RU2778686C1 - Agent with antiaggregatory activity and method for production thereof - Google Patents
Agent with antiaggregatory activity and method for production thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2778686C1 RU2778686C1 RU2021124245A RU2021124245A RU2778686C1 RU 2778686 C1 RU2778686 C1 RU 2778686C1 RU 2021124245 A RU2021124245 A RU 2021124245A RU 2021124245 A RU2021124245 A RU 2021124245A RU 2778686 C1 RU2778686 C1 RU 2778686C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- calcium
- aspartate
- agent
- platelet
- activity
- Prior art date
Links
- 230000002744 anti-aggregatory Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract 2
- -1 calcium L-aspartate tetrahydrate Chemical compound 0.000 claims abstract description 5
- 230000001747 exhibiting Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 15
- 210000001772 Blood Platelets Anatomy 0.000 description 8
- 208000010110 Spontaneous Platelet Aggregation Diseases 0.000 description 7
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 6
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 6
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 5
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 229960005261 Aspartic Acid Drugs 0.000 description 4
- 229940034055 Calcium Aspartate Drugs 0.000 description 4
- OPSXJNAGCGVGOG-DKWTVANSSA-L Calcium L-aspartate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)[C@@H](N)CC([O-])=O OPSXJNAGCGVGOG-DKWTVANSSA-L 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N DL-aspartic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 4
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 3
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L Calcium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 3
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 description 2
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N Clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial Effects 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002008 hemorrhagic Effects 0.000 description 2
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- COKMIXFXJJXBQG-NRFANRHFSA-N tirofiban Chemical compound C1=CC(C[C@H](NS(=O)(=O)CCCC)C(O)=O)=CC=C1OCCCCC1CCNCC1 COKMIXFXJJXBQG-NRFANRHFSA-N 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229930003231 vitamins Natural products 0.000 description 2
- YEDNBEGNKOANMB-REOHCLBHSA-N (2R)-2-amino-3-sulfanylpropanamide Chemical compound SC[C@H](N)C(N)=O YEDNBEGNKOANMB-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CZKPOZZJODAYPZ-WSGIOKLISA-N 2-[(3S,6R,12R,20S,23R)-20-carbamoyl-12-[4-(diaminomethylideneamino)butyl]-3-(1H-indol-3-ylmethyl)-2,5,8,11,14,22-hexaoxo-17,18-dithia-1,4,7,10,13,21-hexazabicyclo[21.3.0]hexacosan-6-yl]acetic acid Chemical compound N1C(=O)[C@@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](CCCCN=C(N)N)NC(=O)CCSSC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H]2CCCN2C(=O)[C@@H]1CC1=CNC2=CC=CC=C12 CZKPOZZJODAYPZ-WSGIOKLISA-N 0.000 description 1
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 239000005552 B01AC04 - Clopidogrel Substances 0.000 description 1
- LSVICRMDTZSTDC-UHFFFAOYSA-N CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O.CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O.CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O LSVICRMDTZSTDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003009 Clopidogrel Drugs 0.000 description 1
- 208000004981 Coronary Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 229960004468 Eptifibatide Drugs 0.000 description 1
- 108010012088 Fibrinogen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 108060003339 GPLD1 Proteins 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 229940056984 Integrilin Drugs 0.000 description 1
- 206010061256 Ischaemic stroke Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000010125 Myocardial Infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000004623 Platelet-Rich Plasma Anatomy 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 206010043554 Thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K Trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 240000008529 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 229940029983 VITAMINS Drugs 0.000 description 1
- 210000003462 Veins Anatomy 0.000 description 1
- 229940088594 Vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229940021016 Vitamin IV solution additives Drugs 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 201000010000 agranulocytosis Diseases 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 201000001320 atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking Effects 0.000 description 1
- 125000004106 butoxy group Chemical group [*]OC([H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 201000008739 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000005712 crystallization Effects 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 230000000001 effect on platelet aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 108010016696 monafram Proteins 0.000 description 1
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 1
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 1
- 239000005445 natural product Substances 0.000 description 1
- 229930014626 natural products Natural products 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- DSNBHJFQCNUKMA-SCKDECHMSA-M thromboxane A2(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC\C=C/C[C@@H]1[C@@H](/C=C/[C@@H](O)CCCCC)O[C@@H]2O[C@H]1C2 DSNBHJFQCNUKMA-SCKDECHMSA-M 0.000 description 1
- 229960003425 tirofiban Drugs 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000011778 trisodium citrate Substances 0.000 description 1
- 230000001562 ulcerogenic Effects 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000021307 wheat Nutrition 0.000 description 1
Abstract
Description
Группа изобретений относится к химии и медицине, а именно к фармацевтической химии и фармакологии, и может быть использовано для создания новых лекарственных средств профилактики тромбоза и тромбоэмболических осложнений.SUBSTANCE: group of inventions relates to chemistry and medicine, namely to pharmaceutical chemistry and pharmacology, and can be used to create new drugs for the prevention of thrombosis and thromboembolic complications.
