RU2777160C2 - Improved method for synthesis of linker-drug vc-seco-duba - Google Patents
Improved method for synthesis of linker-drug vc-seco-duba Download PDFInfo
- Publication number
- RU2777160C2 RU2777160C2 RU2020120838A RU2020120838A RU2777160C2 RU 2777160 C2 RU2777160 C2 RU 2777160C2 RU 2020120838 A RU2020120838 A RU 2020120838A RU 2020120838 A RU2020120838 A RU 2020120838A RU 2777160 C2 RU2777160 C2 RU 2777160C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- formula
- compound
- seco
- duba
- antibody
- Prior art date
Links
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 title abstract description 35
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 70
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 claims abstract description 11
- 108091008116 antibody drug conjugates Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 235000018734 Sambucus australis Nutrition 0.000 claims description 40
- 240000002049 Sambucus australis Species 0.000 claims description 40
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 claims description 35
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 claims description 35
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 claims description 17
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 14
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 claims description 14
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 claims description 14
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N DMA Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 9
- PJUPKRYGDFTMTM-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole;hydrate Chemical compound O.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 PJUPKRYGDFTMTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims description 8
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 108010010691 Trastuzumab Proteins 0.000 claims description 6
- GXYPITRJSPDNLU-UHFFFAOYSA-M (4-nitrophenyl)chloranuidylformate Chemical compound [O-]C(=O)[Cl-]C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 GXYPITRJSPDNLU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 5
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N Diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 description 17
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 17
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- -1 t-butyloxycarbonyl Chemical group 0.000 description 9
- 102000004851 Immunoglobulin G Human genes 0.000 description 8
- 230000001603 reducing Effects 0.000 description 8
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 6
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 6
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N methylene dichloride Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N acetic acid ethyl ester Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 229920002574 CR-39 Polymers 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 4
- NLYNIRQVMRLPIQ-BVCZABNKSA-N Arteether Chemical compound C1C[C@H]2[C@H](C)CC[C@H]3[C@@H](C)[C@@H](OCC)O[C@H]4[C@]32OOC1(C)O4 NLYNIRQVMRLPIQ-BVCZABNKSA-N 0.000 description 3
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 3
- VQNATVDKACXKTF-XELLLNAOSA-N Duocarmycin Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=C2NC(C(=O)N3C4=CC(=O)C5=C([C@@]64C[C@@H]6C3)C=C(N5)C(=O)OC)=CC2=C1 VQNATVDKACXKTF-XELLLNAOSA-N 0.000 description 3
- 102100016662 ERBB2 Human genes 0.000 description 3
- 101700025368 ERBB2 Proteins 0.000 description 3
- 102100012318 F3 Human genes 0.000 description 3
- 101710037934 QRSL1 Proteins 0.000 description 3
- 102100009581 TPBG Human genes 0.000 description 3
- 101700065141 TPBG Proteins 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000005712 crystallization Effects 0.000 description 3
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 3
- 239000004210 ether based solvent Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 102000003735 mesothelin Human genes 0.000 description 3
- 108090000015 mesothelin Proteins 0.000 description 3
- 125000004184 methoxymethyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC([H])([H])* 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- RZZQCIBGHFVPJC-UHFFFAOYSA-N tert-butyl N-[2-[2-(2-hydroxyethoxy)ethylamino]ethyl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N(C)CCNCCOCCO RZZQCIBGHFVPJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 3
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 2
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 2
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 2
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 102100005826 CD19 Human genes 0.000 description 2
- 101700087100 CD19 Proteins 0.000 description 2
- 102100000189 CD22 Human genes 0.000 description 2
- 101700020617 CD22 Proteins 0.000 description 2
- 102100016493 CD33 Human genes 0.000 description 2
- 101700017647 CD33 Proteins 0.000 description 2
- 102100016530 CD37 Human genes 0.000 description 2
- 101700044364 CD37 Proteins 0.000 description 2
- 102100003279 CD38 Human genes 0.000 description 2
- 101700044948 CD38 Proteins 0.000 description 2
- 101700078950 CD44 Proteins 0.000 description 2
- 102100003735 CD44 Human genes 0.000 description 2
- 102100013078 CD47 Human genes 0.000 description 2
- 101700033237 CD47 Proteins 0.000 description 2
- 102100005830 CD70 Human genes 0.000 description 2
- 101700017377 CD70 Proteins 0.000 description 2
- 102100004099 CD74 Human genes 0.000 description 2
- 101710007476 CD74 Proteins 0.000 description 2
- 101700003144 DLL3 Proteins 0.000 description 2
- 102100013694 DLL3 Human genes 0.000 description 2
- 102100016622 ENPP3 Human genes 0.000 description 2
- 101700054532 ENPP3 Proteins 0.000 description 2
- 102100010912 EPCAM Human genes 0.000 description 2
- 108060002563 EPCAM Proteins 0.000 description 2
- 102000000820 Enterotoxin Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001687 Enterotoxin Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100008382 FCRL5 Human genes 0.000 description 2
- 101700031417 FCRL5 Proteins 0.000 description 2
- 102100020191 FGFR3 Human genes 0.000 description 2
- 101700010580 FLO11 Proteins 0.000 description 2
- 102100011898 FOLR1 Human genes 0.000 description 2
- 101700050183 FOLR1 Proteins 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- 102100014519 GPNMB Human genes 0.000 description 2
- 101700040370 GPNMB Proteins 0.000 description 2
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 102100006037 MUC1 Human genes 0.000 description 2
- 101700052761 MUC1 Proteins 0.000 description 2
- 102100006044 MUC16 Human genes 0.000 description 2
- 101700008449 MUC16 Proteins 0.000 description 2
- 102100007544 NCAM1 Human genes 0.000 description 2
- 101700077124 NCAM1 Proteins 0.000 description 2
- 102100000565 NECTIN4 Human genes 0.000 description 2
- 101710005664 NECTIN4 Proteins 0.000 description 2
- 102100018484 TACSTD2 Human genes 0.000 description 2
- 101710024898 TACSTD2 Proteins 0.000 description 2
- 102100009538 TNFRSF8 Human genes 0.000 description 2
- 101710040533 TNFRSF8 Proteins 0.000 description 2
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 2
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 2
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- LKYXEULZVGJVTG-UHFFFAOYSA-N chloromethane Chemical compound Cl[CH] LKYXEULZVGJVTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001268 conjugating Effects 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 2
- AZVARJHZBXHUSO-UHFFFAOYSA-N duocarmycin a Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=C2NC(C(=O)N3CC4CC44C5=C(C(C=C43)=O)NC(C5=O)(C)C(=O)OC)=CC2=C1 AZVARJHZBXHUSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000017256 epidermal growth factor-activated receptor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040009258 epidermal growth factor-activated receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 2
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 239000003880 polar aprotic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000000412 Annexins Human genes 0.000 description 1
- 108050008874 Annexins Proteins 0.000 description 1
- 101700001335 BAB4 Proteins 0.000 description 1
- 229950002903 Bivatuzumab Drugs 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 102100005862 CCR2 Human genes 0.000 description 1
- 102100012080 CCR5 Human genes 0.000 description 1
- 101700043583 CCR5 Proteins 0.000 description 1
- 102100019289 CD2 Human genes 0.000 description 1
- 101700024689 CD2 Proteins 0.000 description 1
- 101710012053 CD274 Proteins 0.000 description 1
- 102100007290 CD274 Human genes 0.000 description 1
- 101710040446 CD40 Proteins 0.000 description 1
- 102100013137 CD40 Human genes 0.000 description 1
- 102100013153 CLEC12A Human genes 0.000 description 1
- 101710010518 CLEC12A Proteins 0.000 description 1
- 108060001122 CRTISO Proteins 0.000 description 1
- 102100005175 CSF1R Human genes 0.000 description 1
- 102000004626 Colony-Stimulating Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010003384 Colony-Stimulating Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L Copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000007118 DNA alkylation Effects 0.000 description 1
- SBJKKFFYIZUCET-JLAZNSOCSA-N Dehydro-L-ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(=O)C1=O SBJKKFFYIZUCET-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- 102100016627 EPHA2 Human genes 0.000 description 1
- 102000002045 Endothelin Human genes 0.000 description 1
- 108050009340 Endothelin Proteins 0.000 description 1
- ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N Endothelin-1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]2CSSC[C@@H](C(N[C@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2)=O)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@H](N)CSSC1)C1=CNC=N1 ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N 0.000 description 1
- 108010055196 EphA2 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 229950009760 Epratuzumab Drugs 0.000 description 1
- 229950009569 Etaracizumab Drugs 0.000 description 1
- 101700029199 F3 Proteins 0.000 description 1
