RU2776795C2 - Antibodies to protein cd38, and their use - Google Patents
Antibodies to protein cd38, and their use Download PDFInfo
- Publication number
- RU2776795C2 RU2776795C2 RU2020129820A RU2020129820A RU2776795C2 RU 2776795 C2 RU2776795 C2 RU 2776795C2 RU 2020129820 A RU2020129820 A RU 2020129820A RU 2020129820 A RU2020129820 A RU 2020129820A RU 2776795 C2 RU2776795 C2 RU 2776795C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- amino acid
- ser
- antigen
- Prior art date
Links
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 title abstract 7
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 title abstract 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title 1
- 102100003279 CD38 Human genes 0.000 abstract 7
- 101700044948 CD38 Proteins 0.000 abstract 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract 4
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 abstract 4
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 abstract 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 abstract 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract 2
- 206010059512 Apoptosis Diseases 0.000 abstract 1
- 231100000023 Cell-mediated cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract 1
- 206010057250 Cell-mediated cytotoxicity Diseases 0.000 abstract 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract 1
- 230000001419 dependent Effects 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 abstract 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
Images
Abstract
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИFIELD OF TECHNOLOGY
Настоящая заявка относится к области биомедицины, в частности к антителу, которое способно связываться с белком CD38.The present application relates to the field of biomedicine, in particular to an antibody that is capable of binding to the CD38 protein.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND OF THE INVENTION
Белок CD38 представляет собой бифункциональную экзонуклеазу, которая может катализировать превращение NAD+ в циклическую АДФ-рибозу (cADPR, циклическая АДФ-рибоза) и гидролизовать cADPR до АДФ-рибозы. Белок CD38 является одним из антигенов, экспрессирующихся на злокачественных плазмоцитах и экспрессирующихся в различных злокачественных гематопоэтических клетках, включающих, помимо прочего, клетки множественной миеломы, клетки хронического В-клеточного лимфобластного лейкоза и клетки острого В-клеточного лимфобластного лейкоза.The CD38 protein is a bifunctional exonuclease that can catalyze the conversion of NAD + to cyclic ADP-ribose (cADPR, cyclic ADP-ribose) and hydrolyze cADPR to ADP-ribose. The CD38 protein is one of the antigens expressed on malignant plasma cells and expressed in various malignant hematopoietic cells, including, but not limited to, multiple myeloma cells, chronic B-cell lymphoblastic leukemia cells, and acute B-cell lymphoblastic leukemia cells.
Однако разработанные в настоящее время антитела к CD38 обладают ограниченной активностью распознавания, ограниченной цитотоксической активностью и ограниченной способностью ингибировать опухоли, поэтому существует острая необходимость в разработке нового антитела к CD38 для разработки новых лекарств.However, anti-CD38 antibodies currently developed have limited recognition activity, limited cytotoxic activity, and limited ability to inhibit tumors, so there is an urgent need to develop a new anti-CD38 antibody for the development of new drugs.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION
В настоящей заявке предлагается антитело к CD38 и его применение. Антитело к CD38, предлагаемое в настоящей заявке, может обладать одним или несколькими из следующих свойств: 1) оно может связываться с белком CD38 с более высокой аффинностью и специфичностью; 2) оно может уничтожать клетки CD38+ путем антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC), комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC) и/или апоптоза; 3) оно может уничтожать и повреждать опухолевые клетки и/или подавлять рост опухоли; 4) его можно использовать для профилактики или лечения опухолей; 5) оно может ингибировать связывание белка CD38 с лигандом CD38. В настоящей заявке дополнительно предлагается способ получения и применения антитела к CD38.The present application proposes an anti-CD38 antibody and its use. An anti-CD38 antibody provided herein may have one or more of the following properties: 1) it may bind to the CD38 protein with higher affinity and specificity; 2) it can kill CD38 + cells by antibody dependent cell mediated cytotoxicity (ADCC), complement dependent cytotoxicity (CDC), and/or apoptosis; 3) it can destroy and damage tumor cells and/or inhibit tumor growth; 4) it can be used to prevent or treat tumors; 5) it can inhibit the binding of the CD38 protein to the CD38 ligand. The present application further provides a method for making and using an anti-CD38 antibody.
С одной стороны, в настоящей заявке предлагается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с белком CD38 при значении K D 1×10-9M или ниже.On the one hand, the present application provides an antibody, or an antigen-binding fragment thereof, that binds to the CD38 protein at a K D value of 1×10 -9 M or less.
В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке может уничтожать и повреждать опухолевые клетки и/или ингибировать рост опухоли путем специфического связывания с белком CD38.In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof of the present application can kill and damage tumor cells and/or inhibit tumor growth by specifically binding to the CD38 protein.
В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке может уничтожать клетки CD38+ путем антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC), комплементзависимой цитотоксичности (CDC) и/или апоптоза.In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof of the present application can kill CD38 + cells by antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC), complement-dependent cytotoxicity (CDC), and/or apoptosis.
В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке не связывается или по существу не связывается с BSA, CD19, TROP2, CD47, AXL или Gas6 и другими неродственными антигенами.In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof of the present application does not bind or does not substantially bind to BSA, CD19, TROP2, CD47, AXL or Gas6 and other unrelated antigens.
В некоторых вариантах осуществления опухоли включают CD38-положительную опухоль. В некоторых вариантах осуществления CD38-положительная опухоль выбрана из группы, включающей множественную миелому, лимфому и лейкоз.In some embodiments, the tumors include a CD38 positive tumor. In some embodiments, the CD38 positive tumor is selected from the group consisting of multiple myeloma, lymphoma, and leukemia.
В некоторых вариантах осуществления опухоль выбрана из группы, включающей неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина.In some embodiments, the tumor is selected from the group consisting of non-Hodgkin's lymphoma and Hodgkin's lymphoma.
В некоторых вариантах осуществления опухолевые клетки включают клетки, выбранные из группы, содержащей клетки Раджи, клетки Дауди, клетки Рамос и клетки RPMI8226.In some embodiments, the tumor cells include cells selected from the group consisting of Raja cells, Daudi cells, Ramos cells, and RPMI8226 cells.
В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с одним или несколькими остатками, соответствующими аминокислотным остаткам 60-89 человеческого белка CD38 при связывании с белком CD38 (при этом аминокислотная последовательность аминокислот 60-89 человеческого белка CD38 показана в SEQ ID NO: 15).In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof binds to one or more residues corresponding to amino acid residues 60-89 of the human CD38 protein when bound to the CD38 protein (wherein the amino acid sequence of amino acids 60-89 of the human CD38 protein is shown in SEQ ID NO: 15) .
В некоторых вариантах осуществления антитело выбрано из группы, включающей моноклональное антитело, одноцепочечное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело и полностью человеческое антитело.In some embodiments, the antibody is selected from the group consisting of a monoclonal antibody, a single chain antibody, a chimeric antibody, a humanized antibody, and a fully human antibody.
В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент выбран из группы, включающей Fab, Fab’, F(ab)2, F(ab’)2, Fv и ScFv.In some embodiments, the antigen-binding fragment is selected from the group consisting of Fab, Fab', F(ab) 2 , F(ab') 2 , Fv, and ScFv.
В некоторых вариантах осуществления белок CD38 представляет собой человеческий белок CD38 или белок CD38 обезьян. Например, белок CD38 может не быть мышиным белком CD38 или может не быть крысиным белком CD38.In some embodiments, the CD38 protein is a human CD38 protein or a monkey CD38 protein. For example, the CD38 protein may not be a murine CD38 protein or may not be a rat CD38 protein.
В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с настоящей заявкой конкурирует с референсным антителом за связывание с белком CD38, при этом референсное антитело содержит вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи, вариабельная область легкой цепи референсного антитела содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3, LCDR1 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:1; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:2; LCDR3 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:3, вариабельная область тяжелой цепи референсного антитела содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3, HCDR1 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:4; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:5; и HCDR3 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:6.In some embodiments, an antibody or antigen-binding fragment thereof according to the present application competes with a reference antibody for binding to the CD38 protein, wherein the reference antibody comprises a light chain variable region and a heavy chain variable region, the reference antibody light chain variable region comprises LCDR1, LCDR2, and LCDR3, LCDR1 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:1; LCDR2 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2; LCDR3 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:3, the heavy chain variable region of the reference antibody contains HCDR1, HCDR2 and HCDR3, HCDR1 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:4; HCDR2 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:5; and HCDR3 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6.
В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи референсного антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:7, и вариабельная область тяжелой цепи референсного антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:8.In some embodiments, the light chain variable region of the reference antibody comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:7 and the heavy chain variable region of the reference antibody comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:8.
В некоторых вариантах осуществления легкая цепь референсного антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:22. Например, легкая цепь референсного антитела или ее фрагмент содержит аминокислотную последовательность, показанную в любом из SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18 и SEQ ID NO:20.In some embodiments, the implementation of the light chain of the reference antibody contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:22. For example, the reference antibody light chain, or fragment thereof, contains the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, and SEQ ID NO:20.
В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь референсного антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:23. Например, тяжелая цепь референсного антитела или ее фрагмент содержит аминокислотную последовательность, показанную в любом из SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 и SEQ ID NO:21.In some embodiments, the implementation of the heavy chain of the reference antibody contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:23. For example, the reference antibody heavy chain, or fragment thereof, contains the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, and SEQ ID NO:21.
В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке содержит легкую цепь антитела или ее фрагмент. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела или ее фрагмент содержит LCDR1, и LCDR1 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела или ее фрагмент содержит LCDR2, и LCDR2 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:2. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела или ее фрагмент содержит LCDR3, и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:3.In some embodiments, the implementation of the antibody or its antigennegative fragment according to the present application contains a light chain of the antibody or its fragment. In some embodiments, the antibody light chain, or fragment thereof, contains an LCDR1, and the LCDR1 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:1. In some embodiments, the antibody light chain, or fragment thereof, contains an LCDR2, and the LCDR2 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2. In some embodiments, the antibody light chain, or fragment thereof, contains an LCDR3, and the LCDR3 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:3.
В некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела или ее фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи VL, и вариабельная область легкой цепи VL содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:7.In some embodiments, the antibody light chain or fragment thereof comprises a VL light chain variable region, and the VL light chain variable region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:7.
В некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела или ее фрагмент дополнительно содержит человеческую константную область. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область содержит константную область человеческого Igκ.In some embodiments, the antibody light chain or fragment thereof further comprises a human constant region. In some embodiments, the human constant region comprises a human Igκ constant region.
В некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела или ее фрагмент содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:22. Например, легкая цепь антитела или ее фрагмент содержит аминокислотную последовательность, показанную в любом из SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18 и SEQ ID NO:20.In some embodiments, the antibody light chain, or fragment thereof, contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:22. For example, an antibody light chain or fragment thereof contains the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, and SEQ ID NO:20.
В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь антитела или ее фрагмент. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела или ее фрагмент содержит HCDR1, и HCDR1 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:4. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела или ее фрагмент содержит HCDR2, и HCDR2 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:5. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела или ее фрагмент содержит HCDR3, и HCDR3 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:6.In some embodiments, the antibody, or antigen-binding fragment thereof, comprises an antibody heavy chain, or fragment thereof. In some embodiments, the antibody heavy chain or fragment thereof contains HCDR1, and HCDR1 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:4. In some embodiments, the antibody heavy chain, or fragment thereof, contains HCDR2, and HCDR2 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:5. In some embodiments, the antibody heavy chain or fragment thereof contains HCDR3, and HCDR3 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6.
В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела или ее фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи VH, и вариабельная область тяжелой цепи VH содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:8.In some embodiments, the antibody heavy chain or fragment thereof comprises a VH heavy chain variable region, and the VH heavy chain variable region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:8.
В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела или ее фрагмент дополнительно содержит человеческую константную область. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область содержит константную область человеческого IgG. В некоторых вариантах осуществления константная область IgG содержит константную область человеческого IgG1.In some embodiments, the antibody heavy chain or fragment thereof further comprises a human constant region. In some embodiments, the human constant region comprises a human IgG constant region. In some embodiments, the IgG constant region comprises a human IgG1 constant region.
В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:23. Например, тяжелая цепь антитела или ее фрагмент содержит аминокислотную последовательность, показанную в любом из SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 и SEQ ID NO:21.In some embodiments, the implementation of the heavy chain of the antibody contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:23. For example, an antibody heavy chain, or fragment thereof, contains the amino acid sequence shown in any one of SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, and SEQ ID NO:21.
С другой стороны, в настоящей заявке предлагается выделенная молекула нуклеиновой кислоты, которая содержит полинуклеотид, кодирующий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке.On the other hand, the present application provides an isolated nucleic acid molecule that contains a polynucleotide encoding the antibody or antigen-binding fragment of the present application.
В некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере, одна из молекул нуклеиновой кислоты является кодон-оптимизированной.In some embodiments, at least one of the nucleic acid molecules is codon-optimized.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты содержит одну или более полинуклеотилных последовательностей, выбранных из группы, включающей SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:14.In some embodiments, the nucleic acid molecule contains one or more polynucleotide sequences selected from the group consisting of SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, and SEQ ID NO:14.
С другой стороны, в настоящей заявке предлагается вектор, который содержит молекулу нуклеиновой кислоты по настоящей заявке.On the other hand, the present application proposes a vector that contains the nucleic acid molecule according to the present application.
С другой стороны, в настоящей заявке предлагается клетка, которая содержит молекулу нуклеиновой кислоты по настоящей заявке или вектор по настоящей заявке.On the other hand, the present application proposes a cell that contains the nucleic acid molecule of the present application or the vector of the present application.
С другой стороны, в настоящей заявке предлагается способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. Способ включает культивирование клетки по настоящей заявке в условиях, которые позволяют экспрессировать антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.On the other hand, the present application provides a method for producing an antibody or antigen-binding fragment thereof. The method includes culturing the cell according to the present application under conditions that allow the expression of the antibody or its antigen-binding fragment.
С другой стороны, в настоящей заявке предлагается фармацевтическая композиция, которая содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, молекулу нуклеиновой кислоты, вектор и/или клетку по настоящей заявке, и необязательно фармацевтически приемлемые адъюванты.On the other hand, the present application provides a pharmaceutical composition that contains an antibody or antigen-binding fragment thereof, a nucleic acid molecule, a vector and/or a cell of the present application, and optionally pharmaceutically acceptable adjuvants.
С другой стороны, в настоящей заявке предлагается применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента для получения лекарственных средств для профилактики или лечения опухолей.On the other hand, the present application proposes the use of an antibody or antigen-binding fragment for the production of drugs for the prevention or treatment of tumors.
В некоторых вариантах осуществления опухоли включают CD38-положительную опухоль. В некоторых вариантах осуществления CD38-положительная опухоль выбрана из группы, включающей множественную миелому, лимфому и лейкоз. В некоторых вариантах осуществления опухоль выбрана из группы, включающей неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина.In some embodiments, the tumors include a CD38 positive tumor. In some embodiments, the CD38 positive tumor is selected from the group consisting of multiple myeloma, lymphoma, and leukemia. In some embodiments, the tumor is selected from the group consisting of non-Hodgkin's lymphoma and Hodgkin's lymphoma.
С другой стороны, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, предлагаемые в настоящей заявке, можно использовать для профилактики или лечения опухолей.On the other hand, the antibody or antigen-binding fragment proposed in this application can be used for the prevention or treatment of tumors.
В некоторых вариантах осуществления опухоли включают CD38-положительную опухоль. В некоторых вариантах осуществления CD38-положительная опухоль выбрана из группы, включающей множественную миелому, лимфому и лейкоз. В некоторых вариантах осуществления опухоль выбрана из группы, включающей неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина.In some embodiments, the tumors include a CD38 positive tumor. In some embodiments, the CD38 positive tumor is selected from the group consisting of multiple myeloma, lymphoma, and leukemia. In some embodiments, the tumor is selected from the group consisting of non-Hodgkin's lymphoma and Hodgkin's lymphoma.
С другой стороны, в настоящей заявке предлагается способ профилактики или лечения опухолей. Способ включает введение нуждающемуся в этом индивидууму антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, молекулы нуклеиновой кислоты, вектора, клетки и/или фармацевтической композиции по настоящей заявке.On the other hand, the present application provides a method for preventing or treating tumors. The method includes administering to an individual in need thereof an antibody or an antigen-binding fragment thereof, a nucleic acid molecule, a vector, a cell and/or a pharmaceutical composition according to the present application.
В некоторых вариантах осуществления опухоли включают CD38-положительную опухоль. В некоторых вариантах осуществления CD38-положительная опухоль выбрана из группы, включающей множественную миелому, лимфому и лейкоз. В некоторых вариантах осуществления опухоль выбрана из группы, включающей неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина.In some embodiments, the tumors include a CD38 positive tumor. In some embodiments, the CD38 positive tumor is selected from the group consisting of multiple myeloma, lymphoma, and leukemia. In some embodiments, the tumor is selected from the group consisting of non-Hodgkin's lymphoma and Hodgkin's lymphoma.
С другой стороны, в настоящей заявке предлагается способ ингибирования связывания белка CD38 с лигандом CD38, и способ включает введение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, молекулы нуклеиновой кислоты, вектора и/или клетки по настоящей заявке.On the other hand, the present application provides a method for inhibiting the binding of a CD38 protein to a CD38 ligand, and the method includes administering an antibody or antigen-binding fragment thereof, a nucleic acid molecule, a vector, and/or a cell of the present application.
В некоторых вариантах осуществления лиганд CD38 содержит CD31.In some embodiments, the implementation of the CD38 ligand contains CD31.
Дополнительные аспекты и преимущества настоящего изобретения станут очевидными для специалистов в данной области из следующего подробного описания, в котором показаны и описаны только иллюстративные варианты осуществления настоящего изобретения. Многочисленные модификации вариантов осуществления изобретения, описанного в настоящем документе, теперь будут очевидны специалистам в данной области без отклонения от раскрытия. Соответственно, чертежи и описание настоящего изобретения следует рассматривать как иллюстративные по своей природе, но не как ограничивающие.Additional aspects and advantages of the present invention will become apparent to those skilled in the art from the following detailed description, in which only illustrative embodiments of the present invention are shown and described. Numerous modifications to the embodiments of the invention described herein will now be apparent to those skilled in the art without departing from the disclosure. Accordingly, the drawings and description of the present invention are to be considered as illustrative in nature and not as limiting.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS
Конкретные признаки изобретения, изложенные в данной заявке, представлены в прилагаемой формуле изобретения. Особенности и преимущества настоящего изобретения можно лучше понять, обратившись к иллюстративным вариантам осуществления и сопроводительным чертежам. Краткое описание чертежей выглядит следующим образом:The specific features of the invention set forth in this application are presented in the appended claims. The features and advantages of the present invention can be better understood by referring to the illustrative embodiments and the accompanying drawings. A brief description of the drawings is as follows:
На фиг. 1 представлена физическая карта сборки антитела SG003 по настоящей заявке в вектор, экспрессирующий полноразмерное антитело.In FIG. 1 is a physical map of the assembly of the SG003 antibody of the present application into a vector expressing the full length antibody.
На фиг. 2 представлена связывающая способность антитела SG003 по настоящей заявке по отношению к белку CD38.In FIG. 2 shows the binding capacity of the SG003 antibody of the present application to the CD38 protein.
На фиг. 3 представлены результаты специфического распознавания белка CD38 антителом SG003 по настоящей заявке.In FIG. 3 shows the results of specific recognition of the CD38 protein by the SG003 antibody of the present application.
Фиг. 4A-4D показывают связывающую способность антитела SG003 по настоящей заявке по отношению к белку CD38 на поверхности представленных клеток.Fig. 4A-4D show the binding ability of the SG003 antibody of the present application to the CD38 protein on the surface of the cells shown.
Фиг. 5A-5D показывают ADCC-активность антитела SG003 по настоящей заявке на представленных клетках.Fig. 5A-5D show the ADCC activity of the SG003 antibody of the present application on the cells shown.
На фиг. 6 представлено ингибирующее действие антитела SG003 по настоящей заявке на рост опухоли.In FIG. 6 shows the inhibitory effect of the SG003 antibody of the present application on tumor growth.
На фиг. 7 представлено воздействие введения антитела SG003 по настоящей заявке на коэффициент выживаемости мышей.In FIG. 7 shows the effect of administration of the SG003 antibody of the present application on the survival rate of mice.
Фиг. 8A-8B показывают связывающую способность введенного антитела SG003 по настоящей заявке по отношению к молекулам CD38, происходящих из различных родов.Fig. 8A-8B show the binding capacity of the administered SG003 antibody of the present application to CD38 molecules from various genera.
На фиг. 9 представлена связывающая способность антитела SG003 по настоящей заявке со случайными мутациями по отношению к молекулам CD38.In FIG. 9 shows the binding capacity of the SG003 antibody of the present application with random mutations to CD38 molecules.
На фиг. 10 представлены подробности связывания эпитопов антитела SG003 по настоящей заявке с белком CD38.In FIG. 10 provides details of the binding of epitopes of the SG003 antibody of the present application to the CD38 protein.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF EMBODIMENTS
Варианты осуществления настоящего изобретения описаны ниже посредством конкретных вариантов осуществления, и специалисты в данной области могут легко оценить другие преимущества и эффекты по настоящему изобретению из раскрытия настоящего изобретения.Embodiments of the present invention are described below by way of specific embodiments, and other advantages and effects of the present invention can be readily appreciated by those skilled in the art from the disclosure of the present invention.
