RU2775653C2 - Compositions and methods for changing flowering and architecture of plants for improvement of potential yield - Google Patents
Compositions and methods for changing flowering and architecture of plants for improvement of potential yield Download PDFInfo
- Publication number
- RU2775653C2 RU2775653C2 RU2019115133A RU2019115133A RU2775653C2 RU 2775653 C2 RU2775653 C2 RU 2775653C2 RU 2019115133 A RU2019115133 A RU 2019115133A RU 2019115133 A RU2019115133 A RU 2019115133A RU 2775653 C2 RU2775653 C2 RU 2775653C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- plant
- sequence
- expression
- transgene
- promoter
- Prior art date
Links
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 title description 168
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 21
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims abstract description 219
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 claims abstract description 85
- 230000000051 modifying Effects 0.000 claims abstract description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 1268
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 491
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 281
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 281
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 280
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 claims description 231
- 229920000023 polynucleotide Polymers 0.000 claims description 191
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 191
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 171
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 claims description 168
- 240000007842 Glycine max Species 0.000 claims description 151
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 114
- 230000001261 florigenic Effects 0.000 claims description 98
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 90
- 230000000295 complement Effects 0.000 claims description 88
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 claims description 80
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 claims description 76
- 240000005158 Phaseolus vulgaris Species 0.000 claims description 76
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 69
- 108020004999 Messenger RNA Proteins 0.000 claims description 64
- 229920002106 messenger RNA Polymers 0.000 claims description 64
- 235000014571 nuts Nutrition 0.000 claims description 62
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 54
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 54
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 37
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 25
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 25
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 25
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 25
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 claims description 25
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 claims description 25
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 25
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 claims description 25
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 claims description 25
- 229940021015 I.V. solution additive Amino Acids Drugs 0.000 claims description 21
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 13
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 claims description 13
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 claims description 13
- 229960005261 Aspartic Acid Drugs 0.000 claims description 12
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 12
- 229960002989 Glutamic Acid Drugs 0.000 claims description 12
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 12
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 12
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 12
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 12
- 229960001153 serine Drugs 0.000 claims description 12
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 claims description 12
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 10
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 9
- 229960002885 Histidine Drugs 0.000 claims description 8
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 8
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 claims description 8
- 230000001809 detectable Effects 0.000 claims description 5
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 abstract description 121
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 38
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 abstract 1
- 101710027506 Rv0998 Proteins 0.000 description 174
- 101700049810 pat Proteins 0.000 description 174
- 101710018398 patZ Proteins 0.000 description 174
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 165
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 128
- 230000001131 transforming Effects 0.000 description 105
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 90
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 89
- 230000001965 increased Effects 0.000 description 85
- 229920001239 microRNA Polymers 0.000 description 66
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 61
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 59
- 229920001405 Coding region Polymers 0.000 description 48
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 40
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 33
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 31
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 27
- 101710023886 GUSB Proteins 0.000 description 25
- 230000000692 anti-sense Effects 0.000 description 24
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 24
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 23
- 108010023832 Florigen Proteins 0.000 description 22
- 230000000442 meristematic Effects 0.000 description 22
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 21
- 108020004459 Small Interfering RNA Proteins 0.000 description 20
- 230000005014 ectopic expression Effects 0.000 description 20
- 101700076142 ERL1 Proteins 0.000 description 19
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 18
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 108020004417 Untranslated RNA Proteins 0.000 description 17
- 229920001894 non-coding RNA Polymers 0.000 description 17
- 101700051207 MADS5 Proteins 0.000 description 16
- 101700029076 agl11 Proteins 0.000 description 16
- 229960003767 Alanine Drugs 0.000 description 14
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 14
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 14
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 14
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 13
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 13
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 12
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 12
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 12
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 12
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N precursor Substances N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 12
- 230000002103 transcriptional Effects 0.000 description 12
- 229920002459 Intron Polymers 0.000 description 11
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 11
- 229920001776 Mature messenger RNA Polymers 0.000 description 11
- GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Threonine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 11
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 11
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 11
- 108020004461 Double-Stranded RNA Proteins 0.000 description 10
- 229920001985 Small interfering RNA Polymers 0.000 description 10
- 241000626572 Xanthomonas oryzae pv. oryzicola Species 0.000 description 10
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 10
- 101700062697 ALMT6 Proteins 0.000 description 9
- 240000000385 Brassica napus var. napus Species 0.000 description 9
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 9
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 9
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 9
- 229920001320 Leader sequence (mRNA) Polymers 0.000 description 9
- 229960004452 Methionine Drugs 0.000 description 9
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 9
- 102100008217 UBE2D1 Human genes 0.000 description 9
- 101710021112 UBE2D1 Proteins 0.000 description 9
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 9
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 9
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 9
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 9
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 9
- UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N Aspartyl-L-proline Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 8
- 229920000195 Bacterial small RNA Polymers 0.000 description 8
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 8
- 235000006618 Brassica rapa subsp oleifera Nutrition 0.000 description 8
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 8
- 240000006962 Gossypium hirsutum Species 0.000 description 8
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 8
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 8
- 101700051590 MYB17 Proteins 0.000 description 8
- 108091000043 Phosphatidylethanolamine-binding protein Proteins 0.000 description 8
- 102000029987 Phosphatidylethanolamine-binding protein Human genes 0.000 description 8
- 229920000401 Three prime untranslated region Polymers 0.000 description 8
- 235000008984 brauner Senf Nutrition 0.000 description 8
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 8
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 8
- 230000001976 improved Effects 0.000 description 8
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 7
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 7
- 229960000310 ISOLEUCINE Drugs 0.000 description 7
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- 241000227653 Lycopersicon Species 0.000 description 7
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 7
- GJNDXQBALKCYSZ-RYUDHWBXSA-N Val-Phe Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 GJNDXQBALKCYSZ-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 7
- 230000002238 attenuated Effects 0.000 description 7
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 7
- 229960001230 Asparagine Drugs 0.000 description 6
- BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 101700080605 NUC1 Proteins 0.000 description 6
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 6
- 235000002560 Solanum lycopersicum Nutrition 0.000 description 6
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 6
- 240000001016 Solanum tuberosum Species 0.000 description 6
- WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 6
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 6
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 101700006494 nucA Proteins 0.000 description 6
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 6
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 6
- 229920001439 Artificial microRNA Polymers 0.000 description 5
- OMSMPWHEGLNQOD-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Phenylalanine Chemical compound NC(=O)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMSMPWHEGLNQOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000001161 Embryo, Mammalian Anatomy 0.000 description 5
- 240000006669 Helianthus annuus Species 0.000 description 5
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 5
- QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 5
- AZLASBBHHSLQDB-GUBZILKMSA-N Leu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C AZLASBBHHSLQDB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- OZILORBBPKKGRI-RYUDHWBXSA-N Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 OZILORBBPKKGRI-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 5
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 5
- 229960005190 Phenylalanine Drugs 0.000 description 5
- 102000030951 Phosphotransferases Human genes 0.000 description 5
- 108091000081 Phosphotransferases Proteins 0.000 description 5
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 5
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 5
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 5
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 5
- 230000000977 initiatory Effects 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 230000000116 mitigating Effects 0.000 description 5
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 5
- 108010084572 phenylalanyl-valine Proteins 0.000 description 5
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 5
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 5
- IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N val-gly Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NCC(O)=O IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 108010013831 Arabidopsis FT protein Proteins 0.000 description 4
- PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N Arg-Gln Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- 101710037135 GAPC2 Proteins 0.000 description 4
- 101710037116 GAPC3 Proteins 0.000 description 4
- 101710025049 GAPDG Proteins 0.000 description 4
- 101710008404 GAPDH Proteins 0.000 description 4
- 102100006425 GAPDH Human genes 0.000 description 4
- 101710010461 Gapdh1 Proteins 0.000 description 4
- ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 4
- UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 101710025050 MK0970 Proteins 0.000 description 4
- 241000218922 Magnoliophyta Species 0.000 description 4
- 235000011430 Malus pumila Nutrition 0.000 description 4
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 4
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 4
- 240000008962 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 4
- 210000001672 Ovary Anatomy 0.000 description 4
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 4
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 4
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 230000025458 RNA interference Effects 0.000 description 4
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 4
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 4
- 229920001891 Small hairpin RNA Polymers 0.000 description 4
- PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N Tyr-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 4
- STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N Val-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VEYJKJORLPYVLO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 4
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 101710025091 cbbGC Proteins 0.000 description 4
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 description 4
- 238000010192 crystallographic characterization Methods 0.000 description 4
- 230000003111 delayed Effects 0.000 description 4
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 4
- 101710025070 gapdh-2 Proteins 0.000 description 4
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 4
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 4
- 230000037039 plant physiology Effects 0.000 description 4
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 4
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 4
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 4
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 4
- -1 threonine Chemical compound 0.000 description 4
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 4
- NJMYZEJORPYOTO-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Proline Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O NJMYZEJORPYOTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 3
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 3
- 229920002395 Aptamer Polymers 0.000 description 3
- 240000005781 Arachis hypogaea Species 0.000 description 3
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 3
- QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- JSLGXODUIAFWCF-UHFFFAOYSA-N Arginyl-Asparagine Chemical compound NC(N)=NCCCC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O JSLGXODUIAFWCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N Asn-Pro Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 3
- 229920005681 CRISPR RNA Polymers 0.000 description 3
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 3
- 102000033147 ERVK-25 Human genes 0.000 description 3
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 description 3
- 240000001441 Fragaria vesca Species 0.000 description 3
- UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N Glu-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N Glu-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 3
- SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- AJHCSUXXECOXOY-NSHDSACASA-N Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-NSHDSACASA-N 0.000 description 3
- 229920002391 Guide RNA Polymers 0.000 description 3
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 description 3
- BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- 108010061833 Integrases Proteins 0.000 description 3
- DRCKHKZYDLJYFQ-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Threonine Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O DRCKHKZYDLJYFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710041004 MYBAS2 Proteins 0.000 description 3
- 240000007119 Malus pumila Species 0.000 description 3
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 3
- AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- 101700083220 REM17 Proteins 0.000 description 3
- 101700068015 REM19 Proteins 0.000 description 3
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 240000008529 Triticum aestivum Species 0.000 description 3
- LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)=CNC2=C1 LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 3
- ONWMQORSVZYVNH-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ONWMQORSVZYVNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- 235000017585 alfalfa Nutrition 0.000 description 3
- 235000017587 alfalfa Nutrition 0.000 description 3
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 3
- 230000005584 early death Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 3
- 108010062266 glycyl-glycyl-argininal Proteins 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 108010044655 lysylproline Proteins 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 3
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 3
- 230000002093 peripheral Effects 0.000 description 3
- QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N pro glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 QLROSWPKSBORFJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating Effects 0.000 description 3
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 3
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 3
- OAIGZYFGCNNVIE-ZPFDUUQYSA-N (2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O OAIGZYFGCNNVIE-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 2
- LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N (2S)-1-[(2S)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- BVZABQIRMYTKCF-JSGCOSHPSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-azaniumyl-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoate Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)=CNC2=C1 BVZABQIRMYTKCF-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 1-[(1S,2R,3R,4S,5R,6R)-3-carbamimidamido-6-{[(2R,3R,4R,5S)-3-{[(2S,3S,4S,5R,6S)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxan-2-yl]oxy}-4-formyl-4-hydroxy-5-methyloxolan-2-yl]oxy}-2,4,5-trihydroxycyclohexyl]guanidine Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- BUXAPSQPMALTOY-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-3-sulfanylpropanoyl)amino]pentanedioic acid Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(O)=O BUXAPSQPMALTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N Adenosine monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 229950006790 Adenosine phosphate Drugs 0.000 description 2
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 description 2
- 235000011437 Amygdalus communis Nutrition 0.000 description 2
- 240000002254 Ananas comosus Species 0.000 description 2
- 235000007119 Ananas comosus Nutrition 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 2
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 2
- WYBVBIHNJWOLCJ-IUCAKERBSA-N Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N WYBVBIHNJWOLCJ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N Arg-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 2
- TWXZVVXRRRRSLT-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Cysteine Chemical compound NC(=O)CC(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O TWXZVVXRRRRSLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MQLZLIYPFDIDMZ-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O MQLZLIYPFDIDMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 2
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 2
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 description 2
- 240000005801 Carthamus tinctorius Species 0.000 description 2
- 210000000349 Chromosomes Anatomy 0.000 description 2
- 229920002759 Circular DNA Polymers 0.000 description 2
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 2
- 240000000613 Citrullus lanatus Species 0.000 description 2
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 2
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 2
- 240000007170 Cocos nucifera Species 0.000 description 2
- 241000723377 Coffea Species 0.000 description 2
- 240000001980 Cucurbita pepo Species 0.000 description 2
- YHDXIZKDOIWPBW-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Glutamine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O YHDXIZKDOIWPBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000001008 Dimocarpus longan Species 0.000 description 2
- 235000000235 Euphoria longan Nutrition 0.000 description 2
- 235000011363 Fragaria x ananassa Nutrition 0.000 description 2
- MRVYVEQPNDSWLH-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O MRVYVEQPNDSWLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N His-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 2
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 2
- PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N Isophenergan Chemical compound C1=CC=C2N(CC(C)N(C)C)C3=CC=CC=C3SC2=C1 PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 2
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 2
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 2
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 2
- UASDAHIAHBRZQV-YUMQZZPRSA-N Met-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N UASDAHIAHBRZQV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- QXOHLNCNYLGICT-YFKPBYRVSA-N Met-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O QXOHLNCNYLGICT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- DZMGFGQBRYWJOR-YUMQZZPRSA-N Met-Pro Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O DZMGFGQBRYWJOR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 241001457070 Mirabilis mosaic virus Species 0.000 description 2
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 2
- 241000233855 Orchidaceae Species 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 101710041402 PABG_02447 Proteins 0.000 description 2
- 240000008426 Persea americana Species 0.000 description 2
- JXWLMUIXUXLIJR-QWRGUYRKSA-N Phe-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JXWLMUIXUXLIJR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 2
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N Phenylalanyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GVUVRRPYYDHHGK-UHFFFAOYSA-N Prolyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C1CCCN1 GVUVRRPYYDHHGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010078762 Protein Precursors Proteins 0.000 description 2
- 102000014961 Protein Precursors Human genes 0.000 description 2
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 description 2
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N Ser-Asp Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- UJTZHGHXJKIAOS-WHFBIAKZSA-N Ser-Gln Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O UJTZHGHXJKIAOS-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Arginine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 2
- 240000003670 Sesamum indicum Species 0.000 description 2
- BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N Thr-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 2
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 2
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 2
- 108010020764 Transposases Proteins 0.000 description 2
- 102000008579 Transposases Human genes 0.000 description 2
- CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 2
- 108020003635 Untranslated Regions Proteins 0.000 description 2
- 229920000146 Untranslated region Polymers 0.000 description 2
- 235000007244 Zea mays Nutrition 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating Effects 0.000 description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229920002847 antisense RNA Polymers 0.000 description 2
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 2
- 101700035665 aroA Proteins 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 2
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 235000005824 corn Nutrition 0.000 description 2
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 2
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine zwitterion Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 230000002363 herbicidal Effects 0.000 description 2
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic Effects 0.000 description 2
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 2
- 108010090333 leucyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010085203 methionylmethionine Proteins 0.000 description 2
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 2
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 230000001264 neutralization Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 2
- 235000005426 persea americana Nutrition 0.000 description 2
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 2
- 230000001402 polyadenylating Effects 0.000 description 2
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 230000000754 repressing Effects 0.000 description 2
- 230000001718 repressive Effects 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 230000008036 short-day photoperiodism Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 2
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 2
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- 235000021307 wheat Nutrition 0.000 description 2
- OPINTGHFESTVAX-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Arginine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N OPINTGHFESTVAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JSZMKEYEVLDPDO-ACZMJKKPSA-N (2R)-2-[[(2S,3S)-2-amino-3-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O JSZMKEYEVLDPDO-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N (2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- YRJOLUDFVAUXLI-GSSVUCPTSA-N (2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]butanedioic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O YRJOLUDFVAUXLI-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 1
- GJSURZIOUXUGAL-UHFFFAOYSA-N 2-((2,6-Dichlorophenyl)imino)imidazolidine Chemical compound ClC1=CC=CC(Cl)=C1NC1=NCCN1 GJSURZIOUXUGAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IMXSCCDUAFEIOE-UHFFFAOYSA-N 2-(1-carboxylatoethylazaniumyl)-5-(diaminomethylideneazaniumyl)pentanoate Chemical compound OC(=O)C(C)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N IMXSCCDUAFEIOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 2-[[(2S)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 235000002754 Acer pseudoplatanus Nutrition 0.000 description 1
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N Actinospectacin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 1
- OMNVYXHOSHNURL-WPRPVWTQSA-N Ala-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMNVYXHOSHNURL-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 235000003840 Amygdalus nana Nutrition 0.000 description 1
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 1
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 1
- 241000207875 Antirrhinum Species 0.000 description 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 1
- PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N Arg-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- DAQIJMOLTMGJLO-YUMQZZPRSA-N Arg-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N DAQIJMOLTMGJLO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- BNODVYXZAAXSHW-UHFFFAOYSA-N Arginyl-Histidine Chemical compound NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 BNODVYXZAAXSHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008682 Argonaute Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010088141 Argonaute Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001167018 Aroa Species 0.000 description 1
- IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N Asn-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- SJUXYGVRSGTPMC-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Alanine Chemical compound OC(=O)C(C)NC(=O)C(N)CC(N)=O SJUXYGVRSGTPMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXWUJJADFMXNKA-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O HXWUJJADFMXNKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DYDKXJWQCIVTMR-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O DYDKXJWQCIVTMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003549 Asthenia Diseases 0.000 description 1
- 235000000832 Ayote Nutrition 0.000 description 1
- 108060000997 BRE1 Proteins 0.000 description 1
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 1
- 240000001466 Brassica juncea Species 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 240000008100 Brassica rapa Species 0.000 description 1
- 241000220243 Brassica sp. Species 0.000 description 1
- 108060005892 CASD1 Proteins 0.000 description 1
- 229920000033 CRISPR Polymers 0.000 description 1
- 108010082319 CRISPR-Associated Protein 9 Proteins 0.000 description 1
- 101710024484 CSE1L Proteins 0.000 description 1
- 108060001954 CSF1 Proteins 0.000 description 1
- 101700003485 CSF2 Proteins 0.000 description 1
- 101700003315 CSF3 Proteins 0.000 description 1
- 101710010743 CSN1S1 Proteins 0.000 description 1
- 108060001965 CSN2 Proteins 0.000 description 1
- 240000001548 Camellia japonica Species 0.000 description 1
- 240000001452 Canavalia ensiformis Species 0.000 description 1
- 240000008574 Capsicum frutescens Species 0.000 description 1
- 235000013912 Ceratonia siliqua Nutrition 0.000 description 1
- 240000008886 Ceratonia siliqua Species 0.000 description 1
- 235000007516 Chrysanthemum Nutrition 0.000 description 1
- 240000007646 Chrysanthemum x morifolium Species 0.000 description 1
- 235000005986 Chrysanthemum x morifolium Nutrition 0.000 description 1
- 235000010523 Cicer arietinum Nutrition 0.000 description 1
- 240000000464 Cicer arietinum Species 0.000 description 1
- 235000009831 Citrullus lanatus Nutrition 0.000 description 1
- 235000012828 Citrullus lanatus var citroides Nutrition 0.000 description 1
- 241000737241 Cocos Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 229920002676 Complementary DNA Polymers 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 description 1
- 235000010071 Cucumis prophetarum Nutrition 0.000 description 1
- 240000004745 Cucumis prophetarum Species 0.000 description 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 1
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 235000009854 Cucurbita moschata Nutrition 0.000 description 1
- 235000009852 Cucurbita pepo Nutrition 0.000 description 1
- 235000009804 Cucurbita pepo subsp pepo Nutrition 0.000 description 1
- 240000005497 Cyamopsis tetragonoloba Species 0.000 description 1
- 241000732800 Cymbidium Species 0.000 description 1
- 235000017141 Cymbidium goeringii Nutrition 0.000 description 1
- 241000173289 Cymbidium goeringii Species 0.000 description 1
- YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N Cys-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- LMKYZBGVKHTLTN-NKWVEPMBSA-N D-nopaline Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)N[C@@H](C(O)=O)CCC(O)=O LMKYZBGVKHTLTN-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- 101710041570 DAHPS2 Proteins 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 241000608360 Dactylorhiza Species 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Destomysin Chemical compound OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005504 Dicamba Substances 0.000 description 1
- IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N Dicamba Chemical compound COC1=C(Cl)C=CC(Cl)=C1C(O)=O IWEDIXLBFLAXBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000000525 Dimocarpus longan Nutrition 0.000 description 1
- 108010007784 EC 2.5.1.6 Proteins 0.000 description 1
- 101700033915 EJ2 Proteins 0.000 description 1
- 241000512897 Elaeis Species 0.000 description 1
- 235000001942 Elaeis Nutrition 0.000 description 1
- 235000001950 Elaeis guineensis Nutrition 0.000 description 1
- 240000003133 Elaeis guineensis Species 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108060003023 F Proteins 0.000 description 1
- 108010046276 FLP recombinase Proteins 0.000 description 1
- 241000218218 Ficus <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 241000220223 Fragaria Species 0.000 description 1
- 101710035129 GPS1 Proteins 0.000 description 1
- 102100004985 GUSB Human genes 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N Gln-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- OWOFCNWTMWOOJJ-WDSKDSINSA-N Gln-Glu Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OWOFCNWTMWOOJJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 239000005561 Glufosinate Substances 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N Glufosinate Chemical compound CP(O)(=O)CCC(N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N Gly-Cys Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C([O-])=O MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 239000005562 Glyphosate Substances 0.000 description 1
- XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-O Glyphosate Chemical compound OC(=O)C[NH2+]CP(O)(O)=O XDDAORKBJWWYJS-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 235000009429 Gossypium barbadense Nutrition 0.000 description 1
- 240000000047 Gossypium barbadense Species 0.000 description 1
- 235000004341 Gossypium herbaceum Nutrition 0.000 description 1
- 240000002024 Gossypium herbaceum Species 0.000 description 1
- 235000009432 Gossypium hirsutum Nutrition 0.000 description 1
- 235000019754 Grower Diet Nutrition 0.000 description 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- NIKBMHGRNAPJFW-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Arginine Chemical compound NC(=N)NCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 NIKBMHGRNAPJFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WSDOHRLQDGAOGU-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 WSDOHRLQDGAOGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009331 Homeodomain Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010048671 Homeodomain Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940097277 Hygromycin B Drugs 0.000 description 1
- HZYHBDVRCBDJJV-HAFWLYHUSA-N Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O HZYHBDVRCBDJJV-HAFWLYHUSA-N 0.000 description 1
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 206010022114 Injury Diseases 0.000 description 1
- 108020004391 Introns Proteins 0.000 description 1
- 241000207783 Ipomoea Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- 240000003613 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 101700023564 J2 Proteins 0.000 description 1
- 241000758789 Juglans Species 0.000 description 1
- 235000013757 Juglans Nutrition 0.000 description 1
- 240000007049 Juglans regia Species 0.000 description 1
- 235000009496 Juglans regia Nutrition 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N Kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N L-alanyl-L-glutamic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine zwitterion Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 240000004322 Lens culinaris Species 0.000 description 1
- 235000014647 Lens culinaris subsp culinaris Nutrition 0.000 description 1
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 241000276420 Lophius piscatorius Species 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase family Proteins 0.000 description 1
- CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N Lys-Pro Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 101700005282 MADS4 Proteins 0.000 description 1
- 102100006971 MAT1A Human genes 0.000 description 1
- 241000220225 Malus Species 0.000 description 1
- 240000001047 Malus domestica Species 0.000 description 1
- 235000004456 Manihot esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 241000219823 Medicago Species 0.000 description 1
- 235000010624 Medicago sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000234295 Musa Species 0.000 description 1
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 1
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 241000169176 Natronobacterium gregoryi Species 0.000 description 1
- 108009000261 Non-homologous end joining Proteins 0.000 description 1
- 108091005503 Nucleic proteins Chemical group 0.000 description 1
- 235000002725 Olea europaea Nutrition 0.000 description 1
- 101700011939 PEBP Proteins 0.000 description 1
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 1
- 235000008673 Persea americana Nutrition 0.000 description 1
- 235000010617 Phaseolus lunatus Nutrition 0.000 description 1
- BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N Phe-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- KLAONOISLHWJEE-UHFFFAOYSA-N Phenylalanyl-Glutamine Chemical compound NC(=O)CCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 KLAONOISLHWJEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 1
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 1
- 240000000129 Piper nigrum Species 0.000 description 1
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 1
- 210000002706 Plastids Anatomy 0.000 description 1
- 240000004092 Platanus occidentalis Species 0.000 description 1
- 235000006485 Platanus occidentalis Nutrition 0.000 description 1
- 241001231452 Platanus x hispanica Species 0.000 description 1
- 108010068086 Polyubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 241000218982 Populus nigra Species 0.000 description 1
- 241000218976 Populus trichocarpa Species 0.000 description 1
- HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N Pro-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JQOHKCDMINQZRV-WDSKDSINSA-N Pro-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 JQOHKCDMINQZRV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 235000011432 Prunus Nutrition 0.000 description 1
- 241000220299 Prunus Species 0.000 description 1
- 235000009827 Prunus armeniaca Nutrition 0.000 description 1
- 240000005204 Prunus armeniaca Species 0.000 description 1
- 240000002799 Prunus avium Species 0.000 description 1
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 1
- 241000205156 Pyrococcus furiosus Species 0.000 description 1
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 1
- 108010079005 RDV peptide Proteins 0.000 description 1
- 108060007001 RFT1 Proteins 0.000 description 1
- 108010012057 RNA Replicase Proteins 0.000 description 1
- 102100017753 RNF20 Human genes 0.000 description 1
- 102000009661 Repressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010034634 Repressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N Ser-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- YZMPDHTZJJCGEI-BQBZGAKWSA-N Ser-His Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 YZMPDHTZJJCGEI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- BXLYSRPHVMCOPS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO BXLYSRPHVMCOPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009367 Sesamum alatum Nutrition 0.000 description 1
- HBMJWWWQQXIZIP-UHFFFAOYSA-N Silicon carbide Chemical compound [Si+]#[C-] HBMJWWWQQXIZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N Simethicone Chemical compound C[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)C CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000592344 Spermatophyta Species 0.000 description 1
- 229960005322 Streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 102100018674 TBXT Human genes 0.000 description 1
- 101710035205 TMEM63C Proteins 0.000 description 1
- 101710019153 TNP1 Proteins 0.000 description 1
- 101700020779 TRPM8 Proteins 0.000 description 1
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 1
- 240000000280 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 241000589499 Thermus thermophilus Species 0.000 description 1
- CKHWEVXPLJBEOZ-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)C(C)O CKHWEVXPLJBEOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 235000001484 Trigonella foenum graecum Nutrition 0.000 description 1
- 240000005216 Trigonella foenum-graecum Species 0.000 description 1
- LCPVBXOHXMBLFW-JSGCOSHPSA-N Trp-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)=CNC2=C1 LCPVBXOHXMBLFW-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- ZQOOYCZQENFIMC-STQMWFEESA-N Tyr-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZQOOYCZQENFIMC-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Serine Chemical compound OCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102400000757 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- OBTCMSPFOITUIJ-FSPLSTOPSA-N Val-Asp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O OBTCMSPFOITUIJ-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- XXDVDTMEVBYRPK-XPUUQOCRSA-N Val-Gln Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O XXDVDTMEVBYRPK-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- YSGSDAIMSCVPHG-YUMQZZPRSA-N Val-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C YSGSDAIMSCVPHG-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 210000003462 Veins Anatomy 0.000 description 1
- 240000004922 Vigna radiata Species 0.000 description 1
- 235000010721 Vigna radiata var radiata Nutrition 0.000 description 1
- 235000011469 Vigna radiata var sublobata Nutrition 0.000 description 1
- 235000010726 Vigna sinensis Nutrition 0.000 description 1
- 240000000728 Vigna unguiculata Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 235000009392 Vitis Nutrition 0.000 description 1
- 241000219095 Vitis Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- UOZODPSAJZTQNH-LSWIJEOBSA-N Zygomycin A1 Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO UOZODPSAJZTQNH-LSWIJEOBSA-N 0.000 description 1
- 101700072873 aacC4 Proteins 0.000 description 1
- 101710029159 aadA Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000003281 allosteric Effects 0.000 description 1
- 235000020224 almond Nutrition 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 1
- 108010001271 arginyl-glutamyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010059459 arginyl-threonyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010036533 arginylvaline Proteins 0.000 description 1
- 101710040635 aroM-1 Proteins 0.000 description 1
- 101710040631 aroM-2 Proteins 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000001390 capsicum minimum Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000036978 cell physiology Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 235000019693 cherries Nutrition 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 235000018597 common camellia Nutrition 0.000 description 1
- 230000002860 competitive Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 108060001960 csm3 Proteins 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000004059 degradation Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental Effects 0.000 description 1
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 1
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structures Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable Effects 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000003448 gibberellin Substances 0.000 description 1
- IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N gibberellin A3 Chemical class C([C@@]1(O)C(=C)C[C@@]2(C1)[C@H]1C(O)=O)C[C@H]2[C@]2(C=C[C@@H]3O)[C@H]1[C@]3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N 0.000 description 1
- 108010085059 glutamyl-arginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 108010078326 glycyl-glycyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 229940097068 glyphosate Drugs 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 102000027634 intracellular receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091007905 intracellular receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 230000011890 leaf development Effects 0.000 description 1
- 230000002015 leaf growth Effects 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108091007165 microRNA precursor Proteins 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000001002 morphogenetic Effects 0.000 description 1
- 101710036448 neo Proteins 0.000 description 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 238000002888 pairwise sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 229960001914 paromomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial Effects 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000027665 photoperiodism Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 1
- 238000004987 plasma desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000000750 progressive Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 125000001116 prolino group Chemical group [H]OC(=O)C1([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 108010025826 prolyl-leucyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 210000001938 protoplasts Anatomy 0.000 description 1
- 235000014774 prunus Nutrition 0.000 description 1
- 235000015136 pumpkin Nutrition 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000022983 regulation of cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive Effects 0.000 description 1
- 230000002987 rna-interference Effects 0.000 description 1
- 238000003559 rna-seq method Methods 0.000 description 1
- 230000002786 root growth Effects 0.000 description 1
- 230000021217 seedling development Effects 0.000 description 1
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 229910010271 silicon carbide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000003335 steric effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised Effects 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 235000001019 trigonella foenum-graecum Nutrition 0.000 description 1
- 238000004450 types of analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 235000020234 walnut Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИCROSS-REFERENCE TO RELATED APPLICATIONS
[1] Данная заявка заявляет приоритет предварительной заявки США № 62/410355, поданной 19 октября 2016 г., и предварительной заявки США № 62/411408, поданной 21 октября 2016 г., которые обе в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки.[1] This application claims priority of U.S. Provisional Application No. 62/410355, filed October 19, 2016, and U.S. Provisional Application No. 62/411408, filed October 21, 2016, both of which are hereby incorporated by reference in their entirety.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИFIELD OF TECHNOLOGY
[2] Данное изобретение относится к композициям и способам для модуляции флорального развития и вегетативного роста посредством генетической модификации культурных растений для повышения урожайности.[2] This invention relates to compositions and methods for modulating floral development and vegetative growth through genetic modification of crop plants to increase yield.
ВКЛЮЧЕНИЕ ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙINCLUDING A SEQUENCE LIST
[3] Перечень последовательностей, содержащийся в файле под названием P34461WO00_SEQ.txt, имеющий размер 177799 байтов (определенный в MS-Windows®) и созданный 18 октября 2017 г., содержит 110 нуклеотидных последовательностей и был подан вместе с данным документом в электронной форме, и в полном объеме включен посредством ссылки.[3] The sequence listing contained in a file called P34461WO00_SEQ.txt, which is 177799 bytes in size (defined in MS-Windows®) and created on October 18, 2017, contains 110 nucleotide sequences and was filed with this document in electronic form, and is incorporated by reference in its entirety.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND OF THE INVENTION
[4] Переход от вегетативного роста к цветению является важным процессом во время развития растения, который необходим для получения урожая зерна в культурных растениях. Существует несколько основных путей регуляции времени цветения у наземных растений, которые реагируют на связанные с окружающей средой и развитием стимулы, включая фотопериодизм (т. е. длину дня), яровизацию (т. е. ответ на зимний холод) и растительные гормоны (например, гиббереллины или ГК), в дополнение к автономным (независимым от условий окружающей среды) путям. Молекулярные сети, регулирующие время цветения у растений, включают пути яровизации и фотопериодизма. В индуктивных фотопериодических условиях активность гена CONSTANS (CO) в первичных листьях повышает экспрессию гена FLOWERING LOCUS T (FT), который транслоцируется в меристему, запуская экспрессию нижележащих активирующих цветение генов LEAFY (LFY), APETALA1 (AP1) и SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CO 1 (SOC1). Действие других генов, таких как FLOWERING LOCUS C (FLC) и TERMINAL FLOWER 1 (TFL1), ингибирует экспрессию или активность этих генов.[4] The transition from vegetative growth to flowering is an important process during plant development, which is necessary for grain production in cultivated plants. There are several major pathways for regulating flowering time in terrestrial plants that respond to environmental and developmental stimuli, including photoperiodism ( i.e., day length), vernalization ( i.e., response to winter cold), and plant hormones ( i.e. , gibberellins or HA), in addition to autonomous (independent of environmental conditions) pathways. The molecular networks that regulate flowering time in plants include the vernalization and photoperiod pathways. Under inductive photoperiodic conditions, the activity of the CONSTANS (CO) gene in primary leaves increases the expression of the FLOWERING LOCUS T (FT) gene, which translocates to the meristem, triggering the expression of the downstream flowering-activating genes LEAFY (LFY), APETALA1 (AP1), and SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CO 1 (SOC1). The action of other genes, such as FLOWERING LOCUS C (FLC) and TERMINAL FLOWER 1 (TFL1), inhibits the expression or activity of these genes.
[5] За исключение нейтральных в отношении длины дня растений, большинство цветущих растений восприимчивы к суточным фотопериодическим циклам и могут быть классифицированы как растения короткого дня (КД) или длинного дня (ДД) на основании фотопериодических условий, необходимых для индукции цветения. Фотопериод относится к относительной длине или длительности светлых и темных периодов в 24-часовом цикле. В общем случае растения длинного дня демонстрируют тенденцию к цветению, когда длина дня превышает некий пороговый фотопериод (например, когда дни становятся длиннее весной), тогда как растения короткого дня демонстрируют тенденцию к цветению, когда длина дня опускается ниже порогового фотопериода (например, когда дни становятся короче после летнего солнцестояния). Другими словами, растения КД цветут, когда дни становятся короче, тогда как растения ДД цветут, когда дни становятся длиннее. Соя является примером растения короткого дня (КД), цветение которого индуцируется, когда растения помещают в условия более короткого светового дня.[5] With the exception of day-length-neutral plants, most flowering plants are susceptible to diurnal photoperiodic cycles and can be classified as short-day (SD) or long-day (DD) plants based on the photoperiod conditions required to induce flowering. Photoperiod refers to the relative length or duration of light and dark periods in a 24-hour cycle. In general, long-day plants show a tendency to flower when the day length exceeds some threshold photoperiod ( for example , when the days get longer in spring), while short-day plants show a tendency to flower when the day length falls below a threshold photoperiod ( for example , when the days become shorter after the summer solstice). In other words, KD plants bloom when the days get shorter, while DD plants bloom when the days get longer. Soybean is an example of a short day (SD) plant that is induced to flower when the plants are placed under shorter daylight conditions.
[6] Растениеводы всегда находятся в поиске новых способов влияния на урожайность растений, в особенности повышения урожая семян важных сельскохозяйственных культур. Таким образом, в данной области техники существует постоянная необходимость в улучшении композиций и способов для повышения урожайности различных культурных растений. В данном документе сделано предположение, что улучшение урожайности культур можно обеспечить, повышая агрономические характеристики, связанные с цветением и генеративным развитием.[6] Growers are always on the lookout for new ways to influence crop yields, especially to increase the yield of important crop seeds. Thus, there is a continuing need in the art for improved compositions and methods for increasing the yield of various crop plants. This document suggests that improved crop yields can be achieved by improving agronomic performance associated with flowering and generative development.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯBRIEF DESCRIPTION OF THE INVENTION
[7] В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложена рекомбинантная ДНК-конструкция, содержащая первую экспрессионную кассету и вторую экспрессионную кассету, причем первая экспрессионная кассета содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с первым промотором пригодным для экспрессии в растениях, а вторая экспрессионная кассета содержит последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая является по меньшей мере на 80% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам полинуклеотидной последовательности первой экспрессионной кассеты, и при этом последовательность ДНК пригодная для транскрипции функционально связана со вторым промотором пригодным для экспрессии в растениях.[7] In accordance with one aspect, the present invention provides a recombinant DNA construct comprising a first expression cassette and a second expression cassette, wherein the first expression cassette contains a polynucleotide sequence encoding a florigen FT protein operably linked to a first promoter suitable for expression in plants, and the second expression cassette contains a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule containing a targeting sequence that is at least 80% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of the polynucleotide sequence of the first expression cassette, and wherein the DNA sequence suitable for transcription is operably linked with a second promoter suitable for expression in plants.
[8] В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложена рекомбинантная ДНК-конструкция, содержащая полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с первым промотором пригодным для экспрессии в растениях, причем полинуклеотидная последовательность содержит последовательность, которая кодирует целевой сайт или сенсор в мРНК-транскрипте, кодируемом полинуклеотидной последовательностью, и при этом целевой сайт мРНК-транскрипта является по меньшей мере на 80% комплементарным эндогенной молекуле РНК, такой как эндогенная молекула микроРНК или миРНК.[8] In accordance with one aspect, the present invention provides a recombinant DNA construct comprising a polynucleotide sequence encoding a florigenic FT protein operably linked to a first promoter suitable for expression in plants, wherein the polynucleotide sequence contains a sequence that encodes a target site or sensor in mRNA transcript encoded by the polynucleotide sequence, and wherein the target site of the mRNA transcript is at least 80% complementary to an endogenous RNA molecule, such as an endogenous miRNA or miRNA molecule.
[9] В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложена рекомбинантная ДНК-конструкция, содержащая последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая является по меньшей мере на 80% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам полинуклеотидной последовательности, кодирующей флоригенный белок FT, причем последовательность ДНК пригодная для транскрипции функционально связана с промотором пригодным для экспрессии в растениях.[9] In accordance with one aspect, the present invention provides a recombinant DNA construct comprising a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule containing a targeting sequence that is at least 80% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of a polynucleotide sequence, encoding a florigenic FT protein, wherein a DNA sequence suitable for transcription is operably linked to a promoter suitable for expression in plants.
[10] В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложены трансгенные растения, клетки растений, ткани растений и фрагменты растений, содержащие вставку рекомбинантной ДНК-конструкции согласно данному изобретению в геноме таких растений, клеток растений, тканей растений и фрагментов растений.[10] According to one aspect, the present invention provides transgenic plants, plant cells, plant tissues, and plant fragments comprising an insertion of the recombinant DNA construct of the present invention in the genome of such plants, plant cells, plant tissues, and plant fragments.
[11] В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложены способы получения трансгенного растения, включающие (a) трансформацию по меньшей мере одной клетки эксплантата рекомбинантной ДНК-конструкцией согласно данному изобретению; и (b) регенерацию или выращивание трансгенного растения из трансформированного эксплантата. Эти способы могут дополнительно включать (c) отбор трансгенного растения, имеющего один или более из следующих признаков или фенотипов: более раннее цветение, более длительный генеративный период или период цветения, увеличенное число цветков на узел, увеличенное число цветочных кистей на узел, увеличенное число бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов или орехов на узел и увеличенное число семян на узел, по сравнению с контрольным растением, не содержащим рекомбинантную ДНК-конструкцию.[11] According to one aspect, the invention provides methods for producing a transgenic plant, comprising (a) transforming at least one explant cell with a recombinant DNA construct of the invention; and (b) regenerating or growing the transgenic plant from the transformed explant. These methods may further comprise (c) selecting a transgenic plant having one or more of the following traits or phenotypes: earlier flowering, longer generative or flowering period, increased number of flowers per node, increased number of flower clusters per node, increased number of pods , pods, pods, fruit, or nuts per node, and an increased number of seeds per node, compared to a control plant not containing the recombinant DNA construct.
[12] В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложены способы посадки трансгенного культурного растения, включающие посадку трансгенного культурного растения с повышенной плотностью в поле, при этом трансгенное культурное растение содержит вставку рекомбинантной ДНК-конструкции согласно данному изобретению.[12] According to one aspect, the invention provides methods for planting a transgenic crop plant, comprising planting the transgenic crop plant at increased density in a field, wherein the transgenic crop plant contains an insert of a recombinant DNA construct of the invention.
[13] В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложено трансгенное растение, содержащее полинуклеотидную последовательность, кодирующую полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с первым промотором пригодным для экспрессии в растениях, а вторая экспрессионная кассета содержит последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая является по меньшей мере на 80% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам полинуклеотидной последовательности первой экспрессионной кассеты, и при этом последовательность ДНК пригодная для транскрипции функционально связана со вторым промотором пригодным для экспрессии в растениях. В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложено трансгенное растение, содержащее последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая является по меньшей мере на 80% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам полинуклеотидной последовательности, кодирующей флоригенный белок FT, причем последовательность ДНК пригодная для транскрипции функционально связана с промотором пригодным для экспрессии в растениях.[13] According to one aspect, the present invention provides a transgenic plant comprising a polynucleotide sequence encoding a polynucleotide sequence encoding a florigenic FT protein operably linked to a first promoter suitable for expression in plants, and a second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription, an coding RNA molecule containing a targeting sequence that is at least 80% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of the polynucleotide sequence of the first expression cassette, and wherein a DNA sequence suitable for transcription is operably linked to a second promoter suitable for expression in plants. In accordance with one aspect, the present invention provides a transgenic plant comprising a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule containing a targeting sequence that is at least 80% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of a polynucleotide sequence encoding a florigenic FT protein, wherein a DNA sequence suitable for transcription is operably linked to a promoter suitable for expression in plants.
[14] В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложено трансгенное растение, которое может в среднем иметь больше семян, стручков, семенных коробочек, плодов, фруктов, орехов или клубней на узел, чем нетрансгенное контрольное растение, например, в среднем по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 125%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 175%, по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 250%, по меньшей мере на 300%, по меньшей мере на 350% или по меньшей мере на 400% больше семян, бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел, чем нетрансгенное контрольное растение. В соответствии с одним аспектом трансгенное растение может в среднем иметь на по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9 или по меньшей мере на 10 больше семян, бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел, чем нетрансгенное контрольное растение. В соответствии с одним аспектом трансгенное растение может в среднем иметь на 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5, 2-4, 2-3, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 3-4, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4-6 или 4-5 больше семян, бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел, чем нетрансгенное контрольное растение. В соответствии с одним аспектом трансгенное растение может в среднем иметь по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9 или по меньшей мере на 10 больше семян, бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел по сравнению с контрольным растением дикого типа или нетрансгенным контрольным растением. В соответствии с одним аспектом трансгенное растение может зацветать по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9, по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 11, по меньшей мере на 12, по меньшей мере на 13, по меньшей мере на 14, по меньшей мере на 15, по меньшей мере на 20, по меньшей мере на 25, по меньшей мере на 30, по меньшей мере на 35, по меньшей мере на 40 или по меньшей мере на 45 дней раньше, чем нетрансгенное контрольное растение.[14] In one aspect, the present invention provides a transgenic plant that can, on average, have more seeds, pods, pods, fruits, fruits, nuts, or tubers per node than a non-transgenic control plant, e.g., an average of at least 1%, at least 2%, at least 5%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 90%, at least 100%, at least 125%, at least 150%, at least 175%, at least 200% , at least 250%, at least 300%, at least 350%, or at least 400% more seeds, beans, pods, pods, fruits, nuts, or tubers per node than net genetic control plant. In accordance with one aspect, the transgenic plant may have an average of at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least at least 8, at least 9, or at least 10 more seeds, pods, pods, pods, fruits, nuts, or tubers per node than the non-transgenic control plant. According to one aspect, a transgenic plant may have an average of 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5, 2-4, 2-3, 3-10, 3- 9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 3-4, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4-6 or 4-5 more seeds, beans, pods, pods, fruits, nuts or tubers per node than the non-transgenic control plant. In accordance with one aspect, a transgenic plant may have an average of at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, or at least 10 more seeds, beans, pods, pods, fruits, nuts, or tubers per node compared to a wild-type or non-transgenic control plant. In accordance with one aspect, the transgenic plant can flower for at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7 , at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, or at least 45 days earlier than the non-transgenic control plant.
[15] В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложено трансгенное растение, содержащее полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с промотором вегетативной стадии, при этом экспрессия флоригенного белка FT подавляется в поздней вегетативной и/или генеративной ткани.[15] According to one aspect, the present invention provides a transgenic plant comprising a polynucleotide sequence encoding a florigenic FT protein operably linked to a vegetative stage promoter, wherein expression of the florigenic FT protein is downregulated in late vegetative and/or generative tissue.
[16] В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложена рекомбинантная ДНК-конструкция, содержащая полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT и функционально связанную с промотором вегетативной стадии, и по меньшей мере одну последовательность, кодирующую РНК-нацеливающую последовательность, которая является комплементарной по меньшей мере части полинуклеотидной последовательности.[16] In accordance with one aspect, the present invention provides a recombinant DNA construct comprising a polynucleotide sequence encoding a florigen FT protein and operably linked to a vegetative stage promoter and at least one sequence encoding an RNA targeting sequence that is complementary to at least a portion of the polynucleotide sequence.
[17] В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложено трансгенное растение, содержащее рекомбинантную полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с промотором вегетативной стадии, при этом экспрессия полинуклеотидной последовательности пространственно и временно ограничена малой молекулой РНК.[17] According to one aspect, the present invention provides a transgenic plant comprising a recombinant polynucleotide sequence encoding a florigenic FT protein operably linked to a vegetative stage promoter, wherein expression of the polynucleotide sequence is spatially and temporally limited by a small RNA molecule.
[18] В соответствии с одним аспектом в данном изобретении предложена рекомбинантная ДНК-конструкция, содержащая экспрессионную кассету, причем экспрессионная кассета содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с промотором, при этом промотор содержит полинуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична полинуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 или 54, или ее функциональной части.[18] In accordance with one aspect, the present invention provides a recombinant DNA construct comprising an expression cassette, wherein the expression cassette contains a polynucleotide sequence encoding a florigenic FT protein operably linked to a promoter, wherein the promoter contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93 %, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to the polynucleotide sequence, selected from the group consisting of SEQ ID NO: 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 or 54, or a functional part thereof.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВBRIEF DESCRIPTION OF GRAPHICS
[19] Фиг. 1A иллюстрирует матричную таблицу, в которой приведено сравнение нуклеотидных последовательностей для каждой комбинации различных генов FT, включая процент их идентичности.[19] FIG. 1A illustrates a matrix table that compares the nucleotide sequences for each combination of different FT genes, including their percent identity.
[20] Фиг. 1B иллюстрирует матричную таблицу, в которой приведено сравнение белковых последовательностей для каждой комбинации различных белков FT, включая процент их идентичности.[20] FIG. 1B illustrates a matrix table that compares the protein sequences for each combination of different FT proteins, including their percent identity.
[21] Фиг. 1C иллюстрирует множественное выравнивание последовательностей CLUSTAL 2.0.9 для различных белков FT, идентифицированных как Gm.FT2a с SEQ ID NO: 2, Gm.FT2b с SEQ ID NO: 6, Le.FT с SEQ ID NO: 12, Pt.FT с SEQ ID NO: 20, Os.HD3a с SEQ ID NO: 18, At.FT с SEQ ID NO: 14, At. TSF с SEQ ID NO: 16, Nt.FT с SEQ ID NO: 10, Gm.FT5a с SEQ ID NO: 4 и Zm.ZCN8 с SEQ ID NO: 8.[21] Fig. 1C illustrates multiple alignment of CLUSTAL 2.0.9 sequences for various FT proteins identified as Gm.FT2a with SEQ ID NO: 2, Gm.FT2b with SEQ ID NO: 6, Le.FT with SEQ ID NO: 12, Pt.FT with SEQ ID NO: 20, Os.HD3a with SEQ ID NO: 18, At.FT with SEQ ID NO: 14, At. TSF with SEQ ID NO: 16, Nt.FT with SEQ ID NO: 10, Gm.FT5a with SEQ ID NO: 4 and Zm.ZCN8 with SEQ ID NO: 8.
[22] Фиг. 2 иллюстрирует общие уровни транскрипта FT в в тканях листьев и верхушек сои, собранных на 1, 3 и 5 дни после выращивания в условиях короткого или длинного светового дня.[22] FIG. 2 illustrates total FT transcript levels in leaf and top tissues of soybeans harvested on
[23] Фиг. 3A-3O и Фиг. 4A-4O иллюстрируют профиль экспрессии промотора pAt.Erecta посредством отслеживания активности GUS на ранних стадиях развития сои. Фиг. 3A-3O представляют собой набор черно-белых изображений окрашенных тканей, а изображения на Фиг. 4A-4O соответствуют Фиг. 3A-3O, но отобраны по синему окрашиванию GUS. Фиг. 3A-3C и 4A-4C иллюстрируют экспрессию в 3-дневных ростках; Фиг. 3D-3I и 4D-4I иллюстрируют экспрессию в 10-дневных вегетативных побегах (выращиваемых в условиях 14 часов светлого/ 10 часов темного фотопериода); Фиг. 3J-3L и 4J-4L иллюстрируют экспрессию в 16-дневных генеративных побегах; а Фиг. 3M-3O и 4M-4O иллюстрируют экспрессию в 30-дневных зрелых и незрелых листьях генеративного побега. Планки соответствуют 100 мкм.[23] FIG. 3A-3O and FIG. 4A-4O illustrate the expression profile of the pAt. Erecta promoter by tracking GUS activity in the early stages of soybean development. Fig. 3A-3O are a set of black and white images of dyed fabrics, and the images in FIG. 4A-4O correspond to FIGS. 3A-3O, but selected for blue GUS staining. Fig. 3A-3C and 4A-4C illustrate expression in 3 day old shoots; Fig. 3D-3I and 4D-4I illustrate expression in 10 day old vegetative shoots (grown under 14 hour light/10 hour dark photoperiod conditions); Fig. 3J-3L and 4J-4L illustrate expression in 16 day old generative shoots; and Fig. 3M-3O and 4M-4O illustrate expression in 30 day old mature and immature leaves of the generative shoot. Planks correspond to 100 microns.
[24] Фиг. 5A-5F и Фиг. 6A-6F иллюстрируют профиль экспрессии GUS с промотором pAT.Erecta во время R1 и цветочной стадий развития (35-40 дней после прорастания). Фиг. 5A-5F представляют собой набор черно-белых изображений окрашенных тканей, а изображения на Фиг. 6A-6F соответствуют Фиг. 5A-5F, но отобраны по синему окрашиванию GUS. Фиг. 5A и 6A иллюстрируют экспрессию в стеблях или стебельках соцветий (стрелки), а Фиг. 5B и 6B иллюстрируют экспрессию в цветоножках (стрелки). Также проиллюстрирована экспрессия в сосудистых и паренхиматозных клетках (Фиг. 5C и 6C), в тычиночных нитях (Фиг. 5D и 6D; стрелка) и в неопыленных семяпочках (Фиг. 5E, 5F, 6E и 6F; стрелки). Планки соответствуют 1 мм.[24] FIG. 5A-5F and FIG. 6A-6F illustrate the expression profile of GUS with the pAT. Erecta promoter during R1 and flower stages of development (35-40 days post germination). Fig. 5A-5F are a set of black and white images of dyed fabrics, and the images in FIG. 6A-6F correspond to FIGS. 5A-5F but selected for blue GUS staining. Fig. 5A and 6A illustrate expression in inflorescence stems or stalks (arrows) and FIG. 5B and 6B illustrate expression in pedicels (arrows). Also illustrated is expression in vascular and parenchymal cells (FIGS. 5C and 6C), in filaments (FIGS. 5D and 6D; arrow) and in unpollinated ovules (FIGS. 5E, 5F, 6E and 6F; arrows). Planks correspond to 1 mm.
[25] Фиг. 7 иллюстрирует изображения срезов апикальной меристемы побегов (АМП) из растений дикого типа и GmFT2a-экспрессирующих трансгенных растений через 7 дней после посадки, полученные методом сканирующей электронной микроскопии (СЭМ).[25] FIG. 7 illustrates images of shoot apical meristem (SAM) sections from wild-type plants and GmFT2a-expressing
[26] Фиг. 8 проиллюстрированы полученные методом сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) микрофотографии аксиллярного примордия соцветия из растения дикого типа (собранного через 27 дней после посадки) в сравнении с аксиллярным примордием соцветия из трансгенного растения, экспрессирующего Gm.FT2a (собранного через 9 дней после посадки).[26] FIG. 8 illustrates scanning electron microscopy (SEM) micrographs of an axillary inflorescence primordia from a wild-type plant (harvested 27 days after planting) compared to an axillary inflorescence primordia from a Gm.FT2a-expressing transgenic plant (harvested 9 days after planting).
[27] Фиг. 9A-9C иллюстрируют эффекты экспрессии Gm.FT2a под управлением промотора At.Erecta в сое. Фиг. 9A иллюстрирует нулевой сегрегант, демонстрирующий нормальные пазушные почки, тогда как Фиг. 9B и Фиг. 9C (соответствующие растениям, гомозиготным или гемизиготным в отношении трансгена Gm.FT2a, соответственно) раннее цветение и увеличенное количество бобов на узел по сравнению с нулевым сегрегантом.[27] FIG. 9A-9C illustrate the effects of Gm.FT2a expression under the control of the At. Erecta promoter in soy. Fig. 9A illustrates a null segregant showing normal axillary buds, while FIG. 9B and FIG. 9C (corresponding to plants homozygous or hemizygous for the Gm.FT2a transgene, respectively) early flowering and increased number of pods per node compared to the null segregant.
[28] Фиг. 10 иллюстрирует изображение целого растения нулевого сегреганта дикого типа рядом с растениями, гемизиготными и гомозиготными в отношении трансгена Gm.FT2a, как указано.[28] FIG. 10 illustrates a picture of a whole plant of a wild-type null segregant next to plants that are hemizygous and homozygous for the Gm.FT2a transgene as indicated.
[29] Фиг. 11 иллюстрирует изображение основного стебля растений, которые являются гомозиготными или гемизиготными в отношении трансгена pAt.Erecta-Gm.FT2a по сравнению с нулевым сегрегантом, как указано.[29] FIG. 11 illustrates the image of the main stem of plants that are homozygous or hemizygous for the pAt.Erecta-Gm.FT2a transgene compared to the null segregant as indicated.
[30] Фиг. 12 иллюстрирует изображения целых растений, трансформированных pAt.Erecta::Gm.FT2a или pAt.Erecta::Gm.FT2a/pAP1::miRNA-FT2a::T-Apx.[30] FIG. 12 illustrates images of whole plants transformed with pAt.Erecta::Gm.FT2a or pAt.Erecta::Gm.FT2a/pAP1::miRNA-FT2a::T-Apx .
[31] Фиг. 13 иллюстрирует изображения целых растений, трансформированных только pAt.Erecta::Gm.FT2a или pAt.Erecta::Gm.FT2a+целевой сайт miR172.[31] FIG. 13 illustrates images of whole plants transformed with pAt.Erecta::Gm.FT2a or pAt.Erecta::Gm.FT2a + miR172 target site alone.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
[32] Цель улучшения урожайности является обычной для всех культурных растений в сельском хозяйстве. Данное изобретение включает способы и композиции для улучшения урожайности цветущих (покрытосеменных) или семенных растений путем модификации характеристик, связанных с временем цветения, генеративным развитием и вегетативным ростом, для улучшения одной или более характеристик или одного или более фенотипов, связанных с цветением и/или урожайностью, таких как число цветков, семян и/или бобов на растение и/или число цветков, семян и/или бобов на узел (и/или на главный стебель) растения. Не ограничиваясь какой-либо теорией, считается, что композиции и способы согласно данному изобретению можно применять для улучшения урожайности растения за счет увеличения числа флоральных меристем, повышения синхронизации появления латеральной меристемы и/или увеличения периода времени для развития боба или семени в растении (например, длительности генеративного периода).[32] The goal of improving yields is common to all crops in agriculture. This invention includes methods and compositions for improving the yield of flowering (angiosperms) or seed plants by modifying characteristics associated with flowering time, generative development and vegetative growth to improve one or more characteristics or one or more phenotypes associated with flowering and/or yield. such as the number of flowers, seeds and/or pods per plant and/or the number of flowers, seeds and/or pods per node (and/or main stem) of the plant. Without wishing to be bound by theory, it is believed that the compositions and methods of this invention can be used to improve plant yield by increasing the number of floral meristems, increasing the timing of lateral meristem emergence, and/or increasing the time period for pod or seed development in the plant (e.g., duration of the generative period).
[33] Ранее было обнаружено, что выращивание растений короткого дня, таких как соя, в условиях длинного дня (например, около 14-16 часов света на сутки), а затем кратковременное помещение этих растений в условия роста с коротким световым днем (например, около 9-11 часов света на сутки в течение около 3-21 дней) перед возвращением растений в условия роста с длинным световым днем (неиндуктивные), позволяет получить растения, имеющие большее число бобов/семян на растение (и бобов/семян на узел и/или на ветку). Смотрите, например, патент США № 8935880 и патентную заявку США № 2014/0259905, полное содержание которых включено в данный документ посредством ссылки. Искусственные индуктивные условия «короткого светового дня» во время вегетативных стадий развития позволили выявить не только то, что время цветения можно менять так, чтобы менять при этом один или более связанных с урожайностью признаков или фенотипов (например, приводя к увеличению числа бобов или семян на узел растения), но также то, что эффект применения этих условий был дозозависимым, когда число цветков, семян и/или бобов на растение (и/или на узел растения) зависело от (i) длительности применения условий короткого дня (т. е. дозы сигнала индукции цветения) и (ii) длины фотопериодов после условий короткого дня в условиях длинного дня (т. е. дозы или длины индуцирующего вегетативный рост сигнала после сигнала индукции короткого дня). Растения сои, помещенные в условия меньшей или менее длительной ранней индукции короткого дня (рИКД) (перед возвращением в условия роста с длинным световым днем), имели больше цветков, бобов и семян на растение с более нормальными высотой и степенью зрелости растения, тогда как растения сои, помещенные в условия большей или более длительной рИКД, давали меньшие, раньше гибнущие растения с меньшим числом бобов и семян на растение (хотя, возможно, с большим числом бобов и/или семян на узел).[33] It has previously been found that growing short-day plants such as soybeans under long-day conditions (e.g., about 14-16 hours of light per day) and then short-term exposure of these plants to short-day growth conditions (e.g., about 9-11 hours of light per day for about 3-21 days) before returning the plants to long daylight growing conditions (non-inductive), produces plants that have more pods/seeds per plant (and pods/seeds per node and /or on a branch). See, for example, US Pat. No. 8,935,880 and US Patent Application No. 2014/0259905, the entire contents of which are incorporated herein by reference. Artificial inductive "short daylight" conditions during the vegetative stages of development have revealed not only that flowering times can be altered to change one or more yield-related traits or phenotypes (for example, leading to an increase in the number of pods or seeds by plant node), but also that the effect of applying these conditions was dose-dependent when the number of flowers, seeds, and/or pods per plant (and/or plant node) depended on (i) the length of time the short day conditions were applied (i.e., flowering induction signal dose) and (ii) length of photoperiods after short day conditions under long day conditions (i.e., dose or length of vegetative growth inducing signal after short day induction signal). Soybean plants placed under shorter or shorter early short day induction (ESDI) conditions (before returning to long daylight growing conditions) had more flowers, pods, and seeds per plant with more normal plant height and maturity, while plants soybeans placed under longer or longer RIDC conditions produced smaller, earlier dying plants with fewer pods and seeds per plant (though possibly more pods and/or seeds per node).
[34] Фенотип индукции короткого дня в сое использовали для определения генов, имеющих измененную экспрессию в этих растениях, посредством профилирования транскрипции. Эти исследования позволили определить несколько генов с измененной экспрессией в этих обработанных растениях сои, включая эндогенный ген FT, Gm.FT2a, имеющий повышенную экспрессию в ответ на условия индукции короткого дня. Поэтому предположили, что можно использовать трансгенную экспрессию FT вместо индукции короткого дня для повышения урожая семян, изменения генеративных признаков или фенотипов в растениях, или и того и другого. Эктопическую экспрессию трансгена Gm.FT2a или другой последовательности FT, или их функционального фрагмента, гомолога или ортолога в цветущем или семяносном растении можно использовать для повышения урожая семян и/или изменения одного или более генеративных фенотипов или признаков, что может означать увеличение числа бобов/семян на растение (и/или числа бобов/семян на узел или главный стебель растения). Как дополнительно объясняется ниже и в зависимости от конкретного вида растения, эти связанные с урожайностью или генеративные фенотипы или признаки также можно применять в отношении других ботанических структур, аналогичных бобам бобовых растений, таких как семенные коробочки, стручки, фрукты, орехи, клубни и т. д. Таким образом, растение с эктопической экспрессией последовательности FT может иметь увеличенное число семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов, клубней и т. д. на узел (-лы), главный стебель и/или ветку (-и) растения, и/или увеличенное число семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов, клубней и т. д. на растение.[34] The short day induction phenotype in soybean was used to identify genes having altered expression in these plants by transcription profiling. These studies identified several genes with altered expression in these treated soybean plants, including the endogenous FT gene, Gm.FT2a , which is overexpressed in response to short day induction conditions. Therefore, it has been suggested that one could use transgenic expression of FT instead of short day induction to increase seed yield, change generative traits or phenotypes in plants, or both. Ectopic expression of the Gm.FT2a transgene or other FT sequence, or a functional fragment, homologue or orthologue thereof, in a flowering or seed-bearing plant can be used to increase seed yield and/or alter one or more generative phenotypes or traits, which may mean an increase in the number of pods/seeds per plant (and/or number of pods/seeds per node or main stem of the plant). As further explained below and depending on the particular plant species, these yield-related or generative phenotypes or traits can also be applied to other botanical structures similar to legumes, such as seed pods, pods, fruits, nuts, tubers, etc. e. Thus, a plant with ectopic expression of the FT sequence may have an increased number of pods, pods, fruits, nuts, tubers, etc. per node(s), main stem and/or branch(s) of the plant, and /or an increased number of seed pods, pods, fruits, nuts, tubers, etc. per plant.
[35] Гены Flowering Locus T (FT) играют ключевую роль в большем росте растений, а их функция состоит в интеграции путей цветения. Было показано, что в разных видах белки FT функционируют как мобильный сигнал или флориген, передаваемый от листьев к верхушкам побегов, где он инициирует генеративное развитие. Смотрите, например, Jaeger, K.E. et al., ʺInterlocking feedback loops govern the dynamic behavior of the floral transition in Arabidopsis,ʺ The Plant Cell, 25:820-833 (2013); Corbesier, L et al., ʺFT protein movement contributes to long distance signaling in floral induction of Arabidopsis,ʺ Science 316: 1030-1033 (2007); Jaeger, KE et al., ʺFT protein acts as a long range signal in Arabidopsis,ʺ Curr Biol 17: 1050-1054 (2007); и Amasino, R.M. et al., ʺThe Timing of Flowering,ʺ Plant Physiology, 154(2):516-520 (2010), полное содержание которых включено в данный документ посредством ссылки. В Arabidopsis белки FT связываются с белками 14-3-3 и Flowering Locus D (FD) в меристеме с образованием комплекса цветения, инициирующего активацию ключевых генов идентичности цветковой меристемы APETATAL1 (AP1) и SOC1 в верхушке побега. Смотрите, например, Taoka, K. et al., ʺ14-3-3 protein act as intracellular receptors for rice Hd3a florigen.ʺ Nature 476:332-335 (2011). Ген TERMINAL FLOWER 1 (TFL1) является ключевым репрессором мишеней FT, который поддерживает центр апикальной меристемы побега (АМП) в вегетативном состоянии. TFL1 действует путем репрессии генов LEAFY (LFY) и AP1. Следовательно, относительные концентрации FT и TFL1 в целевых тканях действуют конкурентным образом, контролируя время генеративного перехода меристем из вегетативного состояния, что может приводить к терминации дальнейшего вегетативного роста. Смотрите, например, Abe, M et al., Science 309:1052-1055 (2005); и McGarry, RC et al., Plant Science 188/189: 71-81 (2012).[35] Flowering Locus T (FT) genes play a key role in greater plant growth, and their function is to integrate flowering pathways. In different species, FT proteins have been shown to function as a mobile signal or florigen transmitted from leaves to shoot tips where it initiates generative development. See, for example, Jaeger, KE et al., ʺInterlocking feedback loops govern the dynamic behavior of the floral transition in Arabidopsis ,ʺ The Plant Cell , 25 :820-833 (2013); Corbesier, L et al., ʺFT protein movement contributes to long distance signaling in floral induction of Arabidopsis ,ʺ Science 316 : 1030-1033 (2007); Jaeger, KE et al., "FT protein acts as a long range signal in Arabidopsis ", " Curr Biol 17 : 1050-1054 (2007); and Amasino, RM et al., "The Timing of Flowering," Plant Physiology , 154 (2):516-520 (2010), the entire contents of which are incorporated herein by reference. In Arabidopsis , FT proteins bind to 14-3-3 and Flowering Locus D (FD) proteins in the meristem to form a flowering complex that initiates the activation of key flower meristem identity genes APETATAL1 (AP1) and SOC1 at the shoot apex. See, for example, Taoka, K. et al., ʺ14-3-3 protein act as intracellular receptors for rice Hd3a florigen.ʺ Nature 476 :332-335 (2011). The TERMINAL FLOWER 1 (TFL1) gene is a key FT target repressor that maintains the shoot apical meristem (SAM) center in a vegetative state. TFL1 acts by repressing the LEAFY (LFY) and AP1 genes. Therefore, the relative concentrations of FT and TFL1 in target tissues act in a competitive manner to control the timing of the generative transition of meristems from the vegetative state, which can lead to termination of further vegetative growth. See, for example, Abe, M et al., Science 309 :1052-1055 (2005); and McGarry, R. C. et al., Plant Science 188/189 : 71-81 (2012).
[36] Гены FT были идентифицированы во многих разных видах, и сообщалось, что эктопическая экспрессия FT индуцирует раннее цветение. Смотрите, например, Kong, F. et al., ʺTwo Coordinately Regulated Homologs of Flowering Locus T Are Involved in the Control of Photoperiodic Flowering in Soybean,ʺ Plant Physiology 154: 1220-1231 (2010); Turck, F. et al., ʺRegulation and identity of florigen: Flowering Locus T moves center stage,ʺ Ann Rev Plant Biol 59: 573-594 (2008); Blackman, BK et al., ʺThe role of recently derived FT paralogs in sunflower domestication,ʺ Curr Biol 20: 629-635 (2010); Lifschitz, E. et al., ʺThe tomato FT orthologs triggers systemic signals that regulate growth and flowering and substitute for diverse environmental stimuli,ʺ PNAS 103: 6398-6403 (2006); Trankner, C. et al., ʺOver-expression of an FT-homologous gene of apple induces early flowering in annual and perennial plants,ʺ Planta 232: 1309-1324 (2010); и Xiang, L. et al., ʺFunctional analysis of Flowering Locus T orthologs from spring orchid (Cymbidium goeringii Rchb. f.) that regulates the vegetative to reproductive transition,ʺ Plant Cell & Biochem 58: 98-105 (2012), полное содержание которых включено в данный документ посредством ссылки. Однако в предыдущих исследования с экспрессией трансгенов FT использовались конститутивные или тканеспецифические промоторы, которые давали либо очень выраженные фенотипы, неклеточные автономные (системные) фенотипы, либо автономные специфические в отношении листьев фенотипы с более ранним цветением растений или всходом по сравнению с контролем и терминацией на более ранних стадиях развития. Учитывая эти факты, эктопическую экспрессию в целом не рассматривали как жизнеспособный подход к повышению урожайности в растениях за счет индукции появления цветков или изменения времени цветения.[36] FT genes have been identified in many different species, and ectopic FT expression has been reported to induce early flowering. See, for example, Kong, F. et al., "Two Coordinately Regulated Homologs of Flowering Locus T Are Involved in the Control of Photoperiodic Flowering in Soybean," Plant Physiology 154 : 1220-1231 (2010); Turck, F. et al., ʺRegulation and identity of florigen: Flowering Locus T moves center stage,ʺ Ann Rev Plant Biol 59 : 573-594 (2008); Blackman, BK et al., ʺThe role of recently derived FT paralogs in sunflower domestication,ʺ Curr Biol 20 : 629-635 (2010); Lifschitz, E. et al., ʺThe tomato FT orthologs triggers systemic signals that regulate growth and flowering and substitute for diverse environmental stimuli,ʺ PNAS 103 : 6398-6403 (2006); Trankner, C. et al., "Over-expression of an FT-homologous gene of apple induces early flowering in annual and perennial plants," Planta 232 : 1309-1324 (2010); and Xiang, L. et al., ʺFunctional analysis of Flowering Locus T orthologs from spring orchid (Cymbidium goeringii Rchb. f.) that regulates the vegetative to reproductive transition,ʺ Plant Cell & Biochem 58 : 98-105 (2012), complete the contents of which are incorporated into this document by reference. However, previous studies with the expression of FT transgenes have used constitutive or tissue-specific promoters that have produced either very pronounced phenotypes, non-cellular autonomous (systemic) phenotypes, or autonomous leaf-specific phenotypes with earlier flowering or emergence compared to controls and termination more early stages of development. Given these facts, ectopic expression has generally not been seen as a viable approach to increase plant yield by inducing flower production or altering flowering time.
[37] Не ограничиваясь какой-либо теорией, считается, что ранний флоригенный сигнал (например, короткий день для сои и других растений КД) может инициировать ранний переход от вегетативного к генеративному состоянию у растений, но также может приводить к терминации части первичной меристемы. При этом возвращение этих растений в неиндуктивные условия роста (например, длинный день для растений КД) после исходного КД-сигнала может сохранить оставшиеся резервы меристемы растения, что сделает возможным продолжение вегетативного роста растения. Таким образом, во время продленной генеративной фазы может развиваться большее число продуктивных цветков, бобов и/или семян на узел (и/или на растение). При индукции раннего цветения также можно создать большее перекрытие между генеративным развитием и вегетативным ростом растения, что может дополнительно стимулировать большую длительность генеративного периода и/или периода цветения или совпадать с ними. В контексте данного документа выражение «длительность генеративного периода» относится ко времени от инициации цветения до конца развития семени/боба и/или наполнения, тогда как «длительность цветения» или «длительность периода цветения» относится ко времени от появления первого открытого цветка до увядания последнего открытого цветка. Посредством возвращения к неиндуктивным условиям роста после индукции раннего цветения более обширные ресурсы будут доступны и направлены на увеличение числа раньше синхронизированных и продуктивных (т. е. не пустых) цветков, бобов и/или семян на растение, в отличие от нормального цветкового развития в растениях короткого дня, в которых позже может происходить уменьшение растительных ресурсов вследствие терминации меристематического роста и созревания растения. [37] Without wishing to be bound by theory, it is believed that an early florigenic signal (e.g., a short day for soybean and other KD plants) may initiate an early transition from vegetative to generative state in plants, but may also lead to termination of part of the primary meristem. At the same time, the return of these plants to non-inductive growth conditions (for example, a long day for KD plants) after the initial KD signal can preserve the remaining reserves of the plant meristem, which will make it possible to continue the vegetative growth of the plant. Thus, more productive flowers, pods and/or seeds per node (and/or plant) can develop during the extended generative phase. By inducing early flowering it is also possible to create more overlap between generative development and vegetative growth of the plant, which can further encourage or coincide with longer generative and/or flowering periods. In the context of this document, the expression "duration of the generative period" refers to the time from the initiation of flowering to the end of seed/bean development and/or filling, while the "duration of flowering" or "duration of the flowering period" refers to the time from the appearance of the first open flower to the withering of the last open flower. By returning to non-inductive growth conditions after early flowering induction, greater resources will be available and devoted to increasing the number of previously synchronized and productive (i.e., non-empty) flowers, pods, and/or seeds per plant, as opposed to normal flower development in plants. a short day, in which a decrease in plant resources can occur later due to the termination of meristematic growth and maturation of the plant.
[38] Однако, как указано выше, сигнал индукции цветения (например, ранние условия короткого дня) также может приводить к ранней терминации растения помимо раннего цветения. Следовательно, было сделано предположение, что могут понадобиться оптимальные доза и время сигнала индукции цветения для максимизации урожайности за счет соблюдения баланса между (i) ранним переходом от вегетативной к генеративной стадии и/или синхронизацией цветения с ранним сигналом индукции цветения (приводящей к потенциальному приросту урожайности в каждом узле растения) и (ii) ранней терминацией роста (приводящей к меньшим растениям с меньшим числом междоузлий, меньшим ветвлением и меньшим числом узлов и/или цветков на растение). Меньших доз сигнала индукции цветения может быть достаточно, чтобы индуцировать цветение, при этом снижая или минимизируя эффект ранней терминации растения, с получением более крупных растений с увеличенным числом цветков, бобов и/или семян на узел (и/или на растение). С другой стороны, более высокие дозы сигнала индукции цветения могут приводить к ранней терминации растения (помимо раннего цветения) с получением меньших растений с относительно небольшим числом цветков, бобов и/или семян на растение вследствие меньшего размера растения с меньшим числом междоузлий и/или веток на растение, несмотря на возможное наличие большего числа цветков, бобов и/или семян на узел (и/или на растение) по сравнению с растениями дикого типа или контрольными растениями в нормальных условиях роста. Как указано выше, эти эффекты эктопической экспрессии FT также могут включать увеличенное число семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов, клубней и т. д. на узел (и/или на растение) в зависимости от конкретного вида растения.[38] However, as noted above, a flowering induction signal (eg, early short day conditions) can also lead to early plant termination in addition to early flowering. Therefore, it has been suggested that optimal dose and timing of the flowering induction signal may be needed to maximize yield by striking a balance between (i) early transition from vegetative to generative stage and/or timing of flowering with an early flowering induction signal (resulting in potential yield gains). at each plant node) and (ii) early termination of growth (resulting in smaller plants with fewer internodes, less branching, and fewer nodes and/or flowers per plant). Smaller doses of the flowering induction signal may be sufficient to induce flowering while reducing or minimizing the effect of early plant termination, resulting in larger plants with an increased number of flowers, pods and/or seeds per node (and/or plant). On the other hand, higher doses of the flowering induction signal can lead to early termination of the plant (in addition to early flowering) with smaller plants with relatively few flowers, pods and/or seeds per plant due to smaller plant size with fewer internodes and/or branches. per plant, despite the possible presence of more flowers, pods and/or seeds per node (and/or plant) compared to wild-type plants or control plants under normal growth conditions. As stated above, these effects of ectopic FT expression may also include an increased number of pods, pods, fruits, nuts, tubers, etc. per node (and/or plant) depending on the particular plant species.
[39] Индукционный фенотип «короткого светового дня», упомянутый выше для сои, использовали для скрининга в отношении генов, имеющих измененную экспрессию в этих растениях, посредством профилирования транскрипции, что привело к определению эндогенного гена FT, Gm.FT2a, имеющего повышенную экспрессию в ответ на условия индукции с коротким днем. Соответственно, было сделано предположение, что экспрессию флоригенного трансгена FT, такого как Gm.FT2a, можно использовать в качестве сигнала индукции цветения, чтобы вызвать раннее цветение и увеличить число цветков, бобов и/или семян на узел (и/или на растение) по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением, не содержащим трансген FT. В соответствии с вариантами реализации данного изобретения соответствующий контроль времени, локации и дозы экспрессии флоригенного FT во время вегетативных стадий развития можно использовать, чтобы индуцировать цветение и получить растения, имеющие большее число цветков, бобов и/или семян на узел по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением, не содержащим трансген FT. Вместо световых условий рИКД FT можно экспрессировать на низком уровне в вегетативной меристеме, чтобы обеспечить сигнал индукции раннего цветения. Соответственно, промотор из гена Erecta (pErecta или pEr), характеризующийся более низкой меристематической экспрессией во время вегетативных стадий развития, был выбран для начального исследования с трансгеном Gm.FT2a. Однако учитывая, что предыдущие исследования показали, что конститутивная экспрессия FT дает растения, имеющие выраженный фенотип с ранней терминацией, и дополнительно, что сайт действия для периферически вырабатываемого и транслоцированного из листьев FT находится в меристеме, существовала возможность, что прямая меристематическая экспрессия FT может давать даже более сильные и выраженные фенотипы (и/или нежизнеспособные растения) по сравнению с конститутивной экспрессией FT.[39] The "short daylight" induction phenotype mentioned above for soybean was used to screen for genes having altered expression in these plants by transcription profiling, which resulted in the identification of an endogenous FT gene, Gm.FT2a , having increased expression in response to short-day induction conditions. Accordingly, it has been suggested that expression of a florigenic FT transgene such as Gm.FT2a can be used as a flowering induction signal to induce early flowering and increase the number of flowers, pods and/or seeds per node (and/or plant) by compared to a wild-type plant or a control plant that does not contain the FT transgene. According to embodiments of the present invention, appropriate control of the timing, location, and dose of florigenic FT expression during the vegetative stages of development can be used to induce flowering and produce plants having a higher number of flowers, pods, and/or seeds per node compared to a wild-type plant. or a control plant that does not contain the FT transgene. Instead of light conditions, FT rICD can be expressed at a low level in the vegetative meristem to provide an early flowering induction signal. Accordingly, a promoter from the Erecta gene ( pErecta or pEr ), characterized by lower meristematic expression during vegetative stages of development, was selected for initial study with the Gm.FT2a transgene. However, given that previous studies have shown that constitutive expression of FT results in plants having a pronounced early termination phenotype, and additionally that the site of action for peripherally produced and translocated from leaves is in the meristem, it was possible that direct meristematic expression of FT could result in even stronger and more pronounced phenotypes (and/or nonviable plants) compared to constitutive FT expression.
[40] Эффект сверхэкспрессии Gm.FT2a с промотором pErecta незамедлительно проявлялся в поколении R0 трансформированных растений сои, которые характеризовались ранним цветением, сниженной урожайностью семян (например, только около 8 семян/растение) и очень ранней терминацией, что позволяет предположить, что баланс между индукцией цветения и репрессией цветения/вегетативным ростом был сильно смещен в сторону цветения и ранней гибели. Однако с этих растений было собрано достаточно семян R1, чтобы можно было проводить дополнительные эксперименты. Было сделано предположение, что выращивание семян сои поколения R1 в условиях фотопериода с длинным днем (репрессивный в отношении цветения) в теплице может замедлить развитие фенотипов, связанных с ранними цветением и гибелью, наблюдаемых в растениях R0. С учетом теоретического ответа на дозу было сделано дополнительное предположение, что сегрегацию гомозиготных, гемизиготных и нулевых в отношении FT2a растений сои можно исследовать вместе в теплице, чтобы оценить ответ на дозу в результате сверхэкспрессии FT. В этих экспериментах (дополнительно описанных ниже) наблюдали, что сегрегированные растения имели разные фенотипы: нулевые растения имели сходство с растениями дикого типа в терминах архитектуры растения и числа бобов на узел (и на растение), тогда как гомозиготные растения рано гибли и имели сильно выраженный карликовый фенотип (хотя, возможно, с увеличенным числом бобов на узел). При этом гемизиготные растения были крупнее и больше походили на нулевые растения или растения дикого типа, но демонстрировали фенотип с усиленным цветением с увеличенным числом бобов на узел (и/или на растение). Эти открытия показывают, что экспрессию трансгена FT на вегетативной стадии и/или в меристеме можно использовать для получения высокоурожайного растения (аналогично применению условий рИКД) и что эффект экспрессии FT может быть дозозависимым, так как растения сои, гемизиготные в отношении трансгена FT2a, под управлением слабого меристематического промотора демонстрировали высокоурожайный фенотип с увеличенным числом бобов на узел без более выраженных фенотипов с ранней гибелью и малой высотой растения, наблюдаемых у гомозиготных в отношении FT2a растений при выращивании в условиях длинного дня (вегетативных).[40] The effect of Gm.FT2a overexpression with the pErecta promoter was immediately apparent in the R 0 generation of transformed soybean plants, which were characterized by early flowering, reduced seed yield (e.g., only about 8 seeds/plant), and very early termination, suggesting that the balance between flowering induction and flowering repression/vegetative growth was strongly biased towards flowering and early death. However, enough R1 seeds were collected from these plants to allow for additional experiments. It has been hypothesized that growing R 1 generation soybean seeds under long-day photoperiod (bloom repressive) conditions in a greenhouse may retard the development of the early flowering and death phenotypes seen in R 0 plants. Given the theoretical dose response, it was further suggested that the segregation of homozygous, hemizygous, and FT2a null soybean plants could be examined together in the greenhouse to evaluate the dose response resulting from FT overexpression. In these experiments (described further below), segregated plants were observed to have different phenotypes: null plants were similar to wild-type plants in terms of plant architecture and number of pods per node (and per plant), while homozygous plants died early and had a strong dwarf phenotype (although possibly with an increased number of pods per node). However, the hemizygous plants were larger and more similar to null plants or wild type plants, but exhibited an enhanced flowering phenotype with an increased number of pods per node (and/or per plant). These findings indicate that expression of the FT transgene in the vegetative stage and/or in the meristem can be used to produce a high yielding plant (similar to the use of rICD conditions) and that the effect of FT expression may be dose-dependent since soybean plants hemizygous for the FT2a transgene are controlled a weak meristematic promoter showed a high yielding phenotype with an increased number of pods per node without the more pronounced early death and low plant height phenotypes seen in FT2a homozygous plants when grown under long day (vegetative) conditions.
[41] Соответственно экспрессию трансгена FT на вегетативной стадии при соответствующем уровне дозы можно использовать, чтобы индуцировать раннее цветение и получать растения, имеющие увеличенное число цветков, бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов, клубней и/или семян на узел по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением, не содержащим трансген FT. Соответствующий уровень дозы FT можно обеспечить с помощью промотора, выбранного для управления экспрессией трансгена FT. Более слабый или низкий уровень экспрессии трансгена FT в вегетативной меристеме можно использовать, чтобы обеспечить сигнал индукции раннего цветения, при этом сохраняя или продлевая длительность генеративного и/или цветкового развития и не приводя к слишком ранней терминации развития растения. Снова, промотор из гена Erecta (pErecta или pEr), характеризующийся более низкой меристематической экспрессией во время вегетативных стадий развития, был выбран для начального исследования с трансгеном Gm.FT2a в растениях сои. Как дополнительно описано ниже, другие промоторы со сходными профилями и уровнями экспрессии в вегетативной меристеме имели сходные эффекты в растениях сои, такие как раннее цветение и/или увеличенное число бобов на узел. Отдельно или в дополнение к выбору промотора для воздействия на уровень экспрессии трансгена можно использовать разные трансгены FT из сои или других видов, которые могут снижать «дозу» раннего сигнала FT, доставляемую в вегетативную меристему, в зависимости от уровня активности трансгенного белка FT в клетке растения. Действительно, исследовали несколько трансгенов FT из сои и других видов растений, и было показано, что они имеют разные эффекты на цветение и другие генеративные признаки при трансгенной экспрессии в растениях сои.[41] Accordingly, expression of the FT transgene at the vegetative stage at an appropriate dose level can be used to induce early flowering and produce plants having an increased number of flowers, pods, pods, pods, fruits, nuts, tubers, and/or seeds per node compared to with a wild-type plant or a control plant that does not contain the FT transgene. An appropriate dose level of FT can be provided by the promoter chosen to drive the expression of the FT transgene. Weaker or lower levels of FT transgene expression in the vegetative meristem can be used to signal the induction of early flowering while maintaining or prolonging the duration of generative and/or flowering development and not leading to too early termination of plant development. Again, a promoter from the Erecta gene ( pErecta or pEr ), characterized by lower meristematic expression during the vegetative stages of development, was selected for initial study with the Gm.FT2a transgene in soybeans. As further described below, other promoters with similar profiles and expression levels in the vegetative meristem had similar effects in soybean plants, such as early flowering and/or increased number of pods per node. Separately or in addition to promoter selection, different FT transgenes from soybean or other species can be used to influence the expression level of the transgene, which can reduce the “dose” of the early FT signal delivered to the vegetative meristem, depending on the level of activity of the FT transgenic protein in the plant cell. . Indeed, several FT transgenes from soybean and other plant species have been investigated and shown to have different effects on flowering and other generative traits when transgene expressed in soybean plants.
[42] Не ограничиваясь теорией, было сделано дополнительное предположение, что увеличенное число бобов на узел в растениях с трансгеном FT может быть результатом, по меньшей мере частично, увеличения числа меристем соцветий и флоральных меристем, индуцированных из вегетативных апикальных и аксиллярных меристем побегов в каждом из испытавших воздействие узлов, что может привести к появлению большего числа цветков и/или выпущенных цветочных гроздьев в этих узлах. Такое увеличение числа флоральных меристем, индуцированное в каждом узле растения в ответ на сверхэкспрессию FT, может происходить за счет одного или более механизмов или путей, которые могут не зависеть от времени цветения и/или длительности генеративной стадии. Однако меристематические изменения могут поначалу быть микроскопическими и, следовательно, при наблюдении не вызывать «раннее цветение» на такой стадии при простом визуальном осмотре, хотя генеративные изменения в меристеме могут уже начать происходить. Ранняя вегетативная экспрессия FT может приводить к более раннему по сравнению с обычным формированию и развитию генеративных меристем в одном или более узлах трансгенного растения. Затем эти генеративные меристемы могут обеспечивать или обуславливать образование большего числа цветочных кистей с последующим появлением на них цветков в каждом узле. Не ограничиваясь теорией, было сделано дополнительное предположение, что более поздняя экспрессия FT во время генеративных стадий может подавлять развитие цветков в каждом узле. Таким образом, более поздно развивающиеся цветки в рамках соответствующей кисти могут гибнуть и, таким образом, больше растительных ресурсов может быть направлено на более рано развивающиеся цветки и генеративные структуры в рамках кисти для более эффективного образования полноразмерных бобов. Сигнал индукции раннего цветения также может приводить к тому, что большая доля существующего меристематического потенциала будет становиться генеративной и проходить стадию развития цветков. Соответственно, может происходить повышенная синхронизация цветочного развития с образованием большего числа зрелых бобов на узел растения.[42] Without being limited by theory, it has been further suggested that the increased number of pods per node in plants with the FT transgene may be the result, at least in part, of an increase in the number of inflorescence meristems and floral meristems induced from vegetative shoot apical and axillary meristems in each from affected nodes, which may result in more flowers and/or released flower clusters at those nodes. Such an increase in the number of floral meristems induced at each plant node in response to FT overexpression may occur through one or more mechanisms or pathways that may be independent of flowering time and/or duration of the generative stage. However, meristematic changes may be microscopic at first and therefore, when observed, do not produce "early flowering" at such a stage by simple visual inspection, although generative changes in the meristem may already be beginning to take place. Early vegetative expression of FT may result in earlier than normal formation and development of generative meristems at one or more nodes of the transgenic plant. These generative meristems can then provide or cause the formation of more flower clusters, followed by the appearance of flowers on them at each node. Without being limited by theory, an additional suggestion has been made that later expression of FT during the generative stages may suppress the development of flowers at each node. Thus, the later developing flowers within the respective raceme may die and thus more plant resources can be directed to the earlier developing flowers and generative structures within the raceme to produce full-sized pods more efficiently. The early flowering induction signal can also cause a large proportion of the existing meristematic potential to become generative and go through the flower stage. Accordingly, increased timing of flower development can occur, producing more mature pods per plant node.
[43] Однако, как указано выше, сигнал индукции цветения также приводит к ранней терминации развития растения помимо раннего цветения. Хотя растения сои, экспрессирующие различные трансгены FT с меристематическим промотором вегетативной стадии, таким как промотор pErecta, имеют увеличенное число бобов на узел на главном стебле растения, многие из этих растений все еще демонстрируют сниженную высоту растения и/или сниженное ветвление, что приводит к меньшему числу узлов на растение, главный стебель и/или ветки. Таким образом, хотя уровень экспрессии FT в растении можно регулировать выбором промотора конкретной вегетативной стадии для подавления выходящих за рамки развития типов и повышения урожайности посредством замедления ранней терминации, трансгенные экспрессирующие FT растения сои могут все еще иметь сниженное число цветущих узлов на растение, что может снижать общую урожайность растения, несмотря на повышенное число узлов на существующий узел на главном стебле.[43] However, as noted above, the flowering induction signal also leads to early termination of plant development in addition to early flowering. Although soybean plants expressing various FT transgenes with a meristematic vegetative stage promoter such as the pErecta promoter have an increased number of pods per node on the main stem of the plant, many of these plants still show reduced plant height and/or reduced branching, resulting in less the number of nodes per plant, main stem and/or branches. Thus, although the level of FT expression in a plant can be controlled by selecting a particular vegetative stage promoter to suppress out-of-development types and increase yield by slowing down early termination, transgenic FT-expressing soybean plants can still have a reduced number of flowering nodes per plant, which can reduce overall plant yield despite an increased number of nodes per existing node on the main stem.
[44] Следовательно, в данном документе сделано предположение, что несмотря на наблюдаемое увеличение числа бобов на узел в растениях сои с экспрессией FT на вегетативной стадии, может быть необходимо дополнительно ослабить, регулировать или ограничить уровень экспрессии трансгена FT для смягчения этих фенотипов ранней терминации и, таким образом, достижения оптимальной урожайности. Если можно сохранить увеличенное число бобов (или других ботанических структур, таких как семенные коробочки, стручки, фрукты, орехи, клубни и т. д.) на узел растения, увеличивая при этом число бобов на растение, например, посредством избегания или замедления терминации, тогда можно будет дополнительно оптимизировать или улучшить общую урожайность растения. [44] Therefore, this document proposes that despite the observed increase in the number of beans per node in soybean plants expressing FT at the vegetative stage, it may be necessary to further attenuate, regulate or limit the expression level of the FT transgene to mitigate these early termination phenotypes and thus achieving optimal yields. If an increased number of pods (or other botanical structures such as pods, pods, fruits, nuts, tubers, etc.) can be maintained per plant node while increasing the number of pods per plant, for example by avoiding or slowing down termination, then it will be possible to further optimize or improve the overall yield of the plant.
[45] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения в данном документе сделано предположение, что урожайность растения можно увеличить или повысить путем ослабления или модификации уровня и/или времени экспрессии трансгена FT посредством супрессии. Как дополнительно описано ниже, количество или пространственно-временной профиль трансгенного FT можно снизить и/или скорректировать посредством природных и/или искусственно созданных молекул РНК, которые нацелены на трансгенный FT для супрессии. Было сделано предположение, что хотя экспрессия трансгенного FT в аксиллярной и апикальной меристеме может инициировать их перенос во флоральную меристему, продолжение экспрессии FT, например, во время генеративных стадий развития, может привести к ранней терминации меристемы и остановке роста и ветвления всего растения. Хотя можно выбрать и использовать промотор вегетативной стадии для экспрессии трансгена FT для ослабления фенотипа ранней терминации и поддержания или продления вегетативного роста и длительности генеративной стадии растения, дополнительная супрессия трансгена FT может дополнительно смягчить фенотип ранней терминации и улучшить или усилить рост, развитие и длительность генеративной стадии растения. Действительно, авторы данного изобретения наблюдали, что супрессия трансгена FT в сое может приводить к более нормальным высоте и ветвлению растения с большим числом узлов на растение по сравнению только с экспрессией трансгенного FT (т. е. без супрессии). Растения сои с комбинированной экспрессией/супрессией трансгена FT будут сохранять большее число бобов на узел с дополнительным смягчением фенотипа ранней терминации, наблюдаемого только при экспрессии трансгенного FT.[45] According to embodiments of the present invention, it is proposed herein that plant yield can be increased or increased by attenuating or modifying the level and/or timing of expression of the FT transgene through suppression. As further described below, the amount or spatio-temporal profile of the transgenic FT can be reduced and/or adjusted by naturally occurring and/or engineered RNA molecules that target the transgenic FT for suppression. It has been suggested that although transgenic FT expression in the axillary and apical meristem may initiate their transfer to the floral meristem, continued FT expression, for example, during generative stages of development, may lead to early termination of the meristem and arrest of growth and branching of the whole plant. Although it is possible to select and use a vegetative stage promoter to express the FT transgene to attenuate the early termination phenotype and maintain or prolong vegetative growth and generative stage length of the plant, additional suppression of the FT transgene can further mitigate the early termination phenotype and improve or enhance growth, development, and generative stage duration. plants. Indeed, the present inventors have observed that suppression of the FT transgene in soybean can result in more normal plant height and branching with higher node numbers per plant compared to expression of the FT transgene alone (i.e., no suppression). Soybean plants with combined expression/suppression of the FT transgene will retain a higher number of beans per node with additional mitigation of the early termination phenotype seen only when the FT transgene is expressed.
[46] Супрессию трансгена FT можно обеспечивать разными путями. В соответствии с первым подходом трансген FT первой экспрессионной кассеты можно подавлять посредством второй экспрессионной кассеты, кодирующей молекулу РНК, нацеленную на трансген FT для супрессии. Молекула РНК может кодироваться последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, функционально связанной с промотором пригодным для экспрессии в растениях, при этом последовательность ДНК пригодная для транскрипции содержит нацеливающую последовательность, которая соответствует по меньшей мере части трансгена FT и/или комплементарной с ней последовательности. В соответствии со вторым подходом трансген FT может кодировать целевой сайт для эндогенной молекулы РНК, при этом целевой сайт является комплементарным с эндогенной молекулой РНК так, что эндогенная молекула РНК нацелена на трансген FT для супрессии. Эндогенная молекула РНК может естественным образом существовать в клетке растения, в которой экспрессируется трансген FT. В соответствии с этим подходом для супрессии не нужна вторая экспрессионная кассета. Также оба эти подхода для супрессии можно использовать вместе. Например, трансген FT может находиться в первой экспрессионной кассете и использоваться в комбинации со второй экспрессионной кассетой, содержащей последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая соответствует по меньшей мере части трансгена FT (и/или комплементарную с ней последовательность) (т. е. первый целевой сайт), так что молекула РНК нацелена на трансген FT для супрессии, и при этом трансген FT дополнительно содержит второй целевой сайт для эндогенной молекулы РНК, которая также нацелена на трансген FT для супрессии. Первый и второй целевые сайты могут быть одинаковыми или разными по последовательности и могут находиться в одной или в разных локациях в транскрипте FT. В контексте данного документа первая полинуклеотидная последовательность или молекула «соответствует» второй полинуклеотидной последовательности или молекуле, если первая последовательность или молекула является сходной, идентичной и/или комплементарной со второй последовательностью или молекулой, например, более чем на 30%, более чем на 40%, более чем на 50%, более чем на 60%, более чем на 70%, более чем на 80%, более чем на 90%, более чем на 95% или 100% идентичной и/или комплементарной.[46] Suppression of the FT transgene can be achieved in a variety of ways. According to a first approach, the FT transgene of the first expression cassette can be suppressed by a second expression cassette encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression. The RNA molecule may be encoded by a transcriptionable DNA sequence operably linked to a promoter suitable for expression in plants, wherein the transcriptionable DNA sequence contains a targeting sequence that corresponds to at least a portion of the FT transgene and/or its complementary sequence. In a second approach, the FT transgene may encode a target site for an endogenous RNA molecule, wherein the target site is complementary to the endogenous RNA molecule such that the endogenous RNA molecule targets the FT transgene for suppression. An endogenous RNA molecule may naturally exist in a plant cell in which the FT transgene is expressed. According to this approach, suppression does not require a second expression cassette. Also, both of these approaches for suppression can be used together. For example, the FT transgene may be present in a first expression cassette and used in combination with a second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule containing a targeting sequence that corresponds to at least a portion of the FT transgene (and/or its complementary sequence). ) (i.e., the first target site) so that the RNA molecule targets the FT transgene for suppression, and the FT transgene additionally contains a second target site for the endogenous RNA molecule that also targets the FT transgene for suppression. The first and second target sites may be the same or different in sequence and may be at the same or different locations in the FT transcript. As used herein, a first polynucleotide sequence or molecule "corresponds" to a second polynucleotide sequence or molecule if the first sequence or molecule is similar, identical and/or complementary to a second sequence or molecule, e.g., more than 30%, more than 40% more than 50%, more than 60%, more than 70%, more than 80%, more than 90%, more than 95% or 100% identical and/or complementary.
[47] В соответствии с одним аспектом данного изобретения предложены рекомбинантные молекула ДНК, вектор или конструкция, содержащие по меньшей мере две экспрессионные кассеты, включая первую экспрессионную кассету и вторую экспрессионную кассету, при этом первая экспрессионная кассета содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок FT (т. е. трансген FT), функционально связанную с первым промотором пригодным для экспрессии в растениях, а вторая экспрессионная кассета содержит последовательность ДНК пригодную для транскрипции, функционально связанную со вторым промотором пригодным для экспрессии в растениях, причем последовательность ДНК пригодная для транскрипции содержит последовательность, которая соответствует по меньшей мере части трансгена FT. Транскрибируемая последовательность ДНК может кодировать молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая является комплементарной по меньшей мере части пре-мРНК или зрелой мРНК, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, кодирующей белок FT (т. е. трансген FT) первой экспрессионной кассеты, так что функция молекулы РНК состоит в подавлении трансгена FT. «Нацеливающая последовательность» молекулы РНК, кодируемой последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, может содержать всю или часть молекулы РНК и кодируется последовательностью последовательности ДНК пригодной для транскрипции, которая соответствует по меньшей мере части трансгена FT и/или комплементарной с ней последовательности. Таким образом, последовательность ДНК пригодная для транскрипции может кодировать молекулу РНК, которая содержит нацеливающую последовательность, которая является комплементарной по меньшей мере части мРНК-транскрипта трансгена FT. В зависимости от конкретного трансгена FT и/или нацеливающей последовательности молекулы РНК, кодируемой последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, также может происходить супрессия эндогенного гена FT второй экспрессионной кассетой помимо трансгена FT или же может происходить супрессия эндогенного гена FT второй экспрессионной кассетой вместо трансгена FT. Многие генные и белковые последовательности FT могут быть идентичными или сходными с одним или более нативными или эндогенными генами FT в трансформируемом растении и, таким образом, служить в качестве базиса для конструирования молекул РНК и нацеливающих последовательностей для супрессии этих нативных и эндогенных генов. Когда последовательность ДНК пригодная для транскрипции кодирует молекулу РНК, которая нацелена и подавляет трансген FT, эндогенный ген FT или их оба, общий уровень экспрессии и активности геном и трансгенов FT можно регулировать, ограничивать или снижать в одной или более тканях трансгенного растения. В одном аспекте молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нацеливающую последовательность, способна гибридизироваться с комплементарной последовательностью нуклеиновой кислоты (например, целевым сайтом) с образованием двухцепочечной нуклеиновой кислоты (например, дцРНК). В одном аспекте гибридизация нацеливающей последовательности первой молекулы нуклеиновой кислоты (например, супрессорной молекулы РНК) с последовательностью целевого сайта второй молекулы нуклеиновой кислоты (например, мРНК-транскрипта трансгена FT) может приводить к супрессии второй молекулы нуклеиновой кислоты. Например, если полинуклеотидная последовательность трансгена FT является нативной для растения, в котором она экспрессируется (или близкородственной), то молекула РНК может быть дополнительно нацелена на соответствующий нативный ген FT для супрессии, в особенности если молекула РНК нацелена на кодирующую последовательность (экзон) трансгена FT. В таких случаях комбинированная супрессия нативных и трансгенных генов FT посредством молекулы РНК, кодируемой последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, может дополнительно снижать дозу белка FT в соответствующих тканях растения. Однако даже при трансгенной экспрессии нативного гена FT не кодирующие белок последовательности, такие как 5' НТО, 3' НТО, лидерные и/или интронные последовательности можно варьировать, не влияя на последовательность кодируемого белка FT. В контексте данного документа «кодирующая полинуклеотидная последовательность» или «полинуклеотидная последовательность» трансгена могут содержать не только кодирующие белок (или экзонные) последовательности, но также другие пригодные для транскрипции последовательности, связанные с кодирующей последовательностью трансгена, которые могут образовывать часть кодируемой последовательность пре-мРНК или зрелой мРНК, такие как 5' НТО, 3' НТО, лидерные и/или интронные последовательности. Таким образом, в контексте данного документа выражения «кодирующая полинуклеотидная последовательность» трансгена FT и «полинуклеотидная последовательность», кодирующая белок FT, можно употреблять взаимозаменяемо.[47] In accordance with one aspect of the present invention, a recombinant DNA molecule, vector, or construct is provided, comprising at least two expression cassettes, including a first expression cassette and a second expression cassette, wherein the first expression cassette contains a polynucleotide sequence encoding an FT protein (t e. FT transgene) operably linked to a first promoter suitable for expression in plants, and the second expression cassette contains a DNA sequence suitable for transcription operably linked to a second promoter suitable for expression in plants, and the DNA sequence suitable for transcription contains a sequence that corresponds to at least part of the FT transgene. The transcribed DNA sequence may encode an RNA molecule containing a targeting sequence that is complementary to at least a portion of the pre-mRNA or mature mRNA encoded by the polynucleotide sequence encoding the FT protein (i.e., the FT transgene) of the first expression cassette, such that the function of the RNA molecule consists in the suppression of the FT transgene. The "targeting sequence" of an RNA molecule encoded by a transcriptionable DNA sequence may comprise all or part of the RNA molecule and is encoded by a transcriptionable DNA sequence that corresponds to at least a portion of the FT transgene and/or its complementary sequence. Thus, a DNA sequence suitable for transcription can encode an RNA molecule that contains a targeting sequence that is complementary to at least a portion of the mRNA transcript of the FT transgene. Depending on the specific FT transgene and/or the targeting sequence of the RNA molecule encoded by a DNA sequence suitable for transcription, the endogenous FT gene may also be suppressed by a second expression cassette in addition to the FT transgene, or the endogenous FT gene may be suppressed by a second expression cassette instead of the FT transgene. Many FT gene and protein sequences may be identical or similar to one or more native or endogenous FT genes in the transformed plant and thus serve as a basis for constructing RNA molecules and targeting sequences to suppress these native and endogenous genes. When a DNA sequence suitable for transcription encodes an RNA molecule that targets and represses an FT transgene, an endogenous FT gene, or both, the overall level of expression and activity of the genome and FT transgenes can be controlled, restricted, or reduced in one or more tissues of the transgenic plant. In one aspect, a nucleic acid molecule containing a targeting sequence is capable of hybridizing to a complementary nucleic acid sequence ( eg, target site) to form a double-stranded nucleic acid ( eg , dsRNA). In one aspect, hybridization of a targeting sequence of a first nucleic acid molecule (eg, a suppressor RNA molecule) with a target site sequence of a second nucleic acid molecule (eg, an mRNA transcript of an FT transgene) may result in suppression of the second nucleic acid molecule. For example, if the polynucleotide sequence of the FT transgene is native to the plant in which it is expressed (or closely related), then the RNA molecule can further target the corresponding native FT gene for suppression, especially if the RNA molecule targets the coding sequence (exon) of the FT transgene. . In such cases, the combined suppression of native and transgenic FT genes by an RNA molecule encoded by a DNA sequence suitable for transcription can further reduce the dose of the FT protein in the respective plant tissues. However, even when the native FT gene is expressed transgenicly, non-protein-coding sequences such as 5' UTR, 3' UTR, leader and/or intron sequences can be varied without affecting the sequence of the encoded FT protein. In the context of this document, the "coding polynucleotide sequence" or "polynucleotide sequence" of a transgene may contain not only protein (or exon) coding sequences, but also other transcriptionable sequences associated with the coding sequence of the transgene, which may form part of the encoded pre-mRNA sequence. or mature mRNA, such as 5' UTR, 3' UTR, leader and/or intron sequences. Thus, in the context of this document, the expressions "coding polynucleotide sequence" of the FT transgene and "polynucleotide sequence" encoding the FT protein can be used interchangeably.
[48] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения первая экспрессионная кассета и вторая экспрессионная кассета могут находиться в одной рекомбинантной молекуле ДНК, векторе или конструкции или же первая экспрессионная кассета и вторая экспрессионная кассета могут находиться в отдельных рекомбинантных молекулах ДНК, векторах или конструкциях. Таким образом, в соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения могут быть предоставлены две рекомбинантные молекулы ДНК, два вектора или две конструкции, содержащие первую рекомбинантную молекулу ДНК, вектор или конструкцию и вторую рекомбинантную молекулу ДНК, вектор или конструкцию, при этом первые рекомбинантные молекула ДНК, вектор или конструкция содержат первую экспрессионную кассету, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок FT (т. е. трансген FT), функционально связанную с первым промотором пригодным для экспрессии в растениях, а вторые рекомбинантные молекула ДНК, вектор или конструкция содержат вторую экспрессионную кассету, содержащую последовательность ДНК пригодную для транскрипции, функционально связанную со вторым промотором пригодным для экспрессии в растениях, причем последовательность ДНК пригодная для транскрипции соответствует по меньшей мере части трансгена FT и/или комплементарной с ней последовательности. Транскрибируемая последовательность ДНК может кодировать молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая является комплементарной по меньшей мере части пре-мРНК или зрелой мРНК, кодируемой трансгеном FT первой экспрессионной кассеты, так что функция молекулы РНК состоит в подавлении трансгена FT.[48] According to embodiments of the present invention, the first expression cassette and the second expression cassette may be in the same recombinant DNA molecule, vector, or construct, or the first expression cassette and the second expression cassette may be in separate recombinant DNA molecules, vectors, or constructs. Thus, in accordance with some embodiments of the invention, two recombinant DNA molecules, two vectors, or two constructs may be provided comprising a first recombinant DNA molecule, vector or construct and a second recombinant DNA molecule, vector or construct, wherein the first recombinant DNA molecule, the vector or construct contains a first expression cassette containing a polynucleotide sequence encoding an FT protein (i.e., an FT transgene) operably linked to a first promoter suitable for expression in plants, and the second recombinant DNA molecule, vector or construct contains a second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription operably linked to a second promoter suitable for expression in plants, wherein the DNA sequence suitable for transcription corresponds to at least a portion of the FT transgene and/or its complementary sequence. The transcribed DNA sequence may encode an RNA molecule containing a targeting sequence that is complementary to at least a portion of the pre-mRNA or mature mRNA encoded by the FT transgene of the first expression cassette, such that the function of the RNA molecule is to suppress the FT transgene.
[49] Предложенные в данном документе рекомбинантные молекулу ДНК, вектор или конструкцию, содержащие трансген FT, можно использовать при трансформации растения для создания трансгенного растения, содержащего трансген FT. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансген FT может находиться в первой экспрессионной кассете и использоваться в комбинации со второй экспрессионной кассетой, содержащей последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая соответствует по меньшей мере части трансгена FT и/или комплементарной с ней последовательности, при этом первую и вторую экспрессионные кассеты трансформируют в растение в виде одного или отдельных событий трансформации. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансген FT, трансформированный в растение, может содержать целевой сайт для эндогенной молекулы РНК, которая может быть нацелена на трансген FT и инициировать его супрессию.[49] Proposed herein, a recombinant DNA molecule, vector or construct containing the FT transgene can be used in plant transformation to create a transgenic plant containing the FT transgene. In accordance with some embodiments of the invention, the FT transgene may be present in a first expression cassette and used in combination with a second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule containing a targeting sequence that corresponds to at least a portion of the FT transgene and/or a sequence complementary to it, wherein the first and second expression cassettes are transformed into a plant as one or separate transformation events. In accordance with some embodiments of the invention, the FT transgene transformed into a plant may contain a target site for an endogenous RNA molecule that can target the FT transgene and initiate its suppression.
