RU2775781C2

RU2775781C2 - Methods for increasing level of 2'-deoxyuridine (durd) in plasma and inhibiting thymidylate synthase

Info

Publication number: RU2775781C2
Application number: RU2019126648A
Authority: RU
Inventors: Йеран У. КАРЛССОН; Бенгт ГУСТАВССОН; Элизабет ОДИН; Ивонн ВЕТТЕРГРЕН; Андерс ВЕДИН
Original assignee: Исофол Медикал Аб
Priority date: 2017-02-14
Filing date: 2018-02-09
Publication date: 2022-07-11

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention relates to medicine, namely to a method for increasing levels of 2’-deoxyuridine (hereinafter – dUrd) in plasma of a human subject. The method for increasing the concentration of 2’-deoxyuridine (dUrd) in plasma of a human subject includes: a stage (a) of injection of 400 mg/m² or 500 mg/m² of 5-fluorouracil (hereinafter – 5-FU) intravenously in the form of a bolus injection to a human subject; after the stage (a), a stage (b) of intravenous injection of 30, 60, 120 or 240 mg/m² of [6R]-5,10-methylenetetrahydrofolate (hereinafter – 6R-MTHF) intravenously in the form of two bolus injections to the specified human subject, and (c) optional injection of 2400 mg/m² of 5-FU in the form of continuous infusion simultaneously with the stage (b) or after it.

EFFECT: above-described method allows for significantly increasing dUrd in blood plasma in a joint injection of an equimolar dose of 6R-MTHF with 5-FU compared to a drug.

11 cl, 4 dwg, 2 tbl, 2 ex

Description

По настоящей заявке испрашивается приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/458868, поданной 14 февраля 2017 г., которая включена в настоящее описание во всей своей полноте в виде ссылки.The present application claims priority over U.S. Provisional Application No. 62/458,868, filed Feb. 14, 2017, which is hereby incorporated by reference in its entirety.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕFIELD OF TECHNOLOGY TO WHICH THE INVENTION RELATES

Настоящее изобретение относится к лечению солидных опухолей у человека, таких как рак, которое включает введение [6R]-5,10-метилен-тетрагидрофолата (6R-МТГФ) в на фоне химиотерапии 5-фторурацилом (5-ФУ).The present invention relates to the treatment of solid tumors in humans, such as cancer, which includes the administration of [6R]-5,10-methylene-tetrahydrofolate (6R-MTHF) in the background of chemotherapy with 5-fluorouracil (5-FU).

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND OF THE INVENTION

5-Фторурацил (5-ФУ) был впервые введен в 1957 и остается основным средством лечения солидных опухолей, включая рак ободочной и прямой кишки (CRC). Цитотоксическая активность 5-ФУ обусловлена главным образом ингибированием тимидилатсинтазы (TS) и до некоторой степени также включением метаболитов в РНК. (Ford et al. (2002) Clinical Cancer Research 2002; 8(1):103-109). Общий показатель ответа только на 5-ФУ довольно ограничен (10-15%), и для повышения противоопухолевой активности 5-ФУ были разработаны стратегии модуляции (Johnston et al. Anticancer Drugs 2001, 12:639-646). Одна из наиболее широко используемых стратегий включает совместное введение фолата, 5-формил-тетрагидрофолата (фолиновой кислоты или лейковорина или ЛВ), с 5-ФУ (Romanini et al. (1991) Cancer Res., 51:789-793; Keyomarsi et al. (1988) J. Biol. Chem., 263:14402-14409). ЛВ стабилизирует тройной комплекс, который ингибирует тимидилатсинтазу (TS), фермент, необходимый для синтеза ДНК (Longley et al. (2003) Nat. Rev. Cancer, 3(5):330-8). При добавлении ЛВ к 5-ФУ общий уровень ответов увеличился до более чем 20% (Id.).5-Fluorouracil (5-FU) was first introduced in 1957 and remains the primary treatment for solid tumors, including colorectal cancer (CRC). The cytotoxic activity of 5-FU is mainly due to the inhibition of thymidylate synthase (TS) and to some extent also the incorporation of metabolites into RNA. (Ford et al. (2002) Clinical Cancer Research 2002; 8(1):103-109). The overall response rate to 5-FU alone is rather limited (10-15%), and modulation strategies have been developed to increase the antitumor activity of 5-FU (Johnston et al. Anticancer Drugs 2001, 12:639-646). One of the most widely used strategies involves the co-administration of folate, 5-formyl-tetrahydrofolate (folinic acid or leucovorin or LV), with 5-FU (Romanini et al. (1991) Cancer Res., 51:789-793; Keyomarsi et al (1988) J Biol Chem 263:14402-14409). The drug stabilizes a ternary complex that inhibits thymidylate synthase (TS), an enzyme essential for DNA synthesis (Longley et al. (2003) Nat. Rev. Cancer, 3(5):330-8). When LV was added to 5-FU, the overall response rate increased to over 20% (Id.).

Восстановленный фолат, фотрексорин-кальций (CoFactor®) (кальциевая соль (dl)-5,10-метилен-птероил-моноглутамата или Ca соль [6R,S]-5,10-метилен-ТГФ), также известный в виде рацемической смеси метилен-ТГФ, был предложен в качестве альтернативы ЛВ, исходя из предположения, что прямое введение восстановленного фолата метилен-ТГФ вместо ЛВ может обеспечить существенные преимущества в отношении клинической активности. CoFactor® представляет собой 1:1 смесь двух диастереоизомеров (Odin, E., Carlsson, G., Frösing, R., Gustavsson, B., Spears, C.P., Larsson, P.A., 1998. Chemical stability and human plasma pharmacokinetics of reduced folates. Cancer Invest. 16, 447-455). Поскольку [6R]-изомер является непосредственно активным ко-субстратом для TS, ожидалось, что введение CoFactor® вместо лейковорина обеспечит преимущества за счет более низкой изменчивости клинической безопасности и эффективности, наблюдаемой как среди пациентов, так и одного у пациента.Reduced folate, fotrexorin-calcium (CoFactor®) (calcium salt of ( dl )-5,10-methylene-pteroyl-monoglutamate or Ca salt of [6R,S]-5,10-methylene-THF), also known as a racemic mixture methylene-THF has been proposed as an alternative to the LV based on the assumption that direct administration of reduced methylene-THF folate in place of the LV could provide significant advantages in terms of clinical activity. CoFactor® is a 1:1 mixture of two diastereoisomers (Odin, E., Carlsson, G., Frösing, R., Gustavsson, B., Spears, CP, Larsson, PA, 1998. Chemical stability and human plasma pharmacokinetics of reduced folates Cancer Invest 16, 447-455). Since the [6R]-isomer is a directly active co-substrate for TS, administration of CoFactor® instead of leucovorin was expected to provide benefits due to the lower variability in clinical safety and efficacy observed both among patients and per patient.

