RU2776812C1 - Pharmaceutical combination including epidermal growth factor and ghrp6 peptide as a secretion stimulator for recovery after brain damage - Google Patents
Pharmaceutical combination including epidermal growth factor and ghrp6 peptide as a secretion stimulator for recovery after brain damage Download PDFInfo
- Publication number
- RU2776812C1 RU2776812C1 RU2021107216A RU2021107216A RU2776812C1 RU 2776812 C1 RU2776812 C1 RU 2776812C1 RU 2021107216 A RU2021107216 A RU 2021107216A RU 2021107216 A RU2021107216 A RU 2021107216A RU 2776812 C1 RU2776812 C1 RU 2776812C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ghrp6
- combination
- egf
- body weight
- cerebral infarction
- Prior art date
Links
- 102100010813 EGF Human genes 0.000 title abstract 4
- 101700033006 EGF Proteins 0.000 title abstract 4
- 229940116977 Epidermal Growth Factor Drugs 0.000 title abstract 4
- WZHKXNSOCOQYQX-UHFFFAOYSA-N 6-amino-2-[[2-[[2-[2-[[2-[[2-amino-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]propanoylamino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]hexanamide Chemical compound C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(=O)NC(CC=1C=CC=CC=1)C(=O)NC(CCCCN)C(N)=O)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 WZHKXNSOCOQYQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract 3
- 208000001183 Brain Injury Diseases 0.000 title abstract 3
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 title abstract 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 title abstract 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 title 1
- 208000002381 Brain Hypoxia Diseases 0.000 abstract 2
- 206010008118 Cerebral infarction Diseases 0.000 abstract 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 abstract 2
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 abstract 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 abstract 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
Images
Abstract
Description
Область техникиTechnical field
Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности к области нейрофармакологии. В частности, оно имеет отношение к фармацевтической комбинации для восстановления после повреждения головного мозга посредством усиления и стимуляции механизмов дифференциации и нейронной специализации в недифференцированных клетках, находящихся в центральной нервной системе, или в нейронах, которые приобретают фенотип и функцию, которые позволяет им заменять другие нейроны, которые погибают из-за ишемического повреждения или протеинопатий. Терапевтическая эффективность комбинации не зависит от момента ее применения.The present invention relates to the field of medicine, in particular to the field of neuropharmacology. In particular, it relates to a pharmaceutical combination for recovery from brain injury by enhancing and stimulating the mechanisms of differentiation and neuronal specialization in undifferentiated cells located in the central nervous system, or in neurons that acquire a phenotype and function that allows them to replace other neurons. that die due to ischemic damage or proteinopathies. The therapeutic efficacy of the combination does not depend on the moment of its application.
Предпосылки создания изобретенияPrerequisites for the creation of the invention
Фармакологический подход к повреждению тканей (ишемическому, геморрагическому, компрессионному, из-за нехватки трофических факторов или любому другому повреждению) в центральной нервной системе представляет собой область, которая, хотя и хорошо изучена, остается бесплодной в отношении эффективных терапевтических результатов и совершенно безуспешной на стадии его внедрения в клиническую практику. Это обусловлено сложностью и очень высокой специализацией клеточных компонентов нервной системы, что препятствует регенерации и замене погибших нейронов и глиальных клеток.The pharmacological approach to tissue injury (ischemic, hemorrhagic, compressive, due to lack of trophic factors, or any other injury) in the central nervous system is an area that, although well understood, remains barren in terms of effective therapeutic results and completely unsuccessful at the stage its implementation in clinical practice. This is due to the complexity and very high specialization of the cellular components of the nervous system, which prevents the regeneration and replacement of dead neurons and glial cells.
Большинство событий, повреждающих ткани нервной системы, происходят во всем мире. Например, ишемический инсульт является второй причиной смерти и третьей ведущей причиной инвалидности во всем мире (Krishnamurthi RV, Neuroepidemiology 2015; 45(3):190-202). Он происходит не только у пожилых людей, поскольку молодые люди также подвержены риску развития ишемических инсультов (Krishnamurthi RV, Neuroepidemiology 2015; 45(3):177-89). Кроме того, случаи травм, нарушающих нервную систему, очень часты и являются причиной инвалидности с высокими социальными издержками (Greenwald BD, J Neurotrauma 2015; 32(23):1883-92).Most events that damage the tissues of the nervous system occur throughout the world. For example, ischemic stroke is the second cause of death and the third leading cause of disability worldwide (Krishnamurthi RV, Neuroepidemiology 2015; 45(3):190-202). It does not only occur in the elderly, as young people are also at risk for ischemic strokes (Krishnamurthi RV, Neuroepidemiology 2015; 45(3):177-89). In addition, cases of trauma that disrupt the nervous system are very common and cause disability with high social costs (Greenwald BD, J Neurotrauma 2015; 32(23):1883-92).
С другой стороны, ряд заболеваний, вызванных морфологическими и функциональными изменениями внутриклеточных белков, известных как протеинопатии, среди которых болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона и боковой амиотрофический склероз, представляют собой серьезную проблему для здоровья во всем мире (Nicholson KA, Neurotherapeutics 2015; 12 (2):376-83). Против последних заболеваний еще нет лечения, направленного на восстановление головного мозга за счет повышения нейропластичности, с целью уменьшения прогрессирующего течения заболевания и/или вызова значительного восстановления. Другие причины нарушения нервной системы, такие как недостатки трофических факторов (Lewis CM, Stem Cell Res Ther 2014; 5(2):32), встречаются не так часто, как вышеупомянутые заболевания и состояния, но они представляют собой огромную проблему для научного сообщества, которому до сих пор не удавалось внедрить терапию, основанную на восстановлении головного мозга, которая была бы важной и повлияла на улучшение качества жизни этих пациентов. Поэтому существует потребность в поиске фармакологических вмешательствах, способствующих восстановлению головного мозга в таких ситуациях, как ишемическое повреждение и протеинопатии, среди прочих. Клиническая оценка рекомбинантных белков с нейротрофической активностью в качестве лекарственных средств-кандидатов для лечения множества заболеваний нервной системы является рациональным подходом к стимуляции восстановления головного мозга. Однако терапевтический эффект указанных белков в клинической практике до сих пор не был продемонстрирован (Henriques A, et al. Frontiers in Neuroscience. 2010; 4:32; Larpthaveesarp A, et al. Brain Sci 2015; 5(2):165-77).On the other hand, a number of diseases caused by morphological and functional changes in intracellular proteins, known as proteinopathies, among which Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease and amyotrophic lateral sclerosis, are a serious health problem worldwide (Nicholson KA, Neurotherapeutics 2015; 12(2):376-83). Against the latter diseases, there is as yet no treatment aimed at restoring the brain by increasing neuroplasticity in order to reduce the progressive course of the disease and/or induce significant recovery. Other causes of nervous system impairment, such as trophic factor deficiencies (Lewis CM, Stem Cell Res Ther 2014; 5(2):32), are not as common as the above diseases and conditions, but they represent a huge challenge to the scientific community, who has so far failed to introduce a brain-repair-based therapy that would be important and improve the quality of life of these patients. Therefore, there is a need to find pharmacological interventions that promote brain recovery in situations such as ischemic injury and proteinopathies, among others. Clinical evaluation of recombinant proteins with neurotrophic activity as drug candidates for the treatment of a variety of diseases of the nervous system is a rational approach to stimulate brain recovery. However, the therapeutic effect of these proteins in clinical practice has not yet been demonstrated (Henriques A, et al. Frontiers in Neuroscience. 2010; 4:32; Larpthaveesarp A, et al. Brain Sci 2015; 5(2):165-77) .
Существует мнение, объективно подкрепленное фактами, что инвалидность по неврологическим нарушениям является необратимой, поскольку ни один из нейропротекторов, которые до сих пор проходили клиническую оценку, не смог аннулировать эту инвалидность (Nicholson KA, Neurotherapeutics 2015; 12 (2):376-83). Эти лекарственные средства не продемонстрировали положительное влияние на годы жизни с поправкой на качество у выживших. Таким образом, поиск терапевтических альтернатив, которые влияют на снижение инвалидности, связанной с нарушениями нервной системы, такими как нарушения, вызванные ишемическим повреждением, протеинопатиями или другими причинами необратимого повреждения нейронов, в настоящее время имеет решающее значение. Указанные терапевтические альтернативы должны способствовать восстановлению головного мозга у пациентов, страдающих нарушением центральной нервной системы.There is an opinion, objectively supported by the facts, that disability due to neurological disorders is irreversible, since none of the neuroprotectors that have been clinically evaluated so far has been able to cancel this disability (Nicholson KA, Neurotherapeutics 2015; 12 (2): 376-83) . These drugs have not shown a positive effect on quality-adjusted life years in survivors. Thus, the search for therapeutic alternatives that affect the reduction of disability associated with disorders of the nervous system, such as those caused by ischemic damage, proteinopathies, or other causes of irreversible neuronal damage, is currently of critical importance. These therapeutic alternatives should promote brain recovery in patients suffering from central nervous system disorders.
Другим критерием является то, что терапевтический подход к ишемическому повреждению головного мозга вместе с нейропротекторным подходом, с помощью тромболизиса (Mowla A, et al, J Neurol Sci 2017; 376:102-5) или нетромболитического лечения (Matsuo R, et al. Stroke 2017; 48(11):3049-56), необходимо провести до истечения 4 часов с момента появления симптомов. Это является одним из основных недостатков известных на сегодняшний день нейропротекторных методов лечения.Another criterion is that a therapeutic approach to ischemic brain injury, together with a neuroprotective approach, via thrombolysis (Mowla A, et al, J Neurol Sci 2017; 376:102-5) or non-thrombolytic treatment (Matsuo R, et al. Stroke 2017; 48(11):3049-56) should be administered within 4 hours of symptom onset. This is one of the major shortcomings of currently known neuroprotective therapies.