Известно, что в качестве антиагрегационных средств последнего поколения разрешены к клиническому применению препараты L-цистеинамид, N6-(аминоиминометил)-N2-(3-меркапто-1-оксопропил)-L-лизилглицил-L-α-аспартил-L-триптофил-L-пролил-, циклический(1-6)-дисульфид («Интегрилин», Glaxo Operations UK Limited, Великобритания), М-(бутилсульфонил)-4-[4-(пиперидил)бутокси]-L-фенилаланин гидрохлорид моногидрат (Тирофибан, «Аграстат», Correvio, Великобритания), F(ab')2 фрагменты мышиных моноклональных антител FRaMon против рецептора фибриногена тромбоцитов - ГП IIb-IIIa («Монафрам®», ЗАО «Фрамон», Россия) [см. Holmes L.E. A randomized trial assessing the impact of three different glycoprotein IIb/IIIa antagonists on glycoprotein IIb/IIIa platelet receptor inhibition and clinical endpoints in patients with acute coronary syndromes / L.E. Holmes, R. Gupta, S. Rajendran, J. Luu, J.K. French, C.P. Juergens // Cardiovasc. Ther. - 2016, N21. doi: 10.1111/1755-5922.12203.].It is known that L-cysteinamide, N 6 -(aminoiminomethyl)-N 2 -(3-mercapto-1-oxopropyl)-L-lysylglycyl-L-α-aspartyl-L- tryptophyl-L-prolyl-, cyclic(1-6)-disulfide (Integrilin, Glaxo Operations UK Limited, UK), M-(butylsulfonyl)-4-[4-(piperidyl)butoxy]-L-phenylalanine hydrochloride monohydrate (Tirofiban, Agrastat, Correvio, UK), F(ab')2 fragments of mouse monoclonal antibodies FRaMon against platelet fibrinogen receptor - GP IIb-IIIa (Monafram ® , CJSC Framon, Russia) [see. Holmes LE A randomized trial assessing the impact of three different glycoprotein IIb/IIIa antagonists on glycoprotein IIb/IIIa platelet receptor inhibition and clinical endpoints in patients with acute coronary syndromes / LE Holmes, R. Gupta, S. Rajendran, J. Luu, JK French, C. P. Juergens // Cardiovasc. Ther. - 2016, N21. doi: 10.1111/1755-5922.12203].
Несмотря на то что данные соединения по результатам клинических исследований оказываются наиболее эффективными в условиях интервеционной кардиологии, применение их ограничено по причине высокой стоимости, развития аутоиммунных реакций [Patrono, С. Antiplatelet agents for the treatment and prevention of atherothrombosis / C. Patrono, F. Andreotti, H. Arnesen // European Heart Journal. - 2011. - Vol. 32. - P. 2922-2932.].Despite the fact that these compounds, according to the results of clinical studies, are the most effective in interventional cardiology, their use is limited due to the high cost, the development of autoimmune reactions [Patrono, C. Antiplatelet agents for the treatment and prevention of atherothrombosis / C. Patrono, F. Andreotti, H. Arnesen // European Heart Journal. - 2011. - Vol. 32. - P. 2922-2932.].
