RU2780139C1 - Способ лечения нейропатической боли - Google Patents
Способ лечения нейропатической боли Download PDFInfo
- Publication number
- RU2780139C1 RU2780139C1 RU2021110083A RU2021110083A RU2780139C1 RU 2780139 C1 RU2780139 C1 RU 2780139C1 RU 2021110083 A RU2021110083 A RU 2021110083A RU 2021110083 A RU2021110083 A RU 2021110083A RU 2780139 C1 RU2780139 C1 RU 2780139C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dha
- pain
- neuropathic pain
- animals
- activity
- Prior art date
Links
- 208000004296 Neuralgia Diseases 0.000 title claims abstract description 64
- 235000020669 docosahexaenoic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N Docosahexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 229960004363 doconexent Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 229940090949 docosahexaenoic acid Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 239000002960 lipid emulsion Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000002354 daily Effects 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 45
- 210000001320 Hippocampus Anatomy 0.000 abstract description 35
- 230000004766 neurogenesis Effects 0.000 abstract description 21
- 210000000274 Microglia Anatomy 0.000 abstract description 15
- 210000003008 brain-resident macrophage Anatomy 0.000 abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 13
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 9
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract description 8
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract description 8
- 230000003110 anti-inflammatory Effects 0.000 abstract description 8
- 230000001603 reducing Effects 0.000 abstract description 6
- 230000001537 neural Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000001149 cognitive Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002996 emotional Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003203 everyday Effects 0.000 abstract 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 56
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 55
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 51
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 31
- 210000004556 Brain Anatomy 0.000 description 29
- 230000000971 hippocampal Effects 0.000 description 22
- 210000001947 Dentate Gyrus Anatomy 0.000 description 19
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N Palmitic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 18
- 230000003936 working memory Effects 0.000 description 15
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 210000002569 neurons Anatomy 0.000 description 12
- 238000011161 development Methods 0.000 description 11
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 11
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 11
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 10
- 230000003959 neuroinflammation Effects 0.000 description 10
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 9
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 9
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 9
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 9
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 9
- 210000003497 Sciatic Nerve Anatomy 0.000 description 8
- 230000000202 analgesic Effects 0.000 description 8
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 8
- 230000001771 impaired Effects 0.000 description 8
- 230000013016 learning Effects 0.000 description 8
- 230000007787 long-term memory Effects 0.000 description 8
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 230000002093 peripheral Effects 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 8
- 230000000770 pro-inflamatory Effects 0.000 description 8
- 206010002855 Anxiety Diseases 0.000 description 7
- 206010057666 Anxiety disease Diseases 0.000 description 7
- 102100000614 DCX Human genes 0.000 description 7
- 206010022114 Injury Diseases 0.000 description 7
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 7
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 7
- 102000009339 Proliferating Cell Nuclear Antigen Human genes 0.000 description 7
- 108010009063 Proliferating Cell Nuclear Antigen Proteins 0.000 description 7
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 7
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 7
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 7
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 7
- 230000002025 microglial Effects 0.000 description 7
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 7
- 206010053552 Allodynia Diseases 0.000 description 6
- SBJKKFFYIZUCET-JLAZNSOCSA-N Dehydro-L-ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(=O)C1=O SBJKKFFYIZUCET-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 208000007999 Hyperesthesia Diseases 0.000 description 6
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 6
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 6
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 6
- 230000002055 immunohistochemical Effects 0.000 description 6
- 230000003137 locomotive Effects 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004544 DC2 Anatomy 0.000 description 5
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 5
- 230000001058 adult Effects 0.000 description 5
- 230000003542 behavioural Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 5
- 230000002530 ischemic preconditioning Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 230000000324 neuroprotective Effects 0.000 description 5
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 238000001711 protein immunostaining Methods 0.000 description 5
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 4
- 102000009132 CB1 Cannabinoid Receptor Human genes 0.000 description 4
- 108010073366 CB1 Cannabinoid Receptor Proteins 0.000 description 4
- -1 CD86 Proteins 0.000 description 4
- 210000001353 Entorhinal Cortex Anatomy 0.000 description 4
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WVMKYAHQZYCCCX-UHFFFAOYSA-N N-(2-hydroxyethyl)docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenamide Chemical compound CCCCCCCCCC=CC=CC=CC=CC=CC=CC(=O)NCCO WVMKYAHQZYCCCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 4
- 210000000278 Spinal Cord Anatomy 0.000 description 4
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 4
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091004768 doublecortin protein Proteins 0.000 description 4
- IJYHVZICHKCLMQ-UHFFFAOYSA-N imidazo[4,5-d]triazin-4-one Chemical class O=C1N=NN=C2N=CN=C12 IJYHVZICHKCLMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 4
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 4
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 4
- 239000006200 vaporizer Substances 0.000 description 4
- 101700016569 AIF1 Proteins 0.000 description 3
- 229940114079 Arachidonic Acid Drugs 0.000 description 3
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N Arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 3
- 229940094657 Botulinum Toxin Type A Drugs 0.000 description 3
- 108010043024 Botulinum Toxins Proteins 0.000 description 3
- 210000003141 Lower Extremity Anatomy 0.000 description 3
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 description 3
- 208000008513 Spinal Cord Injury Diseases 0.000 description 3
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N Stearic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010057266 Type A Botulinum Toxins Proteins 0.000 description 3
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 3
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 3
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000037326 chronic stress Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000004301 light adaptation Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000000051 modifying Effects 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 3
- 230000001953 sensory Effects 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- LGEQQWMQCRIYKG-DOFZRALJSA-N Anandamide Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)NCCO LGEQQWMQCRIYKG-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 210000003050 Axons Anatomy 0.000 description 2
- XCOBLONWWXQEBS-KPKJPENVSA-N BSTFA Chemical compound C[Si](C)(C)O\C(C(F)(F)F)=N\[Si](C)(C)C XCOBLONWWXQEBS-KPKJPENVSA-N 0.000 description 2
- 229940089093 Botox Drugs 0.000 description 2
- 210000001736 Capillaries Anatomy 0.000 description 2
- 206010057668 Cognitive disease Diseases 0.000 description 2
- 208000008313 Contusions Diseases 0.000 description 2
- 210000003284 Horns Anatomy 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- 206010020937 Hypoaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- 229940100601 Interleukin-6 Drugs 0.000 description 2
- PQXKDMSYBGKCJA-CVTJIBDQSA-N Lurasidone Chemical compound C1=CC=C2C(N3CCN(CC3)C[C@@H]3CCCC[C@H]3CN3C(=O)[C@@H]4[C@H]5CC[C@H](C5)[C@@H]4C3=O)=NSC2=C1 PQXKDMSYBGKCJA-CVTJIBDQSA-N 0.000 description 2
- 206010027175 Memory impairment Diseases 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 206010052639 Nerve injury Diseases 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N Oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102100010404 PLA2G4A Human genes 0.000 description 2
- 206010011302 Peripheral nerve injury Diseases 0.000 description 2
- 210000002442 Prefrontal Cortex Anatomy 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 230000001919 adrenal Effects 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 230000002429 anti-coagulation Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 230000000949 anxiolytic Effects 0.000 description 2
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003140 astrocytic Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000002149 cannabinoid Effects 0.000 description 2
- 229930003827 cannabinoid Natural products 0.000 description 2
- 239000003557 cannabinoid Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 229960001432 lurasidone Drugs 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 2
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 2
- 238000002552 multiple reaction monitoring Methods 0.000 description 2
- 230000002981 neuropathic Effects 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000002085 persistent Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 108010016115 plasmalogen-selective phospholipase A2 Proteins 0.000 description 2
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 2
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 231100000486 side effect Toxicity 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000000946 synaptic Effects 0.000 description 2
- 230000003956 synaptic plasticity Effects 0.000 description 2
- 201000010874 syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 2
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000007492 two-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- LACZJJJYINHZIR-UHFFFAOYSA-N 1,1-dimethoxyhexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(OC)OC LACZJJJYINHZIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035676 ANALGESICS Drugs 0.000 description 1
- 229940005513 ANTIDEPRESSANTS Drugs 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 208000005298 Acute Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 description 1
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 1
- 210000004727 Amygdala Anatomy 0.000 description 1
- 208000007415 Anhedonia Diseases 0.000 description 1
- 206010003246 Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000001130 Astrocytes Anatomy 0.000 description 1
- 210000001008 Atrial Appendage Anatomy 0.000 description 1
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 1
- 241001161496 Berryteuthis magister Species 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 Blood Vessels Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 Bovine Serum Albumin Drugs 0.000 description 1
- 108091003117 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- QPBSYVOKYDCNSM-UHFFFAOYSA-N C(=CC=CC=CC=CC=CC=CCCCCCCCCCC)NCCO Chemical compound C(=CC=CC=CC=CC=CC=CCCCCCCCCCC)NCCO QPBSYVOKYDCNSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001879 CA1 Region, Hippocampal Anatomy 0.000 description 1
- 210000001715 Carotid Arteries Anatomy 0.000 description 1
- 206010064012 Central pain syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000238366 Cephalopoda Species 0.000 description 1
- 206010053684 Cerebrohepatorenal syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241001417105 Clupea pallasii Species 0.000 description 1
- 241001149724 Cololabis adocetus Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004397 Cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 210000001787 Dendrites Anatomy 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N Deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 206010012601 Diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 229940022766 EGTA Drugs 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 210000003027 Ear, Inner Anatomy 0.000 description 1
- 229940088598 Enzyme Drugs 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 210000003238 Esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 102100018264 FAAH Human genes 0.000 description 1
- 101700023473 GNPAT Proteins 0.000 description 1