Важно различать тот факт, что нейропротекторные терапевтические подходы направлены на ингибирование первичных нейродегенеративных событий. Напротив, терапевтические подходы к восстановлению головного мозга направлены на стимуляцию компенсаторных регенеративных механизмов (Francardo V, et al., Exp Neurol 2017; 298 (Pt B):137-47).It is important to distinguish between the fact that neuroprotective therapeutic approaches aim to inhibit primary neurodegenerative events. In contrast, therapeutic approaches to brain repair aim to stimulate compensatory regenerative mechanisms (Francardo V, et al., Exp Neurol 2017; 298 (Pt B):137-47).
В патентном документе WO2002/053167 описывается комбинация эпидермального фактора роста (EGF) и стимулятора секреции в виде гексапептида, известного как GHRP6, для его сокращенного названия на английском языке (Growth Hormone Releasing Hexapeptide, высвобождающий гормон роста гексапептид). Компоненты комбинации могут применяться одновременно или последовательно для предотвращения повреждения клеток из-за недостатка артериальной крови. Хотя в этом документе упоминается применение этой комбинации для регенеративных или трофических целей, ее применение или применение ее отдельные компоненты для восстановления головного мозга не демонстрируется и не предполагается. С другой стороны, в WO 2006/092106 описывается применение комбинации EGF-GHRP6 для лечения аутоиммунных нарушений нервной системы. Однако в указанном патентном документе не демонстрируется и не предполагается способность комбинации к восстановлению после повреждения головного мозга. В этом изобретении количества EGF с терапевтической эффективностью находятся в диапазоне 1-10 мкг/кг веса тела.Patent document WO2002/053167 describes a combination of epidermal growth factor (EGF) and a hexapeptide secretion stimulant known as GHRP6 for its English abbreviation ( Growth Hormone Releasing Hexapeptide ). The components of the combination can be used simultaneously or sequentially to prevent cell damage due to lack of arterial blood. Although this document mentions the use of this combination for regenerative or trophic purposes, its use or the use of its individual components for brain recovery is not demonstrated or suggested. On the other hand, WO 2006/092106 describes the use of a combination of EGF-GHRP6 for the treatment of autoimmune disorders of the nervous system. However, said patent document does not demonstrate or suggest the ability of the combination to recover from brain injury. In this invention, amounts of EGF with therapeutic efficacy are in the range of 1-10 μg/kg of body weight.
Кроме того, исследования in vivo подтвердили, что комбинация EGF-GHRP6 оказывает нейропротекторное действие в экспериментальных моделях обширного и очагового инфаркта мозга (García DB-H., Et al. Restor Neurol Neurosci 2013; 31(2):213-23). В этих моделях комбинация снижает число или тяжесть неврологических симптомов, уменьшает объем инфаркта, сохраняет плотность нейронов и увеличивает выживаемость у животных с инфарктом по сравнению с контрольными животными, которым вводили носитель. Это нейропротекторное действие возникает только в том случае, если лечение начато в пределах 4 часов после ишемического инсульта. Кроме того, оба компонента комбинации вводятся в количестве порядка сотен микрограммов активного ингредиента на килограмм веса (Subiros N, et al. Neurol Res 2015; 38(3):187-195). Эти исследования на моделях на животных показали терапевтическую эффективность фармакологического вмешательства только в пределах очень короткого периода времени, что было похоже на терапевтическое окно, описанное для других нейропротекторных воздействий (Alberts MJ. Circulation 2017; 135(2):140-2) с использованием доз порядка 100 мкг EGF на кг веса тела и 600 мкг GHRP6 на кг веса тела. Предшествующие исследования не продемонстрировали терапевтическую эффективность по показателю восстановления головного мозга. Кроме того, когда введение фармакологической комбинации происходит через 4 часа после инсульта, нет никаких указаний на терапевтическую эффективность, ни клинически, ни гистологически, по показателю уменьшения объема инфаркта мозга. С другой стороны, применение комбинации EGF-GHRP6 для неврологического восстановления также изучалось на модели аксональной патологии на животных, которая имитирует болезни двигательных нейронов (Del Barco DG et al., Neurotox Res 2011; 19(1):195-209). Терапевтический эффект достигался при дозах порядка 200 мкг на килограмм веса для EGF и 660 мкг на килограмм веса для GHRP6. Нейропластичность описывается в литературе как способность центральной нервной системы к адаптации в ответ на изменения в окружающей среде или вследствие повреждений. Более того, нейропластичность представляет собой способность групп нейронов к реагированию, функциональному и неврологическому, на нехватки вследствие инсультов или к приему на себя роли других поврежденных групп нейронов, на основе реорганизации синапсов и возможности формирования новых синапсов от нейрона или от нескольких поврежденных нейронов (Kaas JH. Neural Plasticity A2 - Smelser, Neil J. En: Baltes PB, editor. International Encyclopedia of the Social & Behavioral Sciences.Oxford: Pergamon; 2001. p. 10542-6).In addition, in vivo studies have confirmed that the combination of EGF-GHRP6 has a neuroprotective effect in experimental models of extensive and focal cerebral infarction (García DB-H., Et al. Restor Neurol Neurosci 2013; 31(2):213-23). In these models, the combination reduces the number or severity of neurological symptoms, reduces infarct volume, preserves neuronal density, and increases survival in infarct animals compared to vehicle-treated control animals. This neuroprotective effect only occurs if treatment is started within 4 hours of ischemic stroke. In addition, both components of the combination are administered in amounts on the order of hundreds of micrograms of active ingredient per kilogram of weight (Subiros N, et al. Neurol Res 2015; 38(3):187-195). These animal model studies showed the therapeutic efficacy of the pharmacological intervention only within a very short period of time, which was similar to the therapeutic window described for other neuroprotective interventions (Alberts MJ. Circulation 2017; 135(2):140-2) using doses about 100 µg of EGF per kg of body weight and 600 µg of GHRP6 per kg of body weight. Previous studies have not demonstrated therapeutic efficacy in terms of brain recovery. In addition, when the administration of the pharmacological combination occurs 4 hours after stroke, there is no indication of therapeutic efficacy, either clinically or histologically, in terms of reduction in brain infarct volume. On the other hand, the use of EGF-GHRP6 combination for neurological recovery has also been studied in an animal model of axonal pathology that mimics motor neuron diseases (Del Barco DG et al., Neurotox Res 2011; 19(1):195-209). The therapeutic effect was achieved at doses of the order of 200 μg per kilogram of body weight for EGF and 660 μg per kilogram of body weight for GHRP6. Neuroplasticity is described in the literature as the ability of the central nervous system to adapt in response to environmental changes or injury. Moreover, neuroplasticity is the ability of groups of neurons to respond, functionally and neurologically, to shortages due to strokes or to assume the role of other damaged groups of neurons, based on the reorganization of synapses and the possibility of forming new synapses from a neuron or from several damaged neurons (Kaas JH Neural Plasticity A2 - Smelser, Neil J. En: Baltes PB, editor. International Encyclopedia of the Social & Behavioral Sciences. Oxford: Pergamon; 2001. p. 10542-6).
Существует эндогенная физиологическая реакция нейропластичности, которой недостаточно для обеспечения нейронов и глиальных клеток, чтобы заместить утраченные сложные функции. До сих пор нейропластичность, способствующая восстановлению головного мозга, была опробована и достигнута с помощью методов, которые включают физическую тренировку или обучение когнитивным навыкам, но ни в одном случае фармакологическое вмешательство не было успешно использовано для этой цели. Следовательно, существует потребность в фармакологических вмешательствах, способствующих восстановлению головного мозга. Желательно, чтобы эти терапевтические альтернативы оказывали влияние на снижение инвалидности, возникающей в результате таких состояний нервной системы, как те, которые вызваны ишемическим повреждением, протеинопатиями или другими причинами необратимого повреждения нейронов.There is an endogenous physiological response of neuroplasticity, which is not enough to provide neurons and glial cells to replace the lost complex functions. Until now, neuroplasticity that promotes brain recovery has been tried and achieved through methods that include physical training or cognitive skills training, but in no case has pharmacological intervention been successfully used for this purpose. Therefore, there is a need for pharmacological interventions that promote brain recovery. It is desirable that these therapeutic alternatives have the effect of reducing the disability resulting from conditions of the nervous system, such as those caused by ischemic damage, proteinopathies or other causes of irreversible neuronal damage.
Краткое изложение сущности настоящего изобретенияBrief summary of the present invention
Настоящее изобретение способствует решению вышеупомянутой проблемы, предоставляя фармацевтическую комбинацию для восстановления после повреждения головного мозга, включающую EGF и пептид GHRP6 в качестве стимулятора секрецию гормона роста. Указанная комбинация является эффективной для повышения нейропластичности в связи с предыдущим повреждением, таким как ишемическое повреждение, протеинопатии или другие причины необратимого повреждения нейронов, за исключением аутоиммунных заболеваний.The present invention contributes to solving the aforementioned problem by providing a pharmaceutical combination for brain injury recovery comprising EGF and GHRP6 peptide as a growth hormone secretagogue. Said combination is effective in increasing neuroplasticity due to previous injury such as ischemic injury, proteinopathies, or other causes of irreversible neuronal damage, with the exception of autoimmune diseases.