Действительно, в клиническом исследовании фазы II с участием пациентов с метастатическим раком ободочной и прямой кишки, ранее не получавших лечение, частота ответа на CoFactor® оказалась равной 35% (Saif, M.W, Merritt, J, Robbins J, Stewart J., Schupp, J, 2006. Phase III Multicenter Randomized Clinical Trial to Evaluate the Safety and Efficacy of CoFactor®/5-Fluorouracil/Bevacizumab Versus Leucovorin/5-Fluorouracil/ Bevacizumab as Initial Treatment for Metastatic Colorectal Carcinoma Clinical Colorectal Cancer, Vol. 6, No. 3, 229-234, 2006), а в другом клиническом исследовании фазы I/II у 40% пациентов с раком поджелудочной железы введение CoFactor® в сочетании с 5-ФУ обеспечило положительный клинический эффект, определяемый как стабильное заболевание или ответ опухоли (Saif, M.W., Makrilia N., Syrigos K., 2010. CoFactor: Folate Requirement for Optimization of 5-Fluouracil Activity in Anticancer Chemotherapy. Journal of Oncology Vol. 1-5). Тем не менее, помимо ненужной нагрузки, связанной с детоксикацией печени, не встречающийся в природе (6S)-изомер отчасти является конкурентным ингибитором природного [6R]-изомера в отношении его действия в качестве ко-субстрата TS (Leary, R.P., Gaumont, Y., Kisliuk, R.L., 1974. Effects of the diastereoisomers of methylenetetrahydrofolate on the reaction catalyzed by thymidylate synthetase. Biochem. Biophys. Res. Commun. 56, 484-488). Кроме того, в клиническом исследовании фазы IIb не было продемонстрировано, что CoFactor® является более эффективным при раке ободочной и прямой кишки, чем лейковорин, поскольку не было обнаружено никаких существенных различий в эффективности или безопасности между исследуемыми группами, и запланированное исследование фазы III в отношении рака ободочной и прямой кишки было прекращено до его завершения (Пресс-релиз: ADVENTRX Provides Update on Cofactor Program. Nov 2, 2007).Indeed, in a phase II clinical trial in previously untreated patients with metastatic colorectal cancer, the response rate to CoFactor® was found to be 35% (Saif, M.W, Merritt, J, Robbins J, Stewart J., Schupp, J, 2006. Phase III Multicenter Randomized Clinical Trial to Evaluate the Safety and Efficacy of CoFactor®/5-Fluorouracil/Bevacizumab Versus Leucovorin/5-Fluorouracil/ Bevacizumab as Initial Treatment for Metastatic Colorectal Carcinoma Clinical Colorectal Cancer, Vol. 3, 229-234, 2006), and in another phase I/II clinical trial, 40% of patients with pancreatic cancer received CoFactor® in combination with 5-FU to achieve clinical benefit, defined as stable disease or tumor response (Saif, M.W., Makrilia N., Syrigos K., 2010. CoFactor: Folate Requirement for Optimization of 5-Fluouracil Activity in Anticancer Chemotherapy Journal of Oncology Vol. 1-5). However, in addition to the unnecessary burden associated with liver detoxification, the non-naturally occurring (6S) isomer is partly a competitive inhibitor of the natural [6R] isomer with respect to its action as a co-substrate of TS (Leary, R.P., Gaumont, Y ., Kisliuk, R. L., 1974. Effects of the diastereoisomers of methylenetetrahydrofolate on the reaction catalyzed by thymidylate synthetase Biochem Biophys Res Commun 56, 484-488). In addition, CoFactor® was not demonstrated to be more effective than leucovorin in colon and rectal cancer in a phase IIb clinical trial as no significant differences in efficacy or safety were found between study groups, and a planned phase III study regarding colorectal cancer was discontinued before completion (Press Release: ADVENTRX Provides Update on Cofactor Program. Nov 2, 2007).

Имеется большая потребность в композициях и способах стабилизации тройного комплекса и усиления ингибирования TS. Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что введение 6R-МТГФ повышает уровни 2'-дезоксиуридина (dUrd) в плазме по сравнению с введением эквимолярных концентраций ЛВ. Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что введение 6R-МТГФ усиливает ингибирование TS по сравнению с введением эквимолярных концентраций ЛВ.There is a great need for compositions and methods for stabilizing the ternary complex and enhancing TS inhibition. The inventors unexpectedly found that administration of 6R-MTHF increased plasma levels of 2'-deoxyuridine (dUrd) compared to administration of equimolar drug concentrations. The inventors unexpectedly found that administration of 6R-MTHF enhances TS inhibition compared to administration of equimolar drug concentrations.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION

Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что при совместном введении с 5-ФУ эквимолярные дозы 6R-МТГФ приводят к значительно более высоким уровням dUrd в плазме крови по сравнению с ЛВ. Повышение уровня 2'-дезоксиуридина (dUrd) в плазме является маркером ингибирования TS (Ford et al. (2002) Clinical Cancer Research 2002; 8(1):103-109). Настоящее изобретение относится к способам повышения уровней dUrd в плазме, включающим введение 6R-МТГФ. Способы повышения уровня dUrd в плазме обеспечивают увеличение уровней по сравнению с эквимолярными концентрациями ЛВ. Настоящее изобретение также относится к способам усиления ингибирования TS, включающим введение 6R-МТГФ.The inventors surprisingly found that when co-administered with 5-FU, equimolar doses of 6R-MTHF resulted in significantly higher plasma levels of dUrd compared to LV. An increase in plasma 2'-deoxyuridine (dUrd) is a marker of TS inhibition (Ford et al. (2002) Clinical Cancer Research 2002; 8(1):103-109). The present invention relates to methods for increasing plasma levels of dUrd, including the administration of 6R-MTHF. Methods for increasing the level of dUrd in plasma provide an increase in levels compared to equimolar drug concentrations. The present invention also relates to methods for enhancing TS inhibition, including the introduction of 6R-MTHF.

Повышение уровня dUrd в плазме в качестве суррогатного маркера ингибирования TS постепенно становится биомаркером выбора. Этот анализ также относительно прост в осуществлении, состоящему из забора крови и анализа ЖХ-МС/МС. Обработка ингибиторами TS, такими как 5-ФУ, приводит к увеличению внутриклеточных пулов dUMP субстрата TS, что отражается в увеличенных уровнях соответствующего нуклеозида dUrd, который по существу является внеклеточным и может быть измерен в плазме. Кроме того, было показано, что повышение уровня dUrd в плазме возникает после введения ингибиторов TS и, таким образом, является суррогатным маркером ингибирования TS (Ford et al (2002)).An increase in plasma dUrd as a surrogate marker for TS inhibition is gradually becoming the biomarker of choice. This assay is also relatively simple to perform, consisting of blood sampling and LC-MS/MS analysis. Treatment with TS inhibitors such as 5-FU results in an increase in intracellular pools of TS substrate dUMP, which is reflected in increased levels of the corresponding dUrd nucleoside, which is essentially extracellular and can be measured in plasma. Furthermore, an increase in plasma levels of dUrd has been shown to occur following administration of TS inhibitors and thus is a surrogate marker for TS inhibition (Ford et al (2002)).