Наиболее близким аналогом изобретения является клопидогрел (метил-(+)-(S)-альфа-(о-хлорфенил)-6,7-дигидротиено[3.2-с]пиридин-5(4H)-ацетат) из известных антиагрегантов, наиболее близкий по химическому строению. [М.Д. Машковский. Лекарственные средства. Том 1, Москва ООО «Новая Волна», изд. С.Б. Дивов, 2002, с. 468.]. Ингибирует агрегацию тромбоцитов, блокируя связывание аденозиндифосфата (АДФ) с рецепторами тромбоцитов. Применяют для профилактики тромбообразования у больных ишемической болезнью сердца (после инфаркта миокарда), при атеросклерозе мозговых и периферических сосудов.The closest analogue of the invention is clopidogrel (methyl-(+)-(S)-alpha-(o-chlorophenyl)-6,7-dihydrothieno[3.2-c]pyridine-5(4H)-acetate) of the known antiplatelet agents, the closest by chemical structure. [M.D. Mashkovsky. Medicines. Volume 1, Moscow LLC "New Wave", ed. S.B. Divov, 2002, p. 468.]. Inhibits platelet aggregation by blocking the binding of adenosine diphosphate (ADP) to platelet receptors. Applied for the prevention of thrombosis in patients with coronary heart disease (after myocardial infarction), with atherosclerosis of cerebral and peripheral vessels.
Недостатками данного препарата являются возможные геморрагические явления, тромбопения, лейкопения, агранулоцитоз. Нельзя назначать данный препарат одновременно с антикоагулянтами.The disadvantages of this drug are possible hemorrhagic phenomena, thrombopenia, leukopenia, agranulocytosis. You can not prescribe this drug simultaneously with anticoagulants.
Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, проявляющих антиагрегационную активность.The objective of the invention is to expand the arsenal of biologically active substances exhibiting antiaggregatory activity.
Технический результат при использовании изобретения - получение средства с антиагрегационной активностью.The technical result when using the invention is to obtain an agent with antiaggregation activity.
Сущность изобретения: применение L-аспартата кальция тетрагидрата (соединение I) формулы:The essence of the invention: the use of calcium L-aspartate tetrahydrate (compound I) of the formula:
в качестве средства, проявляющего антиагрегационную активность.as a means of exhibiting antiaggregatory activity.
Известен аспартат кальция, являющийся результатом связывания L-аспарагиновой кислоты с кальцием. Данный препарат производства США используется в качестве биологической активной добавки к пище в качестве источника биодоступного кальция [Кальций биодоступный (аспартат) 1000 мг 60 капе [Электронный ресурс] Режим доступа: https://besuto.com.ua/р525287103-kaltsij-biodostupnyj-aspartat.html Дата доступа: 08.02.2021].Known aspartate calcium, which is the result of the binding of L-aspartic acid with calcium. This US-made drug is used as a biologically active food supplement as a source of bioavailable calcium [Bioavailable calcium (aspartate) 1000 mg 60 caps [Electronic resource] Access mode: https://besuto.com.ua/р525287103-kaltsij-biodostupnyj- aspartat.html Date of access: 02/08/2021].
В доступной научно-медицинской и патентной литературе сведений об известности применения L-аспартата кальция в качестве средства, проявляющего антиагрегационную активность, не найдено.In the available scientific, medical and patent literature, information about the popularity of the use of calcium L-aspartate as a means of exhibiting antiaggregatory activity has not been found.
Препаратом сравнения выбрана ацетилсалициловая кислота (2-ацетилоксибензойная кислота), которая длительно и успешно применяется в практической медицине и имеет доказанную эффективность в качестве средства профилактики и лечения тромбоза и тромбоэмболических осложнений [см. 2018 Guidelines for the Early Management of Patients With Acute Ischemic Stroke: A Guideline for Healthcare Professionals From the American Heart Association/American Stroke Association. Stroke.2018; 49:e138].The reference drug was acetylsalicylic acid (2-acetyloxybenzoic acid), which has been successfully used in practical medicine for a long time and has proven efficacy as a means of preventing and treating thrombosis and thromboembolic complications [see. 2018 Guidelines for the Early Management of Patients With Acute Ischemic Stroke: A Guideline for Healthcare Professionals From the American Heart Association/American Stroke Association. Stroke.2018; 49:e138].
