RU2776821C2 - Monoclonal antibody to nav1.7 - Google Patents
Monoclonal antibody to nav1.7 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2776821C2 RU2776821C2 RU2020143562A RU2020143562A RU2776821C2 RU 2776821 C2 RU2776821 C2 RU 2776821C2 RU 2020143562 A RU2020143562 A RU 2020143562A RU 2020143562 A RU2020143562 A RU 2020143562A RU 2776821 C2 RU2776821 C2 RU 2776821C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amino acid
- seq
- acid sequence
- ser
- gly
- Prior art date
Links
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 title abstract 2
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 title abstract 2
- 102100010563 SCN9A Human genes 0.000 abstract 2
- 101700051996 SCN9A Proteins 0.000 abstract 2
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 abstract 2
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 abstract 2
- 229920000023 polynucleotide Polymers 0.000 abstract 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 abstract 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
Images
Abstract
Description
[Область техники][Technical field]
[0001][0001]
Настоящее изобретение относится к новому моноклональному антителу к Nav1.7 или его фрагменту. Более конкретно, настоящее изобретение относится к антителу или его фрагменту, которые специфически связываются с Nav1.7. Более конкретно, настоящее изобретение относится к моноклональному антителу или его фрагменту, которые селективно ингибируют Nav1.7, или к фрагменту антитела, или к фармацевтической композиции, содержащей такое антитело, или к набору для детекции Nav1.7.The present invention relates to a novel anti-Nav1.7 monoclonal antibody or fragment thereof. More specifically, the present invention relates to an antibody or fragment thereof that specifically binds to Nav1.7. More specifically, the present invention relates to a monoclonal antibody or fragment thereof that selectively inhibits Nav1.7, or an antibody fragment, or a pharmaceutical composition containing such an antibody, or a Nav1.7 detection kit.
[Предшествующий уровень техники][prior art]
[0002][0002]
Nav1.7 представляет собой потенциалозависимый натрий-ионный канал, который кодируется геном SCN9A и экспрессируется преимущественно в периферических нервах (непатентная литература: 1). Nav1.7 содержит четыре домена A, B, C и D, каждый из шести трансмембранных белковых спиралей (S1, S2, S3, S4, S5 и S6) и трех внеклеточных гидрофильных петель E1, E2 и E3.Nav1.7 is a voltage-gated sodium ion channel that is encoded by the SCN9A gene and is predominantly expressed in peripheral nerves (non-patent literature: 1). Nav1.7 contains four domains A, B, C and D, each of six transmembrane protein helices (S1, S2, S3, S4, S5 and S6) and three extracellular hydrophilic loops E1, E2 and E3.
[0003][0003]
Известно, что воспалительная боль снижена у мыши, нокаутной по Nav1.7 (непатентная литература: 2). Подтверждено, что ингибитор Nav1.7, который является низкомолекулярным соединением, эффективен при эритромелалгии (непатентная литература: 3), невралгии тройничного нерва (непатентная литература: 4) и т.п.Inflammatory pain is known to be reduced in the Nav1.7 knockout mouse (non-patent literature: 2). The Nav1.7 inhibitor, which is a small molecular weight compound, has been confirmed to be effective in erythromelalgia (non-patent literature: 3), trigeminal neuralgia (non-patent literature: 4), and the like.
[0004][0004]
Моноклональное антитело к Nav1.7, которое эффективно при боли (обезболивающее) и зуда (противозудное), описано в патентной литературе: с 1 по 7, и т.д. Антитело, которое связывается с внеклеточной областью E3 домена C, описано в патентной литературе: с 1 по 3.An anti-Nav1.7 monoclonal antibody that is effective for pain (pain reliever) and pruritus (antipruritus) is described in Patent Literature: 1 to 7, etc. An antibody that binds to the extracellular region of E3 domain C is described in patent literature: 1 to 3.
[Список цитирования][Citation List]
[Патентная литература][Patent Literature]
[0005][0005]
[Патентная литература: 1] WO2011/051350[Patent literature: 1] WO2011/051350
[Патентная литература: 2] US8734798[Patent literature: 2] US8734798
[Патентная литература: 3] US8986954[Patent literature: 3] US8986954
[Патентная литература: 4] US9266953[Patent literature: 4] US9266953
[Патентная литература: 5] WO2014/159595 [Patent literature: 5] WO2014/159595
[Патентная литература: 6] WO2015/032916[Patent literature: 6] WO2015/032916
[Патентная литература: 7] WO2015/035173[Patent literature: 7] WO2015/035173
[Непатентная литература][Non-Patent Literature]
[0006][0006]
[Непатентная литература: 1] PNAS(1997)94:1527-1532[Non-Patent Literature: 1] PNAS(1997)94:1527-1532
[Непатентный документ: 2] PNAS(2004)101:12706-12711[Non-Patent Document: 2] PNAS(2004)101:12706-12711
[Непатентный документ: 3] Pain(2012)153(1):80-85[Non-Patent Document: 3] Pain(2012)153(1):80-85
[Непатентный документ: 4] THE LANCET NEUROLOGY(2017)16(4):291-300[Non-Patent Document: 4] THE LANCET NEUROLOGY(2017)16(4):291-300
[Сущность изобретения][Summary of the Invention]
[Задача, подлежащая решению посредством изобретения][Problem to be solved by invention]
[0007][0007]
Задачей настоящего изобретения является создание нового моноклонального антитела к Nav1.7 или фрагмента антитела, которое можно использовать в качестве терапевтического средства при боли, зуде и т.п.It is an object of the present invention to provide a novel anti-Nav1.7 monoclonal antibody or antibody fragment that can be used as a therapeutic agent for pain, itching, and the like.
[Решение проблемы][Solution]
[0008][0008]
Авторы настоящего изобретения провели тщательные исследования и обнаружили моноклональное антитело, которое специфически связывается с внеклеточной областью E3 домена C Nav1.7 и селективно ингибирует Nav1.7. Мы также обнаружили, что моноклональное антитело по настоящему изобретению имеет анальгезирующее или противозудное ингибирующее действие.The inventors of the present invention have made extensive studies and have found a monoclonal antibody that specifically binds to the extracellular region of E3 of the C domain of Nav1.7 and selectively inhibits Nav1.7. We also found that the monoclonal antibody of the present invention has an analgesic or antipruritic inhibitory effect.
[0009] Конкретно, настоящее изобретение относится к:[0009] Specifically, the present invention relates to:
(1-1)(1-1)
Моноклональному антителу или его фрагменту, который связывается с Nav1.7,A monoclonal antibody or fragment thereof that binds to Nav1.7,
имеющемуhaving
a1) вариабельную область тяжелой цепи,a1) heavy chain variable region,
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 27, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 28 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 29, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, иcontaining a CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 27, a CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 28 and a CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 29, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added , and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 35 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 50, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены;containing a CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 34, a CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 35 and a CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 50, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added ;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 12H4, h12H4, h12H4-2 и h12H4-3 в соответствии с примером или их варианты),(i.e., heavy and light chain variable regions containing CDRs from 12H4, h12H4, h12H4-2 and h12H4-3 according to the example, or variants thereof),
вариабельную область тяжелой цепи, содержащуюheavy chain variable region containing
b1-1) CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 3, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 4 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 5, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены,b1-1) CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and /or added,
b1-2) CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 15, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 16 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 17, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены,b1-2) CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and /or added,
b1-3) CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 15, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 24 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 25, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, илиb1-3) CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and /or added, or
b1-4) CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 21, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 22 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 17, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, иb1-4) CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and /or added, and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 35 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 36, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены;containing a CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 34, a CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 35 and a CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 36, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added ;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 3B2, 3B2/15C8, 15C8, 29G3, или 28B5/15C8 в соответствии с примером или их варианты)(i.e., heavy and light chain variable regions containing CDRs from 3B2, 3B2/15C8, 15C8, 29G3, or 28B5/15C8 according to the example, or variants thereof)
c1) вариабельную область тяжелой цепи,c1) heavy chain variable region,
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 7, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 8 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 9, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, иcontaining a CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 7, a CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 8 and a CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 9, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added , and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 38, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 39 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 40, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены;containing CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 38, CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 39 and CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 40, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added ;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 5E12 в соответствии с примером или их варианты)(i.e., heavy and light chain variable regions containing CDRs from 5E12 according to the example, or variants thereof)
d1) вариабельную область тяжелой цепи,d1) heavy chain variable region,
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 11, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 12 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 13, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, иcontaining a CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 11, a CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 12 and a CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 13, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added , and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 38, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 42 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 40, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены;containing a CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 38, a CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 42 and a CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 40, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added ;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей содержащие CDR из 7B9 в соответствии с примером или их варианты)(i.e., heavy and light chain variable regions containing CDRs from 7B9 according to the example, or variants thereof)
e1) вариабельную область тяжелой цепи e1) heavy chain variable region
содержащую a CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 15, a CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 19 и a CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 17, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, иcontaining a CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 15, a CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 19 and a CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 17, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and /or added, and
вариабельная область легкой цепи light chain variable region
содержащую a CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, a CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 45 и a CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 36, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены;containing a CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, a CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 45 and a CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 36, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and /or added;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 15H6 в соответствии с примером или их варианты),(i.e., heavy and light chain variable regions containing CDRs from 15H6 according to the example, or variants thereof),
вариабельную область тяжелой цепи, содержащуюheavy chain variable region containing
f1-1) CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 21, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 22 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 17, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, илиf1-1) CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and /or added, or
f1-2) CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 3, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 4 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 5, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, иf1-2) CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and /or added, and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 35 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 47, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены;containing a CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 34, a CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 35 and a CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 47, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added ;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 28B5 или 3B2/28B5 в соответствии с примером или их варианты),(i.e., heavy and light chain variable regions containing CDRs from 28B5 or 3B2/28B5 according to the example, or variants thereof),
g1) вариабельную область тяжелой цепи,g1) heavy chain variable region,
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 31, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 32 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 29, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, иcontaining a CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 31, a CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 32 and a CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 29, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added , and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 35 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 50, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены;containing a CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 34, a CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 35 and a CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 50, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added ;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 22D3 в соответствии с примером или их варианты),(i.e., heavy and light chain variable regions containing CDRs from 22D3 according to the example, or variants thereof),
h1) вариабельную область тяжелой цепи,h1) heavy chain variable region,
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 56: G-Y-Y-Xaa4-H (где Xaa4 представляет собой M или I), CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 57: L-I-I-P-Y-Xaa5-G-Xaa6-Xaa7-F-Y-N-Xaa8-K-F-Xaa9-G (где Xaa5 представляет собой S или N, Xaa6 представляет собой D или E, Xaa7 представляет собой T или I, Xaa8 представляет собой Q или P, и Xaa9 представляет собой K или R) и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 58: A-Xaa10-V-S-Y-A-M-D-Y (где Xaa10 представляет собой E или D), где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, иcontaining CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 56: G-Y-Y-Xaa4-H (where Xaa4 is M or I), CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 57: L-I-I-P-Y-Xaa5-G-Xaa6-Xaa7-F-Y-N- Xaa8-K-F-Xaa9-G (where Xaa5 is S or N, Xaa6 is D or E, Xaa7 is T or I, Xaa8 is Q or P, and Xaa9 is K or R) and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 58: A-Xaa10-V-S-Y-A-M-D-Y (wherein Xaa10 is E or D) wherein one or two amino acids may be deleted, substituted, inserted and/or added, and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 54: K-V-S-N-R-Xaa1-S (где Xaa1 представляет собой F или I) и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 55: S-Q-S-Xaa2-H-V-P-Xaa3-T (где Xaa2 представляет собой T или I, и Xaa3 представляет собой F или W), где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены.containing a CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 34, a CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 54: K-V-S-N-R-Xaa1-S (where Xaa1 is F or I) and a CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 55: S-Q-S -Xaa2-H-V-P-Xaa3-T (wherein Xaa2 is T or I and Xaa3 is F or W), where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added.
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR с консенсусными последовательностями множества антител в соответствии с Примером 3, или их варианты).(ie, heavy and light chain variable regions containing CDRs with the consensus sequences of multiple antibodies according to Example 3, or variants thereof).