[50] Кодирующая полинуклеотидная последовательность трансгена FT может включать Gm.FT2a (SEQ ID NO: 1) или любую полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок Gm.FT2a (SEQ ID NO: 2). Кодирующая полинуклеотидная последовательность трансгена FT также может соответствовать другим генам FT в сое или других растениях. Например, другие кодирующие полинуклеотидные последовательности из сои, которые можно использовать в качестве трансгена FT в соответствии с представленными вариантами реализации изобретения, включают: Gm.FT5a (SEQ ID NO: 3) или полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок Gm.FT5a (SEQ ID NO: 4), или Gm.FT2b (SEQ ID NO: 5) или полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок Gm.FT2b (SEQ ID NO: 6). Кроме того, примеры кодирующих полинуклеотидных последовательностей из других видов растений, которые можно использовать, включают: Zm.ZCN8 (SEQ ID NO: 7) из кукурузы или полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок Zm.ZCN8 (SEQ ID NO: 8), Nt.FT-подобный или Nt.FT4 (SEQ ID NO: 9) из табака или полинуклеотидную последовательность, кодирующую Nt.FT-подобный белок или белок Nt.FT4 (SEQ ID NO: 10), Le.FT или SFT (SEQ ID NO: 11) из томата или полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок Le.FT или SFT (SEQ ID NO: 12), At.FT (SEQ ID NO: 13) из Arabidopsis или полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок At.FT (SEQ ID NO: 14), At.TSF (SEQ ID NO: 15) из Arabidopsis или полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок At.TSF (SEQ ID NO: 16), Os.HD3a (SEQ ID NO: 17) из риса или полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок Os.HD3a (SEQ ID NO: 18), или Pt.FT (SEQ ID NO: 19) из Populus trichocarpa или полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок Pt.FT (SEQ ID NO: 20). Дополнительные примеры кодирующих полинуклеотидных последовательностей для трансгенов и белков FT, которые также можно использовать, включают следующие: Gm.FT5b (SEQ ID NO: 21) из сои или любую полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок Gm.FT5b (SEQ ID NO: 22); Gh.FT1 (SEQ ID NO: 23) из хлопка или любую полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок Gh.FT1 (SEQ ID NO: 24); Bn.FTA2a (SEQ ID NO: 25) из канолы или любую полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок Bn.FTA2a (SEQ ID NO: 26); Ta.FT3B1 (SEQ ID NO: 27) из пшеницы или любую полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок Ta.FT3B1 (SEQ ID NO: 28); или Ps.FTa1 (SEQ ID NO: 29) из гороха или любую полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок Ps.FTa1 (SEQ ID NO: 30). Кодирующие полинуклеотидные последовательности для трансгенов FT, кодирующие дополнительные белки FT из других видов, имеющие известные аминокислотные последовательности, также можно использовать в соответствии с вариантами реализации данного изобретения, которые могут, например, включать следующие: Md.FT1 и Md.FT2 из яблони (Malus domestica); Hv.FT2 и Hv.FT3 из ячменя (Hordeum vulgare); Cs.FTL3 из хризантемы; Ls.FT из латука (Lactuca sativa); Pn.FT1 и Pn.FT2 из пирамидального тополя (Populus nigra); Pa.FT из кленолистного платана (Platanus acerifolia); Dl.FT1 из лонгана (Dimocarpus longan); Ps.FTa1, Ps.FTa2, Ps.FTb1, Ps.FTb2 и Ps.FTc из гороха (Pisum sativum); Ac.FT из ананаса (Ananas comosus); Cm-FTL1 и Cm-FTL2 из тыквы (Cucurbita maxima); Ro.FT из розы; Cg.FT из весенней орхидеи (Cymbidium); Fv.FT1 из земляники (Fragaria vesca); Bv.FT2 из сахарной свеклы (Beta Vulgaris); Ha.FT4 из подсолнечника (Helianthus annuus); и Ta.FT или TaFT1 из пшеницы (Triticum aestivum), и последовательности, которые являются по меньшей мере на 60% идентичными, по меньшей мере на 65% идентичными, по меньшей мере на 70% идентичными, по меньшей мере на 75% идентичными, по меньшей мере на 80% идентичными, по меньшей мере на 85% идентичными или по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичными с одной или более такими известными полинуклеотидными и/или белковыми последовательностями. Смотрите, например, Wickland, DP et al., ʺThe Flowering Locus T/Terminal Flower 1 Gene Family: Functional Evolution and Molecular Mechanismsʺ, Molecular Plant 8: 983-997 (2015), содержание которой включено в данный документ посредством ссылки. [50] The coding polynucleotide sequence of the FT transgene may include Gm.FT2a (SEQ ID NO: 1) or any polynucleotide sequence encoding the Gm.FT2a protein (SEQ ID NO: 2). The coding polynucleotide sequence of the FT transgene may also correspond to other FT genes in soy or other plants. For example, other soybean coding polynucleotide sequences that can be used as an FT transgene according to the present embodiments of the invention include: Gm.FT5a (SEQ ID NO: 3) or a polynucleotide sequence encoding a Gm.FT5a protein (SEQ ID NO: 4), or Gm.FT2b (SEQ ID NO: 5) or a polynucleotide sequence encoding a Gm.FT2b protein (SEQ ID NO: 6). In addition, examples of coding polynucleotide sequences from other plant species that can be used include: Zm.ZCN8 (SEQ ID NO: 7) from maize or a polynucleotide sequence encoding a Zm.ZCN8 protein (SEQ ID NO: 8), Nt.FT -like or Nt.FT4 (SEQ ID NO: 9) from tobacco or a polynucleotide sequence encoding an Nt.FT-like protein or Nt.FT4 (SEQ ID NO: 10), Le.FT or SFT protein (SEQ ID NO: 11 ) from tomato or a polynucleotide sequence encoding a Le.FT or SFT protein (SEQ ID NO: 12), At.FT (SEQ ID NO: 13) from Arabidopsis or a polynucleotide sequence encoding an At.FT protein (SEQ ID NO: 14) , At.TSF (SEQ ID NO: 15) from Arabidopsis or a polynucleotide sequence encoding protein At.TSF (SEQ ID NO: 16), Os.HD3a (SEQ ID NO: 17) from rice or a polynucleotide sequence encoding Os protein. HD3a (SEQ ID NO: 18), or Pt.FT (SEQ ID NO: 19) from Populus trichocarpa , or a polynucleotide sequence encoding a Pt.F protein T (SEQ ID NO: 20). Additional examples of coding polynucleotide sequences for FT transgenes and proteins that may also be used include the following: Gm.FT5b (SEQ ID NO: 21) from soy or any polynucleotide sequence encoding a Gm.FT5b protein (SEQ ID NO: 22); Gh.FT1 (SEQ ID NO: 23) from cotton or any polynucleotide sequence encoding a Gh.FT1 protein (SEQ ID NO: 24); Bn.FTA2a (SEQ ID NO: 25) from canola, or any polynucleotide sequence encoding a Bn.FTA2a protein (SEQ ID NO: 26); Ta.FT3B1 (SEQ ID NO: 27) from wheat, or any polynucleotide sequence encoding the Ta.FT3B1 protein (SEQ ID NO: 28); or Ps.FTa1 (SEQ ID NO: 29) from pea, or any polynucleotide sequence encoding a Ps.FTa1 protein (SEQ ID NO: 30). Coding polynucleotide sequences for FT transgenes encoding additional FT proteins from other species having known amino acid sequences may also be used in accordance with embodiments of the present invention, which may, for example, include the following: Md.FT1 and Md.FT2 from apple ( Malus domestica ); Hv.FT2 and Hv.FT3 from barley ( Hordeum vulgare ); Cs.FTL3 from chrysanthemum; Ls.FT from lettuce ( Lactuca sativa ); Pn.FT1 and Pn.FT2 from pyramidal poplar ( Populus nigra ); Pa.FT from maple-leaved sycamore ( Platanus acerifolia ); Dl.FT1 from longan ( Dimocarpus longan ); Ps.FTa1, Ps.FTa2, Ps.FTb1, Ps.FTb2 and Ps.FTc from pea ( Pisum sativum ); Ac.FT from pineapple ( Ananas comosus ); Cm-FTL1 and Cm-FTL2 from pumpkin ( Cucurbita maxima ); Ro.FT from rose; Cg.FT from spring orchid ( Cymbidium ); Fv.FT1 from strawberry ( Fragaria vesca ); Bv.FT2 from sugar beet ( Beta vulgaris ); Ha.FT4 from sunflower ( Helianthus annuus ); and Ta.FT or TaFT1 from wheat ( Triticum aestivum ), and sequences that are at least 60% identical, at least 65% identical, at least 70% identical, at least 75% identical, at least 80% identical, at least 85% identical, or at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94% , at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical with one or more such known polynucleotide and/or protein sequences. See, for example, Wickland, DP et al., "The Flowering Locus T/
[51] Если не указано иное, описанные в данном документе последовательности нуклеиновых кислот или полинуклеотидные последовательности приведены (слева направо) в направлении от 5' к 3', а аминокислотные или белковые последовательности приведены (слева направо) в направлении от N-конца к C-концу. В соответствии с вариантами реализации данного изобретения также можно использовать дополнительные известные или обнаруженные позже гены и белки FT из этих или других видов. Эти гены FT могут быть известны или восстановлены по их нуклеотидным и/или белковым последовательностям, которые могут быть определены путем визуального осмотра или с помощью компьютерных инструментов поиска и идентификации или компьютерного программного обеспечения (и баз данных) на основе алгоритма сравнения с известными последовательностями, структурными доменами FT и т. д. и в соответствии с любым известным методом выравнивания последовательностей, таким как BLAST, FASTA и т. д.[51] Unless otherwise indicated, nucleic acid or polynucleotide sequences described herein are shown (left to right) in the 5' to 3' direction, and amino acid or protein sequences are shown (left to right) in the N-terminal to C direction. -end. Additional known or later discovered FT genes and proteins from these or other species may also be used in accordance with embodiments of the present invention. These FT genes may be known or reconstructed from their nucleotide and/or protein sequences, which may be determined by visual inspection or by using computer search and identification tools or computer software (and databases) based on an algorithm for comparison with known sequences, structural FT domains, etc. and according to any known sequence alignment method such as BLAST, FASTA, etc.
[52] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения трансген FT рекомбинантных молекулы ДНК, вектора или конструкции может содержать полинуклеотидную последовательность, которая при оптимальном выравнивании) является по меньшей мере на 60% идентичной, по меньшей мере на 65% идентичной, по меньшей мере на 70% идентичной, по меньшей мере на 75% идентичной, по меньшей мере на 80% идентичной, по меньшей мере на 85% идентичной или по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной одной или более кодирующим полинуклеотидным последовательностям FT, перечисленным выше (например, SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 или 29), или любой другой известной кодирующей последовательности флоригенного FT. Процент идентичности последовательностей среди полинуклеотидных последовательностей вышеперечисленных кодирующих последовательностей генов FT приведен на Фиг. 1A. В каждой ячейке в таблице на Фиг. 1A приведен процент идентичности для гена FT в соответствующем ряду (запрашиваемая последовательность) по сравнению с геном FT в соответствующей колонке (рассматриваемая последовательность), деленный на общую длину запрашиваемой последовательности, а число в скобках представляет общее число идентичных оснований между запрашиваемой и рассматриваемой последовательностями. Как проиллюстрировано на этой фигуре, процент идентичности среди полинуклеотидных последовательностей для этих образцов генов FT находится в диапазоне от около 60% до около 90% идентичности. Таким образом, полинуклеотидную последовательность, которая попадает в один или более из этих диапазонов идентичности последовательностей или имеет более высокую идентичность последовательности, можно использовать в соответствии с вариантами реализации данного изобретения для индукции цветения, повышения урожая и/или изменения одного или более генеративных признаков растения. Сходные кодирующие полинуклеотидные последовательности для FT можно конструировать или выбирать на основании известных белковых последовательностей FT, консервативных аминокислотных остатков и доменов, вырожденности генетического кода и любого известного варианта оптимизации кодонов для конкретного вида растений, подлежащего трансформации.[52] In accordance with embodiments of the present invention, the FT transgene of a recombinant DNA molecule, vector, or construct may contain a polynucleotide sequence that, when optimally aligned) is at least 60% identical, at least 65% identical, at least 70% identical, at least 75% identical, at least 80% identical, at least 85% identical, or at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to one or more of the FT polynucleotide coding sequences listed above (e.g., SEQ ID NOs: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, or 29), or any other known coding sequence for florigenic FT. The percent sequence identity among the polynucleotide sequences of the above coding sequences for the FT genes is shown in FIG. 1A. In each cell in the table in Fig. 1A shows the percent identity for the FT gene in the respective row (query sequence) compared to the FT gene in the respective column (sequence of interest) divided by the total length of the query sequence, and the number in brackets represents the total number of identical bases between the query and the sequence of interest. As illustrated in this figure, the percent identity among polynucleotide sequences for these FT gene samples ranges from about 60% to about 90% identity. Thus, a polynucleotide sequence that falls within one or more of these sequence identity ranges, or has a higher sequence identity, can be used in accordance with embodiments of the present invention to induce flowering, increase yield, and/or change one or more plant generative traits. Similar coding polynucleotide sequences for FT can be designed or selected based on known FT protein sequences, conserved amino acid residues and domains, degeneracy of the genetic code, and any known codon optimization for the particular plant species to be transformed.
[53] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения трансген FT может содержать полинуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную или белковую последовательность, которая (при оптимальном выравнивании) является по меньшей мере на 60% идентичной, по меньшей мере на 65% идентичной, по меньшей мере на 70% идентичной, по меньшей мере на 75% идентичной, по меньшей мере на 80% идентичной, по меньшей мере на 85% идентичной или по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной одной или более кодирующим белковым или аминокислотным последовательностям FT, перечисленным выше (например, SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 или 30), или любой другой известной белковой последовательности флоригенного FT или ее функциональному фрагменту. Такой «функциональный фрагмент» определяется как белок, имеющий полипептидную последовательность, идентичную или очень сходную с полноразмерным белком FT, но в которой отсутствуют один или более аминокислотных остатков, частей, белковых доменов и т. д. полноразмерного белка FT, при условии, что фрагмент остается активным в отношении того, что он приводит к одному или более фенотипическим эффектам или изменениям аналогично полноразмерному белку, при трансгенной экспрессии в растении. Процент идентичности последовательностей среди вышеперечисленных полноразмерных белков FT приведен на Фиг. 1B. Процент рассчитан, как описано выше со ссылкой на Фиг. 1A на основании числа идентичных аминокислотных остатков (в скобках) между запрашиваемой и рассматриваемой белковыми последовательностями FT. Множественное выравнивание этих белков FT также проиллюстрировано на Фиг. 1C. Как видно по этим фигурам, процент идентичности среди белковых последовательностей для этих генов FT находится в диапазоне от около 60% до около 90% идентичности. Таким образом, полинуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную или белковую последовательность, которая попадает в один или более из этих диапазонов идентичности последовательностей или имеет более высокую идентичность последовательности, можно использовать в соответствии с вариантами реализации данного изобретения для индукции цветения, повышения урожайности и/или изменения одного или более генеративных признаков растения. Эти белковые последовательности FT, кодируемые полинуклеотидной последовательностью согласно данному изобретению, можно конструировать или выбирать на основании известных белковых последовательностей FT и их консервативных аминокислотных остатков и доменов.[53] According to embodiments of the present invention, the FT transgene may comprise a polynucleotide sequence encoding an amino acid or protein sequence that (when optimally aligned) is at least 60% identical, at least 65% identical, at least 70% identical, at least 75% identical, at least 80% identical, at least 85% identical, or at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to one or more of the FT protein or amino acid coding sequences listed above (e.g., SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, or 30) , or any other known florigenic FT protein sequence or functional fragment thereof. Such a "functional fragment" is defined as a protein having a polypeptide sequence identical or very similar to the full-length FT protein, but lacking one or more amino acid residues, portions, protein domains, etc. of the full-length FT protein, provided that the fragment remains active in that it results in one or more phenotypic effects or changes similar to a full length protein when expressed transgenic in a plant. The percent sequence identity among the above full-length FT proteins is shown in FIG. 1b. The percentage is calculated as described above with reference to FIG. 1A based on the number of identical amino acid residues (in brackets) between the queried and considered FT protein sequences. The multiple alignment of these FT proteins is also illustrated in FIG. 1C. As can be seen from these figures, the percent identity among the protein sequences for these FT genes ranges from about 60% to about 90% identity. Thus, a polynucleotide sequence encoding an amino acid or protein sequence that falls within one or more of these sequence identity ranges or has a higher sequence identity can be used in accordance with embodiments of the present invention to induce flowering, increase yield, and/or change one or more generative traits of the plant. These FT protein sequences encoded by the polynucleotide sequence of this invention may be designed or selected based on known FT protein sequences and their conservative amino acid residues and domains.
[54] Как описано ниже, трансген FT, содержащий одну из вышеприведенных кодирующих последовательностей, может дополнительно содержать один или более экспрессионных и/или регуляторных элементов, таких как энхансер (-ы), промотор (-ы), лидерная (-ые) последовательность (-ти), интрон (-ы) и т. д., и трансген FT может содержать геномную последовательность, кодирующую белок FT или аминокислотную последовательность, или их фрагмент или часть. [54] As described below, an FT transgene containing one of the above coding sequences may further comprise one or more expression and/or regulatory elements such as enhancer(s), promoter(s), leader(s) (s), intron(s), etc., and the FT transgene may contain a genomic sequence encoding an FT protein or an amino acid sequence, or a fragment or part thereof.
[55] В контексте данного документа «идентичность последовательности» или «процент идентичности» относится к степени, в которой две оптимально выровненные последовательности ДНК или белка являются идентичными. В данной области техники известны различные алгоритмы и программы для попарного или множественного выравнивания последовательностей, такие как ClustalW и т. д., которые можно использовать для сравнения идентичности или сходства последовательностей между двумя или более последовательностями, например, между двумя или более генами или белковыми последовательностями FT, или между генной (нуклеотидной) или белковой последовательностью FT и другой нуклеотидной или белковой последовательностью. Например, процент идентичности одной последовательности (запрашиваемой) с другой последовательностью (рассматриваемой) можно рассчитать, как описано выше со ссылкой на Фиг. 1A и 1B (т. е. при оптимальном выравнивании последовательностей разделить число идентичных оснований или остатков на общее число оснований или остатков для запрашиваемой последовательности и умножить на 100%). Хотя в данной области техники известны другие методы выравнивания и сравнения, выравнивание и процент идентичности между двумя последовательностями (включая процент идентичности в вышеописанном диапазоне) могут быть определены с помощью алгоритма ClustalW, смотрите, например, Chenna R. et al., ʺMultiple sequence alignment with the Clustal series of programs,ʺ Nucleic Acids Research 31: 3497-3500 (2003); Thompson JD et al., ʺClustal W: Improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice,ʺ Nucleic Acids Research 22: 4673-4680 (1994); and Larkin MA et al., ʺClustal W and Clustal X version 2.0,ʺ Bioinformatics 23: 2947-48 (2007), полное содержание которых включено в данный документ посредством ссылки. В целях данного изобретения при оптимальном выравнивании двух последовательностей (с допуском гэпов в выравнивании) «процент идентичности» для запрашиваемой последовательности рассчитывают, как описано выше со ссылкой на Фиг. 1A и 1B - т. е. процент идентичности=(число идентичных позиций между запрашиваемой и рассматриваемой последовательностями/общее число позиций в запрашиваемой последовательности) x 100%, где каждая последовательность состоит из ряда позиций (нуклеотидных оснований или аминокислотных остатков). Две оптимально выровненные последовательности также можно описать как имеющие определенный процент идентичности. Необязательно, процент идентичности может быть описан со ссылкой на определенное окно сравнения (например, окно выравнивания) между двумя последовательностями, в случае чего число идентичных позиций в окне сравнения делят на длину в нуклеотидах окна сравнения и умножают на 100%. Окно выравнивания может быть определено как область идентичности, сходства или перекрытия между двумя последовательностями.[55] As used herein, "sequence identity" or "percent identity" refers to the degree to which two optimally aligned DNA or protein sequences are identical. Various algorithms and programs for pairwise or multiple sequence alignment are known in the art, such as ClustalW, etc., which can be used to compare sequence identity or similarity between two or more sequences, e.g. between two or more genes or protein sequences. FT, or between an FT gene (nucleotide) or protein sequence and another nucleotide or protein sequence. For example, the percent identity of one sequence (requested) with another sequence (considered) can be calculated as described above with reference to FIG. 1A and 1B (ie, for optimal sequence alignment, divide the number of identical bases or residues by the total number of bases or residues for the requested sequence and multiply by 100%). Although other alignment and comparison methods are known in the art, alignment and percent identity between two sequences (including percent identity in the range described above) can be determined using the ClustalW algorithm, see, for example, Chenna R. et al., ʺMultiple sequence alignment with the Clustal series of programs,ʺ Nucleic Acids Research 31 : 3497-3500 (2003); Thompson JD et al., 'Clustal W: Improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice,' Nucleic Acids Research 22 : 4673-4680 (1994); and Larkin MA et al., "Clustal W and Clustal X version 2.0," Bioinformatics 23 : 2947-48 (2007), the entire contents of which are incorporated herein by reference. For the purposes of this invention, when two sequences are optimally aligned (with gap tolerance in the alignment), the "percent identity" for the requested sequence is calculated as described above with reference to FIG. 1A and 1B - i.e. percent identity = (number of identical positions between the query and the sequence in question / total number of positions in the query sequence) x 100%, where each sequence consists of a number of positions (nucleotide bases or amino acid residues). Two optimally aligned sequences can also be described as having a certain percentage of identity. Optionally, percent identity can be described with reference to a specific comparison window (eg, alignment window) between two sequences, in which case the number of identical positions in the comparison window is divided by the nucleotide length of the comparison window and multiplied by 100%. The alignment window can be defined as the area of identity, similarity, or overlap between two sequences.
[56] Рекомбинантные полинуклеотидная или белковая молекула, или конструкция, или вектор могут быть выделенными. В контексте данного документа термин «выделенный» относится к по меньшей мере частичному отделению молекулы от других молекул, обычно связанных с ней в ее естественном состоянии. В одном варианте реализации изобретения термин «выделенный» относится к молекуле ДНК, которая отделена от нуклеиновых кислот, которые обычно фланкируют молекулу ДНК в ее естественном состоянии. Например, молекула ДНК, кодирующая белок, которая в естественном состоянии присутствует в бактерии, считается выделенной молекулой ДНК, если она не находится в ДНК бактерии, в которой в естественном состоянии можно обнаружить молекулу ДНК, кодирующую белок. Таким образом, молекула ДНК, слитая или функционально связанная с одной или более молекулами ДНК, к которыми бы она не была связана в естественном состоянии, например, в результате применения технологий рекомбинантных ДНК или трансформации растений, считается в данном документе выделенной. Такие молекулы считаются выделенными, даже когда они интегрированы в хромосому клетки-хозяина или находятся в растворе нуклеиновых кислот с другими молекулами ДНК.[56] The recombinant polynucleotide or protein molecule or construct or vector can be isolated. As used herein, the term "isolated" refers to at least partial separation of a molecule from other molecules normally associated with it in its natural state. In one embodiment of the invention, the term "isolated" refers to a DNA molecule that is separated from the nucleic acids that normally flank the DNA molecule in its natural state. For example, a DNA molecule encoding a protein that is naturally present in a bacterium is considered an isolated DNA molecule if it is not found in the DNA of a bacterium in which a DNA molecule encoding a protein can be found in a natural state. Thus, a DNA molecule fused or operably linked to one or more DNA molecules to which it would not naturally be associated, such as through recombinant DNA technology or plant transformation, is considered isolated herein. Such molecules are considered isolated even when they are integrated into the host cell's chromosome or are in nucleic acid solution with other DNA molecules.
[57] Белковая последовательность FT, кодируемая полинуклеотидной последовательностью, или трансген согласно данному изобретению также могут быть сконструированы или выбраны так, чтобы содержать одну или более аминокислотных замен, являющихся химически и/или структурно консервативными (например, замещение одной аминокислоты другой, имеющей сходные химические или физические свойства, такие как гидрофобность, полярность, заряд, стерический эффект, кислая/основная химия, сходные группы боковых цепей, такие как гидроксильные, сульфгидрильные, амино и т. д.), для того, чтобы избежать или минимизировать структурные изменения в белке, которые могут повлиять на его функцию. Например, валин часто является консервативной заменой аланину, а треонин может быть консервативной заменой серину. Дополнительные примеры консервативных аминокислотных замен в белках включают: валин/лейцин, валин/изолейцин, фенилаланин/тирозин, лизин/аргинин, аспарагиновая кислота/глутаминовая кислота и аспарагин/глутамин. Белковая последовательность FT, кодируемая полинуклеотидной последовательностью, или трансген согласно данному изобретению также могут включать белки, которые отличаются одной или более аминокислотами от известной белковой последовательности FT или сходной последовательности в результате наличия делеции (-ий) и/или вставки (-ок), включающих одну или более аминокислот.[57] An FT protein sequence encoded by a polynucleotide sequence or a transgene of the present invention may also be designed or selected to contain one or more amino acid substitutions that are chemically and/or structurally conservative (e.g., substitution of one amino acid for another having similar chemical or physical properties such as hydrophobicity, polarity, charge, steric effect, acidic/basic chemistry, similar side chain groups such as hydroxyl, sulfhydryl, amino, etc.) in order to avoid or minimize structural changes in the protein which may affect its function. For example, valine is often a conservative substitute for alanine, while threonine may be a conservative substitute for serine. Additional examples of conservative amino acid substitutions in proteins include: valine/leucine, valine/isoleucine, phenylalanine/tyrosine, lysine/arginine, aspartic acid/glutamic acid, and asparagine/glutamine. An FT protein sequence encoded by a polynucleotide sequence or a transgene of the invention may also include proteins that differ by one or more amino acids from a known FT protein sequence or similar sequence as a result of deletion(s) and/or insertion(s) comprising one or more amino acids.
[58] Можно идентифицировать различные гены и белки FT от разных видов растений и рассматривать их как гомологи или ортологи FT для применения в данном изобретении, если они имеют сходную последовательность нуклеиновой кислоты и/или белковую последовательность и содержат консервативные аминокислоты и/или структурные домены с по меньшей мере одним известным геном или белком FT. В контексте данного документа подразумевается, что термин «гомолог» в отношении гена или белка FT включает любые гомологи, аналоги, ортологи, паралоги и т. д. гена или белка FT, а термин «гомологичный» в отношении полинуклеотидных или белковых последовательностей означает сходные или идентичные последовательности, включая синтетические, искусственные или сконструированные полинуклеотидные или белковые последовательности. Такой гомолог FT также может быть определен как имеющий такую же или сходную биологическую функцию, что и известные гены FT (например, с аналогичным действием на цветение и/или другие генеративные или связанные с урожайностью признаки или фенотипы при эктопической экспрессии в растении).[58] It is possible to identify different FT genes and proteins from different plant species and consider them as FT homologs or orthologs for use in the present invention if they have a similar nucleic acid and/or protein sequence and contain conserved amino acids and/or structural domains with at least one known FT gene or protein. In the context of this document, the term "homolog" in relation to a FT gene or protein is intended to include any homologues, analogs, orthologues, paralogs, etc. of the FT gene or protein, and the term "homologous" in relation to polynucleotide or protein sequences means similar or identical sequences, including synthetic, artificial or engineered polynucleotide or protein sequences. Such an FT homologue can also be defined as having the same or similar biological function as known FT genes (eg, with a similar effect on flowering and/or other generative or yield-related traits or phenotypes when ectopically expressed in the plant).
[59] Анализ последовательностей и выравнивание белковых последовательностей FT из разных видов растений позволил дополнительно выявить некоторое число консервативных аминокислотных остатков и по меньшей мере один консервативный структурный домен. При применении к различным выровненным белковым последовательностям FT (смотрите, например, Фиг. 1B и 1C) инструмента для определения белковых доменов с использованием базы данных Pfam (например, версии Pfam 26.0, выпущенной в ноябре 2011 г., или более поздних версий), было обнаружено, что эти белки FT содержат по меньшей мере часть предполагаемого фосфатидилэтаноламин-связывающего белкового (PEBP) домена (название домена по Pfam: PBP_N; номер доступа: PF01161). Смотрите, например, Banfield, MJ et al., ʺThe structure of Antirrhinum centroradialis protein (CEN) suggests a role as a kinase inhibitor,ʺ Journal of Mol Biol., 297(5): 1159-1170 (2000), полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки. Было обнаружено, что этот домен PEBP соответствует, например, аминокислотам 28-162 полноразмерного белка Gm.FT2a (смотрите таблицу 5, ниже). Таким образом, белки FT, включенные в варианты реализации данного изобретения, могут включать идентифицированные или охарактеризованные как имеющие или содержащие по меньшей мере домен PEBP (номер доступа: PF01161) в соответствии с анализом Pfam. Соответственно, данное изобретение может дополнительно включать полинуклеотидные последовательности, кодирующие белок FT, содержащий по меньшей мере домен PEBP. Как известно в данной области техники, база данных «Pfam» является крупной коллекцией множественных выравниваний последовательностей и скрытых моделей Маркова, покрывающих многие распространенные белковые семейства, и содержит информацию о различных белковых семействах и их доменных структурах. Посредством определения предполагаемых структурных доменов Pfam для заданной белковой последовательности можно выяснить или определить классификацию и функцию белка. Смотрите, например, Finn, RD et al., ʺThe Pfam protein families database,ʺ Nucleic Acids Research (Database Issue), 42:D222-D230 (2014), полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки.[59] Sequence analysis and alignment of FT protein sequences from different plant species further identified a number of conserved amino acid residues and at least one conserved structural domain. When applied to various aligned FT protein sequences (see, for example, FIGS. 1B and 1C) a protein domain detection tool using the Pfam database (for example, Pfam 26.0 released November 2011 or later), there was these FT proteins were found to contain at least a portion of the putative phosphatidylethanolamine-binding protein (PEBP) domain (Pfam domain name: PBP_N; accession number: PF01161). See, for example, Banfield, MJ et al., ʺThe structure of Antirrhinum centroradialis protein (CEN) suggests a role as a kinase inhibitor,ʺ Journal of Mol Biol., 297 (5): 1159-1170 (2000), the full contents of which incorporated into this document by reference. This PEBP domain was found to correspond, for example, to amino acids 28-162 of the full length Gm.FT2a protein (see Table 5 below). Thus, FT proteins included in embodiments of the present invention may include those identified or characterized as having or containing at least a PEBP domain (accession number: PF01161) according to the Pfam assay. Accordingly, the invention may further include polynucleotide sequences encoding an FT protein containing at least a PEBP domain. As is known in the art, the Pfam database is a large collection of multiple sequence alignments and hidden Markov models covering many common protein families and contains information about the various protein families and their domain structures. By determining putative Pfam structural domains for a given protein sequence, the classification and function of a protein can be elucidated or determined. See, for example, Finn, RD et al., "The Pfam protein families database," Nucleic Acids Research (Database Issue), 42 :D222-D230 (2014), the entire contents of which are incorporated herein by reference.
[60] Варианты реализации данного изобретения могут дополнительно включать полинуклеотидные последовательности, кодирующие индуктивные или флоригенные белки FT. Белок FT, кодируемый полинуклеотидной последовательностью, может быть «индуктивным» или «флоригенным», если белок FT при эктопической экспрессии в растении способен приводить к более раннему цветению и/или повышению плодоносности в контексте числа цветков, бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов, клубней и/или семян на один или более узлов растения. Не ограничиваясь теорией, было сделано дополнительное предположение, что такое повышение плодоносности в контексте числа цветков, бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов, клубней и/или семян на один или более узлов растения может быть результатом увеличения числа меристем в этих узлах, которые переходят от вегетативной к генеративной стадии и дают цветки. Такая повышенная плодоносность в каждом узле вследствие эктопической экспрессии «флоригенного» FT может быть связана с повышением синхронизации выпускания и флорального развития ранних кистей и латеральных меристем в каждом узле. Хотя функция «флоригенного» белка FT может состоять в индукции раннего цветения при эктопической экспрессии в растении, трансгенно экспрессируемый «флоригенный» белок FT может увеличивать число цветков, бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов, клубней и/или семян на узел (узлы) растения за счет одного или более путей или механизмов, независимо или в дополнение к любым флоригенным эффектам, связанным со временем цветения и/или длительностью генеративной стадии.[60] Embodiments of the present invention may further include polynucleotide sequences encoding inductive or florigenic FT proteins. An FT protein encoded by a polynucleotide sequence may be "inductive" or "florigenic" if the FT protein, when ectopically expressed in the plant, is capable of leading to earlier flowering and/or increased fruiting in the context of the number of flowers, pods, pods, pods, fruits, nuts, tubers and/or seeds on one or more plant nodes. Without being limited by theory, it has been further suggested that such an increase in fruitfulness in the context of the number of flowers, pods, pods, pods, fruits, nuts, tubers and/or seeds per one or more plant nodes may result from an increase in the number of meristems at those nodes, which pass from vegetative to generative stage and produce flowers. This increased fecundity at each node due to ectopic expression of "florigenic" FT may be associated with increased timing of release and floral development of early brushes and lateral meristems at each node. Although the function of the "florigenic" FT protein may be to induce early flowering when ectopically expressed in the plant, the transgenic expressed "florigenic" FT protein can increase the number of flowers, pods, pods, pods, fruits, nuts, tubers, and/or seeds per node ( nodes) of the plant through one or more pathways or mechanisms, independently of or in addition to any florigenic effects associated with flowering time and/or duration of the generative stage.
[61] Флоригенные FT-подобные гены из различных видов растений в общем случае отличаются высокой степенью консервативности. Однако многие белки в семействе PEBP имеют аминокислотные последовательности, которые являются по существу сходными с флоригенными белками FT, но не проявляют себя как флоригены. Например, гены Terminal Flower (TFL) из различных видов растений имеют сходные белковые последовательности с флоригенными генами FT, но в действительности замедляют цветение. В недавней работе были определены конкретные аминокислотные остатки, которые в общем случае не являются общими для флоригенных белков FT и других белков PEBP, таких как TFL, и было показано, что замены во многих из этих позиций преобразуют флоригенные белки FT в белки-репрессоры цветения. Смотрите, например, Ho and Weigel, Plant Cell 26: 552-564 (2014); Danilevskaya et al., Plant Physiology 146(1): 250-264 (2008); Harig et al., Plant Journal 72: 908-921 (2012); Hsu et al., Plant Cell 18: 1846-1861 (2006); Kojima et al., Plant Cell Physiology 43(10): 1096-1105 (2002); Kong et al., Plant Physiology 154: 1220-1231 (2010); Molinero-Rosales et al., Planta 218: 427-434 (2004); Zhai et al., PLoS ONE, 9(2): e89030 (2014), и Wickland DP et al. (2015), выше, полное содержание которых включено в данный документ посредством ссылки. Таким образом, аминокислотные остатки могут служить показателями для дополнительного определения и установления различий флоригенных белков FT согласно данному изобретению.[61] Florigenic FT-like genes from various plant species are generally highly conserved. However, many proteins in the PEBP family have amino acid sequences that are substantially similar to the florigenic FT proteins, but do not appear to be florigen. For example, Terminal Flower (TFL) genes from various plant species have similar protein sequences to florigenic FT genes, but actually slow down flowering. Recent work has identified specific amino acid residues that are not generally shared between florigenic FT proteins and other PEBP proteins such as TFL, and it has been shown that substitutions at many of these positions convert florigenic FT proteins into flowering repressor proteins. See, for example, Ho and Weigel, Plant Cell 26: 552-564 (2014); Danilevskaya et al., Plant Physiology 146 (1): 250-264 (2008); Harig et al., Plant Journal 72 : 908-921 (2012); Hsu et al., Plant Cell 18 : 1846-1861 (2006); Kojima et al., Plant Cell Physiology 43 (10): 1096-1105 (2002); Kong et al., Plant Physiology 154 : 1220-1231 (2010); Molinero-Rosales et al., Planta 218 : 427-434 (2004); Zhai et al., PLoS ONE , 9 (2): e89030 (2014), and Wickland DP et al. (2015), supra , the entire contents of which are incorporated herein by reference. Thus, amino acid residues can serve as indicators to further define and discriminate the florigenic FT proteins of the present invention.
[62] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения «индуктивный» или «флоригенный» белок FT может быть дополнительно определен или охарактеризован как содержащий один или более из следующих аминокислотных остатков (аминокислотные позиции относятся к соответствующим или оптимально выровненным позициям полноразмерного белка FT из Arabidopsis, SEQ ID NO: 14): пролин в аминокислотной позиции 21 (P21); аргинин или лизин в аминокислотной позиции 44 (R44 или K44); глицин в аминокислотной позиции 57 (G57); глутаминовая кислота или аспарагиновая кислота в аминокислотной позиции 59 (E59 или D59); тирозин в аминокислотной позиции 85 (Y85); лейцин в аминокислотной позиции 128 (L128); глицин в аминокислотной позиции 129 (G129); треонин в аминокислотной позиции 132 (T132); аланин в аминокислотной позиции 135 (A135); триптофан в аминокислотной позиции 138 (W138); глутаминовая кислота или аспарагиновая кислота в аминокислотной позиции 146 (E146 или D146); и/или цистеин в аминокислотной позиции 164 (C164). Соответствующие аминокислотные позиции других белков FT можно определить посредством выравнивания с последовательностью FT Arabidopsis (смотрите, например, Фиг. 1C). Специалист в данной области техники сможет определить соответствующие аминокислотные позиции других белков FT на основании выравнивания последовательностей. Несколько из этих ключевых остатков находятся в пределах внешнего петлевого домена FT-подобных белков, определяемого аминокислотами 128-145 полноразмерной последовательности FT Arabidopsis (SEQ ID NO: 14) и соответствующих последовательностей других белков FT (смотрите, например, Фиг. 1C). Таким образом, полинуклеотиды согласно данному изобретению могут кодировать флоригенные белки FT, имеющие один или более из этих консервативных аминокислотных остатков. [62] According to embodiments of the present invention, an "inductive" or "florigenic" FT protein can be further defined or characterized as containing one or more of the following amino acid residues (amino acid positions refer to the corresponding or optimally aligned positions of the full-length Arabidopsis FT protein, SEQ ID NO: 14): proline at amino acid position 21 (P21); arginine or lysine at amino acid position 44 (R44 or K44); glycine at amino acid position 57 (G57); glutamic acid or aspartic acid at amino acid position 59 (E59 or D59); tyrosine at amino acid position 85 (Y85); leucine at amino acid position 128 (L128); glycine at amino acid position 129 (G129); threonine at amino acid position 132 (T132); alanine at amino acid position 135 (A135); tryptophan at amino acid position 138 (W138); glutamic acid or aspartic acid at amino acid position 146 (E146 or D146); and/or cysteine at amino acid position 164 (C164). The corresponding amino acid positions of other FT proteins can be determined by alignment with the Arabidopsis FT sequence (see, for example, Fig. 1C). One skilled in the art will be able to determine the corresponding amino acid positions of other FT proteins based on the sequence alignment. Several of these key residues are within the outer loop domain of FT-like proteins defined by amino acids 128-145 of the full-length Arabidopsis FT sequence (SEQ ID NO: 14) and the corresponding sequences of other FT proteins (see, for example, Fig. 1C). Thus, the polynucleotides of the invention may encode FT florigenic proteins having one or more of these conserved amino acid residues.
[63] Флоригенные белки FT согласно данному изобретению также могут содержать одну или более других аминокислот в одной или более из определенных выше позиций остатков. Например, в случае вышеприведенных аминокислотных позиций последовательности белка FT Arabidopsis (At.FT) (SEQ ID NO: 14), флоригенный белок FT может, в альтернативном варианте, содержать одну или более из следующих аминокислот:: аланин (вместо пролина) в позиции, соответствующей позиции 21 последовательности белка At.FT (P21A), или, возможно, другие небольшие неполярные остатки, такие как глицин или валин, в этой позиции; гистидин (вместо лизина или аргинина) в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 44 последовательности белка At.FT, или, возможно, другие полярные аминокислоты в этой позиции; аланин или цистеин (вместо глицина) в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 57 последовательности белка At.FT, или, возможно, другие небольшие неполярные остатки, такие как пролин или валин, в этой позиции; аспарагин или серин (вместо глутаминовой кислоты или аспарагиновой кислоты) в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 59 последовательности белка At.FT, или, возможно, другие небольшие полярные остатки, такие как глутамин, цистеин или треонин, в этой позиции; разные полярные и неполярные незаряженные остатки (отличные от лейцина) в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 85 последовательности белка At.FT; неполярный или гидрофобный незаряженный остаток (отличный от лейцина), такой как изолейцин, валин или метионин, в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 128 последовательности белка At.FT; разные меньшие неполярные и незаряженные остатки (отличные от глицина), такие как аланин, валин, лейцин, изолейцин, метионин и т. д., в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 129 последовательности белка At.FT, хотя в этой позиции могут допускаться некоторые заряженные и полярные остатки; полярный незаряженный остаток (отличный от треонина) в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 132 последовательности белка At.FT; разные аминокислоты, отличные от пролина, такие как треонин, в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 135 последовательности белка At.FT; разные другие объемные неполярные или гидрофобные аминокислоты (вместо триптофана), такие как метионин или фенилаланин, в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 138 последовательности белка At.FT; разные другие полярные или неположительно заряженные аминокислоты, такие как аспарагин или серин, в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 146 последовательности белка At.FT; и/или разные другие полярные или неполярные аминокислоты (вместо цистеина), такие как изолейцин, в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 164 последовательности белка At.FT. Специалист в данной области техники сможет определить соответствующие аминокислотные позиции и замены белков FT на основании выравнивания их последовательностей с последовательностью белка FT Arabidopsis. Кроме того, также предусматривается, что в объем флоригенных белков FT могут попадать другие химически консервативные аминокислотные замены, допустимые с точки зрения специалиста в области биохимии белков. Соответственно, полинуклеотиды согласно данному изобретению могут дополнительно кодировать флоригенные белки FT, имеющие одну или более консервативных аминокислотных замен. Действительно, флоригенные белки FT, кодируемые полинуклеотидами согласно данному изобретению, включают нативные последовательности и искусственные последовательности, содержащие одну или более консервативных аминокислотных замен, а также их функциональные фрагменты.[63] The florigenic FT proteins of the present invention may also contain one or more other amino acids at one or more of the residue positions defined above. For example, in the case of the above amino acid positions of the Arabidopsis FT protein (At.FT) sequence (SEQ ID NO: 14), the florigen FT protein may alternatively contain one or more of the following amino acids: alanine (instead of proline) at positions, the corresponding position 21 of the At.FT protein sequence (P21A), or possibly other small non-polar residues such as glycine or valine, at that position; histidine (instead of lysine or arginine) at the amino acid position corresponding to position 44 of the At.FT protein sequence, or possibly other polar amino acids at that position; alanine or cysteine (instead of glycine) at the amino acid position corresponding to position 57 of the At.FT protein sequence, or possibly other small non-polar residues such as proline or valine at that position; asparagine or serine (instead of glutamic acid or aspartic acid) at the amino acid position corresponding to position 59 of the At.FT protein sequence, or possibly other small polar residues such as glutamine, cysteine or threonine at that position; different polar and non-polar uncharged residues (other than leucine) at the amino acid position corresponding to position 85 of the At.FT protein sequence; a non-polar or hydrophobic uncharged residue (other than leucine) such as isoleucine, valine, or methionine at the amino acid position corresponding to position 128 of the At.FT protein sequence; various smaller non-polar and uncharged residues (other than glycine) such as alanine, valine, leucine, isoleucine, methionine, etc., at the amino acid position corresponding to position 129 of the At.FT protein sequence, although some charged and polar remnants; a polar uncharged residue (other than threonine) at the amino acid position corresponding to position 132 of the At.FT protein sequence; different amino acids other than proline, such as threonine, at the amino acid position corresponding to position 135 of the At.FT protein sequence; various other bulky non-polar or hydrophobic amino acids (instead of tryptophan), such as methionine or phenylalanine, at the amino acid position corresponding to position 138 of the At.FT protein sequence; various other polar or non-positively charged amino acids, such as asparagine or serine, at the amino acid position corresponding to position 146 of the At.FT protein sequence; and/or various other polar or non-polar amino acids (instead of cysteine) such as isoleucine at the amino acid position corresponding to position 164 of the At.FT protein sequence. One skilled in the art will be able to determine the appropriate amino acid positions and substitutions of FT proteins based on their sequence alignment with the Arabidopsis FT protein sequence. In addition, it is also contemplated that other chemically conservative amino acid substitutions acceptable from the point of view of a person skilled in the field of protein biochemistry may fall into the scope of the FT florigenic proteins. Accordingly, the polynucleotides of the present invention may further encode FT florigenic proteins having one or more conservative amino acid substitutions. Indeed, the florigenic FT proteins encoded by the polynucleotides of this invention include native sequences and artificial sequences containing one or more conservative amino acid substitutions, as well as functional fragments thereof.
[64] Флоригенные белки FT согласно данному изобретению также могут быть определены как исключающие (т. е. не содержащие) одну или более аминокислотных замен, которые могут быть характерными для TFL или других нефлоригенных или антифлоригенных белков или быть связанными с ними. Например, в случае аминокислотных позиций последовательности белка FT Arabidopsis (SEQ ID NO: 14), во флоригенном белке FT могут быть исключены одна или более из следующих аминокислот (т. е. в соответствующих или оптимально выровненных позициях флоригенного белка FT): фенилаланин или серин в позиции, соответствующей позиции 21 последовательности белка At.FT (например, вместо пролина или аланина); фенилаланин в позиции, соответствующей позиции 44 последовательности белка At.FT (например, вместо аргинина или лизина); гистидин, глутаминовая кислота или аспарагиновая кислота в позиции, соответствующей позиции 57 последовательности белка At.FT (например, вместо глицина); глицин или аланин в позиции, соответствующей позиции 59 последовательности белка At.FT (например, вместо глутаминовой кислоты или аспарагиновой кислоты); гистидин в позиции, соответствующей позиции 85 последовательности белка At.FT (например, вместо тирозина); лизин, аргинин, аланин или метионин в позиции, соответствующей позиции 109 последовательности белка At.FT; лизин или аргинин в позиции, соответствующей позиции 128 последовательности белка At.FT (например, вместо лейцина); глутамин или аспарагин в позиции, соответствующей позиции 129 последовательности белка At.FT (например, вместо глицина); валин или цистеин в позиции, соответствующей позиции 132 последовательности белка At.FT (например, вместо треонина); лизин, аргинин или аланин в позиции, соответствующей позиции 134 последовательности белка At.FT (например, вместо тирозина); пролин в позиции, соответствующей позиции 135 последовательности белка At.FT (например, вместо аланина или треонина); серин, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, аланин, лизин или аргинин в позиции, соответствующей позиции 138 последовательности белка At.FT (например, вместо триптофана или метионина); лизин или аргинин в позиции, соответствующей позиции 140 последовательности белка At.FT; лизин или аргинин в позиции, соответствующей позиции 146 последовательности белка At.FT (например, вместо кислых или незаряженных полярных остатков); лизин или аргинин в позиции, соответствующей позиции 152 последовательности белка At.FT; и/или аланин в позиции, соответствующей позиции 164 последовательности белка At.FT (например, вместо цистеина или изолейцина). Специалист в данной области техники сможет определить соответствующие аминокислотные позиции и замены других белков FT на основании выравнивания их последовательностей. Соответственно, варианты реализации данного изобретения могут исключать полинуклеотиды, которые кодируют FT-подобные белки, имеющие одну или более вышеуказанных аминокислотных замен, связанных с TFL или другими антифлоригенами. Однако в белке FT могут допускаться одна или несколько таких аминокислотных замен, если он сохраняет при этом флоригенную активность.[64] Florigenic FT proteins of the present invention can also be defined as excluding (i.e., not containing) one or more amino acid substitutions that may be characteristic of or associated with TFL or other non-florigenic or anti-florigenic proteins. For example, in the case of amino acid positions of the Arabidopsis FT protein sequence (SEQ ID NO: 14), one or more of the following amino acids may be omitted from the florigenic FT protein (i.e., at the corresponding or optimally aligned positions of the florigenic FT protein): phenylalanine or serine at the position corresponding to position 21 of the At.FT protein sequence (for example, instead of proline or alanine); phenylalanine at the position corresponding to position 44 of the At.FT protein sequence (for example, instead of arginine or lysine); histidine, glutamic acid, or aspartic acid at position corresponding to position 57 of the At.FT protein sequence (eg, instead of glycine); glycine or alanine at position corresponding to position 59 of the At.FT protein sequence (eg, instead of glutamic acid or aspartic acid); histidine at the position corresponding to position 85 of the At.FT protein sequence (for example, instead of tyrosine); lysine, arginine, alanine or methionine at the position corresponding to position 109 of the At.FT protein sequence; lysine or arginine at the position corresponding to position 128 of the At.FT protein sequence (for example, instead of leucine); glutamine or asparagine at the position corresponding to position 129 of the At.FT protein sequence (eg, instead of glycine); valine or cysteine at the position corresponding to position 132 of the At.FT protein sequence (for example, instead of threonine); lysine, arginine, or alanine at position corresponding to position 134 of the At.FT protein sequence (eg, instead of tyrosine); proline at the position corresponding to position 135 of the At.FT protein sequence (for example, instead of alanine or threonine); serine, aspartic acid, glutamic acid, alanine, lysine, or arginine at the position corresponding to position 138 of the At.FT protein sequence (for example, instead of tryptophan or methionine); lysine or arginine at the position corresponding to position 140 of the At.FT protein sequence; lysine or arginine at the position corresponding to position 146 of the At.FT protein sequence (eg, instead of acidic or uncharged polar residues); lysine or arginine at the position corresponding to position 152 of the At.FT protein sequence; and/or alanine at the position corresponding to position 164 of the At.FT protein sequence (eg instead of cysteine or isoleucine). One skilled in the art will be able to determine the appropriate amino acid positions and substitutions for other FT proteins based on their sequence alignment. Accordingly, embodiments of the present invention may exclude polynucleotides that encode FT-like proteins having one or more of the above amino acid substitutions associated with TFL or other antiflorigen. However, one or more of these amino acid substitutions may be allowed in the FT protein, as long as it retains florigenic activity.
[65] Флоригенный белок FT согласно данному изобретению также может быть определен как сходный с известным белком FT в дополнение к тому, что он имеет один или более из вышеуказанных характерных или консервативных аминокислотных остатков. Например, флоригенный белок может быть определен как имеющий по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 и 30, или ее функциональным фрагментом, в дополнение к одному или более из следующих характерных остатков: тирозин или другой незаряженный полярный или неполярный остаток (например, аланин, триптофан, метионин, лейцин, треонин, цистеин, серин или аспарагин) в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 85 последовательности белка At.FT; лейцин или другой неполярный или гидрофобный остаток (например, изолейцин, валин или метионин) в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 128 последовательности белка At.FT; и/или триптофан или другой крупный неполярный или гидрофобный остаток (например, метионин или фенилаланин) в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 138 последовательности белка At.FT. Такой флоригенный белок FT может быть дополнительно определен как имеющий дополнительные характерные аминокислотные остатки, такие как один или более из следующих: глицин или другой небольшой неполярный и незаряженный остаток (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин или метионин) в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 129 последовательности белка At.FT; и/или треонин в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 132 последовательности белка At.FT.[65] The florigenic FT protein of the present invention can also be defined as being similar to a known FT protein in addition to having one or more of the above characteristic or conserved amino acid residues. For example, a florigenic protein can be defined as having at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90% , at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identity with a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 and 30, or its a functional fragment, in addition to one or more of the following characteristic residues: a tyrosine or other uncharged polar or non-polar residue (for example, alanine, tryptophan, methionine, leucine, threonine, cysteine, serine, or asparagine) at the amino acid position corresponding to position 85 of the protein sequence At.FT; a leucine or other non-polar or hydrophobic residue (eg isoleucine, valine or methionine) at the amino acid position corresponding to position 128 of the At.FT protein sequence; and/or tryptophan or another large non-polar or hydrophobic residue (eg, methionine or phenylalanine) at the amino acid position corresponding to position 138 of the At.FT protein sequence. Such a florigenic FT protein can be further defined as having additional characteristic amino acid residues such as one or more of the following: glycine or another small non-polar and uncharged residue (e.g. alanine, valine, leucine, isoleucine, or methionine) at the amino acid position corresponding to position 129 At.FT protein sequences; and/or threonine at the amino acid position corresponding to position 132 of the At.FT protein sequence.
[66] Флоригенный белок FT согласно данному изобретению также может быть определен как имеющий по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 и 30, или ее функциональным фрагментом, но не имеющий (т. е. исключающий) один или более нефлоригенных или антифлоригенных остатков, таких как один или более из следующих: гистидин в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 85 последовательности белка At.FT; лизин или аргинин в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 128 последовательности белка At.FT; и/или серин, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, лизин или аргинин в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 138 последовательности белка At.FT. Такой флоригенный белок FT может быть дополнительно определен как не имеющий (т. е. исключающий) один или более дополнительных остатков, таких как один или более из следующих: глутамин или аспарагин в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 129 последовательности белка At.FT; и/или валин или цистеин в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 132 последовательности белка At.FT.[66] The florigenic FT protein of the present invention can also be defined as having at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85% at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98% or at least 99% identity with a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 and 30, or a functional fragment thereof, but lacking (i.e., excluding) one or more non-florigenic or anti-florigenic residues, such as one or more of the following: a histidine at the amino acid position corresponding to position 85 of the At.FT protein sequence; lysine or arginine at the amino acid position corresponding to position 128 of the At.FT protein sequence; and/or serine, aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine at the amino acid position corresponding to position 138 of the At.FT protein sequence. Such a florigenic FT protein can be further defined as having no (ie, exclusive) one or more additional residues, such as one or more of the following: glutamine or asparagine at the amino acid position corresponding to position 129 of the At.FT protein sequence; and/or valine or cysteine at the amino acid position corresponding to position 132 of the At.FT protein sequence.
[67] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложены рекомбинантные молекула ДНК, вектор или конструкция, содержащие полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок FT, которая функционально связана с одним или более промоторами и/или другими регуляторными элементами, чьей функцией в клетке растения является регуляция или смещение времени и/или локации экспрессии FT, при трансформации в растение. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансген FT может находиться в первой экспрессионной кассете и использоваться вместе со второй экспрессионной кассетой, содержащей последовательность ДНК пригодную для транскрипции, которая соответствует по меньшей мере части трансгена FT и/или комплементарной с ней последовательности, и кодирует молекулу РНК, которая нацеливает трансген FT для супрессии. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансген FT может содержать целевой сайт для эндогенной молекулы РНК, которая может быть нацелена на трансген FT и инициировать его супрессию.[67] According to embodiments of the present invention, there is provided a recombinant DNA molecule, vector, or construct comprising a polynucleotide sequence encoding an FT protein that is operably linked to one or more promoters and/or other regulatory elements whose function in a plant cell is to regulate or shifting the timing and/or location of FT expression upon transformation into a plant. In accordance with some embodiments of the invention, the FT transgene may be located in a first expression cassette and used in conjunction with a second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription that corresponds to at least a portion of the FT transgene and/or its complementary sequence, and encodes an RNA molecule , which targets the FT transgene for suppression. In accordance with some embodiments of the invention, the FT transgene may contain a target site for an endogenous RNA molecule that can target the FT transgene and initiate its suppression.
[68] Как общепринято считать в данной области техники, термин «промотор» в целом может относиться к последовательности ДНК, которая содержит сайт связывания РНК-полимеразы, сайт инициации транскрипции и/или TATA-бокс и вызывает, инициирует, регулирует, поддерживает и/или стимулирует транскрипцию и экспрессию связанной пригодной для транскрипции полинуклеотидной последовательности и/или гена (или трансгена). Промотор может быть создан синтетически, сконструирован, варьирован и/или получен из известной или природной промоторной последовательности или другой промоторной последовательности (например, предложенной в данном документе). Промотор также может включать химерный промотор, содержащий комбинацию двух или более гетерологичных последовательностей. Таким образом, промотор согласно данному изобретению может включать варианты промоторных последовательностей, которые являются сходными по композиции, но не идентичными с другими промоторными последовательностями, предложенными в данном документе. В контексте данного документа термин «функционально связанный» относится к такой функциональной связи между промотором или другим регуляторным элементом и связанной пригодной для транскрипции полинуклеотидной последовательностью или кодирующей последовательностью гена (или трансгена), что функция промотора и т. д. состоит в инициации, поддержании, изменении, вызывании, регуляции и/или стимуляции транскрипции и экспрессии связанной кодирующей или пригодной для транскрипции полинуклеотидной последовательности, по меньшей мере в конкретной (-ых) ткани (-ях), на конкретной (-ых) стадии (-ях) развития и/или в других определенных условиях. Выражение «промотор пригодный для экспрессии в растениях» относится к промотору, который можно использовать для экспрессии в растении, клетке растения и/или ткани растения связанной кодирующей последовательности, трансгена или пригодной для транскрипции полинуклеотидной последовательности, которая функционально связана с промотором.[68] As commonly understood in the art, the term "promoter" can generally refer to a DNA sequence that contains an RNA polymerase binding site, a transcription initiation site, and/or a TATA box and causes, initiates, regulates, maintains, and/ or stimulates transcription and expression of an associated transcribable polynucleotide sequence and/or gene (or transgene). A promoter can be synthetically created, engineered, varied, and/or derived from a known or natural promoter sequence, or another promoter sequence (eg, as provided herein). The promoter may also include a chimeric promoter containing a combination of two or more heterologous sequences. Thus, the promoter of this invention may include variants of promoter sequences that are similar in composition to, but not identical to, other promoter sequences provided herein. In the context of this document, the term "operably linked" refers to such a functional relationship between a promoter or other regulatory element and the associated transcriptional polynucleotide sequence or coding sequence of a gene (or transgene) such that the function of the promoter, etc., is to initiate, maintain, alteration, induction, regulation and/or stimulation of transcription and expression of the associated coding or transcribable polynucleotide sequence, at least in a particular tissue(s), at a particular developmental stage(s), and/ or under certain other conditions. The term “plant-expressible promoter” refers to a promoter that can be used to express in a plant, plant cell, and/or plant tissue an associated coding sequence, a transgene, or a transcribable polynucleotide sequence that is operably linked to the promoter.
[69] Промотор можно классифицировать в соответствии с различными критериями, связанными с профилем экспрессии кодирующей последовательностью или гена (включая трансген), функционально связанной с промотором, например, как конститутивный, связанный с развитием, тканеспецифический, индуцибельный и т. д. Промоторы, которые инициируют транскрипцию во всех или в большинстве тканей растения, называются «конститутивными» промоторами. Промоторы, которые инициируют транскрипцию во время определенных периодов или стадий развития, называются «связанными с развитием» промоторами. Промоторы, чья экспрессия усиливается в определенных тканях растения по сравнению с другими тканями растения, называются «тканеусиленными» или «тканепредпочтительными» промоторами. Таким образом, «тканепредпочтительный» промотор вызывает относитеьно большую или предпочтительную экспрессию в конкретной (-ых) ткани (-ях) растения, но имеет более низкие уровни экспрессии в другой (-их) ткани (-ях) растения. Промоторы, которые обеспечивают экспрессию в конкретной (-ых) ткани (-ях) растения, но при этом в других тканях растения экспрессия незначительна или отсутствует, называются «тканеспецифическими» промоторами. Промотор, который обеспечивает экспрессию в конкретном типе клеток растения, называется «специфическим в отношении типа клеток» промотором. «Индуцибельным» промотором называется промотор, который инициирует транскрипцию в ответ на внешний стимул, такой как холод, засуха, тепло или свет или другие стимулы, такие как повреждение или применение химических веществ. Промотор также можно классифицировать в терминах его происхождения как гетерологичный, гомологичный, химерный, синтетический и т. д. Термин «гетерологичный» в отношении промотора или другой регуляторной последовательности, связанной с полинуклеотидной последовательностью (например, последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, кодирующей последовательностью, геном или трансгеном), относится к промотору или регуляторной последовательности, которые не связаны с такой полинуклеотидной последовательностью в природе, например, промотор или регуляторная последовательность имеют происхождение, отличное от связанной с ними полинуклеотидной последовательности, и/или в природе не встречаются в виде растения, подлежащем трансформации промотором или регуляторной последовательностью. В более широком смысле термин «гетерологичный» включает комбинацию двух или более молекул или последовательностей ДНК, если такая комбинация обычно не встречается в природе. В контексте данного документа «обычно не встречается в природе» означает не встречается в природе без вмешательства человека. Например, две или более молекул или последовательностей ДНК будут гетерологичными в отношении друг друга, если они обычно находятся в разных геномах или в разных локусах одного генома, или если они не скомбинированы идентичным образом в природе. В соответствии со многими вариантами реализации изобретения промотор экспрессии в растении функционально связанный с полинуклеотидной последовательностью, кодирующей белок FT, является гетерологичным по отношению к полинуклеотидной последовательности, кодирующей белок FT.[69] A promoter can be classified according to various criteria related to the expression profile of a coding sequence or gene (including a transgene) operably linked to the promoter, such as constitutive, developmental, tissue-specific, inducible, etc. Promoters that initiate transcription in all or most plant tissues are called "constitutive" promoters. Promoters that initiate transcription during certain developmental periods or stages are referred to as "developmental" promoters. Promoters whose expression is upregulated in certain plant tissues relative to other plant tissues are referred to as "tissue-enhanced" or "tissue-preferred" promoters. Thus, a "tissue-preferred" promoter causes relatively greater or preferential expression in a particular plant tissue(s) but has lower levels of expression in the other plant tissue(s). Promoters that provide expression in a particular plant tissue(s) but little or no expression in other plant tissues are referred to as "tissue-specific" promoters. A promoter that allows expression in a particular cell type of a plant is referred to as a "cell type-specific" promoter. An "inducible" promoter is a promoter that initiates transcription in response to an external stimulus such as cold, drought, heat or light, or other stimuli such as injury or the application of chemicals. A promoter can also be classified in terms of its origin as heterologous, homologous, chimeric, synthetic, etc. The term "heterologous" in relation to a promoter or other regulatory sequence associated with a polynucleotide sequence (e.g., a transcriptionable DNA sequence, a coding sequence, a genome or transgene) refers to a promoter or regulatory sequence that is not naturally associated with such a polynucleotide sequence, e.g., the promoter or regulatory sequence is of a different origin than its associated polynucleotide sequence and/or does not naturally occur in the plant species subject to transformation with a promoter or regulatory sequence. In a broader sense, the term "heterologous" includes a combination of two or more DNA molecules or sequences, if such a combination does not normally occur in nature. In the context of this document, “not normally found in nature” means not found in nature without human interference. For example, two or more DNA molecules or sequences will be heterologous with respect to each other if they are normally found in different genomes or at different loci in the same genome, or if they are not combined in an identical manner in nature. In accordance with many embodiments of the invention, a plant expression promoter operably linked to a polynucleotide sequence encoding an FT protein is heterologous to a polynucleotide sequence encoding an FT protein.
[70] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложены рекомбинантные молекула ДНК, вектор или конструкция, содержащие флоригенный трансген FT или кодирующую последовательность, функционально связанные с промотором, который является функциональным в растении, которые можно вносить или трансформировать в растение, чтобы изменить связанный с цветением, генеративностью или урожаем признак или фенотип. В вариантах реализации данного изобретения предложена рекомбинантная молекула ДНК, содержащая трансген FT или кодирующую последовательность, функционально связанные с промотором «вегетативной стадии», чтобы при внесении или трансформации в растение вызывать экспрессию трансгена FT на более ранних стадиях развития растения (т. е. во время фазы вегетативного роста растения) для получения повышенного уровня FT в целевых тканях по сравнению с тем, который в ином случае был бы в растении дикого типа на той же стадии развития. Время экспрессии трансгена FT во время вегетативной (-ых) стадии (-ий) развития может быть важным для влияния на один или более связанных с генеративностью, цветением и/или урожайностью признаков иди фенотипов посредством обеспечения временно-индуктивного сигнала для генерации увеличенного количества флоральных меристем и продуктивных цветков в одном или более узлах растения. Экспрессия на вегетативной стадии может быть нужна для инициации раннего цветения и возможности улучшения связанных с генеративностью, цветением и/или урожайностью признаков иди фенотипов, таких как большее число цветков, бобов и т. д. на узел растения. Не ограничиваясь какой-либо теорией, было сделано предположение, что экспрессия трансгена FT в растении на вегетативной стадии может приводить к синхронизации и/или повышению раннего цветения в одном или более узлах с получение большего числа цветков на узел растения. Промоторы, описанные ниже как часть данного изобретения, обеспечивают варианты для регуляции времени экспрессии FT.[70] Embodiments of the present invention provide a recombinant DNA molecule, vector, or construct comprising a florigenic FT transgene or a coding sequence operably linked to a promoter that is functional in a plant, which can be introduced or transformed into a plant to alter the associated flowering, generative, or yield trait or phenotype. Embodiments of the present invention provide a recombinant DNA molecule comprising an FT transgene or coding sequence operably linked to a "vegetative stage" promoter such that, when introduced or transformed into a plant, the expression of the FT transgene is expressed at earlier stages of plant development (i.e., during phase of vegetative growth of the plant) to obtain an increased level of FT in target tissues compared to what would otherwise be in a wild-type plant at the same stage of development. The timing of FT transgene expression during the vegetative stage(s) of development may be important to influence one or more generative, flowering and/or yield related traits or phenotypes by providing a temporally inductive signal to generate increased numbers of floral meristems and productive flowers in one or more nodes of the plant. Expression at the vegetative stage may be needed to initiate early flowering and possibly improve generative, flowering and/or yield related traits or phenotypes such as more flowers, pods, etc. per plant node. Without wishing to be bound by theory, it has been suggested that expression of the FT transgene in a vegetative stage plant may result in synchronization and/or increased early flowering at one or more nodes to produce more flowers per plant node. The promoters described below as part of this invention provide options for regulating the timing of FT expression.
[71] В контексте данного документа промотор «вегетативной стадии» включает любой промотор, который инициирует, вызывает, регулирует и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время одной или более вегетативных стадий развития растения, например, во время одной или более из Ve, Vc, V1, V2, V3, V4 и т. д., и/или любой или всех более поздних вегетативных стадий развития (например, вплоть до стадии Vn). Другими словами термин «вегетативная стадия» относится к вегетативной (-ым) стадии (-ям) развития растения в целом. Такой промотор «вегетативной стадии» может быть дополнительно определен как инициирующий, вызывающий, регулирующий и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена/трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции в одной или более вегетативных тканях растения, таких как одна или более вегетативных меристематических тканей. Такой промотор «вегетативной стадии» может быть дополнительно определен как «предпочтительный в отношении вегетативной стадии» промотор, который инициирует, вызывает, регулирует и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции по меньшей мере предпочтительно или главным образом, если не исключительно, во время одной или более вегетативных стадий развития растения (в противоположность генеративным стадиям). При этом каждый из промотора «вегетативной стадии» и «предпочтительного в отношении вегетативной стадии» промотора также может обеспечивать, допускать, вызывать, регулировать и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время генеративной (-ых) фазы (фаз) или стадии (-ий) развития в одной или более клетках или тканях растения, например, в одной или более цветочных или генеративных тканях. В действительности промотор «вегетативной стадии» может даже инициировать, вызывать, регулировать и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции в одной или более генеративных или цветочных тканях в более высоком уровне или в большей степени, чем в вегетативной (-ых) ткани (-ях), при условии, что промотор «вегетативной стадии» также инициирует, вызывает, регулирует и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время одной или более вегетативных стадий развития растения.[71] As used herein, a "vegetative stage" promoter includes any promoter that initiates, causes, regulates, etc., the transcription or expression of an associated gene, transgene, or transcriptionable DNA sequence during one or more of the vegetative stages of development. plants, for example, during one or more of Ve, Vc, V1, V2, V3, V4, etc., and/or any or all of the later vegetative stages of development (eg, up to the V n stage). In other words, the term "vegetative stage" refers to the vegetative stage(s) of development of the plant as a whole. Such a "vegetative stage" promoter can be further defined as initiating, causing, regulating, etc., the transcription or expression of an associated gene/transgene or DNA sequence suitable for transcription in one or more vegetative plant tissues, such as one or more vegetative tissues. meristematic tissues. Such a "vegetative stage" promoter can be further defined as a "vegetative stage preferred" promoter that initiates, causes, regulates, etc., the transcription or expression of an associated gene, transgene or DNA sequence suitable for transcription at least preferably or mainly, if not exclusively, during one or more of the vegetative stages of the plant (as opposed to the generative stages). Moreover, each of the "vegetative stage" promoter and the "preferred vegetative stage" promoter can also allow, allow, cause, regulate, etc., the transcription or expression of its associated gene, transgene or DNA sequence suitable for transcription during generative (s) phase (s) or stage (s) of development in one or more cells or tissues of a plant, for example, in one or more floral or generative tissues. In fact, a "vegetative stage" promoter may even initiate, cause, regulate, etc., the transcription or expression of its associated gene, transgene, or transcriptional DNA sequence in one or more generative or floral tissues at a higher level or to a greater extent. than in the vegetative tissue(s), provided that the "vegetative stage" promoter also initiates, causes, regulates, etc., the transcription or expression of its associated gene, transgene or DNA sequence suitable for transcription during the time of one or more vegetative stages of plant development.
[72] Признаки и характеристики, связанные с вегетативными стадиями развития для заданного вида растения, известны в данной области техники. В случае двудольных растений вегетативные морфологические признаки и характеристики растения во время вегетативных стадий развития могут включать определенную форму семядоли, наличие вегетативных меристем (апикальной, латеральной/аксиллярной и корневой), расположение листьев, форму листьев, форму края листьев, жилкование листьев, черешки, прилистники, раструбы, подсемядольное колено и корни. В соответствии с вариантами реализации данного изобретения промотор «вегетативной стадии» также может быть дополнительно определен по конкретной вегетативной стадии, во время которой он впервые вызывает, инициирует и т. д. наблюдаемую или выраженную транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена (или трансгена). Например, промотор вегетативной стадии может представлять собой промотор стадии Vc, промотор стадии V1, промотор стадии V2, промотор стадии V3 и т. д. Следовательно, промотор «стадии Vc» определяется как промотор вегетативной стадии, который впервые инициирует или вызывает транскрипцию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время стадии Vc развития растения, промотор «стадии V1» определяется как промотор вегетативной стадии, который впервые инициирует или вызывает транскрипцию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время стадии V1 развития растения, промотор «стадии V2» определяется как промотор вегетативной стадии, который впервые инициирует или вызывает транскрипцию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время стадии V2 развития растения и т. д., хотя экспрессия связанного гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции может происходить непрерывно или с перерывами в одной или более тканях во время более поздних вегетативных (и/или генеративных) стадий развития. Специалист в данной области техники сможет определить время экспрессии заданного гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время развития растения, используя различные методы и техники молекулярного анализа, известные в данной области техники.[72] The traits and characteristics associated with vegetative stages of development for a given plant species are known in the art. In the case of dicotyledonous plants, vegetative morphological characters and characteristics of the plant during vegetative stages of development may include specific cotyledon shape, presence of vegetative meristems (apical, lateral/axillary and root), leaf arrangement, leaf shape, leaf edge shape, leaf venation, petioles, stipules , bells, hypocotyl genu and roots. In accordance with embodiments of the present invention, a "vegetative stage" promoter can also be further defined by the specific vegetative stage during which it first causes, initiates, etc. observed or expressed transcription or expression of its associated gene (or transgene). For example, a vegetative stage promoter can be a Vc stage promoter, a V1 stage promoter, a V2 stage promoter, a V3 stage promoter, etc. Therefore, a “Vc stage” promoter is defined as a vegetative stage promoter that first initiates or causes transcription of its associated gene, transgene or DNA sequence available for transcription during the Vc stage of plant development, a "stage V1" promoter is defined as a vegetative stage promoter that first initiates or causes the transcription of its associated gene, transgene or DNA sequence available for transcription during the V1 stage of development plant, a "stage V2" promoter is defined as a vegetative stage promoter that first initiates or causes transcription of its associated gene, transgene, or DNA sequence suitable for transcription during the V2 stage of plant development, etc., although the expression of the associated gene, transgene, or DNA sequence suitable for trans Violations may occur continuously or intermittently in one or more tissues during the later vegetative (and/or generative) stages of development. One skilled in the art will be able to determine the timing of expression of a given gene, transgene, or DNA sequence suitable for transcription during plant development using various molecular analysis methods and techniques known in the art.
[73] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения промотор «вегетативной стадии» может включать конститутивный, тканепредпочтительный или тканеспецифический промотор. Например, промотор вегетативной стадии может регулировать экспрессию связанного с ним гена/трансгена FT или последовательности ДНК пригодной для транскрипции в одной или более тканях растения, например, в одном или более из корней, стеблей, листьев, меристем и т. д. во время вегетативной (-ых) стадии (-ий) развития растения. При этом такой промотор вегетативной стадии может предпочтительно регулировать экспрессию связанного с ним трансгена FT или кодирующей последовательности, или последовательности ДНК пригодной для транскрипции в одной или более меристем растения. В соответствии со многими вариантами реализации изобретения промотор «вегетативной стадии» может быть «меристемо-специфическим» или «меристемо-предпочтительным» промотором, который вызывает экспрессию трансгена FT или кодирующей последовательности, или последовательности ДНК пригодной для транскрипции в меристематической ткани. Известно, что белки FT функционируют в меристеме растения, помогая инициировать переход от вегетативного к генеративному росту после транслокации белка FT из листьев. В противоположность этому, в вариантах реализации данного изобретения предложена экспрессия трансгена FT непосредственно в меристеме растения для индукции цветения и придания растению измененного связанного с генеративностью и/или урожайностью признака или фенотипа. Таким образом, в соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложены рекомбинантные молекула ДНК, конструкция или вектор, содержащие трансген FT или кодирующую последовательность, функционально связанные с «меристемо-специфическим» или «меристемо-предпочтительным» промотором, который регулирует экспрессию трансгена FT по меньшей мере предпочтительно в одной или более меристематических тканях растения, при трансформации в растение. В контексте данного документа «меристемо-предпочтительный промотор» относится к промоторам, которые предпочтительно вызывают экспрессию связанного гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции по меньшей мере в одной меристематической ткани растения по сравнению с другими тканями растения, например, в одной или более апикальных и/или аксиллярных меристемах, тогда как «меристемо-специфический промотор» относится к промоторам, которые вызывают экспрессию связанного гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции исключительно (или почти исключительно) по меньшей мере в одной меристематической ткани растения.[73] According to embodiments of the present invention, the "vegetative stage" promoter may include a constitutive, tissue-preferred, or tissue-specific promoter. For example, a vegetative stage promoter can regulate the expression of an associated FT gene/transgene or DNA sequence suitable for transcription in one or more plant tissues, e.g., one or more of roots, stems, leaves, meristems, etc., during vegetative growth. (s) stage (s) of plant development. However, such a vegetative stage promoter may preferably regulate the expression of an associated FT transgene or a coding sequence or a DNA sequence suitable for transcription in one or more plant meristems. According to many embodiments of the invention, the "vegetative stage" promoter can be a "meristem-specific" or "meristem-preferred" promoter that causes the expression of an FT transgene or a coding sequence or DNA sequence suitable for transcription in a meristematic tissue. FT proteins are known to function in the plant meristem to help initiate the transition from vegetative to generative growth following translocation of the FT protein from leaves. In contrast, embodiments of the present invention provide expression of an FT transgene directly in the plant meristem to induce flowering and impart an altered generative and/or yield related trait or phenotype to the plant. Thus, according to embodiments of the present invention, there is provided a recombinant DNA molecule, construct, or vector comprising an FT transgene or a coding sequence operably linked to a "meristem-specific" or "meristem-preferred" promoter that regulates the expression of the FT transgene at least preferably in one or more meristematic tissues of the plant, upon transformation into a plant. As used herein, "meristem-preferred promoter" refers to promoters that preferentially cause the expression of a linked gene, transgene, or DNA sequence suitable for transcription in at least one meristematic plant tissue over other plant tissues, e.g., one or more apical and/or axillary meristems, while "meristem-specific promoter" refers to promoters that cause the expression of a linked gene, transgene or transcriptionable DNA sequence exclusively (or almost exclusively) in at least one meristem tissue of a plant.
[74] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложена рекомбинантная молекула ДНК, содержащая кодирующую последовательность FT, функционально связанную с промотором вегетативной стадии, который также может быть меристемо-предпочтительным и/или меристемо-специфическим промотором. Например, промотор может включать промотор pAt.Erecta из Arabidopsis (SEQ ID NO: 31) или его функциональные фрагмент или часть. Два примера усеченной части промотора pAt.Erecta в соответствии с вариантами реализации данного приведены как SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 48. Смотрите, например, Yokoyama, R. et al., ʺThe Arabidopsis ERECTA gene is expressed in the shoot apical meristem and organ primordia,ʺ The Plant Journal 15(3): 301-310 (1998). pAt.Erecta является примером промотора вегетативной стадии, который также является меристемо-предпочтительным. Другие меристемо-предпочтительные или меристемо-специфические промоторы вегетативной стадии были идентифицированы на основании их характерного профиля экспрессии (смотрите, например, примеры 4 и 7 ниже), и их также можно использовать для управления экспрессией FT в соответствии с вариантами реализации данного изобретения. Например, были идентифицированы промоторы из следующих генов рецептор-подобной киназы (RLK), которые можно использовать как меристемо-предпочтительные промоторы вегетативной стадии: Glyma10g38730 (SEQ ID NO: 33), Glyma09g27950 (SEQ ID NO: 34), Glyma06g05900 (SEQ ID NO: 35) и Glyma17g34380 (SEQ ID NO: 36) и любые их функциональные части. Меристемо-предпочтительные промоторы вегетативной стадии в соответствии с вариантами реализации данного изобретения также могут включать промоторы генов рецептор-подобной киназы (RLK) из картофеля: PGSC0003DMP400032802 (SEQ ID NO: 37) и PGSC0003DMP400054040 (SEQ ID NO: 38) и любые их функциональные части. С учетом приведенной в данном документе характеристики промотора pAt.Erecta, управляющего экспрессией FT, и аналогичных профилей экспрессии, определенных для других генов RLK, Erecta или Erecta-подобных (Erl), меристемо-предпочтительные или меристемо-специфические промоторы вегетативной стадии согласно данному изобретению могут дополнительно включать любые известные или идентифицированные позже промоторные последовательности генов RLK, Erecta и Erecta-подобных, из других видов двудольных, имеющих профиль экспрессии на вегетативной стадии в меристеме растений.[74] According to embodiments of the present invention, a recombinant DNA molecule is provided comprising an FT coding sequence operably linked to a vegetative stage promoter, which may also be a meristem-preferred and/or meristem-specific promoter. For example, the promoter may include the pAt. Erecta promoter from Arabidopsis (SEQ ID NO: 31) or a functional fragment or portion thereof. Two examples of a truncated portion of the pAt. Erecta promoter according to embodiments of this are given as SEQ ID NO: 32 and SEQ ID NO: 48. See, for example, Yokoyama, R. et al., ʺThe Arabidopsis ERECTA gene is expressed in the shoot apical meristem and organ primordia, The Plant Journal 15 (3): 301-310 (1998). pAt.Erecta is an example of a vegetative stage promoter that is also meristem-preferred. Other meristem-preferred or meristem-specific vegetative stage promoters have been identified based on their characteristic expression profile (see, for example, Examples 4 and 7 below) and can also be used to drive FT expression in accordance with embodiments of the present invention. For example, promoters from the following receptor-like kinase (RLK) genes have been identified that can be used as meristem-preferred vegetative stage promoters: Glyma10g38730 (SEQ ID NO: 33), Glyma09g27950 (SEQ ID NO: 34), Glyma06g05900 (SEQ ID NO: : 35) and Glyma17g34380 (SEQ ID NO: 36) and any functional parts thereof. Meristem-preferred vegetative stage promoters according to embodiments of the present invention may also include promoters of potato receptor-like kinase (RLK) genes: PGSC0003DMP400032802 (SEQ ID NO: 37) and PGSC0003DMP400054040 (SEQ ID NO: 38) and any functional portions thereof . Based on the characterization of the pAt.Erecta promoter driving FT expression herein and similar expression profiles defined for other RLK, Erecta or Erecta -like ( Erl ) genes, meristem-preferred or meristem-specific vegetative stage promoters of the invention may additionally include any known or later identified promoter sequences for the RLK, Erecta and Erecta-like genes from other dicotyledonous species having a vegetative stage expression profile in the plant meristem.
[75] Дополнительные примеры меристемо-предпочтительных или меристемо-специфических промоторов могут включать промоторы из следующих генов Arabidopsis: Pinhead (At.PNH) (SEQ ID NO: 39), Angustifolia 3 или At.AN3 (SEQ ID NO: 40), At.MYB17 (At.LMI2 или Late Meristem Identity 2; At3g61250) (SEQ ID NO: 41), Kinesin-подобный ген (At5g55520) (SEQ ID NO: 42), AP2/B3-подобные гены, включая At.REM17 (SEQ ID NO: 43) или At.REM19, и Erecta-подобные гены 1 и 2, At.Erl1 (SEQ ID NO: 44) и At.Erl2 (SEQ ID NO: 45) и любые их функциональные части. Другим примером является промотор At.AP1 (pAt.AP1 или pAP1) из Arabidopsis (SEQ ID NO: 49) или его функциональная часть. Однако промотор pAt.AP1 может считаться промотором более поздней вегетативной и генеративной стадии. Учитывая поздний профиль экспрессии на вегетативной и генеративной стадии, промотор pAt.AP1 и родственные промоторы можно применять для управления экспрессией трансгена FT и/или супрессионного элемента трансгена FT. Дополнительные примеры, идентифицированные из сходных генов и/или генов, имеющих сходный профиль экспрессии с промотором pAt.AP1 в нативных видах растений, могут включать промотор из одного из следующих генов: AT1G26310.1 (SEQ ID NO: 50), AT3G30260.1 (SEQ ID NO: 51) или AT5G60910.1 (SEQ ID NO: 52) из Arabidopsis; Glyma01g08150 (SEQ ID NO: 53), Glyma02g13420 (SEQ ID NO: 54), Glyma08g36380 (SEQ ID NO: 55) или Glyma16g13070 (SEQ ID NO: 56) из сои; Solyc02g065730 (SEQ ID NO: 57), Solyc02g089210 (SEQ ID NO: 58), Solyc03g114830 (SEQ ID NO: 59) или Solyc06g069430 (SEQ ID NO: 60) из томата; или GRMZM2G148693 (SEQ ID NO: 61), GRMZM2G553379 (SEQ ID NO: 62), GRMZM2G072582 (SEQ ID NO: 63), или GRMZM2G147716 (SEQ ID NO: 64) из кукурузы, или любую их функциональную часть. [75] Additional examples of meristem-preferred or meristem-specific promoters may include promoters from the following Arabidopsis genes: Pinhead ( At.PNH ) (SEQ ID NO: 39),
[76] Промотор вегетативной стадии, который также может быть меристемо-предпочтительным и/или меристемо-специфическим промотором, может включать как ранние, так и поздние промоторы вегетативной стадии в зависимости от профиля их экспрессии во время вегетативных стадий развития. Промотор «ранней вегетативной стадии» впервые инициирует или вызывает наблюдаемую или выраженную транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена/трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время одной или более ранних вегетативных стадий (т. е. стадий Ve-V5), тогда как промотор «поздней вегетативной стадии» впервые инициирует или вызывает наблюдаемую или выраженную транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена/трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время одной или более поздних вегетативных стадий (т. е. стадии V6 и позже). Промотор ранней или поздней вегетативной стадии также может быть предпочтительным в отношении ранней или поздней вегетативной стадии промотором. «Предпочтительный в отношении ранней вегетативной стадии» промотор инициирует, вызывает, регулирует и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена/трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции преимущественно или в большей степени во время одной или более ранних вегетативных стадий (т. е. стадий Ve-V5) по сравнению с более поздними вегетативными стадиями. Аналогично, «предпочтительный в отношении поздней вегетативной стадии» промотор инициирует, вызывает, регулирует и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена/трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции преимущественно или в большей степени во время одной или более поздних вегетативных стадий (т. е. стадии V6 и позже) по сравнению с более ранними вегетативными стадиями. Соответственно, промотор ранней вегетативной стадии также может быть предпочтительным в отношении поздней вегетативной стадии промотором, если промотор впервые инициирует или вызывает наблюдаемую или выраженную транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена/трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время более ранних вегетативных стадий, но также инициирует, вызывает, регулирует и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена/трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции преимущественно или в большей степени во время более поздних вегетативных стадий. Перечисленные выше примеры промоторов вегетативной стадии могут включать промоторы ранней и поздней вегетативной стадии, которые также могут быть предпочтительными в отношении ранней вегетативной стадии или предпочтительными в отношении поздней вегетативной стадии.[76] The vegetative stage promoter, which can also be a meristem-preferred and/or meristem-specific promoter, can include both early and late vegetative stage promoters depending on their expression profile during the vegetative stages of development. The "early vegetative stage" promoter first initiates or causes observable or pronounced transcription or expression of its associated gene/transgene or transcriptionable DNA sequence during one or more of the early vegetative stages (i.e. Ve-V5 stages), while the promoter "late vegetative stage" first initiates or causes observable or pronounced transcription or expression of its associated gene/transgene or transcriptionable DNA sequence during one or more of the later vegetative stages (i.e., stages V6 and later). An early or late vegetative stage promoter may also be a preferred early or late vegetative stage promoter. An "early vegetative stage preferred" promoter initiates, causes, regulates, etc., the transcription or expression of its associated gene/transgene or transcriptionable DNA sequence predominantly or to a greater extent during one or more of the early vegetative stages (i.e., e. stages Ve-V5) compared to later vegetative stages. Similarly, a "late vegetative stage preferred" promoter initiates, causes, regulates, etc., the transcription or expression of its associated gene/transgene or transcriptionable DNA sequence predominantly or to a greater extent during one or more late vegetative stages ( i.e. stages V6 and later) compared to earlier vegetative stages. Accordingly, an early vegetative stage promoter may also be a preferred late vegetative stage promoter if the promoter first initiates or causes observable or pronounced transcription or expression of an associated gene/transgene or DNA sequence suitable for transcription during the earlier vegetative stages, but also initiates, causes, regulates, etc., the transcription or expression of an associated gene/transgene or DNA sequence suitable for transcription predominantly or to a greater extent during the later vegetative stages. The examples of vegetative stage promoters listed above may include early and late vegetative stage promoters, which may also be early vegetative stage preferred or late vegetative stage preferred.
[77] Полинуклеотидная последовательность промотора вегетативной стадии (или его функциональных фрагмента или части) также может иметь нестрогую идентичность последовательности относительно любого из вышеприведенных промоторов вегетативной стадии и при этом сохранять сходный или идентичный профиль экспрессии связанных последовательности ДНК пригодной для транскрипции, гена или трансгена, функциональной связанных с промотором. Например, промотор вегетативной стадии может содержать полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичной полинуклеотидной последовательности, выбранной из вышеприведенных SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 или 64, или ее функциональной части. «Функциональная часть» известной или предложенной промоторной последовательности определяется как одна или более непрерывных или прерывистых частей известной или предложенной промоторной последовательности, которые могут функционально регулировать, вызывать, стимулировать и т. д. экспрессию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции идентичным или сходным образом с известной или предложенной промоторной последовательностью. С учетом данного изобретения специалист в данной области техники сможет определить, приводит ли промотор, содержащий одну или более частей известной или предложенной промоторной последовательности, и/или имеющий более короткую последовательность или последовательность с менее строгой идентичностью последовательности относительно известной или предложенной промоторной последовательности, к сходному профилю экспрессии и/или сходным фенотипам или эффектам, когда связанный с ним репортерный ген или трансген FT экспрессируется в растении, по сравнению с известной или предложенной промоторной последовательностью.[77] The polynucleotide sequence of a vegetative stage promoter (or a functional fragment or portion thereof) may also have loose sequence identity to any of the above vegetative stage promoters and still retain a similar or identical expression profile of the associated transcriptional DNA sequence, gene or transgene, functional associated with the promoter. For example, a vegetative stage promoter may comprise a polynucleotide sequence that is at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identical to a polynucleotide sequence selected from the above SEQ ID NOs: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 or 64, or her functional part. A "functional portion" of a known or proposed promoter sequence is defined as one or more continuous or discontinuous portions of a known or proposed promoter sequence that can functionally regulate, cause, stimulate, etc., the expression of its associated gene, transgene or DNA sequence suitable for transcription. in an identical or similar manner to a known or proposed promoter sequence. In view of the present invention, one skilled in the art will be able to determine whether a promoter containing one or more parts of a known or proposed promoter sequence and/or having a shorter sequence or a sequence with less strict sequence identity relative to a known or proposed promoter sequence results in a similar expression profile and/or similar phenotypes or effects when its associated reporter gene or FT transgene is expressed in a plant, compared to a known or proposed promoter sequence.
[78] В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения промотор «генеративной стадии» (определенный ниже) может быть функционально связан и использован для экспрессии трансгена FT или кодирующей последовательности, при условии, что промотор генеративной стадии обеспечивает (т. е. инициирует, вызывает, регулирует и т. д.) по меньшей мере некоторый уровень экспрессии трансгена FT во время вегетативной (-ых) стадии (-ий) развития растения для обеспечения сигнала индукции раннего цветения. Примеры промоторов генеративной стадии приведены ниже. Отнесение заданного промотора к категории промотора ранней или поздней вегетативной стадии и/или промотора генеративной стадии зависит от конкретного вида растения, в котором используется промотор. Промотор, имеющий определенный профиль экспрессии в одном виде растения, например, в своем нативном виде растения, может иметь отличный, измененный или смещенный профиль экспрессии при экспрессии в другом виде растения (например, гетерологично в другом виде растения), хотя предполагается, что профиль экспрессии с заданным промотором часто будет сходным (если не идентичным или почти идентичным) для разных видов растений. Например, промотор генеративной стадии в одном виде растения может функционировать как промотор ранней вегетативной стадии при применении для экспрессии трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции в другом виде растения. Таким образом, промотор генеративной стадии можно использовать в некоторых случаях гетерологично для экспрессии трансгена FT и индукции раннего цветения. Например, промотор pAt.AP1 (SEQ ID NO: 49) имеет более предпочтительный в отношении генеративной стадии профиль экспрессии в его нативном растительном виде Arabidopsis, но может регулировать ранний профиль экспрессии на вегетативной стадии в меристеме при гетерологичном применении в растения сои помимо регуляции экспрессии на генеративной стадии.[78] In accordance with some embodiments of the invention, a "generative stage" promoter (defined below) can be operably linked and used to express an FT transgene or coding sequence, provided that the generative stage promoter provides (i.e., initiates, causes, regulates, etc.) at least some level of expression of the FT transgene during the vegetative stage(s) of plant development to provide an early flowering induction signal. Examples of generative stage promoters are shown below. Whether a given promoter is categorized as an early or late vegetative stage promoter and/or a generative stage promoter depends on the particular plant species in which the promoter is used. A promoter that has a particular expression profile in one plant species, e.g., in its native plant species, may have a different, altered, or shifted expression profile when expressed in another plant species (e.g., heterologously in another plant species), although it is contemplated that the expression profile with a given promoter will often be similar (if not identical or nearly identical) across plant species. For example, a generative stage promoter in one plant species can function as an early vegetative stage promoter when used to express a transgene or transcriptionable DNA sequence in another plant species. Thus, the generative stage promoter can be used in some cases heterologously to express the FT transgene and induce early flowering. For example, the pAt.AP1 promoter (SEQ ID NO: 49) has a more generative stage preferred expression profile in its native Arabidopsis plant species, but can regulate an early vegetative stage expression profile in the meristem when applied heterologously to soybean plants in addition to regulating expression at generative stage.
[79] Как указано выше, рекомбинантные молекула ДНК, конструкция или вектор согласно данному изобретению могут содержать экспрессионную кассету, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок FT (т. е. трансген FT), которая функционально связана с промотором вегетативной стадии, который также может быть меристемо-предпочтительным и/или меристемо-специфическим промотором. Кодирующая полинуклеотидная последовательность трансгена FT или экспрессионная кассета также может быть функционально связана с одним или более дополнительными регуляторными элементами, такими как энхансеры, лидерные последовательности, сайты инициации транскрипции (СИТ), линкеры, 5' и 3' нетранслируемые области, интроны, сигналы полиаденилирования, области или последовательности терминации и т. д., которые подходят или необходимы для регуляции или обеспечения экспрессии трансгена FT или кассеты для эффективной выработки белка FT в клетке растения. Такие дополнительные регуляторные элементы могут быть необязательными и использоваться для повышения или оптимизации экспрессии трансгена. В целях данного изобретения «энхансер» можно отличить от «промотора» по тому, что в энхансере обычно отсутствует сайт инициации транскрипции, TATA-бокс или эквивалентная последовательность, и поэтому его одного недостаточно для управления транскрипцией. В контексте данного документа «лидерная последовательность» может быть в общем случае определена как последовательность ДНК нетранслируемой 5´ области (5´ НТО) гена (или трансгена) между сайтом инициации транскрипции (СИТ) и стартовым сайтом кодирующей белок последовательности.[79] As indicated above, a recombinant DNA molecule, construct, or vector of the invention may comprise an expression cassette containing a polynucleotide sequence encoding an FT protein (i.e., an FT transgene) that is operably linked to a vegetative stage promoter, which may also be meristem-preferred and/or meristem-specific promoter. The coding polynucleotide sequence of the FT transgene or expression cassette can also be operably linked to one or more additional regulatory elements such as enhancers, leader sequences, transcription initiation sites (TSITs), linkers, 5' and 3' untranslated regions, introns, polyadenylation signals, termination regions or sequences, etc., that are appropriate or necessary to regulate or allow expression of the FT transgene or cassette for efficient production of the FT protein in the plant cell. Such additional regulatory elements may be optional and used to increase or optimize the expression of the transgene. For the purposes of this invention, an "enhancer" can be distinguished from a "promoter" in that an enhancer typically lacks a transcription initiation site, TATA box, or equivalent sequence, and is therefore insufficient alone to direct transcription. In the context of this document, a "leader sequence" can be generally defined as the DNA sequence of the untranslated 5' region (5' UTR) of a gene (or transgene) between the transcription initiation site (TSI) and the start site of the protein coding sequence.
[80] В контексте данного документа в отношении полинуклеотида «конструкция» представляет собой сегмент или последовательность полинуклеотида, содержащие один или более элементов последовательности, таких как кодирующая последовательность или последовательность ДНК пригодная для транскрипции, и один или более экспрессионных или регуляторных элементов, таких как промотор, энхансер и т. д. «Экспрессионная кассета» представляет собой тип конструкции, содержащей кодирующую последовательность или последовательность ДНК пригодную для транскрипции, которая может экспрессировать кодирующую последовательность или последовательность ДНК пригодную для транскрипции в подходящем хозяине, таком как растительная или бактериальная клетка, и один или более промоторов и/или регуляторных элементов, функционально связанных с кодирующей последовательностью или последовательностью ДНК пригодной для транскрипции. «Вектор» представляет собой полинуклеотид или молекулу ДНК, которые могут содержать одну или более конструкций и/или экспрессионных кассет и которые подходят для стабильности, хранения или других применений или целей, таких как доставка, трансформация и/или поддержание в растении или клетке-хозяине. «Вектор» может включать плазмиду или кольцевую молекулу ДНК, линейную молекулу ДНК, трансформационный вектор, подходящий для трансформации растений, и т. д. Молекула ДНК или вектор могут содержать одну или более конструкций, экспрессионных кассет, селективных маркеров, элементов репликации и/или поддержки и т. д.[80] As used herein in relation to a polynucleotide, a "construct" is a segment or sequence of a polynucleotide containing one or more sequence elements, such as a coding sequence or a DNA sequence suitable for transcription, and one or more expression or regulatory elements, such as a promoter. , enhancer, etc. An "expression cassette" is a type of construct containing a transcriptional coding or DNA sequence that can express a transcriptional coding or DNA sequence in a suitable host, such as a plant or bacterial cell, and one or more promoters and/or regulatory elements operably linked to a coding sequence or DNA sequence suitable for transcription. A "vector" is a polynucleotide or DNA molecule which may contain one or more constructs and/or expression cassettes and which is suitable for stability, storage or other uses or purposes such as delivery, transformation and/or maintenance in a plant or host cell. . A "vector" may include a plasmid or circular DNA molecule, a linear DNA molecule, a transformation vector suitable for plant transformation, etc. A DNA molecule or vector may contain one or more constructs, expression cassettes, selectable markers, replication elements, and/or support, etc.
[81] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения термин «рекомбинантный» в отношении молекулы полинуклеотида (ДНК или РНК), белка, конструкции, вектора и т. д. относится к полинуклеотидной или белковой молекуле или последовательности, которая обычно не встречается в природе и/или находится в условиях, в которых она обычно не встречается в природе, включая молекулу полинуклеотида (ДНК или РНК), белок, конструкцию и т. д., содержащие комбинацию двух или более полинуклеотидных или белковых последовательностей, которые в природе не являлись бы непрерывными или не находились бы вблизи друг друга без вмешательства человека, и/или молекулу ДНК, конструкцию и т. д., содержащие по меньшей мере две последовательности ДНК, гетерологичные по отношению друг к другу. Рекомбинантная молекула ДНК, конструкция и т. д. может содержать последовательности ДНК, которые отделены от других полинуклеотидных последовательностей, которые находятся вблизи таких последовательностей ДНК в природе, и/или последовательность ДНК, которая является смежной (или непрерывной) с другими полинуклеотидными последовательностями, которые в естественных условиях не находятся вблизи друг друга. Рекомбинантная молекула ДНК, конструкция и т. д. также может относиться к молекуле или последовательности ДНК, которая была генетически спроектирована и сконструирована за пределами клетки. Например, рекомбинантная молекула ДНК может включать подходящую плазмиду, вектор и т. д. и может включать линейную или кольцевую молекулу ДНК. Такие плазмиды, векторы и т. д. могут содержать различные вспомогательные элементы, включая прокариотическую точку начала репликации и селективный маркер, а также экспрессирующий FT трансген или экспрессионную кассету, возможно, в дополнение к гену растительного селективного маркера и т. д.[81] In accordance with embodiments of the present invention, the term "recombinant" in relation to a polynucleotide molecule (DNA or RNA), protein, construct, vector, etc. refers to a polynucleotide or protein molecule or sequence that is not normally found in nature and / or is under conditions in which it is not normally found in nature, including a polynucleotide molecule (DNA or RNA), protein, construct, etc., containing a combination of two or more polynucleotide or protein sequences that would not be contiguous in nature or would not be close to each other without human intervention, and/or a DNA molecule, construct, etc., containing at least two DNA sequences that are heterologous with respect to each other. A recombinant DNA molecule, construct, etc. may contain DNA sequences that are separate from other polynucleotide sequences that are found in the vicinity of such DNA sequences in nature, and/or a DNA sequence that is contiguous (or contiguous) with other polynucleotide sequences that are under natural conditions are not close to each other. Recombinant DNA molecule, construct, etc. can also refer to a DNA molecule or sequence that has been genetically designed and constructed outside of a cell. For example, a recombinant DNA molecule may include a suitable plasmid, vector, etc., and may include a linear or circular DNA molecule. Such plasmids, vectors, etc. may contain various accessory elements, including a prokaryotic origin and a selection marker, as well as an FT-expressing transgene or expression cassette, possibly in addition to a plant selection marker gene, etc.
[82] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложена вторая экспрессионная кассета, содержащая пригодную для транскрипции полинуклеотидную или ДНК-последовательность, функционально связанную с промотором пригодным для экспрессии в растениях, при этом последовательность ДНК пригодная для транскрипции содержит последовательность, которая соответствует по меньшей мере части трансгена FT и/или комплементарной с ней последовательности и нацелена на трансген FT для супрессии. Транскрибируемая последовательность ДНК может кодировать молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая является комплементарной по меньшей мере части пре-мРНК или зрелой мРНК, кодируемой полинуклеотидной последовательностью, кодирующей белок FT (т. е. трансген FT), так что молекула РНК подавляет трансген FT. Соответственно, предложены рекомбинантные молекула ДНК, конструкция или вектор для трансформации в растение, содержащие вторую экспрессионную кассету. Такие рекомбинантные молекула ДНК, конструкция или вектор могут дополнительно содержать первую экспрессионную кассету, содержащую кодирующую полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок FT (т. е. трансген FT), функционально связанную с первым промотором пригодным для экспрессии в растениях, и при этом вторая экспрессионная кассета содержит последовательность ДНК пригодную для транскрипции, функционально связанную со вторым промотором пригодным для экспрессии в растениях. В альтернативном варианте, могут быть предоставлены две рекомбинантные молекулы ДНК, конструкции или два вектора для трансформации растения, содержащие первую рекомбинантную молекулу ДНК, конструкцию или вектор и вторую рекомбинантную молекулу ДНК, конструкцию или вектор, при этом первая рекомбинантная молекула ДНК, конструкция или вектор содержит первую экспрессионную кассету, содержащую трансген FT, а вторая рекомбинантная молекула ДНК, конструкция или вектор содержит вторую экспрессионную кассету, содержащую последовательность ДНК пригодную для транскрипции, которая содержит последовательность, которая соответствует по меньшей мере части трансгена FT и/или комплементарной с ней последовательности. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения промотор пригодный для экспрессии в растениях функционально связан с последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, которая кодирует молекулу РНК для супрессии гена FT, или же трансген является гетерологичным по отношению к последовательности ДНК пригодной для транскрипции.[82] According to embodiments of the present invention, a second expression cassette is provided comprising a transcriptionable polynucleotide or DNA sequence operably linked to a promoter suitable for expression in plants, wherein the transcriptionable DNA sequence contains a sequence that corresponds to at least part of the FT transgene and/or its complementary sequence and targets the FT transgene for suppression. The transcribed DNA sequence may encode an RNA molecule containing a targeting sequence that is complementary to at least a portion of the pre-mRNA or mature mRNA encoded by a polynucleotide sequence encoding an FT protein (i.e., an FT transgene), such that the RNA molecule represses the FT transgene. Accordingly, a recombinant DNA molecule, construct or vector for transformation into a plant is provided, comprising a second expression cassette. Such recombinant DNA molecule, construct, or vector may further comprise a first expression cassette containing a coding polynucleotide sequence encoding an FT protein (i.e., an FT transgene) operably linked to a first promoter suitable for expression in plants, and wherein the second expression cassette contains a DNA sequence suitable for transcription, operably linked to a second promoter suitable for expression in plants. Alternatively, two recombinant DNA molecules, constructs, or two vectors for plant transformation may be provided, comprising a first recombinant DNA molecule, construct, or vector and a second recombinant DNA molecule, construct, or vector, wherein the first recombinant DNA molecule, construct, or vector comprises the first expression cassette containing the FT transgene, and the second recombinant DNA molecule, construct or vector contains a second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription, which contains a sequence that corresponds to at least part of the FT transgene and/or a complementary sequence with it. In some embodiments, a plant-expressible promoter is operably linked to a transcriptionable DNA sequence that encodes an RNA molecule to suppress the FT gene, or the transgene is heterologous to a transcriptionable DNA sequence.
[83] Для супрессии трансгена FT в соответствии с вариантами реализации данного изобретения можно использовать любой известный в данной области техники способ, включая экспрессию антисмысловых РНК, двухцепочечных РНК (дцРНК) или последовательностей РНК с инвертированными повторами, или посредством совместной супрессии или РНК-интерференции (РНКи) посредством экспрессии малых интерферирующих РНК (миРНК), коротких шпилечных РНК (кшРНК), транс-действующих миРНК (тд-миРНК) или микро-РНК (микроРНК). Смотрите, например, публикации патентных заявок США № 2009/0070898, 2011/0296555 и 2011/0035839, содержание которых включено в данный документ посредством ссылки. Соответственно, молекула РНК, кодируемая последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, может представлять собой антисмысловую РНК, двухцепочечную РНК (дцРНК) или РНК с инвертированными повторами, малую интерферирующую РНК (миРНК), короткую шпилечную РНК (кшРНК), транс-действующую миРНК (тд-миРНК) или микро-РНК (микроРНК), включая РНК-предшественники, такие как миРНК- или микроРНК-предшественники, которые могут процессироваться или расщепляться до зрелой молекулы РНК, такой как зрелая миРНК или микроРНК. В контексте данного документа термин «супрессия» относится к снижению, уменьшению или элиминации уровня экспрессии мРНК и/или белка, кодируемого целевым геном и/или трансгеном в растении, клетке растения или ткани растения, которое может быть ограничено конкретной тканью и/или стадией развития растения в зависимости от промотора, используемого для экспрессии молекулы РНК.[83] Any method known in the art can be used to suppress the FT transgene according to embodiments of the present invention, including expression of antisense RNAs, double-stranded RNAs (dsRNAs), or inverted repeat RNA sequences, or by co-suppression or RNA interference ( RNAi) through the expression of small interfering RNAs (siRNAs), short hairpin RNAs (shRNAs), trans-acting siRNAs (td-miRNAs), or micro-RNAs (miRNAs). See, for example, US Patent Application Publication Nos. 2009/0070898, 2011/0296555, and 2011/0035839, the contents of which are incorporated herein by reference. Accordingly, an RNA molecule encoded by a DNA sequence suitable for transcription can be antisense RNA, double-stranded RNA (dsRNA) or inverted repeat RNA, small interfering RNA (siRNA), short hairpin RNA (shRNA), trans-acting siRNA (td- siRNA) or microRNA (miRNA), including precursor RNAs such as siRNA or microRNA precursors that can be processed or cleaved into a mature RNA molecule, such as a mature siRNA or microRNA. In the context of this document, the term "suppression" refers to the reduction, reduction or elimination of the level of expression of an mRNA and/or protein encoded by a target gene and/or transgene in a plant, plant cell or plant tissue, which may be limited to a particular tissue and/or developmental stage. plants depending on the promoter used to express the RNA molecule.
[84] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложены рекомбинантные молекула ДНК, конструкция или вектор, содержащие последовательность ДНК пригодную для транскрипции и/или элементы супрессии, кодирующие молекулу РНК или последовательность, нацеленные на трансген FT для супрессии, при этом последовательность ДНК пригодная для транскрипции функционально связана с промотором пригодным для экспрессии в растениях. Так как молекула РНК предназначена для супрессии, молекула РНК, кодируемая последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, может являться некодирующей молекулой РНК. В целях данного изобретения «некодирующая молекула РНК» представляет собой молекулу РНК, которая не кодирует белок. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения рекомбинантные молекула ДНК, конструкция или вектор могут содержать первую экспрессионную кассету, содержащую трансген FT, и вторую экспрессионную кассету, содержащую последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии. В альтернативном варианте первая экспрессионная кассета, содержащая трансген FT, и вторая экспрессионная кассета, содержащая последовательность ДНК пригодную для транскрипции для супрессии трансгена FT, могут находиться в двух разных рекомбинантных молекулах ДНК, конструкциях или векторах.[84] In accordance with embodiments of the present invention, a recombinant DNA molecule, construct, or vector is provided, containing a DNA sequence suitable for transcription and/or suppression elements encoding an RNA molecule or sequence targeting an FT transgene for suppression, wherein the DNA sequence is suitable for transcription is operably linked to a promoter suitable for expression in plants. Since the RNA molecule is intended for suppression, the RNA molecule encoded by a DNA sequence suitable for transcription may be a non-coding RNA molecule. For the purposes of this invention, a "non-coding RNA molecule" is an RNA molecule that does not code for a protein. In accordance with some embodiments of the invention, the recombinant DNA molecule, construct, or vector may comprise a first expression cassette containing an FT transgene and a second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression. Alternatively, the first expression cassette containing the FT transgene and the second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription to suppress the FT transgene may be in two different recombinant DNA molecules, constructs or vectors.
[85] Транскрибируемая последовательность ДНК может содержать элемент супрессии, который имеет длину по меньшей мере 15 нуклеотидов, например, длину от около 15 нуклеотидов до около 27 нуклеотидов, или длину 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 нуклеотидов, при этом элемент супрессии соответствует по меньшей мере части целевого трансгена FT, подлежащего супрессии, и/или комплементарной с ним последовательности ДНК. Во многих вариантах реализации изобретения последовательность ДНК пригодная для транскрипции или элемент супрессии могут иметь длину по меньшей мере 17, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22 или по меньшей мере 23 нуклеотидов (или более) (например, длину по меньшей мере 25, по меньшей мере 30, по меньшей мере 50, по меньшей мере 100, по меньшей мере 200, по меньшей мере 300, по меньшей мере 500, по меньшей мере 1000, по меньшей мере 1500, по меньшей мере 2000, по меньшей мере 3000, по меньшей мере 4000 или по меньшей мере 5000 нуклеотидов). В зависимости от длины и последовательности последовательности ДНК пригодной для транскрипции или элемента супрессии могут допускаться одно или более несовпадений в последовательности или некомплементарных оснований без потери функции супрессии. В действительности даже короткие элементы супрессии РНКи с длиной в диапазоне от около 15 нуклеотидов до около 27 нуклеотидов могут иметь одно или более несовпадений или некомплементарных оснований, но при этом эффективно подавлять целевой трансген FT. Соответственно, смысловой или антисмысловой элемент супрессии может содержать последовательность, которая является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной или комплементарной соответствующей последовательности по меньшей мере сегмента или части целевого трансгена FT или ее комплементарной последовательности, соответственно.[85] The DNA sequence to be transcribed may comprise a suppression element that is at least 15 nucleotides in length, e.g., about 15 nucleotides to about 27 nucleotides in length, or 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 or 27 nucleotides, wherein the suppression element corresponds to at least a portion of the target FT transgene to be suppressed and/or its complementary DNA sequence. In many embodiments, a transcriptional DNA sequence or suppression element may be at least 17, at least 19, at least 20, at least 21, at least 22, or at least 23 nucleotides in length (or more) (for example, a length of at least 25, at least 30, at least 50, at least 100, at least 200, at least 300, at least 500, at least 1000, at least 1500, at least 2000, at least 3000, at least 4000 or at least 5000 nucleotides). Depending on the length and sequence of the DNA sequence available for transcription or the suppression element, one or more sequence mismatches or base mismatches can be tolerated without loss of suppression function. In fact, even short RNAi suppressor elements ranging in length from about 15 nucleotides to about 27 nucleotides can have one or more mismatches or non-complementary bases yet effectively suppress the target FT transgene. Accordingly, the sense or antisense suppression element may contain a sequence that is at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical or complementary to the corresponding sequence of at least a segment or portion of the target FT transgene or its complementary sequence, respectively.