Тем не менее, недостатком известного препарата является высокая частота аспиринорезистентности, нежелательные клинические явления в виде ульцерогенного и гемморагических эффектов [Patrono, С. Antiplatelet agents for the treatment and prevention of atherothrombosis / C. Patrono, F. Andreotti, H. Arnesen // European Heart Journal. - 2011. - Vol. 32. - P. 2922-2932.].However, the disadvantage of the known drug is the high incidence of aspirin resistance, adverse clinical events in the form of ulcerogenic and hemorrhagic effects [Patrono, C. Antiplatelet agents for the treatment and prevention of atherothrombosis / C. Patrono, F. Andreotti, H. Arnesen // European heart journal. - 2011. - Vol. 32. - P. 2922-2932.].
Антиагрегационная активность и острая токсичность соединенияAntiaggregatory activity and acute toxicity of the compound
Эксперименты в условиях in vitro выполнены на крови здоровых доноров-мужчин в возрасте 18-24 лет. Общее количество доноров составило 28 человек. Забор крови для исследования соединений в отношении системы гемостаза проводился из кубитальной вены с использованием систем вакуумного забора крови BD Vacutainer® (Becton Dickinson and Company, США). В качестве стабилизатора венозной крови использовался 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении 9:1. Все тесты проводились на обогащенной и обедненной тромбоцитами плазмах. Образцы богатой тромбоцитами плазмы получали центрифугированием цитратной крови при 1000 об/мин в течение 10 минут, бестромбоцитарной плазмы - при 3000 об/мин в течение 20 минут. В работе использовалась центрифуга ОПН-3.02 (ОАО ТНК «ДАСТАН», Киргизия). Исследование влияния на агрегацию тромбоцитов проводили по методу Born (Born G.G.V. Nature (London). - 1962. - V. 194.) на агрегометре «AT-02» (НПФ «Медтех», Россия). Определение антиагрегационной активности соединения I и ацетилсалициловой кислоты проводили в конечной концентрации 10-3 моль/л. В качестве индукторов агрегации использовали аденозиндифосфат (АДФ) в концентрации 20 мкг/мл и коллаген в концентрации 5 мг/мл производства «Технология-Стандарт» (Россия). Проводили оценку максимальной амплитуды агрегации, скорости агрегации, время достижения максимальной амплитуды и дезагрегацию в присутствии изучаемых соединений при агрегации тромбоцитов, индуцированной АДФ. При коллаген-индуцированной агрегации тромбоцитов оценивали латентный период, во время которого происходит активация фосфолипазы С (что приводит к образованию вторичных посредников, вследствие чего развивается секреция тромбоцитарных гранул и синтез тромбоксана А2).Experiments under in vitro conditions were performed on the blood of healthy male donors aged 18-24 years. The total number of donors was 28 people. Blood sampling for the study of compounds in relation to the hemostasis system was carried out from the cubital vein using BD Vacutainer® vacuum blood sampling systems (Becton Dickinson and Company, USA). A 3.8% sodium citrate solution in a ratio of 9:1 was used as a venous blood stabilizer. All tests were performed on platelet-rich and platelet-poor plasma. Samples of platelet-rich plasma were obtained by centrifugation of citrated blood at 1000 rpm for 10 minutes, platelet-free plasma at 3000 rpm for 20 minutes. An OPN-3.02 centrifuge (JSC TNK DASTAN, Kyrgyzstan) was used in the work. The study of the effect on platelet aggregation was carried out according to the Born method (Born GGV Nature (London). - 1962. - V. 194.) on the AT-02 aggregometer (SPF Medtech, Russia). Determination of the antiaggregation activity of compound I and acetylsalicylic acid was carried out at a final concentration of 10 -3 mol/L. Adenosine diphosphate (ADP) at a concentration of 20 μg/ml and collagen at a concentration of 5 mg/ml produced by Technology-Standard (Russia) were used as aggregation inducers. We assessed the maximum amplitude of aggregation, the rate of aggregation, the time to reach the maximum amplitude and disaggregation in the presence of the studied compounds during platelet aggregation induced by ADP. In collagen-induced platelet aggregation, the latent period during which phospholipase C is activated (which leads to the formation of second messengers, resulting in the secretion of platelet granules and the synthesis of thromboxane A 2 ) was assessed.