[0010][0010]
(1-2) Антитело или фрагмент антитела в соответствии с (1-1),(1-2) An antibody or antibody fragment according to (1-1),
имеющееhaving
вариабельную область тяжелой цепи, содержащуюheavy chain variable region containing
CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 27, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены по любому положению, иному чем положение 10;CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added at any position other than
CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 28, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 29, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены по любому положению, иному чем положение 2 и 6, иCDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added, and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29, where one or two amino acids can be deleted, substituted , inserted and/or added at any position other than
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 35, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены, и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 50, где одна или две аминокислоты могут быть удалены, замещены, вставлены и/или добавлены по любому положению, иному чем положение 5. (т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR, в которых критические последовательности в 12H4 являются необходимыми в соответствии с Примером 6, или их варианты)containing a CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 34, where one or two amino acids can be deleted, substituted, inserted and/or added, a CDR2 with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 35, where one or two amino acids can be deleted, substituted , inserted and/or added, and a CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 50, where one or two amino acids may be deleted, substituted, inserted and/or added at any position other than
[0011][0011]
(2) Антитело или фрагмент антитела в соответствии с (1-1) или (1-2),(2) An antibody or antibody fragment according to (1-1) or (1-2),
имеющееhaving
a1) вариабельную область тяжелой цепи,a1) heavy chain variable region,
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 27, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 28 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 29, иcontaining CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 27, CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 28 and CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 29, and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 35 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 50;containing CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 50;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 12H4, h12H4, h12H4-2 и h12H4-3 в соответствии с примером),(i.e., heavy and light chain variable regions containing CDRs from 12H4, h12H4, h12H4-2 and h12H4-3 according to the example),
вариабельную область тяжелой цепи, содержащуюheavy chain variable region containing
b1-1) CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 3, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 4 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 5,b1-1) CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5,
b1-2) CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 15, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 16 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 17,b1-2) CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17,
b1-3) CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 15, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 24 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 25, илиb1-3) CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25, or
b1-4) CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 21, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 22 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 17, иb1-4) CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 35 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 36;containing CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 36;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 3B2, 3B2/15C8, 15C8, 29G3 или 28B5/15C8 в соответствии с примером)(i.e., heavy and light chain variable regions containing CDRs from 3B2, 3B2/15C8, 15C8, 29G3 or 28B5/15C8 according to the example)
c1) вариабельную область тяжелой цепи,c1) heavy chain variable region,
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 7, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 8 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 9, иcontaining CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 7, CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 8 and CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 9, and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 38, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 39 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 40;containing CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 5E12 в соответствии с примером);(ie, heavy and light chain variable regions containing CDRs from 5E12 according to the example);
d1) вариабельную область тяжелой цепи,d1) heavy chain variable region,
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 11, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 12 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 13, иcontaining CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 11, CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 12 and CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 13, and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 38, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 42 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 40;containing CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 42 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 7B9 в соответствии с примером)(i.e., heavy and light chain variable regions containing CDRs from 7B9 according to the example)
e1) вариабельную область тяжелой цепи,e1) heavy chain variable region,
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 15, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 19 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 17, иcontaining CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 15, CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 19 and CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 17, and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 45 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 36;containing CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 45 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 36;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 15H6 в соответствии с примером);(i.e., heavy and light chain variable regions containing CDRs from 15H6 according to the example);
вариабельную область тяжелой цепи, содержащуюheavy chain variable region containing
f1-1) CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 21, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 22 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 17, илиf1-1) CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, or
f1-2) CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 3, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 4 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 5, иf1-2) CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 35 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 47;containing CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 47;
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 28B5 или 3B2/28B5 в соответствии с примером);(ie, heavy and light chain variable regions containing CDRs from 28B5 or 3B2/28B5 according to the example);
g1) вариабельную область тяжелой цепи,g1) heavy chain variable region,
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 31, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 32 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 29, иcontaining CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 31, CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 32 and CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 29, and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 35 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 50; илиcontaining CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35 and CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 50; or
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR из 22D3 в соответствии с примером);(ie, heavy and light chain variable regions containing CDRs from 22D3 according to the example);
h1) вариабельную область тяжелой цепи,h1) heavy chain variable region,
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 56, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 57 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 58, иcontaining CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 56, CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 57 and CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 58, and
вариабельную область легкой цепи,light chain variable region
содержащую CDR1 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 34, CDR2 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 54 и CDR3 с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 55.containing CDR1 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 34, CDR2 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 54 and CDR3 with the amino acid sequence from SEQ ID NO: 55.
(т.е., вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие CDR с консенсусными последовательностями множества антител в соответствии с Примером 3)(i.e., heavy and light chain variable regions containing CDRs with consensus sequences of multiple antibodies according to Example 3)
[0012][0012]
(3) антитело или фрагмент антитела в соответствии с (1-1) или (1-2),(3) an antibody or antibody fragment according to (1-1) or (1-2),
имеющееhaving
a2) вариабельную область тяжелой цепиa2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 52, 59 или 60 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 52, 59 или 60, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 52, 59 or 60 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 52, 59 or 60, and
вариабельную область легкой цепи light chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 53 или 61 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 53 или 61;with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 53 or 61 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 53 or 61;
b2) вариабельную область тяжелой цепиb2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 26 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 26, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 26 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 26, and
вариабельную область легкой цепиlight chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 49 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 49;with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 49 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 49;
c2) вариабельную область тяжелой цепиc2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 23 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 23, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 23 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 23, and
вариабельную область легкой цепиlight chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 48 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 48;with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 48 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 48;
d2) вариабельную область тяжелой цепиd2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 2 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 2, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 2 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 2, and
вариабельную область легкой цепиlight chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 33 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 33;with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 33 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 33;
e2) вариабельную область тяжелой цепиe2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 6 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 6, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 6 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 6, and
вариабельную область легкой цепиlight chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 37 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 37;with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 37 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 37;
f2) вариабельную область тяжелой цепиf2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 10 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 10, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 10 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 10, and
вариабельную область легкой цепиlight chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 41 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 41;with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 41 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 41;
g2) вариабельную область тяжелой цепиg2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 14 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 14, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 14 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 14, and
вариабельную область легкой цепиlight chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 43 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 43;with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 43 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 43;
h2) вариабельную область тяжелой цепиh2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 18 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 18, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 18 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 18, and
вариабельную область легкой цепиlight chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 44 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 44;with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 44 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 44;
i2) вариабельную область тяжелой цепиi2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 20 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 20, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 20 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 20, and
вариабельную область легкой цепиlight chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 46 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 46;with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 46 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 46;
j2) вариабельную область тяжелой цепиj2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 30 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 30, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 30 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 30, and
вариабельную область легкой цепиlight chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 51 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 51;with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 51 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 51;
k2) вариабельную область тяжелой цепиk2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 2 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 2, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 2 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 2, and
вариабельную область легкой цепиlight chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 46 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 46;with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 46 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 46;
l2) вариабельную область тяжелой цепиl2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 2 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 2, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 2 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 2, and
вариабельную область легкой цепиlight chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 43 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 43; илиwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 43 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 43; or
m2) вариабельную область тяжелой цепиm2) heavy chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 20 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 20, иwith an amino acid sequence from SEQ ID NO: 20 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 20, and
вариабельную область легкой цепиlight chain variable region
с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 43 или аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 95% идентичной аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 43.with an amino acid sequence from SEQ ID NO: 43 or an amino acid sequence at least 95% identical to the amino acid sequence from SEQ ID NO: 43.
Конкретные примеры антител перечислены в таблице 1 в Примере.Specific examples of antibodies are listed in Table 1 in Example.
[0013][0013]
(4) Антитело или фрагмент антитела в соответствии с (3), имеющее(4) An antibody or antibody fragment according to (3) having
a2-1) вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 52, иa2-1) a heavy chain variable region with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 52, and
вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 53;a light chain variable region with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 53;
a2-2) вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 59, иa2-2) a heavy chain variable region with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 59, and
вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 53; или a light chain variable region with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 53; or
a2-3) вариабельную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 60, иa2-3) a heavy chain variable region with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 60, and
вариабельную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 61.a light chain variable region with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 61.
(5) Антитело или фрагмент антитела в соответствии с любым из (1)-(4),(5) An antibody or antibody fragment according to any of (1) to (4),
дополнительно имеющееadditionally having
константную область тяжелой цепи с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 62 или 63, иa heavy chain constant region with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 62 or 63, and
константную область легкой цепи с аминокислотной последовательностью из SEQ ID NO: 64.a light chain constant region with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 64.
Конкретные примеры антител в (4) и (5) перечислены в таблице 2 в Примере.Specific examples of the antibodies in (4) and (5) are listed in Table 2 in Example.
[0014][0014]
(6) Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его фрагмент в соответствии с любым из (1-1), (1-2) и (2)-(5).(6) A pharmaceutical composition containing an antibody or fragment thereof according to any of (1-1), (1-2) and (2)-(5).
(7) Фармацевтическая композиция в соответствии с (6) для лечения или предупреждения боли и/или зуда.(7) A pharmaceutical composition according to (6) for treating or preventing pain and/or itching.
(8) Полинуклеотид, кодирующий вариабельную область тяжелой цепи антитела в соответствии с (3) или (4), где полинуклеотид необязательно кодирует константную область тяжелой цепи антитела в соответствии с (5).(8) A polynucleotide encoding an antibody heavy chain variable region according to (3) or (4), wherein the polynucleotide optionally encodes an antibody heavy chain constant region according to (5).
(9) Полинуклеотид, кодирующий вариабельную область тяжелой цепи антитела в соответствии с (3) или (4), где полинуклеотид необязательно кодирует константную область легкой цепи антитела в соответствии с (5).(9) A polynucleotide encoding an antibody heavy chain variable region according to (3) or (4), wherein the polynucleotide optionally encodes an antibody light chain constant region according to (5).
(10) Экспрессирующий вектор, содержащий полинуклеотид в соответствии с (8) или (9).(10) An expression vector containing a polynucleotide according to (8) or (9).
[0015][0015]
(11) Полинуклеотид кодирующий антитело или его фрагмент в соответствии с любым из (1-1), (1-2), и (2)-(5).(11) A polynucleotide encoding an antibody or fragment thereof according to any of (1-1), (1-2), and (2)-(5).
(12) Антитело или его фрагмент в соответствии с любым из (1-1), (1-2), и (2)-(5), где фрагмент представляет собой Fab, Fab', F(ab')2, scFv, dsFv или диатело.(12) An antibody or fragment thereof according to any of (1-1), (1-2), and (2)-(5), wherein the fragment is Fab, Fab', F(ab') 2 , scFv , dsFv or diabody.
(13) Способ профилактики или лечения заболевания, связанного с Nav1.7, включающий введение моноклонального антитела или его фрагмента, в соответствии с любым из (1-1), (1-2), и (2)-(5).(13) A method for preventing or treating a disease associated with Nav1.7, comprising administering a monoclonal antibody or fragment thereof according to any of (1-1), (1-2), and (2)-(5).
(14) Моноклональное антитело или его фрагмент в соответствии с любым из (1-1), (1-2) и (2)-(5) для производства средства для лечения или профилактики заболевания, связанного с Nav1.7.(14) A monoclonal antibody or fragment thereof according to any of (1-1), (1-2) and (2) to (5) for producing an agent for treating or preventing a disease associated with Nav1.7.
(15) Моноклональное антитело или его фрагмент в соответствии с любым из (1-1), (1-2) и (2)-(5) для лечения или профилактики заболевания, связанного с Nav1.7.(15) A monoclonal antibody or fragment thereof according to any of (1-1), (1-2) and (2)-(5) for treating or preventing a disease associated with Nav1.7.
(16) Способ в соответствии с (13), или антитело или его фрагмент в соответствии с (14) или (15), где заболевание, связанное с Nav1.7 представляет собой боль и/или зуд.(16) The method according to (13), or the antibody or fragment thereof according to (14) or (15), wherein the disease associated with Nav1.7 is pain and/or itching.
(17) Набор для детекции Nav1.7, включающий моноклональное антитело или его фрагмент в соответствии с любым из (1-1), (1-2) и (2)-(5).(17) A Nav1.7 detection kit comprising a monoclonal antibody or fragment thereof according to any of (1-1), (1-2) and (2)-(5).
[Эффект изобретения][Invention effect]
[0016][0016]
Поскольку моноклональное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению специфически связывается с Nav1.7, его можно использовать для обнаружения Nav1.7 в биологических образцах. Кроме того, поскольку моноклональное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению обладает свойством селективно ингибировать Nav1.7, фармацевтическая композиция, содержащая его, очень полезна в медицине, особенно для лечения или профилактики заболевания, связанного с Nav1.7.Because the monoclonal antibody or fragment thereof of the present invention specifically binds to Nav1.7, it can be used to detect Nav1.7 in biological samples. In addition, since the monoclonal antibody or fragment thereof of the present invention has the property of selectively inhibiting Nav1.7, a pharmaceutical composition containing it is very useful in medicine, especially for treating or preventing a disease associated with Nav1.7.
[Краткое описание чертежей][Brief Description of Drawings]
[0017][0017]
[Фигура 1] Нумерация по Кабат и результаты выравнивания тяжелой цепи из 15C8 (SEQ ID NO: 14), 15H6 (SEQ ID NO: 18), 28B5 (SEQ ID NO: 20), и 29G3 (SEQ ID NO: 23).[Figure 1] Kabat numbering and heavy chain alignment results from 15C8 (SEQ ID NO: 14), 15H6 (SEQ ID NO: 18), 28B5 (SEQ ID NO: 20), and 29G3 (SEQ ID NO: 23).
[Фигура 2] Нумерация по Кабат и результаты выравнивания легкой цепи из 15C8 (SEQ ID NO: 43), легкой цепи из 15H6 (SEQ ID NO: 44), 28B5 (SEQ ID NO: 46) и 29G3 (SEQ ID NO: 48).[Figure 2] Kabat numbering and light chain alignment results from 15C8 (SEQ ID NO: 43), light chain from 15H6 (SEQ ID NO: 44), 28B5 (SEQ ID NO: 46) and 29G3 (SEQ ID NO: 48 ).
[Фигура 3] Нумерация по Кабат тяжелой цепи h12H4 (SEQ ID NO:52, ФИГ. 3A) и легкой цепи h12H4 (SEQ ID NO:53, ФИГ. 3B).[Figure 3] Kabat numbering of h12H4 heavy chain (SEQ ID NO:52, FIG. 3A) and h12H4 light chain (SEQ ID NO:53, FIG. 3B).
[Фигура 4] Оценка эффективности лекарственного средства путем местного внутриподошвенного введения моделям с лигированием части седалищного нерва.[Figure 4] Evaluation of drug efficacy by local intraplantar injection models with ligation of part of the sciatic nerve.
[Фигура 5] Оценка эффективности лекарственного средства путем внутривенного введения моделям с лигированием части седалищного нерва.[Figure 5] Evaluation of the effectiveness of the drug by intravenous injection models with ligation of the part of the sciatic nerve.
[Вариант осуществления изобретения][Embodiment]
[0018][0018]
Термины в настоящем описании относятся к широко используемым в данной области значениям, если не указано иное.The terms in the present description refer to commonly used in this field values, unless otherwise indicated.
В настоящем изобретении для получения антител можно использовать способы, известные в данной области. Примеры включают способы, описанные в «Immunochemistry in Practice» (Blackwell Scientific Publications).In the present invention, methods known in the art can be used to produce antibodies. Examples include the methods described in "Immunochemistry in Practice" (Blackwell Scientific Publications).