[86] Транскрибируемая последовательность ДНК согласно данному изобретению для нацеленной супрессии трансгена FT может содержать один или более из следующих элементов супрессии и/или нацеливающих последовательностей: (a) последовательность ДНК, которая содержит по меньшей мере одну антисмысловую последовательность ДНК, которая является антисмысловой или комплементарной по меньшей мере одному сегменту или одной части целевого трансгена FT; (b) последовательность ДНК, которая содержит множество копий по меньшей мере одной антисмысловой последовательности ДНК, которая является антисмысловой или комплементарной по меньшей мере одному сегменту или одной части целевого трансгена FT; (c) последовательность ДНК, которая содержит по меньшей мере одну смысловую последовательность ДНК, которая содержит по меньшей мере один сегмент или одну часть целевого трансгена FT; (d) последовательность ДНК, которая содержит множество копий по меньшей мере одной смысловой последовательности ДНК, каждая из которых содержит по меньшей мере один сегмент или одну часть целевого трансгена FT; (e) последовательность ДНК, которая содержит сегмент или часть целевого трансгена FT с инвертированными повторами и/или транскрибируется в РНК для супрессии целевого трансгена FT путем образования двухцепочечной РНК, при этом транскрибируемая РНК содержит по меньшей мере одну антисмысловую последовательность ДНК, которая является антисмысловой или комплементарной по меньшей мере одному сегменту или одной части целевого трансгена FT, и по меньшей мере одну смысловую последовательность ДНК, которая содержит по меньшей мере один сегмент или одну часть целевого трансгена FT; (f) последовательность ДНК, которая транскрибируется в РНК для супрессии целевого трансгена FT путем образования одной двухцепочечной РНК и содержит множество антисмысловых последовательностей ДНК, каждая из которых является антисмысловой или комплементарной по меньшей мере одному сегменту или одной части целевого трансгена FT, и множество смысловых последовательностей ДНК, каждая из которых содержит по меньшей мере один сегмент или одну часть целевого трансгена FT; (g) последовательность ДНК, которая транскрибируется в РНК для супрессии целевого трансгена FT путем образования множества двухцепочечных РНК и содержит множество антисмысловых последовательностей ДНК, каждая из которых является антисмысловой или комплементарной по меньшей мере одному сегменту или одной части целевого трансгена FT, и множество смысловых последовательностей ДНК, каждая из которых содержит по меньшей мере один сегмент или одну часть целевого трансгена FT, при этом множество антисмысловых сегментов ДНК и множество смысловых сегментов ДНК упорядочены в серии из инвертированны повторов; (h) последовательность ДНК, которая содержит нуклеотиды, полученные из микроРНК, предпочтительно растительной микроРНК; (i) последовательность ДНК, которая содержит нуклеотиды из миРНК; (j) последовательность ДНК, которая транскрибируется в РНК-аптамер, способный связываться с лигандом; и (k) последовательность ДНК, которая транскрибируется в РНК-аптамер, способный связываться с лигандом, и ДНК, которая транскрибируется в регуляторную РНК, способную регулировать экспрессию целевого трансгена FT, при этом регуляция целевого трансгена FT зависит от конформации регуляторной РНК, а на конформацию регуляторной РНК имеет аллостерический эффект состояние связывания РНК-аптамера лигандом. Транскрибируемая последовательность ДНК может содержать один или более вышеуказанных элементов супрессии и/или одну или более нацеливающих последовательностей, которые могут соответствовать одной или более последовательностям трансгена FT и/или его комплементарной последовательности.[86] The transcribed DNA sequence of the present invention for targeted suppression of an FT transgene may comprise one or more of the following suppression elements and/or targeting sequences: (a) a DNA sequence that contains at least one antisense DNA sequence that is antisense or complementary at least one segment or one portion of the target FT transgene; (b) a DNA sequence that contains multiple copies of at least one antisense DNA sequence that is antisense or complementary to at least one segment or one portion of the target FT transgene; (c) a DNA sequence that contains at least one sense DNA sequence that contains at least one segment or one portion of the target FT transgene; (d) a DNA sequence that contains multiple copies of at least one sense DNA sequence, each of which contains at least one segment or one part of the target FT transgene; (e) a DNA sequence that contains a segment or portion of the target FT transgene with inverted repeats and/or is transcribed into RNA to suppress the target FT transgene by forming a double-stranded RNA, wherein the transcribed RNA contains at least one antisense DNA sequence that is antisense or complementary to at least one segment or one portion of the target FT transgene, and at least one sense DNA sequence that contains at least one segment or one portion of the target FT transgene; (f) a DNA sequence that is transcribed into RNA to suppress the target FT transgene by producing a single double-stranded RNA and contains a plurality of antisense DNA sequences, each of which is antisense or complementary to at least one segment or one portion of the target FT transgene, and a plurality of sense sequences DNA, each containing at least one segment or one portion of the target FT transgene; (g) a DNA sequence that is transcribed into RNA to suppress the target FT transgene by generating a plurality of double-stranded RNAs and contains a plurality of antisense DNA sequences, each of which is antisense or complementary to at least one segment or one portion of the target FT transgene, and a plurality of sense sequences DNA, each containing at least one segment or one portion of the target FT transgene, wherein a plurality of antisense DNA segments and a plurality of sense DNA segments are ordered in a series of inverted repeats; (h) a DNA sequence that contains nucleotides derived from microRNA, preferably plant microRNA; (i) a DNA sequence that contains nucleotides from the siRNA; (j) a DNA sequence that is transcribed into an RNA aptamer capable of binding to a ligand; and (k) a DNA sequence that is transcribed into an RNA aptamer capable of binding to the ligand and a DNA that is transcribed into a regulatory RNA capable of regulating the expression of the target FT transgene, where regulation of the target FT transgene is dependent on the conformation of the regulatory RNA, and conformation regulatory RNA has an allosteric effect, the state of binding of the RNA aptamer by the ligand. The transcribed DNA sequence may contain one or more of the above suppression elements and/or one or more targeting sequences, which may correspond to one or more sequences of the FT transgene and/or its complementary sequence.
[87] Множественные смысловые и/или антисмысловые последовательности супрессии последовательности ДНК пригодной для транскрипции для одной или более целевых последовательностей трансгена FT могут быть упорядочены периодически в тандеме или упорядочены в тандемные сегменты или повторы, такие как тандемные инвертированные повторы, которые также могут прерываться одной или более спейсерными последовательностями. Кроме того, смысловая или антисмысловая последовательность последовательности ДНК пригодной для транскрипции или элемента супрессии может идеально не совпадать или не быть комплементарной с целевой последовательностью трансгена FT, в зависимости от последовательности и длины последовательности ДНК пригодной для транскрипции или элемента супрессии. В действительности даже короткие элементы супрессии РНКи с длиной в диапазоне от около 15 нуклеотидов до около 27 нуклеотидов могут иметь одно или более несовпадений или некомплементарных оснований в зависимости от длины элемента супрессии или нацеливающей последовательности, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 (или более) несовпадений, но при этом эффективно подавлять целевой трансген FT. Соответственно, смысловой или антисмысловой элемент супрессии может содержать последовательность, которая является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной или комплементарной соответствующей последовательности по меньшей мере сегмента или части целевого трансгена FT или ее комплементарной последовательности, соответственно.[87] Multiple sense and/or antisense sequences of suppression of a DNA sequence suitable for transcription for one or more target sequences of the FT transgene can be ordered periodically in tandem or ordered into tandem segments or repeats, such as tandem inverted repeats, which can also be interrupted by one or more more spacer sequences. In addition, the sense or antisense sequence of a transcriptionable DNA sequence or suppression element may ideally not match or be complementary to the target sequence of the FT transgene, depending on the sequence and length of the transcriptionable DNA sequence or suppression element. Indeed, even short RNAi suppressor elements with a length ranging from about 15 nucleotides to about 27 nucleotides may have one or more mismatches or non-complementary bases depending on the length of the suppression element or targeting sequence, e.g., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 (or more) mismatches, yet effectively suppress the target FT transgene. Accordingly, the sense or antisense suppression element may contain a sequence that is at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical or complementary to the corresponding sequence of at least a segment or portion of the target FT transgene or its complementary sequence, respectively.
[88] В случае антисмысловой супрессии последовательность ДНК пригодная для транскрипции может содержать последовательность, которая является антисмысловой или комплементарной по меньшей мере части или сегменту целевого трансгена FT. Транскрибируемая последовательность ДНК и/или элемент супрессии могут содержать множество антисмысловых последовательностей, которые являются комплементарными одной или более частям или одному или более сегментам целевого трансгена FT, или множество копий антисмысловой последовательности, комплементарной целевому трансгену FT. Антисмысловая последовательность может быть по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной последовательности ДНК, комплементарной по меньшей мере сегменту или части мРНК целевого трансгена FT. Другими словами, антисмысловая последовательность может быть по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной целевому трансгену FT.[88] In the case of antisense suppression, a DNA sequence suitable for transcription may contain a sequence that is antisense or complementary to at least a portion or segment of the target FT transgene. The transcribed DNA sequence and/or suppression element may comprise a plurality of antisense sequences that are complementary to one or more portions or one or more segments of the target FT transgene, or multiple copies of an antisense sequence that is complementary to the target FT transgene. The antisense sequence can be at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical DNA sequence that is complementary to at least a segment or portion of the target FT transgene mRNA. In other words, the antisense sequence can be at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% complementary to the target FT transgene.
[89] В контексте данного документа термины «процент комплементарности» или «доля комплементарности» в отношении двух нуклеотидных последовательностей сходны по концепции с процентом идентичности, но относятся к процентной доле нуклеотидов последовательности, которые демонстрируют оптимальное спаривание оснований или гибридизируются с нуклеотидами референсной последовательности, когда два последовательности упорядочены линейно и демонстрируют оптимальное спаривание оснований без вторичных свернутых структур, таких как петли, стебли или шпильки, но с допущением несовпадений и гэпов в спаривании оснований между двумя последовательностями. Такой процент комплементарности может наблюдаться между двумя цепями ДНК, двумя цепями РНК или цепью ДНК и цепью РНК. «Процент комплементарности» можно рассчитать путем (i) оптимального спаривания оснований или гибридизации двух нуклеотидных последовательностей в линейном и полностью развернутом упорядочении (т. е. без сворачивания или вторичных структур) в окне сравнения (например, окне выравнивания), (ii) определения числа позиций, в которых наблюдается спаривание оснований между двумя последовательностями в окне сравнения для получения числа комплементарных позиций, (iii) деления числа комплементарных позиций на общее число позиций в окне сравнения и (iv) умножения этого результата на 100% для получения процента комплементарности двух последовательностей. В этих целях окно выравнивания определяется как область комплементарности между двумя последовательностями. Оптимальное спаривание оснований между двумя последовательностями можно определить на основании известного спаривания нуклеотидных оснований, таких как G-C, A-T и A-U, посредством водородного связывания. Если «процент комплементарности» рассчитывают относительно референсной или запрашиваемой последовательности без уточнения конкретного окна сравнения, то процент идентичности определяют, деля число комплементарных позиций между двумя линейными последовательностями на общую длину референсной последовательности. В целях данного изобретения, когда две последовательности (запрашиваемая и рассматриваемая) имеют оптимальное спаривание оснований (с допуском гэпов и несовпадений или неспаренных нуклеотидов), «процент комплементарности» для запрашиваемой последовательности (когда окно сравнения не определено) равен числу спаренных позиций между двумя последовательностями, деленному на общее число позиций в запрашиваемой последовательности по всей ее длине, что затем умножается на 100%.[89] As used herein, the terms "percent complementarity" or "proportion of complementarity" in relation to two nucleotide sequences are similar in concept to percentage identity, but refer to the percentage of nucleotides in a sequence that exhibit optimal base pairing or hybridize with nucleotides of a reference sequence when the two sequences are ordered linearly and exhibit optimal base pairing without secondary folds such as loops, stems, or hairpins, but allowing for mismatches and gaps in base pairing between the two sequences. This percentage of complementarity can be observed between two DNA strands, two RNA strands, or a DNA strand and an RNA strand. "Percent complementarity" can be calculated by (i) optimally base-pairing or hybridizing two nucleotide sequences in a linear and fully unfolded ordering (i.e., no folding or secondary structures) in a comparison window (e.g., an alignment window), (ii) determining the number positions at which there is a base pairing between two sequences in the comparison window to obtain the number of complementary positions, (iii) dividing the number of complementary positions by the total number of positions in the comparison window, and (iv) multiplying this result by 100% to obtain the percent complementarity of the two sequences. For this purpose, the alignment window is defined as the region of complementarity between two sequences. Optimal base pairing between two sequences can be determined based on known nucleotide base pairings such as G-C, A-T and A-U via hydrogen bonding. If "percent complementarity" is calculated relative to a reference or query sequence without specifying a specific comparison window, then percent identity is determined by dividing the number of complementary positions between two linear sequences by the total length of the reference sequence. For the purposes of this invention, when two sequences (query and subject) have optimal base pairing (allowing for gaps and mismatches or unpaired nucleotides), the "percent complementarity" for the query sequence (when the comparison window is not defined) is equal to the number of paired positions between the two sequences, divided by the total number of positions in the requested sequence along its entire length, which is then multiplied by 100%.
[90] Для супрессии трансгена FT с помощью инвертированного повтора или транскрибированной дцРНК последовательность ДНК пригодная для транскрипции может содержать смысловую последовательность, которая содержат сегмент или часть целевого трансгена FT и антисмысловую последовательность, которая является комплементарной сегменту или части целевого трансгена FT, при этом смысловая и антисмысловая последовательности ДНК расположены в тандеме. Каждая из смысловой и антисмысловой последовательностей, соответственно, может быть менее чем на 100% идентичной или комплементарной сегменту или части целевого трансгена FT, как описано выше. Смысловая и антисмысловая последовательности могут быть разделены спейсерной последовательностью так, чтобы молекула РНК, транскрибированная с последовательности ДНК пригодной для транскрипции, образовывала стебель, петлю или структуру типа «стебель-петля» между смысловой и антисмысловой последовательностями. В ином случае последовательность ДНК пригодная для транскрипции может содержать множество смысловых и антисмысловых последовательностей, которые расположены в тандеме, которые также могут быть разделены одной или более спейсерными последовательностями. Транскрибируемая последовательность ДНК, содержащая множество смысловых и антисмысловых последовательностей, может быть упорядочена в виде групп смысловых последовательностей за которыми следуют группы антисмысловых последовательностей, или в виде групп тандемно расположенных смысловых и антисмысловых последовательностей.[90] For suppression of an FT transgene by an inverted repeat or transcribed dsRNA, a DNA sequence suitable for transcription may contain a sense sequence that contains a segment or portion of the target FT transgene and an antisense sequence that is complementary to the segment or portion of the target FT transgene, wherein the sense and antisense DNA sequences are arranged in tandem. Each of the sense and antisense sequences, respectively, may be less than 100% identical or complementary to a segment or portion of the target FT transgene, as described above. The sense and antisense sequences can be separated by a spacer sequence such that an RNA molecule transcribed from a transcriptionable DNA sequence forms a stem, loop, or stem-loop structure between the sense and antisense sequences. Otherwise, a DNA sequence suitable for transcription may contain a plurality of sense and antisense sequences that are arranged in tandem, which may also be separated by one or more spacer sequences. A transcribed DNA sequence containing a plurality of sense and antisense sequences can be ordered as groups of sense sequences followed by groups of antisense sequences, or as groups of sense and antisense sequences arranged in tandem.
[91] Для супрессии трансгена FT с помощью микро-РНК (микроРНК) последовательность ДНК пригодная для транскрипции может содержать последовательность ДНК, полученную из последовательности микроРНК, нативной для вируса или эукариота, такого как животное или растение, или модифицированную или полученную из такой нативной последовательности микроРНК. Такие нативные или полученные из нативных последовательности микроРНК могут образовывать структуру с гибридизацией «в себе» и служить каркасом для микроРНК-предшественника, и также могут соответствовать стеблевой области нативной последовательности микроРНК-предшественника, такой как в нативной (или полученной из нативной) последовательности при-микроРНК или пре-микроРНК. При этом, кроме этих нативных или полученных из нативных каркасных или препроцессированных последовательностей микроРНК, сконструированные микроРНК согласно данному изобретению дополнительно содержат последовательность, соответствующую сегменту или части целевого трансгена FT. Таким образом, кроме препроцессированных или каркасных последовательностей, элемент супрессии может быть сконструирован, чтобы дополнительно содержать смысловую и/или антисмысловую последовательность, которая соответствует сегменту или части целевого трансгена FT, и/или последовательность, которая является с ним комплементарной, хотя допускается наличие одного или более несовпадений в последовательности.[91] For suppression of the FT transgene by micro-RNA (miRNA), a DNA sequence suitable for transcription may comprise a DNA sequence derived from a microRNA sequence native to a virus or eukaryote, such as an animal or plant, or modified or derived from such a native sequence. miRNA. Such native or native-derived miRNA sequences may form an in-itself hybridization structure and serve as a scaffold for a precursor microRNA, and may also correspond to the stem region of a native miRNA precursor sequence, such as in the native (or native-derived) sequence miRNA or pre-miRNA. Moreover, in addition to these native or derived from native backbone or preprocessed miRNA sequences, the engineered miRNAs according to the invention additionally contain a sequence corresponding to a segment or part of the target FT transgene. Thus, in addition to the preprocessed or framework sequences, the suppression element can be designed to further contain a sense and/or antisense sequence that corresponds to a segment or portion of the target FT transgene and/or a sequence that is complementary to it, although one or more mismatches in the sequence.
[92] Сконструированные микроРНК применимы для нацеленной супрессии генов с повышенной специфичностью. Смотрите, например, Parizotto et al., Genes Dev. 18:2237-2242 (2004), и публикации патентных заявок США № 2004/0053411, 2004/0268441, 2005/0144669 и 2005/0037988, содержание которых включено в данный документ посредством ссылки. микроРНК представляют собой некодирующие РНК. При расщеплении молекулы микроРНК-предшественника образуется зрелая микроРНК, которая, как правило, имеет длину от около 19 до около 25 нуклеотидов (обычно длину от около 20 до около 24 нуклеотидов в растениях), например, длину 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов, и имеет последовательность, соответствующую гену-мишени супрессии и/или его комплементарной последовательности. Зрелая микроРНК гибридизируется с целевыми транскриптами мРНК и управляет связыванием комплекса белков с целевыми транскриптами, что может ингибировать трансляцию и/или приводить к разрушению транскрипта, осуществляя, таким образом, негативную регуляцию или подавление экспрессии целевого гена. микроРНК-предшественники также применимы в растениях для управления синфазной выработкой миРНК, транс-действующих миРНК (тд-миРНК) в процессе, в котором необходима РНК-зависимая РНК-полимераза для супрессии целевого гена. Смотрите, например, Allen et al., Cell 121:207-221 (2005), Vaucheret Science STKE, 2005:pe43 (2005), и Yoshikawa et al. Genes Dev., 19:2164-2175 (2005), содержание которых включено в данный документ посредством ссылки.[92] Constructed miRNAs are applicable for targeted gene suppression with increased specificity. See, for example, Parizotto et al., Genes Dev . 18:2237-2242 (2004), and US Patent Application Publication Nos. 2004/0053411, 2004/0268441, 2005/0144669, and 2005/0037988, the contents of which are incorporated herein by reference. microRNAs are non-coding RNAs. Cleavage of the precursor miRNA molecule produces a mature miRNA that is typically about 19 to about 25 nucleotides in length (typically about 20 to about 24 nucleotides in plants), e.g., 19, 20, 21, 22, 23 , 24 or 25 nucleotides, and has a sequence corresponding to the target suppression gene and/or its complementary sequence. Mature miRNA hybridizes to target mRNA transcripts and directs the binding of a protein complex to target transcripts, which can inhibit translation and/or result in transcript degradation, thus downregulating or suppressing target gene expression. microRNA precursors are also useful in plants to direct the in-phase production of miRNAs, trans-acting siRNAs (tg-miRNAs) in a process that requires an RNA-dependent RNA polymerase to suppress the target gene. See, for example, Allen et al., Cell 121:207-221 (2005), Vaucheret Science STKE , 2005:pe43 (2005), and Yoshikawa et al. Genes Dev ., 19:2164-2175 (2005), the contents of which are incorporated herein by reference.
[93] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложены рекомбинантные молекула ДНК, конструкция или вектор, содержащие последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующие молекулу микроРНК или микроРНК-предшественника для нацеленной супрессии трансгена FT. Такая последовательность ДНК пригодная для транскрипции может содержать последовательность длиной по меньшей мере 19 нуклеотидов, которая соответствует трансгену FT и/или последовательности, комплементарной трансгену FT, хотя допускается наличие одного или более несовпадений в последовательности и/или неспаренных нуклеотидов.[93] In accordance with embodiments of the present invention, a recombinant DNA molecule, construct, or vector containing a DNA sequence suitable for transcription encoding a microRNA or microRNA precursor molecule for targeted suppression of an FT transgene is provided. Such a DNA sequence suitable for transcription may contain a sequence of at least 19 nucleotides in length that corresponds to the FT transgene and/or a sequence complementary to the FT transgene, although one or more sequence mismatches and/or mismatches are allowed.
[94] Трансген FT также можно супрессировать с помощью одной или более малых интерферирующих РНК (миРНК). Путь миРНК включает несинфазное расщепление более длинной промежуточной двухцепочечной РНК («двойной спирали РНК») на малые интерферирующие РНК (миРНК). Размер или длина миРНК, как правило, находится в диапазоне от около 19 до около 25 нуклеотидов или пар оснований, но обычные классы миРНК включают содержащие 21 пару оснований или 24 пары оснований. Таким образом, последовательность ДНК пригодная для транскрипции согласно данному изобретению может кодировать молекулу РНК длиной по меньшей мере от около 19 до около 25 нуклеотидов, например, диной 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеотидов. Для супрессии с помощью миРНК предложены рекомбинантные молекула ДНК, конструкция или вектор, содержащие последовательность ДНК пригодную для транскрипции и/или элемент супрессии, кодирующие молекулу миРНК для нацеленной супрессии трансгена FT.[94] The FT transgene can also be suppressed by one or more small interfering RNAs (siRNAs). The siRNA pathway involves the out-of-phase cleavage of a longer intermediate double-stranded RNA ("RNA double helix") into small interfering RNAs (siRNAs). The size or length of siRNAs typically range from about 19 to about 25 nucleotides or base pairs, but common classes of siRNAs include those of 21 base pairs or 24 base pairs. Thus, a DNA sequence suitable for transcription according to the present invention may encode an RNA molecule of at least about 19 to about 25 nucleotides in length, such as 19, 20, 21, 22, 23, 24, or 25 nucleotides in length. For siRNA suppression, a recombinant DNA molecule, construct or vector containing a DNA sequence suitable for transcription and/or a suppression element encoding an siRNA molecule for targeted suppression of the FT transgene is proposed.
[95] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложены рекомбинантные молекула ДНК, вектор или конструкция, содержащие последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую некодирующую молекулу РНК, которая связывается или гибридизируется с последовательностью целевой мРНК в клетке растения, такой как кодирующая (экзон) и/или нетранслируемая (НТО) последовательность целевой мРНК, при этом целевая молекула мРНК кодирует белок FT, а последовательность ДНК пригодная для транскрипции функционально связана с промотором пригодным для экспрессии в растениях. Кроме нацеливания на последовательность зрелой мРНК, некодирующая молекула РНК, кодируемая последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, может быть нацелена на интронную последовательность трансгена или транскрипта FT. В соответствии с другими вариантами реализации изобретения предложены рекомбинантные молекула ДНК, вектор или конструкция, содержащие последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую некодирующую молекулу РНК (предшественника), которая расщепляется или процессируется до зрелой некодирующей молекулы РНК, которая связывается или гибридизируется с целевой мРНК в клетке растения, при этом целевая молекула мРНК кодирует белок FT, а последовательность ДНК пригодная для транскрипции функционально связана с промотором пригодным для экспрессии в растениях, который может быть тканеспецифическим, тканепредпочтительным, связанным с развитием и/или промотором другого типа.[95] In accordance with embodiments of the present invention, a recombinant DNA molecule, vector, or construct is provided that contains a DNA sequence suitable for transcription encoding a non-coding RNA molecule that binds or hybridizes to a target mRNA sequence in a plant cell, such as encoding (exon) and /or untranslated (NTR) sequence of the target mRNA, wherein the target mRNA molecule encodes the FT protein, and the DNA sequence suitable for transcription is operably linked to a promoter suitable for expression in plants. In addition to targeting a mature mRNA sequence, a non-coding RNA molecule encoded by a DNA sequence suitable for transcription can be targeted to the intron sequence of a transgene or FT transcript. In accordance with other embodiments of the invention, a recombinant DNA molecule, vector, or construct is provided that contains a DNA sequence suitable for transcription encoding a non-coding RNA (precursor) molecule that is cleaved or processed into a mature non-coding RNA molecule that binds or hybridizes to a target mRNA in a cell. plants, wherein the target mRNA molecule encodes the FT protein, and the DNA sequence suitable for transcription is operably linked to a promoter suitable for expression in plants, which may be tissue-specific, tissue-preferential, developmental, and/or another type of promoter.
[96] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложены рекомбинантные молекула ДНК, вектор или конструкция, содержащие последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую некодирующую молекулу РНК, при этом некодирующая молекула РНК является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере сегменту или части молекулы мРНК (i), экспрессируемой из трансгена FT и/или (ii) кодирующей белок FT в растении или клетке растения, при этом последовательность ДНК пригодная для транскрипции функционально связана с промотором пригодным для экспрессии в растениях. Некодирующая молекула РНК может быть нацелена на последовательность зрелой мРНК или мРНК-предшественника, 5' или 3' нетранслируемую область (НТО), кодирующую последовательность (экзон) и/или интрон или интронную последовательность трансгена или транскрипта FT. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения некодирующая молекула РНК нацелена на трансген FT для супрессии и является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам полинуклеотидной (кодирующей) последовательности, кодирующей белок FT (например, SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 или 29), или любой другой известной кодирующей последовательности флоригенного FT. В соответствии с другими вариантами реализации изобретения некодирующая молекула РНК является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26 или по меньшей мере 27 последовательным нуклеотидам молекулы мРНК, кодирующей белок FT, который является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 или 30, или любой другой известной белковой последовательности флоригенного FT или ее функциональному фрагменту. В контексте данного документа термин «последовательный» в отношении полинуклеотидной или белковой последовательности означает отсутствие делеций или гэпов в последовательности. В соответствии с вариантами реализации данного изобретения некодирующая молекула РНК, кодируемая последовательностью ДНК пригодной для транскрипции рекомбинантных молекулы ДНК, вектора или конструкции, предложенных в данном документе, может представлять собой зрелую микроРНК или миРНК, или микроРНК- или миРНК-предшественника, которые могут процессироваться или расщепляться в клетке растения с образованием зрелой микроРНК или миРНК.[96] According to embodiments of the present invention, a recombinant DNA molecule, vector, or construct is provided, comprising a DNA sequence suitable for transcription encoding a non-coding RNA molecule, wherein the non-coding RNA molecule is at least 80%, at least 85% , at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5 % or 100% complementary to at least a segment or portion of an mRNA molecule (i) expressed from an FT transgene and/or (ii) encoding an FT protein in a plant or plant cell, wherein a DNA sequence suitable for transcription is operably linked to a promoter suitable for expression in plants. The non-coding RNA molecule can be targeted to the mature mRNA or precursor mRNA sequence, the 5' or 3' untranslated region (UTR), the coding sequence (exon) and/or the intron or intron sequence of the transgene or FT transcript. In accordance with some embodiments of the invention, the non-coding RNA molecule targets the FT transgene for suppression and is at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% complementary to at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, at least 19, at least 20, at least 21, at least 22, at least 23, at least 24, at least 25, at least 26, or at least 27 consecutive nucleotides of a polynucleotide (coding) sequence encoding an FT protein (e.g., SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, or 29), or any other known coding sequence for florigenic FT. In accordance with other embodiments of the invention, the non-coding RNA molecule is at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% complementary to at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, at least 19, at least 20, at least 21, at least 22, at least 23, at least 24, at least 25, at least 26, or at least 27 consecutive nucleotides of an mRNA molecule encoding an FT protein that is at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical to SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 or 30, or any th other known florigenic FT protein sequence or a functional fragment thereof. In the context of this document, the term "sequential" in relation to a polynucleotide or protein sequence means the absence of deletions or gaps in the sequence. In accordance with embodiments of the present invention, the non-coding RNA molecule encoded by a DNA sequence suitable for transcription of the recombinant DNA molecule, vector or construct provided herein may be a mature miRNA or miRNA, or a precursor microRNA or miRNA that can be processed or be cleaved in the plant cell to form mature miRNA or miRNA.
[97] В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения последовательность ДНК пригодная для транскрипции может содержать последовательность, кодирующую нацеливающую последовательность молекулы РНК, которая является комплементарной и/или гибридизируется с мРНК конкретного гена или трансгена Gm.FT2a для нацеливания на ген или трансген Gm.FT2a для супрессии. Транскрибируемая последовательность ДНК может содержать последовательность (например, SEQ ID NO: 65), кодирующую нацеливающую последовательность (например, SEQ ID NO: 66) молекулы РНК, кодируемой последовательностью ДНК пригодной для транскрипции или транскрибируемой с нее. Нацеливающая последовательность молекулы РНК может представлять собой любую последовательность достаточной длины, которая является комплементарной с сегментом или частью мРНК, кодируемой трансгеном FT, а последовательность ДНК пригодная для транскрипции может содержать последовательность, которая кодирует нацеливающую последовательность молекулы РНК или транскрибируется в нее. Например, последовательность ДНК пригодная для транскрипции, кодирующая микроРНК-предшественника, может содержать SEQ ID NO: 67, которая может процессироваться в зрелую микроРНК, содержащую SEQ ID NO: 67, нацеленную на ген или трансген Gm.FT2a для супрессии. мРНК, кодируемая целевым геном или трансгеном FT, может содержать целевой сайт для молекулы РНК, кодируемой последовательностью ДНК пригодной для транскрипции. Такой целевой сайт в мРНК трансгена FT может содержать, например, SEQ ID NO: 68, которая может кодироваться последовательностью (например, SEQ ID NO: 69) гена или трансгена FT. Таким образом, кодирующая полинуклеотидная последовательность трансгена FT может содержать последовательность, кодирующую целевой сайт для молекулы РНК.[97] In some embodiments, a DNA sequence suitable for transcription may comprise a sequence encoding a targeting sequence of an RNA molecule that is complementary to and/or hybridizes with mRNA of a particular Gm.FT2a gene or transgene to target the Gm.FT2a gene or transgene. for suppression. The DNA sequence to be transcribed may comprise a sequence (eg, SEQ ID NO: 65) encoding a targeting sequence (eg, SEQ ID NO: 66) of an RNA molecule encoded by or transcribed from a transcribable DNA sequence. The targeting sequence of the RNA molecule may be any sequence of sufficient length that is complementary to the segment or portion of the mRNA encoded by the FT transgene, and the DNA sequence suitable for transcription may contain a sequence that encodes or is transcribed into the targeting sequence of the RNA molecule. For example, a transcriptionable DNA sequence encoding a precursor miRNA may contain SEQ ID NO: 67, which can be processed into a mature miRNA containing SEQ ID NO: 67 targeted at the Gm.FT2a gene or transgene for suppression. The mRNA encoded by the target FT gene or transgene may contain a target site for an RNA molecule encoded by a DNA sequence suitable for transcription. Such a target site in the mRNA of the FT transgene may comprise, for example, SEQ ID NO: 68, which may be encoded by the sequence (eg, SEQ ID NO: 69) of the FT gene or transgene. Thus, the coding polynucleotide sequence of an FT transgene may contain a sequence encoding a target site for an RNA molecule.
[98] Кроме промотора пригодного для экспрессии в растениях, рекомбинантные молекула ДНК, конструкция, вектор или экспрессионная кассета, содержащие последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую некодирующую молекулу РНК для супрессии трансгена FT, также могут быть функционально связаны с одним или более дополнительными регуляторными элементами, такими как энхансеры, сайты инициации транскрипции (СИТ), линкеры, сигналы полиаденилирования, 5' и/или 3' каркасные или остовные последовательности, последовательности или области терминации и т. д., которые подходят, необходимы или предпочтительны для регуляции или обеспечения экспрессии последовательности ДНК пригодной для транскрипции в клетке или ткани растения. Такие дополнительные регуляторные элементы могут быть необязательными и использоваться для повышения или оптимизации экспрессии последовательности ДНК пригодной для транскрипции.[98] In addition to a promoter suitable for expression in plants, a recombinant DNA molecule, construct, vector or expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription encoding a non-coding RNA molecule for suppression of the FT transgene can also be operably linked to one or more additional regulatory elements. such as enhancers, transcription initiation sites (TSITs), linkers, polyadenylation signals, 5' and/or 3' backbone or backbone sequences, termination sequences or regions, etc., which are appropriate, necessary or preferred to regulate or mediate expression DNA sequences suitable for transcription in a plant cell or tissue. Such additional regulatory elements may be optional and may be used to increase or optimize the expression of a DNA sequence suitable for transcription.
[99] В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения последовательность ДНК пригодная для транскрипции может содержать последовательность, которая соответствует по меньшей мере части некодирующей последовательности трансгена FT и/или комплементарной с ним последовательности, такую как 5' или 3' нетранслируемая область (НТО) или интронная последовательность трансгена FT, что может обеспечить возможность избирательной супрессии трансгена FT относительно эндогенного гена FT. «Некодирующие последовательности трансгена FT» (не путать с «некодирующей молекулой РНК», кодируемой последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, для супрессии гена или трансгена FT) представляют собой последовательности трансгена FT, которые транскрибируются и образуют часть пре-мРНК и/или зрелой мРНК, но не кодируют трансгенный белок FT. Соответственно, последовательность ДНК пригодная для транскрипции может кодировать молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая соответствует по меньшей мере части некодирующей последовательности трансгена FT и/или комплементарной с ней последовательности. Таким образом, последовательность ДНК пригодная для транскрипции может содержать последовательность, которая соответствует по меньшей мере части пре-мРНК или зрелой мРНК, кодируемой трансгеном FT. Последовательность последовательности ДНК пригодной для транскрипции и кодируемая нацеливающая последовательность молекулы РНК зависят от конкретных некодирующих последовательностей трансгена FT, которые могут быть одинаковыми или разными или уникальными относительно эндогенного (-ых) гена (-ов) FT. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения предложены рекомбинантные молекула ДНК, вектор или конструкция, содержащие экспрессионную кассету, которая содержит последовательность ДНК пригодную для транскрипции, имеющую последовательность, которая соответствует по меньшей мере части некодирующей последовательности трансгена FT и/или комплементарной с ней последовательности. Аналогично, как описано выше, могут быть предоставлены две или более экспрессионных кассет, включая первую экспрессионную кассету и вторую экспрессионную кассету, при этом первая экспрессионная кассета содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок FT (т. е. трансген FT), функционально связанную с первым промотором пригодным для экспрессии в растениях, а вторая экспрессионная кассета содержит последовательность ДНК пригодную для транскрипции, функционально связанную со вторым промотором пригодным для экспрессии в растениях, причем последовательность ДНК пригодная для транскрипции содержит последовательность, которая соответствует по меньшей мере части некодирующей последовательности трансгена FT и/или комплементарной ей последовательности. Первая и вторая экспрессионные кассеты могут находиться в одной молекуле ДНК, одном векторе или одной конструкции или в отдельных молекулах ДНК, векторах или конструкциях.[99] In some embodiments, a DNA sequence suitable for transcription may comprise a sequence that corresponds to at least a portion of the non-coding sequence of the FT transgene and/or its complementary sequence, such as a 5' or 3' untranslated region (UTR) or the intron sequence of the FT transgene, which may allow selective suppression of the FT transgene relative to the endogenous FT gene. "FT transgene non-coding sequences" (not to be confused with "non-coding RNA molecule", encoded by a DNA sequence suitable for transcription, to suppress a FT gene or transgene) are FT transgene sequences that are transcribed and form part of the pre-mRNA and/or mature mRNA, but do not encode the transgenic FT protein. Accordingly, a DNA sequence suitable for transcription may encode an RNA molecule containing a targeting sequence that corresponds to at least a portion of the non-coding sequence of the FT transgene and/or a sequence complementary to it. Thus, a DNA sequence suitable for transcription may contain a sequence that corresponds to at least a portion of the pre-mRNA or mature mRNA encoded by the FT transgene. The sequence of the DNA sequence suitable for transcription and the encoded targeting sequence of the RNA molecule depend on the specific non-coding sequences of the FT transgene, which may be the same or different or unique relative to the endogenous FT gene(s). In accordance with some embodiments of the invention, a recombinant DNA molecule, vector, or construct is provided that contains an expression cassette that contains a DNA sequence suitable for transcription, having a sequence that corresponds to at least a portion of the non-coding sequence of the FT transgene and/or a sequence complementary to it. Similarly, as described above, two or more expression cassettes can be provided, including a first expression cassette and a second expression cassette, wherein the first expression cassette contains a polynucleotide sequence encoding an FT protein (i.e., an FT transgene) operably linked to a first promoter suitable for expression in plants, and the second expression cassette contains a DNA sequence suitable for transcription, functionally linked to a second promoter suitable for expression in plants, and the DNA sequence suitable for transcription contains a sequence that corresponds to at least part of the non-coding sequence of the FT transgene and/or its complementary sequence. The first and second expression cassettes may be in the same DNA molecule, one vector or one construct, or in separate DNA molecules, vectors or constructs.
[100] Транскрибируемая последовательность ДНК, кодирующая молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, может быть функционально связана с промотором пригодным для экспрессии в растениях. Профиль экспрессии молекулы РНК может зависеть от конкретного промотора пригодного для экспрессии в растениях. Как описано выше, экспрессию трансгена FT под управлением промотора вегетативной стадии можно использовать для инициации раннего цветения и повышения числа цветков, бобов и т. д. на узел растения, но также она может приводить к ранней гибели растения. Недавно было сделано предположение, что дополнительную экспрессию молекулы РНК, нацеленной на трансген FT для супрессии, можно использовать для корректировки и/или ослабления профиля и уровня экспрессии трансгена FT для дополнительного смягчения фенотипов ранней терминации. Это может происходить посредством снижения количества транскрипта и белка из трансгена FT (т. е. снижения уровня экспрессии) и/или модификации профиля экспрессии (т. е. корректировки или ограничения профиля трансгенной экспрессии FT). Не ограничиваясь теорией, считается, что снижение экспрессии трансгена FT может быть достаточно для индукции раннего цветения со смягчением фенотипов ранней терминации. Аналогично, ограниченный пространственно-временный профиль экспрессии FT может снижать экспрессию FT в конкретных тканях и/или на конкретных стадиях развития, когда трансгенный FT может вызывать раннюю терминацию. Таким образом, в соответствии с вариантами реализации данного изобретения время и профиль экспрессии трансгена FT и молекулы РНК (нацеленной на трансген FT для супрессии) могут быть одинаковыми, перекрывающимися или разными.[100] A transcribed DNA sequence encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression can be operably linked to a promoter suitable for expression in plants. The expression profile of an RNA molecule may depend on the particular promoter suitable for expression in plants. As described above, expression of the FT transgene under the control of the vegetative stage promoter can be used to initiate early flowering and increase the number of flowers, pods, etc. per plant node, but it can also lead to early death of the plant. It has recently been suggested that additional expression of an RNA molecule targeted to the FT transgene for suppression could be used to correct and/or attenuate the profile and expression level of the FT transgene to further mitigate early termination phenotypes. This can be done by reducing the amount of transcript and protein from the FT transgene (ie, reducing the level of expression) and/or modifying the expression profile (ie, adjusting or restricting the FT transgene expression profile). Without being limited by theory, it is believed that a decrease in FT transgene expression may be sufficient to induce early flowering with mitigation of early termination phenotypes. Similarly, a limited spatiotemporal profile of FT expression may reduce FT expression in specific tissues and/or at specific developmental stages where the transgenic FT may cause early termination. Thus, according to embodiments of the present invention, the timing and expression profile of the FT transgene and the RNA molecule (targeting the FT transgene for suppression) may be the same, overlapping, or different.
[101] В соответствии со многими вариантами реализации изобретения, приведенными выше, могут быть предоставлены по меньшей мере две экспрессионные кассеты, включая первую экспрессионную кассету и вторую экспрессионную кассету, при этом первая экспрессионная кассета содержит трансген FT, функционально связанный с первым промотором пригодным для экспрессии в растениях, а вторая экспрессионная кассета содержит последовательность ДНК пригодную для транскрипции, функционально связанную со вторым промотором пригодным для экспрессии в растениях, причем последовательность ДНК пригодная для транскрипции кодирует молекулу РНК, нацеленную на трансген FT для супрессии. Две экспрессионные кассеты могут находиться в одной рекомбинантной молекуле ДНК, конструкции или векторе или находиться в отдельных рекомбинантных молекулах ДНК, конструкциях или векторах. Как описано выше, первый промотор пригодный для экспрессии в растениях, функционально связанный с трансгеном FT, может быть промотором вегетативной стадии, который также может быть меристемо-специфическим или меристемо-предпочтительным промотором. Второй промотор пригодный для экспрессии в растениях, функционально связанный с последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, может включать различные типы промоторов, включая конститутивные, индуцибельные, связанные с развитием, тканеспецифические, тканепредпочтительные, вегетативной стадии, генеративной стадии и т. д., но время и профиль экспрессии молекулы РНК должны по меньшей мере частично перекрываться со временем и профилем экспрессии трансгена FT. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения второй промотор пригодный для экспрессии в растениях может быть конститутивным промотором или промотором вегетативной стадии для снижения уровня экспрессии трансгена FT. Такой конститутивный промотор или промотор вегетативной стадии также может быть тканеспецифическим или тканепредпочтительным промотором и/или может характеризоваться широким перекрытием со временем и профилем экспрессии трансгена FT. В действительности конститутивный или перекрывающийся профиль экспрессии последовательности ДНК пригодной для транскрипции (и супрессорной молекулы РНК) по отношению к трансгену FT может быть эффективным при снижении количества или дозы экспрессии FT, в особенности если супрессия трансгена FT является неидеальной или неполной. В некоторых случаях трансген FT и супрессорная конструкция даже могут быть функционально связаны с одинаковыми или сходными промоторами. Например, первый промотор пригодный для экспрессии в растениях, управляющий экспрессией трансгена FT, может представлять собой промотор ранней или поздней вегетативной стадии и/или генеративной стадии, а второй промотор пригодный для экспрессии в растениях, управляющий экспрессией последовательности ДНК пригодной для транскрипции, кодирующей молекулу РНК для супрессии, может представлять собой промотор ранней или поздней вегетативной стадии и/или генеративной стадии[101] According to many of the embodiments above, at least two expression cassettes can be provided, including a first expression cassette and a second expression cassette, wherein the first expression cassette contains an FT transgene operably linked to a first promoter suitable for expression. in plants, and the second expression cassette contains a transcriptionable DNA sequence operably linked to a second promoter suitable for expression in plants, wherein the transcriptional DNA sequence encodes an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression. The two expression cassettes may be in the same recombinant DNA molecule, construct or vector, or in separate recombinant DNA molecules, constructs or vectors. As described above, the first promoter suitable for expression in plants operably linked to the FT transgene may be a vegetative stage promoter, which may also be a meristem-specific or meristem-preferred promoter. The second promoter suitable for expression in plants, operably linked to a DNA sequence suitable for transcription, may include various types of promoters, including constitutive, inducible, developmental, tissue-specific, tissue-preferential, vegetative stage, generative stage, etc., but time and the expression profile of the RNA molecule should at least partially overlap with time and the expression profile of the FT transgene. In accordance with some embodiments of the invention, the second promoter suitable for expression in plants can be a constitutive promoter or a vegetative stage promoter to reduce the level of expression of the FT transgene. Such a constitutive or vegetative stage promoter may also be a tissue-specific or tissue-preferred promoter and/or may have broad overlap over time and expression profile of the FT transgene. Indeed, a constitutive or overlapping expression profile of a transcriptionable DNA sequence (and a suppressor RNA molecule) with respect to the FT transgene may be effective in reducing the amount or dose of FT expression, especially if the suppression of the FT transgene is imperfect or incomplete. In some cases, the FT transgene and the suppressor construct may even be operably linked to the same or similar promoters. For example, the first plant-expressible promoter driving the expression of the FT transgene may be an early or late vegetative and/or generative stage promoter, and the second plant-expressible promoter driving the expression of a transcriptionable DNA sequence encoding an RNA molecule. for suppression, may be an early or late vegetative stage and/or generative stage promoter
[102] В данной области техники известно много примеров конститутивных промоторов, таких как промотор вируса мозаики цветной капусты (CaMV) 35S и 19S (смотрите, например, патент США № 5352605), усиленный промотор CaMV 35S, такой как промотор CaMV 35S с областью омега (смотрите, например, Holtorf, S. et al., Plant Molecular Biology, 29: 637-646 (1995) или двойной усиленный промотор CaMV (смотрите, например, патент США № 5322938), промотор вируса мозаики норичника (FMV) 35S (смотрите, например, патент США № 6372211), промотор вируса мозаики мирабилис (MMV) (смотрите, например, патент США № 6420547), промотор колимовируса хлоротичной полосатости арахиса (смотрите, например, патент США № 5850019), нопалиновый или октопиновый промотор, убиквитиновый промотор, такой как полиубиквитиновый промотор сои (смотрите, например, патент США № 7393948), промотор S-аденозилметионинсинтетазы Arabidopsis (смотрите, например, 8809628) и т. д., или любые функциональные части вышеуказанных промоторов, при этом содержание каждой из вышеприведенных ссылок включено в данный документ посредством ссылки. В альтернативном варианте второй промотор пригодный для экспрессии в растениях может представлять собой промотор вегетативной и/или генеративной стадии, примеры которых приведены в данном документе.[102] Many examples of constitutive promoters are known in the art, such as the cauliflower mosaic virus (CaMV) 35S and 19S promoter (see, for example, US Pat. (see, for example, Holtorf, S. et al., Plant Molecular Biology , 29: 637-646 (1995) or CaMV double boosted promoter (see, for example, US Pat. see e.g. US Pat. No. 6,372,211), mirabilis mosaic virus (MMV) promoter (see e.g. U.S. Pat. No. 6,420,547), peanut chlorotic streak colimovirus promoter (see e.g. US Pat. No. 5,850,019), nopaline or octopine promoter, ubiquitin a promoter such as the soybean polyubiquitin promoter (see, for example, US Pat. No. 7,393,948), the Arabidopsis S-adenosylmethionine synthetase promoter (see, for example, 8809628), etc., or any functional portions of the above promoters, when The contents of each of the foregoing references are incorporated herein by reference. Alternatively, the second promoter suitable for expression in plants may be a vegetative and/or generative stage promoter, examples of which are provided herein.
[103] В соответствии с другими вариантами реализации изобретения второй промотор пригодный для экспрессии в растениях может иметь более отличающиеся время и/или профиль экспрессии, например, в других тканях растения и/или на других стадиях развития, относительно трансгена FT. Таким образом, эффективный пространственно-временной профиль экспрессии трансгена FT можно модифицировать, изменять и/или корректировать в зависимости от относительных времени и профилей экспрессии трансгена FT и последовательности ДНК пригодной для транскрипции, кодирующей молекулу РНК для супрессии трансгена FT (а также конкретной нацеливающей последовательности молекулы РНК). При этом, в соответствии со многими вариантами реализации изобретения последовательность ДНК пригодная для транскрипции (и молекула РНК) может экспрессироваться на более поздней стадии развития или в более поздней ткани относительно начала экспрессии трансгена FT, так что трансген FT может обеспечивать сигнал индукции раннего цветения перед супрессией более поздней экспрессией супрессорной молекулы РНК, или, иными словами, трансген FT может супрессироваться после сигнала индукции раннего цветения для снижения или смягчения ранней терминации. Например, первый промотор пригодный для экспрессии в растениях, управляющий экспрессией трансгена FT, может представлять собой промотор ранней вегетативной стадии, а второй промотор пригодный для экспрессии в растениях, управляющий экспрессией последовательности ДНК пригодной для транскрипции, кодирующей молекулу РНК для супрессии, может представлять собой промотор поздней вегетативной стадии и/или промотор генеративной стадии, или первый промотор пригодный для экспрессии в растениях может представлять собой промотор поздней вегетативной стадии, а второй промотор пригодный для экспрессии в растениях может представлять собой промотор генеративной стадии. В более широком смысле второй промотор пригодный для экспрессии в растениях может инициировать, вызывать и/или регулировать экспрессию связанного с ним трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции на более поздней стадии развития, чем первый промотор пригодный для экспрессии в растениях, так, чтобы супрессорная конструкция в общем случае экспрессировалась после исходного сигнала индукции FT цветения во время более ранней (-их) вегетативной (-ых) стадии (-ий) развития. Таким образом, второй промотор пригодный для экспрессии в растениях может представлять собой промотор более поздней стадии развития, чем первый промотор пригодный для экспрессии в растениях. Например, второй промотор пригодный для экспрессии в растениях может управлять экспрессией на более поздней стадии развития, чем первый промотор пригодный для экспрессии в растениях, но в тех же самых типах тканей или линиях дифференцировки (например, в меристеме), что и первый промотор пригодный для экспрессии в растениях. Такой промотор вегетативной стадии и/или генеративной стадии также может быть тканеспецифическим или тканепредпочтительным промотором, таким как меристемо-специфический или меристемо-предпочтительный меристемы промотор. Примеры промоторов поздней вегетативной стадии приведены выше.[103] In other embodiments, a second promoter suitable for expression in plants may have a more different timing and/or expression profile, e.g., in other plant tissues and/or at different developmental stages, relative to the FT transgene. Thus, the effective spatiotemporal expression profile of the FT transgene can be modified, altered, and/or corrected depending on the relative timing and expression profiles of the FT transgene and the transcriptionable DNA sequence encoding the RNA molecule for suppressing the FT transgene (as well as the particular targeting sequence of the molecule RNA). However, in many embodiments, a transcriptionable DNA sequence (and RNA molecule) may be expressed at a later developmental stage or in a later tissue relative to the start of expression of the FT transgene, so that the FT transgene may provide an early flowering induction signal before suppression. later expression of the suppressor RNA molecule, or in other words, the FT transgene can be suppressed after the early flowering induction signal to reduce or mitigate early termination. For example, the first plant-expressible promoter driving the expression of the FT transgene may be an early vegetative stage promoter, and the second plant-expressible promoter driving the expression of a transcriptionable DNA sequence encoding an RNA molecule for suppression may be the promoter late vegetative stage and/or generative stage promoter, or the first promoter suitable for expression in plants may be a late vegetative stage promoter and the second promoter suitable for expression in plants may be a generative stage promoter. More broadly, a second plant-expressible promoter can initiate, cause, and/or regulate the expression of its associated transgene or transcriptional DNA sequence at a later developmental stage than the first plant-expressible promoter, such that the suppressor construct generally expressed after the initial FT flowering induction signal during the earlier vegetative stage(s) of development(s). Thus, the second promoter suitable for expression in plants may be a promoter of a later developmental stage than the first promoter suitable for expression in plants. For example, a second promoter suitable for expression in plants may drive expression at a later developmental stage than a first promoter suitable for expression in plants, but in the same tissue types or lineages (e.g. meristem) as the first promoter suitable for expression in plants. expression in plants. Such a vegetative stage and/or generative stage promoter may also be a tissue-specific or tissue-preferred promoter, such as a meristem-specific or meristem-preferred meristem promoter. Examples of late vegetative stage promoters are given above.
[104] Посредством экспрессии последовательности ДНК пригодной для транскрипции и молекулы РНК для супрессии трансгена FT во время одной или более поздних стадий развития растения относительно трансгена FT, эффективный профиль экспрессии трансгена FT можно модифицировать, изменять и/или корректировать до более ранних стадий развития и/или тканей относительно экспрессии одного трансгена FT. В некоторых случаях экспрессия трансгена FT на вегетативной стадии может задерживаться или продолжаться во время более поздних вегетативных и/или генеративных стадий или в более поздних тканях в растении. Таким образом, экспрессия молекулы РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, может снижать уровень трансгена FT на этих более поздних стадиях и/или в более поздних тканях для эффективного ограничения уровня экспрессии трансгена FT до более ранних стадий развития и/или тканей. В результате можно поддерживать или сохранять сигнал индукции раннего цветения, тогда как более позднюю экспрессию FT можно ослаблять или уменьшать, чтобы избежать или замедлить раннюю терминацию оставшихся меристематических резервов растения и обеспечить возможность продолжения вегетативного роста и развития растения после цветения.[104] By expressing a DNA sequence suitable for transcription and an RNA molecule for suppressing the FT transgene during one or more later stages of plant development relative to the FT transgene, the effective expression profile of the FT transgene can be modified, altered and/or corrected to earlier stages of development and/ or tissues relative to the expression of a single FT transgene. In some cases, expression of the FT transgene during the vegetative stage may be delayed or continued during later vegetative and/or generative stages or in later tissues in the plant. Thus, expression of an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression can reduce the level of the FT transgene at these later stages and/or in later tissues to effectively limit the level of expression of the FT transgene to earlier developmental stages and/or tissues. As a result, the early flowering induction signal can be maintained or maintained while the later FT expression can be attenuated or reduced to avoid or slow down early termination of the remaining meristematic reserves of the plant and allow continued vegetative growth and development of the plant after flowering.
[105] В контексте данного документа промотор «генеративной стадии» определяется как любой промотор, который инициирует, вызывает, регулирует и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время одной или более генеративных стадий развития растения, например, во время одной или более из стадий развития R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 и/или R8. Такой промотор «генеративной стадии» может быть дополнительно определен как «предпочтительный в отношении генеративной стадии» промотор, который инициирует, вызывает, регулирует и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена/трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции по меньшей мере предпочтительно или главным образом, если не исключительно, во время одной или более генеративных стадий развития растения (в противоположность вегетативным стадиям). При этом каждый из промотора «генеративной стадии» и «предпочтительного в отношении генеративной стадии» промотора также может инициировать, обеспечивать, допускать, вызывать, регулировать и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время вегетативной (-ых) фазы (фаз) или стадии (-ий) развития в одной или более клетках или тканях растения. Таким образом, промотор генеративной стадии также может быть промотором вегетативной стадии при экспрессии во время обеих фаз развития (т. е. во время как вегетативной, так и генеративной стадий развития). Такой промотор генеративной стадии также может быть тканеспецифическим или тканепредпочтительным промотором, таким как меристемо-специфический или меристемо-предпочтительный промотор. Промотор «генеративной стадии» может быть дополнительно определен как инициирующий, вызывающий, регулирующий и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена/трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции в одной или более генеративных тканях растения. Такой промотор «генеративной стадии» также может быть определен как «флорально-предпочтительный» промотор, который инициирует, вызывает, регулирует и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена/трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции по меньшей мере предпочтительно или главным образом, если не исключительно, по меньшей мере в одной флоральной или генеративной ткани, такой как флоральная меристема, или «флорально-специфический» промотор, который инициирует, вызывает, регулирует и т. д. транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена/трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции исключительно (или почти исключительно) по меньшей мере в одной флоральной или генеративной ткани. Признаки и характеристики этих генеративных стадий для заданного вида растения известны в данной области техники.[105] As used herein, a "generative step" promoter is defined as any promoter that initiates, causes, regulates, etc., the transcription or expression of an associated gene, transgene, or transcriptionable DNA sequence during one or more generative steps. plant development, for example, during one or more of the stages of development R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 and/or R8. Such a "generative stage" promoter can be further defined as a "generative stage preferred" promoter that initiates, causes, regulates, etc., the transcription or expression of an associated gene/transgene or DNA sequence suitable for transcription at least preferably or primarily, if not exclusively, during one or more of the generative stages of the plant (as opposed to the vegetative stages). Moreover, each of the “generative stage” promoter and the “generative stage preferred” promoter can also initiate, provide, allow, cause, regulate, etc., the transcription or expression of its associated gene, transgene or DNA sequence suitable for transcription in the time of the vegetative phase(s) or stage(s) of development in one or more plant cells or tissues. Thus, a generative stage promoter can also be a vegetative stage promoter when expressed during both phases of development (ie, during both the vegetative and generative stages of development). Such a generative stage promoter may also be a tissue-specific or tissue-preferred promoter, such as a meristem-specific or meristem-preferred promoter. A "generative stage" promoter can be further defined as initiating, causing, regulating, etc., the transcription or expression of its associated gene/transgene or DNA sequence suitable for transcription in one or more generative tissues of the plant. Such a "generative stage" promoter can also be defined as a "floral-preferred" promoter that initiates, causes, regulates, etc., the transcription or expression of an associated gene/transgene or DNA sequence suitable for transcription at least preferably or principally. manner, if not exclusively, in at least one floral or generative tissue, such as a floral meristem, or a "floral-specific" promoter that initiates, causes, regulates, etc., transcription or expression of its associated gene/transgene, or DNA sequences suitable for transcription exclusively (or almost exclusively) in at least one floral or generative tissue. The features and characteristics of these generative stages for a given plant species are known in the art.
[106] Примеры промоторов генеративной стадии, которые также могут быть промоторами ранней или поздней вегетативной стадии в зависимости от их профиля экспрессии в заданном виде растения, могут включать следующие промоторы из генов томата: промотор Sl.Nod (pSl.Nod, pLe.Nod или pNod) (SEQ ID NO: 70), промотор Sl.MADS5 (pSl.MADS5, pLe.MADS5 или pMADS5) (SEQ ID NO: 71) или промотор Sl.MADS-RIN (pSl.MADS-RIN, pLe.MADS-RIN или pMADS-RIN) (SEQ ID NO: 72), или их функциональную часть. Дополнительные примеры, идентифицированные как имеющие гомологию и/или сходный профиль экспрессии с промотором pSl.MADS5 и/или pSl.MADS-RIN в нативных видах растений, могут включать промотор из одного из следующих генов: AT1G24260.1 (SEQ ID NO: 73), AT2G45650.1 (SEQ ID NO: 74), AT3G02310.1 (SEQ ID NO: 75), или AT5G15800.1 (SEQ ID NO: 76), или AT2G03710.1 (SEQ ID NO: 77) из Arabidopsis; Glyma05g28140 (SEQ ID NO: 78), Glyma08g11120 (SEQ ID NO: 79), Glyma11g36890 (SEQ ID NO: 80), Glyma08g27670 (SEQ ID NO: 81), Glyma13g06730 (SEQ ID NO: 82), или Glyma19g04320 (SEQ ID NO: 83) из сои; Solyc02g089200 (SEQ ID NO: 84), Solyc03g114840 (SEQ ID NO: 85), Solyc12g038510 (SEQ ID NO: 86), Solyc04g005320 (SEQ ID NO: 87) или Solyc05g056620 (SEQ ID NO: 88) из томата; или GRMZM2G159397 (SEQ ID NO: 89), GRMZM2G003514 (SEQ ID NO: 90), GRMZM2G160565 (SEQ ID NO: 91), GRMZM2G097059 (SEQ ID NO: 92), GRMZM2G099522 (SEQ ID NO: 93) или GRMZM2G071620 (SEQ ID NO: 94) из кукурузы или любую функциональную часть любого из вышеприведенных промоторов.[106] Examples of generative stage promoters, which may also be early or late vegetative stage promoters depending on their expression profile in a given plant species, may include the following promoters from tomato genes: Sl.Nod promoter (pSl.Nod, pLe.Nod or pNod) (SEQ ID NO: 70), Sl.MADS5 promoter (pSl.MADS5, pLe.MADS5 or pMADS5) (SEQ ID NO: 71) or Sl.MADS-RIN promoter (pSl.MADS-RIN, pLe.MADS- RIN or pMADS-RIN) (SEQ ID NO: 72), or a functional part thereof. Additional examples identified as having homology and/or a similar expression profile to the pSl.MADS5 and/or pSl.MADS-RIN promoter in native plant species may include a promoter from one of the following genes: AT1G24260.1 (SEQ ID NO: 73) , AT2G45650.1 (SEQ ID NO: 74), AT3G02310.1 (SEQ ID NO: 75), or AT5G15800.1 (SEQ ID NO: 76), or AT2G03710.1 (SEQ ID NO: 77) from Arabidopsis ; Glyma05g28140 (SEQ ID NO: 78), Glyma08g11120 (SEQ ID NO: 79), Glyma11g36890 (SEQ ID NO: 80), Glyma08g27670 (SEQ ID NO: 81), Glyma13g06730 (SEQ ID NO: 82), or Glyma19g04320 (SEQ ID NO: 83) from soy; Solyc02g089200 (SEQ ID NO: 84), Solyc03g114840 (SEQ ID NO: 85), Solyc12g038510 (SEQ ID NO: 86), Solyc04g005320 (SEQ ID NO: 87) or Solyc05g056620 (SEQ ID NO: 88) from tomato; or GRMZM2G159397 (SEQ ID NO: 89), GRMZM2G003514 (SEQ ID NO: 90), GRMZM2G160565 (SEQ ID NO: 91), GRMZM2G097059 (SEQ ID NO: 92), GRMZM2G099522 (SEQ ID NO: 93) or GRMZM2G071620 (SEQ ID NO: 93) NO: 94) from corn, or any functional portion of any of the above promoters.
[107] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения промотор «генеративной стадии» также может быть дополнительно определен по конкретной генеративной стадии, во время которой он впервые вызывает, инициирует и т. д. наблюдаемую или выраженную транскрипцию или экспрессию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции. Например, промотор генеративной стадии может представлять собой промотор стадии R1, промотор стадии R2, промотор стадии R3 и т. д. Следовательно, промотор «стадии R1» определяется как промотор генеративной стадии, который впервые инициирует или вызывает транскрипцию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время стадии R1 развития растения, промотор «стадии R2» определяется как промотор генеративной стадии, который впервые инициирует или вызывает транскрипцию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время стадии R2 развития растения, и т. д., хотя экспрессия связанного гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции может происходить непрерывно или с перерывами в одной или более тканях во время более поздних генеративных стадий развития. Переход от вегетативной к генеративной стадии (и начало стадии R1) определяется в соответствии со стандартными в данной области техники конвенциями для заданного культурного растения (т. е. обычно, как в случае сои, это видимое появление первого открытого цветка на растении). Специалист в данной области техники сможет определить время экспрессии заданного гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции во время развития растения, используя различные методы и техники молекулярного анализа, известные в данной области техники, если это время экспрессии уже не известно.[107] In accordance with embodiments of the present invention, a “generative stage” promoter can also be further defined by the specific generative stage during which it first causes, initiates, etc. observed or expressed transcription or expression of its associated gene, transgene or a DNA sequence suitable for transcription. For example, a generative step promoter can be an R1 step promoter, an R2 step promoter, an R3 step promoter, etc. Therefore, an “R1 step” promoter is defined as a generative step promoter that first initiates or causes transcription of its associated gene, transgene, or DNA sequence available for transcription during the R1 stage of plant development, an "R2 stage" promoter is defined as a generative stage promoter that first initiates or causes transcription of its associated gene, transgene, or DNA sequence available for transcription during the R2 stage of plant development, etc. etc., although expression of an associated gene, transgene, or transcriptional DNA sequence may occur continuously or intermittently in one or more tissues during the later generative stages of development. The transition from vegetative to generative stage (and the start of the R1 stage) is determined according to industry standard conventions for a given crop plant (i.e. usually, as in the case of soybeans, this is the visible appearance of the first open flower on the plant). A person skilled in the art will be able to determine the expression time of a given gene, transgene or DNA sequence suitable for transcription during plant development using various molecular analysis methods and techniques known in the art if the expression time is not already known.
[108] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения промотор «генеративной стадии» может включать конститутивный, тканепредпочтительный или тканеспецифический промотор. Например, промотор генеративной стадии может регулировать экспрессию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции в одной или более тканях растения, например, в одном или более из корней, стеблей, листьев, меристем и т. д. во время генеративной (-ых) стадии (-ий) развития растения. При этом такой промотор генеративной стадии может предпочтительно регулировать экспрессию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции в одной или более меристем растения. В соответствии со многими вариантами реализации изобретения промотор «генеративной стадии» может быть «меристемо-специфическим» или «меристемо-предпочтительным» промотором, который вызывает экспрессию связанного с ним гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции в меристематической ткани, которая по меньшей мере частично соответствует профилю экспрессии трансгена FT и ослабляет и/или корректирует экспрессию трансгена FT.[108] According to embodiments of the present invention, a "generative stage" promoter may include a constitutive, tissue-preferred, or tissue-specific promoter. For example, a generative stage promoter may regulate the expression of an associated gene, transgene, or DNA sequence suitable for transcription in one or more plant tissues, e.g., one or more of roots, stems, leaves, meristems, etc. during generative ( th) stage(s) of plant development. However, such a generative stage promoter may preferentially regulate the expression of an associated gene, transgene or DNA sequence suitable for transcription in one or more meristems of the plant. In accordance with many embodiments of the invention, a "generative stage" promoter can be a "meristem-specific" or "meristem-preferred" promoter that causes the expression of its associated gene, transgene, or DNA sequence suitable for transcription in a meristematic tissue that is at least partially corresponds to the expression profile of the FT transgene and attenuates and/or corrects the expression of the FT transgene.
[109] Полинуклеотидная последовательность этих промоторов (или их функциональных фрагментов или частей) также может иметь нестрогую идентичность последовательности и при этом сохранять сходный или идентичный профиль экспрессии связанных гена, трансгена или последовательности ДНК пригодной для транскрипции, функциональной связанных с промотором. Например, промотор поздней вегетативной и/или генеративной стадии может содержать полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичной полинуклеотидной последовательности, выбранной из вышеприведенных SEQ ID NO: 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93 или 94, или ее функциональной части. «Функциональная часть» известной или предложенной промоторной последовательности определена выше.[109] The polynucleotide sequence of these promoters (or functional fragments or parts thereof) can also have loose sequence identity and still retain a similar or identical expression profile of the associated gene, transgene, or transcriptionable DNA sequence operably linked to the promoter. For example, a late vegetative and/or generative stage promoter may comprise a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90% %, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97% , at least 98%, at least 99%, or 100% identical to a polynucleotide sequence selected from the above SEQ ID NOs: 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80 , 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93 or 94, or a functional part thereof. A "functional portion" of a known or proposed promoter sequence is defined above.
[110] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения молекула РНК, кодируемая второй экспрессионной кассетой, содержащей последовательность ДНК пригодную для транскрипции, функционально связанную со вторым промотором пригодным для экспрессии в растениях, может вызывать снижение или элиминацию уровня экспрессии мРНК и/или белка, кодируемых трансгеном FT в одной или более тканях растения посредством супрессии трансгена FT. При применении второй экспрессионной кассеты уровень экспрессии транскрипта трансгенного FT и/или белка может быть снижен по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 3%, по меньшей мере на 4%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% в одной или более тканях растения, таких как одна или более меристематических тканей, по сравнению с уровнями транскрипта мРНК и/или белка трансгена FT, которые наблюдались бы в тех же самых тканях растения без второй экспрессионной кассеты. Уровни транскрипта мРНК и/или белка трансгена FT могут быть снижены на 1%-100%, 1%-75%, 1%-50%, 1%-25%, 5%-100%, 5%-95%, 5%-90%, 5%-85%, 5%-80%, 5%-75%, 5%-70%, 5%-65%, 5%-60%, 5%-55%, 5%-50%, 5%-45%, 5%-40%, 5%-35%, 5%-30%, 5%-25%, 5%-20%, 5%-15%, 5%-10%, 10%-100%, 10%-90%, 10%-80%, 10%-70%, 10%-60%, 10%-50%, 10%-40%, 10%-30%, 10%-20%, 25%-100%, 25%-75%, 25%-50%, 50%-100%, 50%-75% или 75%-100% в одной или более тканях растения по сравнению с уровнями транскрипта мРНК и/или белка трансгена FT, которые наблюдались бы в тех же самых тканях растения без второй экспрессионной кассеты.[110] In accordance with embodiments of the present invention, an RNA molecule encoded by a second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription, operably linked to a second promoter suitable for expression in plants, can cause a decrease or elimination of the level of expression of the mRNA and/or protein encoded an FT transgene in one or more plant tissues by suppressing the FT transgene. When using the second expression cassette, the level of expression of the transgenic FT transcript and/or protein can be reduced by at least 1%, at least 2%, at least 3%, at least 4%, at least 5%. %, at least 10%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 60% at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98% or at least 99% in one or more plant tissues, such as one or more meristematic tissues, compared to the levels of the FT transgene mRNA transcript and/or protein that would be observed in the same plant tissues without a second expression cassette. FT transgene mRNA transcript and/or protein levels can be reduced by 1%-100%, 1%-75%, 1%-50%, 1%-25%, 5%-100%, 5%-95%, 5 %-90%, 5%-85%, 5%-80%, 5%-75%, 5%-70%, 5%-65%, 5%-60%, 5%-55%, 5%- 50%, 5%-45%, 5%-40%, 5%-35%, 5%-30%, 5%-25%, 5%-20%, 5%-15%, 5%-10% , 10%-100%, 10%-90%, 10%-80%, 10%-70%, 10%-60%, 10%-50%, 10%-40%, 10%-30%, 10 %-20%, 25%-100%, 25%-75%, 25%-50%, 50%-100%, 50%-75%, or 75%-100% in one or more plant tissues compared to levels mRNA transcript and/or protein of the FT transgene that would be observed in the same plant tissues without the second expression cassette.
[111] В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения в ином случае вторая экспрессионная кассета может быть сконструирована так, чтобы кодировать молекулу РНК, которая нацелена на эндогенный ген FT для супрессии. Избирательную супрессию эндогенного гена FT можно обеспечивать путем нацеливания на его кодирующую последовательность, если трансген FT имеет отличную от эндогенного гена кодирующую последовательность (т. е. молекула РНК может содержать нацеливающую последовательность, которая является комплементарной по меньшей мере части кодирующей последовательности эндогенного гена FT). В альтернативном варианте, даже если кодирующие последовательности трансгена FT и эндогенного гена FT являются одинаковыми или сходными, вторая экспрессионная кассета может быть сконструирована так, чтобы кодировать молекулу РНК, которая нацелена на нетранслируемую или некодирующую последовательность мРНК, кодируемой эндогенным геном FT, например, в пределах 5' НТО, 3'НТО, интронных и/или лидерных последовательностей мРНК-транскрипта эндогенного FT, если эти последовательности отличаются или отсутствуют в трансгене FT (т. е. молекула РНК может содержать нацеливающую последовательность, которая является комплементарной по меньшей мере части нетранслируемой или некодирующей последовательности эндогенного гена FT). В соответствии с этими вариантами реализации изобретения последовательность ДНК пригодная для транскрипции второй экспрессионной кассеты может быть сконструирована в соответствии с предложенными в данном документе принципами для нацеливания на конкретную кодирующую или нетранслируемую (некодирующую) последовательность мРНК, кодируемую эндогенным геном FT, для супрессии, вместо последовательности мРНК, кодируемой трансгеном FT.[111] In accordance with additional variants of the invention, otherwise, the second expression cassette can be designed to encode an RNA molecule that targets the endogenous FT gene for suppression. Selective suppression of an endogenous FT gene can be achieved by targeting its coding sequence if the FT transgene has a different coding sequence from the endogenous gene (i.e., the RNA molecule may contain a targeting sequence that is complementary to at least a portion of the coding sequence of the endogenous FT gene). Alternatively, even if the coding sequences of the FT transgene and the endogenous FT gene are the same or similar, the second expression cassette can be designed to encode an RNA molecule that targets the untranslated or non-coding mRNA sequence encoded by the endogenous FT gene, for example, within 5'UTR, 3'UTR, intron and/or leader sequences of the endogenous FT mRNA transcript, if these sequences are different or absent from the FT transgene (i.e., the RNA molecule may contain a targeting sequence that is complementary to at least a portion of the untranslated or non-coding sequence of the endogenous FT gene). In accordance with these embodiments of the invention, a DNA sequence suitable for transcription of the second expression cassette can be designed in accordance with the principles proposed herein to target a specific coding or non-translated (non-coding) mRNA sequence encoded by the endogenous FT gene for suppression, instead of the mRNA sequence encoded by the FT transgene.
[112] В соответствии с другим широким аспектом данного изобретения предложены рекомбинантные молекула ДНК, конструкция или вектор, содержащие полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок FT (т. е. трансген FT), функционально связанную с промотором пригодным для экспрессии в растениях, при этом полинуклеотидная последовательность дополнительно содержит последовательность, кодирующую целевой сайт или сенсор для эндогенной молекулы РНК, такой как эндогенная микроРНК или миРНК, при этом целевой сайт или сенсор находятся в транскрипте пре-мРНК и/или зрелой мРНК, кодируемом трансгеном FT, например, в пределах 5' НТО, 3'НТО, интронных и/или лидерных последовательностей. В контексте данного документе «сенсор» представляет собой целевой сайт малой некодирующей РНК в мРНК-транскрипте трансгена FT, который является комплементарным эндогенной молекуле РНК, такой как эндогенная микроРНК или миРНК. Эндогенная молекула РНК может встречаться в природе в клетке или ткани растения и функционировать, подавляя один или более целевых генов, имеющих целевой сайт для эндогенной молекулы РНК. В данном документе сделано предположение, что трансген FT может быть дополнительно сконструирован так, чтобы содержать последовательность, кодирующую целевой сайт или сенсор мРНК для эндогенной молекулы РНК, так, чтобы происходила супрессия трансгена FT эндогенной молекулой РНК. Следовательно, супрессию трансгена FT можно использовать для смягчения фенотипов ранней терминации, наблюдаемых при только экспрессии трансгенного FT (т. е. без супрессии), аналогично супрессии посредством второй экспрессионной кассеты, кодирующей супрессионную молекулу РНК. Эндогенная молекула РНК может представлять собой любую известную встречающуюся в природе малую молекулу РНК, такую как микроРНК, миРНК и т. д., чья функция состоит в инициации супрессии одного или более целевых генов в клетке растения. В соответствии со многими вариантами реализации изобретения эндогенная молекула РНК может естественным образом экспрессироваться во время поздних вегетативных и/или генеративных стадий развития (например, в одной или более поздних вегетативных, генеративных и/или флоральных тканях) так, что эндогенная молекула РНК вызывает супрессию трансгена FT после обеспечения исходного сигнала индукции цветения. В соответствии со многими вариантами реализации изобретения промотор пригодный для экспрессии в растениях, целевой сайт трансгена FT или они оба являются гетерологичными по отношению к кодирующей полинуклеотидной последовательности трансгена FT.[112] According to another broad aspect of the present invention, a recombinant DNA molecule, construct, or vector is provided, comprising a polynucleotide sequence encoding an FT protein (i.e., an FT transgene) operably linked to a promoter suitable for expression in plants, wherein the polynucleotide sequence additionally contains a sequence encoding a target site or sensor for an endogenous RNA molecule, such as endogenous microRNA or miRNA, while the target site or sensor is located in the pre-mRNA and/or mature mRNA transcript encoded by the FT transgene, for example, within the 5' UTR , 3'UTR, intron and/or leader sequences. As used herein, a "sensor" is a target site of a small non-coding RNA in an mRNA transcript of an FT transgene that is complementary to an endogenous RNA molecule, such as an endogenous miRNA or siRNA. An endogenous RNA molecule may occur naturally in a plant cell or tissue and function to repress one or more target genes having a target site for the endogenous RNA molecule. It is contemplated herein that the FT transgene can be further engineered to contain a sequence encoding a target site or mRNA sensor for an endogenous RNA molecule such that the FT transgene is suppressed by the endogenous RNA molecule. Therefore, suppression of the FT transgene can be used to mitigate the early termination phenotypes seen when the FT transgenic is expressed alone (ie, without suppression), similar to suppression by a second expression cassette encoding a suppression RNA molecule. An endogenous RNA molecule can be any known naturally occurring small RNA molecule such as miRNA, miRNA, etc., whose function is to initiate the suppression of one or more target genes in a plant cell. According to many embodiments of the invention, an endogenous RNA molecule can be naturally expressed during late vegetative and/or generative stages of development (e.g., in one or more late vegetative, generative, and/or floral tissues) such that the endogenous RNA molecule causes suppression of the transgene. FT after providing the initial flowering induction signal. In many embodiments, the promoter suitable for expression in plants, the target site of the FT transgene, or both are heterologous with respect to the coding polynucleotide sequence of the FT transgene.
[113] В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения эндогенная молекула РНК может представлять собой одну или более эндогенных молекул микроРНК, например, одну или более из молекул РНК miR156 и/или miR172. Последовательности эндогенных молекул miR156 и miR172 будут зависеть от конкретного вида растения, в котором будет экспрессироваться трансген FT. трансген FT может быть сконструирован так, чтобы кодировать целевой сайт или сенсор мРНК для молекулы miR156 или miR172 в представляющем интерес виде растения, которое может быть выбрано на основании уровня и времени экспрессии одной или более молекул miR156 и miR172. В сое существует три молекулы miR172, которые экспрессируются на более высоких уровнях во время, близкое к переходу от вегетативной к генеративной стадии, miRNA172a (SEQ ID NO: 95), miRNA172c (SEQ ID NO: 96), или miRNA172k (SEQ ID NO: 97), и существует три молекулы miR156, которые присутствуют в избытке при переходе от молодого ко взрослому растению, miR156a (SEQ ID NO: 103), miR156c (SEQ ID NO: 104), или miR156q (SEQ ID NO: 105). Таким образом, полинуклеотидная последовательность, кодирующая белок FT, может дополнительно содержать последовательность, кодирующую один или более целевых сайтов или сенсоров для одной или более таких эндогенных молекул РНК miR156 или miR172. Каждый из целевых сайтов или сенсоров miR156 или miR172 может находиться в транскрипте пре-мРНК и/или зрелой мРНК, кодируемом трансгеном FT, например, в пределах кодирующей, 5' НТО, 3'НТО и/или интронной последовательности РНК, кодируемой полинуклеотидной последовательностью трансгена FT, хотя целевые сайты или сенсоры miR156 или miR172 чаще находятся в некодирующей и/или нетранслируемой последовательности. Примеры последовательностей, кодирующих целевой сайт или сенсор для молекулы miR156 сои, включают SEQ ID NO: 106, 108, 109 и 110, которые являются комплементарными с одной или более молекулами miR156. Например, последовательность, приведенная как SEQ ID NO: 106, кодирует SEQ ID NO: 107 как целевой сайт или сенсор мРНК для miR156. Примеры последовательностей, кодирующих целевой сайт или сенсор для молекулы miR172 сои, включают SEQ ID NO: 98, 100 и 101, которые являются комплементарными с одной или более молекулами miR172. Например, последовательность, приведенная как SEQ ID NO: 98, кодирует SEQ ID NO: 99 как целевой сайт или сенсор мРНК для miR172. При этом последовательность целевого сайта или сенсора трансгена FT можно определить на основании комплементарной последовательности известной молекулы miR156 или miR172. В действительности, в зависимости от последовательности одной или более эндогенных молекул miR156, miR172 и/или других малых молекул РНК, встречающихся в естественном состоянии в заданном виде растения, экспрессионную кассету трансгенного FT, трансформируемую в такой вид растения, можно сконструировать так, чтобы она кодировала целевой сайт или сенсор для такой эндогенной молекулы miR156, miR172 или другой малой молекулы РНК. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения первую экспрессионную кассету, содержащую трансген FT, можно сконструировать так, чтобы она имела последовательность, кодирующую целевой сайт или сенсор для эндогенной молекулы miR156, miR172 или другой малой молекулы РНК, даже если в тех же рекомбинантных молекуле ДНК, конструкции или векторе, или в том же трансгенном растении присутствует вторая экспрессионная кассета, которая содержат последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая дополнительно нацелена на тот же трансген FT для супрессии.[113] In accordance with some embodiments of the invention, the endogenous RNA molecule may be one or more endogenous microRNA molecules, for example, one or more of the miR156 and/or miR172 RNA molecules. The sequences of the endogenous miR156 and miR172 molecules will depend on the specific plant species in which the FT transgene will be expressed. The FT transgene can be designed to encode a target site or mRNA sensor for a miR156 or miR172 molecule in a plant species of interest, which can be selected based on the level and timing of expression of one or more miR156 and miR172 molecules. In soybean, there are three miR172 molecules that are expressed at higher levels during the transition from vegetative to generative stage, miRNA172a (SEQ ID NO: 95), miRNA172c (SEQ ID NO: 96), or miRNA172k (SEQ ID NO: 97), and there are three miR156 molecules that are present in excess at the transition from young to mature plant, miR156a (SEQ ID NO: 103), miR156c (SEQ ID NO: 104), or miR156q (SEQ ID NO: 105). Thus, a polynucleotide sequence encoding an FT protein may further comprise a sequence encoding one or more target sites or sensors for one or more such endogenous miR156 or miR172 RNA molecules. Each of the target sites or sensors of miR156 or miR172 can be located in the pre-mRNA and/or mature mRNA transcript encoded by the FT transgene, for example, within the coding, 5'UTR, 3'UTR and/or intron RNA sequence encoded by the transgene's polynucleotide sequence. FT, although miR156 or miR172 target sites or sensors are more often in a non-coding and/or non-translated sequence. Examples of sequences encoding a target site or sensor for the soybean miR156 molecule include SEQ ID NOs: 106, 108, 109 and 110, which are complementary to one or more miR156 molecules. For example, the sequence given as SEQ ID NO: 106 encodes SEQ ID NO: 107 as the target site or mRNA sensor for miR156. Examples of sequences encoding a target site or sensor for the soybean miR172 molecule include SEQ ID NOs: 98, 100 and 101, which are complementary to one or more miR172 molecules. For example, the sequence given as SEQ ID NO: 98 encodes SEQ ID NO: 99 as the target site or mRNA sensor for miR172. In this case, the sequence of the target site or sensor of the FT transgene can be determined based on the complementary sequence of the known miR156 or miR172 molecule. Indeed, depending on the sequence of one or more of the endogenous miR156, miR172, and/or other small RNA molecules naturally occurring in a given plant species, the transgenic FT expression cassette transformed into that plant species can be engineered to encode a target site or sensor for such an endogenous miR156, miR172 or other small RNA molecule. In accordance with some embodiments of the invention, the first expression cassette containing the FT transgene can be designed to have a sequence encoding a target site or sensor for an endogenous miR156, miR172, or other small RNA molecule, even if in the same recombinant DNA molecule, construct or vector, or in the same transgenic plant, a second expression cassette is present that contains a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that additionally targets the same FT transgene for suppression.
[114] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения целевой сайт для эндогенной молекулы РНК будет зависеть от растения, в котором будет экспрессироваться трансген FT. Для многих двудольных видов известны последовательности miR156 и miR172 (и их целевые сайты и сенсоры). Целевой сайт или сенсор мРНК трансгенного FT, комплементарный с эндогенной молекулой РНК, может иметь длину 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 (или более) нуклеотидов. Как правило, целевой сайт или сенсор трансгена FT сконструирован так, чтобы быть на 100% комплементарным эндогенной miR156 или miR172. Однако целевой сайт или сенсор для эндогенной супрессорной молекулы РНК не обязательно должен быть на 100% комплементарным эндогенной miR156 или miR172, чтобы быть эффективным (т. е., чтобы гибридизироваться с miR156 или miR172 и являться мишенью для супрессии). Например, не полностью идеальная комплементарность может обеспечить гибридизацию более чем одной молекулы miR156, miR172 и/или другой эндогенной молекулы РНК с целевым сайтом или сенсором. Для любого заданного вида растения целевой сайт или сенсор, кодируемый кодирующей полинуклеотидной последовательностью трансгена FT, может в некоторой степени варьироваться, но при этом связываться или гибридизироваться с эндогенной молекулой РНК, такой как эндогенная молекула РНК miR156 или miR172, при экспрессии в клетке растения. Соответственно, целевой сайт мРНК-транскрипта, кодируемый трансгеном FT, может содержать одно или более несовпадений, например 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более несовпадений, в зависимости от длины выравнивания между эндогенной молекулой РНК (например, miR156, miR172) и мРНК-транскриптом. В действительности, целевой сайт, кодируемый кодирующей полинуклеотидной последовательностью трансгена FT, может быть по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97% по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5%, по меньшей мере на 99,9% или на 100% комплементарным с нацеливающей последовательностью эндогенной молекулы РНК (например, miR156 или miR172), например, как целевой сайт или сенсор для молекулы a miR172 в сое (SEQ ID NO: 98, 100 или 101) целевой сайт или сенсор для молекулы a miR156 в сое (SEQ ID NO: 106, 108, 109 или 110).[114] In accordance with embodiments of the present invention, the target site for an endogenous RNA molecule will depend on the plant in which the FT transgene will be expressed. The miR156 and miR172 sequences (and their target sites and sensors) are known for many dicotyledonous species. The target site or sensor of the transgenic FT mRNA complementary to the endogenous RNA molecule may be 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, or 27 (or more) nucleotides in length. Typically, the target site or sensor of the FT transgene is designed to be 100% complementary to endogenous miR156 or miR172. However, the target site or sensor for an endogenous suppressor RNA molecule does not need to be 100% complementary to endogenous miR156 or miR172 to be effective (i.e., to hybridize to miR156 or miR172 and be a target for suppression). For example, not entirely perfect complementarity may allow more than one miR156, miR172, and/or other endogenous RNA molecule to hybridize to a target site or sensor. For any given plant species, the target site or sensor encoded by the coding polynucleotide sequence of the FT transgene may vary to some extent, yet bind or hybridize to an endogenous RNA molecule, such as an endogenous miR156 or miR172 RNA molecule, when expressed in a plant cell. Accordingly, the target site of an mRNA transcript encoded by the FT transgene may contain one or more mismatches, e.g. , miR156, miR172) and mRNA transcriptome. Indeed, the target site encoded by the coding polynucleotide sequence of the FT transgene may be at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least at least 99.5%, at least 99.9%, or 100% complementary to an endogenous RNA molecule targeting sequence (e.g., miR156 or miR172), such as the target site or sensor for the a miR172 molecule in soy (SEQ ID NO: 98, 100 or 101) target site or sensor for the a miR156 molecule in soybean (SEQ ID NO: 106, 108, 109 or 110).
[115] В соответствии с другим широким аспектом данного изобретения предложены способы трансформации клетки, ткани или эксплантата растения рекомбинантными молекулой ДНК, конструкцией или вектором, предложенными в данном документе, для получения трансгенного растения. Рекомбинантные молекула ДНК, конструкция или вектор могут содержать трансген FT или экспрессионную кассету. В зависимости от типа супрессии, трансген FT может дополнительно содержать целевой сайт для эндогенной молекулы РНК. Рекомбинантные молекула ДНК, конструкция или вектор могут содержать вторую экспрессионную кассету, содержащую последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии. В альтернативном варианте трансген FT и последовательность ДНК пригодная для транскрипции, кодирующая молекулу РНК, могут находиться в двух отдельных молекулах ДНК, конструкциях или векторах, которые можно трансформировать в растения вместе или отдельно. Рекомбинантные молекулу ДНК, конструкцию или вектор, содержащие трансген FT и последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, можно трансформировать в растение. В соответствии с другими вариантами реализации изобретения первую рекомбинантную молекулу ДНК, конструкцию или вектор, содержащие трансген FT, и вторую рекомбинантную молекулу ДНК, конструкцию или вектор, содержащие последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, можно совместно трансформировать в растение. В соответствии с другими вариантами реализации изобретения растение, трансформированное первой экспрессионной кассетой, содержащей трансген FT, можно трансформировать второй экспрессионной кассетой, содержащей последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, или растение, трансформированное первой экспрессионной кассетой, содержащей последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, можно трансформировать второй экспрессионной кассетой, содержащей трансген FT. В соответствии с дополнительными вариантами реализации изобретения первое трансгенное растение, содержащее первую экспрессионную кассету, содержащую (i) трансген FT или (ii) последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, можно скрещивать со вторым растением, содержащим вторую экспрессионную кассету, содержащую (i) последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, или (ii) трансген FT, так, чтобы можно было получить одно или более дочерних растений, содержащих как первую, так и вторую экспрессионные кассеты (т. е. как трансген FT, так и последовательность ДНК пригодную для транскрипции).[115] According to another broad aspect of the present invention, methods are provided for transforming a cell, tissue, or plant explant with a recombinant DNA molecule, construct, or vector provided herein to produce a transgenic plant. The recombinant DNA molecule, construct or vector may contain an FT transgene or an expression cassette. Depending on the type of suppression, the FT transgene may additionally contain a target site for an endogenous RNA molecule. The recombinant DNA molecule, construct, or vector may contain a second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression. Alternatively, the FT transgene and a transcriptionable DNA sequence encoding an RNA molecule can be in two separate DNA molecules, constructs or vectors that can be transformed into plants together or separately. A recombinant DNA molecule, construct or vector containing the FT transgene and a transcriptionable DNA sequence encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression can be transformed into a plant. In accordance with other embodiments of the invention, a first recombinant DNA molecule, construct or vector containing the FT transgene, and a second recombinant DNA molecule, construct or vector containing a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression can be co-transform into a plant. In accordance with other embodiments of the invention, a plant transformed with a first expression cassette containing the FT transgene can be transformed with a second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression, or a plant transformed with the first expression cassette , containing a DNA sequence suitable for transcription, encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression, can be transformed with a second expression cassette containing the FT transgene. In accordance with additional embodiments of the invention, a first transgenic plant containing a first expression cassette containing (i) an FT transgene or (ii) a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression can be crossed with a second plant, containing a second expression cassette containing (i) a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression, or (ii) the FT transgene, so that one or more daughter plants can be obtained containing both the first, and a second expression cassette (i.e. both the FT transgene and a DNA sequence suitable for transcription).
[116] В данной области техники известны многочисленные способы трансформации хромосом в клетках растений рекомбинантными молекулой ДНК, конструкцией или вектором, которые можно применять в соответствии со способами данного изобретения для получения клетки трансгенного растения, части растения и растения. В соответствии с представленными способами можно применять любые подходящие способы или методики для трансформации растительных клеток, известные в данной области техники. эффективные способы трансформации растений включают бактериально-опосредованную трансформацию, такую как Agrobacterium-опосредованная или Rhizhobium-опосредованная трансформация и опосредованная бомбардировкой микрочастицами трансформация. В данной области техники известны различные способы трансформации эксплантатов трансформационным вектором путем бактериально-опосредованной трансформации или бомбардировки микрочастицами и последующего культивирования и т. д. этих эксплантатов для регенерации или выращивания трансгенных растений. Другие способы трансформации растений, такие как микроинъекция, электропорация, вакуумная инфильтрация, применение высокого давления, ультразвука, перемешивание с карбидокремниевыми волокнами, ПЭГ-опосредованная трансформация и т. д., также известны в данной области техники. Трансгенные растения, получаемые с помощью этих способов трансформации, могут быть химерными или нехимерными в отношении события трансформации, в зависимости от используемых способов и эксплантатов. Подходящие способы пластидной трансформации рекомбинантной молекулой ДНК или конструкцией также известны в данной области техники.[116] Numerous methods are known in the art for transforming chromosomes in plant cells with a recombinant DNA molecule, construct or vector, which can be used in accordance with the methods of this invention to obtain a transgenic plant cell, plant part and plant. In accordance with the methods presented, any suitable methods or techniques for transforming plant cells known in the art can be used. effective plant transformation methods include bacterial-mediated transformation such as Agrobacterium -mediated or Rhizhobium -mediated transformation and microparticle bombardment-mediated transformation. Various methods are known in the art for transforming explants with a transformation vector by bacterial-mediated transformation or microparticle bombardment and then culturing etc. of these explants to regenerate or grow transgenic plants. Other methods of plant transformation such as microinjection, electroporation, vacuum infiltration, high pressure application, ultrasound, mixing with silicon carbide fibers, PEG-mediated transformation, etc., are also known in the art. Transgenic plants produced by these transformation methods may be chimeric or non-chimeric with respect to the transformation event, depending on the methods and explants used. Suitable methods for plastid transformation with a recombinant DNA molecule or construct are also known in the art.
[117] Дополнительно предложены способы экспрессии трансгена FT в одной или более клетках или тканях растения под управлением промотора вегетативной стадии, который также может быть меристемо-предпочтительным или меристемо-специфическим промотором. Экспрессию трансгена FT можно модифицировать, ослаблять и/или корректировать за счет наличия целевого сайта или сенсора для эндогенной молекулы РНК в мРНК, кодируемой трансгеном FT, так, чтобы эндогенная молекула РНК была нацелена на трансген FT для супрессии. Кроме трансгена FT, молекула РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, также может экспрессироваться из последовательности ДНК пригодной для транскрипции, трансформированной в растение. Такие способы можно использовать для изменения времени цветения растения и/или числа продуктивных или успешных цветков, фруктов, бобов и/или семян на узел растения по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением, не содержащим трансген FT. В действительности, способы согласно данному изобретению можно применять для изменения связанных с генеративностью или урожайностью фенотипов или признаков трансгенного растения.[117] Further provided are methods for expressing an FT transgene in one or more plant cells or tissues under the control of a vegetative stage promoter, which can also be a meristem-preferred or meristem-specific promoter. Expression of the FT transgene can be modified, attenuated and/or adjusted by having a target site or sensor for an endogenous RNA molecule in the mRNA encoded by the FT transgene such that the endogenous RNA molecule is targeted to the FT transgene for suppression. In addition to the FT transgene, an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression can also be expressed from a transcriptionable DNA sequence transformed into a plant. Such methods can be used to change the flowering time of a plant and/or the number of productive or successful flowers, fruits, pods and/or seeds per plant node compared to a wild-type plant or control plant lacking the FT transgene. Indeed, the methods of this invention can be used to alter the generative or yield related phenotypes or traits of a transgenic plant.
[118] Трансформацию целевого растительного материала или эксплантата можно осуществлять на практике в тканевой культуре в питательной среде, например, смеси питательных веществ, которые обеспечивают рост клеток in vitro. Целевые реципиентные клетки или эксплантаты могут включать, но не ограничиваются этим, меристемы, кончики побегов, протопласты, подсемядольные колена, каллюс, незрелые или зрелые эмбрионы, побеги, почки, узловые секции, листья, гаметы, такие как микроспоры, пыльца, спермии, яйцеклетки, и т. д. или любые их подходящие части. Предусматривается, что в качестве мишени для трансформации можно использовать любую трансформируемую клетку или ткань, из которой можно регенерировать или вырастить фертильное растение. Трансформированные эксплантаты, клетки или ткани можно подвергать дополнительным этапам культивирования, таким как индукция каллюса, селекция, регенерация и т. д., как известно в данной области техники. Трансформированные клетки, ткани или эксплантаты, содержащие вставку рекомбинантной ДНК, можно выращивать или регенерировать в трансгенные растения в культуре, наполнителе или почве в соответствии с известными в данной области техники способами. Трансгенные растения можно дополнительно скрещивать между собой или с другими растениями для получения трансгенных семян и потомства. Трансгенное растение также можно получать путем скрещивания первого растения, содержащего рекомбинантную последовательность ДНК или событие трансформации, со вторым растением, в котором отсутствует вставка. Например, рекомбинантную последовательность ДНК можно вносить в первую линию растений, подлежащих трансформации, которые затем можно скрещивать со второй линией растений для интрогрессии рекомбинантной последовательности ДНК во вторую линию растений. Потомство от такого скрещивания можно дополнительно многократно обратно скрещивать с более желательными линиями, например, на протяжении 6-8 поколений обратного скрещивания, для получения потомства с по существу таким же генотипом, что и исходная родительская линия, но с внесенной рекомбинантной последовательностью ДНК.[118] the Transformation of the target plant material or explant can be practiced in tissue culture in a nutrient medium, for example, a mixture of nutrients that promote cell growth in vitro. Target recipient cells or explants may include, but are not limited to, meristems, shoot tips, protoplasts, hypocotyls, callus, immature or mature embryos, shoots, buds, nodal sections, leaves, gametes such as microspores, pollen, sperm, eggs , etc. or any suitable parts thereof. It is contemplated that any transformable cell or tissue that can be regenerated or grown into a fertile plant can be used as a target for transformation. Transformed explants, cells or tissues can be subjected to additional culture steps such as callus induction, selection, regeneration, etc., as is known in the art. Transformed cells, tissues, or explants containing the recombinant DNA insert can be grown or regenerated into transgenic plants in culture, media, or soil, according to methods known in the art. Transgenic plants can be further crossed with each other or with other plants to produce transgenic seeds and offspring. A transgenic plant can also be obtained by crossing a first plant containing the recombinant DNA sequence or transformation event with a second plant lacking the insert. For example, the recombinant DNA sequence can be introduced into a first line of plants to be transformed, which can then be crossed with a second line of plants to introgress the recombinant DNA sequence into a second plant line. The progeny from such a cross can be further backcrossed multiple times with more desirable lines, e.g. over 6-8 backcross generations, to produce progeny with essentially the same genotype as the original parent line, but with a recombinant DNA sequence introduced.
[119] Рекомбинантную ДНК-конструкцию или экспрессионную кассету согласно данному изобретению можно включать в ДНК-трансформационный вектор для использования при трансформации целевых клетки, ткани или эксплантата растения. Такой трансформационный вектор согласно данному изобретению может в общем случае содержать последовательности или элементы, необходимые или полезные для эффективной трансформации, помимо последовательности ДНК пригодной для транскрипции и/или трансгена FT или экспрессионной кассеты. В случае Agrobacterium-опосредованной трансформации трансформационный вектор может содержать сегмент сконструированной транспортной ДНК (или Т-ДНК) или область, имеющую две граничные последовательности, левую границу (ЛГ) и правую границу (ПГ), фланкирующие по меньшей мере последовательность ДНК пригодную для транскрипции и/или трансген FT, так, что вставка Т-ДНК в геном растения создаст событие трансформации для последовательности ДНК пригодной для транскрипции и/или трансгена FT. Другими словами, последовательность ДНК пригодная для транскрипции и/или трансген FT были бы расположены между левой и правой границами Т-ДНК, возможно, наряду с дополнительными трансгенами или экспрессионными кассетами, такими как трансген растительного селективного маркера и/или другие представляющие агрономический интерес гены, которые могут обеспечивать представляющий агрономический интерес признак или фенотип растению. Кроме кодирующих белок последовательностей, представляющие агрономический интерес гены могут дополнительно содержать полинуклеотидную последовательность, кодирующую супрессорный РНК-элемент. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения последовательность ДНК пригодная для транскрипции и/или трансген FT и трансген растительного селективного маркера (или другой представляющий агрономический интерес ген) могут находиться в отдельных сегментах Т-ДНК в одной или разных рекомбинантных молекулах ДНК, например, как для совместной трансформации. Трансформационный вектор или конструкция могут дополнительно содержать прокариотические поддерживающие элементы, которые в случае Agrobacterium-опосредованной трансформации могут находиться в остове вектора за пределами области (-ей) Т-ДНК.[119] The recombinant DNA construct or expression cassette of the invention can be incorporated into a DNA transformation vector for use in transforming a target cell, tissue, or plant explant. Such a transformation vector according to the invention may generally contain sequences or elements necessary or useful for efficient transformation, in addition to a transcriptional DNA sequence and/or an FT transgene or expression cassette. In the case of Agrobacterium -mediated transformation, the transformation vector may contain a segment of engineered transfer DNA (or T-DNA) or a region having two boundary sequences, a left border (LB) and a right border (RG), flanking at least a DNA sequence suitable for transcription and /or an FT transgene, such that insertion of the T-DNA into the plant genome will create a transformation event for a DNA sequence suitable for transcription and/or an FT transgene. In other words, a DNA sequence suitable for transcription and/or an FT transgene would be located between the left and right borders of the T-DNA, possibly along with additional transgenes or expression cassettes such as a plant selectable marker transgene and/or other genes of agronomic interest, which may provide a trait or phenotype of agronomic interest to a plant. In addition to protein coding sequences, genes of agronomic interest may further comprise a polynucleotide sequence encoding a suppressor RNA element. In some embodiments, the transcriptional DNA sequence and/or the FT transgene and the plant selectable marker transgene (or other gene of agronomic interest) may reside in separate T-DNA segments in the same or different recombinant DNA molecules, such as for joint transformation. The transformation vector or construct may further comprise prokaryotic support elements which, in the case of Agrobacterium -mediated transformation, may reside in the backbone of the vector outside of the T-DNA region(s).
[120] В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения первая экспрессионная кассета, содержащая трансген FT, и вторая экспрессионная кассета, содержащая последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, могут находиться в одной Т-ДНК трансформационного вектора (т. е. между одними правой и левой границами Т-ДНК); первая экспрессионная кассета, содержащая трансген FT, может находиться в первой Т-ДНК (содержащей первую правую границу и первую левую границу), а вторая экспрессионная кассета, содержащая последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, может находиться во второй Т-ДНК (содержащей вторую правую границу и вторую левую границу), при этом первая и вторая Т-ДНК находятся в одном трансформационном векторе; или первая экспрессионная кассета, содержащая трансген FT, может находиться в первой Т-ДНК первого трансформационного вектора, а вторая экспрессионная кассета, содержащая последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, может находиться во второй Т-ДНК второго трансформационного вектора. Первую и вторую экспрессионные кассеты, находящиеся в одном или двух трансформационных векторах, можно совместно трансформировать в клетку растения, или же первая и вторая экспрессионные кассеты могут находиться в двух отдельных трансформационных векторах, и их трансформируют в клетки растения отдельно. Первую и вторую экспрессионные кассеты можно трансформировать в одну или более клеток растений, уже содержащих событие трансформации в отношении другой экспрессионной кассеты, или же первую и вторую экспрессионные кассеты можно трансформировать в разные клетки растения, которые можно выращивать или регенерировать в первое и второе трансгенное растение. Первое или второе трансгенные растения и/или их потомство можно скрещивать между собой так, чтобы свести вместе первую и вторую экспрессионные кассеты в одном растении.[120] In accordance with some embodiments of the invention, the first expression cassette containing the FT transgene and the second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression may be in the same T-DNA of the transformational vector (i.e., between the same right and left T-DNA borders); the first expression cassette containing the FT transgene may be in the first T-DNA (containing the first right border and the first left border), and the second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression, may be in the second T-DNA (containing the second right border and the second left border), while the first and second T-DNA are in the same transformation vector; or the first expression cassette containing the FT transgene may be in the first T-DNA of the first transformation vector, and the second expression cassette containing a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression may be in the second T- DNA of the second transformation vector. The first and second expression cassettes in one or two transformation vectors can be co-transformed into a plant cell, or the first and second expression cassettes can be in two separate transformation vectors and are transformed into plant cells separately. The first and second expression cassettes can be transformed into one or more plant cells already containing a transformation event for another expression cassette, or the first and second expression cassettes can be transformed into different plant cells that can be grown or regenerated into the first and second transgenic plant. The first or second transgenic plants and/or their progeny can be crossed with each other so as to bring together the first and second expression cassettes in one plant.
[121] Трансген растительного селективного маркера в трансформационном векторе или конструкции согласно данному изобретению можно использовать для помощи в отборе трансформированных клеток или тканей вследствие наличия селекционного агента, такого как антибиотик или гербицид, при этом трансген растительного селективного маркера обеспечивает устойчивость или резистентность к селекционному агенту. Таким образом, селекционный агент может поддерживать или способствовать выживаемости, развитию, росту, пролиферации и т. д. трансформированных клеток, экспрессирующих ген растительного селективного маркера, так, чтобы увеличить долю трансформированных клеток в растении R0. Обычно используемые гены растительных селективных маркеров включают, например, те, которые обеспечивают устойчивость или резистентность к антибиотикам, таким как канамицин или паромомицин (nptII), гигромицин B (aph IV), стрептомицин или спектиномицин (aadA) и гентамицин (aac3 и aacC4), или те, которые обеспечивают устойчивость или резистентность к гербицидам, таким как глюфосинат (bar или pat), дикамба (DMO) и глифосат (aroA или EPSPS). Также можно использовать гены растительных селективных маркеров, которые обеспечивают возможность визуального скрининга в отношении трансформантов, например, люциферазы или зеленого флуоресцентного белка (ЗФБ), или ген, экспрессирующий бета-глюкуронидазу, или ген uidA (GUS), для которого известны различные хромогенные субстраты.[121] A plant selectable marker transgene in a transformation vector or construct of the present invention can be used to aid in the selection of transformed cells or tissues due to the presence of a selection agent, such as an antibiotic or herbicide, wherein the plant selection marker transgene provides resistance or resistance to the selection agent. Thus, the selection agent can support or promote the survival, development, growth, proliferation, etc. of transformed cells expressing the plant selection marker gene, so as to increase the proportion of transformed cells in the plant R 0 . Commonly used plant selectable marker genes include, for example, those conferring resistance or resistance to antibiotics such as kanamycin or paromomycin ( nptII ), hygromycin B ( aph IV ), streptomycin or spectinomycin ( aadA ) and gentamicin ( aac3 and aacC4 ), or those that provide resistance or resistance to herbicides such as glufosinate ( bar or pat ), dicamba ( DMO ), and glyphosate ( aroA or EPSPS ). It is also possible to use plant selectable marker genes that allow visual screening for transformants, for example, luciferase or green fluorescent protein (GFP), or a beta-glucuronidase expressing gene, or the uidA (GUS) gene, for which various chromogenic substrates are known.
[122] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения способы трансформации клетки, ткани или эксплантата растения рекомбинантной молекулой ДНК или конструкцией могут дополнительно включать сайт-направленную или нацеленную интеграцию. В соответствии с этими способами часть рекомбинантной донорной матричной молекулы ДНК (т. е. последовательность для вставки) можно вставлять или интегрировать в необходимый сайт или локус в геноме растения. Последовательность для вставки донорной матрицы может содержать трансген или конструкцию, такие как (i) трансген FT или конструкцию, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок FT, функционально связанную с промотором вегетативной стадии, который также может быть меристемо-предпочтительным или меристемо-специфическим промотором, и/или (ii) последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, и функционально связана с промотором вегетативной стадии и/или промотором генеративной стадии, который также может быть меристемо-предпочтительным или меристемо-специфическим промотором. Донорная матрица также может иметь одно или два плеча гомологии, фланкирующие последовательность вставки, для стимуляции события нацеленной вставки посредством гомологичной рекомбинации и/или гомологичной репарации. Таким образом, рекомбинантная молекула ДНК согласно данному изобретению может дополнительно содержать донорную матрицу для сайт-направленной или нацеленной интеграции трансгена или конструкции, такой как трансген или конструкция FT, в геном растения.[122] According to embodiments of the present invention, methods for transforming a cell, tissue, or plant explant with a recombinant DNA molecule or construct may further comprise site-directed or targeted integration. According to these methods, a portion of the recombinant donor template DNA molecule (ie, the sequence to be inserted) can be inserted or integrated at a desired site or locus in the plant genome. The sequence for inserting the donor template may comprise a transgene or construct, such as (i) an FT transgene or a construct containing a polynucleotide sequence encoding an FT protein operably linked to a vegetative stage promoter, which may also be a meristem-preferred or meristem-specific promoter, and /or (ii) a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression and is operably linked to a vegetative stage promoter and/or a generative stage promoter, which may also be a meristem-preferred or meristem-specific promoter. The donor template may also have one or two homology arms flanking the insertion sequence to promote a targeted insertion event via homologous recombination and/or homologous repair. Thus, the recombinant DNA molecule of the invention may further comprise a donor template for site-directed or targeted integration of a transgene or construct, such as a transgene or FT construct, into the plant genome.