- 210000003594 Ganglia, Spinal Anatomy 0.000 description 1
- 229940065521 Glucocorticoid inhalants for obstructive airway disease Drugs 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001308 Heart Ventricles Anatomy 0.000 description 1
- 206010020718 Hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 208000004044 Hypesthesia Diseases 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 229940076144 Interleukin-10 Drugs 0.000 description 1
- 210000001153 Interneurons Anatomy 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 1
- 241000735235 Ligustrum vulgare Species 0.000 description 1
- 108090000128 Lipoxygenases Proteins 0.000 description 1
- 102000003820 Lipoxygenases Human genes 0.000 description 1
- 210000004185 Liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 Lung Anatomy 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000010076 Mononeuropathy Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 1
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 1
- 210000003205 Muscles Anatomy 0.000 description 1
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 1
- 102000004868 N-methyl-D-aspartate receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090001041 N-methyl-D-aspartate receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 206010029174 Nerve compression Diseases 0.000 description 1
- 206010029331 Neuropathy peripheral Diseases 0.000 description 1
- 210000004940 Nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- BOWVQLFMWHZBEF-KTKRTIGZSA-N Oleoylethanolamide Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)NCCO BOWVQLFMWHZBEF-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 108009000578 Oxidative Stress Proteins 0.000 description 1
- 101700037958 PDE9A Proteins 0.000 description 1
- 101700052389 PRVM Proteins 0.000 description 1
- 101710033705 PVALB Proteins 0.000 description 1
- 102100020302 PVALB Human genes 0.000 description 1
- 210000001428 Peripheral Nervous System Anatomy 0.000 description 1
- 210000004303 Peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 229940072417 Peroxidase Drugs 0.000 description 1
- 108090000437 Peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 102000004005 Prostaglandin-endoperoxide synthases Human genes 0.000 description 1
- 108090000459 Prostaglandin-endoperoxide synthases Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- JZCPYUJPEARBJL-UHFFFAOYSA-N Rimonabant Chemical compound CC=1C(C(=O)NN2CCCCC2)=NN(C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)C=1C1=CC=C(Cl)C=C1 JZCPYUJPEARBJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100019667 STAT3 Human genes 0.000 description 1
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 1
- 241001125046 Sardina pilchardus Species 0.000 description 1
- 241000269821 Scombridae Species 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- JIWBIWFOSCKQMA-LTKCOYKYSA-N Stearidonic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC(O)=O JIWBIWFOSCKQMA-LTKCOYKYSA-N 0.000 description 1
- 210000000225 Synapses Anatomy 0.000 description 1
- 229940037128 Systemic Glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 102100003095 TNFRSF1A Human genes 0.000 description 1
- 101710038526 TNFRSF1A Proteins 0.000 description 1
- 231100000765 Toxin Toxicity 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Tris Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000364021 Tulsa Species 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010001801 Tumor Necrosis Factor-alpha Proteins 0.000 description 1
- 229920001567 Vinyl ester Polymers 0.000 description 1
- 201000004525 Zellweger syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000001780 adrenocortical Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001773 anti-convulsant Effects 0.000 description 1
- 230000001430 anti-depressive Effects 0.000 description 1
- 230000003502 anti-nociceptive Effects 0.000 description 1
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940053200 antiepileptics Fatty acid derivatives Drugs 0.000 description 1
- 125000004429 atoms Chemical group 0.000 description 1
- 239000003693 atypical antipsychotic agent Substances 0.000 description 1
- 238000009227 behaviour therapy Methods 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N cAMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 1
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 1
- LKYXEULZVGJVTG-UHFFFAOYSA-N chloromethane Chemical compound Cl[CH] LKYXEULZVGJVTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000749 chronicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004807 desolvation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 1
- QSEDHCQTXJIDAG-UHFFFAOYSA-N docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenamide Chemical compound CCCCCCCCCC=CC=CC=CC=CC=CC=CC(N)=O QSEDHCQTXJIDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 235000004626 essential fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N ethanolamine Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 108010046094 fatty-acid amide hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000001030 gas--liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium(0) Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002363 herbicidal Effects 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 239000008079 hexane Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004295 hippocampal neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000011539 homogenization buffer Substances 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036032 hypoalgesia Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious Effects 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 230000031261 interleukin-10 production Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesions Effects 0.000 description 1
- 235000020640 mackerel Nutrition 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 201000005518 mononeuropathy Diseases 0.000 description 1
- 201000008895 mood disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 239000005445 natural product Substances 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000004255 neuroglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000002314 neuroinflammatory Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological Effects 0.000 description 1
- 230000000508 neurotrotrophic Effects 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drugs Drugs 0.000 description 1
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M palmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000005020 pharmaceutical industry Methods 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 238000001050 pharmacotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 201000006380 plexopathy Diseases 0.000 description 1
- 108091008117 polyclonal antibodies Proteins 0.000 description 1
- 229920000120 polyethyl acrylate Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 210000001176 projection neuron Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 102000034577 retinoid X receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038912 retinoid X receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible Effects 0.000 description 1
- 235000019512 sardine Nutrition 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000003238 somatosensory Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous Effects 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-M stearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 230000037327 stress response Effects 0.000 description 1
- 238000005556 structure-activity relationship Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 1
- 230000000152 swallowing Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly Effects 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано для лечения нейропатической боли. Способ включает введение природного компонента, полученного из морских организмов - этаноламида докозагексаеновой кислоты (ЭА-ДГК) подкожно в виде водо-жировой эмульсии в дозе 4 мг/кг в течение 5 недель ежедневно. Использование изобретения позволяет лечить нейропатическую боль и ее когнитивные и эмоциональные последствия за счет подавления нейровоспаления в гиппокампе, усиления нейрогенеза, снижения активации микроглии и высвобождения провоспалительных цитокинов под действием ЭА-ДГК. 17 ил.
Description
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и может быть использовано для снижения болевой чувствительности организма в условиях хронической нейропатической боли при применении N-докозагексаеноил-этаноламина (этаноламид докозагексаеновой кислоты, ЭА-ДГК).
Нейропатическая боль - это патологическое состояние, вызванное травмой или заболеванием соматосенсорной нервной системы. Такое повреждение нервной ткани может быть как центральным, так и периферическим, создавая условия для развития различных болевых синдромов (Schomberg D.; Ahmed M.; Miranpuri G.; Olson J.; Resnick, D.K. «Neuropathic pain: Role of inflammation, immune response, and ion channel activity in central injury mechanisms». Ann. Neurosci. 2012, 19, 125–132). Периферическая нейропатическая боль - широко распространенное и сложное патологическое состояние, которое может иметь различную этиологию, включая травму нерва во время операции или компрессионные невропатии, такие как туннельный синдром, компрессия нерва, травма нерва и различные плексопатии (Colloca L.; Ludman T.; Bouhassira, D. et al. «Neuropathic pain». Nat. Rev. Dis. Prim. 2017, 3, 17). На распространенность синдрома нейропатической боли в популяции влияют различные факторы, включая старение, диабет и рост числа онкологический заболеваний, а также побочные эффекты химиотерапии, которые влияют на все сенсорные волокна. Данная патологическая боль значительно снижает качество жизни и дорого обходится обществу. Существующие варианты фармакотерапии, такие как нестероидные противовоспалительные препараты, антидепрессанты, противосудорожные препараты и опиаты, преимущественно снимают болевые симптомы только за счет неспецифического снижения возбудимости нейронов (Bannister K.; Sachau J.; Baron R.; Dickenson A.H. «Neuropathic pain. Mechanism-based therapeutics». Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2020, 60, 257–274). Эти общие методы лечения не направлены на устранение основных причин боли и лишь в редких случаях приводят к полному облегчению симптомов. Неэффективность доступных методов лечения в основном связана с ограниченным пониманием процессов, лежащих в основе этого типа боли. Нейропатическая боль проявляется комбинацией различных сенсорных симптомов (аллодиния, гипер- и гипоалгезия, гипер- и гипестезия), а также когнитивных и аффективных расстройств, включая потерю памяти, тревогу, депрессию и ангедонию. Эти симптомы предполагают участие в патологическом процессе различных отделов мозга, включая гиппокамп (Mutso A.A.; Radzicki D.; Baliki M.N. et al. «Abnormalities in hippocampal functioning with persistent pain». J. Neurosci. 2012, 32, 5747–5756; Liu M.G.; Chen J. «Roles of the hippocampal formation in pain information processing». Neurosci. Bull. 2009, 25, 237–266). Многочисленные исследования показывают, что хроническая периферическая боль может вызывать глубокие изменения пластичности гиппокампа, включая нарушение нейрогенеза (Dellarole A.; Morton P.; Brambilla R. et al. «Neuropathic pain-induced depressive-like behavior and hippocampal neurogenesis and plasticity are dependent on TNFR1 signaling». Brain Behav. Immun. 2014, 41, 65–81) и синаптической пластичности. Продолжительная невропатическая боль может повлиять на эмоционально управляемое обучение и связанную с ним синаптическую реорганизацию, что способствует хронизации болевого синдрома. Неотъемлемой частью патогенеза и движущей силой такой реорганизации является реакция нейровоспаления, сопровождающаяся активацией микроглии и высвобождением провоспалительных факторов. Глиальные клетки, активируемые при нейропатической боли, характеризуются пролиферацией, гипертрофией и повышенной продукцией провоспалительных цитокинов, таких как интерлейкин-1β, интерлейкин-6 и фактор некроза опухоли-α (Del Rey A.; Yau H.J.; Randolf A. et al. «Chronic neuropathic pain-like behavior correlates with IL-1β expression and disrupts cytokine interactions in the hippocampus». Pain 2011, 152, 2827–2835; Fiore N.T.; Austin P.J. «Glial-cytokine-neuronal adaptations in the ventral hippocampus of rats with affective behavioral changes following peripheral nerve injury». Neuroscience 2018, 390, 119–140; Fiore N.T.; Austin P.J. «Peripheral nerve injury triggers neuroinflammation in the medial prefrontal cortex and ventral hippocampus in a subgroup of rats with coincident affective behavioral changes». Neuroscience 2019, 416, 147–167).
В настоящее время существует значительный арсенал анальгетиков для лечения нейропатической боли, однако они обладают рядом недостатков, связанных с низкой эффективностью, высоким риском развития побочных эффектов, неселективностью в отношении патофизиологии болевого процесса, что требует формирования сложных многокомпонентных динамических схем для обеспечения выздоровления пациента. В этой связи, разработка новых эффективных и безопасных фармакологических средств, обладающих анальгетической и нейропротекторной активностью, для лечения нейропатической боли является одной из приоритетных задач современной медицины и нейрофармакологии.