По настоящей заявке термин «антитело» относится, как правило, к пептиду, способному специфически распознавать и/или нейтрализовать определенный антиген. Например, антитело может включать иммуноглобулин, состоящий, по меньшей мере, из двух тяжелых (H) цепей и двух легких (L) цепей, связанных друг с другом посредством дисульфидных связей, и может включать любую молекулу, содержащую антигенсвязывающий фрагмент. Термин «антитело» включает моноклональное антитело, фрагмент антитела или производное антитела, включая, но не ограничиваясь этим, человеческое антитело (полностью человеческое антитело), гуманизированное антитело, химерное антитело, одноцепочечное антитело (например, scFv), и антигенсвязывающий фрагмент антитела (например, Fab, Fab' и (Fab)2 фрагмент). Термин «антитело» дополнительно включает все рекомбинантные формы антитела, такие как антитело, экспрессируемое в прокариотической клетке, негликозилированное антитело и любой антигенсвязывающий фрагмент антитела по настоящей заявке и его производное. Каждая тяжелая цепь может состоять из вариабельной области тяжелой цепи (VH) и константной области тяжелой цепи. Каждая легкая цепь может состоять из вариабельной области легкой цепи (VL) и константной области легкой цепи. Области VH и VL могут быть далее подразделены на гипервариабельные области (известные как определяющие комплементарность области (CDR)), которые распределены между более консервативными областями, известными как каркасные области (FR). Каждая VH и VL может состоять из трех CDR и FR, которые могут быть расположены от аминоконца до карбоксиконца в порядке FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи содержат связывающие домены, которые взаимодействуют с антигеном. Константные области антитела могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканью хозяина или фактором, который содержится во множестве клеток (например, эффекторных клеток) иммунной системы, и первым компонентом (Clq) классической системы комплемента.As used herein, the term "antibody" generally refers to a peptide capable of specifically recognizing and/or neutralizing a particular antigen. For example, an antibody may include an immunoglobulin consisting of at least two heavy (H) chains and two light (L) chains linked to each other via disulfide bonds, and may include any molecule containing an antigen-binding moiety. The term "antibody" includes a monoclonal antibody, an antibody fragment, or an antibody derivative, including, but not limited to, a human antibody (fully human antibody), a humanized antibody, a chimeric antibody, a single chain antibody (e.g., scFv), and an antigen-binding antibody fragment (e.g., Fab, Fab' and (Fab) 2 fragment). The term "antibody" further includes all recombinant forms of an antibody, such as an antibody expressed in a prokaryotic cell, a non-glycosylated antibody, and any antigen-binding fragment of an antibody of the present application and its derivative. Each heavy chain may consist of a heavy chain variable region (VH) and a heavy chain constant region. Each light chain may be composed of a light chain variable region (VL) and a light chain constant region. The VH and VL regions can be further subdivided into hypervariable regions (known as complementarity determining regions (CDRs)), which are distributed among more conserved regions known as framework regions (FRs). Each VH and VL may be composed of three CDRs and FRs, which may be arranged from amino to carboxy in the order FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 and FR4. The heavy chain and light chain variable regions contain binding domains that interact with antigen. The constant regions of an antibody can mediate the binding of an immunoglobulin to host tissue or a factor found in a variety of cells (eg, effector cells) of the immune system and the first component (Clq) of the classical complement system.
По настоящей заявке термин «антителосвязывающий фрагмент» относится, как правило, к одному или нескольким фрагментам антитела, которые служат для специфического связывания с антигеном. Антигенсвязывающая функция антитела может быть реализована с помощью полноразмерного фрагмента антитела. Антигенсвязывающая функция антитела также может быть реализована следующим образом: при помощи тяжелой цепи, содержащей фрагмент Fv, ScFv, dsFv, Fab, Fab' или F(ab')2, или легкой цепи, содержащей фрагмент Fv, ScFv, dsFv, Fab, Fab' или F(ab')2; (1) Fab-фрагмента, то есть моновалентного фрагмента, содержащего домены VL, VH, CL и CH; (2) фрагмента F(ab’)2, двухвалентного фрагмента, содержащего два фрагмента Fab, связанных дисульфидной связью в шарнирной области; (3) фрагмента Fd, содержащего домены VH и CH; (4) Fv-фрагмента, содержащего домены VL и VH в одном плече антитела; (5) фрагмента dAb, содержащего домен VH (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546); (6) изолированной определяющей комплементарность области (CDR); и (7) комбинации двух или более изолированных CDR, которые необязательно связаны линкером. Кроме того, может быть дополнительно включена одновалентная одноцепочечная молекула Fv (scFv), образованная спариванием VL и VH (см. Bird et al., (1988) Science 242: 423-426; и Huston et al., (1988)) Proc.Natl.Acad.Sci. 85: 5879-5883). «Антигенсвязывающая группа» может дополнительно содержать иммуноглобулиновый слитый белок, который содержит связывающий домен, выбранный из группы, включающей (1) пептид связывающего домена, слитый с пептидом шарнирной области иммуноглобулина; (2) константную область тяжелой цепи иммуноглобулина CH2, слитую с шарнирной областью; и (3) константную область тяжелой цепи иммуноглобулина CH3, слитую с константной областью CH2.As used herein, the term "antibody-binding fragment" generally refers to one or more antibody fragments that serve to specifically bind to an antigen. The antigen-binding function of an antibody can be realized using a full length antibody fragment. The antigen-binding function of an antibody can also be implemented as follows: using a heavy chain containing a fragment of Fv, ScFv, dsFv, Fab, Fab' or F(ab') 2 or a light chain containing a fragment of Fv, ScFv, dsFv, Fab, Fab ' or F(ab') 2 ; (1) a Fab fragment, ie a monovalent fragment containing the VL, VH, CL and CH domains; (2) an F(ab') 2 fragment, a bivalent fragment containing two Fab fragments linked by a disulfide bond in the hinge region; (3) an Fd fragment containing VH and CH domains; (4) an Fv fragment containing the VL and VH domains in one antibody arm; (5) a dAb fragment containing a VH domain (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546); (6) an isolated complementarity determining region (CDR); and (7) combinations of two or more isolated CDRs that are optionally linked by a linker. In addition, a monovalent single chain Fv molecule (scFv) formed by the pairing of VL and VH can be further included (see Bird et al., (1988) Science 242: 423-426; and Huston et al., (1988)) Proc. Natl.Acad.Sci. 85: 5879-5883). The "antigen binding group" may further comprise an immunoglobulin fusion protein that contains a binding domain selected from the group consisting of (1) a binding domain peptide fused to an immunoglobulin hinge peptide; (2) an immunoglobulin CH2 heavy chain constant region fused to a hinge region; and (3) a CH3 immunoglobulin heavy chain constant region fused to a CH2 constant region.
По настоящей заявке, термины «белок CD38» и «антиген CD38» в настоящем документе используются как взаимозаменяемые и включают любой вариант, изотип и видовой гомолог CD38, которые в природе экспрессируются в клетках или экспрессируются в клетках, трансфицированных геном CD38. По настоящей заявке, CD38 может быть человеческим CD38 с номером доступа в GenBank BAA18966.1. По настоящей заявке, CD38 может быть обезьяньим CD38, таким как CD38 макаки с номером доступа в GenBank AAT36330.1. Белок CD38 по настоящей заявке также может быть известен как АДФ-рибозилциклаза 1, cADPr-гидролаза 1, Cd38-rs1, циклическая АДФ-рибозогидролаза 1, антиген I-19 или NIM-R5. «CD38+ клетка» относится, как правило, к клетке, которая экспрессирует белок CD38. Она также может быть известна как CD38-положительная клетка. «CD38- клетка» относится, как правило, к клетке, которая по существу не экспрессирует белок CD38.As used herein, the terms "CD38 protein" and "CD38 antigen" are used interchangeably herein and include any CD38 variant, isotype, and species homologue naturally expressed in cells or expressed in cells transfected with the CD38 gene. According to the present application, CD38 may be human CD38 with GenBank accession number BAA18966.1. In the present application, CD38 may be a simian CD38, such as macaque CD38 with GenBank accession number AAT36330.1. The CD38 protein of the present application may also be known as ADP-
По настоящей заявке термин «белок CD31» относится, как правило, к трансмембранному гликопротеину массой 130-140 кДа, обнаруженному на поверхности тромбоцитов, в соединениях культивируемых эндотелиальных клеток и в миелоидных клеточных линиях, а также известному как молекула адгезии-1 тромбоцитов и эндотелиальных клеток (PECAM-1/CD31). По настоящей заявке, CD31 может быть человеческим CD31 с номером доступа в GenBank NP_000433.4. CD31 может быть использован в качестве лиганда для CD38, чтобы играть роль в тромбозе и ангиогенезе.As used herein, the term "CD31 protein" refers generally to a 130-140 kDa transmembrane glycoprotein found on the surface of platelets, in cultured endothelial cell junctions, and in myeloid cell lines, and is also known as platelet and endothelial cell adhesion molecule-1. (PECAM-1/CD31). According to the present application, CD31 may be human CD31 with GenBank accession number NP_000433.4. CD31 can be used as a ligand for CD38 to play a role in thrombosis and angiogenesis.
По настоящей заявке термин «ADCC» представляет собой антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC), и, как правило, означает, что клетка с активностью в отношении уничтожения клеток распознает сегмент Fc, покрывающий антиген-мишень, при помощи рецептора Fc (FcR), экспрессируемого на ее поверхности. С помощью ADCC эффекторные клетки иммунной системы активно растворяют клетки-мишени, чьи мембранные поверхностные антигены были связаны со специфическими антителами.As used herein, the term "ADCC" is antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC), and generally means that a cell with cell-killing activity recognizes an Fc segment covering a target antigen using an Fc receptor (FcR), expressed on its surface. With ADCC, effector cells of the immune system actively dissolve target cells whose membrane surface antigens have been bound to specific antibodies.
По настоящей заявке термин «CDC» представляет собой комплементзависимую цитотоксичность (CDC) и относится, как правило, к цитотоксическому эффекту, в котором задействован комплемент. То есть, специфическое антитело связывается с соответствующим антигеном на поверхности клеточной мембраны с образованием комплекса и активацией классического пути комплемента. Образующийся мембраноатакующий комплекс оказывает литическое действие на клетку-мишень.As used herein, the term "CDC" is complement dependent cytotoxicity (CDC) and generally refers to a cytotoxic effect in which complement is involved. That is, the specific antibody binds to the corresponding antigen on the surface of the cell membrane to form a complex and activate the classical complement pathway. The resulting membrane attack complex has a lytic effect on the target cell.
По настоящей заявке термин «злокачественная опухоль», как правило, относится к физиологическому состоянию или описывает физиологическое состояние млекопитающих, которое, как правило, может характеризоваться нарушением регуляции клеточной пролиферации или выживаемости. Примеры злокачественной опухоли включают, но не ограничиваются ими, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз, а также лимфоидную злокачественную опухоль. Например, злокачественная опухоль может быть лимфомой.As used herein, the term "cancer" generally refers to or describes a physiological condition in mammals, which may typically be characterized by dysregulation of cell proliferation or survival. Examples of cancer include, but are not limited to, carcinoma, lymphoma, blastoma, sarcoma, and leukemia, as well as lymphoid cancer. For example, the cancer may be a lymphoma.
По настоящей заявке термин «лимфома» относится, как правило, к злокачественной опухоли лимфатической системы. Возникновение лимфомы происходит из-за неконтролируемой пролиферации клеток лимфоузла или клеток лимфы и образования злокачественных клеток с аномальными способностями, которые могут вторгаться в другие ткани на всем протяжении тела. Лимфома имеет много подтипов, где два основных типа представляют собой лимфому Ходжкина и неходжкинскую лимфому. По настоящей заявке термин «лимфома Ходжкина» (ХЛ) относится, как правило, к классу лимфом, продуцируемых лимфоцитами из лейкоцитов. По настоящей заявке термин «неходжкинская лимфома» (НХЛ) относится, как правило, к другим классам лимфом, за исключением лимфомы Ходжкина.As used herein, the term "lymphoma" generally refers to a malignant tumor of the lymphatic system. Lymphoma occurs due to the uncontrolled proliferation of lymph node cells or lymph cells and the formation of malignant cells with abnormal abilities that can invade other tissues throughout the body. Lymphoma has many subtypes, where the two main types are Hodgkin's lymphoma and non-Hodgkin's lymphoma. As used herein, the term "Hodgkin's lymphoma" (HL) generally refers to a class of lymphomas produced by lymphocytes from leukocytes. As used herein, the term "non-Hodgkin's lymphoma" (NHL) generally refers to other classes of lymphomas with the exception of Hodgkin's lymphoma.
По настоящей заявке термин «лейкоз» относится, как правило, к злокачественному пролиферативному заболеванию кроветворной системы, которое, как правило, относится к классу заболеваний, вызванных массивной пролиферацией и накоплением лейкозных клеток. Клональные лейкозные клетки в значительной степени пролиферируют и накапливаются в костном мозге и других гематопоэтических тканях из-за неконтролируемой пролиферации, нарушенной дифференцировки, ингибирования апоптоза или аналогичных механизмов, инфильтрируют другие негематопоэтические органы и при этом подавляют нормальную гематопоэтическую функцию. Клинически могут быть обнаружены анемия различной степени, кровотечение, лихорадка с инфекцией, а также увеличение печени, селезенки и лимфатических желез, и боль в костях.As used herein, the term "leukemia" generally refers to a malignant proliferative disease of the hematopoietic system, which generally refers to a class of diseases caused by massive proliferation and accumulation of leukemic cells. Clonal leukemic cells proliferate and accumulate to a large extent in the bone marrow and other hematopoietic tissues due to uncontrolled proliferation, impaired differentiation, inhibition of apoptosis or similar mechanisms, infiltrate other non-hematopoietic organs, and thereby suppress normal hematopoietic function. Clinically, anemia of varying degrees, bleeding, fever with infection, as well as enlargement of the liver, spleen and lymph glands, and bone pain can be detected.
По настоящей заявке термин «множественная миелома» (ММ) относится, как правило, к злокачественной опухоли, которая поражает костный мозг из-за аномальной пролиферации плазматических клеток. Множественная миелома вызывает накопление злокачественных клеток в костном мозге, в результате чего вытесняются здоровые клетки крови. Злокачественные клетки вместо нормальных антител вырабатывают ненормальные белки, которые могут вызывать осложнения.As used herein, the term "multiple myeloma" (MM) generally refers to a malignant tumor that affects the bone marrow due to abnormal proliferation of plasma cells. Multiple myeloma causes malignant cells to build up in the bone marrow, crowding out healthy blood cells. Malignant cells instead of normal antibodies produce abnormal proteins that can cause complications.
По настоящей заявке термин «клетка Раджи» относится, как правило, к непрерывной клеточной линии человека, способной продуцировать штаммы вируса Эпштейна-Барр. Вирус трансформирует лимфоциты пуповины и индуцирует ранний антиген в клетке Раджи. Клетка Раджи широко используется в качестве хозяина для трансфекции, а также используется для понимания злокачественных опухолей гематопоэтических клеток и других клеток. Кроме того, поскольку клетка Раджи экспрессирует несколько рецепторов, которые экспрессируют определенные компоненты комплемента, а также Fc-рецепторы иммуноглобулинового белка G, она также используется для обнаружения иммунных комплексов.As used herein, the term "Raja cell" generally refers to a continuous human cell line capable of producing strains of the Epstein-Barr virus. The virus transforms umbilical cord lymphocytes and induces an early antigen in Raja's cell. The Raja cell is widely used as a host for transfection and is also used to understand malignant tumors of hematopoietic cells and other cells. In addition, since the Raja cell expresses several receptors that express certain complement components as well as IgG protein Fc receptors, it is also used to detect immune complexes.
По настоящей заявке термин «клетка Дауди» относится, как правило, к клеточной линии, полученной из лимфомы Беркитта. Хотя клетка Дауди имеет внутриклеточную тяжелую цепь класса I, на ее поверхности не экспрессируются молекулы лейкоцитарного антигена человека (HLA) класса I. Это связано с тем, что его ген, кодирующий белок β2-микросферы (β2m), является дефектным, так что у белка отсутствует транслируемая мРНК.As used herein, the term "Daudi cell" generally refers to a cell line derived from Burkitt's lymphoma. Although the Daudi cell has an intracellular class I heavy chain, class I human leukocyte antigen (HLA) molecules are not expressed on its surface. This is because its gene encoding the β2-microsphere protein (β2m) is defective, so the protein no translated mRNA.
По настоящей заявке термин «клетка Рамос» относится, как правило, к клеточной линии лимфомы Беркитта. Клетка не несет штамма вируса Эпштейна-Барр и секретирует IgM.As used herein, the term "Ramos cell" generally refers to the Burkitt's lymphoma cell line. The cell does not carry the Epstein-Barr virus strain and secretes IgM.
По настоящей заявке термин «клетка RPMI8226» относится, как правило, к клеточной линии множественной миеломы.As used herein, the term "RPMI8226 cell" generally refers to a multiple myeloma cell line.
По настоящей заявке термин «K D » используется взаимозаменяемо с «KD» и относится, как правило, к равновесной константе диссоциации для специфического взаимодействия антитело-антиген в M (моль/л). KD можно рассчитать, исходя из концентрации вещества AB и диссоциированных из него веществ A и B: KD= c(A)×c(B)/c(AB). Из этой формулы можно узнать, что чем больше значение KD, тем больше диссоциация и тем слабее аффинность между веществами A и B; наоборот, чем меньше значение KD, тем меньше диссоциация и тем сильнее аффинность между веществами A и B.As used herein, the term " K D " is used interchangeably with "KD" and refers generally to the equilibrium dissociation constant for a specific antibody-antigen interaction in M (mol/l). KD can be calculated based on the concentration of substance AB and substances A and B dissociated from it: KD= c(A)×c(B)/c(AB). From this formula, one can learn that the larger the KD value, the greater the dissociation and the weaker the affinity between substances A and B; on the contrary, the smaller the KD value, the smaller the dissociation and the stronger the affinity between substances A and B.
По настоящей заявке термин «моноклональное антитело» относится, как правило, к популяции по существу гомологичных антитела, то есть различные антитела в этой популяции одинаковы, за исключением природных мутаций, которые могут существовать в незначительных количествах. Моноклональное антитело является высокоспецифичным и непосредственно нацелено на единственный антигенный сайт. Например, моноклональное антитело можно получать с помощью гибридомной технологии или моноклональное антитело можно получать с помощью способа рекомбинантной ДНК в бактериях, эукариотах или растительных клетках. Моноклональное антитело можно также получить из фаговой библиотеки с использованием технологии, описанной, например, в Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991) и Marks et al., Mol. Biol., 222: 581-597 (1991).As used herein, the term "monoclonal antibody" generally refers to a population of essentially homologous antibodies, i.e. the different antibodies in that population are the same except for naturally occurring mutations that may exist in minor amounts. The monoclonal antibody is highly specific and directly targets a single antigenic site. For example, a monoclonal antibody can be obtained using hybridoma technology, or a monoclonal antibody can be obtained using a recombinant DNA method in bacteria, eukaryotes, or plant cells. A monoclonal antibody can also be obtained from a phage library using the technology described, for example, in Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991) and Marks et al., Mol. Biol., 222: 581-597 (1991).
По настоящей заявке термин «одноцепочечное антитело» (scFv) относится, как правило, к молекуле, образованной путем связывания вариабельной области тяжелой цепи антитела с вариабельной областью легкой цепи через олигопептидный линкер.As used herein, the term "single chain antibody" (scFv) generally refers to a molecule formed by linking an antibody heavy chain variable region to a light chain variable region via an oligopeptide linker.
По настоящей заявке термин «химерное антитело» относится, как правило, к антителу, в котором часть аминокислотной последовательности каждой тяжелой цепи или легкой цепи гомологична соответствующей аминокислотной последовательности антитела определенного вида или принадлежит к определенной категории, и остальная часть цепи гомологична соответствующей последовательности у другого вида. Например, вариабельная область легкой цепи и тяжелой цепь происходят из вариабельной области вида животных (например, мышь, крыса и т.д.), в то время как константная часть гомологична последовательности антитела другого вида (например, человек). Например, для получения химерных антител, вариабельные области можно получить путем использования не принадлежащих человеку B-клеток или гибридомных клеток, а константную область, соединенную с ними, получить от человека. Преимущество вариабельной области заключается в простоте производства, и на ее специфичность не влияет источник, из которого получена соединенная с ней константная область. В то же время, поскольку константная область химерного антитела может быть получена от человека, возможность антитела вызывать иммунный ответ при инъекции ниже, чем у антитела, в котором константная область получена из источника, не принадлежащего человеку.As used herein, the term “chimeric antibody” generally refers to an antibody in which a portion of the amino acid sequence of each heavy chain or light chain is homologous to, or belongs to, the corresponding amino acid sequence of an antibody of a particular species, and the remainder of the chain is homologous to the corresponding sequence in another species. . For example, the light chain variable region and the heavy chain are from the variable region of an animal species (eg, mouse, rat, etc.), while the constant portion is homologous to an antibody sequence of another species (eg, human). For example, to obtain chimeric antibodies, the variable regions can be obtained by using non-human B cells or hybridoma cells, and the constant region associated with them can be obtained from a human. The variable region has the advantage of being easy to manufacture, and its specificity is not affected by the source from which the constant region linked to it is derived. At the same time, since the constant region of a chimeric antibody can be derived from a human, the ability of the antibody to elicit an immune response when injected is lower than that of an antibody in which the constant region is derived from a non-human source.
По настоящей заявке термин «гуманизированное антитело» относится, как правило, к химерному антителу, которое содержит меньше последовательностей, полученных из не принадлежащих человеку иммуноглобулиновых белков, чтобы снизить иммуногенность, когда гетерологичное антитело вводят людям, и поддерживать полную аффинность связывания с антигеном и специфичность антитела. Например, можно использовать прививку CDR и ее варианты(Jones et al., Nature 321: 522 (1986)), включающие «изменение формы» (Verhoeyen, et al., 1988 Science 239: 1534-1536; Riechmann, et al., 1988 Nature 332: 323-337; Tempest, et al., Bio/Technol 1991 9: 266-271), «гиперхимеризацию» (Queen и др., 1989 Proc Natl Acad Sci USA 86: 10029-10033; Co, et al., 1991 Proc Natl Acad Sci USA 88:2869-2873; Co, et al., 1992 J Immunol 148:1149-1154) и «маскировку поверхностных остатков» (Mark, et al., «Derivation of therapeutically active humanized and veneered anti-CD18 antibodies». In: Metcalf BW, Dalton BJ, eds. Cellular adhesion: molecular definition to therapeutic potential. New York: Plenum Press, 1994: 291-312), реконструкцию поверхности (патент США US5639641) и другие технические способы для гуманизации связывающих доменов из не принадлежащих человеку источников. Если другие области, такие как шарнирные области и домены константной области также происходят из не принадлежащих человеку источников, эти области также могут быть гуманизированы.As used herein, the term "humanized antibody" generally refers to a chimeric antibody that contains fewer sequences derived from non-human immunoglobulin proteins to reduce immunogenicity when the heterologous antibody is administered to humans and maintain full antigen binding affinity and antibody specificity. . For example, CDR grafting and variants thereof (Jones et al., Nature 321: 522 (1986)), including "shaping" (Verhoeyen, et al., 1988 Science 239: 1534-1536; Riechmann, et al., 1988 Nature 332: 323-337; Tempest, et al., Bio/Technol 1991 9: 266-271), "hyperchimerization" (Queen et al., 1989 Proc Natl Acad Sci USA 86: 10029-10033; Co, et al ., 1991 Proc Natl Acad Sci USA 88:2869-2873; Co, et al., 1992 J Immunol 148:1149-1154) and "surface residue masking" (Mark, et al., "Derivation of therapeutically active humanized and veneered anti-CD18 antibodies". In: Metcalf BW, Dalton BJ, eds. Cellular adhesion: molecular definition to therapeutic potential. New York: Plenum Press, 1994: 291-312), surface reconstruction (US patent US5639641) and other technical methods for humanization of binding domains from non-human sources. If other regions such as hinge regions and constant region domains are also derived from non-human sources, these regions can also be humanized.