[123] Любой сайт или локус в геноме растения потенциально может быть выбран для сайт-направленной интеграции трансгена или конструкции согласно данному изобретению. В случае сайт-направленной интеграции сначала может создаваться двухцепочечный разрыв или «ник» в выбранном геномном локусе с помощью сайт-специфической нуклеазы, такой как, например, цинк-пальцевая нуклеаза (ZFN), мегануклеаза, нуклеаза, подобная активаторам транскрипции (TALEN), Argonaute (неограничивающие примеры белков Argonaute включают Thermus thermophilus Argonaute (TtAgo), Pyrococcus furiosus Argonaute (PfAgo), Natronobacterium gregoryi Argonaute (NgAgo), РНК-направляемая нуклеаза (неограничивающие примеры РНК-направляемых нуклеаз включают Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9 (также известную как Csn1 и Csx12), Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, их гомологи или их модифицированные версии); рекомбиназы (без ограничений, например, тирозиновой рекомбиназы, присоединенной к мотиву распознавания ДНК (например, рекомбиназы Cre, рекомбиназы Flp, рекомбиназы Tnp1), сериновой рекомбиназы, присоединенной к мотиву распознавания ДНК (например, интегразы PhiC31, интегразы R4, интегразы TP-901); транспозазы (без ограничений, например, ДНК-транспозазы, присоединенной к ДНК-связывающему домену); или любой их комбинации. Также предложены направляющие РНК (например, РНК CRISPR (crРНК), транс-активирующие РНК CRISPR (tracrРНК), направляющие РНК (нРНК), одинарные направляющие РНК (онРНК)), применимые в способах с использованием РНК-направляемых нуклеаз. Можно применять любой известный в данной области техники способ для сайт-направленной интеграции. В присутствии донорной матричной молекулы может происходить репарация двухцепочечного разрыва или «ника» посредством гомологичной рекомбинации между плечами гомологии донорной матрицы и геномом растения или посредством негомологичного соединения концов (НГСК), приводя к сайт-направленной интеграции последовательности вставки в геном растения для создания события нацеленной вставки в сайте двухцепочечного разрыва или «ника» или вблизи него. Таким образом, можно обеспечить сайт-специфическую вставку или интеграцию трансгена или конструкции.[123] Any site or locus in the plant genome can potentially be selected for site-directed integration of a transgene or construct of the invention. In the case of site-directed integration, a double-strand break or “nick” can first be created at the selected genomic locus with a site-specific nuclease such as, for example, zinc finger nuclease (ZFN), meganuclease, transcription activator-like nuclease (TALEN), Argonaute (non-limiting examples of Argonaute proteins include Thermus thermophilus Argonaute (TtAgo), Pyrococcus furiosus Argonaute (PfAgo), Natronobacterium gregoryi Argonaute (NgAgo), RNA-directed nuclease (non-limiting examples of RNA-directed nucleases include Cas1, Cas1B, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, Cas9 (also known as Csn1 and Csx12), Cas10, Csy1, Csy2, Csy3, Cse1, Cse2, Csc1, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmr1, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csb1, Csb2, Csb3, Csx17, Csx14, Csx10, Csx16, CsaX, Csx3, Csx1, Csx15, Csf1, Csf2, Csf3, Csf4, Cpf1, their homologues or their modified versions); recombinases ( without limitation, for example, tyrosine recombinase attached to m DNA recognition motif ( eg , Cre recombinase, Flp recombinase, Tnp1 recombinase), serine recombinase attached to DNA recognition motif ( eg, PhiC31 integrase, R4 integrase, TP-901 integrase); transposase (without limitation, for example , DNA transposase attached to a DNA-binding domain); or any combination of them. Guide RNAs ( eg, CRISPR RNA (crRNA), trans -activating CRISPR RNA (tracrRNA), guide RNA (nRNA), single guide RNA (sRNA)) useful in methods using RNA-targeted nucleases are also provided. Any method known in the art for site-directed integration can be used. In the presence of a donor template molecule, repair of a double-strand break or "nick" can occur via homologous recombination between the homology arms of the donor template and the plant genome, or via non-homologous end joining (NGSK), leading to site-directed integration of the insert sequence into the plant genome to create a targeted insertion event at or near the site of the double-strand break or "nick". Thus, site-specific insertion or integration of a transgene or construct can be achieved.
[124] В контексте данного документа термин «вставка» в отношении трансформации растения или сайт-направленной интеграции относится к вставке или интеграции экзогенного полинуклеотида или ДНК-конструкции, молекулы или последовательности, такой как последовательность трансформационного вектора или Т-ДНК или последовательность вставки донорной матрицы, в геном растения. В этом контексте термин «экзогенный» относится к полинуклеотиду или ДНК-конструкции, молекуле или последовательности, которые вносят в клетку или ткань растения, используя подходящий способ или метод трансформации растения или редактирования генома, известный в данной области техники.[124] As used herein, the term "insert" in relation to plant transformation or site-directed integration refers to the insertion or integration of an exogenous polynucleotide or DNA construct, molecule, or sequence, such as a transformation vector or T-DNA sequence, or a donor template insert sequence. , into the plant genome. In this context, the term "exogenous" refers to a polynucleotide or DNA construct, molecule or sequence that is introduced into a plant cell or tissue using a suitable plant transformation or genome editing method or method known in the art.
[125] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения растение, которое можно трансформировать рекомбинантной молекулой ДНК или трансформационным вектором, содержащим трансген FT и/или последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, может включать множество цветущих растений или покрытосеменных растений, которые могут быть дополнительно определены как включающий различные виды двусемядольных (двудольных) растений, такие как соя, хлопок, люцерна, канола, сахарная свекла, люцерна и другие бобовые растения. Двудольное растение может быть представителем вида Brassica sp. (например, B. napus, B. rapa, B. juncea), в частности, видов Brassica, используемых в качестве источника растительных масел, люцерной (Medicago sativa), подсолнечником (Helianthus annuus), сафлором (Carthamus tinctorius), масличной пальмой (Elaeis spp.), кунжутом (Sesamum spp.), кокосом (Cocos spp.), соей (Glycine max), табаком (Nicotiana tabacum), картофелем (Solanum tuberosum), арахисом (Arachis hypogaea), хлопком (Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum), сладким картофелем (Ipomoea batatus), маниокой (Manihot esculenta), кофе (Coffea spp.), чаем (Camellia spp.), фруктовыми деревьями, такими как яблоня (Malus spp.), Prunus spp., такие как слива, абрикос, персик, вишня и т. д., груша (Pyrus spp.), инжир (Ficus casica), банан (Musa spp.) и т. д., цитрусовыми деревьями (Citrus spp.), кокосом (Theobroma cacao), авокадо (Persea americana), оливой (Olea europaea), миндалем (Prunus amygdalus), грецким орехом (Juglans spp.), земляникой (Fragaria spp.), арбузом (Citrullus lanatus), перцем (Capsicum spp.), сахарной свеклой (Beta vulgaris), виноградом (Vitis, Muscadinia), томатом (Lycopersicon esculentum, Solanum lycopersicum) и огурцом (Cucumis sativis). Бобовые растения включают бобы и горох. Бобы включают, например, гуар, рожковое дерево, пажитник, сою, фасоль обыкновенную, коровий горох, маш, лимскую фасоль, обыкновенный боб, чечевицу и нут. Учитывая, что данное изобретение может относиться к широкому диапазону видов растений, данное изобретение дополнительно относится к другим ботаническим структурам, аналогичным бобам бобовых растений, таким как семенные коробочки, стручки, фрукты, орехи, клубни и т. д.[125] In accordance with embodiments of the present invention, a plant that can be transformed with a recombinant DNA molecule or a transformation vector containing an FT transgene and/or a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression may include a plurality of flowering plants or angiosperms, which can be further defined as including various types of dicotyledonous (dicotyledonous) plants, such as soybean, cotton, alfalfa, canola, sugar beet, alfalfa and other leguminous plants. The dicotyledonous plant may be a representative of the species Brassica sp. (e.g. B. napus, B. rapa, B. juncea ), in particular Brassica species, used as a source of vegetable oils, alfalfa ( Medicago sativa ), sunflower ( Helianthus annuus ), safflower ( Carthamus tinctorius ), oil palm ( Elaeis spp.), sesame ( Sesamum spp.), coconut ( Cocos spp.), soybean ( Glycine max ), tobacco ( Nictiana tabacum ), potato ( Solanum tuberosum ), peanut ( Arachis hypogaea ), cotton ( Gossypium barbadense, Gossypium hirsutum ), sweet potato ( Ipomoea batatus ), cassava ( Manihot esculenta ), coffee ( Coffea spp.), tea ( Camellia spp.), fruit trees such as apple ( Malus spp.), Prunus spp. such as plum, apricot , peach, cherry, etc., pear ( Pyrus spp.), fig ( Ficus casica ), banana ( Musa spp.), etc., citrus trees ( Citrus spp.), coconut ( Theobroma cacao ), avocado ( Persea americana ), olive ( Olea europaea ), almond ( Prunus amygdalus ), walnut ( Juglans spp.), strawberry ( Fragaria s pp.), watermelon ( Citrullus lanatus ), pepper ( Capsicum spp.), sugar beet ( Beta vulgaris ), grapes (Vitis, Muscadinia ), tomato (Lycopersicon esculentum, Solanum lycopersicum ) and cucumber ( Cucumis sativis ). Leguminous plants include beans and peas. Legumes include, for example, guar, carob, fenugreek, soybeans, common beans, cowpeas, mung beans, lima beans, common beans, lentils and chickpeas. Given that this invention may apply to a wide range of plant species, this invention additionally relates to other botanical structures similar to beans of legumes, such as seed pods, pods, fruits, nuts, tubers, etc.
[126] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения и в зависимости от конкретного трансформируемого вида растения, растение с эктопической экспрессией последовательности флоригенного FT, которую можно модифицировать посредством супрессии, как предложено в данном документе, может иметь измененное или большее число семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов, клубней и т. д. на узел (-лы), главный стебель и/или ветку (-и) растения, и/или измененное или большее число семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов, клубней и т. д. на растение по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением, не содержащим трансген FT. [126] In accordance with embodiments of the present invention and depending on the specific plant species being transformed, a plant with ectopic expression of a florigenic FT sequence that can be modified by suppression as proposed herein may have an altered or greater number of pods, pods, fruits, nuts, tubers, etc. per node(s), main stem and/or branch(s) of the plant, and/or modified or more pods, pods, fruits, nuts, tubers, etc. per plant compared to a wild-type plant or a control plant that does not contain the FT transgene.
[127] В соответствии с другим широким аспектом данного изобретения предложены трансгенные растения, клетки растений, семена и части растений, содержащие одно или более событий трансформации или одну или более вставок в геноме по меньшей мере одной клетки растения, при этом событие трансформации или вставка содержат (i) рекомбинантную последовательность ДНК, конструкцию или полинуклеотид, содержащие трансген Flowering Locus T (FT), причем трансген FT содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок FT, функционально связанную с промотором вегетативной стадии, который также может быть меристемо-предпочтительным или меристемо-специфическим промотором, и/или (ii) последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, функционально связанную с промотором вегетативной стадии и/или промотором генеративной стадии, который также может быть меристемо-предпочтительным или меристемо-специфическим промотором. Как предложено в данном документе можно осуществлять нацеливание на трансген FT для супрессии посредством трансгенно экспрессируемой и/или эндогенной молекулы РНК. Молекула РНК может кодироваться последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, которую также трансформируют в растение, часть растения, семя растения или клетку растения. Белок FT, кодируемый полинуклеотидной последовательностью, может соответствовать нативному гену FT в трансгенном растении, трансформированном полинуклеотидной кодирующей последовательностью, или быть гомологичным или сходным с белком FT, нативным для трансгенного растения (т. е. не нативным для трансгенного растения, но сходным с нативным или эндогенным белком FT), или гетерологичным для трансгенного растения. Такое трансгенное растение можно получать любым удобным способом трансформации, за которым могут следовать селекция, культивирование, регенерация, развитие и т. д., в случае желания или необходимости получения трансгенного растения R0, которое затем можно самоопылять или скрещивать с другими растениями для создания семян R1 и последующих поколений и семян посредством дополнительного скрещивания и т. д. Аналогично, варианты реализации данного изобретения дополнительно включают клетку, ткань, эксплантат и т. д. растения, содержащие одну или более трансгенных клеток, имеющих событие трансформации или геномную вставку рекомбинантной ДНК или полинуклеотидной последовательности, содержащей трансген FT и/или последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии.[127] According to another broad aspect of the present invention, transgenic plants, plant cells, seeds, and plant parts are provided, comprising one or more transformation events or one or more inserts in the genome of at least one plant cell, wherein the transformation event or insert comprises (i) a recombinant DNA sequence, construct, or polynucleotide comprising a Flowering Locus T (FT) transgene, wherein the FT transgene contains a polynucleotide sequence encoding an FT protein operably linked to a vegetative stage promoter, which may also be a meristem-preferred or meristem-specific promoter and/or (ii) a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression, operably linked to a vegetative stage promoter and/or a generative stage promoter, which may also be a meristem-preferred or meristem-specific promoter . As proposed herein, the FT transgene can be targeted for suppression by a transgene-expressed and/or endogenous RNA molecule. An RNA molecule can be encoded by a transcriptionable DNA sequence that is also transformed into a plant, plant part, plant seed, or plant cell. The FT protein encoded by the polynucleotide sequence may correspond to the native FT gene in the transgenic plant transformed with the polynucleotide coding sequence, or be homologous or similar to the FT protein native to the transgenic plant (i.e., not native to the transgenic plant, but similar to native or endogenous FT protein), or heterologous for the transgenic plant. Such a transgenic plant can be obtained by any convenient transformation method, which can be followed by selection, cultivation, regeneration, development, etc., if desired or necessary to obtain a transgenic R 0 plant, which can then be self-pollinated or crossed with other plants to create seeds. R1 and subsequent generations and seeds through additional crossing, etc. Similarly, embodiments of this invention further include a cell, tissue, explant, etc. plants containing one or more transgenic cells having a transformation event or genomic insertion of recombinant DNA or a polynucleotide sequence containing the FT transgene and/or a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression.
[128] Трансгенные растения, клетки растений, семена и части растений согласно данному изобретению могут быть гомозиготными или гемизиготными в отношении трансгенного события или вставки трансгена FT и/или последовательности ДНК пригодной для транскрипции в геном по меньшей мере одной клетки растения, или могут содержать любое число копий трансгенных событий или вставок, содержащих трансген FT и/или последовательность ДНК пригодную для транскрипции. Доза или количество экспрессии трансгена FT могут меняться в зависимости от его зиготности и/или числа копий, что может влиять на степень или меру фенотипических изменений в трансгенном растении и т. д. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансгенное растение, содержащее трансген FT и/или элемент супрессии FT, которые можно модифицировать, ослаблять и/или корректировать, как предложено в данном документе, может дополнительно характеризоваться как имеющее один или более измененных фенотипов или признаков, связанных с цветением или генеративностью, которые могут включать измененные связанные с урожайностью признаки или фенотипы, такие как повышение числа цветков, бобов и т. д. и/или семян на растение (и/или на узел растения) по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением, не содержащим трансген FT (и/или не содержащим элемент супрессии FT). Такое трансгенное растение может дополнительно характеризоваться как имеющее измененную структуру, морфологию и/или архитектуру вследствие изменения высоты растения, профиля ветвления, числа цветочных узлов и т. д. по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением. В действительности, связанные с урожайностью фенотипы или признаки, изменяемые сверхэкспрессией FT в трансгенном растении, могут включать: время цветения, длительность генеративной стадии, длительность цветения, количество или время опадания цветков, бобов, стручков, семенных коробочек, фруктов, орехов и т. д., число цветков на узел, число кистей на узел, число веток на растение, число узлов на растение, число узлов на главном стебле, число узлов на ветках, число бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов и т. д. на растение, число бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов и т. д. на узел, число бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов и т. д. на главном стебле, число бобов, семян, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов и т. д. на ветках, массу семян (например, массу 1000 семян), число семян на растение, число семян на главном стебле, число семян на узел и/или измененную архитектуру растения, по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением, не содержащим трансген FT (и/или не содержащим элемент супрессии FT). В контексте данного документа термин «сверхэкспрессия» в отношении трансгена FT включает эктопическую экспрессию трансгена.[128] The transgenic plants, plant cells, seeds, and plant parts of the invention may be homozygous or hemizygous for a transgenic event or insertion of an FT transgene and/or a DNA sequence suitable for transcription into the genome of at least one plant cell, or may contain any the number of copies of transgenic events or inserts containing the FT transgene and/or a DNA sequence suitable for transcription. The dose or amount of expression of the FT transgene may vary depending on its zygosity and/or copy number, which may affect the degree or extent of phenotypic changes in the transgenic plant, etc. In accordance with some embodiments of the invention, a transgenic plant containing an FT transgene and /or an FT suppression element that can be modified, attenuated, and/or adjusted as provided herein, may further be characterized as having one or more altered phenotypes or traits associated with flowering or generativity, which may include altered yield-related traits, or phenotypes such as an increase in the number of flowers, pods, etc. and/or seeds per plant (and/or plant node) compared to a wild-type plant or control plant that does not contain the FT transgene (and/or does not contain a suppression element F.T.). Such a transgenic plant may be further characterized as having an altered structure, morphology and/or architecture due to a change in plant height, branching profile, number of flower nodes, etc., compared to a wild-type or control plant. In fact, yield-related phenotypes or traits altered by overexpression of FT in a transgenic plant may include: flowering time, length of generative stage, length of flowering, number or time of falling of flowers, pods, pods, pods, fruits, nuts, etc. ., number of flowers per node, number of racemes per node, number of branches per plant, number of nodes per plant, number of nodes on main stem, number of nodes on branches, number of pods, pods, pods, fruits, nuts, etc. on plant, number of beans, pods, pods, fruits, nuts, etc. per node, number of beans, pods, pods, fruits, nuts, etc. per main stem, number of pods, seeds, pods, pods , fruit, nuts, etc. on twigs, seed weight (e.g., 1000 seed weight), number of seeds per plant, number of seeds per main stem, number of seeds per node, and/or altered plant architecture compared to wild-type plant or control p asthenia not containing the FT transgene (and/or not containing an FT suppressor element). In the context of this document, the term "overexpression" in relation to the FT transgene includes ectopic expression of the transgene.
[129] В целях данного изобретения «растение» может включать эксплантат, сеянец, росток или целое растение на любой стадии регенерации или развития. В контексте данного документа термин «трансгенное растение» относится к растению, чей геном был изменен посредством интеграции или вставки рекомбинантной молекулы ДНК, конструкции или последовательности. Трансгенное растение включает растение R0, выращенное или регенерированное их исходной (-ых) трансформированной (-ых) клетки (-ок) растения, а также потомство трансгенных растений в последующих поколениях или продукты скрещивания трансгенного растения R0. В контексте данного документа термин «часть растения» может относиться к любому органу или интактной ткани растения, таким как меристема, орган/структура побега (например, лист, стебель и клубень), корень, цветок или орган/структура цветка (например, прицветник, чашелистик, лепесток, тычинка, плодолистик, пыльник и семяпочка), семя (например, эмбрион, эндосперм и семенная оболочка), фрукт (например, зрелая завязь), пропагула или другие ткани растения (например, сосудистая ткань, покровная ткань и т. п.), или любой их части. Части растения согласно данному изобретению могут быть жизнеспособными, нежизнеспособными, подлежащими регенерации и/или не подлежащими регенерации. «Пропагула» может включать любую часть растения, которая способна вырасти в целое растение. В целях данного изобретения клетка растения, трансформированная трансгеном FT и/или элементом супрессии FT в соответствии с вариантами реализации данного изобретения, может включать любую клетку растения, которая является компетентной для трансформации, как известно в данной области техники, с учетом способа трансформации, такую как клетка меристемы, эмбриональная клетка, клетка каллюса и т. д. В контексте данного документа термин «клетка трансгенного растения» просто относится к любой клетке растения, трансформированной стабильно интегрированной рекомбинантной молекулой ДНК или последовательностью. Клетка трансгенного растения может включать исходную трансформированную клетку растения, клетку трансгенного растения регенерированного или выращенного растения R0, или клетку трансгенного растения из любого дочернего растения трансформированного растения R0, включая клетки семени или эмбриона растения, или культивируемые клетки растения или клетки каллюса и т. д.[129] For the purposes of this invention, a "plant" may include an explant, seedling, sprout, or whole plant at any stage of regeneration or development. As used herein, the term "transgenic plant" refers to a plant whose genome has been altered by integration or insertion of a recombinant DNA molecule, construct or sequence. A transgenic plant includes an R 0 plant grown or regenerated from its original transformed plant cell(s), as well as progeny of the transgenic plants in subsequent generations or crosses of the transgenic R 0 plant. In the context of this document, the term "plant part" may refer to any organ or intact tissue of a plant, such as the meristem, shoot organ/structure (e.g., leaf, stem, and tuber), root, flower, or flower organ/structure (e.g., bract, sepal, petal, stamen, carpel, anther and ovule), seed (e.g. embryo, endosperm and seed coat), fruit (e.g. mature ovary), propagule, or other plant tissues (e.g. vascular tissue, integumentary tissue, etc.) .), or any part of them. Parts of the plant according to the present invention may be viable, non-viable, regenerable and/or non-regenerate. "Propagula" may include any part of a plant that is capable of growing into a whole plant. For the purposes of this invention, a plant cell transformed with an FT transgene and/or an FT suppression element according to embodiments of this invention may include any plant cell that is competent for transformation as known in the art, given the transformation method, such as meristem cell, embryonic cell, callus cell, etc. As used herein, the term "transgenic plant cell" simply refers to any plant cell transformed with a stably integrated recombinant DNA molecule or sequence. The transgenic plant cell may include an original transformed plant cell, a transgenic plant cell of a regenerated or grown plant R 0 , or a transgenic plant cell from any daughter plant of the transformed R 0 plant, including seed or plant embryo cells, or cultured plant cells or callus cells, etc. d.
[130] В соответствии со многими вариантами реализации изобретения трансгенное растение может содержать полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с промотором вегетативной стадии. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения экспрессию флоригенного белка FT в трансгенном растении можно подавлять на вегетативной и/или генеративной стадии и/или в вегетативной и/или генеративной ткани трансгенного растения, например, посредством эндогенной и/или трансгенно или эктопически экспрессируемой молекулы РНК. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения экспрессия флоригенного белка FT в трансгенном растении может быть пространственно и/или временно ограничена малой молекулой РНК. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансгенное растение может содержать последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на флоригенный ген или трансген FT для супрессии.[130] In accordance with many embodiments of the invention, the transgenic plant may contain a polynucleotide sequence encoding a florigenic FT protein operably linked to a vegetative stage promoter. In accordance with some embodiments of the invention, the expression of the florigenic FT protein in a transgenic plant can be suppressed at the vegetative and/or generative stage and/or in the vegetative and/or generative tissue of the transgenic plant, for example, by means of an endogenous and/or transgenic or ectopically expressed RNA molecule. In accordance with some embodiments of the invention, expression of the florigenic FT protein in a transgenic plant may be spatially and/or temporally restricted by a small RNA molecule. In accordance with some embodiments of the invention, the transgenic plant may contain a transcriptional DNA sequence encoding an RNA molecule that targets the florigenic gene or FT transgene for suppression.
[131] Варианты реализации данного изобретения могут дополнительно включать способы создания или получения трансгенных растений, имеющих измененные связанные с генеративностью и/или урожайностью признаки или фенотипы, например, путем трансформации, скрещивания и т. д., при этом способ включает внесение рекомбинантной молекулы ДНК, конструкции или последовательности, содержащей трансген FT и/или последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, которая нацелена на трансген FT для супрессии, в клетку растения, и затем регенерацию или выращивание трансгенного растения из трансформированной клетки растения, что можно осуществлять в условиях селекционного давления, благоприятных для трансгенного события. Такие способы могут включать трансформацию клетки растения рекомбинантной молекулой ДНК или последовательностью, содержащей трансген FT и/или последовательность ДНК пригодную для транскрипции, и отбор растения, имеющего один или более измененных фенотипов или признаков, таких как одно или более из следующего: время цветения, длительность генеративной стадии, длительность цветения, количество или время опадания цветков, бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов и т. д., число цветков на узел, число кистей на узел, число веток на растение, число узлов на растение, число узлов на главном стебле, число узлов на ветках, число бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов и т. д. на растение, число бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов и т. д. на узел, число бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов и т. д. на главном стебле, число бобов, семян, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов и т. д. на ветках, массу семян (например, массу 1000 семян), число семян на растение, число семян на главном стебле, число семян на узел и/или измененная архитектура растения, по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением, не содержащим трансген FT (и/или не содержащим элемент супрессии FT). Например, варианты реализации данного изобретения могут включать способы получения трансгенного растения, имеющего увеличенное число цветков, бобов и/или семян на растение (и/или увеличенное число цветков, бобов и/или семян на узел растения), при этом способ включает внесение рекомбинантной молекулы ДНК, содержащей трансген FT и/или последовательность ДНК пригодную для транскрипции, в клетку растения, и затем регенерацию или выращивание трансгенного растения из клетки растения. Затем можно проводить отбор трансгенного растения на основании одного или более вышеуказанных связанных с генеративностью и/или урожайностью признаков иди фенотипов. Отбор трансгенного растения, клетки растения или ткани растения также можно проводить на основании присутствия трансгена FT и/или элемента супрессии FT, используя один или более способов или наборов, известных в данной области техники, таких как секвенирование ДНК, гибридизация, связывание антител и/или другие молекулярные технологии.[131] Embodiments of the present invention may further include methods for creating or obtaining transgenic plants having altered generative and/or yield-related traits or phenotypes, for example, by transformation, crossing, etc., the method comprising introducing a recombinant DNA molecule , construct or sequence containing the FT transgene and/or a DNA sequence suitable for transcription encoding an RNA molecule that targets the FT transgene for suppression into a plant cell, and then regeneration or cultivation of the transgenic plant from the transformed plant cell, which can be carried out under conditions selection pressure favorable for a transgenic event. Such methods may include transforming a plant cell with a recombinant DNA molecule or sequence containing an FT transgene and/or a DNA sequence suitable for transcription, and selecting a plant having one or more altered phenotypes or traits, such as one or more of the following: flowering time, duration generative stage, duration of flowering, number or time of fall of flowers, pods, pods, pods, fruits, nuts, etc., number of flowers per node, number of racemes per node, number of branches per plant, number of nodes per plant, number of nodes on main stem, number of nodes on branches, number of beans, pods, pods, fruits, nuts, etc. per plant, number of beans, pods, pods, fruit, nuts, etc. per node, number of beans, pods, pods, fruits, nuts, etc. per main stem, number of pods, seeds, pods, pods, fruits, nuts, etc. per twig, weight of seeds (e.g. weight of 1000 seeds ), number of seeds per plant, number of seeds per main stem, number of seeds per node, and/or altered plant architecture, compared to a wild-type plant or control plant lacking the FT transgene (and/or lacking an FT suppression element). For example, embodiments of the invention may include methods for producing a transgenic plant having an increased number of flowers, pods, and/or seeds per plant (and/or an increased number of flowers, pods, and/or seeds per plant node), the method comprising introducing a recombinant molecule DNA containing the FT transgene and/or a DNA sequence suitable for transcription into a plant cell, and then regenerating or growing the transgenic plant from the plant cell. The transgenic plant can then be selected based on one or more of the above generative and/or yield related traits or phenotypes. Selection of a transgenic plant, plant cell, or plant tissue can also be made based on the presence of the FT transgene and/or FT suppression element using one or more methods or kits known in the art, such as DNA sequencing, hybridization, antibody binding, and/or other molecular technologies.
[132] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения трансгенное растение может иметь по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 125%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 175%, по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 250%, по меньшей мере на 300%, по меньшей мере на 350% или по меньшей мере на 400% больше цветков, бобов, семян, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней, чем нетрансгенное контрольное растение. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансгенное растение может в среднем иметь по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 125%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 175%, по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 250%, по меньшей мере на 300%, по меньшей мере на 350% или по меньшей мере на 400% больше цветков, бобов, семян, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел, чем нетрансгенное контрольное растение. Трансгенное растение может в среднем иметь по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9 или по меньшей мере 10 бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел. Трансгенное растение может в среднем иметь 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5, 2-4, 2-3, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 3-4, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4-6 или 4-5 бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел. Трансгенное растение может в среднем иметь по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9 или по меньшей мере на 10 больше цветков, бобов, семян, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел по сравнению с нетрансгенным контрольным растением. Трансгенное растение может представлять собой растение сои, и трансгенное растение может в среднем иметь больше узлов и/или семян на узел, чем нетрансгенное контрольное растение. Трансгенное растение может зацветать по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9, по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 11, по меньшей мере на 12, по меньшей мере на 13, по меньшей мере на 14, по меньшей мере на 15, по меньшей мере на 20, по меньшей мере на 25, по меньшей мере на 30, по меньшей мере на 35, по меньшей мере на 40 или по меньшей мере на 45 дней раньше, чем нетрансгенное контрольное растение.[132] According to embodiments of the invention, the transgenic plant may have at least 1%, at least 2%, at least 5%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 90%, at least 100%, at least 125%, at least 150%, at least 175%, at least 200%, at least 250%, at least 300%, at least 350% or at least 400% more flowers, beans, seeds, pods, pods, fruits, nuts or tubers than a non-transgenic control plant. In accordance with some embodiments of the invention, the transgenic plant may have an average of at least 5%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 90%, at least 100%, at least 125%, at least 150%, at least 175%, at least 200%, at least 250%, at least 300%, at least 350% or at least 400% more flowers, beans, seeds, pods, pods, fruits, nuts or tubers per node, than the non-transgenic control plant. The transgenic plant may have, on average, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, or at least 10 beans, pods, pods, fruits, nuts or tubers per node. A transgenic plant may average 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5, 2-4, 2-3, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 3-4, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4-6 or 4-5 beans, pods, pods, fruits, nuts or tubers per knot. The transgenic plant may, on average, have at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least at least 8, at least 9, or at least 10 more flowers, pods, seeds, pods, pods, fruits, nuts, or tubers per node compared to the non-transgenic control plant. The transgenic plant may be a soybean plant, and the transgenic plant may, on average, have more nodes and/or seeds per node than a non-transgenic control plant. The transgenic plant can flower for at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, or at least 45 days earlier than the non-transgenic control plant.
[133] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложено трансгенное растение, содержащее полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с промотором вегетативной стадии, при этом экспрессия полинуклеотидной кодирующей последовательности пространственно и/или временно ослаблена, ограничена, модифицирована и/или скорректирована молекулой РНК, которая может представлять собой малую некодирующую молекулу РНК. Уровень экспрессии или трансляции мРНК и/или белка флоригенного FT в трансгенном растении может быть подавлен или снижен в одной или более меристематических, генеративных и/или флоральных тканях и/или во время одной или более генеративных стадий. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения длительность генеративной стадии и/или длительность цветения трансгенного растения, содержащего трансген FT и/или элемент супрессии FT, предложенного в данном документе, может быть по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9, по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 11, по меньшей мере на 12, по меньшей мере на 13, по меньшей мере на 14, по меньшей мере на 15, по меньшей мере на 20, по меньшей мере на 25, по меньшей мере на 30, по меньшей мере на 35, по меньшей мере на 40 или по меньшей мере на 45 дней дольше, чем длительность генеративной стадии и/или длительность цветения растения дикого типа или контрольного растения, но также может быть не более чем (т. е. не больше чем) на 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или 60 дней дольше, чем длительность генеративной стадии и/или длительность цветения растения дикого типа или контрольного растения. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения начало цветения (т. е. появление первого открытого цветка) трансгенного растения, содержащего трансген FT и/или элемент супрессии FT, предложенного в данном документе, может быть или происходить по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9, по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 11, по меньшей мере на 12, по меньшей мере на 13, по меньшей мере на 14, по меньшей мере на 15, по меньшей мере на 20, по меньшей мере на 25, по меньшей мере на 30, по меньшей мере на 35, по меньшей мере на 40 или по меньшей мере на 45 дней раньше, чем у растения дикого типа или контрольного растения, но также может быть не более чем (т. е. не больше чем) на 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или 60 дней раньше, чем начало цветения растения дикого типа или контрольного растения. [133] According to embodiments of the present invention, a transgenic plant is provided, comprising a polynucleotide sequence encoding a florigenic FT protein operably linked to a vegetative stage promoter, wherein the expression of the polynucleotide coding sequence is spatially and/or temporally attenuated, restricted, modified and/or corrected. an RNA molecule, which may be a small non-coding RNA molecule. The level of expression or translation of the florigenic FT mRNA and/or protein in the transgenic plant may be suppressed or reduced in one or more meristematic, generative and/or floral tissues and/or during one or more generative steps. In accordance with some embodiments of the invention, the duration of the generative stage and/or the duration of flowering of a transgenic plant containing an FT transgene and/or an FT suppression element proposed herein may be at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11 , at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40 or at least 45 days longer than the duration of the generative stage and/or the duration of flowering of the wild-type plant or control plant, but may also be no more than (i.e. no more than) 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 or 60 days longer, h we eat the duration of the generative stage and/or the duration of flowering of the wild-type plant or control plant. In accordance with some embodiments of the invention, the onset of flowering (i.e., the appearance of the first open flower) of a transgenic plant containing an FT transgene and / or an FT suppression element proposed herein can be or occur at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10 , at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, or at least 45 days earlier than the wild-type plant or control plant, but may also be no more than (i.e., no more than) 3, 4, 5 , 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, or 60 days earlier than the start of flowering of the wild-type plant or by control plant.
[134] В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения число цветков, семян, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов, бобов или клубней у трансгенного растения, содержащего трансген FT и/или элемент супрессии FT, предложенного в данном документе, может быть по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 3%, по меньшей мере на 4%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 6%, по меньшей мере на 7%, по меньшей мере на 8%, по меньшей мере на 9%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 125%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 175%, по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 250%, по меньшей мере на 300%, по меньшей мере на 350% или по меньшей мере на 400% больше, чем у растения дикого типа или контрольного растения. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения число цветков, семян, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или бобов на главном стебле трансгенного растения, содержащего трансген FT и/или элемент супрессии FT, предложенного в данном документе, может быть по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 3%, по меньшей мере на 4%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 6%, по меньшей мере на 7%, по меньшей мере на 8%, по меньшей мере на 9%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 125%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 175%, по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 250%, по меньшей мере на 300%, по меньшей мере на 350% или по меньшей мере на 400% больше, чем у растения дикого типа или контрольного растения. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения число цветков, семян, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или бобов на узел на главном стебле трансгенного растения, содержащего трансген FT и/или элемент супрессии FT, предложенного в данном документе, может быть по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 3%, по меньшей мере на 4%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 6%, по меньшей мере на 7%, по меньшей мере на 8%, по меньшей мере на 9%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 125%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 175%, по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 250%, по меньшей мере на 300%, по меньшей мере на 350% или по меньшей мере на 400% больше, чем у растения дикого типа или контрольного растения.[134] In accordance with some embodiments of the invention, the number of flowers, seeds, pods, pods, fruits, nuts, beans, or tubers in a transgenic plant containing an FT transgene and/or an FT suppression element provided herein may be at least at least 1%, at least 2%, at least 3%, at least 4%, at least 5%, at least 6%, at least 7%, at least 8%, at least 9%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80 %, at least 90%, at least 100%, at least 125%, at least 150%, at least 175%, at least 200%, at least 250% , at least 300%, according to me at least 350% or at least 400% more than the wild-type plant or control plant. In accordance with some embodiments of the invention, the number of flowers, seeds, pods, pods, fruits, nuts, or beans on the main stem of a transgenic plant containing an FT transgene and/or an FT suppression element provided herein may be at least 1 %, at least 2%, at least 3%, at least 4%, at least 5%, at least 6%, at least 7%, at least 8% at least 9%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 90%, at least 100%, at least 125%, at least 150%, at least 175%, at least 200%, at least 250%, at least measure by 300%, by m at least 350% or at least 400% more than wild-type plant or control plant. In accordance with some embodiments of the invention, the number of flowers, seeds, pods, pods, fruits, nuts, or beans per node on the main stem of a transgenic plant containing an FT transgene and/or an FT suppression element provided herein may be at least 1%, at least 2%, at least 3%, at least 4%, at least 5%, at least 6%, at least 7%, at least 8%, at least 9%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 35 %, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80% at least 90%, at least 100%, at least 125%, at least 150%, at least 175%, at least 200%, at least 250%, at least 30 0%, at least 350% or at least 400% more than the wild-type plant or control plant.
[135] Каждое из этих характерных количеств или числовых значений на растение, главный стебель или ветку, такое как число цветков, семенных коробочек, семян, стручков, фруктов, орехов или бобов на растение, главный стебель или ветку, можно рассчитать как среднее по двум или более растениям или определить для одного растения, а количества или числовые значения цветков, семенных коробочек, семян, стручков, фруктов, орехов или бобов на узел можно рассчитать как среднее для одного или более растений. Таким образом, можно рассчитывать процентное изменение между двумя растениями, между растением и средним по двум или более растениям или между двумя средними значениями (при этом каждое вреднее значение взято по двум или более растениям).[135] Each of these characteristic numbers or numerical values per plant, main stem or branch, such as the number of flowers, pods, seeds, pods, fruits, nuts or beans per plant, main stem or branch, can be calculated as the average of two or more plants or determined for a single plant, and the numbers or numbers of flowers, pods, seeds, pods, fruits, nuts or beans per node can be calculated as an average of one or more plants. Thus, it is possible to calculate the percentage change between two plants, between a plant and the average of two or more plants, or between two averages (with each detrimental value taken from two or more plants).
[136] В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения число цветков, семенных коробочек, семян, стручков, фруктов, орехов, бобов или клубней на узел трансгенного растения, содержащего трансген FT и/или элемент супрессии FT, предложенного в данном документе, в среднем может быть по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 3%, по меньшей мере на 4%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 6%, по меньшей мере на 7%, по меньшей мере на 8%, по меньшей мере на 9%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 125%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 175%, по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 250%, по меньшей мере на 300%, по меньшей мере на 350% или по меньшей мере на 400% больше, чем у растения дикого типа или контрольного растения. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансгенное растение, содержащее трансген FT и/или элемент супрессии FT, предложенное в данном документе, может в среднем иметь по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9 или по меньшей мере 10 цветков, бобов, семенных коробочек, семян, стручков, фруктов, орехов, бобов или клубней на узел. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансгенное растение, содержащее трансген FT и/или элемент супрессии FT, предложенное в данном документе, может в среднем иметь 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5, 2-4, 2-3, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4-6 или 4-5, или около 2, около 3, около 4, около 5, около 6, около 7, около 8, около 9 или около 10 цветков, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов, бобов или клубней на узел. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансгенное растение, содержащее трансген FT и/или элемент супрессии FT, предложенное в данном документе, может в среднем иметь по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9 или по меньшей мере на 10 больше цветков, семенных коробочек, семян, стручков, фруктов, орехов, бобов или клубней на узел по сравнению с нетрансгенным растением дикого типа или контрольным растением.[136] In accordance with some embodiments of the invention, the number of flowers, pods, seeds, pods, fruits, nuts, beans, or tubers per node of a transgenic plant containing an FT transgene and/or an FT suppression element provided herein may, on average, be at least 1%, at least 2%, at least 3%, at least 4%, at least 5%, at least 6%, at least 7%, at least 8%, at least 9%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least at least 80%, at least 90%, at least 100%, at least 125%, at least 150%, at least 175%, at least 200%, at least by 250% at least e. 300%, at least 350%, or at least 400% more than the wild-type plant or control plant. In accordance with some embodiments of the invention, a transgenic plant containing an FT transgene and/or an FT suppression element provided herein may have an average of at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9 or at least 10 flowers, pods, pods, seeds, pods, fruits, nuts, beans or tubers per node. In accordance with some embodiments of the invention, a transgenic plant containing an FT transgene and/or an FT suppression element provided herein may have an average of 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2 -5, 2-4, 2-3, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7 , 4-6 or 4-5, or about 2, about 3, about 4, about 5, about 6, about 7, about 8, about 9 or about 10 flowers, pods, pods, fruits, nuts, beans or tubers to the node. In accordance with some embodiments of the invention, a transgenic plant containing an FT transgene and/or an FT suppression element provided herein may have an average of at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9 or at least 10 more flowers, pods, seeds, pods, fruits, nuts, beans or tubers per node compared to a non-transgenic wild-type plant or control plant.
[137] В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения среднее число семенных коробочек, стручков, семян, фруктов, орехов, бобов или клубней и/или среднее число цветков, семенных коробочек, стручков, семян, фруктов, орехов, бобов или клубней на узел трансгенного растения, содержащего трансген FT и/или элемент супрессии FT, предложенного в данном документе (или на главном стебле такого трансгенного растения), может быть на 1%-400%, 1%-350%, 1%-300%, 1%-250%, 1%-200%, 1%-150%, 1%-100%, 1%-75%, 1%-50%, 1%-25%, 5%-400%, 5%-350%, 5%-300%, 5%-250%, 5%-200%, 5%-150%, 5%-100%, 5%-95%, 5%-90%, 5%-85%, 5%-80%, 5%-75%, 5%-70%, 5%-65%, 5%-60%, 5%-55%, 5%-50%, 5%-45%, 5%-40%, 5%-35%, 5%-30%, 5%-25%, 5%-20%, 5%-15%, 5%-10%, 10%-400%, 10%-350%, 10%-300%, 10%-250%,10%-200%, 10%-150%, 10%-100%, 10%-90%, 10%-80%, 10%-70%, 10%-60%, 10%-50%, 10%-40%, 10%-30%, 10%-20%, 25%-400%, 25%-350%, 25%-300%, 25%-250%, 25%-200%, 25%-150%, 25%-100%, 25%-75%, 25%-50%, 50%-400%, 50%-350%, 50%-300%, 50%-250%, 50%-200%, 50%-150%, 50%-100%, 50%-75%, 75%-400%, 75%-350%, 75%-300%, 75%-250%, 75%-200%, 75%-150%, 75%-100%, 100%-400%, 100%-350%, 100%-300%, 100%-250%, 100%-200% или 100%-150% больше, чем у растения дикого типа или контрольного растения. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения длительность генеративной стадии трансгенного растения, содержащего трансген FT и/или элемент супрессии FT, предложенного в данном документе, может быть на 1%-400%, 1%-350%, 1%-300%, 1%-250%, 1%-200%, 1%-150%, 1%-100%, 1%-75%, 1%-50%, 1%-25%, 5%-400%, 5%-350%, 5%-300%, 5%-250%, 5%-200%, 5%-150%, 5%-100%, 5%-95%, 5%-90%, 5%-85%, 5%-80%, 5%-75%, 5%-70%, 5%-65%, 5%-60%, 5%-55%, 5%-50%, 5%-45%, 5%-40%, 5%-35%, 5%-30%, 5%-25%, 5%-20%, 5%-15%, 5%-10%, 10%-400%, 10%-350%, 10%-300%, 10%-250%, 10%-200%, 10%-150%, 10%-100%, 10%-90%, 10%-80%, 10%-70%, 10%-60%, 10%-50%, 10%-40%, 10%-30%, 10%-20%, 25%-400%, 25%-350%, 25%-300%, 25%-250%, 25%-200%, 25%-150%, 25%-100%, 25%-75%, 25%-50%, 50%-400%, 50%-350%, 50%-300%, 50%-250%, 50%-200%, 50%-150%, 50%-100%, 50%-75%, 75%-400%, 75%-350%, 75%-300%, 75%-250%, 75%-200%, 75%-150%, 75%-100%, 100%-400%, 100%-350%, 100%-300%, 100%-250%, 100%-200% или 100%-150% больше, в терминах числа дней, чем у растения дикого типа или контрольного растения. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения начало цветения трансгенного растения, содержащего трансген FT и/или элемент супрессии FT, предложенного в данном документе, может быть на 1%-400%, 1%-350%, 1%-300%, 1%-250%, 1%-200%, 1%-150%, 1%-100%, 1%-75%, 1%-50%, 1%-25%, 5%-400%, 5%-350%, 5%-300%, 5%-250%, 5%-200%, 5%-150%, 5%-100%, 5%-95%, 5%-90%, 5%-85%, 5%-80%, 5%-75%, 5%-70%, 5%-65%, 5%-60%, 5%-55%, 5%-50%, 5%-45%, 5%-40%, 5%-35%, 5%-30%, 5%-25%, 5%-20%, 5%-15%, 5%-10%, 10%-400%, 10%-350%, 10%-300%, 10%-250%, 10%-200%, 10%-150%, 10%-100%, 10%-90%, 10%-80%, 10%-70%, 10%-60%, 10%-50%, 10%-40%, 10%-30%, 10%-20%, 25%-400%, 25%-350%, 25%-300%, 25%-250%, 25%-200%, 25%-150%, 25%-100%, 25%-75%, 25%-50%, 50%-400%, 50%-350%, 50%-300%, 50%-250%, 50%-200%, 50%-150%, 50%-100%, 50%-75%, 75%-400%, 75%-350%, 75%-300%, 75%-250%, 75%-200%, 75%-150%, 75%-100%, 100%-400%, 100%-350%, 100%-300%, 100%-250%, 100%-200% или 100%-150% раньше, в терминах числа дней, чем у растения дикого типа или контрольного растения.[137] In accordance with some embodiments of the invention, the average number of pods, pods, seeds, fruits, nuts, beans, or tubers and/or the average number of flowers, pods, pods, seeds, fruits, nuts, beans, or tubers per node of the transgenic plants containing the FT transgene and/or the FT suppression element provided herein (or on the main stem of such a transgenic plant) can be 1%-400%, 1%-350%, 1%-300%, 1%- 250%, 1%-200%, 1%-150%, 1%-100%, 1%-75%, 1%-50%, 1%-25%, 5%-400%, 5%-350% , 5%-300%, 5%-250%, 5%-200%, 5%-150%, 5%-100%, 5%-95%, 5%-90%, 5%-85%, 5 %-80%, 5%-75%, 5%-70%, 5%-65%, 5%-60%, 5%-55%, 5%-50%, 5%-45%, 5%- 40%, 5%-35%, 5%-30%, 5%-25%, 5%-20%, 5%-15%, 5%-10%, 10%-400%, 10%-350% , 10%-300%, 10%-250%,10%-200%, 10%-150%, 10%-100%, 10%-90%, 10%-80%, 10%-70%, 10 %-60%, 10%-50%, 10%-40%, 10%-30%, 10%-20%, 25%-400%, 25%-350%, 25%-300%, 25%- 250%, 25%-200%, 25%-150%, 25%-100%, 25%-75%, 25%-50%, 50%-400%, 50%-350%, 50%-300% , 50%-250% , 50%-200%, 50%-150%, 50%-100%, 50%-75%, 75%-400%, 75%-350%, 75%-300%, 75%-250%, 75 %-200%, 75%-150%, 75%-100%, 100%-400%, 100%-350%, 100%-300%, 100%-250%, 100%-200% or 100%- 150% more than wild-type plant or control plant. In accordance with some embodiments of the invention, the duration of the generative stage of a transgenic plant containing an FT transgene and/or an FT suppression element proposed herein can be 1%-400%, 1%-350%, 1%-300%, 1 %-250%, 1%-200%, 1%-150%, 1%-100%, 1%-75%, 1%-50%, 1%-25%, 5%-400%, 5%- 350%, 5%-300%, 5%-250%, 5%-200%, 5%-150%, 5%-100%, 5%-95%, 5%-90%, 5%-85% , 5%-80%, 5%-75%, 5%-70%, 5%-65%, 5%-60%, 5%-55%, 5%-50%, 5%-45%, 5 %-40%, 5%-35%, 5%-30%, 5%-25%, 5%-20%, 5%-15%, 5%-10%, 10%-400%, 10%- 350%, 10%-300%, 10%-250%, 10%-200%, 10%-150%, 10%-100%, 10%-90%, 10%-80%, 10%-70% , 10%-60%, 10%-50%, 10%-40%, 10%-30%, 10%-20%, 25%-400%, 25%-350%, 25%-300%, 25 %-250%, 25%-200%, 25%-150%, 25%-100%, 25%-75%, 25%-50%, 50%-400%, 50%-350%, 50%- 300%, 50%-250%, 50%-200%, 50%-150%, 50%-100%, 50%-75%, 75%-400%, 75%-350%, 75%-300% , 75%-250%, 75%-200%, 75%-150%, 75%-100%, 100%-400%, 100%-350%, 100%-300%, 100%-250%, 100 %-200% or 100%-150% more, in terms of number of days, than growth wild type or control plant. In accordance with some embodiments of the invention, the onset of flowering of a transgenic plant containing an FT transgene and/or an FT suppression element provided herein may be 1%-400%, 1%-350%, 1%-300%, 1%. -250%, 1%-200%, 1%-150%, 1%-100%, 1%-75%, 1%-50%, 1%-25%, 5%-400%, 5%-350 %, 5%-300%, 5%-250%, 5%-200%, 5%-150%, 5%-100%, 5%-95%, 5%-90%, 5%-85%, 5%-80%, 5%-75%, 5%-70%, 5%-65%, 5%-60%, 5%-55%, 5%-50%, 5%-45%, 5% -40%, 5%-35%, 5%-30%, 5%-25%, 5%-20%, 5%-15%, 5%-10%, 10%-400%, 10%-350 %, 10%-300%, 10%-250%, 10%-200%, 10%-150%, 10%-100%, 10%-90%, 10%-80%, 10%-70%, 10%-60%, 10%-50%, 10%-40%, 10%-30%, 10%-20%, 25%-400%, 25%-350%, 25%-300%, 25% -250%, 25%-200%, 25%-150%, 25%-100%, 25%-75%, 25%-50%, 50%-400%, 50%-350%, 50%-300 %, 50%-250%, 50%-200%, 50%-150%, 50%-100%, 50%-75%, 75%-400%, 75%-350%, 75%-300%, 75%-250%, 75%-200%, 75%-150%, 75%-100%, 100%-400%, 100%-350%, 100%-300%, 100%-250%, 100% -200% or 100%-150% earlier, in terms of number of days, than the wild-type plant or control plant.
[138] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложенные в данном документе трансгенные растения могут иметь комбинацию двух или более признаков или фенотипов, описанных в данном документе, например, двух или более признаков из увеличенного числа бобов, семенных коробочек, стручков, семян, фруктов, орехов или клубней на узел, увеличенного числа бобов, семенных коробочек, стручков, семян, фруктов, орехов или клубней на главном стебле, повышенной длительности генеративной стадии, более раннего начала цветения, минимальной высоты растения, такой как по меньшей мере 900 или более миллиметров (т. е. большей или равной 0,9 метра) в случае сои, и/или сниженного ветвления по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансгенные растения могут в среднем иметь увеличенное число бобов, семенных коробочек, стручков, семян, фруктов или орехов на узел или более раннее начало цветения по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением. Такие трансгенные растения могут дополнительно иметь увеличенное число бобов, семенных коробочек, стручков, семян, фруктов, орехов или клубней на главном стебле и/или повышенную длительности генеративной стадии по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением.[138] In accordance with embodiments of the present invention, the transgenic plants provided herein may have a combination of two or more of the traits or phenotypes described herein, for example, two or more traits from an increased number of beans, pods, pods, seeds, fruits , nuts or tubers per node, increased number of pods, pods, pods, seeds, fruits, nuts or tubers per main stem, increased duration of the generative stage, earlier onset of flowering, minimum plant height such as at least 900 millimeters or more (i.e., greater than or equal to 0.9 meters) in the case of soybean, and/or reduced branching compared to the wild-type plant or control plant. In accordance with some embodiments of the invention, transgenic plants may, on average, have an increased number of pods, pods, pods, seeds, fruits, or nuts per node, or an earlier onset of flowering compared to a wild-type or control plant. Such transgenic plants may additionally have an increased number of pods, pods, pods, seeds, fruits, nuts, or tubers per stem and/or an increased duration of the generative stage compared to a wild-type or control plant.
[139] Например, предложенное в данном документе трансгенное растение может иметь по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 125%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 175%, по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 250%, по меньшей мере на 300%, по меньшей мере на 350% или по меньшей мере на 400% больше цветков, бобов, семян, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел и начало цветения, которое происходит по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9, по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 11, по меньшей мере на 12, по меньшей мере на 13, по меньшей мере на 14, по меньшей мере на 15, по меньшей мере на 20, по меньшей мере на 25, по меньшей мере на 30, по меньшей мере на 35, по меньшей мере на 40 или по меньшей мере на 45 дней раньше по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением. Предложенное в данном документе трансгенное растение может в среднем иметь по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9 или по меньшей мере на 10 больше цветков, бобов, семян, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел и начало цветения, которое происходит по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9, по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 11, по меньшей мере на 12, по меньшей мере на 13, по меньшей мере на 14, по меньшей мере на 15, по меньшей мере на 20, по меньшей мере на 25, по меньшей мере на 30, по меньшей мере на 35, по меньшей мере на 40 или по меньшей мере на 45 дней раньше по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением. Такие трансгенные растения могут дополнительно иметь длительность генеративной стадии и/или цветения, которая по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9, по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 11, по меньшей мере на 12, по меньшей мере на 13, по меньшей мере на 14, по меньшей мере на 15, по меньшей мере на 20, по меньшей мере на 25, по меньшей мере на 30, по меньшей мере на 35, по меньшей мере на 40 или по меньшей мере на 45 дней дольше, чем длительность генеративной стадии и/или цветения растения дикого типа или контрольного растения, и/или увеличенное число цветков, бобов, семян, семенных коробочек, стручков, фруктов или орехов на главном стебле трансгенного растения, которое по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 3%, по меньшей мере на 4%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 6%, по меньшей мере на 7%, по меньшей мере на 8%, по меньшей мере на 9%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 125%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 175% или по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 250%, по меньшей мере на 300%, по меньшей мере на 350% или по меньшей мере на 400% больше, чем у растения дикого типа или контрольного растения.[139] For example, the transgenic plant provided herein may have at least 1%, at least 2%, at least 5%, at least 10%, at least 15%, at least at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 90%, at least 100%, at least 125%, at least 150%, at least 175%, at least 200%, at least 250%, at least 300%, at least 350% or at least 400% more flowers, beans, seeds , pods, pods, fruits, nuts or tubers per node and the beginning of flowering, which occurs at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, or at least 45 days earlier than the wild-type or control plant. The transgenic plant provided herein can have an average of at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, or at least 10 more flowers, pods, seeds, pods, pods, fruits, nuts, or tubers per node, and an onset of flowering that occurs at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, or at least 45 days earlier than the wild-type plant or control plant. Such transgenic plants may further have a generative stage and/or flowering duration that is at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6 , at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, or at least 45 days longer than the duration of the generative stage and/or flowering of a wild-type plant or control plant, and/or an increased number of flowers, pods, seeds, pods, pods, fruits or nuts on the main stem of the transgenic plant, which is at least 1%, at least 2%, at least at least 3%, at least 4%, at least 5%, at least 6%, at least 7%, at least 8%, at least 9%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30 %, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% at least 80%, at least 90%, at least 100%, at least 125%, at least 150%, at least 175%, or at least 200%, at least 250%, at least 300%, at least 350%, or at least 400% more than the wild-type plant or control plant.
[140] В соответствии с вариантами реализации данного изобретения предложенные в данном документе трансгенные растения могут иметь измененную архитектуру растения с минимальной высотой растения и сниженным ветвлением, что может сопровождаться небольшим снижением числа узлов на растение. Трансгенные растения, экспрессирующие только трансген FT, могут иметь выраженный карликовый фенотип вследствие ранней терминации, что подразумевает небольшую высоту растения наряду со снижением ветвления и количества узлов на растение. Посредством экспрессии трансгена FT с сенсором микроРНК или вторым супрессорным элементом, нацеленным на трансген FT, можно ослабить эти выраженные фенотипы ранней терминации для получения более нормальной высоты растения, сохраняя при этом увеличенное число бобов на узел. В соответствии с этими вариантами реализации изобретения трансгенные растения могут иметь (i) минимальную высоту растения, которая снижена не более чем на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% или 40% по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением (т. е. разница в высоте растений между трансгенным растением и растением дикого типа или контрольным растением не превышает одно или более из этих процентных значений), (ii) общее число веток, сниженное по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением, и/или (iii) минимальное число узлов на растение (и/или на главный стебель), которое снижено не более чем на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% или 40% по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением (т. е. разница в числе узлов на растение (и/или на главный стебель) между трансгенным растением и растением дикого типа или контрольным растением не превышает одно или более из этих процентных значений). В случае сои предложенное в данном документе трансгенное растение может иметь минимальную высоту, которая составляет по меньшей мере 700 миллиметров (по меньшей мере), по меньшей мере 750 по меньшей мере, по меньшей мере 800 по меньшей мере, по меньшей мере 850 по меньшей мере, по меньшей мере 900 по меньшей мере, по меньшей мере 950 по меньшей мере, по меньшей мере 1000 по меньшей мере, по меньшей мере 1050 по меньшей мере, по меньшей мере 1100 по меньшей мере, по меньшей мере 1150 по меньшей мере, по меньшей мере 1200 по меньшей мере, по меньшей мере 1250 по меньшей мере, по меньшей мере 1300 по меньшей мере, по меньшей мере 1350 по меньшей мере или по меньшей мере 1400 по меньшей мере; общее число узлов на растение, которое составляет по меньшей мере 100, по меньшей мере 125, по меньшей мере 150, по меньшей мере 175, по меньшей мере 200, по меньшей мере 225, по меньшей мере 250, по меньшей мере 275, по меньшей мере 300, по меньшей мере 325, по меньшей мере 350, по меньшей мере 375 или по меньшей мере 400 узлов; и/или общее число веток, которое снижено по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% по сравнению с растением дикого типа или контрольным растением. Все вышеприведенные числовые, процентные и разностные значения для растения дополнительно включают значения, рассчитанные из среднего по множеству растений того же типа.[140] In accordance with embodiments of the present invention, the transgenic plants provided herein may have an altered plant architecture with minimal plant height and reduced branching, which may be accompanied by a slight decrease in the number of nodes per plant. Transgenic plants expressing only the FT transgene can have a pronounced dwarf phenotype due to early termination, which implies a small plant height along with a reduction in branching and the number of nodes per plant. By expressing the FT transgene with a microRNA sensor or a second suppressor element targeting the FT transgene, these pronounced early termination phenotypes can be attenuated to produce more normal plant height while maintaining an increased number of pods per node. In accordance with these embodiments of the invention, transgenic plants may have (i) a minimum plant height that is reduced by no more than 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, or 40% compared to wild-type plant or control plant (i.e., the difference in plant height between the transgenic plant and the wild-type plant or control plant does not exceed one or more of these percentages), (ii) total number of branches reduced by at least 50% at least 55%, at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, by at least 90% or at least 95% compared to the wild-type plant or control plant, and/or (iii) a minimum number of nodes per plant (and/or main stem) that is reduced by no more than 5 %, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, or 40% compared to wild-type plant or control plant (i.e., difference in number number of nodes per plant (and/or main stem) between the transgenic plant and the wild-type plant or control plant does not exceed one or more of these percentages). In the case of soybean, the transgenic plant provided herein may have a minimum height that is at least 700 millimeters (at least), at least 750 at least at least 800 at least at least 850 at least at least 900 at least at least 950 at least at least 1000 at least at least 1050 at least at least 1100 at least at least 1150 at least at least 1200 at least at least 1250 at least, at least 1300 at least, at least 1350 at least or at least 1400 at least; a total number of nodes per plant that is at least 100, at least 125, at least 150, at least 175, at least 200, at least 225, at least 250, at least 275, at least at least 300, at least 325, at least 350, at least 375, or at least 400 nodes; and/or a total number of branches that is reduced by at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, or at least 95% compared to the wild-type plant or control plant. All of the above numerical, percentage, and difference values for a plant further include values calculated from the average of multiple plants of the same type.
[141] В соответствии с другим широким аспектом данного изобретения предложены способы посадки трансгенных растений согласно данному изобретению при нормальной или высокой плотности в поле. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения урожайность культурного растения на акр (или на земельную площадь) можно повысить путем посадки трансгенных растений согласно данному изобретению при более высокой плотности в поле. Как описано в данном документе, трансгенные растения согласно данному изобретению, экспрессирующие флоригенный белок FT во время вегетативной (-ых) стадии (-ий) развития, и/или с супрессией трансгена FT могут демонстрировать увеличенное число бобов и/или семян на узел (в частности, на главном стебле), но также могут иметь измененную архитектуру растения со сниженным ветвлением и меньшим числом узлов на ветку. Поэтому было сделано предположение, что трансгенные растения согласно данному изобретению можно высевать при более высокой плотности для увеличения урожайности на акр в поле. Для пропашных культур более высокую плотность можно обеспечивать посева большего числа семян/растений на ряд и/или путем снижения расстояния между рядами. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения трансгенное культурное растение согласно данному изобретению можно высевать при плотности в поле (количество растений на земельную/полевую площадь), которая по меньшей мере на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 50%, 75%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 225% или 250% выше или больше, чем нормальная плотность посева для такого культурного растения в соответствии со стандартной сельскохозяйственной практикой.[141] In accordance with another broad aspect of the present invention, methods are provided for planting transgenic plants of the present invention at normal or high density in a field. In accordance with some embodiments of the invention, crop yield per acre (or land area) can be increased by planting the transgenic plants of the invention at higher field densities. As described herein, transgenic plants according to the invention expressing the florigen FT protein during vegetative stage(s) of development and/or with suppression of the FT transgene may exhibit an increased number of pods and/or seeds per node (in particularly on the main stem), but may also have altered plant architecture with reduced branching and fewer nodes per branch. Therefore, it has been suggested that the transgenic plants of this invention can be planted at higher densities to increase yield per acre in the field. For row crops, higher density can be achieved by planting more seeds/plants per row and/or by reducing row spacing. In accordance with some embodiments of the invention, a transgenic crop plant according to this invention can be planted at a density in the field (number of plants per land/field area) that is at least 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 50 %, 75%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 225%, or 250% higher than or greater than the normal planting density for such a crop in accordance with standard agricultural practice.
[142] В случае сои типовая плотность посева находится в диапазоне от около 100000 до 150000 семян на акр, а типовое расстояние между рядами находится в диапазоне от около 26 до около 40 дюймов, например, расстояние между рядами составляет 30 дюймов или 36 дюймов. В рамках заданного ряда, как правило, могут высевать около 6-8 семян сои на фут. В противоположность этому, посев с высокой плотностью в случае сои может включать диапазон приблизительно от 150000 до 250000 семян на акр, а расстояние между рядами может находиться в диапазоне от около 10 дюймов или менее до около 25 дюймов, например, расстояние между рядами составляет 10 дюймов, 15 дюймов или 20 дюймов. В случае посева при высокой плотности в пределах каждого ряда можно высевать приблизительно 9-12 семян сои на фут, возможно, в комбинации с меньшим расстоянием между рядами. При этом высокая плотность культур может обеспечиваться узким расстоянием между рядами без увеличения плотности посева в пределах каждого ряда.[142] In the case of soybean, typical planting density is in the range of about 100,000 to 150,000 seeds per acre, and typical row spacing is in the range of about 26 to about 40 inches, for example, row spacing is 30 inches or 36 inches. Within a given row, they can typically plant about 6-8 soybean seeds per foot. In contrast, a high density planting for soybeans may include a range of approximately 150,000 to 250,000 seeds per acre, and row spacing may range from about 10 inches or less to about 25 inches, for example, row spacing is 10 inches. , 15 inches or 20 inches. When planting at high density, approximately 9-12 soybean seeds per foot can be sown within each row, possibly in combination with smaller row spacing. At the same time, a high density of crops can be provided by a narrow distance between rows without increasing the sowing density within each row.
[143] В случае хлопка типовая плотность посева находится в диапазоне от около 28000 до 45000 семян на акр, а типовое расстояние между рядами находится в диапазоне от около 38 до около 40 дюймов, например, расстояние между рядами составляет 38 дюймов или 40 дюймов. В рамках заданного ряда, как правило, могут высевать около 2-3 семени хлопка на фут. В противоположность этому, посев с высокой плотностью в случае хлопка может включать диапазон приблизительно от 48000 до 60000 семян на акр, а расстояние между рядами может находиться в диапазоне от около 30 дюймов или менее до около 36 дюймов. В случае посева при высокой плотности в пределах каждого ряда можно высевать приблизительно 3-5 семян хлопка на фут, возможно, в комбинации с меньшим расстоянием между рядами. При этом высокая плотность культуры в случае хлопка может обеспечиваться узким расстоянием между рядами без увеличения плотности посева в пределах каждого ряда.[143] In the case of cotton, typical planting density is in the range of about 28,000 to 45,000 seeds per acre, and typical row spacing is in the range of about 38 to about 40 inches, for example, row spacing is 38 inches or 40 inches. Within a given row, they can typically plant about 2-3 cottonseeds per foot. In contrast, high density planting for cotton can include a range of about 48,000 to 60,000 seeds per acre, and row spacing can range from about 30 inches or less to about 36 inches. When planting at high density, approximately 3-5 cotton seeds per foot can be sown within each row, possibly in combination with less row spacing. At the same time, a high crop density in the case of cotton can be provided by a narrow distance between rows without increasing the sowing density within each row.
[144] В случае канолы типовая плотность посева находится в диапазоне от около 360000 до 550000 семян на акр, а типовое расстояние между рядами (между культиваторными стойками) находится в диапазоне от около 6 дюймов до около 16 дюймов. В рамках заданного ряда, как правило, могут высевать около 8-12 семени канолы на фут. В противоположность этому, посев с высокой плотностью в случае канолы может включать диапазон приблизительно от 450000 до 680000 семян на акр, а расстояние между рядами может находиться в диапазоне от около 5 дюймов или менее до около 10 дюймов. В случае посева при высокой плотности в пределах каждого ряда можно высевать приблизительно 10-16 семян канолы на фут, возможно, в комбинации с меньшим расстоянием между рядами. При этом высокая плотность культуры в случае канолы может обеспечиваться узким расстоянием между рядами без увеличения плотности посева в пределах каждого ряда.[144] In the case of canola, typical planting density ranges from about 360,000 to 550,000 seeds per acre, and typical row spacing (between cultivator tines) ranges from about 6 inches to about 16 inches. Within a given row, they can typically plant about 8-12 canola seeds per foot. In contrast, high density planting for canola can include a range of about 450,000 to 680,000 seeds per acre, and row spacing can range from about 5 inches or less to about 10 inches. When planting at high density, approximately 10-16 canola seeds per foot can be planted within each row, possibly in combination with less row spacing. At the same time, a high crop density in the case of canola can be provided by a narrow distance between the rows without increasing the planting density within each row.
[145] Ниже приведены неограничивающие типовые варианты реализации данного изобретения:[145] The following are non-limiting exemplary embodiments of the present invention:
1. Рекомбинантная ДНК-конструкция, содержащая первую экспрессионную кассету и вторую экспрессионную кассету, причем первая экспрессионная кассета содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с первым промотором пригодным для экспрессии в растениях, а вторая экспрессионная кассета содержит последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая является по меньшей мере на 80% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам полинуклеотидной последовательности первой экспрессионной кассеты, и при этом последовательность ДНК пригодная для транскрипции функционально связана со вторым промотором пригодным для экспрессии в растениях.1. A recombinant DNA construct comprising a first expression cassette and a second expression cassette, wherein the first expression cassette contains a polynucleotide sequence encoding the florigenic FT protein operably linked to a first promoter suitable for expression in plants, and the second expression cassette contains a DNA sequence suitable for transcription , encoding an RNA molecule containing a targeting sequence that is at least 80% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of the polynucleotide sequence of the first expression cassette, and wherein a DNA sequence suitable for transcription is operably linked to a second promoter suitable for expression in plants.
2. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 1, отличающаяся тем, что нацеливающая последовательность молекулы РНК имеет длину от около 15 до около 27 нуклеотидов.2. The recombinant DNA construct of
3. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 1 или 2, отличающаяся тем, что нацеливающая последовательность молекулы РНК имеет длину 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 нуклеотидов.3. Recombinant DNA construct according to
4. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-3, отличающаяся тем, что нацеливающая последовательность молекулы РНК является по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или 100% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам полинуклеотидной последовательности первой экспрессионной кассеты.4. Recombinant DNA construct according to any one of embodiments of the invention 1-3, characterized in that the targeting sequence of the RNA molecule is at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of the polynucleotide sequence of the first expression cassette.
5. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-4, отличающаяся тем, что нацеливающая последовательность молекулы РНК является по меньшей мере на 80% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам мРНК-транскрипта, кодируемого полинуклеотидной последовательностью первой экспрессионной кассеты.5. A recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 1-4, characterized in that the targeting sequence of the RNA molecule is at least 80% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of the mRNA transcript encoded by the polynucleotide sequence of the first expression cassette.
6. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-5, отличающаяся тем, что нацеливающая последовательность молекулы РНК является по меньшей мере на 80% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам экзонной или кодирующей последовательности мРНК-транскрипта.6. Recombinant DNA construct according to any one of embodiments 1-5, characterized in that the targeting sequence of the RNA molecule is at least 80% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of the exon or coding sequence of the mRNA transcript.
7. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-5, отличающаяся тем, что нацеливающая последовательность молекулы РНК является по меньшей мере на 80% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам некодирующей последовательности мРНК-транскрипта.7. Recombinant DNA construct according to any one of embodiments 1-5, characterized in that the targeting sequence of the RNA molecule is at least 80% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of the non-coding sequence of the mRNA transcript.
8. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-7, отличающаяся тем, что молекула РНК, кодируемая последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, представляет собой предшественника микроРНК или миРНК.8. Recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 1-7, characterized in that the RNA molecule encoded by a DNA sequence suitable for transcription is a microRNA or miRNA precursor.
9. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-8, отличающаяся тем, что последовательность ДНК пригодная для транскрипции содержит последовательность, которая является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% комплементарной SEQ ID NO: 68 или 69.9. Recombinant DNA construct according to any one of embodiments of the invention 1-8, characterized in that the DNA sequence suitable for transcription contains a sequence that is at least 80%, at least 85%, at least 90% , at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% complementary to SEQ ID NO: 68 or 69.
10. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-9, отличающаяся тем, что последовательность ДНК пригодная для транскрипции содержит последовательность, которая является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной SEQ ID NO: 65.10. Recombinant DNA construct according to any one of embodiments of the invention 1-9, characterized in that the DNA sequence suitable for transcription contains a sequence that is at least 80%, at least 85%, at least 90% , at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 65.
11. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-10, отличающаяся тем, что полинуклеотидная последовательность первой экспрессионной кассеты содержит последовательность, которая является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентичной SEQ ID NO: 69.11. Recombinant DNA construct according to any one of embodiments of the invention 1-10, characterized in that the polynucleotide sequence of the first expression cassette contains a sequence that is at least 80%, at least 85%, at least 90% , at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 69.
12. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-11, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 и 30, или ее функциональным фрагментом.12. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 1-11, characterized in that the FT florigen protein contains an amino acid sequence having at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identity with a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 , 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 and 30, or a functional fragment thereof.
13. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 12, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT дополнительно содержит одну или более из следующих аминокислот: тирозин или другой незаряженный полярный или неполярный остаток в аминокислотной позиции флоригенного белка FT, соответствующей аминокислотной позиции 85 в SEQ ID NO: 14; лейцин или другой неполярный остаток в аминокислотной позиции флоригенного белка FT, соответствующей аминокислотной позиции 128 в SEQ ID NO: 14; и триптофан или другой большой неполярный остаток в аминокислотной позиции флоригенного белка FT, соответствующей аминокислотной позиции 138 в SEQ ID NO: 14.13. Recombinant DNA construct according to embodiment 12, characterized in that the florigen FT protein additionally contains one or more of the following amino acids: tyrosine or another uncharged polar or non-polar residue at the amino acid position of the florigen FT protein corresponding to amino acid position 85 in SEQ ID NO: 14; leucine or other non-polar residue at the amino acid position of the FT florigenic protein corresponding to amino acid position 128 in SEQ ID NO: 14; and tryptophan or other large non-polar residue at the amino acid position of the FT florigenic protein corresponding to amino acid position 138 of SEQ ID NO: 14.
14. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 12, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT не содержит одну или более из следующих аминокислот: гистидин в аминокислотной позиции, соответствующей лизину или аргинину в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 85 в SEQ ID NO: 14; лизин или аргинин в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 128 в SEQ ID NO: 14; и серин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лизин или аргинин в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 138 в SEQ ID NO: 14.14. Recombinant DNA construct according to embodiment 12, characterized in that the FT florigen protein does not contain one or more of the following amino acids: histidine at the amino acid position corresponding to lysine or arginine at the amino acid position corresponding to position 85 in SEQ ID NO: 14 ; lysine or arginine at the amino acid position corresponding to position 128 in SEQ ID NO: 14; and serine, aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine at the amino acid position corresponding to position 138 in SEQ ID NO: 14.
15. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 12, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 и 30, или их функционального фрагмента.15. Recombinant DNA construct according to embodiment 12, characterized in that the FT florigen protein contains an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 , 20, 22, 24, 26, 28 and 30, or a functional fragment thereof.
16. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-15, отличающаяся тем, что полинуклеотидная последовательность имеет по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 и 29.16. Recombinant DNA construct according to any of embodiments of the invention 1-15, characterized in that the polynucleotide sequence has at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96% , at least 97%, at least 98%, or at least 99% identity with a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 and 29.
17. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-16, отличающаяся тем, что первый промотор пригодный для экспрессии в растениях является промотором вегетативной стадии.17. A recombinant DNA construct according to any one of embodiments 1-16, wherein the first promoter suitable for expression in plants is a vegetative stage promoter.
18. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-17, отличающаяся тем, что первый промотор пригодный для экспрессии в растениях является меристемо-предпочтительным или меристемо-специфическим промотором.18. A recombinant DNA construct according to any one of embodiments 1-17, wherein the first promoter suitable for expression in plants is a meristem-preferred or meristem-specific promoter.
19. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-18, отличающаяся тем, что первый промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с полинуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 или 48, или ее функциональной частью.19. A recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 1-18, characterized in that the first promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical to a polynucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 or 48, or a functional part thereof.
20. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 19, отличающаяся тем, что первый промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с SEQ ID NO: 31, или ее функциональной частью.20. Recombinant DNA construct according to embodiment 19, characterized in that the first promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80% at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5% or 100% identical to SEQ ID NO: 31, or its functional part.
21. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 19, отличающаяся тем, что первый промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 48.21. Recombinant DNA construct according to embodiment 19, characterized in that the first promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80% at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical to SEQ ID NO: 32 or SEQ ID NO :48.
22. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 19, отличающаяся тем, что первый промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с SEQ ID NO: 44, или ее функциональной частью.22. Recombinant DNA construct according to embodiment 19, characterized in that the first promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80% at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5% or 100% identical to SEQ ID NO: 44, or its functional part.
23. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-22, отличающаяся тем, что первый промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с полинуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 или 64, или ее функциональной частью.23. A recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 1-22, characterized in that the first promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical to a polynucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 or 64, or a functional part thereof.
24. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 23, отличающаяся тем, что первый промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с SEQ ID NO: 49, или ее функциональной частью.24. Recombinant DNA construct according to embodiment 23, characterized in that the first promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80% at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical to SEQ ID NO: 49, or its functional part.
25. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-24, отличающаяся тем, что второй промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с полинуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 или 64, или ее функциональной частью.25. Recombinant DNA construct according to any one of embodiments of the invention 1-24, characterized in that the second promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical to a polynucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 or 64, or a functional part thereof.
26. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-25, отличающаяся тем, что второй промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с SEQ ID NO: 49, или ее функциональной частью.26. A recombinant DNA construct according to any one of embodiments of the invention 1-25, characterized in that the second promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical to SEQ ID NO: 49 , or its functional part.
27. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-26, отличающаяся тем, что второй промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с полинуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93 или 94, или ее функциональной частью.27. Recombinant DNA construct according to any one of embodiments of the invention 1-26, characterized in that the second promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical to a polynucleotide sequence selected from group consisting of SEQ ID NO: 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93 or 94, or a functional part thereof.
28. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-27, отличающаяся тем, что первый промотор пригодный для экспрессии в растениях является промотором вегетативной стадии, а второй промотор пригодный для экспрессии в растениях является промотором поздней вегетативной стадии и/или промотором генеративной стадии.28. A recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 1-27, characterized in that the first promoter suitable for expression in plants is a vegetative stage promoter, and the second promoter suitable for expression in plants is a late vegetative stage promoter and/or a generative stage promoter. stages.
29. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 28, отличающаяся тем, что первый промотор пригодный для экспрессии в растениях является промотором ранней вегетативной стадии.29. Recombinant DNA construct according to embodiment 28, characterized in that the first promoter suitable for expression in plants is an early vegetative stage promoter.
30. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 28, отличающаяся тем, что второй промотор пригодный для экспрессии в растениях является предпочтительным промотором генеративной стадии.30. The recombinant DNA construct of embodiment 28, wherein the second promoter suitable for expression in plants is the preferred generative stage promoter.
31. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 1-30, отличающаяся тем, что первый промотор пригодный для экспрессии в растениях инициирует выявляемую экспрессию полинуклеотидной последовательности, кодирующей флоригенный белок FT на более ранней стадии развития, чем та, на которой второй промотор пригодный для экспрессии в растениях инициирует выявляемую экспрессию последовательности ДНК пригодной для транскрипции.31. A recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 1-30, characterized in that the first promoter suitable for expression in plants initiates detectable expression of the polynucleotide sequence encoding the florigenic FT protein at an earlier stage of development than that at which the second promoter suitable for expression in plants initiates detectable expression of a DNA sequence suitable for transcription.
32. Молекула ДНК или вектор, содержащие рекомбинантную ДНК-конструкцию по любому из вариантов реализации изобретения 1-31.32. A DNA molecule or vector containing a recombinant DNA construct according to any one of embodiments of the invention 1-31.
33. Плазмидный вектор для Agrobacterium-опосредованной трансформации, содержащий рекомбинантную ДНК-конструкцию по любому из вариантов реализации изобретения 1-31.33. A plasmid vector for Agrobacterium -mediated transformation containing a recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 1-31.
34. Донорная матричная молекула для сайт-опосредованной интеграции, содержащая рекомбинантную ДНК-конструкцию по любому из вариантов реализации изобретения 1-31.34. Donor template molecule for site-mediated integration, containing a recombinant DNA construct according to any of embodiments of the invention 1-31.
35. Трансгенное растение, содержащее вставку рекомбинантной ДНК-конструкции по любому из вариантов реализации изобретения 1-31 в геноме по меньшей мере одной клетки трансгенного растения.35. A transgenic plant comprising an insertion of a recombinant DNA construct according to any one of embodiments 1-31 in the genome of at least one cell of the transgenic plant.
36. Трансгенное растение по варианту реализации изобретения 35, отличающееся тем, что трансгенное растение является гомозиготным в отношении вставки рекомбинантной ДНК-конструкции.36. The transgenic plant of embodiment 35, wherein the transgenic plant is homozygous for the insertion of the recombinant DNA construct.
37. Трансгенное растение по варианту реализации изобретения 35, отличающееся тем, что трансгенное растение является гемизиготным в отношении вставки рекомбинантной ДНК-конструкции.37. The transgenic plant according to embodiment 35, wherein the transgenic plant is hemizygous for the insertion of the recombinant DNA construct.
38. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-37, отличающееся тем, что трансгенное растение является растением короткого дня.38. A transgenic plant according to any one of the embodiments of the invention 35-37, characterized in that the transgenic plant is a short day plant.
39. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-38, отличающееся тем, что трансгенное растение является двудольным растением.39. A transgenic plant according to any one of the embodiments of the invention 35-38, characterized in that the transgenic plant is a dicotyledonous plant.
40. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-39, отличающееся тем, что трансгенное растение является бобовым растением.40. A transgenic plant according to any one of embodiments 35-39, wherein the transgenic plant is a leguminous plant.
41. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-40, отличающееся тем, что трансгенное растение является соей.41. A transgenic plant according to any one of embodiments 35-40, wherein the transgenic plant is a soybean.
42. Трансгенное растение по варианту реализации изобретения 41, отличающееся тем, что трансгенное растение сои дает больше стручков на узел, чем контрольное растение, не содержащее рекомбинантную ДНК-конструкцию.42. The transgenic plant of embodiment 41, wherein the transgenic soybean plant produces more pods per node than a control plant that does not contain the recombinant DNA construct.
43. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-42, отличающееся тем, что трансгенное растение дает больше цветков на узел, чем контрольное растение, не содержащее рекомбинантную ДНК-конструкцию.43. The transgenic plant of any one of embodiments 35-42, wherein the transgenic plant produces more flowers per node than a control plant that does not contain the recombinant DNA construct.
44. Трансгенное растение или его часть по любому из вариантов реализации изобретения 35-43, отличающееся тем, что трансгенное растение дает больше семян, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или бобов на узел трансгенного растения, чем контрольное растение, не содержащее рекомбинантную ДНК-конструкцию.44. A transgenic plant or part thereof according to any one of embodiments 35-43, wherein the transgenic plant produces more seeds, pods, pods, fruits, nuts, or beans per node of the transgenic plant than a control plant that does not contain recombinant DNA - design.
45. Трансгенное растение или его часть по любому из вариантов реализации изобретения 35-44, отличающееся тем, что трансгенное растение цветет раньше, чем контрольное растение, не содержащее рекомбинантную ДНК-конструкцию.45. A transgenic plant or part thereof according to any one of the embodiments of the invention 35-44, characterized in that the transgenic plant blooms earlier than a control plant that does not contain a recombinant DNA construct.
46. Трансгенное растение или его часть по любому из вариантов реализации изобретения 35-45, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет больше цветочных кистей на узел, чем контрольное растение, не содержащее рекомбинантную ДНК-конструкцию.46. A transgenic plant or part thereof according to any one of embodiments 35-45, wherein the transgenic plant has more flower clusters per node than a control plant that does not contain the recombinant DNA construct.
47. Часть трансгенного растения, содержащая вставку рекомбинантной ДНК-конструкции по любому из вариантов реализации изобретения 1-31 в геноме по меньшей мере одной клетки части трансгенного растения.47. A part of a transgenic plant containing an insertion of a recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 1-31 in the genome of at least one cell of the transgenic plant part.
48. Часть трансгенного растения по любому из вариантов реализации изобретения 44-47, отличающаяся тем, что часть трансгенного растения представляет собой одно из следующего: семя, фрукт, лист, семядолю, гипокотиль, меристему, эмбрион, эндосперм, корень, побег, стебель, боб, цветок, соцветие, цветоножку, стебелек, пестик, дыхальце, цветоложе, лепесток, чашелистик, пыльцу, тычинку, нить, завязь, семяпочку, перикарпий, флоэму или сосудистую ткань.48. A transgenic plant part according to any of embodiments 44-47, characterized in that the transgenic plant part is one of the following: seed, fruit, leaf, cotyledon, hypocotyl, meristem, embryo, endosperm, root, shoot, stem, bean, flower, inflorescence, pedicel, stalk, pistil, spiracle, receptacle, petal, sepal, pollen, stamen, filament, ovary, ovule, pericarp, phloem, or vascular tissue.
49. Рекомбинантная ДНК-конструкция, содержащая полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с промотором пригодным для экспрессии в растениях, причем полинуклеотидная последовательность содержит последовательность, которая кодирует целевой сайт в мРНК-транскрипте, кодируемом полинуклеотидной последовательностью, и при этом целевой сайт мРНК-транскрипта является по меньшей мере на 80% комплементарным эндогенной молекуле РНК.49. Recombinant DNA construct containing a polynucleotide sequence encoding the florigenic FT protein operably linked to a promoter suitable for expression in plants, wherein the polynucleotide sequence contains a sequence that encodes a target site in the mRNA transcript encoded by the polynucleotide sequence, and at the same time the target site The mRNA transcript is at least 80% complementary to the endogenous RNA molecule.
50. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 49, отличающаяся тем, что целевой сайт мРНК-транскрипта имеет длину по меньшей мере 17 нуклеотидов.50. Recombinant DNA construct according to embodiment 49, characterized in that the target site of the mRNA transcript is at least 17 nucleotides long.
51. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 49 или 50, отличающаяся тем, что целевой сайт мРНК-транскрипта имеет длину 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 или 27 нуклеотидов.51. Recombinant DNA construct according to embodiment 49 or 50, characterized in that the target site of the mRNA transcript is 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, or 27 nucleotides long.
52. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-51, отличающаяся тем, что целевой сайт мРНК-транскрипта является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или но 100% комплементарным эндогенной молекуле РНК.52. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-51, characterized in that the target site of the mRNA transcript is at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5% or but 100% complementary to the endogenous RNA molecule.
53. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-52, отличающаяся тем, что целевой сайт находится в некодирующей последовательности мРНК-транскрипта.53. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-52, characterized in that the target site is located in the non-coding sequence of the mRNA transcript.
54. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-53, отличающаяся тем, что целевой сайт мРНК-транскрипта является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарным SEQ ID NO: 95, 96, 97, 103, 104 или 105.54. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-53, characterized in that the target site of the mRNA transcript is at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% complementary to SEQ ID NOs: 95, 96, 97, 103, 104, or 105.
55. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-54, отличающаяся тем, что целевой сайт мРНК-транскрипта является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарным SEQ ID NO: 95 или 103.55. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-54, characterized in that the target site of the mRNA transcript is at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% complementary to SEQ ID NO: 95 or 103.
56. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-55, отличающаяся тем, что полинуклеотидная последовательность, кодирующая флоригенный белок FT, содержит последовательность, которая является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичной SEQ ID NO: 98, 99, 100, 101, 106, 107, 108, 109 или 110.56. The recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-55, characterized in that the polynucleotide sequence encoding the florigenic FT protein contains a sequence that is at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NOs: 98, 99 , 100, 101, 106, 107, 108, 109 or 110.
57. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-54 или 56, отличающаяся тем, что целевой сайт мРНК-транскрипта является по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентичным SEQ ID NO: 99 или 107.57. A recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-54 or 56, characterized in that the target site of the mRNA transcript is at least 80%, at least 85%, at least 90%, according to at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 99 or 107.
58. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-57, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 и 30, или ее функциональным фрагментом.58. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-57, characterized in that the FT florigen protein contains an amino acid sequence having at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identity with a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 , 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 and 30, or a functional fragment thereof.
59. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-58, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT дополнительно содержит одну или более из следующих аминокислот: тирозин или другой незаряженный полярный или неполярный остаток в аминокислотной позиции флоригенного белка FT, соответствующей аминокислотной позиции 85 в SEQ ID NO: 14; лейцин или другой неполярный остаток в аминокислотной позиции флоригенного белка FT, соответствующей аминокислотной позиции 128 в SEQ ID NO: 14; и триптофан или другой большой неполярный остаток в аминокислотной позиции флоригенного белка FT, соответствующей аминокислотной позиции 138 в SEQ ID NO: 14.59. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-58, characterized in that the florigenic FT protein additionally contains one or more of the following amino acids: tyrosine or other uncharged polar or non-polar residue at the amino acid position of the florigenic FT protein corresponding to the amino acid position 85 in SEQ ID NO: 14; leucine or other non-polar residue at the amino acid position of the FT florigenic protein corresponding to amino acid position 128 in SEQ ID NO: 14; and tryptophan or other large non-polar residue at the amino acid position of the FT florigenic protein corresponding to amino acid position 138 of SEQ ID NO: 14.
60. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-58, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT не содержит одну или более из следующих аминокислот: гистидин в аминокислотной позиции, соответствующей лизину или аргинину в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 85 в SEQ ID NO: 14; лизин или аргинин в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 128 в SEQ ID NO: 14; и серин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лизин или аргинин в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 138 в SEQ ID NO: 14.60. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-58, characterized in that the FT florigen protein does not contain one or more of the following amino acids: histidine at the amino acid position corresponding to lysine or arginine at the amino acid position corresponding to position 85 in SEQ ID NO: 14; lysine or arginine at the amino acid position corresponding to position 128 in SEQ ID NO: 14; and serine, aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine at the amino acid position corresponding to position 138 in SEQ ID NO: 14.
61. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-61, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 и 30, или ее функциональный фрагмент.61. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-61, characterized in that the florigenic FT protein contains an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 , 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 and 30, or a functional fragment thereof.
62. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-62, отличающаяся тем, что полинуклеотидная последовательность имеет по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 и 29.62. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-62, characterized in that the polynucleotide sequence has at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96% , at least 97%, at least 98%, or at least 99% identity with a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 and 29.
63. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-62, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях является промотором вегетативной стадии.63. Recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 49-62, characterized in that the promoter suitable for expression in plants is a vegetative stage promoter.
64. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-63, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях является меристемо-предпочтительным или меристемо-специфическим промотором.64. Recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 49-63, characterized in that the promoter suitable for expression in plants is a meristem-preferred or meristem-specific promoter.
65. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-64, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с полинуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 или 48, или ее функциональной частью.65. A recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-64, characterized in that the promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95 %, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5% or 100% identical with a polynucleotide sequence selected from the group , consisting of SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45 or 48, or a functional part thereof.
66. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-65, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с SEQ ID NO: 31, или ее функциональной частью.66. A recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-65, characterized in that the promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95 %, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical to SEQ ID NO: 31, or its functional part.
67. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-65, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 48.67. A recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-65, characterized in that the promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95 %, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical to SEQ ID NO: 32 or SEQ ID NO: 48.
68. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-65, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с SEQ ID NO: 44, или ее функциональной частью.68. A recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-65, characterized in that the promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95 %, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical to SEQ ID NO: 44, or its functional part.
69. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 49-68, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с полинуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 или 64, или ее функциональной частью.69. A recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-68, characterized in that the promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95 %, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5% or 100% identical with a polynucleotide sequence selected from the group , consisting of SEQ ID NO: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 or 64, or a functional part thereof.
70. Молекула ДНК или вектор, содержащие рекомбинантную ДНК-конструкцию по любому из вариантов реализации изобретения 49-69.70. A DNA molecule or vector containing a recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-69.
71. Плазмидный вектор для Agrobacterium-опосредованной трансформации, содержащий рекомбинантную ДНК-конструкцию по любому из вариантов реализации изобретения 49-69.71. Plasmid vector for Agrobacterium -mediated transformation containing a recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-69.
72. Донорная матричная молекула для сайт-опосредованной интеграции, содержащая рекомбинантную ДНК-конструкцию по любому из вариантов реализации изобретения 49-69.72. Donor template molecule for site-mediated integration, containing a recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 49-69.
73. Трансгенное растение, содержащее вставку рекомбинантной ДНК-конструкции по любому из вариантов реализации изобретения 49-69 в геноме по меньшей мере одной клетки трансгенного растения.73. A transgenic plant comprising an insertion of a recombinant DNA construct according to any one of embodiments 49-69 in the genome of at least one cell of the transgenic plant.
74. Трансгенное растение по варианту реализации изобретения 73, отличающееся тем, что трансгенное растение является гомозиготным в отношении вставки рекомбинантной ДНК-конструкции.74. The transgenic plant according to
75. Трансгенное растение по варианту реализации изобретения 73, отличающееся тем, что трансгенное растение является гемизиготным в отношении вставки рекомбинантной ДНК-конструкции.75. The transgenic plant according to
76. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 73-75, отличающееся тем, что трансгенное растение является растением короткого дня.76. A transgenic plant according to any one of the embodiments of the invention 73-75, characterized in that the transgenic plant is a short day plant.
77. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 73-76, отличающееся тем, что трансгенное растение является двудольным растением.77. A transgenic plant according to any one of the embodiments of the invention 73-76, characterized in that the transgenic plant is a dicotyledonous plant.
78. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 73-77, отличающееся тем, что трансгенное растение является бобовым растением.78. A transgenic plant according to any one of embodiments 73-77, wherein the transgenic plant is a leguminous plant.
79. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 73-78, отличающееся тем, что трансгенное растение является соей.79. A transgenic plant according to any one of the embodiments of the invention 73-78, characterized in that the transgenic plant is a soybean.
80. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 73-79, отличающееся тем, что трансгенное растение сои дает больше бобов на узел, чем контрольное растение, не содержащее рекомбинантную ДНК-конструкцию.80. The transgenic plant of any one of embodiments 73-79, wherein the transgenic soybean plant produces more beans per node than a control plant that does not contain the recombinant DNA construct.
81. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 73-80, отличающееся тем, что трансгенное растение дает больше цветков на узел, чем контрольное растение, не содержащее рекомбинантную ДНК-конструкцию.81. The transgenic plant of any one of embodiments 73-80, wherein the transgenic plant produces more flowers per node than a control plant that does not contain the recombinant DNA construct.
82. Трансгенное растение или его часть по любому из вариантов реализации изобретения 73-81, отличающееся тем, что трансгенное растение дает больше семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или бобов на узел трансгенного растения, чем контрольное растение, не содержащее рекомбинантную ДНК-конструкцию.82. A transgenic plant or part thereof according to any one of embodiments 73-81, wherein the transgenic plant produces more pods, pods, fruits, nuts, or beans per node of the transgenic plant than a control plant that does not contain the recombinant DNA construct .
83. Трансгенное растение или его часть по любому из вариантов реализации изобретения 73-82, отличающееся тем, что трансгенное растение цветет раньше, чем контрольное растение, не содержащее рекомбинантную ДНК-конструкцию.83. A transgenic plant or part thereof according to any one of the embodiments of the invention 73-82, characterized in that the transgenic plant blooms earlier than a control plant that does not contain a recombinant DNA construct.
84. Трансгенное растение или его часть по любому из вариантов реализации изобретения 73-83, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет больше цветочных кистей на узел, чем контрольное растение, не содержащее рекомбинантную ДНК-конструкцию.84. The transgenic plant, or part thereof, of any one of embodiments 73-83, wherein the transgenic plant has more flower clusters per node than a control plant that does not contain the recombinant DNA construct.
85. Часть трансгенного растения, содержащая вставку рекомбинантной ДНК-конструкции по любому из вариантов реализации изобретения 49-69 в геноме по меньшей мере одной клетки части трансгенного растения.85. A part of a transgenic plant containing an insertion of a recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 49-69 in the genome of at least one cell of the transgenic plant part.
86. Часть трансгенного растения по любому из вариантов реализации изобретения 82-85, отличающаяся тем, что часть трансгенного растения представляет собой одно из следующего: семя, фрукт, лист, семядолю, гипокотиль, меристему, эмбрион, эндосперм, корень, побег, стебель, боб, цветок, соцветие, цветоножку, стебелек, пестик, дыхальце, цветоложе, лепесток, чашелистик, пыльцу, тычинку, нить, завязь, семяпочку, перикарпий, флоэму или сосудистую ткань.86. A transgenic plant part according to any one of the embodiments of the invention 82-85, characterized in that the transgenic plant part is one of the following: seed, fruit, leaf, cotyledon, hypocotyl, meristem, embryo, endosperm, root, shoot, stem, bean, flower, inflorescence, pedicel, stalk, pistil, spiracle, receptacle, petal, sepal, pollen, stamen, filament, ovary, ovule, pericarp, phloem, or vascular tissue.
87. Рекомбинантная ДНК-конструкция, содержащая последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая является по меньшей мере на 80% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам полинуклеотидной последовательности, кодирующей флоригенный белок FT, причем последовательность ДНК пригодная для транскрипции функционально связана с промотором пригодным для экспрессии в растениях.87. Recombinant DNA construct containing a DNA sequence suitable for transcription, encoding an RNA molecule containing a targeting sequence that is at least 80% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of a polynucleotide sequence encoding a florigen FT protein, moreover, a DNA sequence suitable for transcription is operably linked to a promoter suitable for expression in plants.
88. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 87, отличающаяся тем, что нацеливающая последовательность молекулы РНК имеет длину от около 15 до около 27 нуклеотидов.88. The recombinant DNA construct of embodiment 87, wherein the targeting sequence of the RNA molecule is about 15 to about 27 nucleotides in length.
89. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 87 или 88, отличающаяся тем, что нацеливающая последовательность молекулы РНК является по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам полинуклеотидной последовательности, кодирующей флоригенный белок FT.89. Recombinant DNA construct according to embodiment 87 or 88, characterized in that the targeting sequence of the RNA molecule is at least 85%, at least 90%, at least 95%, at least 96% , at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of the polynucleotide sequence encoding the florigenic FT protein.
90. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-89, отличающаяся тем, что нацеливающая последовательность молекулы РНК является по меньшей мере на 80% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам мРНК-транскрипта, кодируемого полинуклеотидной последовательностью, кодирующей флоригенный белок FT.90. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-89, characterized in that the targeting sequence of the RNA molecule is at least 80% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of the mRNA transcript encoded by the polynucleotide sequence encoding the florigen FT protein .
91. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-90, отличающаяся тем, что нацеливающая последовательность молекулы РНК является по меньшей мере на 80% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам экзонной или кодирующей последовательности мРНК-транскрипта.91. A recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 87-90, characterized in that the targeting sequence of the RNA molecule is at least 80% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of the exon or coding sequence of the mRNA transcript.
92. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-91, отличающаяся тем, что нацеливающая последовательность молекулы РНК является по меньшей мере на 80% комплементарной по меньшей мере 15 последовательным нуклеотидам некодирующей последовательности мРНК-транскрипта.92. A recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 87-91, characterized in that the targeting sequence of the RNA molecule is at least 80% complementary to at least 15 consecutive nucleotides of the non-coding sequence of the mRNA transcript.
93. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-92, отличающаяся тем, что молекула РНК, кодируемая последовательностью ДНК пригодной для транскрипции, представляет собой предшественника микроРНК или миРНК.93. A recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-92, characterized in that the RNA molecule encoded by a DNA sequence suitable for transcription is a microRNA or miRNA precursor.
94. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-93, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT, кодируемый полинуклеотидной последовательностью, содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 и 30, или ее функциональным фрагментом.94. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-93, characterized in that the florigenic FT protein encoded by the polynucleotide sequence contains an amino acid sequence having at least 60%, at least 65%, at least 70% at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identity with a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 and 30, or a functional fragment thereof.
95. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-94, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT дополнительно содержит одну или более из следующих аминокислот: тирозин или другой незаряженный полярный или неполярный остаток в аминокислотной позиции флоригенного белка FT, соответствующей аминокислотной позиции 85 в SEQ ID NO: 14; лейцин или другой неполярный остаток в аминокислотной позиции флоригенного белка FT, соответствующей аминокислотной позиции 128 в SEQ ID NO: 14; и триптофан или другой большой неполярный остаток в аминокислотной позиции флоригенного белка FT, соответствующей аминокислотной позиции 138 в SEQ ID NO: 14.95. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-94, characterized in that the florigenic FT protein additionally contains one or more of the following amino acids: tyrosine or another uncharged polar or non-polar residue at the amino acid position of the florigenic FT protein corresponding to the amino acid position 85 in SEQ ID NO: 14; leucine or other non-polar residue at the amino acid position of the FT florigenic protein corresponding to amino acid position 128 in SEQ ID NO: 14; and tryptophan or other large non-polar residue at the amino acid position of the FT florigenic protein corresponding to amino acid position 138 of SEQ ID NO: 14.
96. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-94, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT не содержит одну или более из следующих аминокислот: гистидин в аминокислотной позиции, соответствующей лизину или аргинину в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 85 в SEQ ID NO: 14; лизин или аргинин в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 128 в SEQ ID NO: 14; и серин, аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту, лизин или аргинин в аминокислотной позиции, соответствующей позиции 138 в SEQ ID NO: 14.96. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-94, characterized in that the FT florigen protein does not contain one or more of the following amino acids: histidine at the amino acid position corresponding to lysine or arginine at the amino acid position corresponding to position 85 in SEQ ID NO: 14; lysine or arginine at the amino acid position corresponding to position 128 in SEQ ID NO: 14; and serine, aspartic acid, glutamic acid, lysine or arginine at the amino acid position corresponding to position 138 in SEQ ID NO: 14.
97. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-96, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 и 30, или ее функциональным фрагментом.97. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-96, characterized in that the FT florigen protein contains an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14 , 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 and 30, or a functional fragment thereof.
98. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-97, отличающаяся тем, что полинуклеотидная последовательность, кодирующая флоригенный белок FT, имеет по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 и 29.98. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-97, characterized in that the polynucleotide sequence encoding the florigenic FT protein has at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95% , at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% identity with a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 and 29.
99. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-98, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с полинуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 или 64, или ее функциональной частью.99. A recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-98, characterized in that the promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95 %, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5% or 100% identical with a polynucleotide sequence selected from the group , consisting of SEQ ID NO: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 or 64, or a functional part thereof.
100. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-99, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с SEQ ID NO: 49, или ее функциональной частью.100. A recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-99, characterized in that the promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95 %, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5%, or 100% identical to SEQ ID NO: 49, or its functional part.
101. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-100, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая является по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99%, по меньшей мере на 99,5% или на 100% идентичной с полинуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93 или 94, или ее функциональной частью.101. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-100, characterized in that the promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95 %, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, at least 99.5% or 100% identical with a polynucleotide sequence selected from the group , consisting of SEQ ID NO: 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91 , 92, 93 or 94, or a functional part thereof.
102. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-101, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях является промотором вегетативной стадии.102. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-101, characterized in that the promoter suitable for expression in plants is a vegetative stage promoter.
103. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-102, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях является промотором поздней вегетативной стадии и/или промотором генеративной стадии.103. Recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 87-102, characterized in that the promoter suitable for expression in plants is a late vegetative stage promoter and/or a generative stage promoter.
104. Рекомбинантная ДНК-конструкция по любому из вариантов реализации изобретения 87-103, отличающаяся тем, что промотор пригодный для экспрессии в растениях является гетерологичным в отношении последовательности ДНК пригодной для транскрипции.104. Recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-103, characterized in that the promoter suitable for expression in plants is heterologous with respect to the DNA sequence suitable for transcription.
105. Молекула ДНК или вектор, содержащие рекомбинантную ДНК-конструкцию по любому из вариантов реализации изобретения 87-104.105. A DNA molecule or vector containing a recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-104.
106. Трансгенное растение, содержащее вставку рекомбинантной ДНК-конструкции по любому из вариантов реализации изобретения 87-104 в геноме по меньшей мере одной клетки трансгенного растения.106. A transgenic plant comprising an insertion of a recombinant DNA construct according to any one of the embodiments of the invention 87-104 in the genome of at least one cell of the transgenic plant.
107. Трансгенное растение по варианту реализации изобретения 106, отличающееся тем, что трансгенное растение является растением короткого дня.107. The transgenic plant of
108. Трансгенное растение по варианту реализации изобретения 106 или 107, отличающееся тем, что трансгенное растение является двудольным растением.108. The transgenic plant of
109. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 106-108, отличающееся тем, что трансгенное растение является бобовым растением.109. A transgenic plant according to any one of embodiments 106-108, wherein the transgenic plant is a leguminous plant.
110. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 106-109, отличающееся тем, что трансгенное растение является соей.110. A transgenic plant according to any one of the embodiments of the invention 106-109, characterized in that the transgenic plant is a soybean.
111. Часть трансгенного растения, содержащая вставку рекомбинантной ДНК-конструкции по любому из вариантов реализации изобретения 87-103 в геноме по меньшей мере одной клетки части трансгенного растения.111. A part of a transgenic plant containing an insertion of a recombinant DNA construct according to any of the embodiments of the invention 87-103 in the genome of at least one cell of the transgenic plant part.
112. Часть трансгенного растения по варианту реализации изобретения 111, отличающаяся тем, что часть трансгенного растения представляет собой одно из следующего: семя, фрукт, лист, семядолю, гипокотиль, меристему, эмбрион, эндосперм, корень, побег, стебель, боб, цветок, соцветие, цветоножку, стебелек, пестик, дыхальце, цветоложе, лепесток, чашелистик, пыльцу, тычинку, нить, завязь, семяпочку, перикарпий, флоэму или сосудистую ткань.112. A transgenic plant part according to embodiment 111, characterized in that the transgenic plant part is one of the following: seed, fruit, leaf, cotyledon, hypocotyl, meristem, embryo, endosperm, root, shoot, stem, bean, flower, inflorescence, pedicel, stalk, pistil, spiracle, receptacle, petal, sepal, pollen, stamen, filament, ovary, ovule, pericarp, phloem, or vascular tissue.
113. Способ получения трансгенного растения, включающий113. A method for producing a transgenic plant, including
(a) трансформацию по меньшей мере одной клетки эксплантата рекомбинантной ДНК-конструкцией по любому из вариантов реализации изобретения 1-31, 49-69 или 87-104; и(a) transforming at least one explant cell with a recombinant DNA construct according to any one of embodiments 1-31, 49-69, or 87-104; and
(b) регенерацию или выращивание трансгенного растения из трансформированного эксплантата.(b) regenerating or growing the transgenic plant from the transformed explant.
114. Способ по варианту реализации изобретения 113, дополнительно включающий:114. The method of embodiment 113, further comprising:
(c) отбор трансгенного растения, имеющего один или более из следующих признаков или фенотипов: более раннее цветение, более длительный генеративный период или период цветения, увеличенное число цветков на узел, увеличенное число цветочных кистей на узел, увеличенное число бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов или орехов на узел и увеличенное число семян на узел, по сравнению с контрольным растением, не содержащим рекомбинантную ДНК-конструкцию.(c) selecting a transgenic plant having one or more of the following traits or phenotypes: earlier flowering, longer generative or flowering period, increased number of flowers per node, increased number of flower clusters per node, increased number of pods, pods, pods , fruits or nuts per node and an increased number of seeds per node compared to a control plant not containing the recombinant DNA construct.
115. Способ по варианту реализации изобретения 113 или 114, отличающийся тем, что этап трансформации (a) проводят посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации или бомбардировки микрочастицами эксплантата.115. The method of
116. Способ по любому из вариантов реализации изобретения 113-115, отличающийся тем, что этап трансформации (a) включает сайт-направленную интеграцию рекомбинантной ДНК-конструкции.116. The method according to any of the embodiments of the invention 113-115, characterized in that the step of transformation (a) includes site-directed integration of the recombinant DNA construct.
117. Способ посадки трансгенного культурного растения, включающий:117. A method for planting a transgenic crop plant, including:
посадку трансгенного культурного растения с повышенной плотностью в поле, при этом трансгенное культурное растение содержит вставку рекомбинантной ДНК-конструкции по любому из вариантов реализации изобретения 1-31, 49-69 или 87-104. planting a transgenic crop plant at an increased density in a field, wherein the transgenic crop plant contains an insert of a recombinant DNA construct according to any one of embodiments 1-31, 49-69, or 87-104.
118. Способ по варианту реализации изобретения 117, отличающийся тем, что трансгенное культурное растение представляет собой сою, и при этом на акр высаживают от около 150000 до 250000 семян трансгенного соевого растения.118. The method of
119. Способ по варианту реализации изобретения 117, отличающийся тем, что трансгенное культурное растение представляет собой хлопок, и при этом на акр высаживают от около 48000 до 60000 семян трансгенного хлопкового растения.119. The method of
120. Способ по варианту реализации изобретения 117, отличающийся тем, что трансгенное культурное растение представляет собой канолу, и при этом на акр высаживают от около 450000 до 680000 семян трансгенного растения канолы.120. The method of
121. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-46, 73-84 или 106-110, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет по меньшей мере на 1%, по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 125%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 175%, по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 250%, по меньшей мере на 300%, по меньшей мере на 350% или по меньшей мере на 400% больше семян, бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней, чем нетрансгенное контрольное растение.121. The transgenic plant according to any of the embodiments of the invention 35-46, 73-84 or 106-110, characterized in that the transgenic plant has at least 1%, at least 2%, at least 5%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 90%, at least at least 100%, at least 125%, at least 150%, at least 175%, at least 200%, at least 250%, at least 300%, at least 350% or at least 400% more seeds, pods, pods, pods, fruits, nuts or tubers than the non-transgenic control plant.
122. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-46, 73-84 или 106-110, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет в среднем по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 15%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 125%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 175%, по меньшей мере на 200%, по меньшей мере на 250%, по меньшей мере на 300%, по меньшей мере на 350% или по меньшей мере на 400% больше семян, бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел, чем нетрансгенное контрольное растение.122. The transgenic plant according to any of the embodiments of the invention 35-46, 73-84 or 106-110, characterized in that the transgenic plant has an average of at least 5%, at least 10%, at least 15 %, at least 20%, at least 25%, at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50% at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 90%, at least 100%, at least 125%, at least 150%, at least 175%, at least 200%, at least 250%, at least 300%, at least 350% or at least 400% more seeds , beans, pods, pods, fruits, nuts or tubers per node than the non-transgenic control plant.
123. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-46, 73-84 или 106-110, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет в среднем по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9 или по меньшей мере 10 бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел.123. The transgenic plant according to any of the embodiments of the invention 35-46, 73-84 or 106-110, characterized in that the transgenic plant has an average of at least 2, at least 3, at least 4, at least 5 , at least 6, at least 7, at least 8, at least 9 or at least 10 beans, pods, pods, fruits, nuts or tubers per node.
124. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-46, 73-84 или 106-110, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет в среднем 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6, 2-5, 2-4, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4-6 или 4-5 бобов, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или клубней на узел.124. The transgenic plant according to any of the embodiments of the invention 35-46, 73-84 or 106-110, characterized in that the transgenic plant has an average of 2-10, 2-9, 2-8, 2-7, 2-6 , 2-5, 2-4, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 4-10, 4-9, 4-8, 4-7, 4 -6 or 4-5 beans, pods, pods, fruits, nuts or tubers per node.
125. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-46, 73-84 или 106-110, отличающееся тем, что трансгенное растение имеет в среднем по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9 или по меньшей мере на 10 больше семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или бобов на узел по сравнению с нетрансгенным контрольным растением.125. The transgenic plant according to any of the embodiments of the invention 35-46, 73-84 or 106-110, characterized in that the transgenic plant has an average of at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, or at least 10 more pods, pods, fruits, nuts, or beans per node compared to a non-transgenic control plant.
126. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-46, 73-84 или 106-110, отличающееся тем, что трансгенное растение цветет по меньшей мере на 1, по меньшей мере на 2, по меньшей мере на 3, по меньшей мере на 4, по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 6, по меньшей мере на 7, по меньшей мере на 8, по меньшей мере на 9, по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 11, по меньшей мере на 12, по меньшей мере на 13, по меньшей мере на 14, по меньшей мере на 15, по меньшей мере на 20, по меньшей мере на 25, по меньшей мере на 30, по меньшей мере на 35, по меньшей мере на 40 или по меньшей мере на 45 дней раньше, чем нетрансгенное контрольное растение.126. A transgenic plant according to any one of embodiments of the invention 35-46, 73-84 or 106-110, characterized in that the transgenic plant blooms at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12 , at least 13, at least 14, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, or at least 45 days earlier than the non-transgenic control plant.
127. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 121, 122, 123, 124, 125 или 126, отличающееся тем, что трансгенное растение представляет собой соевое растение и трансгенное растение имеет в среднем больше бобов на узел, чем нетрансгенное контрольное растение.127. The transgenic plant of any one of
128. Трансгенное растение, содержащее полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с промотором вегетативной стадии, при этом экспрессия флоригенного белка FT подавляется в поздней вегетативной и/или генеративной ткани.128. A transgenic plant containing a polynucleotide sequence encoding a florigenic FT protein operably linked to a vegetative stage promoter, wherein the expression of the florigenic FT protein is suppressed in the late vegetative and/or generative tissue.
129. Трансгенное растение по варианту реализации изобретения 128, отличающееся тем, что экспрессия флоригенного белка FT подавляется малой молекулой РНК.129. A transgenic plant according to embodiment 128, characterized in that the expression of the florigenic FT protein is suppressed by a small RNA molecule.
130. Рекомбинантная ДНК-конструкция, содержащая полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT и функционально связанную с промотором вегетативной стадии, и по меньшей мере одну последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу РНК, содержащую нацеливающую последовательность, которая является комплементарной по меньшей мере части полинуклеотидной последовательности.130. Recombinant DNA construct containing a polynucleotide sequence encoding florigen FT protein and functionally linked to a vegetative stage promoter, and at least one DNA sequence suitable for transcription, encoding an RNA molecule containing a targeting sequence that is complementary to at least part of the polynucleotide sequences.
131. Трансгенное растение, содержащее вставку рекомбинантной ДНК-конструкции по варианту реализации изобретения 130 в геноме по меньшей мере одной клетки трансгенного растения.131. A transgenic plant containing an insert of a recombinant DNA construct according to embodiment 130 in the genome of at least one cell of the transgenic plant.
132. Трансгенное растение, содержащее рекомбинантную полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с промотором вегетативной стадии, при этом экспрессия полинуклеотидной последовательности пространственно и временно ограничена малой молекулой РНК.132. A transgenic plant containing a recombinant polynucleotide sequence encoding the florigenic FT protein operably linked to a vegetative stage promoter, wherein the expression of the polynucleotide sequence is spatially and temporally limited by a small RNA molecule.
133. Рекомбинантная ДНК-конструкция, содержащая экспрессионную кассету, причем экспрессионная кассета содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую флоригенный белок FT, функционально связанную с промотором пригодным для экспрессии в растениях, при этом промотор пригодный для экспрессии в растениях содержит полинуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или 100% идентична полинуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 или 64, или ее функциональной части.133. A recombinant DNA construct containing an expression cassette, wherein the expression cassette contains a polynucleotide sequence encoding the florigenic FT protein operably linked to a promoter suitable for expression in plants, while the promoter suitable for expression in plants contains a polynucleotide sequence that is at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93 %, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to the polynucleotide sequence, selected from the group consisting of SEQ ID NO: 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63 or 64, or a functional part thereof.
134. Рекомбинантная ДНК-конструкция по варианту реализации изобретения 130 или 133, отличающаяся тем, что флоригенный белок FT содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 60%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности с последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 и 30, или ее функциональным фрагментом.134. Recombinant DNA construct according to
135. Молекула ДНК или вектор, содержащие рекомбинантную ДНК-конструкцию по варианту реализации изобретения 130 или 133.135. A DNA molecule or vector containing a recombinant DNA construct according to
136. Плазмидный вектор для Agrobacterium-опосредованной трансформации, содержащий рекомбинантную ДНК-конструкцию ппо варианту реализации изобретения 130 или 133.136. A plasmid vector for Agrobacterium -mediated transformation containing a recombinant DNA construct according to
137. Донорная матричная молекула для сайт-опосредованной интеграции, содержащая рекомбинантную ДНК-конструкцию по варианту реализации изобретения 130 или 133.137. Donor template molecule for site-mediated integration containing a recombinant DNA construct according to
138. Трансгенное растение, содержащее вставку рекомбинантной ДНК-конструкции по варианту реализации изобретения 130 или 133 в геноме по меньшей мере одной клетки трансгенного растения.138. A transgenic plant containing an insertion of a recombinant DNA construct according to
139. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 131, 132 или 138, отличающееся тем, что трансгенное растение является гомозиготным в отношении вставки рекомбинантной ДНК-конструкции.139. A transgenic plant according to any one of
140. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 131, 132, 138 или 139, отличающееся тем, что трансгенное растение является гемизиготным в отношении вставки рекомбинантной ДНК-конструкции.140. A transgenic plant according to any one of
141. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 131, 132 или 138-140, отличающееся тем, что трансгенное растение является растением короткого дня.141. The transgenic plant of any one of
142. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 131, 132 или 138-141, отличающееся тем, что трансгенное растение является двудольным растением.142. A transgenic plant according to any one of
143. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 131, 132 или 138-142, отличающееся тем, что трансгенное растение является бобовым растением.143. A transgenic plant according to any one of
144. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 131, 132 или 138-143, отличающееся тем, что трансгенное растение является соей.144. The transgenic plant of any one of
145. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-46, 73-84, 106-110, 131, 132 или 138-144, отличающееся тем, что трансгенное растение дает больше семян, семенных коробочек, стручков, фруктов, орехов или бобов на узел трансгенного растения, чем контрольное растение, не содержащее рекомбинантную ДНК-конструкцию.145. The transgenic plant of any one of embodiments 35-46, 73-84, 106-110, 131, 132, or 138-144, wherein the transgenic plant produces more seeds, pods, pods, fruits, nuts, or beans per node of the transgenic plant than a control plant that does not contain the recombinant DNA construct.
146. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-46, 73-84, 106-110, 131, 132 или 138-145, отличающееся тем, что трансгенное растение цветет раньше, чем контрольное растение, не содержащее рекомбинантную ДНК-конструкцию.146. A transgenic plant according to any one of embodiments 35-46, 73-84, 106-110, 131, 132, or 138-145, characterized in that the transgenic plant blooms earlier than a control plant that does not contain the recombinant DNA construct.
147. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-46, 73-84, 106-110, 131, 132 или 138-146, отличающееся тем, что трансгенное растение представляет собой соевое растение, которое имеет высоту, составляющую по меньшей мере около 700 миллиметров, на стадии R8.147. The transgenic plant of any one of embodiments 35-46, 73-84, 106-110, 131, 132, or 138-146, wherein the transgenic plant is a soybean plant that has a height of at least about 700 millimeters, at stage R8.
148. Трансгенное растение по любому из вариантов реализации изобретения 35-46, 73-84, 106-110, 131, 132 или 138-147, отличающееся тем, что трансгенное растение представляет собой соевое растение, которое имеет по меньшей мере 100 узлов на растение на стадии R8.148. The transgenic plant of any one of embodiments 35-46, 73-84, 106-110, 131, 132, or 138-147, wherein the transgenic plant is a soybean plant that has at least 100 nodes per plant at stage R8.
149. Часть трансгенного растения, содержащая вставку рекомбинантной ДНК-конструкции по варианту реализации изобретения 130 или 133 в геноме по меньшей мере одной клетки части трансгенного растения.149. Part of a transgenic plant containing an insert of a recombinant DNA construct according to
ПРИМЕРЫEXAMPLES
Пример 1. Условия индукции с коротким днем для сои и идентификация генов Flowering Locus T (FT) с помощью профилирования транскрипции.Example 1 Short Day Induction Conditions for Soybeans and Identification of Flowering Locus T (FT) Genes by Transcription Profiling.
[146] Этот пример ранее был описан в одновременно находящейся на рассмотрении заявке на патент США № 15/131987 и международной заявке № PCT/US2016/028130, которые в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки. Способы фотопериодической световой обработки (т. е. индукции цветения растений в условиях короткого дня) описаны в патенте США № 8935880 и публикации патентной заявки США № 2014/0259905, которые в полном объеме включены в данный документ посредством ссылки. Как дополнительно описано в них, ранняя индукция в условиях короткого дня позволяла получать растения сои, имеющие измененные генеративные признаки, включая увеличенное число бобов/семян на растение. Эксперименты с профилированием транскрипции проводили, используя экспрессионные микроматрицы для определения наличия повышающей регуляции для конкретного транскрипта в этих светоиндуцированных растениях, чтобы идентифицировать гены, которые могут отвечать за опосредование фенотипов короткодневной индукции. В этих экспериментах проводили анализ транскриптов для тканей листьев и цветочных верхушек сои, собранных с растений через 1, 3 и 5 дней после их помещения в индуктивные условия короткого светового дня (короткий день), в сравнении с тканями растений, которые не помещали в индуктивные условия (длинный день)[146] This example was previously described in co-pending US Patent Application No. 15/131987 and International Application No. PCT/US2016/028130, which are incorporated herein by reference in their entirety. Methods for photoperiodic light processing (i.e.short day conditions) are described in US Pat. No. 8,935,880 and US Patent Application Publication No. 2014/0259905, which are incorporated herein by reference in their entirety. As further described therein, early induction under short day conditions produced soybean plants having altered generative traits, including an increased number of pods/seeds per plant. Transcription profiling experiments were performed using expression microarrays to determine the presence of upregulation for a particular transcript in these light-induced plants in order to identify genes that may be responsible for mediating short day induction phenotypes. In these experiments, transcripts were analyzed for soybean leaf and flower top tissues harvested from
[147] Как проиллюстрировано на Фиг. 2, повышенное накопление транскриптов наблюдали для конкретного гена Flowering Locus T, Gm.FT2a (SEQ ID NO: 1), в листьях, собранных через 3 и 5 дней после применения условий ранней индукции короткого дня (рИКД), в сравнении с образцами, полученными из (i) тканей цветочных верхушек тех же самых растений, подвергнутых короткодневной индукции, (ii) тканей листьев и цветочных верхушек растений сои, которые вместо этого помещали в условия длинного дня. Эти данные поддерживают вывод, что экспрессия Gm.FT2a индуцируется в тканях листьев растений, подвергнутых условиям рИКД, что не наблюдалось в растениях, которые выращивали в условиях длинного дня. Также экспрессию Gm.FT2a не наблюдали в цветочных верхушках обработанных рИКД растений, что согласуется с моделью экспрессии белка FT, которая индуцируется в периферических листовых тканях в ответ на индуктивные фотопериодические условия, а затем перемещается в участок своего действия в меристемах для индукции цветения. Однако дополнительные эксперименты с применением более чувствительного анализа секвенирования РНК для транскриптов показали наличие некоторой индукции Gm.FT2a в верхушках побегов и аксиллярных почках в ответ на условия рИКД (данные не показаны).[147] As illustrated in FIG. 2, increased transcript accumulation was observed for a specific Flowering Locus T gene, Gm.FT2a (SEQ ID NO: 1), in leaves harvested 3 and 5 days after application of early short day induction (ESD) conditions, compared to samples obtained from (i) flower top tissues of the same plants subjected to short day induction, (ii) leaf and flower top tissues of soybean plants that were placed under long day conditions instead. These data support the conclusion that Gm.FT2a expression is induced in leaf tissues of plants subjected to rICD conditions, which was not observed in plants grown under long day conditions. Also, Gm.FT2a expression was not observed in the flower tops of rICD-treated plants, consistent with a pattern of FT protein expression that is induced in peripheral leaf tissues in response to inductive photoperiodic conditions and then migrates to its site of action in the meristems to induce flowering. However, additional experiments using a more sensitive RNA sequencing analysis for transcripts showed some induction of Gm.FT2a in shoot tips and axillary buds in response to rICD conditions (data not shown).
Пример 2. Изучение характеристик профилей экспрессии промотора pAt.Erecta в сое.Example 2 Characterization of expression profiles of the pAt.Erecta promoter in soy.
[148] Для достижения необходимых признаков или фенотипов посредством трансгенных подходов может требоваться регуляция временных и пространственных профилей эктопической экспрессии гена FT. Физиологические эксперименты с соей для определения экспрессии Gm.FT2a в вегетативных тканях после условий короткодневной индукции (смотрите Фиг. 2) показали, что достижение положительных в отношении урожайности признаков может основываться на более ранней экспрессии FT во время вегетативной стадии. С другой стороны, несмотря на то, что транскрипты FT не выявляются в вегетативных верхушках, было показано, что белок FT преодолевает большое расстояние от листьев до апикальной ткани, где он инициирует переход от вегетативной стадии к генеративной. Смотрите, например, Lifschitz, E. et al., (2006), выше; и Corbeiser, L. et al., ʺFT Protein Movement Contributes to Long-Distance Signaling in Floral Induction of Arabidopsisʺ, Science 316: 1030-1033 (2007). Таким образом, в свете наших собственных наблюдений, мы предложили использовать промотор вегетативной стадии, который является активным в меристеме, для регуляции эктопической экспрессии FT в растении. Посредством экспрессии морфогенетического сигнала FT непосредственно в меристеме на необходимой стадии развития можно обойти или избежать многие эндогенные пути и регуляторные отклики (например, регуляцию трансдукции FT в листьях и транслокацию сигнала FT на большое расстояние). Предыдущие эксперименты с короткодневными индукционными условиями (описанными выше в примере 1) выявили повышенную регуляцию гена Gm.Erecta в меристемах растений сои. Было показано, что промотор pErecta (SEQ ID NO: 31) из Arabidopsis имеет слабую экспрессию в меристеме растений во время вегетативных стадий развития. Соответственно, промотор pAt.Erecta был выбран для первых экспериментов по экспрессии FT.[148] To achieve the desired traits or phenotypes through transgenic approaches, regulation of the temporal and spatial profiles of ectopic FT gene expression may be required. Physiological experiments with soybean to determine the expression of Gm.FT2a in vegetative tissues after short-day induction conditions (see Fig. 2) showed that the achievement of positive yield traits may be based on earlier expression of FT during the vegetative stage. On the other hand, despite the fact that FT transcripts are not detected in the vegetative apices, the FT protein has been shown to travel a long distance from the leaves to the apical tissue, where it initiates the transition from the vegetative to the generative stage. See, for example , Lifschitz, E. et al., (2006), supra ; and Corbeiser, L. et al., ʺFT Protein Movement Contributes to Long-Distance Signaling in Floral Induction of Arabidopsisʺ , Science 316 : 1030-1033 (2007). Thus, in light of our own observations, we proposed using a vegetative stage promoter that is active in the meristem to regulate ectopic FT expression in the plant. By expressing the morphogenetic FT signal directly in the meristem at the required developmental stage, many endogenous pathways and regulatory responses can be bypassed or avoided ( eg , regulation of FT transduction in leaves and long-range FT signal translocation). Previous experiments with short day induction conditions (described in Example 1 above) revealed upregulation of the Gm. Erecta gene in soybean plant meristems. The pErecta promoter (SEQ ID NO: 31) from Arabidopsis has been shown to be weakly expressed in the plant meristem during the vegetative stages of development. Accordingly, the pAt. Erecta promoter was chosen for the first FT expression experiments.
[149] Дополнительные эксперименты проводили, чтобы дополнительно изучить профили экспрессии pAt.Erecta, слитого с геном репортера GUS в вегетативных и флоральных меристематических тканях. Анализ профилей экспрессии GUS во время развития саженцев сои показал, что промотор pAt.Erecta демонстрирует временный и пространственный профиль экспрессии, предпочтительно в меристематических тканях во время вегетативной стадии развития. Фиг. 3A-3O и 4A-4O и Фиг. 5A-5F и 6A-6F включают два набора изображений, чтобы проиллюстрировать профиль окрашивания GUS. На Фиг. 3A-3O и 5A-5F представлены черно-белые изображения окрашенных тканей, а на Фиг. 4A-4O и 6A-6F, соответственно, представлены черно-белые изображения, соответствующие Фиг. 3A-3O и 5A-5F, соответственно, но с цветовой фильтрацией для демонстрации профиля и интенсивности синего окрашивания GUS. Таким образом, профиль экспрессии окрашивания GUS можно оценить по этим черно-белым изображениям путем сравнения соответствующих изображений на Фиг. 3A-3O и 4A-4O или Фиг. 5A-5F и 6A-6F. Как проиллюстрировано на Фиг. 3A-3O и 4A-4O, окрашивание GUS было выявлено в незрелых однолистных пластинках и черешках сои (Фиг. 4A и 4B) через три дня после посева/прорастания. Экспрессия pAt.Erecta::GUS также хорошо выявлялась в участках трехлистного примордия, апикальной меристемы побегов (АМП) и аксиллярной меристемы на этой ранней вегетативной стадии (Фиг. 4C). Активность GUS не выявлялась в полностью развернутых однолистных и трехлистных листьях через десять дней после прорастания или посева (Фиг. 4D и 4E). Однако активность GUS выявлялась в проксимальной части незрелой, неразвернутой, но полностью развитой трехлистной пластины и с адаксиальной стороны черешка (Фиг. 4F). Подробное наблюдение развивающейся апикальной ткани показало, что сильная экспрессия сохранялась в развивающемся незрелом листовом примордии, аксиллярных меристемах и апикальных меристемах побегов (Фиг. 4G-I).[149] Additional experiments were performed to further explore the expression profiles of pAt. Erecta fused to the GUS reporter gene in vegetative and floral meristematic tissues. Analysis of GUS expression profiles during soybean seedling development showed that the pAt.Erecta promoter exhibits a temporal and spatial expression profile, preferably in meristematic tissues during the vegetative stage of development. Fig. 3A-3O and 4A-4O and FIG. 5A-5F and 6A-6F include two sets of images to illustrate the GUS staining profile. On FIG. 3A-3O and 5A-5F are black and white images of dyed fabrics, and FIGS. 4A-4O and 6A-6F, respectively, are black and white images corresponding to FIGS. 3A-3O and 5A-5F, respectively, but with color filtering to show the profile and intensity of GUS blue staining. Thus, the GUS staining expression profile can be assessed from these black and white images by comparing the corresponding images in FIG. 3A-3O and 4A-4O or FIG. 5A-5F and 6A-6F. As illustrated in FIG. 3A-3O and 4A-4O, GUS staining was detected in immature soybean unifolia and petioles (FIGS. 4A and 4B) three days after seeding/germination. The expression of pAt.Erecta::GUS was also well detected in areas of trifoliate primordia, shoot apical meristem (SAM) and axillary meristem at this early vegetative stage (Fig. 4C). GUS activity was not detected in fully expanded single and trifoliate leaves ten days after germination or seeding (FIGS. 4D and 4E). However, GUS activity was detected in the proximal part of the immature, unfolded, but fully developed trifoliate plate and on the adaxial side of the petiole (Fig. 4F). Detailed observation of the developing apical tissue showed that strong expression was maintained in the developing immature leaf primordia, axillary meristems, and shoot apical meristems (Fig. 4G-I).
[150] На ранней генеративной стадии активность промотора pAt.Erecta не выявлялась в зрелых листовых пластинах и была снижена в развивающемся листовом примордии. Сигнал GUS не выявлялся на промежуточной вегетативной стадии в верхушках в апикальной меристеме побегов (АМП) или в аксиллярной меристеме (АМ) после того, как в этих тканях начали формироваться соцветия (Фиг. 4J-4L). На всех поздних стадиях в верхушках или в пазухах цветочного примордия нельзя было выявить какую-либо дополнительную меристематическую активность. Однако экспрессия GUS продолжалась с адаксиальной стороны черешков и в проксимальной части незрелой листовой пластины (Фиг. 4M и 4N), но не в полностью развернутых листовых пластинах (Фиг. 4O). Профили экспрессии GUS с промотором pAt.Erecta также анализировали на более поздних стадиях развития R1 (35-40 дней после прорастания). Аналогично с более ранними стадиями развития, в зрелых листьях или стеблях экспрессия не выявлялась. Однако сильная промоторная активность была выявлена в стеблях соцветий (Фиг. 5A и 6A; смотрите стрелку) и цветоножках (Фиг. 5B и 6B; смотрите стрелку). В обеих тканях экспрессия выявлялась в сосудистых и паренхиматозных клетках (Фиг. 5C и 6C). На этой стадии экспрессия также выявлялась в тычиночных нитях (Фиг. 5D и 6D; смотрите стрелки) и в неопыленных семяпочках (Фиг. 5E, 5F, 6E и 6F; смотрите стрелки на 6F).[150] At the early generative stage, pAt.Erecta promoter activity was not detected in mature leaf blades and was reduced in the developing leaf primordia. The GUS signal was not detected at the intermediate vegetative stage in the tips in the shoot apical meristem (SAM) or in the axillary meristem (AM) after inflorescences began to form in these tissues (Fig. 4J-4L). At all later stages no additional meristematic activity could be detected in the apices or axils of the flower primordia. However, GUS expression continued on the adaxial side of the petioles and in the proximal part of the immature leaf blade (Fig. 4M and 4N), but not in the fully unfolded leaf blade (Fig. 4O). GUS expression profiles with the pAt.Erecta promoter were also analyzed at later stages of R1 development (35-40 days after germination). Similar to earlier stages of development, expression was not detected in mature leaves or stems. However, strong promoter activity was detected in inflorescence stems (FIGS. 5A and 6A; see arrow) and pedicels (FIGS. 5B and 6B; see arrow). In both tissues, expression was detected in vascular and parenchymal cells (FIGS. 5C and 6C). At this stage, expression was also detected in filaments (FIGS. 5D and 6D; see arrows) and in unpollinated ovules (FIGS. 5E, 5F, 6E and 6F; see arrows in 6F).
[151] Ранее промотор pAt.Erecta был изучен в Arabidopsis. Интересно, что профили экспрессии pAt.Erecta в Arabidopsis были сравнимы с профилями, наблюдаемыми в сое во время вегетативной стадии, но не во время поздних генеративных стадий. В противоположность этому, профиль экспрессии pAt.Erecta в сое снижен в ранних генеративных тканях, но снова повышается в некоторых более поздних генеративных органах и тканях, включая стебли соцветий и цветоножки. Смотрите, например, Chen, M-K et al., FEBS Letters 588: 3912-17 (2014); Yokoyama, R et al.; Shpak, ED et al., Science 309: 290-293 (2005); и Yokoyama, R et al., Plant J 15(3): 301-310 (1998), полное содержание которых включено в данный документ посредством ссылки. Таким образом, промотор pAt.Erecta обеспечивает новый профиль экспрессии в сое.[151] Previously, the pAt.Erecta promoter has been studied in Arabidopsis . Interestingly, the expression profiles of pAt.Erecta in Arabidopsis were comparable to those observed in soybean during the vegetative stage, but not during the late generative stages. In contrast, the expression profile of pAt.Erecta in soybean is reduced in early generative tissues, but increases again in some later generative organs and tissues, including inflorescence stems and pedicels. See, for example , Chen, MK et al., FEBS Letters 588 : 3912-17 (2014); Yokoyama, R et al.; Shpak, ED et al., Science 309 : 290-293 (2005); and Yokoyama, R et al., Plant J 15 (3): 301-310 (1998), the entire contents of which are incorporated herein by reference. Thus, the pAt.Erecta promoter provides a new expression profile in soy.
Пример 3. Экспрессия гена Flowering Locus T, Gm.FT2a, под управлением pAt. Промотор Erecta меняет время цветения и число бобов на узел в сое.Example 3 Expression of the Flowering Locus T gene, Gm.FT2a under the control of pAt. The Erecta promoter changes flowering time and number of pods per node in soybean.
[152] Трансгенные растения сои получали путем трансформации эксплантатов сои рекомбинантной молекулой ДНК (т. е. трансформационным вектором на основе Т-ДНК), содержащей промотор pAt.Erecta, функционально связанный с геном Gm.FT2a, посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации для создания четырех событий pAt.Erecta::Gm.FT2a, которые оставляли для дополнительного исследования. Эффект сверхэкспрессии FT2a незамедлительно проявлялся в растениях R0, которые характеризовались очень ранним цветением и терминацией со сниженным урожаем семян (например, только около 8 семян/растение). Эти трансгенные растения Gm.FT2a также имели небольшую высоту и очень мало ветвей, если вообще имели. Сегрегирующие R1растения и их потомство впоследствии выращивали в теплице в условиях длинного дня для начального изучения и получения характеристик. При выращивании этих растений в условиях длинного дня выраженные карликовые фенотипы, наблюдаемые для Gm.FT2a-трансгенных растений R0, были улучшены. В этих экспериментах как гомозиготные, так и гемизиготные растения, выращиваемые в теплице в условиях 16-часового светового дня (т. е. 16/8-часовые фотопериоды день/ночь), цвели намного раньше, чем нулевые сегреганты дикого типа. Gm.FT2a-трансгенные растения цвели через около 19-22 дня после посадки или посева. (смотрите, например, Фиг. 9A-9C). В этих условиях роста трансгенные растения сои, экспрессирующие Gm.FT2a, дополнительно имели увеличенное число бобов на узел на главном стебле по сравнению с контролем дикого типа (смотрите, например, Фиг. 10 и 11, дополнительно обсуждаемые ниже).[152] Transgenic soybean plants were obtained by transforming soybean explants with a recombinant DNA molecule ( i.e., a T-DNA-based transformation vector) containing the pAt.Erecta promoter operably linked to the Gm.FT2a gene through Agrobacterium -mediated transformation to create four pAt.Erecta::Gm.FT2a events, which were left for further study. The effect of FT2a overexpression was immediately apparent in R 0 plants, which were characterized by very early flowering and termination with reduced seed yield ( eg only about 8 seeds/plant). These Gm.FT2a transgenic plants were also short in height and had very few, if any, branches. Segregating R 1 plants and their progeny were subsequently grown in a greenhouse under long day conditions for initial study and characterization. By growing these plants under long day conditions, the pronounced dwarf phenotypes observed for Gm.FT2a -R 0 transgenic plants were improved. In these experiments, both homozygous and hemizygous plants grown in a greenhouse under 16-hour daylight hours ( i.e., 16/8-hour day/night photoperiods) flowered much earlier than wild-type null segregants. The Gm.FT2a transgenic plants flowered about 19-22 days after planting or seeding. (see, for example , Figs. 9A-9C). Under these growth conditions, transgenic soybean plants expressing Gm.FT2a additionally had an increased number of beans per node on the main stem compared to the wild-type control (see, for example , Figures 10 and 11, discussed further below).
[153] Растения, содержащие одно из трансгенных событий pAt.Erecta::Gm.FT2a (событие 1), выращиваемые в регулируемых внешних условиях, дополнительно анализировали с помощью сканирующей электронной микроскопии (СЭМ). Анализ апикальной меристемы побегов (АМП) этих трансгенных растений (собранных через 7 дней после посадки) выявил ранний переход АМП в меристему соцветий (МС) и флоральную меристему (ФМ) (Фиг. 7). В противоположность этому, АМП растений сои дикого типа не дифференцировалась в МС на этой стадии роста. Аналогично, визуализация аксиллярной меристемы трансформантов FT2a (собранных через 9 дней после посадки) показала развитие дормантных меристем соцветий (дМС) (или латеральных примордиальных кистей) в МС и ФМ (Фиг. 8), приводя к более рано развивающимся цветочным веткам (кистям) в узлах этих трансгенных растений. Изучение дополнительных фенотипических характеристик выявило раннее цветение на стадии V1 в экспрессирующих Gm.FT2a растениях сои, которое происходило задолго до перехода к цветению в нулевых сегрегирующих растениях (Фиг. 9A-9C). Эти данные в комбинации с вышеописанным профилем экспрессии pAt.Erecta::GUS показывают, что раннее цветение и, в частности, формирование соцветий и флоральной меристемы, было индуцировано эктопической экспрессией Gm.FT2a во время вегетативной стадии в листовом примордии и апикальной меристеме побегов и аксиллярной меристеме всходов. Считается, что образование большего количества меристем соцветий и флоральных меристем дополнительно вызывает более раннее появление и рост вторичных и третичных кистей, приводя к большему числу продуктивных цветков и бобов, формируемых в узле.[153] Plants containing one of the pAt.Erecta::Gm.FT2a transgenic events (event 1) grown under controlled environmental conditions were further analyzed by scanning electron microscopy (SEM). Analysis of the shoot apical meristem (SAM) of these transgenic plants (harvested 7 days after planting) revealed an early transition of AMP into inflorescence meristem (MS) and floral meristem (FM) (Fig. 7). In contrast, wild-type soybean AMP did not differentiate into MS at this growth stage. Similarly, visualization of the axillary meristem of FT2a transformants (harvested 9 days after planting) showed the development of dormant inflorescence meristems (dMS) (or lateral primordial racemes) in MC and FM (Fig. 8), leading to earlier developing flower branches (races) in nodes of these transgenic plants. Examination of additional phenotypic characteristics revealed early flowering at stage V1 in Gm.FT2a expressing soybean plants, which occurred long before the transition to flowering in null segregating plants (FIGS. 9A-9C). These data, combined with the pAt.Erecta ::GUS expression profile described above, indicate that early flowering, and in particular inflorescence and floral meristem formation, was induced by ectopic expression of Gm.FT2a during the vegetative stage in leaf primordia and shoot apical and axillary meristems. seedling meristem. It is believed that the formation of more inflorescence meristems and floral meristems additionally causes earlier appearance and growth of secondary and tertiary racemes, resulting in more productive flowers and pods formed at the node.
[154] Gm.FT2a-трансгенные растения сои не только демонстрировали более раннее цветение и давали больше бобов на узел на главном стебле (по сравнению с сегрегирующими нулевыми растениями), но также оказалось, что эффекты эктопической экспрессии Gm.FT2a в трансгенных растениях являются дозозависимыми. Хотя как гомозиготные, так и гемизиготные растения имели меньшую высоту и меньшее ветвление, растения, гомозиготные в отношении трансгена Gm.FT2a, испытали более сильное влияние, чем гемизиготные растения, возможно потому, что гомозиготные растения содержат две копии трансгена (т. е. большую дозу) в отличие от только одной копии (т. е. меньшей дозы) в гемизиготных растениях. В условиях роста длинного дня гомозиготные растения погибали раньше и имели меньшую общую высоту с меньшим количеством узлов и веток на главном стебле по сравнению с растениями, гемизиготными в отношении трансгена (Фиг. 10). В отличие от гомозиготных растений, которые демонстрировали большое число субоптимальных карликовых фенотипов, включая очень малое (в случае наличия) число веток на главном стебле, гемизиготные растения имели промежуточный фенотип в терминах вегетативного роста, высоты растения и числа узлов, присутствующих на главном стебле, по сравнению с растениями дикого типа и гомозиготными растениями. В условиях 16-часового длинного дня гемизиготные растения имели более нормальную высоту растений с некоторой степенью ветвления и большую длительность цветения по сравнению с гомозиготными растениями (Фиг. 10). Гемизиготные растения также цвели в течение 40-64 дней после инициации R1, тогда как гомозиготные растения цвели только в течение 16-24 дней вследствие ранней терминации.[154] Gm.FT2a -transgenic soybean plants not only showed earlier flowering and produced more beans per node on the main stem (compared to segregating null plants), but the effects of Gm.FT2a ectopic expression in transgenic plants also appeared to be dose-dependent. . Although both homozygous and hemizygous plants had shorter height and less branching, plants homozygous for the Gm.FT2a transgene were more affected than hemizygous plants, possibly because homozygous plants contain two copies of the transgene ( i.e., more dose) as opposed to only one copy ( i.e., lower dose) in hemizygous plants. Under long day growth conditions, homozygous plants died earlier and had a lower overall height with fewer nodes and branches on the main stem compared to plants hemizygous for the transgene (Fig. 10). Unlike homozygous plants, which exhibited a large number of suboptimal dwarf phenotypes, including very few (if any) number of branches on the main stem, hemizygous plants had an intermediate phenotype in terms of vegetative growth, plant height, and the number of nodes present on the main stem, compared with wild-type and homozygous plants. Under 16-hour long day conditions, hemizygous plants had more normal plant height with some degree of branching and longer flowering time compared to homozygous plants (FIG. 10). Hemizygous plants also flowered within 40-64 days of R1 initiation, while homozygous plants only flowered for 16-24 days due to early termination.
[155] Дополнительные эксперименты проводили с растениями, трансформированными конструкцией Gm.FT2a (3 события) в условиях длинного дня (16 часов) и контролируемых внешних условиях, чтобы дополнительно изучить характеристики доза-ответ для гемизиготных и гомозиготных растений. Разница в числе узлов и бобов на главном стебле и ветках, а также среднее число бобов на узел и средняя высота на растение приведены в таблице 1 для трех гомозиготных событий (гомо-событие 2, гомо-событие 3, гомо-событие 4) и трех гемизиготных событий (геми-событие 2, геми-событие 3, геми-событие 4). Эти события отличаются от вышеописанного события 1.[155] Additional experiments were performed with plants transformed with the Gm.FT2a construct (3 events) under long day conditions (16 hours) and controlled environmental conditions to further explore dose-response characteristics for hemizygous and homozygous plants. The difference in the number of nodes and pods on the main stem and branches, as well as the average number of pods per node and average height per plant are shown in Table 1 for three homozygous events (
Таблица 1. Данные по уровню событий для гомозиготных и гемизиготных Gm.FT2a-трансгенных растений.Table 1. Event rate data for homozygous and hemizygous Gm.FT2a transgenic plants.
на растениеAvg. # VT nodes
per plant
на растениеAvg. # HS beans
per plant
на растениеAvg. # of beans W
per plant
[156] Как показано в таблице 2, гемизиготные растения имели соответственно большее число узлов на главном стебле (ГС) и ветках (ВТ) и большую высоту растений, чем гомозиготные растения. Таим образом, гемизиготные растения в целом подверглись меньшему влиянию, чем гомозиготные растения, и больше напоминают растения дикого типа. Гемизиготные растения также имели большее число бобов на узел и большее число бобов на главном стебле и ветках по сравнению с гомозиготными растениями. Следовательно, гемизиготные растения в целом имели более близкую к нормальному растению архитектуру с большим числом бобов на узел (и на растение), предположительно, вследствие меньшей дозы трансгена Gm.FT2a. Относительный уровень дозы Gm.FT2a на основании зиготности трансгена был дополнительно подтвержден дополнительными экспериментами, показывающими, что уровни транскрипта Gm.FT2a были выше в тканях из гомозиготных растений, чем в тканях из гемизиготных растений (данные не показаны).[156] As shown in Table 2, hemizygous plants had a correspondingly higher number of nodes on the main stem (HS) and branches (BT) and greater plant height than homozygous plants. Thus, hemizygous plants are generally less affected than homozygous plants and more closely resemble wild-type plants. Hemizygous plants also had more pods per node and more pods per main stem and branches compared to homozygous plants. Therefore, hemizygous plants in general had a more normal plant architecture with a higher number of pods per node (and per plant), presumably due to a lower dose of the Gm.FT2a transgene. The relative dose level of Gm.FT2a based on transgene zygosity was further confirmed by additional experiments showing that Gm.FT2a transcript levels were higher in tissues from homozygous plants than in tissues from hemizygous plants (data not shown).
[157] Ранняя индукция цветения в этих Gm.FT2a-трансгенных растениях была связана с большим числом бобов (и семян) на узел на главном стебле как в гемизиготных, так и в гомозиготных растениях. Гомозиготные и гемизиготные растения, содержащие трансген Gm.FT2a, имели большее число бобов/семян на узел на главном стебле растения по сравнению с сегрегантами дикого типа (Фиг. 11). Также было обнаружено, что распределение бобов на главном стебле является разным для Gm.FT2a-трансгенных растений и нулевых растений дикого типа. Было обнаружено, что как гомозиготные, так и гемизиготные растения, выращиваемые в условиях длинного дня, имеют больше бобов по меньшей мере в нижних узлах главного стебля и больше бобов на узел в среднем по сравнению с нулевыми растениями дикого типа (данные не показаны). Растения, гемизиготные в отношении трансгена Gm.FT2a, содержали наибольшее число бобов на узел по всей длине главного стебля. Однако эти эффекты зависели от конкретных условий роста, включая длину дня и т. д. В целом, эксперименты, проводимые с соей в условиях более длинного дня демонстрировали тенденцию к большей разнице между трансгенными и нулевыми растениями.[157] Early flowering induction in these Gm.FT2a transgenic plants was associated with a higher number of pods (and seeds) per main stem node in both hemizygous and homozygous plants. Homozygous and hemizygous plants containing the Gm.FT2a transgene had a higher number of pods/seeds per node on the main stem of the plant compared to wild-type segregants (Fig. 11). It was also found that the distribution of beans on the main stem is different for Gm.FT2a transgenic plants and wild-type null plants. Both homozygous and hemizygous plants grown under long day conditions were found to have more pods at least at the lower nodes of the main stem and more pods per node on average compared to wild-type null plants (data not shown). Plants hemizygous for the Gm.FT2a transgene contained the highest number of pods per node along the entire length of the main stem. However, these effects depended on specific growth conditions, including day length, etc. In general, experiments with soybean under longer day conditions showed a trend towards greater difference between transgenic and null plants.
[158] Дозозависимые эффекты трансгенной экспрессии Gm.FT2a также наблюдали в полевых экспериментах. В полевых экспериментах растения сои, гемизиготные в отношении двух событий Gm.FT2a (события 1 и 2, выше), демонстрировали в среднем около 2,68 бобов на узел на главном стебле, а растения, гомозиготные в отношении этих событий, имели в среднем около 1,40 бобов на узел, тогда как нулевые сегрегирующие растения имели около 1,63 бобов на узел. Однако в ранних полевых испытаниях было обнаружено, что растения, гемизиготные в отношении трансгенного Gm.FT2a (событие 2), имели в среднем около 3,21 бобов на узел по сравнению с около 3,05 бобов на узел в среднем в гомозиготных растениях и около 2,19 бобов на узел в нулевых сегрегирующих растениях. В другом мелкоделяночном эксперименте, проводимом в другой полевой локации, было обнаружено, что растения, гемизиготные в отношении трансгена Gm.FT2a (событие 1) имеют в среднем около 2,17 бобов на узел по сравнению с около 2,05 бобов на узел в среднем в растениях, гомозиготных в отношении трансгена Gm.FT2a (событие 2), и около 1,30 бобов на узел в нулевых сегрегирующих растениях. Таким образом, число бобов на узел в растениях, содержащих трансген Gm.FT2a, может зависеть от множества факторов, включая дозу трансгена FT, внешние и полевые условия и, возможно, разницу в сельскохозяйственной практике. Однако, подобно Gm.FT2a-трансгенным растениям, выращиваемым в теплице, гомозиготные и гемизиготные Gm.FT2a-трансгенные растения, выращиваемые в полевых условиях, часто имели меньше узлов на главном стебле, меньшую общую высоту и/или сниженное ветвление в трансгенных растениях. В действительности, растения дикого типа, как правило, характеризуются большим ветвлением и большим общим числом узлов на растение, чем гемизиготные и гомозиготные Gm.FT2a-растения.[158] Dose-dependent effects of transgene expression of Gm.FT2a were also observed in field experiments. In field experiments, soybean plants hemizygous for the two Gm.FT2a events (
[159] Дополнительные физиологические данные получали от гомозиготных Gm.FT2a-трансгенных растений и контрольных растений дикого типа (ДТ), выращиваемых в теплице в условиях 14-часового длинного дня (смотрите таблицу 2). Эти данные представляют усредненные измерения, сделанные для шести Gm.FT2a-трансгенных растений для каждого события или для восьми растений дикого типа.[159] Additional physiological data were obtained from homozygous Gm.FT2a transgenic plants and control wild-type (WT) plants grown in a greenhouse under 14-hour long day conditions (see Table 2). These data represent average measurements made of six Gm.FT2a transgenic plants for each event or eight wild type plants.
[160] Для получения фенотипических характеристик этих растений были собраны следующие матрицы: Дни до цветения на R1 (DOFR1); дни до R7 (DOR7); длительность генеративной стадии в дни от R1 до R7 (PDR1R7); число веток на растение (BRPP); общее число фертильных узлов на ветках (FNBR); общее число фертильных узлов на растение (FNLP); общее число фертильных узлов на главном стебле (FNST); число узлов на ветках (NDBR); число узлов на главном стебле (NDMS); число узлов/растение (NDPL); процент фертильных узлов на ветках (PFNB); процент общего числа фертильных узлов (PFNN); процент фертильных узлов на главном стебле (PFNS); число бобов на растение (PDPP); число бобов на главном стебле (PODMS); число бобов на ветках (PODBR); среднее число бобов/узел; число семян на растение на R8 (SDPPR8); и масса 1000 семян (SW1000). Каждое из этих измерений проводили во время сбора, если не указано иное время.[160] To obtain the phenotypic characteristics of these plants, the following matrices were collected: Days to Flowering on R1 (DOFR1); days to R7 (DOR7); duration of the generative stage on days R1 to R7 (PDR1R7); number of branches per plant (BRPP); total number of fertile nodes on branches (FNBR); total number of fertile nodes per plant (FNLP); total number of fertile nodes on the main stem (FNST); number of nodes on branches (NDBR); number of nodes on the main stem (NDMS); number of nodes/plant (NDPL); percentage of fertile nodes on branches (PFNB); percentage of total number of fertile nodes (PFNN); percentage of fertile nodes on the main stem (PFNS); number of pods per plant (PDPP); number of beans per main stem (PODMS); number of beans per branch (PODBR); average number of beans/node; number of seeds per plant per R8 (SDPPR8); and weight of 1000 seeds (SW1000). Each of these measurements was taken at the time of collection, unless otherwise indicated.
Таблица 2. Фенотипические данные уровня конструкции для трансгенных гомозиготных в отношении Gm.FT2a растений и растений ДТ.Table 2. Construct level phenotypic data for transgenic Gm.FT2a homozygous plants and DT plants.
[161] В соответствии с вышеописанными наблюдениями, гомозиготные Gm.FT2a-трансгенные растения испытывали более раннюю индукцию цветения, чем растения ДТ (DOFR1 около 21 дня после посадки вместо около 33-34 дней для растений дикого типа). Эти измерения дополнительно показали, что число веток (и другие измерения, связанные с ветвлением, такие как число узлов или бобов на ветках) было сильно снижено. Так как трансгенные растения имели меньшую высоту и очень слабое ветвление, общее число узлов или бобов на растение также было сильно снижено. Однако число бобов на узел на главном стебле было повышено в трансгенных растениях (например, в среднем около 3,8 бобов/узел) по сравнению с нулевыми растениями дикого типа (например, около 2,4 бобов/узел).[161] Consistent with the above observations, homozygous Gm.FT2a transgenic plants experienced earlier flowering induction than DT plants (DOFR1 about 21 days after planting instead of about 33-34 days for wild-type plants). These measurements further showed that the number of branches (and other branching-related measurements such as the number of nodes or beans on branches) was greatly reduced. Since the transgenic plants were shorter and had very little branching, the total number of nodes or pods per plant was also greatly reduced. However, the number of pods per node on the main stem was increased in transgenic plants ( eg averaging about 3.8 pods/node) compared to wild-type null plants ( eg approx 2.4 pods/node).
[162] Не ограничиваясь какой-либо теорией, считается, что причиной большего числа бобов на узел, наблюдаемого для трансгенных растений сои, экспрессирующих FT2a в меристеме во время вегетативных стадий развития, по меньшей мере частично может быть синхронизация раннего цветения с ранним появлением вторичных и/или третичных кистей и/или лучшее использование ресурсов с получением большего количества дающих бобы цветков на узел. Ранняя экспрессия FT в меристеме (смотрите, например, Фиг. 3 и 4) может вызывать раннее появление дормантных меристем соцветий с получением большего числа кистей на узел растения так, что большее число кистей дает зрелые цветки и полностью развитые бобы в каждом узле. Однако последующая экспрессия FT в генеративной ткани (смотрите, например, Фиг. 5 или 6) может прекращать флоральное развитие развивающихся позже цветков в каждом узле, приводя к более эффективному размещению ресурсов в более рано развивающихся кистях, цветках и бобах. В растениях сои дикого типа намного меньший процент вторичных и третичных кистей давали цветки и полностью развитые бобы по сравнению с первичными кистями, а более поздно развивающиеся цветки первичной кисти, как правило, не дают зрелых цветков и/или полноразмерных бобов перед опаданием. Таким образом, было сделано предположение, что большее число бобов на узел может формироваться в растениях, экспрессирующих белки FT в вегетативной меристеме за счет синхронизации раннего развития цветков с ранним появлением боковых кистей в одном или более узлах растения. С по меньшей мере промотором pAt.Erecta, управляющим экспрессией FT, позже развивающиеся цветки (которые в ином случае могли бы не дать полностью развитые или полноразмерные бобы) также могут терминироваться экспрессией FT на более поздней генеративной стадии для направления ресурсов в более рано развивающиеся цветки.[162] Without wishing to be bound by theory, it is believed that the higher pods per node observed for transgenic soybean plants expressing FT2a in the meristem during the vegetative stages of development may be at least in part due to the synchronization of early flowering with early emergence of secondary and /or tertiary racemes and/or better use of resources with more bean-bearing flowers per node. Early expression of FT in the meristem (see e.g. Figs. 3 and 4) can cause early emergence of dormant inflorescence meristems producing more racemes per plant node so that more racemes produce mature flowers and fully developed pods at each node. However, subsequent expression of FT in the generative tissue (see, for example , Fig. 5 or 6) can abort the floral development of later developing flowers at each node, leading to more efficient resource allocation in earlier developing racemes, flowers, and pods. In wild-type soybean plants, a much lower percentage of secondary and tertiary racemes produced flowers and fully developed pods compared to primary racemes, and later developing primary raceme flowers generally do not produce mature flowers and/or full-sized pods before dropping. Thus, it has been suggested that a higher number of pods per node may be formed in plants expressing FT proteins in the vegetative meristem by synchronizing early flower development with the early appearance of lateral racemes at one or more plant nodes. With at least the pAt . Erecta promoter driving FT expression, later developing flowers (which might otherwise not produce fully developed or full-sized pods) can also be terminated by FT expression at a later generative stage to direct resources to earlier developing flowers.
Пример 4. Экспрессия гена Flowering Locus T, Gm.FT2a, под управлением альтернативных промоторов вегетативной стадии в сое.Example 4 Expression of the Flowering Locus T Gene, Gm.FT2a , Driven by Alternative Vegetative Stage Promoters in Soybean.
[163] На основании фенотипов, наблюдаемых в предыдущем примере 3, для управления экспрессией трансгена Gm.FT2a были предложены два промотора, которые считаются предпочтительными в отношении листьев промоторами вегетативной стадии: pAt.BLS (SEQ ID NO: 46) и pAt.ALMT6 (SEQ ID NO: 47). В контексте данного документа «предпочтительный в отношении листьев» относится к промотору, который предпочтительно инициирует транскрипцию связанного с ним гена в тканях листьев по сравнению с другими тканями растения. Так как считается, что FT функционирует как мобильный флориген, ранняя экспрессия FT во время вегетативных стадий в периферических тканях, таких как листья, с предпочтительным в отношении листьев или специфическим в отношении листьев промотором может приводить к фенотипам, сходным с меристемо-предпочтительной экспрессией pAt.Erecta::Gm.FT2a. Дополнительно было сделано предположение, что экспрессия FT с вегетативным листовым промотором также может ослаблять сигнал индукции цветения и, следовательно, смягчить фенотипы ранней терминации, наблюдаемые при гомозиготной экспрессии FT в меристеме, и увеличить высоту и ветвление растения.[163] Based on the phenotypes observed in the previous example 3, two promoters were proposed to drive the expression of the Gm.FT2a transgene, which are considered leaf-preferred vegetative stage promoters: pAt.BLS (SEQ ID NO: 46) and pAt.ALMT6 ( SEQ ID NO: 47). As used herein, "leaf-preferred" refers to a promoter that preferentially initiates transcription of its associated gene in leaf tissues over other plant tissues. Since FT is thought to function as a mobile florigen, early expression of FT during the vegetative stages in peripheral tissues such as leaves with a leaf-preferred or leaf-specific promoter can result in phenotypes similar to meristem-preferred pAt expression. Erecta::Gm.FT2a . Additionally, it has been suggested that expression of FT with a vegetative leaf promoter may also attenuate the flowering induction signal and therefore mitigate the early termination phenotypes seen with homozygous expression of FT in the meristem and increase plant height and branching.
[164] В этих экспериментах конструировали трансформационные векторы для pAt.ALMT6::Gm.FT2a и pAt.BLS::Gm.FT2a и использовали для трансформации линии сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Было показано, что экспрессия с промотором pAt.BLS начинается в листовом примордии номер 5 (p5) и экспрессируется в первичных жилках листьев только до перехода к цветению, а промотор pAt.ALMT6 также является вегетативным листовым промотором с экспрессией на более поздних стадиях развития по сравнению с pAt.BLS. Смотрите, например, Efroni et al., ʺA Protracted and Dynamic Maturation Schedule Underlies Arabidopsis Leaf Development,ʺ The Plant Cell 20(9): 2293-2306 (2008); и Shani et al., ʺStage-Specific Regulation of Solanum lycopersicum Leaf Maturation by Class 1 KNOTTED1-LIKE HOMEOBOX Proteins,ʺ The Plant Cell 21(10): 3078-3092 (2009). Получали трансгенные растения сои для каждой из этих векторных конструкций и изучали в отношении фенотипов в камерах для выращивания в 14-часовых фотопериодических условиях в сравнении с растениями дикого типа. Для каждой из промоторных конструкций pAt.BLS исследовали шесть трансгенных событий (5 растений на событие), а для промотора pAt.ALMT6 исследовали семь трансгенных событий (5 растений на событие). Для каждой из этих конструкций контрольные данные получали от пяти растений дикого типа.[164] In these experiments, transformation vectors for pAt.ALMT6 :: Gm.FT2a and pAt.BLS :: Gm.FT2a were constructed and used to transform a soybean line via Agrobacterium -mediated transformation. It was shown that expression with the pAt.BLS promoter starts in leaf primordia number 5 (p5) and is expressed in primary leaf veins only before the transition to flowering, while the pAt.ALMT6 promoter is also a vegetative leaf promoter with expression at later stages of development compared to with pAt.BLS . See, for example , Efroni et al., "A Protracted and Dynamic Maturation Schedule Underlies Arabidopsis Leaf Development," The Plant Cell 20 (9): 2293-2306 (2008); and Shani et al., "Stage-Specific Regulation of Solanum lycopersicum Leaf Maturation by
[165] Для получения фенотипических характеристик этих трансгенных растений были собраны следующие матрицы (таблицы 3 и 4). Отдельные измерения аналогичны определенным выше, а получение фенотипических характеристик проводили для растений, гомозиготных в отношении трансгена.[165] To obtain the phenotypic characteristics of these transgenic plants, the following matrices were assembled (Tables 3 and 4). Individual measurements are similar to those defined above, and phenotypic characterization was performed on plants homozygous for the transgene.
Таблица 3. Фенотипические данные уровня конструкции для растений pAt.ALMT6::Gm.FT2a и растений ДТ.Table 3. Construct level phenotypic data for pAt.ALMT6::Gm.FT2a plants and DT plants.
Таблица 4. Фенотипические данные уровня конструкции для растений pAt.BLS::Gm.FT2a и растений ДТ.Table 4. Construct level phenotypic data for pAt.BLS::Gm.FT2a plants and DT plants.
[166] Трансгенные растения, экспрессирующие Gm.FT2a под управлением альтернативных промоторов pAt.ALMT6 и pAt.BLS были фенотипически более сходными с растениями дикого типа (ДТ), чем трансгенные растения pAT.Erecta::Gm.FT2a. Растения, трансформированные конструкциями pAt.ALMT6::Gm.FT2a и pAt.BLS::Gm.FT2a, имели время цветения и признаки вегетативного роста, сходные с контрольными растениями дикого типа, возможно, с немного увеличенным числом узлов на ветках по сравнению с растениями дикого типа (таблицы 3 и 4). Эти данные можно интерпретировать, как показывающие, что время и локация экспрессии трансгенного FT важны для получения связанных с генеративностью и урожайностью признаков или фенотипов, которые отличаются от растений дикого типа. Просто экспрессии трансгена FT во время более ранних вегетативных стадий развития (например, в тканях листьев) может быть недостаточно для изменения связанных с генеративностью и урожайностью фенотипов растения (например, числа бобов на узел). Таким образом, в соответствии с вариантами реализации данного изобретения, промотор, функционально связанный с флоригенным трансгеном FT, может предпочтительно быть меристемо-специфическим или меристемо-предпочтительным промотором помимо управления экспрессией во время вегетативных стадий развития растения. Однако, когда профили экспрессии для двух вышеуказанных предпочтительных в отношении листьев промоторов исследовали в растениях сои, в развивающихся листьях не наблюдали окрашивание GUS с промотором pAt.BLS, а промотор pAt.ALMT6 не обеспечивал выявляемую экспрессию GUS в листьях до поздних вегетативных стадий с намного более высокой экспрессией во время ранних генеративных стадий. Таким образом, остается возможность того, что экспрессии трансгенов FT в периферических тканях (листьях) во время ранних вегетативных стадий с применением разных тканеспецифических промоторов может быть достаточно, в некоторых случаях, для индукции раннего цветения и/или других связанных с генеративностью и урожайностью признаков или фенотипов, которые также могут зависеть от конкретного исследуемого вида растения.[166] Transgenic plants expressing Gm.FT2a under the control of alternative promoters pAt.ALMT6 and pAt.BLS were phenotypically more similar to wild-type (WT) plants than transgenic pAT.Erecta :: Gm.FT2a plants . Plants transformed with constructs pAt.ALMT6::Gm.FT2a and pAt.BLS::Gm.FT2a had flowering times and vegetative growth characteristics similar to wild-type controls, possibly with a slightly increased number of nodes per branch compared to plants wild type (tables 3 and 4). These data can be interpreted as showing that the timing and location of transgenic FT expression is important in obtaining generative and yield-related traits or phenotypes that differ from wild-type plants. Mere expression of the FT transgene during earlier vegetative stages of development ( eg in leaf tissues) may not be sufficient to change generative and yield-related plant phenotypes ( eg number of pods per node). Thus, according to embodiments of the present invention, a promoter operably linked to a florigenic FT transgene may preferably be a meristem-specific or meristem-preferred promoter in addition to directing expression during the vegetative stages of plant development. However, when expression profiles for the above two leaf-preferred promoters were examined in soybean plants, GUS staining with the pAt.BLS promoter was not observed in developing leaves, and the pAt.ALMT6 promoter did not provide detectable GUS expression in leaves until the late vegetative stages with much more high expression during the early generative stages. Thus, the possibility remains that expression of FT transgenes in peripheral tissues (leaves) during early vegetative stages using different tissue-specific promoters may be sufficient, in some cases, to induce early flowering and/or other generative and yield-related traits or phenotypes, which may also depend on the particular plant species being studied.
Пример 5. Идентификация белковых доменов гомологов FT с помощью анализа Pfam.Example 5 Identification of protein domains of FT homologues using Pfam analysis.
[167] Ортологи Gm.FT2a идентифицировали с помощью анализа последовательностей и обзора литературы, а несколько примеров этих гомологов FT перечислены в таблице 5 наряду с Gm.FT2a. Они включают другие гены FT сои, а также несколько геном FT из других видов растений. Аминокислотные последовательности этих белков FT анализировали, чтобы идентифицировать любые белковые домены Pfam, используя программное обеспечение HMMER и базы данных Pfam (версия 27.0). Было обнаружено, что эти белковые последовательности FT (SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10 и 12) имеют одинаковый домен Pfam, определенный как белок фосфатидилэтаноламин-связывающего домена (PEBP), имеющий название Pfam-домена «PBP_N» и номер доступа Pfam PF01161. Расположение доменов PBP_N в каждой из этих последовательностей белка FT также приведено в таблице 5. Расположение домена PBP_N в других белках FT можно определить посредством выравнивания последовательностей. Следовательно, подразумевается, что любую последовательность ДНК, кодирующую по меньшей мере белок FT, содержащий домен PBP_N, можно использовать в рекомбинантной молекуле ДНК согласно данному изобретению, при условии, что соответствующий белок FT имеет флоригенную активность при эктопической экспрессии в меристеме растения.[167] Gm.FT2a orthologs were identified by sequence analysis and literature review, and several examples of these FT homologues are listed in Table 5 along with Gm.FT2a . These include other soybean FT genes as well as several FT genomes from other plant species. The amino acid sequences of these FT proteins were analyzed to identify any Pfam protein domains using the HMMER software and the Pfam database (version 27.0). These FT protein sequences (SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8, 10 and 12) were found to have the same Pfam domain defined as a phosphatidylethanolamine binding domain (PEBP) protein having the Pfam domain name "PBP_N" and Pfam access number PF01161. The location of the PBP_N domains in each of these FT protein sequences is also shown in Table 5. The location of the PBP_N domain in other FT proteins can be determined by sequence alignment. Therefore, it is contemplated that any DNA sequence encoding at least a FT protein containing a PBP_N domain can be used in the recombinant DNA molecule of the present invention, provided that the corresponding FT protein has florigenic activity when ectopically expressed in the plant meristem.
Таблица 5. Расположение домена PBP_N (Pfam) в последовательностях белков FT.Table 5. Location of the PBP_N (Pfam) domain in FT protein sequences.
SEQ ID NO.PROTEIN
SEQID NO.
Пример 6. Экспрессия гомологов FT под управлением промотора pAt.Erecta в сое.Example 6 Promoter driven expression of FT homologuespAt.Erecta in soy.
[168] Конструировали дополнительные трансформационные векторы, содержащие другие гомологи FT (таблица 6) под управлением промотора pAt.Erecta, и использовали для трансформации сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, изучали в отношении их фенотипов в теплице с 14-14,5-часовым естественным фотопериодом светового дня. Для каждой конструкции исследовали шесть событий (6 растений на событие). Также исследовали шесть растений и усредняли для контрольных растений дикого типа (ДТ). Разные группы экспериментов (A-E) проводили, как показано в таблице 6, с отдельными контролями дикого типа.[168] Additional transformation vectors were constructed containing other FT homologues (Table 6) under the control of the pAt . Erecta promoter and used to transform soybean via Agrobacterium -mediated transformation. The transgenic plants generated by these events were studied for their phenotypes in a greenhouse with 14-14.5 hour natural photoperiods. Six events were examined for each construct (6 plants per event). Six plants were also examined and averaged over wild-type control (WT) plants. Different sets of experiments (AE) were performed as shown in Table 6 with separate wild-type controls.
Таблица 6. Перечень конструкций для некоторых Gm.FT2a и их гомологов с их белковыми последовательностями.Table 6 List of designs for someGm.FT2a and their homologues with their protein sequences.
[169] Следующие матрицы были собраны для получения фенотипических характеристик растений, трансформированных каждой из конструкций, перечисленных в таблице 6, для экспрессии гомологов FT с промотором pAt.Erecta в дополнение к данным, полученным для конструкции Gm.FT2a, как описано выше. Отдельные измерения аналогичны определенным выше, а получение фенотипических трансформантов характеристик проводили для растений, гомозиготных в отношении трансгена.[169] The following matrices were assembled to obtain the phenotypic characteristics of plants transformed with each of the constructs listed in Table 6 to express FT homologues with the pAt.Erecta promoter in addition to the data generated for the Gm.FT2a construct as described above. Separate measurements are similar to those defined above, and the production of phenotypic character transformants was performed for plants homozygous for the transgene.
[170] Фенотипические данные были получены для растений, экспрессирующих трансгены Zm.ZCN8 и Nt.FT-подобный под управлением промотора pAt.Erecta (смотрите таблицы 7 и 8). Характерные значения для каждого события в таблицах 7 и 8 усреднены по всем исследуемым растениям, содержащим событие. Также приведена колонка с усреднением значений события для каждого признака.[170] Phenotypic data were obtained for plants expressing the Zm.ZCN8 and Nt.FT-like transgenes under the control of the pAt.Erecta promoter (see tables 7 and 8). The characteristic values for each event in tables 7 and 8 are averaged over all the studied plants containing the event. There is also a column with averaging event values for each feature.
Таблица 7. Фенотипические данные уровня конструкции и события для растений Zm.ZCN8 и растений ДТ.Table 7. Phenotypic construct level data and events for Zm.ZCN8 plants and DT plants.
(граммы)SW1000
(grams)
Таблица 8. Фенотипические данные уровня конструкции и события для растений Nt.FT-подобный и растений ДТ. Table 8 Phenotypic construct level data and events for plantsNt.FT-like and plants DT.
[171] Трансгенные растения сои, экспрессирующие белки Zm.ZCN8 и Nt.FT-подобный, цвели раньше, чем контрольные растения дикого типа и имели увеличенное число бобов на узел (аналогично растениям, экспрессирующим трансген Gm.FT2a). В действительности, растения сои, экспрессирующие Zm.ZCN8 и Nt.FT-подобный, имели несколько фенотипов, сходных с Gm.FT2a-трансгенными растениями, включая меньшее число дней до цветения (DOFR1), меньшее число веток (BRPP), меньше узлов на растение (NDPL), меньше узлов на ветках (NDBR), меньшее число бобов на растение (PDPP) и меньше бобов на ветках (PODBR), наряду с увеличением числа бобов на узел и снижением числа семян на растение (таблицы 7 и 8) по сравнению с контролями дикого типа. Однако несколько негативных фенотипов, наблюдаемых в гомозиготных в отношении Gm.FT2a растениях, были менее выражены в экспрессирующих Zm.ZCN8 и Nt.FT-подобный трансгенных растениях. В целом, растения, экспрессирующие трансген Zm.ZCN8, имели меньшую высоту и меньшее ветвление, но больше бобов на узел на главном стебле. Аналогично, растения, экспрессирующие трансген Nt.FT-подобный, имели меньшую высоту, меньшее ветвление, увеличенное число бобов на узел на главном стебле по сравнению с контрольными растениями дикого типа.[171] Transgenic soybean plants expressing the Zm.ZCN8 and Nt.FT-like proteins bloomed earlier than wild-type control plants and had an increased number of beans per node (similar to plants expressing the Gm.FT2a transgene). In fact, soybean plants expressing Zm.ZCN8 and Nt.FT-like had several phenotypes similar to Gm.FT2a- transgenic plants, including fewer days to flowering (DOFR1), fewer branches (BRPP), fewer nodes per plant (NDPL), fewer nodes per branch (NDBR), fewer pods per plant (PDPP) and fewer pods per branch (PODBR), along with an increase in the number of pods per node and a decrease in the number of seeds per plant (Tables 7 and 8) compared to wild-type controls. However, several negative phenotypes observed in Gm.FT2a homozygous plants were less pronounced in Zm.ZCN8 and Nt.FT-like transgenic plants expressing. In general, plants expressing the Zm.ZCN8 transgene had shorter height and less branching, but more pods per node on the main stem. Similarly, plants expressing the Nt.FT-like transgene had lower height, less branching, increased number of pods per node on the main stem compared to wild-type control plants.
[172] Два трансгенных события Zm.ZCN8 и четыре события Nt.FT-подобный из вышеперечисленных также исследовали в полевых испытаниях в двух разных локациях. Фенотипические данные были получены для растений, экспрессирующих трансгены Zm.ZCN8 и Nt.FT-подобный под управлением промотора pAt.Erecta (таблицы 9 и 10). В случае полевых измерений признаки были аналогичными с перечисленными выше для таблиц с данными по теплицам, за исключением того, что DOR8 и PDR1R8 представляют количество дней до R8 и длительность генеративной стадии между R1 и R8. Кроме того, все остальные признаки определяли при сборе (т. е. на стадии R8) вместо стадии R7. События 1 и 2 в таблице 9 соответствуют событиям 2 и 3 с таблице 7, а события 1-4 в таблице 10 соответствуют событиям 1-4 в таблице 8, соответственно. За исключение количества дней до цветения на R1 (DOFR1) и длительности генеративной стадии в днях от R1 до R8 (PDR1R8), все фенотипические измерения получены на основании данных, собранных в двух локациях. Аналогично наблюдениям в теплице, трансгенные растения сои, экспрессирующие белки Zm.ZCN8 и Nt.FT-подобный, также цвели раньше, чем контрольные растения дикого типа в поле. Zm.ZCN8-трансгенные растения имели увеличенное число бобов на узел, тогда как растения Nt.FT-подобный не демонстрировали четкого увеличения числа бобов на узел в полевых испытаниях.[172] Two Zm.ZCN8 transgenic events and four Nt.FT-like events listed above were also field tested at two different locations. Phenotypic data were obtained for plants expressing the Zm.ZCN8 and Nt.FT-like transgenes under the control of the pAt.Erecta promoter (Tables 9 and 10). In the case of field measurements, the traits were similar to those listed above for the greenhouse data tables, except that DOR8 and PDR1R8 represent the number of days before R8 and the duration of the generative stage between R1 and R8. In addition, all other traits were determined at harvest (ie, R8 step) instead of R7 step.
Таблица 9. Фенотипические данные с полевых испытаний для растений Zm.ZCN8 и растений ДТ.Table 9 Phenotypic data from field trials for Zm.ZCN8 plants and DT plants.
(* - данные по одной локации)(* - data for one location)
Таблица 10. Фенотипические данные с полевых испытаний для растений Nt.FT-подобный и растений ДТ. Table 10 Phenotypic data from field trials for plantsNt.FT-likeand plants DT.
(* - данные по одной локации)(* - data for one location)
[173] Дополнительные фенотипические данные были получены для растений, экспрессирующих трансген Gm.FT2b под управлением промотора pAt.Erecta (таблица 11).[173] Additional phenotypic data were obtained for plants expressing the Gm.FT2b transgene under the control of the pAt.Erecta promoter (Table 11).
Таблица 11. Фенотипические данные уровня конструкции и события для растений Gm.FT2b и растений ДТ.Table 11. Phenotypic construct level data and events for Gm.FT2b plants and DT plants.
(граммы)SW1000
(grams)
[174] Трансгенные растения сои, экспрессирующие трансген Gm.FT2b, цвели раньше и имели меньшее ветвление, чем контрольные растения дикого типа. Gm.FT2b-экспрессирующие растения сои характеризовались сниженным количеством дней до цветения (DOFR1), сниженным числом веток (BRPP), меньшим числом узлов на растение (NDPL), меньшим числом узлов на ветках (NDBR), сниженным числом бобов на растение (PDPP) и меньшим числом бобов на ветках (PODBR) (таблица 9). Однако Gm.FT2b-трансгенные растения не демонстрировали увеличение числа бобов на узел. В целом, растения, экспрессирующие трансген Gm.FT2b, имели меньшую высоту и меньшее ветвление по сравнению с контрольными растениями дикого типа. Трансгенные растения сои, экспрессирующие четыре разные события трансгена Gm.FT2b, также исследовали в полевых экспериментах. Фенотипические данные были получены для растений, экспрессирующих трансген Gm.FT2b под управлением промотора pAt.Erecta (таблица 12). События 1-4 в таблице 11 соответствуют событиям 3, 2, 1 и 4 в таблице 12, соответственно. Аналогично наблюдениям в теплице, Gm.FT2b-экспрессирующие растения сои демонстрировали сниженное количество дней до цветения (DOFR1) в поле. Другие фенотипические измерения также демонстрировали аналогичные с наблюдаемыми в теплице признаки по сравнению с контрольными растениями дикого типа.[174] Transgenic soybean plants expressing the Gm.FT2b transgene flowered earlier and had less branching than wild-type control plants. Gm.FT2b-expressing soybean plants were characterized by reduced number of days to flowering (DOFR1), reduced number of branches (BRPP), fewer nodes per plant (NDPL), fewer nodes per branch (NDBR), reduced number of pods per plant (PDPP) and fewer pods per branch (PODBR) (Table 9). However, the Gm.FT2b transgenic plants did not show an increase in the number of pods per node. In general, plants expressing the Gm.FT2b transgene had shorter height and less branching compared to wild-type control plants. Transgenic soybean plants expressing four different events of the Gm.FT2b transgene were also tested in field experiments. Phenotypic data were obtained for plants expressing the Gm.FT2b transgene under the control of the pAt.Erecta promoter (Table 12). Events 1-4 in Table 11 correspond to
Таблица 12. Фенотипические данные с полевых испытаний для растений Gm.FT2b и растений ДТ.Table 12 Phenotypic data from field trials for Gm.FT2b plants and DT plants.
[175] Дополнительные фенотипические данные были получены для растений, экспрессирующих трансген Le.SFT под управлением промотора pAt.Erecta (таблица 13).[175] Additional phenotypic data were obtained for plants expressing the Le.SFT transgene under the control of the pAt.Erecta promoter (Table 13).
Таблица 13. Фенотипические данные уровня конструкции и события для растений Le.SFT и растений ДТ.Table 13. Phenotypic construct level data and events for Le.SFT plants and DT plants.
узелBobov/
knot
(граммы)SW1000
(grams)
[176] В целом, растения сои, экспрессирующие трансген Le.SFT, имели меньшую высоту с меньшим ветвлением и в среднем увеличенное число бобов на узел по сравнению с контрольными растениями дикого типа (таблица 13). Однако эти эффекты варьировались и зависели от события. Например, события 1, 3 и 4 демонстрировали раннее цветение (DOFR1), тогда как другие события были нейтральными или фактически имели задержку цветения. Кроме того, некоторые из трансгенных событий Le.SFT демонстрировали увеличение числа бобов на узел в среднем в разной степени, тогда как пара событий были нейтральными в смысле числа бобов на узел. Интересно, что два события (события 5 и 6) имели в среднем наибольшее число бобов на узел, несмотря на задержку цветения. [176] In general, soybean plants expressing the transgeneLe.SFT, had lower height with less branching and an average increased number of pods per node compared to wild-type controls (Table 13). However, these effects varied and depended on the event. For example,
[177] Дополнительные фенотипические данные были получены для растений, экспрессирующих трансген Gm.FT5a под управлением промотора pAt.Erecta (таблица 14).[177] Additional phenotypic data were obtained for plants expressing the Gm.FT5a transgene driven by the pAt.Erecta promoter (Table 14).
Таблица 14. Фенотипические данные уровня конструкции и события для растений Gm.FT5a и растений ДТ.Table 14. Phenotypic construct level data and events for Gm.FT5a plants and DT plants.
(граммы)SW1000
(grams)
[178] Трансгенные растения сои, экспрессирующие трансген Gm.FT5a, цвели значительно раньше, чем контрольные растения дикого типа и имели увеличенное число бобов на узел (аналогично растениям, экспрессирующим трансген Gm.FT2a). В действительности, растения сои, экспрессирующие Gm.FT5a, имели несколько фенотипов (сходных с Gm.FT2a-трансгенными растениями), включая меньшее число дней до цветения (DOFR1), меньшее число веток (BRPP), меньше узлов на растение (NDPL), меньше узлов на ветках (NDBR), меньшее число бобов на растение (PDPP) и меньше бобов на ветках (PODBR), наряду с увеличением числа бобов на узел и снижением числа семян на растение (таблица 14). В целом, растения, экспрессирующие трансген Gm.FT5a, имели меньшую высоту и меньшее ветвление, но больше бобов на узел (в частности, на главном стебле) по сравнению с контрольными растениями дикого типа. [178] Transgenic soybean plants expressing the transgeneGm.FT5a, flowered significantly earlier than wild type controls and had an increased number of pods per node (similar to plants expressing the transgeneGm.FT2a). In fact, soybean plants expressingGm.FT5a, had several phenotypes (similar toGm.FT2a-transgenic plants), including fewer days to flowering (DOFR1), fewer branches (BRPP), fewer nodes per plant (NDPL), fewer nodes per branch (NDBR), fewer pods per plant (PDPP) and fewer pods per branch (PODBR), along with an increase in the number of pods per node and a decrease in the number of seeds per plant (Table 14). In general, plants expressing the transgeneGm.FT5a, had lower height and less branching, but more pods per node (particularly on the main stem) compared to wild-type controls.
[179] Не ограничиваясь какой-либо теорией, эти данные поддерживают модель действия сверхэкспрессии FT дозозависимым образом со степенью или мерой связанных фенотипов (например, раннее цветение, увеличение числа бобов на узел и изменение архитектуры растения) в зависимости от (i) уровня и времени экспрессии FT, (ii) тканевой специфичности экспрессии FT и (iii) относительной активности и целевой специфичности конкретного экспрессируемого белка FT. Например, экспрессия ортологов белка FT из других видов растений в сое может указывать более слабый эффект по сравнению со сверхэкспрессией эндогенного белка FT (Gm.FT2a) в сое, что может быть связано с тем, что ненативные гомологи белка FT имеют более низкую активность в сое. Однако экспрессия некоторых нативных белков FT может не приводить к существенным фенотипическим эффектам, если они имеют отличную специализированную роль в своем нативном состоянии или контексте. Разные белки FT также могут действовать на разные тканевые мишени и рецепторы и, следовательно, иметь разные эффекты на различные связанные с архитектурой растений и цветением признаки и фенотипы.[179] While not wishing to be bound by theory, these data support a model of the effect of FT overexpression in a dose-dependent manner with the degree or measure of associated phenotypes ( e.g. , early flowering, increase in pods per node, and change in plant architecture) as a function of (i) level and time FT expression, (ii) tissue specificity of FT expression, and (iii) relative activity and target specificity of the particular FT protein expressed. For example, expression of FT protein orthologues from other plant species in soybean may indicate a weaker effect compared to overexpression of endogenous FT protein (Gm.FT2a) in soybean, which may be due to non-native FT protein homologues having lower activity in soybean. . However, the expression of some native FT proteins may not result in significant phenotypic effects if they have a different specialized role in their native state or context. Different FT proteins can also act on different tissue targets and receptors and therefore have different effects on different plant architecture and flowering traits and phenotypes.
[180] Вне зависимости от уровня активности конкретного гомолога FT изменение связанных с генеративностью и архитектурой растения фенотипов коррелирует со временем и локацией экспрессии FT. Экспрессия трансгенов FT на вегетативной стадии может быть необходима для индукции раннего цветения и/или увеличения числа флоральных меристем, цветков, бобов и т. д. на узел растения. В действительности, показано, что экспрессия FT в меристематических тканях во время вегетативных стадий развития с соответствующей дозой трансгена FT вызывает генеративные изменения в растениях, которые приводят к увеличению числа цветков, бобов и/или семян на узел. В противоположность этому, экспрессия трансгена Gm.FT2a под управлением предпочтительных в отношении листьев промоторов приводила к очень небольшим, в случае их наличия, фенотипическим изменения, по сравнению с растениями дикого типа. Эти данные показывают, что как время, так и тканевая специфичность (или тканевая предпочтительность) экспрессии FT являются важными факторами, которые влияют на генеративные и/или связанные с урожайностью фенотипические изменения в трансгенных растениях.[180] Regardless of the level of activity of a particular FT homologue, changes in plant generativity and architecture-related phenotypes correlate with the timing and location of FT expression. Expression of FT transgenes during the vegetative stage may be necessary to induce early flowering and/or increase the number of floral meristems, flowers, pods, etc. per plant node. In fact, expression of FT in meristematic tissues during vegetative stages with an appropriate dose of the FT transgene has been shown to induce generative changes in plants that result in an increase in the number of flowers, pods and/or seeds per node. In contrast, expression of the Gm.FT2a transgene driven by leaf-preferred promoters resulted in very small, if present, phenotypic changes compared to wild-type plants. These data indicate that both timing and tissue specificity (or tissue preference) of FT expression are important factors that influence generative and/or yield-related phenotypic changes in transgenic plants.
[181] Представленные данные позволяют предположить, что разные белки FT могут иметь разные уровни активности и/или разную тканевую специфичность, несмотря на экспрессию с одним и тем же промотором pErecta. Хотя несколько конструкций, экспрессирующих Gm.FT2a, Zm.ZCN8, Nt.FT-подобный и Gm.FT5a, вызывали ранние цветение и терминацию кроме увеличения числа бобов на узел, другие конструкции, экспрессирующие Gm.FT2b и Le.SFT, оказывали другие коррелятивные эффекты на цветение. Экспрессия Gm.FT2b не вызывала ранние цветение и терминацию растений, но и не отличалась существенным увеличением числа бобов на узел. С другой стороны, экспрессия Le.SFT демонстрировала увеличение числа бобов на узел и раннюю терминацию, несмотря на задержку цветения. Интересно, что увеличение числа бобов на узел в FT-трансгенных растениях не коррелирует с продлением генеративной стадии (PDR1R7) и не всегда сопутствовало раннему цветению (DOFR1), как отмечено выше. Эти данные позволяют предположить, что генеративные изменения в ответ на экспрессию белков FT в меристеме на вегетативной стадии могут происходить посредством одного или более независимых механизмов или путей. Увеличение числа бобов на узел в FT-трансгенных растениях может зависеть от числа меристем соцветий и флоральных меристем, индуцированных из вегетативных меристеме в каждом узле, что может происходить независимо от времени цветения и/или длительности генеративной стадии. Однако, как отмечено выше, длительность генеративной стадии не обязательно может коррелировать с длительностью цветения.[181] The data presented suggest that different FT proteins may have different levels of activity and/or different tissue specificity despite being expressed with the same pErecta promoter. Although several constructs expressing Gm.FT2a , Zm.ZCN8 , Nt.FT- like, and Gm.FT5a caused early flowering and termination in addition to increasing the number of pods per node, other constructs expressing Gm.FT2b and Le.SFT had other correlative effects. flowering effects. Expression of Gm.FT2b did not cause early flowering and termination of plants, but did not show a significant increase in the number of pods per node. On the other hand, Le.SFT expression showed an increase in the number of pods per node and early termination despite delayed flowering. Interestingly, the increase in the number of pods per node in FT transgenic plants does not correlate with prolongation of the generative stage (PDR1R7) and does not always accompany early flowering (DOFR1), as noted above. These data suggest that generative changes in response to expression of FT proteins in the meristem during the vegetative stage may occur through one or more independent mechanisms or pathways. The increase in the number of pods per node in FT transgenic plants may depend on the number of inflorescence meristems and floral meristems induced from vegetative meristems at each node, which may occur regardless of flowering time and/or duration of the generative stage. However, as noted above, the duration of the generative stage may not necessarily correlate with the duration of flowering.
Пример 7. Идентификация дополнительных меристематических промоторов вегетативной стадии.Example 7 Identification of Additional Vegetative Stage Meristematic Promoters.
[182] После наблюдения фенотипических эффектов с экспрессией Gm.FT2a под управлением меристемо-предпочтительного промотора вегетативной стадии pAt.Erecta, предполагается, что можно использовать другие меристемо-предпочтительные (меристемо-специфические) промоторы вегетативной стадии для управления экспрессией белков FT для инициации связанных с генеративностью или урожайностью признаков или фенотипов в растениях, таких как увеличенное числом бобов на узел (и/или на растение или главный стебель). Используя изученный профиль экспрессии промотора pAt.Erecta (смотрите пример 2), были идентифицированы другие меристемо-предпочтительные (меристемо-специфические) промоторы вегетативной стадии из сои, картофеля и Arabidopsis. Использовали два биоинформационных подхода для идентификации кандидатных генов из других видов двудольных, включая, например, Arabidopsis, сою, Medicago, картофель и томат, имеющие сходные профили экспрессии с pAt.Erecta: BAR Espressolog и Expression Angler. Смотрите, например, BAR expressolog identification: expression profile similarity ranking of homologous genes in plant species,ʺ Plant J 71(6): 1038-50 (2012); и Toufighi, K et al., ʺThe Botany Array Resource: e-Northerns, Expression Angling, and promoter analyses,ʺ Plant J 43(1): 153-163 (2005). Следовательно, промоторные последовательности из этих генов были предложены для применения при экспрессии трансгенов FT в соответствии с вариантами реализации данного изобретения.[182] After observing the phenotypic effects with Gm.FT2a expression under the control of the meristem-preferred vegetative stage promoter pAt.Erecta , it is contemplated that other meristem-preferred (meristem-specific) vegetative stage promoters can be used to drive the expression of FT proteins to initiate associated the generativity or yield of traits or phenotypes in plants, such as increased number of pods per node (and/or per plant or main stem). Using the studied expression profile of the pAt.Erecta promoter (see Example 2), other meristem-preferred (meristem-specific) vegetative stage promoters from soybean, potato and Arabidopsis were identified. Two bioinformatic approaches were used to identify candidate genes from other dicotyledonous species, including, for example, Arabidopsis, soybean, Medicago , potato, and tomato, having similar expression profiles to pAt . Erecta: BAR Espressolog and Expression Angler. See, for example , BAR expressolog identification: expression profile similarity ranking of homologous genes in plant species,ʺ Plant J 71 (6): 1038-50 (2012); and Toufighi, K et al., "The Botany Array Resource: e-Northerns, Expression Angling, and promoter analyses," Plant J 43 (1): 153-163 (2005). Therefore, promoter sequences from these genes have been proposed for use in the expression of FT transgenes in accordance with embodiments of the present invention.
[183] Примеры промоторов генов, идентифицированных в этом анализе, включают следующие: четыре гена рецептор-подобной киназы (RLK) из сои, включая Glyma10g38730 (SEQ ID NO: 33), Glyma09g27950 (SEQ ID NO: 34), Glyma06g05900 (SEQ ID NO: 35) и Glyma17g34380 (SEQ ID NO: 36). Дополнительные примеры включают промоторы гена рецептор-подобной киназы (RLK) из картофеля, PGSC0003DMP400032802 (SEQ ID NO: 37) и PGSC0003DMP400054040 (SEQ ID NO: 38). Возможно, что эти гены RLK могут быть структурно и/или функционально родственными с генами Erecta и Erecta-подобный из Arabidopsis и других видов, так как они тоже являются генами RLK. Другие меристемо-предпочтительные промоторы вегетативной стадии из генов Arabidopsis включают следующие: At.MYB17 (At.LMI2; At3g61250) (SEQ ID NO: 41), Kinesin-подобный ген (At5g55520) (SEQ ID NO: 42), AP2/B3-подобные гены, включая At.REM17 (SEQ ID NO: 43) или At.REM19 и гены Erecta-подобный 1 и 2, At.Erl1 (SEQ ID NO: 44) и At.Erl2 (SEQ ID NO: 45). Каждый из этих промоторов и сходных функциональных последовательностей может быть функционально связан с геном FT для инициации эктопической экспрессии генов FT в одно или более меристемах растений по меньшей мере во время вегетативной (-ых) стадии (-ий) развития.[183] Examples of gene promoters identified in this assay include the following: four soybean receptor-like kinase (RLK) genes including Glyma10g38730 (SEQ ID NO: 33), Glyma09g27950 (SEQ ID NO: 34), Glyma06g05900 (SEQ ID NO: 35) and Glyma17g34380 (SEQ ID NO: 36). Additional examples include receptor-like kinase (RLK) gene promoters from potato, PGSC0003DMP400032802 (SEQ ID NO: 37) and PGSC0003DMP400054040 (SEQ ID NO: 38). It is possible that these RLK genes may be structurally and/or functionally related to the Erecta and Erecta-like genes from Arabidopsis and other species, as they are also RLK genes. Other meristem-preferred vegetative stage promoters from Arabidopsis genes include the following: At.MYB17 ( At.LMI2 ; At3g61250) (SEQ ID NO: 41), Kinesin-like gene (At5g55520) (SEQ ID NO: 42), AP2/B3- like genes including At.REM17 (SEQ ID NO: 43) or At.REM19 and erecta -like 1 and 2 genes, At.Erl1 (SEQ ID NO: 44) and At.Erl2 (SEQ ID NO: 45). Each of these promoters and similar functional sequences can be operably linked to the FT gene to initiate ectopic expression of FT genes in one or more plant meristems at least during the vegetative stage(s) of development.
[184] В отношении гена At.MYB17 (At.LMI2) смотрите Pastore, JL et al., ʺLATE MERISTEM IDENTITY 2 acts together with LEAFY to activate APETALA1,ʺ Development 138: 3189-3198 (2011), полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки. В отношении гена Kinesin-like смотрите Fleury, D et al., ʺThe Arabidopsis thaliana Homolog of Yeast BRE1 Has a Function in Cell Cycle Regulation during Early Leaf and Root Growth,ʺ Plant Cell, 19(2): 417-432 (2007), полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки. В отношении генов REM17 и REM19 Arabidopsis смотрите Mantegazza, O et al., ʺAnalysis of the Arabidopsis REM gene family predicts functions during flower development,ʺ Ann Bot 114(7): 1507-1515 (2014), полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки. Дополнительно в отношении гена At.Erl2 смотрите ʺSpecial Issue: Receptor-like Kinases,ʺ JIPB 55(12): 1181-1286 (2013), и, в частности, Shpak, E., ʺDiverse Roles of ERECTA Family Genes in Plant Development,ʺ JIPB 55(12): 1251-1263 (2013), полное содержание которых включено в данный документ посредством ссылки.[184] For the At.MYB17 ( At.LMI2 ) gene, see Pastore, JL et al., ʺLATE
Пример 8. Экспрессия гена Flowering Locus T, Gm.FT2a, под управлением промотора pAt.Erl1 изменяет время цветения и число бобов на узел в сое.Example 8 Expression of the Flowering Locus T gene, Gm.FT2a , under the control of the pAt.Erl1 promoter changes the flowering time and the number of pods per node in soybeans.
[185] Конструировали трансформационный вектор, содержащий Gm.FT2a под управлением меристемо-предпочтительного промотора вегетативной стадии pAt.Erl1 (SEQ ID NO: 44) и использовали для трансформации сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, изучали в отношении их фенотипов в теплице с 14-14,5-часовым естественным фотопериодом светового дня. Для каждой конструкции pAt.Erl1::Gm.FT2a исследовали шесть событий (6 растений на событие) в теплице. Также исследовали шесть растений и усредняли для контрольных растений дикого типа (ДТ). Также исследовали четыре события в поле с 12 параллельными участками поля на событие и сравнивали с контролями ДТ на том же поле. Для получения фенотипических характеристик этих растений были собраны следующие матрицы и выражены в виде среднего для каждого события (а также растений дикого типа) при выращивании в теплице (смотрите таблицу 15) и в поле (смотрите таблицу 16). Также приведена колонка с усреднением по всем событиям на признак.[185] A transformation vector containing Gm.FT2a under the control of the meristem-preferred vegetative stage promoter pAt.Erl1 (SEQ ID NO: 44) was constructed and used to transform soybean by Agrobacterium -mediated transformation. The transgenic plants generated by these events were studied for their phenotypes in a greenhouse with 14-14.5 hour natural photoperiods. For each pAt.Erl1::Gm.FT2a construct , six events (6 plants per event) were examined in the greenhouse. Six plants were also examined and averaged over wild-type control (WT) plants. Four events in the field were also examined with 12 parallel field sections per event and compared with DT controls in the same field. To obtain the phenotypic characteristics of these plants, the following matrices were collected and expressed as the mean of each event (as well as wild-type plants) grown in the greenhouse (see Table 15) and in the field (see Table 16). There is also a column with averaging over all events per attribute.
Таблица 15. Фенотипические данные для растений pAt.Erl1:Gm.FT2a и растений ДТ, выращиваемых в теплице.Table 15 Phenotypic data for greenhouse grown pAt.Erl1:Gm.FT2a and DT plants.
узелBobov/
node
(граммы)SW1000
(grams)
Таблица 16. Фенотипические данные для растений pAt.Erl1:Gm.FT2a и растений ДТ, выращиваемых в поле.Table 16. Phenotypic data for pAt.Erl1:Gm.FT2a plants and DT plants grown in the field.
(унции)SW1000
(oz)
[186] Трансгенные растения сои, экспрессирующие конструкцию pAt.Erl1::Gm.FT2a, цвели раньше, чем контрольные растения дикого типа и имели увеличенное число бобов на узел (аналогично растениям, экспрессирующим трансген Gm.FT2a под управлением промотора pAt.Erecta). В действительности, растения сои, экспрессирующие pAt.Erl1::Gm.FT2a, имели несколько фенотипов, сходных с pAt.Erecta::Gm.FT2a-трансгенными растениями, включая меньшее число дней до цветения (DOFR1), меньшее число дней до R7 (DOR7), меньшее число веток на растение (BRPP), меньше узлов на растение (NDPL), меньшее число бобов на растение (PDPP), наряду с увеличением числа бобов на узел (таблица 15) по сравнению с контрольными растениями дикого типа. Однако несколько фенотипов, наблюдаемых в растениях pAt.Erecta::Gm.FT2a, таких как число бобов на главном стебле (PODMS), число бобов на ветках (PODBR) и масса 1000 семян (SW1000), были менее выражены в экспрессирующих pAt.Erl1::Gm.FT2a трансгенных растениях. Ранние результаты на второй год полевых исследований также продемонстрировали раннее цветение, что указывает на сходные генеративные признаки. Как следствие, измерения для этих признаков могут быть сокращены по-другому, например, PDPP или PODPP для числа бобов на растение, PDMS или PODMS для числа бобов на главном стебле, PDBR или PODBR для числа бобов на ветках, TPBR для общего числа бобов на ветках и т. д.[186] Transgenic soybean plants expressing the pAt.Erl1::Gm.FT2a construct flowered earlier than wild-type controls and had an increased number of beans per node (similar to plants expressing the Gm.FT2a transgene driven by the pAt.Erecta promoter). In fact, soybean plants expressing pAt.Erl1::Gm.FT2a had several phenotypes similar to pAt.Erecta::Gm.FT2a transgenic plants, including fewer days to flowering (DOFR1), fewer days to R7 ( DOR7), fewer branches per plant (BRPP), fewer nodes per plant (NDPL), fewer pods per plant (PDPP), along with an increase in pods per node (Table 15) compared to wild type controls. However, several phenotypes observed in pAt.Erecta::Gm.FT2a plants , such as number of pods per main stem (PODMS), number of pods per branch (PODBR), and 1000 seed weight (SW1000), were less pronounced in expressing pAt.Erl1 ::Gm.FT2a transgenic plants. Early results in the second year of field trials also showed early flowering, indicating similar generative traits. As a consequence, measurements for these traits can be abbreviated differently, e.g. PDPP or PODPP for pods per plant, PDMS or PODMS for pods per main stem, PDBR or PODBR for pods per branch, TPBR for total pods per plant. branches, etc.
[187] Профиль экспрессии для промотора Erecta-подобный 1 Arabidopsis (pAt.Erl1) в сое, измеряемый по окрашиванию GUS, является более ограниченным, чем профиль экспрессии pAt.Erecta в сое, описанный выше. pAt.Erl1 управляет экспрессией GUS в вегетативных аксиллярных меристемах и в ранних флоральных меристемах, полученных из аксиллярной ткани. Однако окрашивание GUS не наблюдается в апикальной меристеме побегов на любой стадии, на которой ее можно отличить от других меристематических тканей развивающегося растения. Экспрессия репортера GUS под управлением промотора pAt.Erl1 не наблюдается в ткани листьев, стебле или корнях на любой стадии (данные не показаны). Учитывая, что экспрессия FT под управлением промотора pAt.Erecta или pAt.Erl1 индуцировала раннее цветение и увеличение числа бобов на узел, вегетативной экспрессии трансгена FT в меристеме растения или вблизи нее в целом может быть достаточно для индукции этих связанных с генеративностью и урожайностью фенотипов или признаков.[187] The expression profile for the Arabidopsis Erecta-like 1 ( pAt.Erl1 ) promoter in soybean, as measured by GUS staining, is more limited than the soybean pAt.Erecta expression profile described above. pAt.Erl1 controls GUS expression in vegetative axillary meristems and early floral meristems derived from axillary tissue. However, GUS staining is not observed in the shoot apical meristem at any stage at which it can be distinguished from other meristematic tissues of the developing plant. Expression of the GUS reporter under the control of the pAt.Erl1 promoter is not observed in leaf tissue, stem, or roots at any stage (data not shown). Considering that FT expression under the control of the pAt.Erecta or pAt.Erl1 promoter induced early flowering and an increase in the number of pods per node, vegetative expression of the FT transgene in or near the plant meristem as a whole may be sufficient to induce these generative and yield-related phenotypes or signs.
Пример 9. Экспрессия микроРНК, нацеленной на Gm.FT2a для супрессииExample 9 Expression of miRNA targeting Gm.FT2a for suppression
[188] Было сделано предположение, что снижение уровня экспрессии трансгена Gm.FT2a вод управлением промотора вегетативной стадии в генеративных или флоральных тканях посредством супрессии РНК может продлить генеративную стадию в растениях сои. Чтобы исследовать, влияет ли супрессия эндогенного Gm.FT2a на генеративные или морфологические фенотипы растений сои, конструировали трансформационный вектор, содержащий последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую молекулу микроРНК (микроРНК-FT2a; SEQ ID NO: 67), которая нацелена на экспрессию эндогенного Gm.FT2a под управлением промотора поздней вегетативной и/или генеративной стадии, промотора pAt.AP1 (SEQ ID NO: 49) или промотора pSl.MADS-RIN (SEQ ID NO: 72), и использовали для трансформации растений сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, изучали в теплице в условиях 14-14,5-часового фотопериода светового дня. Исследовали по шесть растений на событие и сравнивали в среднем с контрольными растениями дикого типа (ДТ). Усредненные фенотипические данные, полученные по растениям pAP1::miRNA-FT и растениям дикого типа в теплице, приведены в таблице 17. В таблице 18 приведены фенотипические наблюдения для растений pMADS-RIN::miRNA-FT и растений дикого типа в теплице и выражены в виде среднего для каждого события и в виде среднего по событиям и растениям дикого типа.[188] It has been suggested that reducing the expression level of the Gm.FT2a transgene by controlling the vegetative stage promoter in generative or floral tissues through RNA suppression may prolong the generative stage in soybean plants. To investigate whether suppression of endogenous Gm.FT2a affects the generative or morphological phenotypes of soybean plants, a transformation vector was constructed containing a DNA sequence suitable for transcription encoding a microRNA molecule (microRNA-FT2a; SEQ ID NO: 67) that targets the expression of endogenous Gm .FT2a under the control of a late vegetative and/or generative stage promoter, the pAt.AP1 promoter (SEQ ID NO: 49) or the pSl.MADS-RIN promoter (SEQ ID NO: 72), and was used to transform soybean plants by Agrobacterium -mediated transformation . Transgenic plants created by these events were studied in a greenhouse under conditions of 14-14.5-hour daylight photoperiod. Six plants per event were examined and compared on average with wild-type (WT) control plants. Averaged phenotypic data obtained from pAP1::miRNA-FT plants and wild-type plants in the greenhouse are shown in Table 17. Table 18 shows the phenotypic observations for pMADS-RIN::miRNA-FT plants and wild-type plants in the greenhouse and are expressed as averaged over each event and averaged over events and wild-type plants.
Таблица 17. Фенотипические данные для растений pAP1::miRNA-FT2a и растений ДТ, выращиваемых в теплице.Table 17. Phenotypic data for pAP1::miRNA-FT2a plants and greenhouse grown DT plants.
[189] В тепличных условиях время и начало цветения в растениях, экспрессирующих конструкцию pAP1::miRNA-FT2a, было приблизительно таким же, что и в контрольных растениях ДТ. Трансгенные растения, экспрессирующие конструкцию pAP1::miRNA-FT2a или pMADS-RIN::miRNA-FT2a, также выращивали в полевых условиях. Исследовали шесть растений, содержащих четыре разных событий конструкции pAP1::miRNA-FT2a и сравнивали в среднем с контрольными растениями дикого типа (ДТ). В случае полевых экспериментов измерения проводили при сборе (стадия R8), если не указано иное. SDARR8 представляет количество семян на площадь (т. е. на квадратный фут) на стадии R8. Усредненные фенотипические данные, полученные для выращенных в поле растений, приведены в таблице 18 для конструкции pAP1::miRNA-FT2a и в таблице 20 для конструкции pMADS-RIN::miRNA-FT2a.[189] Under greenhouse conditions, the timing and onset of flowering in plants expressing the pAP1::miRNA-FT2a construct was approximately the same as in DT control plants. Transgenic plants expressing the pAP1::miRNA-FT2a or pMADS-RIN::miRNA-FT2a construct were also grown in the field. Six plants containing four different events of the pAP1::miRNA-FT2a construct were examined and compared on average with wild type (WT) control plants. In the case of field experiments, measurements were taken at collection (R8 step) unless otherwise noted. SDARR8 represents the number of seeds per area (ie, per square foot) at stage R8. Averaged phenotypic data from field grown plants are shown in Table 18 for the pAP1::miRNA-FT2a construct and in Table 20 for the pMADS-RIN::miRNA-FT2a construct .
Таблица 18. Фенотипические данные для выращенных в поле растений pAP1::miRNA-FT2a и растений ДТ.Table 18. Phenotypic data for field grown pAP1::miRNA-FT2a plants and DT plants.
(унции)SW1000
(oz)
[190] В полевых условиях растения сои, трансформированные конструкцией pAP1::miRNA-FT2a снова имели в среднем приблизительно такие же признаки цветения и генеративные признаки, что и контрольные растения ДТ, хотя pAP1::miRNA-FT2a-трансгенные растения могли иметь немного меньше бобов (PDPPR8, PDMSR8, TPBR8, бобов/узел) по сравнению с контрольными растениями ДТ на стадии R8.[190] In the field, soybean plants transformed with the pAP1::miRNA-FT2a construct again had, on average, approximately the same flowering and generative traits as WT control plants, although the pAP1::miRNA-FT2a transgenic plants might have slightly less beans (PDPPR8, PDMSR8, TPBR8, bean/node) compared to DT control plants at the R8 stage.
Пример 10. Модификация экспрессии Gm.FT2a искусственной микроРНК, управляемой промотором pAP1, изменяет генеративные фенотипы в тепличных условиях.Example 10 Modification of the Gm.FT2a expression of artificial miRNA driven by the pAP1 promoter alters generative phenotypes under greenhouse conditions.
[191] Чтобы показать, что супрессия Gm.FT2a в поздних вегетативных и/или генеративных тканях после исходной эктопической экспрессии трансгенного Gm.FT2a может продлевать генеративную стадию в растениях сои и/или противодействовать ранней терминации, конструировали трансформационный вектор, содержащий Gm.FT2a под управлением меристемо-предпочтительного промотора вегетативной стадии pAt.Erecta (SEQ ID NO: 31) с областью терминатора Apx или Lhcb2 (T-Apx и T-Lhcb2), и пригодную для транскрипции молекулу ДНК, кодирующую искусственную микроРНК (SEQ ID NO: 67), нацеленную на Gm.FT2a для супрессии и под управлением промотора pAt.AP1 (SEQ ID NO: 49) с областью терминатора GAPDH (каждая конструкция обозначена pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a) и использовали для трансформации сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, изучали в теплице с 14-14,5-часовым фотопериодом светового дня. Для каждой конструкции pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a исследовали шесть событий (6 растений на событие) и усредняли данные. Усредненные данные для каждой конструкции также усредняли по событиям. Также исследовали шесть контрольных растений дикого типа (ДТ) и усредняли как контроль. В таблицах 19 и 20 приведены фенотипические данные, полученные для шести событий, а также средние значения для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a и ДТ с двумя разными областями терминатора (T-Apx и T-Lhcb2).[191] To show that suppression of Gm.FT2a in late vegetative and/or generative tissues after initial ectopic expression of transgenic Gm.FT2a can prolong the generative stage in soybean plants and/or counteract early termination, a transformation vector was constructed containing Gm.FT2a under control of the meristem-preferred vegetative stage promoter pAt.Erecta (SEQ ID NO: 31) with the Apx or Lhcb2 terminator region (T-Apx and T-Lhcb2), and a DNA molecule suitable for transcription encoding an artificial microRNA (SEQ ID NO: 67) targeted to Gm.FT2a for suppression and under the control of the pAt.AP1 promoter (SEQ ID NO: 49) with a GAPDH terminator region (each construct designated pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a ) and used for transformation soybeans through Agrobacterium -mediated transformation. The transgenic plants generated by these events were studied in a greenhouse with a 14-14.5 hour photoperiod. For each pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a examined six events (6 plants per event) and averaged the data. The average data for each construct was also averaged across events. Six wild-type (WT) control plants were also examined and averaged as controls. Tables 19 and 20 show the phenotypic data obtained for six events, as well as the average values for plants pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a and DT with two different terminator regions (T-Apx and T-Lhcb2).
Таблица 19. Фенотипические данные для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx | pAP1::miRNA-FT2a::T-GAPDH и растений ДТ в тепличных условиях.Table 19. Phenotypic data for plants pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx | pAP1::miRNA-FT2a::T-GAPDH and DT plants in greenhouse conditions.
узелBobov/
knot
(граммы)SW1000
(grams)
Таблица 20. Фенотипические данные для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 | pAP1::miRNA-FT2a::T-GAPDH и растений ДТ в тепличных условиях.Table 20. Phenotypic data for pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 | pAP1::miRNA-FT2a::T-GAPDH and DT plants in greenhouse conditions.
(граммы)SW1000
(grams)
[192] В этом эксперименте в теплице трансгенные растения сои, содержащие конструкции pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a, характеризовались более ранним началом цветения (DOFR1) и увеличенным числом бобов на узел (и на главный стебель) по сравнению с контрольными растениями ДТ (бобов/узел, PODMS). Трансгенные растения с комбинированной конструкцией pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a имели большую высоту растений и повышенное ветвление, а также увеличенное число узлов на растение (и на главный стебель) и увеличенное число бобов на растение (и на главный стебель) по сравнению с растениями сои только с трансгеном pAt.Erecta::Gm.FT2a без супрессорной кассеты микроРНК (смотрите, например, таблицу 2). На Фиг. 12 приведены полные изображения растений, гомозиготных в отношении pAt.Erecta::Gm.FT2a или pAt.Erecta::Gm.FT2a/pAP1::miRNA-FT2a, демонстрирующие, что дополнительная супрессия трансгена Gm.FT2a является эффективной для смягчения фенотипов ранней терминации, наблюдаемых с одним трансгеном pAt.Erecta::Gm.FT2a, включая небольшую высоту растений и сниженное ветвление.[192] In this greenhouse experiment, transgenic soybean plants containing pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a were characterized by an earlier onset of flowering (DOFR1) and an increased number of pods per node (and per main stem) compared to DT control plants (pods/node, PODMS). Transgenic plants with combined construct pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a had higher plant height and increased branching, as well as increased number of nodes per plant (and per stem) and increased number of pods per plant (and per stem) compared to soybean plants with the pAt.Erecta transgene alone. ::Gm.FT2a without miRNA suppressor cassette (see, for example, Table 2). On FIG. 12 shows complete images of plants homozygous for pAt.Erecta::Gm.FT2a or pAt.Erecta::Gm.FT2a/pAP1::miRNA-FT2a demonstrating that additional suppression of the Gm.FT2a transgene is effective in mitigating early termination phenotypes. observed with a single pAt.Erecta::Gm.FT2a transgene , including low plant height and reduced branching.
[193] Эти данные показывают, что супрессия Gm.FT2a в поздних вегетативных и/или генеративнивных тканях после более ранней эктопической дозы трансгена Gm.FT2a является эффективной для инициации раннего цветения и сохранения увеличенного числа бобов на узел, смягчая при этом фенотипы ранней терминации, наблюдаемые в растениях, содержащих один трансген Gm.FT2a. Интересно, что увеличенное число бобов на узел в этих растениях наблюдали без очевидного увеличения длительности генеративной стадии.[193] These data indicate that suppression of Gm.FT2a in late vegetative and/or generative tissues following an earlier ectopic dose of the Gm.FT2a transgene is effective in initiating early flowering and maintaining an increased number of pods per node, while attenuating early termination phenotypes. observed in plants containing one Gm.FT2a transgene. Interestingly, an increased number of pods per node in these plants was observed without an obvious increase in the duration of the generative stage.
Пример 11. Модификация экспрессии Gm.FT2a искусственной микроРНК, управляемой промотором pAP1, изменяет генеративные фенотипы в полевых условиях.Example 11 Modification of Gm.FT2a expression of artificial microRNA driven by the pAP1 promoter alters generative phenotypes in the field.
[194] Три из четырех трансформационных событий (в зависимости от года) конструкции pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx | pAP1::miRNA-FT2a::T-GAPDH, описанных в примере 10, выращивали и исследовали в полевых условиях в течение двух последовательных лет. Для каждого из событий и контроля ДТ получали и усредняли фенотипические данные (события пронумерованы для соответствия). В таблицах 21 и 22 приведены усредненные фенотипические данные, полученные для этих растений, а также в виде среднего по трем событиям.[194] Three of the four transformation events (depending on the year) of the pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx | pAP1::miRNA-FT2a::T-GAPDH described in Example 10 were grown and field tested for two consecutive years. For each of the events and control DT, phenotypic data were obtained and averaged (events are numbered for correspondence). Tables 21 and 22 show the average phenotypic data obtained for these plants, as well as the average of the three events.
[195] Четыре трансформационных события конструкции pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhbc2 | pAP1::miRNA-FT::T-GAPDH, описанные в примере 10, выращивали и исследовали в полевых условиях в течение двух последовательных лет. Для каждого события и контроля ДТ получали и усредняли фенотипические данные по некоторому количеству растений. В таблицах 23 и 24 приведены усредненные фенотипические данные, полученные для этих растений, а также в виде среднего по четырем событиям.[195] Four transformation events of pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhbc2 | pAP1::miRNA-FT::T-GAPDH described in Example 10 were grown and field tested for two consecutive years. For each event and DT control, phenotypic data were obtained and averaged over a number of plants. Tables 23 and 24 show the average phenotypic data obtained for these plants, as well as the average of the four events.
Таблица 21. Фенотипические данные для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx | pAP1::miRNA-FT::T-GAPDH и растений ДТ, выращенных в поле (год 1).Table 21. Phenotypic data for plants pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx | pAP1::miRNA-FT::T-GAPDH and DT plants grown in the field (year 1).
(унции)SW1000
(oz)
Таблица 22. Фенотипические данные для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx | pAP1::miRNA-FT::T-GAPDH и растений ДТ, выращенных в поле (год 2).Table 22. Phenotypic data for plants pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx | pAP1::miRNA-FT::T-GAPDH and DT plants grown in the field (year 2).
(унции)SW1000
(oz)
Таблица 23. Фенотипические данные для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T- Lhbc2 | pAP1::miRNA-FT::T-GAPDH и растений ДТ, выращенных в поле (год 1).Table 23. Phenotypic data for plants pAt.Erecta::Gm.FT2a::T- Lhbc2 | pAP1::miRNA-FT::T-GAPDH and DT plants grown in the field (year 1).
узелBobov/
knot
(унции)SW1000
(oz)
Таблица 24. Фенотипические данные для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T- Lhbc2 | pAP1::miRNA-FT::T-GAPDH и растений ДТ, выращенных в поле (год 2).Table 24. Phenotypic data for plants pAt.Erecta::Gm.FT2a::T- Lhbc2 | pAP1::miRNA-FT::T-GAPDH and DT plants grown in the field (year 2).