Также можно использовать способы генетической инженерии, известные в данной области. Примеры включают способы, описанные в Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Fourth Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press (2012), Current Protocols Essential Laboratory Techniques, Current Protocols (2012).You can also use the methods of genetic engineering known in this field. Examples include the methods described in Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Fourth Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press (2012), Current Protocols Essential Laboratory Techniques, Current Protocols (2012).
[0019][0019]
Человеческий Nav1.7 представляет собой белок (UniProtKB/Swiss-Prot:Q15858), состоящий из аминокислот, которые кодируются геном SCN9A.Human Nav1.7 is a protein (UniProtKB/Swiss-Prot:Q15858) consisting of amino acids encoded by the SCN9A gene.
[0020][0020]
Моноклональное антитело или его фрагмент в настоящем изобретении представляет собой моноклональное антитело или его фрагмент, имеющее CDR или вариабельные области тяжелой/легкой цепей, представленные в настоящем описании. Антитело или его фрагмент могут происходить из любого класса (например, IgG, IgE, IgM, IgD или IgA) или подкласса иммуноглобулиновых молекул и их можно получить от любого вида, включая мышь, крысу, акулу, кролика, свинью, хомяка, верблюда, ламу, козу и человека. Предпочтительным антителом или его фрагментом является гуманизированное моноклональное антитело или его фрагмент.A monoclonal antibody or fragment thereof in the present invention is a monoclonal antibody or fragment thereof having the CDR or heavy/light chain variable regions provided herein. The antibody or fragment thereof may be from any class (eg, IgG, IgE, IgM, IgD, or IgA) or subclass of immunoglobulin molecules and may be obtained from any species, including mouse, rat, shark, rabbit, pig, hamster, camel, llama , goat and human. A preferred antibody or fragment thereof is a humanized monoclonal antibody or fragment thereof.
[0021][0021]
В изобретении «фрагмент моноклонального антитела» означает часть моноклонального антитела, где фрагмент специфически связывается с Nav1.7 и селективно ингибирует Nav1.7, так же, как и указанное моноклональное антитело.As used herein, "monoclonal antibody fragment" means a portion of a monoclonal antibody where the fragment specifically binds to Nav1.7 and selectively inhibits Nav1.7, as does said monoclonal antibody.
[0022][0022]
Конкретные примеры включают Fab (фрагмент связывания антигена), Fab', F(ab')2, одноцепочечное антитело (одноцепочечный Fv; также в настоящем документе, обозначаемый как scFv), стабилизированное дисульфидом антитело (стабилизированный дисульфидом Fv; далее в в настоящем документе, обозначаемый как dsFv), димеризованные фрагменты V-области (далее в настоящем документе, обозначаемые как диатело) и пептиды, содержащие CDR, которые специфически связываются с человеческим Nav1.7 (Expert Opinion on Therapeutic Patents, Vol. 6, No. 5, pp. 441-456, 1996).Specific examples include Fab (antigen binding fragment), Fab', F(ab') 2 , single chain antibody (single chain Fv; also referred to herein as scFv), disulfide-stabilized antibody (disulfide-stabilized Fv; hereinafter, referred to as dsFv), dimerized fragments of the V region (hereinafter referred to as diatelo) and peptides containing CDRs that specifically bind to human Nav1.7 (Expert Opinion on Therapeutic Patents, Vol. 6, No. 5, pp 441-456, 1996).
[0023][0023]
Fab представляет собой фрагмент антитела, имеющий молекулярную массу приблизительно 50000 с активностью связывания антигена и состоящий приблизительно из половины N-концевой области H-цепи и всей L-цепи, полученный путем разрушения с помощью фермента папаина пептидной части верхней части двух дисульфидных связей (SS-связей), которые сшивают две H-цепи в шарнирной области IgG. Fab, используемый в настоящем изобретении, можно получить путем обработки папаином моноклонального антитела по настоящему изобретению. Альтернативно, Fab можно получить путем вставки ДНК, кодирующей Fab из моноклонального антитела по настоящему изобретению, в экспрессирующий вектор и путем трансдукции вектором клетки для экспрессии.Fab is an antibody fragment having a molecular weight of approximately 50,000 with antigen binding activity and consisting of approximately half of the N-terminal region of the H chain and the entire L chain, obtained by breaking with the papain enzyme the peptide portion of the upper part of two disulfide bonds (SS- ties) that crosslink two H chains in the IgG hinge region. The Fab used in the present invention can be obtained by treating the monoclonal antibody of the present invention with papain. Alternatively, the Fab can be obtained by inserting the DNA encoding the Fab from the monoclonal antibody of the present invention into an expression vector and transducing the vector into a cell for expression.
[0024][0024]
Fab' представляет собой фрагмент антитела, имеющий молекулярную массу приблизительно 50000 с активностью связывания антигена и с расщепленными связями S-S между шарнирами F(ab')2. Fab', используемый в настоящем изобретении, можно получить путем обработки F(ab')2 моноклонального антитела по настоящему изобретению с восстановителем дитиотрейтолом. Fab' также можно получить путем вставки ДНК, кодирующей Fab' из моноклонального антитела по настоящему изобретению, в экспрессирующий вектор для клеток и трансдукции вектором клеток E. coli, дрожжей или животных для экспрессии.Fab' is an antibody fragment having a molecular weight of approximately 50,000 with antigen binding activity and cleaved SS bonds between F(ab') 2 hinges. The Fab' used in the present invention can be obtained by treating the F(ab') 2 of the monoclonal antibody of the present invention with dithiothreitol as a reducing agent. The Fab' can also be obtained by inserting the DNA encoding the Fab' from the monoclonal antibody of the present invention into an expression vector for cells and transducing the vector into E. coli, yeast or animal cells for expression.
[0025][0025]
F(ab')2 представляет собой фрагмент антитела, имеющий молекулярную массу приблизительно 100000 с активностью связывания антигена и образованный связыванием двух областей Fab' в шарнирной части, полученной путем разрушения ферментом пепсином нижней части двух связей S-S в шарнирной области IgG. F(ab')2, используемый в настоящем изобретении, можно получать путем обработки моноклонального антитела по настоящему изобретению пепсином. Альтернативно, F(ab')2, используемый в настоящем изобретении, также можно получать путем вставки ДНК, кодирующей F(ab')2 из моноклонального антитела, в экспрессирующий вектор для клеток и трансдукции вектором клеток E. coli, дрожжей или животных для экспрессии.F(ab') 2 is an antibody fragment having a molecular weight of approximately 100,000 with antigen binding activity and formed by the binding of two Fab' regions in the hinge region obtained by breaking the bottom of the two SS bonds in the IgG hinge region with the enzyme pepsin. F(ab') 2 used in the present invention can be obtained by treating the monoclonal antibody of the present invention with pepsin. Alternatively, the F(ab') 2 used in the present invention can also be obtained by inserting the DNA encoding the F(ab') 2 from a monoclonal antibody into an expression vector for cells and transducing the vector into E. coli, yeast, or animal cells for expression. .
[0026][0026]
ScFv представляет собой полипептид VH-P-VL или VL-P-VH, в котором одна цепь VH и одна цепь VL соединены с использованием подходящего пептидного линкера (далее в настоящем документе, обозначенного P), и это фрагмент антитела, обладающий антигенной активностью. VH и VL, содержащиеся в scFv, используемом в настоящем изобретении, могут быть производными моноклонального антитела по настоящему изобретению. ScFv, используемый в настоящем изобретении, можно получить путем конструирования вектора, экспрессирующего scFV, с использованием кДНК, кодирующей VH и VL из моноклонального антитела по настоящему изобретению, и путем трансдукции вектором клеток E. coli, дрожжей или животных для экспрессии.ScFv is a VH-P-VL or VL-P-VH polypeptide in which one VH chain and one VL chain are connected using an appropriate peptide linker (hereinafter referred to as P) and is an antibody fragment having antigenic activity. The VH and VL contained in the scFv used in the present invention may be derived from the monoclonal antibody of the present invention. The ScFv used in the present invention can be obtained by constructing an scFV expression vector using cDNA encoding VH and VL from the monoclonal antibody of the present invention, and transducing the vector into E. coli, yeast, or animal cells for expression.
[0027][0027]
dsFv получают при связывании полипептидов, в которых каждый аминокислотный остаток в VH и VL замещен остатком цистеина через связь S-S. Аминокислотный остаток, замененный на остаток цистеина, можно выбирать на основе предсказания третичной структуры антитела согласно способу, указанному Reiter et al. (Protein Engineering, 7, 697 (1994)). VH или VL, содержащиеся в dsFv по настоящему изобретению, можно получать из моноклонального антитела по настоящему изобретению. dsFv, используемый в настоящем изобретении, можно получать путем вставки в соответствующий экспрессирующий вектор с использованием кДНК, кодирующей VH и VL из моноклонального антитела по настоящему изобретению, для конструирования экспрессирующего вектора dsFV, и путем трансдукции вектором клеток E. coli, дрожжей или животных для экспрессии.dsFv is produced by linking polypeptides in which each amino acid residue in VH and VL is replaced by a cysteine residue through an S-S bond. The amino acid residue replaced with a cysteine residue can be selected based on the prediction of the tertiary structure of the antibody according to the method described by Reiter et al. (Protein Engineering, 7, 697 (1994)). The VH or VL contained in the dsFv of the present invention can be obtained from the monoclonal antibody of the present invention. dsFv used in the present invention can be obtained by inserting into an appropriate expression vector using cDNA encoding VH and VL from the monoclonal antibody of the present invention to construct a dsFV expression vector, and by transducing the vector into E. coli, yeast, or animal cells to express .
[0028][0028]
Диатело представляет собой фрагмент антитела с scFv, имеющим такую же или другую специфичность связывания антигена, образующим димер, и фрагмент антитела с двухвалентной активностью связывания для одного и того же антигена или с двумя типами активностей связывания антигена, специфичными для разных антигенов. Например, двухвалентное диатело, которое специфически взаимодействует с моноклональным антителом по настоящему изобретению, можно получить путем конструирования ДНК, кодирующей scFV с пептидным линкером длиной от 3 до 10 остатков, с использованием кДНК, кодирующей VH и VL моноклонального антитела по настоящему изобретению, вставки ДНК в клеточный экспрессирующий вектор для клеток и трансдукции вектором клеток E. coli, дрожжей или животных для экспрессии диатела.A diabody is an antibody fragment with scFv having the same or different antigen binding specificity forming a dimer and an antibody fragment with bivalent binding activity for the same antigen or with two types of antigen binding activities specific for different antigens. For example, a divalent diabody that specifically interacts with a monoclonal antibody of the present invention can be obtained by constructing a DNA encoding scFV with a peptide linker of 3 to 10 residues in length, using a cDNA encoding VH and VL of a monoclonal antibody of the present invention, inserting the DNA into a cellular expression vector for cells and transduction with the vector of E. coli, yeast or animal cells to express the diabody.
[0029][0029]
Пептид, содержащий CDR, включает, по меньшей мере, один или несколько участков CDR в VH или VL. Множество CDR могут быть связаны напрямую или через соответствующий пептидный линкер. Пептид, содержащий CDR, в настоящем изобретении можно получать путем конструирования ДНК, кодирующей CDR, с использованием кДНК, кодирующей VH и VL моноклонального антитела по настоящему изобретению, вставки ДНК в экспрессирующий вектор для клеток животных и трансдукции вектором клеток E.coli, дрожжей или животных для экспрессии. Пептид, содержащий CDR, можно также получать способом химического синтеза, таким как способ Fmoc (флуоренилметилоксикарбонильный способ) или способом tBoc (трет-бутилоксикарбонильный способ).The CDR-containing peptide includes at least one or more CDR regions in VH or VL. Many CDRs can be linked directly or via an appropriate peptide linker. The CDR-containing peptide of the present invention can be obtained by constructing a DNA encoding a CDR using a cDNA encoding VH and VL of a monoclonal antibody of the present invention, inserting the DNA into an expression vector for animal cells, and transducing the vector into E. coli, yeast, or animal cells. for expression. The CDR-containing peptide can also be prepared by a chemical synthesis method such as the Fmoc method (fluorenylmethyloxycarbonyl method) or the tBoc method (tert-butyloxycarbonyl method).
[0030][0030]
Моноклональное антитело или его фрагмент по настоящему изобретению характеризуется специфическим связыванием с Nav1.7. Пример способов измерения способности специфически связываться с Nav1.7 показан далее.The monoclonal antibody or fragment thereof of the present invention is characterized by specific binding to Nav1.7. An example of how to measure the ability to specifically bind to Nav1.7 is shown below.
[0031][0031]
Специфические связи могут характеризоваться равновесной константой диссоциации, по меньшей мере, 1×10-6 M или менее (например, меньшая KD представляет более прочные связи). Способы определения того, связываются ли специфически две молекулы, хорошо известны в данной области, и они включают способ конкурентного ELISA, описанный в примере 5 и поверхностного плазмонного резонанса. Однако изолированное антитело, которое специфически связывается с Nav1.7, может проявлять перекрестную реактивность с другими антигенами, такими как молекулы Nav1.7, происходящие от других видов. Однако мультиспецифическое антитело, которое связывается с hNav1.7 и одним или несколькими дополнительными антигенами, или биспецифическое антитело, которое связывается с двумя различными областями hNav1.7 (например, петля EC 3-1 и петля EC 3-3), считается антителом, которое «специфически связывается» с hNav1.7.Specific bonds may have an equilibrium dissociation constant of at least 1×10 -6 M or less (eg, lower KD represents stronger bonds). Methods for determining whether two molecules specifically bind are well known in the art and include the competitive ELISA method described in Example 5 and surface plasmon resonance. However, an isolated antibody that specifically binds to Nav1.7 may be cross-reactive with other antigens, such as Nav1.7 molecules derived from other species. However, a multispecific antibody that binds to hNav1.7 and one or more additional antigens, or a bispecific antibody that binds to two different regions of hNav1.7 (e.g., EC 3-1 loop and EC 3-3 loop), is considered an antibody that "specifically binds" to hNav1.7.