По настоящей заявке термин «эпитоп» относится, как правило, к антигенной детерминанте, то есть, группе молекул, распознаваемой иммунной системой (например, антителом). Например, эпитоп может быть прерывистыми трехмерными участками в антигене, распознаваемом иммунной системой. Эпитопы состоят, как правило, из химически активных поверхностных групп молекул (таких как боковые цепи аминокислот или сахаров) и, как правило, имеют определенные трехмерные структурные характеристики, а также определенные характеристики заряда. Эпитопы можно разделить на конформационные эпитопы и неконформационные эпитопы (линейные эпитопы) в соответствии с их структурой. Эпитопы могут состоять из непрерывных остатков или могут быть образованы дискретными остатками, которые становятся смежными из-за сворачивания антигенного полимера.As used herein, the term "epitope" generally refers to an antigenic determinant, that is, a group of molecules recognized by the immune system (eg, by an antibody). For example, an epitope may be discontinuous three-dimensional regions in an antigen that is recognized by the immune system. Epitopes are typically composed of reactive surface groups of molecules (such as amino acid or sugar side chains) and typically have certain three-dimensional structural characteristics as well as certain charge characteristics. Epitopes can be divided into conformational epitopes and non-conformational epitopes (linear epitopes) according to their structure. Epitopes may consist of continuous residues or may be formed by discrete residues that become contiguous due to folding of the antigenic polymer.
По настоящей заявке термин «IgG» относится, как правило, к иммуноглобулинам G. IgG представляет собой один из иммуноглобулинов человека, которые дополнительно включают IgA, IgM, IgD и lgE. В соответствии с антигенным отличием γ-цепи в молекуле IgG человеческий IgG имеет четыре подтипа: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4. IgG играет важную роль в иммунитете. По настоящей заявке термин «IgG1» относится, как правило, к подтипу с наибольшей долей IgG, который имеет высокую аффинность к рецептору Fc.As used herein, the term "IgG" generally refers to immunoglobulins G. IgG is one of the human immunoglobulins, which further includes IgA, IgM, IgD, and IgE. In accordance with the antigenic difference of the γ-chain in the IgG molecule, human IgG has four subtypes: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4. IgG plays an important role in immunity. As used herein, the term "IgG1" generally refers to the subtype with the highest proportion of IgG that has high affinity for the Fc receptor.
По настоящей заявке термин «молекула нуклеиновой кислоты» относится, как правило, к изолированному нуклеотиду, дезоксирибонуклеотиду, рибонуклеотиду или его аналогу любой длины, который может быть выделен из природного окружения или синтезирован искусственно.As used herein, the term "nucleic acid molecule" refers generally to an isolated nucleotide, deoxyribonucleotide, ribonucleotide, or analogue thereof, of any length, which may be isolated from the natural environment or artificially synthesized.
По настоящей заявке термин «вектор» относится, как правило, к молекуле нуклеиновой кислоты, способной к саморепликации в подходящем хозяине. Вектор может переносить вставленную молекулу нуклеиновой кислоты в клетки и/или между клетками. Вектор может включать векторы, которые в основном используются для вставки ДНК или РНК в клетку, в основном используются для копирования ДНК или РНК, и в основном используются для транскрипции ДНК или РНК и/или трансляции. Вектор может быть полинуклеотидом, который может быть транскрибирован и транслирован в пептид при введении в подходящую клетку. Как правило, вектор может давать желаемый продукт экспрессии посредством культивирования подходящих клеток, которые содержат вектор.As used herein, the term "vector" generally refers to a nucleic acid molecule capable of self-replication in a suitable host. The vector can carry the inserted nucleic acid molecule into and/or between cells. The vector may include vectors that are primarily used to insert DNA or RNA into a cell, are primarily used to copy DNA or RNA, and are primarily used to transcribe DNA or RNA and/or translate. The vector may be a polynucleotide that can be transcribed and translated into a peptide when introduced into a suitable cell. Generally, the vector can produce the desired expression product by culturing suitable cells that contain the vector.
По настоящей заявке термин «клетка» относится, как правило, к отдельной клетке, клеточной линии или клеточной культуре, которые могут содержать или могли содержать плазмиду или вектор, включающие молекулу нуклеиновой кислоты по настоящей заявке, или могут экспрессировать антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке. «Клетка» может включать потомство одиночной клетки. Из-за естественной, случайной или преднамеренной мутации потомство клетки может не быть полностью идентичным исходной родительской клетке по морфологии или геному, при условии, что потомство клетки может экспрессировать антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке. Клетку можно получать путем трансфекции клеток in vitro вектором по настоящей заявке. Клетка может быть прокариотической клеткой (например, E. coli) или эукариотической клеткой (например, дрожжевая клетка, например, клетка COS, клетка яичника китайского хомяка (CHO), клетка HeLa, клетка HEK293, клетка COS-1, клетка NS0 или миеломная клетка). В некоторых вариантах осуществления клетка представляет собой клетку млекопитающего. Например, клетка млекопитающего может представлять собой клетку CHO-K1. По настоящей заявке термин «рекомбинантная клетка» относится, как правило, к клетке, в которую был введен рекомбинантный экспрессирующий вектор. Рекомбинантная клетка не только включает определенную специфическую клетку, но также включает потомство этих клеток.As used herein, the term “cell” generally refers to a single cell, cell line, or cell culture that may or may contain a plasmid or vector comprising the nucleic acid molecule of the present application, or may express an antibody or antigen-binding fragment thereof of the present invention. application. A "cell" may include the progeny of a single cell. Due to natural, accidental or intentional mutation, the progeny of a cell may not be completely identical to the original parent cell in morphology or genome, provided that the progeny of the cell can express the antibody or antigen-binding fragment of the present application. The cell can be obtained by in vitro transfection of cells with the vector of the present application. The cell may be a prokaryotic cell (eg, E. coli ) or a eukaryotic cell (eg, a yeast cell, such as a COS cell, a Chinese Hamster Ovary (CHO) cell, a HeLa cell, a HEK293 cell, a COS-1 cell, an NS0 cell, or a myeloma cell ). In some embodiments, the cell is a mammalian cell. For example, a mammalian cell may be a CHO-K1 cell. As used herein, the term "recombinant cell" generally refers to a cell into which a recombinant expression vector has been introduced. A recombinant cell not only includes a certain specific cell, but also includes the progeny of those cells.
В настоящей заявке, термины «белок A» и «ProA» взаимозаменяемы в настоящем документе, и включают белок A, полученный из его природного источника, белок A, полученный путем синтеза (например, с помощью пептидного синтеза или с помощью рекомбинантной технологии), и варианты, которые сохраняют связывающую способность белка. Белок A можно приобретать у Repligen, Pharmacia и Fermatech. Белок A, как правило, иммобилизован на твердофазной подложке носителе. Термин «ProA» также относится к колонке из смолы для аффинной хроматографии или к хроматографической матрице твердой подложки, с которой ковалентно связан белок A.As used herein, the terms "Protein A" and "ProA" are used interchangeably herein, and include Protein A derived from its natural source, Protein A obtained by synthesis (e.g., by peptide synthesis or by recombinant technology), and variants that retain protein binding capacity. Protein A is available from Repligen, Pharmacia and Fermatech. Protein A is usually immobilized on a solid phase support. The term "ProA" also refers to an affinity chromatography resin column or solid support chromatographic matrix to which Protein A is covalently bound.
По настоящей заявке термин «приблизительно» относится, как правило, к отклонению в пределах 0,5-10% от указанного значения, такому как отклонение в пределах 0,5%, 1%, 1,5%, 2%, 2,5%, 3%, 3,5%, 4%, 4,5%, 5%, 5,5%, 6%, 6,5%, 7%, 7,5%, 8%, 8,5%, 9%, 9,5% или 10% от указанного количества.As used herein, the term "approximately" refers, as a rule, to a deviation within 0.5-10% of the specified value, such as a deviation within 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5 %, 3%, 3.5%, 4%, 4.5%, 5%, 5.5%, 6%, 6.5%, 7%, 7.5%, 8%, 8.5%, 9%, 9.5% or 10% of the indicated amount.
По настоящей заявке термин «включать/включающий», как правило, означает «включающий», «содержащий» или «охватывающий». В некоторых случаях термин также означает «являться» или «состоять из».As used herein, the term "comprise/comprising" generally means "including", "comprising", or "covering". In some cases, the term also means "to be" or "to consist of".
Антитело, его антигенсвязывающий фрагмент или вариантAntibody, antigen-binding fragment or variant thereof
В аспекте, в настоящей заявке предлагается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или его вариант, который связывается с белком CD38 с величиной K D 1×10-9 M или ниже (например, величиной K D не больше чем приблизительно 1×10-9M, не больше чем приблизительно 9×10-10M, не больше чем приблизительно 8×10-10M, не больше чем приблизительно 7×10-10M, не больше чем приблизительно 6×10-10M, не больше чем приблизительно 5×10-10M, не больше чем приблизительно 4×10-10M, не больше чем приблизительно 3×10-10M, не больше чем приблизительно 2×10-10M, не больше чем 1×10-10M или не больше чем приблизительно 1×10-11M или ниже).In an aspect, the present application provides an antibody, or an antigen-binding fragment or variant thereof, that binds to the CD38 protein with a K D value of 1×10 -9 M or less (for example, a K D value of not greater than about 1×10 -9 M, not more than about 9×10 -10 M, not more than about 8×10 -10 M, not more than about 7×10 -10 M, not more than about 6×10 -10 M, not more than about 5× 10 -10 M, no more than about 4x10 -10 M, no more than about 3x10 -10 M, no more than about 2x10 -10 M, no more than 1x10 -10 M or no more than about 1×10 -11 M or less).
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке может уничтожать CD38+ клетки путем антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC), комплементзависимой цитотоксичности (CDC) и/или апоптоза.The antibody or antigen-binding fragment of the present application can destroy CD38 + cells by antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC), complement-dependent cytotoxicity (CDC) and/or apoptosis.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент или вариант по настоящей заявке может уничтожать и повреждать опухолевые клетки и/или ингибировать рост опухоли путем специфического связывания с белком CD38. Например, опухоль может включать CD38-положительную опухоль. Например, CD38-положительную опухоль можно выбирать из группы, включающей множественную миелому, лимфому и лейкоз. Альтернативно, например, опухоль выбрана из группы, включающей неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина. Опухолевую клетку можно выбирать из группы, включающей клетку Раджи, клетку Дауди, клетку Рамос и клетку RPMI8226. По настоящей заявке, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент погут уничтожать и повреждать клетки множественной миеломы, лимфомы, лейкоза, неходжкинской лимфомы и лимфомы Ходжкина или ингибировать рост множественной миеломы, лимфомы, лейкоза, неходжкинской лимфомы и лимфомы Ходжкина.An antibody or antigen-binding fragment or variant thereof can kill and damage tumor cells and/or inhibit tumor growth by specifically binding to the CD38 protein. For example, the tumor may include a CD38 positive tumor. For example, a CD38 positive tumor may be selected from the group consisting of multiple myeloma, lymphoma, and leukemia. Alternatively, for example, the tumor is selected from the group consisting of non-Hodgkin's lymphoma and Hodgkin's lymphoma. The tumor cell can be selected from the group consisting of a Raja cell, a Dowdy cell, a Ramos cell, and an RPMI8226 cell. According to the present application, the antibody or antigen-binding fragment thereof can kill and damage cells of multiple myeloma, lymphoma, leukemia, non-Hodgkin's lymphoma and Hodgkin's lymphoma or inhibit the growth of multiple myeloma, lymphoma, leukemia, non-Hodgkin's lymphoma and Hodgkin's lymphoma.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в настоящей заявке при связывании с белком C38 может связываться с одним или несколькими остатками, соответствующими аминокислотным остаткам 60-89 человеческого белка CD38. Например, аминокислотные остатки 60-89 человеческого белка CD38 показаны в SEQ ID NO:15.An antibody or antigen-binding fragment thereof herein, when bound to a C38 protein, may bind to one or more residues corresponding to amino acid residues 60-89 of the human CD38 protein. For example, amino acid residues 60-89 of the human CD38 protein are shown in SEQ ID NO:15.
По настоящей заявке, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может также связываться с аминокислотными остатками, соответствующими аминокислотным остаткам 90-119 человеческого белка CD38, соответствующими аминокислотным остаткам 150-159 человеческого белка CD38, или соответствующими аминокислотным остаткам 180-189 человеческого белка CD38.As used herein, an antibody or antigen-binding fragment thereof may also bind to amino acid residues corresponding to amino acid residues 90-119 of the human CD38 protein, corresponding to amino acid residues 150-159 of the human CD38 protein, or corresponding to amino acid residues 180-189 of the human CD38 protein.
По настоящей заявке, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может по существу не связываться с аминокислотными остатками, соответствующими аминокислотным остаткам 170-179 человеческого белка CD38, или не связываться с аминокислотными остатками, соответствующими аминокислотным остаткам 291-300 человеческого белка CD38.As used herein, an antibody or antigen-binding fragment thereof may not substantially bind to amino acid residues corresponding to amino acid residues 170-179 of the human CD38 protein, or not bind to amino acid residues corresponding to amino acid residues 291-300 of the human CD38 protein.
Антитело по настоящей заявке может быть моноклональным антителом, одноцепочечным антителом, химерным антителом, гуманизированным антителом и/или полностью человеческим антителом. Антигенсвязывающий фрагмент антитела по настоящей заявке может быть фрагментом Fab, Fab’, F(ab)2, F(ab’)2, Fv и/или ScFv.An antibody of the present application may be a monoclonal antibody, a single chain antibody, a chimeric antibody, a humanized antibody, and/or a fully human antibody. The antigen-binding fragment of an antibody of the present application may be a Fab, Fab', F(ab) 2 , F(ab') 2 , Fv and/or ScFv fragment.
Белок CD38 по настоящей заявке может быть человеческим белком CD38 или обезьяньим белком CD38. Например, белок CD38 может не быть мышиным белком CD38, или может не быть крысиным белком CD38. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке по существу не связывается с мышиным белком CD38 или крысиным белком CD38.The CD38 protein of the present application may be a human CD38 protein or a simian CD38 protein. For example, a CD38 protein may not be a murine CD38 protein, or may not be a rat CD38 protein. In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof does not substantially bind to mouse CD38 protein or rat CD38 protein.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в настоящей заявке может конкурировать с референсным антителом за связывание с белком CD38. Референсное антитело может содержать вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи. Например, вариабельная область легкой цепи референсного антитела может содержать LCDR1, LCDR2 и LCDR3, LCDR1 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:1; LCDR2 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:2; LCDR3 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:3, вариабельная область тяжелой цепи референсного антитела может содержать HCDR1, HCDR2 и HCDR3, HCDR1 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:4; HCDR2 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:5; и HCDR3 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:6.An antibody or antigen-binding fragment thereof in the present application may compete with a reference antibody for binding to the CD38 protein. The reference antibody may comprise a light chain variable region and a heavy chain variable region. For example, the variable region of the light chain of the reference antibody may contain LCDR1, LCDR2 and LCDR3, LCDR1 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:1; LCDR2 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2; LCDR3 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:3, the heavy chain variable region of the reference antibody may contain HCDR1, HCDR2 and HCDR3, HCDR1 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:4; HCDR2 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:5; and HCDR3 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6.
По настоящей заявке, аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:7, и аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:8.As used herein, the light chain variable region amino acid sequence of the reference antibody may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:7, and the heavy chain variable region amino acid sequence of the reference antibody may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:8.
По настоящей заявке, легкая цепь референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:22. Например, легкая цепь референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в любой из SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18 и SEQ ID NO:20. Тяжелая цепь референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:23; Например, тяжелая цепь референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в любой из SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 и SEQ ID NO:21.According to the present application, the light chain of the reference antibody may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:22. For example, the reference antibody light chain may comprise the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, and SEQ ID NO:20. The reference antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:23; For example, the reference antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, and SEQ ID NO:21.
Например, легкая цепь референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:11, и тяжелая цепь референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:13. Например, легкая цепь референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:16, и тяжелая цепь референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:17. Например, легкая цепь референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:18, и тяжелая цепь референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:19. Например, легкая цепь референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:20, и тяжелая цепь референсного антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:21.For example, a reference antibody light chain may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:11 and a reference antibody heavy chain may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:13. For example, a light chain of a reference antibody may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:16, and a heavy chain of a reference antibody may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:17. For example, a light chain of a reference antibody may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:18, and a heavy chain of a reference antibody may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:19. For example, a reference antibody light chain may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:20 and a reference antibody heavy chain may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:21.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с настоящей заявкой может содержать легкая цепь антитела или ее фрагмент.An antibody or antigen-binding fragment thereof according to the present application may comprise an antibody light chain or a fragment thereof.
Например, легкая цепь антитела или ее фрагмент может содержать LCDR1, и LCDR1 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:1. Легкая цепь антитела или ее фрагмент может содержать LCDR2, и LCDR2 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:2. Легкая цепь антитела или ее фрагмент может содержать LCDR3, и LCDR3 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:3.For example, an antibody light chain or fragment thereof may contain LCDR1, and LCDR1 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:1. An antibody light chain, or fragment thereof, may contain LCDR2, and LCDR2 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2. An antibody light chain, or fragment thereof, may contain LCDR3, and LCDR3 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:3.
Легкая цепь антитела или ее фрагмент по настоящей заявке может содержать вариабельную область легкой цепи VL, и вариабельная область легкой цепи VL может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:7.The light chain of an antibody or fragment thereof of the present application may comprise a VL light chain variable region, and the VL light chain variable region may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:7.
По настоящей заявке, легкая цепь антитела или ее фрагмент может содержать константную область Igκ, например, может содержать константную область Igκ человека.According to the present application, the antibody light chain or fragment thereof may contain an Igκ constant region, for example, may contain a human Igκ constant region.
По настоящей заявке, легкая цепь антитела или ее фрагмент может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:22:According to the present application, the light chain of an antibody or its fragment may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:22:
EIVMTQSPASLSASLGQRAX20ISCRASX27SVSX31SAX34SYVHWYQQKSGQPPKLLIYLASX57X58X59SGVPARFSGSGSGTDFTLTIHPVESEDVATYYCHHSRX97X98PX100X101FGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:22), где X20=T или S; X27=S или N; X31=S или T; X34=F или Y; X57=N и D; X58=L или I; X59=E или Q; X97=E или Q; X98=L или V; X100=F или S; X101=T или S.EIVMTQSPASLSASLGQRAX 20 ISCRASX 27 SVSX 31 SAX 34 SYVHWYQQKSGQPPKLLIYLASX 57 X 58 X 59 SGVPARFSGSGSGTDFTLTIHPVESEDVATYYCHHSRX 97 X 98 PX 100 X 101 FGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO:22), где X 20 =T или S; X 27 =S or N; X 31 =S or T; X 34 =F or Y; X 57 =N and D; X 58 =L or I; X 59 =E or Q; X 97 =E or Q; X 98 =L or V; X 100 =F or S; X 101 =T or S.
В некоторых вариантах осуществления по сравнению с легкой цепью антитела, показанной в SEQ ID NO:11, легкая цепь антитела или ее фрагмент, по меньшей мере, содержит замену аминокислоты/аминокислот, выбранную из группы, включающей:In some embodiments, compared to the antibody light chain shown in SEQ ID NO:11, the antibody light chain, or fragment thereof, at least contains an amino acid/amino acid substitution selected from the group consisting of:
(a) замену аминокислоты/аминокислот по X20, X27, X34, X58, X59, X97 и/или X100;(a) replacing the amino acid/amino acids at X 20 , X 27 , X 34 , X 58 , X 59 , X 97 and/or X 100 ;
(b) замена аминокислоты/аминокислот по X34, X57, X59, X100 и/или X101; и(b) replacing the amino acid/amino acids at X 34 , X 57 , X 59 , X 100 and/or X 101 ; and
(c) замена аминокислоты/аминокислот по X27, X31 и/или X98.(c) replacing the amino acid/amino acids at X 27 , X 31 and/or X 98 .
В некоторых вариантах осуществления по сравнению с легкой цепью антитела, показанной в SEQ ID NO:11, легкая цепь антитела или ее фрагмент, по меньшей мере, содержит замену аминокислоты/аминокислот по X20, X27, X34, X58, X59, X97 и/или X100, где аминокислота по X20 может быть замещена T или S; аминокислота по X27 может быть замещена S или N; аминокислота по X34 может быть замещена F или Y; аминокислота по X58 может быть замещена L или I; аминокислота по X59 может быть замещена E или Q; аминокислота по X97 может быть замещена E или Q; и аминокислота по X100 может быть замещена F или S.In some embodiments, compared to the antibody light chain shown in SEQ ID NO:11, the antibody light chain, or fragment thereof, at least contains an amino acid/amino acid substitution at X 20 , X 27 , X 34 , X 58 , X 59 , X 97 and/or X 100 , where the amino acid at X 20 may be substituted with T or S; the amino acid at X 27 may be substituted with S or N; the amino acid at X 34 may be substituted with F or Y; the amino acid at X 58 may be substituted with L or I; the amino acid at X 59 may be substituted with E or Q; the amino acid at X 97 may be substituted with E or Q; and the amino acid at X 100 may be substituted with F or S.
В некоторых вариантах осуществления по сравнению с легкой цепью антитела, показанной в SEQ ID NO:11, легкая цепь антитела или ее фрагмент, по меньшей мере, содержит замену аминокислоты/аминокислот по X34, X57, X59, X100 и/или X101, где аминокислота по X34 может быть замещена F или Y; аминокислота по X57 может быть замещена N или D; аминокислота по X59 может быть замещена E или Q; аминокислота по X100 может быть замещена F или S; и аминокислота по X101 может быть замещена T или S.In some embodiments, compared to the antibody light chain shown in SEQ ID NO:11, the antibody light chain, or fragment thereof, at least contains an amino acid/amino acid substitution at X 34 , X 57 , X 59 , X 100 and/or X 101 where the amino acid at X 34 may be substituted with F or Y; the amino acid at X 57 may be substituted with N or D; the amino acid at X 59 may be substituted with E or Q; the amino acid at X 100 may be substituted with F or S; and the amino acid at X 101 may be substituted with T or S.
В некоторых вариантах осуществления по сравнению с легкой цепью антитела, показанной в SEQ ID NO:11, легкая цепь антитела или ее фрагмент, по меньшей мере, содержит замену аминокислоты/аминокислот по X27, X31 и/или X98, где аминокислота по X27 может быть замещена S или N; аминокислота по X31 может быть замещена S или T; и аминокислота по X98 может быть замещена L или V.In some embodiments, compared to the antibody light chain shown in SEQ ID NO:11, the antibody light chain, or fragment thereof, at least contains an amino acid/amino acid substitution at X 27 , X 31 and/or X 98 , where the amino acid at X 27 may be substituted with S or N; the amino acid at X 31 may be substituted with S or T; and the amino acid at X 98 may be substituted with L or V.