(унции)SW1000
(oz)
[196] Растения сои, содержащие любую из конструкций pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a (с любым терминатором) цвели раньше (DOFR1) и имели немного продленную генеративную стадию (в днях) между стадиями R1 и R8 (PDR1R8) и увеличенное число бобов на узел (и на растение) на стадии R8 (PDPPR8, бобов/узел) при выращивании в полевых условиях по сравнению с контрольными растениями ДТ. Однако, растения сои, содержащие конструкцию pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a::T-GAPDH, также характеризовались сниженным ветвлением (BRPPR8) по сравнению с контрольными растениями ДТ. Ранние результаты на третий год полевых исследований растений с конструкцией pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a::T-GAPDH также продемонстрировали раннее цветение, что указывает на сходные генеративные признаки.[196] Soybean plants containing any of the constructs pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a (with any terminator) flowered earlier (DOFR1) and had a slightly extended generative stage (in days) between R1 and R8 stages (PDR1R8) and an increased number of pods per node (and per plant) at the R8 stage (PDPPR8 , bean/node) when grown in the field compared to control DT plants. However, soybean plants containing pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a::T-GAPDH were also characterized by reduced branching (BRPPR8) compared to DT control plants. Early results for the third year of field trials of plants with pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a::T-GAPDH also showed early flowering, indicating similar generative traits.
[197] Эти полевые результаты показывают, что обе конструкции pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a::T-GAPDH с разными терминаторами способны повышать признаки урожайности и смягчать фенотипы ранней терминации в полевых условиях (смотрите, например, пример 3, выше), что согласуется с тепличными данными, приведенными в примере 10, выше. Эти данные дополнительно поддерживают модель, что супрессия трансгена Gm.FT2a помогает уменьшить или смягчить фенотипы ранней терминации и архитектуры растений, включая уменьшение высоты растений, ветвления и числа узлов на растение (или на главный стебель), по сравнению с экспрессией одного трансгена Gm.FT2a.[197] These field results show that both pAt.Erecta::Gm.FT2a | pAP1::miRNA-FT2a::T-GAPDH with different terminators are able to increase yield traits and alleviate early termination phenotypes in the field (see e.g. Example 3 above), which is consistent with the greenhouse data shown in Example 10 above. These data further support the model that suppression of the Gm.FT2a transgene helps to reduce or mitigate early termination and plant architecture phenotypes, including reduction in plant height, branching, and number of nodes per plant (or main stem), compared with expression of the Gm.FT2a transgene alone. .
Пример 12. Модификация экспрессии Gm.FT2a искусственной микроРНК, управляемой промотором pSl.MADS5, изменяет генеративные фенотипы в тепличных условиях.Example 12 Modification of Gm.FT2a expression of artificial miRNA driven by the pSl.MADS5 promoter alters generative phenotypes under greenhouse conditions.
[198] Кроме промотора pAP1, использовали другие промоторы генеративной стадии для экспрессии молекулы микроРНК, нацеленной на трансген Gm.FT2a для супрессии. В одной группе экспериментов конструировали трансформационный вектор, содержащий Gm.FT2a под управлением промотора pAt.Erecta и последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую искусственную микроРНК, которая нацелена на Gm. FT2a для супрессии и под управлением промотора Solanum lycopersicum MADS5 (pSl.MADS5; SEQ ID NO: 71) и использовали для трансформации сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, изучали в отношении их фенотипов в теплице с 14-14,5-часовым фотопериодом светового дня. Для конструкции pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 | pSl.MADS5::miRNA-FT2a::T-GAPDH исследовали шесть событий (6 растений на событие). Также исследовали шесть растений и усредняли для контрольных растений дикого типа (ДТ).[198] In addition to the pAP1 promoter, other generative stage promoters were used to express a miRNA molecule targeted at the Gm.FT2a transgene for suppression. In one set of experiments, a transformation vector was constructed containing Gm.FT2a under the control of the pAt.Erecta promoter and a transcriptionable DNA sequence encoding an artificial miRNA that targets Gm. FT2a was suppressed and driven by the Solanum lycopersicum MADS5 promoter ( pSl.MADS5; SEQ ID NO: 71) and was used to transform soybeans by Agrobacterium -mediated transformation. The transgenic plants generated by these events were studied for their phenotypes in a greenhouse with a 14-14.5 hour photoperiod. For the construction pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 | pSl.MADS5::miRNA-FT2a::T-GAPDH was examined for six events (6 plants per event). Six plants were also examined and averaged over wild-type control (WT) plants.
[199] В таблице 25 приведены усредненные фенотипические данные для каждого события и растения ДТ и усредненное значение по каждому признаку по всем исследуемым событиям. («--» означает, что данные не получены)[199] Table 25 shows the average phenotypic data for each event and DT plant and the average value for each trait across all events studied. ("--" means no data received)
Таблица 25. Фенотипические данные для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 | pSl.MADS5::miRNA-FT::T-GAPDH и растений ДТ в тепличных условиях.Table 25. Phenotypic data for plants pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 | pSl.MADS5::miRNA-FT::T-GAPDH and DT plants under greenhouse conditions.
(граммы)SW1000
(grams)
[200] Аналогично с предыдущими примерами, ограничение эктопической экспрессии Gm.FT2a с помощью искусственной микроРНК, экспрессируемой в генеративных тканях, приводило к получению растений сои, которые цвели раньше (DOFR1), чем контрольные растения ДТ. Однако трансгенные растения сои, содержащие конструкцию pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 | pSl.MADS5::miRNA-FT2a::T-GAPDH, имели меньше бобов на растение (PDPP), меньше узлов на растение (NDPL), сниженное число веток (BRPP), меньше семян на растение на стадии R8 (SDPP8) и меньшую длительность генеративной стадии между стадиями R1 и R7 (PDR1R7) по сравнению с контрольными растениями ДТ, хотя эти трансгенные растения имели большее число бобов на узел (и на главный стебель) по сравнению с контрольными растениями ДТ (бобов/узел, PODMS) и фенотипы с улучшенной архитектурой растений по сравнению с экспрессией одного pAt.Erecta::Gm.FT2a (смотрите, например, таблицу 2).[200] Similar to previous examples, restriction of ectopic expression of Gm.FT2a with artificial miRNA expressed in generative tissues resulted in soybean plants that flowered earlier (DOFR1) than control DT plants. However, transgenic soybean plants containing the construct pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 | pSl.MADS5::miRNA-FT2a::T-GAPDH, had fewer pods per plant (PDPP), fewer nodes per plant (NDPL), reduced number of branches (BRPP), fewer seeds per plant at the R8 stage (SDPP8) and less duration of the generative stage between R1 and R7 stages (PDR1R7) compared to control DT plants, although these transgenic plants had a higher number of pods per node (and per main stem) compared to control DT plants (pods/node, PODMS) and phenotypes with improved plant architecture compared to the expression of one pAt.Erecta::Gm.FT2a (see, for example, table 2).
[201] Эти данные дополнительно поддерживают модель, что супрессия трансгена Gm.FT2a помогает уменьшить или смягчить фенотипы ранней терминации с одним трансгеном Gm.FT2a, но экспрессия микроРНК-FT2a с промотором pMADS5 может не быть настолько эффективной, как в случае промотора pAP1, в отношении смягчения фенотипов ранней терминации.[201] These data further support the model that suppression of the Gm.FT2a transgene helps to reduce or alleviate early termination phenotypes with a single Gm.FT2a transgene, but miRNA-FT2a expression with the pMADS5 promoter may not be as efficient as with the pAP1 promoter, in regarding the mitigation of early termination phenotypes.
Пример 13. Модификация экспрессии Gm.FT2a искусственной микроРНК, управляемой промотором pSl.MADS5, изменяет генеративные фенотипы в поле.Example 13 Modification of Gm.FT2a expression of artificial microRNA driven by the pSl.MADS5 promoter alters generative phenotypes in the field.
[202] Трансгенные растения, содержащие три или четыре трансформационных события конструкции pAt.Erecta::Gm.FT2a | pSl.MADS5::miRNA-FT2a, описанные в примере 12, выращивали и исследовали в полевых условиях в течение двух последовательных лет. В случае каждого события и контроля ДТ получали данные для шести растений (события пронумерованы для соответствия). В таблицах 26 и 27 приведены усредненные фенотипические данные, полученные для каждого события и контроля ДТ и усредненное значение по каждому признаку по всем событиям.[202] Transgenic plants containing three or four transformation events of the construct pAt.Erecta::Gm.FT2a | pSl.MADS5::miRNA-FT2a described in Example 12 were grown and field tested for two consecutive years. For each event and DT control, data were obtained for six plants (events are numbered for consistency). Tables 26 and 27 show the average phenotypic data obtained for each event and TD control and the average value for each trait across all events.
Таблица 26. Фенотипические данные для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 | pSl.MADS5::miRNA-FT2a::T-GAPDH и растений ДТ, выращенных в поле (год 1).Table 26. Phenotypic data for plants pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 | pSl.MADS5::miRNA-FT2a::T-GAPDH and DT plants grown in the field (year 1).
(унции)SW1000
(oz)
Таблица 27. Фенотипические данные для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 | pSlLe.MADS5::miRNA-FT2a::T-GAPDH и растений ДТ, выращенных в поле (год 2).Table 27. Phenotypic data for pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 | pSlLe.MADS5::miRNA-FT2a::T-GAPDH and DT plants grown in the field (year 2).
(унции)SW1000
(oz)
[203] Растения сои, содержащие конструкцию pAt.Erecta::Gm.FT2a | pSl.MADS5::miRNA-FT2a, цвели раньше (DOFR1) и имели немного продленную генеративную стадию (в днях) между стадиями R1 и R8 (PDR1R8) и увеличенное число бобов на узел на стадии R8 (бобов/узел) в полевых условиях по сравнению с контрольными растениями ДТ. Однако, растения сои, содержащие конструкцию pAt.Erecta::Gm.FT2a | pSl.MADS5::miRNA-FT2a, также характеризовались сниженным ветвлением (BRPPR8) по сравнению с контрольными растениями ДТ.[203] Soybean plants containing the construct pAt.Erecta::Gm.FT2a | pSl.MADS5::miRNA-FT2a , flowered earlier (DOFR1) and had a slightly extended generative stage (in days) between R1 and R8 stages (PDR1R8) and an increased number of pods per node at the R8 stage (pods/node) in the field according to compared with control plants DT. However, soybean plants containing pAt.Erecta::Gm.FT2a | pSl.MADS5::miRNA-FT2a were also characterized by reduced branching (BRPPR8) compared to control DT plants.
Пример 14. Модификация экспрессии Gm.FT2a искусственной микроРНК, управляемой промотором pSl.NOD, изменяет генеративные фенотипы в тепличных условиях.Example 14 Modification of Gm.FT2a expression of artificial microRNA driven by the pSl.NOD promoter alters generative phenotypes under greenhouse conditions.
[204] Третий промотор (pSl.NOD), регулирующий экспрессию микроРНК-FT2a, также исследовали в тепличных условиях. Конструировали трансформационный вектор, содержащий Gm.FT2a под управлением промотора pAt.Erecta (SEQ ID NO: 31) и последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую микроРНК-FT2a (SEQ ID NO: 67) под управлением промотора Solanum lycopersicum NOD (pSl.NOD; SEQ ID NO: 70) и использовали для трансформации сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, содержащие шесть событий этой конструкции pAt.Erecta::Gm.FT2a | pSl.NOD::miRNA-FT2a (шесть растений на событие), выращивали в теплице с 14-14,5-часовым фотопериодом светового дня. Данные получали для шести растений для каждого события и контроля дикого типа (ДТ). В таблице 28 приведены усредненные фенотипические данные, полученные для каждого события и контроля ДТ и усредненное значение по каждому признаку по всем событиям.[204] The third promoter ( pSl.NOD ), which regulates the expression of microRNA-FT2a, was also investigated in greenhouse conditions. A transformation vector was constructed containing Gm.FT2a under the control of the pAt.Erecta promoter (SEQ ID NO: 31) and a DNA sequence suitable for transcription encoding miRNA-FT2a (SEQ ID NO: 67) under the control of the Solanum lycopersicum NOD promoter ( pSl.NOD; SEQ ID NO: 70) and used to transform soybean by Agrobacterium -mediated transformation. Transgenic plants containing six events of this construct pAt.Erecta::Gm.FT2a | pSl.NOD::miRNA-FT2a (six plants per event) were grown in a greenhouse with a 14-14.5 hour photoperiod. Data were obtained for six plants for each event and wild type control (WT). Table 28 shows the average phenotypic data obtained for each event and control DT and the average value for each trait across all events.
Таблица 28. Фенотипические данные для выращенных в теплице растений pAt.Erecta::Gm.FT2a | pSl.NOD::miRNA-FT2a и растений ДТ.Table 28. Phenotypic data for greenhouse grown pAt.Erecta::Gm.FT2a | pSl.NOD :: miRNA-FT2a and plant DT.
(граммы)SW1000
(grams)
[205] Растения сои, содержащие конструкцию pAt.Erecta::Gm.FT2a | pSl.NOD::miRNA-FT2a, цвели раньше (DOFR1), чем контрольные растения ДТ и имели более короткую генеративную стадию (PDR1R7), меньше веток на растение (BRPP), меньше узлов на растение (NDPL) и меньше бобов на растение (PDPP) в теплице по сравнению с контрольными растениями ДТ. Однако эти трансгенные растения имели большее число бобов на узел (и на главный стебель) по сравнению с растениями ДТ (бобов/узел, PODMS) и фенотипы с улучшенной архитектурой растений по сравнению с экспрессией одного pAt.Erecta::Gm.FT2a (смотрите, например, таблицу 2).[205] Soybean plants containing the construct pAt.Erecta::Gm.FT2a | pSl.NOD::miRNA-FT2a , flowered earlier (DOFR1) than DT control plants and had a shorter generative stage (PDR1R7), fewer branches per plant (BRPP), fewer nodes per plant (NDPL), and fewer pods per plant ( PDPP) in greenhouse compared to DT control plants. However, these transgenic plants had higher numbers of pods per node (and per main stem) compared to DT (pods/node, PODMS) plants and phenotypes with improved plant architecture compared to expression of pAt.Erecta::Gm.FT2a alone (see e.g. table 2).
[206] Эти данные дополнительно поддерживают модель, что супрессия трансгена Gm.FT2a помогает уменьшить или смягчить фенотипы ранней терминации, но экспрессия микроРНК-FT2a под управлением промотора pSl.NOD может не быть настолько де эффективной, как в случае промотора pAP1, в смысле смягчения фенотипов ранней терминации, хотя эти трансгенные растения имели большее число бобов на узел (и на главный стебель), чем контрольные растения ДТ (бобов/узел, PODMS). [206] These data further support the model that suppression of the Gm.FT2a transgene helps to reduce or alleviate early termination phenotypes, but miRNA-FT2a expression under the control of the pSl.NOD promoter may not be as efficient as in the case of the pAP1 promoter in terms of alleviating early termination phenotypes, although these transgenic plants had a higher number of pods per node (and per main stem) than control DT plants (pods/node, PODMS).
Пример 15. Модификация эктопической экспрессии Gm.FT2a с помощью целевого сайта для гетерологичной miR172 изменяет генеративные фенотипы в тепличных условиях.Example 15 Modification of Gm.FT2a ectopic expression with a target site for heterologous miR172 alters generative phenotypes under greenhouse conditions.
[207] В качестве альтернативного подхода для супрессии Gm.FT2a создавали конструкции, содержащие трансген Gm.FT2a и сконструированную мишень или сайт связывания (или сенсор) микроРНК, который распознается эндогенной микроРНК в сое, которые служили для ослабления и/или корректировки эктопической экспрессии трансгена Gm.FT2a. Конструировали трансформационные векторы, содержащие трансген Gm.FT2a под управлением промотора pAt.Erecta (SEQ ID NO: 31) с областью терминатора Apx или Lhcb2 (T-Apx и T-Lhcb2), и дополнительно содержащие последовательность (SEQ ID NO: 98), кодирующую целевой сайт микроРНК miR172 (SEQ ID NO: 99) в мРНК трансгенного Gm.FT2a и использовали для трансформации сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, изучали в отношении их фенотипов в теплице с 14-14,5-часовым фотопериодом светового дня. Для каждой из двух конструкций pAt.Erecta::Gm.FT2a с сайтом связывания miR172 исследовали шесть событий (6 растений на событие). Также исследовали шесть растений и усредняли для контрольных растений дикого типа (ДТ). В таблицах 29 и 30 приведены усредненные фенотипические данные, полученные для каждого события и контроля ДТ для каждой из двух конструкций и усредненное значение по каждому признаку по всем исследуемым событиям.[207] As an alternative approach for suppression of Gm.FT2a , constructs were created containing the Gm.FT2a transgene and an engineered target or binding site (or sensor) of microRNA, which is recognized by endogenous microRNA in soy, which served to attenuate and/or correct ectopic expression of the transgene Gm.FT2a . Transformation vectors were constructed containing the Gm.FT2a transgene driven by the pAt.Erecta promoter (SEQ ID NO: 31) with an Apx or Lhcb2 terminator region (T-Apx and T-Lhcb2), and additionally containing the sequence (SEQ ID NO: 98), miR172 microRNA target site (SEQ ID NO: 99) in the transgenic Gm.FT2a mRNA and used to transform soybean by Agrobacterium -mediated transformation. The transgenic plants generated by these events were studied for their phenotypes in a greenhouse with a 14-14.5 hour photoperiod. For each of the two pAt.Erecta::Gm.FT2a constructs with the miR172 binding site, six events were examined (6 plants per event). Six plants were also examined and averaged over wild-type control (WT) plants. Tables 29 and 30 show the average phenotypic data obtained for each event and control DT for each of the two constructs and the average value for each trait across all events studied.
Таблица 29. Фенотипические данные для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx/целевой сайт miR172 и растений ДТ.Table 29. Phenotypic data for pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx / miR172 target site and DT plants.
узелBobov/
knot
(граммы)SW1000
(grams)
Таблица 30. Фенотипические данные для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2/целевой сайт miR172 и растений ДТ.Table 30 Phenotypic data for pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhcb2 / miR172 target site and DT plants.
(граммы)SW1000
(grams)
[208] Растения сои, содержащие любую из двух конструкций pAt.Erecta::Gm.FT2a/целевой сайт miR172, цвели раньше (DOFR1), но характеризовались сниженным ветвлением (BRPP) и меньшим числом бобов и узлов на растение (PDPP, NDPL) по сравнению с контрольными растениями ДТ. Однако эти трансгенные растения имели большее число бобов на узел (и на главный стебель) по сравнению с контрольными растениями ДТ (бобов/узел, PODMS) и фенотипы с улучшенной архитектурой растений по сравнению с экспрессией одного pAt.Erecta::Gm.FT2a (смотрите таблицу 2).[208] Soybean plants containing either of the two constructspAt.Erecta::Gm.FT2a/miR172 target site, flowered earlier (DOFR1) but had reduced branching (BRPP) and fewer pods and nodes per plant (PDPP, NDPL) compared to DT control plants. However, these transgenic plants had a higher number of pods per node (and per main stem) compared to DT (bean/node, PODMS) control plants and phenotypes with improved plant architecture compared to expressing onepAt.Erecta::Gm.FT2a(see table 2).
[209] Эти данные поддерживают гипотезу, что супрессия трансгена Gm.FT2a с помощью целевого сайта для эндогенной miR172 является эффективной для уменьшения или смягчения фенотипов ранней терминации, наблюдаемых при экспрессии трансгена Gm.FT2a, но супрессия трансгена Gm.FT2a с помощью целевого сайта для сконструированной miR172 может не быть настолько же эффективной (по меньшей мере в некоторых случаях), что и экспрессия искусственной микроРНК для супрессии Gm.FT2a с использованием промотора поздней вегетативной и/или генеративной стадии, такого как промотор pAP1, для смягчения фенотипов ранней терминации, хотя Gm.FT2a-трансгенные растения, содержащие целевой сайт miR172, имели большее число бобов на узел (и на главный стебель), чем контрольные растения ДТ (бобов/узел, PODMS) с фенотипами с улучшенной архитектурой растений по сравнению с экспрессией одного Gm.FT2a. На Фиг. 13 приведены полные изображения растений, гомозиготных в отношении pAt.Erecta::Gm.FT2a или pAt.Erecta::Gm.FT2a/целевой сайт miR172, демонстрирующие, что дополнительная супрессия с помощью целевого сайта miR172 является эффективной для смягчения фенотипов ранней терминации, наблюдаемых с одним трансгеном pAt.Erecta::Gm.FT2a, включая небольшую высоту растений и сниженное ветвление.[209] These data support the hypothesis that suppression of the Gm.FT2a transgene with a target site for endogenous miR172 is effective in reducing or alleviating the early termination phenotypes observed when the Gm.FT2a transgene is expressed, but suppressing the Gm.FT2a transgene with a target site for engineered miR172 may not be as efficient (at least in some cases) as artificial miRNA expression to suppress Gm.FT2a using a late vegetative and/or generative stage promoter such as the pAP1 promoter to mitigate early termination phenotypes, although Gm.FT2a transgenic plants containing the miR172 target site had more pods per node (and per main stem) than control DT (bean/node, PODMS) plants with phenotypes with improved plant architecture compared to Gm.FT2a alone expression . On FIG. 13 shows complete images of plants homozygous for pAt.Erecta::Gm.FT2a or pAt.Erecta::Gm.FT2a/ miR172 targeting site demonstrating that additional suppression by the miR172 targeting site is effective in mitigating the early termination phenotypes observed with one pAt.Erecta::Gm.FT2a transgene , including small plant height and reduced branching.
Пример 16. Модификация эктопической экспрессии Gm.FT2a с помощью целевого сайта для miR172 изменяет генеративные фенотипы в полевых условиях.Example 16 Modification of Gm.FT2a ectopic expression with miR172 target site alters generative phenotypes in the field.
[210] Трансгенные растения, содержащие четыре трансформационных события конструкции pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx/целевой сайт miR172, описанные в примере 15, выращивали и исследовали в полевых условиях. События 1-4 в таблице 29 соответствуют событиям 1-4 в таблице 31, соответственно. Данные получали для шести растений для каждого события и контроля ДТ. В таблице 31 приведены усредненные фенотипические данные, полученные для каждого события и контроля ДТ и усредненное значение по каждому признаку по всем событиям.[210] Transgenic plants containing the four transformation events of the pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx construct/miR172 target site described in Example 15 were grown and field tested. Events 1-4 in Table 29 correspond to Events 1-4 in Table 31, respectively. Data were obtained for six plants for each DT event and control. Table 31 shows the average phenotypic data obtained for each event and control DT and the average value for each trait across all events.
Таблица 31. Фенотипические данные для выращенных в поле растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx/целевой сайт miR172 и растений ДТ.Table 31. Phenotypic data for field grown pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx /miR172 target site and DT plants.
[211] Аналогично тепличным данным, растения сои с конструкцией pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx/целевой сайт miR172 цвели раньше (DOFR1) и имели большее число бобов на узел (и на главный стебель) на стадии R8 (PDPPR8, бобов/узел) в полевых условиях по сравнению с контрольными растениями ДТ. Однако эти растения сои с конструкцией pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx/целевой сайт miR172 также имели сниженное ветвление (BRPPR8) и сниженное число бобов и узлов на растение (PDPPR8, NDPLR8) по сравнению с контрольными растениями ДТ.[211] Similar to greenhouse data, soybean plants with construct pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx / miR172 target site flowered earlier (DOFR1) and had more pods per node (and per main stem) at the R8 stage ( PDPPR8, pod/node) in the field compared to DT control plants. However, these pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Apx /miR172 construct soybean plants also had reduced branching (BRPPR8) and reduced number of pods and nodes per plant (PDPPR8, NDPLR8) compared to DT control plants.
Пример 17. Модификация эктопической экспрессии Gm.FT2a с помощью усеченного промотора pAt.Erecta и целевого сайта для гетерологичной miR172 изменяет генеративные фенотипы в тепличных условиях.Example 17 Modification of Gm.FT2a ectopic expression with a truncated pAt.Erecta promoter and a heterologous miR172 target site altered generative phenotypes under greenhouse conditions.
[212] Усеченный промотор pAt.Erecta использовали для управления ослабленным уровнем экспрессии трансгена Gm.FT2a и сопрягали с целевым сайтом для микроРНК miR172, чтобы возможно дополнительно ослабить и/или скорректировать эктопическую экспрессию трансгена Gm.FT2a. Конструировали трансформационные векторы, содержащие трансген Gm.FT2a под управлением усеченного промотора pAt.Erecta (SEQ ID NO: 32) с областью терминатора Lhcb2 (T-Lhcb2), и дополнительно содержащие последовательность (SEQ ID NO: 98), кодирующую целевой сайт miR172 (SEQ ID NO: 99), и использовали для трансформации растений сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, изучали в отношении их фенотипов в теплице с 14-14,5-часовым фотопериодом светового дня. Для конструкции pAt.Erecta_truncated::Gm.FT2a с целевым сайтом miR172 исследовали шесть событий (6 растений на событие). Также исследовали шесть растений и усредняли для контрольных растений дикого типа (ДТ). В таблице 32 приведены усредненные фенотипические данные, полученные для каждого события и контроля ДТ и усредненное значение по каждому признаку по всем исследуемым событиям.[212] The truncated pAt.Erecta promoter was used to drive attenuated expression of the Gm.FT2a transgene and fused to the miR172 miRNA target site to possibly further attenuate and/or correct ectopic expression of the Gm.FT2a transgene. Transformation vectors were constructed containing the Gm.FT2a transgene driven by the truncated pAt.Erecta promoter (SEQ ID NO: 32) with the Lhcb2 terminator region (T-Lhcb2), and additionally containing the sequence (SEQ ID NO: 98) encoding the miR172 target site ( SEQ ID NO: 99) and used to transform soybean plants via Agrobacterium -mediated transformation. The transgenic plants generated by these events were studied for their phenotypes in a greenhouse with a 14-14.5 hour photoperiod. For the pAt.Erecta_truncated::Gm.FT2a construct with the miR172 target site, six events were examined (6 plants per event). Six plants were also examined and averaged over wild-type control (WT) plants. Table 32 shows the average phenotypic data obtained for each event and control of TD and the average value for each trait for all events studied.
Таблица 32. Фенотипические данные для растений pErecta_truncated::Gm.FT2a::T-Lhbc2/целевой сайт miR172 и растений ДТ.Table 32. Phenotypic data for plants pErecta_truncated::Gm.FT2a::T-Lhbc2 /miR172 target site and DT plants.
(граммы)SW1000
(grams)
[213] Растения сои, содержащие конструкцию pAt.Erecta_truncated::Gm.FT2a/целевой сайт miR172, цвели раньше (DOFR1), но характеризовались немного сниженным ветвлением (BRPP) и меньшим числом узлов на растение (NDPL) по сравнению с контрольными растениями ДТ. Однако эти трансгенные растения имели большее число бобов на узел (и на главный стебель) по сравнению с контрольными растениями ДТ (бобов/узел, PODMS) и фенотипы с улучшенной архитектурой растений по сравнению с экспрессией одного pAt.Erecta::Gm.FT2a (смотрите, например, таблицу 2).[213] Soybean plants containing the pAt.Erecta_truncated::Gm.FT2a/ miR172 target site flowered earlier (DOFR1) but had slightly reduced branching (BRPP) and fewer nodes per plant (NDPL) compared to DT control plants . However, these transgenic plants had higher numbers of pods per node (and per main stem) compared to DT (pods/node, PODMS) control plants and phenotypes with improved plant architecture compared to expression of pAt.Erecta::Gm.FT2a alone (see , for example, table 2).
[214] Эти данные поддерживают гипотезу, что супрессия трансгена Gm.FT2a с помощью целевого сайта для эндогенной miR172 является эффективной для уменьшения или смягчения ранней терминации, наблюдаемой при экспрессии трансгена Gm.FT2a, и/или что экспрессия трансгена Gm.FT2a с усеченным промотором pAt.Erecta может дополнительно смягчать фенотипы ранней терминации для экспрессии одного Gm.FT2a.[214] These data support the hypothesis that suppression of the Gm.FT2a transgene by a target site for endogenous miR172 is effective in reducing or alleviating the early termination observed when the Gm.FT2a transgene is expressed, and/or that expression of the Gm.FT2a transgene with a truncated promoter pAt.Erecta can further alleviate early termination phenotypes for single Gm.FT2a expression.
Пример 18. Модификация эктопической экспрессии Gm.FT2a с помощью усеченного промотора pAt.Erecta и целевого сайта miR172 изменяет генеративные фенотипы в поле.Example 18 Modification of Gm.FT2a ectopic expression with the truncated pAt.Erecta promoter and miR172 target site alters generative phenotypes in the field.
[215] Трансгенные растения в отношении трех событий конструкции pAt.Erecta_truncated::Gm.FT2a::T-Lhbc2/целевой сайт miR172, описанные в примере 18, выращивали и исследовали в полевых условиях. События 1, 2 и 5 в таблице 32 соответствуют событиям 1-3 в таблице 33, соответственно. Данные получали для шести растений для каждого события и контроля ДТ. В таблице 33 приведены усредненные фенотипические данные для каждого события и контроля ДТ и усредненное значение по каждому признаку по всем событиям.[215] Transgenic plants for the three events of the construct pAt.Erecta_truncated::Gm.FT2a::T-Lhbc2 / miR172 target site described in Example 18 were grown and field tested.
Таблица 33. Фенотипические данные для растений pErecta_truncated::Gm.FT2a::T-Lhbc2/целевой сайт miR172 и растений ДТ в поле.Table 33. Phenotypic data for pErecta_truncated::Gm.FT2a::T-Lhbc2 / miR172 target site and DT plants in the field.
(унции)SW1000
(oz)
[216] Аналогично тепличным данным, растения сои с конструкцией pAt.Erecta_truncated::Gm.FT2a/целевой сайт miR172 цвели раньше (DOFR1) и имели большее число бобов на узел (и на главный стебель) на стадии R8 (PDMSR8, бобов/узел) в полевых условиях по сравнению с контрольными растениями ДТ. Однако эти растения сои с конструкцией pAt.Erecta_truncated::Gm.FT2a/целевой сайт miR172 также имели сниженное ветвление (BRPPR8) и сниженное число бобов и узлов на растение (NDPLR8) по сравнению с контрольными растениями ДТ.[216] Similar to greenhouse data, soybean plants with construct pAt.Erecta_truncated::Gm.FT2a / miR172 target site flowered earlier (DOFR1) and had more pods per node (and per main stem) at the R8 stage (PDMSR8, pods/node ) in the field compared to control DT plants. However, these soybean plants with construct pAt.Erecta_truncated::Gm.FT2a /miR172 target site also had reduced branching (BRPPR8) and reduced number of pods and nodes per plant (NDPLR8) compared to DT control plants.
Пример 19. Модификация эктопической экспрессии Gm.FT2a и нативной экспрессии Gm.FT2a, Gm.FT5a и Gm.FT5b в сое с помощью искусственной микроРНК изменяет генеративные фенотипы.Example 19 Modification of ectopic expression of Gm.FT2a and native expression of Gm.FT2a , Gm.FT5a and Gm.FT5b in soybean with artificial miRNA alters generative phenotypes.
[217] Конструировали трансформационный вектор и использовали для трансформации растений сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации, при этом вектор содержал трансген Gm.FT2a, как описано выше, под управлением меристемо-предпочтительного промотора вегетативной стадии pAt.Erecta (SEQ ID NO: 31) с областью терминатора Lhcb2 (T-Lhcb2), и последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую искусственную микроРНК (SEQ ID NO: 102), которая нацелена не только на Gm.FT2a (эктопический и эндогенный), но также на эндогенные гены Gm.FT5a и Gm.FT5b для супрессии, при этом последовательность ДНК пригодная для транскрипции, кодирующая микроРНК, находится под управлением промотора pAt.AP1 (SEQ ID NO: 49) с областью терминатора GAPDH. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, изучали в теплице в условиях 14-14,5-часового фотопериода светового дня. Данные получали для шести растений для каждого события и контроля ДТ. В таблице 34 приведены усредненные фенотипические данные, полученные для каждого события и контроля ДТ и усредненное значение по каждому признаку по всем событиям.[217] A transformation vector was constructed and used to transform soybean plants by Agrobacterium -mediated transformation, the vector containing the Gm.FT2a transgene as described above under the control of the meristem-preferred vegetative stage promoter pAt.Erecta (SEQ ID NO: 31) with terminator region Lhcb2 (T-Lhcb2), and a DNA sequence suitable for transcription encoding an artificial miRNA (SEQ ID NO: 102) that targets not only Gm.FT2a (ectopic and endogenous), but also endogenous Gm.FT5a and Gm.FT5b for suppression, while the DNA sequence suitable for transcription, encoding microRNA, is under the control of the pAt.AP1 promoter (SEQ ID NO: 49) with the GAPDH terminator region. Transgenic plants created by these events were studied in a greenhouse under conditions of 14-14.5-hour daylight photoperiod. Data were obtained for six plants for each DT event and control. Table 34 shows the average phenotypic data obtained for each event and control DT and the average value for each trait across all events.
Таблица 34. Фенотипические данные для растений pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhbc2 | pAP1::miRNA-FT2a/FT5a/FT5b::T-GAPDH и растений ДТ, выращенных в теплице.Table 34. Phenotypic data for plants pAt.Erecta::Gm.FT2a::T-Lhbc2 | pAP1::miRNA-FT2a/FT5a/FT5b::T-GAPDH and greenhouse grown DT plants.
(граммы)SW1000
(grams)
[218] В таблице 34 приведены измерения некоторых дополнительных признаков, включая PDNDBRR8 (число бобов на узел на ветках) и PDNDMSR8 (число бобов на узел на главном стебле) на стадии R8, PHTR8 (высота растения на стадии R8 в миллиметрах), SDPDR8 (число семян на боб на R8) и SNUM (число семян на растение). Растения сои, экспрессирующие кассету pAt.Erecta::Gm.FT2a с комбинированной супрессией Gm.FT2a, Gm.FT5a и Gm.FT5b, цвели раньше (DOFR1) и имели существенно увеличенное число бобов на узел (и увеличенное число бобов на главном стебле), но сниженное ветвление по сравнению с контрольными растениями ДТ.[218] Table 34 shows measurements of some additional traits, including PDNDBRR8 (beans per node on branches) and PDNDMSR8 (beans per node on main stem) at stage R8, PHTR8 (plant height at stage R8 in millimeters), SDPDR8 ( number of seeds per bean at R8) and SNUM (number of seeds per plant). Soybean plants expressing the pAt.Erecta::Gm.FT2a cassette with combined suppression of Gm.FT2a , Gm.FT5a and Gm.FT5b flowered earlier (DOFR1) and had a significantly increased number of pods per node (and an increased number of pods per main stem) but reduced branching compared to DT control plants.
Пример 20. Экспрессия эктопического Gm.FT2a под управлением промотора pAP1 изменяет время цветения и число бобов на узел в сое.Example 20 Expression of ectopic Gm.FT2a under the control of the pAP1 promoter changes the flowering time and the number of pods per node in soybeans.
[219] Конструировали трансформационный вектор, содержащий Gm.FT2a под управлением промотора pAt.AP1 с областью терминатора Lhcb2, и использовали для трансформации сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, изучали в теплице с 14-14,5-часовым фотопериодом светового дня. Данные получали для шести растений для каждого события и контроля ДТ. В таблице 35 приведены усредненные фенотипические данные, полученные для каждого события и контроля ДТ и усредненное значение по каждому признаку по всем событиям.[219] A transformation vector containing Gm.FT2a under the control of the pAt.AP1 promoter with an Lhcb2 terminator region was constructed and used to transform soybean by Agrobacterium -mediated transformation. The transgenic plants generated by these events were studied in a greenhouse with a 14-14.5 hour photoperiod. Data were obtained for six plants for each DT event and control. Table 35 shows the average phenotypic data obtained for each event and control DT and the average value for each trait across all events.
Таблица 35. Фенотипические данные для растений pAt.AP1::Gm.FT2a::T-Lhbc2 и растений ДТ, выращиваемых в теплице.Table 35 Phenotypic data for greenhouse grown pAt.AP1::Gm.FT2a::T-Lhbc2 and DT plants.
(граммы)SW1000
(grams)
[220] Растения сои, экспрессирующие кассету pAt.AP1::Gm.FT2a::T-Lhbc2, цвели раньше (DOFR1) и имели существенно увеличенное число бобов на узел (и увеличенное число бобов на главном стебле), но сниженное ветвление по сравнению с контрольными растениями ДТ. Ранние полевые исследования с этой конструкцией также продемонстрировали раннее цветение, показывая, таким образом, что в растениях, выращиваемых в полевых условиях, будут наблюдаться сходные генеративные признаки.[220] Soybean plants expressing the pAt.AP1::Gm.FT2a::T-Lhbc2 cassette flowered earlier (DOFR1) and had a significantly increased number of beans per node (and an increased number of beans on the main stem), but reduced branching compared to with control plants DT. Early field studies with this construct also demonstrated early flowering, thus indicating that plants grown in the field will exhibit similar generative traits.
Пример 21. Экспрессия эктопического Gm.FT2a под управлением промотора pSl.Nod в сое.Example 21 Expression of ectopic Gm.FT2a under the control of the pSl.Nod promoter in soy.
[221] Конструировали трансформационный вектор, содержащий Gm.FT2a под управлением промотора pSl.Nod с областью терминатора Lhcb2, и использовали для трансформации сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, изучали в теплице с 14-14,5-часовым фотопериодом светового дня. Данные получали для шести растений для каждого события и контроля ДТ. В таблице 36 приведены усредненные фенотипические данные, полученные для каждого события и контроля ДТ и усредненное значение по каждому признаку по всем событиям.[221] A transformation vector containing Gm.FT2a driven by the pSl.Nod promoter with an Lhcb2 terminator region was constructed and used to transform soybean by Agrobacterium -mediated transformation. The transgenic plants generated by these events were studied in a greenhouse with a 14-14.5 hour photoperiod. Data were obtained for six plants for each DT event and control. Table 36 shows the average phenotypic data obtained for each event and control DT and the average value for each trait across all events.
Таблица 36. Фенотипические данные для растений pSl.Nod::Gm.FT2a::T-Lhbc2 и растений ДТ в теплице.Table 36 Phenotypic data for pSl.Nod::Gm.FT2a::T-Lhbc2 plants and greenhouse DT plants.
[222] В этих экспериментах не наблюдали существенных изменений между растениями pSl.Nod::Gm.FT2a::T-Lhbc2 и растениями ДТ. Ранние полевые результаты с этой конструкцией дополнительно показывают отсутствие изменений в начале цветения.[222] In these experiments, no significant changes were observed between pSl.Nod::Gm.FT2a::T-Lhbc2 plants and DT plants. Early field results with this construct further show no change at the onset of flowering.
Пример 22. Модификация Gm.FT2a под управлением промотора pAt.Erl1 с помощью искусственной микроРНК, управляемой промотором pSl.MADS-RIN, в сое.Example 22 Modification of Gm.FT2a driven by the pAt.Erl1 promoter with an artificial microRNA driven by the pSl.MADS-RIN promoter in soy.
[223] Чтобы проверить гипотезу, что супрессия Gm.FT2a в поздних вегетативных и/или генеративных тканях после исходной эктопической экспрессии трансгенного Gm.FT2a может продлевать генеративную стадию в растениях сои, конструировали трансформационный вектор, содержащий Gm.FT2a под управлением меристемо-предпочтительного промотора вегетативной стадии pAt.Erl1 (SEQ ID NO: 44) с областью терминатора GAPDH (T-GAPDH), и последовательность ДНК пригодную для транскрипции, кодирующую искусственную микроРНК (SEQ ID NO: 67), нацеленную на Gm.FT2a для супрессии и под управлением промотора pSl.MADS-RIN (SEQ ID NO: 72) с областью терминатора T-Apx и использовали для трансформации сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, изучали в теплице с 14-14,5-часовым фотопериодом светового дня. Данные получали для шести растений для каждого события и контроля ДТ. В таблице 37 приведены усредненные фенотипические данные, полученные для каждого события и контроля ДТ и усредненное значение по каждому признаку по всем событиям.[223] To test the hypothesis that suppression of Gm.FT2a in late vegetative and/or generative tissues following initial ectopic expression of transgenic Gm.FT2a may prolong the generative stage in soybean plants, a transformation vector was constructed containing Gm.FT2a under the control of a meristem-preferred promoter. vegetative stage pAt.Erl1 (SEQ ID NO: 44) with a GAPDH terminator region (T-GAPDH), and a transcriptionable DNA sequence encoding an artificial miRNA (SEQ ID NO: 67) targeting Gm.FT2a for suppression and control pSl.MADS-RIN promoter (SEQ ID NO: 72) with a T-Apx terminator region and used to transform soybean by Agrobacterium -mediated transformation. The transgenic plants generated by these events were studied in a greenhouse with a 14-14.5 hour photoperiod. Data were obtained for six plants for each DT event and control. Table 37 shows the average phenotypic data obtained for each event and control DT and the average value for each trait across all events.
Таблица 37. Фенотипические данные для растений pAt.Erl1::Gm.FT2a::T-GAPDH | pSl.MADS-RIN::miRNA-FT2a:: T-Apx и растений ДТ, выращиваемых в теплице.Table 37. Phenotypic data for pAt.Erl1::Gm.FT2a::T-GAPDH | pSl.MADS-RIN::miRNA-FT2a:: T-Apx and greenhouse grown DT plants.
[224] Растения сои, экспрессирующие кассеты pAt.Erl1::Gm.FT2a::T-GAPDH | pSl.MADS-RIN::miRNA-FT2a, цвели немного раньше (DOFR1) и имели немного увеличенное число бобов на узел (и немного увеличенное число бобов на главном стебле) и умеренное снижение ветвления по сравнению с контрольными растениями ДТ. Ранние полевые результаты с этой конструкцией также продемонстрировали умеренно-раннее цветение, показывая, что в растениях, выращиваемых в полевых условиях, будут наблюдаться сходные умеренные изменения в генеративных признаках.[224] Soybean plants expressing pAt.Erl1::Gm.FT2a::T-GAPDH cassettes | pSl.MADS-RIN::miRNA-FT2a , flowered slightly earlier (DOFR1) and had a slightly increased number of pods per node (and a slightly increased number of pods per main stem) and a modest reduction in branching compared to DT control plants. Early field results with this construct also showed moderate early flowering, indicating that plants grown in the field will show similar moderate changes in generative traits.
Пример 23. Модификация эктопической экспрессии Gm.FT2a с помощью промотора pAt.Erl1 и сенсора miR156 изменяет время цветения.Example 23 Promoter Modification of Gm.FT2a Ectopic ExpressionpAt.Erl1and miR156 sensor changes the flowering time.
[225] Конструировали трансформационный вектор, содержащий Gm.FT2a под управлением меристемо-предпочтительного промотора вегетативной стадии pAt.Erl1 (SEQ ID NO: 44) с целевым сайтом miR156 (SEQ ID NO: 106) и областью терминатора GAPDH (T-GAPDH) и использовали для трансформации сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, исследовали в поле. Данные получали для шести растений для каждого события и контроля ДТ. Ранние полевые результаты с этой конструкцией продемонстрировали раннее цветение, показывая, что в растениях, выращиваемых в теплице или в поле, вероятно будут наблюдаться умеренные изменения в генеративных признаках, включая увеличенное число бобов на узел.[225] A transformation vector was constructed containing Gm.FT2a driven by the meristem-preferred vegetative stage promoter pAt.Erl1 (SEQ ID NO: 44) with the miR156 target site (SEQ ID NO: 106) and the GAPDH terminator region (T-GAPDH) and used to transform soybean by Agrobacterium -mediated transformation. The transgenic plants created by these events were tested in the field. Data were obtained for six plants for each DT event and control. Early field results with this construct demonstrated early flowering, indicating that plants grown in the greenhouse or in the field are likely to experience moderate changes in generative traits, including an increased number of pods per node.
Пример 24. Модификация эктопической экспрессии Gm.FT2a с помощью усеченного промотора pAt.Erecta изменяет время цветения.Example 24 Modification of Gm.FT2a ectopic expression with a truncated pAt.Erecta promoter alters flowering time.
[226] Конструировали трансформационный вектор, содержащий Gm.FT2a под управлением более короткого усеченного промотора pAt.Erecta (SEQ ID NO: 48) с областью терминатора Lhcb2 (T-Lhcb2) и использовали для трансформации сои посредством Agrobacterium-опосредованной трансформации. Трансгенные растения, созданные с помощью этих событий, исследовали в поле. Данные получали для шести растений для каждого события и контроля ДТ. Ранние полевые результаты с этой конструкцией продемонстрировали немного более раннее начало цветения, показывая, что в растениях, выращиваемых в теплице или в поле, вероятно будут наблюдаться небольшие или умеренные изменения в генеративных признаках, включая немного увеличенное число бобов на узел. Таким образом, наиболее ослабленные генеративные фенотипы и смягченные эффекты ранней терминации могут обеспечиваться этим более минимальным усеченным промотором pAt.Erecta (по сравнению с примерами 3 и 17).[226] A transformation vector containing Gm.FT2a driven by a shorter truncated pAt.Erecta promoter (SEQ ID NO: 48) with an Lhcb2 (T-Lhcb2) terminator region was constructed and used to transform soybean via Agrobacterium-mediated transformation. The transgenic plants created by these events were tested in the field. Data were obtained for six plants for each DT event and control. Early field results with this construct showed a slightly earlier onset of flowering, indicating that plants grown in the greenhouse or in the field are likely to show slight to moderate changes in generative traits, including a slightly increased number of pods per node. Thus, the most attenuated generative phenotypes and milder effects of early termination can be provided by this more minimal truncated pAt.Erecta promoter (compared to examples 3 and 17).
[227] После подробного описания данного изобретения станет очевидной возможность модификаций, вариаций и эквивалентных вариантов реализации без отступления от сути и объема данного изобретения, описанного в данном документе и прилагаемой формуле изобретения. Кроме того, следует понимать, что все примеры в данном описании приведены в качестве неограничивающих примеров.[227] After a detailed description of the present invention, the possibility of modifications, variations, and equivalent implementations will become apparent without departing from the spirit and scope of the present invention as described herein and in the appended claims. In addition, it should be understood that all examples in this description are given as non-limiting examples.
--->--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ SEQUENCE LIST
<110> MONSANTO TECHNOLOGY LLC<110> MONSANTO TECHNOLOGY LLC
BROWER-TOLAND, Brent BROWER-TOLAND, Brent
DAI, Shunhong Dai, Shunhong
GABBERT, Karen GABBERT, Karen
GOLDSHMIDT, Alexander GOLDSHMIDT, Alexander
HOWELL, Miya HOWELL, Miya
MCDILL, Brad MCDILL, Brad
OVADYA, Dan OVADYA, Dan
SAVIDGE, Beth SAVIDGE, Beth
SHARMA, Vijay SHARMA, Vijay
<120> КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ ИЗМЕНЕНИЯ ЦВЕТЕНИЯ<120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR FLOWER CHANGE
И АРХИТЕКТУРЫ РАСТЕНИЙ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ ПОТЕНЦИАЛА УРОЖАЙНОСТИAND PLANT ARCHITECTURE TO IMPROVE YIELD POTENTIAL
<130> P34461WO00<130> P34461WO00
<150> US 62/410355 <150> US 62/410355
<151> 2016-10-19<151> 2016-10-19
<150> US 62/411408<150> US 62/411408
<151> 2016-10-21<151> 2016-10-21
<160> 110 <160> 110
<170> PatentIn версия 3.5<170> PatentIn version 3.5
<210> 1<210> 1
<211> 531<211> 531
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 1<400> 1
atgcctagtg gaagtaggga tcctctcgtt gttgggggag taattgggga tgtattggat 60atgcctagtg gaagtaggga tcctctcgtt gttgggggag taattgggga tgtattggat 60
ccttttgaat attctattcc tatgagggtt acctacaata acagagatgt cagcaatgga 120ccttttgaat attctattcc tatgaggggtt acctacaata acagagatgt cagcaatgga 120
tgtgaattca aaccctcaca agttgtcaac caaccaaggg taaatatcgg tggtgatgac 180tgtgaattca aaccctcaca agttgtcaac caaccaaggg taaatatcgg tggtgatgac 180
ctcaggaact tctatacttt gattgcggtt gatcccgatg cacctagccc aagtgacccc 240ctcaggaact tctatacttt gattgcggtt gatcccgatg cacctagccc aagtgacccc 240
aatttgagag aatacctcca ttggttggtg actgatatcc cagcaacaac aggggctagt 300aatttgagag aatacctcca ttggttggtg actgatatcc cagcaacaac aggggctagt 300
ttcggccatg aggttgtaac atatgaaagt ccaagaccaa tgatggggat tcatcgtttg 360ttcggccatg aggttgtaac atatgaaagt ccaagaccaa tgatggggat tcatcgtttg 360
gtgtttgtgt tatttcgtca actgggtagg gagaccgtgt atgcaccagg atggcgccag 420gtgtttgtgt tatttcgtca actgggtagg gagaccgtgt atgcaccagg atggcgccag 420
aatttcaaca ctaaagaatt tgctgaactt tacaaccttg gattgccagt tgctgctgtc 480aatttcaaca ctaaagaatt tgctgaactt tacaaccttg gattgccagt tgctgctgtc 480
tatttcaaca ttcagaggga atctggttct ggtggaagga ggttatacta a 531tatttcaaca ttcagaggga atctggttct ggtggaagga ggttatacta a 531
<210> 2<210> 2
<211> 176<211> 176
<212> Белок<212> Protein
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 2<400> 2
Met Pro Ser Gly Ser Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Gly Val Ile Gly Met Pro Ser Gly Ser Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Gly Val Ile Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Val Leu Asp Pro Phe Glu Tyr Ser Ile Pro Met Arg Val Thr Tyr Asp Val Leu Asp Pro Phe Glu Tyr Ser Ile Pro Met Arg Val Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Asn Asn Arg Asp Val Ser Asn Gly Cys Glu Phe Lys Pro Ser Gln Val Asn Asn Arg Asp Val Ser Asn Gly Cys Glu Phe Lys Pro Ser Gln Val
35 40 45 35 40 45
Val Asn Gln Pro Arg Val Asn Ile Gly Gly Asp Asp Leu Arg Asn Phe Val Asn Gln Pro Arg Val Asn Ile Gly Gly Asp Asp Leu Arg Asn Phe
50 55 60 50 55 60
Tyr Thr Leu Ile Ala Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asp Pro Tyr Thr Leu Ile Ala Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asp Pro
65 70 75 80 65 70 75 80
Asn Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Asn Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr
85 90 95 85 90 95
Thr Gly Ala Ser Phe Gly His Glu Val Val Thr Tyr Glu Ser Pro Arg Thr Gly Ala Ser Phe Gly His Glu Val Val Thr Tyr Glu Ser Pro Arg
100 105 110 100 105 110
Pro Met Met Gly Ile His Arg Leu Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Leu Pro Met Met Gly Ile His Arg Leu Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Leu
115 120 125 115 120 125
Gly Arg Glu Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr Gly Arg Glu Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr
130 135 140 130 135 140
Lys Glu Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val Lys Glu Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val
145 150 155 160 145 150 155 160
Tyr Phe Asn Ile Gln Arg Glu Ser Gly Ser Gly Gly Arg Arg Leu Tyr Tyr Phe Asn Ile Gln Arg Glu Ser Gly Ser Gly Gly Arg Arg Leu Tyr
165 170 175 165 170 175
<210> 3<210> 3
<211> 519<211> 519
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 3<400> 3
atggcacggg agaaccctct tgttattggt ggtgtgattg gggatgttct caaccctttt 60atggcacggg agaaccctct tgttattggt ggtgtgattg gggatgttct caaccctttt 60
acaagctccg tttctttgac tgtttcaatc aataataggg cgattagcaa tggcttggaa 120acaagctccg tttctttgac tgtttcaatc aataataggg cgattagcaa tggcttggaa 120
ctcaggccct ctcaagttgt taatcgccct agggttactg ttggtggtga agacctaagg 180ctcaggccct ctcaagttgt taatcgccct agggttactg ttggtggtga agacctaagg 180
accttctaca ctctggttat ggtggatgca gatgcaccta gccctagcaa ccctgtcttg 240accttctaca ctctggttat ggtggatgca gatgcaccta gccctagcaa ccctgtcttg 240
agggaatacc ttcactggat ggtgacagat attccagcta ccacaaatgc aagctttggg 300agggaatacc ttcactggat ggtgacagat attccagcta ccacaaatgc aagctttggg 300
agagaggttg tgttttatga gagcccgaac ccttcagtag ggattcatcg aatcgtgttc 360agagaggttg tgttttatga gagcccgaac ccttcagtag ggattcatcg aatcgtgttc 360
gtattgttcc agcaattggg cagagacact gtcatcaccc cagaatggcg ccataatttc 420gtattgttcc agcaattggg cagagacact gtcatcaccc cagaatggcg ccataatttc 420
aattccagaa actttgctga aattaataac cttgcacctg ttgcagcagc ttatgccaac 480aattccagaa actttgctga aattaataac cttgcacctg ttgcagcagc ttatgccaac 480
tgccaaagag agcgtggttg cggtggaagg agatattaa 519tgccaaagag agcgtggttg cggtggaagg agatattaa 519
<210> 4<210> 4
<211> 172<211> 172
<212> Белок<212> Protein
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 4<400> 4
Met Ala Arg Glu Asn Pro Leu Val Ile Gly Gly Val Ile Gly Asp Val Met Ala Arg Glu Asn Pro Leu Val Ile Gly Gly Val Ile Gly Asp Val
1 5 10 15 1 5 10 15
Leu Asn Pro Phe Thr Ser Ser Val Ser Leu Thr Val Ser Ile Asn Asn Leu Asn Pro Phe Thr Ser Ser Val Ser Leu Thr Val Ser Ile Asn Asn
20 25 30 20 25 30
Arg Ala Ile Ser Asn Gly Leu Glu Leu Arg Pro Ser Gln Val Val Asn Arg Ala Ile Ser Asn Gly Leu Glu Leu Arg Pro Ser Gln Val Val Asn
35 40 45 35 40 45
Arg Pro Arg Val Thr Val Gly Gly Glu Asp Leu Arg Thr Phe Tyr Thr Arg Pro Arg Val Thr Val Gly Gly Glu Asp Leu Arg Thr Phe Tyr Thr
50 55 60 50 55 60
Leu Val Met Val Asp Ala Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asn Pro Val Leu Leu Val Met Val Asp Ala Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asn Pro Val Leu
65 70 75 80 65 70 75 80
Arg Glu Tyr Leu His Trp Met Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr Asn Arg Glu Tyr Leu His Trp Met Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr Asn
85 90 95 85 90 95
Ala Ser Phe Gly Arg Glu Val Val Phe Tyr Glu Ser Pro Asn Pro Ser Ala Ser Phe Gly Arg Glu Val Val Phe Tyr Glu Ser Pro Asn Pro Ser
100 105 110 100 105 110
Val Gly Ile His Arg Ile Val Phe Val Leu Phe Gln Gln Leu Gly Arg Val Gly Ile His Arg Ile Val Phe Val Leu Phe Gln Gln Leu Gly Arg
115 120 125 115 120 125
Asp Thr Val Ile Thr Pro Glu Trp Arg His Asn Phe Asn Ser Arg Asn Asp Thr Val Ile Thr Pro Glu Trp Arg His Asn Phe Asn Ser Arg Asn
130 135 140 130 135 140
Phe Ala Glu Ile Asn Asn Leu Ala Pro Val Ala Ala Ala Tyr Ala Asn Phe Ala Glu Ile Asn Asn Leu Ala Pro Val Ala Ala Ala Tyr Ala Asn
145 150 155 160 145 150 155 160
Cys Gln Arg Glu Arg Gly Cys Gly Gly Arg Arg Tyr Cys Gln Arg Glu Arg Gly Cys Gly Gly Arg Arg Tyr
165 170 165 170
<210> 5<210> 5
<211> 531<211> 531
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 5<400> 5
atgcctcgtg gaagtaggga ccctctagtt gttgggcgtg tgattgggga tgtattggac 60atgcctcgtg gaagtaggga ccctctagtt gttgggcgtg tgattgggga tgtattggac 60
ccttttgaat gttctattcc tatgagggtc acctacaata acaaagatgt cagcaatgga 120ccttttgaat gttctattcc tatgagggtc acctacaata acaaagatgt cagcaatgga 120
tgtgaattca aaccctcaca agttgtcaac caaccaagaa taaatatcgg tggtgatgat 180tgtgaattca aaccctcaca agttgtcaac caaccaagaa taaatatcgg tggtgatgat 180
ttcaggaact tctacacttt gatcgcggtt gatcctgatg cacctagccc aagtgatccc 240ttcaggaact tctacacttt gatcgcggtt gatcctgatg cacctagccc aagtgatccc 240
aatttcagag aatacctcca ttggttagta actgacattc cagcaacaac ggggcctact 300aatttcagag aatacctcca ttggttagta actgacattc cagcaacaac ggggcctact 300
ttcggtcatg aggttgtaac atatgaaaat ccacgaccca tgatggggat ccatcgtata 360ttcggtcatg aggttgtaac atatgaaaat ccacgaccca tgatggggat ccatcgtata 360
gtctttgtgt tatttcgtca acagggtaga gagacagtgt atgcaccagg atggcgccaa 420gtctttgtgt tatttcgtca acagggtaga gagacagtgt atgcaccagg atggcgccaa 420
aatttcatta ctagagaatt tgctgaactt tacaatcttg gattgccagt tgctgctgtc 480aatttcatta ctagagaatt tgctgaactt tacaatcttg gattgccagt tgctgctgtc 480
tattttaaca tccagagaga atctggttgt ggtggaagaa ggctatgtta a 531a 531
<210> 6<210> 6
<211> 176<211> 176
<212> Белок<212> Protein
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 6<400> 6
Met Pro Arg Gly Ser Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Arg Val Ile Gly Met Pro Arg Gly Ser Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Arg Val Ile Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Val Leu Asp Pro Phe Glu Cys Ser Ile Pro Met Arg Val Thr Tyr Asp Val Leu Asp Pro Phe Glu Cys Ser Ile Pro Met Arg Val Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Asn Asn Lys Asp Val Ser Asn Gly Cys Glu Phe Lys Pro Ser Gln Val Asn Asn Lys Asp Val Ser Asn Gly Cys Glu Phe Lys Pro Ser Gln Val
35 40 45 35 40 45
Val Asn Gln Pro Arg Ile Asn Ile Gly Gly Asp Asp Phe Arg Asn Phe Val Asn Gln Pro Arg Ile Asn Ile Gly Gly Asp Asp Phe Arg Asn Phe
50 55 60 50 55 60
Tyr Thr Leu Ile Ala Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asp Pro Tyr Thr Leu Ile Ala Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asp Pro
65 70 75 80 65 70 75 80
Asn Phe Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Asn Phe Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr
85 90 95 85 90 95
Thr Gly Pro Thr Phe Gly His Glu Val Val Thr Tyr Glu Asn Pro Arg Thr Gly Pro Thr Phe Gly His Glu Val Val Thr Tyr Glu Asn Pro Arg
100 105 110 100 105 110
Pro Met Met Gly Ile His Arg Ile Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Gln Pro Met Met Gly Ile His Arg Ile Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Gln
115 120 125 115 120 125
Gly Arg Glu Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Ile Thr Gly Arg Glu Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Ile Thr
130 135 140 130 135 140
Arg Glu Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val Arg Glu Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val
145 150 155 160 145 150 155 160
Tyr Phe Asn Ile Gln Arg Glu Ser Gly Cys Gly Gly Arg Arg Leu Cys Tyr Phe Asn Ile Gln Arg Glu Ser Gly Cys Gly Gly Arg Arg Leu Cys
165 170 175 165 170 175
<210> 7<210> 7
<211> 528<211> 528
<212> ДНК<212> DNA
<213> Zea mays<213> Zea mays
<400> 7<400> 7
atgtcagcaa ccgatcattt ggttatggct cgtgtcatac aggatgtatt ggatcccttt 60atgtcagcaa ccgatcattt ggttatggct cgtgtcatac aggatgtatt ggatcccttt 60
acaccaacca ttccactaag aataacgtac aacaataggc tacttctgcc aagtgctgag 120acaccaacca ttcactaag aataacgtac aacaataggc tacttctgcc aagtgctgag 120
ctaaagccat ccgcggttgt aagtaaacca cgagtcgata tcggtggcag tgacatgagg 180ctaaagccat ccgcggttgt aagtaaacca cgagtcgata tcggtggcag tgacatgagg 180
gctttctaca ccctggtact gattgacccg gatgccccaa gtccaagcca tccatcacta 240gctttctaca ccctggtact gattgacccg gatgccccaa gtccaagcca tccatcacta 240
agggagtact tgcactggat ggtgacagat attccagaaa caactagtgt caactttggc 300agggagtact tgcactggat ggtgacagat attccagaaa caactagtgt caactttggc 300
caagagctaa tattttatga gaggccggac ccaagatctg gcatccacag gctggtattt 360caagagctaa tattttatga gaggccggac ccaagatctg gcatccacag gctggtattt 360
gtgctgttcc gtcaacttgg cagggggaca gtttttgcac cagaaatgcg ccacaacttc 420gtgctgttcc gtcaacttgg cagggggaca gtttttgcac cagaaatgcg ccacaacttc 420
aactgcagaa gctttgcacg gcaatatcac ctcagcattg ccaccgctac acatttcaac 480aactgcagaa gctttgcacg gcaatatcac ctcagcattg ccaccgctac acatttcaac 480
tgtcaaaggg aaggtggatc cggcggaaga aggtttaggg aagagtag 528tgtcaaaggg aaggtggatc cggcggaaga aggtttaggg aaagtag 528
<210> 8<210> 8
<211> 175<211> 175
<212> Белок<212> Protein
<213> Zea mays<213> Zea mays
<400> 8<400> 8
Met Ser Ala Thr Asp His Leu Val Met Ala Arg Val Ile Gln Asp Val Met Ser Ala Thr Asp His Leu Val Met Ala Arg Val Ile Gln Asp Val
1 5 10 15 1 5 10 15
Leu Asp Pro Phe Thr Pro Thr Ile Pro Leu Arg Ile Thr Tyr Asn Asn Leu Asp Pro Phe Thr Pro Thr Ile Pro Leu Arg Ile Thr Tyr Asn Asn
20 25 30 20 25 30
Arg Leu Leu Leu Pro Ser Ala Glu Leu Lys Pro Ser Ala Val Val Ser Arg Leu Leu Leu Pro Ser Ala Glu Leu Lys Pro Ser Ala Val Val Ser
35 40 45 35 40 45
Lys Pro Arg Val Asp Ile Gly Gly Ser Asp Met Arg Ala Phe Tyr Thr Lys Pro Arg Val Asp Ile Gly Ser Asp Met Arg Ala Phe Tyr Thr
50 55 60 50 55 60
Leu Val Leu Ile Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser His Pro Ser Leu Leu Val Leu Ile Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser His Pro Ser Leu
65 70 75 80 65 70 75 80
Arg Glu Tyr Leu His Trp Met Val Thr Asp Ile Pro Glu Thr Thr Ser Arg Glu Tyr Leu His Trp Met Val Thr Asp Ile Pro Glu Thr Thr Ser
85 90 95 85 90 95
Val Asn Phe Gly Gln Glu Leu Ile Phe Tyr Glu Arg Pro Asp Pro Arg Val Asn Phe Gly Gln Glu Leu Ile Phe Tyr Glu Arg Pro Asp Pro Arg
100 105 110 100 105 110
Ser Gly Ile His Arg Leu Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Leu Gly Arg Ser Gly Ile His Arg Leu Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Leu Gly Arg
115 120 125 115 120 125
Gly Thr Val Phe Ala Pro Glu Met Arg His Asn Phe Asn Cys Arg Ser Gly Thr Val Phe Ala Pro Glu Met Arg His Asn Phe Asn Cys Arg Ser
130 135 140 130 135 140
Phe Ala Arg Gln Tyr His Leu Ser Ile Ala Thr Ala Thr His Phe Asn Phe Ala Arg Gln Tyr His Leu Ser Ile Ala Thr Ala Thr His Phe Asn
145 150 155 160 145 150 155 160
Cys Gln Arg Glu Gly Gly Ser Gly Gly Arg Arg Phe Arg Glu Glu Cys Gln Arg Glu Gly Gly Ser Gly Gly Arg Arg Phe Arg Glu Glu
165 170 175 165 170 175
<210> 9<210> 9
<211> 525<211> 525
<212> ДНК<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum<213> Nicotiana tabacum
<400> 9<400> 9
atgccaagaa tagatccttt gatagttggt cgtgtggtag gagatgtttt agatccattc 60atgccaagaa tagatccttt gatagttggt cgtgtggtag gagatgtttt agatccattc 60
acaaggtctg ttgatcttag agtggtttac aataataggg aagtcaacaa tgcatgtggc 120acaaggtctg ttgatcttag agtggtttac aataataggg aagtcaacaa tgcatgtggc 120
ttgaaacctt ctcaaattgt tacgcaacct agggttcaaa ttggagggga tgatcttcgc 180ttgaaacctt ctcaaattgt tacgcaacct agggttcaaa ttggagggga tgatcttcgc 180
aacttttaca ctctggttat ggtggatcct gatgctccaa gcccaagcaa ccctaacctg 240aacttttaca ctctggttat ggtggatcct gatgctccaa gcccaagcaa ccctaacctg 240
agggagtatc tacactggct ggtcacagat atcccagcaa ctacagatac aagctttgga 300agggagtatc tacactggct ggtcacagat atcccagcaa ctacagatac aagctttgga 300
aatgaagtta tatgctacga gaatccacaa ccatcattgg gaattcatcg ctttgttttc 360aatgaagtta tatgctacga gaatccacaa ccatcattgg gaattcatcg ctttgttttc 360
gtgttgtttc gacaattggg tcgcgaaact gtgtatgcac caggttggcg tcagaatttc 420gtgttgtttc gacaattggg tcgcgaaact gtgtatgcac caggttggcg tcagaatttc 420
agcacaagag actttgcaga agtttacaat cttggtttgc ccgtttctgc tgtttacttc 480agcacaagag actttgcaga agtttacaat cttggtttgc ccgtttctgc tgtttacttc 480
aattgccata gggagagtgg tactggtggc cgccgcgcat attaa 525aattgccata gggagagtgg tactggtggc cgccgcgcat attaa 525
<210> 10<210> 10
<211> 174<211> 174
<212> Белок<212> Protein
<213> Nicotiana tabacum<213> Nicotiana tabacum
<400> 10<400> 10
Met Pro Arg Ile Asp Pro Leu Ile Val Gly Arg Val Val Gly Asp Val Met Pro Arg Ile Asp Pro Leu Ile Val Gly Arg Val Val Gly Asp Val
1 5 10 15 1 5 10 15
Leu Asp Pro Phe Thr Arg Ser Val Asp Leu Arg Val Val Tyr Asn Asn Leu Asp Pro Phe Thr Arg Ser Val Asp Leu Arg Val Val Tyr Asn Asn
20 25 30 20 25 30
Arg Glu Val Asn Asn Ala Cys Gly Leu Lys Pro Ser Gln Ile Val Thr Arg Glu Val Asn Asn Ala Cys Gly Leu Lys Pro Ser Gln Ile Val Thr
35 40 45 35 40 45
Gln Pro Arg Val Gln Ile Gly Gly Asp Asp Leu Arg Asn Phe Tyr Thr Gln Pro Arg Val Gln Ile Gly Gly Asp Asp Leu Arg Asn Phe Tyr Thr
50 55 60 50 55 60
Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asn Pro Asn Leu Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asn Pro Asn Leu
65 70 75 80 65 70 75 80
Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr Asp Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr Asp
85 90 95 85 90 95
Thr Ser Phe Gly Asn Glu Val Ile Cys Tyr Glu Asn Pro Gln Pro Ser Thr Ser Phe Gly Asn Glu Val Ile Cys Tyr Glu Asn Pro Gln Pro Ser
100 105 110 100 105 110
Leu Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Leu Gly Arg Leu Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Leu Gly Arg
115 120 125 115 120 125
Glu Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Ser Thr Arg Asp Glu Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Ser Thr Arg Asp
130 135 140 130 135 140
Phe Ala Glu Val Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ser Ala Val Tyr Phe Phe Ala Glu Val Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ser Ala Val Tyr Phe
145 150 155 160 145 150 155 160
Asn Cys His Arg Glu Ser Gly Thr Gly Gly Arg Arg Ala Tyr Asn Cys His Arg Glu Ser Gly Thr Gly Gly Arg Arg Ala Tyr
165 170 165 170
<210> 11<210> 11
<211> 534<211> 534
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 11<400> 11
atgcctagag aacgtgatcc tcttgttgtt ggtcgtgtgg taggggatgt attggaccct 60atgcctagag aacgtgatcc tcttgttgtt ggtcgtgtgg taggggatgt attggaccct 60
ttcacaagaa ctattggcct aagagttata tatagagata gagaagttaa taatggatgc 120ttcacaagaa ctattggcct aagagttata tatagagata gagaagttaa taatggatgc 120
gagcttaggc cttcccaagt tattaaccag ccaagggttg aagttggagg agatgaccta 180gagcttaggc cttcccaagt tattaaccag ccaagggttg aagttggagg agatgaccta 180
cgtacctttt tcactttggt tatggtggac cctgatgctc caagtccgag tgatccaaat 240cgtacctttt tcactttggt tatggtggac cctgatgctc caagtccgag tgatccaaat 240
ctgagagaat accttcactg gttggtcacc gatattccag ctaccacagg ttcaagtttt 300ctgagagaat accttcactg gttggtcacc gatattccag ctaccacagg ttcaagtttt 300
gggcaagaaa tagtgagcta tgaaagtcca agaccatcaa tgggaataca tcgatttgta 360360
tttgtattat tcagacaatt aggtcggcaa acagtgtatg ctccaggatg gcgtcagaat 420tttgtattat tcagacaatt aggtcggcaa acagtgtatg ctccaggatg gcgtcagaat 420
ttcaacacaa gagattttgc agaactttat aatcttggtt tacctgttgc tgctgtctat 480ttcaacacaa gagattttgc agaactttat aatcttggtt tacctgttgc tgctgtctat 480
tttaattgtc aaagagagag tggcagtggt ggacgtagaa gatctgctga ttga 534tttaattgtc aaagagagag tggcagtggt ggacgtagaa gatctgctga ttga 534
<210> 12<210> 12
<211> 177<211> 177
<212> Белок<212> Protein
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 12<400> 12
Met Pro Arg Glu Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Arg Val Val Gly Asp Met Pro Arg Glu Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Arg Val Val Gly Asp
1 5 10 15 1 5 10 15
Val Leu Asp Pro Phe Thr Arg Thr Ile Gly Leu Arg Val Ile Tyr Arg Val Leu Asp Pro Phe Thr Arg Thr Ile Gly Leu Arg Val Ile Tyr Arg
20 25 30 20 25 30
Asp Arg Glu Val Asn Asn Gly Cys Glu Leu Arg Pro Ser Gln Val Ile Asp Arg Glu Val Asn Asn Gly Cys Glu Leu Arg Pro Ser Gln Val Ile
35 40 45 35 40 45
Asn Gln Pro Arg Val Glu Val Gly Gly Asp Asp Leu Arg Thr Phe Phe Asn Gln Pro Arg Val Glu Val Gly Gly Asp Asp Leu Arg Thr Phe Phe
50 55 60 50 55 60
Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asp Pro Asn Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asp Pro Asn
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr
85 90 95 85 90 95
Gly Ser Ser Phe Gly Gln Glu Ile Val Ser Tyr Glu Ser Pro Arg Pro Gly Ser Ser Phe Gly Gln Glu Ile Val Ser Tyr Glu Ser Pro Arg Pro
100 105 110 100 105 110
Ser Met Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Leu Gly Ser Met Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Leu Gly
115 120 125 115 120 125
Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr Arg Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr Arg
130 135 140 130 135 140
Asp Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val Tyr Asp Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val Tyr
145 150 155 160 145 150 155 160
Phe Asn Cys Gln Arg Glu Ser Gly Ser Gly Gly Arg Arg Arg Ser Ala Phe Asn Cys Gln Arg Glu Ser Gly Ser Gly Gly Arg Arg Arg Ser Ala
165 170 175 165 170 175
Asp asp
<210> 13<210> 13
<211> 528<211> 528
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 13<400> 13
atgtctataa atataagaga ccctcttata gtaagcagag ttgttggaga cgttcttgat 60atgtctataa atataagaga ccctcttata gtaagcagag ttgttggaga cgttcttgat 60
ccgtttaata gatcaatcac tctaaaggtt acttatggcc aaagagaggt gactaatggc 120ccgtttaata gatcaatcac tctaaaggtt acttatggcc aaagagaggt gactaatggc 120
ttggatctaa ggccttctca ggttcaaaac aagccaagag ttgagattgg tggagaagac 180ttggatctaa ggccttctca ggttcaaaac aagccaagag ttgagattgg tggagaagac 180
ctcaggaact tctatacttt ggttatggtg gatccagatg ttccaagtcc tagcaaccct 240ctcaggaact tctatacttt ggttatggtg gatccagatg ttccaagtcc tagcaaccct 240
cacctccgag aatatctcca ttggttggtg actgatatcc ctgctacaac tggaacaacc 300cacctccgag aatatctcca ttggttggtg actgatatcc ctgctacaac tggaacaacc 300
tttggcaatg agattgtgtg ttacgaaaat ccaagtccca ctgcaggaat tcatcgtgtc 360360
gtgtttatat tgtttcgaca gcttggcagg caaacagtgt atgcaccagg gtggcgccag 420gtgtttatat tgtttcgaca gcttggcagg caaacagtgt atgcaccagg gtggcgccag 420
aacttcaaca ctcgcgagtt tgctgagatc tacaatctcg gccttcccgt ggccgcagtt 480aacttcaaca ctcgcgagtt tgctgagatc tacaatctcg gccttcccgt ggccgcagtt 480
ttctacaatt gtcagaggga gagtggctgc ggaggaagaa gactttag 528ttctacaatt gtcagaggga gagtggctgc ggaggaagaa gactttag 528
<210> 14<210> 14
<211> 175<211> 175
<212> Белок<212> Protein
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 14<400> 14
Met Ser Ile Asn Ile Arg Asp Pro Leu Ile Val Ser Arg Val Val Gly Met Ser Ile Asn Ile Arg Asp Pro Leu Ile Val Ser Arg Val Val Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Val Leu Asp Pro Phe Asn Arg Ser Ile Thr Leu Lys Val Thr Tyr Asp Val Leu Asp Pro Phe Asn Arg Ser Ile Thr Leu Lys Val Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Gly Gln Arg Glu Val Thr Asn Gly Leu Asp Leu Arg Pro Ser Gln Val Gly Gln Arg Glu Val Thr Asn Gly Leu Asp Leu Arg Pro Ser Gln Val
35 40 45 35 40 45
Gln Asn Lys Pro Arg Val Glu Ile Gly Gly Glu Asp Leu Arg Asn Phe Gln Asn Lys Pro Arg Val Glu Ile Gly Gly Glu Asp Leu Arg Asn Phe
50 55 60 50 55 60
Tyr Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Val Pro Ser Pro Ser Asn Pro Tyr Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Val Pro Ser Pro Ser Asn Pro
65 70 75 80 65 70 75 80
His Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr His Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr
85 90 95 85 90 95
Thr Gly Thr Thr Phe Gly Asn Glu Ile Val Cys Tyr Glu Asn Pro Ser Thr Gly Thr Thr Phe Gly Asn Glu Ile Val Cys Tyr Glu Asn Pro Ser
100 105 110 100 105 110
Pro Thr Ala Gly Ile His Arg Val Val Phe Ile Leu Phe Arg Gln Leu Pro Thr Ala Gly Ile His Arg Val Val Phe Ile Leu Phe Arg Gln Leu
115 120 125 115 120 125
Gly Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr Gly Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr
130 135 140 130 135 140
Arg Glu Phe Ala Glu Ile Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val Arg Glu Phe Ala Glu Ile Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val
145 150 155 160 145 150 155 160
Phe Tyr Asn Cys Gln Arg Glu Ser Gly Cys Gly Gly Arg Arg Leu Phe Tyr Asn Cys Gln Arg Glu Ser Gly Cys Gly Gly Arg Arg Leu
165 170 175 165 170 175
<210> 15<210> 15
<211> 528<211> 528
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 15<400> 15
atgtctttaa gtcgtagaga tcctcttgtg gtcggcagtg ttgttggaga tgttcttgat 60atgtctttaa gtcgtagaga tcctcttgtg gtcggcagtg ttgttggaga tgttcttgat 60
cctttcacga ggttggtctc tcttaaggtc acttatggcc atagagaggt tactaatggc 120cctttcacga ggttggtctc tcttaaggtc acttatggcc atagagaggt tactaatggc 120
ttggatctaa ggccttctca agttctgaac aaaccaatag tggagattgg aggagacgac 180ttggatctaa ggccttctca agttctgaac aaaccaatag tggagattgg aggagacgac 180
ttcagaaatt tctacacctt ggttatggtg gatccagatg tgccgagtcc aagcaaccct 240ttcagaaatt tctacacctt ggttatggtg gatccagatg tgccgagtcc aagcaaccct 240
caccaacgag aatatctcca ctggttggtg actgatatac ctgccaccac tggaaatgcc 300caccaacgag aatatctcca ctggttggtg actgatatac ctgccaccac tggaaatgcc 300
tttggcaatg aggtggtgtg ctacgagagt ccacgtcccc cctcgggaat tcatcgtatt 360tttggcaatg aggtggtgtg ctacgagagt ccacgtcccc cctcgggaat tcatcgtatt 360
gtgttggtat tgttccggca actcggaaga caaacggttt atgcaccggg gtggcgccaa 420gtgttggtat tgttccggca actcggaaga caaacggttt atgcaccggg gtggcgccaa 420
cagttcaaca ctcgtgagtt tgctgagatc tacaatcttg gtcttcctgt ggctgcctct 480cagttcaaca ctcgtgagtt tgctgagatc tacaatcttg gtcttcctgt ggctgcctct 480
tacttcaact gccagaggga gaatggctgt gggggaagaa gaacgtag 528tacttcaact gccagaggga gaatggctgt gggggaagaa gaacgtag 528
<210> 16<210> 16
<211> 175<211> 175
<212> Белок<212> Protein
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 16<400> 16
Met Ser Leu Ser Arg Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Ser Val Val Gly Met Ser Leu Ser Arg Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Ser Val Val Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Val Leu Asp Pro Phe Thr Arg Leu Val Ser Leu Lys Val Thr Tyr Asp Val Leu Asp Pro Phe Thr Arg Leu Val Ser Leu Lys Val Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Gly His Arg Glu Val Thr Asn Gly Leu Asp Leu Arg Pro Ser Gln Val Gly His Arg Glu Val Thr Asn Gly Leu Asp Leu Arg Pro Ser Gln Val
35 40 45 35 40 45
Leu Asn Lys Pro Ile Val Glu Ile Gly Gly Asp Asp Phe Arg Asn Phe Leu Asn Lys Pro Ile Val Glu Ile Gly Gly Asp Asp Phe Arg Asn Phe
50 55 60 50 55 60
Tyr Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Val Pro Ser Pro Ser Asn Pro Tyr Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Val Pro Ser Pro Ser Asn Pro
65 70 75 80 65 70 75 80
His Gln Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr His Gln Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr
85 90 95 85 90 95
Thr Gly Asn Ala Phe Gly Asn Glu Val Val Cys Tyr Glu Ser Pro Arg Thr Gly Asn Ala Phe Gly Asn Glu Val Val Cys Tyr Glu Ser Pro Arg
100 105 110 100 105 110
Pro Pro Ser Gly Ile His Arg Ile Val Leu Val Leu Phe Arg Gln Leu Pro Pro Ser Gly Ile His Arg Ile Val Leu Val Leu Phe Arg Gln Leu
115 120 125 115 120 125
Gly Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Gln Phe Asn Thr Gly Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Gln Phe Asn Thr
130 135 140 130 135 140
Arg Glu Phe Ala Glu Ile Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Ser Arg Glu Phe Ala Glu Ile Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Ser
145 150 155 160 145 150 155 160
Tyr Phe Asn Cys Gln Arg Glu Asn Gly Cys Gly Gly Arg Arg Thr Tyr Phe Asn Cys Gln Arg Glu Asn Gly Cys Gly Gly Arg Arg Thr
165 170 175 165 170 175
<210> 17<210> 17
<211> 540<211> 540
<212> ДНК<212> DNA
<213> Oryza sativa<213> Oryza sativa
<400> 17<400> 17
atggccggaa gtggcaggga cagggaccct cttgtggttg gtagggttgt gggtgatgtg 60atggccggaa gtggcaggga cagggaccct cttgtggttg gtagggttgt gggtgatgtg 60
ctggacgcgt tcgtccggag caccaacctc aaggtcacct atggctccaa gaccgtgtcc 120ctggacgcgt tcgtccggag caccaacctc aaggtcacct atggctccaa gaccgtgtcc 120
aatggctgcg agctcaagcc gtccatggtc acccaccagc ctagggtcga ggtcggcggc 180aatggctgcg agctcaagcc gtccatggtc acccaccagc ctagggtcga ggtcggcggc 180
aatgacatga ggacattcta cacccttgtg atggtagacc cagatgcacc aagcccaagt 240aatgacatga ggacattcta cacccttgtg atggtagacc cagatgcacc aagcccaagt 240
gaccctaacc ttagggagta tctacattgg ttggtcactg atattcctgg tactactgca 300gaccctaacc ttagggagta tctacattgg ttggtcactg atattcctgg tactactgca 300
gcgtcatttg ggcaagaggt gatgtgctac gagagcccaa ggccaaccat ggggatccac 360gcgtcatttg ggcaagaggt gatgtgctac gagagcccaa ggccaaccat ggggatccac 360
cggctggtgt tcgtgctgtt ccagcagctg gggcgtcaga cagtgtacgc gcccgggtgg 420cggctggtgt tcgtgctgtt ccagcagctg gggcgtcaga cagtgtacgc gcccgggtgg 420
cgtcagaact tcaacaccaa ggacttcgcc gagctctaca acctcggctc gccggtcgcc 480cgtcagaact tcaacaccaa ggacttcgcc gagctctaca acctcggctc gccggtcgcc 480
gccgtctact tcaactgcca gcgcgaggca ggctccggcg gcaggagggt ctacccctag 540gccgtctact tcaactgcca gcgcgaggca ggctccggcg gcaggagggt ctacccctag 540
<210> 18<210> 18
<211> 179<211> 179
<212> Белок<212> Protein
<213> Oryza sativa<213> Oryza sativa
<400> 18<400> 18
Met Ala Gly Ser Gly Arg Asp Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Arg Val Met Ala Gly Ser Gly Arg Asp Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Arg Val
1 5 10 15 1 5 10 15
Val Gly Asp Val Leu Asp Ala Phe Val Arg Ser Thr Asn Leu Lys Val Val Gly Asp Val Leu Asp Ala Phe Val Arg Ser Thr Asn Leu Lys Val
20 25 30 20 25 30
Thr Tyr Gly Ser Lys Thr Val Ser Asn Gly Cys Glu Leu Lys Pro Ser Thr Tyr Gly Ser Lys Thr Val Ser Asn Gly Cys Glu Leu Lys Pro Ser
35 40 45 35 40 45
Met Val Thr His Gln Pro Arg Val Glu Val Gly Gly Asn Asp Met Arg Met Val Thr His Gln Pro Arg Val Glu Val Gly Gly Asn Asp Met Arg
50 55 60 50 55 60
Thr Phe Tyr Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Thr Phe Tyr Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser
65 70 75 80 65 70 75 80
Asp Pro Asn Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Asp Pro Asn Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro
85 90 95 85 90 95
Gly Thr Thr Ala Ala Ser Phe Gly Gln Glu Val Met Cys Tyr Glu Ser Gly Thr Thr Ala Ala Ser Phe Gly Gln Glu Val Met Cys Tyr Glu Ser
100 105 110 100 105 110
Pro Arg Pro Thr Met Gly Ile His Arg Leu Val Phe Val Leu Phe Gln Pro Arg Pro Thr Met Gly Ile His Arg Leu Val Phe Val Leu Phe Gln
115 120 125 115 120 125
Gln Leu Gly Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Gln Leu Gly Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe
130 135 140 130 135 140
Asn Thr Lys Asp Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Ser Pro Val Ala Asn Thr Lys Asp Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Ser Pro Val Ala
145 150 155 160 145 150 155 160
Ala Val Tyr Phe Asn Cys Gln Arg Glu Ala Gly Ser Gly Gly Arg Arg Ala Val Tyr Phe Asn Cys Gln Arg Glu Ala Gly Ser Gly Gly Arg Arg
165 170 175 165 170 175
Val Tyr Pro Val Tyr Pro
<210> 19<210> 19
<211> 525<211> 525
<212> ДНК<212> DNA
<213> Populus trichocarpa<213> Populus trichocarpa
<400> 19<400> 19
atgtcaaggg acagagatcc tctgagcgtt ggccgtgtta taggggacgt gctggacccc 60atgtcaaggg acagagatcc tctgagcgtt ggccgtgtta taggggacgt gctggacccc 60
ttcacaaagt ctatctccct cagggtcact tacagctcca gagaggtcaa caatggttgc 120ttcacaaagt ctatctccct cagggtcact tacagctcca gagaggtcaa caatggttgc 120
gagctcaagc cctctcaggt tgccaaccag cctagggttg atattggcgg ggaagatcta 180gagctcaagc ccctctcaggt tgccaaccag cctagggttg atattggcgg ggaagatcta 180
aggaccttct acactctggt tatggtggac cctgatgcac ccagcccaag tgaccccagc 240aggaccttct acactctggt tatggtggac cctgatgcac ccagcccaag tgaccccagc 240
ctaagagaat atttgcattg gttggtgact gatattccag caacaactgg ggcaagcttt 300ctaagagaat atttgcattg gttggtgact gatattccag caacaactgg ggcaagcttt 300
ggccatgaaa ctgtgtgcta tgagagcccg aggccgacaa tgggaattca tcggtttgtt 360360
ttcgtcttgt ttcggcaact gggcaggcaa actgtgtatg cccctgggtg gcgccagaac 420ttcgtcttgt ttcggcaact gggcaggcaa actgtgtatg cccctggggtg gcgccagaac 420
ttcaacacca gagactttgc tgaggtctac aatcttggat cgccagtggc tgctgtttat 480ttcaacacca gagactttgc tgaggtctac aatcttggat cgccagtggc tgctgtttat 480
ttcaactgcc agagggagag tggctctggt ggtaggaggc gataa 525ttcaactgcc aggggagag tggctctggt ggtaggaggc gataa 525
<210> 20<210> 20
<211> 174<211> 174
<212> Белок<212> Protein
<213> Populus trichocarpa<213> Populus trichocarpa
<400> 20<400> 20
Met Ser Arg Asp Arg Asp Pro Leu Ser Val Gly Arg Val Ile Gly Asp Met Ser Arg Asp Arg Asp Pro Leu Ser Val Gly Arg Val Ile Gly Asp
1 5 10 15 1 5 10 15
Val Leu Asp Pro Phe Thr Lys Ser Ile Ser Leu Arg Val Thr Tyr Ser Val Leu Asp Pro Phe Thr Lys Ser Ile Ser Leu Arg Val Thr Tyr Ser
20 25 30 20 25 30
Ser Arg Glu Val Asn Asn Gly Cys Glu Leu Lys Pro Ser Gln Val Ala Ser Arg Glu Val Asn Asn Gly Cys Glu Leu Lys Pro Ser Gln Val Ala
35 40 45 35 40 45
Asn Gln Pro Arg Val Asp Ile Gly Gly Glu Asp Leu Arg Thr Phe Tyr Asn Gln Pro Arg Val Asp Ile Gly Gly Glu Asp Leu Arg Thr Phe Tyr
50 55 60 50 55 60
Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asp Pro Ser Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asp Pro Ser
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr
85 90 95 85 90 95
Gly Ala Ser Phe Gly His Glu Thr Val Cys Tyr Glu Ser Pro Arg Pro Gly Ala Ser Phe Gly His Glu Thr Val Cys Tyr Glu Ser Pro Arg Pro
100 105 110 100 105 110
Thr Met Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Leu Gly Thr Met Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Leu Gly
115 120 125 115 120 125
Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr Arg Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr Arg
130 135 140 130 135 140
Asp Phe Ala Glu Val Tyr Asn Leu Gly Ser Pro Val Ala Ala Val Tyr Asp Phe Ala Glu Val Tyr Asn Leu Gly Ser Pro Val Ala Ala Val Tyr
145 150 155 160 145 150 155 160
Phe Asn Cys Gln Arg Glu Ser Gly Ser Gly Gly Arg Arg Arg Phe Asn Cys Gln Arg Glu Ser Gly Ser Gly Gly Arg Arg Arg
165 170 165 170
<210> 21<210> 21
<211> 519<211> 519
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 21<400> 21
atggcacggg agaaccctct tgttattggg ggtgtgattg gggatgttct caatcctttt 60atggcacggg agaaccctct tgttattggg ggtgtgattg gggatgttct caatcctttt 60
acaatctccg tttcttttac tatttcaatc aataataggg cgattagcaa tggcttggaa 120acaatctccg tttcttttac tatttcaatc aataataggg cgattagcaa tggcttggaa 120
ctgaggccct ctcaagttgt taatcgccct agagtcactg ttggtggtga agacctaagg 180ctgaggccct ctcaagttgt taatcgccct agagtcactg ttggtggtga agacctaagg 180
accttctaca cactggttat ggtggatgca gatgcaccta gccctagcaa ccctgtcttg 240accttctaca cactggttat ggtggatgca gatgcaccta gccctagcaa ccctgtcttg 240
agggaatacc ttcactggat ggtgacagat attccagcta ccacaaatgc aagctttggg 300agggaatacc ttcactggat ggtgacagat attccagcta ccacaaatgc aagctttggg 300
agagaggttg tgttttatga gagcccgaac ccttcagcag ggattcatcg acttgtgttc 360agagaggttg tgttttatga gagcccgaac ccttcagcag ggattcatcg acttgtgttc 360
atattattcc agcaactggg cagagacact gtcatcaccc cagaatggcg ccataatttc 420atattattcc agcaactggg cagagacact gtcatcaccc cagaatggcg ccataatttc 420
aattccagaa actttgctga aattaataac cttgcacctg ttgcagcagc ttatgccaac 480aattccagaa actttgctga aattaataac cttgcacctg ttgcagcagc ttatgccaac 480