Авторы изобретения понимают, что повышение уровней dUrd в плазме непосредственно отражает текущее общее состояние ингибирования TS опухоли в организме во время лечения 5-ФУ, выявляя все присутствующие участки опухоли, включая метастазы.The inventors understand that the increase in plasma levels of dUrd directly reflects the current overall state of tumor TS inhibition in the body during 5-FU treatment, revealing all tumor sites present, including metastases.

Вышесказанное полностью подтверждается данными о том, что базовая активность TS в опухолях намного выше, чем в слизистой оболочке, и что как связывание метаболита, 5-фтордезоксиуридинмонофосфата (FdUMP), с TS, так и TS-ингибирующий эффект во время терапии 5-ФУ существенно выше в опухолях, чем в слизистой оболочке и других клетках организма. Примечательным является то, что без добавления экзогенного фолата (МТГФ) в опухолях практически отсутствует связывание FdUMP (Peters et al. (1991) Eur J Cancer, 27 (3):263-267).The above is fully supported by the data that the baseline activity of TS in tumors is much higher than in the mucosa, and that both the binding of the metabolite, 5-fluorodeoxyuridine monophosphate (FdUMP), to TS and the TS-inhibitory effect during 5-FU therapy are significantly higher in tumors than in the mucous membrane and other body cells. Notably, without the addition of exogenous folate (MTHF), there is virtually no FdUMP binding in tumors (Peters et al. (1991) Eur J Cancer, 27(3):263-267).

Таким образом, уровень dUrd в плазме в качестве суррогатного маркера ингибирования TS явно выделяется на фоне более старых анализов, основанных, например, на TS-связывании ³H-FdUMP, которые ограничиваются только in vitro исследованиями, например, биопсии опухолей или слизистой оболочки, или анализа выделенного TS-фермента. Эти анализы связывания на основе радиоактивной метки в настоящее время используются редко, если вообще используются, и тесно связаны с очень большой изменчивостью (Peters et al. (1991) Eur J Cancer, 27 (3):263-267), а также с трудностями, связанными с получением необходимых материалов для анализов.Thus, the plasma level of dUrd as a surrogate marker for TS inhibition clearly stands out from older assays based, for example, on TS binding of ³ H-FdUMP, which are limited to in vitro studies only, for example, tumor or mucosal biopsies, or analysis of the selected TS-enzyme. These radiolabel-based binding assays are now rarely, if ever, used and are closely associated with very high variability (Peters et al. (1991) Eur J Cancer, 27(3):263-267) as well as difficulties associated with obtaining the necessary materials for analysis.

Авторы изобретения полагают, что для перехода опухоли в состояние апоптоза, необходимое для инициации некроза опухоли, необходима степень ингибирования TS выше 90%. Кроме того, предполагается, что 6R-МТГФ обладает способностью стабилизировать вышеуказанный ингибирующий тройной комплекс до уровня, необходимого для обеспечения ингибирования TS на уровне 90% и выше.The inventors believe that a degree of TS inhibition greater than 90% is required for a tumor to enter the apoptotic state necessary to initiate tumor necrosis. In addition, it is assumed that 6R-MTHF has the ability to stabilize the above inhibitory ternary complex to a level necessary to provide TS inhibition of 90% or more.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

Фиг. 1: Усиленное ингибирование TS после введения 5-ФУ с 30 и 60 мг/м² 6R-МТГФ (обозначенным как «6R») по сравнению с 30 мг/м² l-ЛВ («L-ЛВ») (обозначенным как «L-ЛВ 30») по сравнению с 60 мг/м² рацемической смеси (d,l-ЛВ или ЛВ).Fig. 1: Enhanced TS inhibition after administration of 5-FU with 30 and 60 mg/m ² 6R-MTHF (labeled "6R") compared to 30 mg/m ² l-LV ("L-LV") (labeled " L-LV 30") compared to 60 mg/m ² racemic mixture (d,l-LV or LV).

Фиг. 2: Уровни dUrd в плазме по отношению к L-ЛВ 30 мг/м² (60 мг/м² d,l-ЛВ или ЛВ, или ЛВ 60) после введения 5-ФУ с 30 и 60 мг/м² 6R-МТГФ (обозначенным как «6R»).Fig. 2: Plasma dUrd levels relative to L-LV 30 mg/m ² (60 mg/m ² d,l-LV or LV or LV 60) after administration of 5-FU with 30 and 60 mg/m ² 6R- MTHF (designated as "6R").

Фиг. 3: Эквимолярное сравнение ЛВ и 6R-МТГФ, показанное в виде возрастающих уровней dUrd в плазме через 24 часа после болюсной инъекции 500 мг/м² 5-ФУ, введенной вместе с болюсной инъекцией 30 мг/м² l-ЛВ (обозначенным как «L-ЛВ30») (60 мг/м² d, l-ЛВ или ЛВ) или 30 мг/м² 6R-МТГФ (обозначенным как «М30»). Приращения рассчитывали как индивидуальные различия между концентрациями dUrd в плазме через 24 часа (t₂₄) за вычетом концентрации dUrd в плазме непосредственно перед инъекцией (t₀) для циклов L-ЛВ (n=48) и циклов 6R-МГТФ (n=18). L-ЛВ является активным природным изомером ЛВ, который представляет собой смесь 50:50 L-ЛВ и неприродного, не(значительно) активного d-ЛВ. Молекулярные массы 6R-МТГФ и L-ЛВ достаточно схожи в качестве основы для эквимолярного сравнения. Различие между группами проверяли с помощью U-критерия Манна-Уитни (р<0,05).Fig. 3: Equimolar comparison of LV and 6R-MTHF, shown as increasing plasma dUrd levels 24 hours after a bolus injection of 500 mg/m ² 5-FU administered together with a bolus injection of 30 mg/m ² l-LV (indicated as "L-LV30") (60 mg/m ² d, l-LV or LV) or 30 mg/m ² 6R-MTHF (designated "M30"). Increments were calculated as individual differences between plasma dUrd concentrations at 24 hours (t ₂₄ ) minus plasma dUrd concentration just before injection (t ₀ ) for L-LV cycles (n=48) and 6R-MGTP cycles (n=18) . L-HD is the active natural isomer of LV, which is a 50:50 mixture of L-HD and non-natural, not (significantly) active d-HD. The molecular weights of 6R-MTHF and L-LV are similar enough as a basis for an equimolar comparison. The difference between groups was tested using the Mann-Whitney U-test (p<0.05).