В контексте настоящего изобретения термин «фармацевтическая комбинация» относится к комбинации двух активных фармацевтических ингредиентов с различными механизмами биологического действия, некоторыми общими и другими исключительными, причем такие ингредиенты или активные вещества вводятся одновременно или последовательно в ходе лечения нуждающемуся пациенту.In the context of the present invention, the term "pharmaceutical combination" refers to the combination of two active pharmaceutical ingredients with different mechanisms of biological action, some common and others exclusive, and such ingredients or active substances are administered simultaneously or sequentially during treatment to a patient in need.
Пептид GHRP6 в качестве стимулятора секреции гормона роста хорошо известен специалистам в данной области техники. Он имеет следующую аминокислотную последовательность: His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH2. EGF представляет собой фактор роста, открытый в прошлом веке, который применяется в фармацевтике, косметических средствах и тканевой инженерии.The GHRP6 peptide as a growth hormone secretagogue is well known to those skilled in the art. It has the following amino acid sequence: His-D-Trp-Ala-Trp-D-Phe-Lys-NH 2 . EGF is a growth factor discovered in the last century, which is used in pharmaceuticals, cosmetics and tissue engineering.
«Восстановление после повреждения головного мозга» в контексте настоящего изобретения требует регенерации нейронных и глиальных компонентов, поддерживаемой активацией механизмов нейропластичности. Пути активации таких механизмов стимулируются, когда, например, подавляется экспрессия гена, кодирующего галектин-3, одновременно с увеличением экспрессии гена, кодирующего гемопексин, экспрессию которого можно определить с помощью nanoLC-MS (нанофлюидно-жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией), как описано Martinez и другими (Biochemistry and Biophysics Reports 5 (2016) 379-387). Галектин-3 представляет собой лектин, который способствует активации микроглии и, следовательно, помогает увеличить и расширить воспаление в головном мозге, что препятствует эндогенной или стимулированной регенерации. Он был связан с худшим прогнозом у пациентов (Denes, A., y otros, Brain Behav. Immun. 2010; 24: 708-723). Гемопексин, с другой стороны, представляет собой белок, нейрорегенеративная функция которого связана со стимуляцией ангиогенеза после повреждения в результате ишемии головного мозга и/или реперфузии (Dong B y otros, BMC Anesthesiol 2018; 18:2)."Recovery from brain injury" in the context of the present invention requires the regeneration of neuronal and glial components supported by the activation of neuroplasticity mechanisms. Activation pathways of such mechanisms are stimulated when, for example, the expression of the gene encoding galectin-3 is suppressed, simultaneously with an increase in the expression of the gene encoding hemopexin, the expression of which can be determined using nanoLC-MS (nanofluid chromatography combined with mass spectrometry), as described by Martinez et al. (Biochemistry and Biophysics Reports 5 (2016) 379-387). Galectin-3 is a lectin that promotes microglia activation and therefore helps increase and expand inflammation in the brain, which prevents endogenous or stimulated regeneration. It has been associated with worse prognosis in patients (Denes, A., y otros, Brain Behav. Immun. 2010; 24: 708-723). Hemopexin, on the other hand, is a protein whose neuroregenerative function is associated with the stimulation of angiogenesis after injury due to cerebral ischemia and/or reperfusion (Dong B y otros, BMC Anesthesiol 2018; 18:2).
В настоящем изобретении термин «пластичность мозга», также известный как «нейропластичность», описывается как способность к установлению новых нейронных цепей (другими нейронами или клетками, которые дифференцируются в направлении нейронного фенотипа), которые позволяют выполнять сложные функции нервной системы, утраченные или нарушенные вследствие ишемических, токсических, хирургических повреждений, травм, протеинопатий, генетических нарушений или других причин необратимого повреждения нейронов, за исключением аутоиммунных заболеваний. Эта способность вносит вклад в восстановление головного мозга.In the present invention, the term "brain plasticity", also known as "neuroplasticity", is described as the ability to establish new neural circuits (by other neurons or cells that differentiate in the direction of a neuronal phenotype) that allow the complex functions of the nervous system to be lost or impaired due to ischemic, toxic, surgical injury, trauma, proteinopathies, genetic disorders, or other causes of irreversible neuronal damage, excluding autoimmune diseases. This ability contributes to the recovery of the brain.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическая комбинация включает от 0,3 мкг до 0,9 мкг EGF на кг веса тела и от 30 мкг до 80 мкг GHRP6 на кг веса тела, эти компоненты проявляют синергетическое действие. Совместное введение этих активных ингредиентов в конкретной схеме введения доз и в течение определенного периода времени показало терапевтическую эффективность, превосходящую таковую, описанную в литературе, предшествующей настоящему изобретению. Восстановление головного мозга, достигаемое с помощью вышеупомянутой фармацевтической комбинации, подтверждается сохранением сложных функций, таких как память и способность к обучению, а также несомненным и быстрым восстановлением двигательных, сенсорных и когнитивных способностей у подвергнутых лечению пациентов. Удивительно, но результаты показали, что при очень неблагоприятных сценариях неврологического нарушения с более чем 80% поврежденных двигательных нейронов, как это происходит при боковом амиотрофическом склерозе, восстановление головного и спинного мозга возможно за счет стимуляции и повышения физиологической нейропластичности и, следовательно, возможно переломить характерное вялое течение этого заболевания.In one embodiment of the present invention, the pharmaceutical combination comprises 0.3 μg to 0.9 μg of EGF per kg of body weight and 30 μg to 80 μg of GHRP6 per kg of body weight, these components exhibit a synergistic effect. The co-administration of these active ingredients in a specific dosing regimen and over a period of time has shown a therapeutic efficacy superior to that described in the literature prior to the present invention. The recovery of the brain achieved with the above pharmaceutical combination is evidenced by the preservation of complex functions such as memory and learning ability, as well as the undeniable and rapid recovery of motor, sensory and cognitive abilities in treated patients. Surprisingly, the results showed that under very adverse scenarios of neurological impairment with more than 80% of motor neurons damaged, as occurs in amyotrophic lateral sclerosis, repair of the brain and spinal cord is possible through stimulation and increase in physiological neuroplasticity and, therefore, it is possible to reverse the characteristic sluggish course of this disease.
Указанная фармацевтическая комбинация в некоторой степени способствует замещению утраченной трофики вследствие первичного повреждения. Преимущественно, это усиление механизмов нейропластичности приводит к терапевтической эффективности, не ограничиваясь фармакологическим вмешательством, проводимым в первые часы после повреждения головного мозга. Это является заметным отличием от нейропротекторных вмешательств предшествующего уровня техники. Более того, это усиление механизмов нейропластичности имеет решающее значение для восстановления головного мозга, поскольку физиологическая реакция нейропластичности, запускаемая сразу после инсульта, недостаточна для возращения трофики, утраченной в результате первичного повреждения, и не оказывает значительное влияние на неврологическое восстановление у нуждающегося пациента.The specified pharmaceutical combination to some extent contributes to the replacement of lost trophism due to primary damage. Preferably, this enhancement of neuroplasticity mechanisms leads to therapeutic efficacy, not limited to pharmacological intervention, carried out in the first hours after brain injury. This is a marked difference from prior art neuroprotective interventions. Moreover, this enhancement of neuroplasticity mechanisms is critical for brain recovery, since the physiological neuroplasticity response triggered immediately after a stroke is not sufficient to restore the trophism lost as a result of the primary injury and does not significantly affect neurological recovery in a patient in need.
Фармацевтическая комбинация по настоящему изобретению способствует восстановлению головного мозга при заболеваниях нервной системы, которые проявляются двигательными, сенсорными, вегетативными и когнитивными нарушениями, вызванными ишемическими, токсическими, хирургическими повреждениями, травмами, протеинопатиями, генетическими нарушениями или другими причинами необратимого повреждения нейронов, к которым не относятся аутоиммунные заболевания.The pharmaceutical combination of the present invention promotes brain recovery in diseases of the nervous system, which are manifested by motor, sensory, autonomic and cognitive disorders caused by ischemic, toxic, surgical injuries, trauma, proteinopathies, genetic disorders or other causes of irreversible damage to neurons, which do not include autoimmune diseases.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения компоненты комбинации EGH-GHRP6 вводятся парентерально либо последовательно, либо одновременно. Пути парентерального введения компонентов комбинации включают внутривенный, интратекальный, интрацеребровентрикулярный путь, в мозжечково-мозговую цистерну или интраназальный путь. В частности, без ограничения, интратекальное введение выполняется посредством люмбальной пункции и/или с использованием устройства, предназначенного для такого рода введения. В случае интраназального пути введение комбинации направлено на удлинение обонятельных луковиц. В одном варианте осуществления настоящего изобретения комбинация состоит из набора, включающего: a) контейнер или флакон, содержащий EGF и фармацевтически приемлемые наполнители или носители, и b) контейнер или флакон, содержащий GHRP6 и фармацевтически приемлемые наполнители или носители. В конкретном варианте осуществления EGF в наборе находится в диапазоне от 5 мкг до 80 мкг на контейнер, а GHRP6 находится в диапазоне от 0,5 мг до 6 мг на контейнер.In one embodiment of the present invention, the components of the EGH-GHRP6 combination are administered parenterally, either sequentially or simultaneously. Pathways for parenteral administration of the components of the combination include the intravenous, intrathecal, intracerebroventricular, cerebellar cistern, or intranasal routes. In particular, without limitation, intrathecal administration is performed by means of a lumbar puncture and/or using a device designed for this kind of administration. In the case of the intranasal route, administration of the combination aims to lengthen the olfactory bulbs. In one embodiment of the present invention, the combination consists of a kit including: a) a container or vial containing EGF and pharmaceutically acceptable excipients or carriers, and b) a container or vial containing GHRP6 and pharmaceutically acceptable excipients or carriers. In a specific embodiment, the EGF in the kit is in the range of 5 μg to 80 μg per container and the GHRP6 is in the range of 0.5 mg to 6 mg per container.