tgccaaagag agcgtggttg cggtggaagg agatattaa 519tgccaaagag agcgtggttg cggtggaagg agatattaa 519
<210> 22<210> 22
<211> 172<211> 172
<212> Белок<212> Protein
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 22<400> 22
Met Ala Arg Glu Asn Pro Leu Val Ile Gly Gly Val Ile Gly Asp Val Met Ala Arg Glu Asn Pro Leu Val Ile Gly Gly Val Ile Gly Asp Val
1 5 10 15 1 5 10 15
Leu Asn Pro Phe Thr Ile Ser Val Ser Phe Thr Ile Ser Ile Asn Asn Leu Asn Pro Phe Thr Ile Ser Val Ser Phe Thr Ile Ser Ile Asn Asn
20 25 30 20 25 30
Arg Ala Ile Ser Asn Gly Leu Glu Leu Arg Pro Ser Gln Val Val Asn Arg Ala Ile Ser Asn Gly Leu Glu Leu Arg Pro Ser Gln Val Val Asn
35 40 45 35 40 45
Arg Pro Arg Val Thr Val Gly Gly Glu Asp Leu Arg Thr Phe Tyr Thr Arg Pro Arg Val Thr Val Gly Gly Glu Asp Leu Arg Thr Phe Tyr Thr
50 55 60 50 55 60
Leu Val Met Val Asp Ala Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asn Pro Val Leu Leu Val Met Val Asp Ala Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asn Pro Val Leu
65 70 75 80 65 70 75 80
Arg Glu Tyr Leu His Trp Met Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr Asn Arg Glu Tyr Leu His Trp Met Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr Asn
85 90 95 85 90 95
Ala Ser Phe Gly Arg Glu Val Val Phe Tyr Glu Ser Pro Asn Pro Ser Ala Ser Phe Gly Arg Glu Val Val Phe Tyr Glu Ser Pro Asn Pro Ser
100 105 110 100 105 110
Ala Gly Ile His Arg Leu Val Phe Ile Leu Phe Gln Gln Leu Gly Arg Ala Gly Ile His Arg Leu Val Phe Ile Leu Phe Gln Gln Leu Gly Arg
115 120 125 115 120 125
Asp Thr Val Ile Thr Pro Glu Trp Arg His Asn Phe Asn Ser Arg Asn Asp Thr Val Ile Thr Pro Glu Trp Arg His Asn Phe Asn Ser Arg Asn
130 135 140 130 135 140
Phe Ala Glu Ile Asn Asn Leu Ala Pro Val Ala Ala Ala Tyr Ala Asn Phe Ala Glu Ile Asn Asn Leu Ala Pro Val Ala Ala Ala Tyr Ala Asn
145 150 155 160 145 150 155 160
Cys Gln Arg Glu Arg Gly Cys Gly Gly Arg Arg Tyr Cys Gln Arg Glu Arg Gly Cys Gly Gly Arg Arg Tyr
165 170 165 170
<210> 23<210> 23
<211> 525<211> 525
<212> ДНК<212> DNA
<213> Gossypium hirsutum<213> Gossypium hirsutum
<400> 23<400> 23
atgcctagag acagagatcc tttggttgtt ggtagggtta taggagatgt gttggaccct 60atgcctagag acagagatcc tttggttgtt ggtagggtta taggagatgt gttggaccct 60
tttacaaggt ctatttcact tagggtcact tatgctacta gggatgttag caatggtgtt 120tttacaaggt ctatttcact tagggtcact tatgctacta gggatgttag caatggtgtt 120
gagcttaagc catctcaagt tgttaaccaa ccaagggttg atattggtgg ggatgatctg 180gagcttaagc catctcaagt tgttaaccaa ccaagggttg atattggtgg ggatgatctg 180
aggaccttct acaccttggt tatggtggat cctgatgctc caagtccaag tgacccaaac 240aggaccttct acaccttggt tatggtggat cctgatgctc caagtccaag tgacccaaac 240
ctcagggaat acttgcactg gttggttact gatattccag ccacaactgg tgcaagcttt 300ctcagggaat acttgcactg gttggttact gatattccag ccacaactgg tgcaagcttt 300
ggtcaagagg tggtctgcta tgagagccca cgaccaacgg tcggtatcca tcgttttgtg 360ggtcaagagg tggtctgcta tgagagccca cgaccaacgg tcggtatcca tcgttttgtg 360
ttcgtgctgt tccggcaact tggaaggcaa acggtgtacg ctccagggtg gcgccaaaac 420ttcgtgctgt tccggcaact tggaaggcaa acggtgtacg ctccagggtg gcgccaaaac 420
ttcaacacta gggactttgc tgagctttac aacctcgggt tgccggtggc tgctgtttac 480ttcaacacta gggactttgc tgagctttac aacctcgggt tgccggtggc tgctgtttac 480
tttaactgcc agagggagag tggatccggt ggccgtagga catga 525tttaactgcc agaggggagag tggatccggt ggccgtagga catga 525
<210> 24<210> 24
<211> 174<211> 174
<212> Белок<212> Protein
<213> Gossypium hirsutum<213> Gossypium hirsutum
<400> 24<400> 24
Met Pro Arg Asp Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Arg Val Ile Gly Asp Met Pro Arg Asp Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Arg Val Ile Gly Asp
1 5 10 15 1 5 10 15
Val Leu Asp Pro Phe Thr Arg Ser Ile Ser Leu Arg Val Thr Tyr Ala Val Leu Asp Pro Phe Thr Arg Ser Ile Ser Leu Arg Val Thr Tyr Ala
20 25 30 20 25 30
Thr Arg Asp Val Ser Asn Gly Val Glu Leu Lys Pro Ser Gln Val Val Thr Arg Asp Val Ser Asn Gly Val Glu Leu Lys Pro Ser Gln Val Val
35 40 45 35 40 45
Asn Gln Pro Arg Val Asp Ile Gly Gly Asp Asp Leu Arg Thr Phe Tyr Asn Gln Pro Arg Val Asp Ile Gly Gly Asp Asp Leu Arg Thr Phe Tyr
50 55 60 50 55 60
Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asp Pro Asn Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser Asp Pro Asn
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr
85 90 95 85 90 95
Gly Ala Ser Phe Gly Gln Glu Val Val Cys Tyr Glu Ser Pro Arg Pro Gly Ala Ser Phe Gly Gln Glu Val Val Cys Tyr Glu Ser Pro Arg Pro
100 105 110 100 105 110
Thr Val Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Leu Gly Thr Val Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Arg Gln Leu Gly
115 120 125 115 120 125
Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr Arg Arg Gln Thr Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr Arg
130 135 140 130 135 140
Asp Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val Tyr Asp Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val Tyr
145 150 155 160 145 150 155 160
Phe Asn Cys Gln Arg Glu Ser Gly Ser Gly Gly Arg Arg Thr Phe Asn Cys Gln Arg Glu Ser Gly Ser Gly Gly Arg Arg Thr
165 170 165 170
<210> 25<210> 25
<211> 528<211> 528
<212> ДНК<212> DNA
<213> Brassica napus<213> Brassica napus
<400> 25<400> 25
atgtctttaa gtaatagaga tcctcttgtg gtagggagag ttgtaggaga cgttcttgaa 60atgtctttaa gtaatagaga tcctcttgtg gtagggagag ttgtaggaga cgttcttgaa 60
tgtttcacaa gatcaatcga tctaagggtt acttatggcc aaagagaggt gacaaatggg 120tgtttcacaa gatcaatcga tctaagggtt acttatggcc aaagagaggt gacaaatggg 120
ttggatctaa ggccttctca agttctcaac aagccaagag ttgagattgg tggagaagac 180ttggatctaa ggccttctca agttctcaac aagccaagag ttgagattgg tggagaagac 180
ctaaggaact tctatacttt ggttatggtg gatccagatg ttccaagtcc tagcaatcct 240ctaaggaact tctatacttt ggttatggtg gatccagatg ttccaagtcc tagcaatcct 240
cacctccgag aatatcttca ctggttggtg actgatatcc cagcgacaac tggaacaaac 300cacctccgag aatatcttca ctggttggtg actgatatcc cagcgacaac tggaacaaac 300
tttggcaatg agattgtgtc ttacgagagt ccaaggccca actcgggtat tcatcgtatc 360tttggcaatg agattgtgtc ttacgagagt ccaaggccca actcgggtat tcatcgtatc 360
gtgctcgtat tgttccgaca gctcggtagg caaacagtgt atgaaccagg atggcgccaa 420gtgctcgtat tgttccgaca gctcggtagg caaacagtgt atgaaccagg atggcgccaa 420
caattcaaca ctcgtgagtt tgcttcccta tacaatctcg gccttcccgt ggctgcggtt 480caattcaaca ctcgtgagtt tgcttcccta tacaatctcg gccttcccgt ggctgcggtt 480
ttctacaatt gtcagaggga gagtggctgc ggaggacgaa gaagttag 528ttctacaatt gtcagaggga gagtggctgc ggaggacgaa gaagttag 528
<210> 26<210> 26
<211> 175<211> 175
<212> Белок<212> Protein
<213> Brassica napus<213> Brassica napus
<400> 26<400> 26
Met Ser Leu Ser Asn Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Arg Val Val Gly Met Ser Leu Ser Asn Arg Asp Pro Leu Val Val Gly Arg Val Val Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Val Leu Glu Cys Phe Thr Arg Ser Ile Asp Leu Arg Val Thr Tyr Asp Val Leu Glu Cys Phe Thr Arg Ser Ile Asp Leu Arg Val Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Gly Gln Arg Glu Val Thr Asn Gly Leu Asp Leu Arg Pro Ser Gln Val Gly Gln Arg Glu Val Thr Asn Gly Leu Asp Leu Arg Pro Ser Gln Val
35 40 45 35 40 45
Leu Asn Lys Pro Arg Val Glu Ile Gly Gly Glu Asp Leu Arg Asn Phe Leu Asn Lys Pro Arg Val Glu Ile Gly Gly Glu Asp Leu Arg Asn Phe
50 55 60 50 55 60
Tyr Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Val Pro Ser Pro Ser Asn Pro Tyr Thr Leu Val Met Val Asp Pro Asp Val Pro Ser Pro Ser Asn Pro
65 70 75 80 65 70 75 80
His Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr His Leu Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr
85 90 95 85 90 95
Thr Gly Thr Asn Phe Gly Asn Glu Ile Val Ser Tyr Glu Ser Pro Arg Thr Gly Thr Asn Phe Gly Asn Glu Ile Val Ser Tyr Glu Ser Pro Arg
100 105 110 100 105 110
Pro Asn Ser Gly Ile His Arg Ile Val Leu Val Leu Phe Arg Gln Leu Pro Asn Ser Gly Ile His Arg Ile Val Leu Val Leu Phe Arg Gln Leu
115 120 125 115 120 125
Gly Arg Gln Thr Val Tyr Glu Pro Gly Trp Arg Gln Gln Phe Asn Thr Gly Arg Gln Thr Val Tyr Glu Pro Gly Trp Arg Gln Gln Phe Asn Thr
130 135 140 130 135 140
Arg Glu Phe Ala Ser Leu Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val Arg Glu Phe Ala Ser Leu Tyr Asn Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val
145 150 155 160 145 150 155 160
Phe Tyr Asn Cys Gln Arg Glu Ser Gly Cys Gly Gly Arg Arg Ser Phe Tyr Asn Cys Gln Arg Glu Ser Gly Cys Gly Gly Arg Arg Ser
165 170 175 165 170 175
<210> 27<210> 27
<211> 543<211> 543
<212> ДНК<212> DNA
<213> Triticum aestivum<213> Triticum aestivum
<400> 27<400> 27
atgtcggcag cggatccatt ggttgtggct catgttttac aagatgtgct tgatccattt 60atgtcggcag cggatccatt ggttgtggct catgttttac aagatgtgct tgatccattt 60
acatcaactg ttccgctcag gatagcctac aacaataggc tagttctggc aggtgctgag 120acatcaactg ttccgctcag gatagcctac aacaataggc tagttctggc aggtgctgag 120
ctaagaccat ctgcaattgt aagcaagcca cgagttgata tcggtggcag tgacatgaga 180ctaagaccat ctgcaattgt aagcaagcca cgagttgata tcggtggcag tgacatgaga 180
gtcctctata ccctgatatt ggtggatcca gacgccccaa gcccaagtca cccatcacta 240gtcctctata ccctgatatt ggtggatcca gacgccccaa gcccaagtca cccatcacta 240
agggagtact tgcactggat ggtgtccgac atccctggaa caactagtgg cagcttcggc 300agggagtact tgcactggat ggtgtccgac atccctggaa caactagtgg cagcttcggc 300
caagagcttg tagtttatga aagaccagaa cccagatctg gtattcaccg gatggtattt 360caagagcttg tagtttatga aagaccagaa cccagatctg gtattcaccg gatggtattt 360
gtgctgttcc agcaactagg caggggaaca gtttttgcac cagatgtgcg acacaatttc 420gtgctgttcc agcaactagg caggggaaca gtttttgcac cagatgtgcg acacaatttc 420
agctgcagaa actttgcacg gcagtaccac ctcaacattg tggctgcctc atatttcaac 480agctgcagaa actttgcacg gcagtaccac ctcaacattg tggctgcctc atatttcaac 480
tgtcaaaggg aaggtggatc tggcggaaga aggtttaggc cagaaagttc tcaaggggag 540tgtcaaaggg aaggtggatc tggcggaaga aggtttaggc cagaaagttc tcaaggggag 540
tag 543tag 543
<210> 28<210> 28
<211> 180<211> 180
<212> Белок<212> Protein
<213> Triticum aestivum<213> Triticum aestivum
<400> 28<400> 28
Met Ser Ala Ala Asp Pro Leu Val Val Ala His Val Leu Gln Asp Val Met Ser Ala Ala Asp Pro Leu Val Val Ala His Val Leu Gln Asp Val
1 5 10 15 1 5 10 15
Leu Asp Pro Phe Thr Ser Thr Val Pro Leu Arg Ile Ala Tyr Asn Asn Leu Asp Pro Phe Thr Ser Thr Val Pro Leu Arg Ile Ala Tyr Asn Asn
20 25 30 20 25 30
Arg Leu Val Leu Ala Gly Ala Glu Leu Arg Pro Ser Ala Ile Val Ser Arg Leu Val Leu Ala Gly Ala Glu Leu Arg Pro Ser Ala Ile Val Ser
35 40 45 35 40 45
Lys Pro Arg Val Asp Ile Gly Gly Ser Asp Met Arg Val Leu Tyr Thr Lys Pro Arg Val Asp Ile Gly Gly Ser Asp Met Arg Val Leu Tyr Thr
50 55 60 50 55 60
Leu Ile Leu Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser His Pro Ser Leu Leu Ile Leu Val Asp Pro Asp Ala Pro Ser Pro Ser His Pro Ser Leu
65 70 75 80 65 70 75 80
Arg Glu Tyr Leu His Trp Met Val Ser Asp Ile Pro Gly Thr Thr Ser Arg Glu Tyr Leu His Trp Met Val Ser Asp Ile Pro Gly Thr Thr Ser
85 90 95 85 90 95
Gly Ser Phe Gly Gln Glu Leu Val Val Tyr Glu Arg Pro Glu Pro Arg Gly Ser Phe Gly Gln Glu Leu Val Val Tyr Glu Arg Pro Glu Pro Arg
100 105 110 100 105 110
Ser Gly Ile His Arg Met Val Phe Val Leu Phe Gln Gln Leu Gly Arg Ser Gly Ile His Arg Met Val Phe Val Leu Phe Gln Gln Leu Gly Arg
115 120 125 115 120 125
Gly Thr Val Phe Ala Pro Asp Val Arg His Asn Phe Ser Cys Arg Asn Gly Thr Val Phe Ala Pro Asp Val Arg His Asn Phe Ser Cys Arg Asn
130 135 140 130 135 140
Phe Ala Arg Gln Tyr His Leu Asn Ile Val Ala Ala Ser Tyr Phe Asn Phe Ala Arg Gln Tyr His Leu Asn Ile Val Ala Ala Ser Tyr Phe Asn
145 150 155 160 145 150 155 160
Cys Gln Arg Glu Gly Gly Ser Gly Gly Arg Arg Phe Arg Pro Glu Ser Cys Gln Arg Glu Gly Gly Ser Gly Gly Arg Arg Phe Arg Pro Glu Ser
165 170 175 165 170 175
Ser Gln Gly Glu Ser Gln Gly Glu
180 180
<210> 29<210> 29
<211> 531<211> 531
<212> ДНК<212> DNA
<213> Pisum sativum<213> Pisum sativum
<400> 29<400> 29
atggcaggta gtagcaggaa tcctctcgct gttggtcgtg taattggtga tgtgatagac 60atggcaggta gtagcaggaa tcctctcgct gttggtcgtg taattggtga tgtgatagac 60
ccctttgaaa attcggttcc tctccgagtc acctatggta gtagagatgt gaataatggt 120ccctttgaaa attcggttcc tctccgagtc acctatggta gtagagatgt gaataatggt 120
tgtgagctta aaccctctca cgttggaaat caacccagag tgaatgttgg tggaaacgat 180tgtgagctta aaccctctca cgttggaaat caacccagag tgaatgttgg tggaaacgat 180
ctcaggaaca tttatactct agttcttgtg gacccagatt cacctagccc aagcaaccct 240ctcaggaaca tttatactct agttcttgtg gacccagatt cacctagccc aagcaaccct 240
acttttaggg agtaccttca ttggttggtg actgatattc cagctactac tgaggtcagt 300acttttaggg agtaccttca ttggttggtg actgatattc cagctactac tgaggtcagt 300
ttcggtaacg aaattgtgag ctatgaaagg ccacgaccca cctcagggat ccatcgtttc 360ttcggtaacg aaattgtgag ctatgaaagg ccacgaccca cctcagggat ccatcgtttc 360
gtgtttatac tattccgtca gcagtgtaga caaagggttt acgctccagg atggcgacag 420gtgtttatac tattccgtca gcagtgtaga caaagggttt acgctccagg atggcgacag 420
aatttcaata caagagaatt tgctgaactt tacaatcttg gatcaccagt tgctgctgtt 480aatttcaata caagagaatt tgctgaactt tacaatcttg gatcaccagt tgctgctgtt 480
ttcttcaact gtcaaaggga gagtggctct ggtggaagaa catttagata a 531ttcttcaact gtcaaaggga gagtggctct ggtggaagaa catttagata a 531
<210> 30<210> 30
<211> 176<211> 176
<212> Белок<212> Protein
<213> Pisum sativum<213> Pisum sativum
<400> 30<400> 30
Met Ala Gly Ser Ser Arg Asn Pro Leu Ala Val Gly Arg Val Ile Gly Met Ala Gly Ser Ser Arg Asn Pro Leu Ala Val Gly Arg Val Ile Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Val Ile Asp Pro Phe Glu Asn Ser Val Pro Leu Arg Val Thr Tyr Asp Val Ile Asp Pro Phe Glu Asn Ser Val Pro Leu Arg Val Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Gly Ser Arg Asp Val Asn Asn Gly Cys Glu Leu Lys Pro Ser His Val Gly Ser Arg Asp Val Asn Asn Gly Cys Glu Leu Lys Pro Ser His Val
35 40 45 35 40 45
Gly Asn Gln Pro Arg Val Asn Val Gly Gly Asn Asp Leu Arg Asn Ile Gly Asn Gln Pro Arg Val Asn Val Gly Gly Asn Asp Leu Arg Asn Ile
50 55 60 50 55 60
Tyr Thr Leu Val Leu Val Asp Pro Asp Ser Pro Ser Pro Ser Asn Pro Tyr Thr Leu Val Leu Val Asp Pro Asp Ser Pro Ser Pro Ser Asn Pro
65 70 75 80 65 70 75 80
Thr Phe Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr Thr Phe Arg Glu Tyr Leu His Trp Leu Val Thr Asp Ile Pro Ala Thr
85 90 95 85 90 95
Thr Glu Val Ser Phe Gly Asn Glu Ile Val Ser Tyr Glu Arg Pro Arg Thr Glu Val Ser Phe Gly Asn Glu Ile Val Ser Tyr Glu Arg Pro Arg
100 105 110 100 105 110
Pro Thr Ser Gly Ile His Arg Phe Val Phe Ile Leu Phe Arg Gln Gln Pro Thr Ser Gly Ile His Arg Phe Val Phe Ile Leu Phe Arg Gln Gln
115 120 125 115 120 125
Cys Arg Gln Arg Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr Cys Arg Gln Arg Val Tyr Ala Pro Gly Trp Arg Gln Asn Phe Asn Thr
130 135 140 130 135 140
Arg Glu Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Ser Pro Val Ala Ala Val Arg Glu Phe Ala Glu Leu Tyr Asn Leu Gly Ser Pro Val Ala Ala Val
145 150 155 160 145 150 155 160
Phe Phe Asn Cys Gln Arg Glu Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Phe Arg Phe Phe Asn Cys Gln Arg Glu Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Phe Arg
165 170 175 165 170 175
<210> 31<210> 31
<211> 901<211> 901
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 31<400> 31
aaaccgaccg gagccaacca aaccggttaa catcctaaaa ccaatcatat tttattaagt 60aaaccgaccg gagccaacca aaccggttaa catcctaaaa ccaatcatat tttattaagt 60
tttgtgttga tgctaaacca aaaatcattg gcatgcatat ttctaaattt agtaataaac 120tttgtgttga tgctaaacca aaaatcattg gcatgcatat ttctaaattt agtaataaac 120
aaaaacactt agaaatcaca cgttcactat actaaaaaac gttgacaaaa acacaacaac 180aaaaacactt agaaatcaca cgttcactat actaaaaaac gttgacaaaa acacaacaac 180
tatactaata attaaagaag agaaaactga accaaacttt ttgtaaactc ctgaatttaa 240tatactaata attaaagaag agaaaactga accaaacttt ttgtaaactc ctgaatttaa 240
attagtaatt gaagtaagaa gatgaagaag aacatgttaa gcaaacaaaa aaattacact 300attagtaatt gaagtaagaa gatgaagaag aacatgttaa gcaaacaaaa aaattacact 300
aaaatcatat aaaaatacat aattacaaaa gtacccataa gatggattta ttgatatggg 360aaaatcatat aaaaatacat aattacaaaa gtacccataa gatggattta ttgatatggg 360
tcatctgtga aacaagccac agagagacaa agactcgtaa gtattgggca acgaaagcga 420tcatctgtga aacaagccac agagagacaa agactcgtaa gtattgggca acgaaagcga 420
cctcctttat tcaccactgc cattaacatg ttcttcttct ccttcttctt ctacatttta 480cctcctttat tcaccactgc cattaacatg ttcttcttct ccttcttctt ctacatttta 480
tgaccgtttt acccttcaag agagagaaac aaaatcactc cctctcactc actctatctc 540tgaccgtttt acccttcaag agagagaaac aaaatcactc cctctcactc actctatctc 540
tctcttctgc aaagcttcag aactctggca gagagataaa agatgatggg gtttttaact 600tctcttctgc aaagcttcag aactctggca gagagataaa agatgatggg gtttttaact 600
ttatcctccc caaataattc ttcttccctt catctctctc tcttacacaa caggtcccta 660ttatcctccc caaataattc ttcttccctt catctctctc tcttacacaa caggtcccta 660
catttgtaca atctcctctc tttaaagact ctctctcttt ctctctccat ctctatctta 720catttgtaca atctcctctc tttaaagact ctctctcttt ctctctccat ctctatctta 720
ctctgtattt ctgtcgtctg agcactcaat gaaaccactg taaatttccg ccagaatttg 780ctctgtattt ctgtcgtctg agcactcaat gaaaccactg taaatttccg ccagaatttg 780
atgtgatgga acgataaaaa tcattttttc tcggttaaag taaaaaaaca aaaacaaatt 840atgtgatgga acgataaaaa tcattttttc tcggttaaag taaaaaaaca aaaacaaatt 840
tctgtagaaa tcataataaa agaaagaaaa aaaatctaat gtcggtacat aatacggttc 900tctgtagaaa tcataataaa agaaagaaaa aaaatctaat gtcggtacat aatacggttc 900
t 901t 901
<210> 32<210> 32
<211> 507<211> 507
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 32<400> 32
aaaccgaccg gagccaacca aaccggttaa catcctaaaa ccaatcatat tttattaagt 60aaaccgaccg gagccaacca aaccggttaa catcctaaaa ccaatcatat tttattaagt 60
tttgtgttga tgctaaacca aaaatcattg gcatgcatat ttctaaattt agtaataaac 120tttgtgttga tgctaaacca aaaatcattg gcatgcatat ttctaaattt agtaataaac 120
aaaaacactt agaaatcaca cgttcactat actaaaaaac gttgacaaaa acacaacaac 180aaaaacactt agaaatcaca cgttcactat actaaaaaac gttgacaaaa acacaacaac 180
tatactaata attaaagaag agaaaactga accaaacttt ttgtaaactc ctgaatttaa 240tatactaata attaaagaag agaaaactga accaaacttt ttgtaaactc ctgaatttaa 240
attagtaatt gcacaacagg tccctacatt tgtacaatct cctctcttta aagactctct 300attagtaatt gcacaacagg tccctacatt tgtacaatct cctctcttta aagactctct 300
ctctttctct ctccatctct atcttactct gtatttctgt cgtctgagca ctcaatgaaa 360ctctttctct ctccatctct atcttactct gtatttctgt cgtctgagca ctcaatgaaa 360
ccactgtaaa tttccgccag aatttgatgt gatggaacga taaaaatcat tttttctcgg 420ccactgtaaa tttccgccag aatttgatgt gatggaacga taaaaatcat ttttctcgg 420
ttaaagtaaa aaaacaaaaa caaatttctg tagaaatcat aataaaagaa agaaaaaaaa 480ttaaagtaaa aaaacaaaaa caaatttctg tagaaatcat aataaaagaa agaaaaaaaa 480
tctaatgtcg gtacataata cggttct 507tctaatgtcg gtacataata cggttct 507
<210> 33<210> 33
<211> 2000<211> 2000
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 33<400> 33
catgagcaag taagtaaaca ttttatctct gttacactcc aaacacatac actaacttaa 60catgagcaag taagtaaaca ttttatctct gttacactcc aaacacatac actaacttaa 60
gcagagtcct ttttcggcta ttcactccat caccaaagaa tgagctcatc cataaaaaca 120gcagagtcct ttttcggcta ttcactccat caccaaagaa tgagctcatc cataaaaaca 120
tatacatgtc aacatgtcga aagatgtaga acctggtaac aataataaag aatgataatt 180tatacatgtc aacatgtcga aagatgtaga acctggtaac aataataaag aatgataatt 180
tttttatttt taaaacgaag cactaaaata gatttaatta tatttatcat ataaaattac 240tttttatttt taaaacgaag cactaaaata gatttaatta tatttatcat ataaaattac 240
caattaatca tatatctagt gaaatgatca cttcaagtat aaaaaaagat tttatacttt 300caattaatca tatatctagt gaaatgatca cttcaagtat aaaaaaagat tttatacttt 300
tcgtctttct gtatttagaa atattagcaa agtcttggat aaaaaagtgg tcgtagcctg 360tcgtctttct gtatttagaa atattagcaa agtcttggat aaaaaagtgg tcgtagcctg 360
tccctgtagt ttccttgtta gtcttgatga acaagaagtt ctcagttctc cccaccctat 420tccctgtagt ttccttgtta gtcttgatga acaagaagtt ctcagttctc cccaccctat 420
tctgattcgg tttacatgga agtagtaagt aaccatacac cattatagaa ataatacgat 480tctgattcgg tttacatgga agtagtaagt aaccatacac cattatagaa ataatacgat 480
aaccacacgc catgtcttac ctcatgcgtt tactgaagtt gttttcttct tttatttttc 540aaccacacgc catgtcttac ctcatgcgtt tactgaagtt gttttcttct tttatttttc 540
tttgatggag ttatggtatt aatattcaat attagattgg aacttgcaga tcaacttcaa 600tttgatggag ttatggtatt aatattcaat attagattgg aacttgcaga tcaacttcaa 600
gaggcactct ttgataagga taccccaggc attgcttttt gacataacgc caaaaccctc 660gaggcactct ttgataagga taccccaggc attgcttttt gacataacgc caaaaccctc 660
ctaaaaaacc cttcattttc tatctcttag ttccatttta tgcaatgaaa taaaacttct 720ctaaaaaacc cttcattttc tatctcttag ttccatttta tgcaatgaaa taaaacttct 720
caaatagtgt caaagcccga aaattgccta ccatatattt atcacgattc atgaagggta 780caaatagtgt caaagcccga aaattgccta ccatatattt atcacgattc atgaagggta 780
tcttaattcc tttttttttt ttttcctgaa atgttttttt tgaaggaatt ttcttgaaat 840tcttaattcc tttttttttt ttttcctgaa atgtttttttt tgaaggaatt ttcttgaaat 840
gttttaatgc cttttttttt actcaagaaa tgtcttaatg cttgtttact tacataaagt 900gttttaatgc cttttttttt actcaagaaa tgtcttaatg cttgtttact tacataaagt 900
aatatcgttt gtcttttttt acgcaatatt atattctagt actctgtctc tccaatctta 960aatatcgttt gtcttttttt acgcaatatt atattctagt actctgtctc tccaatctta 960
ttatttttaa aatttttctt ccttcctatc ctattatgca caaaaaggtg taattttaac 1020ttattttttaa aatttttctt ccttcctatc ctattatgca caaaaaggtg taattttaac 1020
atttttctac tagtaaaaaa cctacaaact ttttctattg ttaaaattaa atataaaagt 10801080
aattattttt attttatata aaaatacaaa gattttatgg aaaaatatgt aagatataaa 11401140
aatatgatta attattttac tttcatctta acttagcaaa tactttctga tcagtgcctt 1200aatatgatta attattttac tttcatctta acttagcaaa tactttctga tcagtgcctt 1200
atctcgcaca atccacaaac attatctcgc acaagccaca aacacgcgct tcatgatcca 1260atctcgcaca atccacaaac attatctcgc acaagccaca aacacgcgct tcatgatcca 1260
aaattgtacg agcgacgctg tccatgtctc ctagaacgcg cgtagtaaga aataagtgtc 1320aaattgtacg agcgacgctg tccatgtctc ctagaacgcg cgtagtaaga aataagtgtc 1320
cctttgattt catgttgcat agttaatttt tagtttaaga ttaattttag atagttttcc 1380cctttgattt catgttgcat agttaatttt tagtttaaga ttaattttag atagttttcc 1380
atatttttaa ttttatatta aagataaagt caaaattaat gtttagaatt aattgagttt 1440atatttttaa ttttatatta aagataaagt caaaattaat gtttagaatt aattgagttt 1440
aagtcatttt aggtaccttt tggataaaga aatttaaatt aaattttaat tcaaaattaa 1500aagtcatttt aggtacctttt tggataaaga aatttaaatt aaattttaat tcaaaattaa 1500
tataaaccaa aattattaaa acataaatca tattacttta aaattaattt ttcgaaaaag 15601560
cacattcaaa gctccactaa aaattgtctt tgattaatag ccgtggatga gatttgattt 1620cacattcaaa gctccactaa aaattgtctt tgattaatag ccgtggatga gatttgattt 1620
attagtgaga aaagacaaag aggtttaagc gcacgcgaag agaggcgcgt aagtaaatag 1680attagtgaga aaagacaaag aggtttaagc gcacgcgaag agaggcgcgt aagtaaatag 1680
gagaaacttt agctgtcaaa tatgctggga aacggcgagt acgaatgacg gcggctacca 1740gagaaacttt agctgtcaaa tatgctggga aacggcgagt acgaatgacg gcggctacca 1740
cccttatatt acagtgacag tctcactctc acctatctag cctaacgtcg cttcaccgcc 1800cccttatatt acagtgacag tctcactctc acctatctag cctaacgtcg cttcaccgcc 1800
gtttcccatt cttattctct ctcttcataa cactcttcct atttacagtt cacgccaaat 1860gtttcccatt cttattctct ctcttcataa cactcttcct atttacagtt cacgccaaat 1860
gcctgcactc tttctctact attaccaagc attggccaca ccaacaccaa cgaataacct 1920gcctgcactc tttctctact attaccaagc attggccaca ccaacaccaa cgaataacct 1920
ttgttattgt aactaataac cactgcattt ttcccatact cgttgatctc ttccactaag 1980ttgttattgt aactaataac cactgcattt ttcccatact cgttgatctc ttccactaag 1980
tgctgtggtt ggtgaccgca 2000tgctgtggtt ggtgaccgca 2000
<210> 34<210> 34
<211> 2479<211> 2479
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 34<400> 34
ttggattgtg tagaagaaaa aaattgaaaa aaaatatgac atccatgtta atttttgaaa 60ttggattgtg tagaagaaaa aaattgaaaa aaaatatgac atccatgtta atttttgaaa 60
ttttcttata ataattttcc gtcttcaacc aaaccagact cctattaagt atagtaaata 120ttttcttata ataatttttcc gtcttcaacc aaaccagact cctattaagt atagtaaata 120
ctattatatt tttgtggact tcttaataaa tagtagtaat attttgaaaa gcttttttat 180ctattatatt tttgtggact tcttaataaa tagtagtaat attttgaaaa gcttttttat 180
ttttacgaaa gtcataataa attataaaca aacttataaa aaatattaaa tcttatagta 240ttttacgaaa gtcataataa attataaaaca aacttataaa aaatattaaa tcttatagta 240
ctacttttat ataataataa taataataat aataataata ataataataa taaaacgtgt 300300 ctacttttat ataataataa taataataat aataataata ataataataa
tcaaaattat taatattcct cttgaagttc cgtttcatat tctgtaaaaa aaagttgcgt 360tcaaaattat taatattcct cttgaagttc cgtttcatat tctgtaaaaa aaagttgcgt 360
ttgatattaa aatataacag tactaaaaaa acaacataaa aaagaaaatc atgtttgatg 420ttgatattaa aatataacag tactaaaaaa acaacataaa aaagaaaatc atgtttgatg 420
aaagaaaata caaatatatt ttcataaaga gaacttcaca attactcgca atgctgtgtg 480aaagaaaata caaatatatt ttcataaaga gaacttcaca attactcgca atgctgtgtg 480
aaatagggat ataaccttta tccaagacac gttcccatca ttgaagtata attaaatctt 540aaatagggat ataaccttta tccaagacac gttcccatca ttgaagtata attaaatctt 540
ttacggttaa ttataatgaa atcattttgg atttgctttt gcctattatc acttttcaca 600ttacggttaa ttataatgaa atcattttgg atttgctttt gcctattatc acttttcaca 600
cgatgatact taattattca tagacctttt tgtcgagtaa gaggggaaat gctaaacttt 660660
tctgcttaga ttttttggca tagttaatgg attttagcct ttttctttct tattaatttt 720tctgcttaga ttttttggca tagttaatgg attttagcct ttttctttct tattaatttt 720
tttctttcat aagcatagtc ccggtaaaat tctcactttc agttgatact ttacctcctc 780tttctttcat aagcatagtc ccggtaaaat tctcactttc agttgatact ttacctcctc 780
cgaaaagttt cccatattag agactcaatg gcgtataaaa tcatcttaaa catttactta 840cgaaaagttt cccatattag agactcaatg gcgtataaaa tcatcttaaa catttactta 840
taatgaatgg aaataaaatc taaaaagtta gctactaatt ctttcacggc cattacgaag 900taatgaatgg aaataaaatc taaaaagtta gctactaatt ctttcacggc cattacgaag 900
actttgctta aaaatggaaa aaaagcaaaa tataaaagag tgtacattgt ctatttttat 960actttgctta aaaatggaaa aaaagcaaaa tataaaagag tgtacattgt ctatttttat 960
aattgacttg gctctgtatg tattatgtaa ttaattttta atcttatatt ttgattattt 10201020
atagagatat aaaatgaatt tgatagttaa agaaagaaaa gaagagatga aaaattgtgt 10801080
gttcgatcct ctaataaaac taacatttta ataaattaat atttatcatt tttttaatta 1140gttcgatcct ctaataaaac taacatttta ataaattaat
tttgagtttt ggaagtgtaa tgagtcgagt aattttattt gatggttgtt tggttcactt 1200tttgagtttt ggaagtgtaa tgagtcgagt aattttattt gatggttgtt tggttcactt 1200
atctatgttg atcaagtaat cgatcaattt atctccatga ataatgatga tttttaagaa 1260atctatgttg atcaagtaat cgatcaattt atctccatga ataatgatga tttttaagaa 1260
tatttaacat ttgaccatca attccttaaa tcatgtaatt atttttgtca accatgcaac 1320tatttaacat ttgaccatca attccttaaa tcatgtaatt atttttgtca accatgcaac 1320
ctctataaat ataggtccta catatgtttg acattcatca tagtgtgtaa tgtatttttt 13801380
ttattaaaaa aaacagagat gatgaactcg tgataaagaa tcacctaaca cattactgat 1440ttattaaaaa aaacagagat gatgaactcg tgataaagaa tcacctaaca cattactgat 1440
actctctata aatatcacat gacaacctta aacaaatacg cacaattcat atatcaatat 1500actctctata aatatcacat gacaacctta aacaaatacg cacaattcat atatcaatat 1500
ccattacttt gtcatattct aatttgagtg taaaagtctt tattattaca gtcttttaag 1560ccattacttt gtcatattct aatttgagtg taaaagtctt tattattaca gtcttttaag 1560
ttggtttaga gcaatttgag ttaatatctt tatacaaaaa taacttaatt ttttaatatt 1620ttggtttaga gcaatttgag ttaatatctt tatacaaaaa taacttaatt ttttaatatt 1620
atttttaaga catatttctc ataaaaaatc acataattta gtttataatt tttaatttaa 16801680
tattatcttc atttttattt ataaaattta attacctaat tcatcaatat taaaaaaata 1740tattatcttc atttttattt ataaaattta attacctaat tcatcaatat taaaaaaata 1740
aattaattta attaatatca ataaatttat cctaaactta taaacattat cattaatgct 1800aattaattta attaatatca ataaatttat cctaaactta taaacattat cattaatgct 1800
cttctctctt aaatgtttat ggatataact tcttttattt aattaaaatg tttattttaa 18601860
attaaattaa tgtaagaaat aatacaaatt gaatattgta taaaggaaca aacataattt 1920attaaattaa tgtaagaaat aatacaaatt gaatattgta taaaggaaca aacataattt 1920
tgttttgtat tagaccataa gtaatactcc atattagatt atatatataa cttttatttt 1980tgttttgtat tagaccataa gtaatactcc atattagatt atatatataa cttttatttt 1980
aaaattatag agtatacttt ttttagagga aattatagag caaactacat tcatatgatt 20402040
tctcttttat aaatattgaa aacaaaatag ggatatgcaa cagcaaacga gggaggtttg 21002100
aggagagagg gagagagaga gaatgtaggc gcgtgtggca cagttatgag ttaagactta 2160aggagagagg gagagagaga gaatgtaggc gcgtgtggca cagttatgag ttaagactta 2160
ggagaagtac acattggcat aggcattgtt attggattat gtgtagagtc cgatagacta 2220ggagaagtac acattggcat aggcattgtt attggattat gtgtagagtc cgatagacta 2220
gaatgacggc tactagttac tactctctct cttcataaac acaccattta tgtttttccc 2280gaatgacggc tactagttac tactctctct cttcataaac acaccattta tgtttttccc 2280
ttcccttcac gccaaacgcc tgcactctac actctactct ctcgtgctct gtgactactg 2340ttcccttcac gccaaacgcc tgcactctac actctactct ctcgtgctct gtgactactg 2340
tcactctctc ataaaccaaa catgccctta atccattttc catagtagtt agtgttgtta 2400tcactctctc ataaaccaaa catgccctta atccattttc catagtagtt agtgttgtta 2400
ctcatctctt ccatcttcaa tctctcttct ttccttattg ttgctcacca aggtggggtt 2460ctcatctctt ccatcttcaa tctctcttct ttccttattg ttgctcacca aggtggggtt 2460
ttttgtacgt gtggtggca 2479ttttgtacgt gtggtggca 2479
<210> 35<210> 35
<211> 2000<211> 2000
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 35<400> 35
cattaaataa ttctaaaaaa gatataaatt tttgtataca aatctatatt taagaaactt 60cattaaataa ttctaaaaaa gatataaatt tttgtataca aatctatatt taagaaactt 60
ttaatctaga tgtcgatttt aaaaaatatt atttaattaa aaaatattag atggtgtaat 120ttaatctaga tgtcgatttt aaaaaatatt atttaattaa aaaatattag atggtgtaat 120
aattaatcaa aattatatca agataatctg attcctttct atacacacat aatattattt 180180
catccttagt ccctaatatt ttcaattctc attttgttac cagacttgta ccgaacaaaa 240catccttagt ccctaatatt ttcaattctc attttgttac cagacttgta ccgaacaaaa 240
acaaaatatc taatcatagt tttcattcaa caaaaatgat ttttaactca atttgaaaca 300acaaaatatc taatcatagt tttcattcaa caaaaatgat ttttaactca atttgaaaca 300
cttttcattc atttttaaaa ctaagaaaaa atttgtgatt tatttttata attttgaaaa 360360
acattctacc atcattatta ttgtttctac taccatcatt attaatgtta ctactatcac 420acattctacc atcattatta ttgtttctac taccatcatt attaatgtta ctactatcac 420
cttcctagtt ataaccgtaa gcattatata tttttattat tattgttatt atgttatttt 480480
gttaatatat ttatttttgt tctaaaaaat tattattttt tcatatcttt cactattttt 540gttaatatat ttatttttgt tctaaaaaat tattattttt tcatatcttt cactattttt 540
gttattattt tagcaagttt gattattttt tattttaaat atttttatgt gtcacttttt 600gttattattt tagcaagttt gattattttt tattttaaat atttttatgt gtcacttttt 600
atatcacatt atttaacagt gtgaatcgat aaaaaatata ataattatct ttaatttgta 660atatcacatt atttaacagt gtgaatcgat aaaaaatata ataattatct ttaatttgta 660
agaatttttt caaaattaaa actgatttta gttcttgaaa aatgtaaaac taaaaatgaa 720agaatttttt caaaattaaa actgatttta gttcttgaaa aatgtaaaac taaaaatgaa 720
aaccacctaa cggggcctta gtaattagga catggtctcc ctggttaccc acgggatttt 780aaccacctaa cggggcctta gtaattagga catggtctcc ctggttaccc acgggatttt 780
ttcacatcaa agaagacctg gtattttcat tttcatgaga tttttgcata tcgaacaagg 840ttcacatcaa agaagacctg gtattttcat tttcatgaga tttttgcata tcgaacaagg 840
cattaagaca ggggttgtca ttgtcgtgat agtataattt acatggtcga agtgatagaa 900cattaagaca ggggttgtca ttgtcgtgat agtataattt acatggtcga agtgatagaa 900
actttaacca tcatttacct tgtaccttac tataacacaa aatactacga tttccaaaca 960actttaacca tcatttacct tgtaccttac tataacacaa aatactacga tttccaaacca 960
ctagatcgcg cgcttatgtt ttcagacaca ttattcttct tcattcataa ataaatttgc 1020ctagatcgcg cgcttatgtt ttcagacaca ttattcttct tcattcataa ataaatttgc 1020
agctagtata tgataattgt accaatttat gtaagttttt tacaaaggac attcttatct 1080agctagtata tgataattgt accaatttat gtaagttttt tacaaaggac attcttatct 1080
caataaaaaa ctaaatgttt aaaatattct ctagcacatt ttttaaatac attttgtcta 11401140
attaattaaa attaaaagag gatataaaaa atatgctgct aacatcttga acatttccgc 1200attaattaaa attaaaagag gatataaaaa atatgctgct aacatcttga acatttccgc 1200
aatcaataat ttctcaatct atctgaatat ttttgcaact gtatacaaaa atctcagaac 1260aatcaataat ttctcaatct atctgaatat ttttgcaact gtatacaaaa atctcagaac 1260
agaaaattat tgattaaact ggaagaattt aataacattt gattcacgtt tgtttagtga 1320agaaaattat tgattaaact ggaagaattt aataacattt gattcacgtt tgtttagtga 1320
ttaaaaaatc ataacattac actatctaac aaatgcagca tccataacta ccaaacatta 1380ttaaaaaatc ataacattac actatctaac aaatgcagca tccataacta ccaaacatta 1380
aacaagagaa acagacaaag tccaataatc acagagacac gcagtgacaa agaaaagaaa 1440aacaagagaa acagacaaag tccaataatc acagagacac gcagtgacaa agaaaagaaa 1440
gagggaacgg taaagagaaa ggtgtctctg tcatctcaaa tagattgcca taactccctc 1500gagggaacgg taaagagaaa ggtgtctctg tcatctcaaa tagattgcca taactccctc 1500
cttctctctc acaagctctt gcagagtgaa agcgaccact ttccgatctc aattaaaagt 1560cttctctctc acaagctctt gcagagtgaa agcgaccact ttccgatctc aattaaaagt 1560
atggcataat ttgcaatggc ggaactgaac gaataataat aagagatacc atagttaaga 1620atggcataat ttgcaatggc ggaactgaac gaataataat aagagatacc atagttaaga 1620
gagagaaaca caaacatgga aaaagctggg cctcactccc tgggtacaca tagatagaga 16801680
ctatggtgca gtgttgcagg ttgtagcaga agctctgcca aatagtgtta actttattcg 1740ctatggtgca gtgttgcagg ttgtagcaga agctctgcca aatagtgtta actttattcg 1740
agaaaattat tattattatt attattatta ttattctctc tctctagtct attatcagtg 18001800
gtaattcagt aatgttgttg cattatagag agagcgtggt ctatgtgcca gggtgatgtg 1860gtaattcagt aatgttgttg cattatagag agagcgtggt ctatgtgcca gggtgatgtg 1860
atgtcatttc actaccttca aagccagaaa aatgcaacag aaaaagcttt catcccatca 1920atgtcatttc actaccttca aagccagaaa aatgcaacag aaaaagcttt catcccatca 1920
catcatttga accatgaatc atgaactagt tttctaaact aaaactataa caacaccttc 1980catcatttga accatgaatc atgaactagt tttctaaact aaaactataa caacaccttc 1980
ggttgttgtt gttgttggct 2000ggttgttgtt gttgttggct 2000
<210> 36<210> 36
<211> 2000<211> 2000
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 36<400> 36
aacatttaag atcttaaaga tgccaagagc ttcatatgaa aatgtacaaa agagatttta 60aacatttaag atcttaaaga tgccaagagc ttcatatgaa aatgtacaaa agagatttta 60
aaggcaatat caatgctgtg acgccatatt aaaataaaag ggatggtttc tcctgtatat 120aaggcaatat caatgctgtg acgccatatt aaaataaaag ggatggtttc tcctgtatat 120
tgagcaattt gtattactta tatacacaaa atctaaattg attcttaaca aatatgtaaa 180tgagcaattt gtattactta tatacacaaa atctaaattg attcttaaca aatatgtaaa 180
gaaattaata atatgatcaa gttacctgaa gaagctaaaa taaaatagaa aattaagtaa 240gaaattaata atatgatcaa gttacctgaa gaagctaaaa taaaatagaa aattaagtaa 240
aagaaatgag gagtagaata taagataaca tcaaaaaatt atttcagcat attttaagaa 300aagaaatgag gagtagaata taagataaca tcaaaaaatt atttcagcat attttaagaa 300
catcaaattt acctttcatc aaaattaatc ttaaaagact aaaacattta attaagttta 360catcaaattt acctttcatc aaaattaatc ttaaaagact aaaacattta attaagttta 360
taaatactca cacaaaatat taatttattt tgtaattatt attttttata tttttattta 420420
ctattgcctc aaaatttgca ctaaacaaga gaccctagag atttcgttag aacaataata 480ctattgcctc aaaatttgca ctaaacaaga gaccctagag atttcgttag aacaataata 480
gacacggtat taaataatta aattaatacg aggatgcata actaccaaac aaatgcgata 540gacacggtat taaataatta aattaatacg aggatgcata actaccaaac aaatgcgata 540
aataaatgag acgacgagag agcacaacgc gggaatgaga taattaagaa aaaaaatcta 600aataaatgag acgacgagag agcacaacgc gggaatgaga taattaagaa aaaaaatcta 600
ataaattagg aaaaaaaaga cataatatca taagcttgaa tccaatgtac aaagagaggt 660ataaattagg aaaaaaaaga cataatatca taagcttgaa tccaatgtac aaagagaggt 660
tggcaataaa gagaaagaga aaagacgtcc ctgtcacctc aaatggattg cattactcat 720tggcaataaa gagaaagaga aaagacgtcc ctgtcacctc aaatggattg cattactcat 720
tgaaaaggac attattactt ccgacttttt atattaactt actaattata aaatatataa 780tgaaaaggac attattactt ccgacttttt atattaactt actaattata aaatatataa 780
aaaaatactt caaagatgca tatattttat tttattacat aattacataa cagaataata 840aaaaatactt caaagatgca tatattttat ttttattacat aattacataa cagaataata 840
taaaataatg taactacaca ttaaaacatt aaaatagtga ttggagtagt ggtataagag 900taaaataatg taactacaca ttaaaacatt aaaatagtga ttggagtagt ggtataagag 900
gacgttgaat tcacgcggaa gagaaggata tatttcatgt ttaatttgtt gtcatgccta 960gacgttgaat tcacgcggaa gagaaggata tatttcatgt ttaatttgtt gtcatgccta 960
gttcaatgta atctaataag taaaaataaa atacaaacaa aataaagatt ttggtttctt 10201020
aacaaaagta cttttacttt aaatatatat ttttatctgg tttttaaaca tgcacatatt 10801080
taacataaaa gttcatatta aactttttcc tacatacttg gatcaaatag tcacgtattg 1140taacataaaa gttcatatta aactttttcc tacatacttg gatcaaaatag tcacgtattg 1140
caggtaaaaa ataatagtgt agcttataga aatcgtagaa ataagtctat aaaccagaag 1200caggtaaaaa ataatagtgt agcttataga aatcgtagaa ataagtctat aaaccagaag 1200
aaaaaaaaca ttaaaataat agtatagaaa tctatatcag tgtccccagt tcttacattc 12601260
atgacccatt tccccataaa ctctttgcag ataatgcaat ggcaaaacca cacagaaagt 1320atgacccatt tccccataaa ctctttgcag ataatgcaat ggcaaaacca cacagaaagt 1320
gacccctggg aatcaaaagt taaaaccaat ggcacagcat agcacagtgt acagtgttta 1380gacccctggg aatcaaaagt taaaaccaat ggcacagcat agcacagtgt acagtgttta 1380
tttactatat agcaaaacac tcactggcat aacactttag ggagagagag agtgaaaaca 1440tttactatat agcaaaacac tcactggcat aacactttag ggagagagag agtgaaaaca 1440
agtgtaaaaa gagagaaagt taggaggggg atagagagtg tgtgtgtgtg cagagtttgc 1500agtgtaaaaa gagagaaagt taggagggggg atagagtg tgtgtgtgtg cagagtttgc 1500
aggcttgtag cagaaatggt ggcagatggt tttaacttta tgtgtgaaat aattttcttc 1560aggcttgtag cagaaatggt ggcagatggt tttaacttta tgtgtgaaat aattttcttc 1560
tatctctttt ctctttagtg ttttctctct ctctctctct cttctttttc ttcctgcatc 16201620
ttcttgtgtt tagggagtgt gatgttttgt ggcagaagaa cgatgtgatt ggacacagcc 1680ttcttgtgtt tagggagtgt gatgttttgt ggcagaagaa cgatgtgatt ggacacagcc 1680
aaagctgtgg acttgttctg ttactacttt gtaattgtaa tcacataaaa ggctagaggg 1740aaagctgtgg acttgttctg ttactacttt gtaattgtaa tcacataaaa ggctagaggg 1740
tatgaagagt gcacagaaaa atactagtac tagtttcaaa caaaactcac cttactacta 1800tatgaagagt gcacagaaaa atactagtac tagtttcaaa caaaactcac cttactacta 1800
cccttccatc tcaagccata gttgagttga gtggtgcaca gtgtcactat acataccact 1860cccttccatc tcaagccata gttgagttga gtggtgcaca gtgtcactat acataccact 1860
aacacccttt tttggttctt gttctgtggc tccttgtgct ttgagcaaga gctttttgag 1920aacacccttt tttggttctt gttctgtggc tccttgtgct ttgagcaaga gctttttgag 1920
aaagagcttg gtggtggtgg ttgttgttga gtggtttcat ggttaggctg ttgttaagtt 1980aaagagcttg gtggtggtgg ttgttgttga gtggtttcat ggttaggctg ttgttaagtt 1980
gaagttcatc agttgcagct 2000gaagttcatc agttgcagct 2000
<210> 37<210> 37
<211> 1399<211> 1399
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum tuberosum<213> Solanum tuberosum
<400> 37<400> 37
aacgaaaaat ttagaaacta ttagtgatcc aaatgttcgt gattacctgc aacgagaaca 60aacgaaaaat ttagaaacta ttagtgatcc aaatgttcgt gattacctgc aacgagaaca 60
acaacgaata cttgaaaaaa gaaatcgaca atcacaacca caaccataat cgcaacaatt 120acaacgaata cttgaaaaaa gaaatcgaca atcacaacca caaccataat cgcaacaatt 120
ctcagaatca tatcctaatt ttttttcgaa tagtgctaaa tttgaaaacg acctaccgaa 180ctcagaatca tatcctaatt ttttttcgaa tagtgctaaa tttgaaaacg acctaccgaa 180
tttctaaatt attgttgtga tcaattaatt attatgttat gtattgtatt ttatcttgta 240tttctaaatt attgttgtga tcaattaatt attatgttat gtattgtatt ttatcttgta 240
tttaaattat tatgttatgt attgtattgt tatcttgtat ttaaattatc atatcatgta 300tttaaattat tatgttatgt attgtattgt tatcttgtat ttaaattatc atatcatgta 300
ttgtattttt aaattaattt tttttgcata ttctttataa tgaaaattaa taataaaaca 360360
attttattat tcacgaaaat tagaaaaaaa gttaaaatac tattaatttg aaattaaaat 420attttattat tcacgaaaat tagaaaaaaa gttaaaatac tattaatttg aaattaaaat 420
agtatatatt aaataatatt tttaaaaata ttatattata tttaaaaaga attatgaata 480agtatatatt aaataatatt tttaaaaata ttatattata tttaaaaaga attatgaata 480
ttagatattt aattaatgga attatatgta aaataatatg ttaattagaa agtaatagaa 540ttagatattt aattaatgga attatatgta aaataatatg ttaattagaa agtaatagaa 540
aaataataaa ataatgaaaa agtagaaata gagagtgtga atagtagaat ttggagaact 600aaataataaa ataatgaaaa agtagaaata gagagtgtga atagtagaat ttggagaact 600
attcaactct ctaaatttga agaatatagg gtgatttgga ggtgggttgg agtgtccatt 660660
ctctatttta ctctcaaaat atagagaatg gagagaaaaa tagaggtgga ttggagatgg 720ctctatttta ctctcaaaat atagagaatg gagagaaaaa tagaggtgga ttggagatgg 720
tcttagtgac atttttgatt ccgccaatgc tcagttggcg tagtcgctgt caaacttgag 780tcttagtgac atttttgatt ccgccaatgc tcagttggcg tagtcgctgt caaacttgag 780
aaaggattac ccctttaggc ttgcacagac agtgacttat gatgaaatga agccagagaa 840aaaggattac ccctttaggc ttgcacagac agtgacttat gatgaaatga agccagagaa 840
ggcactctgt tataacactt aaatgaaaat acatgtgtat ggactagcaa taaaaggggc 900ggcactctgt tataacactt aaatgaaaat acatgtgtat ggactagcaa taaaaggggc 900
actagtaatt ttagtaattg aaaagcaagt gtatagagag agataatgag agagaaagag 960actagtaatt ttagtaattg aaaagcaagt gtatagagag agataatgag agagaaagag 960
taagtacact actactgcta ctatcccata tagctgtaat gttgcaggtc tgatttttgc 1020taagtacact actactgcta ctatcccata tagctgtaat gttgcaggtc tgatttttgc 1020
agttgcagac ccccttcttg gcacaagctc ttttaacttt tatcttctca aataattctc 1080agttgcagac ccccttcttg gcacaagctc ttttaacttt tatcttctca aataattctc 1080
tctctctctc tctctctttt ttctcttttt acattgtgag gaaactgaat acccattgta 1140tctctctctc tctctctttt ttctcttttt acattgtgag gaaactgaat acccattgta 1140
tgtattagtg tgaggcctat ctgccacaag gatgtgatgg aacactatgc ttcctctgct 1200tgtattagtg tgaggcctat ctgccacaag gatgtgatgg aacactatgc ttcctctgct 1200
aaaaccccac aaccccaaaa ctctttttca cttcacattt aatcacaatt cctcagtgaa 1260aaaaccccac aaccccaaaa ctctttttca cttcacattt aatcacaatt cctcagtgaa 1260
attattctgt tgctctctct aatttcaatt tcaatgtcgg taagtccaag aactggtttt 1320attattctgt tgctctctct aatttcaatt tcaatgtcgg taagtccaag aactggtttt 1320
tcaattcaaa ggagctgagt tagtgcaaac acttgaggtt ttgagttttg acagagactt 13801380
gagtctcaga gaaactacc 1399gagtctcaga gaaactacc 1399
<210> 38<210> 38
<211> 2000<211> 2000
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum tuberosum<213> Solanum tuberosum
<400> 38<400> 38
accttatata agttacaatt tagttatgta tataagttaa aattaaatta aaagacattt 60accttata agttacaatt tagttatgta tataagttaa aattaaatta aaagacattt 60
cgaaataata tgattatacc atttcgaaat taattagaga gagaaataag atctcgcaaa 120cgaaataata tgattatacc atttcgaaat taattagaga gagaaataag atctcgcaaa 120
attaagtgtc ttcttgaaat taagaaccat ttttaggaga taattatgta ttttttcatt 180attaagtgtc ttcttgaaat taagaaccat tttttaggaga taattatgta ttttttcatt 180
tttaatttga cacgtatgca tatccactat tttgttttat tccaaagtga cccctacttc 240tttaatttga cacgtatgca tatccactat tttgttttat tccaaagtga cccctacttc 240
ttttggtaat ttctttgagt attttaaact ctagtccccc tttctcaagc aaaaaggctc 300ttttggtaat ttctttgagt attttaaact ctagtccccc tttctcaagc aaaaaggctc 300
actcgcgcac gcgcgaagag acattgtgac gcgctggatg gaaaatccag aagcgtaact 360actcgcgcac gcgcgaagag acattgtgac gcgctggatg gaaaatccag aagcgtaact 360
gtcaaaaaat agaacaactt tgggaaacgg ggtgacggcc gctgccacca cttttttcat 420gtcaaaaaat agaacaactt tgggaaacgg ggtgacggcc gctgccacca cttttttcat 420
ttccaaacac tcattaacta acgtcgtttc accgccgttt actgcttaat gagtatgaat 480ttccaaacac tcattaacta acgtcgtttc accgccgttt actgcttaat gagtatgaat 480
tacactctaa tagtctattt ttacttattt ttaatgtgtt tatcaaatta tatttttaaa 540tacactctaa tagtctattt ttacttattt ttaatgtgtt tatcaaatta tatttttaaa 540
tataatactt taaaaatatt atcatcaata ataagagtaa attaaaaaat aaatgacaaa 600600
ttgtttctta aattgttaaa ttaaacaatt aaaactgaat atttacaaaa tacctcttaa 660660
cttgctaaat taaacaattg aaactatatt tatattaata aattgaactg acaaaaataa 720cttgctaaat taaacaattg aaactatatt tatattaata aattgaactg acaaaaataa 720
ataaaggaac tatatatttt ctcaattata tctttttact aaaatattat ttttctaata 780ataaaggaac tatatatttt ctcaattata tctttttact aaaatattat ttttctaata 780
ctagttaaac ttttaaaaaa catctaataa agaaaaagaa tttgttcaat tatactttag 840ctagttaaac ttttaaaaaa catctaataa agaaaaagaa tttgttcaat tatactttag 840
aagcttttat tattattatt attattagta gtagtagtag tagtaataaa ttagattaaa 900aagcttttat tattattatt attattagta gtagtagtag tagtaataaa ttagattaaa 900
ttaaagagag aagtattcaa aactcccaaa actattgtat tagttttatt tcagaactat 960ttaaagagag aagtattcaa aactcccaaa actattgtat tagttttatt tcagaactat 960
tgacaatctt aatttttttt tttttaattt gactaggtga acttaaatat acttcatttt 10201020
ttgcaaaaca agtgaagtac actcttaaat tttcatcaag tttagaaatg ttttcaacaa 10801080
tttactagac tctttattaa gaacttcatg ttctttcaag agtttatgag cacttgctat 1140tttactagac tctttattaa gaacttcatg ttctttcaag agtttatgag cacttgctat 1140
gtcatgttac agatcaagaa tatctacaga gtgtatctaa atttagtact agtaaagtag 1200gtcatgttac agatcaagaa tatctacaga gtgtatctaa atttagtact agtaaagtag 1200
aaaatgtatt acttatctct caaacaatag gtattcatta tactattttg agatgtccaa 1260aaaatgtatt acttatctct caaacaatag gtattcatta tactattttg agatgtccaa 1260
caattttttt tcactttatg aaatcaatga ataatttaac acttagttcc taattcccag 1320caattttttt tcactttatg aaatcaatga ataatttaac acttagttcc taattcccag 1320
taagcattaa ttatagttat ttacttatta tatttttcaa cacattatat tgaaaaagtg 13801380
atatagtaaa tctatctttt tattttatta tttcttaaaa tttgtacaaa cttaataata 14401440
gacaaatatt gttgaatagg aataataatt tacattaaat ccaatatatt tttcaatagt 15001500
tgtcactaaa tgaaaatact tcatctgttt caatttatgt gatagttttc atttttcaaa 1560tgtcactaaa tgaaaatact tcatctgttt caatttatgt gatagttttc atttttcaaa 1560
agtcagacaa ttatatattt ataaattaag taaaaaatat tataagtcac actaattaac 1620agtcagacaa ttatatattt ataaattaag taaaaaatat tataagtcac actaattaac 1620
aattcgaaat attcggtacg gaggaactaa cacttatgtt tttagaccat attagtcttt 1680aattcgaaat attcggtacg gaggaactaa cacttatgtt tttagaccat attagtcttt 1680
tctctctatt tattatataa tattgagagg agagtgcaac caccatggca actttctctg 1740tctctctatt tattatataa tattgagagg agagtgcaac caccatggca actttctctg 1740
tcttcataaa acgcagctga cattaaaaac acagacacac acttcgcatt tcatatccct 1800tcttcataaa acgcagctga cattaaaaac acagacacac acttcgcatt tcatatccct 1800
ctcactacac gccaaatgcc tgctcttcct atttctcttc ttcttctttt tcttcttctc 1860ctcactacac gccaaatgcc tgctcttcct atttctcttc ttcttctttt tcttcttctc 1860
tctcattcac ataacacaca ttcttgtact aactctgcat cataaactct accccacttt 1920tctcattcac ataacacaca ttcttgtact aactctgcat cataaactct accccacttt 1920
cttcttcttc tccggtcata ttgctctgaa actccactta ttgctctctc ccggcattta 1980cttcttcttc tccggtcata ttgctctgaa actccactta ttgctctctc ccggcattta 1980
tttttagttt ctcagaaata 2000tttttagtttt ctcagaaata 2000
<210> 39<210> 39
<211> 471<211> 471
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 39<400> 39
taataagaga cgaaaaaaaa ataactaact gatcattacc atccataaat aaatagttgc 60taataagaga cgaaaaaaaa ataactaact gatcattacc atccataaat aaatagttgc 60
tgccataaac caaacacatt gtgcttatca aaaagaagaa atttgtactt aatgaaacat 120tgccataaac caaacacatt gtgcttatca aaaagaagaa atttgtactt aatgaaacat 120
tcattattag caaagtgtaa aaccaaagaa aaacaaactt tatttctcat tttattagta 180tcattattag caaagtgtaa aaccaaagaa aaacaaactt
aaagtgaaga agagtaaaga aaaagagaga ctgagatgag gctgagagcc tgagtctgcg 240aaagtgaaga agagtaaaga aaaagagaga ctgagatgag gctgagagcc tgagtctgcg 240
ggtggagaga gagagaaaga aagcctcttt acacgtgatt tttaaaagag accaaaaccc 300ggtggagaga gagagaaaga aagcctcttt acacgtgatt tttaaaagag accaaaaccc 300
caaaagcaaa cctcttttgc atgcgtcctt aaaagacata aatttctctc aaaattttct 360360
acatcacaaa atcaatcttt ttctcttctt cttcgtcttc atcatcatca tcatcatctt 420acatcacaaa atcaatcttt ttctcttctt cttcgtcttc atcatcatca tcatcatctt 420
cctctttctc ttcctactga gatattttct ccacattgag aggaaagcta t 471cctctttctc ttcctactga gatattttct ccacattgag aggaaagcta t 471
<210> 40<210> 40
<211> 1231<211> 1231
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 40<400> 40
aggataaatt tcatctatta agatatcagt caattataat gtgttacgtg attcgataaa 60aggataaatt tcatctatta agatatcagt caattataat gtgttacgtg attcgataaa 60
aaaaaaagac caaaaaaaaa aagaagataa ctattggtaa gcgtaagaaa tgtgtttaca 120120
ttttggcatt ttgccaaaac acataaagat ggttagtgat gagacgagac gagtcatgcg 180ttttggcatt ttgccaaaac acataaagat ggttagtgat gagacgagac gagtcatgcg 180
ctacttttaa aacaaaatga aaaacatcat taagctaaca aaccaaacac acttgttttg 240ctacttttaa aacaaaatga aaaacatcat taagctaaca aaccaaacac acttgttttg 240
ataacatgtt ctagggaact agttatgcca aatctaatcc gcataagaag actaagtcac 300ataacatgtt ctagggaact agttatgcca aatctaatcc gcataagaag actaagtcac 300
aacataattc agtaatttgg ttgagattaa atcctataaa tatgatttta aggtataaga 360360
gagaagagac tcttttgatc aacacaatca aacatctaca aagaaaatta tctcacatag 420gagaagagac tcttttgatc aacacaatca aacatctaca aagaaaatta tctcacatag 420
ctacttctta atctaatttt ttcattaatc cattttattt taaatgtgaa gaatcgcatc 480ctacttctta atctaattttt ttcattaatc cattttattt taaatgtgaa gaatcgcatc 480
tagatgtgac ctctcatgat aaaaaattaa accattgtaa aaaaaatgtt gtgtaaaact 540tagatgtgac ctctcatgat aaaaaattaa accattgtaa aaaaaatgtt gtgtaaaact 540
aaatataata aattattaaa aaaatacaaa ttcaatccac taggttaaaa actcctatgt 600aaatataata aattattaaa aaaatacaaa ttcaatccac taggttaaaa actcctatgt 600
agaacatttt tttatattaa aatgtaaata catgaatctt atttttcgaa aaactaaaga 660agaacatttt tttatattaa aatgtaaata catgaatctt atttttcgaa aaactaaaga 660
catctttttt ttatatatta attaccaaaa caaaataaga cgacaaaaat attctttgat 720catctttttt ttatatatta attaccaaaa caaaataaga cgacaaaaat attctttgat 720
atagtaaaag aaaactagaa aactagaaaa caataaatta ccaaaacaat ctagaaaaca 780atagtaaaag aaaactagaa aactagaaaa caataaatta ccaaaacaat ctagaaaaca 780
ataaatccta ctttgcatta ctttattata aaatcccgaa atgaatctat aaatgtagaa 840ataaatccta ctttgcatta ctttattata aaatcccgaa atgaatctat aaatgtagaa 840
aatattatac aaaagttgta agagatttta atatacataa ttacatatat atacaagtaa 900aatattatac aaaagttgta agagatttta atatacataa ttacatatat atacaagtaa 900
atacaccgta tatacatacg aaggagtaaa cagtattatt tggtatatag ttacgtctct 960atacaccgta tatacatacg aaggagtaaa cagtattatt tggtatatag ttacgtctct 960
atatacgaag ggttcaaact tcaaagtaat aatttaatca acaatgtgta catattgata 1020atatacgaag ggttcaaact tcaaagtaat aatttaatca acaatgtgta catattgata 1020
agtagtagta tatatgtaaa ggtctcacgt ctctataata aagtatgact cgtcacgtga 1080agtagtagta tatatgtaaa ggtctcacgt ctctataata aagtatgact cgtcacgtga 1080
cctcctcttc ttcgcagaga cagagatagg atgagacaga aagaaaccaa caaaaccaaa 1140ccctcctcttc ttcgcagaga cagagatagg atgagacaga aagaaaccaa caaaaccaaa 1140
ccccaaaacc caagaaaaag agaaaaacac tctcttctct tctctctctc tctttctatt 1200ccccaaaacc caagaaaaag agaaaaacac tctcttctct tctctctctc tctttctatt 1200
taagagactt cactgtctct ctcagtcttt t 1231taagagactt cactgtctct ctcagtcttt t 1231
<210> 41<210> 41
<211> 1548<211> 1548
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 41<400> 41
ttcacgtgtt tatttattta tttgggttat taaacataaa tcatgtaaat ctgaatcctg 60ttcacgtgtt
tggagatctc tccctagttg atgaatagat atgatgaatt taattctttc atgaaataaa 120tggagatctc tccctagttg atgaatagat atgatgaatt taattctttc atgaaataaa 120
aatatatgaa acatatgtag cagaaaaaga agcatatcta tgaaacaaca aacattcaaa 180aatatatgaa acatatgtag cagaaaaaga agcatatcta tgaaacaaca aacattcaaa 180
aaaaaaagga aaacggaaaa ttattaatat gaaaactacg gctttgactt gtagctgact 240aaaaaaagga aaacggaaaa ttattaatat gaaaactacg gctttgactt gtagctgact 240
acatttacga catatatata taaatggacc ccactgagtg tctgcaaggt ctttacacaa 300acatttacga catatatata taaatggacc ccactgagtg tctgcaaggt ctttacacaa 300
cagtatcttc ttctgtttct ttgactcttt gtgatcccta agcctaccca taatacgtgt 360360
ctacatttta ttggattgtt tcgtgactct gtaatctttt ttataagaaa acaagtaata 420ctacatttta ttggattgtt tcgtgactct gtaatctttt ttataagaaa acaagtaata 420
gtgaaattga agtaaatagc tcagcacaga aacttcgaca aaaataactc acagattaga 480gtgaaattga agtaaatagc tcagcacaga aacttcgaca aaaataactc acagattaga 480
aaagaaaata tatgcataaa tagccatggt tcatttatga acaatttatt cgttttttta 540aaagaaaata tatgcataaa tagccatggt tcatttatga acaattttatt cgttttttta 540
gtttataatt tcattaaaac atgtttgtca catcacattt catgtccttc ggctcctact 600gtttataatt tcattaaaac atgtttgtca catcacattt catgtccttc ggctcctact 600
acaacaacaa gtcactgtca tctccattac ttccacttct gctcctttct ttattaactt 660acaacaacaa gtcactgtca tctccattac ttccacttct gctcctttct ttattaactt 660
gttcaaaaac aattctaaga taaataacaa taaatgttgg tctctcttta ttatttcccg 720gttcaaaaac aattctaaga taaataacaa taaatgttgg tctctcttta ttatttcccg 720
gctaaagaag gaggatgtct cgtattatcc gccatcaatg ctcttttgtt tcctgtttct 780gctaaagaag gaggatgtct cgtattatcc gccatcaatg ctcttttgtt tcctgtttct 780
tgcaatttga atccctgaga atcctagccc acttatttac tactttgcct tagctgtttt 840tgcaatttga atccctgaga atcctagccc acttatttac tactttgcct tagctgtttt 840
cgacatcaaa attttggtca tatgactcat atcaatcttc aaatttgata aaatatgttc 900cgacatcaaa attttggtca tatgactcat atcaatcttc aaatttgata aaatatgttc 900
ccaattcaca aaaacaaaaa agttttcgaa agctcaaaaa cctttaccat ttcaatagta 960ccaattcaca aaaacaaaaa agttttcgaa agctcaaaaa cctttaccat ttcaatagta 960
gataggattc ttttagattt gcatttcacg aaaagagaag aaaaaaaatc gaaaaatatt 1020gataggattc ttttagattt gcatttcacg aaaagagaag aaaaaaaatc gaaaaatatt 1020
tgcaatcatg attttttgtt tctgaaggag acctgtagtt gctgtcatga acattaaata 1080tgcaatcatg attttttgtt tctgaaggag acctgtagtt gctgtcatga acattaaata 1080
caaatctaat aaatgttgta cgaattttgc gtgtaataaa tggtcagggc cggctcgaag 1140caaatctaat aaatgttgta cgaattttgc gtgtaataaa tggtcagggc cggctcgaag 1140
ctcgctgatc gtcctttttt cgtgtctcta tagcaacaca caatcgtatt tatttcaaac 1200ctcgctgatc gtcctttttt cgtgtctcta tagcaacaca caatcgtatt tatttcaaac 1200
tttttttact ttgtttccca tccatcaaat ataagtataa aaatgtaaag aatcatcata 1260tttttttact ttgtttccca tccatcaaat ataagtataa aaatgtaaag aatcatcata 1260
tatagatcgt aaattcattg cttcctttgg ctttttattt catctagacg acgttaaaac 1320tatagatcgt aaattcattg cttcctttgg ctttttattt catctagacg acgttaaaac 1320
cagaccagac caaatacatt tatcattttt cccttttttc taaaattctc tctttgattc 1380cagaccagac caaatacatt tatcattttt cccttttttc taaaattctc tctttgattc 1380
ctatcttctt ctctttattt tcactttgtg ctttctctgt ctctcctatt atgagtctaa 1440ctatcttctt ctctttattt tcactttgtg ctttctctgt ctctcctatt atgagtctaa 1440
aagtctacta gctgttcaat agttttgtct ttctgtgttt cttcttcttc aaaaccgaaa 1500aagtctacta gctgttcaat agttttgtct ttctgtgttt cttcttcttc aaaaccgaaa 1500
gaaattcaaa aagagtcttt cgctgcttgt tagtggggtg aggaacaa 1548gaaattcaaa aagagtcttt cgctgcttgt tagtggggtg aggaacaa 1548
<210> 42<210> 42
<211> 440<211> 440
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 42<400> 42
aaacccgaac ccgaaccaaa cccgaaccaa aatcttaaat tacccgaatg ggtcttaaat 60aaacccgaac ccgaaccaaa cccgaaccaa aatcttaaat tacccgaatg ggtcttaaat 60
ttctaaatcc gaaaaacccg aacccaaaat acccaacccg aatctgaccc gaatatccga 120ttctaaatcc gaaaaacccg aacccaaaat acccaacccg aatctgaccc gaatatccga 120
acgcctaatt tttctatgtt aatgaaatca attatatgac atgtttataa agagaaataa 180180
attacggtga gaattaagcc catttacgtt acggaaataa aacacccatt taaaaaagcc 240attacggtga gaattaagcc catttacgtt acggaaataa aacacccatt taaaaaagcc 240
caacacgtga agcccatttc cgagtgcgtc ccacatttac tccaacggtc gaatcgactc 300caacacgtga agcccatttc cgagtgcgtc ccacatttac tccaacggtc gaatcgactc 300
aaacattcaa aatacaaaaa cgctatcttt atcgtcttcc tctgtctctc tctcacaaca 360aaacattcaa aatacaaaaa cgctatcttt atcgtcttcc tctgtctctc tctcacaaca 360
cataacgttc aaatcctctc tctctctatc tcgtctctta tctctagatc taaaaatctc 420cataacgttc aaatcctctc tctctctatc tcgtctctta tctctagatc taaaaatctc 420
ttctttcctc aatctctgtt 440ttctttcctc aatctctgtt 440
<210> 43<210> 43
<211> 317<211> 317
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 43<400> 43
acagacattt acttatacgg ttattgaggt tgaactggac cggagtagca ataaattatc 60acagacattt acttatacgg ttattgaggt tgaactggac cggagtagca ataaattatc 60
ggttcagttt gggagatcaa accgtttaaa agaaaataat ttgaaatggc cacgcagaat 120ggttcagttt gggagatcaa accgtttaaa agaaaataat ttgaaatggc cacgcagaat 120
acgagggtct gaggattgta cctcctttct ctgcaaaaac ttaaacgttg atttgactca 180180
agcgtcaagg taaggtactc tctcttcata caacatttta gctttacttt ttctctttac 240agcgtcaagg taaggtactc tctcttcata caacatttta gctttacttt ttctctttac 240
tcttctctct ctctttctct ttctctttct ctttcactcg ttctctctca ctcactctct 300tcttctctct ctctttctct ttctctttct ctttcactcg ttctctctca ctcactctct 300
tcacacacag atccaag 317
<210> 44<210> 44
<211> 3912<211> 3912
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 44<400> 44
acaccaataa aaatacacag caataaaatc gctacgtata tatatatata atatgtatta 60acaccaataa aaatacacag caataaaatc gctacgtata tatatatata atatgtatta 60
tctattacaa gatagtaata gagtatagca agttgtatca tctaacaaac tatgcgaata 120tctattacaa gatagtaata gagtatagca agttgtatca tctaacaaac tatgcgaata 120
aaatttgaac attgtgacat gtagatgtag tgtaatttag ctaagtgctt atcatcagta 180aaatttgaac attgtgacat gtagatgtag tgtaatttag ctaagtgctt atcatcagta 180
acatagaccg acttaacttt ttacgaaaaa aaaaaagtaa catagaccga aaaaatgcat 240acatagaccg acttaacttt ttacgaaaaa aaaaaagtaa catagaccga aaaaatgcat 240
atcgtaaatt taatggaaaa cacaatttac gataagtaaa aaacaaaaag aaattacgat 300atcgtaaatt taatggaaaa cacaatttac gataagtaaa aaacaaaaag aaattacgat 300
aagtcgagaa aaatgcaaca aattgagata aagtattgat aaaaccatga aagtgtcggc 360360
gtatgtaaat gcggtgatta atgtgatcat tagagcgtgt gtgttaaacg cggcggtttt 420gtatgtaaat gcggtgatta atgtgatcat tagagcgtgt gtgttaaacg cggcggtttt 420
agtggagatt gatcagctga taacactctt accgggacga atctaattcc atattcatgg 480agtggagatt gatcagctga taacactctt accgggacga atctaattcc atattcatgg 480
cttgttaaaa cctaagacat acgcaatctc taatttgcta gtatagttag ttctatatta 540cttgttaaaa cctaagacat acgcaatctc taatttgcta gtatagttag ttctatatta 540
tttttcgact aataatgtaa acatatgatt attaagtcgc aaaaagagtg cttaacaacc 600tttttcgact aataatgtaa acatatgatt attaagtcgc aaaaagagtg cttaacaacc 600
aaaaagtgga ttaattaact tggtgggaaa agttacaaaa cctttaatga ttactctttg 660660
taccaagaat agtggcgaag cactataaga gcagagaaaa gaagctcaat aatgtactaa 720taccaagaat agtggcgaag cactataaga gcagagaaaa gaagctcaat aatgtactaa 720
aagttgtaga tttttacagc ttaaatacac caaaattaat agaaaagttg gtaatttttt 780aagttgtaga tttttacagc ttaaatacac caaaattaat agaaaagttg gtaatttttt 780
aattcatggc tactgattta gattttagaa aacaatagta gtatcattgt cacatcttaa 840aattcatggc tactgattta gattttagaa aacaatagta gtatcattgt cacatcttaa 840
acacacaata ggtatgtttt aaatcaaagg ccgtagttaa tttgtcaaaa atgtatgcat 900acacacaata ggtatgtttt aaatcaaagg ccgtagttaa tttgtcaaaa atgtatgcat 900
ttggtatttg gatgtctccg aaaggatgga tatatggact tgttagataa tttcatacct 960ttggtatttg gatgtctccg aaaggatgga tatatggact tgttagataa tttcatacct 960
cagtatcaat agtcatggag cccaaattgc tcaaaaacat atttttaatt ccaagacttt 1020cagtatcaat agtcatggag cccaaattgc tcaaaaacat atttttaatt ccaagacttt 1020
gatgaagacg taataatgag tccaatgggc catcagatac aatgttcgga atttaacggg 1080gatgaagacg taataatgag tccaatgggc catcagatac aatgttcgga atttaacggg 1080
tttgttagtt ataagtattg ggcttgacct atctggttca atgatatgta ggaacaaccc 1140tttgttagtt ataagtattg ggcttgacct atctggttca atgatatgta ggaacaaccc 1140
aatttgcaaa gctttattaa aagactcttt agttgtcgtc aaggtttaac ttgtagtagt 1200aatttgcaaa gctttattaa aagactcttt agttgtcgtc aaggtttaac ttgtagtagt 1200
tggtaagaaa ttctacgtga aataggcaac attacaaaaa caaaaatcaa ttcgaaatca 1260tggtaagaaa ttctacgtga aataggcaac attacaaaaa caaaaatcaa ttcgaaatca 1260
tacaaaacga aaccaagtag taaccaacta cactattatg acattaatga ttagacattc 1320tacaaaacga aaccaagtag taaccaacta cactattatg acattaatga ttagacattc 1320
ccaaatcata caagttcctg tcatgaagga aacaatggtc cgtatttgca aacgattaca 1380ccaaatcata caagttcctg tcatgaagga aacaatggtc cgtatttgca aacgattaca 1380
aaaattcaaa ccaaaaatga aaaaacgagt taaattattt ggtttataaa aatagtaatg 1440aaaattcaaa ccaaaaatga aaaaacgagt taaattattt ggtttataaa aatagtaatg 1440
tcaacagaag actagattgg gaaacctgaa gcgaacagag cttttaaaaa cgagtttgaa 1500tcaacagaag actagattgg gaaacctgaa gcgaacagag cttttaaaaa cgagtttgaa 1500
cggctgggat catttggtac aatacccacc gtaagtttgt ttaccctagg gatgcaagcc 1560cggctgggat catttggtac aatacccacc gtaagtttgt ttaccctagg gatgcaagcc 1560
aaaggcccaa atcagttact acttactgct acaaccatcg tctcagcttt ttgtctcagc 1620aaaggcccaa atcagttact acttactgct acaaccatcg tctcagcttt ttgtctcagc 1620
tttttactaa tgaagcatac aatttcttgg gcatgtcaca tctcgacacg tgtccactat 1680tttttactaa tgaagcatac aatttcttgg gcatgtcaca tctcgacacg tgtccactat 1680
tctcttctct tattggctac tcgttcgtag gcttctgtta atagatgatc tctctataac 1740tctcttctct tattggctac tcgttcgtag gcttctgtta atagatgatc tctctataac 1740
tctaacagtc ttttctttct ctttatttcg ttttggtatt ttaagtttca aattgaaaat 1800tctaacagtc ttttctttct ctttatttcg ttttggtatt ttaagtttca aattgaaaat 1800
aataggagga aaagtctagt tttaaatatt gtttttttac aagtgaacgt gaaccaattt 1860aataggagga aaagtctagt tttaaatatt gtttttttac aagtgaacgt gaaccaattt 1860
acctcttttt ttttatatat cctatcggct aatctggtta gtatcggtag aaatgcaccg 1920acctcttttt ttttatatat cctatcggct aatctggtta gtatcggtag aaatgcaccg 1920
aggtgctaca gagattaatg ctagggatag tcagaccgct tgtatttctg actatcaagt 1980aggtgctaca gagattaatg ctagggatag tcagaccgct tgtatttctg actatcaagt 1980
aaatctacgc ccaactcaca tatttcccaa acaaatgtga tttttttttt tttttttttt 20402040
tttttttttt ttttgtaaca aatgtgattt tgttttcaag gaaaatagaa cttacgtttg 2100tttttttttt ttttgtaaca aatgtgattt tgttttcaag gaaaatagaa cttacgtttg 2100
ggaatttcac ccttcactaa agcttccttc tgccattaga ccacaaaggc ttgggcaatt 2160ggaatttcac ccttcactaa agcttccttc tgccattaga ccacaaaggc ttgggcaatt 2160
taccattttt gtaaaagtag aaaacaaaat gcctaaaatg ttcatacttc attacatcaa 2220taccatttttt gtaaaagtag aaaacaaaat gcctaaaatg ttcatacttc attacatcaa 2220
caaggttatg cccacgatat agaggcatgt aacatttata tatatagtgg aagaagccta 22802280
cgagctttat taataagtat aaactctgat tattaggtaa ataaattact taaaacgatt 2340taataagtat aaactctgat tattaggtaa ataaattact taaaacgatt 2340
actcaactga caaaaccgta gttgaataat aaggttacta tgaataccga ttgaatattg 2400actcaactga caaaaccgta gttgaataat aaggttacta tgaataccga ttgaatattg 2400
caaagccgga attgaaaaat atataacaga tcaaatgttc aagtgtggtc ataattctca 2460caaagccgga attgaaaaat atataacaga tcaaatgttc aagtgtggtc ataattctca 2460
cataggtcat atagctgaac ccatgcatct atttactagt ctatagaaag tactagagac 2520cataggtcat atagctgaac ccatgcatct atttactagt ctatagaaag tactagagac 2520
gcatacagct gaacctactc tattctttta ttaattttgg ttctcgtgga tacaaaattc 25802580
ctccaacatt tattagaacg aataaaacca atatgatgat gattagttat tggtaaacat 2640ctccaacatt tattagaacg aataaaacca atatgatgat gattagttat tggtaaacat 2640
ataaacgttg agtaaacttc aaaatagatt gaagtactat taagacttgc attttttccc 2700ataaacgttg agtaaacttc aaaatagatt gaagtactat taagacttgc attttttccc 2700
cttgggttat attcttgaat cgtttcgaag tattttaact ttcaagaata gaaggttcct 2760cttgggttat attcttgaat cgtttcgaag tattttaact ttcaagaata gaaggttcct 2760
caactataaa caattacatt aatcaaaacc atttctatgt aaacaacata atttttgtat 2820caactataaa caattacatt aatcaaaacc atttctatgt aaacaacata atttttgtat 2820
attttagtct tccccaaaag tttgaccgat agggcggttt agaccgtata gtacgactgt 28802880
acaacaaaaa ggactctgga gacctaaaga tccaaaacta tgcaaaataa agatacggtc 2940acaacaaaaa ggactctgga gacctaaaga tccaaaacta tgcaaaataa agatacggtc 2940
ggaccaattt aatctaacaa aaccaaatcc ttatactaaa ctatttaccg atacatttcc 3000ggaccaattt aatctaacaa aaccaaatcc ttatactaaa ctatttaccg atacatttcc 3000
atataacaca gtacacacaa ttaaatcaaa cattattgga agaacaagat agaatattgg 30603060
cttaatctcg aacgattaga gttatcctag agcctcggag cttttgtcac atataatata 31203120
aactatggta tatataaaca tgactctcat ttgtatttat cgcaaggtac aattccacca 3180aactatggta tatataaaca tgactctcat ttgtatttat cgcaaggtac aattccacca 3180
atttttttcg tcccactcat acagctttaa ttgtgaaatc aatccataaa aaaccaacat 3240atttttttcg tcccactcat acagctttaa ttgtgaaatc aatccataaa aaaccaacat 3240
gtgacatggt ctctataact ataactataa gatagtaaaa aattcacatc aacataaaag 3300gtgacatggt ctctataact ataactataa gatagtaaaa aattcacatc aacataaaag 3300
aaaaccaatc atattggcta aaaaaaacta acggtcgaaa aacgtataac cacaaaacca 33603360
aaccggtcca accggtgtcc ccaatcacta tcaaagcatt aactaacttt cacaaggaaa 3420aaccggtcca accggtgtcc ccaatcacta tcaaagcatt aactaacttt cacaaggaaa 3420
agcatagttc agtttctcta catcgcttcc catcctctta accctgttta ctcgaatcat 3480agcatagttc agtttctcta catcgcttcc catcctctta accctgttta ctcgaatcat 3480
ccaccgttgg atcaaacacg cgctacaaat ctagcgcgtg accgaggttt ttacacagtg 3540ccaccgttgg atcaaacacg cgctacaaat ctagcgcgtg accgaggtttt ttacacagtg 3540
gaatattacc atgcattgga aagcggcgtc tacaacaaac ggcgggtcat gtcaccgtca 3600gaatattacc atgcattgga aagcggcgtc tacaacaaac ggcgggtcat gtcaccgtca 3600
aaatcaacct ttcttaattc ctaacgccgt tacttatctc cgtttactaa aaatgttaat 3660aaatcaacct ttcttaattc ctaacgccgt tacttatctc cgtttactaa aaatgttaat 3660
gcgtgtgaga gtgaagatca tatactaatt agaagtggct aatgttttaa cgtgacatta 3720gcgtgtgaga gtgaagatca tatactaatt agaagtggct aatgttttaa cgtgacatta 3720
ttatcatagt taatggttcg atcagagttt taagtagtaa atgatataag tgtgtgtata 37803780
taattgcata catatatact ctcacactct gacagatttg tcgtggtctt agtattctct 3840taattgcata catatatact ctcacactct gacagatttg tcgtggtctt agtattctct 3840
ttcatggcta gttatatagg gctctagtac attatctctc tctccccatt tctctgtctc 3900ttcatggcta gttatatagg gctctagtac attatctctc tctccccatt tctctgtctc 3900
tctcttcttt aa 3912tctcttcttt aa 3912
<210> 45<210> 45
<211> 2000<211> 2000
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 45<400> 45
atctttatgg tcaccgagtc tactgatata attttactgt cgcagtttgt ttccactact 60atctttatgg tcaccgagtc tactgatata attttactgt cgcagtttgt ttccactact 60
taagtttcta taatttcaca gtttgaaaga aaaattactg gttattcagc taaattacaa 120120
agattagttt aattagttta gccagtataa tgttttagta aagtattaaa cggcattttt 180agattagttt aattagttta gccagtataa tgttttagta aagtattaaa cggcattttt 180
cgttgggaga attatgttat ggtataatct actaatacat acttttacac atatatcaaa 240cgttgggaga attatgttat ggtataatct actaatacat acttttacac atatatcaaa 240
aagtttgacc atagtaggta gtacaacata gaagaatcaa gatcggaacc agcaaggaag 300aagtttgacc atagtaggta gtacaacata gaagaatcaa gatcggaacc agcaaggaag 300
aagatacggt cggtccatat taagctaaga ggaccaacgt aactcgatat atatttttct 360aagatacggt cggtccatat taagctaaga ggaccaacgt aactcgatat atatttttct 360
gttctctacg ttaccaccat ataaatttta atattgaaaa aatcatcttt tggcattgtg 420gttctctacg ttaccaccat ataaatttta atattgaaaa aatcatcttt tggcattgtg 420
tttgatgtcg gattcggaat atggaaagag gagagatatg agattttggc acaaaggaag 480tttgatgtcg gattcggaat atggaaagag gagagatatg agattttggc acaaaggaag 480
ctgccaaagc attagggcaa ccgagtagta acgagatcaa acatcgtttc aatcggacgg 540ctgccaaagc attagggcaa ccgagtagta acgagatcaa acatcgtttc aatcggacgg 540
tcggggtttg accaatattt ctcggatatc ttttggaccc tacgttctga cttgaacttg 600tcggggtttg accaatattt ctcggatatc ttttggaccc tacgttctga cttgaacttg 600
atcagtcact tcagtacctt agttttcatt ttcaatgtga tcatgagttt ttttttacat 660660
gttagcttca aaacaaatac taatattcat taactatgga tcggcatagt tttcatgtaa 720gttagcttca aaacaaatac taatattcat taactatgga tcggcatagt tttcatgtaa 720
tcagctgagc gtttatcata ttgattgaag ctaacatgta aaattctcat gatcacattg 780tcagctgagc gtttatcata ttgattgaag ctaacatgta aaattctcat gatcacattg 780
acttttgcct acaaatttta aaagagtata caaataattg cttaatgaag atagcttcca 840acttttgcct acaaatttta aaagagtata caaataattg cttaatgaag atagcttcca 840
tagagaaaga gtaacagctt tatacggagg catagcttta gacacgatct ctgctcttgt 900tagagaaaga gtaacagctt tatacgggagg catagcttta gacacgatct ctgctcttgt 900
gttttttgtt taacactgaa tccacagtga aattactgct catttttttt cattttttat 960gttttttgtt taacactgaa tccacagtga aattactgct cattttttttt catttttat 960
tacatttttt tttttacttt tttatttatt acaatctaca gttctaccaa cttattcaac 1020tacatttttt tttttacttt tttatttatt acaatctaca gttctaccaa cttattcaac 1020
ctagtggtac catatcgacc ccaaaattaa tcaatctaat tacaaggtag aaatagaaag 1080ctagtggtac catatcgacc ccaaaattaa tcaatctaat tacaaggtag aaatagaaag 1080
attttatcaa aggagacaac tctgatcgat aatatgttgc aataaaacca tgaaaaactg 11401140
taaaaaatat tgaaagctga agaaaaattt tcaaatcgat aaaaggatag tactaaacca 1200taaaaaatat tgaaagctga agaaaaattt tcaaatcgat aaaaggatag tactaaacca 1200
atccggtttg tggcatcttt ttcacccaat cactatcaaa gcattaacta aaaatcacaa 1260atccggtttg tggcatcttt ttcacccaat cactatcaaa gcattaacta aaaatcacaa 1260
ggaagagcat aatttgattc tctacatcgc agtccacgat aggatttctc tatccaccgt 1320ggaagagcat aatttgattc tctacatcgc agtccacgat aggatttctc tatccaccgt 1320
tggatcaaat ttaataatga tgcacgcgcg cgtcaacggg attttaccca gcaaaggaat 1380tggatcaaat ttaataatga tgcacgcgcg cgtcaacggg attttaccca gcaaaggaat 1380
gtcttttcac cggactctta aaagacgttc ttcttttttc acctttgcat tggaaaacgg 1440gtcttttcac cggactctta aaagacgttc ttcttttttc acctttgcat tggaaaacgg 1440
cgtttcttct tagaaccgtc gccgtcaaat catacggcct aataaatctc cgtttaacgc 1500cgtttcttct tagaaccgtc gccgtcaaat catacggcct aataaatctc cgtttaacgc 1500
cgttacttta ccgttaagta ctaaaaaaac aaaaaaaaat catttcgatc actgtctcat 1560cgttacttta ccgttaagta ctaaaaaaac aaaaaaaaat catttcgatc actgtctcat 1560
taagatgatc ggagatgttt tagcagggtt taacaagtga tgatagtaat gtatgtatat 1620taagatgatc ggagatgttt tagcaggggtt taacaagtga tgatagtaat gtatgtatat 1620
atgttactga cattattttg tcgttgtcta ataggagggt actaaagttt ctctctctca 1680atgttactga cattattttg tcgttgtcta ataggagggt actaaagttt ctctctctca 1680
tggcgtcgga gctcagcctc tagtaatgta gactgtcctc tctttctctc tctcttcttt 1740tggcgtcgga gctcagcctc tagtaatgta gactgtcctc tctttctctc tctcttcttt 1740
aaacatctct gctctgtttt ccttccagtt cacgctaatc tcctgtgtcg gtcccctctc 1800aaacatctct gctctgtttt ccttccagtt cacgctaatc tcctgtgtcg gtcccctctc 1800
tcttttcctt tggtctctcc caacaatggc agaacgactt tgtacccttc ttttgctctt 18601860
tgtttgaatt tcgtttcttg ctacaaagct tcaaaggatc tgacttttcc ctaaacagaa 19201920
aaagaggtct ttaaccaaaa aaggttgtta cttgttttct gggtttcgtg gtgttactct 1980aaagaggtct ttaaccaaaa aaggttgtta cttgttttct gggtttcgtg gtgttactct 1980
tgaggaagaa gaagaagaag 2000tgaggaagaa gaagaagaag 2000
<210> 46<210> 46
<211> 1470<211> 1470
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 46<400> 46
ctacctaata taactagcta gggatttcta ctcttgtttt cataatcgat ctacggacat 60ctacctaata taactagcta gggatttcta ctcttgtttt cataatcgat ctacggacat 60
ttctcggaac gtggtcaaga ttcatgagtc ttctgttttt tatgtctctg ttcaatttgg 120ttctcggaac gtggtcaaga ttcatgagtc ttctgttttt tatgtctctg ttcaatttgg 120
tttagagatt agtatgctta tttgtttatt tcatatatgg ttatgagagg agaggctaat 180tttagagatt agtatgctta tttgtttatt tcatatatgg ttatgagagg agaggctaat 180
ggcatatact ctgatgtttg tgatggctgc taatatcgtt gaggagttat tcacgttgtt 240ggcatatact ctgatgtttg tgatggctgc taatatcgtt gaggagttat tcacgttgtt 240
tcatgcgcaa aaatcaacag aaaaaattct gattatgagc caactctgtg aacccttata 300tcatgcgcaa aaatcaacag aaaaaattct gattatgagc caactctgtg aacccttata 300
gtgcgcccag aggtttgcga ggcaaaatcc cgatgaacca gaaggaattt tagatctcta 360gtgcgcccag aggtttgcga ggcaaaatcc cgatgaacca gaaggaattt tagatctcta 360
tcaacaataa ctatgatgga gctcgtttaa attcatcaca gcgacaacat cattaggctg 420tcaacaataa ctatgatgga gctcgtttaa attcatcaca gcgacaacat cattaggctg 420
cccaacgtct atgtctcctg gaggtgatgg tacttgatct ctcaaccaat tttcttgaaa 480cccaacgtct atgtctcctg gaggtgatgg tacttgatct ctcaaccaat tttcttgaaa 480
atatcatgcc ttgtgagcgc tttcatattg cgcctaaaat acccaatacg caatgaacct 540atatcatgcc ttgtgagcgc tttcatattg cgcctaaaat acccaatacg caatgaacct 540
acttccaaag gcatagaaaa aaaactgata atgataatga gatttgtcac tatacttatc 600acttccaaag gcatagaaaa aaaactgata atgataatga gatttgtcac tatacttatc 600
ctatccctac ataggagccg tttgattgtt tagtccatgt tttcattttg tttagtctaa 660660
tgctatataa cttttcttta tcagtctatt gttatatgac ttatatatat ctcaagagat 720tgctatataa cttttcttta tcagtctatt gttatatgac ttatatatat ctcaagagat 720
aaggccaata aatcttcttc ttaattatat ctgaagactc aaaacatatt ttgagtttaa 780aaggccaata aatcttcttc ttaattatat ctgaagactc aaaacatatt ttgagtttaa 780
taaaataaat aacgtccaaa tgctacatac aaacggacca aattcatgga ggtataaatt 840taaaataaat aacgtccaaa tgctacatac aaacggacca aattcatgga ggtataaatt 840
taaattattt tttgttccaa agtgtatgca gtgatttatt gatgaatgcg atagagcggc 900taaattattt tttgttccaa agtgtatgca gtgatttatt gatgaatgcg atagagcggc 900
gaaagagaat aatcgtcacc tagaagacaa attgatcggc cgtacatata tacataaata 960gaaagagaat aatcgtcacc tagaagacaa attgatcggc cgtacatata tacataaata 960
caaacctgcc acttcacatg tcacccacct ttaagcaccc ccttcacata catactttct 1020caaacctgcc acttcacatg tcacccacct ttaagcaccc ccttcacata catactttct 1020
ataacaaaaa tatcagcttc tagttcatat ttatgttaca ataactcgag tgaatcatac 1080ataacaaaaa tatcagcttc tagttcatat ttatgttaca ataactcgag tgaatcatac 1080
taaaaaaatg taatgctttc tctaaatagg agataaaatg caccctccga cctaactaaa 1140taaaaaaatg taatgctttc tctaaatagg agataaaatg caccctccga cctaactaaa 1140
gattccttat tttagctatt taagacatat tgcacatgta tagagataca taaacacata 1200gattccttat tttagctatt taagacatat tgcacatgta tagagataca taaacacata 1200
tgcaatatgc acatcttcta tacattgaaa aaagctgatc ttgcaaatat ttgtcttaca 12601260
caacacaagc gaccaaagcg atgcgtttcc caatgataag gttacgacat acttacacga 1320caacacaagc gaccaaagcg atgcgtttcc caatgataag gttacgacat acttacacga 1320
ctctctctat tgtctcgtct ctttctttcc tcatccctct cctttgtctc ctttcactct 1380ctctctctat tgtctcgtct ctttctttcc tcatccctct cctttgtctc ctttcactct 1380
atttttcact tttcagaata cttttacgta aaaatcatgg acatgtcatt gtctccaccc 1440atttttcact tttcagaata cttttacgta aaaatcatgg acatgtcatt gtctccaccc 1440
tactatactc tttttttgtt ctttttgttt 1470tactatactc tttttttgtt ctttttgttt 1470
<210> 47<210> 47
<211> 1793<211> 1793
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 47<400> 47
ttggttgtct ggcatcatca ttttgtaccg tttctcccaa agtaagaaac ggtacaatct 60ttggttgtct ggcatcatca ttttgtaccg ttttctcccaa agtaagaaac ggtacaatct 60
tctcttatat agatttcata ccccaaaacc ctaaattcat tagggttttc aaaaaaaaaa 120tctcttatat agatttcata ccccaaaacc ctaaattcat tagggttttc aaaaaaaaaa 120
atcacgttta cctctaaacc aatcttctct tatatagata aatcataacg tttgtttgat 180180
ttttcagttt tctacttaac caatattaaa ctaaagtcga attgagatga gtggtagcaa 240tttcagttt tctacttaac caatattaaa ctaaagtcga attgagatga gtggtagcaa 240
accacagttt aattaagaag ttaattatag gccacatgat tgagcaagcc tttttgtttt 300accacagttt aattaagaag ttaattatag gccacatgat tgagcaagcc ttttgtttt 300
gtaacacatc ttatcagctg cttaaaattt tggctgcctc ccattggcca actggtctaa 360gtaacacatc ttatcagctg cttaaaattt tggctgcctc ccattggcca actggtctaa 360
acatcattgc attggcattc tcataatcaa tcaatctaat gagaaacttt gaatatttat 420acatcattgc attggcattc tcataatcaa tcaatctaat gagaaacttt gaatatttat 420
gaaaaactga ataacaacat aacataaacg aacaatgtaa aaaagaaaaa cacaaaaaaa 480480
aaaacacttt aaaaaacaaa aaccaaaaac tcttaaacta taaactcatg aacacttagt 540aaaacacttt aaaaaacaaa aaccaaaaac tcttaaacta taaactcatg aacacttagt 540
gatgaggtct gaaagggtgt aaccaccacc tgttgtcaat aggtgacaac ttcttcttgg 600gatgaggtct gaaagggtgt aaccaccacc tgttgtcaat aggtgacaac ttcttcttgg 600
gaacattcgg gaaagtgaag gcttaggtga cggttgtctt aaaagtctct tttagttaat 660gaacattcgg gaaagtgaag gcttaggtga cggttgtctt aaaagtctct tttagttaat 660
tcatcgtatt ttcgatgggc attacgtttg atgcataaag gcccatatgg gctatacatg 720tcatcgtatt ttcgatgggc attacgtttg atgcataaag gcccatatgg gctatacatg 720
tactgcgttt gagtggcttt ctaaggattg atgtattgtc tctatgagag tattcgttta 780780
actcatggag atctactctc cacgatattt tctgtaaact tttctttttg ttgattagat 840actcatggag atctactctc cacgatattt tctgtaaact tttctttttg ttgattagat 840
aaatagaaaa ttgtgtagag cgaaactttt aatgaattaa aatgcggaag cgattaaagc 900aaatagaaaa ttgtgtagag cgaaactttt aatgaattaa aatgcggaag cgattaaagc 900
atgaatagat aaattggaca agagattaaa cgagggatca tctagttttt acactgatca 960atgaatagat aaattggaca aggattaaa cgagggatca tctagttttt acactgatca 960
ctagtcatct gcttgcagaa gaagtatatc attaatcaag caaaacgagg gcataaattt 1020ctagtcatct gcttgcagaa gaagtatatc attaatcaag caaaacgagg gcataaattt 1020
cttacaaata acttttacag taggttaatg attttttaat aacttgtcca tttcacatgc 1080cttacaaata acttttacag taggttaatg attttttaat aacttgtcca tttcacatgc 1080
atgtgtatct ttgtactata catgctaagt gtttcattaa tcaagataaa cgtgtctacg 1140atgtgtatct ttgtactata catgctaagt gtttcattaa tcaagataaa cgtgtctacg 1140
aataacttaa aacagtacaa cttccctaaa aaattcatta aatgaaaggt ttttatagat 1200aataacttaa aacagtacaa cttccctaaa aaattcatta aatgaaaggt ttttatagat 1200
tatacattgc acggtacggt tcggttacca ttcgaagtct aaaaagagaa tgacggttct 1260tatacattgc acggtacggt tcggttacca ttcgaagtct aaaaagagaa tgacggttct 1260
gataatgctt ttaatcgctt ttgtattgta aatcattaaa acagtaagcc ggataccgaa 1320gataatgctt ttaatcgctt ttgtattgta aatcattaaa acagtaagcc ggataccgaa 1320
ttactaatca gacccaaaaa agaatctata ggaaaaatat caactgaaga gcgggtaggc 1380ttactaatca gacccaaaaa agaatctata ggaaaaatat caactgaaga gcgggtaggc 1380
ttgaccttga aaggaagaat ggtgagcgag cggtggatag atatgtaata aattgtaacg 1440ttgaccttga aaggaagaat ggtgagcgag cggtggatag atatgtaata aattgtaacg 1440
ctttcaaaat gtcaaagtca caagtcacat tactcacgag ccaacactaa ccatgcaact 1500ctttcaaaat gtcaaagtca caagtcacat tactcacgag ccaacactaa ccatgcaact 1500
tttgttttga cattttccta aactttaggt ataaaatacc cgcgtaataa ataacctctt 15601560
cataattggg tccacccact cacaggtcca cacataagga accgaaaaag gtaaaattca 1620cataattggg tccaccact cacaggtcca cacataagga accgaaaaag gtaaaattca 1620
aaaacttaca aagtttttta gagatgatgt ggtgaagtat tgcattaatg gaataatggg 1680aaaacttaca aagtttttta gagatgatgt ggtgaagtat tgcattaatg gaataatggg 1680
aaaagaaagt aattgcaacg tacgtataga ttaatccatt gacacaaatg aaaagtttct 1740aaaagaaagt aattgcaacg tacgtataga ttaatccatt gacacaaatg aaaagtttct 1740
ttctatttaa tgtacacaac aaaggttctc ttcagagtaa tttaggggaa aaa 1793ttctatttaa tgtacacaac aaaggttctc ttcagagtaa tttaggggaa aaa 1793
<210> 48<210> 48
<211> 257<211> 257
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 48<400> 48
acacaacagg tccctacatt tgtacaatct cctctcttta aagactctct ctctttctct 60acacaacagg tccctacatt tgtacaatct cctctcttta aagactctct ctctttctct 60
ctccatctct atcttactct gtatttctgt cgtctgagca ctcaatgaaa ccactgtaaa 120ctccatctct atcttactct gtatttctgt cgtctgagca ctcaatgaaa ccactgtaaa 120
tttccgccag aatttgatgt gatggaacga taaaaatcat tttttctcgg ttaaagtaaa 180tttccgccag aatttgatgt gatggaacga taaaaatcat tttttctcgg ttaaagtaaa 180
aaaacaaaaa caaatttctg tagaaatcat aataaaagaa agaaaaaaaa tctaatgtcg 240aaaacaaaaa caaatttctg tagaaatcat aataaaagaa agaaaaaaaa tctaatgtcg 240
gtacataata cggttct 257gtacataata cggttct 257
<210> 49<210> 49
<211> 1787<211> 1787
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 49<400> 49
aagggatatt taatgggaag aaaagaaggg tggagatgta acaaaggcga agataatgga 60aagggatatt taatgggaag aaaagaaggg tggagatgta acaaaggcga agataatgga 60
tattcttggg atgttgtctt caaggccacg agcttagatt cttttagttt tgctcaattt 120120
gttaagtttc tacttttcct tttgttgctt actacttttg ctcatgatct ccatatacat 180gttaagtttc tacttttcct tttgttgctt actacttttg ctcatgatct ccatatacat 180
atcatacata tatatagtat actatcttta gactgatttc tctatacact atcttttaac 240atcatacata tatatagtat actatcttta gactgatttc tctatacact atcttttaac 240
ttatgtatcg tttcaaaact caggacgtac atgtttaaat ttggttatat aaccacgacc 300ttatgtatcg tttcaaaact caggacgtac atgtttaaat ttggttatat aaccacgacc 300
atttcaagta tatatgtcat accataccag atttaatata acttctatga agaaaataca 360atttcaagta tatatgtcat accataccag atttaatata acttctatga agaaaataca 360
taaagttgga ttaaaatgca agtgacatct ttttagcata ggttcatttg gcatagaaga 420taaagttgga ttaaaatgca agtgacatct ttttagcata ggttcatttg gcatagaaga 420
aatatataac taaaaatgaa ctttaactta aatagatttt actatattac aattttttct 480aatatataac taaaaatgaa ctttaactta aatagatttt actatattac aattttttct 480
ttttacatgg tctaatttat ttttctaaaa ttagtataat tgttgttttg atgaaacaat 540ttttacatgg tctaatttat ttttctaaaa ttagtataat tgttgttttg atgaaacaat 540
aataccgtaa gcaatagttg ctaaaagatg tccaaatatt tataaattac aaagtaaatc 600aataccgtaa gcaatagttg ctaaaagatg tccaaatatt tataaattac aaagtaaatc 600
aaataaggaa gaagacacgt ggaaaacacc aaataagaga agaaatggaa aaaacagaaa 660660
gaaatttttt aacaagaaaa atcaattagt cctcaaacct gagatattta aagtaatcaa 720gaaatttttt aacaagaaaa atcaattagt cctcaaacct gagatattta aagtaatcaa 720
ctaaaacagg aacacttgac taacaaagaa atttgaaacg tggtccaact ttcacttaat 780ctaaaacagg aacacttgac taacaaagaa atttgaaacg tggtccaact ttcacttaat 780
tatattgttt tctctaaggc ttatgcaata tatgccttaa gcaaatgccg aatctgtttt 840tatattgttt tctctaaggc ttatgcaata tatgccttaa gcaaatgccg aatctgtttt 840
tttttttttt gttattggat attgactgaa aataaggggt tttttcacac ttgaagatct 900tttttttttt gttattggat attgactgaa aataaggggt tttttcacac ttgaagatct 900
caaaagagaa aactattaca acggaaattc attgtaaaag aagtgattaa gcaaattgag 960caaaagagaa aactattaca acggaaattc attgtaaaag aagtgattaa gcaaattgag 960
caaaggtttt tatgtggttt atttcattat atgattgaca tcaaattgta tatatatggt 10201020
tgttttattt aacaatatat atggatataa cgtacaaact aaatatgttt gattgacgaa 10801080
aaaaaatata tgtatgtttg attaacaaca tagcacatat tcaactgatt tttgtcctga 11401140
tcatctacaa cttaataaga acacacaaca ttgaacaaat ctttgacaaa atactatttt 1200tcatctacaa cttaataaga acacacaaca ttgaacaaat ctttgacaaa atactatttt 1200
tgggtttgaa attttgaata cttacaatta ttcttctcga tcttcctctc tttccttaaa 1260tgggtttgaa attttgaata cttacaatta ttcttctcga tcttcctctc tttccttaaa 1260
tcctgcgtac aaatccgtcg acgcaataca ttacacagtt gtcaattggt tctcagctct 1320tcctgcgtac aaatccgtcg acgcaataca ttacacagtt gtcaattggt tctcagctct 1320
accaaaaaca tctattgcca aaagaaaggt ctatttgtac ttcactgtta cagctgagaa 1380accaaaaaca tctattgcca aaagaaaggt ctatttgtac ttcactgtta cagctgagaa 1380
cattaaatat aataagcaaa tttgataaaa caaagggttc tcaccttatt ccaaaagaat 14401440
agtgtaaaat agggtaatag agaaatgtta ataaaaggaa attaaaaata gatattttgg 1500agtgtaaaat agggtaatag agaaatgtta ataaaaggaa attaaaaata gatattttgg 1500
ttggttcaga ttttgtttcg tagatctaca gggaaatctc cgccgtcaat gcaaagcgaa 1560ttggttcaga ttttgtttcg tagatctaca gggaaatctc cgccgtcaat gcaaagcgaa 1560
ggtgacactt ggggaaggac cagtggtccg tacaatgtta cttacccatt tctcttcacg 1620ggtgacactt ggggaaggac cagtggtccg tacaatgtta cttacccatt tctcttcacg 1620
agacgtcgat aatcaaattg tttattttca tatttttaag tccgcagttt tattaaaaaa 16801680
tcatggaccc gacattagta cgagatatac caatgagaag tcgacacgca aatcctaaag 1740tcatggaccc gacattagta cgagatatac caatgagaag tcgacacgca aatcctaaag 1740
aaaccactgt ggtttttgca aacaagagaa accagcttta gcttttc 1787aaaccactgt ggtttttgca aacaagagaa accagcttta gcttttc 1787
<210> 50<210> 50
<211> 1731<211> 1731
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 50<400> 50
atttctctta aaataactaa attatatgaa gaaaaaacaa gagagataac gacgatcttg 60atttctctta aaataactaa attatatgaa gaaaaaacaa gagagataac gacgatcttg 60
atctaattag gaaagttttc taatgatggt aatgtgaaag agtgcttctt tcactcttta 120atctaattag gaaagttttc taatgatggt aatgtgaaag agtgcttctt tcactcttta 120
tttaaagaag agatattttg gaaatagcgg tttgaaagaa agctataact tggtattggg 180tttaaagaag agatattttg gaaatagcgg tttgaaagaa agctataact tggtattgggg 180
gaaggaaata aaccagagtt ggtttctagg atgtgttgtc gacttctcat tggtctgatt 240gaaggaaata aaccagagtt ggtttctagg atgtgttgtc gacttctcat tggtctgatt 240
agacttccat tgcctaatgt cgagtctatg ttttctcgta tataattttc aataagtgga 300agacttccat tgcctaatgt cgagtctatg ttttctcgta tataattttc aataagtgga 300
acattgataa aaaaaataac aataattgat tatcgacgtc tagtgacgtg aaaatgggtt 360acattgataaaaaaaataac aataattgat tatcgacgtc
agctagacaa gtgaaatatg cacagaccac agacttcaga gcttccccaa gtgtcgcatt 420agctagacaa gtgaaatatg cacagaccac agacttcaga gcttccccaa gtgtcgcatt 420
cgatttgcat tgacggcgga tatttcttaa ataattttct ttcattttct aactatatta 480cgatttgcat tgacggcgga tatttcttaa ataattttct ttcattttct aactatatta 480
ttggttgttg atatatattt tttgtaaata aaaatgtaat aatgtaacca agtagttata 540aaaatgtaat aatgtaacca agtagttata 540
gaggttttaa ttgctcggcg gtaagaacag tgaagtacat atagatgttt cttggtagag 600gaggttttaa ttgctcggcg gtaagaacag tgaagtacat atagatgttt cttggtagag 600
ttgaacttca attgacaact gtgtattttg ttgagtcaat agatttcacg ttggatataa 660ttgaacttca attgacaact gtgtattttg ttgagtcaat
agatacagca gaagaaaatt aattttgaag tttgggttaa ttaaggaaat atccaaaata 720agatacagca gaagaaaatt aattttgaag tttgggttaa ttaaggaaat atccaaaata 720
caaattacca taagtttttt ttgtactact aagcaaatta tatactcaac ttttcttttt 780caaattacca taagtttttt ttgtactact aagcaaatta tatactcaac ttttcttttt 780
gctaaaattt gtctttgatg gaattctagg gaataaatta agagaactac gtattataga 840gctaaaattt gtctttgatg gaattctagg gaataaatta agagaactac gtattataga 840
ttaatacacc atgatcactt taagcagacc aaatgataat aacttattga acacgattta 900ttaatacacc atgatcactt taagcagacc aaatgataat aacttattga acacgattta 900
ttcatgtagt acgtacatag atccaaagat cggaataaga tacgagagaa aatggttacc 960ttcatgtagt acgtacatag atccaaagat cggaataaga tacgagagaa aatggttacc 960
ccatttattt atgtggagat aagaagcaag caactaaagc aattaaaagt accaaagaag 1020ccatttattt atgtggagat aagaagcaag caactaaagc aattaaaagt accaaagaag 1020
aacatttaga gcaaactaaa agaatctaaa gctcgtgccc ttggcgacac tatccgctga 1080aacatttaga gcaaactaaa agaatctaaa gctcgtgccc ttggcgacac tatccgctga 1080
tctccattat caacactttt cgtacatatg cagtacttcc tcctttgtcc attattaaaa 11401140
tttagcatat atgtttgaat cgttgccgct ttcaattttt tttttttttg agtatattgt 1200tttagcatat atgtttgaat cgttgccgct ttcaattttt ttttttttttg agtatattgt 1200
tttgagtgtt gtatatccgt caacatatta cacatctata tttttcaact ttttggatga 1260tttgagtgtt gtatatccgt caacatatta cacatctata tttttcaact ttttggatga 1260
atttactaag ttggcataaa ttatcaaaaa acaaattggt aaatgatctg ttattaaatt 1320atttactaag ttggcataaa ttatcaaaaa acaaattggt aaatgatctg ttattaaatt 1320
gtgattaaaa taacattttg accaaaacaa acctcgcatc acacataatt atgatatttt 13801380
attatatggt gcatgcaata tctgttaact aagatgctat ttgaatgtta atttcaatgt 1440attatatggt gcatgcaata tctgttaact aagatgctat ttgaatgtta atttcaatgt 1440