Фиг. 4: 6R-МГТФ дозозависимое увеличение возрастающих уровней dUrd в плазме через 24 часа после введения болюсной инъекции 500 мг/м² 5-ФУ вместе с болюсной инъекцией 30 мг/м² L-ЛВ (обозначенным как «L-ЛВ30») (60 мг/м² d,l-ЛВ или ЛВ) или 30 мг/м² 6R-МГТФ (обозначенным как «M30»), или 60 мг/м² 6R-МГТФ (обозначенным как «M60»). Приращения рассчитывали как индивидуальные различия между концентрациями dUrd в плазме через 24 часа (t₂₄) за вычетом концентрации dUrd в плазме непосредственно перед инъекцией (t₀) для циклов L-ЛВ (30 мг/м², n=48) и циклов 6R-МТГФ (30 мг/м², n=18; 60 мг/м², n=16). Различия между группами были значимыми согласно результатам двустороннего дисперсионного анализа Фридмана (р<0,05).Fig. 4: 6R-MGTP dose-dependent increase in increasing plasma dUrd levels 24 hours after administration of a 500 mg/m ² bolus injection of 5-FU along with a 30 mg/m ² bolus of L-LV (designated as “L-LV30”) (60 mg/m ² d,l-LV or LV) or 30 mg/m ² 6R-MGTP (labeled "M30") or 60 mg/m ² 6R-MGTP (labeled "M60"). Increments were calculated as individual differences between plasma dUrd concentrations at 24 hours (t ₂₄ ) minus plasma dUrd concentration just before injection (t ₀ ) for L-LV cycles (30 mg/m ² , n=48) and 6R- cycles. MTHF (30 mg/m ² , n=18; 60 mg/m ² , n=16). Differences between groups were significant according to Friedman's two-way analysis of variance (p<0.05).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

В одном из вариантов осуществления [6R]-5,10-метилен-тетрагидрофолиевую кислоту (6R-МТГФ) или ее фармацевтически приемлемую соль используют в виде твердой формы, которая растворима в воде, или в виде лиофилизата, необязательно стабилизированного одним или более подходящими наполнителями и/или антиоксидантами, такими как лимонная кислота или аскорбиновая кислота или их солевые формы. В одном из вариантов осуществления 6R-МТГФ вводят в виде одного или более болюсов для внутривенного введения, причем каждый болюс содержит 5-1000 мг/м² BSA (площади поверхности тела), например 5 мг/м² BSA, например 7 мг/м² BSA, например 10 мг/м² BSA, например 15 мг/м² BSA, например 30 мг/м² BSA, например 60 мг/м² BSA, например 120 мг/м² BSA, например 240 мг/м² BSA, например 480 мг/м² BSA, например, 720 мг/м² BSA или 960 мг/м² BSA. Используемый в настоящем описании термин «болюс» означает способ внутривенного введения, при котором разовая доза фармацевтической композиции вводится сразу, в отличие от внутривенной инфузии, когда разовая доза вводится при постоянной концентрации в течение определенного периода времени.In one embodiment, [6R]-5,10-methylene-tetrahydrofolic acid (6R-MTHF), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, is used as a solid form that is water-soluble or as a lyophilisate, optionally stabilized with one or more suitable excipients. and/or antioxidants such as citric acid or ascorbic acid or their salt forms. In one embodiment, 6R-MTHF is administered as one or more intravenous boluses, each bolus containing 5-1000 mg/m ² BSA (body surface area), eg 5 mg/m ² BSA, eg 7 mg/m ² BSA, eg 10 mg/m ² BSA, eg 15 mg/m ² BSA, eg 30 mg/m ² BSA, eg 60 mg/m ² BSA, eg 120 mg/m ² BSA, eg 240 mg/m ² BSA eg 480 mg/m ² BSA, eg 720 mg/m ² BSA or 960 mg/m ² BSA. As used herein, the term “bolus” means an intravenous administration method in which a single dose of a pharmaceutical composition is administered all at once, as opposed to an intravenous infusion where a single dose is administered at a constant concentration over a period of time.

Дозировка зависит от формы терапии, формы применения препарата, а также от возраста, веса, питания и состояния пациента. Лечение может начинаться с меньшего количества, ниже оптимального, которое может быть увеличено для достижения оптимального эффекта. Предпочтительная доза, используемая в терапии, составляет от 10 до 3000 мг в сутки, в частности от 50 до 500 мг в сутки. Введение можно выполнять в виде разовой дозы или в виде многократных доз.The dosage depends on the form of therapy, the form of application of the drug, as well as on the age, weight, nutrition and condition of the patient. Treatment may be started with a smaller amount, below the optimum, which may be increased to achieve the optimum effect. The preferred dose used in therapy is from 10 to 3000 mg per day, in particular from 50 to 500 mg per day. The introduction can be carried out in the form of a single dose or in the form of multiple doses.

В одном из вариантов осуществления 6R-МТГФ может быть в форме свободной кислоты, в форме фармацевтически приемлемой соли, в частности кислой соли, а также соли щелочного или щелочноземельного металла.In one embodiment, the 6R-MTHF may be in the form of a free acid, in the form of a pharmaceutically acceptable salt, in particular an acid salt, as well as an alkali or alkaline earth metal salt.

В другом варианте осуществления МТГФ включает оба диастереомерных изомера, в частности диастереоизомерно чистый природный 6R-МТГФ. Используемый в настоящем описании термин «диастереоизомерно чистый» означает 6R-МТГФ или его соль в изомерном избытке по сравнению с другим изомером, более чем примерно 80%, предпочтительно более чем примерно 90%, предпочтительно более чем примерно 95%, более предпочтительно более чем примерно 97% и более предпочтительно более чем примерно 99%, более предпочтительно более чем примерно 99,5% или более, и наиболее предпочтительно до 100%, где остаток представляет собой другой изомер, 6S-МТГФ.In another embodiment, MTHF includes both diastereomeric isomers, in particular diastereomeric pure natural 6R-MTHF. As used herein, the term "diastereoisomerically pure" means 6R-MTHF or a salt thereof in an isomeric excess over the other isomer, greater than about 80%, preferably greater than about 90%, preferably greater than about 95%, more preferably greater than about 97% and more preferably greater than about 99%, more preferably greater than about 99.5% or greater, and most preferably up to 100%, where the remainder is the other isomer, 6S-MTHF.