В другом аспекте настоящим изобретением предусматривается применение EGF и GHRP6 для производства фармацевтической комбинации для восстановления после повреждения головного мозга. Применение этой фармацевтической комбинации для восстановления головного мозга особенно выгодно. Синергизм между обоими компонентами стимулирует дифференциацию стволовых клеток или недифференцированных нейронов, или клеток на стадии G0, чтобы они становились клетками с нейронным и/или глиальным фенотипом, с возможностью приобретения функций нейронов и глии, которые были утрачены в результате предыдущего повреждения иного характера. Применение этой фармацевтической комбинации, предпочтительно в дозах, предусмотренных настоящим изобретением, имеет особые преимущества, поскольку оно не связано с умеренными или тяжелыми побочными эффектами. Этот терапевтический метод не представляет никакого риска для пациентов.In another aspect, the present invention provides for the use of EGF and GHRP6 for the manufacture of a pharmaceutical combination for recovery from brain injury. The use of this pharmaceutical combination for brain recovery is particularly advantageous. The synergy between both components stimulates the differentiation of stem cells or undifferentiated neurons or cells at the G0 stage to become cells with a neuronal and/or glial phenotype, with the possibility of acquiring neuronal and glial functions that were lost as a result of previous damage of a different nature. The use of this pharmaceutical combination, preferably at the dosages provided by the present invention, has particular advantages since it is not associated with moderate or severe side effects. This therapeutic method poses no risk to patients.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения комбинация применяется для восстановления после повреждения головного мозга в виде инфаркта мозга. Удивительно, но эта фармацевтическая комбинация приводит к аннулированию нарушения двигательной активности, вызванному инфарктом мозга, как геморрагическим, так и ишемическим. Синергизм, который существует между компонентами фармацевтической комбинации настоящего изобретения, выражается в восстановлении головного мозга, что объективно представляется в виде снижения инвалидности, существенного улучшения качества жизни и выживаемости подвергнутых лечение пациентов. Эти результаты, относящиеся к эффективности, не зависели от времени первого введения, т.е. они не были связаны с узким терапевтическим окном. Это ломает существующую парадигму в отношении нейропротекторных вмешательств. Кроме того, это является неожиданным в свете результатов, полученных с использованием комбинации EGF и GHRP6 на моделях ишемии головного мозга на животных, и тех, которые были описаны в случае других подобных клинических вмешательств (Mowla A, et al., J Neurol Sci 2017; 376:102-5), когда терапевтическая эффективность демонстрируется только тогда, когда лечение начинается до 4 часов после ишемического инсульта.In one embodiment of the present invention, the combination is used to recover from brain injury in the form of cerebral infarction. Surprisingly, this pharmaceutical combination leads to the reversal of movement disorders caused by cerebral infarction, both hemorrhagic and ischemic. The synergy that exists between the components of the pharmaceutical combination of the present invention is expressed in the restoration of the brain, which objectively appears as a reduction in disability, a significant improvement in the quality of life and survival of treated patients. These efficacy results were independent of the time of the first administration, i.e. they were not associated with a narrow therapeutic window. This breaks the current paradigm regarding neuroprotective interventions. Furthermore, this is unexpected in light of the results obtained using the combination of EGF and GHRP6 in animal models of cerebral ischemia and those reported in other similar clinical interventions (Mowla A, et al., J Neurol Sci 2017; 376:102-5) when therapeutic efficacy is only demonstrated when treatment is started up to 4 hours after ischemic stroke.
Напротив, введение фармацевтической комбинации по настоящему изобретению не ограничивается характеристическим терапевтическим окном, составляющим приблизительно от 4 до 6 часов (для нейропротекторных, тромболитических или нетромболитических вмешательств) в случае ишемических нарушений. Таким образом, в клиническом исследовании настоящего изобретения первое применение комбинации имело место между начальным моментом диагностирования инфаркта мозга и 24 часами после постановки диагноза.In contrast, the administration of the pharmaceutical combination of the present invention is not limited to a characteristic therapeutic window of approximately 4 to 6 hours (for neuroprotective, thrombolytic or non-thrombolytic interventions) in the case of ischemic disorders. Thus, in the clinical study of the present invention, the first use of the combination took place between the initial diagnosis of cerebral infarction and 24 hours after diagnosis.
Кроме того, фармацевтическую комбинацию по настоящему изобретению применяли, иногда, для новорожденных, серьезно пораженных тяжелой гипоксией у новорожденных. Был получен очень благоприятный результат не только в отношении выживаемости этих новорожденных, но и в плане восстановления головного мозга за счет повышения нейропластичности. Оценка этих младенцев в конце первого года жизни показала меньшее, чем ожидалось, число неврологических осложнений, учитывая величину и тяжесть гипоксии у новорожденных. Подобным образом и неожиданно было установлено, что фармацевтическая комбинация по настоящему изобретению повышает мышечную силу и улучшает глотательный рефлекс, и снижает прогрессирование дизартрии у подвергнутых экспериментальному лечению пациентов с боковым амиотрофическим склерозом, у которых его начало проявилось в продолговатом мозге.In addition, the pharmaceutical combination of the present invention has occasionally been used in neonates severely affected by severe neonatal hypoxia. A very favorable result was obtained not only in terms of the survival of these newborns, but also in terms of brain recovery due to increased neuroplasticity. Evaluation of these infants at the end of the first year of life showed fewer than expected neurological complications, given the magnitude and severity of neonatal hypoxia. Similarly, and unexpectedly, the pharmaceutical combination of the present invention has been found to increase muscle strength and improve the swallowing reflex and reduce the progression of dysarthria in experimentally treated patients with amyotrophic lateral sclerosis whose onset is in the medulla oblongata.
Следовательно, настоящим изобретением также предусматривается способ восстановления после повреждения головного мозга, в котором терапевтически эффективное количество фармацевтической комбинации, включающей EGF и GHRP6, вводится пациентам, нуждающимся в этом. В одном варианте осуществления настоящего изобретения терапевтически эффективное количество EGF составляет от 0,3 мкг до 0,9 мкг этого фактора роста на кг веса тела, а терапевтически эффективное количество GHRP6 составляет от 30 мкг до 80 мкг GHRP6 на кг веса тела пациента. Этот подход настоящего изобретения применим, когда повреждение имеет ишемический, токсический, хирургический, травматический характер, вызвано протеинопатиями, генетическими нарушениями или другими причинами необратимого повреждения нейронов, за исключением аутоиммунных заболеваний.Therefore, the present invention also provides a method for recovering from brain injury, wherein a therapeutically effective amount of a pharmaceutical combination comprising EGF and GHRP6 is administered to patients in need thereof. In one embodiment of the present invention, a therapeutically effective amount of EGF is from 0.3 μg to 0.9 μg of this growth factor per kg of body weight, and a therapeutically effective amount of GHRP6 is from 30 μg to 80 μg of GHRP6 per kg of the patient's body weight. This approach of the present invention is applicable when the damage is of an ischemic, toxic, surgical, traumatic nature, caused by proteinopathies, genetic disorders, or other causes of irreversible neuronal damage, with the exception of autoimmune diseases.
В конкретном варианте осуществления способ по настоящему изобретению применяется, когда повреждения головного мозга вызвано инфарктом мозга или тяжелой гипоксией головного мозга у новорожденного. В другом варианте осуществления способ по настоящему изобретению применяется в связи с обширным и хроническим повреждением двигательных нейронов, как в случае бокового амиотрофического склероза, поскольку он снижает скорость прогрессирования указанного заболевания, а также уменьшает тяжесть характерных неврологических симптомов. Комбинацию вводят при лечении болезни двигательного нейрона прогрессирующего и вялого течения, для повышения мышечной силы, глотательного рефлекса и уменьшения дизартрии.In a specific embodiment, the method of the present invention is applied when brain damage is caused by cerebral infarction or severe cerebral hypoxia in a newborn. In another embodiment, the method of the present invention is applied in connection with extensive and chronic damage to motor neurons, as in the case of amyotrophic lateral sclerosis, since it reduces the rate of progression of this disease, as well as reduces the severity of characteristic neurological symptoms. The combination is administered in the treatment of progressive and flaccid motor neuron disease, to increase muscle strength, swallowing reflex and reduce dysarthria.
Терапевтическая комбинация, которую вводят в способе восстановления головного мозга по настоящему изобретению, помимо повышения нейропластичности, сама по себе представляет трофическую поддержку, аналогичную той, которая создается физиологически на стадиях эмбриона и плода. Это благоприятствует не только нейронам и/или глиальным клеткам, но и всем компонентам нейроваскулярной единицы. Следовательно, трофическая поддержка, предоставляемая указанной фармацевтической комбинацией, имитирует физиологическую среду тканей нервной системы.The therapeutic combination administered in the brain repair method of the present invention, in addition to enhancing neuroplasticity, is in itself a trophic support similar to that produced physiologically in the embryonic and fetal stages. This favors not only neurons and/or glial cells, but all components of the neurovascular unit. Therefore, the trophic support provided by said pharmaceutical combination mimics the physiological environment of the tissues of the nervous system.