- 102000027757 FGF receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008101 FGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100008453 FOLH1 Human genes 0.000 description 1
- 101700036477 FOLH1 Proteins 0.000 description 1
- 230000035693 Fab Effects 0.000 description 1
- 229950009929 Farletuzumab Drugs 0.000 description 1
- 102000006815 Folate receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020005243 Folate receptors Proteins 0.000 description 1
- 229950002140 Futuximab Drugs 0.000 description 1
- 229950000918 Glembatumumab Drugs 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N Glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 229960003180 Glutathione Drugs 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010064750 Humanized Monoclonal Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 102000015434 Humanized Monoclonal Antibodies Human genes 0.000 description 1
- 102100014263 IGF1R Human genes 0.000 description 1
- 101700025802 IGF1R Proteins 0.000 description 1
- 102000010790 Interleukin-3 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038452 Interleukin-3 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 229950010939 Iratumumab Drugs 0.000 description 1
- 229950007752 Isatuximab Drugs 0.000 description 1
- 102100013180 KDR Human genes 0.000 description 1
- 102100001008 MET Human genes 0.000 description 1
- 102100000165 MS4A1 Human genes 0.000 description 1
- 101710010909 MS4A1 Proteins 0.000 description 1
- 206010025650 Malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229950003734 Milatuzumab Drugs 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M NaHCO3 Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101700008337 PSMA Proteins 0.000 description 1
- 102100004042 PTK7 Human genes 0.000 description 1
- 101700007351 PTK7 Proteins 0.000 description 1
- 108010089836 Proto-Oncogene Proteins c-met Proteins 0.000 description 1
- 101700044827 RNMT Proteins 0.000 description 1
- 102100013504 RPL17 Human genes 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 229950007463 Rovalpituzumab Drugs 0.000 description 1
- 102100010587 SDC1 Human genes 0.000 description 1
- 102100010114 SLC39A6 Human genes 0.000 description 1
- 101710017109 SLC39A6 Proteins 0.000 description 1
- 102100005287 SLC44A4 Human genes 0.000 description 1
- 108091007272 SLC44A4 Proteins 0.000 description 1
- 108060007796 SPATA2 Proteins 0.000 description 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 102000003705 Syndecan-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000058 Syndecan-1 Proteins 0.000 description 1
- 101700073629 TDGF1 Proteins 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N TFA trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100017373 TM4SF1 Human genes 0.000 description 1
- 101710007366 TM4SF1 Proteins 0.000 description 1
- 101710037528 TRX5 Proteins 0.000 description 1
- 231100000765 Toxin Toxicity 0.000 description 1
- 241000722921 Tulipa gesneriana Species 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000003298 Tumor Necrosis Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010001801 Tumor Necrosis Factor-alpha Proteins 0.000 description 1
- 108010081267 Type 3 Fibroblast Growth Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108091007928 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 101700068327 VTCN1 Proteins 0.000 description 1
- 102100014952 VTCN1 Human genes 0.000 description 1
- 229950000302 Vadastuximab Drugs 0.000 description 1
- 229950006959 Vorsetuzumab Drugs 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 229960003008 blinatumomab Drugs 0.000 description 1
- 108090000514 blinatumomab Proteins 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 102000008395 cell adhesion mediator activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040002558 cell adhesion mediator activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 1
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 108040003506 cyclic ADP-ribose hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 235000020960 dehydroascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011615 dehydroascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 108010007604 epratuzumab Proteins 0.000 description 1
- 108010059577 etaracizumab Proteins 0.000 description 1
- 108010087285 farletuzumab Proteins 0.000 description 1
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- 108091021327 futuximab Proteins 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 108010093819 iratumumab Proteins 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible Effects 0.000 description 1
- 108010011618 isatuximab Proteins 0.000 description 1
- 230000000503 lectinlike Effects 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 108010017913 milatuzumab Proteins 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 1
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108010031818 monoclonal antibody BIWA 4 Proteins 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 210000003867 nerve cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neurons Anatomy 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 108010042024 pertuzumab Proteins 0.000 description 1
- 229960002087 pertuzumab Drugs 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 238000009522 phase III clinical trial Methods 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000003638 reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained Effects 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- 231100000224 toxic side effect Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 108020003112 toxins Proteins 0.000 description 1
- 108091004198 trastuzumab duocarmazine Proteins 0.000 description 1
- 230000001573 trophoblastic Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cells Anatomy 0.000 description 1
Abstract
Description
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯFIELD OF THE INVENTION
Настоящее изобретение относится к улучшенному способу синтеза линкер-лекарственное средство vc-seco-DUBA и его промежуточных соединений, а также к применению указанного улучшенного способа в способе получения конъюгата антитело-лекарственное средство, содержащего vc-seco-DUBA линкер-лекарственное средство.The present invention relates to an improved method for synthesizing the linker-drug of vc-seco-DUBA and its intermediates, and to the use of said improved method in a process for preparing an antibody-drug conjugate containing the vc- seco -DUBA linker-drug.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯBACKGROUND OF THE INVENTION
Дуокармицины являются членами семейства противоопухолевых антибиотиков, которые включают дуокармицин A, дуокармицин SA и CC-1065. Они известны своими мощными противоопухолевыми свойствами, но обычно не используются сами по себе из-за их чрезвычайно высокой токсичности. В настоящее время дуокармицины исследуют в качестве цитотоксических лекарственных средств в конъюгатах антитело-лекарственное средство (ADC).Duocarmycins are members of a family of antitumor antibiotics that include duocarmycin A, duocarmycin SA, and CC-1065. They are known for their powerful anticancer properties but are not commonly used on their own due to their extremely high toxicity. Duocarmycins are currently being investigated as cytotoxic drugs in antibody-drug conjugates (ADCs).
ADC обладают потенциалом для решения большой неудовлетворенной потребности в эффективных новых методах лечения рака путем направления сильнодействующего цитотоксического лекарственного средства конкретно к раковым клеткам, тем самым повышая эффективность, одновременно снижая потенциальные системные токсические побочные эффекты низкомолекулярного лекарственного средства.ADCs have the potential to address the large unmet need for effective new cancer treatments by targeting a potent cytotoxic drug specifically to cancer cells, thereby increasing efficacy while reducing potential systemic toxic side effects of the small molecule drug.
Одним из ключевых аспектов будущего коммерческого успеха ADC является способ синтеза цитотоксического лекарственного средства и соответствующей конструкции линкер-лекарственное средство, в которой линкерный фрагмент присоединяют к цитотоксическому лекарственному средству для облегчения конъюгации с антителом, который пригоден для получения в промышленных масштабах.One of the key aspects of the future commercial success of ADCs is the method for synthesizing a cytotoxic drug and the corresponding linker-drug design, in which a linker fragment is attached to a cytotoxic drug to facilitate conjugation to an antibody that is suitable for production on an industrial scale.
Линкер-лекарственное средство vc-seco-DUBA формулы (I) Linker drug vc- seco -DUBA of formula ( I )
впервые раскрытое в WO2011/133039 как соединение 18b на стр. 210, ll. 21-27, является примером сильнодействующего аналога CC-1065. ADC vc-seco-DUBA с анти-HER2-антителом трастузумаб, т.е. SYD985 или (vic-)трастузумаб дуокармазин, был успешно использован в нескольких доклинических исследованиях (M.M.C. van der Lee et al., Molecular Cancer Therapeutics, 2015, 14(3), 692-703; J. Black et al., Molecular Cancer Therapeutics, 2016, 15 (8), 1900-1909) и стадии I клинических испытаний (ClinicalTrials.gov NCT02277717). В настоящее время лечение SYD985 напрямую сравнивается с лечением по выбору врача на стадии III клинических испытаний у пациентов с HER2-положительным местнораспространенным или метастатическим раком молочной железы (TULIP; ClinicalTrials.gov NCT03262935).first disclosed in WO2011/133039 as compound 18b on page 210, ll. 21-27 is an example of a potent analogue of CC-1065. ADC vc- seco -DUBA with anti-HER2 antibody trastuzumab, i.e. SYD985 or (vic-)trastuzumab duocarmazine has been successfully used in several preclinical studies (MMC van der Lee et al. , Molecular Cancer Therapeutics, 2015, 14(3), 692-703; J. Black et al. , Molecular Cancer Therapeutics , 2016, 15(8), 1900-1909) and Phase I clinical trials (ClinicalTrials.gov NCT02277717). SYD985 treatment is currently being directly compared to physician-choice treatment in Phase III clinical trials in patients with HER2-positive locally advanced or metastatic breast cancer (TULIP; ClinicalTrials.gov NCT03262935).