[0032][0032]
Моноклональное антитело по настоящему изобретению или его фрагмент характеризуется ингибированием Nav1.7. Ниже приведен пример способа измерения способности ингибировать Nav1.7.The monoclonal antibody of the present invention, or a fragment thereof, is characterized by inhibition of Nav1.7. The following is an example of a method for measuring the ability to inhibit Nav1.7.
[0033][0033]
ДНК, кодирующую Nav1.7, клонируют в pcDNA3.1 (Invitrogen). Экспрессирующим вектором трансфицируют клетки FreeStyle 293 (Thermo Fisher Scientific) для конструирования клеток со стабильной экспрессией Nav1.7. Специфическое ингибирование Nav1.7 антителом оценивают путем выполнения ручной фиксации потенциала с использованием этой клетки согласно способам, описанным ниже. Кусочки стекла, покрытые поли-L-лизином, располагают в чашках диаметром 35 мм. Клетки со стабильной экспрессией Nav1.7, суспендированные в 10% FBS-содержащей DMEM (SIGMA), высевают на чашки (4×104 клеток/чашку). Через сутки после посева кусочки стекла переносят в мерную камеру для формирования целых клеток. Антитело обрабатывают с фиксацией -70 мВ прямоугольной волной 10 мс при 0,1 Гц. Измерение проводят до и после обработки антителом (действие занимает >2 минут).The DNA encoding Nav1.7 was cloned into pcDNA3.1 (Invitrogen). The expression vector was transfected into FreeStyle 293 cells (Thermo Fisher Scientific) to construct cells with stable expression of Nav1.7. Specific inhibition of Nav1.7 by the antibody is assessed by performing manual voltage clamping using this cell according to the methods described below. Glass pieces coated with poly-L-lysine are placed in cups with a diameter of 35 mm. Cells with stable expression of Nav1.7 suspended in 10% FBS-containing DMEM (SIGMA) are plated on plates (4×10 4 cells/dish). One day after inoculation, the glass pieces are transferred to a measuring chamber for the formation of whole cells. The antibody is treated with fixation -70 mV
[0034][0034]
Моноклональное антитело по настоящему изобретению можно получить, используя CDR или вариабельные области тяжелой и легкой цепей, описанные в настоящем описании, в соответствии с обычными способами в данной области.The monoclonal antibody of the present invention can be obtained using the CDRs or variable regions of the heavy and light chains described in the present description, in accordance with conventional methods in this field.
[0035][0035]
Моноклональное антитело по настоящему изобретению дополнительно включает гуманизированное моноклональное антитело. Гуманизированное антитело имеет сниженную антигенность в организме человека, поэтому оно подходит для введения людям с целью терапии и т.п. Гуманизированное моноклональное антитело получают путем пересадки определяющей комплементарности области (CDR) антитела млекопитающего, отличного от человека, такого как мышь, в каркасную область (FR) антитела человека. Таким образом, область FR получают из антитела человека. Подходящие FR можно выбирать, ссылаясь на литературу Kabat E A. et al. FR можно выбирать таким образом, что CDR может образовывать соответствующий антигенсвязывающий участок. При необходимости, аминокислоты FR вариабельных областей могут быть заменены так, чтобы CDR восстановленного гуманизированного антитела могли образовывать соответствующий антигенсвязывающий участок (Sato, K. et al., Cancer Res. Vol. 53, p. 851, 1993). Доля замещенных аминокислот в FR составляет от 0 до 15% от всей области FR, предпочтительно от 0 до 5% от всей области FR.The monoclonal antibody of the present invention further comprises a humanized monoclonal antibody. The humanized antibody has reduced antigenicity in the human body, so it is suitable for administration to humans for therapy and the like. A humanized monoclonal antibody is produced by grafting a complementarity determining region (CDR) of an antibody from a non-human mammal, such as a mouse, into the framework region (FR) of a human antibody. Thus, the FR region is derived from a human antibody. Suitable FRs can be selected by referring to the literature of Kabat E A. et al. The FR can be chosen such that the CDR can form the appropriate antigen binding site. If necessary, the amino acids of the FR variable regions can be changed so that the CDRs of the reconstituted humanized antibody can form the appropriate antigen binding site (Sato, K. et al., Cancer Res. Vol. 53, p. 851, 1993). The proportion of substituted amino acids in the FR is 0 to 15% of the total FR region, preferably 0 to 5% of the total FR region.
[0036][0036]
Кроме того, в качестве гуманизированного антитела по настоящему изобретению доступна константная область антитела человека. В качестве предпочтительной константной области антитела человека, для тяжелой цепи можно использовать Cγ, например, можно использовать Cγ1, Cγ2, Cγ3 и Cγ4. Для легкой цепи можно использовать Cκ и Cλ. Кроме того, область С антитела человека может быть модифицирована для повышения стабильности антитела или его продуктивности. При гуманизации доступное антитело человека может быть любого изотипа, такого как IgG, IgM, IgA, IgE и IgD. В настоящем изобретении предпочтительным является IgG и наиболее предпочтительным IgG1 или IgG4.In addition, a human antibody constant region is available as a humanized antibody of the present invention. As a preferred human antibody constant region, Cγ can be used for the heavy chain, for example, Cγ1, Cγ2, Cγ3 and Cγ4 can be used. For a light chain, Cκ and Cλ can be used. In addition, the C region of a human antibody can be modified to improve the stability of the antibody or its productivity. When humanized, the available human antibody can be of any isotype, such as IgG, IgM, IgA, IgE, and IgD. In the present invention, IgG is preferred and IgG1 or IgG4 is most preferred.
[0037][0037]
Гуманизированное моноклональное антитело по настоящему изобретению может иметь или не иметь лизин, добавленный к C-концу константных областей тяжелой цепи. Предпочтительно, оно содержит константную область легкой цепи из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 64 и константную область тяжелой цепи из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 62 или 63 и может иметь или не иметь лизин, добавленный к C-концу SEQ ID NO: 62 или 63.The humanized monoclonal antibody of the present invention may or may not have a lysine added to the C-terminus of the heavy chain constant regions. Preferably, it contains a light chain constant region from the amino acid sequence of SEQ ID NO: 64 and a heavy chain constant region from the amino acid sequence of SEQ ID NO: 62 or 63, and may or may not have a lysine added to the C-terminus of SEQ ID NO: 62 or 63.
[0038][0038]
Гуманизированное моноклональное антитело можно получать общепринятыми способами производства (см., например, Пример 4 ниже, публикацию WO95/14041 и публикацию WO96/02576). В частности, последовательность ДНК, кодирующую вариабельную область, разработанную для связывания CDR мышиного антитела с FR антитела человека, синтезируют с помощью способа ПЦР из ряда олигонуклеотидов, приготовленных с частично перекрывающимися концами (см. публикацию WO98/13388). Полученную ДНК лигируют с ДНК, кодирующей константную область антитела человека, а затем вставляют в экспрессирующий вектор. Альтернативно, ДНК, кодирующую вариабельную область антитела, можно вставлять в экспрессирующий вектор, содержащий ДНК константной области антитела. Для производства антител по настоящему изобретению гены антител вставляют в экспрессирующие векторы для экспрессии под контролем областей контроля экспрессии, например, энхансеров/промоторов. Затем, экспрессирующим вектором можно трансформировать клетки-хозяева для экспрессии антитела.Humanized monoclonal antibody can be obtained by conventional production methods (see, for example, Example 4 below, publication WO95/14041 and publication WO96/02576). In particular, a DNA sequence encoding a variable region designed to bind a mouse antibody CDR to a human antibody FR is synthesized by PCR from a series of oligonucleotides prepared with partially overlapping ends (see WO98/13388). The resulting DNA is ligated with DNA encoding a human antibody constant region and then inserted into an expression vector. Alternatively, the DNA encoding the antibody variable region can be inserted into an expression vector containing the antibody constant region DNA. For the production of antibodies of the present invention, antibody genes are inserted into expression vectors for expression under the control of expression control regions, eg, enhancers/promoters. The host cells can then be transformed with the expression vector to express the antibody.
[0039][0039]
Клетки-хозяева указанных выше трансформантов включают клетки позвоночных, такие как клетки COS или клетки CHO, прокариоты и дрожжи. Трансформантов можно культивировать способами, известными специалисту. Посредством культивирования моноклональное антитело по настоящему изобретению производится внутри трансформантов или вне их. Среду для культуры можно соответствующим образом выбирать из общепринятых сред в зависимости от клетки-хозяина. В случае клеток COS доступны среда RPMI-1640 и минимальная эссенциальная среда Игла (DMEM), модифицированная Дульбекко, и при необходимости можно добавлять ингредиенты сыворотки, а также эмбриональную телячью сыворотку (FBS). Температура выращивания трансформантов не ограничена, поскольку не снижает серьезно способность продуцировать белки в клетке. Предпочтительными являются температуры от 32 до 42ºC. Наиболее предпочтительной является температура 37ºC. По мере необходимости, культивирование можно проводить в атмосфере, содержащей диоксид углерода от 1 до 10% (об./об.).Host cells of the above transformants include vertebrate cells such as COS cells or CHO cells, prokaryotes and yeasts. Transformants can be cultured by methods known to the skilled person. Through cultivation, the monoclonal antibody of the present invention is produced inside or outside the transformants. The culture medium can be appropriately selected from conventional media depending on the host cell. In the case of COS cells, RPMI-1640 medium and Dulbecco's Modified Eagle's Minimal Essential Medium (DMEM) are available, and serum ingredients can be added as needed, as well as fetal bovine serum (FBS). The temperature for growing transformants is not limited as long as it does not seriously reduce the ability to produce proteins in the cell. Temperatures between 32 and 42ºC are preferred. The most preferred temperature is 37ºC. As necessary, cultivation can be carried out in an atmosphere containing carbon dioxide from 1 to 10% (v/v).
[0040][0040]
Фракции, содержащие моноклональное антитело по настоящему изобретению, которые получают в трансформантах или вне трансформантов описанными ранее способами, могут быть разделены и очищены известными ранее способами разделения. Эти способы основаны на физическом или химическом свойстве целевого белка. Конкретно, примеры включают обработку общепринятым осадителем белков, ультрафильтрацию, хроматографию на молекулярных ситах (гель-фильтрацию), адсорбционную хроматографию, ионообменную хроматографию, аффинную хроматографию, различную хроматографию, такую как высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), диализ и их сочетания. Способы позволяют легко производить моноклональное антитело по настоящему изобретению с высоким выходом и чистотой.Fractions containing a monoclonal antibody of the present invention, which are obtained in transformants or outside of transformants by the previously described methods, can be separated and purified by previously known separation methods. These methods are based on a physical or chemical property of the target protein. Specifically, examples include treatment with a conventional protein precipitant, ultrafiltration, molecular sieve chromatography (gel filtration), adsorption chromatography, ion exchange chromatography, affinity chromatography, various chromatography such as high performance liquid chromatography (HPLC), dialysis, and combinations thereof. The methods allow the monoclonal antibody of the present invention to be easily produced in high yield and purity.
[0041][0041]
Моноклональное антитело или его активный фрагмент по настоящему изобретению можно дополнительно модифицировать различными молекулами, такими как полиэтиленгликоли (ПЭГ), радиоактивные вещества, токсины и т.п. В данной области известны способы для модификации антител.The monoclonal antibody or active fragment thereof of the present invention can be further modified with various molecules such as polyethylene glycols (PEGs), radioactive substances, toxins, and the like. Methods for modifying antibodies are known in the art.
[0042][0042]
Моноклональное антитело по настоящему изобретению также может быть слито с другим белком по их N- или C-концам (Clinical Cancer Research, 2004, 10, 1274-1281). Специалист может приблизительно выбрать слитый белок.The monoclonal antibody of the present invention can also be fused to another protein at their N- or C-termini (Clinical Cancer Research, 2004, 10, 1274-1281). The artisan can roughly select the fusion protein.
[0043][0043]
Фармацевтическую композицию, содержащую моноклональное антитело по настоящему изобретению или его фрагмент (фармацевтическая композиция по настоящему изобретению), можно вводить системно или местно перорально или парентерально. Для парентерального введения можно выбрать, например, внутривенную инъекцию, такую как капельная инфузия, внутримышечную инъекцию, интраперитонеальную инъекцию, подкожную инъекцию, интраназальное введение, ингаляцию и т.п.A pharmaceutical composition containing a monoclonal antibody of the present invention or a fragment thereof (pharmaceutical composition of the present invention) can be administered systemically or topically orally or parenterally. For parenteral administration, for example, intravenous injection such as drip infusion, intramuscular injection, intraperitoneal injection, subcutaneous injection, intranasal administration, inhalation and the like can be selected.
[0044][0044]
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению очень полезна в качестве лекарственного средства для лечения и/или профилактики заболеваний, связанных с Nav1.7.The pharmaceutical composition of the present invention is very useful as a drug for the treatment and/or prevention of diseases associated with Nav1.7.
Заболевания, связанные с Nav1.7, включают боль, зуд, нейрогенные воспаления, кашель и т.п.Diseases associated with Nav1.7 include pain, itching, neurogenic inflammation, cough, and the like.