Краткое описание чертежейBrief description of the drawings
Фиг. 1. Графическое представление результатов протеомных экспериментов. На фиг. 1А представлена тепловая карта всех белков, идентифицированных в каждом хроматографическом цикле, демонстрирующая различный профиль экспрессии через 24 часа после лечения крыс комбинацией 0,6 мкг EGF/кг веса тела и 40 мкг GHRP6/кг веса тела (A), по сравнению с лечением носителем (C), у крыс с очаговым инфарктом мозга, а также по сравнению с контрольной группой, подвергнутой псевдооперации (B). На фиг. 1B представлены вулканные диаграммы, показывающие дифференциально экспрессируемые белки в экспериментальной группе, подвергнутой лечению комбинацией (0,6 мкг EGF/кг веса тела и 40 мкг GHRP6/кг веса тела), по сравнению с контрольной группой, получавшей носитель. Fig. 1 . Graphical representation of the results of proteomic experiments. In FIG. 1A is a heat map of all proteins identified in each chromatographic run showing a different expression profile 24 hours after treatment of rats with the combination of 0.6 μg EGF/kg bw and 40 μg GHRP6/kg bw (A), compared to vehicle treatment. (C), in rats with focal cerebral infarction, and also compared with pseudo-surgery controls (B). In FIG. 1B are volcano graphs showing the differentially expressed proteins in the experimental group treated with the combination (0.6 μg EGF/kg body weight and 40 μg GHRP6/kg body weight) compared to the vehicle control group.
Фиг. 2. Стратификация пациентов с инфарктом мозга в соответствии с клинической оценкой тяжести неврологического состояния на момент постановки диагноза. Пациенты были случайным образом расчленены на три группы лечения. Клиническая оценка тяжести неврологического состояния осуществлялась в соответствии с критериями шкалы NIHSS. Fig. 2 . Stratification of patients with cerebral infarction according to the clinical assessment of the severity of the neurological condition at the time of diagnosis. Patients were randomly divided into three treatment groups. Clinical assessment of the severity of the neurological condition was carried out in accordance with the NIHSS criteria.
Фиг. 3. Процент выживаемости пациентов с инфарктом мозга, получавших два уровня доз комбинации EGF и GHRP6 или традиционную терапию. Fig. 3 . Survival percentage of patients with cerebral infarction who received two dose levels of a combination of EGF and GHRP6 or conventional therapy.
Фиг. 4. Распределение результатов, наблюдаемых у пациентов, согласно неврологической оценке на основе модифицированной шкалы Ренкина, через 90 дней после появления симптомов инфаркта мозга. Пациенты получали два уровня доз комбинации EGF-GHRP6 или традиционную терапию. Панели A-C соответствуют степени тяжести инфаркта мозга, оцененной по шкале NIHSS на момент постановки диагноза. Разные буквы указывают на значимые различия, p<0,001, во всех случаях, согласно критерию хи-квадрат для сравнения долей. Fig. 4 . Distribution of outcomes observed in patients, according to the neurological assessment based on the modified Rankine scale, 90 days after the onset of symptoms of cerebral infarction. Patients received two dose levels of the EGF-GHRP6 combination or conventional therapy. Panels AC correspond to the severity of cerebral infarction, assessed by the NIHSS scale at the time of diagnosis. Different letters indicate significant differences, p<0.001, in all cases, according to a chi-square test for proportion comparisons.
Фиг. 5. Сравнение уровней галектина-3 в сыворотке пациентов, получавших традиционную терапию или два уровня доз комбинации EGF-GHRP6, с использованием диаграмм в виде блоков с усами. Различия между тремя группами сравнивали, используя критерий Краскела-Уоллиса, а затем критерия Данна. Одинаковые буквы указывают на отсутствие значимых различий, разные буквы указывают на статистически значимые различия. Fig. 5 . Comparison of serum levels of galectin-3 in patients treated with conventional therapy or two dose levels of EGF-GHRP6 combination using bar graphs with whiskers. Differences between the three groups were compared using the Kruskal-Wallis test and then Dunn's test. Same letters indicate no significant differences, different letters indicate statistically significant differences.
Фиг. 6. Линейный регрессионный анализ, демонстрирующий, что в случае группы пациентов, подвергнутой лечению фармацевтической комбинацией 0,8 мкг EGF/кг веса тела и 50 мкг GHRP6/кг веса тела, нет значимой корреляции между временем начала лечения и клиническим развитием за 90 дней, по шкале Ренкина (0-5) (A). В случае группы, получавшей комбинацию 10 мкг EGF/кг теса тела и 5 мкг GHRP6/кг веса тела, демонстрируется положительная и значимая корреляция между временем начала лечения и клиническим развитием по шкале Ренкина (0-5) (В). Fig. 6 . Linear regression analysis demonstrating that in the case of the group of patients treated with the pharmaceutical combination of 0.8 µg EGF/kg body weight and 50 µg GHRP6/kg body weight, there is no significant correlation between the time of treatment initiation and clinical development at 90 days, according to the scale Rankine (0-5) (A). In the case of the group receiving the combination of 10 μg EGF/kg body weight and 5 μg GHRP6/kg body weight, a positive and significant correlation between the time of treatment initiation and clinical development on the Rankine scale (0-5) (B) is demonstrated.
Фиг. 7. Анализ оценки когнитивной функции по монреальской шкале (MoCA) через 2 и 6 месяцев после инфаркта мозга у пациентов, получавших комбинированную терапию, с использованием двух уровней доз комбинации EGF-GHRP6, или традиционную терапию. В него также входит контрольная группа из 30 пациентов с неневрологическими заболеваниями. Звездочки указывают на статистически значимые различия согласно критерию Краскела-Уоллиса, а затем критерию Данна. Fig. 7 . Analysis of the Montreal Cognitive Assessment (MoCA) score at 2 and 6 months after cerebral infarction in patients receiving combination therapy using two dose levels of the EGF-GHRP6 combination, or conventional therapy. It also includes a control group of 30 patients with non-neurological diseases. Asterisks indicate statistically significant differences according to the Kruskal-Wallis test and then Dunn's test.
Подробное описание вариантов осуществления/примеры вариантов осуществленияDetailed Description of Embodiments/Examples of Embodiments
Пример 1. Анализ дифференциальной экспрессии белков, приводящих к лечению с использованием EGF и GHRP6, в зоне ишемической полутени у крыс с очаговым инфарктом мозгаExample 1 Differential Expression Analysis of Proteins Leading to EGF and GHRP6 Treatment in Ischemic Penumbra in Rats with Focal Cerebral Infarction
Чтобы иметь представление об эффекте лечения комбинацией EGF-GHRP6 в зоне ишемии полутени, был проведен эксперимент на крысах с очаговым инфарктом мозга, вызванным внутримозговым введением эндотелина 1. Через два часа после внутримозгового введения эндотелина 1 крыс подвергали лечению комбинацией EGF-GHRP6 (0,6 мкг/кг веса тела EGF и 40 мкг/кг веса тела GHRP6, n=9) или носителем (n=10). За обеими экспериментальными группами наблюдали, и животных каждой группы умерщвляли вместе с животными из группы, подвергнутой псевдооперации, через 3, 5 и 24 часа после лечений указанной фармацевтической комбинацией. Гомогенаты тканей головного мозга всех животных были приготовлены и объединены в три группы. Были выполнены следующие процедуры: общие белки, ферментативное расщепление, анализ смеси пептидов с помощью жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии (ЖХ-МС/МС) и идентификация белков. Последнее было выполнено в базах данных о последовательностях на основе спектров МС/МС, что сократило поиск до таксономии Rattus norvegicus в базе данных Swissprot (29982 белка, апрель 2016 г.). Для безмаркерной количественной оценки в качестве статистического инструмента использовалась программа Perseus v.1.5.2.6. Рассматривали не менее трех копий, определенных количественно для каждого белка. Парный тест проводили для каждого представляющего интерес состояния относительно контрольных животных, подвергнутых псевдооперации, или между животными, получавшими комбинацию EGF-GHRP6, и не подвергнутыми лечению животными. Нулевая гипотеза была отвергнута для белков с коэффициентом изменения ≥1,5 и р-значением, составляющим менее 0,05. Для группы белков со значительными изменениями также учитывался уровень ложноположительных результатов (FDR), составляющий 5%.In order to have an idea of the effect of treatment with a combination of EGF-GHRP6 in the zone of penumbra ischemia, an experiment was conducted on rats with focal cerebral infarction caused by intracerebral administration of endothelin 1. Two hours after intracerebral administration of endothelin 1, rats were treated with a combination of EGF-GHRP6 (0.6 µg/kg bw EGF and 40 µg/kg bw GHRP6, n=9) or vehicle (n=10). Both experimental groups were observed and the animals of each group were euthanized together with the animals of the
Количественный анализ каждого ишемического образца от животного выполняли путем сравнения с подвергнутыми псевдооперации животными одновременно. Кроме того, животных с очаговым инфарктом мозга, подвергнутыми лечению комбинацией EGF-GHRP6, сравнивали с животными, получавшими носитель. Наибольшее количество белков, изменяющих уровень своей экспрессии, было выявлено под действием комбинации через 24 часа после лечения. 97 белков увеличивали уровни своей экспрессии, и 124 белка снижали их. Результаты протеомных экспериментов можно увидеть на фиг. 1.Quantitative analysis of each ischemic sample from an animal was performed by comparison with pseudo-operated animals at the same time. In addition, animals with focal cerebral infarction treated with the EGF-GHRP6 combination were compared with animals treated with vehicle. The greatest number of proteins that change the level of their expression was detected under the action of the combination 24 hours after treatment. 97 proteins increased their expression levels and 124 proteins decreased them. The results of the proteomic experiments can be seen in Fig. one.