Синтез линкер-лекарственного средства vc-seco-DUBA описан в WO 2011/133039 как четырехстадийный способ. Получение vc-seco-DUBA в результате этого способа в лабораторном масштабе 50-100 мг давало линкер-лекарственное средство с общим выходом только 21-25%. Последние две стадии, т.е. стадии 3 и 4, этого способа имеют решающее значение для общего выхода vc-seco-DUBA из всего процесса, показывая общий выход всего около 50%. В промышленном масштабе выход этого четырехстадийного способа будет еще ниже.Synthesis of the linker drug vc- seco -DUBA is described in WO 2011/133039 as a four-step process. Preparation of vc- seco -DUBA from this method on a laboratory scale of 50-100 mg gave the linker drug in an overall yield of only 21-25%. The last two stages, i.e. steps 3 and 4 of this process are critical to the overall yield of vc- seco -DUBA from the entire process, showing an overall yield of only about 50%. On an industrial scale, the yield of this four step process will be even lower.
Следовательно, существует потребность в улучшенном способе получения vc-seco-DUBA. В частности, существует потребность в способе, который является эффективным с точки зрения выхода и химической чистоты, экономически эффективным с точки зрения реагентов и условий реакции и который пригоден для производства в промышленном масштабе.Therefore, there is a need for an improved process for preparing vc- seco -DUBA. In particular, there is a need for a process that is efficient in terms of yield and chemical purity, cost effective in terms of reagents and reaction conditions, and that is suitable for industrial scale production.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯBRIEF DESCRIPTION OF THE PRESENT INVENTION
Настоящее изобретение относится к усовершенствованному способу синтеза линкер-лекарственного средства vc-seco-DUBA и его промежуточных соединений с условиями процесса, которые пригодны для получения в промышленном масштабе и которые дают желаемый vc-seco-DUBA продукт с улучшенным выходом.The present invention relates to an improved process for synthesizing the vc- seco -DUBA linker drug and its intermediates under process conditions that are suitable for industrial scale production and that yield the desired vc- seco -DUBA product in improved yield.
В первом аспекте настоящее изобретение относится к соединению формулы (II) In a first aspect, the present invention relates to a compound of formula ( II )
Во втором аспекте изобретение относится к способу, включающему взаимодействие соединения формулы (III) In a second aspect, the invention relates to a process comprising reacting a compound of formula ( III )
с хлористым водородом в 1,4-диоксане с образованием соединения формулы (II).with hydrogen chloride in 1,4-dioxane to form a compound of formula ( II ).
В третьем аспекте изобретение относится к применению соединения формулы (II) в способе получения vc-seco-DUBA формулы (I) In a third aspect, the invention relates to the use of a compound of formula (II) in a process for the preparation of vc- seco -DUBA of formula ( I )
В четвертом аспекте изобретение относится к применению способа получения vc-seco-DUBA в способе получения vc-seco-DUBA-содержащего антитело-лекарственное средство конъюгата.In a fourth aspect, the invention relates to the use of a method for producing vc-seco-DUBA in a method for producing a vc- seco -DUBA-containing antibody-drug conjugate.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE PRESENT INVENTION
Дуокармицины представляют собой класс структурно родственных токсинов, впервые выделенных из бульонной культуры видов Streptomyces. Они являются членами семейства противоопухолевых антибиотиков, которые включают дуокармицин А, дуокармицин SA и CC-1065. Дуокармицины связываются с малой бороздкой ДНК и впоследствии вызывают необратимое алкилирование ДНК. Это нарушает структуру нуклеиновых кислот, что в конечном итоге приводит к гибели опухолевых клеток.Duocarmycins are a class of structurally related toxins first isolated from the broth culture of Streptomyces species. They are members of a family of anticancer antibiotics that include duocarmycin A, duocarmycin SA, and CC-1065. Duocarmycins bind to the minor groove of DNA and subsequently cause irreversible DNA alkylation. This disrupts the structure of nucleic acids, which ultimately leads to the death of tumor cells.
WO2011/133039, в частности, раскрывает сильнодействующее линкер-лекарственное средство vc-seco-DUBA формулы (I) (соединение 18b на стр. 210, ll. 21-27), которое содержит производное дуокармицина CC-1065WO2011/133039 specifically discloses a potent linker drug vc- seco -DUBA of formula (I) (compound 18b on pages 210, ll. 21-27) which contains the duocarmycin derivative CC-1065
Настоящее изобретение относится к усовершенствованному способу получения vc-seco-DUBA с удивительно высоким выходом, который может быть успешно применен в промышленном масштабе.The present invention relates to an improved process for producing vc- seco -DUBA with surprisingly high yields, which can be successfully applied on an industrial scale.
Химический синтез vc-seco-DUBA линкер-лекарственное средство в примере 10 WO 2011/133039 описан как четырехстадийный способThe chemical synthesis of vc- seco -DUBA linker-drug in Example 10 of WO 2011/133039 is described as a four step process
в котором PNP-Cl представляет собой 4-нитрофенилхлорформиат, Et3N представляет собой триэтиламин, Boc представляет собой трет-бутилоксикарбонил, TFA обозначает трифторуксусную кислоту, CHCl3 обозначает хлороформ и DMF обозначает N,N-диметилформамид.in which PNP-Cl is 4-nitrophenyl chloroformate, Et 3 N is triethylamine, Boc is t-butyloxycarbonyl, TFA is trifluoroacetic acid, CHCl 3 is chloroform, and DMF is N,N-dimethylformamide.
В лабораторном масштабе 50-100 мг этот четырехстадийный способ показывает общий выход только 21-25%. В промышленном масштабе этот выход будет значительно ниже.On a laboratory scale of 50-100 mg, this four-step process shows an overall yield of only 21-25%. On an industrial scale, this yield will be much lower.
Низкий общий выход этого четырехстадийного способа может быть в значительной степени обусловлен низким совокупным выходом, составляющим всего около 50% в лабораторном масштабе последних двух стадий, то есть стадий 3 и 4. Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что модифицированная процедура, включающая замену кислотного реагента на стадии 3, дает новое промежуточное соединение, которое может быть выделено путем кристаллизации. Неожиданно было обнаружено, что эта модифицированная процедура стадии 3 и использование нового промежуточного соединения привели к значительному увеличению выхода vc-seco-DUBA.The low overall yield of this four-step process may be largely due to the low combined yield of only about 50% laboratory scale of the last two steps, i.e. steps 3 and 4. stage 3, gives a new intermediate compound, which can be isolated by crystallization. Surprisingly, this modified step 3 procedure and the use of a new intermediate resulted in a significant increase in the yield of vc- seco -DUBA.
Обычно стадия кристаллизации вводится в химический синтез, когда необходимо повысить чистоту продукта. Однако введение такой стадии обычно снижает выход указанного продукта, так как значительное количество продукта остается в маточном растворе. Неожиданно авторы настоящего изобретения обнаружили, что введение стадии кристаллизации в синтез vc-seco-DUBA, как описано выше в настоящем описании, приводящей к новому промежуточному соединению формулы (II)Usually the crystallization step is introduced into chemical synthesis when it is necessary to increase the purity of the product. However, the introduction of such a stage usually reduces the yield of the specified product, since a significant amount of the product remains in the mother liquor. Unexpectedly, the inventors of the present invention found that the introduction of a crystallization step into the synthesis of vc- seco -DUBA as described above in the present description, resulting in a new intermediate compound of formula ( II )
не только приводит к увеличению чистоты (с 94-96% до ≥99,0%), но также показало неожиданное, значительное увеличение выхода vc-seco-DUBA (с 53% до ~79%).not only resulted in an increase in purity (from 94-96% to ≥99.0%), but also showed an unexpected, significant increase in the yield of vc- seco -DUBA (from 53% to ~79%).
Следовательно, в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (II).Therefore, in one embodiment, the present invention relates to a compound of formula ( II ).