Известен способ снижения нейропатической боли с помощью использования ботулотоксина типа А (US № 20080138364 А1, МПК A61K38/00, A61K38/16, A61K38/48, A61K39/08, опубл. 12.01.2008), который назначали в следующих дозах:
- животным – 7-30 единиц Botox / кг, оценивали физиологическую реакцию через 5-ть дней после травмы%;
- людям – 10-300 единиц Botox однократно, в среднем 50-300 единиц, как внутримышечно, так и подкожно, при артрите онкологии, боли в брюшине, воспалении легких и др. Вызывает недоумение, что в каждом примере лечат одного конкретного человека, а применяемая доза «плавающая», что вызывает большие сомнения по поводу всего лечения.
Известный способ имеет следующие недостатки:
1. бутулиновый токсин – чрезвычайно опасное вещество, нужно соблюдать меры предосторожности для того, чтобы он не был введен в кровеносный сосуд;
2. эксперименты, выполненные на мышах, ограничились только физиологическим тестированием животных, причем проведен только визуальный анализ параметров развития острой болевой реакции, инструментальные тесты не применялись; дальнейший анализ состояния непосредственно систем болевого анализатора (спинномозговые ганглии, задние рога спинного мозга) не проводился;
3. эксперименты на людях проведены без описания каких-либо статистически значимых различий;
4. применение ботулотоксина имеет ограничения - нарушение свертываемости крови, терапия антикоагулянтами или прием других лекарственных средств в антикоагулянтных дозах, выраженная мышечная слабость или атрофия мышц-мишеней, наличие неврологических заболеваний, повышенная температура; острые инфекционные или неинфекционные заболевания и др.;
5. ботулинический токсин типа А следует с осторожностью вводить в места, находящиеся в непосредственной близости от сонных артерий, верхушек легких и пищевода;
6. применение ботулинического токсина типа А может спровоцировать нарушения глотания, речи и дыхания, что потребует незамедлительных оперативных мер;
7. для пациентов в возрасте до 18 лет исследования по воздействию ботулотоксина вообще не проводились;
8. любая терапия, содержащая ботулинический токсин, должна применяться под специальным контролем и только в том случае, когда ожидаемая польза от лечения превосходит риск;
9. облегчение от боли, по заключению авторов, составляет от 2-х до 6-ти месяцев, при этом никакими данными не подкреплено.
Известен способ лечения нейропатической боли имидазотриазинонами (WO 2013/156231 Al, МПК А61К 31/00, А61К 31/53, А61Р 25/04, опубл. 24.10.2013), который рекомендовали в следующих дозах:
- примерно 0,01 мг-10 г на человека в сутки, предпочтительно 0,5-5 г (максимально до 10 г), может быть назначен орально, назально, подкожно, внутримышечно, в виде суппозиториев и пр.; ежедневная доза для введения людям для предотвращения невропатической боли может находиться в диапазоне примерно 0,01-50 мг/кг или для среднего по весу человека (70 кг) 3,5 г, и по длительности реабилитации от 1 недели до 1 года; это очень значительная нагрузка на организм и применение таких синтетических препаратов должно быть исчерпывающе обоснованным.
К недостаткам способа следует отнести:
1. имидазотриазиноны - класс полностью синтетических соединений, своей структурой близки к гербицидам;
2. основа их действия – ингибирование фосфодиэстеразы-9, что приводит к модуляции (нарастанию) уровня цикличного аденозинмонофосфата и повышению синаптической пластичности и синаптических процессов; однако для исследования имидазотриазинонов для терапии нейропатической боли была выбрана крайне противоречивая модель;
3. модель травматического повреждения спинного мозга (spinal cord injury, SCI) обычно используют для тестирования препаратов, действие которых направленно на восстановление ткани травмированного спинного мозга и проводящих путей, при этом физиологические тесты направлены на оценку восстановления чувствительности и двигательной активности животных с повреждением спинного мозга;
4. судя по дизайну исследования и применению широкого спектра физиологического тестирования нейропатической боли путем оценки чувствительности задних конечностей животных, авторам патента следовало бы использовать модель периферической нейропатической боли, которая формируется путем лигирования седалищного нерва задней лапы крысы или повреждением корешков спинного мозга, что помогло бы установить анальгетическую активность исследуемых препаратов;
5. в данном же случае кажется более вероятным тот факт, что у животных без введения имидазотриазинонов просто происходит более раннее восстановление функций задних конечностей, с более быстрым восстановлением чувствительности;
6. можно также предположить, что данная модель могла быть использована, если бы контузионная травма была легкой степени тяжести, но в патенте указано, что восстановление вегетативных функций животных наблюдалось лишь через неделю после операции, а это указывает на контузию тяжелой степени, и в данном случае речь идет о восстановлении чувствительности задних конечностей, а не о терапии нейропатической боли.
Известен патент способ, предлагающий использование этаноламида пальмитиновой кислоты в качестве средства снижения нейропатической боли. При этом лечение боли проводили дозами от 1,2 г до 2,4 г в сутки на пациента в течение 1 месяца, оценку эффекта проводили по шкале боли Numeric Rating Scale (NRS), она снижалась с 10 (максимум) до 3-х, однако для усиления авторы использовали группу витаминов В, причем их содержание в комплексных препаратах было до 300% от рекомендуемой нормы, поэтому сложно вычленить истинное действие заявляемого вещества – этаноламида пальмитиновой кислоты (WO 2016/146453 Al «Composition for use in the treatment of neuropathic pain», МПК A61K 31/164, A61K 31/197, A61K 31/455, A61K 31/51, A61K 31/525, A61K 31/714, A61P 25/00, опубл. 22.09.2016).
Недостатками данного способа являются:
1. эксперименты проведены на крайне скромной выборке людей, без описания каких-либо статистически значимых различий;
2. полностью отсутствуют данные о хотя-бы предполагаемых механизмах действия PEA и различных композиций на его основе;
3. исследователи ограничились лишь физиологическим тестированием людей, которое обладает некоторой степенью субъективности;
4. не было проведено никаких функциональных тестов или биохимических анализов крови людей, принимавших участие в эксперименте;
5. в целом, исследование анальгетического действия этаноламида пальмитиновой кислоты достаточно широко освещено в литературе в последние 10-15 лет.
Известен способ для лечения нейропатической боли, использующего композиция, в котором в качестве активного фармацевтического начала, как и в предыдущем способе предлагается использование этаноламида пальмитиновой кислоты. Прием животными этаноламида пальмитиновой кислоты составлял 5 мг/кг, орально со связующими добавками, обладающими и собственной активностью, а главный контроль показателей оценивали на 8-е сутки (US 20150265568 A1», МПК A6IK 3I/221, A61K 3I/I64, опубл. 24.09.2015).
Способ имеет следующие недостатки:
1. исследователи ограничились только физиологическим тестированием животных, причем с очень скромным объёмом экспериментальных подходов, использовался только тест на развитие тактильной аллодинии, тогда как огромный спектр дополнительных проявлений нейропатической боли не освещался (механическая аллодиния, термическая аллодиния, гипералгезия, нарушение когнитивных функций);
2. в связи с использованием лишь тестирования тактильной аллодинии животных, исследователи не в состоянии установить хотя бы некоторые механизмы действия исследуемых композиций на основе этаноламида пальмитиновой кислоты;
3. срок проведения эксперимента крайне скромный (8 дней), тогда как основное проявление нейропатической боли приходится на 14 день после операции, а признаки тактильной аллодинии сохраняются вплоть до 2-3 месяцев;
4. эксперименты представлены без описания каких-либо статистически значимых различий между экспериментальными группами.
Наиболее близким к заявляемому решению является способ лечения нейропатической боли путем введения докозагексаеновой кислоты, являющейся природной морской кислотой, получаемой из морских организмов. Докозагексаеновую кислоту в виде эмульсии вводят млекопитающим подкожно в дозе 4,5 мг/кг ежедневно в течение 2 недель после операции (Manzhulo et al. «Neuron-astrocyte interactions in spinal cord dorsal horn in neuropathic pain development and docosahexaenoic acid therapy» // Journal of Neuroimmunology. 2016. Vol. 298, P. 90–97).
Данный способ имеет следующие недостатки:
1. это была одна из первых работ авторов по подтвержденному действию докозагексаеновой кислоты при нейропатической боли, однако при всех обнадеживающих результатах средство не обладало еще той эффективностью, что присуще многим официальным лекарственным препаратам;
2. авторы сами считают, что их исследование промежуточное и, в дальнейшем, должно быть обосновано многими дополнительными факторами;
3. также была выбрана модель, не раскрывающая в полном объеме возможные направления применения препарата.
Техническая проблема, решаемая изобретением – разработка нового эффективного, способа лечения нейропатической боли и ее эмоциональных эффектов на основе нового природного морского компонента, этаноламида докозагексаеновой кислоты, обладающего высокой биологической активностью, за счет нейропротективного действия ЭА-ДГК.
Заявленная техническая проблема решается тем, что в известном способе лечения нейропатической боли, включающим введение фармацевтически эффективного количества природного компонента, полученного из морских организмов, согласно изобретению, в качестве природного компонента, полученного из морских организмов, берут этаноламид докозагексаеновой кислоты.
Использование этаноламида докозагексаеновой кислоты для лечения нейропатической боли, который ранее в этих целях не применялся, позволил получить абсолютно неожиданный эффект по устранению нейропатической боли. Кроме того, ЭА-ДГК подавляет нейровоспаление, усиливает нейрогенез, восстанавливает нарушение двигательной активности, рабочей и долговременной памяти и проявляет другие положительные эффекты.
Экспериментально установлено, что фармацевтически эффективной дозой ЭА-ДГК, позволяющей устранить воздействие нейропатической боли, является доза в количестве 4 мг/кг ежедневно в течение не менее 5-ти недель.
Целесообразно ЭА-ДГК вводить подкожно в виде водо-жировой эмульсии. Это позволяет достичь заявляемого технического результата.
Способ лечения ЭА-ДГК (N-докозагексаеноил-этаноламином) нейропатической боли осуществляли следующим образом.