Среди белков, которые значительно снижали уровни своей экспрессии в зоне ишемической полутени, благодаря эффекту комбинированного лечения EGF-GHRP6, находятся галектин-3 и переносчик возбуждающих аминокислот типа 2. Напротив, белки гемопексин, неудезин, цитоглобин, парвальбумин и кальбиндин значительно увеличивали уровни своей экспрессии.Among the proteins that significantly reduced their expression levels in the ischemic penumbra due to the effect of combined treatment with EGF-GHRP6 are galectin-3 and excitatory amino
Пример 2. Эффект введения комбинации EGF-GHRP6 на восстановление головного мозга у пациентов, перенесших инфаркт мозгаExample 2 Effect of EGF-GHRP6 Combination Administration on Brain Recovery in Patients After Cerebral Infarction
Пятьдесят пациентов, перенесших инфаркт мозга ишемической этиологии, получали лечение комбинацией EGF-GHRP6 с момента постановки диагноза. Диагностика включала временной интервал до 24 часов после появления симптомов. Лечение проводилось в течение недели и состояло из парентерального последовательного введения 0,8 мкг/кг веса тела EGF и 50 мкг/кг веса тела GHRP6 каждые 12 часов. Вторую группу из 35 пациентов подвергали лечению комбинацией EGF-GHRP6: 10 мкг/кг веса тела EGF и 5 мкг/кг веса тела GHRP6, следуя той же схеме введения. Другая группа из 42 пациентов с инфарктом мозга ишемической этиологии получала традиционную терапию, которая в основном заключалась в лечении симптомов и осложнений.Fifty patients with cerebral infarction of ischemic etiology have been treated with the combination of EGF-GHRP6 since diagnosis. Diagnosis included a time interval up to 24 hours after the onset of symptoms. The treatment was carried out for a week and consisted of parenteral sequential administration of 0.8 μg/kg body weight of EGF and 50 μg/kg of body weight of GHRP6 every 12 hours. The second group of 35 patients were treated with a combination of EGF-GHRP6: 10 μg/kg body weight EGF and 5 μg/kg body weight GHRP6, following the same administration schedule. Another group of 42 patients with cerebral infarction of ischemic etiology received conventional therapy, which mainly consisted in the treatment of symptoms and complications.
Все пациенты подвергались экспертизе и оценивались по шкале оценки инфаркта мозга Национального института здравоохранения США (NIHSS), которая отражала их неврологическое состояние на момент постановки диагноза. Эта оценка позволила расчленить пациентов на три группы: инфаркт мозга легкой степени (NIHSS 0-7), инфаркт мозга средней степени (NIHSS 8-14) и инфаркт мозга тяжелой степени (NIHSS более 14). Это неврологическое состояние пациентов на момент постановки диагноза, в отправной точке, в соответствии с группой исследования, представлено на фиг. 2, где можно увидеть, что не было различий в средней неврологической оценке каждой группы. Впоследствии, в день 90, исходная оценка по NIHSS была началом отсчета (в качестве отправной точки) для сравнения с неврологическим состоянием в результате лечений, оцененным по модифицированной шкале Ренкина. Анализ выживаемости показал, что 96% пациентов выжили в группе, подвергнутой лечению комбинацией EGF-GHRP6: 0,8 мкг/кг веса тела EGF и 50 мкг/кг веса тела GHRP6, и 60% пациентов выжили в группе, получавшей традиционную терапию (p=0,0001, согласно логарифмическому ранговому критерию Мантеля-Кокса). По сравнению с группой, подвергнутой лечению другой фармацевтической комбинацией (10 мкг/кг веса тела EGF и 5 мкг/кг веса тела GHRP6), разница также была значимой (p=0,02, согласно тому же статистическому критерию). Эти результаты представлены на фиг. 3.All patients were assessed and assessed using the US National Institutes of Health Cerebral Infarction Scoring Scale (NIHSS), which reflected their neurological status at the time of diagnosis. This assessment allowed patients to be divided into three groups: mild cerebral infarction (NIHSS 0-7), moderate cerebral infarction (NIHSS 8-14) and severe cerebral infarction (NIHSS over 14). This neurological condition of the patients at the time of diagnosis, at the starting point, according to the study group, is shown in FIG. 2, where it can be seen that there was no difference in the mean neurological score of each group. Subsequently, at day 90, the baseline NIHSS score was the starting point (as a starting point) for comparison with neurological status as a result of treatments, assessed by the modified Rankine scale. Survival analysis showed that 96% of patients survived in the group treated with the combination of EGF-GHRP6: 0.8 µg/kg body weight EGF and 50 µg/kg body weight GHRP6, and 60% of patients survived in the conventional therapy group (p =0.0001, according to the Mantel-Cox logarithmic rank test). Compared to the group treated with the other pharmaceutical combination (10 µg/kg bw EGF and 5 µg/kg bw GHRP6), the difference was also significant (p=0.02, according to the same statistical test). These results are presented in Fig. 3.
Через 90 дней после диагностирования инфаркта мозга пациентов оценивали по модифицированной шкале Ренкина (фиг. 4). Пациенты с оценкой от 0 до 2 имели удовлетворительные изменения, с меньшим числом неврологических последствий и меньшей инвалидностью вследствие функциональных нарушений. Напротив, пациенты с оценкой выше 3 имели худшее неврологическое состояние и большую инвалидностью вследствие функциональных нарушений. Наивысшая оценка по шкале Ренкина эквивалентна худшему состоянию; в случае этой оценке умершим пациентам присваивалась оценка 5 по шкале Ренкина. Группа пациентов, получавших терапию с использованием 0,8 мкг/кг веса тела EGF и 50 мкг/кг веса тела GHRP6, продемонстрировала улучшение неврологического состояния по сравнению с группой, подвергнутых лечению другой комбинацией (10 мкг/кг веса тела EGF и 5 мкг/кг веса тела GHRP6), а также по сравнению с группой, получавшей традиционную терапию (критерий хи-квадрат для сравнения долей). Эта разница заметна даже у пациентов с наихудшим неврологическим состоянием на момент постановки диагноза (NIHSS>15).90 days after the diagnosis of cerebral infarction, patients were assessed according to the modified Rankine scale (Fig. 4). Patients with a score of 0 to 2 had satisfactory changes, with fewer neurological consequences and less disability due to functional impairment. In contrast, patients with a score above 3 had worse neurological status and greater disability due to functional impairment. The highest score on the Rankine scale is equivalent to the worst condition; in the case of this assessment, the deceased patients were assigned a score of 5 on the Rankine scale. The group of patients treated with EGF 0.8 µg/kg bw and GHRP6 50 µg/kg bw showed improved neurological status compared to the other combination group (
В дополнение к клинической оценке через 90 дней после инфаркта мозга определяли уровни галектина-3 в сыворотке. Концентрацию этого лектина измеряли с помощью имеющегося в продаже иммуноанализа ELISA (R&D Systems, Minneapolis, США). Три группы сравнивали с помощью критерия Краскела-Уоллиса, а затем критерия Данна. Значимое снижение этого биомаркера было продемонстрировано у пациентов, подвергнутых лечению фармацевтической комбинацией 0,8 мкг/кг веса тела EGF и 50 мкг/кг веса тела GHRP6, по сравнению с пациентами, получавшими традиционную терапию или другую комбинацию EGF и GHRP6 (фиг. 5).In addition to clinical evaluation 90 days after cerebral infarction, serum galectin-3 levels were determined. The concentration of this lectin was measured using a commercially available ELISA immunoassay (R&D Systems, Minneapolis, USA). The three groups were compared using the Kruskal-Wallis test and then the Dunn test. A significant decrease in this biomarker was demonstrated in patients treated with the pharmaceutical combination of 0.8 µg/kg bw EGF and 50 µg/kg bw GHRP6 compared with patients treated with conventional therapy or another combination of EGF and GHRP6 (Fig. 5) .
Последний результат, помимо подтверждения данных протеомного исследования, проведенного при доклинических оценках (пример 1), показывает, что лечение фармацевтической комбинацией 0,8 мкг/кг веса тела EGF и 50 мкг/кг веса тела GHRP6 снижает уровни галектина-3 в сыворотке. Это один из лектинов, которые активируют микроглию через toll-подобный рецептор (а именно, TLR4) и, следовательно, способствует снижению и сдерживанию воспалительной реакции в головном мозге, которая связана с наихудшим прогнозом. Это снижение галектина-3 в сыворотке связано с более благоприятным восстановлением головного мозга, вызванным фармацевтической комбинацией по настоящему изобретению.The latter result, in addition to confirming the data of the proteomic study conducted in preclinical evaluations (Example 1), shows that treatment with the pharmaceutical combination of 0.8 μg/kg bw EGF and 50 μg/kg bw GHRP6 reduces serum levels of galectin-3. It is one of the lectins that activate microglia through a toll-like receptor (namely, TLR4) and therefore contributes to the reduction and containment of the inflammatory response in the brain, which is associated with the worst prognosis. This decrease in serum galectin-3 is associated with a more favorable brain recovery caused by the pharmaceutical combination of the present invention.