Во втором варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения соединения формулы (II), включающему взаимодействие соединения формулы (III)In a second embodiment, the present invention relates to a process for preparing a compound of formula (II) comprising reacting a compound of formula ( III )
с хлористым водородом в 1,4-диоксане с образованием соединения формулы (II). Обычно соединение формулы (III) взаимодействует с 10-20% масс. хлористого водорода в 1,4-диоксане. Предпочтительно соединение формулы (III) подвергают взаимодействию с 12-18% хлористым водородом в 1,4-диоксане, более предпочтительно с 15% хлористым водородом в 1,4-диоксане. Обычно, массовое соотношение соединения формулы (III):HCl в 1,4-диоксане составляет от 1:0,5 до 1:25. Предпочтительно массовое соотношение соединения формулы (III):HCl в 1,4-диоксане составляет от 1:1 до 1:10. Более предпочтительно от 1:5 до 1:10.with hydrogen chloride in 1,4-dioxane to form a compound of formula ( II ). Usually the compound of formula (III) interacts with 10-20% of the mass. hydrogen chloride in 1,4-dioxane. Preferably the compound of formula (III) is reacted with 12-18% hydrogen chloride in 1,4-dioxane, more preferably 15% hydrogen chloride in 1,4-dioxane. Typically, the weight ratio of the compound of formula (III):HCl in 1,4-dioxane is from 1:0.5 to 1:25. Preferably, the weight ratio of the compound of formula (III):HCl in 1,4-dioxane is from 1:1 to 1:10. More preferably 1:5 to 1:10.
В основном, количество хлористого водорода находится в молярном избытке от количества соединения формулы (III). Предпочтительно количество хлористого водорода составляет по меньшей мере 2 молярных эквивалента количества соединения формулы (III), более предпочтительно от 2 до 50 эквивалентов.In general, the amount of hydrogen chloride is in molar excess of the amount of the compound of formula (III). Preferably, the amount of hydrogen chloride is at least 2 molar equivalents of the amount of the compound of formula (III), more preferably 2 to 50 equivalents.
Предпочтительно, указанная реакция происходит в присутствии акцептора, такого как триизопропилсилан в воде и/или метаноле. Указанная вода и/или метанол могут присутствовать в количестве менее 25% масс. от общей массы растворителя, предпочтительно менее 15%, более предпочтительно менее 10%.Preferably, said reaction takes place in the presence of an acceptor such as triisopropylsilane in water and/or methanol. The specified water and/or methanol may be present in an amount of less than 25% of the mass. based on the total weight of the solvent, preferably less than 15%, more preferably less than 10%.
Соединение формулы (III) может быть получено, как описано, например, в R.C. Elgersma et al., Molecular Cancer Therapeutics, 2015, 12(6), 1813-1835, путем взаимодействия соединения формулы (IV) The compound of formula (III) can be obtained as described, for example, in RC Elgersma et al. , Molecular Cancer Therapeutics, 2015, 12(6), 1813-1835, by reacting a compound of formula ( IV )
с 4-нитрофенилхлорформиатом с образованием соединения формулы (V)with 4-nitrophenyl chloroformate to form a compound of formula (V)
с последующим взаимодействием соединения формулы (V) с соединением формулы (VI) followed by reaction of a compound of formula (V) with a compound of formula ( VI )
в присутствие 1-гидроксибензотриазол гидрата с образованием соединения формулы (III).in the presence of 1-hydroxybenzotriazole hydrate to form a compound of formula (III).
В основном, взаимодействие соединения формулы (IV) с 4-нитрофенилхлорформиатом осуществляют при температуре от 0 до 20°С. Предпочтительно температура составляет от 0 до 10°С, более предпочтительно от 0 до 6°С, еще более предпочтительно от 2 до 6°С, наиболее предпочтительно от 3 до 5°С.Basically, the interaction of the compounds of formula (IV) with 4-nitrophenylchloroformate is carried out at a temperature of from 0 to 20°C. Preferably the temperature is 0 to 10°C, more preferably 0 to 6°C, even more preferably 2 to 6°C, most preferably 3 to 5°C.
Подходящими растворителями для использования при получении соединения формулы (V) являются, без ограничения, органические растворители, предпочтительно апротонные растворители, более предпочтительно полярные апротонные растворители. Предпочтительными растворителями являются эфирные растворители, амидные растворители или их смеси. Особенно предпочтительными растворителями являются тетрагидрофуран (THF), N,N-диметилацетамид (DMA) или их смеси. Наиболее предпочтительной является смесь THF и DMA.Suitable solvents for use in the preparation of a compound of formula (V) are, without limitation, organic solvents, preferably aprotic solvents, more preferably polar aprotic solvents. Preferred solvents are ether solvents, amide solvents or mixtures thereof. Particularly preferred solvents are tetrahydrofuran (THF), N,N -dimethylacetamide (DMA) or mixtures thereof. Most preferred is a mixture of THF and DMA.
Подходящими основаниями для использования при получении соединения формулы (V) являются органические основания, например третичные амины. Особенно подходящее основание представляет собой Et3N.Suitable bases for use in the preparation of a compound of formula (V) are organic bases such as tertiary amines. A particularly suitable base is Et 3 N.
Обычно взаимодействие соединения формулы (V) с соединением формулы (VI) осуществляют при температуре от 0 до 20°С. Предпочтительно температура составляет от 0 до 10°С, более предпочтительно от 4 до 10°С.Usually the interaction of the compounds of formula (V) with the compound of formula (VI) is carried out at a temperature of from 0 to 20°C. Preferably the temperature is 0 to 10°C, more preferably 4 to 10°C.
Подходящими растворителями для использования при получении соединения формулы (III) являются, без ограничения, органические растворители, предпочтительно апротонные растворители, полярные растворители или их смеси. Предпочтительные растворители представляют собой эфирные растворители, амидные растворители или их смеси. Особенно предпочтительные растворители представляют собой THF, DMA или их смеси. Наиболее предпочтительной является смесь THF и DMA.Suitable solvents for use in the preparation of the compound of formula (III) are, without limitation, organic solvents, preferably aprotic solvents, polar solvents, or mixtures thereof. Preferred solvents are ether solvents, amide solvents or mixtures thereof. Particularly preferred solvents are THF, DMA or mixtures thereof. Most preferred is a mixture of THF and DMA.
Соединение формулы (IV) может быть получено любым подходящим способом, известным в предшествующем уровне техники, например способом, описанным в Примере 6а WO2015/185142, или аналогично ему.The compound of formula (IV) can be obtained by any suitable method known in the prior art, for example, the method described in Example 6a WO2015/185142, or similar.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (II) для получения vc-seco-DUBA.In another embodiment, the present invention relates to the use of a compound of formula (II) for the preparation of vc- seco -DUBA.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения vc-seco-DUBA, в котором соединение формулы (II) взаимодействует с соединением формулы (VII)In yet another embodiment, the present invention relates to a process for preparing vc- seco -DUBA wherein a compound of formula (II) is reacted with a compound of formula ( VII )
Неожиданно выход vc-seco-DUBA еще больше увеличился, когда соединение формулы (II) подвергли взаимодействию с соединением формулы (VII) с использованием N,N-диизопропиламина (DIPEA) в качестве основания вместо триэтиламина (Et3N), который использовали в Примере 10 WO 2011/133039. Обычно, молярное соотношение соединения формулы (II):DIPEA находится в диапазоне от 1:1 до 1:15. Предпочтительно, соотношение находится в диапазоне от 1:1 до 1:10, более предпочтительно от 1:2 до 1:7, еще более предпочтительно от 1:3 до 1:5, наиболее предпочтительно соотношение составляет приблизительно 1:4.Surprisingly, the yield of vc- seco -DUBA was further increased when a compound of formula (II) was reacted with a compound of formula (VII) using N,N -diisopropylamine (DIPEA) as base instead of triethylamine (Et 3 N) used in Example 10 WO 2011/133039. Typically, the molar ratio of the compound of formula (II):DIPEA is in the range from 1:1 to 1:15. Preferably, the ratio is in the range of 1:1 to 1:10, more preferably 1:2 to 1:7, even more preferably 1:3 to 1:5, most preferably the ratio is about 1:4.
Как правило, реакцию соединения формулы (II) с соединением формулы (VII) проводят при температуре от 0 до 20°С. Предпочтительно температура составляет от 0 до 10°С, более предпочтительно от 0 до 5°C.As a rule, the reaction of the compounds of formula (II) with the compound of formula (VII) is carried out at a temperature of from 0 to 20°C. Preferably the temperature is 0 to 10°C, more preferably 0 to 5°C.
Подходящими растворителями для использования при взамодействии формулы (II) с соединением формулы (VII) с получением vc-seco-DUBA являются, без ограничения, органические растворители, предпочтительно апротонные растворители, более предпочтительно полярные апротонные растворители. Предпочтительные растворители представляют собой эфирные растворители, амидные растворители или их смеси. Особенно предпочтительными растворителями являются THF, DMA, N,N-диметилформамид (DMF) или их смеси. Наиболее предпочтительным является DMA.Suitable solvents for use in reacting formula (II) with a compound of formula (VII) to form vc- seco -DUBA are, without limitation, organic solvents, preferably aprotic solvents, more preferably polar aprotic solvents. Preferred solvents are ether solvents, amide solvents or mixtures thereof. Particularly preferred solvents are THF, DMA, N,N -dimethylformamide (DMF) or mixtures thereof. Most preferred is DMA.