Средства и методы исследования
Животные и хирургия
В работе использовали крыс-самцов линии Вистар (250±10 г, возраст 3 месяца). Крысы были получены из Национального научного центра морской биологии им. А.В. Жирмунского Дальневосточного отделения Российской академии наук (ННЦМБ ДВО РАН), Владивосток, Россия. Животных содержали по три-четыре в клетке с неограниченным доступом к корму и воде с 12-часовом циклом свет/темнота. Температура (23±2°C) и влажность (55±15%) были постоянными. Все экспериментальные процедуры были одобрены Комитетом по этике животных при Национальном научном центре морской биологии им. А.В. Жирмунского ДВО РАН (№ 1/2020) в соответствии с международными нормами Европейской директивы 2010/63/EU и этические руководящие принципы для изучения экспериментальной боли у находящихся в сознании животных Международной ассоциации изучения боли. Животных анестезировали изофлураном с использованием вапорайзера для анестезии грызунов (VetFlo, Kent Scientific Corporation, США). Моделирование нейропатической боли проводили путем наложения трех лигатур (шелк, Ethicon, США) на расстоянии 1-2 мм на седалищный нерв правой задней лапы крысы (Bennett G.J.; Xie Y.K. «A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man». Pain 1988, 33, 87–107).
Получение N-докозагексаенил-этаноламина (ЭА-ДГК)
ЭА-ДГК получали из продуктов промышленной переработки дальневосточного кальмара, выловленного в Беринговом море или из жиров промысловых морских рыб (тихоокеанская сельдь, сардина иваси, скумбрия, сайра и др.). Концентрат ПНЖК получали по методике Ермоленко с соавт. (Ermolenko E.; Latyshev N.; Sultanov R.; Kasyanov S. «Technological approach of 1-O-alkyl-sn-glycerols separation from Berryteuthis magister squid liver oil». Food Sci. Technol. 2016, 53, 1722–1726; Патент РФ № 1581737 «Способ получения концентрата этиловых эфиров эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот», МПК С11С 1/00, С11В 7/00, опубл. 21.05.1993). Далее, концентрат ПНЖК превращали в этиловые эфиры, затем обрабатывали этаноламином для получения этаноламидов жирных кислот (Патент РФ № 2412157С1 «Способ получения этаноламидов полиненасыщенных жирных кислот», МПК С07С 231/02, С07С 233/20, опубл. 09.09.2009). ВЭЖХ этаноламидов ПНЖК выполняли на хроматографе Shimadzu LC-8A (Shimadzu, Япония) с детектором UV/VIS SPD-20A (205 нм). Разделение проводили на препаративной колонке с обращенной фазой Supelco Discovery HS С-18 (Bellefonte, PA); размер частиц 10 мкм, внутренний диаметр 250Ч50 мм. Использовали изократическое элюирование системой этанол/вода (70:30, об./об.). Скорость элюирования 50 мл/мин. Фракции, содержащие этаноламид ДГК, собирали, упаривали в вакууме и анализировали с помощью газовой хроматографии (ГХ) и масс-спектрометрии ГХ (ГХ-МС). ЭА-ДГК представлял собой светло-желтую масляную жидкость с невыраженным запахом при комнатной температуре. Чистота 99.4% (фиг. 1).
Для определения истинного состава триметилсилильного производного (TMS-NAE или TMS-ЭА-ЖК, триметилильных производных жирных кислот) этаноламида жирной кислоты использовали методы ГХ и ГХ-МС. Для получения TMS-производных 50 мкл N, O-бис-(триметилсилил)-трифторацетамида (BSTFA) добавляли к 1 мг этаноламидов жирных кислот с последующим нагреванием до 60°C в течение 1 часа в атмосфере аргона. Затем добавляли 1 мл гексана и вводили по 1 мкл каждой силилированной фракции в систему ГХ. Для определения состава ТМС-АЭ-ЖК использовали хроматограф Shimadzu GC-2010 с капиллярной колонкой Supelco SL-5 ms 30 мм × 0.25 мм внутренний диаметр (США) и пламенно-ионизационный детектор (Япония). Компоненты смеси разделяли при определенных условиях: (1) начальная температура 180°C; (2) скорость нагревания от 2°C / мин до 260°C; и (3) температура поддерживалась в течение 35 мин. Температура инжектора и детектора была одинаковой и составляла 260°C. Для идентификации структуры TMS-NAE использовали GC-MS. Электронные спектры ударов регистрировали на приборе Shimadzu TQ-8040 (Япония) с колонкой Supelco SL-5 ms (США) при 70 эВ. Использовали те же температурные условия, что и при газовой хроматографии
Терапия
ЭА-ДГК вводили крысам подкожно в виде водо-жировой эмульсии. Эмульсию готовили смешиванием ЭА-ДГК с водой до конечной концентрации 25 мг/мл при постоянном встряхивании с использованием встряхивающего устройства Multi-Vortex (V-32, Biosan, Латвия). Полученную эмульсию вводили крысам подкожно в таком количестве, чтобы обеспечить дозу ЭА-ДГК 4 мг/кг. Период введения составлял пять недель ежедневно со дня проведения операции.
Животные (n=60) были случайным образом разделены на четыре группы:
1 группа «ЛО» (n=15), включала ложнооперированных животных, обработанных носителем (вода);
2 группа «ЛО+ЭА-ДГК» (n=15), включала ложнооперированных животных, получавших ЭА-ДГК;
3 группа «Боль» (n=15), включала животных, которым вводили носитель (вода), с повреждением седалищного нерва;
4 группа «Боль+ЭА-ДГК» (n=15), состояла из животных с повреждением седалищного нерва, получавших ЭА-ДГК. Крыс выводили из эксперимента через 35 дней после операции в день последнего введения ЭА-ДГК или носителя.
Статистический анализ данных
Полученные данные выражены как среднее значение ± SEM. Нормальность данных оценивали с помощью теста Шапиро–Уилка. Данные, полученные с помощью поведенческих тестов, иммуногистохимии, ELISA и липидного анализа, сравнивали с использованием двухфакторного дисперсионного анализа с последующим повторным тестом множественного сравнения Тьюки. В работе использовали двухфакторный дисперсионный анализ для оценки величины каждого эффекта, а именно лечения ЭА-ДГК («лечение») и лигирования седалищного нерва («хирургия»). Различия считались статистически значимыми при p<0.05. Все статистические тесты были выполнены с использованием программного обеспечения Microsoft Excel (Microsoft, Талса, Оклахома-сити, США) и GraphPad prism 4 (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США).
Изобретение иллюстрируется следующими чертежами:
на фиг. 1 – Химическая структура N-докозагексаеноил-этаноламина (ЭА-ДГК).
на фиг. 2 – Влияние нейропатической боли и терапии ЭА-ДГК на поведение животных. (А) Гипералгезия (время до одергивания хвоста). (Б) Двигательная активность (количество пересеченных квадратов в тесте «открытое поле»). (В) Рабочая память (частота правильного чередования рукавов в Y-лабиринте, %). (Г) Двигательная активность (количество входов в рукава Y-образного лабиринт). (Д) Тревожность (время пребывания в закрытых рукавах крестообразного лабиринта, %). (Е) Долговременная память (латентный период в тесте пассивного избегания, сек). Данные представляют собой средние значения±SEM, n=10 (количество животных в группе), *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001.
на фиг. 3 – Влияние нейротравмы и терапии ЭА-ДГК на активность микроглии гиппокампа. (А) Репрезентативные изображения иммуноокрашивания Iba-1. Масштабная линейка: 100 мкм. (Б) Гистограмма, демонстрирующая % Iba1-позитивного окрашивания в областях гиппокампа CA1, CA3 и DG после операции и терапии ЭА-ДГК. Данные представляют собой среднее значение±SEM, n=40 (количество срезов), *p<0.05, **p<0.01. (В) Репрезентативные изображения иммуноокрашивания CD86. Масштабная линейка: 100 мкм. (Г) Гистограмма, демонстрирующая % CD86-позитивного окрашивания в областях гиппокампа CA1, CA3 и DG после операции и терапии ЭДГК. Среднее значение±SEM, n=40 (количество срезов), *p<0.05, **p<0.01. (Д) Эффекты влияния нейротравмы и терапии ЭДГК на микроглиальный маркер гиппокампа и экспрессию цитокинов, измеренные с помощью ИФА; гистограммы экспрессии Iba-1, CD86, IL1β и IL6 в гиппокампе. Среднее значение±SEM, n=5 на группу (количество животных), *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001.
на фиг. 4 – Эффект влияния нейротравмы и терапии ЭА-ДГК на пролиферацию нейрогенез в гиппокампе. (А) Репрезентативные изображения окрашивания PCNA-позитивных клеток. Масштабная линейка: 100 мкм. (Б) Гистограмма, показывающая изменение количества PCNA+ клеток в субгранулярной зоне зубчатой извилины (DG SGZ). (В) Репрезентативные изображения окрашивания DCX-позитивных нейронов. Масштабная линейка: 100 мкм. (Г) Гистограмма, показывающая изменения количества незрелых нейронов в DG SGZ. Среднее значение ± SEM, n=20 (количество срезов в группе), *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001.
на фиг. 5 – Результаты липидного анализа LC-MS всего мозга крысы после нейротравмы и терапии ЭА-ДГК. (А) Уровень различных N-ацилэтаноламинов выражен в нМ/мл. (Б) Содержание в мозге основных жирных кислот и DMA (% от общего количества жирных кислот и DMA). Среднее значение ± SEM, n=5 (количество животных в группе), *p<0.05, ** p<0.01, ***p<0.001.
Эксперимент 1. Изучение влияния ЭА-ДГК на связанные с нейропатической болью сенсорные и поведенческие изменения.
Болевая чувствительность. Для оценки антиноцицептивной активности ЭА-ДГК использовали тест «отдергивания хвоста» на аппарате LE5022 (Panlab, Барселона, Испания). Для этого хвост помещали на нагревательный элемент, точка нагрева которого располагалась на расстоянии 5–8 см от кончика хвоста. Точка отсечения была установлена на 20 с, после чего нагревание прекращалось, для предотвращения повреждения тканей. Регистрировали время реакции животного, выраженное отдергиванием хвоста.
В группе «Боль» через две-четыре недели после операции наблюдались процессы гипералгезии. В то же время введение ЭА-ДГК предотвратило развитие тепловой гипералгезии у животных с нейропатической болью на вторую и третью неделю после операции (фиг. 2А).