«Боль» включает в себя острую боль, хроническую боль, нейропатическую боль, воспалительную боль, артрит, остеоартрит, мигрень, кластерные головные боли, невралгию тройничного нерва, герпетическую невралгию, генерализованную невралгию, нейродегенеративные заболевания, нарушения движения, нейроэндокринную боль, атаксию, сепсис, висцеральную боль, острую подагру, постгерпетическую невралгию, диабетическую нейропатию, ишиас, позвоночную боль, боль в голове или шее, сильную боль или непреодолимую боль, внезапную боль, боль после операции, генетическую эритромелалгию, зубную боль, ринит, боль при злокачественной опухоли, нарушения мочевого пузыря."Pain" includes acute pain, chronic pain, neuropathic pain, inflammatory pain, arthritis, osteoarthritis, migraine, cluster headaches, trigeminal neuralgia, herpetic neuralgia, generalized neuralgia, neurodegenerative diseases, movement disorders, neuroendocrine pain, ataxia, sepsis , visceral pain, acute gout, postherpetic neuralgia, diabetic neuropathy, sciatica, spinal pain, pain in the head or neck, severe pain or intractable pain, sudden pain, pain after surgery, genetic erythromelalgia, toothache, rhinitis, cancer pain, bladder disorders.
«Зуд» включает острый зуд, хронический зуд, гистамин-зависимый зуд, гистамин-независимый зуд."Itching" includes acute pruritus, chronic pruritus, histamine-dependent pruritus, histamine-independent pruritus.
«Нейрогенное воспаление» может быть связано с астмой, артритом, экземой, головной болью, мигренью, псориазом или их сочетанием."Neurogenic inflammation" may be associated with asthma, arthritis, eczema, headache, migraine, psoriasis, or a combination.
«Кашель» включает патологический или хронический кашель."Cough" includes pathological or chronic cough.
[0045][0045]
Эффективная доза выбрана в диапазоне от 0,01 мг до 100 мг на 1 кг массы тела за раз. Альтернативно, можно выбирать дозу от 5 до 5000 мг, предпочтительно дозу от 10 до 500 мг на пациента. Однако доза фармацевтической композиции, содержащей моноклональное антитело по настоящему изобретению или его фрагмент, не ограничена этими дозами. Длительность введения может быть также соответствующим образом выбрана в зависимости от возраста, симптома и т.п. у пациента. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению также может включать фармацевтически приемлемый носитель или добавку в зависимости от пути введения. Примеры такого носителя и добавки включают воду, фармацевтически приемлемый органический растворитель, коллаген, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, альгинат натрия, водорастворимый декстран, пектин, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, казеин, диглицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, вазелин сывороточный альбумин человека (САЧ), маннит, сорбит, лактозу, поверхностно-активные вещества, разрешенные в качестве фармацевтической добавки. Добавка для применения соответствующим образом выбрана или комбинирована из вышеперечисленных в зависимости от лекарственной формы, но не ограничивается этим.An effective dose is selected in the range from 0.01 mg to 100 mg per 1 kg of body weight at a time. Alternatively, a dose of 5 to 5000 mg can be selected, preferably a dose of 10 to 500 mg per patient. However, the dose of the pharmaceutical composition containing the monoclonal antibody of the present invention or a fragment thereof is not limited to these doses. The duration of administration may also be appropriately selected depending on age, symptom, and the like. at the patient. The pharmaceutical composition of the present invention may also include a pharmaceutically acceptable carrier or additive, depending on the route of administration. Examples of such a carrier and additive include water, a pharmaceutically acceptable organic solvent, collagen, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, sodium alginate, water-soluble dextran, pectin, methylcellulose, ethylcellulose, casein, diglycerin, propylene glycol, polyethylene glycol, petrolatum, human serum albumin (HSA), mannitol, sorbitol, lactose, surfactants allowed as a pharmaceutical additive. The additive for use is appropriately selected or combined from the above depending on the dosage form, but is not limited to this.
[0046][0046]
Настоящее изобретение включает полинуклеотид, кодирующий вариабельные области тяжелой и/или легкой цепи моноклонального антитела по настоящему изобретению. Полинуклеотид, кодирующий вариабельные области тяжелой цепи моноклонального антитела по настоящему изобретению, может дополнительно кодировать константные области тяжелой цепи. Полинуклеотид, кодирующий вариабельные области легкой цепи моноклонального антитела по настоящему изобретению, может дополнительно кодировать константные области легкой цепи. Настоящее изобретение также относится к экспрессирующим векторам, содержащим, по меньшей мере, один из этих полинуклеотидов.The present invention includes a polynucleotide encoding the heavy and/or light chain variable regions of a monoclonal antibody of the present invention. A polynucleotide encoding heavy chain variable regions of a monoclonal antibody of the present invention may further encode heavy chain constant regions. A polynucleotide encoding light chain variable regions of a monoclonal antibody of the present invention may further encode light chain constant regions. The present invention also relates to expression vectors containing at least one of these polynucleotides.
[0047][0047]
Полинуклеотид представляет собой полимер, состоящий из нуклеотидов, таких как несколько дезоксирибонуклеиновых кислот (ДНК) или рибонуклеиновых кислот (РНК), поскольку он кодирует антитело по настоящему изобретению. Они могут включать основания, отличающиеся от природных продуктов. Полинуклеотид по настоящему изобретению доступен для получения антител с помощью генетической технологии, и он пригоден в качестве зонда для скрининга антител, обладающих эквивалентной активностью с антителом по настоящему изобретению. То есть, используя полинуклеотид, кодирующий антитело по настоящему изобретению, или его часть в качестве зонда и используя способ, такой как способ гибридизации или амплификации гена, такой как ПЦР, можно получить ДНК, которая может гибридизоваться с указанным полинуклеотидом в жестких условиях и кодирует антитело, обладающее эквивалентной активностью с антителом по настоящему изобретению. Такие ДНК также включены в полинуклеотид по настоящему изобретению.A polynucleotide is a polymer composed of nucleotides such as several deoxyribonucleic acids (DNA) or ribonucleic acids (RNA) as it encodes an antibody of the present invention. They may include bases other than natural products. The polynucleotide of the present invention is available for production of antibodies by genetic engineering and is useful as a screening probe for antibodies having equivalent activity to an antibody of the present invention. That is, by using a polynucleotide encoding an antibody of the present invention, or a portion thereof, as a probe, and using a method such as a hybridization or gene amplification method such as PCR, DNA can be obtained that can hybridize to said polynucleotide under stringent conditions and encode an antibody. having equivalent activity with the antibody of the present invention. Such DNA is also included in the polynucleotide of the present invention.
[0048][0048]
Способ гибридизации (Sambrook, J et al., Molecular cloning, 2-е изд., 9,47-9,58, Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) хорошо известен специалисту в данной области. Условие для гибридизации, например, включает условия с низкой жесткостью. Условия с низкой жесткостью означают, что этап отмывки после гибридизации проводится, например, при 0,1×SSC, содержащем 0,1% SDS при 42°C, предпочтительно при 0,1×SSC, содержащем 0,1% SDS при 50°C. Более предпочтительным условием для гибридизации является условие с высокой жесткостью. Условие с высокой жесткостью означает, например, при 5×SSC, содержащем 0,1% SDS, при 65ºC. В этих условиях при более высокой температуре ожидается эффективное получение полинуклеотида с более высоким сходством. В отношении жесткости гибридизации перечисляются несколько факторов, такие как температура или концентрация соли. Специалист может выбрать эти факторы соответствующим образом и может получить аналогичную жесткость.The hybridization method (Sambrook, J et al., Molecular cloning, 2nd ed., 9.47-9.58, Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) is well known to those skilled in the art. The condition for hybridization, for example, includes conditions of low stringency. Low stringency conditions mean that the wash step after hybridization is carried out, for example, at 0.1×SSC containing 0.1% SDS at 42°C, preferably at 0.1×SSC containing 0.1% SDS at 50° C. A more preferred hybridization condition is one with high stringency. High stringency condition means, for example, at 5xSSC containing 0.1% SDS at 65ºC. Under these conditions, at a higher temperature, efficient production of a polynucleotide with higher similarity is expected. With regard to stringency of hybridization, several factors are listed, such as temperature or salt concentration. The person skilled in the art can select these factors appropriately and can obtain similar stiffness.
[0049][0049]
Антитела, функционально эквивалентные моноклональному антитело по настоящему изобретению, имеют в основном высокое сходство в аминокислотной последовательности. Эти антитела кодируются полинуклеотидом, который получают с помощью описанных выше способов гибридизации или амплификации гена. В настоящее изобретение включены антитела, которые функционально эквивалентны антителам по настоящему изобретению и имеют высокое сходство по аминокислотной последовательности антител. Высокое сходство означает сходство, по меньшей мере, более чем 75% аминокислотной последовательности, предпочтительно, сходство 85%, и более предпочтительно, сходство 95%. Для определения подобия полипептидов доступен алгоритм, описанный в литературе (Wilbur, W. J. и Lipman, D. J. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1983) 80, 726-730).Antibodies functionally equivalent to the monoclonal antibody of the present invention have generally high similarity in amino acid sequence. These antibodies are encoded by a polynucleotide, which is obtained using the methods of hybridization or gene amplification described above. Included in the present invention are antibodies that are functionally equivalent to the antibodies of the present invention and have high similarity in the amino acid sequence of the antibodies. High similarity means at least more than 75% amino acid sequence similarity, preferably 85% similarity, and more preferably 95% similarity. An algorithm described in the literature is available for determining the similarity of polypeptides (Wilbur, W. J. and Lipman, D. J. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1983) 80, 726-730).
[0050][0050]
Моноклональное антитело по настоящему изобретению или его фрагмент специфически связывается с Nav1.7, поэтому его можно использовать для обнаружения Nav1.7 в биологических образцах. Биологические образцы включают кровь, плазму, сыворотку, мочу, органы, ткани, костный мозг, лимфоузлы и т.п. Таким образом, набор, содержащий моноклональное антитело по настоящему изобретению, можно использовать в качестве набора для обнаружения Nav1.7. Этот набор включает моноклональное антитело по настоящему изобретению или его фрагмент, а также может включать меченное вторичное антитело, субстрат, необходимый для детекции меток, носитель, промывочный буфер, разбавитель для образца, субстрат для фермента, раствор, останавливающий реакцию, белок Nav1.7 в качестве очищенного стандарта для сусбстрата, инструкции по применению и т.п.The monoclonal antibody of the present invention, or a fragment thereof, specifically binds to Nav1.7 and can therefore be used to detect Nav1.7 in biological samples. Biological samples include blood, plasma, serum, urine, organs, tissues, bone marrow, lymph nodes, and the like. Thus, a kit containing the monoclonal antibody of the present invention can be used as a Nav1.7 detection kit. This kit includes a monoclonal antibody of the present invention or a fragment thereof, and may also include a labeled secondary antibody, a substrate necessary for the detection of labels, a carrier, a wash buffer, a sample diluent, a substrate for an enzyme, a solution that stops the reaction, Nav1.7 protein in as a purified standard for the substrate, instructions for use, etc.
[Пример][Example]
[0051][0051]
Далее в настоящем документе настоящее изобретение будет конкретно описано со ссылкой на Примеры. Однако настоящее изобретение не ограничено примерами, приведенными ниже.Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to Examples. However, the present invention is not limited to the examples below.
[0052][0052]
Пример 1: Получение антитела к Nav1.7Example 1: Obtaining antibodies to Nav1.7
В качестве антигена выбирали пептид (1418-SVNVDKQPKYEYSL (SEQ ID NO: 1)-1431; пептиды hCE3C), соответствующий С-концевым областям внеклеточной петли домена C и E3 человеческого Nav1.7 (UniProtKB/Swiss-Prot: Q15858).The peptide (1418-SVNVDKQPKYEYSL (SEQ ID NO: 1)-1431; hCE3C peptides) corresponding to the C-terminal regions of the extracellular loop of the C domain and E3 of human Nav1.7 (UniProtKB/Swiss-Prot: Q15858) was chosen as the antigen.
Синтезировали пептид (Cys-SVNVDKQPKYEYSL (SEQ ID NO: 1); Cys-hCE3C), к которому добавляли остаток Cys на N-конец (произведено Toray Corporation). Пептид был связан с малеимидированным гемоцианином гигантского моллюска (KLH, произведено Thermo Scientific Corporation) для получения иммуногена. Этим комплексом пептид-KLH иммунизировали самок мышей A/J Jms Slc при помощи полного адъюванта Фрейнда. Затем проводили дополнительную иммунизацию неполным адъювантом Фрейнда четыре раза.A peptide (Cys-SVNVDKQPKYEYSL (SEQ ID NO: 1); Cys-hCE3C) was synthesized to which a Cys residue was added at the N-terminus (manufactured by Toray Corporation). The peptide was coupled to maleimidated giant clam hemocyanin (KLH, manufactured by Thermo Scientific Corporation) to produce an immunogen. Female A/J Jms Slc mice were immunized with this peptide-KLH complex using complete Freund's adjuvant. Then additional immunization with incomplete Freund's adjuvant was carried out four times.
Через трое суток после последней иммунизации вырезали селезенку. Клетки селезенки и миеломную клетку мыши (p3×6363-Ag8., Tokyo-based Mass Laboratory) сливали с помощью способа с PEG и проводили отбор в среде, содержащей гипоксантин, аминоптерин и тимидин. Гибридому, продуцирующую связанные антитела, устанавливали способами ELISA с использованием иммуногенных пептидов с культуральным супернатантом.Three days after the last immunization, the spleen was excised. Spleen cells and a mouse myeloma cell (p3x6363-Ag8., Tokyo-based Mass Laboratory) were fused using the PEG method and selected in a medium containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine. Hybridoma producing bound antibodies were identified by ELISA methods using immunogenic peptides with culture supernatant.
[0053][0053]
Пример 2: Определение последовательностей антителExample 2: Determination of antibody sequences
Аминокислотные последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепей антитела, определяли из гибридомных клеток установленных клонов общепринятыми способами (Таблица 1).The amino acid sequences of the variable regions of the heavy and light chains of the antibody were determined from the hybridoma cells of established clones by conventional methods (Table 1).