В предпочтительном варианте осуществления процесс проводят в присутствии 1-гидроксибензотриазол гидрата. Как правило, молярное соотношение соединения формулы (II):1-гидроксибензотриазол гидрата находится в диапазоне от 1:1 до 1:10. Предпочтительно, соотношение находится в диапазоне от 1:1 до 1:7, более предпочтительно от 1:2 до 1:5, еще более предпочтительно, от 1:2 до 1:3, наиболее предпочтительно, соотношение составляет приблизительно 1:2,5.In a preferred embodiment, the process is carried out in the presence of 1-hydroxybenzotriazole hydrate. Typically, the molar ratio of the compound of formula (II): 1-hydroxybenzotriazole hydrate is in the range from 1:1 to 1:10. Preferably the ratio is in the range of 1:1 to 1:7, more preferably 1:2 to 1:5, even more preferably 1:2 to 1:3, most preferably the ratio is about 1:2.5 .
Настоящее изобретение дополнительно относится к способу получения vc-seco-DUBA ADC формулы (VIII)The present invention further relates to a process for the preparation of vc- seco -DUBA ADC of formula ( VIII )
где соединение vc-seco-DUBA линкер-лекарственное средство получают способом по изобретению, как описано выше в настоящем описании.wherein the vc- seco -DUBA linker-drug compound is prepared by the method of the invention as described herein above.
m представляет собой среднее отношение лекарственное средство-антитело (DAR) от 1 до 8, предпочтительно от 1 до 6, более предпочтительно от 1 до 4.m is a mean drug-antibody ratio (DAR) of 1 to 8, preferably 1 to 6, more preferably 1 to 4.
В контексте настоящего изобретения любое антитело, в частности, любое антитело, обладающее терапевтической активностью, или любое антитело, известное в области ADC, или любой его антигенсвязывающий фрагмент, например фрагмент F(ab')2 или Fab', одноцепочечное (sc) антитело, scFv, однодоменное (sd) антитело, диатело или миниантитело, могут быть использованы для (дикого типа или сайта-специфической) конъюгации vc-seco-DUBA. Антитела могут быть любого изотипа, такие как антитела IgG, IgA или IgM. Предпочтительно антитело представляет собой антитело IgG, более предпочтительно антитело IgG1 или IgG2. Антитела могут быть химерными, гуманизированными или человеческими. Предпочтительно антитела являются гуманизированными. Еще более предпочтительно, антитело представляет собой гуманизированное или человеческое антитело IgG, наиболее предпочтительно, гуманизированное или человеческое моноклональное антитело IgG1 (mAb). Предпочтительно указанное антитело имеет κ (каппа) легкие цепи, т.е. гуманизированное или человеческое антитело IgG1-κ.In the context of the present invention, any antibody, in particular any antibody having therapeutic activity, or any antibody known in the art of ADC, or any antigen-binding fragment thereof, such as a F(ab') 2 or Fab' fragment, a single chain (sc) antibody, scFv, single domain (sd) antibody, diabody or mini-antibody can be used for (wild-type or site-specific) vc- seco -DUBA conjugation. The antibodies can be of any isotype, such as IgG, IgA or IgM antibodies. Preferably the antibody is an IgG antibody, more preferably an IgG 1 or IgG 2 antibody. Antibodies can be chimeric, humanized or human. Preferably the antibodies are humanized. Even more preferably, the antibody is a humanized or human IgG antibody, most preferably a humanized or human IgG 1 monoclonal antibody (mAb). Preferably, said antibody has κ (kappa) light chains, i. e. humanized or human IgG 1 -κ antibody.
В гуманизированных антителах антигенсвязывающие определяющие комплементарность области (CDR) в вариабельных областях тяжелой цепи (HC) и легкой цепи (LC) получают из антител нечеловеческого происхождения, обычно мыши, крысы или кролика. Эти CDR нечеловеческого происхождения могут быть помещены в человеческий каркас (каркасная область (FR) FR1, FR2, FR3 и FR4) вариабельных областей HC и LC. Выбранные аминокислоты в FR человека могут быть заменены на соответствующие исходные аминокислоты нечеловеческого вида, например, для улучшения аффинности связывания при сохранении низкой иммуногенности. Альтернативно, каркасы, не относящиеся к человеку, сохраняются, и выбранные аминокислоты FR нечеловеческого вида могут быть заменены на их соответствующие аминокислоты человека для снижения иммуногенности при сохранении аффинности связывания антитела. Таким образом, гуманизированные вариабельные области объединяются с человеческими константными областями.In humanized antibodies, the antigen binding complementarity determining regions (CDRs) in the heavy chain (HC) and light chain (LC) variable regions are derived from antibodies of non-human origin, typically mouse, rat or rabbit. These CDRs of non-human origin can be placed in the human framework (framework region (FR) FR1, FR2, FR3 and FR4) of the HC and LC variable regions. Selected amino acids in the human FR can be substituted for the corresponding original non-human amino acids, for example, to improve binding affinity while maintaining low immunogenicity. Alternatively, non-human scaffolds are retained and selected non-human FR amino acids can be substituted for their corresponding human amino acids to reduce immunogenicity while maintaining antibody binding affinity. Thus, humanized variable regions are combined with human constant regions.
Эти антитела могут быть получены рекомбинантным, синтетическим или другими подходящими способами, известными в данной области.These antibodies can be produced by recombinant, synthetic, or other suitable methods known in the art.
Как правило, антитело представляет собой моноспецифичное (т.е. специфичное для одного антигена; такой антиген может быть общим для разных видов или иметь сходные аминокислотные последовательности между видами) или биспецифичное (т.е. специфичное для двух разных антигенов вида) антитело, содержащее по меньшей мере одну вариабельную область HC и LC, связывающуюся с мишенью, выбранной из группы, состоящей из аннексина Al, B7H4, CA6, CA9, CA15-3, CA19-9, CA27-29, CA125, CA242 (раковый антиген 242), CCR2, CCR5, CD2, CD19, CD20, CD22, CD30 (фактор некроза опухоли 8), CD33, CD37, CD38 (циклическая АДФ рибозогидролаза), CD40, CD44, CD47 (белок, ассоциированный с интегрином), CD56 (молекула адгезии нервных клеток), CD70, CD74, CD79, CD115 (рецептор колониестимулирующего фактора 1), CD123 (рецептор интерлейкина-3), CD138 (синдекан 1), CD203c (ENPP3), CD303, CD333, CEA, CEACAM, CLCA-1 (лектиноподобная молекула-1 С-типа), CLL-1, c-MET (рецептор фактора роста гепатоцитов), Cripto, DLL3, EGFL, EGFR, EPCAM, EPh (например, EphA2 или EPhB3), ETBR (рецептор эндотелина типа B), FAP, FcRL5 (подобный Fc-рецептору белок 5, CD307), FGFR (например, FGFR3), FOLR1 (рецептор фолиевой кислоты альфа), GCC (гуанилилциклаза C), GPNMB, HER2, HMW-MAA (высокомолекулярный антиген, ассоциированный с меланомой), интегрин α (например, αvβ3 и αvβ5), IGF1R, TM4SF1 (или L6 антиген), антиген Lea-подобный углевод, антиген Lex, антиген Ley (CD174), LIV1, мезотелин (MSLN), MN (CA9), MUC1, MUC16, NaPi2b, Nectin-4, PD-1, PD-L1, PSMA, PTK7, SLC44A4, STEAP-1, 5T4 антиген (или TPBG, трофобластический гликопротеин), TF (тканевой фактор, тромбопластин, CD142), TF-Ag, Tag72, TNFR, TROP2 (опухолеассоциированный трансдуктор кальциевого сигнала 2), VEGFR и VLA.Typically, an antibody is monospecific (i.e., specific for one antigen; such an antigen may be common across species or have similar amino acid sequences between species) or bispecific (i.e., specific for two different antigens of a species) antibody containing at least one HC and LC variable region binding to a target selected from the group consisting of annexin Al, B7H4, CA6, CA9, CA15-3, CA19-9, CA27-29, CA125, CA242 (cancer antigen 242), CCR2, CCR5, CD2, CD19, CD20, CD22, CD30 (tumor necrosis factor 8), CD33, CD37, CD38 (cyclic ADP ribose hydrolase), CD40, CD44, CD47 (integrin associated protein), CD56 (nerve cell adhesion molecule ), CD70, CD74, CD79, CD115 (colony stimulating factor receptor 1), CD123 (interleukin-3 receptor), CD138 (syndecan 1), CD203c (ENPP3), CD303, CD333, CEA, CEACAM, CLCA-1 (lectin-like molecule- 1 C-type), CLL-1, c-MET (hepatocyte growth factor receptor), Cripto, DLL3, EGFL, EGFR, EPCAM, EPh (eg, EphA2 or EPhB3), ETBR (endothelin type B receptor), FAP, FcRL5 (Fc receptor-like protein 5, CD307), FGFR (eg, FGFR3), FOLR1 (folic acid receptor alpha), GCC ( guanylyl cyclase C), GPNMB, HER2, HMW-MAA (melanoma-associated high molecular weight antigen), α integrin (eg, αvβ3 and αvβ5), IGF1R, TM4SF1 (or L6 antigen), Lea-like carbohydrate antigen, Lex antigen, Ley antigen (CD174), LIV1, mesothelin (MSLN), MN (CA9), MUC1, MUC16, NaPi2b, Nectin-4, PD-1, PD-L1, PSMA, PTK7, SLC44A4, STEAP-1, 5T4 antigen (or TPBG, trophoblastic glycoprotein), TF (tissue factor, thromboplastin, CD142), TF-Ag, Tag72, TNFR, TROP2 (tumor-associated calcium signal transducer 2), VEGFR and VLA.