Например, легкая цепь антитела или ее фрагмент может содержать аминокислотную последовательность, показанную в любой из SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18 и SEQ ID NO:20.For example, an antibody light chain or fragment thereof may comprise the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, and SEQ ID NO:20.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке может содержать тяжелую цепь антитела или ее фрагмент.An antibody or antigen-binding fragment thereof according to the present application may contain an antibody heavy chain or a fragment thereof.
По настоящей заявке, тяжелая цепь антитела или ее фрагмент может содержать HCDR1, и the HCDR1 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:4. Тяжелая цепь антитела или ее фрагмент может содержать HCDR2, и HCDR2 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:5. Альтернативно, например, тяжелая цепь антитела или ее фрагмент может содержать HCDR3, и HCDR3 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:6.According to the present application, the heavy chain of the antibody or its fragment may contain HCDR1, and the HCDR1 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:4. An antibody heavy chain, or fragment thereof, may contain HCDR2, and HCDR2 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:5. Alternatively, for example, an antibody heavy chain or fragment thereof may contain HCDR3, and HCDR3 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6.
Тяжелая цепь антитела или ее фрагмент может содержать вариабельную область тяжелой цепи VH, и вариабельная область тяжелой цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:8.An antibody heavy chain or fragment thereof may comprise a VH heavy chain variable region, and the VH heavy chain variable region may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:8.
По настоящей заявке, тяжелая цепь антитела или ее фрагмент дополнительно содержит константную область человека. Например, константная область человека может содержать константную область IgG человека. Например, константная область IgG может содержать константную область IgG1 человека.According to the present application, the antibody heavy chain or fragment thereof further comprises a human constant region. For example, a human constant region may comprise a human IgG constant region. For example, an IgG constant region may comprise a human IgG1 constant region.
По настоящей заявке, тяжелая цепь антитела или ее фрагмент может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:23:According to the present application, the heavy chain of the antibody or its fragment may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:23:
QVQLLESGGGLVQPGGSLKLSCVASGX27X28FSLYX33MNWVRQAPGKGLEWIGKIX52P X54SSX57X58X59YX61PSX64KDKFFISRDNAKNTLYLQMTKVRSEDTALYYCARLX100IX102X103G GX106X107YWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTH TCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:23), где X27=F или Y; X28=D или N; X33=W или Y; X52=N, Q или S; X54=D, E или N; X57=T или S; X58=I или L; X59=N или Q; X61=T или S; X64=L или V; X100=W или Y; X102=A или G; X103=T или S; X106=F или Y; X107=D или N.QVQLLESGGGLVQPGGSLKLSCVASGX 27 X 28 FSLYX 33 MNWVRQAPGKGLEWIGKIX 52 PX 54 SSX 57 X 58 X 59 YX 61 PSX 64 KDKFFISRDNAKNTLYLQMTKVRSEDTALYYCARLX 100 IX 102 X 103 G GX 106 X 107 YWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG ALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTH TCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:23), где X 27 =F or Y; X 28 =D or N; X 33 =W or Y; X 52 =N, Q or S; X 54 =D, E or N; X 57 =T or S; X 58 =I or L; X 59 =N or Q; X 61 =T or S; X 64 =L or V; X 100 =W or Y; X 102 =A or G; X 103 =T or S; X 106 =F or Y; X 107 =D or N.
В некоторых вариантах осуществления по сравнению с легкой цепью антитела, показанной в SEQ ID NO: 13, легкая цепь антитела или ее фрагмент, по меньшей мере, содержит замену аминокислоты/аминокислот, выбранных из группы, включающей:In some embodiments, compared to the antibody light chain shown in SEQ ID NO: 13, the antibody light chain, or fragment thereof, at least contains an amino acid/amino acid substitution selected from the group consisting of:
(a) замену аминокислоты/аминокислот по X27, X28, X33, X52, X54, X59, X102 и/или X103;(a) replacing the amino acid/amino acids at X 27 , X 28 , X 33 , X 52 , X 54 , X 59 , X 102 and/or X 103 ;
(b) замену аминокислоты/аминокислот по X52, X54, X61, X100 и/или X103; и(b) replacing the amino acid/amino acids at X 52 , X 54 , X 61 , X 100 and/or X 103 ; and
(c) замену аминокислоты/аминокислот по X52, X57, X58, X64, X106 и/или X107.(c) replacing the amino acid/amino acids at X 52 , X 57 , X 58 , X 64 , X 106 and/or X 107 .
В некоторых вариантах осуществления по сравнению с легкой цепью антитела, показанной в SEQ ID NO: 13, легкая цепь антитела или ее фрагмент, по меньшей мере, содержит замену аминокислоты/аминокислот по X27, X28, X33, X52, X54, X59, X102 и/или X103, где аминокислота по X27 может быть замещена F или Y; аминокислота по X28 может быть замещена D или N; аминокислота по X33 может быть замещена W или Y; аминокислота по X52 может быть замещена N или Q; аминокислота по X54 может быть замещена D или E; аминокислота по X59 может быть замещена N или Q; аминокислота по X102 может быть замещена A или G; и аминокислота по X103 может быть замещена T или S.In some embodiments, compared to the antibody light chain shown in SEQ ID NO: 13, the antibody light chain, or fragment thereof, at least contains an amino acid/amino acid substitution at X 27 , X 28 , X 33 , X 52 , X 54 , X 59 , X 102 and/or X 103 where the amino acid at X 27 may be substituted with F or Y; the amino acid at X 28 may be substituted with D or N; the amino acid at X 33 may be substituted with W or Y; the amino acid at X 52 may be substituted with N or Q; the amino acid at X 54 may be substituted with D or E; the amino acid at X 59 may be substituted with N or Q; the amino acid at X 102 may be substituted with A or G; and the amino acid at X 103 may be substituted with T or S.
В некоторых вариантах осуществления по сравнению с легкой цепью антитела, показанной в SEQ ID NO: 13, легкая цепь антитела или ее фрагмент, по меньшей мере, содержит замену аминокислоты/аминокислот по X52, X54, X61, X100 и/или X103, где аминокислота по X52 может быть замещена N или S; аминокислота по X54 может быть замещена D или N; аминокислота по X61 может быть замещена T или S; аминокислота по X100 может быть замещена W или Y; и аминокислота по X103 может быть замещена T или S.In some embodiments, compared to the antibody light chain shown in SEQ ID NO: 13, the antibody light chain, or fragment thereof, at least contains an amino acid/amino acid substitution at X 52 , X 54 , X 61 , X 100 and/or X 103 where the amino acid at X 52 may be substituted with N or S; the amino acid at X 54 may be substituted with D or N; the amino acid at X 61 may be substituted with T or S; the amino acid at X 100 may be substituted with W or Y; and the amino acid at X 103 may be substituted with T or S.
В некоторых вариантах осуществления по сравнению с легкой цепью антитела, показанной в SEQ ID NO: 13, легкая цепь антитела или ее фрагмент, по меньшей мере, содержит замену аминокислоты/аминокислот по X52, X57, X58, X64, X106 и/или X107, где, аминокислота по X52 может быть замещена N или S; аминокислота по X57 может быть замещена T или S; аминокислота по X58 может быть замещена I или L; аминокислота по X64 может быть замещена L или V; аминокислота по X106 может быть замещена F или Y; и аминокислота по X107 может быть замещена D или N.In some embodiments, compared to the antibody light chain shown in SEQ ID NO: 13, the antibody light chain, or fragment thereof, at least contains an amino acid/amino acid substitution at X 52 , X 57 , X 58 , X 64 , X 106 and/or X 107 where, the amino acid at X 52 may be substituted with N or S; the amino acid at X 57 may be substituted with T or S; the amino acid at X 58 may be substituted with I or L; the amino acid at X 64 may be substituted with L or V; the amino acid at X 106 may be substituted with F or Y; and the amino acid at X 107 may be substituted with D or N.
В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела может содержать аминокислотную последовательность, показанную в любой из SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 и SEQ ID NO:21.In some embodiments, the antibody heavy chain may comprise the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, and SEQ ID NO:21.
В некоторых вариантах осуществления в антителе или его антигенсвязывающем фрагменте по настоящей заявке, LCDR1 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:1 или ее вариант; LCDR2 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:2 или ее вариант; the LCDR3 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:3 или ее вариант; и HCDR1 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:4 или ее вариант; HCDR2 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:5 или ее вариант; HCDR3 может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:6 или ее вариант. Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать антитело SG003 или антитело с такими же LCDR1-3 и HCDR1-3. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящей заявке может содержать вариабельную область легкой цепи, вариабельная область легкой цепи может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:7 или ее вариант; и тяжелая цепь может содержать вариабельную область тяжелой цепи, вариабельная область тяжелой цепи может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:8 или ее вариант. Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать антитело SG003 или антитело с такой же вариабельной областью легкой цепи и вариабельной областью тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке может содержать легкую цепь и тяжелую цепь, легкая цепь может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:11, и тяжелая цепь может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:13. Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать антитело SG003 или аминокислотную последовательность такой же легкой цепи и тяжелой цепи.In some embodiments, in an antibody or antigen-binding fragment thereof of the present application, LCDR1 may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:1 or a variant thereof; LCDR2 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2 or a variant thereof; the LCDR3 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:3 or a variant thereof; and HCDR1 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:4 or a variant thereof; HCDR2 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:5 or a variant thereof; HCDR3 may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6 or a variant thereof. For example, an antibody or antigen-binding fragment thereof may comprise an SG003 antibody or an antibody with the same LCDR1-3 and HCDR1-3. In some embodiments, the implementation of the light chain of the antibody or its antigennegative fragment according to the present application may contain the variable region of the light chain, the variable region of the light chain may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:7 or a variant thereof; and the heavy chain may comprise a heavy chain variable region, the heavy chain variable region may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:8 or a variant thereof. For example, an antibody or antigen-binding fragment thereof may comprise an SG003 antibody or an antibody with the same light chain variable region and heavy chain variable region. In some embodiments, an antibody or antigen-binding fragment thereof of the present application may comprise a light chain and a heavy chain, the light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:11, and the heavy chain may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:13 . For example, an antibody or antigen-binding fragment thereof may comprise an SG003 antibody or an amino acid sequence of the same light chain and heavy chain.
В некоторых вариантах осуществления антитело по настоящей заявке может представлять собой SG003. LCDR1, LCDR2 и LCDR3 из антитела SG003 могут содержать аминокислотные последовательности, как показано в SEQ ID NO.1, SEQ ID NO.2 и SEQ ID NO.3, соответственно; VL может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO.7; HCDR1, LCDR2 и LCDR3 могут содержать аминокислотные последовательности, как показано в SEQ ID NO.4, SEQ ID NO.5 и SEQ ID NO.6, соответственно; VH может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO.8; легкая цепь может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO.11; и тяжелая цепь может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO.13.In some embodiments, the implementation of the antibody according to the present application may be SG003. LCDR1, LCDR2 and LCDR3 from the SG003 antibody may contain the amino acid sequences as shown in SEQ ID NO.1, SEQ ID NO.2 and SEQ ID NO.3, respectively; VL may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO.7; HCDR1, LCDR2 and LCDR3 may contain amino acid sequences as shown in SEQ ID NO.4, SEQ ID NO.5 and SEQ ID NO.6, respectively; VH may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO.8; the light chain may contain an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO.11; and the heavy chain may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO.13.
В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке конкурирует с референсным антителом за связывание с белком CD38 (например, человеческим белком CD38 или обезьяньим белком CD38). Референсное антитело может содержать LCDR1, LCDR2, LCDR3 и HCDR1, HCDR2, HCDR3, и LCDR1 может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:1; LCDR2 может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:2; LCDR3 может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:3; HCDR1 может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:4; HCDR2 может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:5; и HCDR3 может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:6. В некоторых вариантах осуществления референсное антитело может содержать антитело SG003 или антитело с такими же LCDR1, LCDR2, LCDR3 и HCDR1, HCDR2, HCDR3. В некоторых вариантах осуществления референсное антитело может содержать вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи, вариабельная область легкой цепи может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:7; и вариабельная область тяжелой цепи может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:8. Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать антитело SG003 или антитело с такой же вариабельной областью легкой цепи и вариабельной областью тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления референсное антитело может содержать легкую цепь и тяжелую цепь, легкая цепь может содержать аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:11 и тяжелая цепь может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:13. Например, референсное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать антитело SG003 или антитело с такой же легкой цепью и тяжелой цепью.In some embodiments, an antibody or antigen-binding fragment thereof of the present application competes with a reference antibody for binding to a CD38 protein (eg, human CD38 protein or simian CD38 protein). The reference antibody may contain LCDR1, LCDR2, LCDR3 and HCDR1, HCDR2, HCDR3, and LCDR1 may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:1; LCDR2 may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:2; LCDR3 may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:3; HCDR1 may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:4; HCDR2 may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:5; and HCDR3 may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:6. In some embodiments, the reference antibody may comprise an SG003 antibody or an antibody with the same LCDR1, LCDR2, LCDR3 and HCDR1, HCDR2, HCDR3. In some embodiments, the reference antibody may comprise a light chain variable region and a heavy chain variable region, the light chain variable region may comprise an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:7; and the heavy chain variable region may comprise an amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:8. For example, an antibody or antigen-binding fragment thereof may comprise an SG003 antibody or an antibody with the same light chain variable region and heavy chain variable region. In some embodiments, the reference antibody may comprise a light chain and a heavy chain, the light chain may comprise the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:11, and the heavy chain may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:13. For example, a reference antibody or antigen-binding fragment thereof may contain an SG003 antibody or an antibody with the same light chain and heavy chain.
Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в настоящей заявке может дополнительно содержать в аминокислотных последовательностях легкой цепи и/или тяжелой цепи одну или несколько случайных мутаций (например, одну или более, одну или несколько замен аминокислот). Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать по одному или нескольким сайтам в каркасной области L-FR1~L-FR4 в вариабельной области легкой цепи одну или несколько случайных мутаций (например, одну или более, одну или несколько замен аминокислот), и/или содержать по одному или нескольким сайтам в каркасной области H-FR1~H-FR4 в вариабельной области тяжелой цепи одну или несколько случайных мутаций (например, одну или более, одну или несколько замен аминокислот). Например, после случайной мутации, легкая цепь антитела или его антигенсвязывающего фрагмента может содержать аминокислотную последовательность, показанную в любой из SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18 и SEQ ID NO:20; и/или, тяжелая цепь антитела или его антигенсвязывающего фрагмента может содержать аминокислотную последовательность, показанную в любой из SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 и SEQ ID NO:21. Антитело к CD38, мутированное случайным образом, или его антигенсвязывающий фрагмент все еще имеют способность к специфическому связыванию с человеческим белком CD38 и обезьяньим белком CD38.An antibody or antigen-binding fragment thereof herein may further comprise one or more random mutations (eg, one or more, one or more amino acid substitutions) in the light chain and/or heavy chain amino acid sequences. For example, an antibody or antigen-binding fragment thereof may contain one or more random mutations (eg, one or more, one or more amino acid substitutions), and/ or contain one or more random mutations (eg, one or more, one or more amino acid substitutions) at one or more sites in the H-FR1~H-FR4 framework region of the heavy chain variable region. For example, after random mutation, the light chain of an antibody or antigen-binding fragment thereof may contain the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, and SEQ ID NO:20; and/or the heavy chain of an antibody or antigen-binding fragment thereof may comprise the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, and SEQ ID NO:21. The randomly mutated anti-CD38 antibody or antigen-binding fragment thereof still has the ability to specifically bind to human CD38 protein and simian CD38 protein.
В некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящей заявке может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:16; и тяжелая цепь может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:17; альтернативно, легкая цепь антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящей заявке может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:18; и тяжелая цепь может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:19; альтернативно, легкая цепь антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящей заявке может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:20; и тяжелая цепь может содержать аминокислотную последовательность, как показано в SEQ ID NO:21.In some embodiments, the implementation of the light chain of the antibody or antigennegative fragment according to the present application may contain an amino acid sequence, as shown in SEQ ID NO:16; and the heavy chain may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:17; alternatively, the light chain of the antibody or antigennegative fragment of the present application may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:18; and the heavy chain may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:19; alternatively, the light chain of the antibody or antigennegative fragment of the present application may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:20; and the heavy chain may contain the amino acid sequence as shown in SEQ ID NO:21.
Белки, пептиды и/или аминокислотные последовательности, предлагаемые в настоящей заявке, следует также понимать как охватывающие следующий объем: вариант или гомолог, имеющий такую же или аналогичную функцию, что и белок или пептид.Proteins, peptides and/or amino acid sequences provided herein should also be understood to encompass the following scope: a variant or homologue having the same or similar function as a protein or peptide.
По настоящей заявке вариант может быть белком или пептидом, полученным путем замены, делеции или добавления одной или нескольких аминокислот в аминокислотной последовательности белка и/или пептида (например, антитела или его фрагмента, который специфически связывается с белком CD38). Например, функциональный вариант может содержать белок или пептид с модификацией аминокислот путем замены, делеции и/или вставки, по меньшей мере, одной, например, 1-30, 1-20, или 1-10, или например, 1, 2, 3 , 4 или 5 аминокислот. Функциональный вариант может, в основном, сохранять биологическую активность белка или пептида до модификации (например, замещения, делеции или добавления). Например, функциональный вариант может сохранять, по меньшей мере, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% биологической активности (например, антигенсвязывающей способности) исходного белка или пептида. Например, замена может быть консервативной заменой.According to the present application, a variant may be a protein or peptide obtained by substitution, deletion or addition of one or more amino acids in the amino acid sequence of a protein and/or peptide (for example, an antibody or fragment thereof that specifically binds to the CD38 protein). For example, a functional variant may contain a protein or peptide with modification of amino acids by substitution, deletion and/or insertion of at least one, for example, 1-30, 1-20, or 1-10, or for example, 1, 2, 3 , 4 or 5 amino acids. A functional variant may substantially retain the biological activity of the protein or peptide prior to modification (eg, substitution, deletion, or addition). For example, a functional variant may retain at least 60%, 70%, 80%, 90%, or 100% of the biological activity (eg, antigen-binding capacity) of the original protein or peptide. For example, the substitution may be a conservative substitution.
По настоящей заявке, гомолог может представлять собой белок или пептид, имеющий, по меньшей мере, приблизительно 85% (например, по меньшей мере, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 91%, приблизительно 92%, приблизительно 93%, приблизительно 94%, приблизительно 95%, приблизительно 96%, приблизительно 97%, приблизительно 98%, приблизительно 99% или больше) гомологии последовательности с аминокислотной последовательностью белка и/или пептида (например, антитела или его фрагмента, который специфически связывается с белком CD38).As used herein, a homologue may be a protein or peptide having at least about 85% (e.g., at least about 85%, about 90%, about 91%, about 92%, about 93%, about 94 %, about 95%, about 96%, about 97%, about 98%, about 99% or more) sequence homology with the amino acid sequence of a protein and/or peptide (for example, an antibody or fragment thereof that specifically binds to the CD38 protein).
По настоящей заявке, гомология относится, как правило, к подобию, аналогии или ассоциации между двумя или более последовательностями. «Процент гомологии последовательностей» можно рассчитать следующим образом: две последовательности для выравнивания сравнивают в окне сравнения, чтобы определить число положений с одинаковыми основаниями нуклеиновой кислоты (например, A, T, C, G, I) или с одинаковыми аминокислотными остатками (например, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys и Met) в двух последовательностях, чтобы получить число совпадающих положений. Число совпадающих положений делят на общее число положений в окне сравнения (то есть размер окна), и результат умножают на 100 для получения процента гомологии последовательностей. Выравнивание для определения процента гомологии последовательностей можно проводить в соответствии с различными способами, известными в данной области, с использованием общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области могут определять соответствующие параметры для выравнивания последовательностей, включающие любой алгоритм, необходимый для достижения максимального выравнивания в пределах сравниваемой полноразмерной последовательности или в пределах целевой области последовательности. Гомологию также можно определить следующими способами: FASTA и BLAST. Описание алгоритма FASTA можно найти в публикации W. R. Pearson and D. J. Lipman's «Improved Tools for Biological Sequence Comparison», Proceedings of the National Academy of Sciences (Proc. Natl. Acad. Sci.), 85: 2444-2448, 1988; и D. J. Lipman and W. R. Pearson's «Fast and Sensitive Protein Mass Similarity Search», Science, 227: 1435-1441, 1989. Описание алгоритма BLAST можно найти у S. Altschul, W. Gish, W. Miller, E. W. Myers and D. Lipman, «A Basic Local Alignment Search Tool», Journal of Molecular Biology, 215: 403-410, 1990.As used herein, homology generally refers to similarity, analogy, or association between two or more sequences. "Percent sequence homology" can be calculated as follows: two sequences for alignment are compared in a comparison window to determine the number of positions with the same nucleic acid base (e.g. A, T, C, G, I) or with the same amino acid residues (e.g. Ala , Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys and Met) in two sequences to get the number of matching positions. The number of matching positions is divided by the total number of positions in the comparison window (ie, window size) and the result is multiplied by 100 to obtain the percent sequence homology. Alignment to determine percent sequence homology can be performed according to various methods known in the art using publicly available computer software such as BLAST, BLAST-2, ALIGN or Megalign (DNASTAR) software. Those skilled in the art can determine appropriate parameters for sequence alignment, including any algorithm necessary to achieve maximum alignment within the full length sequence being compared or within the target sequence region. Homology can also be determined in the following ways: FASTA and BLAST. A description of the FASTA algorithm can be found in W. R. Pearson and D. J. Lipman's "Improved Tools for Biological Sequence Comparison", Proceedings of the National Academy of Sciences (Proc. Natl. Acad. Sci.), 85: 2444-2448, 1988; and D. J. Lipman and W. R. Pearson's "Fast and Sensitive Protein Mass Similarity Search", Science, 227: 1435-1441, 1989. A description of the BLAST algorithm can be found in S. Altschul, W. Gish, W. Miller, E. W. Myers and D. Lipman , "A Basic Local Alignment Search Tool", Journal of Molecular Biology, 215: 403-410, 1990.
Нуклеиновая кислота, вектор, клетка, и способ полученияNucleic acid, vector, cell, and production method
В другом аспекте настоящей заявки дополнительно предлагается одна или несколько молекул выделенной нуклеиновой кислоты. Одна или несколько молекул нуклеиновой кислоты может содержать полинуклеотид, кодирующий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящей заявке. Например, полинуклеотид в одной или нескольких молекулах нуклеиновой кислоты может кодировать целое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, и может также кодировать его часть (например, одну или несколько из HCDR1-3, LCDR1-3, VL, VH, легкая цепь или тяжелая цепь).In another aspect of the present application, one or more isolated nucleic acid molecules are further provided. One or more nucleic acid molecules may contain a polynucleotide encoding the antibody or antigen-binding fragment of the present application. For example, a polynucleotide in one or more nucleic acid molecules may encode the entire antibody, or an antigen-binding fragment thereof, and may also encode a portion of it (e.g., one or more of HCDR1-3, LCDR1-3, VL, VH, light chain, or heavy chain) .