Определение острой токсичности соединения I и аспирина проведено на 200 белых мышах самцах в возрасте 2 месяцев со средней массой тела 20-21 г. при внутрибрюшинном способе введения. Животные прошли карантин в течение 14 дней в условиях отдельного бокса вивария кафедры биологической химии БГМУ. Температурный режим помещения вивария поддерживался от +18 до +22°С. Освещение вивария совмещенное (естественное и люминесцентное). Еженедельно в помещении вивария проводилась 20 мин. бактерицидная обработка стационарным настенным бактерицидным облучателем. Животные имели круглосуточный свободный доступ к поилкам, получали набор натуральных продуктов (овощи, зерно) и стандартную диету, представленную в виде экструдированного гранулированного корма для содержания лабораторных животных (мышей, крыс, хомяков) соответствующий Декларации о соответствии № РОСС RU. ПР 98, Д 00497 до 07.02.2016 г. и содержащий в своем составе пшеницу, ячмень, шрот соевый, муку рыбную, дрожжи, отруби, а также витамины и минеральные вещества, витаминно-минеральный комплекс, растительный жир, антиоксидант.Determination of the acute toxicity of compound I and aspirin was carried out on 200 male white mice aged 2 months with an average body weight of 20-21 g with the intraperitoneal route of administration. The animals were quarantined for 14 days in a separate vivarium box of the Department of Biological Chemistry, Belarusian State Medical University. The temperature regime of the vivarium room was maintained from +18 to +22°C. Vivarium lighting combined (natural and fluorescent). Every week, 20 minutes were spent in the vivarium. bactericidal treatment with a stationary wall bactericidal irradiator. Animals had round-the-clock free access to drinkers, received a set of natural products (vegetables, grains) and a standard diet presented in the form of extruded granular feed for keeping laboratory animals (mice, rats, hamsters) corresponding to Declaration of Conformity No. ROSS RU. PR 98, D 00497 until 02/07/2016 and containing wheat, barley, soybean meal, fish meal, yeast, bran, as well as vitamins and minerals, vitamin and mineral complex, vegetable fat, antioxidant.
Исследования выполнялись в соответствии правилами лабораторной практики (GLP), со статьей 11 Федерального закона от 12 апреля 2010 г. №61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств» и «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (М., 2012).The studies were carried out in accordance with the rules of laboratory practice (GLP), with Article 11 of the Federal Law of April 12, 2010 No. 61-FZ "On the circulation of medicines" and "Guidelines for the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances" (M., 2012 ).
При проведении исследований на белых беспородных мышах при внутрибрюшинном введении вещества исследовали в дозах 100-500 мг/кг с шагом в 50 мг/кг. Количество вводимого вещества рассчитывали по объему введенного раствора в зависимости от массы тела с учетом максимально допустимого количества жидкости. Контрольная (интактная) группа животных включена в эксперимент для проведения сравнительной оценки состояния и поведения особей в контрольной и опытных группах. Данная группа животных по окончании первых суток наблюдений исключалась из эксперимента. Наблюдение за опытными группами проводилось в течение 14 суток.When conducting studies on white outbred mice with intraperitoneal administration, the substances were studied at doses of 100-500 mg/kg in increments of 50 mg/kg. The amount of the injected substance was calculated from the volume of the injected solution depending on the body weight, taking into account the maximum allowable amount of liquid. The control (intact) group of animals was included in the experiment for a comparative assessment of the state and behavior of individuals in the control and experimental groups. This group of animals was excluded from the experiment at the end of the first day of observations. The experimental groups were observed for 14 days.
Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10.0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05. Величину LD50 вычисляли методом пробит-анализа с использованием программы BioStat 5.9 (Analyst Soft Inc.).The results of the study were processed using the statistical package Statistica 10.0 (StatSoft Inc, USA). The test for the normality of the distribution of actual data was performed using the Shapiro-Wilk test. Analysis of variance was performed using the Kruskal-Wallis test. The critical significance level p for statistical tests was taken equal to 0.05. The LD50 value was calculated by probit analysis using BioStat 5.9 software (Analyst Soft Inc.).
Пример 1. Антиагрегационная активность соединения.Example 1 Anti-aggregation activity of a compound.