В другом варианте осуществления 6R-МТГФ является химически чистым. Используемый в настоящем описании термин «химически чистый» означает соединение с химической чистотой примерно 80%, предпочтительно с химической чистотой примерно 90%, более предпочтительно примерно 95%, более предпочтительно примерно 97%, более предпочтительно примерно 98% и наиболее предпочтительно 99% или выше 99%, например, с химической чистотой 99,5, 99,6, 99,7, 99,8, 99,9 или до 100%, согласно результатам определения методом ВЭЖХ. Химические примеси могут включать непрореагировавший исходный материал (включая растворители), продукты разложения 6R-МТГФ (такие как тетрагидрофолиевая кислота и ее продукты разложения) и т.д.In another embodiment, the 6R-MTHF is chemically pure. As used herein, the term "chemically pure" means a compound with a chemical purity of about 80%, preferably a chemical purity of about 90%, more preferably about 95%, more preferably about 97%, more preferably about 98%, and most preferably 99% or greater. 99%, e.g. chemical purity 99.5, 99.6, 99.7, 99.8, 99.9 or up to 100% as determined by HPLC. Chemical impurities may include unreacted starting material (including solvents), degradation products of 6R-MTHF (such as tetrahydrofolic acid and its degradation products), and the like.

Необязательно, фармацевтическая композиция, содержащая, например 6R-МТГФ, может дополнительно содержать по меньшей мере одно противораковое соединение. Противораковое соединение может включать, без ограничения, один или более химиотерапевтических агентов, таких как, без ограничения: нуклеиновые кислоты, в частности фторированные нуклеиновые кислоты (например, 5-фторурацил (5-ФУ) или его аналог или пролекарство), антифолаты (например, пеметрексед, ралтитрексид, лометрексол), ингибиторы топоизомеразы (например, иринотекан, топотекан), антиметаболитные лекарственные средства (например, метотрексат, гемцитабин, тезацитабин), модуляторы 5-ФУ, алкилирующие агенты (например, циклофосфамид, кармустин), ингибиторы биосинтеза нуклеиновых кислот (митомицин, антрациклины (например, эпирубицин, доксорубицин)), производные платины (например, цисплатин, оксалиплатин, карбоплатин), препараты, разрушающие микротрубочки (например, паклитаксел, доцетаксел, винолребин, винкристин), препараты, блокирующие гормоны (например, ингибиторы тамоксифена) ингибиторы киназ, включая, без ограничения, рецепторные и нерецепторные тирозинкиназы (например, Iressa, Tarceva, SU5416, PTK787, Gleevec), ингибиторы протеосом (например, бортезомиб), иммуномодуляторы (например, левамисол), противовоспалительные лекарственные средства, ингибиторы васкуляризации, цитокины (например, интерлейкины, факторы некроза опухолей) и лекарственные средства, ингибирующие активность цитокинов, гормонов или рецепторов цитокинов или гормонов (например, анти-VEGF-антитело бевацизумаб или «Авастин»). Противораковые соединения также могут включать моноклональные антитела, такие как, без ограничения, моноклональные антитела, которые связывают цитокины, гормоны или рецепторы гормонов (например, антитела, которые блокируют активацию факторов роста EGF или VEGF, такие как авастин, эрбитукс, герцептин) и т.д. В одном из вариантов осуществления 6R-МТГФ вводят в комбинации с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного противоракового соединения. Когда 6R-МТГФ вводят в комбинации с терапевтически эффективным количеством по меньшей мере одного противоракового соединения, специалист в данной области техники поймет, что по меньшей мере указанное одно противораковое соединение можно вводить до, после или одновременно с 6R-МТГФ.Optionally, a pharmaceutical composition containing, for example, 6R-MTHF may further contain at least one anti-cancer compound. The anticancer compound may include, without limitation, one or more chemotherapeutic agents such as, but not limited to: nucleic acids, in particular fluorinated nucleic acids (e.g., 5-fluorouracil (5-FU) or an analog or prodrug thereof), antifolates (e.g., pemetrexed, raltitrexide, lometrexol), topoisomerase inhibitors (eg, irinotecan, topotecan), antimetabolite drugs (eg, methotrexate, gemcitabine, tezacitabine), 5-FU modulators, alkylating agents (eg, cyclophosphamide, carmustine), inhibitors of nucleic acid biosynthesis ( mitomycin, anthracyclines (eg, epirubicin, doxorubicin)), platinum derivatives (eg, cisplatin, oxaliplatin, carboplatin), microtubule disrupting drugs (eg, paclitaxel, docetaxel, vinolrebin, vincristine), hormone-blocking drugs (eg, tamoxifen inhibitors) kinase inhibitors, including but not limited to receptor and non-receptor tyrosine kinases (e.g., Iressa, Tarc eva, SU5416, PTK787, Gleevec), proteasome inhibitors (eg, bortezomib), immunomodulators (eg, levamisol), anti-inflammatory drugs, vascularization inhibitors, cytokines (eg, interleukins, tumor necrosis factors), and drugs that inhibit cytokine, hormone activity or cytokine or hormone receptors (eg, the anti-VEGF antibody bevacizumab or Avastin). Anti-cancer compounds may also include monoclonal antibodies such as, but not limited to, monoclonal antibodies that bind cytokines, hormones, or hormone receptors (e.g., antibodies that block the activation of EGF or VEGF growth factors, such as Avastin, Erbitux, Herceptin), etc. d. In one embodiment, 6R-MTHF is administered in combination with a therapeutically effective amount of at least one anticancer compound. When 6R-MTHF is administered in combination with a therapeutically effective amount of at least one anti-cancer compound, one skilled in the art will appreciate that the at least one anti-cancer compound may be administered before, after, or simultaneously with 6R-MTHF.

ПРИМЕРЫEXAMPLES

Приведенные ниже примеры просто демонстрируют природу настоящего изобретения и никоим образом не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения или прилагаемую формулу изобретения.The following examples simply demonstrate the nature of the present invention and should in no way be construed as limiting the scope of the invention or the appended claims.

Пример 1 - Лечение 5-ФУ и фолатами.Example 1 - Treatment with 5-FU and folates.

1. Структура исследования.1. The structure of the study.