По меньшей мере, одна из молекул нуклеиновой кислоты из молекул нуклеиновой кислоты по настоящей заявке может быть кодон-оптимизированной. Например, способ оптимизации кодонов включает, в качестве неограничивающих примеров, удаление редких кодонов, коррекцию содержания GC, повышение стабильности мРНК, коррекцию вторичной структуры мРНК, рациональную разработку линкера и коррекцию окружения стартового кодона.At least one of the nucleic acid molecules of the nucleic acid molecules of the present application may be codon-optimized. For example, the codon optimization method includes, but is not limited to, rare codon removal, GC content correction, mRNA stability enhancement, mRNA secondary structure correction, rational linker design, and start codon environment correction.
В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты может содержать одну или несколько полинуклеотидных последовательностей, выбранных из группы, включающей SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:14., где SEQ ID NO:9 может кодировать вариабельную область легкой цепи антитела SG003 по настоящей заявке. SEQ ID NO:10 может кодировать вариабельную область тяжелой цепи антитела SG003 по настоящей заявке. SEQ ID NO:12 может кодировать легкую цепь антитела SG003 по настоящей заявке. SEQ ID NO:14 может кодировать тяжелую цепь антитела SG003 по настоящей заявке.In some embodiments, the implementation of the nucleic acid molecule may contain one or more polynucleotide sequences selected from the group including SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 and SEQ ID NO:14., where SEQ ID NO: 9 may encode the light chain variable region of the SG003 antibody of the present application. SEQ ID NO:10 may encode the heavy chain variable region of the SG003 antibody of the present application. SEQ ID NO:12 may encode the light chain of the SG003 antibody of the present application. SEQ ID NO:14 may encode the heavy chain of the SG003 antibody of the present application.
Молекула нуклеиновой кислоты по настоящей заявке может быть выделенной. Например, молекулу нуклеиновой кислоты можно получать или синтезировать следующими способами: (i) молекулу нуклеиновой кислоты можно амплифицировать in vitro, например, получать амплификацией при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР), (ii) молекула нуклеиновой кислоты можно получать путем клонирования и рекомбинации, (iii) молекулу нуклеиновой кислоты можно очищать, например, отделять путем отщепления и электрофоретического фракционирования в геле, или (iv) молекулу нуклеиновой кислоты можно синтезировать, например, путем химического синтеза. В некоторых вариантах осуществления выделенная нуклеиновая кислота представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, полученную при помощи технологии рекомбинантной ДНК.The nucleic acid molecule of the present application may be isolated. For example, a nucleic acid molecule can be obtained or synthesized in the following ways: (i) a nucleic acid molecule can be amplified in vitro , for example, obtained by polymerase chain reaction (PCR) amplification, (ii) a nucleic acid molecule can be obtained by cloning and recombination, ( iii) the nucleic acid molecule can be purified, eg separated by cleavage and gel electrophoretic fractionation, or (iv) the nucleic acid molecule can be synthesized, eg by chemical synthesis. In some embodiments, the isolated nucleic acid is a nucleic acid molecule produced using recombinant DNA technology.
По настоящей заявке нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, можно получать с помощью различных способов, известных в данной области. Эти способы включают, но не ограничиваются ими, способ с рестрикцией фрагментов или ПЦР с достройкой перекрывающихся участков с использованием синтетических олигонуклеотидов. Для получения подробной информации можно обратиться к Sambrook et al., Molecular cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989; и Ausube et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing и Wiley-Interscience, New York N.Y., 1993.According to the present application, a nucleic acid encoding an antibody or antigen-binding fragment can be obtained using various methods known in this field. These methods include, but are not limited to, fragment restriction or overlapping PCR using synthetic oligonucleotides. For details, see Sambrook et al., Molecular cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989; and Ausube et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley-Interscience, New York N.Y., 1993.
В другом аспекте настоящей заявки предлагается один или несколько векторов, которые содержат одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты по настоящей заявке. Каждый вектор может содержать одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты. Кроме того, вектор может содержать другие гены, такие как маркерный ген, который позволяет отобрать вектор в соответствующих клетках и при соответствующих условиях. Кроме того, вектор может дополнительно содержать элемент контроля экспрессии, который позволяет указанной кодирующей области быть надлежащим образом экспрессированной в соответствующем хозяине. Такой элемент контроля хорошо известен специалистам в данной области и может содержать промотор, участок связывания рибосомы, энхансер и другие элементы контроля, регулирующие транскрипцию гена или трансляцию мРНК и т.д. В некоторых вариантах осуществления последовательность для контроля экспрессии представляет собой регулируемый элемент. Конкретная структура последовательности для контроля экспрессии может варьироваться в зависимости от функций видов или типов клеток, но, как правило, содержит 5'-нетранскрибируемую последовательность и 5'- и 3'-нетранслируемую последовательность, участвующую в инициации транскрипции и трансляции, такую как TATA-бокс, кэпирующую последовательность, последовательность CAAT и т.д. Например, 5'-нетранскрибируемая последовательность для контроля экспрессии может включать промоторную область, а промоторная область может содержать промоторную последовательность для контроля транскрипции функциональной связанной с ней нуклеиновой кислоты. Последовательность для контроля экспрессии может также включать энхансерную последовательность или предшествующую активаторную последовательность. Одна или несколько молекул нуклеиновой кислоты по настоящей заявке могут быть функционально связаны с элементом контроля экспрессии.In another aspect of the present application, one or more vectors are provided that contain one or more nucleic acid molecules of the present application. Each vector may contain one or more nucleic acid molecules. In addition, the vector may contain other genes, such as a marker gene, which allows selection of the vector in appropriate cells and under appropriate conditions. In addition, the vector may further comprise an expression control element that allows said coding region to be properly expressed in the appropriate host. Such a control element is well known to those skilled in the art and may include a promoter, a ribosome binding site, an enhancer, and other control elements that regulate gene transcription or mRNA translation, etc. In some embodiments, the expression control sequence is a regulated element. The specific structure of the expression control sequence may vary depending on the functions of species or cell types, but generally contains a 5' non-transcribed sequence and a 5' and 3' non-translated sequence involved in transcription and translation initiation, such as TATA- box, capping sequence, CAAT sequence, etc. For example, a 5' non-transcribed sequence to control expression may include a promoter region, and the promoter region may contain a promoter sequence to control transcription of a functionally linked nucleic acid. The expression control sequence may also include an enhancer sequence or a precursor activator sequence. One or more nucleic acid molecules of the present application may be operably linked to an expression control element.
Вектор может содержать, например, плазмиды, космиды, вирусы, бактериофаги или другие векторы, широко используемые, например, в генетической инженерии. Например, вектор представляет собой экспрессирующий вектор. Например, экспрессирующий вектор может быть вектором T-easy.The vector may contain, for example, plasmids, cosmids, viruses, bacteriophages, or other vectors widely used, for example, in genetic engineering. For example, the vector is an expression vector. For example, the expression vector may be a T-easy vector.
В другом аспекте настоящей заявки предлагается клетка, которая может содержать одну или несколько молекул нуклеиновой кислоты по настоящей заявке и/или один или несколько векторов по настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления каждая клетка или каждый тип клеток может содержать одну молекулу нуклеиновой кислоты или один вектор или один тип молекулы нуклеиновой кислоты или вектора по настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления каждая клетка или каждый тип клеток может содержать более одной (например, два или более) молекулы нуклеиновой кислоты или вектора или более одного типа (например, два или более типов) молекулы нуклеиновой кислоты или векторов по настоящей заявке. Например, вектор по настоящей заявке можно вводить в клетку, такую как эукариотические клетки, такую как растительные клетки, грибные или дрожжевые клетки, и т.д. Вектор по настоящей заявке можно вводить в клетку способом, известным в данной области, таким как электропорация, трансфекция с липофектином, трансфекция с липофектамином, и т.д. Например, клетка может быть клеткой CHO-S.In another aspect of the present application, a cell is provided that may contain one or more nucleic acid molecules of the present application and/or one or more vectors of the present application. In some embodiments, each cell or cell type may contain one nucleic acid molecule or one vector or one type of nucleic acid molecule or vector of the present application. In some embodiments, each cell or cell type may contain more than one (eg, two or more) nucleic acid molecules or vectors, or more than one type (eg, two or more types) of nucleic acid molecules or vectors of the present application. For example, the vector of the present application can be introduced into a cell such as eukaryotic cells such as plant cells, fungal or yeast cells, etc. The vector of the present application can be introduced into a cell by a method known in the art, such as electroporation, transfection with lipofectin, transfection with lipofectamine, etc. For example, the cell may be a CHO-S cell.
В другом аспекте настоящей заявки предлагается способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. Способ может включать культивирование клетки по настоящей заявке в условиях, которые позволяют экспрессировать антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Например, целесообразно использовать соответствующие среды для культивирования, соответствующую температуру и время инкубации и так далее. Эти способы известны специалистам в данной области.In another aspect of the present application, a method for producing an antibody or antigen-binding fragment thereof is provided. The method may include culturing the cell according to the present application under conditions that allow the expression of the antibody or its antigen-binding fragment. For example, it is appropriate to use appropriate culture media, appropriate incubation temperature and time, and so on. These methods are known to those skilled in the art.
В некоторых случаях способ может дополнительно включать этап выделения и/или очистки антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. Например, для аффинной хроматографии можно использовать агарозу с белком G или белком A, и антитела в геле и/или высокоэффективную жидкостную хроматографию и т.п. также можно использовать для очистки и выделения антител или антигенсвязывающих фрагментов по настоящей заявке. Например, также можно использовать аффинную очистку с белком A.In some cases, the method may further include the step of isolating and/or purifying the antibody or antigen-binding fragment thereof. For example, protein G or protein A agarose and antibodies in gel and/or high performance liquid chromatography and the like can be used for affinity chromatography. can also be used to purify and isolate antibodies or antigen-binding fragments of the present application. For example, protein A affinity purification can also be used.
Фармацевтическая композиция и применениеPharmaceutical composition and application
В другом аспекте настоящей заявки предлагается фармацевтическая композиция, которая может содержать антитело, его антигенсвязывающий фрагмент или его вариант по настоящей заявке, молекулу нуклеиновой кислоты, вектор, или клетку, и необязательно фармацевтически приемлемый адъювант.In another aspect of the present application, a pharmaceutical composition is provided that may comprise an antibody, an antigen-binding fragment thereof, or a variant thereof, a nucleic acid molecule, a vector, or a cell, and optionally a pharmaceutically acceptable adjuvant.
Фармацевтически приемлемый адъювант может содержать буферы, антиоксиданты, консерванты, низкомолекулярные пептиды, белки, гидрофильные полимеры, аминокислоты, сахара, хелатирующие средства, противоионы, комплексные соединения с металлами и/или неионные поверхностно-активные вещества, и т.д.The pharmaceutically acceptable adjuvant may contain buffers, antioxidants, preservatives, low molecular weight peptides, proteins, hydrophilic polymers, amino acids, sugars, chelating agents, counterions, metal complexes and/or nonionic surfactants, etc.
По настоящей заявке, фармацевтическую композицию можно формулировать для перорального введения, внутривенного введения, внутримышечного введения, введения in situ в месте опухоли, ингаляции, ректального введения, вагинального введения, трансдермального введения или введения через подкожное депо.According to the present application, the pharmaceutical composition can be formulated for oral administration, intravenous administration, intramuscular administration, in situ administration at the site of a tumor, inhalation, rectal administration, vaginal administration, transdermal administration, or administration through a subcutaneous depot.
Фармацевтическую композицию можно использовать для ингибирования роста опухоли. Например, фармацевтическая композиция по настоящей заявке может ингибировать или смягчать развитие или прогрессирование заболеваний, уменьшать размер опухоли (или даже в основном устранять опухоль), и/или уменьшать и/или стабилизировать проявление болезни.The pharmaceutical composition can be used to inhibit tumor growth. For example, the pharmaceutical composition of the present application may inhibit or alleviate the development or progression of diseases, reduce the size of a tumor (or even substantially eliminate a tumor), and/or reduce and/or stabilize the manifestation of a disease.
Фармацевтическая композиция по настоящей заявке может содержать терапевтически эффективное количество антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. Терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу, необходимую для профилактики и/или лечения (по меньшей мере, частичного лечения) нарушения или состояния (например, злокачественной опухоли) и/или каких-либо осложнений у индивидуума с нарушением или состоянием или с риском развития нарушения или состояния.The pharmaceutical composition according to the present application may contain a therapeutically effective amount of an antibody or antigen-binding fragment. A therapeutically effective amount may be the dose required to prevent and/or treat (at least partially treat) a disorder or condition (e.g., cancer) and/or any complications in an individual with the disorder or condition or at risk of developing the disorder. or states.
С другой стороны, в настоящей заявке предлагается применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента для получения лекарственных средств для профилактики или лечения опухолей.On the other hand, the present application proposes the use of an antibody or antigen-binding fragment for the production of drugs for the prevention or treatment of tumors.
С другой стороны, в настоящей заявке предлагается антитело или его антигенсвязывающий фрагмент для профилактики или лечения опухолей.On the other hand, the present application provides an antibody or antigen-binding fragment for the prevention or treatment of tumors.
С другой стороны, в настоящей заявке предлагается способ профилактики или лечения опухолей. Способ включает введение нуждающемуся в этом индивидууму антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, молекулы нуклеиновой кислоты, вектора, клетки и/или фармацевтической композиции по настоящей заявке.On the other hand, the present application provides a method for preventing or treating tumors. The method includes administering to an individual in need thereof an antibody or an antigen-binding fragment thereof, a nucleic acid molecule, a vector, a cell and/or a pharmaceutical composition of the present application.
По настоящей заявке, опухоль может включать CD38-положительную опухоль. Например, CD38-положительную опухоль можно выбирать из группы, включающей множественную миелому, лимфому и лейкоз.According to the present application, the tumor may include a CD38-positive tumor. For example, a CD38 positive tumor may be selected from the group consisting of multiple myeloma, lymphoma, and leukemia.
В некоторых вариантах осуществления опухоль выбрана из группы, включающей неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина.In some embodiments, the tumor is selected from the group consisting of non-Hodgkin's lymphoma and Hodgkin's lymphoma.
С другой стороны, в настоящей заявке предлагается способ для ингибирования связывания белка CD38 с лигандом CD38, и способ включает введение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, молекулы нуклеиновой кислоты, вектора и/или клетки по настоящей заявке.On the other hand, the present application provides a method for inhibiting the binding of a CD38 protein to a CD38 ligand, and the method includes administering an antibody or antigen-binding fragment thereof, a nucleic acid molecule, a vector, and/or a cell of the present application.
По настоящей заявке, лиганд CD38 может содержать белок CD31.According to the present application, the CD38 ligand may contain the CD31 protein.
В некоторых вариантах осуществления способ для ингибирования связывания белка CD38 с лигандом CD38 представляет собой способ in vitro или ex vivo.In some embodiments, the method for inhibiting the binding of a CD38 protein to a CD38 ligand is an in vitro or ex vivo method.
Настоящая заявка может включать следующий вариант осуществления:The present application may include the following embodiment:
1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который связывается с белком CD38 с величной K D 1×10-9M или ниже.1. An antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to the CD38 protein with a K D value of 1×10 -9 M or less.
2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 1, которое может уничтожать и повреждать опухолевые клетки и/или ингибировать рост опухоли путем специфического связывания с белком CD38.2. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to
3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-2, которое может уничтожать CD38+ клетки путем антителозависимой клеточноопосредованной цитотоксичности (ADCC), комплементзависимой цитотоксичности (CDC) и/или апоптоза.3. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-2, which can kill CD38 + cells by antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC), complement-dependent cytotoxicity (CDC), and/or apoptosis.
4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 3, где опухоли включают CD38-положительную опухоль.4. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to
5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 4, где CD38-положительная опухоль выбрана из группы, включающей множественную миелому, лимфому и лейкоз.5. The antibody or antigen-binding fragment thereof according to embodiment 4, wherein the CD38 positive tumor is selected from the group consisting of multiple myeloma, lymphoma, and leukemia.
6. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 3-5, где опухоль выбрана из группы, включающей неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина.6. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 3-5, wherein the tumor is selected from the group consisting of non-Hodgkin's lymphoma and Hodgkin's lymphoma.
7. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 3-6, где опухолевые клетки включают клетки, выбранные из группы, включающей клетку Раджи, клетку Дауди, клетку Рамос и клетку RPMI8226.7. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 3-6, wherein the tumor cells include cells selected from the group consisting of a Raji cell, a Dowdy cell, a Ramos cell, and an RPMI8226 cell.
8. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-7, которое при связывании с белком CD38 связывается с одним или несколькими остатками, соответствующими аминокислотным остаткам 60-89 человеческого белка CD38.8. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-7, which, when bound to the CD38 protein, binds to one or more residues corresponding to amino acid residues 60-89 of the human CD38 protein.
9. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-8, где антитело выбран из группы, включающей моноклональное антитело, одноцепочечное антитело, химерное антитело, гуманизированное антитело и полностью человеческое антитело.9. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-8, wherein the antibody is selected from the group consisting of a monoclonal antibody, a single chain antibody, a chimeric antibody, a humanized antibody, and a fully human antibody.
10. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-9, где антигенсвязывающий фрагмент выбран из группы, включающей фрагменты Fab, Fab’, F(ab)2, F(ab’)2, Fv и ScFv.10. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-9, wherein the antigen-binding fragment is selected from the group consisting of Fab, Fab', F(ab) 2 , F(ab') 2 , Fv and ScFv fragments.
11. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-10, где белок CD38 является человеческим белком CD38 или обезьяньим белком CD38.11. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-10, wherein the CD38 protein is a human CD38 protein or a simian CD38 protein.
12. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-11, которое конкурирует с референсным антителом за связывание с белком CD38, где референсное антитело содержит вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи, вариабельная область легкой цепи референсного антитела содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3, LCDR1 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:1; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:2; LCDR3 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:3, вариабельная область тяжелой цепи референсного антитела содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3, HCDR1 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:4; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:5; и HCDR3 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:6.12. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-11 that competes with a reference antibody for binding to the CD38 protein, wherein the reference antibody comprises a light chain variable region and a heavy chain variable region, the reference antibody light chain variable region comprises LCDR1, LCDR2 and LCDR3, LCDR1 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:1; LCDR2 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2; LCDR3 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:3, the heavy chain variable region of the reference antibody contains HCDR1, HCDR2 and HCDR3, HCDR1 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:4; HCDR2 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:5; and HCDR3 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6.
13. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 12, где вариабельная область легкой цепи референсного антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:7, и вариабельная область тяжелой цепи референсного антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:8.13. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to
14. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 12-13, где легкая цепь референсного антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:22; и тяжелая цепь референсного антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:23.14. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 12-13, wherein the light chain of the reference antibody contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:22; and the heavy chain of the reference antibody contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:23.
15. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-14, которое конкурирует с референсным антителом за связывание с белком CD38, где референсное антитело содержит легкую цепь и тяжелую цепь, где легкая цепь референсного антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в любой из SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18 и SEQ ID NO:20; и тяжелая цепь референсного антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в любой из SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 и SEQ ID NO:21.15. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-14 that competes with a reference antibody for binding to the CD38 protein, wherein the reference antibody comprises a light chain and a heavy chain, wherein the reference antibody light chain comprises the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18 and SEQ ID NO:20; and the heavy chain of the reference antibody contains the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 and SEQ ID NO:21.
16. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-15, где антитело содержит легкую цепь антитела или ее фрагмент.16. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-15, wherein the antibody comprises an antibody light chain or fragment thereof.
17. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 16, где легкая цепь антитела или ее фрагмент содержит LCDR1, и LCDR1 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:1.17. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to embodiment 16, wherein the antibody light chain or fragment thereof comprises an LCDR1 and the LCDR1 comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:1.
18. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 16-17, где легкая цепь антитела или ее фрагмент содержит LCDR2, и LCDR2 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:2.18. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 16-17, wherein the antibody light chain or fragment thereof contains LCDR2 and LCDR2 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2.
19. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 16-18, где легкая цепь антитела или ее фрагмент содержит LCDR3, и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:3.19. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 16-18, wherein the antibody light chain or fragment thereof contains an LCDR3 and the LCDR3 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:3.
20. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 16-19, где легкая цепь антитела или ее фрагмент содержит вариабельную область легкой цепи VL, и вариабельная область легкой цепи VL содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:7.20. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 16-19, wherein the antibody light chain or fragment thereof comprises a VL light chain variable region and the VL light chain variable region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:7.
21. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 16-20, где легкая цепь антитела или ее фрагмент дополнительно содержит константную область человека.21. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 16-20, wherein the antibody light chain or fragment thereof further comprises a human constant region.
22. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 21, где человек константная область человека содержит константную область Igκ человека.22. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to
23. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 16-22, где легкая цепь антитела или ее фрагмент содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:22.23. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 16-22, wherein the antibody light chain or fragment thereof comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:22.
24. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 27, где легкая цепь антитела или ее фрагмент содержит аминокислотную последовательность, показанную в любой из SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18 и SEQ ID NO:20.24. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to
25. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-24, где антитело содержит тяжелую цепь антитела или ее фрагмент.25. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-24, wherein the antibody comprises an antibody heavy chain or fragment thereof.
26. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 25, где тяжелая цепь антитела или ее фрагмент содержит HCDR1, и HCDR1 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:4.26. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to embodiment 25, wherein the antibody heavy chain or fragment thereof contains HCDR1 and HCDR1 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:4.
27. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 25-26, где тяжелая цепь антитела или ее фрагмент содержит HCDR2, и HCDR2 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:5.27. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 25-26, wherein the antibody heavy chain or fragment thereof contains HCDR2 and HCDR2 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:5.
28. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 25-27, где тяжелая цепь антитела или ее фрагмент содержит HCDR3, и HCDR3 содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:6.28. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 25-27, wherein the antibody heavy chain or fragment thereof contains HCDR3 and HCDR3 contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6.
29. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 25-28, где тяжелая цепь антитела или ее фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи VH, и вариабельная область тяжелой цепи VH содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:8.29. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 25-28, wherein the antibody heavy chain or fragment thereof comprises a VH heavy chain variable region and the VH heavy chain variable region comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:8.
30. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 25-29, где тяжелая цепь антитела или ее фрагмент дополнительно содержит константную область человека.30. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 25-29, wherein the antibody heavy chain or fragment thereof further comprises a human constant region.
31. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 30, где константная область человека содержит константную область IgG человека.31. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to
32. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 31, где константная область IgG содержит константную область IgG1 человека.32. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to embodiment 31, wherein the IgG constant region comprises a human IgG1 constant region.
33. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 25-32, где, тяжелая цепь антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO:23.33. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 25-32, wherein the heavy chain of the antibody contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:23.
34. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 33, где тяжелая цепь антитела содержит аминокислотную последовательность, показанную в любой из SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19 и SEQ ID NO:21.34. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to embodiment 33, wherein the heavy chain of the antibody comprises the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, and SEQ ID NO:21.
35. Одна или несколько изолированных молекул нуклеиновой кислоты, содержащих полинуклеотид, кодирующий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-34.35. One or more isolated nucleic acid molecules comprising a polynucleotide encoding an antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-34.
36. Молекула нуклеиновой кислоты в соответствии с вариантом осуществления 35, где, по меньшей мере, одна из молекул нуклеиновой кислоты является кодон-оптимизированной.36. A nucleic acid molecule according to embodiment 35, wherein at least one of the nucleic acid molecules is codon-optimized.
37. Молекула нуклеиновой кислоты в соответствии с любым из вариантов осуществления 35-36, где молекула нуклеиновой кислоты содержит одну или несколько полинуклеотидных последовательностей, выбранных из группы, включающей SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:14.37. A nucleic acid molecule according to any one of embodiments 35-36, wherein the nucleic acid molecule comprises one or more polynucleotide sequences selected from the group consisting of SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, and SEQ ID NO:14.
38. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты в соответствии с любым из вариантов осуществления 35-37.38. A vector containing a nucleic acid molecule according to any of embodiments 35-37.
39. Клетка, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты в соответствии с любым из вариантов осуществления 35-37 или вектор в соответствии с вариантом осуществления 38.39. A cell containing a nucleic acid molecule according to any of embodiments 35-37 or a vector according to embodiment 38.
40. Способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-34, включающий культивирование клетки в соответствии с вариантом осуществления 39 в условиях, которые позволяют экспрессировать антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.40. A method for producing an antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of Embodiments 1-34, comprising culturing the cell according to Embodiment 39 under conditions that allow expression of the antibody or antigen-binding fragment thereof.
41. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-34, молекулу нуклеиновой кислоты в соответствии с любым из вариантов осуществления 35-37, вектор в соответствии с любым из вариантов осуществления 38, или клетка в соответствии с вариантом осуществления 39, и необязательно фармацевтически приемлемый адъювант.41. A pharmaceutical composition comprising an antibody or antigen-binding fragment thereof according to any of embodiments 1-34, a nucleic acid molecule according to any of embodiments 35-37, a vector according to any of embodiments 38, or a cell according to any of embodiments 38, with Embodiment 39, and optionally a pharmaceutically acceptable adjuvant.
42. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-34 для получения лекарственных средств для профилактики или лечения опухолей.42. The use of an antibody or antigen-binding fragment thereof according to any of embodiments 1-34 for the preparation of medicaments for the prevention or treatment of tumors.
43. Применение в соответствии с вариантом осуществления 42, где опухоли включают CD38-положительную опухоль.43. Use according to Embodiment 42, wherein the tumors comprise a CD38 positive tumor.
44. Применение в соответствии с вариантом осуществления 43, где CD38-положительная опухоль выбрана из группы, включающей множественную миелому, лимфому и лейкоз.44. Use according to Embodiment 43, wherein the CD38 positive tumor is selected from the group consisting of multiple myeloma, lymphoma, and leukemia.
45. Применение в соответствии с вариантами осуществления 42-44, где опухоль выбрана из группы, включающей неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина.45. Use according to embodiments 42-44 wherein the tumor is selected from the group consisting of non-Hodgkin's lymphoma and Hodgkin's lymphoma.
46. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-34 для профилактики или лечения опухолей.46. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-34 for the prevention or treatment of tumors.
47. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 46, где опухоли включают CD38-положительную опухоль.47. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to embodiment 46, wherein the tumors comprise a CD38 positive tumor.
48. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с вариантом осуществления 47, где CD38-положительная опухоль выбрана из группы, включающей множественную миелому, лимфому и лейкоз.48. The antibody or antigen-binding fragment thereof according to embodiment 47, wherein the CD38 positive tumor is selected from the group consisting of multiple myeloma, lymphoma, and leukemia.
49. Применение в соответствии с любым из вариантов осуществления 46-48, где опухоль выбрана из группы, включающей неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина.49. Use according to any one of embodiments 46-48 wherein the tumor is selected from the group consisting of non-Hodgkin's lymphoma and Hodgkin's lymphoma.
50. Способ профилактики или лечения опухолей у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение индивидууму антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-34, молекулы нуклеиновой кислоты в соответствии с любым из вариантов осуществления 35-37, вектора в соответствии с вариантом осуществления 38, клетки в соответствии с вариантом осуществления 39, и/или фармацевтической композиции в соответствии с вариантом осуществления 40.50. A method for preventing or treating tumors in an individual in need thereof, comprising administering to the individual an antibody or an antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-34, a nucleic acid molecule according to any one of embodiments 35-37, a vector according to embodiment 38, a cell according to embodiment 39, and/or a pharmaceutical composition according to
51. Способ в соответствии с вариантом 50, где опухоли включают CD38-положительную опухоль.51. The method of
52. Способ в соответствии с вариантом 51, где CD38-положительная опухоль выбрана из группы, включающей множественную миелому, лимфому и лейкоз.52. The method of embodiment 51 wherein the CD38 positive tumor is selected from the group consisting of multiple myeloma, lymphoma, and leukemia.
53. Способ в соответствии с любым из вариантов осуществления 50-52, где опухоль выбрана из группы, включающей неходжкинскую лимфому и лимфому Ходжкина.53. The method according to any one of embodiments 50-52, wherein the tumor is selected from the group consisting of non-Hodgkin's lymphoma and Hodgkin's lymphoma.
54. Способ для ингибирования связывания белка CD38 с лигандом CD38, включающий введение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в соответствии с любым из вариантов осуществления 1-34, молекулы нуклеиновой кислоты в соответствии с любым из вариантов осуществления 35-37, вектора в соответствии с вариантом осуществления 38, клетки в соответствии с вариантом осуществления 39.54. A method for inhibiting the binding of a CD38 protein to a CD38 ligand, comprising administering an antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of embodiments 1-34, a nucleic acid molecule according to any one of embodiments 35-37, a vector according to embodiment 38, cells according to embodiment 39.
55. Способ в соответствии с вариантом 54, где CD38 лиганд содержит CD31.55. The method according to option 54, wherein the CD38 ligand comprises CD31.
Не ограничиваясь какой-либо теорией, следующие примеры предназначены только для объяснения режима работы продуктов, способов или систем по настоящей заявке, но не предназначены для ограничения объема изобретения по настоящей заявке.Without being limited by any theory, the following examples are only intended to explain the mode of operation of the products, methods or systems of the present application, but are not intended to limit the scope of the invention of the present application.
ПРИМЕРЫEXAMPLES
Пример 1: Получение гибридомных антител и клонирование геновExample 1: Preparation of hybridoma antibodies and gene cloning
Иммунизация мышей: мышей balb/c (приобретенных у Beijing Vital River Labs Animal Technology Co., Ltd.) подкожно (s.c.) иммунизировали три раза адъювантом Фрейнда или неполным адъювантом Фрейнда, смешанным со 100 мкг растворимого антигена CD38 (приобретенного у Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.). В сутки 0 использовали полный адъювант Фрейнда и в сутки 14 и сутки 28 использовали неполный адъювант Фрейнда. Клетки селезенки иммунизированных мышей сливали с миеломными клетками SP2/0 (ATCC) в соответствии со стандартным способом.Immunization of mice: balb/c mice (purchased from Beijing Vital River Labs Animal Technology Co., Ltd.) subcutaneously (s.c.) were immunized three times with Freund's adjuvant or incomplete Freund's adjuvant mixed with 100 µg of soluble CD38 antigen (purchased from Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.). On
Гибридомное слияние: проводили слияние мышиных селезенок в соответствии с общепринятым в настоящее время способом гибридомного слияния, и проводили скрининг слитых гибридомных клеток (105 клеток на лунку) в соответствии со способом скрининга HAT. Через 12 суток супернатант подвергали анализу ELISA с использованием микропланшета, покрытого антигеном CD38. Предпочтительные клоны проводили через второй раунд субклонирования способом серийных разведений. Полученный штамм гибридомы, который стабильно экспрессировал интересующее антитело, сохраняли и использовали для конструирования библиотек.Hybridoma Fusion: Mouse spleens were fused according to the currently conventional hybridoma fusion method, and fused hybridoma cells (10 5 cells per well) were screened according to the HAT screening method. After 12 days, the supernatant was subjected to ELISA analysis using a microplate coated with CD38 antigen. Preferred clones were subjected to a second round of subcloning by the serial dilution method. The resulting hybridoma strain, which stably expressed the antibody of interest, was stored and used to construct libraries.
Получение РНК: РНК получали с использованием набора для выделения РНК с реагентом TRIzol (приобретен у Life technologies). Для получения кДНК, кодирующей ген антитела, использовали набор для обратной транскрипции (приобретен у Beijing Quanshijin Biotechnology Co., Ltd.), и кДНК использовали в качестве матрицы для ПЦР-амплификации гена вариабельной области антитела. Клонировали вектор T-easy, и после клонирования полученные последовательности вариабельной области тяжелой цепи и легкой цепи секвенировали, чтобы затем получить соответствующие аминокислотные последовательности.RNA Preparation: RNA was prepared using the TRIzol Reagent RNA Isolation Kit (purchased from Life technologies). A reverse transcription kit (purchased from Beijing Quanshijin Biotechnology Co., Ltd.) was used to obtain cDNA encoding an antibody gene, and cDNA was used as a template for PCR amplification of the antibody variable region gene. The T-easy vector was cloned, and after cloning, the resulting heavy chain and light chain variable region sequences were sequenced to then obtain the corresponding amino acid sequences.
Пример 2: Гуманизация и получение антителаExample 2 Humanization and Antibody Production
Последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой цепей мышиного антитела, полученные в Примере 1, подвергали выравниванию последовательностей с последовательностями человеческого антитела из базы данных NCBI при помощи способа для выравнивания последовательностей онлайн (IgBlast), предлагаемого NCBI, для выявления потенциальных сайтов для гуманизации. Далее, конструировали трехмерную структуру вариабельной области мышиного антитела при помощи SwissModel, для определения сайтов для гуманизации. Проводили гуманизацию по соответствующим сайтам для гуманизациидля получения последовательности гуманизированного антитела.The mouse antibody heavy and light chain variable region sequences obtained in Example 1 were subjected to sequence alignment with human antibody sequences from the NCBI database using the NCBI Online Sequence Alignment (IgBlast) method to identify potential sites for humanization. Next, a three-dimensional structure of the mouse antibody variable region was constructed using the SwissModel to determine sites for humanization. Humanization was carried out at the appropriate humanization sites to obtain the humanized antibody sequence.
Гуманизированное антитело назвали SG003, и результаты секвенирования показали, что аминокислотные последовательности LCDR1-3 антитела SG003 показаны в SEQ ID NO.1, SEQ ID NO.2, и SEQ ID NO.3, соответственно; аминокислотная последовательность VL показана в SEQ ID NO.7; нуклеотидная последовательность, кодирующая VL, полученную путем оптимизации кодонов и обратной трансляции, показана в SEQ ID NO.9; аминокислотные последовательности HCDR1-3 антитела SG003 показаны в SEQ ID NO.4, SEQ ID NO.5 и SEQ ID NO.6, соответственно; аминокислотная последовательность VH показана в SEQ ID NO.8; и нуклеотидная последовательность, кодирующая VH, полученную путем оптимизации кодонов и обратной трансляции, показана в SEQ ID NO.10.The humanized antibody was named SG003, and the sequencing results showed that the LCDR1-3 amino acid sequences of the SG003 antibody are shown in SEQ ID NO.1, SEQ ID NO.2, and SEQ ID NO.3, respectively; the amino acid sequence of VL is shown in SEQ ID NO.7; the nucleotide sequence encoding VL obtained by codon optimization and reverse translation is shown in SEQ ID NO.9; the amino acid sequences of HCDR1-3 of antibody SG003 are shown in SEQ ID NO.4, SEQ ID NO.5 and SEQ ID NO.6, respectively; the amino acid sequence of VH is shown in SEQ ID NO.8; and the nucleotide sequence encoding the VH obtained by codon optimization and reverse translation is shown in SEQ ID NO.10.
Аминокислотная последовательность легкой цепи антитела SG003 показана в SEQ ID NO.11; а кодирующая ее нуклеотидная последовательность показана в SEQ ID NO.12. Аминокислотная последовательность тяжелой цепи антитела SG003 показана в SEQ ID NO.13; а кодирующая ее нуклеотидная последовательность показана в SEQ ID NO.14.The light chain amino acid sequence of antibody SG003 is shown in SEQ ID NO.11; and the nucleotide sequence encoding it is shown in SEQ ID NO.12. The amino acid sequence of the heavy chain of antibody SG003 is shown in SEQ ID NO.13; and the nucleotide sequence encoding it is shown in SEQ ID NO.14.
Полученные гены вариабельных областей гуманизированного антитела клонировали в эукариотический экспрессирующий вектор pCMV-163, содержащий ген константной области IgG человека, для конструирования вектора, экспрессирующего целое антитело, с физической картой, показанной на Фиг. 1. На Фиг. 1, показаны различные компоненты эукариотического экспрессирующего вектора pCMV-163, известные в данной области и рекомбинированные в показанном порядке.The resulting humanized antibody variable region genes were cloned into the pCMV-163 eukaryotic expression vector containing the human IgG constant region gene to construct a whole antibody expression vector with the physical map shown in FIG. 1. In FIG. 1 shows the various components of the pCMV-163 eukaryotic expression vector known in the art and recombined in the order shown.
Набор с экспрессирующей системой ExpiCHOTM (приобретен у Thermo Fisher Scientific) применяли для трансфекции эукариотического экспрессирующего вектора, кодирующего антитело SG003 в клетки CHO-S для экспрессии, и собирали супернатант клеточной культуры, содержащий интересующий белок. Целевое антитело очищали с использованием общепринятой аффинной очистки с белком A.The ExpiCHOTM Expression System Kit (purchased from Thermo Fisher Scientific) was used to transfect a eukaryotic expression vector encoding the SG003 antibody into CHO-S cells for expression, and cell culture supernatant containing the protein of interest was harvested. The target antibody was purified using conventional protein A affinity purification.
Пример 3: Связывание гуманизированного антитела с целевым антигеномExample 3 Binding of Humanized Antibody to Target Antigen
Планшет для ELISA покрывали раствором PBS, содержащим 1 мкг/мл слитого белка CD38-His при 4°C в течение ночи. Планшет затем отмывали раствором PBS, содержащим 0,01% Tween-20 (PBST). 10% эмбриональную телячью сыворотку добавляли к PBST и блокировали при 37°C в течение часа. Затем добавляли различные концентрации антитела SG003 и контрольного антитела даратумумаб (DARZALEX) и проводили реакцию при 37°C в течение часа. После отмывания PBST добавляли меченные пероксидазой хрена (HRP) вторичные козлиные антитела к человеческому IgG (приобретенные у Thermo Fisher Scientific) и проводили реакцию при 37°C в течение 30 минут. Затем планшет отмывали с PBST (5 раз), и оставшиеся капли жидкости удаляли насколько возможно промокательной бумагой. В каждую лунку добавляли 100 мкл TMB (приобретенного в eBioscience) и помещали при комнатной температуре (20±5°C) в темноту в течение 1-5 минут. В каждую лунку добавляли 100 мкл останавливающего раствора 2N H2SO4 для гашения реакции с субстратом. Значение OD считывали при 450 нм с помощью микроспектрофотометра для чтения планшетов и анализировали связывающую способность антитела по отношению к целевому антигену CD38-His. Результаты показывают, что антитело SG003 показало более сильную активность связывания, чем контрольное антитело даратумумаб, и результаты показаны на фиг. 2. На фиг. 2, значение ЕС50 составляет 35,1±10,5 нг/мл, тогда как значение ЕС50 антитела даратумумаб составляет 150,9±105,8 нг/мл.The ELISA plate was covered with a PBS solution containing 1 μg/ml CD38-His fusion protein at 4°C overnight. The plate was then washed with a PBS solution containing 0.01% Tween-20 (PBST). 10% fetal calf serum was added to PBST and blocked at 37°C for one hour. Then, various concentrations of SG003 antibody and control antibody daratumumab (DARZALEX) were added and reacted at 37° C. for one hour. After washing with PBST, horseradish peroxidase (HRP) labeled secondary goat anti-human IgG antibodies (purchased from Thermo Fisher Scientific) were added and reacted at 37° C. for 30 minutes. The plate was then washed with PBST (5 times) and the remaining drops of liquid were removed as far as possible with blotting paper. 100 μl TMB (purchased from eBioscience) was added to each well and placed at room temperature (20±5°C) in the dark for 1-5 minutes. 100 μl of 2N H 2 SO 4 stopping solution was added to each well to quench the reaction with the substrate. The OD value was read at 450 nm with a microplate reader and the binding capacity of the antibody to the target CD38-His antigen was analyzed. The results show that the SG003 antibody showed stronger binding activity than the control antibody daratumumab, and the results are shown in FIG. 2. In FIG. 2, the EC50 value is 35.1±10.5 ng/mL, while the EC50 value of the daratumumab antibody is 150.9±105.8 ng/mL.
Пример 4: Определение аффинности гуманизированного антителаExample 4 Affinity Determination of a Humanized Antibody
Аффинность антитела анализировали при помощи прибора для взаимодействия биомакромолекул BIACORE (GE). Антитело к человеческому IgG-Fab (приобретено у Abcam) связывали с чипом, и использовали антитело к человеческому IgG для захвата антитела SG003. Концентрация антитела была установлена на 1 мкг/мл, время инъекции составило 60-150 секунд; антиген CD38 применяли в качестве подвижной фазы; использовали шесть градиентов концентрации (3,125, 6,25, 12,5, 25, 50, 100 нМ), время ассоциации составило 120 секунд; время диссоциации составило 1200 секунд; использовали 10 мМ буфер глицин-соляная кислота (pH 2,1) для регенерации в течение 60 секунд. Результаты показали, что антитело SG003 имеет аффинность, показанную в таблице 1.Antibody affinity was analyzed using the BIACORE Biomacromolecular Interaction Instrument (GE). An anti-human IgG-Fab (purchased from Abcam) was linked to the chip and the anti-human IgG was used to capture the SG003 antibody. The antibody concentration was set to 1 μg/ml, the injection time was 60-150 seconds; CD38 antigen was used as mobile phase; six concentration gradients were used (3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 nM), association time was 120 seconds; the dissociation time was 1200 seconds; used 10 mM glycine-hydrochloric acid buffer (pH 2.1) to regenerate within 60 seconds. The results showed that the SG003 antibody has the affinity shown in Table 1.
(106⋅1/Ms) Association constant
(10 6 ⋅1/Ms)
(10-4⋅1/s) Dissociation constant
(10 -4 ⋅1/s)
(10-10M) Relative affinity
( 10-10M )
Пример 5: Специфическое распознавание целевого антигена гуманизированным антителомExample 5 Specific Recognition of a Target Antigen by a Humanized Antibody
Различные белки, такие как молочный белок (Beijing Bomed Biotechnology Co., Ltd.), BSA (BOVOGEN), CD19 (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.), TROP2 (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.), CD47 (Beijing Magpel Biotech Technology Co., Ltd.), CD38 (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.), Gas6 (R&D) и AXL (ACRO Biosystems) были соответственно использованы для покрытия стрипов для ELISA в концентрации 1 мг/мл при 4°C в течение ночи. После отмывания PBST, добавляли 10% эмбриональную телячью сыворотку и блокировали при 37°C в течение часа. Добавляли антитело SG003 и проводили реакцию при 37°C в течение часа. После отмывания PBST добавляли меченные пероксидазой хрена (HRP) вторичные козлиные антитела к человеческому IgG (приобретенные у Thermo Fisher Scientific) и проводили реакцию при 37°C в течение 30 минут. Затем планшет отмывали с PBST (5 раз), и оставшиеся капли жидкости удаляли насколько возможно промокательной бумагой. В каждую лунку добавляли 100 мкл TMB (eBioscience) и помещали при комнатной температуре (20±5°C) в темноту в течение 1-5 минут. В каждую лунку добавляли 100 мкл останавливающего раствора 2N H2SO4 для гашения реакции с субстратом, и считывали значение OD при 450 нм с помощью микроспектрофотометра для чтения планшетов для анализа связывающей способности антитело-белок.Various proteins such as milk protein (Beijing Bomed Biotechnology Co., Ltd.), BSA (BOVOGEN), CD19 (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.), TROP2 (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.), CD47 (Beijing Magpel Biotech Technology Co., Ltd.), CD38 (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.), Gas6 (R&D), and AXL (ACRO Biosystems) were respectively used to coat ELISA strips at 1 mg/mL at 4°C during the night. After washing with PBST, 10% fetal calf serum was added and blocked at 37° C. for one hour. SG003 antibody was added and reacted at 37°C for one hour. After washing with PBST, horseradish peroxidase (HRP) labeled secondary goat anti-human IgG antibodies (purchased from Thermo Fisher Scientific) were added and reacted at 37° C. for 30 minutes. The plate was then washed with PBST (5 times) and the remaining drops of liquid were removed as far as possible with blotting paper. 100 μl TMB (eBioscience) was added to each well and placed at room temperature (20±5°C) in the dark for 1-5 minutes. 100 μl of 2N H 2 SO 4 stopping solution was added to each well to quench the reaction with the substrate, and the OD value at 450 nm was read using a microspectrophotometer to read antibody-protein binding assay plates.
Результаты показаны на фиг. 3. Результаты на фиг. 3 показывают, что антитело SG003 может специфически распознавать целевой антиген CD38, но не показывает реакции специфического связывания с молочным белком, BSA, CD19, TROP2, CD47, AXL, Gas6 и другими белками.The results are shown in FIG. 3. Results in FIG. 3 shows that the SG003 antibody can specifically recognize the target CD38 antigen, but does not show a specific binding reaction with milk protein, BSA, CD19, TROP2, CD47, AXL, Gas6, and other proteins.