Двигательная активность. Двигательную активность животных оценивали с помощью Y-лабиринта. Y-образный лабиринт представлял собой устройство из непрозрачного акрилового стекла с тремя равными рукавами (длина 50 см, высота 32 см и ширина 16 см). Каждую крысу помещали в центр лабиринта на 5 мин, чтобы она могла свободно перемещаться и исследовать окружающее пространство. Вход в рукав засчитывали, когда животное входило в него всеми четырьмя лапами. Для регистрации уровня двигательной активности оценивалось общее количество заходов каждой крысы в рукава лабиринта. Также для оценки общей двигательной активности использовали тестирование в открытом поле. Каждое животное помещали в центр квадратной арены из плексигласа (ширина: 50 см; высота: 40 см) на 5 мин. Арена была разделена на 25 квадратов. Поведение животного регистрировали с помощью видеокамеры, установленной над устройством, и подсчитывали количество пересеченных квадратов. Тесты проводили еженедельно на протяжении 5 недель эксперимента.
Исследование двигательной активности в Y-лабиринте выявило общее увеличение двигательной активности у животных, получающих ЭА-ДГК в сравнении с животными, получающими носитель. Разница в количестве заходов между животными группы «ЛО» и «Боль» не наблюдалась в течение всего эксперимента (фиг. 2Г). Исследование в открытом поле также показало, что лечение ЭА-ДГК значительно индуцировало усиление двигательной активности у животных, получавших терапию, по сравнению с животным в группе «Боль» и «ЛО» на всех неделях эксперимента. Более того, у животных с болью, получающих ЭА-ДГК, двигательная активность была значительно выше, чем у животных с нейропатической болью, получающих носитель (вода) (фиг. 2Б). Увеличение двигательной активности у всех животных, получавших терапию, мы связываем с обезболивающим эффектом ЭА-ДГК. Но поскольку ранее было показано, что ЭА-ДГК не оказывает прямого действия на каннабиноидные рецепторы CB1, его анальгетическая активность не может быть обусловлена их стимуляцией. Это подтверждается в нашем исследовании тем фактом, что введение ЭА-ДГК увеличивает двигательную активность, а ранее было доказано, что стимуляция рецепторов CB1 в головном мозге снижает подвижность (Cosenza M.; Gifford A.N.; Gatley S. et al. «Locomotor activity and occupancy of brain cannabinoid CB1 receptors by the antagonist/inverse agonist AM281». Synapse 2000, 38, 477–482; Bass C.E.; Griffin G.; Grier M.; Mahadevan A.; Razdan R.K.; Martin B.R. «SR-141716A-induced stimulation of locomotor activity: A structure–activity relationship study». Pharmacol. Biochem. Behav. 2002, 74, 31–40). В данном случае анальгетические и когнитивные эффекты потенциально были основаны на повышенной концентрации анандамида, который, напротив, может стимулировать рецепторы CB1, за счет чего развивается анальгетическое действие. Это согласуется с нашими результатами, согласно которым введение ЭА-ДГК приводит к увеличению концентрации анандамида в головном мозге крыс.
Рабочая память. Оценка рабочей памяти у крыс проводилась с помощью теста спонтанного чередования в Y-лабиринте. Эксперимент проводился одновременно с изучением двигательной активности. Для оценки уровня рабочей памяти анализировалось количество «правильных» чередований рукавов (последовательный выбор каждой из трех ветвей без повторных входов). Оценивалось общее количество входов (N) и количество «правильных» троек (M). Уровень сохранности рабочей памяти рассчитывался по следующей формуле: R (%) = Mx100/(N-2).
Исследование в Y-лабиринте показало снижение рабочей памяти у животных с нейропатической болью на 2 и 3 неделях после операции. У животных, получавших синаптамид, показатели рабочей памяти существенно не отличались от группы ложнооперированных животных на тех же сроках после операции (фиг. 2В).
Тревожность. Исследования тревожности животных проводили с использованием приподнятого крестообразного лабиринта (Panlab, Барселона, Испания). Исследование было основано на тенденции избегать открытых пространств с повышенной тревожностью. Лабиринт представлял собой устройство, состоящее из двух открытых рукавов (30×5 см, стены высотой 0.25 см) и двух закрытых рукавов (30×5 см, стены высотой 15 см), выходящих из центральной площадки (5×5 см), расположенных друг напротив друга. Животное помещали в центр лабиринта лицом к открытому рукаву и оставляли в аппарате на 5 мин, при этом его поведение регистрировали с помощью видеокамеры, расположенной над лабиринтом. Время нахождения в открытом и закрытом рукавах и в центральной зоне регистрировалось автоматически.
Исследование уровня тревожности в приподнятом крестообразном лабиринте не выявило существенных различий между группами «ЛО» и «Боль». Однако мы обнаружили в группах, получавших ЭF-ДГК, значительное снижение процента времени, проведенного в закрытых рукавах лабиринта, что указывало на анксиолитическую активность соединения. В то же время ложнооперированные животные, получавшие лечение ЭF-ДГК, предпочитали находиться в центре лабиринта, а животные из группы «Боль+ЭА-ДГК» проводили больше времени, изучая открытые рукава (фиг. 2Д).
Долгосрочная память. Для оценки влияния хронической нейропатической боли и лечения ЭА-ДГК на долговременную память применялся тест пассивного избегания (Ishiyama T.; Tokuda K.; Ishibashi T.; Ito A.; Toma S.; Ohno Y. «Lurasidone (SM-13496), a novel atypical antipsychotic drug, reverses MK-801-induced impairment of learning and memory in the rat passive-avoidance test». Eur. J. Pharmacol. 2007, 572, 160–170). Испытательная установка состояла из светлой и темной камер, разделенных раздвижной дверцей. Во время фазы обучения крыс помещали в светлую камеру и позволяли свободно передвигаться в течение 60 с, прежде чем открыть раздвижную дверь. Когда животное входило в темную камеру, дверь закрывалась, и через 2 с производился электрический удар (0.3 мА). Второй этап тестирования проводился через 24 ч после тренировки, но без электрошока. Чтобы оценить долговременную память, мы измерили задержку до входа животных в темную камеру (step-through latency).
Поведенческое тестирование выявило гиппокамп-зависимое нарушение памяти у крыс с перевязанным седалищным нервом. Показатели долгосрочной памяти в группе «Боль» резко снижались по сравнению с группой «ЛО». Терапия ЭА-ДГК предотвращала контекстно-зависимое ухудшение долговременной памяти у крыс с нейропатической болью. В группе «Боль+ЭА-ДГК» не было значительных различий с ложнооперированными животными (фиг. 2Е).
Эксперимент 2. Иммунологическое исследование влияния ЭА-ДГК на опосредованные нейропатической болью изменения активности микроглии в гиппокампе.
Образцы для последующего гистологического анализа были собраны на 35-е сутки после операции. Животных анестезировали с помощью изофлурана с использованием вапорайзера для анестезии грызунов (VetFlo, Kent Scientific Corporation, США). Перед проведением перфузии делали разрез стенки ушка правого предсердия. В левый желудочек вводили фосфатный буфер (рН=7.2), после чего проводили перфузию забуференным 10% формалином, приготовленным на 0.1М фосфатном буфере (рН=7.2). Далее проводили фиксацию в течении 16 ч при 4°С в свежем забуференном 10% формалине. После фиксации и промывки в 0.1 М фосфатным буфером (рН=7.2) образцы ткани помещали в парафиновые блоки и получали срезы толщиной 10 мкм с использованием ротационного микротома Leica RM 2245 (Leica Biosystems, США). После депарафинирования парафиновые срезы гиппокампа инкубировали в 3% перекиси водорода для блокирования эндогенной пероксидазной активности перед иммуногистохимическим окрашиванием. После 3 промывок в 0.1М фосфатном буфере (рН=7.2) срезы обрабатывали в течение 60 мин в 2% растворе бычьего сывороточного альбумина (sc-2323; Santa Cruz Biotechnology, Калифорния, США) и 0.25% растворе Тритон Х-100 (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США). Для оценки активности микроглии в гиппокампе иммуногистохимическое окрашивание проводили с использованием кроличьих поликлональных антител против Iba-1 (1:500, ab108539) и кроличьих моноклональных антител против CD86 (1:1000, ab53004) (Abcam, Cambridge, MA, США). Вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (PI-1000, антикроличий; PI-2000, антимышиный), использовали в соответствии с рекомендациями производителя (1:100; Vector Laboratories, Burlingame, CA, США). После промывки 0.1М фосфатным буфером (рН 7.2) срезы обрабатывали в течение 5-10 минут хромогеном (DAB Plus; Abcam, США). Затем срезы промывали 0.1М фосфатным буфером (рН 7,2), обезвоживали и помещали в среду для заключения Dako (CS705; Dako, Carpinteria, CA, USA). Изображения были получены с использованием микроскопа Zeiss Axio Imager, оснащенного цветной видеокамерой AxioCam 503 и программным обеспечением AxioVision (Carl Zeiss, Оберкохен, Германия). Изображения были сохранены в виде файлов TIFF с последующей обработкой и анализом с помощью программного обеспечения ImageJ (NIH, Bethesda, MD, США). Оценка Iba1- и CD86-специфической окрашенной области проводилась с использованием каждого шестого среза. Для этого изображения обрабатывались следующим образом: преобразование изображения в режим оттенков серого, вычитание фона и бинаризация. Затем рассчитывали площадь, занимаемую иммунопозитивной микроглией по Iba-1 и CD86 в областях CA1, CA3 и DG. Все измерения были выполнены оператором, который не знал идентичности срезов. Для определения концентраций белков Iba1, CD86, IL-6 и IL-1β в гиппокампе использовали иммуноферментный анализ (ИФА). Крыс анестезировали изофлураном с использованием испарителя для анестезии грызунов (VetFlo, Kent Scientific Corporation, США), и каждый гиппокамп быстро извлекали, замораживали в жидком азоте и хранили при температуре -70°C. Были использованы кит наборы ИФА для количественного определения Iba1 (NBP2-66675, NovusBio), CD86 (RAB0887-1KT, Sigma-Aldrich), IL-6 (ERA32RB, Invitrogen) и IL-1beta (BMS630, Invitrogen) в соответствии с инструкцией производителя. Для анализа использовали как правый, так и левый гиппокамп. Буфер для гомогенизации состоял из 100 мМ Трис (pH 7.4), 150 мМ NaCl, 1 мМ EGTA, 1 мМ EDTA, 1% Triton X-100 и 0.5% дезоксихолата натрия с коктейлем ингибиторов протеаз (cOmplete, Sigma-Aldrich). Набор BCA Protein Assay Kit (Pierce, Rockford, IL, USA) использовали для определения концентрации белка. Оптическую плотность измеряли на планшетном спектрофотометре iMark (Bio-Rad, США) при длине волны 450 нм.