Примеры подходящих антител включают блинатумомаб (CD19), эпратузумаб (CD22), иратумумаб и брентуксимаб (CD30), вадастуксимаб (CD33), тетулумаб (CD37), изатуксимаб (CD38), биватузумаб (CD44), лорвотузумаб (CD56), ворсетузумаб (CD70), милатузумаб (CD74), полатузумаб (CD79), ровалпитузумаб (DLL3), футуксимаб (EGFR), опортузумаб (EPCAM), фарлетузумаб (FOLR1), глембатумумаб (GPNMB), трастузумаб и пертузумаб (HER2), этарацизумаб (интегрин), анетумаб (мезотелин), панкомаб (MUC1), энфортумаб (нектин-4), и H8, A1 и A3 (5T4 антиген).Examples of suitable antibodies include blinatumomab (CD19), epratuzumab (CD22), iratumumab and brentuximab (CD30), vadastuximab (CD33), tetulumab (CD37), isatuximab (CD38), bivatuzumab (CD44), lorvotuzumab (CD56), vorsetuzumab (CD70) , milatuzumab (CD74), polatuzumab (CD79), rovalpituzumab (DLL3), futuximab (EGFR), oportuzumab (EPCAM), farletuzumab (FOLR1), glembatumumab (GPNMB), trastuzumab and pertuzumab (HER2), etaracizumab (integrin), anetumab ( mesothelin), pancomab (MUC1), enfortumab (nectin-4), and H8, A1 and A3 (5T4 antigen).
Конъюгирование vc-seco-DUBA линкер-лекарственного средства с антителом может быть осуществлено, как описано, например, в WO2011/133039, WO2015/177360 и WO2017/137628.Conjugation of the vc- seco -DUBA linker drug to the antibody can be carried out as described, for example, in WO2011/133039, WO2015/177360 and WO2017/137628.
ADC дикого типа получают путем конъюгирования линкер-лекарственного средства с антителом через свободные тиолы боковых цепей цистеинов, полученные путем восстановления межцепочечных дисульфидных связей. Получение включает частичное восстановление подвергнутых воздействию растворителя межцепочечных дисульфидов с последующей модификацией полученных тиолов малеимидсодержащими линкер-лекарственными средствами. Стратегия связывания цистеина дает в результате максимум два лекарственных средства на восстановленный дисульфид. Большинство молекул IgG человека имеют четыре дисульфидные связи, подверженные воздействию растворителя, и поэтому возможен диапазон от нуля до восьми лекарственных средств на антитело. Точное количество лекарственных средств на антитело определяется степенью редукции дисульфида и количеством молярных эквивалентов линкер-лекарственное средство, использованных в последующей реакции конъюгации. Полное восстановление всех четырех дисульфидных связей дает гомогенную конструкцию с восемью лекарственными средствами на антитело, тогда как частичное восстановление обычно приводит к гетерогенной смеси с без, двумя, четырьмя, шестью или восемью лекарственными средствами на антитело.Wild-type ADCs are produced by conjugating a linker drug to an antibody through free cysteine side chain thiols obtained by reduction of interchain disulfide bonds. The preparation involves partial reduction of solvent-exposed interchain disulfides, followed by modification of the resulting thiols with maleimide-containing linker drugs. The cysteine binding strategy results in a maximum of two drugs per reduced disulfide. Most human IgG molecules have four solvent-exposed disulfide bonds and therefore a range of zero to eight drugs per antibody is possible. The exact amount of drugs per antibody is determined by the degree of disulfide reduction and the number of linker-drug molar equivalents used in the subsequent conjugation reaction. Complete reduction of all four disulfide bonds results in a homogeneous eight-drug/antibody construct, while partial reduction typically results in a heterogeneous mixture with no, two, four, six, or eight drugs per antibody.
Сайт-специфические ADC получают путем конъюгирования линкер-лекарственного средства с антителом через боковые цепи сконструированных остатков цистеина в подходящих положениях мутированного антитела. Сконструированные цистеины обычно завершаются другими тиолами, такими как цистеин или глутатион, с образованием дисульфидов. Эти закрытые остатки должны быть освобождены до того, как может произойти прикрепление лекарственного средства. Прикрепление лекарственного средства к сконструированным остаткам либо достигается путем уменьшения как нативных межцепочечных, так и мутантных дисульфидов, затем повторного окисления нативных межцепочечных цистеинов с использованием мягкого окислителя, такого как CuSO4 или дегидроаскорбиновая кислота, с последующим стандартным конъюгированием освобожденного сконструированного цистеина с линкер-лекарственным средством или с использованием мягких восстанавливающих агентов, которые восстанавливают мутантные дисульфиды с более высокой скоростью, чем межцепные дисульфидные связи, с последующим стандартным конъюгированием освобожденного сконструированного цистеина с линкер-лекарственным средством. При оптимальных условиях два лекарственных средства на антитело (т.е. отношение лекарственное средство-антитело, DAR, равно 2) будет прикреплено (если один цистеин встроен в тяжелую цепь или легкую цепь mAb). Site-specific ADCs are generated by conjugating a linker drug to an antibody through the side chains of engineered cysteine residues at appropriate positions in the mutated antibody. The engineered cysteines are usually completed with other thiols such as cysteine or glutathione to form disulfides. These closed residues must be released before drug attachment can occur. Attachment of the drug to engineered residues is either achieved by reducing both native interchain and mutant disulfides, then reoxidizing the native interchain cysteines using a mild oxidizing agent such as CuSO4 or dehydroascorbic acid, followed by standard conjugation of the freed engineered cysteine to the linker drug, or using mild reducing agents that reduce mutant disulfides at a faster rate than interchain disulfide bonds, followed by standard conjugation of the free engineered cysteine to the linker drug. Under optimal conditions, two drugs per antibody (ie, drug-antibody ratio, DAR, equal to 2) will be attached (if one cysteine is inserted into the heavy chain or light chain of the mAb).
В предпочтительном варианте осуществления антитело, используемое в соответствии с настоящим изобретением, представляет собой анти-HER2 антитело, еще более предпочтительно, анти-HER2 антитело, трастузумаб.In a preferred embodiment, the antibody used in accordance with the present invention is an anti-HER2 antibody, even more preferably an anti-HER2 antibody, trastuzumab.
В одном конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения ADC трастузумаб vc-seco-DUBA формулы (IX) In one specific embodiment, the present invention relates to a process for the preparation of trastuzumab vc- seco -DUBA ADC of formula ( IX )
ПримерыExamples
Пример 1 - Получение метилCBI-азаиндол-бензамид-MOM-Boc-этилендиамин-D (4)Example 1 - Preparation of methyl CBI-azaindole-benzamide-MOM-Boc-ethylenediamine-D (4)
МетилCBI-азаиндол-бензамид-MOM (1) (1,0 г, 1,75 ммоль) подвергали взаимодействию с 4-нитрофенилхлорформиатом (PNP-Cl) (0,43 г, 2,12 ммоль) в смеси тетрагидрофурана (THF) (4,5 г) и N,N-диметилацетамида (DMA) (3,0 г) в присутствии триэтиламина (Et3N) (0,55 г, 4,94 ммоль) в течение примерно 1,5 часов при температуре 0°C, давали нагреться до 6°C. Получали суспензию, содержащую метилCBI-азаиндол-бензамид-MOM-PNP (2).Methyl CBI-azaindole-benzamide-MOM (1) (1.0 g, 1.75 mmol) was reacted with 4-nitrophenyl chloroformate (PNP-Cl) (0.43 g, 2.12 mmol) in tetrahydrofuran (THF) mixture ( 4.5 g) and N,N -dimethylacetamide (DMA) (3.0 g) in the presence of triethylamine (Et 3 N) (0.55 g, 4.94 mmol) for about 1.5 hours at 0 ° C, allowed to warm up to 6°C. A suspension containing methyl CBI-azaindole-benzamide-MOM-PNP (2) was obtained.