Пример 6: Связывание гуманизированного антитела с антигеном на клеточной поверхностиExample 6 Binding of Humanized Antibody to Cell Surface Antigen
Применяли технологию проточного анализа для выявления связывания белков CD38 на поверхностях клеток Раджи, клеток Дауди, клеток Рамос и клеток RPMI8226 с антителом SG003 и контрольным антителом даратумумаб. Собирали клетки в фазе логарифмического роста, корректировали плотность клеток до 5×106 клетки/мл, и предварительно охлаждали на льду. Антитело SG003 и контрольное антитело даратумумаб разбавляли до различных концентраций предварительно охлажденным физиологическим раствором, содержащим 2% FBS. Брали 100 мкл клеток, и добавляли равный объем разведенного антитела для проведения реакции при 4°C в течение 30 минут в темноте. После завершения реакции клетки дважды отмывали. Клетки ресуспендировали в 100 мкл разведенных вторичных антител мыши к IgG, меченных фикоэритрином (приобретены у BD Pharmingen), и проводили реакцию при 4°C в темноте в течение 30 минут. После завершения реакции клетки дважды отмывали предварительно охлажденным физиологическим раствором, содержащим 2% FBS. Клетки ресуспендировали в 400 мкл 1% параформальдегида. Для анализа связывающей способности антител с антигенами на клеточной поверхности использовали проточную цитометрию (BD Calibur).Flow analysis technology was used to detect the binding of CD38 proteins on the surfaces of Raji cells, Daudi cells, Ramos cells and RPMI8226 cells to the SG003 antibody and the control antibody daratumumab. Collected cells in the phase of logarithmic growth, adjusted the cell density to 5×10 6 cells/ml, and pre-cooled on ice. The SG003 antibody and the control antibody daratumumab were diluted to various concentrations with pre-chilled saline containing 2% FBS. Took 100 μl of cells, and added an equal volume of diluted antibody to carry out the reaction at 4°C for 30 minutes in the dark. After completion of the reaction, the cells were washed twice. Cells were resuspended in 100 μl of diluted phycoerythrin-labeled anti-IgG secondary mouse antibodies (purchased from BD Pharmingen) and reacted at 4° C. in the dark for 30 minutes. After completion of the reaction, the cells were washed twice with pre-chilled saline containing 2% FBS. Cells were resuspended in 400 μl of 1% paraformaldehyde. Flow cytometry (BD Calibur) was used to analyze the binding capacity of antibodies to antigens on the cell surface.
Результаты показывают, что антитело SG003 может специфически распознавать CD38 на поверхности клеток Раджи, клеток Дауди, клеток Рамос и клеток RPMI8226. Эта активность распознавания значительно выше, чем у контрольного антитела Даратумумаб и зависит от дозы, и значение EC50 для SG003 и клеток Раджи (фиг. 4A) было 34,4 нг/мл, а у Даратумумаба было 49,3 нг/мл. Значение EC50 для SG003 и клеток Дауди (фиг. 4B) было 36,7 нг/мл, а у Даратумумаба было 50,9 нг/мл. Значение EC50 для SG003 и клеток Рамос (фиг. 4C) было 81,5 нг/мл, а у Даратумумаба было 95,1 нг/мл. Значение EC50 для SG003 и клеток RPMI8226 (фиг. 4D) было 140,3 нг/мл, а у Даратумумаба было 176,5 нг/мл.The results show that the SG003 antibody can specifically recognize CD38 on the surface of Raji cells, Daudi cells, Ramos cells, and RPMI8226 cells. This recognition activity is significantly higher than the control antibody Daratumumab and is dose dependent, and the EC50 value for SG003 and Raji cells (Fig. 4A) was 34.4 ng/mL and for Daratumumab was 49.3 ng/mL. The EC50 value for SG003 and Daudi cells (Fig. 4B) was 36.7 ng/mL and for Daratumumab it was 50.9 ng/mL. The EC50 value for SG003 and Ramos cells (Fig. 4C) was 81.5 ng/mL and for Daratumumab it was 95.1 ng/mL. The EC50 value for SG003 and RPMI8226 cells (Fig. 4D) was 140.3 ng/mL and for Daratumumab it was 176.5 ng/mL.
Пример 7: Антителозависмая клеточноопосредованная цитотоксичность (ADCC) гуманизированного антителаExample 7: Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity (ADCC) of a Humanized Antibody
Сначала, плотность клеток-мишеней (клетки Раджи, клетки Дауди, клетки Рамос и клетки RPMI8226), необходимые для эксперимента, корректировали до 2×105 клетки/мл, ресуспендиовали в буфере для ADCC (среда MEM без фенола красного+1% FBS), и добавляли в 96-луночный планшет (50 мкл/лунку). Затем, 100 мкл антитела SG003 в различных концентрациях добавляли в каждую лунку, перемешивали до гомогенности и инкубировали при 37°C в инкубаторе, содержащем 5% CO2, в течение 30 минут. Затем, плотность необходимых эффекторных клеток NK92MI-CD16a (приобретены у Huabo Bio) корректировали до 1,2×106 клетка/мл, и добавляли к лункам с клетками-мишенями в соотношении клеток-мишеней с эффекторными клетками 1:6. После смешивания, смесь инкубировали при 37°C в течение 4-6 часов в инкубаторе, содержащем 5% CO2, а затем удаляли часть исходного раствора (100 мкл/лунку) в 96-луночном планшете и добавляли в каждую лунку реакционную смесь с LDH из набора для детекции LDH (набор для детекции цитотоксичности, приобретен у Roche) (100 мкл/лунку). Проводили реакцию смеси при 37°C в течение 10 минут. Затем, добавляли останавливающий раствор (50 мкл/лунку) и осторожно перемешивали. Значение OD читали при 492 нм при помощи микроспектрофотометр для чтения планшетов, в качестве фонового значения использовали значение OD при 650 нм. В эксперименте также использовали следующие контрольные группы: контроль 1 был буфер для ADCC, контроль 2 был клетки-мишени+буфер для ADCC, контроль 3 был клетки-мишени+лизат+буфер для ADCC, и контроль 4 был клетки-мишени+эффекторные клетки+буфер для ADCC. Показатель специфического лизиса (%) = ((экспериментальная группа-контроль 4)/(контроль 3 - контроль 2)) ×100%. Кривую доза-эффект анализировали при помощи GraphPad Prism, версии 5.First, the density of target cells (Raji cells, Daudi cells, Ramos cells and RPMI8226 cells) required for the experiment was adjusted to 2×10 5 cells/ml, resuspended in ADCC buffer (MEM without phenol red + 1% FBS) , and added to a 96-well plate (50 μl/well). Then, 100 μl of SG003 antibody at various concentrations was added to each well, mixed until homogeneous and incubated at 37°C in an incubator containing 5% CO 2 for 30 minutes. Then, the density of the desired NK92MI-CD16a effector cells (purchased from Huabo Bio) was adjusted to 1.2×10 6 cells/ml, and added to the target cell wells at a ratio of target cells to effector cells of 1:6. After mixing, the mixture was incubated at 37°C for 4-6 hours in an incubator containing 5% CO 2 and then part of the stock solution (100 μl/well) was removed in a 96-well plate and the LDH reaction mixture was added to each well. from the LDH Detection Kit (Cytotoxicity Detection Kit, purchased from Roche) (100 µl/well). The mixture was reacted at 37° C. for 10 minutes. Then, stop solution (50 µl/well) was added and mixed gently. The OD value was read at 492 nm using a microplate reader, and the OD value at 650 nm was used as the background value. The following control groups were also used in the experiment:
Результаты показывают, что при тестировании с эффекторными клетками NK92MI-CD16a и клетками-мишенями Раджи антитело SG003 показало очень эффективную активность ADCC (см. Фиг. 5A), при этом значение EC50 для SG003 составило 6,97 нг/мл, а для Даратумумаба составило 17,0 нг/мл. Когда в качестве клетки-мишени использовали клетки Дауди, значение EC50 для SG003 составляло 0,72 нг/мл, а для Даратумумаба составляло 4,6 нг/мл (см. Фиг. 5B). В то же время антитело SG003 также показало эффективную активность ADCC в отношении клеток Рамос (см. Фиг. 5C). Значение EC50 для SG003 составило 0,69±0,007 нг/мл, а для Даратумумаба составило 3,01 нг/мл. Антитело SG003 также показало эффективную активность ADCC в отношении клеток RPMI8226 (см. Фиг. 5D) со значением EC50 для SG003 1,46 нг/мл, а для Даратумумаба 4,94 нг/мл.The results show that when tested with NK92MI-CD16a effector cells and Raji target cells, SG003 showed very efficient ADCC activity (see Figure 5A), with an EC50 value of 6.97 ng/mL for SG003 and 6.97 ng/mL for Daratumumab. 17.0 ng/ml. When Daudi cells were used as the target cell, the EC50 value for SG003 was 0.72 ng/ml and for Daratumumab was 4.6 ng/ml (see Fig. 5B). At the same time, the SG003 antibody also showed effective ADCC activity against Ramos cells (see Fig. 5C). The EC50 value for SG003 was 0.69±0.007 ng/mL and for Daratumumab it was 3.01 ng/mL. The SG003 antibody also showed effective ADCC activity against RPMI8226 cells (see Fig. 5D) with an EC50 value for SG003 of 1.46 ng/mL and for Daratumumab 4.94 ng/mL.
Пример 8: Ингибирование опухолевой активности in vivo при помощи гуманизированного антителаExample 8: In vivo inhibition of tumor activity with a humanized antibody
Модель опухоли была создана путем инокуляции клеток Раджи-Luc в мышей CB17 SCID, чтобы оценить эффект антитела SG003 в отношении ингибирования активности опухоли.A tumor model was created by inoculating Raji-Luc cells into CB17 SCID mice to evaluate the effect of the SG003 antibody in inhibiting tumor activity.
Для эксперимента выбирали самок мышей CB17 в возрасте 5-8-недель (приобретенных у Beijing Biocytogen Co., Ltd.). Клетка Раджи-Luc представляет собой стабильную клеточную линию, полученную Beijing Biocytogen Co., Ltd. на основе клетки Раджи, которая трансформировали репортерным геном люциферина. После восстановления и культивирования до необходимого количества, собирали клетки в логарифмической фазе роста и суспендировали до концентрации 5×106 клеток/0,2 мл. Мышам CB17 SCID инокулировали клетки через хвостовую вену в количестве 0,2 мл/мышь. После инокуляции наблюдали при помощи визуализатора для мелких животных за ростом опухоли и массой тела на Сутки 0 и Сутки 7. На Сутки 7, выбирали 18 мышей с умеренными сигналами визуализации опухоли и случайным образом распределяли по трем группам, по шесть мышей в каждой группе. Затем животным стали вводить инъекции. Была контрольная группа с физиологическим раствором, группа положительного контроля (Даратумумаб, приобретено у Johnson&Johnson) и экспериментальная группа (SG003) с дозировкой 200 мкг/кг, один раз в две недели, всего два раза. Затем наблюдали за массой тела, ростом опухоли и коэффициентом выживаемости у мышей.CB17 female mice aged 5-8 weeks (purchased from Beijing Biocytogen Co., Ltd.) were selected for the experiment. The Raji-Luc cell is a stable cell line obtained by Beijing Biocytogen Co., Ltd. based on a Raja cell that was transformed with a luciferin reporter gene. After reconstitution and cultivation to the required number, cells in the logarithmic growth phase were harvested and suspended to a concentration of 5×10 6 cells/0.2 ml. CB17 SCID mice were inoculated with cells via the tail vein at 0.2 ml/mouse. After inoculation, tumor growth and body weight were monitored with a small animal imager on
Результаты показывают, что как Даратумумаб, так и SG003 могут переноситься экспериментальными животными. У животных в каждой группе наблюдали значительное ингибирующее действие на рост опухоли по сравнению с контрольной группой (см. Фиг. 6). На Сутки 7 после первого введения, средняя интенсивность флуоресценции в группах лечения Даратумумабом и антителом SG003 была соответственно (среднее 3,92×107, стандартная ошибка 4,04×106), (среднее 3,19×107, стандартная ошибка 9,32×106), что достоверно ниже средней интенсивности флуоресценции опухоли в контрольной группе (среднее 3,04×108, стандартная ошибка 4,29×107).The results show that both daratumumab and SG003 can be tolerated in experimental animals. Animals in each group showed a significant inhibitory effect on tumor growth compared to the control group (see Fig. 6). On
Затем дополнительно наблюдали за коэффициентом выживаемости животных. Среднее время выживания в контрольной группе составило 12 суток после распределения по группам, для Даратумумаба - 21 сутки, а для группы с SG003-28 суток. Группа с SG003 превосходит группу с Даратумумабом (см. Фиг.7).Then, the survival rate of the animals was additionally monitored. The median survival time in the control group was 12 days after grouping, for Daratumumab it was 21 days, and for the SG003 group it was 28 days. The SG003 group outperformed the Daratumumab group (see FIG. 7).
Пример 9: Специфичность распознавания видов для химерного антителаExample 9 Species Recognition Specificity for a Chimeric Antibody
Внеклеточные белки CD38 (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.) разных видов - человека (Human), мыши (Mus), крыса (Rattus), яванского макака (Cynomolgus) и т.п. - использовали для покрытия стрипов для ELISA в концентрации 1 мг/мл при 4°C в течение ночи. После отмывания PBST добавляли 10% эмбриональную телячью сыворотку и блокировали при 37°C в течение часа. Добавляли исследуемые антитела SG003 и контрольные антитела Даратумумаб и проводили реакцию при 37°C в течение часа. После отмывания PBST добавляли меченные пероксидазой хрена (HRP) вторичные козлиные антитела к человеческому IgG (приобретенные у Thermo Fisher Scientific) и проводили реакцию при комнатной температуре в течение 30 минут. Планшет отмывали с PBST (5 раз), и оставшиеся капли удаляли насколько возможно промокательной бумагой. В каждую лунку добавляли 100 мкл TMB (приобретен у eBioscience) и помещали при комнатной температуре (20±5°C) в темноту на 1-5 минут. В каждую лунку добавляли 100 мкл останавливающего раствора 2N H2SO4 для гашения реакции с субстратом, и считывали значение OD при 450 нм с помощью микроспектрофотометра для чтения планшетов для анализа связывающей способности антитела к белку CD38 различных видов.Extracellular proteins CD38 (Beijing Yiqiao Shenzhou Biotechnology Co., Ltd.) of different species - human (Human), mouse (Mus), rat (Rattus), cynomolgus monkey (Cynomolgus), etc. - used to coat ELISA strips at a concentration of 1 mg/ml at 4°C overnight. After washing with PBST, 10% fetal calf serum was added and blocked at 37° C. for one hour. Test antibodies SG003 and control antibodies Daratumumab were added and reacted at 37° C. for one hour. After washing with PBST, horseradish peroxidase (HRP) labeled secondary goat anti-human IgG (purchased from Thermo Fisher Scientific) was added and reacted at room temperature for 30 minutes. The plate was washed with PBST (5 times) and the remaining drops were removed as far as possible with blotting paper. 100 μl TMB (purchased from eBioscience) was added to each well and placed at room temperature (20±5°C) in the dark for 1-5 minutes. 100 µl of 2N H 2 SO 4 stopping solution was added to each well to quench the reaction with the substrate, and the OD value at 450 nm was read using a microspectrophotometer for reading plates to analyze the binding ability of antibodies to CD38 protein of various species.
Результаты показывают, что антитело SG003 может распознавать молекулы белка CD38 человека и яванских макак, но не связывается с молекулами белка CD38 мышей и крыс; результаты показаны на Фиг. 8A.The results show that the SG003 antibody can recognize human and cynomolgus CD38 protein molecules, but does not bind to mouse and rat CD38 protein molecules; the results are shown in FIG. 8A.
Контрольное антитело Даратумумаб распознает только молекулы человеческого белка CD38 и не связывается с молекулами белка CD38 от мышей, крыс и яванских макак. Результаты показаны на Фиг. 8B.The control antibody Daratumumab only recognizes human CD38 protein molecules and does not bind to CD38 protein molecules from mice, rats, and cynomolgus monkeys. The results are shown in FIG. 8B.
Пример 10: Поддержание биологической активности гуманизированного антитела после мутацииExample 10: Maintaining the biological activity of a humanized antibody after mutation
С помощью технологии генетической инженерии последовательности вариабельной области антитела SG003 можно случайным образом мутировать для получения новых последовательностей вариабельной области антитела, и дополнительно получать новые последовательности легкой цепи и тяжелой цепи антитела. Например, для антитела, полученного после случайной мутации на основе антитела SG003, аминокислотная последовательность легкой цепи может быть SEQ ID NO:16, и аминокислотная последовательность тяжелой цепи может быть SEQ ID NO:17; или, аминокислотная последовательность легкой цепи может быть SEQ ID NO:18, и аминокислотная последовательность тяжелой цепи может быть SEQ ID NO:19; альтернативно, аминокислотная последовательность легкой цепи может быть SEQ ID NO:20, и аминокислотная последовательность тяжелой цепи может быть SEQ ID NO:21. Антитела, содержащие вышеописанную комбинацию легкой цепи и тяжелой цепи после мутации, называются SG003M1-3 в последовательности (например, аминокислотная последовательность легкой цепи антитела SG003M1 представляет собой SEQ ID NO:16, и аминокислотная последовательность тяжелой цепи представляет собой SEQ ID NO:17).Using genetic engineering technology, the SG003 antibody variable region sequences can be randomly mutated to generate new antibody variable region sequences, and further generate new antibody light chain and heavy chain sequences. For example, for an antibody resulting from a random mutation based on the SG003 antibody, the light chain amino acid sequence may be SEQ ID NO:16 and the heavy chain amino acid sequence may be SEQ ID NO:17; or, the light chain amino acid sequence may be SEQ ID NO:18 and the heavy chain amino acid sequence may be SEQ ID NO:19; alternatively, the light chain amino acid sequence may be SEQ ID NO:20 and the heavy chain amino acid sequence may be SEQ ID NO:21. Antibodies containing the above-described combination of light chain and heavy chain after mutation are referred to as SG003M1-3 in the sequence (for example, the light chain amino acid sequence of the antibody SG003M1 is SEQ ID NO:16, and the amino acid sequence of the heavy chain is SEQ ID NO:17).
Новое антитело получали при помощи способа из Примера 2, и оценивали активность антитела при помощи способа из Примера 4. Случайным образом мутированное антитело SG003M1-3 может распознавать антиген CD38 (см. Фиг. 9). Определили, что величина EC50 SG003M1 составила 15,72 нг/мл, величина EC50 SG003M2 составила 27,75 нг/мл, и величина EC50 SG003M3 составила 6,10 нг/мл. Выбирали случайным образом SG003M1 и определяли результаты аффинности, как показано в таблице 2.A new antibody was prepared using the method of Example 2, and the activity of the antibody was evaluated using the method of Example 4. The randomly mutated SG003M1-3 antibody can recognize the CD38 antigen (see Fig. 9). The EC50 value of SG003M1 was determined to be 15.72 ng/ml, the EC50 value of SG003M2 was 27.75 ng/ml, and the EC50 value of SG003M3 was 6.10 ng/ml. SG003M1 was randomly selected and affinity results determined as shown in Table 2.
(106⋅1/Ms) Association constant
(10 6 ⋅1/Ms)
(10-4⋅1/s) Dissociation constant
(10 -4 ⋅1/s)
(10-10 M) affinity
( 10-10M )
Пример 11: Подтверждение эпитопов для гуманизированного антителаExample 11: Confirmation of epitopes for a humanized antibody
Для анализа эпитопов антитела SG003, распознающего антиген CD38, использовали способ картирования эпитопов. Мутанты антигена CD38 (Таблица 3, где все мутированные аминокислоты представляют собой аланин) были разработаны с помощью способа аланиновой замены, а CD38 дикого типа, а также различные мутантные гены получали путем полимеразной цепной реакции (ПЦР) и перекрывающихся праймеров (перекрывание) и других методов молекулярной биологии. После разделения и восстановления путем электрофореза в агарозном геле антитело или мутанты расщепляли ферментами для рестрикции HindIII и NheI и клонировали в вектор pEGFP-N1. После секвенирования по правильным последовательностям использовали набор для трансфекции HighGene (ABclonal) для трансфекции вектора, содержащего CD38 дикого типа или мутантный ген, в клетки 293T в соответствии со способом, описанным в инструкции для набора. Через 48 часов после трансфекции клетки собирали путем отщепления трипсином, чтобы приготовить суспензию из одиночных клеток. Клетки-мишени и антитело SG003 инкубировали при рабочей концентрации 10 мкг/мл в течение 30 минут при постоянной температуре 4°C. Затем добавляли GAH-IgG Fc PE (Invitrogen, кат. №: 12-4998-82) и инкубировали при постоянной температуре 4°C в течение 30 минут, и измеряли интенсивность флуоресценции каналов для FITC и PE проточной цитометрией, где интенсивность флуоресценции для FITC представляет собой уровень экспрессии молекулы CD38 и ее мутантов, а интенсивность флуоресценции для PE представляет собой силу связывания антитела SG003 с антигеном.An epitope mapping method was used to analyze the epitopes of the SG003 antibody recognizing the CD38 antigen. Mutants of the CD38 antigen (Table 3, where all mutated amino acids are alanine) were designed using the alanine substitution method, and wild-type CD38 as well as various mutant genes were generated by polymerase chain reaction (PCR) and overlapping primers (overlapping) and other methods. molecular biology. After separation and recovery by agarose gel electrophoresis, the antibody or mutants were digested with restriction enzymes HindIII and NheI and cloned into the pEGFP-N1 vector. After sequencing the correct sequences, the HighGene Transfection Kit (ABclonal) was used to transfect the vector containing the wild-type CD38 or mutant gene into 293T cells according to the method described in the kit instructions. 48 hours after transfection, cells were harvested by trypsin digestion to prepare a single cell suspension. Target cells and SG003 antibody were incubated at a working concentration of 10 μg/ml for 30 minutes at a constant temperature of 4°C. Then, GAH-IgG Fc PE (Invitrogen, Cat No: 12-4998-82) was added and incubated at a constant temperature of 4°C for 30 minutes, and the fluorescence intensity of the channels for FITC and PE was measured by flow cytometry, where the fluorescence intensity for FITC represents the level of expression of the CD38 molecule and its mutants, and the fluorescence intensity for PE represents the binding strength of the SG003 antibody to the antigen.
Результаты проточной цитометрии на Фиг. 10 показывают, что антитело SG003 не связывается с мутантами 21, 22, и 23, что позволяет предположить, что аминокислотная область 60-89 белка CD38 является основным эпитопом, который распознается антителом SG003.The flow cytometry results in Fig. 10 show that the SG003 antibody does not bind to
Вышеизложенное подробное описание предоставлено для объяснения и примера, и не предназначено для ограничения объема прилагаемой формулы изобретения. Множество вариантов осуществления, перечисленных в настоящем документе, очевидны специалистам в данной области и находятся в объеме прилагаемой формулы изобретения и ее эквивалентов.The foregoing detailed description is provided by way of explanation and example, and is not intended to limit the scope of the appended claims. Many of the embodiments listed herein are obvious to those skilled in the art and are within the scope of the appended claims and their equivalents.
--->--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ SEQUENCE LIST
<110> HANGZHOU SUMGEN BIOTECH CO., LTD.; SUMGEN MAB (BEIJING)<110> HANGZHOU SUMGEN BIOTECH CO., LTD.; SUMGENMAB (BEIJING)
BIOTECH CO., LTD. BIOTECH CO., LTD.