Изучая влияние периферической нейротравмы и терапии ЭА-ДГК на активность микроглии в гиппокампе мы обнаружили увеличение Iba-1-положительного иммунного окрашивания при нейропатической боли в зубчатой извилине гиппокампа, в зоне CA1 и области CA3. Более того, площадь Iba-1-положительного иммуноокрашивания в группе животных с нейропатической болью, получающих ЭА-ДГК существенно не отличалась от таковой в группах ложнооперированных животных, получавших ЭА-ДГК и носитель (фиг. 3А, Б). CD86-иммунопозитивное окрашивание в зубчатой извилине выявило увеличение в группе «Боль», при этом в группе «Боль+ЭА-ДГК» не наблюдалось увеличения CD86-иммунопозитивного окрашивания. Однако в области CA3 введение ЭА-ДГК не предотвращало увеличения окрашивания CD86-иммунопозитивной области микроглии. Окрашивание CD86 в группе «Боль+ЭА-ДГК» оказалось на уровне группы «Боль». В области CA1 изменений иммунореактивности CD86 не наблюдалось ни при боли, ни при терапии (фиг. В, Г). Иммуногистохимические данные об активности микроглии были подтверждены данными, полученными с помощью ИФА. Было показано, что концентрация Iba-1 в гиппокампе животных с нейропатической болью, которым вводили носитель, была значительно увеличена по сравнению с группой ложнооперированных животных. У крыс с болью, получающих ЭА-ДГК, концентрация Iba-1 была значительно ниже, чем в группе «Боль». Аналогичная ситуация наблюдалась и для накопления белка CD86. У животных с нейропатической болью, получавших носитель, количество CD86 было значительно выше, чем в группе животных с болью, получавших ЭА-ДГК. ИФА цитокинов в ткани гиппокампа показал увеличение продукции провоспалительного цитокина IL-1β в группе «Боль» по сравнению с группой «Боль+ЭА-ДГК». Кроме того, было показано увеличение концентрации IL-6 в группе «Боль» по сравнению с группой «Боль+ЭА-ДГК» (фиг. 3Д). Изучение продукции IL-10 не выявило существенных различий между группами (данные не показаны).
Эксперимент 3. Исследование влияния ЭА-ДГК на опосредованные нейропатической болью изменения активности пролиферации и нейрогенеза в зубчатой извилине гиппокампа.
На гистологическом материале, который использовали для окрашивания микроглии проведена оценка интенсивности нейрогенеза, количество новообразованных нейронов в субгранулярной зоне (SGZ) зубчатой извилины (DG) определяли с использованием антител к даблкортину (anti-DCX) (1:500, ab18723; Abcam). Пролиферативную активность в DG SGZ определяли иммуногистохимическим окрашиванием ядерного антигена пролиферирующих клеток (PCNA) с использованием мышиных моноклональных антител против PCNA (1: 500, ab29) (Abcam). Вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (PI-1000, антикроличий; PI-2000, антимышиный), использовали в соответствии с рекомендациями производителя (1: 100; Vector Laboratories, Burlingame, CA, США). После промывки 0.1М фосфатным буфером (рН 7.2) срезы обрабатывали в течение 5-10 минут хромогеном (DAB Plus; Abcam, США). Затем срезы промывали 0.1М фосфатным буфером (рН 7,2), обезвоживали и помещали в среду для заключения Dako (CS705; Dako, Carpinteria, CA, USA). Изображения были получены с использованием микроскопа Zeiss Axio Imager, оснащенного цветной видеокамерой AxioCam 503 и программным обеспечением AxioVision (Carl Zeiss, Оберкохен, Германия). Изображения были сохранены в виде файлов TIFF с последующей обработкой и анализом с помощью программного обеспечения ImageJ (NIH, Bethesda, MD, США). Каждый шестой срез использовался для количественного определения DCX и PCNA. Иммунопозитивные клетки подсчитывались только в пределах DG SGZ. В расчетах использовались только целые клетки, содержащие видимые ядра. Все измерения были выполнены оператором, который не знал идентичности срезов.
Изучение процессов пролиферации и нейрогенеза в гиппокампе проводилось путем иммуногистохимического обнаружения ядерного антигена пролиферирующих клеток (PCNA) и даблкортина (маркер новообразованных нейронов). При подсчете количества PCNA- и DCX-иммунопозитивных клеток учитывались только клетки, расположенные строго в субгранулярной зоне зубчатой извилины гиппокампа. Установлено, что у животных с нейропатической болью, получающих носитель, количество PCNA-иммунопозитивных нейронов было значительно снижено по сравнению с группами «ЛО» и «ЛО+ЭА-ДГК», тогда как в группе «Боль+ЭА-ДГК» среднее количество иммунопозитивных нейронов было значительно выше, чем в группе «Боль» (фиг. 4А, Б). Аналогичный результат наблюдался при анализе иммуногистохимического окрашивания даблкортина. Мы обнаружили снижение плотности даблкортин-положительных нейронов в DG SGZ у крыс с нейропатией. В группе «Боль+ЭА-ДГК» средняя плотность DCX-положительных нейронов была значительно выше, чем в группе «Боль» (фиг. 4В, Г).
Учитывая, что активация микроглии и выработка провоспалительных цитокинов отрицательно влияют на гиппокампозависимую память, наиболее вероятно, что в основе наблюдаемых эффектов лежит противовоспалительная активность ЭА-ДГК. Кроме того, выраженная противовоспалительная активность играет важную роль в поддержании нормального уровня нейрогенеза гиппокампа, нарушенного нейропатической болью. Хроническая нейропатическая боль способствует долговременной поведенческой адаптации, связанной с нейровоспалительным сигналом и нарушением нейропластичности. Недавно стало известно, что повреждение периферической нервной системы приводит к нарушению нейрональной пластичности и изменению активности микроглии и астроцитов, что, в свою очередь, приводит к дисбалансу продукции цитокинов и центральной сенсибилизации (Clark A.K.; Old E.A.; Malcangio M. «Neuropathic pain and cytokines: Current perspectives». J. Pain Res. 2013, 6, 803–814). В нашем исследовании нейровоспаление, вызванное болью, нарушило нейрогенез гиппокампа и способствовало когнитивному и аффективному дефициту. Введение ЭДГК в течение пяти недель позволило нам поддерживать нормальный уровень пролиферативной активности в DG SGZ. Мы предполагаем, что наблюдаемые фармакологические эффекты во многом обусловлены выраженной противовоспалительной активностью ЭА-ДГК. Известно, что провоспалительные цитокины ингибируют нейрогенез, а противовоспалительные, наоборот, стимулируют пролиферацию нейронов гиппокампа и обеспечивают их выживание (Goshen I.; Kreisel T.; Ben-Menachem-Zidon O. et al. «Brain interleukin-1 mediates chronic stress-induced depression in mice via adrenocortical activation and hippocampal neurogenesis suppression». Mol. Psychiatry 2008, 13, 717–728; Zunszain P.A.; Anacker C.; Cattaneo A.; Carvalho L.A., Pariante C.M. «Glucocorticoids, cytokines and brain abnormalities in depression». Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry 2011, 35, 722–729; Perez-Asensio F.J.; Planas A.M.; Pozas E. «Interleukin-10 regulates progenitor differentiation and modulates neurogenesis in adult brain». J. Cell Sci. 2013, 126, 4208–4219; Pereira L.; Font-Nieves M.; Van den Haute C.; Baekelandt V.; Planas A.M.; Pozas E. «IL-10 regulates adult neurogenesis by modulating ERK and STAT3 activity». Front. Cell. Neurosci. 2015, 9, 57). Например, снижение пролиферативной активности нейронов в гиппокампе наблюдалось у трансгенных мышей с повышенной продукцией астроцитарного IL-6 (Vallieres L.; Campbell I.L.; Gage F.H.; Sawchenko P.E. «Reduced hippocampal neurogenesis in adult transgenic mice with chronic astrocytic production of interleukin-6». J. Neurosci. 2002, 22, 486–492). И если нарушение рабочей памяти при нейропатической боли может быть следствием нейровоспаления (Chen J.; Buchanan J.B.; Sparkman N.L.; Godbout J.P.; Freund G.G.; Johnson R.W. «Neuroinflammation and disruption in working memory in aged mice after acute stimulation of the peripheral innate immune system». Brain Behav. Immun. 2008, 22, 301–311), то дефицит ассоциативного эмоционального обучения долговременной памяти, который мы идентифицировали в тесте пассивного избегания, вероятно, является результатом нарушения нейрогенеза гиппокампа. Мы делаем такой вывод на основании исследований, подтверждающих участие нарушения нейрогенеза гиппокампа в развитии гиппокампозависимых нарушений контекстного обучения (Jaako-Movits K.; Zharkovsky T.; Romantchik O. et al. «Developmental lead exposure impairs contextual fear conditioning and reduces adult hippocampal neurogenesis in the rat brain». Int. J. Dev. Neurosci. 2005, 23, 627–635; Hernandez-Rabaza V.; Llorens-Martin M.; Velázquez-Sánchez C. et al. «Inhibition of adult hippocampal neurogenesis disrupts contextual learning but spares spatial working memory, long-term conditional rule retention and spatial reversal». Neuroscience 2009, 159, 59–68; Yang M.; Kim J.S.; Song M.S. et al. «Cyclophosphamide impairs hippocampus-dependent learning and memory in adult mice: Possible involvement of hippocampal neurogenesis in chemotherapy-induced memory deficits». Neurobiol. Learn. Mem. 2010, 93, 487–494). Специфический для гиппокампа дефицит контекстуальной памяти (Mutso A.A.; Radzicki D.; Baliki M.N. et al «Abnormalities in hippocampal functioning with persistent pain». J. Neurosci. 