Установлено, что введение соединения I в кювету агрегометра приводит к удлинению реакции высвобождения тромбоцитов (lag-периода) на 15,7% (р<0,05), снижению амплитуды агрегации тромбоцитов на 29,4% (р<0,05), скорости агрегации тромбоцитов на 13,6% (р<0,05) и удлинению времени достижения максимальной агрегации на 25,7% (р<0,05) по сравнению с контролем (табл. 1). При этом ацетилсалициловая кислота не влияет на реакцию высвобождения тромбоцитов, уступая соединению I по действию на уровень агрегации тромбоцитов более чем в 2,2 раза (р<0,05), показатели скорости агрегации тромбоцитов на 28,6% (р<0,05) и времени достижения максимума агрегации более чем в 2,4 раза (р<0,05).It was found that the introduction of compound I into the cuvette of the aggregometer leads to a prolongation of the platelet release reaction (lag-period) by 15.7% (p<0.05), a decrease in the amplitude of platelet aggregation by 29.4% (p<0.05), the rate of platelet aggregation by 13.6% (p<0.05) and the lengthening of the time to reach maximum aggregation by 25.7% (p<0.05) compared with the control (Table 1). At the same time, acetylsalicylic acid does not affect the platelet release reaction, yielding to compound I in terms of its effect on the level of platelet aggregation by more than 2.2 times (p<0.05), the rate of platelet aggregation by 28.6% (p<0.05 ) and the time to reach the maximum aggregation by more than 2.4 times (p<0.05).
Пример 2. Изучение острой токсичности при внутрибрюшинном введении мышам.EXAMPLE 2 Study of Acute Toxicity by Intraperitoneal Administration to Mice.
В результате исследования установлено, что соединение I согласно классификации химических веществ по параметрам острой токсичности И.В. Березовской и критерию токсичности при оценке опасности химических соединений по И.В. Саноцкому и И.П. Улановой относится к классу малотоксичных веществ (табл. 2).As a result of the study, it was found that compound I, according to the classification of chemicals according to the parameters of acute toxicity, I.V. Berezovskaya and the criterion of toxicity in assessing the hazard of chemical compounds according to I.V. Sanotsky and I.P. Ulanova belongs to the class of low-toxic substances (Table 2).
Таким образом, соединение I является малотоксичным и эффективнее аспирина ингибирует процессы активации и агрегации тромбоцитов.Thus, compound I is low toxic and more effective than aspirin in inhibiting the activation and aggregation of platelets.
Наиболее близким аналогом способа получения L-аспартата кальция является способ синтеза аспартата кальция тетрагидрата по схеме:The closest analogue of the method for obtaining calcium L-aspartate is the method for the synthesis of calcium aspartate tetrahydrate according to the scheme:
L-Аспартата кальция тетрагидрат, Ca(L-Asp)⋅4H2O. Суспензию L-аспарагиновой кислоты (1,33 г, 10,0 ммоль) в 15 мл воды нагревали до 60°С и небольшими порциями добавляли гидроксид кальция (0,76 г, 10,0 ммоль). Полученную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч, фильтровали в горячем состоянии и давали медленно остыть до комнатной температуры. Кристаллизация наблюдалась в течение примерно 12 часов. Через несколько дней был достигнут выход 1,4 г (75%). Растворимость в воде 0,028 г/л при 22°С. рН насыщенного раствора 10,50. C4H3CaNO8 (243,2). Вычислено: С: 19.75, Н: 5.39, N: 5.76, О: 52.62.Найдено: С: 19,65, Н: 5,28, N: 5,67, О: 53,10 [Schmidbaur, Н., Bach, I., Wilkinson, D.L., & Muller, G. (1989). Metal ion binding by amino acids. Preparation and crystal structures of two calcium L-asparatate hydrates. Chemische Berichte, 122(8), 1439-1444.]. Недостатком прототипа является низкий выход целевого продукта.Calcium L-Aspartate tetrahydrate, Ca(L-Asp)⋅4H 2 O. A suspension of L-aspartic acid (1.33 g, 10.0 mmol) in 15 ml of water was heated to 60°C and calcium hydroxide (0 .76 g, 10.0 mmol). The resulting mixture was refluxed for 3 hours, filtered while hot and allowed to cool slowly to room temperature. Crystallization was observed for about 12 hours. After a few days, a yield of 1.4 g (75%) was achieved. Solubility in water 0.028 g/l at 22°C. The pH of the saturated solution is 10.50. C 4 H 3 CaNO 8 (243.2). Calcd: C: 19.75, H: 5.39, N: 5.76, O: 52.62. Found: C: 19.65, H: 5.28, N: 5.67, O: 53.10 [Schmidbaur, H., Bach , I., Wilkinson, D.L., & Muller, G. (1989). Metal ion binding by amino acids. Preparation and crystal structures of two calcium L-asparatate hydrates. Chemische Berichte, 122(8), 1439-1444]. The disadvantage of the prototype is the low yield of the target product.