В этом клиническом исследовании было установлено время включения пациентов до 24 часов после появления неврологических симптомов для определения того, можно ли увидеть эффект этой комбинации за пределами классического терапевтического окна, установленного для вмешательств у пациентов с инфарктом мозга (Mowla A, et al., J Neurol Sci 2017; 376:102-5). Удивительно, но группа пациентов, подвергнутых лечению фармацевтической комбинацией 0,8 мкг/кг веса тела EGF и 50 мкг/кг веса тела GHRP6, не продемонстрировала значимой корреляции между временем начала лечения и клиническим исходом через 90 дней, определяемой по шкале Ренкина (с использованием линейного регрессионного анализа и коэффициента ранговой корреляции Спирмана r = -0,1, p=0,45) (фиг. 6А). Напротив, в группе, которая получала другую комбинацию (10 мкг/кг веса тела EGF и 5 мкг/кг веса тела GHRP6), была продемонстрирована положительная и значимая корреляция между отсроченным началом лечения и наихудшим клиническим исходом по шкале Ренкина (с использованием линейного регрессионного анализа и коэффициента Спирмана r=0,36, p=0,03) (фиг. 6B). Этот результат очень важен, поскольку он означает, что назначение лечения в любое время в течение 24-часового периода после появления симптомов связано с терапевтическим эффектом. Кроме того, этот результат расширяет критерии отбора на пациентов, нуждающихся в восстановлении головного мозга, и контрастирует с результатами, достигнутыми с помощью нейропротекторных терапевтических вмешательств, предшествующих настоящему изобретению.In this clinical study, patients were timed to enroll up to 24 hours after the onset of neurological symptoms to determine whether the effect of this combination could be seen outside the classical therapeutic window established for interventions in patients with cerebral infarction (Mowla A, et al., J Neurol Sci 2017; 376:102-5). Surprisingly, the group of patients treated with the pharmaceutical combination of 0.8 µg/kg bw EGF and 50 µg/kg bw GHRP6 did not show a significant correlation between the time of initiation of treatment and the clinical outcome at 90 days, as determined by the Rankine scale (using linear regression analysis and Spearman's rank correlation coefficient r = -0.1, p=0.45) (Fig. 6A). In contrast, in the group that received the other combination (
Когнитивная функция часто ухудшаются у пациентов, перенесших инфаркт мозга. Таким образом, когнитивная функция является одной из наиболее важных мишеней механизмов нейропластичности, и допускается ее восстановление, когда будет успешным восстановление головного мозга. В настоящем исследовании тест для оценки когнитивной функции (монреальская шкала оценки когнитивной функции, MoCA) применялся через 2 и 6 месяцев после эпизода инфаркта мозга для пациентов, подвергнутых лечению фармацевтической комбинацией 0,8 мкг/кг веса тела EGF и 50 мкг/кг веса тела GHRP6, для пациентов, получавших лечение комбинацией 10 мкг/кг веса тела EGF и 5 мкг/кг веса тела GHRP6, а также для группы, получавшей традиционную терапию. Также была включена контрольная группа из 30 пациентов с неневрологическими заболеваниями, сопоставленную по возрасту и полу с пациентами с инфарктом мозга, участвовавшими в этом исследовании. Результаты этого исследования показали, что пациенты, подвергнутые лечению фармацевтической комбинации 0,8 мкг/кг веса тела EGF и 50 мкг/кг веса тела GHRP6, после двух месяцев указанного лечения имели заметное улучшение когнитивной функции по сравнению с пациентам, которые получали традиционную терапию или терапию с использованием другой комбинации (10 мкг/кг веса тела EGF и 5 мкг/кг веса тела GHRP6). Через 6 месяцев эта различие в когнитивной функции не только сохраняется в группе, подвергнутой лечению комбинацией 0,8 мкг/кг веса тела EGF и 50 мкг/кг веса тела GHRP6 (статистически значимо), но, что удивительно, когнитивная функция в этой группе была схожа с таковой у пациентов с неневрологическими заболеваниями (в контрольной группе) (фиг. 7).Cognitive function often deteriorates in patients who have had a cerebral infarction. Thus, cognitive function is one of the most important targets of the mechanisms of neuroplasticity, and its recovery is allowed when the brain recovery is successful. In the present study, a test to assess cognitive function (Montreal Cognitive Assessment Scale, MoCA) was applied 2 and 6 months after an episode of cerebral infarction in patients treated with a pharmaceutical combination of 0.8 µg/kg body weight of EGF and 50 µg/kg body weight GHRP6, for patients treated with the combination of 10 µg/kg bw EGF and 5 µg/kg bw GHRP6, and for the conventional therapy group. A control group of 30 patients with non-neurological diseases was also included, matched for age and gender with patients with cerebral infarction who participated in this study. The results of this study showed that patients treated with the pharmaceutical combination of 0.8 µg/kg body weight EGF and 50 µg/kg body weight GHRP6 had a marked improvement in cognitive function after two months of said treatment compared to patients who received conventional therapy or therapy using another combination (10 µg/kg body weight EGF and 5 µg/kg body weight GHRP6). After 6 months, this difference in cognitive function not only persisted in the group treated with the combination of 0.8 µg/kg bw EGF and 50 µg/kg bw GHRP6 (statistically significant), but, surprisingly, cognitive function in this group was similar to that in patients with non-neurological diseases (in the control group) (Fig. 7).
Пример 3. Эффект введения комбинации EGF и средства, стимулирующего секрецию, в виде гексапептида на восстановление головного мозга у пациентов с боковым амиотрофическим склерозомExample 3 Effect of administering a combination of EGF and a secretion stimulating agent as a hexapeptide on brain recovery in patients with amyotrophic lateral sclerosis
Сорок пациентов с точным диагностированием бокового амиотрофического склероза подвергали лечению 0,6 мкг/кг веса тела EGF и 60 мкг/кг веса тела GHRP6, внутривенно, через день в течение 6 месяцев, вместе с Rilutek® (Рилузолом). Ранее эти пациенты были расчленены на группы в соответствии с происхождением заболевания: спинномозговым (n=25) или бульбарным (n=15). Другую группу из 30 пациентов с точным диагностированием бокового амиотрофического склероза, также расчлененную в соответствии с происхождением, спинномозговым (n=21) или бульбарным (n=9), подвергали лечению только Rilutek®.Forty patients with an accurate diagnosis of amyotrophic lateral sclerosis were treated with 0.6 μg/kg body weight of EGF and 60 μg/kg of body weight of GHRP6, intravenously, every other day for 6 months, together with Rilutek® (Riluzole). Previously, these patients were divided into groups according to the origin of the disease: spinal (n=25) or bulbar (n=15). Another group of 30 patients with an accurate diagnosis of amyotrophic lateral sclerosis, also divided according to origin, spinal (n=21) or bulbar (n=9), were treated with Rilutek® alone.
Перед началом и после окончания исследования всех пациентов оценивали, используя функциональную шкалу для бокового амиотрофического склероза (ALSFRS-R). Шкала ALSFRS-R обычно используется для неврологической и функциональной оценки пациентов с указанным заболеванием. Эта шкала включает различные функциональные элементы, например, связанные с языком, слюноотделением, глотанием, умением писать, обращением со столовыми принадлежностями, одеванием и санитарной обработкой, поворотом в постели, подъемом по лестнице и дыханием.Before and after the end of the study, all patients were assessed using the amyotrophic lateral sclerosis functional scale (ALSFRS-R). The ALSFRS-R is commonly used for neurological and functional evaluation of patients with this disease. This scale includes various functional items, such as those related to language, salivation, swallowing, writing, handling utensils, dressing and sanitizing, turning in bed, climbing stairs, and breathing.
После 6 месяцев лечения пациенты, одновременно получавшие 0,6 мкг/кг веса тела EGF и 60 мкг/кг веса тела GHRP6 и Rilutek®, продемонстрировали некоторое клиническое улучшение, как показано в таблице 1. Это улучшение было обнаружено у пациентов с началом проявления заболевания как в спинном мозге, так и в продолговатом мозге, и заключались в снижении слюноотделения, улучшении глотания и дыхания и небольшом улучшении дизартрии. Ничто из последнего не наблюдалось в группе пациентов, подвергнутых лечению только Rilutek®.After 6 months of treatment, patients treated concomitantly with 0.6 µg/kg bw EGF and 60 µg/kg bw GHRP6 and Rilutek® showed some clinical improvement as shown in Table 1. This improvement was found in patients with onset of disease both in the spinal cord and in the medulla oblongata, and consisted of a decrease in salivation, an improvement in swallowing and breathing, and a slight improvement in dysarthria. None of the latter was observed in the Rilutek®-only group of patients.
Таблица 1. Сравнение ALSFRS-R до и после лечения комбинацией EGF-GHRP6 и Rilutek® или только Rilutek®Table 1. Comparison of ALSFRS-R before and after treatment with a combination of EGF-GHRP6 and Rilutek® or Rilutek® alone
До леченияBefore treatment
после леченияafter treatment
+ Rilutek® EGF 0.6 mcg/kg, GHRP6 60 mcg/kg,
+ Rilutek®
Пример 4. Эффект введения комбинации EGF-GHRP6 на восстановление головного мозга у новорожденных с тяжелой гипоксией мозгаExample 4 Effect of EGF-GHRP6 Combination Administration on Brain Recovery in Newborns with Severe Cerebral Hypoxia
Группа новорожденных, у которых по разным перинатальным причинам была тяжелая гипоксия головного мозга, получала экспериментальное лечение с использованием 0,3 мкг/кг веса тела EGF и 30 мкг кг веса тела GHRP6 (n=9). Лечение проводилось в течение недели и заключалось в парентеральном введении комбинации EGF-GHRP6 каждые 12 часов.A group of newborns who had severe cerebral hypoxia for various perinatal reasons received an experimental treatment using 0.3 µg/kg bw EGF and 30 µg kg bw GHRP6 (n=9). The treatment was carried out for a week and consisted of parenteral administration of a combination of EGF-GHRP6 every 12 hours.