2012, 32, 5747–5756) подтверждает участие зубчатой извилины гиппокампа в обработке и передаче болевых импульсов. По нашим данным, введение ЭА-ДГК предотвращает нарушение длительного контекстуального обучения гиппокампа и снижает активность CD86-позитивной (провоспалительной M1) микроглии в DG. Данное обстоятельство предполагает связь между активацией микроглии в DG, снижением нейрогенеза в гиппокампе и нарушением гиппокамп-зависимой памяти. В то же время через пять недель после операции мы не наблюдали увеличения активности CD86-позитивной микроглии в области гиппокампа CA1, что может объяснить восстановление пространственной рабочей памяти, поскольку функционирование этого типа памяти связано с областью CA1 (Murray A.J.; Sauer J.F.; Riedel G. et al. «Parvalbumin-positive CA1 interneurons are required for spatial working but not for reference memory». Nat. Neurosci. 2011, 14, 297–299; Zhang X.H.; Liu S.S.; Yi F.; Zhuo M.; Li B.M. «Delay-dependent impairment of spatial working memory with inhibition of NR2B-containing NMDA receptors in hippocampal CA1 region of rats». Mol. Brain 2013, 6, 13). Нарушение рабочей памяти, вызванное нейропатической болью, и лежащие в основе морфологические изменения в дендритном дереве пирамидных нейронов CA1, вероятно, связаны с проекциями аксонов из III слоя медиальной энторинальной коры в область гиппокампа CA1. Входы из III слоя энторинальной коры в гиппокамп, как известно, играют важную роль в задачах пространственной рабочей памяти (Suh J.; Rivest A.J.; Nakashiba T.; Tominaga T.; Tonegawa S. «Entorhinal cortex layer III input to the hippocampus is crucial for temporal association memory». Science 2011, 334, 1415–1420; Kitamura T.; Macdonald C.J.; Tonegawa S. «Entorhinal–hippocampal neuronal circuits bridge temporally discontiguous events». Learn. Mem. 2015, 22, 438–443). Этот входной путь, а также аксоны, идущие от II слоя энторинальной коры к дендритам DG, являются основным входным путем информации о боли в гиппокамп (Liu M.G.; Chen J. «Roles of the hippocampal formation in pain information processing». Neurosci. Bull. 2009, 25, 237–266). Повышенное иммуноокрашивание Iba-1-позитивной микроглии в области CA1 может косвенно указывать на активацию противовоспалительной микроглии M2, секретирующей нейропротекторные факторы и способствующей нормальному функционированию нейронов в этой области, что приводит к восстановлению рабочей памяти у животных с перевязанным седалищным нервом. Кроме того, известно, что область CA1 гиппокампа участвует в тревожно-подобном поведении, изменяя экспрессию GluR1 в ответ на различные внешние раздражители (Xiang X.; Huang W.; Haile C.N.; Kosten T.A. «Hippocampal GluR1 associates with behavior in the elevated plus maze and shows sex differences». Behav. Brain Res. 2011, 222, 326–331). Отсутствие повышенной тревожности в приподнятом крестообразном лабиринте у животных, получающих ЭА-ДГК, в наших экспериментах также подчеркивает взаимосвязь между процессами нейровоспаления в области CA1 и их функциональной активностью, указывая на анксиолитическую активность ЭА-ДГК. В то же время мы наблюдали усиление иммуноокрашивания CD86 в области гиппокампа CA3, в то время как введение ЭА-ДГК не уменьшало активность провоспалительной микроглии в данной области через пять недель после операции. Учитывая, что область СА3 наиболее восприимчива к изменениям при различных стрессовых условиях (McEwen B.S.; Nasca C.; Gray J.D. «Stress effects on neuronal structure: Hippocampus, amygdala, and prefrontal cortex». Neuropsychopharmacology 2016, 41, 3–23; Marrocco J.; Gray J.D.; Kogan J.F. et al. «Early life stress restricts translational reactivity in CA3 neurons associated with altered stress responses in adulthood». Front. Behav. Neurosci. 2019, 13, 157), активация микроглии может в этом случае быть не только следствием нейропатической боли, но также следствием хронического стресса, связанного с гипоталамо-гипофизарным синдромом, активацией оси надпочечников и развитием дезадаптивного ответа (Ulrich-Lai Y.M.; Figueiredo H.F.; Ostrander M.M. et al. «Chronic stress induces adrenal hyperplasia and hypertrophy in a subregion-specific manner». Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2006, 291, E965–E973). В этом случае введение ЭА-ДГК снижает интенсивность этих изменений и не позволяет им приводить к фатальным структурным аномалиям дендритного древа нейронов и нарушению когнитивных функций экспериментальных животных.
Эксперимент 4. Изучение влияния ЭА-ДГК на опосредованные нейропатической болью изменения липидного состава головного мозга.
Для анализа липидов была взята дополнительная группа из 20-ти животных. Для анализа липидов животных умерщвляли изофлураном с использованием испарителя для анестезии грызуров (VetFlo, Kent Scientific Corporation, США), и каждый мозг быстро извлекали, замораживали в жидком азоте и хранили при -700C до использования. В замороженный мозг крысы добавляли внутренний стандарт ЭА-22:0 (этаноламид насыщенной жирной кислоты с 20-ю атомами) в концентрации 0.1 нМ с последующей экстракцией липидов по методу Блая и Дайера (Bligh E.G.; Dyer W.J. «A rapid method of total lipid extraction and purification». Can. J. Biochem. Physiol. 1959, 37, 911–917). Конечный липидный остаток восстанавливали в 1 мл ледяного CHCl3, продували аргоном и хранили при -80 °C до проведения жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Анализ этаноламидов жирных кислот (ЭА-ЖК) методом ЖХ-МС был проведен с помощью аналитической колонки Ascentis C18 (2.1 мм × 100 мм × 3 микрон, Supelco, США) и LC-MS 8060 (Shimadzu, Япония), оснащенной источником ионизации электрораспылением с подогревом при атмосферном давлении в режим положительной полярности. Смесь анализировали с помощью мониторинга множественных реакций (MRM). Параметры источника ионов задавались следующие: температура интерфейса 380°C; температура линии десольватации 250°C; расход распыляющего газа (N2) 3 л/мин; расход осушающего газа (N2) 3 л/мин; расход греющего газа (сухой воздух) 17 л/мин. Энергия столкновения была оптимизирована для каждого соединения индивидуально. Молекулярный ион и фрагмент для каждого измеренного соединения были следующими: 348→62 для АЭ-АК (этаноламид арахидоновой кислоты), 372→62 для ЭА-ДГК (этаноламид докозагексаеновой кислоты), 326→62 для ЭA-ОК (этаноламид олеиновой кислоты), 300→62 для ЭА-ПК (этаноламид пальмитиновой кислоты), 328→62 для ЭА-СК (этаноламид стеаридоновой кислоты) и 384→62 для внутреннего стандарт (ЭА-22:0). Количественная оценка каждого этаноламида жирной кислоты в образце ткани была достигнута с использованием LabSolution (Shimadzu) с последующим сравнением площади пика с площадью пика внутреннего стандарта. Значения выражены в нМ ЭА-ЖК/г влажной ткани.
Метиловые эфиры жирных кислот (МЭЖК) и диметилацетали (ДМА) из липидов головного мозга крыс получали по методике Карро и Дубака (Carreau J.P.; Dubacq J.P. «Adaptation of a macro-scale method to the micro-scale for fatty acid methyl transesterification of biological lipid extracts». J. Chromatogr. А 1978, 151, 384–390). α, β-ненасыщенный эфир в молекулах плазмалогена превращался в ДМА соответствующего альдегида во время переэтерификации, относительное количество плазмалогена таким образом отражалось в соотношении между альдегидом 18:0 и стеариновой кислотой, а также в соотношении между 16:0 альдегидом и пальмитиновой кислотой (Bjorkhem I.; Sisfontes L.; Bostrom B.; Kase B.F.; Blomstrand R. «Simple diagnosis of the Zellweger syndrome by gas-liquid chromatography of dimethyl acetals». J. Lipid Res. 1986, 27, 786–791). Анализ МЭЖК и ДМА проводили с помощью газовой хроматографии на хроматографе Shimadzu GC-2010 (Shimadzu, Киото, Япония) с пламенно-ионизационным детектором и капиллярной колонкой 30 м × 0.25 мм внутренний диаметр Supelcowax 10 (Беллефонте, Пенсильвания). Анализ проводился при следующих условиях: температура колонки 190°С, температура инжектора и детектора 240°C. В качестве газа-носителя использовался гелий. Пики метиловых эфиров жирных кислот идентифицировали по временам удерживания отдельных сложных эфиров жирных кислот в сравнении с аутентичными стандартами их эквивалентных чисел длины углерода. Идентификацию ДМА проводили путем сравнения времен удерживания со стандартами 16:0-DMA и 18:0-DMA (Sigma-Aldrich, США). ГХ-МС использовали для подтверждения структур МЭЖК и ДМА. Электронные спектры удара записывали на приборе Shimadzu TQ-8040 (Япония) с колонкой Supelco SL-5 ms (США) при 70 эВ при определенных условиях: (1) начальная температура 160°C; (2) скорость нагрева от 2°C/мин до 240°C; и (3) поддержании температуры в течение 35 мин.
Анализ липидов выявил повышение концентрации ЭА-ПК (этаноламид пальмитиновой кислоты) в головном мозге животных получающих ЭА-ДГК, как у ложнооперированных животных, так и у крыс с нейротравмой. Также наблюдалось увеличение концентрации ЭA-ОК (этаноламид олеиновой кислоты) в группе с терапией по сравнению с группой «ЛО». Мы обнаружили влияние травмы и лечения на концентрацию ЭА-АК (этаноламид арахидоновой кислоты) в мозге, так терапия ЭА-ДГК увеличивает его концентрацию в несколько раз в мозге у крыс. Также мы обнаружили, что сама травма также увеличивает концентрацию ЭА-АК даже без введения ЭА-ДГК. Интересно, что при введении ЭА-ДГК крысам в течение пяти недель, концентрация самого липида в головном мозге существенно не увеличивается (фиг. 5А).