Задачей изобретения является расширение арсенала методов синтеза биологически активных веществ, проявляющих антиагрегационную активность.The objective of the invention is to expand the arsenal of methods for the synthesis of biologically active substances that exhibit anti-aggregation activity.
Технический результат при использовании изобретения - повышение выхода целевого соединения.The technical result when using the invention is to increase the yield of the target compound.
Предлагаемый способ получения L-аспартата кальция тетрагидрата формулы:The proposed method for obtaining L-aspartate calcium tetrahydrate formula:
осуществляется следующим образом. Суспензию аспарагиновой кислоты в 20 мл воды смешивают с порошком гидроксида кальция (Са(ОН)2⋅H2O) в мольном соотношении 1:1. Реакционную смесь нагревают при 95°С в течение 40 минут. Гомогенный раствор упаривают и сушат при комнатной температуре до получения целевого продукта.is carried out as follows. A suspension of aspartic acid in 20 ml of water is mixed with calcium hydroxide powder (Ca(OH) 2 ⋅H 2 O) in a molar ratio of 1:1. The reaction mixture is heated at 95°C for 40 minutes. The homogeneous solution is evaporated and dried at room temperature to obtain the desired product.
Пример 3. Синтез аспартата кальция тетрагидрата. К суспензии 6,60 г (0,05 моль) аспарагиновой кислоты в 20 мл воды прибавляют порциями 3,70 г (0,05 моль) гидроксида кальция Са(ОН)2⋅H2O. Реакционную смесь нагревают при 95°С в течение 40 минут. Гомогенный раствор упаривают и сушат при комнатной температуре. Получают 8,75 г (85,0%) аспартата кальция тетрагидрата, C4C13CaNO8. Аспартат кальция тетрагидрат - продукт белого цвета, хорошо растворим в воде, нерастворим в спирте, ацетоне, т.пл. 98-100°С (из водного ацетона). Rf 0,61 (этанол - вода - 1:1).Example 3. Synthesis of calcium aspartate tetrahydrate. To a suspension of 6.60 g (0.05 mol) of aspartic acid in 20 ml of water is added in portions of 3.70 g (0.05 mol) of calcium hydroxide Ca(OH) 2 ⋅H 2 O. The reaction mixture is heated at 95°C in within 40 minutes. The homogeneous solution is evaporated and dried at room temperature. 8.75 g (85.0%) calcium aspartate tetrahydrate, C 4 C 13 CaNO 8 , is obtained. Calcium aspartate tetrahydrate is a white product, readily soluble in water, insoluble in alcohol, acetone, m.p. 98-100°C (from aqueous acetone). R f 0.61 (ethanol - water - 1:1).
Элементный анализ. Найдено, %: С 19,82; Н 5,44; N 5,79. C4H13CaNO8. Вычислено, %: С 19,75; Н 5,39; N 5,76.elemental analysis. Found, %: С 19.82; H, 5.44; N 5.79. C 4 H 13 CaNO 8 . Calculated, %: C 19.75; H 5.39; N 5.76.
Заявляемое соединение представляет собой белое кристаллическое вещество, хорошо растворимое в воде, нерастворимое в спирте, ацетоне.The claimed compound is a white crystalline substance, highly soluble in water, insoluble in alcohol, acetone.
ИК спектр, ν, см-1: 3367 (NH2, вал.), 1688, 1647 (C=О, вал.), 1431, 1416 (СН2, ножн., СН2-СО).IR spectrum, ν, cm -1 : 3367 (NH 2 , val.), 1688, 1647 (C=O, val.), 1431, 1416 (CH 2 , scissors, CH 2 -CO).
Спектр ЯМР 1Н (D2O), δ, м.д.: 2.76 (2Н, м, β-СН2); 3.90 (1H, м, α-СН).1Н NMR spectrum (D 2 O ), δ, ppm: 2.76 (2Н, m, β-CH 2 ); 3.90 (1H, m, α-CH).