Безопасность и эффективность [6R]-5,10-метилентетрагидрофолата ([6R]-МТГФ) анализируют в открытом когортном исследовании фазы I/II на нескольких площадках (ISO-CC-005) у пациентов с раком ободочной и прямой кишки стадии IV (mCRC) для определения безопасной и переносимой в/в болюсной дозы 6R-МТГФ в комбинации со стандартными дозами 5-ФУ (500 мг/м²) отдельно или в комбинации с фиксированной дозой бевацизумаба, оксалиплатина или иринотекана. Среди групп пациентов (n≥3) возрастающие дозы 6R-МТГФ в пределах от 30-240 мг/м² BSA оценивают в присутствии различных комбинаций цитотоксических препаратов, только 5-ФУ или 5-ФУ плюс оксалиплатин, бевацизумаб или иринотекан, вводимых стандартными дозами. Ожидается, что исследование будет завершено к концу 2017 года. Краткое описание плана исследования и каждой группы исследования приведено ниже в таблице 1.The safety and efficacy of [6R]-5,10-methylenetetrahydrofolate ([6R]-MTHF) is being analyzed in a phase I/II multisite open cohort study (ISO-CC-005) in patients with stage IV colorectal cancer (mCRC). ) to determine a safe and tolerable IV bolus dose of 6R-MTHF in combination with standard doses of 5-FU (500 mg/m ² ) alone or in combination with a fixed dose of bevacizumab, oxaliplatin, or irinotecan. Among patient groups (n≥3), increasing doses of 6R-MTHF ranging from 30-240 mg/m ² BSA are evaluated in the presence of various combinations of cytotoxic drugs, 5-FU alone or 5-FU plus oxaliplatin, bevacizumab, or irinotecan administered at standard doses. . The study is expected to be completed by the end of 2017. A brief description of the study design and each study group is provided in Table 1 below.

Таблица 1: Начальные дозы химиотерапевтических агентов (бевацизумаб, оксалиплатин, иринотекан и/или 5-ФУ) и исследуемого лекарственного средства (6R-МТГФ)Table 1: Initial doses of chemotherapy agents (bevacizumab, oxaliplatin, irinotecan and/or 5-FU) and study drug (6R-MTHF)

Группа леченияTreatment group КогортаCohort ^** БевацизумабBevacizumab ОксалиплатинOxaliplatin ИринотеканIrinotecan ^## 5-ФУ5-FU ** 6R-МТГФ6R-MTHF 5-ФУ5-FU Через примерноAfter about
-180 минут-180 minutes
(инфузия от 30 до 90 мин)(infusion from 30 to 90 minutes) Через примерно -60 минутAfter about -60 minutes
(инфузия от 15 до 120 мин)(infusion from 15 to 120 min) Через примерноAfter about
-60 минут-60 minutes
(инфузия от 30 до 90 мин)(infusion from 30 to 90 minutes) Через 0 минутAfter 0 minutes
(болюс)(bolus) Через примерно 30 минутAfter about 30 minutes
(болюс)(bolus) ^aa Через примерно 35 минутAfter about 35 minutes
(46-часовая непрерывная инфузия)(46 hour continuous infusion) ^aa Группа 1Group 1 Когорта 1Cohort 1 N/AN/A N/AN/A N/AN/A 500 мг/м² 500 mg/ ^m2 30 мг/м² 30 mg/ ^m2 N/AN/A Когорта 2Cohort 2 N/AN/A N/AN/A N/AN/A 500 мг/м² 500 mg/ ^m2 60 мг/м² 60 mg/ ^m2 N/AN/A Когорта 8Cohort 8 N/AN/A N/AN/A N/AN/A 500 мг/м² 500 mg/ ^m2 120 мг/м² 120 mg/ ^m2 N/AN/A Когорта 9Cohort 9 N/AN/A N/AN/A N/AN/A 500 мг/м² 500 mg/ ^m2 240 мг/м² 240 mg/ ^m2 N/AN/A Группа 2Group 2 Когорта 4Cohort 4 N/AN/A 85 мг/м² 85 mg/ ^m2 N/AN/A 500 мг/м² 500 mg/ ^m2 30 мг/м² 30 mg/ ^m2 N/AN/A Когорта 5Cohort 5 N/AN/A 85 мг/м² 85 mg/ ^m2 N/AN/A 500 мг/м² 500 mg/ ^m2 60 мг/м² 60 mg/ ^m2 N/AN/A Группа 3Group 3 Когорта 6Cohort 6 N/AN/A N/AN/A 180 мг/м² 180 mg/ ^m2 500 мг/м² 500 mg/ ^m2 30 мг/м² 30 mg/ ^m2 N/AN/A Когорта 7Cohort 7 N/AN/A N/AN/A 180 мг/м² 180 mg/ ^m2 500 мг/м² 500 mg/ ^m2 60 мг/м² 60 mg/ ^m2 N/AN/A Группа 4Group 4 Когорта 12Cohort 12 N/AN/A 85 мг/м² 85 mg/ ^m2 N/AN/A 400 мг/м² 400 mg/ ^m2 60 мг/м^2a 60 mg/m ^2a 2400 мг/м² 2400 mg/ ^m2 Когорта 13Cohort 13 N/AN/A 85 мг/м² 85 mg/ ^m2 N/AN/A 400 мг/м² 400 mg/ ^m2 120 мг/м^2a 120 mg/ ^m2a 2400 мг/м² 2400 mg/ ^m2 Когорта 14Cohort 14 N/AN/A 85 мг/м² 85 mg/ ^m2 N/AN/A 400 мг/м² 400 mg/ ^m2 240 мг/м^2a 240 mg/ ^m2a 2400 мг/м² 2400 mg/ ^m2 Группа 5Group 5 Когорта 15Cohort 15 5 мг/кг5 mg/kg 85 мг/м² 85 mg/ ^m2 N/AN/A 400 мг/м² 400 mg/ ^m2 SP2D^a,b SP2D ^a,b 2400 мг/м² 2400 mg/ ^m2

Сокращение: N/A: не применимо, SP2D: доза, выбранная для фазы 2.Abbreviation: N/A: not applicable, SP2D: dose selected for phase 2.

Окно временных точек для введения оксалиплатина может быть расширено для обеспечения времени инфузии до 120 минут, при необходимостиThe window of time points for the administration of oxaliplatin can be extended to provide an infusion time of up to 120 minutes, if necessary.

# Окно временных точек для введения иринотекана может быть расширено для обеспечения времени инфузии до 90 минут, при необходимости.# The window of time points for the administration of irinotecan can be extended to provide infusion times up to 90 minutes, if necessary.

Вводимая болюсная доза 5-ФУ не должна превышать максимальную рекомендуемую суточную дозу 1000 мг независимо от площади поверхности тела.The bolus dose of 5-FU administered should not exceed the maximum recommended daily dose of 1000 mg, regardless of body surface area.