Кроме того, мы определили влияние нейропатической боли и терапии ЭА-ДГК на состав жирных кислот в головном мозге крыс. В частности, было показано, что введение ЭА-ДГК предотвращает опосредованное болью снижение уровня 16:0-DМA и 18:0-DMA. ЭА-ДГК предотвращало индуцированное болью снижение содержания плазмалогенных непрямых маркеров 1,1-диметоксигексадекан (16:0-DMA)/пальмитат (C16:0) и 1,1-(18:0-DMA)/октадеканоат (C18:0) (фиг. 5Б).
Поддержание нормального уровня плазмалогенов (Pls) в головном мозге играет важную роль в снижении активности микроглии во время введения ЭА-ДГК. Известно, что плазмалогены содержат насыщенную жирную кислоту со связью сложного винилового эфира в положении sn-1, а также полиненасыщенную жирную кислоту (например, арахидоновую или докозагексаеновую кислоту) в положении sn-2, которая высвобождается Pls-селективной фосфолипазой А2 (PLA2) (Farooqui A.A. «Studies on plasmalogen-selective phospholipase A 2 in brain». Mol. Neurobiol. 2010, 41, 267–273). В нашем исследовании нейровоспаление, вызванное периферической нейротравмой, привело к снижению содержания плазмалогенов в головном мозге, на что указывают количества диметилацеталей 16:0 и 18:0. Это снижение может быть связано с развитием окислительного стресса, вызванным процессом нейровоспаления, поскольку Pls-специфическая виниловая эфирная связь в положении sn-1 может быть повреждена окислителями, включая активные формы кислорода/азота (Engelmann M.G.; Redl C.V.; Nikol S. «Recurrent perivascular inflammation induced by lipopolysaccharide (endotoxin) results in the formation of atheromatous lesions in vivo». Lab. Investig. 2004, 84, 425–432). Кроме того, Pls-селективная фосфолипаза PLA2 (активность которой значительно повышается при воспалительных состояниях) может метаболизировать плазмалогены, снижая их содержание в головном мозге (Farooqui A.A. «Studies on plasmalogen-selective phospholipase A 2 in brain». Mol. Neurobiol. 2010, 41, 267–273). Недавно стало известно, что провоспалительные стимулы, стресс и старение подавляют экспрессию синтезирующего Pls фермента, Gnpat, что приводит к снижению уровня Pls (Hossain M.S.; Abe Y.; Ali F. et al. «Reduction of ether-type glycerophospholipids, plasmalogens, by NF-κB signal leading to microglial activation». J. Neurosci. 2017, 37, 4074–4092). Мы не наблюдали снижения уровня плазмалогенов у крыс, получающих ЭА-ДГК, что, с одной стороны, может быть следствием их противовоспалительной активности. В то же время мы также наблюдали увеличение общего содержания ДГК у животных с периферической нейротравмой, получающих как носитель, так и ЭА-ДГК. Согласно результатам ANOVA, основное влияние на общее содержание ДГК в головном мозге оказало наличие/отсутствие нейротравмы. Это может означать, что высвобождение ДГК во время гидролиза ЭА-ДГК не является основным механизмом противовоспалительной активности ЭА-ДГК, что подтверждается наблюдением гораздо более низкой биологической активности ДГК по сравнению с ЭА-ДГК (Kim H.Y., Spector A.A. «N-Docosahexaenoylethanolamine: A neurotrophic and neuroprotective metabolite of docosahexaenoic acid». Mol. Asp. Med. 2018, 64, 34–44). Ранее, эксперименты in vitro показали, что активность ЭА-ДГК не блокируется циклооксигеназой и липоксигеназой, а снижается в результате воздействия амидгидролазы жирных кислот, что также подтверждает гипотезу о том, что ЭА-ДГК является основным метаболитом, определяющим нейропротекторную активность ДГК (Park T.; Chen H.; Kevala K.; Lee J.W.; Kim H.Y. «N-Docosahexaenoylethanolamine ameliorates LPS-induced neuroinflammation via cAMP/PKA-dependent signaling). J. Neuroinflamm. 2016, 13, 1–5).
Заявляемый способ лечения нейропатической боли с помощью нового природного соединения, полученного из морских организмов позволяет практически полностью устранить нейропатическую боль при приеме препарата в течение 5-ти недель. Таким образом, предлагаемое нами использование N-докозагексаеноиламина в аспекте нейропатической боли является подтвержденным фактом и может быть применено при разработке новых лечебных композиций с повышенной фармакологической активностью.
Изобретение создано с использованием материалов, представленных в статье Tyrtyshnaia A.A., Egorova E.L., Starinets A.A., Ponomarenko A.I., Ermolenko E.V., Manzhulo I.V. N-Docosahexaenoylethanolamine attenuates neuroinflammation and improves hippocampal neurogenesis in rats with sciatic nerve chronic constriction injury // Marine drugs. 2020. Vol. 18(10). P. 516. Опубликована 15.10.2020.
Claims (1)
- Способ лечения нейропатической боли, включающий введение природного компонента, полученного из морских организмов, отличающийся тем, что в качестве природного компонента, полученного из морских организмов, вводят этаноламид докозагексаеновой кислоты подкожно в виде водо-жировой эмульсии в дозе 4 мг/кг в течение 5 недель ежедневно.
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2780139C1 true RU2780139C1 (ru) | 2022-09-19 |
Family
ID=
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2412157C1 (ru) * | 2009-09-09 | 2011-02-20 | Учреждение Российской академии наук Институт биологии моря им. А.В. Жирмунского Дальневосточного отделения Российской академии наук | Способ получения этаноламидов полиненасыщенных жирных кислот |
WO2014108574A1 (en) * | 2013-01-14 | 2014-07-17 | Biocopea Limited | Solid solution compositions and use in severe pain |
RU2701720C1 (ru) * | 2018-04-12 | 2019-10-01 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента - Интеллект" | Комбинации пальмитоилэтаноламида для лечения хронической боли |
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2412157C1 (ru) * | 2009-09-09 | 2011-02-20 | Учреждение Российской академии наук Институт биологии моря им. А.В. Жирмунского Дальневосточного отделения Российской академии наук | Способ получения этаноламидов полиненасыщенных жирных кислот |
WO2014108574A1 (en) * | 2013-01-14 | 2014-07-17 | Biocopea Limited | Solid solution compositions and use in severe pain |
RU2701720C1 (ru) * | 2018-04-12 | 2019-10-01 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента - Интеллект" | Комбинации пальмитоилэтаноламида для лечения хронической боли |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
МАНЖУЛО И. В. и др. Нейропротекторная активность докозагексаеновой кислоты в центральной и периферической нервной системе при повреждении седалищного нерва//Нейрохимия, 2020, T. 37, N 1, С. 800-87 DOI: 10.31857/S102781332001015X. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Cutuli et al. | n-3 polyunsaturated fatty acids supplementation enhances hippocampal functionality in aged mice | |
Schley et al. | (n-3) PUFA Alter Raft Lipid Composition and Decrease Epidermal Growth Factor Receptor Levels in Lipid Rafts of Human Breast Cancer Cells1, 2 | |
Hao et al. | Garcinol upregulates GABAA and GAD65 expression, modulates BDNF-TrkB pathway to reduce seizures in pentylenetetrazole (PTZ)-induced epilepsy | |
Wang et al. | Primary characterization of the immune response in pigs infected with Trichinella spiralis | |
Talamonti et al. | Impairment of DHA synthesis alters the expression of neuronal plasticity markers and the brain inflammatory status in mice | |
Nordgren et al. | Docosahexaenoic acid enhances amphiregulin-mediated bronchial epithelial cell repair processes following organic dust exposure | |
Zamberletti et al. | Lifelong imbalanced LA/ALA intake impairs emotional and cognitive behavior via changes in brain endocannabinoid system | |
Tyrtyshnaia et al. | N-Docosahexaenoylethanolamine attenuates neuroinflammation and improves hippocampal neurogenesis in rats with sciatic nerve chronic constriction injury | |
Aguilera et al. | The protective role of squalene in alcohol damage in the chick embryo retina | |
Kim et al. | N-3 PUFA have antidepressant-like effects via improvement of the HPA-axis and neurotransmission in rats exposed to combined stress | |
Tyrtyshnaia et al. | Adult hippocampal neurogenesis in neuropathic pain and alkyl glycerol ethers treatment | |
Veigas et al. | Fish oil concentrate delays sensitivity to thermal nociception in mice | |
Santos-Soto et al. | Voluntary running in young adult mice reduces anxiety-like behavior and increases the accumulation of bioactive lipids in the cerebral cortex | |
Ulu et al. | A high docosahexaenoic acid diet alters lung inflammation and recovery following repetitive exposure to aqueous organic dust extracts | |
Hassan et al. | The effects of dietary fatty acids on bone, hematopoietic marrow and marrow adipose tissue in a murine model of senile osteoporosis | |
Tian et al. | Micheliolide alleviates ankylosing spondylitis (AS) by suppressing the activation of the NLRP3 inflammasome and maintaining the balance of Th1/Th2 via regulating the NF-κB signaling pathway | |
Gu et al. | Endogenous ω-3 fatty acids in Fat-1 mice attenuated depression-like behaviors, spatial memory impairment and relevant changes induced by olfactory bulbectomy | |
Dawson et al. | Molecular and metabolomic changes in the proximal colon of pigs infected with Trichuris suis | |
Kobayashi et al. | Dietary supplementation with eicosapentaenoic acid inhibits plasma cell differentiation and attenuates lupus autoimmunity | |
Attaluri et al. | Brain-specific increase in leukotriene signaling accompanies chronic neuroinflammation and cognitive impairment in a model of Gulf war illness | |
Wierenga et al. | Single cell analysis of docosahexaenoic acid suppression of sequential LPS-induced proinflammatory and interferon-regulated gene expression in the macrophage | |
RU2780139C1 (ru) | Способ лечения нейропатической боли | |
Sun et al. | Bovine milk fat enriched in conjugated linoleic and vaccenic acids attenuates allergic dermatitis in mice | |
Abohalaka et al. | Endocannabinoid metabolism inhibition ameliorates ovalbumin-induced allergic airway inflammation and hyperreactivity in Guinea pigs | |
Starinets et al. | Anti-inflammatory activity of synaptamide in the peripheral nervous system in a model of sciatic nerve injury |