[0054] Пример 3: Выравнивание последовательностей антител[0054] Example 3: Alignment of antibody sequences
Аминокислотные последовательности тяжелых и легких цепей 15C8, 15H6, 28B5 и 29G3 нумеровали по Кабат с использованием программного обеспечения abYsis для анализа последовательности антител и выравнивания с помощью программного обеспечения GENETIX для анализа генов (фиг. 1 и 2). В результате аминокислотные последовательности 15C8, 15H6, 28B5 и 29G3 были сходными, как описано ниже.The heavy and light chain amino acid sequences of 15C8, 15H6, 28B5 and 29G3 were Kabat numbered using abYsis antibody sequence analysis software and aligned with GENETIX gene analysis software (FIGS. 1 and 2). As a result, the amino acid sequences of 15C8, 15H6, 28B5 and 29G3 were similar, as described below.
CDR1 легкой цепи состояла из 16 аминокислот из SEQ ID NO:34.The light chain CDR1 consisted of 16 amino acids from SEQ ID NO:34.
CDR2 легкой цепи состояла из семи аминокислот K-V-S-N-R-Xaa1-S, где Xaa1 являлась F или I: SEQ ID NO:54.The light chain CDR2 consisted of seven amino acids K-V-S-N-R-Xaa1-S, where Xaa1 was F or I: SEQ ID NO:54.
CDR3 легкой цепи состояла из 9 аминокислот S-Q-S-Xaa2-H-V-P-Xaa3-T, где Xaa2 являлась T или I, и Xaa3 являлась F или W: SEQ ID NO: 55.The light chain CDR3 consisted of 9 amino acids S-Q-S-Xaa2-H-V-P-Xaa3-T, where Xaa2 was T or I and Xaa3 was F or W: SEQ ID NO: 55.
CDR1 тяжелой цепи состояла из 5 аминокислот G-Y-Y-Xaa4-H, где Xaa4 являлась M или I: SEQ ID NO: 56.The heavy chain CDR1 consisted of 5 amino acids G-Y-Y-Xaa4-H, where Xaa4 was M or I: SEQ ID NO: 56.
CDR2 тяжелой цепи состояла из 17 аминокислот L-I-I-P-Y-Xaa5-G-Xaa6-Xaa7-F-Y-N-Xaa8-K-F-Xaa9-G, где Xaa5 являлась S или N, Xaa6 являлась D или E, Xaa7 являлась T или I, Xaa8 являлась Q или P, и Xaa9 являлась K или R: SEQ ID NO:57.The heavy chain CDR2 consisted of 17 amino acids L-I-I-P-Y-Xaa5-G-Xaa6-Xaa7-F-Y-N-Xaa8-K-F-Xaa9-G, where Xaa5 was S or N, Xaa6 was D or E, Xaa7 was T or I, Xaa8 was Q or P, and Xaa9 was K or R: SEQ ID NO:57.
CDR3 тяжелой цепи состояла из 9 аминокислот A-Xaa10-V-S-Y-A-M-D-Y, где Xaa10 являлась E или D: SEQ ID NO:58.The heavy chain CDR3 consisted of 9 amino acids A-Xaa10-V-S-Y-A-M-D-Y, where Xaa10 was E or D: SEQ ID NO:58.
[0055][0055]
Пример 4: Гуманизация антителаExample 4 Humanization of an Antibody
12H4 гуманизировали следующим способом. При помощи программного обеспечения Absis для анализа последовательностей проводили поиск и отбирали акцепторные последовательности зародышевой линии человека, аналогичные последовательностям V-гена для доменов тяжелой и легкой цепей в аминокислотных последовательностях мышиного антитела. Для областей J-цепи с помощью IMGT (http://www.imgt.org/) был проведен поиск последовательностей с высокой гомологией с ДНК мышиного антитела, чтобы получить человеческую каркасную последовательность. Последовательность гуманизированного антитела, указанная в таблице 2, была разработана путем имплантации CDR1, CDR2 и CDR3 на тяжелые и легкие цепи мышиного антитело к этой человеческой каркасной последовательности, как определено путем нумерации по Кабат (Wu, TT and Kabat, EA, J. Exp. Med. Aug1;132(2):211-50 (1970)). В качестве константной области для тяжелой цепи использовали h12H4, h12H4-2 и h12H4-3, hIgG4Pro (SEQ ID NO: 62) или hIgG1 (SEQ ID NO: 63) и для легкой цепи использовали hIgK (SEQ ID NO: 64).12H4 was humanized in the following way. Using the Absis sequence analysis software, human germline acceptor sequences similar to the V-gene sequences for the heavy and light chain domains in the mouse antibody amino acid sequences were searched for and selected. For J chain regions, IMGT (http://www.imgt.org/) was searched for sequences with high homology to mouse antibody DNA to obtain a human backbone sequence. The humanized antibody sequence shown in Table 2 was designed by implanting CDR1, CDR2, and CDR3 into the heavy and light chains of a mouse antibody to this human framework sequence, as determined by Kabat numbering (Wu, TT and Kabat, EA, J. Exp. Med Aug1;132(2):211-50 (1970)). h12H4, h12H4-2 and h12H4-3, hIgG4Pro (SEQ ID NO: 62) or hIgG1 (SEQ ID NO: 63) were used as the constant region for the heavy chain, and hIgK (SEQ ID NO: 64) was used for the light chain.
Гуманизированные 12H4 (h12H4), h12H4-2 и h12H4-3, имплантированные с CDR к другим акцепторным человеческим последовательностям зародышевой линии, показали аналогичную аффинность антитела мыши против иммуногенного пептида (Cys-CE3C), как описано в примере 5.Humanized 12H4 (h12H4), h12H4-2 and h12H4-3 implanted with CDRs to other human germline acceptor sequences showed similar affinity for mouse antibody against immunogenic peptide (Cys-CE3C) as described in Example 5.
[0056][0056]
Пример 5: Оценка аффинностиExample 5: Affinity Score
Аффинность для иммуногенных пептидов (Cys-hCE3C) определяли конкурентным методом ELISA, описанным ниже.Affinity for immunogenic peptides (Cys-hCE3C) was determined by the competitive ELISA method described below.
Разбавленный раствор полученного антитела мыши добавляли к планшету с иммобилизованным анти-мышиным антителом IgG и позволяли ему связываться при комнатной температуре в течение 3 часов. После трехкратной промывки очищающим буфером для ELISA добавляли меченный биотином иммуногенный пептид и стрептавидин-HRP (производен PIERCE). Одновременно добавляли серию разведений немеченого иммуногенного пептида и проводили реакцию в течение ночи при 4ºC. После трехкратной промывки с помощью промывки для ELISA добавляли для окрашивания TMB-Substrate Chromogen (производимый Thermo Fisher Scientific). Реакцию гасили равным объемом 0,05N серной кислоты, и измеряли оптическую плотность при 450 нм. Концентрацию немеченого пептида, которая ослабляла сигнал меченного биотином пептида на половину принимали за IC50. В результате, антитело показало сильную аффинность к иммунному пептиду, как показано в таблице 3.The diluted solution of the resulting mouse antibody was added to the immobilized anti-mouse IgG antibody plate and allowed to bind at room temperature for 3 hours. After washing three times with ELISA clearing buffer, biotin labeled immunogenic peptide and streptavidin-HRP (derived from PIERCE) were added. Simultaneously, a series of dilutions of unlabeled immunogenic peptide was added and the reaction was carried out overnight at 4ºC. After washing three times with the ELISA wash, TMB-Substrate Chromogen (manufactured by Thermo Fisher Scientific) was added for staining. The reaction was quenched with an equal volume of 0.05N sulfuric acid and the absorbance was measured at 450 nm. The concentration of unlabeled peptide that attenuated the biotin-labeled peptide signal by half was taken as the IC 50 . As a result, the antibody showed strong affinity for the immune peptide as shown in Table 3.
[0057][0057]
[0058][0058]
Пример 6: Идентификация аминокислот, критичных для связывания гуманизированного 12H4Example 6 Identification of Amino Acids Critical for Humanized 12H4 Binding
Для гуманизированного 12H4 (h12H4) проводили нумерацию по Кабат и определение CDR с помощью программного обеспечения abYsis для анализа последовательности антител. Результаты показаны на ФИГ. 3А, 3B. Кроме того, был получен мутант, в котором точечная мутация была введена в аминокислота, соответствующую CDR, и аффинность рассчитывали способом, описанным в примере 5. В это время пептид (SVNVDKQPKYEYSL; SEQ ID NO: 1) за исключением N-концевого Cys иммуногенного пептида использовали в качестве немеченого пептида, и рассчитывали аффинность для этого пептида. Результаты для легкой цепи показаны в таблице 4, а результаты для тяжелой цепи показаны в таблице 5. В результате, легкая цепь Q90 и V94 теряла свою аффинность для этого пептида, когда эти положения были заменены другой аминокислотой. В таблице 4 n.d. означает необнаруживаемый. Это позволяет предположить, что Q90 и V94 легкой цепи являются особенно важными аминокислотами для связывания. При этом аффинность легкой цепи N28 и тяжелой цепи M99 снизилась более чем в 10 раз, когда эта аминокислота была заменена другой аминокислотой. Исходя из этого факта, N28 легкой цепи и M99 тяжелой цепи считаются важными аминокислотами для связывания.Humanized 12H4 (h12H4) was Kabat numbered and CDR determined using abYsis antibody sequencing software. The results are shown in FIG. 3A, 3B. In addition, a mutant was obtained in which a point mutation was introduced at the amino acid corresponding to the CDR, and the affinity was calculated by the method described in Example 5. At this time, the peptide (SVNVDKQPKYEYSL; SEQ ID NO: 1) except for the N-terminal Cys of the immunogenic peptide was used as the unlabeled peptide and the affinity for that peptide was calculated. The results for the light chain are shown in Table 4 and the results for the heavy chain are shown in Table 5. As a result, the Q90 and V94 light chain lost their affinity for this peptide when these positions were changed to another amino acid. Table 4 n.d. means undetectable. This suggests that light chain Q90 and V94 are particularly important amino acids for binding. At the same time, the affinity of the N28 light chain and the M99 heavy chain decreased more than 10-fold when this amino acid was replaced by another amino acid. Based on this fact, light chain N28 and heavy chain M99 are considered important amino acids for binding.
[0059][0059]
(мутант/wt)IC 50 ratio
(mutant/wt)
[0060][0060]
(мутант/wt)IC 50 ratio
(mutant/wt)
[0061][0061]
Пример 7: Оценка эффективности лекарственного средстваExample 7 Evaluation of drug efficacy
(7-1) Получение моделей частичного лигирования седалищного нерва крысы(7-1) Derivation of models of partial ligation of the sciatic nerve of the rat
Крысе делали анестезию изофлураном и брили левую ногу. Надрезали кожу верхней части бедра и разрезали мышцы, чтобы обнажить седалищный нерв. Приблизительно половину седалищного нерва плотно перевязывали нейлоновой нитью и зашивали мышцы и кожу. Это считали хирургической операцией. Аналогичные действия, за исключением перевязки седалищного нерва, проводили на правой ноге, в качестве симуляции операции.The rat was anesthetized with isoflurane and the left leg was shaved. The skin of the upper thigh was incised and the muscles cut to expose the sciatic nerve. Approximately half of the sciatic nerve was tightly tied with nylon thread and the muscles and skin were sutured. It was considered a surgical operation. Similar actions, with the exception of ligation of the sciatic nerve, were performed on the right leg, as a simulation of the operation.
[0062][0062]
(7-2) Оценка эффективности лекарственного средства путем местного внутриподошвенного введения(7-2) Evaluation of drug efficacy by topical intraplantar administration
Крысу, подготовленную в (7-1), применяли для оценки болевого поведения при механической гипералгезии с помощью анальгезиометра (метод Рэндала Селитто) через две недели после операции. Заднюю конечность крысы сжимали таким образом, что давящий стимул увеличивался на 16 г в секунду по анальгезиометру, а давление, когда крыса демонстрировала реакцию избегания, было установлено в качестве болевого порога. Болевой порог оценивали для левой и правой задних конечностей и считали болевым порогом до лечения. Выбранные животные имели болевой порог 60-90 г при операции и 100-175 г при ложной операции. Для тренировки животных аналогичные процедуры проводили перед измерением болевого порога перед лечением. Антитело по настоящему изобретению получали в концентрации 300 мкг/40 мкл с использованием PBS и вводили 40 мкл внутриподошвенно. Через пять минут после введения оценивали болевой порог правой и левой задних конечностей и считали его болевым порогом после лечения.% Обратных значений рассчитывали способами, описанными ниже, для оценки болевых эффектов антитела.The rat prepared in (7-1) was used to evaluate pain behavior in mechanical hyperalgesia with an analgesiometer (Randal Selitto method) two weeks after surgery. The hind limb of the rat was compressed such that the pressure stimulus was increased by 16 g per second on the analgesiometer, and the pressure when the rat showed an avoidance response was set as the pain threshold. The pain threshold was assessed for the left and right hind limbs and was considered the pain threshold before treatment. The selected animals had a pain threshold of 60-90 g during surgery and 100-175 g during sham surgery. For training animals, similar procedures were performed before measuring the pain threshold before treatment. The antibody of the present invention was obtained at a concentration of 300 μg/40 μl using PBS and injected 40 μl intraplantarly. Five minutes after administration, the pain threshold of the right and left hind limbs was assessed and considered the pain threshold after treatment. % Reciprocal values were calculated by the methods described below to assess the pain effects of the antibody.
Для оценки воздействия антитела на боль рассчитывали % купирования симптомов при помощи способов, описанных ниже.To evaluate the effect of the antibody on pain, % symptom relief was calculated using the methods described below.
% купирования симптомов = (болевой порог после лечения на оперированной лапе - болевой порог перед лечением на оперированной лапе)/(болевой порог после лечения при ложной операции - порог боли перед лечением при ложной операции)×100% relief of symptoms = (pain threshold after treatment on the operated paw - pain threshold before treatment on the operated paw) / (pain threshold after treatment in sham surgery - pain threshold before treatment in sham surgery) × 100
Результаты 3B2, 15C8, 28B5, 29G3 и 12H4 показаны на ФИГ. 4. Антитело по настоящему изобретению ингибирует Nav1.7 путем интраплантарного введения и показывает значимую эффективность для болевого поведения.The results of 3B2, 15C8, 28B5, 29G3 and 12H4 are shown in FIG. 4. The antibody of the present invention inhibits Nav1.7 by intraplant administration and shows significant efficacy for pain behavior.