Claims (3)
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2022109692A Division RU2787421C1 (en) | 2022-04-11 | Method for producing calcium l-aspartate tetrahydrate |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2778686C1 true RU2778686C1 (en) | 2022-08-23 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2787421C1 (en) * | 2022-04-11 | 2023-01-09 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Башкирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for producing calcium l-aspartate tetrahydrate |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2709017C1 (en) * | 2019-08-27 | 2019-12-13 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский университет) (ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Се | Pharmaceutical composition possessing antiaggregant activity |
| RU2731106C1 (en) * | 2019-10-23 | 2020-08-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Волгоградский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации ФГБОУ ВО ВолгГМУ МЗ РФ | Dipotassium salt of n-(4-hydroxybenzoyl) taurine, having antiaggregant and antithrombotic activity |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2709017C1 (en) * | 2019-08-27 | 2019-12-13 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский университет) (ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Се | Pharmaceutical composition possessing antiaggregant activity |
| RU2731106C1 (en) * | 2019-10-23 | 2020-08-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Волгоградский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации ФГБОУ ВО ВолгГМУ МЗ РФ | Dipotassium salt of n-(4-hydroxybenzoyl) taurine, having antiaggregant and antithrombotic activity |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Patrono C., Andreotti F., Arnesen H., et al., "Antiplatelet agents for the treatment and prevention of atherothrombosis", European Heart Journal, 2011, vol. 32(23), pp.2922-2932. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2787421C1 (en) * | 2022-04-11 | 2023-01-09 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Башкирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for producing calcium l-aspartate tetrahydrate |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Cohen-Kaplan et al. | The ubiquitin-proteasome system and autophagy: Coordinated and independent activities | |
| Cockram et al. | Ubiquitination in the regulation of inflammatory cell death and cancer | |
| Guarda et al. | Regulation of inflammasome activity | |
| Fuortes et al. | Role of the tyrosine kinase pyk2 in the integrin-dependent activation of human neutrophils by TNF | |
| US8853235B2 (en) | Polymorphs and salts of a kinase inhibitor | |
| JP2009203244A (en) | Complicated mixture exhibiting selective inhibition of cyclooxygenase 2 | |
| Belizario et al. | Coupling caspase cleavage and proteasomal degradation of proteins carrying PEST motif | |
| AU2010337738B2 (en) | Composition for improving brain function and method for improving brain function | |
| EP2817322A2 (en) | New homo- and heterodimeric smac mimetic compounds as apoptosis inducers | |
| Cakir-Kiefer et al. | In vitro digestibility of α-casozepine, a benzodiazepine-like peptide from bovine casein, and biological activity of its main proteolytic fragment | |
| US10829453B2 (en) | Antagonists of the kappa opioid receptor | |
| RU2778686C1 (en) | Agent with antiaggregatory activity and method for production thereof | |
| CA2490282A1 (en) | Use of casein peptides for treating hypertension | |
| Martin et al. | Epinephrine restores platelet functions inhibited by ticagrelor: A mechanistic approach | |
| Chua et al. | Co-chaperones of Hsp90 in Plasmodium falciparum and their concerted roles in cellular regulation | |
| JP6809848B2 (en) | Composition for chymase inhibition | |
| Jayanti et al. | Egg white albumin form complex with aspirin and caffeine and its role as free radical scavenger | |
| RU2770405C1 (en) | Triazole derivatives exhibiting antiaggregatory activity | |
| Kyriakidis et al. | Evaluation of antiplatelet activity of phenolic compounds by flow cytometry | |
| JP2007314469A (en) | Ubiquitin ligase inhibitor | |
| Mishchenko et al. | Chemosensitizing activity of histone deacetylases inhibitory cyclic hydroxamic acids for combination chemotherapy of lymphatic leukemia | |
| Miwa et al. | Inhibition of advanced protein glycation by 8-quinolinecarboxylic hydrazide | |
| Gurcay et al. | Comparative biochemical and motor function analysis of alpha lipoic acid and n-acetyl cysteine treatment on rats with experimental spinal cord injury | |
| RU2775079C1 (en) | Adaptogenic humic agent | |
| Khoshimov et al. | Research influence biological active agents in the course of regulation of functional activity of platelets and system of a haemostasis |