На второй стадии трет-бутил (2-((2-(2-гидроксиэтокси)этил)амино)этил)(метил)карбамат (3) (0,58 г, 2,19 ммоль) растворяли в DMA (1,7 г) и добавляли 1-гидроксибензотриазол гидрат (HOBt) (0,35 г, 2,28 ммоль). Полученный раствор подвергали взаимодействию с суспензией в течение 1,5 часов при температуре 4°С, давали нагреться до 10°С.In the second step, tert-butyl (2-((2-(2-hydroxyethoxy)ethyl)amino)ethyl)(methyl)carbamate (3) (0.58 g, 2.19 mmol) was dissolved in DMA (1.7 g ) and 1-hydroxybenzotriazole hydrate (HOBt) (0.35 g, 2.28 mmol) was added. The resulting solution was subjected to interaction with the suspension for 1.5 hours at a temperature of 4°C, allowed to warm up to 10°C.
После завершения реакции к реакционной смеси добавляли этилацетат (EtOAc) (8,8 г) и раствор промывали солевым раствором (11,3 г), насыщенным раствором бикарбоната натрия (3,8 г) и снова соляным раствором (3,8 г). Органический слой отделяли и очищали с помощью фильтрования через слой активированного угля. Растворитель выпаривали на ротационном вакуумном испарителе. Полученный метилCBI-азаиндол-бензамид-MOM-Boc-этилендиамин-D (4) растворяли в ацетоне (20 г) и, в конце концов, снова очищали с помощью фильтрования через слой активированного угля.After completion of the reaction, ethyl acetate (EtOAc) (8.8 g) was added to the reaction mixture, and the solution was washed with brine (11.3 g), saturated sodium bicarbonate solution (3.8 g) and again with brine (3.8 g). The organic layer was separated and purified by filtration through a bed of activated carbon. The solvent was evaporated on a rotary vacuum evaporator. The resulting methyl CBI-azaindole-benzamide-MOM-Boc-ethylenediamine-D (4) was dissolved in acetone (20 g) and finally purified again by filtration through a bed of activated carbon.
Сырой продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя его подвижной фазой - DCM:MeOH=97:3-94:6. Объединенные фракции продукта концентрировали и сушили в вакууме с получением метилCBI-азаиндол-бензамид-MOM-Boc-этилендиамин-D (4) (1,27 г, 1,48 ммоль; 84% выход, 93,82% чистота).The crude product was purified by silica gel column chromatography eluting with a mobile phase of DCM:MeOH=97:3-94:6. The combined product fractions were concentrated and dried in vacuo to give methyl CBI-azaindole-benzamide-MOM-Boc-ethylenediamine-D (4) (1.27 g, 1.48 mmol; 84% yield, 93.82% purity).
Пример 2 - Получение vc-seco-DUBAExample 2 - Obtaining vc- seco -DUBA
Получение метилCBI-азаиндол-бензамид-этилендиамин-D гидрохлорида (5)Preparation of methylCBI-azaindole-benzamide-ethylenediamine-D hydrochloride (5)
Метоксиметильную (MOM) и трет-бутилоксикарбонильную (Boc) группы метилCBI-азаиндол-бензамид-MOM-Boc-этилендиамин-D (4) (1,27 г, 1,48 ммоль) удаляли с помощью 15% хлористого водорода (HCl) в 1,4-диоксане (7,5 г) в присутствии акцептора (триизопропилсилан (0,63 г), вода (0,4 г) и метанол (0,3 г)). МетилCBI-азаиндол-бензамид-этилендиамин-D гидрохлорид (5) кристаллизуется из реакционного раствора в виде желтого твердого вещества.Methoxymethyl (MOM) andtert-butyloxycarbonyl (Boc) groups of methyl CBI-azaindole-benzamide-MOM-Boc-ethylenediamine-D (4) (1.27 g, 1.48 mmol) were removed with 15% hydrogen chloride (HCl) in 1,4-dioxane (7, 5 g) in the presence of an acceptor (triisopropylsilane (0.63 g), water (0.4 g) and methanol (0.3 g)). MethylCBI-azaindole-benzamide-ethylenediamine-D hydrochloride (5) crystallizes from the reaction solution as a yellow solid.
Полученное желтое твердое вещество отфильтровывали, промывали ацетоном и сушили на фильтре с использованием азота и вакуума, получая чистый продукт (5) (1,0 г, 1,33 ммоль; 90% выход, ≥90% чистота).The resulting yellow solid was filtered off, washed with acetone and dried on the filter using nitrogen and vacuum to give pure product (5) (1.0 g, 1.33 mmol; 90% yield, ≥90% purity).
Получение vc-seco-DUBAGetting vc-seco-DUBA
МетилCBI-азаиндол-бензамид-этилендиамин-D гидрохлорид (5) (1,0 г, 1,33 ммоль) подвергали взаимодействию в течение 1,5 часов в темноте при температуре 0°C, которой давали нагреться до 5°C с малеимид-OEG2-val-cit-PABA-PNP (6) (0,98 г, 1,29 ммоль) в DMA (17,8 г) в присутствии N,N-диизопропиламина (DIPEA) (0,65 г, 5,10 ммоль) и HOBt (0,47 г, 3,16 ммоль). Реакционную смесь по каплям добавляли в воду (201,1 г) при температуре от 23 до 25°С (50-60 мин) и получали осадок сырого продукта vc-seco-DUBA. Через 30 минут перемешивания, выпавший в осадок сырой продукт фильтровали на фильтре под давлением. Осадок на фильтре тщательно промывали водой и высушивали на фильтре под вакуумом и слабым потоком азота.Methyl CBI-azaindole-benzamide-ethylenediamine-D hydrochloride ( 5 ) (1.0 g, 1.33 mmol) was reacted for 1.5 hours in the dark at 0°C, which was allowed to warm to 5°C with maleimide- OEG 2 -val-cit-PABA-PNP ( 6 ) (0.98 g, 1.29 mmol) in DMA (17.8 g) in the presence of N,N -diisopropylamine (DIPEA) (0.65 g, 5, 10 mmol) and HOBt (0.47 g, 3.16 mmol). The reaction mixture was added dropwise to water (201.1 g) at 23 to 25° C. (50-60 min) to give a precipitate of the crude vc- seco -DUBA product. After 30 minutes of stirring, the precipitated crude product was filtered on a pressure filter. The filter cake was thoroughly washed with water and dried on the filter under vacuum and a gentle flow of nitrogen.
Сырой продукт vc-seco-DUBA сначала подвергали флеш-хроматографии низкого давления (неподвижная фаза - силикагель от 0,040 до 0,063 мм; подвижная фаза - дихлорметан:метанол=90:10). Соответствующие фракции (с чистотой UPLC-IN vc-seco-DUBA ≥90%) собирали в колбу, фильтровали и упаривали. Дальнейшую очистку осуществляли с помощью препаративной хроматографии (неподвижная фаза - силикагель от 0,015 до 0,040 мм; подвижная фаза - дихлорметан:метанол=90:10-85:15). Соответствующие фракции (с чистотой UPLC-IN vc-seco-DUBA ≥90%) собирали в колбу и растворитель меняли на DMA. Концентрирование осуществляли при максимальной температуре 25°C. Концентрированные растворы объединяли, фильтровали через фильтр 0,2 мкм и добавляли в воду для осаждения чистого vc-seco-DUBA в виде мелкодисперсного желтого порошка (выход: 35-45%; чистота: ≥99,0%).The crude vc- seco -DUBA product was first subjected to low pressure flash chromatography (stationary phase silica gel 0.040 to 0.063 mm; mobile phase dichloromethane:methanol=90:10). The appropriate fractions (with a purity of UPLC-IN vc- seco -DUBA ≥90%) were collected in a flask, filtered and evaporated. Further purification was carried out using preparative chromatography (stationary phase - silica gel from 0.015 to 0.040 mm; mobile phase - dichloromethane:methanol=90:10-85:15). The appropriate fractions (with purity UPLC-IN vc- seco -DUBA ≥90%) were collected in a flask and the solvent was changed to DMA. The concentration was carried out at a maximum temperature of 25°C. The concentrated solutions were combined, filtered through a 0.2 μm filter and added to water to precipitate pure vc- seco -DUBA as a fine yellow powder (yield: 35-45%; purity: ≥99.0%).