[0063][0063]
(7-3) Оценка эффективности лекарственного средства путем внутривенного введения(7-3) Evaluation of drug efficacy by intravenous administration
Крысу, подготовленную в (7-1), применяли для оценки поведения механической аллодинии с помощью нити фон Фрея через две недели после операции. Крысу помещали в пластиковую клетку на проволочную сетку для акклиматизации. После введения антитела нити фон Фрея (0,4-26 г) прижимали к лапе крысы со стороны проволочной сетки. Крыса начинает проявлять реакцию избегания при определенном значении давления нити. Это значение устанавливали в качестве болевого порога. Порог оценивали для левой и правой задних лап и установливали как болевой порог перед лечением. Выбранные животные имели болевой порог 0,6-2 г при хирургическом вмешательстве и 8-15 г при имитации операции. Для тренировки животных аналогичные процедуры проводили перед измерением болевого порога перед лечением. Получали антитело по настоящему изобретению в концентрации 50 мг/кг с использованием физиологического раствора и вводили внутривенно. Через 0,5-72 часа после введения, измеряли болевой порог правой и левой задних лап. Он был установлен как болевой порог после лечения.The rat prepared in (7-1) was used to assess the behavior of mechanical allodynia with a von Frey thread two weeks after surgery. The rat was placed in a plastic cage on wire mesh for acclimatization. After the introduction of the antibody, von Frey threads (0.4-26 g) were pressed against the paw of the rat from the side of the wire mesh. The rat begins to show an avoidance reaction at a certain value of thread pressure. This value was set as the pain threshold. The threshold was evaluated for the left and right hind legs and set as the pain threshold before treatment. The selected animals had a pain threshold of 0.6-2 g for surgical intervention and 8-15 g for simulated surgery. For training animals, similar procedures were performed before measuring the pain threshold before treatment. Received the antibody of the present invention at a concentration of 50 mg/kg using saline and administered intravenously. 0.5-72 hours after administration, the pain threshold of the right and left hind legs was measured. It was set as pain threshold after treatment.
Для оценки воздействия соединения на боль рассчитывали % купирования симптомов при помощи способов, описанных ниже.To evaluate the effect of a compound on pain, % symptom relief was calculated using the methods described below.
% купирования симптомов = (логарифм болевого порога после лечения на оперированной лапе - логарифм болевого порога перед лечением на оперированной лапе)/(логарифм болевого порога после лечения при ложной операции - логарифм болевого порога перед лечением при ложной операции)% symptom relief = (log of pain threshold after treatment on the operated paw - log of pain threshold before treatment on the operated paw) / (log of pain threshold after treatment in sham surgery - log of pain threshold before treatment in sham surgery)
Результат для гуманизированного 12H4 (h12H4) показан на ФИГ. 5. Антитело по настоящему изобретению показало значительную лекарственную эффективность в отношении болевого поведения при внутривенном введении.The result for humanized 12H4 (h12H4) is shown in FIG. 5. The antibody of the present invention showed significant drug efficacy in pain behavior when administered intravenously.
[Промышленная применимость][Industrial applicability]
[0064][0064]
Моноклональное антитело по настоящему изобретению или его фрагмент можно использовать для обнаружения Nav1.7 в биологических образцах. Кроме того, фармацевтическая композиция, содержащая моноклональное антитело по настоящему изобретению или его фрагмент, очень полезна в качестве лекарственного средства для лечения или предотвращения заболеваний, связанных с Nav1.7 связанных заболеваний.The monoclonal antibody of the present invention, or a fragment thereof, can be used to detect Nav1.7 in biological samples. In addition, the pharmaceutical composition containing the monoclonal antibody of the present invention or a fragment thereof is very useful as a drug for the treatment or prevention of diseases associated with Nav1.7 related diseases.
--->--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ SEQUENCE LIST
<110> SHIONOGI & CO., LTD.<110> SHIONOGI & CO., LTD.
<120> Моноклональные антитела к Nav1.7<120> Monoclonal antibodies to Nav1.7
<130> 19P00036WO<130> 19P00036WO
<160> 64 <160> 64
<170> PatentIn version 3.5<170>PatentIn version 3.5
<210> 1<210> 1
<211> 14<211> 14
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> пептид hCE3C<223> hCE3C peptide
<400> 1<400> 1
Ser Val Asn Val Asp Lys Gln Pro Lys Tyr Glu Tyr Ser Leu Ser Val Asn Val Asp Lys Gln Pro Lys Tyr Glu Tyr Ser Leu
1 5 10 1 5 10
<210> 2<210> 2
<211> 118<211> 118
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь 3B2<223> Heavy Chain 3B2
<400> 2<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Thr Gly Phe Thr Phe Ser Trp Tyr Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Thr Gly Phe Thr Phe Ser Trp Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Ala Lys Arg Leu Glu Trp Val Val Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Ala Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45 35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Met Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Met Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Leu Trp Asp Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Arg Leu Trp Asp Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ser Val Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 3<210> 3
<211> 5<211> 5
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR1 3B2 VH<223> CDR1 3B2 VH
<400> 3<400> 3
Trp Tyr Val Met Ser Trp Tyr Val Met Ser
1 5 fifteen
<210> 4<210> 4
<211> 17<211> 17
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 3B2 VH<223> CDR2 3B2 VH
<400> 4<400> 4
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met Lys Thr Ile Ser Ser Gly Gly Val Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Met Lys
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 5<210> 5
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR3 3B2 VH<223> CDR3 3B2 VH
<400> 5<400> 5
Leu Trp Asp Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Leu Trp Asp Pro Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 fifteen
<210> 6<210> 6
<211> 121<211> 121
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь 5E12<223> Heavy chain 5E12
<400> 6<400> 6
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30 20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Ser Lys Phe Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Ser Lys Phe
50 55 60 50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Val Tyr Asp Gly Asn Tyr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Ala Arg Val Tyr Asp Gly Asn Tyr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110 100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 7<210> 7
<211> 5<211> 5
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR1 5E12 VH<223> CDR1 5E12 VH
<400> 7<400> 7
Asp Thr Tyr Met His Asp Thr Tyr Met His
1 5 fifteen
<210> 8<210> 8
<211> 17<211> 17
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 5E12 VH<223> CDR2 5E12 VH
<400> 8<400> 8
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Ser Lys Phe Gln Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Asp Ser Lys Phe Gln
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 9<210> 9
<211> 12<211> 12
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR3 5E12 VH<223> CDR3 5E12 VH
<400> 9<400> 9
Val Tyr Asp Gly Asn Tyr Val Gly Ala Met Asp Tyr Val Tyr Asp Gly Asn Tyr Val Gly Ala Met Asp Tyr
1 5 10 1 5 10
<210> 10<210> 10
<211> 121<211> 121
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь 7B9<223> Heavy Chain 7B9
<400> 10<400> 10
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30 20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Ala Ser Lys Phe Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60 50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Ile Gln Phe Thr Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ile Gln Phe Thr Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Val Asp Asp Gly Asn Tyr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Ala Arg Val Asp Asp Gly Asn Tyr Val Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110 100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 11<210> 11
<211> 5<211> 5
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR1 7B9 VH<223> CDR1 7B9 VH
<400> 11<400> 11
Asp Thr Tyr Ile His Asp Thr Tyr Ile His
1 5 fifteen
<210> 12<210> 12
<211> 17<211> 17
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 7B9 VH<223> CDR2 7B9 VH
<400> 12<400> 12
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Ala Ser Lys Phe Gln Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ile Tyr Ala Ser Lys Phe Gln
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 13<210> 13
<211> 12<211> 12
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR3 7B9 VH<223> CDR3 7B9 VH
<400> 13<400> 13
Val Asp Asp Gly Asn Tyr Val Gly Ala Met Asp Tyr Val Asp Asp Gly Asn Tyr Val Gly Ala Met Asp Tyr
1 5 10 1 5 10
<210> 14<210> 14
<211> 118<211> 118
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь 15C8<223> Heavy chain 15C8
<400> 14<400> 14
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Pro
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30 20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Leu Ile Ile Pro Tyr Ser Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gly Leu Ile Ile Pro Tyr Ser Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Met Glu Ile Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Ile Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Ala Glu Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Arg Ala Glu Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ser Val Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 15<210> 15
<211> 5<211> 5
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR1 15C8 VH, 15H6 VH и 29G3 VH<223> CDR1 15C8 VH, 15H6 VH and 29G3 VH
<400> 15<400> 15
Gly Tyr Tyr Met His Gly Tyr Tyr Met His
1 5 fifteen
<210> 16<210> 16
<211> 17<211> 17
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 15C8 VH<223> CDR2 15C8 VH
<400> 16<400> 16
Leu Ile Ile Pro Tyr Ser Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Leu Ile Ile Pro Tyr Ser Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 17<210> 17
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR3 15C8 VH, 15H6 VH и 28B5 VH<223> CDR3 15C8VH, 15H6VH and 28B5VH
<400> 17<400> 17
Ala Glu Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Ala Glu Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 fifteen
<210> 18<210> 18
<211> 118<211> 118
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь 15H6<223> Heavy chain 15H6
<400> 18<400> 18
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Pro
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30 20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Leu Ile Ile Pro Tyr Ser Gly Glu Ile Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gly Leu Ile Ile Pro Tyr Ser Gly Glu Ile Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Met Glu Ile Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Ile Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Ala Glu Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Arg Ala Glu Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ser Val Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 19<210> 19
<211> 17<211> 17
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 15H6 VH<223> CDR2 15H6 VH
<400> 19<400> 19
Leu Ile Ile Pro Tyr Ser Gly Glu Ile Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Leu Ile Ile Pro Tyr Ser Gly Glu Ile Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 20<210> 20
<211> 118<211> 118
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь 28B5<223> Heavy Chain 28B5
<400> 20<400> 20
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Leu Gly Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Leu Gly Pro
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30 20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Pro Lys Phe Gly Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Pro Lys Phe
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Val Tyr Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Met Glu Leu Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Leu Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Ala Glu Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Arg Ala Glu Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ser Val Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 21<210> 21
<211> 5<211> 5
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR1 28B5 VH<223> CDR1 28B5 VH
<400> 21<400> 21
Gly Tyr Tyr Ile His Gly Tyr Tyr Ile His
1 5 fifteen
<210> 22<210> 22
<211> 17<211> 17
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 28B5 VH<223> CDR2 28B5 VH
<400> 22<400> 22
Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Pro Lys Phe Lys Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Pro Lys Phe Lys
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 23<210> 23
<211> 118<211> 118
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь 29G3<223> Heavy Chain 29G3
<400> 23<400> 23
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Pro Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Pro
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Val Asn Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Ser Val Asn Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30 20 25 30
Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Gly Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60 50 55 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Met Ala Leu Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Met Ala Leu Gly Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Ala Asp Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Arg Ala Asp Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser Ser Val Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 24<210> 24
<211> 17<211> 17
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 29G3 VH<223> CDR2 29G3 VH
<400> 24<400> 24
Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Arg Leu Ile Ile Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Arg
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 25<210> 25
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR3 29G3 VH<223> CDR3 29G3 VH
<400> 25<400> 25
Ala Asp Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Ala Asp Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 fifteen
<210> 26<210> 26
<211> 118<211> 118
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь 12H4<223> Heavy chain 12H4
<400> 26<400> 26
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr
20 25 30 20 25 30
Tyr Ile Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Tyr Ile Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Ser Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Ser Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Glu Tyr Phe Cys Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Glu Tyr Phe Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 27<210> 27
<211> 5<211> 5
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR1 12H4 VH, h12H4 VH, h12H4-2 VH и h12H4-3 VH<223> CDR1 12H4 VH, h12H4 VH, h12H4-2 VH and h12H4-3 VH
<400> 27<400> 27
Tyr Tyr Tyr Ile Gln Tyr Tyr Tyr Ile Gln
1 5 fifteen
<210> 28<210> 28
<211> 17<211> 17
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 12H4 VH, h12H4 VH, h12H4-2 VH и h12H4-3 VH<223> CDR2 12H4 VH, h12H4 VH, h12H4-2 VH and h12H4-3 VH
<400> 28<400> 28
Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe Lys Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 29<210> 29
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR3 12H4 VH, 22D3 VH, h12H4 VH, h12H4-2 VH и h12H4-3 VH<223> CDR3 12H4 VH, 22D3 VH, h12H4 VH, h12H4-2 VH and h12H4-3 VH
<400> 29<400> 29
Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr
1 5 fifteen
<210> 30<210> 30
<211> 118<211> 118
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь 22D3<223> Heavy Chain 22D3
<400> 30<400> 30
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30 20 25 30
Tyr Ile Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Tyr Ile Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Thr Asn Asn Thr Glu Lys Phe Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Thr Asn Asn Thr Glu Lys Phe
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 31<210> 31
<211> 5<211> 5
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR1 22D3 VH<223> CDR1 22D3 VH
<400> 31<400> 31
His Tyr Tyr Ile Gln His Tyr Tyr Ile Gln
1 5 fifteen
<210> 32<210> 32
<211> 17<211> 17
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 22D3 VH<223> CDR2 22D3 VH
<400> 32<400> 32
Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Thr Asn Asn Thr Glu Lys Phe Lys Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Thr Asn Asn Thr Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 33<210> 33
<211> 113<211> 113
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь 3B2<223> Light chain 3B2
<400> 33<400> 33
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45 35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95 85 90 95
Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110 100 105 110