На момент постановки диагноза у всех новорожденных были выявлены электроэнцефалографические изменения медленноволнового типа, а при ультразвуковом исследовании наблюдались признаки отека и эхогенности в перивентрикулярных областях. С клинической точки зрения наблюдались признаки легкой легочной гипертензии, артериальной гипотонии, трудности с поддержанием температуры тела, гипогликемия и диурез менее 1 мл в час. Во всех случаях в течение первых 24 часов регистрировались судороги, и в большинстве случаев наблюдались слабый сосательный рефлекс и миоз.At the time of diagnosis, all newborns had slow-wave electroencephalographic changes, and ultrasound showed signs of edema and echogenicity in the periventricular areas. From a clinical point of view, there were signs of mild pulmonary hypertension, arterial hypotension, difficulty maintaining body temperature, hypoglycemia, and urine output less than 1 ml per hour. In all cases, convulsions were recorded within the first 24 hours, and in most cases a weak sucking reflex and miosis were observed.
Младенцы наблюдались в течение одного года с ежеквартальными консультациями. При оценке первого триместра у 7 детей, получавших указанные дозы EGF и GHRP6, электроэнцефалограмма характеризовалась наличием периодических мультифокальных разрядов, но менее частых, чем те, которые определялись ранее перинатально, и во всех случаях дети реагировали на прерывистую световую стимуляцию. Ультрасонографическое исследование показало, что перивентрикулярные кистозные очаги в головном мозге явно регрессируют. Физикальное обследование, в частности неврологическое обследование, по шкале Амьмели-Тисона, выявило легкую дисфункцию центральной нервной системы, состоящую из небольших нарушений мышечного тонуса и рефлексов, нарушений двигательной активности и, в целом, задержки психомоторного развития, с легким нарушением зрения и слуха. Через шесть месяцев у 8 из 9 детей, подвергнутых лечению комбинацией EGF-GHRP6, электроэнцефалограмма была нормальной. В состоянии бодрствования отмечались ритмичность и реактивность на прерывистую световую стимуляцию в тета-диапазоне. В состоянии сна наблюдалась гипнагогическая гиперсинхрония с пароксизмальными элементами, но не эпилептиформная. Магнитно-резонансные томограммы показали, что перивентрикулярные кистозные очаги исчезли, а нормальный вид базальных ядер был подтвержден компьютерной томографией. При неврологическом обследовании не выявлено ни нарушений мышечного тонуса и рефлексов, ни двигательной активности. Было подтверждено нормальное психомоторное развитие в соответствии с возрастом. Расстройств зрения и слуха не обнаружено. В целом младенцы хорошо реагировали на социальную среду.Infants were followed up for one year with quarterly consultations. When evaluating the first trimester of 7 children treated with the indicated doses of EGF and GHRP6, the electroencephalogram was characterized by the presence of intermittent multifocal discharges, but less frequent than those previously determined perinatally, and in all cases the children responded to intermittent light stimulation. Ultrasonographic examination showed that periventricular cystic lesions in the brain are clearly regressing. Physical examination, in particular neurological examination, according to the Ammeli-Tyson scale, revealed mild dysfunction of the central nervous system, consisting of small violations of muscle tone and reflexes, impaired motor activity and, in general, psychomotor retardation, with mild impairment of vision and hearing. After six months, 8 out of 9 children treated with the EGF-GHRP6 combination had a normal electroencephalogram. In the waking state, rhythmicity and reactivity to intermittent light stimulation in the theta range were noted. In the state of sleep, hypnagogic hypersynchrony with paroxysmal elements was observed, but not epileptiform. Magnetic resonance imaging showed that the periventricular cystic lesions had disappeared, and the normal appearance of the basal ganglia was confirmed by computed tomography. Neurological examination revealed neither violations of muscle tone and reflexes, nor motor activity. Normal psychomotor development was confirmed according to age. No visual or hearing impairments were found. In general, the infants responded well to the social environment.
В возрасте одного года у 8 из 9 подвергнутых лечению детей картина энцефалограммы была нормальной, во время бодрствования основной ритм задних отделов 6-7 Гц, двухфазные от средних до высоких потенциалы, и двусторонняя синхронность в затылочных областях была подтверждена на мигание. Способность реагировать на прерывистую световую стимуляцию отмечалась на низких частотах. Запись сна не выявила нерегулярной активности парадоксального сна, но были подтверждены симметричные и синхронные веретена сна. Экспериментальное вначале лечение комбинацией EGF-GHRP6 показало, что это фармакологическое вмешательство у новорожденных с тяжелой гипоксией было терапевтически эффективным, поскольку развитие этих младенцев было намного более благоприятным, чем развитие новорожденных с тяжелой гипоксией, получавших только традиционную терапию, которые продемонстрировали значительную задержку неврологического развития в соответствии с возрастом.At one year of age, 8 of 9 treated children had a normal EEG pattern, during wakefulness the basal posterior rhythm was 6-7 Hz, biphasic medium to high potentials, and bilateral occipital synchrony was confirmed by flashing. The ability to respond to intermittent light stimulation was noted at low frequencies. Sleep recording did not reveal irregular REM sleep activity, but symmetrical and synchronous sleep spindles were confirmed. Initial experimental treatment with the EGF-GHRP6 combination showed that this pharmacological intervention in severely hypoxic neonates was therapeutically effective, as the development of these infants was much more favorable than that of the severely hypoxic neonates treated with conventional therapy alone, who demonstrated significant neurodevelopmental delay in according to age.
Claims (6)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CU2018-0092 | 2018-08-21 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2776812C1 true RU2776812C1 (en) | 2022-07-26 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7361638B2 (en) * | 2001-01-03 | 2008-04-22 | Centro De Ingenieria Genetica Y Biotecnologia | Pharmaceutical combination for the treatment of tissue damage owing to an arterial irrigation defect |
| RU2470650C1 (en) * | 2011-08-30 | 2012-12-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Биофарм-тест" | Drug preparation for treating haemorrhagic and ischemic stroke and method for producing it |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7361638B2 (en) * | 2001-01-03 | 2008-04-22 | Centro De Ingenieria Genetica Y Biotecnologia | Pharmaceutical combination for the treatment of tissue damage owing to an arterial irrigation defect |
| RU2470650C1 (en) * | 2011-08-30 | 2012-12-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Биофарм-тест" | Drug preparation for treating haemorrhagic and ischemic stroke and method for producing it |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| DIANA GARCIA DEL BARCO et al., Coadministration of epidermal growth factor and growth hormone releasing peptide-6 improves clinical recovery in experimental autoimmune encephalitis, Restorative Neurology and Neuroscience, 2011, 29, pp. 243-252. DIANA GARCIA DEL BARCO et al., Therapeutic Effect of the Combined Use of Growth Hormone Releasing Peptide-6 and Epidermal Growth Factor in an Axonopathy Model, Neurotox Res, 2011, 19:195-209. * |
| DIANA GARCIA DEL BARCO-HERRERA et al., Epidermal growth factor and growth hormone-releasing peptide-6: Combined therapeutic approach in experimental stroke, Restorative Neurology and Neuroscience, 2013, 31, pp. 213-223. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AL-DIN et al. | Brainstem encephalitis and the syndrome of miller fisher a clinical study | |
| DE69126304T2 (en) | METHOD AND COMPOSITION FOR TREATING DISEASES OF THE CNS CAUSED BY ABNORMAL BETA AMYLOID PROTEIN | |
| Pakalnis et al. | Forced normalization: acute psychosis after seizure control in seven patients | |
| CN107847615B (en) | TPP1 formulations and methods for treating CLN2 disease | |
| US20210315932A1 (en) | Dosing Regimen for Treatment of Cognitive and Motor Impairments with Blood Plasma and Blood Plasma Products | |
| JPH0318602B2 (en) | ||
| US20080286234A1 (en) | Method for treating demyelinating diseases | |
| Saito et al. | Acute disseminated encephalomyelitis after influenza vaccination | |
| EP4374921A2 (en) | Dosing regimen for treatment of cognitive and motor impairments with blood plasma and blood plasma products | |
| Aljomah et al. | Pediatrics COVID-19 and neurological manifestations: Single tertiary centre experience | |
| Atzema et al. | Should we use steroids to treat children with Bell's palsy? | |
| RU2776812C1 (en) | Pharmaceutical combination including epidermal growth factor and ghrp6 peptide as a secretion stimulator for recovery after brain damage | |
| CN112912092B (en) | Pharmaceutical combination comprising an epidermal growth factor and a secretagogue peptide GHRP6 for restoring brain damage | |
| Critchley et al. | Spinal cord disease: basic science, diagnosis and management | |
| Caplan et al. | Subacute sclerosing panencephalitis presenting as childhood psychosis | |
| Salguero et al. | Childhood multiple sclerosis with psychotic manifestations. | |
| Imam et al. | What is happening to motor neuron disease in Nigeria | |
| JP2001523724A (en) | Citicoline for treating motor neuron disease and demyelination disease | |
| Allen et al. | Myasthenia Gravis in Monozygotic Twins: Clinical Follow-up Nine Years After Thymectomy | |
| Del Mar Sáez de Ocariz et al. | Cerebrovascular complications of neurosyphilis: The return of an old problem | |
| Fedorová et al. | Cognitive impairment in major depressive disorder and severe depressive episode with psychotic symptoms | |
| Yadavmali et al. | The Lance-Adams syndrome: helpful or just hopeful, after cardiopulmonary arrest | |
| Dzhaparalieva et al. | A CASE REPORT OF RARE FAMILIAL DEMYELINATING DISEASE | |
| Eslamifar et al. | Multiple Sclerosis and Evaluation of Vitamin D Effect | |
| Roller et al. | Disease state management: Myasthenia gravis |