* Когорта № 3, Когорта № 10 и Когорта № 11, первоначально включенные в более ранние версии этого протокола клинического исследования, были исключены.*Cohort #3, Cohort #10, and Cohort #11, originally included in earlier versions of this clinical study protocol, have been excluded.

a В группе лечения № 4 (когорты № 12, № 13 и № 14) и группе № 5 (когорта № 15) общая доза 6R-МТГФ может быть разделена на две (2) в.в. болюсные инъекции, вводимые примерно через 30 и 60 минут после введения болюсной инъекции 5-ФУ (через 0 минут), соответственно. Непрерывная инфузия 5-ФУ может быть приостановлена для введения второй инъекции 6R-МТГФ.a In treatment group #4 (cohorts #12, #13, and #14) and group #5 (cohort #15), the total dose of 6R-MTHF may be divided into two (2) iv doses. bolus injections administered approximately 30 and 60 minutes after the administration of the 5-FU bolus injection (at 0 minutes), respectively. The continuous 5-FU infusion may be interrupted for a second injection of 6R-MTHF.

b Уровень дозы 6R-МТГФ в группе лечения № 4 (MOFOX) оценивается как уровень дозы с наиболее благоприятным профилем для следующего исследования.b The dose level of 6R-MTHF in treatment group #4 (MOFOX) is estimated as the dose level with the most favorable profile for the next study.

В Гетеборге в течение почти двух десятилетий собирают клинические данные о лечении и результатах по всем пациентам с CRC. Образцы плазмы и ткани хранятся в биобанке в соответствующих физических условиях для длительного хранения. База данных и биобанк работают согласно соответствующим этическим и нормативным требованиям. Пациентов, получавших стандартную дозу 5-ФУ, 500 мг/м², плюс в/в болюсная доза ЛВ, 60 мг/м² (эквивалентная 30 мг/м² L-ЛВ), отбирали случайным образом из банка данных.Gothenburg has been collecting clinical data on treatment and outcomes for all patients with CRC for almost two decades. Plasma and tissue samples are stored in a biobank under appropriate physical conditions for long-term storage. The database and biobank operate in accordance with relevant ethical and regulatory requirements. Patients treated with a standard dose of 5-FU, 500 mg/m ² , plus an IV bolus dose of 60 mg/m ² LV (equivalent to 30 mg/m ² L-LV) were randomly selected from the data bank.

Сохраненные образцы плазмы всех пациентов использовали для определения dUrd.Stored plasma samples from all patients were used to determine dUrd.

Настоящее исследование является историческим сравнительным исследованием групп. Все пациенты получали стандартную дозу 500 мг 5-ФУ, вводимую в виде болюсной инъекции, плюс соответствующий фолат 6R-МТГФ или ЛВ, также вводимый в виде болюсной инъекции.The present study is a historical comparative study of groups. All patients received the standard dose of 500 mg 5-FU given as a bolus injection plus the appropriate 6R-MTHF or LV folate also given as a bolus injection.

2. Пациенты, получавшие 6R-МТГФ.2. Patients treated with 6R-MTHF.

Все пациенты были протестированы в течение двух последовательных циклов лечения 5-ФУ. Значения dUrd измеряли непосредственно перед введением 5-ФУ (t₀) и через 24 часа (t₂₄). Средние значения и стандартные отклонения для различия между значениями, полученными для t₂₄ и t₀, наблюдаемой у пациентов, рассчитывали для каждого уровня дозы - 30 и 60 мг/м² 6R-МТГФ, соответственно. Некоторые значения для дозы 240 мг/m² 6R-МТГФ также были проанализированы и рассчитаны.All patients were tested for two consecutive cycles of 5-FU treatment. The dUrd values were measured immediately before the introduction of 5-FU (t ₀ ) and after 24 hours (t ₂₄ ). Mean values and standard deviations for the difference between the values obtained for t ₂₄ and t ₀ observed in patients were calculated for each dose level - 30 and 60 mg/m ² 6R-MTHF, respectively. Some values for the 240 mg/m ² dose of 6R-MTHF were also analyzed and calculated.

3. Пациенты, получавшие ЛВ.3. Patients treated with LV.

Двадцать четыре пациента с метастатическим раком (mCRC) ободочной и прямой кишки, получавшие 5-ФУ плюс 60 мг/м² ЛВ, были отобраны случайным образом из базы данных, и для каждого пациента определяли уровни dUrd в t₀ и t₂₄ в двух циклах лечения, и таким же образом, как для пациентов с 6R-МТГФ, рассчитывали среднее значение и стандартные отклонения для различия между значениями, полученными в t₂₄ и t₀. Поскольку ЛВ представляет собой смесь 50:50 природных (1-формил-тетрагидрофолат) и не встречающихся в природе (d-формил-тетрагидрофолат) изомеров, активный изомер составляет половину от заданной дозы ЛВ. Молекулярные массы ЛВ и 6R-МТГФ очень похожи, и поэтому 60 мг ЛВ можно рассматривать в качестве эквимолярных 30 мг 6R-МТГФ.Twenty-four patients with metastatic colorectal cancer (mCRC) treated with 5-FU plus 60 mg/m ² LV were randomly selected from a database and dUrd levels at t ₀ and t ₂₄ were determined for each patient in two cycles. treatment, and in the same way as for patients with 6R-MTHF, calculated the mean value and standard deviations for the difference between the values obtained at t ₂₄ and t ₀ . Because the drug is a 50:50 mixture of naturally occurring (1-formyl-tetrahydrofolate) and non-naturally occurring (d-formyl-tetrahydrofolate) isomers, the active isomer is half of the prescribed drug dose. The molecular weights of the drug and 6R-MTHF are very similar, and therefore 60 mg of drug can be considered as equimolar to 30 mg of 6R-MTHF.

4. Статистические методы.4. Statistical methods.

Различия между всеми четырьмя группами проверяли с помощью двухфакторного дисперсионного анализа Фридмана, и после этого оценивали различие между двумя группами, получавшими эквимолярные дозы ЛВ 60 мг/м² и 6R-МТГФ 30 мг/м² с помощью U критерия Манна-Уитни. Значения P менее 0,05 считались значимыми.Differences between all four groups were tested using Friedman's two-way ANOVA, and then the difference between the two groups receiving 60 mg/m ² equimolar doses of LV and 30 mg/m ² 6R-MTHF was assessed using the Mann-Whitney U test. P values less than 0.05 were considered significant.

3. Определение уровня dUrd в плазме.3. Determination of the level of dUrd in plasma.

Уровень dUrd в плазме определяли методом, включающим жидкостную хроматографию с последующей тандемной масс-спектрометрией, в общих чертах описанную ниже. Образцы плазмы, хранившиеся в морозильной камере при -80°С, извлекали и в плазму добавляли трихлоруксусную кислоту, затем образцы перемешивали и центрифугировали. Супернатант фильтровали через мембранный фильтр с молекулярной массой 10 кДа и снова центрифугировали в течение 30 минут. Раствор, находящийся на дне пробирки был готов для анализа методом ЖХ-МС/МС. Образцы для калибровки готовили таким же образом, используя холостой образец плазмы и различные концентрации внутреннего стандарта. Вводимый объем в ЖХ-МС/МС составлял 40 мкл. Дезоксиуридин и хлор-дезоксиуридин ионизировали электрораспылением в негативном режиме. Параметры МС оптимизировали в отношении максимальной реакции всех фолатов. Использовали метод сбора данных МС/МС (мониторинг множественных реакций).Plasma dUrd levels were determined by a method involving liquid chromatography followed by tandem mass spectrometry, outlined below. Plasma samples stored in a freezer at -80°C were removed and trichloroacetic acid was added to the plasma, then the samples were mixed and centrifuged. The supernatant was filtered through a 10 kDa membrane filter and centrifuged again for 30 minutes. The solution at the bottom of the tube was ready for analysis by LC-MS/MS. Calibration samples were prepared in the same manner using a blank plasma sample and various concentrations of the internal standard. The injection volume in LC-MS/MS was 40 μl. Deoxyuridine and chlor-deoxyuridine were electrospray ionized in negative mode. MS parameters were optimized for maximum response of all folates. The MS/MS (multiple reaction monitoring) data collection method was used.