Продукт отфильтровали, промыли водой и сушили на фильтре с использованием азота и вакуума при температуре максимум 25°С.The product was filtered, washed with water and dried on the filter using nitrogen and vacuum at a maximum temperature of 25°C.
Сравнительный пример - Получение vc-seco-DUBAComparative Example - Obtaining vc- seco -DUBA
Синтез vc-seco-DUBA осуществляли в соответствии со способом, описанным в Примере 10 WO2011/133039.Synthesis of vc- seco -DUBA was carried out according to the method described in Example 10 of WO2011/133039.
Стадия 1Stage 1
МетилCBI-азаиндол-бензамид-MOM-Boc-этилендиамин-D (4) (0,1 ммоль) суспендировали в хлороформе (CHCl3) (6 мл) и охлаждали на льду. Добавляли 2 мл кислоты (трифторуксусная кислота (TFA) или 15% HCl в 1,4-диоксане (7,5 г)) и смесь перемешивали в течение 3 часов. Затем смесь концентрировали в вакууме.Methyl CBI-azaindole-benzamide-MOM-Boc-ethylenediamine-D ( 4 ) (0.1 mmol) was suspended in chloroform (CHCl 3 ) (6 ml) and cooled on ice. 2 ml of acid (trifluoroacetic acid (TFA) or 15% HCl in 1,4-dioxane (7.5 g)) was added and the mixture was stirred for 3 hours. The mixture was then concentrated in vacuo.
Стадия 2Stage 2
Остаток растворяли в N,N-диметилформамиде (DMF) (4 мл), раствор охлаждали на льду и добавляли малеимид-OEG2-val-cit-PABA-PNP (6) (0,13 ммоль) и основание (1 ммоль, Et3N или DIPEA). Смесь перемешивали в течение 2 часов, концентрировали в вакууме и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (SiO2, дихлорметан:метанол, 1:0-8:2).The residue was dissolved in N,N -dimethylformamide (DMF) (4 ml), the solution was cooled on ice and maleimide-OEG 2 -val-cit-PABA-PNP (6) (0.13 mmol) and base (1 mmol, Et 3N or DIPEA). The mixture was stirred for 2 hours, concentrated in vacuo and the residue was purified using column chromatography (SiO 2 , dichloromethane:methanol, 1:0-8:2).
Вышеуказанный способ осуществляли с использованием или HCl в 1,4-диоксане или известной кислоты TFA для удаления групп MOM и Boc метилCBI-азаиндол-бензамид-MOM-Boc-этилендиамин-D (4) на первой стадии и с использованием или DIPEA или известного основания Et3N для облегчения реакции сочетания метилCBI-азаиндол-бензамид-этилендиамин-D гидрохлорида (5) и малеимид-OEG2-val-cit-PABA-PNP (6) на стадии 2, чтобы определить влияние выбора кислоты и основания на эффективность препарата vc-seco-DUBA.The above method was carried out using either HCl in 1,4-dioxane or a known TFA acid to remove the MOM and Boc groups methylCBI-azaindole-benzamide-MOM-Boc-ethylenediamine-D (4) in the first step and using either DIPEA or a known base Et 3 N to facilitate the coupling reaction of methyl CBI-azaindole-benzamide-ethylenediamine-D hydrochloride (5) and maleimide-OEG2-val-cit-PABA-PNP (6) in step 2 to determine the effect of acid and base selection on drug efficacy vc -seco-DUBA.
В таблице ниже показан выход vc-seco-DUBA.The table below shows the output of vc-seco-DUBA.
* Кислота и реагент, используемые в способе, известном из уровня техники (WO2011/133039) * Acid and reagent used in the method known from the prior art (WO2011/133039)
Использование HCl в 1,4-диоксане вместо TFA на стадии 1 привело к увеличению общего выхода vc-seco-DUBA на 25,8%, как определено методом ВЭЖХ. Использование DIPEA вместо Et3N на стадии 2 привело к снижению общего выхода vc-seco-DUBA на 23,6%, как определено ВЭЖХ. Однако использование HCl в 1,4-диоксане на стадии 1 и DIPEA на стадии 2 привело к увеличению общего выхода vc-seco-DUBA на 29,8%, как определено методом ВЭЖХ.The use of HCl in 1,4-dioxane instead of TFA in step 1 increased the overall yield of vc- seco -DUBA by 25.8% as determined by HPLC. The use of DIPEA in place of Et 3 N in step 2 resulted in a 23.6% reduction in overall yield of vc- seco -DUBA as determined by HPLC. However, the use of HCl in 1,4-dioxane in Step 1 and DIPEA in Step 2 increased the overall yield of vc- seco -DUBA by 29.8% as determined by HPLC.
Claims (31)
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP17203457.1 | 2017-11-24 | ||
| EP17203457 | 2017-11-24 | ||
| PCT/EP2018/082199 WO2019101850A1 (en) | 2017-11-24 | 2018-11-22 | Improved process for the synthesis of linker-drug vc-seco-duba |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020120838A RU2020120838A (en) | 2021-12-24 |
| RU2020120838A3 RU2020120838A3 (en) | 2022-03-03 |
| RU2777160C2 true RU2777160C2 (en) | 2022-08-01 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2578719C2 (en) * | 2010-04-21 | 2016-03-27 | Синтарга Б.В. | Novel conjugates of cc-1065 analogues and bifunctional linkers |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2578719C2 (en) * | 2010-04-21 | 2016-03-27 | Синтарга Б.В. | Novel conjugates of cc-1065 analogues and bifunctional linkers |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| R. C. ELGERSMA ET AL, Design, Synthesis, and Evaluation of Linker-Duocarmycin Payloads: Toward Selection of HER2-Targeting Antibody-Drug Conjugate SYD985, MOLECULAR PHARMACEUTICS, 2015, vol. 12, no. 6, p. 1813-1835, doi: 10.1021/mp500781a. W. DOKTER ET AL, Preclinical Profile of the HER2-Targeting ADC SYD983/SYD985: Introduction of a New Duocarmycin-Based Linker-Drug Platform, MOLECULAR CANCER THERAPEUTICS, 2014, vol. 13, no. 11, p. 2618-2629, doi: 10.1158/1535-7163.MCT-14-0040-T. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2022548908A (en) | Camptothecin derivatives and their complexes | |
| JP6606545B2 (en) | Cytotoxic benzodiazepine derivatives | |
| JP7042291B2 (en) | Its application to linkers and ADCs | |
| JP7451677B2 (en) | Antibody-drug conjugates carrying two-component toxins and their applications | |
| JP6828056B2 (en) | Anti-HER2 antibody-drug conjugate and its use | |
| CN107469089A (en) | A kind of PEG connexons and aglucon drug conjugates | |
| JP2024508976A (en) | Antibody-immune agonist conjugates and uses thereof | |
| CA3173118A1 (en) | Neodegrader conjugates | |
| WO2022262789A1 (en) | Antitumor compound and use thereof | |
| JP2024509891A (en) | Anti-HER2 antibody-immune agonist conjugates and uses thereof | |
| CA3198230A1 (en) | Conjugate and use thereof | |
| RU2777160C2 (en) | Improved method for synthesis of linker-drug vc-seco-duba | |
| EP3713939B1 (en) | Improved process for the synthesis of linker-drug vc-seco | |
| CA3208591A1 (en) | Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof | |
| WO2024024935A1 (en) | Novel method for producing antibody-drug conjugate having antineoplastic effect | |
| KR20230004714A (en) | drug antibody conjugate | |
| KR20230127918A (en) | Novel antibody drug conjugate | |
| CN118079013A (en) | Condensed ring compound, conjugate and application thereof | |
| KR20190143246A (en) | Novel linker compound and Site-Specific compounds of Antibody-Drug Conjugate Comprising the Same | |
| CN115192732A (en) | DNA toxic dimer compound and conjugate thereof | |
| CN117883589A (en) | Antibody-novel protein degradation agent conjugates | |
| TW202408590A (en) | Antibody drug conjugate, and preparation method and use thereof | |
| IL307317A (en) | Dna toxic dimer compound and conjugate thereof |