Arg Arg
<210> 34<210> 34
<211> 16<211> 16
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR1 3B2 VK, 15C8 VK, 15H6 VK, 28B5 VK, 29G3 VK, 12H4 VK, 22D3<223> CDR1 3B2 VK, 15C8 VK, 15H6 VK, 28B5 VK, 29G3 VK, 12H4 VK, 22D3
VK, h12H4 VK, h12H4-2 VK и h12H4-3 VK VK, h12H4 VK, h12H4-2 VK and h12H4-3 VK
<400> 34<400> 34
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15 1 5 10 15
<210> 35<210> 35
<211> 7<211> 7
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 3B2 VK, 15C8 VK, 28B5 VK, 29G3 VK, 12H4 VK, 22D3VK, h12H4<223> CDR2 3B2 VK, 15C8 VK, 28B5 VK, 29G3 VK, 12H4 VK, 22D3VK, h12H4
VK, h12H4-2 VK и h12H4-3 VK VK, h12H4-2 VK and h12H4-3 VK
<400> 35<400> 35
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5 fifteen
<210> 36<210> 36
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR3 3B2 VK, 15C8 VK, 15H6 VK и 29G3 VK<223> CDR3 3B2 VK, 15C8 VK, 15H6 VK and 29G3 VK
<400> 36<400> 36
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Phe Thr Ser Gln Ser Thr His Val Pro Phe Thr
1 5 fifteen
<210> 37<210> 37
<211> 108<211> 108
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь 5E12<223> Light chain 5E12
<400> 37<400> 37
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn
20 25 30 20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45 35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Asn Ile Asn Ser Val Glu Thr Ser Gly Ser Gly Thr Gly Phe Thr Leu Asn Ile Asn Ser Val Glu Thr
65 70 75 80 65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Tyr Trp Pro Phe Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Tyr Trp Pro Phe
85 90 95 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Arg Ile Lys Arg Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Arg Ile Lys Arg
100 105 100 105
<210> 38<210> 38
<211> 11<211> 11
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR1 5E12 VK и 7B9 VK<223> CDR1 5E12 VK and 7B9 VK
<400> 38<400> 38
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn Leu His Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn Leu His
1 5 10 1 5 10
<210> 39<210> 39
<211> 7<211> 7
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 5E12 VK<223> CDR2 5E12 VK
<400> 39<400> 39
Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser
1 5 fifteen
<210> 40<210> 40
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR3 5E12 VK и 7B9 VK<223> CDR3 5E12 VK and 7B9 VK
<400> 40<400> 40
Gln Gln Ser Asn Tyr Trp Pro Phe Thr Gln Gln Ser Asn Tyr Trp Pro Phe Thr
1 5 fifteen
<210> 41<210> 41
<211> 108<211> 108
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь 7B9 VK<223> Light chain 7B9 VK
<400> 41<400> 41
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn
20 25 30 20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45 35 40 45
Lys Tyr Thr Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Lys Tyr Thr Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr
65 70 75 80 65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Tyr Trp Pro Phe Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Tyr Trp Pro Phe
85 90 95 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Gly Ile Lys Arg Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Gly Ile Lys Arg
100 105 100 105
<210> 42<210> 42
<211> 7<211> 7
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 7B9 VK<223> CDR2 7B9 VK
<400> 42<400> 42
Tyr Thr Ser Gln Ser Ile Ser Tyr Thr Ser Gln Ser Ile Ser
1 5 fifteen
<210> 43<210> 43
<211> 113<211> 113
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь 15C8<223> Light chain 15C8
<400> 43<400> 43
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45 35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95 85 90 95
Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110 100 105 110
Arg Arg
<210> 44<210> 44
<211> 113<211> 113
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь 15H6<223> Light chain 15H6
<400> 44<400> 44
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45 35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Ile Ser Gly Val Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Ile Ser Gly Val Pro
50 55 60 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Lys Phe Lys Ile Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Lys Phe Lys Ile
65 70 75 80 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95 85 90 95
Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110 100 105 110
Arg Arg
<210> 45<210> 45
<211> 7<211> 7
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 15H6 VK<223> CDR2 15H6 VK
<400> 45<400> 45
Lys Val Ser Asn Arg Ile Ser Lys Val Ser Asn Arg Ile Ser
1 5 fifteen
<210> 46<210> 46
<211> 113<211> 113
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь 28B5<223> Light chain 28B5
<400> 46<400> 46
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45 35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95 85 90 95
Ile His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ile His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110 100 105 110
Arg Arg
<210> 47<210> 47
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR3 28B5 VK<223> CDR3 28B5 VK
<400> 47<400> 47
Ser Gln Ser Ile His Val Pro Trp Thr Ser Gln Ser Ile His Val Pro Trp Thr
1 5 fifteen
<210> 48<210> 48
<211> 113<211> 113
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь 29G3<223> Light chain 29G3
<400> 48<400> 48
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gln Ala Ser Leu Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45 35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95 85 90 95
Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110 100 105 110
Arg Arg
<210> 49<210> 49
<211> 113<211> 113
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь 12H4<223> Light chain 12H4
<400> 49<400> 49
Asp Val Val Met Thr Gln Ala Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ala Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45 35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80 65 70 75 80
Thr Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Thr Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95 85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110 100 105 110
Arg Arg
<210> 50<210> 50
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR3 12H4 VK, h12H4 VK, h12H4-2 VK и h12H4-3 VK<223> CDR3 12H4 VK, h12H4 VK, h12H4-2 VK and h12H4-3 VK
<400> 50<400> 50
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr
1 5 fifteen
<210> 51<210> 51
<211> 113<211> 113
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь 22D3<223> Light chain 22D3
<400> 51<400> 51
Asp Val Val Met Thr Gln Ala Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ala Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45 35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95 85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110 100 105 110
Arg Arg
<210> 52<210> 52
<211> 118<211> 118
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь h12H4<223> Heavy chain h12H4
<400> 52<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr
20 25 30 20 25 30
Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45 35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Thr Val Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 53<210> 53
<211> 114<211> 114
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь h12H4 и h12H4-2<223> Light chain h12H4 and h12H4-2
<400> 53<400> 53
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45 35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95 85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110 100 105 110
Arg Thr Arg Thr
<210> 54<210> 54
<211> 7<211> 7
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 VK<223> CDR2 VK
<220><220>
<221> прочий признак<221> other attribute
<222> (6)..(6)<222>(6)..(6)
<223> Xaa может быть Ile или Phe<223> Xaa can be Ile or Phe
<400> 54<400> 54
Lys Val Ser Asn Arg Xaa Ser Lys Val Ser Asn Arg Xaa Ser
1 5 fifteen
<210> 55<210> 55
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR3 VK<223> CDR3 VK
<220><220>
<221> прочий признак<221> other sign
<222> (4)..(4)<222> (4)..(4)
<223> Xaa может быть Thr или Ile<223> Xaa can be Thr or Ile
<220><220>
<221> прочий признак<221> other attribute
<222> (8)..(8)<222>(8)..(8)
<223> Xaa может быть Phe или Trp<223> Xaa can be Phe or Trp
<400> 55<400> 55
Ser Gln Ser Xaa His Val Pro Xaa Thr Ser Gln Ser Xaa His Val Pro Xaa Thr
1 5 fifteen
<210> 56<210> 56
<211> 5<211> 5
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR1 VH<223> CDR1 VH
<220><220>
<221> прочий признак<221> other sign
<222> (4)..(4)<222> (4)..(4)
<223> Xaa может быть Met или Ile<223> Xaa can be Met or Ile
<400> 56<400> 56
Gly Tyr Tyr Xaa His Gly Tyr Tyr Xaa His
1 5 fifteen
<210> 57<210> 57
<211> 17<211> 17
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR2 VH<223> CDR2 VH
<220><220>
<221> прочий признак<221> other sign
<222> (6)..(6)<222>(6)..(6)
<223> Xaa может быть Ser или Asn<223> Xaa can be Ser or Asn
<220><220>
<221> прочий признак<221> other sign
<222> (8)..(8)<222>(8)..(8)
<223> Xaa может быть Asp или Glu<223> Xaa can be Asp or Glu
<220><220>
<221> прочий признак<221> other attribute
<222> (9)..(9)<222>(9)..(9)
<223> Xaa может быть Thr или Ile <223> Xaa can be Thr or Ile
<220><220>
<221> прочий признак<221> other sign
<222> (13)..(13)<222> (13)..(13)
<223> Xaa может быть Gln или Pro<223> Xaa can be Gln or Pro
<220><220>
<221> прочий признак<221> other sign
<222> (16)..(16)<222> (16)..(16)
<223> Xaa может быть Lys или Arg<223> Xaa can be Lys or Arg
<400> 57<400> 57
Leu Ile Ile Pro Tyr Xaa Gly Xaa Xaa Phe Tyr Asn Xaa Lys Phe Xaa Leu Ile Ile Pro Tyr Xaa Gly Xaa Xaa Phe Tyr Asn Xaa Lys Phe Xaa
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 58<210> 58
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> CDR3 VH<223> CDR3 VH
<220><220>
<221> прочий признак<221> other sign
<222> (2)..(2)<222> (2)..(2)
<223> Xaa может быть Glu или Asp<223> Xaa can be Glu or Asp
<400> 58<400> 58
Ala Xaa Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Ala Xaa Val Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 fifteen
<210> 59<210> 59
<211> 118<211> 118
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь h12H4-2<223> Heavy chain h12H4-2
<400> 59<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr
20 25 30 20 25 30
Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45 35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Thr Val Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 60<210> 60
<211> 118<211> 118
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Тяжелая цепь h12H4-3<223> Heavy chain h12H4-3
<400> 60<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Tyr
20 25 30 20 25 30
Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45 35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asn Ser Asn Ile Thr Glu Lys Phe
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Arg Ile Phe Thr Thr Met Val Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Thr Val Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 61<210> 61
<211> 114<211> 114
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Легкая цепь h12H4-3<223> Light chain h12H4-3
<400> 61<400> 61
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30 20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45 35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95 85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110 100 105 110
Arg Thr Arg Thr
<210> 62<210> 62
<211> 327<211> 327
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> hIgG4Pro<223> hIgG4Pro
<400> 62<400> 62
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30 20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60 50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80 65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95 85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110 100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125 115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140 130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160 145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175 165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190 180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205 195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220 210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240 225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255 245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270 260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285 275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300 290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320 305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325 325
<210> 63<210> 63
<211> 330<211> 330
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> hIgG1<223>hIgG1
<400> 63<400> 63
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30 20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45 35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60 50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80 65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95 85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110 100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125 115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140 130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160 145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175 165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190 180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205 195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220 210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240 225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255 245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270 260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285 275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300 290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320 305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 325 330
<210> 64<210> 64
<211> 105<211> 105
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> hIgK<223> hIgK
<400> 64<400> 64
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Ser Asp Glu Gln Leu
1 5 10 15 1 5 10 15
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
20 25 30 20 25 30
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
35 40 45 35 40 45
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
50 55 60 50 55 60
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
65 70 75 80 65 70 75 80
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
85 90 95 85 90 95
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105 100 105
<---<---
Claims (101)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018-104391 | 2018-05-31 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2020143562A RU2020143562A (en) | 2022-07-04 |
RU2776821C2 true RU2776821C2 (en) | 2022-07-27 |
Family
ID=
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2428424C2 (en) * | 2005-04-11 | 2011-09-10 | Ксенон Фармасьютикалз Инк. | Spiroheterocyclic compounds and use thereof as therapeutic agents |
US9458118B2 (en) * | 2013-09-10 | 2016-10-04 | Chromocell Corporation | Sodium channel modulators for the treatment of pain and diabetes |
WO2016170009A1 (en) * | 2015-04-21 | 2016-10-27 | Almirall, S.A. | Amino-substituted heterocyclic derivatives as sodium channel inhibitors |
RU2618886C2 (en) * | 2013-02-20 | 2017-05-11 | Регенерон Фармасьютикалс, Инк. | Non-human animals with modified sequences immunoglobulin heavy chains |
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2428424C2 (en) * | 2005-04-11 | 2011-09-10 | Ксенон Фармасьютикалз Инк. | Spiroheterocyclic compounds and use thereof as therapeutic agents |
RU2618886C2 (en) * | 2013-02-20 | 2017-05-11 | Регенерон Фармасьютикалс, Инк. | Non-human animals with modified sequences immunoglobulin heavy chains |
US9458118B2 (en) * | 2013-09-10 | 2016-10-04 | Chromocell Corporation | Sodium channel modulators for the treatment of pain and diabetes |
WO2016170009A1 (en) * | 2015-04-21 | 2016-10-27 | Almirall, S.A. | Amino-substituted heterocyclic derivatives as sodium channel inhibitors |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10899835B2 (en) | IgM Fc and J-chain mutations that affect IgM serum half-life | |
KR101844611B1 (en) | Anti-c5a binding moieties with high blocking activity | |
US20080221307A1 (en) | Neutralizing determinants of IL-17 Receptor A and antibodies that bind thereto | |
CN114887053A (en) | Development and application of TSLP (total stress relaxation) related disease therapeutic agent | |
US11643458B2 (en) | Monoclonal antibody against Nav1.7 | |
RU2756012C2 (en) | Anti-pcsk9 antibody and its application | |
US10954292B2 (en) | Anti-PACAP antibody | |
CN111196849B (en) | Anti-sclerostin antibodies, antigen-binding fragments thereof, and medical uses thereof | |
CN113993534A (en) | Protein conjugates against iRhom2 | |
US9587015B2 (en) | Anti-human CTGF antibody | |
EP3901173A1 (en) | Bispecific protein | |
RU2776821C2 (en) | Monoclonal antibody to nav1.7 | |
RU2741802C2 (en) | Myl9 antibody | |
JP7457880B2 (en) | Novel Nav1.7 monoclonal antibodies | |
US20240210419A1 (en) | Compositions and methods for detecting and regulating fibronectin-integrin interactions and signaling | |
WO2022191162A1 (en) | Anti-ace2 monoclonal antibody | |
CN118119711A (en) | Nav1.7 monoclonal antibodies | |
WO2019054460A1 (en) | Anti-ramp2 antibody |