ПРИМЕР 2 - Ингибирование TS.EXAMPLE 2 Inhibition of TS.

Различия между первыми тремя группами были значимыми (р=0,04), также были значимыми различия между двумя эквимолярными группами: 60 мг/м² ЛВ и 30 мг/м² [6R]-МГТФ (p=0,03). Эквимолярная доза [6R]-МГТФ вместе с 5-ФУ обеспечивает значительно более высокий уровень dUrd, чем ЛВ. Кроме того, по-видимому, между увеличением дозы [6R]-МТГФ и усилением ингибирования TS существует зависимость доза-ответ, что отражается в увеличении уровней dUrd в плазме (см. Таблицу 2 и фиг. 1).Differences between the first three groups were significant (p=0.04), and there were also significant differences between the two equimolar groups: 60 mg/m ² LV and 30 mg/m ² [6R]-MGTP (p=0.03). An equimolar dose of [6R]-MGTP together with 5-FU provides a significantly higher level of dUrd than LV. In addition, there appears to be a dose-response relationship between increasing [6R]-MTHF dose and increasing TS inhibition, as reflected in increased plasma levels of dUrd (see Table 2 and FIG. 1).

Таблица 2. Увеличение уровня dUrd через 24 часа после болюсной инъекции 5-ФУ плюс L-ЛВ или 6R-МТГФTable 2 Increase in dUrd 24 hours after bolus injection of 5-FU plus L-LV or 6R-MTHF

Доза активного соединения, мг/мDose of active compound, mg/m ²² BSA BSA Вводимая доза, мг/мAdministered dose, mg/m ²² BSA BSA № циклаcycle number Среднее значение (tMean value (t ₂₄₂₄ -t-t ₀₀ ) dUrd в плазме, пмоль/мл) dUrd in plasma, pmol/ml SD, пмоль/млSD, pmol/ml p<p< ЛВ относительно 6RLV relative to 6R Все группыAll groups ^1one L-ЛВ 30L-LV 30 60 (d,l-ЛВ)60 (d,l-LV) 4848 48,748.7 25,825.8 0,030.03 0,040.04 6R-МТГФ 306R-MTHF 30 30thirty 18eighteen 74,774.7 52,752.7 6R-МТГФ 606R-MTHF 60
6R-МТГФ 2406R-MTHF 240 6060
240240 16
416
four 91,8
99,991.8
99.9 67,6
ND67.6
ND

¹За исключением группы 240 мг/м². ¹ Except for the 240 mg/m ² group.

Это исследование показало, что биомодуляция 5-ФУ с помощью 6R-МТГФ, а не ЛВ приводит к увеличению уровня dUrd в плазме и усилению ингибирования TS. Это наблюдение также подтверждается зависимым от дозы ингибированием TS после увеличения дозы 6R-МТГФ.This study showed that 5-FU biomodulation with 6R-MTHF rather than LV resulted in increased plasma levels of dUrd and increased TS inhibition. This observation is also supported by dose-dependent inhibition of TS after increasing the dose of 6R-MTHF.

Болюсная доза 60 мг/м² ЛВ является стандартной дозой, используемой в так называемом режиме лечения северных стран, широко используемом в Скандинавии. Клинические результаты аналогичны результатам, полученным при других режимах, в которых ЛВ вводят в виде инфузии, часто в количестве 400 мг в течение двух часов (Gustavsson et al., (2015) Clinical Colorectal Cancer, 14:1-10). Интересным оказался тот факт, что после введения 6R-МТГФ наблюдается гораздо более сильное ингибирование TS (фиг. 2).The bolus dose of 60 mg/m ² LV is the standard dose used in the so-called Nordic treatment regimen widely used in Scandinavia. Clinical results are similar to those obtained with other regimens in which the drug is administered as an infusion, often in an amount of 400 mg over two hours (Gustavsson et al., (2015) Clinical Colorectal Cancer, 14:1-10). Interestingly, after the introduction of 6R-MTHF, a much stronger inhibition of TS was observed (Fig. 2).

Claims

1. A method for increasing the plasma concentration of 2'-deoxyuridine (dUrd) in a human subject, comprising:

a) the step of administering 400 or 500 mg/m ² 5-fluorouracil (5-FU) intravenously as a bolus injection to a human subject;

b) after step a) the step of administering intravenously 30, 60, 120, or 240 mg/m ² [6R]-5,10-methylenetetrahydrofolate (6R-MTHF) intravenously as two bolus injections to said human subject, and

c) optional administration of 2400 mg/m ² 5-FU as a continuous infusion simultaneously with or after step b).

2. The method of claim 1 wherein the 6R-MTHF is provided as a pharmaceutically acceptable salt.

3. The method of claim 2 wherein the pharmaceutically acceptable salt is in the form of a lyophilisate.

4. The method of claim 1, wherein said method provides an increased plasma concentration of 2'-deoxyuridine (dUrd) relative to human plasma concentration of dUrd following administration of an equimolar dose of 5-formyltetrahydrofolate (LV).

5. The method of claim 1 wherein 6R-MTHF is administered intravenously as a bolus injection to said human subject approximately 30 minutes after step a).

6. The method of claim 1 wherein 6R-MTHF is administered intravenously as a bolus injection to said human subject approximately 30 and 60 minutes after step a).

7. The method of claim 1, wherein said human subject is suffering from cancer.

8. The method of claim 7, wherein said cancer is rectal cancer.

9. The method of claim 1, wherein said method further comprises the step of administering a therapeutically effective amount of at least one anticancer agent selected from the group consisting of oxaliplatin, irinotecan, and bevacizumab.

10. The method of claim 1, wherein said method causes increased thymidylate synthase (TS) inhibition compared to TS inhibition in a human subject following administration of an equimolar dose of LV.

11. The method of claim 1 wherein the 6R-MTHF is greater than 90% chemically pure and has a 95% isomeric excess over [6S]-5,10-methylenetetrahydrofolate (6S-MTHF).