<120> АНТИТЕЛА К БЕЛКУ CD38 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ<120> ANTIBODIES TO CD38 PROTEIN AND THEIR USE
<130> 0070-PA-008RU<130> 0070-PA-008EN
<160> 23 <160> 23
<170> PatentIn version 3.5<170>PatentIn version 3.5
<210> 1<210> 1
<211> 15<211> 15
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> LCDR1<223> LCDR1
<400> 1<400> 1
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Ala Phe Ser Tyr Val His Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Ala Phe Ser Tyr Val His
1 5 10 15 1 5 10 15
<210> 2<210> 2
<211> 7<211> 7
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> LCDR2<223> LCDR2
<400> 2<400> 2
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5 fifteen
<210> 3<210> 3
<211> 9<211> 9
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> LCDR3<223> LCDR3
<400> 3<400> 3
His His Ser Arg Glu Leu Pro Phe Thr His His Ser Arg Glu Leu Pro Phe Thr
1 5 fifteen
<210> 4<210> 4
<211> 5<211> 5
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> HCDR1<223> HCDR1
<400> 4<400> 4
Leu Tyr Trp Met Asn Leu Tyr Trp Met Asn
1 5 fifteen
<210> 5<210> 5
<211> 17<211> 17
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> HCDR2<223> HCDR2
<400> 5<400> 5
Lys Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys Lys Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp asp
<210> 6<210> 6
<211> 10<211> 10
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> HCDR3<223> HCDR3
<400> 6<400> 6
Leu Trp Ile Ala Thr Gly Gly Phe Asp Tyr Leu Trp Ile Ala Thr Gly Gly Phe Asp Tyr
1 5 10 1 5 10
<210> 7<210> 7
<211> 111<211> 111
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> VL<223> VL
<400> 7<400> 7
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30 20 25 30
Ala Phe Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Ala Phe Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro
35 40 45 35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60 50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His
65 70 75 80 65 70 75 80
Pro Val Glu Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Arg Pro Val Glu Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Arg
85 90 95 85 90 95
Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110 100 105 110
<210> 8<210> 8
<211> 119<211> 119
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> VH<223> VH
<400> 8<400> 8
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Leu Tyr Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Leu Tyr
20 25 30 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Lys Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Gly Lys Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu
50 55 60 50 55 60
Lys Asp Lys Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Asp Lys Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Leu Trp Ile Ala Thr Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Leu Trp Ile Ala Thr Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110 100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 9<210> 9
<211> 333<211> 333
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Кодон-оптимизированная нуклеотидная последовательность VL<223> Codon-optimized VL nucleotide sequence
<400> 9<400> 9
gagatcgtga tgacccagag ccctgccagc ctgagcgcca gcctgggcca gagggccaccgagatcgtga tgacccagag ccctgccagc ctgagcgcca gcctgggcca gagggccacc
60 60
atcagctgca gggccagcag cagcgtgagc agcagcgcct tcagctacgt gcactggtacatcagctgca gggccagcag cagcgtgagc agcagcgcct tcagctacgt gcactggtac
120 120
cagcagaaga gcggccagcc tcctaagctg ctgatctacc tggccagcaa cctggagagccagcagaaga gcggccagcc tcctaagctg ctgatctacc tggccagcaa cctggagagc
180 180
ggcgtgcctg ccaggttcag cggcagcggc agcggcaccg acttcaccct gaccatccacggcgtgcctg ccaggttcag cggcagcggc agcggcaccg acttcaccct gaccatccac
240 240
cctgtggaga gcgaggacgt ggccacctac tactgccacc acagcaggga gctgcctttccctgtggaga gcgaggacgt ggccacctac tactgccacc acagcaggga gctgcctttc
300 300
accttcggca gcggcaccaa gctggagatc aag accttcggca gcggcaccaa gctggagatc aag
333 333
<210> 10<210> 10
<211> 357<211> 357
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Кодон-оптимизированная нуклеотидная последовательность VH <223> Codon-optimized VH nucleotide sequence
<400> 10<400> 10
caggtgcagc tgctggagag cggcggcggc ctggtgcagc ctggcggcag cctgaagctgcaggtgcagc tgctggagag cggcggcggc ctggtgcagc ctggcggcag cctgaagctg
60 60
agctgcgtgg ccagcggctt cgacttcagc ctgtactgga tgaactgggt gaggcaggccagctgcgtgg ccagcggctt cgacttcagc ctgtactgga tgaactgggt gaggcaggcc
120 120
cctggcaagg gcctggagtg gatcggcaag atcaaccctg acagcagcac catcaactaccctggcaagg gcctggagtg gatcggcaag atcaaccctg acagcagcac catcaactac
180 180
acccctagcc tgaaggacaa gttcttcatc agcagggaca acgccaagaa caccctgtacacccctagcc tgaaggacaa gttcttcatc agcagggaca acgccaagaa caccctgtac
240 240
ctgcagatga ccaaggtgag gagcgaggac accgccctgt actactgcgc caggctgtggctgcagatga ccaaggtgag gagcgaggac accgccctgt actactgcgc caggctgtgg
300 300
atcgccaccg gcggcttcga ctactggggc cagggcacca ccctgaccgt gagcagc atcgccaccg gcggcttcga ctactggggc cagggcacca ccctgaccgt gagcagc
357 357
<210> 11<210> 11
<211> 218<211> 218
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> легкая цепь SG003 <223> light chain SG003
<400> 11<400> 11
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30 20 25 30
Ala Phe Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Ala Phe Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro
35 40 45 35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60 50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His
65 70 75 80 65 70 75 80
Pro Val Glu Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Arg Pro Val Glu Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Arg
85 90 95 85 90 95
Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110 100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125 115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140 130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160 145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175 165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190 180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205 195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 210 215
<210> 12<210> 12
<211> 657<211> 657
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> нуклеотидная последовательность легкой цепи SG003 <223> light chain nucleotide sequence SG003
<400> 12<400> 12
gagatcgtga tgacccagag ccctgccagc ctgagcgcca gcctgggcca gagggccaccgagatcgtga tgacccagag ccctgccagc ctgagcgcca gcctgggcca gagggccacc
60 60
atcagctgca gggccagcag cagcgtgagc agcagcgcct tcagctacgt gcactggtacatcagctgca gggccagcag cagcgtgagc agcagcgcct tcagctacgt gcactggtac
120 120
cagcagaaga gcggccagcc tcctaagctg ctgatctacc tggccagcaa cctggagagccagcagaaga gcggccagcc tcctaagctg ctgatctacc tggccagcaa cctggagagc
180 180
ggcgtgcctg ccaggttcag cggcagcggc agcggcaccg acttcaccct gaccatccacggcgtgcctg ccaggttcag cggcagcggc agcggcaccg acttcaccct gaccatccac
240 240
cctgtggaga gcgaggacgt ggccacctac tactgccacc acagcaggga gctgcctttccctgtggaga gcgaggacgt ggccacctac tactgccacc acagcaggga gctgcctttc
300 300
accttcggca gcggcaccaa gctggagatc aagcgtacgg tggctgcacc atctgtcttcaccttcggca gcggcaccaa gctggagatc aagcgtacgg tggctgcacc atctgtcttc
360 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctgatcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg
420 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcgaataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg
480 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagcggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc
540 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtcagcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc
600 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttag acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aaggcttca acaggggaga gtgttag
657 657
<210> 13<210> 13
<211> 449<211> 449
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> тяжелая цепь SG003 <223> heavy chain SG003
<400> 13<400> 13
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Leu Tyr Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Leu Tyr
20 25 30 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Lys Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Gly Lys Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu
50 55 60 50 55 60
Lys Asp Lys Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Asp Lys Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Leu Trp Ile Ala Thr Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Leu Trp Ile Ala Thr Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110 100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125 115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140 130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160 145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175 165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190 180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205 195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220 210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240 225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255 245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270 260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285 275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300 290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320 305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335 325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350 340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365 355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380 370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400 385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415 405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430 420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445 435 440 445
Lys Lys
<210> 14<210> 14
<211> 1350<211> 1350
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> нуклеотидная последовательность тяжелой цепи SG003<223> heavy chain nucleotide sequence SG003
<400> 14<400> 14
caggtgcagc tgctggagag cggcggcggc ctggtgcagc ctggcggcag cctgaagctgcaggtgcagc tgctggagag cggcggcggc ctggtgcagc ctggcggcag cctgaagctg
60 60
agctgcgtgg ccagcggctt cgacttcagc ctgtactgga tgaactgggt gaggcaggccagctgcgtgg ccagcggctt cgacttcagc ctgtactgga tgaactgggt gaggcaggcc
120 120
cctggcaagg gcctggagtg gatcggcaag atcaaccctg acagcagcac catcaactaccctggcaagg gcctggagtg gatcggcaag atcaaccctg acagcagcac catcaactac
180 180
acccctagcc tgaaggacaa gttcttcatc agcagggaca acgccaagaa caccctgtacacccctagcc tgaaggacaa gttcttcatc agcagggaca acgccaagaa caccctgtac
240 240
ctgcagatga ccaaggtgag gagcgaggac accgccctgt actactgcgc caggctgtggctgcagatga ccaaggtgag gagcgaggac accgccctgt actactgcgc caggctgtgg
300 300
atcgccaccg gcggcttcga ctactggggc cagggcacca ccctgaccgt gagcagcgctatcgccaccg gcggcttcga ctactggggc cagggcacca ccctgaccgt gagcagcgct
360 360
agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggcagcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc
420 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtggacagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg
480 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcaggaaactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga
540 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctacctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac
600 600
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaaatctgcaacg tgaatcacaa gccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa
660 660
tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccgtcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg
720 720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgagtcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag
780 780
gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtcaagtt caactggtacgtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtcaagtt caactggtac
840 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagcgtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc
900 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggagacgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag
960 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaatacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa
1020 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctggccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg
1080 1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgccaccaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc
1140 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctggtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg
1200 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcaggactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag
1260 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcagcaggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag
1320 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga
1350 1350
<210> 15<210> 15
<211> 30<211> 30
<212> Белок<212> Protein
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 15<400> 15
Pro Glu Thr Val Leu Ala Arg Cys Val Lys Tyr Thr Glu Ile His Pro Pro Glu Thr Val Leu Ala Arg Cys Val Lys Tyr Thr Glu Ile His Pro
1 5 10 15 1 5 10 15
Glu Met Arg His Val Asp Cys Gln Ser Val Trp Asp Ala Phe Glu Met Arg His Val Asp Cys Gln Ser Val Trp Asp Ala Phe
20 25 30 20 25 30
<210> 16<210> 16
<211> 218<211> 218
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Мутированная легкая цепь 1<223> Mutated
<400> 16<400> 16
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Gln Arg Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Asn Ser Val Ser Ser Ser Gln Arg Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Asn Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30 20 25 30
Ala Tyr Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Ala Tyr Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro
35 40 45 35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Ile Gln Ser Gly Val Pro Ala Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Ile Gln Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60 50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His
65 70 75 80 65 70 75 80
Pro Val Glu Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Arg Pro Val Glu Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Arg
85 90 95 85 90 95
Gln Leu Pro Ser Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gln Leu Pro Ser Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110 100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125 115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140 130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160 145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175 165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190 180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205 195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 210 215
<210> 17<210> 17
<211> 449<211> 449
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Мутированная тяжелая цепь 1<223> Mutated
<400> 17<400> 17
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Tyr Asn Phe Ser Leu Tyr Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Tyr Asn Phe Ser Leu Tyr
20 25 30 20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Lys Ile Gln Pro Glu Ser Ser Thr Ile Gln Tyr Thr Pro Ser Leu Gly Lys Ile Gln Pro Glu Ser Ser Thr Ile Gln Tyr Thr Pro Ser Leu
50 55 60 50 55 60
Lys Asp Lys Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Asp Lys Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Leu Trp Ile Gly Ser Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Leu Trp Ile Gly Ser Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110 100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125 115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140 130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160 145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175 165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190 180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205 195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220 210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240 225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255 245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270 260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285 275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300 290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320 305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335 325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350 340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365 355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380 370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400 385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415 405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430 420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445 435 440 445
Lys Lys
<210> 18<210> 18
<211> 218<211> 218
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Мутированная легкая цепь 2<223> Mutated
<400> 18<400> 18
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30 20 25 30
Ala Tyr Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Ala Tyr Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro
35 40 45 35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asp Leu Gln Ser Gly Val Pro Ala Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asp Leu Gln Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60 50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His
65 70 75 80 65 70 75 80
Pro Val Glu Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Arg Pro Val Glu Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Arg
85 90 95 85 90 95
Glu Leu Pro Tyr Ser Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Leu Pro Tyr Ser Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110 100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125 115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140 130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160 145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175 165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190 180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205 195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 210 215
<210> 19<210> 19
<211> 449<211> 449
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Мутированная тяжелая цепь 2<223> Mutated
<400> 19<400> 19
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Leu Tyr Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Leu Tyr
20 25 30 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Lys Ile Ser Pro Asn Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ser Pro Ser Leu Gly Lys Ile Ser Pro Asn Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Ser Pro Ser Leu
50 55 60 50 55 60
Lys Asp Lys Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Asp Lys Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Leu Tyr Ile Ala Ser Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Leu Tyr Ile Ala Ser Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110 100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125 115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140 130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160 145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175 165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190 180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205 195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220 210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240 225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255 245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270 260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285 275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300 290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320 305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335 325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350 340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365 355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380 370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400 385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415 405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430 420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445 435 440 445
Lys Lys
<210> 20<210> 20
<211> 218<211> 218
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Мутированная легкая цепь 3<223> Mutated
<400> 20<400> 20
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Asn Ser Val Ser Thr Ser Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Asn Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30 20 25 30
Ala Phe Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Ala Phe Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro
35 40 45 35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60 50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His
65 70 75 80 65 70 75 80
Pro Val Glu Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Arg Pro Val Glu Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Arg
85 90 95 85 90 95
Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110 100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125 115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140 130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160 145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175 165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190 180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205 195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 210 215
<210> 21<210> 21
<211> 449<211> 449
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Мутированная тяжелая цепь 3<223> Mutated
<400> 21<400> 21
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Leu Tyr Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Leu Tyr
20 25 30 20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Lys Ile Ser Pro Asp Ser Ser Ser Leu Asn Tyr Thr Pro Ser Val Gly Lys Ile Ser Pro Asp Ser Ser Ser Leu Asn Tyr Thr Pro Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Asp Lys Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Asp Lys Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Leu Trp Ile Ala Thr Gly Gly Tyr Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Leu Trp Ile Ala Thr Gly Gly Tyr Asn Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110 100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125 115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140 130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160 145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175 165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190 180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205 195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220 210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240 225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255 245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270 260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285 275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300 290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320 305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335 325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350 340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365 355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380 370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400 385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415 405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430 420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445 435 440 445
Lys Lys
<210> 22<210> 22
<211> 218<211> 218
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> формула легкой цепи<223> light chain formula
<220><220>
<221> X20<221>X20
<222> (20)..(20)<222> (20)..(20)
<223> X20=T или S<223> X20=T or S
<220><220>
<221> X27<221>X27
<222> (27)..(27)<222> (27)..(27)
<223> X27=S или N<223> X27=S or N
<220><220>
<221> X31<221>X31
<222> (31)..(31)<222> (31)..(31)
<223> X31=S или T<223> X31=S or T
<220><220>
<221> X34<221>X34
<222> (34)..(34)<222> (34)..(34)
<223> X34=F или Y<223> X34=F or Y
<220><220>
<221> X57<221> X57
<222> (57)..(57)<222> (57)..(57)
<223> X57=N или D<223> X57=N or D
<220><220>
<221> X58<221> X58
<222> (58)..(58)<222> (58)..(58)
<223> X58=L или I<223> X58=L or I
<220><220>
<221> X59<221>X59
<222> (59)..(59)<222> (59)..(59)
<223> X59=E или Q<223> X59=E or Q
<220><220>
<221> X97<221> X97
<222> (97)..(97)<222> (97)..(97)
<223> X97=E или Q<223> X97=E or Q
<220><220>
<221> X98<221>X98
<222> (98)..(98)<222> (98)..(98)
<223> X98=L или V<223> X98=L or V
<220><220>
<221> X100<221> X100
<222> (100)..(100)<222> (100)..(100)
<223> X100=F или S<223> X100=F or S
<220><220>
<221> X101<221> X101
<222> (101)..(101)<222> (101)..(101)
<223> X101=T или S<223> X101=T or S
<400> 22<400> 22
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Gln Arg Ala Xaa Ile Ser Cys Arg Ala Ser Xaa Ser Val Ser Xaa Ser Gln Arg Ala Xaa Ile Ser Cys Arg Ala Ser Xaa Ser Val Ser Xaa Ser
20 25 30 20 25 30
Ala Xaa Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro Ala Xaa Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Pro Pro
35 40 45 35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro Ala Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Xaa Xaa Xaa Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60 50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile His
65 70 75 80 65 70 75 80
Pro Val Glu Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Arg Pro Val Glu Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys His His Ser Arg
85 90 95 85 90 95
Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110 100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125 115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140 130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160 145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175 165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190 180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205 195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 210 215
<210> 23<210> 23
<211> 449<211> 449
<212> Белок<212> Protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> формула тяжелой цепи<223> heavy chain formula
<220><220>
<221> X27<221>X27
<222> (27)..(27)<222> (27)..(27)
<223> X27=F или Y<223> X27=F or Y
<220><220>
<221> X28<221>X28
<222> (28)..(28)<222> (28)..(28)
<223> X28=D или N<223> X28=D or N
<220><220>
<221> X33<221>X33
<222> (33)..(33)<222> (33)..(33)
<223> X33=W или Y<223> X33=W or Y
<220><220>
<221> X52<221>X52
<222> (52)..(52)<222> (52)..(52)
<223> X52=N, Q или S<223> X52=N, Q or S
<220><220>
<221> X54<221>X54
<222> (54)..(54)<222> (54)..(54)
<223> X54=D, E или N<223> X54=D, E or N
<220><220>
<221> X57<221> X57
<222> (57)..(57)<222> (57)..(57)
<223> 57=T или S<223> 57=T or S
<220><220>
<221> X58<221>X58
<222> (58)..(58)<222> (58)..(58)
<223> X58=I или L<223> X58=I or L
<220><220>
<221> X59<221> X59
<222> (59)..(59)<222> (59)..(59)
<223> X59=N или Q<223> X59=N or Q
<220><220>
<221> X61<221> X61
<222> (61)..(61)<222> (61)..(61)
<223> X61=T или S<223> X61=T or S
<220><220>
<221> X64<221>X64
<222> (64)..(64)<222> (64)..(64)
<223> X64=L или V<223> X64=L or V
<220><220>
<221> X100<221> X100
<222> (100)..(100)<222> (100)..(100)
<223> X100=W или Y<223> X100=W or Y
<220><220>
<221> X102<221> X102
<222> (102)..(102)<222> (102)..(102)
<223> X102=A или G<223> X102=A or G
<220><220>
<221> X103<221> X103
<222> (103)..(103)<222> (103)..(103)
<223> X103=T или S<223> X103=T or S
<220><220>
<221> X106<221> X106
<222> (106)..(106)<222> (106)..(106)
<223> X106=F или Y<223> X106=F or Y
<220><220>
<221> X107<221> X107
<222> (107)..(107)<222> (107)..(107)
<223> X107=D или N<223> X107=D or N
<400> 23<400> 23
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Xaa Xaa Phe Ser Leu Tyr Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Xaa Xaa Phe Ser Leu Tyr
20 25 30 20 25 30
Xaa Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Xaa Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45 35 40 45
Gly Lys Ile Xaa Pro Xaa Ser Ser Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Pro Ser Xaa Gly Lys Ile Xaa Pro Xaa Ser Ser Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Pro Ser Xaa
50 55 60 50 55 60
Lys Asp Lys Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Asp Lys Phe Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Thr Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Leu Xaa Ile Xaa Xaa Gly Gly Xaa Xaa Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Leu Xaa Ile Xaa Xaa Gly Gly Xaa Xaa Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110 100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125 115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140 130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160 145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175 165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190 180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205 195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220 210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240 225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255 245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270 260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285 275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300 290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320 305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335 325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350 340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365 355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380 370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400 385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415 405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430 420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445 435 440 445
Lys Lys
<---<---
Claims (58)
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810144817.4A CN110144008B (en) | 2018-02-12 | 2018-02-12 | CD38 protein antibody and application thereof |
CN201810144817.4 | 2018-02-12 | ||
PCT/CN2019/074806 WO2019154421A1 (en) | 2018-02-12 | 2019-02-11 | Cd38 protein antibody and application thereof |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2020129820A3 RU2020129820A3 (en) | 2022-03-14 |
RU2020129820A RU2020129820A (en) | 2022-03-14 |
RU2776795C2 true RU2776795C2 (en) | 2022-07-26 |
Family
ID=
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006099875A1 (en) * | 2005-03-23 | 2006-09-28 | Genmab A/S | Antibodies against cd38 for treatment of multiple myeloma |
MX2009004050A (en) * | 2006-10-19 | 2009-04-28 | Sanofi Aventis | Novel anti-cd38 antibodies for the treatment of cancer. |
RU2402568C2 (en) * | 2004-02-06 | 2010-10-27 | МорфоСис АГ | Human anti-cd38-antibodies and their application |
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2402568C2 (en) * | 2004-02-06 | 2010-10-27 | МорфоСис АГ | Human anti-cd38-antibodies and their application |
WO2006099875A1 (en) * | 2005-03-23 | 2006-09-28 | Genmab A/S | Antibodies against cd38 for treatment of multiple myeloma |
MX2009004050A (en) * | 2006-10-19 | 2009-04-28 | Sanofi Aventis | Novel anti-cd38 antibodies for the treatment of cancer. |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
IN718CHENP2007 A, 11.01.2008. * |
VAN DE DONK N.W.C.J. et al., Monoclonal antibodies targeting CD38 in hematological malignancies and beyond. Immunological Reviews 2016. Vol. 270: 95-112. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR102536014B1 (en) | PD-1 Agonist Antibodies and Uses Thereof | |
US20230056881A1 (en) | TARGETED TGFß INHIBITION | |
US20220017621A1 (en) | Combination Therapy for Cancer | |
KR101439719B1 (en) | Antibodies against csf-1r | |
KR102223187B1 (en) | Anti-CD47 monoclonal antibody and its use | |
CN110144008B (en) | CD38 protein antibody and application thereof | |
CN113173993A (en) | Antagonistic anti-canine PD-1 antibodies | |
KR20100097684A (en) | Axl antibodies | |
CN110540592B (en) | Antibodies that bind to AXL protein and uses thereof | |
EP3443981B1 (en) | Llt-1 antibodies with new functional properties | |
KR20140107507A (en) | Novel anti-human ctgf antibody | |
RU2776795C2 (en) | Antibodies to protein cd38, and their use | |
CN103588878A (en) | Humanized anti-human-interleukin-1[belta] monoclonal antibody, preparation thereof and applications thereof | |
US20230250186A1 (en) | Cd38 protein antibody and application thereof |