the once and current developments in donor-derived platelet products for hemostatic therapy | |
RU2782185C1 (ru) | Добавочный раствор для хранения отмытых размороженных эритроцитов | |
WO2002023988A1 (en) | Prolonged storage of red blood cells | |
Rathbun et al. | Posttransfusion survival of red cells frozen for 8 weeks after 42‐day liquid storage in AS‐3 | |
Solheim et al. | Red cell metabolism and preservation | |
Ross et al. | Additive solution for the suspension and storage of deglycerolized red blood cells | |
AbuRass | Effect of Environmental Storage on Red Blood Cells Parameters at Elmak Nimer University Hospital Blood Bank | |
JP5568103B2 (ja) | 赤血球の保存のための組成物及び方法 | |
Rowley | Cryopreservation of Hematopoietic Cells | |
Boral | Cellular cryopreservation in blood banking |