gtcatccaat ccaatcgagt ttttttttct ttttaaaaaa acaacaaaat tcatggtcac 1500gtcatccaat ccaatcgagt ttttttttct ttttaaaaaa acaacaaaat tcatggtcac 1500
tataaatact cttttattct taagaatttt tttctcctgt attttccaaa aataatagtc 15601560
catttttacc ttatttatct cccgaagaaa ttggatcgat caatgaagga aagaaatcaa 1620catttttacc ttatttatct cccgaagaaa ttggatcgat caatgaagga aagaaatcaa 1620
atggtcttat gatcaaagca acattgagaa attcaatcta caaaaagcag acacatctcg 1680atggtcttat gatcaaagca acattgagaa attcaatcta caaaaagcag acacatctcg 1680
acgtaagaaa gaagaaatta tcatagtgat caaaagtacg taaaatcgga a 1731acgtaagaaa gaagaaatta tcatagtgat caaaagtacg taaaatcgga a 1731
<210> 51<210> 51
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 51<400> 51
atagaaaaaa gtggttatcc aagctacaca aactttttag acttatttct ctcattcttc 60atagaaaaaa gtggttatcc aagctacaca aactttttag acttatttct ctcattcttc 60
tagagatttt taatgaaatt tgtatatact tgaaatgcat ataaaataaa taagaaaaca 120tagagatttt taatgaaatt tgtatatact tgaaatgcat ataaaataaa taagaaaaca 120
atatctactt aatgtcctgt tcaagaatta ttaagaaatt tcactacgtt gttaagtcca 180atatctactt aatgtcctgt tcaagaatta ttaagaaatt tcactacgtt gttaagtcca 180
ttttactcca ccttctccac tggagttaga ctctactaag tcgcgttatc ctgcagagta 240ttttactcca ccttctccac tggagttaga ctctactaag tcgcgttatc ctgcagagta 240
aagattgact atgcattgga ccttgtcgat gtgaaaatgt taaaaagata attattatga 300aagattgact atgcattgga ccttgtcgat gtgaaaatgt taaaaagata attattatga 300
aatctctact ataacatatt tggtttcctc aattttaaaa tacctatttt tttctcagtt 360360
taccattaac caatctattc cgtgatattt aatgtttaaa cccttcttca attctattta 420taccattaac caatctattc cgtgatattt aatgtttaaa cccttcttca attctattta 420
acctacattc taaacaaggt gtcctcattt tcaaaatcct aaactcatct tcatctatat 480acctacattc taaacaaggt gtcctcattt tcaaaatcct aaactcatct tcatctatat 480
ttctattttc tgccaaaatc ataccacaaa aaacatatac gaaaaatgac cacggaaatt 540ttctattttc tgccaaaatc ataccacaaa aaacatatac gaaaaatgac cacggaaatt 540
gtcttttatt gtttatttcc aaagtcaacc aagttgactg ttctttatat aatgattttt 600gtcttttatt gtttatttcc aaagtcaacc aagttgactg ttcttttat aatgattttt 600
ttttaaaaaa ttatatattg agctaagaaa atattaagtg taattttcaa aaagagaaaa 660ttttaaaaaa ttatatattg agctaagaaa atattaagtg taattttcaa aaagagaaaa 660
tatatttatt ataaaaatct atagtggtgg atcaaaattc tggtttaaat tattgtatca 720tatatttatt ataaaaatct atagtggtgg atcaaaattc tggtttaaat tattgtatca 720
attttgaggt tcaaatttta ggatggaaga gaaacgtaga atgcacttaa agttctgtcg 780attttgaggt tcaaatttta ggatggaaga gaaacgtaga atgcacttaa agttctgtcg 780
atttttgtta gtacataatc cctcatataa ccatacatat acttattgca ataaccatac 840atttttgtta gtacataatc cctcatataa ccatacatat acttattgca ataaccatac 840
gttaagaata gggaccaact tcatcggtgc ttctgttaga catttcaaga atgatatatc 900gttaagaata gggaccaact tcatcggtgc ttctgttaga catttcaaga atgatatatc 900
acattcatgt atctccgtat atgtattaag accaatgact aaactcagcc attgtagata 960acattcatgt atctccgtat atgtattaag accaatgact aaactcagcc attgtagata 960
tagttcaggt aaaactgtca attgtggatc agtatgttga aaattgttaa ctatggttcg 1020tagttcaggt aaaactgtca attgtggatc agtatgttga aaattgttaa ctatggttcg 1020
cttgtaacag aatataaata taataataat atataatact aatagtaata tatataataa 1080cttgtaacag aatataaata taataataat atataatact aatagtaata tatataataa 1080
taataaaaag caagcactaa ttattttata gaaacacttt aaaaagtatt aaaatctcat 1140aaaaagtatt aaaatctcat 1140
ttaaaacaac tctccaagtt ggtagtccat tgatctacaa gacagctcca cctgaaccac 1200ttaaaacaac tctccaagtt ggtagtccat tgatctacaa gacagctcca cctgaaccac 1200
atccacaatg taaaatttaa ccgtacacat aaaccatgat cataagatgc aacatggtaa 1260atccacaatg taaaatttaa ccgtacacat aaaccatgat cataagatgc aacatggtaa 1260
aatctctggt gaagttttcg taatcgatga tgaatatata tatatatata tatatatata 13201320
tatatatata tatatatata tatatatata tatatataca atatattttt attttcaatc 13801380
tatttagtaa gtacatattt gttatgaaag tacaaaaata acattgtaat aggtcaagct 1440tatttagtaa gtacatattt gttatgaaag tacaaaaata acattgtaat aggtcaagct 1440
ctttgtggtg gtttacattg taataggtca agctctttat tattatttta ctatatgtat 1500ctttgtggtg gtttacattg taataggtca agctctttat tattatttta ctatatgtat 1500
cttcttatcc attcttatat tttatatcat atatggtcaa aagaaccaat cgtatcacag 1560cttcttatcc attcttatat tttatatcat atatggtcaa aagaaccaat cgtatcacag 1560
cagcatttgt taatagaact ttgatcttgg taattacagg ttctatattg aaatcgcagg 1620cagcatttgt taatagaact ttgatcttgg taattacagg ttctatattg aaatcgcagg 1620
agccaaacca gcaacttggg ttaattatta acttcattca ccaataataa taattgatcg 1680agccaaacca gcaacttggg ttaattatta acttcattca ccaataataa taattgatcg 1680
tcaagactat ttcggacaca aagacataaa tacttgtttt ctgctctccc tttccctaaa 17401740
tgtatcattt gatactttct ctttttccct ccatatgcct tttgtgtgta taaatatatg 1800tgtatcattt gatactttct ctttttccct ccatatgcct tttgtgtgta taaatatatg 1800
tatatgaata agttcacaaa aatagaaaat taaatcaaat cttcgcgtaa tttctcatca 1860tatatgaata agttcacaaa aatagaaaat taaatcaaat cttcgcgtaa tttctcatca 1860
aactccactt ttcttctttt taagagaatc tagggtttct tctactactt cttctttctt 1920aactccactt ttcttctttt taagagaatc tagggtttct tctactactt cttctttctt 1920
ctttaggtgg tcaaatttcc aagttcttct tttagctctc tcttttgttt ccaagaaacc 1980ctttaggtgg tcaaatttcc aagttcttct tttagctctc tcttttgttt ccaagaaacc 1980
tgagaagaat ttttgtagat a 2001tgagaagaat ttttgtagat a 2001
<210> 52<210> 52
<211> 1814<211> 1814
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 52<400> 52
tctacagtga cgtaagtgat gtggtataaa tacggtatgt gacgtgaata catagacgat 60tctacagtga cgtaagtgat gtggtataaa tacggtatgt gacgtgaata catagacgat 60
gatatttgtg gaaaaaaaag aaagaaaaaa aaaacacaaa agctacatac gagtggaaga 120gatatttgtg gaaaaaaaag aaagaaaaaa aaaacacaaa agctacatac gagtggaaga 120
agagaccaga gtggagataa agttttaagg gctgtttggg aaataaacca tttgatgtgt 180agagaccaga gtggagataa agttttaagg gctgtttggg aaataaacca tttgatgtgt 180
tgtcgagtcc tcattggcta ctttttactg tgcttgtaac tcgttcgtta gttttgtgcc 240tgtcgagtcc tcattggcta ctttttactg tgcttgtaac tcgttcgtta gttttgtgcc 240
tccctttagc ttacattgtt tccgtaccgt acggactttt gttattgttt ttaaggttaa 300300
gaaatcagac caaagaactc aatagatatt aaaggagaat aatctttaac tccttaatac 360gaaatcagac caaagaactc aatagatatt aaaggagaat aatctttaac tccttaatac 360
tttctacagt aacactataa cgactatata tagggtttaa atattctttc aaaatgcaaa 420tttctacagt aacactataa cgactatata tagggtttaa atattctttc aaaatgcaaa 420
ttgtattttg gttttttaat ttttcttttt gcatggagac aagttttttt ctggttaaat 480ttgtattttg gttttttaat ttttcttttt gcatggagac aagttttttt ctggttaaat 480
gcacggagaa attttaattt tatttaaggt gactttctgt ttttccttta aacagggaga 540gcacggagaa attttaattt tatttaaggt gactttctgt ttttccttta aacagggaga 540
aacattgtgc ttacaatttc aaagatatat atattagata aaattaaata tagtgtgttt 600aacattgtgc ttacaatttc 600
taataagtac acgaaagaat ttgacccaat tgtaataaaa ccttaggaaa aatagtaatt 660taataagtac acgaaagaat ttgacccaat tgtaataaaa ccttaggaaa aatagtaatt 660
ttataattgc aaacacaaaa ataacacgga acattttaca atattttatc ctgctaaatt 720ttataattgc aaacacaaaa ataacacgga acattttaca atattttatc ctgctaaatt 720
ggaaggaaaa aaactaaaat gatgtccttt tcttcaattt caagttaagt atcgatcttc 780ggaaggaaaa aaactaaaat gatgtccttt tcttcaattt caagttaagt atcgatcttc 780
tctttgctct ggaaattgat gaacctacaa agtggaagct aggctgaaat ttagctgctg 840tctttgctct ggaaattgat gaacctacaa agtggaagct aggctgaaat ttagctgctg 840
aaccaacaaa actcttaaca tcaaatgaag catgttctat agatcgtggc gttgatcttt 900aaccaacaaa actcttaaca tcaaatgaag catgttctat agatcgtggc gttgatcttt 900
ttggaccaac caatatgcaa aatgcatata ttgttgtaaa aaaaatgcct atattccata 960ttggaccaac caatatgcaa aatgcatata ttgttgtaaa aaaaatgcct atattccata 960
acttattcac ttgatatact ataatttttc ttttgaccgg gaaaaagtgg cctatttatg 1020acttattcac ttgatatact ataatttttc ttttgaccgg gaaaaagtgg cctatttatg 1020
ggaagagaat ctcaaacgta tgatactctc aatgtaggaa aagtctctag actaccattt 1080ggaagagaat ctcaaacgta tgatactctc aatgtaggaa aagtctctag actaccattt 1080
tcttttactc ctttagaccc attggatttg ggtagatgga tttattaaat acaatgtaag 1140tcttttactc ctttagaccc attggatttg ggtagatgga tttattaaat acaatgtaag 1140
gagtttttaa atgaaatata aagatacttt aatgattaac tggtaactgg taaattggta 1200gagtttttaa atgaaatata aagatacttt aatgattaac tggtaactgg taaattggta 1200
atgtactact attgtagtca atgtaagaaa atagttacga aaataaaacc ttttctgtca 1260atgtactact attgtagtca atgtaagaaa atagttacga aaataaaacc ttttctgtca 1260
attaataact cactactata atttttgtag gattaacaca tcacactaag ctattttatg 1320attaataact cactactata atttttgtag gattaacaca tcacactaag ctattttatg 1320
actaaataag taaatataat ttcttccgaa ggttcaactt tttgagtggt tattgaatag 1380actaaataag taaatataat ttcttccgaa ggttcaactt tttgagtggt tattgaatag 1380
ggaacgtgtt ccgataagaa gttaacaaaa caacattcat gtcggtccca tgactattat 1440ggaacgtgtt ccgataagaa gttaacaaaa caacattcat gtcggtccca tgactattat 1440
atgtctgact ctgtgtgata tcgatatata cataacatat attggtctga aaagtggaaa 1500atgtctgact ctgtgtgata tcgatatata cataacatat attggtctga aaagtggaaa 1500
atctatttta agatttggta actgatcaat gaattgataa ctgatagtct gataccaaac 1560atctatttta agatttggta actgatcaat gaattgataa ctgatagtct gataccaaac 1560
ataaactagt tttgtacact aacaaaataa gaatgaaata tcaaattttg taagaattgg 1620ataaactagt tttgtacact aacaaaataa gaatgaaata tcaaattttg taagaattgg 1620
taactgatat aatgaatcat cgtaactgat tattttcttt taccttccga cgtaaatttg 1680taactgatat aatgaatcat cgtaactgat tattttcttt taccttccga cgtaaatttg 1680
tttatgttgc tcttaattat gttcgtacct taattgatca taaacacata aattttagtg 1740tttatgttgc tcttaattat gttcgtacct taattgatca taaacacata aattttagtg 1740
attccttatg tcgagttgtc aatggtttgg aagattggta gctcctgaca tttcatcgga 18001800
atttcttctc tcca 1814atttcttctc tcca 1814
<210> 53<210> 53
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 53<400> 53
tttcgtgtgt gtgaacaaaa taaatgatct gcacatgtat catggttata gtaacaagtc 60tttcgtgtgt gtgaacaaaa taaatgatct gcacatgtat catggttata gtaacaagtc 60
ccagctccca agggtagtag ctgcttaaag acacacggaa accctcgagg ataatggtgg 120ccagctccca agggtagtag ctgcttaaag acacacggaa accctcgagg ataatggtgg 120
agagagagtg ttgaaatttc aaccatctca cttttttctt ctaccttatt ctttagccga 180aggagagtg ttgaaatttc aaccatctca ctttttttctt ctaccttatt ctttagccga 180
aaattaagtt ctaactttaa aatacagatt tgcttcagaa gttgattttt taggtttttt 240aaattaagtt ctaactttaa aatacagatt tgcttcagaa gttgattttt taggtttttt 240
tttttctgga agaccaatat taatttgtga tagttagtta aaaaaattat attatgtttt 300tttttctgga agaccaatat taatttgtga tagttagtta aaaaaattat attatgtttt 300
gtgatagtta gttgaaaaaa ttatattgtg ttttgctact aatttacttt caaaatataa 360gtgatagtta gttgaaaaaa ttatattgtg ttttgctact aatttacttt caaaatataa 360
atatccaaat atatatataa atcttatcac ttgaaaatag atggtgggta tatggactca 420atatccaaat atatatataa atcttatcac ttgaaaatag atggtgggta tatggactca 420
aatctatgga tcggtctgtt taacccacga attttgcaga taacaagcct ttttttaaaa 480480
gaaaattcgc ataactatat ccaagttttt cttagttcgg tccattaagc tagcacatct 540gaaaattcgc ataactatat ccaagttttt cttagttcgg tccattaagc tagcacatct 540
agtagtcttt atccatggac atattattaa tttgttatgt taaaattttg atttttaatc 600agtagtcttt atccatggac atattattaa tttgttatgt taaaattttg atttttaatc 600
tagtggtata ttttagtatg atagatttta acttaaaaaa tgaagtcaat tttttattac 660tagtggtata ttttagtatg atagatttta acttaaaaaa tgaagtcaat tttttattac 660
taattttata catttttcac ttttaaaaaa tatttatttc ataagaaata tttttaaatt 720taattttata catttttcac ttttaaaaaa tatttatttc ataagaaata tttttaaatt 720
actatttggg tccatggatc aatttattta tctgagtttt tatgggctag atacaaatct 780actatttggg tccatggatc aatttattta tctgagtttt tatgggctag atacaaatct 780
tggaaaaaag ccaatttatt tcatggattg gcttatttga tccgtctaaa atgcaagctt 840tggaaaaaag ccaatttatt tcatggattg gcttatttga tccgtctaaa atgcaagctt 840
cacaagacaa accttaaaca taccatacca tccttttatc tatctctact tcaaaatcaa 900cacaagacaa accttaaaca taccatacca tccttttatc tatctctact tcaaaatcaa 900
tttttgcaac attcactcaa tggtgcactt aattaacaaa ccctcatcca tatacacata 960tttttgcaac attcactcaa tggtgcactt aattaacaaa ccctcatcca tatacacata 960
tttagagatc aacaatatga ttatctatca aaaatacaca aaatcagtgt gtgtttgggt 1020tttagagatc aacaatatga ttatctatca aaaatacaca aaatcagtgt gtgtttgggt 1020
aggcgttgac aaaaattagt tttgaatgaa attgatttta taattttttt tttgttaaaa 10801080
ttgattttga agtaatatta tttatgtttg gatgttttat taaaaaatta agttatgaat 1140ttgattttga agtaatatta tttatgtttg gatgttttat taaaaaatta agttatgaat 1140
aaaatgaagt acataatttt ggaccaaaaa ttattcaaaa ttatttcaac ccaaaattaa 12001200
ttctgtatcc aaagtcaatt ttaaattttt ctttgatgtg aaactaaaca tgtaaaaatg 1260ttctgtatcc aaagtcaatt ttaaattttt ctttgatgtg aaactaaaca tgtaaaaatg 1260
tatttaaatt aaaattaatt ttagacttat aattaattct ctgtggtcaa tccaaataca 1320tatttaaatt aaaattaatt ttagacttat aattaattct ctgtggtcaa tccaaataca 1320
cactcacact tagaatgtat gaaatttcaa tttttaactt tctcatctat gagctgttcc 1380cactcacact tagaatgtat gaaatttcaa tttttaactt tctcatctat gagctgttcc 1380
tattcctcct tcccctccta tgccctcact agggagccag ccagccatat tccaaaagcc 1440tattcctcct tcccctccta tgccctcact agggagccag ccagccatat tccaaaagcc 1440
cttattatca cacatgggtc cctccatagt caaaataaaa ataatatcat gatcactgtt 1500cttattatca cacatgggtc cctccatagt caaaataaaa ataatatcat gatcactgtt 1500
tggccataaa gagctatacg acacacatgg acacagtagt acactgccca accaatcaca 1560tggccataaa gagctatacg acacacatgg acacagtagt acactgccca accaatcaca 1560
cgtcgacagc acaccgttcc caaactactt cacctttccc aaaccagaaa ccaaaaccac 1620cgtcgacagc acaccgttcc caaactactt cacctttccc aaaccagaaa ccaaaaccac 1620
ttgtcatcaa acccctgccc agatagtttt tctccatttc aatattttac ttcacctttt 1680ttgtcatcaa acccctgcc agatagtttt tctccatttc aatattttac ttcacctttt 1680
gaggctttgt gggtactaca aaacataaca caattgaact cactgtgctt tcccatgaca 1740gaggctttgt gggtactaca aaacataaca caattgaact cactgtgctt tcccatgaca 1740
cacatctata cttgtccaga agaagaaaga tccatgaact aacattccca cacgctcgct 1800cacatctata cttgtccaga agaagaaaga tccatgaact aacattccca cacgctcgct 1800
tcaccatatt tgccaccctt ttaaccctca cttcttgggt ttattttgct cctttttttt 18601860
ttccttgttt ggggtttgca tttttcctgg ttgaaaaagg gaagaacttg aactaattgg 1920ttccttgttt ggggtttgca ttttcctgg ttgaaaaagg gaagaacttg aactaattgg 1920
ttaagttacc tatctatcta tctatctagg gtataatatt ttatatcagt tattaaagga 19801980
aagaaagaaa gaaacgaaga t 2001aagaaagaaa gaaacgaaga t 2001
<210> 54<210> 54
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 54<400> 54
tcactagggt agtagttgct taaagacaca cggaaacatt taaggataat tgtggagaga 60tcactagggt agtagttgct taaagacaca cggaaacatt taaggataat tgtggagaga 60
gagtgttgaa atttcaatca tctctctctc taccacggta tacttcaata aaaaaaatta 120gagtgttgaa atttcaatca tctctctctc taccacggta tacttcaata aaaaaaatta 120
aggactaatt ttaaaataca gagatttatt ctagaggttg attcttttag tgtgtttgat 180180
tttatgttaa tacctcaaac atacatttag aatcccacaa aattagtttg gtatcatgtt 240tttatgttaa tacctcaaac atacatttag aatcccacaa aattagtttg gtatcatgtt 240
tggattttca aaagttaatt ttgtaacgta cgtttgggat aaacctaggt ttgggtttgg 300tggattttca aaagttaatt ttgtaacgta cgtttgggat aaacctaggt ttgggtttgg 300
atcagaccaa caaatttgta gcttttaaag tgaaattact ttttatttgt atatttagga 360atcagaccaa caaatttgta gcttttaaag tgaaattact ttttatttgt atatttagga 360
tagaaacatg catgaagtaa aaatactttt gattagtata tatccaaaca aatatcaaca 420tagaaacatg catgaagtaa aaatactttt gattagtata tatccaaaca aatatcaaca 420
cttttgaaca aaaagggtaa tcatgttcta ttaatatttt ttttttttgt gataaagaag 480cttttgaaca aaaagggtaa tcatgttcta ttaatatttt ttttttttgt gataaaagaag 480
tagctgaagc ttcttatttg acaattaaat aattcttctc ctatcggatt ggtccatttt 540tagctgaagc ttcttatttg acaattaaat aattcttctc ctatcggatt ggtccatttt 540
taaagtaaaa tgatacctca aattgtgact atatacacaa gccgtgaatc aaatcttaga 600taaagtaaaa tgatacctca aattgtgact atatacacaa gccgtgaatc aaatcttaga 600
ccttggttaa aagactcaag tgctaagtca tttgtaccaa taacttttgg tataagtaaa 660660
ctcatttttt acaacatact tttgattcaa acttatgttc gcaaacttta tacaaatatg 720ctcatttttt acaacatact tttgattcaa acttatgttc gcaaacttta tacaaatatg 720
cacttagtgt gtttggatat ttcctagaat gaattttgag tgccaaatca aggtggaaat 780cacttagtgt gtttggatat ttcctagaat gaattttgag tgccaaatca aggtggaaat 780
attgcaaagg ttaaagtaaa tatttgttac tttgaccttt tcaagttacc atgttattga 840attgcaaagg ttaaagtaaa tatttgttac tttgaccttt tcaagttacc atgttattga 840
taaagagtat ttatcgattt ttattaatga ttaatctttg tcaaaaaatt tagttagtta 900taaaaggtat ttatcgattt ttattaatga ttaatctttg tcaaaaaatt tagttagtta 900
gttttagcgg gattttttcc tcctaattat atttttttca tccacaatac ttgaatttga 960960
caccttcatt aaaaggatta agtctgtatt actcagattg ttactttgcc tgctttaagt 1020caccttcatt aaaaggatta agtctgtatt actcagattg ttactttgcc tgctttaagt 1020
tgattttgat aagattgaaa gctaatccaa atatatattt tcacattaaa aattttattg 10801080
catttaaaat taattggctt aaaaataaat tttgaattat atatatatat tgaatttgtt 1140catttaaaat taattggctt 1140
ataactttta gcaagaaaaa atatttaaac acagaccaca ttatctcaaa ataaatttta 1200ataactttta gcaagaaaaa atatttaaac acagaccaca ttatctcaaa ataaatttta 1200
attaaaatta ttttattcaa aaatcaattt ttatcaatat tcacccaaac acacaaactt 1260attaaaatta ttttattcaa aaatcaattt ttatcaatat tcacccaaac acacaaactt 1260
aatttaaaaa aaaatcctca tttatattag agatccacaa tatagttatc tatatatcaa 13201320
ccatacacaa aatcataacg taagaaattt caattttcaa ccatctcatg tgatctatgc 1380ccatacacaa aatcataacg taagaaattt caattttcaa ccatctcatg tgatctatgc 1380
atgctattat tcctcctacc cctcctattc cctcactagg gagccagcca tattccaaaa 14401440
gctcttaaca cacatgggtc cctccatagt cataataaaa ataatatcat catcactgtg 1500gctcttaaca cacatgggtc cctccatagt cataataaaa ataatatcat catcactgtg 1500
tggccataaa gagctacaag acacacatgg acacagtagt acactgccca accaatcaca 1560tggccataaa gagctacaag acacacatgg acacagtagt acactgccca accaatcaca 1560
cgtcgacagc acaacgatcc caaactactt cacctttccc aaaccagaaa ccaaaaccac 1620cgtcgacagc acaacgatcc caaactactt cacctttccc aaaccagaaa ccaaaaccac 1620
ttgtcaccaa accccagtcc cagatagttt tctcaccatt tccgtatttt acttcacctt 1680ttgtcaccaa accccagtcc cagatagttt tctcaccatt tccgtatttt acttcacctt 1680
tagtgggtag tggttacatg atatcagcac actttcactc actgtgcttt cccgtgacac 1740tagtgggtag tggttacatg atatcagcac actttcactc actgtgcttt cccgtgacac 1740
gcatctatac ttgtccagaa gaagtaagat ccatgaacta acattcccac acgctcgctt 1800gcatctatac ttgtccagaa gaagtaagat ccatgaacta acattcccac acgctcgctt 1800
caccatattt gccacccttt taacctcact tcttagggtt attttgctcc cttttccttg 18601860
tttgggaatt gggtttggtt tggtttttct tggttgtaaa aggtaaagaa gaactaattg 1920tttgggaatt gggtttggtt tggtttttct tggttgtaaa aggtaaagaa gaactaattg 1920
gttaagttac tatatatcta gctagggtat ataatattat ataattattg ttattaaagg 1980gttaagttac tatatatcta gctagggtat ataatattat ataattattg ttattaaagg 1980
aaacaaagaa agaactaaga t 2001aaacaaagaa agaactaaga t 2001
<210> 55<210> 55
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 55<400> 55
acaaaagatc acaaaattga acaataatga caatacctcg cattgaagta gttcaataca 60acaaaagatc acaaaattga acaataatga caatacctcg cattgaagta gttcaataca 60
tattctgagt atgactcgcg agtacatgta tctcatgttt cagtttttaa ccacagctgg 120tattctgagt atgactcgcg agtacatgta tctcatgttt cagtttttaa ccacagctgg 120
atgccatgga cacttttaat tctattcttt taaatgagat acctggccta tcaattttaa 180atgccatgga cacttttaat tctattcttt taaatgagat acctggccta tcaattttaa 180
gggtaaatta aaactcagaa atcaacatac taaaaaattg catgcatgtc cgcaaaagaa 240gggtaaatta aaactcagaa atcaacatac taaaaaattg catgcatgtc cgcaaaagaa 240
aatgtttaag gcagtatata ttcactagtg cacaaagttt tgaccttaaa tattgaaata 300aatgtttaag gcagtatata ttcactagtg cacaaagttt tgaccttaaa tattgaaata 300
gtgaccatac gagtgtaatg tttcagatat atataatgct aattatggac taattaatta 360gtgaccatac gagtgtaatg tttcagatat atataatgct aattatggac taattaatta 360
aaatagagga ttgctttcaa taggaaaata gtagtgtaat ggaaaccgga aagtgaacta 420aaatagaggga ttgctttcaa taggaaaata gtagtgtaat ggaaaccggga aagtgaacta 420
gaaagaaatg ttaaaaatgg tctagggaaa aagttaagga gaaaatggat tatacataat 480gaaagaaatg ttaaaaatgg tctaggggaaa aagttaagga gaaaatggat tatacataat 480
gtcaaaaatt ttataccgct gattataatt tatatattat gtaggaaaaa tttattaaat 540gtcaaaaatt ttataccgct gattataatt tatatattat gtaggaaaaa tttattaaat 540
tttaaaataa ttaaaattat aatttatgat tgaatgatat tataaaacaa ttttacacaa 600600
tcaatttata aatattaaac ttaaaagata aacctaaaaa atactatttt tctttatcat 660tcaatttata aatattaaac ttaaaagata aacctaaaaa atactatttt tctttatcat 660
aatattagta taaaataatt ctactaaaaa aaataattaa tatttataaa aatacatata 720aatattagta taaaataatt ctactaaaaa aaataattaa tatttataaa aatacatata 720
aaataaatat tttttttata acataattta ttttatatat aaaaattaat caaatatttt 780780
aactttggat tacttaatta aaaaatgatt cctaaaaaag accatttgaa tattatttgg 840aactttggat tacttaatta aaaaatgatt cctaaaaaag accatttgaa tattatttgg 840
tggacgaagg gatggaccag agttcaatac tcgtgggttt tggcggcgtc aatgagagga 900tggacgaagg gatggaccag agttcaatac tcgtgggttt tggcggcgtc aatgagagga 900
tgcacgtaat gttcgggtcc gtacggcatt gccactgttt aaaccatcgg acacttgaaa 960tgcacgtaat gttcgggtcc gtacggcatt gccactgttt aaaccatcgg acacttgaaa 960
gctcaaagca gtgactgtga tgagcagctc gcaatagaga atccaaaatt cccaaaagca 1020gctcaaagca gtgactgtga tgagcagctc gcaatagaga atccaaaatt cccaaaagca 1020
aaaacaaaac ccaaaaagca aaagagatat cattgtgtgg ctgttagata ccacagacag 10801080
caacatggta actgaccacc caatccgggc tcgacagcgc aacgttagca aaaccgccct 1140caacatggta actgaccacc caatccgggc tcgacagcgc aacgttagca aaaccgccct 1140
ggttttttcc caaaccagaa accactttat cgccaaaccc caatgtgatt agagtgttgc 1200ggttttttcc caaaccagaa accactttat cgccaaaccc caatgtgatt agagtgttgc 1200
taggtgcacc tactgttatt gctggtgcac ccaaccttct ttgataatga taaaattatc 1260taggtgcacc tactgttatt gctggtgcac ccaaccttct ttgataatga taaaattatc 1260
cgtcttcttt ttccctttac ggatcaagtt gatccgcaag ttgattttta agacttacag 1320cgtcttcttt ttccctttac ggatcaagtt gatccgcaag ttgattttta agacttacag 1320
atcaagttaa tcggtaagtc ttttatggat caacttgatc cgtaagtctt aaaaattaat 1380atcaagttaa tcggtaagtc ttttatggat caacttgatc cgtaagtctt aaaaattaat 1380
ttaccaatca acttgatccg taagaagctt gcagatcaag ttgatccata aaagacttaa 1440ttaccaatca acttgatccg taagaagctt gcagatcaag ttgatccata aaagacttaa 1440
aaatcaattt gcggatcaac ttgatccgta agaagcttac gaatcaagtt gatccgtaaa 1500aaatcaattt gcggatcaac ttgatccgta agaagcttac gaatcaagtt gatccgtaaa 1500
agacttacgg atcaacttga tccgtaagtc ttaacaatct acttgcggat caacttgatc 1560agacttacgg atcaacttga tccgtaagtc ttaacaatct acttgcggat caacttgatc 1560
cgtaagaaac ttgcagatca tctatatcaa ctgtagatca actaaaacat atgcggatcg 1620cgtaagaaac ttgcagatca tctatatcaa ctgtagatca actaaaacat atgcggatcg 1620
actcattaca tatgtggacc aacctgaatg agctaggtgc acaaaaatat ttttaaaaat 1680actcattaca tatgtggacc aacctgaatg agctaggtgc acaaaaatat ttttaaaaat 1680
acatagggat atttttgtct tttcatgtta agtgttaggt gcccaacaac aataatgctg 1740acatagggat atttttgtct tttcatgtta agtgttaggt gcccaacaac aataatgctg 1740
ggtgcactta gtaacaccca tgtgattagg gatatataac aacatagcat actcacacta 1800ggtgcactta gtaacaccca tgtgattagg gatatataac aacatagcat actcacacta 1800
ctactcactg cggttttttt ctcctccaga agaagaaaga tccttaaatc aacattctct 1860ctactcactg cggttttttt ctcctccaga agaagaaaga tccttaaatc aacattctct 1860
ctccctccct tggttataat agcaagcttt tcaagcatat ttccggggtt tgttcccttt 1920ctccctccct tggttataat agcaagcttt tcaagcatat ttccggggtt tgttcccttt 1920
tccttgttta gggttttctt tggaaaaaaa aggtaattag gtataataat ataattaaag 1980tccttgttta gggttttctt tggaaaaaaa aggtaattag gtataataat ataattaaag 1980
caaaaaaaaa aaaaataaca t 2001caaaaaaaaaaaaaataaca t 2001
<210> 56<210> 56
<211> 1162<211> 1162
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 56<400> 56
agcgcaccgg gaaccaaaac gcgtgtacgc gtaccacgta tcccaattcc ataagaaatt 60agcgcaccgg gaaccaaaac gcgtgtacgc gtaccacgta tcccaattcc ataagaaatt 60
ctaaaaaccc acacgaacca ttttgggcag gaacaaaatc ccccagacga cgacacctca 120ctaaaaaccc acacgaacca ttttgggcag gaacaaaatc ccccagacga cgacacctca 120
gaaagttagg ggcattttgg tactttctgc atgtgttaga gccttgtttg tataaaggat 180gaaagttagg ggcattttgg tactttctgc atgtgttaga gccttgtttg tataaaggat 180
atagatattt gtctaaggtg tatattgtaa acaaaatatg actttcctat tcttacatgg 240atagatattt gtctaaggtg tatattgtaa acaaaatatg actttcctat tcttacatgg 240
tcttttgtct tataaaagat gatagtgacc gagttgataa ttgttcacaa taataatatg 300tcttttgtct tataaaagat gatagtgacc gagttgataa ttgttcacaa taataatatg 300
tgtaaagtga tagtcagtta acaagtgtcg actacccgtc gattccgtac aagatagtaa 360tgtaaagtga tagtcagtta acaagtgtcg actacccgtc gattccgtac aagatagtaa 360
tcatacgagt gtaaagtttc ctatagagag agagacatga atactaaggg ggattattta 420tcatacgagt gtaaagtttc ctatagagag agagacatga atactaaggg ggattattta 420
attaaaatag aggattgttt taaataggta aataataata ataataataa taataataat 480attaaaatag aggattgttt taaataggta aataataata ataataataa taataataat 480
aataataata ataataataa taataagcaa aggagaaaga gatgttaaaa atggtggaag 540aataataata ataataataa taataagcaa aggagaaaga gatgttaaaa atggtggaag 540
gaaaaagata accctaaaaa ggaacatttg aatatttggt ggacgaaggg atggaccaga 600gaaaaagata accctaaaaa ggaacatttg aatatttggt ggacgaaggg atggaccaga 600
gttcaatact cgtgggtcgt ggcgccgtca acgtaaggat gcacgtaatg ttctggttca 660gttcaatact cgtgggtcgt ggcgccgtca acgtaaggat gcacgtaatg ttctggttca 660
tatacgacat tgacactgtt taaaccatca gacacttgaa agcaaagcag tgagtgtgac 720tatacgacat tgacactgtt taaaccatca gacacttgaa agcaaagcag tgagtgtgac 720
tgtgagagag cagcaataga gaatccaaaa tcccgaaaat caaaaacaaa acccaaaaag 780tgtgagagag cagcaataga gaatccaaaa tcccgaaaat caaaaacaaa acccaaaaag 780
caaaagagat atgattgtgt ggctgttagt taccacgaca acaacatggt aactgacaag 840caaaagagat atgattgtgt ggctgttagt taccacgaca acaacatggt aactgacaag 840
ccaatcaggg atcgacagcg caacgttaag aaaactaccc cggtttttcg taaaccagaa 900ccaatcaggg atcgacagcg caacgttaag aaaactaccc cggtttttcg taaaccagaa 900
accacttgtc gccaaacccc aatgtgatta gtgatatata ataacatagc atactcacac 960accacttgtc gccaaaccc aatgtgatta gtgatatata ataacatagc atactcacac 960
taccactcac tgcggttttt ctcctccaga agaagaaaga tccgtaaatt aacattctct 1020taccactcac tgcggttttt ctcctccaga agaagaaaga tccgtaaatt aacattctct 1020
ccctcccttc gctataatag caagcttttc aagcatattt ctggggtttg gtcccttttc 1080ccctcccttc gctataatag caagcttttc aagcatattt ctggggtttg gtcccttttc 1080
cttgtttggg gttttcttgg gaaaaaagaa gtaattaggt ataataatag tataactaaa 1140cttgtttggg gttttcttgg gaaaaaagaa gtaattaggt ataataatag tataactaaa 1140
gcaaaaaaaa agacagtaat at 1162gcaaaaaaaa agacagtaat at 1162
<210> 57<210> 57
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 57<400> 57
atctttcaaa gagacggatt tagagcgagt tctaatctaa taaaaaatta ttcaataaca 60atctttcaaa gagacggatt tagagcgagt tctaatctaa taaaaaatta ttcaataaca 60
ccatacttga aattaataac gtttacaatt actttttttt gaaacgtagg ggcatgtgaa 120ccatacttga aattaataac gtttacaatt actttttttt gaaacgtagg ggcatgtgaa 120
attaaaatta aagcgtaaat gaaaattcac aatgtctaaa ttcggaacta acagatgcta 180attaaaatta aagcgtaaat gaaaattcac aatgtctaaa ttcggaacta acagatgcta 180
tgcaggagag caacaaaaga agaaacccta attgctaaat ggaaaaaagt gcaaggaaaa 240tgcaggagag caacaaaaga agaaacccta attgctaaat ggaaaaaagt gcaaggaaaa 240
atcaagtttc tatatgtgtc ttttaagtca attattcatg gtgtcaactg tcaatatata 300atcaagtttc tatatgtgtc ttttaagtca
cggggataat gcacaaatac ctctcaactt atgcccgaaa tctcaaagac acacttatac 360cggggataat gcacaaatac ctctcaactt atgcccgaaa tctcaaagac acacttatac 360
tatactaagg tcctattatt atttttgtta ataatttttt atcccttttc tgcttacgtg 420tatactaagg tcctattatt atttttgtta ataatttttt atcccttttc tgcttacgtg 420
gcactaaatt gtgggaccaa cgttgattgg cttttttttc caagctagtg tcacgtaggc 480gcactaaatt gtgggaccaa cgttgattgg ctttttttttc caagctagtg tcacgtaggc 480
cgaaaagggg cagaaaatta ttaataaaaa taagtttagg ggtaatagga ctttagtata 540cgaaaagggg cagaaaatta ttaataaaaa taagtttagg ggtaatagga ctttagtata 540
atataaatat gtctctggga tttcgggcat aagttgaggg atacttgtgc actatatgcg 600atataaatat gtctctggga tttcgggcat aagttgaggg atacttgtgc actatatgcg 600
gtatttttat ttaggggtgg tttggtttga agaaagttat gatgctatga ttagttattt 660660
tttagtgaat gtttgatttg ttgcattaaa aataatatgt atggcataat ttttaagaat 720tttagtgaat gtttgatttg ttgcattaaa aataatatgt atggcataat ttttaagaat 720
aatttatttc ttcgattttc ttcgtaaatg tgaaagtgat aatataaaaa tagcttaaga 780aatttatttc ttcgattttc ttcgtaaatg tgaaagtgat aatataaaaa tagcttaaga 780
ggaaaatttt gtttaactat ttttccagtt atctcatcat taattcatta ttactcgact 840ggaaaatttt gtttaactat ttttccagtt atctcatcat taattcatta ttactcgact 840
caagacaata ataactcaaa attatagggt cctttggtgc gagggatcaa aaataacgat 900caagacaata ataactcaaa attatagggt cctttggtgc gagggatcaa aaataacgat 900
aatgtgataa aaaaaaaaat cttgtttagt tgtcatgttt agaataactt atccaccatt 960aatgtgataa aaaaaaaaat cttgtttagt tgtcatgttt agaataactt atccaccatt 960
tacattatag tgatgagata tgttattcgt aaataactac cttcaaaata acctatcctg 1020tacattatag tgatgagata tgttattcgt aaataactac cttcaaaata acctatcctg 1020
taataactta ttcccaacga tagtaataaa aatttatgtt acgattattt ttctttatcc 1080taataactta ttcccaacga tagtaataaa aatttatgtt acgattattt ttctttatcc 1080
atcactggac taaacgtgtt ggaagaactt taatttagag ttggtgggct aactgtcgtt 1140atcactggac taaacgtgtt ggaagaactt taatttagag ttggtgggct aactgtcgtt 1140
attgggaaac ctgtatgcat attgaaaaag taaaaaaaag acaaagagtg ttgtttgtag 1200attgggaaac ctgtatgcat attgaaaaag taaaaaaaag acaaagagtg ttgtttgtag 1200
gtacaattgg tgtcgaatag taattggaga gtactgctgt gaagtgactc tagttgttta 1260gtacaattgg tgtcgaatag taattggaga gtactgctgt gaagtgactc tagttgttta 1260
actgtttctt cactatgaac cacacgatga caaacgtagt acaatcgaag ccaaaaatag 1320actgtttctt cactatgaac cacacgatga caaacgtagt acaatcgaag ccaaaaatag 1320
attcaaggtt attacaaaac ttaaataaca aaaccacaaa cactgcaatt atactaccta 13801380
gtatattagt actagcagtg agactgtttc gtttttgatc aaaaatttcg cgctcgagtt 1440gtatattagt actagcagtg agactgtttc gtttttgatc aaaaatttcg cgctcgagtt 1440
taatataggt tgtatcaatg gtgaagctat ctcacccttg atcagaaatt tcgagttttg 1500taatataggt tgtatcaatg gtgaagctat ctcacccttg atcagaaatt tcgagttttg 1500
aatataaaaa aaaattatat taagagcacc actcagaatg aattttgcag tgtacgattc 15601560
aaatttaatt gggggctcta atacgaaatt ccgcattggg tggaaaagga aaaagaaaaa 1620aaatttaatt gggggctcta atacgaaatt ccgcattggg tggaaaagga aaaagaaaaa 1620
gctatgatca atctactctc cactgttgca gtttaccctg ctatgttgta ctaaattgta 1680gctatgatca atctactctc cactgttgca gtttaccctg ctatgttgta ctaaattgta 1680
ttcttgcatg aatctcaaag gataatattt gattttcttt taattataag tatttaaaat 1740ttcttgcatg aatctcaaag gataatattt gattttcttt taattataag tatttaaaat 1740
tatatccaaa aaaaaatata gcttatttgt gattccgaga tctgtgagta gaaaatccta 1800tatatccaaa aaaaaatata gcttatttgt gattccgaga tctgtgagta gaaaatccta 1800
aaaactattt cgagccaatt tttgagaact atgaaaatat ttaaagtaaa aaattatacc 1860aaaactattt cgagccaatt tttgagaact atgaaaatat ttaaagtaaa aaattatacc 1860
atttgatgaa tataactaaa atagatattt aaaagattaa ttatcaacgt ttaattcaaa 1920ttaattcaaa 1920
aattgatgac caagcactag attggtcata tagttttgag attataactt cttaattatt 1980aattgatgac caagcactag attggtcata tagttttgag attataactt cttaattatt 1980
gggtattgtt aaactttcaa c 2001gggtattgtt aaactttcaa c 2001
<210> 58<210> 58
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 58<400> 58
cccacccttt ggttcttcga accccctacc cgcacccctt tcttcttctt tttcttcggt 6060
gatctcgtcc cccgtccccc cccctcaccc ccgcctcctt ctttcttctt tttcggaaca 120gatctcgtcc cccgtccccc cccctcaccc ccgcctcctt ctttcttctt tttcggaaca 120
ccctcaccta tttcttcatt tcaaattatt cttacttatt cttaaaagtg atgaataaga 180ccctcaccta tttcttcatt tcaaattatt cttacttatt cttaaaagtg atgaataaga 180
aaaaaatgaa aaacccaaca acttgttaca tatcgaaggg tttgttgatt atgatgaact 240aaaaaatgaa aaacccaaca acttgttaca tatcgaaggg tttgttgatt atgatgaact 240
tgaaacattt tttaataaaa aaatttgtaa tttcttcatc tcaaattagt tttttaattt 300tgaaacattt tttaataaaa aaatttgtaa tttcttcatc tcaaattagt tttttaattt 300
atattattta tttattttga taatgtgttt taaaaattga tgtttctagt tttgaatacg 360360
ttagagtttg attttatttt tataatcttg gattaattca taattttctt ttctgttttt 420ttagagtttg attttatttt tataatcttg gattaattca taattttctt ttctgttttt 420
atctttctaa aaacgtataa ataaaaataa ataaaaaaga attaaaaaaa gtcaaaattt 480atctttctaa aaacgtataa ataaaaataa ataaaaaaga attaaaaaaa gtcaaaattt 480
ttaattttca atgtggcact gacgtgacac taatgtgaca ataaaatgac gcgtgtgtaa 540ttaattttca atgtggcact gacgtgacac taatgtgaca ataaaatgac gcgtgtgtaa 540
tacacttgct actgtgagac tggtattgta gtattagggt tgaaaaaaat cactttaaag 600tacacttgct actgtgagac tggtattgta gtattagggt tgaaaaaaat cactttaaag 600
atgttaaggg ataatttaaa cgctagtgta gtttaagtgc taaagtaagt tttgcagcca 660atgttaaggg ataatttaaa cgctagtgta gtttaagtgc taaagtaagt tttgcagcca 660
agttcgagag aacttttatg tattttctct ttaaatatat actcttctca ctgacgatta 720agttcgagag aacttttatg tattttctct ttaaatatat actcttctca ctgacgatta 720
tcgatgtaat gatctgactg ttctttaatt ttcttcaaag ttttatttgg attagtgatt 780tcgatgtaat gatctgactg ttctttaatt ttcttcaaag ttttatttgg attagtgatt 780
aaatggctaa gacttaattg tcaaagtaac tccctaacca tgatatttct tttattttct 840aaatggctaa gacttaattg tcaaagtaac tccctaacca tgatatttct tttattttct 840
ttttaaaatt gatctcttta ttggcttatt tctcctattt tatttcacct ctttcttccc 900ttttaaaatt gatctcttta ttggcttatt tctcctattt tatttcacct ctttcttccc 900
tatttcctct aagacgcaat aaaaagagtg ctttgaaaga aataaaagaa attgtatgct 960tatttcctct aagacgcaat aaaaagagtg ctttgaaaga aataaaagaa attgtatgct 960
taaaaaagta ttaggaagag aactattccc aatatttatg gacaagatag tatattgcta 1020taaaaaagta ttaggaagag aactattccc aatatttatg gacaagatag tatattgcta 1020
agatggcgga atttcaataa tttttaatga aatatataat gtatttatga actaaattag 1080agatggcgga atttcaataa tttttaatga aatatataat gtattatga actaaattag 1080
aattgaagat ttatttttat acaattaaat tttaattatt aatttaattt atatcatgta 11401140
tcactagttc aagtaaaaat ttagagaaaa tggaaagaaa ataaacgaag aagagccaaa 1200tcactagttc aagtaaaaat ttagagaaaa tggaaagaaa ataaacgaag aagagccaaa 1200
tctaattagg catatgctac aatggaaccg cattaacaaa caaaaatatt taaaactact 1260tctaattagg catatgctac aatggaaccg cattaacaaa caaaaatatt taaaactact 1260
cctaaaataa aggaggaaaa catatattat aaatcacaaa aaatattagt atcacaaaaa 1320cctaaaataa aggaggaaaa catatattat aaatcacaaa aaatattagt atcacaaaaa 1320
tgaacctgag ggacatatta tgaaactttt atataaagta ataataatca aattttagaa 13801380
tttaaattag ccaagtgaaa tatatacctt taattataat tttattttta ttaaaaaaac 1440tttaaattag ccaagtgaaa tatatacctt taattataat tttattttta ttaaaaaaac 1440
gatgtcatat atgaaatgta gagagtacta catagtgcag aagtactgaa tgtcctagga 1500gatgtcatat atgaaatgta gagagtacta catagtgcag aagtactgaa tgtcctagga 1500
ccttagcata taaggagtat atactaaaaa taagaatgac gtaaaacacc atcaatgcaa 1560ccttagcata taaggagtat atactaaaaa taagaatgac gtaaaacacc atcaatgcaa 1560
ctattatacg aataaaaact caataagtat ggcccaacca ttacctgcca acccgttgaa 1620ctattatacg aataaaaact caataagtat ggcccaacca ttacctgcca acccgttgaa 1620
atctcgatta atttaaattt acgtacaaaa taaataaaaa tttcaaacta aaactatcta 1680atctcgatta atttaaattt acgtacaaaa taaataaaaa tttcaaacta aaactatcta 1680
atcacatttt gtctggtggt atgtagcata attttgtggc tcttaaccac cagatactag 1740atcacatttt gtctggtggt atgtagcata attttgtggc tcttaaccac cagatactag 1740
cagtgtgtac gttttatcca atcacaaatc gacaacgcaa caccccttaa tgcttaaacc 1800cagtgtgtac gttttatcca atcacaaatc gacaacgcaa caccccttaa tgcttaaacc 1800
actcttgtat caggttatta ttattccctt tcactcaatc aatcaaaaat caacaaataa 1860actcttgtat caggttatta ttattccctt tcactcaatc aatcaaaaat caacaaataa 1860
aacctccccc cccaaccctc aatcatgctt cttcttccat atagtctctc aattagtcca 1920aacctccccc cccaaccctc aatcatgctt cttcttccat atagtctctc aattagtcca 1920
aacaaacctc tctatctatg ctaggtagct tatatgattt aatagttcga ttaatttaaa 1980aacaaacctc tctatctatg ctaggtagct tatatgattt aatagttcga ttaatttaaa 1980
tacgcattaa agatagagga t 2001tacgcattaa agatagagga t 2001
<210> 59<210> 59
<211> 1812<211> 1812
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 59<400> 59
tttcgtcaaa agtgttgtca aatttctatt ggttcacaat actcttcaac tcatttaact 60tttcgtcaaa agtgttgtca aatttctatt ggttcacaat actcttcaac tcatttaact 60
tttactcacc gtttcaaaaa caattaactc tagtctgact tgattgacta gacacggagt 120tttactcacc gtttcaaaaa caattaactc tagtctgact tgattgacta gacacggagt 120
ttaagagtat aaagaagatt tttaaatata taattgtaaa ctaaaacata tttagaaaaa 180180
ttgagatagt aataattaac aaaaacggac tcactctctc ccttttctca ttattactcg 240ttgagatagt aataattaac aaaaacggac tcactctctc ccttttctca ttattactcg 240
gccgcaaact cttaaaaata cacgccttaa ttaatactct tgcctaatag agtattcatt 300gccgcaaact cttaaaaata cacgccttaa ttaatactct tgcctaatag agtattcatt 300
tagcacattt ttaagaaaat tgtaaattac taaggatatg attttttata taatggacaa 360tagcacattt ttaagaaaat tgtaaattac taaggatatg attttttata taatggacaa 360
ttgttattaa aaagacgaag atatttttta aaacttttat tcgaaacaaa tatgagaaaa 420ttgttattaa aaagacgaag atatttttta aaacttttat tcgaaacaaa tatgagaaaa 420
ttggaaaaaa aattcagaaa atgttttttt cataccaaac acactcctaa gtttaagtag 480ttggaaaaaa aattcagaaa atgttttttt cataccaaac acactcctaa gtttaagtag 480
ggaaaatcgt ctgatatacc tctcaacttt gtcatttagg gttgatatac cccttgttat 540ggaaaatcgt ctgatatacc tctcaacttt gtcatttagg gttgatatac cccttgttat 540
gaaagtggct catatatacc cctacttgta aacaaatggc tcacatatac cctttttctc 600gaaagtggct catatatacc cctacttgta aacaaatggc tcacatatac cctttttctc 600
taacggaaat gaaaacaaaa taattttagt ctaaattttt attatttttt tctaaaaaat 660660
ataatcccat atgaataaat ttaatcctcg tcaaacatat ttttttttac tttattttgt 720ataatcccat atgaataaat ttaatcctcg tcaaacatat ttttttttac tttattttgt 720
ttcaataact aatttataat tattattttg atgataaaat ttatttatgt ttcactaata 780ttcaataact aatttataat tattattttg atgataaaat ttatttatgt ttcactaata 780
ttcttgtaaa acttattgta gatgatcaaa ttttttcttc gaatccgaaa ttaaattaca 840ttcttgtaaa acttattgta gatgatcaaa ttttttcttc gaatccgaaa ttaaattaca 840
atacacatac agaaaaatag tttaattttt tattctttaa actaagaaat gaaagaaaaa 900atacacatac agaaaaatag tttaattttt tattctttaa actaagaaat gaaagaaaaa 900
aacaaaataa gataagaaat tcaaataatt ataataaaag aagtcaaaaa ataatttatg 960aacaaaataa gataagaaat tcaaataatt ataataaaag aagtcaaaaa ataatttatg 960
tatgaaaaaa aattaaaata taccttgaac tttgatagaa gaatcatatt tacccctaaa 10201020
taattttttt ttaaaaatta gaagtaataa atataaattt aaaattaatt ttttaaaatt 1080taattttttt ttaaaaatta gaagtaataa atataaattt 1080
tgttaaatga agggtatatg cgagccattt tgtaacggca ggggtatatg ttagccgttt 11401140
gtataacggt aagggcatag atgagccact tttataacga ggggtatata agctccaaat 1200gtataacggt aagggcatag atgagccact tttataacga ggggtatata agctccaaat 1200
gacaaagttg agaggtatat caaacccttc tcctatttaa gtatttagca tatcatttaa 1260gtatttagca tatcatttaa 1260
tagaataaat taaataaata ctttatatga gaaaattgaa aaaaaaaatt caaaaaatgt 13201320
tttccttcat actaaacaca cttctaatct aagtatttag catatcattt aatagaataa 1380tttccttcat actaaacaca cttctaatct aagtatttag catatcattt aatagaataa 1380
attaaataaa tactttagat gaatattaat tggtatcttg atttagatag ataattggga 1440attaaataaa tactttagat gaatattaat tggtatcttg atttagatag ataattggga 1440
cgggacctca tgttcaaatt ttaagagaga taaaaatatt aaatgattct tttcattgtt 15001500
ttagtgttgt tgaatagaat tatttaatac attttattaa aggatgatga taattatttt 15601560
atcaaaatta atctaactgt acgaaagatc atcaaaatat taattagtat catccaaaaa 1620atcaaaatta atctaactgt acgaaagatc atcaaaatat taattagtat catccaaaaa 1620
acaatttctt aaaaatcagg caacaagata tggaaataag atcttttgtt ttttcttata 16801680
tttgaataaa agaaaaagac tacgtattta atatctcata tgtaatatat aatgaataat 1740tttgaataaa agaaaaagac tacgtattta atatctcata tgtaatatat aatgaataat 1740
cttttttttt taataaaagt atcataaaat tatagagcac tagaaaaatc atttcttttt 18001800
gactaatatg gc 1812gactaatatg gc 1812
<210> 60<210> 60
<211> 1880<211> 1880
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 60<400> 60
atctgaaata acttttgttg ggcaaaatat cccagatgtg gaagagagag aatatagtgg 60atctgaaata acttttgttg ggcaaaatat cccagatgtg gaagagagag aatatagtgg 60
tttttaaaaa accagagtgg tttcgtcaaa tgtgttgtcg atttttcatt ggacagagaa 120tttttaaaaa accagagtgg tttcgtcaaa tgtgttgtcg atttttcatt ggacagagaa 120
gatggattat ttgttatgtg tctcaataaa acccacaagt ttttttttgt acagtagaca 180gatggattat ttgttatgtg tctcaataaa acccacaagt ttttttttgt acagtagaca 180
atagccgtgc gcatcttgta gccaggtgat gcgaaacaat ggaataacgc ccaccatctt 240atagccgtgc gcatcttgta gccaggtgat gcgaaacaat ggaataacgc ccaccatctt 240
tttgaaattt cggtgaaaat agtagcttcg tcacgaatta atatttgata aatattatta 300tttgaaattt cggtgaaaat agtagcttcg tcacgaatta atatttgata aatattatta 300
tacattcata atcactgctt cttttaaata aaatattttt ttcgttttat atcaattgat 360tacattcata atcactgctt cttttaaata aaatattttt ttcgttttat atcaattgat 360
tttttttata tgtttattga aaaaaaatta taagtaagaa gatgatattg ctaattccac 420tttttttata tgtttattga aaaaaaatta taagtaagaa gatgatattg ctaattccac 420
acatattact tttagtatga tgataaacta atataaaact gagggagtag attatttgtt 480acatattact tttagtatga tgataaacta atataaaact gagggagtag attatttgtt 480
ataataagat agagatactg ttaaaaaata tgatatagta aatgaagttg gtataataaa 540ataataagat agagatactg ttaaaaaata tgatatagta aatgaagttg gtataataaa 540
aaatattaaa aggaaatgct tcactaatga ggccttatat agcacgattt ttttttatga 600aaatattaaa aggaaatgct tcactaatga ggccttatat agcacgattt ttttttatga 600
tagattatat atattatagt tagggaatta catggctttg agacatattg gcctctacat 660tagattatat atattatagt tagggaatta catggctttg agacatattg gcctctacat 660
agtttcgaag cctattggct tccacgtatt ttttatatat tagttattac ggctacctta 720agtttcgaag cctattggct tccacgtatt ttttatatat tagttattac ggctacctta 720
tcaaaacatg ctaatttaat acaaattatt cttaaaacga gcctagtaga tataactctc 780tcaaaacatg ctaatttaat acaaattatt cttaaaacga gcctagtaga tataactctc 780
tgttggtcat cttttacaag cgccatagta tgctcggagg ggtagatagt atagtaattt 840tgttggtcat cttttacaag cgccatagta tgctcggagg ggtagatagt atagtaattt 840
gggaggacga tgttagcgtg gtacctagtc ttgacaaaaa ctctgcttca tggtatatat 900gggaggacga tgttagcgtg gtacctagtc ttgacaaaaa ctctgcttca tggtatatat 900
aacttaagac tgatgttttt atataattgg tatagtttaa tttatgattc cattacgttt 960aacttaagac tgatgtttttt atataattgg tatagtttaa tttatgattc cattacgttt 960
aattgtgtga ttgtatattt aaaacttaaa tttctataac agtttataaa attttgtatt 10201020
gctattaaat atatttttta aaataaaaca aaagaaatta ataaggaagt atgtcttttt 1080gctattaaat atatttttta aaataaaaca aaagaaatta ataaggaagt atgtcttttt 1080
tattcggaca tgatgattca taaactggga taaagattta taatagattg tagggtaaat 1140tattcggaca tgatgattca taaactggga taaagattta taatagattg tagggtaaat 1140
cttatattta ggtatttcat tttcttataa tttttatcag ctgtatataa gtttcaatgg 1200cttatattta ggtatttcat ttttcttataa tttttatcag ctgtatataa gtttcaatgg 1200
tttaatttat tgtagtaata ggttattgtt ggtgcttctg ttgaataaat aacaaaatca 1260tttaatttat tgtagtaata ggttattgtt ggtgcttctg ttgaataaat aacaaaatca 1260
agcattatgg gtatatagtt gtttataatt tctttgatac gatggtacaa aattatctta 1320agcattatgg gtatatagtt gtttataatt tctttgatac gatggtacaa aattatctta 1320
tgacttgagg ggggtgtttg gtaggcaata tttcggagga atatttcaaa attaaatttt 13801380
aaataaattt atagttactc tcttcttaat tatttgttga tattttaatt taaaattgtc 14401440
tcaattattt ataaaaattt taaattctta attaatttaa ttcataatta ataaagataa 1500tcaattattt ataaaaattt taaattctta attaatttaa ttcataatta ataaagataa 1500
aataataaat tactatatca actatcattt tttaataata tattatttaa aaattgaata 1560aataataaat tactatatca actatcattt tttaataata tattattaa aaattgaata 1560
aatatttaaa aataaaaaaa tttatattta attgataata tatcaatcaa acgcaatata 1620aatatttaaa aataaaaaaa tttatattta attgataata tatcaatcaa acgcaatata 1620
aatttaattc gcaaaaatca aagcgtaaag ttaaccaatt cattggctgg gtggatagca 1680aatttaattc gcaaaaatca aagcgtaaag ttaaccaatt cattggctgg gtggatagca 1680
gtcgtttgta tggacaagaa ttaatgtacg gctaatacta ttggttaatt tattgagcaa 17401740
attgtgtggt ccaactggat attcactctc ttatcccttt cgttttcctc ttttagtatt 1800attgtgtggt ccaactggat attcactctc ttatcccttt cgttttcctc ttttagtatt 1800
ttatttttca ccccatagta attgttattt tttaaatgtg cattggataa atttatatat 18601860
atatatatat gtaataatta 1880gtaataatta 1880
<210> 61<210> 61
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Zea mays<213> Zea mays
<400> 61<400> 61
cccgccgagc aagtcaatcg ccccatcatg cggacttgct cggcaaatgg gctagagaga 60cccgccgagc aagtcaatcg ccccatcatg cggacttgct cggcaaatgg gctagagaga 60
ggtttatggg cctcgccttg ggtaccctgt tcccggtacc cgacaatgac cttcctcgga 120ggtttatggg cctcgccttg ggtaccctgt tcccggtacc cgacaatgac cttcctcgga 120
tgctgatagg tcaattaaag aaacaacaat ggatatatat ggataggtat agaggtgtaa 180180
ggctatctct agaacgttgc ctattcttat acccatattc aaactttatt gataaaatgt 240ggctatctct agaacgttgc ctattcttat acccatattc aaactttatt gataaaatgt 240
tggacaggtc tggtgccctt ggaacaagtg ttgtttccat tctccagagt ggactacttc 300tggacaggtc tggtgccctt ggaacaagtg ttgtttccat tctccagagt ggactacttc 300
ttgcgctgat ttgtttggtg agttaccgaa ggagatttag gggaagaaaa acagggcact 360ttgcgctgat ttgtttggtg agttaccgaa ggagatttag gggaagaaaa acagggcact 360
tataagtgat atattgttta tctcagatgt attgatcact tctctggtat tggtgcaatg 420tataagtgat atattgttta tctcagatgt attgatcact tctctggtat tggtgcaatg 420
tattggggta ccgatcactg agtaatcacg caatgtattg gggtactaaa tcctctctgg 480tattggggta ccgatcactg agtaatcacg caatgtattg gggtactaaa tcctctctgg 480
tatcgattat tcatgcaatg tattgacgat tttaataagt gaatcgccaa tgtatatgat 540tatcgattat tcatgcaatg tattgacgat tttaataagt gaatcgccaa tgtatatgat 540
atttccactg gcggtgtact taatacagcc gccagtgtat atacatcatt tccactgacg 600atttccactg gcggtgtact taatacagcc gccagtgtat atacatcatt tccactgacg 600
gttcagttaa gtgaaccgca agtgtatatg acatttccac tggcggtgta ctttatagaa 660gttcagttaa gtgaaccgca agtgtatatg acatttccac tggcggtgta ctttatagaa 660
ccgccagtgt atatacatcc tttacactga cggttcagtt aagtgaacca ccagtgtata 720ccgccagtgt atatacatcc tttacactga cggttcagtt aagtgaacca ccagtgtata 720
tgatatttcc actggcggtg tacttaatac agctgccagt gtatatacat cctttatact 780tgatatttcc actggcggtg tacttaatac agctgccagt gtatatacat cctttatact 780
gacggttcag ttaagtgaac cgacagtgta tatgatattt ccactgccgg tgtacttaat 840gacggttcag ttaagtgaac cgacagtgta tatgatattt ccactgccgg tgtacttaat 840
acagctgcca gtgtatatac atcctttata ctgacggttc agttaagtga accgccagta 900acagctgcca gtgtatatac atcctttata ctgacggttc agttaagtga accgccagta 900
tatattatat ttccactggc ggtttactta ataaaaccgc aagtgtaaat acatcattta 960tatattatat ttccactggc ggtttactta ataaaaccgc aagtgtaaat acatcattta 960
cactgacagt tttgttaagt gaaccaccag cgtatatata tttacactgc cggttcgtta 10201020
agacgggccc gtctgttttt ttcactggcg tgctgtaact gaaaccgcca ttataaattt 1080agacgggccc gtctgttttt ttcactggcg tgctgtaact gaaaccgcca ttataaattt 1080
ctacgtgccg ccaccttaga gctcttttct actagtgtta acttcttttc ttgtagacca 1140ctacgtgccg ccaccttaga gctcttttct actagtgtta acttcttttc ttgtagacca 1140
tttggaaaac aggaaacaac gcggtactgt attcaacaac agatggttgt ccacacctat 1200tttggaaaac aggaaacaac gcggtactgt attcaacaac agatggttgt ccacacctat 1200
gacaatcatg gcgtcaatgc agtagtaagt ttgtcgtttt tgtgtgtgtg tgtttattag 12601260
ccgtttcttt gttttttttc ttctgttgag ctccaacttt atgaaacgtc gtaagctggt 1320ccgtttcttt gttttttttc ttctgttgag ctccaacttt atgaaacgtc gtaagctggt 1320
aattatgaaa tgtaaggatt tggagagaga aaaaaaacgg gagggaaaac catgcatgct 1380aattatgaaa tgtaaggatt tggagagaga aaaaaaacgg gagggaaaac catgcatgct 1380
gctgacgcga cggccggacg cagacgcaac aatgcccccg gtgcggcgtt gtcgagcagc 1440gctgacgcga cggccggacg cagacgcaac aatgcccccg gtgcggcgtt gtcgagcagc 1440
cactgcacca ccccacgcat cacctgcagt aatctagcga cgggtttttc ttatttattt 15001500
atttatttat ttatttttct tctctccctc cctccctcag atttgttttc gttttcatta 1560atttatttat ttatttttct tctctccctc cctccctcag atttgttttc gttttcatta 1560
atcgttatta ccagcaatta attaacttta tctattgatt taccaaaccg caataaagaa 16201620
tatatatatt cttttattaa ggtccagtaa taagcagcac agaagcgcag gtgcagcagc 1680tatatatatt cttttattaa ggtccagtaa taagcagcac agaagcgcag gtgcagcagc 1680
agcagcgtca gcgcccgagg cgcgcacgag agaaacagag gctgacgagg tggggcccgt 1740agcagcgtca gcgcccgagg cgcgcacgag agaaacagag gctgacgagg tggggcccgt 1740
gcgggccttg accaatcgga gttcgacaac agcctggcca cccacaaaca cacactcctt 1800gcgggccttg accaatcgga gttcgacaac agcctggcca cccacaaaca cacactcctt 1800
cgcctcgcgc cggccgtcgt cgcctccctc caccgaacga tccctcctcc tcctcctcct 1860cgcctcgcgc cggccgtcgt cgcctccctc caccgaacga tccctcctcc tcctcctcct 1860
cctcctcctc gcatcccacc ccaccccacc ttctccttaa agctacctgc ctacccggcg 1920ccctcctcctc gcatcccacc ccaccccacc ttctccttaa agctacctgc ctacccggcg 1920
gttgccgccg ccgcaatcga tcgaccggaa gagaaagagc agctagctag ctagcagatc 1980gttgccgccg ccgcaatcga tcgaccggaa gagaaagagc agctagctag ctagcagatc 1980
ggagcacggc aacaaggcga t 2001ggagcacggc aacaaggcga t 2001
<210> 62<210> 62
<211> 1610<211> 1610
<212> ДНК<212> DNA
<213> Zea mays<213> Zea mays
<400> 62<400> 62
tagtgttatc catggccaca ttattttgtt tgtttgagtt agtttcatta ttcaagcaac 6060
agtccattga tgcaataatt gacatataac agttgtacac attatcttgc taaaaccgga 120agtccattga tgcaataatt gacatataac agttgtacac attatcttgc taaaaccggga 120
actattgttt ccagtatcaa aaaaatataa cctgataatg aattttccat tggattttat 180180
gcaatatcca gattctcaag atctcttggg aaccaaacgc cgccaaaaat cggttccaca 240gcaatatcca gattctcaag atctcttggg aaccaaacgc cgccaaaaat cggttccaca 240
aacgaattcg ataaagcaag tgacaacaac gatttcagtg agattttttt taaaatacac 300300
tactctactc caggaatgac taggacaaca tagatagata gtgaagggaa aaatagtggc 360tactctactc caggaatgac taggacaaca tagatagata gtgaagggaa aaatagtggc 360
tgcccttgcc aacatctttt ggttatgata gcaagtgtaa taaggtgatg tagatggact 420tgcccttgcc aacatctttt ggttatgata gcaagtgtaa taaggtgatg tagatggact 420
acatgagacg ccacgtcaga tttaaaaatg tggaacaaag agaagtggag aaaaaaattg 480acatgagacg ccacgtcaga tttaaaaatg tggaacaaag agaagtggag aaaaaaattg 480
ggttgctcgc tagtagccaa ctgagagtgg gttggacacg gactccaaag actccctgtt 540ggttgctcgc tagtagccaa ctgagagtgg gttggacacg gactccaaag actccctgtt 540
agagagagag aggggttgac caaatattaa atatacaacc ggtatcctcg aagagttatt 600agagagagag aggggttgac caaatattaa atatacaacc ggtatcctcg aagagtttatt 600
atacaaatga ttgtctatac gtgacatgac aacatcacaa accaactata gactacatat 660atacaaatga ttgtctatac gtgacatgac aacatcacaa accaactata gactacatat 660
tactctatct atactaaaat ataattcatt ttaacgctaa ttacatattt attaattaac 720tactctatct atactaaaat ataattcatt ttaacgctaa ttacatattt attaattaac 720
ttatgaatgt attttgtatg tatatctaca ttcattatct tctattcgaa tgtagataga 780ttatgaatgt attttgtatg tatatctaca ttcattatct tctattcgaa tgtagataga 780
aaaagagcaa tagaactata ttttgggaca gaagaagtat taattagaga gtatttggtt 840aaaagagcaa tagaactata ttttgggaca gaagaagtat taattagaga gtatttggtt 840
tctaaagact tagtccctca attttattct tattcagtcc ctaaattgac aaatacaaaa 900tctaaagact tagtccctca attttattct tattcagtcc ctaaattgac aaatacaaaa 900
actgaaatta agttttagat tttatatttg acaattttat actataataa aatagagaga 960actgaaatta agttttagat tttatatttg acaattttat actataataa aatagagaga 960
ttaaaaatta atacctagaa atcaaatata ctcttaaact tcacttcgtg ccagaggcta 1020ttaaaaatta atacctagaa atcaaatata ctcttaaact tcacttcgtg ccagaggcta 1020
gctgcgacta gctgcgagat tggaatggat ccggtttcga ccgtacgagg aaggacgctg 1080gctgcgacta gctgcgagat tggaatggat ccggtttcga ccgtacgagg aaggacgctg 1080
gcccaggcag tggggccttg tgatgggaga tgcggtgggg cccgacgggt ccggccgcgg 11401140
ggcatcggct aatgggagtt cgacaacggc agcctcggaa cccatcccgg tttcgcgata 1200ggcatcggct aatgggagtt cgacaacggc agcctcggaa cccatcccgg tttcgcgata 1200
ccccctcact gctccagtgc tccctcctcc cctcccctcc gatcaagtcg gggcaacgcg 1260ccccctcact gctccagtgc tccctcctcc cctcccctcc gatcaagtcg gggcaacgcg 1260
catcactcgc tttaaatccg cacctcccgg ccggtcccct tatcacctca ccttctcctt 1320catcactcgc tttaaatccg cacctcccgg ccggtcccct tatcacctca ccttctcctt 1320
tgagtcctct ctctccgccg ccgcagctag ctgtgacgtt atgctctcgc cggcgccata 1380tgagtcctct ctctccgccg ccgcagctag ctgtgacgtt atgctctcgc cggcgccata 1380
gcgccagcgc ctaccgtcta caactatcca gccttaggct tacctatccc gtcaatcaag 1440gcgccagcgc ctaccgtcta caactatcca gccttaggct tacctatccc gtcaatcaag 1440
cctctcgtaa ggaacaagga aggtagctag ctagttctat agctgctgtc gtcgtcgtca 1500cctctcgtaa ggaacaagga aggtagctag ctagttctat agctgctgtc gtcgtcgtca 1500
tcggcggcgg cggcgcctgt tcttagagga taaggttgtc ctagcggaga gggagctagc 1560tcggcggcgg cggcgcctgt tcttagagga taaggttgtc ctagcggaga gggagctagc 1560
caggatttcg gttgagatca agagggggag caggcggcgg cggcggcgat 16101610
<210> 63<210> 63
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Zea mays<213> Zea mays
<400> 63<400> 63
cccccctcta ggcgactatc aaggatccct atccaaacgg ccctaagtgc gagacgggta 60cccccctcta ggcgactatc aaggatccct atccaaacgg ccctaagtgc gagacgggta 60
tggactagag gtcggtgccg aggaggtagc agggaggtgc gagattctgt tacagagatc 120tggactagag gtcggtgccg aggaggtagc agggaggtgc gagattctgt tacagagatc 120
gcggggtgct cgggccacac aacggcagcg cgaggcgttt ggcatggtcc gccaaactcg 180gcggggtgct cgggccacac aacggcagcg cgaggcgttt ggcatggtcc gccaaactcg 180
cgaagacgac gaccgggagg cgtggggccc actgcgcagc gtgatagttt ggtcgcgcag 240cgaagacgac gaccgggagg cgtggggccc actgcgcagc gtgatagttt ggtcgcgcag 240
cgggtgcggt gagcggctga cgagagggtc ccgcccgcca gcgagccggg gtgtgcgatg 300cgggtgcggt gagcggctga cgagagggtc ccgcccgcca gcgagccggg gtgtgcgatg 300
ggccagcgag cgcgagaacg tagttgggcc gcgcgaagcg aggagttggc tcgaaattgg 360ggccagcgag cgcgagaacg tagttgggcc gcgcgaagcg aggagttggc tcgaaattgg 360
gccgaataga gtggaattgg cccatgaagc ctttttattc ttttcttttt atattttctg 420gccgaataga gtggaattgg cccatgaagc cttttttattc ttttcttttt atattttctg 420
ttttctgttt tcttttcttt ttattttttt caattcccaa tttgaacttc aaaatatgag 480ttttctgttt tcttttcttt ttattttttt caattcccaa tttgaacttc aaaatatgag 480
tatgaaacta gtacccaatt tgaagttcaa gtatgacttt gaatttgtac tcaaattaga 540tatgaaacta gtacccaatt tgaagttcaa gtatgacttt gaatttgtac tcaaattaga 540
tttttaatca taccagtatg gttaagtttg tgtatttata aactttgttt tatattttat 600600
tttatccctt tctttctttt tttcctcaaa tactcttctc attatcattt ttatttaatt 660tttatccctt tctttctttt tttcctcaaa tactcttctc attatcattt ttatttaatt 660
catattatta ttgattttaa tgcacaaaca aaaaatccaa tatgatgcaa tggtttattt 720catattatta ttgattttaa tgcacaaaca aaaaatccaa tatgatgcaa tggtttattt 720
gtgtcttatt aaggatctac ttttttttac atgagtggtc acatgtaatg ataactagag 780gtgtcttatt aaggatctac ttttttttac atgagtggtc acatgtaatg ataactagag 780
gtacacatac atatataaag gaaacaattt ctccttttat tcttccttac aaagtgggta 840gtacacatac atatataaag gaaacaattt ctccttttat tcttccttac aaagtgggta 840
ttacaatcct ttcatttgca ctttcttcga tgcattgatt gttgattatc ccatgtttct 900ttacaatcct ttcatttgca ctttcttcga tgcattgatt gttgattatc ccatgtttct 900
atacctctta gaggttggac attgctcctt tatataaaaa cacacctaga acgagtgacc 960atacctctta gaggttggac attgctcctt tatataaaaa cacacctaga acgagtgacc 960
ttagagttgt tctccatctt tggatgctga ataagttgca tgttagaagc tcattagccg 1020ttagagttgt tctccatctt tggatgctga ataagttgca tgttagaagc tcattagccg 1020
atgaagtgta aacatctcta gtgtgaatac tttatggtgg aaagtgtttc tgttgctttg 10801080
ttgattgtca cagtttgtgt cccatgtaat tctaactcta gccatggact tttttcttcg 1140ttgattgtca cagtttgtgt cccatgtaat tctaactcta gccatggact tttttcttcg 1140
gtctattagc ttgagtgcta tgttaggttg ctaccaagac aaaatacact cacttgtgag 1200gtctattagc ttgagtgcta tgttaggttg ctaccaagac aaaatacact cacttgtgag 1200
tgttgaagtt ggattttgtt cctttagggc tagcttgaaa cttaaatccc ctccagagtt 12601260
tttggggatt gagtgaaaaa tgagctattt tcctactcaa tcttcgagaa ttatagaggg 1320tttggggatt gagtgaaaaa tgagctattt tcctactcaa tcttcgagaa ttatagaggg 1320
aatttaagtt tttaaactag ccattgtcta aaaaatgtca tcttcttccc cgtgtctaac 1380aatttaagtt tttaaactag ccattgtcta aaaaatgtca tcttcttccc cgtgtctaac 1380
tcggccatgt cgctcgtgct aggggaggtt cgactgttgt aacacccaaa atttctattt 1440tcggccatgt cgctcgtgct aggggaggtt cgactgttgt aacacccaaa atttctattt 1440
tgagaatcaa ttaaatttct ttaaaaatat ttgaattaat tcttttatgt gtattatact 1500tgagaatcaa ttaaatttct ttaaaaatat ttgaattaat tcttttatgt gtattatact 1500
gctaaaaata tcttcttctt ctcggccgta caagtaggtc gctttccaat atatattctc 1560gctaaaaata tcttcttctt ctcggccgta caagtaggtc gctttccaat atatattctc 1560
gttttacaat attttcaacg cattttttcc ttttattaag gtccaagtaa taagtagtag 1620gttttacaat attttcaacg cattttttcc ttttattaag gtccaagtaa taagtagtag 1620
taccggtggg gaaagagaaa gagagagaag cgcggccgca gcgagcagcg tcgtcagcgg 1680taccggtggg gaaagagaaa gagagagaag cgcggccgca gcgagcagcg tcgtcagcgg 1680
ttggggcgcg gacgagagtg agaggctgac gaggtgggcc cgtgcgagcc ttgaccaatc 1740ttggggcgcg gacgagagtg agaggctgac gaggtgggcc cgtgcgagcc ttgaccaatc 1740
ggagttcgac agcagcctgc ccccaaaccc acgcacgctc atcacacaga cacacacact 1800ggagttcgac agcagcctgc ccccaaaccc acgcacgctc atcacacaga cacacacact 1800
ctctgtgtct ctcgcgtcgc gcccggccgt cgcctcccct ccctccctgc accgaccgat 1860ctctgtgtct ctcgcgtcgc gcccggccgt cgcctcccct ccctccctgc accgaccgat 1860
ccctcccctg aacccctcct cacatcctac cacctcttta aagctaccca gctacctgcc 1920ccctcccctg aacccctcct cacatcctac cacctcttta aagctaccca gctacctgcc 1920
tgcctcgcct caacctcgcc ggcggccgca gccgcataga ccggaagaga aaggaagcag 1980tgcctcgcct caacctcgcc ggcggccgca gccgcataga ccggaagaga aaggaagcag 1980
agatcggagg caggcgaaga t 2001agatcgggagg caggcgaaga t 2001
<210> 64<210> 64
<211> 1589<211> 1589
<212> ДНК<212> DNA
<213> Zea mays<213> Zea mays
<400> 64<400> 64
ggtttcgctc gtcccgctgt cgtgttttga ttggacgcgg gggttttgga gcggcgtgga 60ggtttcgctc gtcccgctgt cgtgttttga ttggacgcgg gggttttgga gcggcgtgga 60
ggcagctaga ccgtcggatc atgacgggga tcgttattgc gggccagaag gatgggccta 120ggcagctaga ccgtcggatc atgacgggga tcgttattgc gggccagaag gatgggccta 120
gcgaggccgg cgttcgagtg atgcgctcgt cagggcgcgc ggggcaggga ttggtcgagc 180gcgaggccgg cgttcgagtg atgcgctcgt cagggcgcgc ggggcaggga ttggtcgagc 180
ctggcgtggg ccggaagggt gcggttcagt ggtgagatat ggttttttcc attttgcttg 240ctggcgtggg ccggaagggt gcggttcagt ggtgagatat ggttttttcc attttgcttg 240
ttccagttcc agtccagcct tccagggtcg gtcgggcaca agggagcgag atggcaagtc 300ttccagttcc agtccagcct tccagggtcg gtcgggcaca agggagcgag atggcaagtc 300
aaacgtcgcg tttgctgcag ggcgtctggc tgatgggtcc acacgggtgt aggaccggat 360360
gtctgtgagg ctattatcaa taaaagtttt atgggagttt catgcacatt taatggtatg 420gtctgtgagg ctattatcaa taaaagtttt atgggagttt catgcacatt taatggtatg 420
tcacgtcagc attttggacg ttatgccata tcatttaaaa tgaatgggtt tcagagataa 480480
aattagtttg atgtggatga aatcatgtca acccgttttc aaagtcttgg aaactatgtg 540aattagtttg atgtggatga aatcatgtca acccgttttc aaagtcttgg aaactatgtg 540
aaatgtccat tgatagtggt ttgtttaatc ttaccatatt ttactaacat ctattggtta 600aaatgtccat tgatagtggt ttgtttaatc ttaccatatt ttactaacat ctattggtta 600
tttagttgca tcatttaatt agtatattaa tctatgaaaa tgaaagtttg cattgagaag 660660
tattatttca tttttagttt cataacactt ttgatgatgt ggcattgttg gaaagagcga 720tattatttca tttttagttt cataacactt ttgatgatgt ggcattgttg gaaagagcga 720
tatgaaatcc ctattgtgaa cagcctgagt gtcctcccct gtttcttttt ccctcggaga 780tatgaaatcc ctattgtgaa cagcctgagt gtcctcccct gtttcttttt ccctcggaga 780
aactgtgatt gagggttttg aataacaagg aattttagcc cactcaatac cgtttaattc 840aactgtgatt gagggttttg aataacaagg aattttagcc cactcaatac cgtttaattc 840
tctttgtcca aacaaatcat tattgtagat tattcattat tattaggaaa gattcaggtt 900tctttgtcca aacaaatcat tattgtagat tattcattat tattaggaaa gattcaggtt 900
accctccata cctattaggc tttatttgga tactttgtat agtgttttat atattataat 960accctccata cctattaggc tttatttggga tactttgtat agtgttttat atattataat 960
ttgtggcttc tgtacagtgt tatatcatca ctagatgtgt ggtttctgta ttgtcaccaa 1020ttgtggcttc tgtacagtgt tatatcatca ctagatgtgt ggtttctgta ttgtcaccaa 1020
ataacatggg ggtcatgtgt ggtttttgta gaataatttt atagtacgat gttgtcatga 1080ataacatggg ggtcatgtgt ggtttttgta gaataatttt atagtacgat gttgtcatga 1080
ctctacaagg gaactttaca tgaattaaac ctgcacaaaa tttacaagct tttgagcctc 11401140
tgtcatgaat gtacaatgtt atagaaatac aagaagtgta gccttgcata tttgtataaa 1200tgtcatgaat gtacaatgtt atagaaatac aagaagtgta gccttgcata tttgtataaa 1200
ttgtttgggg gaaagaatct atgcttcaaa aaatgtggcc ttgtagcttg cacaaagtac 1260ttgtttgggg gaaagaatct atgcttcaaa aaatgtggcc ttgtagcttg cacaaagtac 1260
atgttgtaca atgctacaga agaaacatgt cttgccgctc agccaaaagg accgaccgtg 1320atgttgtaca atgctacaga agaaacatgt cttgccgctc agccaaaagg accgaccgtg 1320
agaatcagag cactgcccct gagtctaagt aaacagaaaa agaggacaaa atgagttatt 1380agaatcagag cactgcccct gagtctaagt aaacagaaaa agaggacaaa atgagttatt 1380
acaatacaga gaggcaaaga ttcttggaac tatagaccac aaactttagg gtcgtcaacc 1440acaatacaga gaggcaaaga ttcttggaac tatagaccac aaactttagg gtcgtcaacc 1440
ccaccaccca cccgtgcccc tcgcacgcgg gcccgcctcc ttgcgcacta ccaccggacc 1500ccaccaccca cccgtgcccc tcgcacgcgg gcccgcctcc ttgcgcacta ccaccggacc 1500
atggtccctt ttaaatactt caccgccacc cactccccct ttttgcgatg acctcattgt 1560atggtccctt ttaaatactt caccgccacc cactccccct ttttgcgatg acctcattgt 1560
catctttccg gtaaactagg cacctcttt 1589catctttccg gtaaactagg cacctcttt 1589
<210> 65<210> 65
<211> 21<211> 21
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 65<400> 65
tgtaggtaac cctcatagga c 21tgtaggtaac cctcatagga c 21
<210> 66<210> 66
<211> 21<211> 21
<212> РНК<212> RNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 66<400> 66
uguagguaac ccucauagga c 21uguagguaac ccucauagga c 21
<210> 67<210> 67
<211> 328<211> 328
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Искусственная последовательность<223> Artificial sequence
<400> 67<400> 67
ggcagagccg tgcccgtctc atcccctgcc cgtgcaagca gctaggtagg acgatttgag 60ggcagagccg tgcccgtctc atcccctgcc cgtgcaagca gctaggtagg acgatttgag 60
cgtggtgtta ggccgaaccg ctgaaggaag attgctccac tgttgactgc attgtaggta 120cgtggtgtta ggccgaaccg ctgaaggaag attgctccac tgttgactgc attgtaggta 120
accctcatag gacaaatgta ttgcttatat tcagcaatat aatgttcgtc ctatgatttt 180accctcatag gacaaatgta ttgcttatat tcagcaatat aatgttcgtc ctatgatttt 180
tacctacaat atagtcgata gtggaagaac ggtaacatat gtggtttgca gcaggtgagc 240tacctacaat atagtcgata gtggaagaac ggtaacatat gtggtttgca gcaggtgagc 240
aggatgggtg tggatgattg aatatctctg ttcagtgttt tcatcatctg actgaacact 300aggatgggtg tggatgattg aatatctctg ttcagtgttt tcatcatctg actgaacact 300
gaatcagctt gctgacgtta gaggttag 328gaatcagctt gctgacgtta gaggttag 328
<210> 68<210> 68
<211> 21<211> 21
<212> РНК<212> RNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 68<400> 68
guccuaugag gguuaccuac a 21guccuaugag gguuaccuac a 21
<210> 69<210> 69
<211> 21<211> 21
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 69<400> 69
gtcctatgag ggttacctac a 21gtcctatgag ggttacctac a 21
<210> 70<210> 70
<211> 3058<211> 3058
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 70<400> 70
aatcataaac acaaatataa gaaaaaattt tgtgatagat taataattaa cgtaaaactc 60aatcataaac acaaatataa gaaaaaattt tgtgatagat taataattaa cgtaaaactc 60
atcaatttac aaaaatctct tagaataatc agtgaacgat tcatataatc gaccctaact 120atcaatttac aaaaatctct tagaataatc agtgaacgat tcatataatc gaccctaact 120
gctcctaatt ggtgtgttat cattgttata agctaaaagt agttatgatg aactatacat 180gctcctaatt ggtgtgttat cattgttata agctaaaagt agttatgatg aactatacat 180
tatgtggtaa acaaattact tcaaaccata atatattgtg gggcttgatg ggattttgtc 240tatgtggtaa acaaattact tcaaaccata atatattgtg gggcttgatg ggattttgtc 240
aatttcatca aagaattttg ttttgggcca ctttgacatt atgcatccaa aaaggtccaa 300aatttcatca aagaattttg ttttgggcca ctttgacatt atgcatccaa aaaggtccaa 300
tagataacta gcccacttaa taagttcatt tactcctctt gctgattttg gactaaacag 360tagataacta gcccacttaa taagttcatt tactcctctt gctgattttg gactaaacag 360
aagagccaga aatcacagac ttatccattt tgtggtccag actgtgtcac cacctttgag 420aagagccaga aatcacagac ttatccattt tgtggtccag actgtgtcac cacctttgag 420
aaaaggtaac aacgacgaca tattcagtga agttgcacga gtagagtttt aaaaggagag 480aaaaggtaac aacgacgaca tattcagtga agttgcacga gtagagtttt aaaaggagag 480
cgtgtacatt gtcttacgaa aaaaatttgt gttacatagc gcgtcatttg aatgagacct 540cgtgtacatt gtcttacgaa aaaaatttgt gttacatagc gcgtcatttg aatgagacct 540
aatgaggtac aaattcaaaa taatcagact ctaatataga aaacatgata aatacttgat 600aatgaggtac aaattcaaaa taatcagact ctaatataga aaacatgata aatacttgat 600
ttatcccata ctatgtgata cattttaata tatagtttat tttaaaagat atgatacata 660660
tatcacataa actgaaacgt cggaatgaat aaaaaatgtt gttattacta ggtttcttgt 720tatcacataa actgaaacgt cggaatgaat aaaaaatgtt gttatacta ggtttcttgt 720
gactaataat ctaaagctcc tttgaagaag taattcctag aaattaggtt tacctaccac 780gactaataat ctaaagctcc tttgaagaag taattcctag aaattaggtt tacctaccac 780
tacttttttc tttttttttg acacaagtga aggtataagt tgaaacaatg accaattact 840tactttttttc ttttttttttg acacaagtga aggtataagt tgaaacaatg accaattact 840
catgggaagt tgtttattag cccacaggtc tcattggcca cttatatttt agcatagtta 900catgggaagt tgtttattag cccacaggtc tcattggcca cttatatttt agcatagtta 900
cttcgagaga tcaatcaaaa aacttacaaa aatatttatt cagtagagtc gatagtaaat 960cttcgagaga tcaatcaaaa aacttacaaa aatatttatt cagtagagtc gatagtaaat 960
atttatcatt caccatcgta tgatatacat ttgatatata ttttaggtgt tgattttctc 1020atttatcatt caccatcgta tgatatacat ttgatatata ttttaggtgt tgattttctc 1020
atacatacaa gttgtataat ataacataca cttcagatac atatagtttg aagtcaaaat 1080atacatacaa gttgtataat ataacataca cttcagatac atatagtttg aagtcaaaat 1080
ttatatgcaa aatatgaggt atgttaacac gtgatctctc cataaagcta aataatttat 1140ttatatgcaa aatatgaggt atgttaacac gtgatctctc cataaagcta aataatttat 1140
gtatatattt tttaaatata catataatat tatattctaa tttgttttgc ccttttttag 1200gtatatattt tttaaatata catataatat tatattctaa tttgttttgc ccttttttag 1200
tggtacaatt atatttttaa aattttaaat tcgtctctag ctaacttgca catatagttt 1260tggtacaatt atatttttaa aattttaaat tcgtctctag ctaacttgca catatagttt 1260
gaagtcacat acacttggta ctctcttcac ctacattcaa cttctgcttt gaaaacatac 1320gaagtcacat acacttggta ctctcttcac ctacattcaa cttctgcttt gaaaacatac 1320
atacatagac ataatatatt cgtataattt taataaaaaa atatcgtata cacgcaaata 1380atacatagac ataatatatt cgtataattt taataaaaaa atatcgtata cacgcaaata 1380
tattatttta tttttaaaga aaatgaaaat ccaaaatatg acaatcccaa gtttgtggcc 1440tattatttta tttttaaaga aaatgaaaat ccaaaatatg acaatcccaa gtttgtggcc 1440
aggtgttaaa cacttgtgga ctaaacatat atatttattt tttcaattta tccatagggc 1500aggtgttaaa cacttgtgga ctaaacatat atatttattt tttcaattta tccatagggc 1500
acacacttag aaaaaatggg catttcccca tagttttggc ctaaagttcc taaaaaccac 1560acacacttag aaaaaatggg catttcccca tagttttggc ctaaagttcc taaaaaccac 1560
tggcttcttc tgcattctcc aaaactgtgg aaccaaaaga cttataagta ctgtttcttg 1620tggcttcttc tgcattctcc aaaactgtgg aaccaaaaga cttataagta ctgtttcttg 1620
gtttaattat ttttacgtat tttattttta aagaatataa tatttaaatt ttaatatttt 16801680
attaaaatta tgtatcgtct tttaaatcat ataattatat tgaaagttga aattaaaaaa 1740attaaaatta tgtatcgtct tttaaatcat ataattatat tgaaagttga aattaaaaaa 1740
cttactaaat ataaataaaa atgcttaaat taaaacagaa ggagtaatat ctaaaatgag 1800cttactaaat ataaataaaa atgcttaaat taaaacagaa ggagtaatat ctaaaatgag 1800
ttatatatat atatataaaa gctttattta atacgaatat tttattcata tagtgtgagc 1860ttatatatat atatataaaa gctttattta atacgaatat tttattcata tagtgtgagc 1860
tcataaaatt tattcataat ttgagaatag ttaatgactt atttttcgat ataatattgt 1920tcataaaatt tattcataat ttgagaatag ttaatgactt atttttcgat ataatattgt 1920
tattctcttc tcaaaagatt tactagtaat gcgaggactg ttaatgacgt attctttaag 1980tattctcttc tcaaaagatt tactagtaat gcgaggactg ttaatgacgt attctttaag 1980
ctcgaatgat ttagatttaa cctttatata aatatttaat gacttttatg aaatatatca 20402040
agatattcga aatggtaagt atcaaatata tattttgttg cataaagttt ttttctaaac 2100agatattcga aatggtaagt atcaaatata tattttgttg cataaagttt ttttctaaac 2100
taaagtgcag agaactttat acactatagg agtaatattt actacttata taagtagtac 2160taaagtgcag agaactttat acactatagg agtaatattt actacttata taagtagtac 2160
aatattgagt aatatttact gtttattaat tattatatta tattaatata ctccctatcc 2220aatattgagt aatatttact gtttattaat tattatatta tattaatata ctccctatcc 2220
aagaataact cgactttacc aataaaaagt cactgtaatt tctctttgct cctgagttaa 2280aagaataact cgactttacc aataaaaagt cactgtaatt tctctttgct cctgagttaa 2280
atatttttat tcggttattc tcgtagccga ttaaagttat atagatatta agaaaatata 2340atatttttat tcggttattc tcgtagccga ttaaagttat atagatatta agaaaatata 2340
tttaggcttt ttatattata tttaaaagtt aattatgttt attttagtta tttatcaaat 2400tttaggcttt ttatattata tttaaaagtt aattatgttt attttagtta tttatcaaat 2400
attatcttat accctgcgta taaactaaag taaatatcac attaaattta cgtatagtaa 2460attatcttat accctgcgta taaactaaag taaatatcac attaaattta cgtatagtaa 2460
aagtaatgtg attattaatt atataaattt tattaaatat gtgaataatt tagctcctga 2520aagtaatgtg attattaatt atataaattt tattaaatat gtgaataatt tagctcctga 2520
tctactatca aacgaattat tatagtatta gtgacggagc catcatattt ttaagggttt 2580tctactatca aacgaattat tatagtatta gtgacggagc catcatattt ttaagggttt 2580
attcgaacct tcttcagcga aaaattatac tatttctata tgattaaaat aactttttag 26402640
atatatacaa taaatgtcaa accccattca atcattttaa gtatttattt cttcaaatta 2700atatatacaa taaatgtcaa accccattca atcattttaa gtatttattt cttcaaatta 2700
tcgaactctt ttatcgaaaa ttttgaatcg accgctatat actaatattt tatttaaaac 2760tcgaactctt ttatcgaaaa ttttgaatcg accgctatat actaatattt tatttaaaac 2760
cacagattta tcattcatga accgacaaat gtatttaaat ttactgacca tataacagaa 2820cacagattta tcattcatga accgacaaat gtatttaaat ttactgacca tataacagaa 2820
cctgataaca cataaactac ttattattat tattattatt attgttatta taatcatagt 28802880
accaaaaaaa atataaaaat aatattactc acgtactgag aattaaataa taaataaata 2940accaaaaaaa atataaaaat aatattactc acgtactgag aattaaataa taaataaata 2940
aataaagtga taaacaaaaa caagtgactg gaacattgga aattatccaa aaccatcaaa 3000aataaagtga taaacaaaaa caagtgactg gaacattgga aattatccaa aaccatcaaa 3000
acaaaatatc tataaataga tagaaattca ttcttatttc ttacttcact tacaaaaa 30583058
<210> 71<210> 71
<211> 2245<211> 2245
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 71<400> 71
tcttgtcaat atgatctcaa ataacaaata attctatgac aatatgtatt aaccatttta 60tcttgtcaat atgatctcaa ataacaaata attctatgac aatatgtatt aaccatttta 60
aaacatcgat cttatgttct ttcaattata attaatttac taaatattaa ttatatttta 120120
caacatcgta taatatatat gtgatacaca tgtcaaagca cgtgcggtga agctaaatat 180180
ttaaataact ttaaagtaac tttcaattaa tattagtttg aattaaaaaa aataatgaat 240ttaaataact ttaaagtaac tttcaattaa tattagtttg aattaaaaaa aataatgaat 240
tagtcatgag atttgcgtac tcttactttt gaagagtgtg ttatcactct tataataggt 300tagtcatgag atttgcgtac tcttactttt gaagagtgtg ttatcactct tataataggt 300
aaaagggaaa agggtctgat atacccctca actttgtcat ttggagctga tatacccctc 360aaaagggaaa agggtctgat atacccctca actttgtcat ttggagctga tatacccctc 360
gttataaaag tggctcatat atgcccttac cgctatataa acggctcaca tatacccctg 420gttataaaag tggctcatat atgcccttac cgctatataa acggctcaca tatacccctg 420
ccgttacaaa atggctcaca tatacccttc atttaacgga agttaaaaca ttagttttaa 480480
atttatattt attacttcta attttttaaa aaaaattatt taggggtata tatgattctt 540atttatattt attacttcta attttttaaa aaaaattatt taggggtata tatgattctt 540
ctatcaaagt tcaaggttta ttgtaatttt tttcatacat aaattatttt ttgacttctt 600aaattatttt ttgacttctt 600
ttattatagt tatttgaatt tcttattctt attttgtttt ttttctttca ttccttagtt 660660
taaagaataa aaaattaaac tatttttttg tgtgtattgt aatttaattt cgtattcgaa 720taaagaataa aaaattaaac tatttttttg tgtgtattgt aatttaattt cgtattcgaa 720
gaaaaaattt ggtcatctat aataagtttt acaagaatat tagtgaaaca taaataaatt 780gaaaaaattt ggtcatctat aataagtttt acaagaatat tagtgaaaca taaataaatt 780
tgattatcaa aataataatt ataaattaat cattgaaaca aaaaaagtca aaaaaatatg 840tgattatcaa aataataatt ataaattaat cattgaaaca aaaaaagtca aaaaaatatg 840
tttgacgagg attaaattac tcatatggga ttatattttt tagaaaaatt attatttttc 900tttgacgagg attaaattac tcatatggga ttatattttt tagaaaaatt attatttttc 900
atttccgtta gaggaaaatg gtatatgtga gtcatttgtt tacaagtagg ggtatatatg 960atttccgtta gaggaaaatg gtatatgtga gtcatttgtt tacaagtagg ggtatatatg 960
agtcactttc ataacaaggg gtatatcagc tctaaatgac aaagttgagg ggtatatcag 1020agtcactttc ataacaaggg gtatatcagc tctaaatgac aaagttgagg ggtatatcag 1020
acccttttcc ctatgtaaaa tctaaaatta agtttgaact cacataaaat tatataggcc 1080acccttttcc ctatgtaaaa tctaaaatta agtttgaact cacataaaat tatataggcc 1080
gtaacctact taacccattg tcatcactaa ttatatagag atcttgattt gatatattaa 1140gtaacctact taacccattg tcatcactaa ttatatagag atcttgattt gatatattaa 1140
aagtaaatgc atcacatatt ttttttaaaa attatttatt tgtaaaaata aggtcgacaa 1200aagtaaatgc atcacatatt ttttttaaaa attatttatt tgtaaaaata aggtcgacaa 1200
atactgtgaa atcaatgtga aaaaggtttt gatcgttgag tgtatcttta actatggtga 1260atactgtgaa atcaatgtga aaaaggtttt gatcgttgag tgtatcttta actatggtga 1260
tgcacaacgt aacgaaatca ttttcattac caatattatg aatttttaca ttatatataa 13201320
aataagatat ataactaata tccatatatt atattacata tataaattaa aaatatataa 1380aataagatat ataactaata tccatatatt atattacata tataaattaa aaatatataa 1380
cgaacaaaaa tactacaaaa ttaatggaat acactctatg aatccagcat acacaaatag 1440cgaacaaaaa tactacaaaa ttaatggaat acactctatg aatccagcat acacaaatag 1440
agcctctacg taagccagtt gttatctaat ctgtttagtc actatgacat cagataagat 1500agcctctacg taagccagtt gttatctaat ctgtttagtc actatgacat cagataagat 1500
atctgtttag ggtacccgtt tacacatcag cttttaaggt ttcctactta ccaaacactt 1560atctgtttag ggtacccgtt tacacatcag cttttaaggt ttcctactta ccaaacactt 1560
ctccttcacc aaattgtttc tccaatctca ttcaaacaaa cacacaacta ggtggttcga 1620ctccttcacc aaattgtttc tccaatctca ttcaaacaaa cacacaacta ggtggttcga 1620
acaaactcaa taattttttt ttaaaaaaaa tttatattta tactaaaaat taaataaata 1680acaaactcaa taattttttt ttaaaaaaaa tttatattta tactaaaaat taaataaata 1680
tacatgtaca tttgtttctt aactcataac aaaattaatt aacgactcag tgggatcgtg 1740tacatgtaca tttgtttctt aactcataac aaaattaatt aacgactcag tgggatcgtg 1740
aaaatgtttt ttacggctaa agttatgaat ttaaaccata gtatccacaa aaagttaagt 1800aaaatgtttt ttacggctaa agttatgaat ttaaaccata gtatccacaa aaagttaagt 1800
ttccattttt tttcccaaag aaaatttaaa ataacaaact cttaatttca aaatatggtg 1860ttccattttt tttcccaaag aaaatttaaa ataacaaact cttaatttca aaatatggtg 1860
cacaaaatat aaggggaaag ggttaaattg agataatccg gtgtcatttt aaagcgaaca 1920cacaaaatat aaggggaaag ggttaaattg agataatccg gtgtcatttt aaagcgaaca 1920
aaattgattt tttctaaaac taaaaatcaa gaaacaaaat agaaacatat caaataagac 19801980
aacaaaagtg tgtaacgtga caatgtgata taatacgaaa taccctagga ataattgaac 20402040 aacaaaagtg tgtaacgtga caatgtgata taatacgaaa taccctagga
acataaaatt cactataaaa ggacaatgtc ataattaatt tttgtaaata aaatattcac 2100acataaaatt cactataaaa ggacaatgtc ataattaatt tttgtaaata aaatattcac 2100
cactttacat gatacgtaat tggtatttgg tacaaaattt gagtaatagt aagataaatg 21602160
tagtagtagt gtggtactta ctatggttat gtctatatat acatattgca tatgtatata 22202220
taaaaagatt gaaacaaaga aaaaa 2245taaaaagatt gaaacaaaga 2245
<210> 72<210> 72
<211> 2234<211> 2234
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 72<400> 72
tatgatcttt ttcaatgaag tgattcagtt caatggaact caaattttat atgtggtagg 60tatgatcttt ttcaatgaag tgattcagtt caatggaact caaattttat atgtggtagg 60
aattttatat caagtcacta atttattttg ataaccatcg agttagtagt taaaattatg 120120
atattgatat gttttaagat agaattgaat acataaaagg tagatctggt acataaacta 180agaattgaat acataaaagg tagatctggt acataaacta 180
ttgtgcttat gtagaatttg gggaagaaac gtcaaggaat ataatgtaaa gtatagtaga 240ttgtgcttat gtagaatttg gggaagaaac gtcaaggaat ataatgtaaa gtatagtaga 240
caatttattt tatcgtatac atattaataa ttattttcac gattcgaata tatataaccg 300caatttattt tatcgtatac atattaataa ttatttttcac gattcgaata tatataaccg 300
atagatcaca caataataaa tattagtgtt gctcatcgaa aactccgatg cactaatgtt 360atagatcaca caataataaa tattagtgtt gctcatcgaa aactccgatg cactaatgtt 360
tgccactaat tcttaagata gataacaaac acatctaaac attattaatt aagtgtatat 420tgccactaat tcttaagata gataacaaac acatctaaac attattaatt aagtgtatat 420
atacaacata ttttaaactt attctataac tggatttcaa tttaaaaaaa ataatgatgt 480atacaacata ttttaaactt attctataac tggatttcaa tttaaaaaaa ataatgatgt 480
gtcatgtccc aaagttagtt gcactctaaa aaaagttaaa aggtttttaa ccaaaaataa 540gtcatgtccc aaagttagtt gcactctaaa aaaagttaaa aggtttttaa ccaaaaataa 540
cttcttgact ataacaaatt agagttggaa ttaataatca aaacatataa aaattgatat 600600
ttttaaacaa gttttacacc ataatgtagc aatccatcct gttagtgata ttgtctgctt 660ttttaaacaa gttttacacc ataatgtagc aatccatcct gttagtgata ttgtctgctt 660
taaatctagg aatgtacgtc tttaaaatgc gtcattagtg ggtaagacat gcttacttaa 720taaatctagg aatgtacgtc tttaaaatgc gtcattagtg ggtaagacat gcttacttaa 720
aacacgtcat taatgaataa gatttgttta cttatatact caacatctct catatatttt 780aacacgtcat taatgaataa gatttgttta cttatatact caacatctct catatatttt 780
actgatgtga aattagttat cttaaaccgg aatgtcagta cacttcattt gtatcttttt 840actgatgtga aattagttat cttaaaccgg aatgtcagta cacttcattt gtatcttttt 840
ttatatgagc cattatcatt tacatgtaaa agtgcacctt aaagctggtt aagcttataa 900ttatgagc cattatcatt tacatgtaaa agtgcacctt aaagctggtt aagcttataa 900
actataaatt gttcattttt tctcgtttaa taatcaatat ctacttaaca aggcctgttt 960actataaatt gttcattttt tctcgtttaa taatcaatat ctacttaaca aggcctgttt 960
aatagatgat aatagtttaa gtagaaaaat gaaattgtaa cttttttacg acttttaaca 1020aatagatgat aatagtttaa gtagaaaaat gaaattgtaa cttttttacg acttttaaca 1020
tttcaactat cagttagtaa tatgctcatc cattacatat tttaaagaga acaaagaacc 1080tttcaactat cagttagtaa tatgctcatc cattacatat tttaaagaga acaaagaacc 1080
attaaaaggt taaaaactta ttataaagtt aaatattttt tcagtatata tgaaaggacc 1140attaaaaggt taaaaactta ttataaagtt aaatattttt tcagtatata tgaaaggacc 1140
ttacaagtta caactaaatc ttttgaaaga aaagtatcgg tcactactaa gttttccaag 1200ttacaagtta caactaaatc ttttgaaaga aaagtatcgg tcactactaa gttttccaag 1200
aaaaacaaca acaaaggaac aatctttttc taccacaagg ggatgtgact attgatagaa 12601260
tccattcatt ttaatgggag ggcaattttt ttttaagcgg attcaaaata taaaaaagta 13201320
aatatacgga caaaaaaaaa taagaaaatt tatcaacgta tacataagaa aagttgcata 1380aatatacgga caaaaaaaaa taagaaaatt tatcaacgta tacataagaa aagttgcata 1380
cttccaaata gacatgatac ataaacatga tctttaactt gacgtcagtt ggcaactata 1440cttccaaata gacatgatac ataaacatga tctttaactt gacgtcagtt ggcaactata 1440
tgtgcacaag taggcactta aacttgtata agattgaaca attgacacat tcatcctaca 1500tgtgcacaag taggcactta aacttgtata agattgaaca attgacacat tcatcctaca 1500
ggcaccctac atgaaaattt tgtgtcctgc gtggcgtcct acgtgtatca tgtcatgcat 1560ggcaccctac atgaaaattt tgtgtcctgc gtggcgtcct acgtgtatca tgtcatgcat 1560
gacatgtgtg gctacttgtt caattttata caagagtaag tgcctacttg tgcgcatcca 1620gacatgtgtg gctacttgtt caattttata caagagtaag tgcctacttg tgcgcatcca 1620
aagttgaggg tcatagttac cgactgacgt caagttaaga gtcatgttta tgtattatgc 1680aagttgaggg tcatagttac cgactgacgt caagttaaga gtcatgttta tgtattatgc 1680
cctccaggta acatagattt gaagaagcat ggaatgcatg tagatcttac ttctcgtgaa 1740cctccaggta acatagattt gaagaagcat ggaatgcatg tagatcttac ttctcgtgaa 1740
aatggttttc aaatacgaat agattagtct cggctcaagt aaaacatttt aaaagtaagt 1800aatggttttc aaatacgaat agattagtct cggctcaagt aaaacatttt aaaagtaagt 1800
acttaagaca aaataataca ataataaaaa agttatgata atattaaata ataaaaacta 1860acttaagaca aaataataca ataataaaaa agttatgata atattaaata ataaaaacta 1860
tagcaaaata taatatatta tcgaagcaaa cataaatgtc taattcaagc ctcgataaat 1920tagcaaaata taatatatta tcgaagcaaa cataaatgtc taattcaagc ctcgataaat 1920
gaaaaaaata atctaatttg aacaccgcaa ctttctttta aatgggccct ccacgacact 1980gaaaaaaata atctaatttg aacaccgcaa ctttctttta aatgggccct ccacgacact 1980
tcatgatata tagtaaaaca aaaaagtctt tattctcttt tcttcttgac tagggaacca 2040tcatgatata tagtaaaaca aaaaagtctt tattctcttt tcttcttgac tagggaacca 2040
ttagatttta aagacattaa atctattacc cttaccctaa gaataagaag atgtaaagta 2100ttagatttta aagacattaa atctattacc cttaccctaa gaataagaag atgtaaagta 2100
gaagagaaaa caaccaaaac catatatata catatatata attacattat attgtcttat 2160gaagagaaaa caaccaaaac catatatata catatatata attacattat attgtcttat 2160
aacatatagt cttttaagga aaaacaaatt tagaaaaaaa taatattatt ttacattttt 22202220
tttcttcata caat 2234tttcttcata caat 2234
<210> 73<210> 73
<211> 1302<211> 1302
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 73<400> 73
actatatacc ctccaattat tgtgtaccaa agaccctcat aggatttatt caaatattgc 60actatatacc ctccaattat tgtgtaccaa agaccctcat aggatttatt caaatattgc 60
aaaattgaaa gaaaaaatgt taattaccct atccatgctt agatattttc aaacctaaaa 120aaaattgaaa gaaaaaatgt taattaccct atccatgctt agatattttc aaacctaaaa 120
atttggtgca tttttgtgtt tatacataat tagtaaagga gagaaattag agttccactc 180atttggtgca tttttgtgtt tatacataat tagtaaagga gagaaattag agttccactc 180
tcaccaacac tttattctag ctagtggttt aatttttcaa tttcagtcca tatttagttt 240240
agagaaaaat gtgattctgc caagaaagtt tgatgctttt ttacttagtt catcgaatta 300agagaaaaat gtgattctgc caagaaagtt tgatgctttt ttacttagtt catcgaatta 300
tagagattaa taattgaaaa tcctacaaaa aaccctaaca tttaaaacca tttttattta 360tagagattaa taattgaaaa tcctacaaaa aaccctaaca tttaaaacca tttttattta 360
atacgttgag agagacagag atattaaaat cgtatgattc gtaagagtgt gatgttgaaa 420atacgttgag agagacagag atattaaaat cgtatgattc gtaagagtgt gatgttgaaa 420
atgagagatt aataatggaa ggtggagatg gcgcgtgtgc gatgagtgat tgcaacccta 480atgagagatt aataatggaa ggtggagatg gcgcgtgtgc gatgagtgat tgcaacccta 480
aacagaaaat agtagggcaa tgaatgagtt tggacacgtg tcgacatctc gatggtaggg 540aacagaaaat agtagggcaa tgaatgagtt tggacacgtg tcgacatctc gatggtaggg 540
tctgataaat ccacctgatt tttttatata aaaaattttg attttataaa tttttctttt 600600
ttacttataa aatcgagttc agggaatcat gtgacctaac cttaactagg tgaagcctcg 660ttacttataa aatcgagttc agggaatcat gtgacctaac cttaactagg tgaagcctcg 660
tacgattttc ccaacttacg gaactaccct tgtgattggt taaaaatgta aagtaaaaca 720tacgattttc ccaacttacg gaactaccct tgtgattggt taaaaatgta aagtaaaaca 720
ctactcgttt gtgatgtttt catgatatct aaaactctta ctgctagttt tgataaatct 780ctactcgttt gtgatgtttt catgatatct aaaactctta ctgctagttt tgataaatct 780
tactgctaga tttgcttttc cttttccaat ctatagtact gctaagatta tttttgttag 840tactgctaga tttgcttttc cttttccaat ctatagtact gctaagatta tttttgttag 840
tgaaattaac agaaatgtct tttgtattag tctactttat aaaccaccat tttgatgtgg 900tgaaattaac agaaatgtct tttgtattag tctactttat aaaccaccat tttgatgtgg 900
ccaaaaaaaa aaccatgttg ataaattcag tttggtaaga gagtctgatg agacacaaaa 960ccaaaaaaaa aaccatgttg ataaattcag tttggtaaga gagtctgatg agacacaaaa 960
aaaattatgg gaaagaaaga aaacataaat ggataaaata aacagagatt tgaatataag 1020aaaattatgg gaaagaaaga aaacataaat ggataaaata aacagagatt tgaatataag 1020
atatagttta ttttggttat cttagggttc gtccgatgtt agagatcatg tctgaccgaa 1080atatagttta ttttggttat cttagggttc gtccgatgtt agagatcatg tctgaccgaa 1080
agtcttagtg ctttttggtt gcagacgtaa ttgctttatt ctgaccggta agtaggtgat 11401140
ggacacaaag gtatgattca attagaaaaa ctaaacatag cattattatt ctgtttggtt 1200ggacacaaag gtatgattca attagaaaaa ctaaacatag cattattatt ctgtttggtt 1200
atatttaaac ccattagctt cttttctctt ttgatttgca cattgaatcg cttattaatc 1260atatttaaac ccattagctt cttttctctt ttgatttgca cattgaatcg cttattaatc 1260
tcacttggtc atggtctcat agaagcattt taagcaaatt tg 1302tcacttggtc atggtctcat agaagcattt taagcaaatt tg 1302
<210> 74<210> 74
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 74<400> 74
aataaaaaac tactagatta cagctcttga ttggttgata acttgatatc atatatcgtg 60aataaaaaac tactagatta cagctcttga ttggttgata acttgatatc atatatcgtg 60
tttgtagttg aagatgtaaa gatttatcat cttgtatttg aattttgcac aatatataat 120tttgtagttg aagatgtaaa gatttatcat cttgtatttg aattttgcac aatatataat 120
gtgatgattc tatgtttgtt tgtaaactta tgtgcaaatg ggcgataact aaacgttcgt 180gtgatgattc tatgtttgtt tgtaaactta tgtgcaaatg ggcgataact aaacgttcgt 180
aaaatagtta catgtactaa ttaatcgaag cacataaata ttatatatat atatatgtat 240240
atatatgaaa cgattcattg attttaagta tttaatttat tttttaagat tttagttgtc 300atatatgaaa cgattcattg attttaagta tttaatttat tttttaagat tttagttgtc 300
ttaacctcgt acgaagaaga aggatatata ctatttaact cgtggagatg atgaggttcg 360ttaacctcgt acgaagaaga aggatatata ctatttaact cgtggagatg atgaggttcg 360
gatatttttc cttaagacca caagacactg acacgccgac tgatcgataa aaaaagttaa 420gatatttttc cttaagacca caagacactg acacgccgac tgatcgataa aaaaagttaa 420
ggcctacaat acaaaagagt agcagattcc cttacacgtg tttcatttat gatctgttaa 480ggcctacaat acaaaagagt agcagattcc cttacacgtg tttcatttat gatctgttaa 480
ttaactccat tgagcttcaa tatctcatta gccgaaaatt aacttgacgt tttccattga 540ttaactccat tgagcttcaa tatctcatta gccgaaaatt aacttgacgt tttccattga 540
actgtcgaaa aaatttgtag aaaaagtgaa atgtccccta tttaacttcc aagtttaaaa 600actgtcgaaa aaatttgtag aaaaagtgaa atgtccccta tttaacttcc aagtttaaaa 600
cctaaaatta attagttacc gttttgatga ataacgttga aagaatcgtc aacatatcaa 660cctaaaatta attagttacc gttttgatga ataacgttga aagaatcgtc aacatatcaa 660
atgatgcaga tacaacaagg gacaaaaaca tcaaaaaatt gattaaaaat aatcattcag 720atgatgcaga tacaacaagg gacaaaaaca tcaaaaaatt gattaaaaat aatcattcag 720
atattagcaa ttaaactgta agtaaatgat tgcatatata tatatgaatg aatacatata 780atattagcaa ttaaactgta agtaaatgat tgcatatata tatatgaatg aatacatata 780
tatgtatcaa actgtaagta aataatacat acatatatat atatatatat aggaaaatat 840tatgtatcaa actgtaagta aataatacat acatatatat atatatatat aggaaaatat 840
ctcatttttc aatcattttc agaggtaaac atttttaaag acaattttac ctaacccaac 900ctcatttttc aatcattttc agaggtaaac atttttaaag acaatttttac ctaacccaac 900
atcttactat atttaaccag ctctgcgaga gcttcaaaac aatgatgaat tttctgcccc 960atcttactat atttaaccag ctctgcgaga gcttcaaaac aatgatgaat tttctgcccc 960
ttttcattga ccaaataaaa gttcacaaat ttgtaaaacc aatcagcatt aatttcgcac 1020ttttcattga ccaaataaaa gttcacaaat ttgtaaaacc aatcagcatt aatttcgcac 1020
gtagtttact tcgtccgatt ttagatcaag tagacatttt aaccaaacat attgaatcac 1080gtagtttact tcgtccgatt ttagatcaag tagacatttt aaccaaacat attgaatcac 1080
ggttcaatca agatacatgg ttgcgagtat aatatatcaa tccttcaccg cattagaaaa 1140ggttcaatca agatacatgg ttgcgagtat aatatatcaa tccttcaccg cattagaaaa 1140
ccaaattttc tatttaattt agcgtgttct tttaatgaac gcagcgtcag cgacaacaaa 1200ccaaattttc tatttaattt agcgtgttct tttaatgaac gcagcgtcag cgacaacaaa 1200
gaagaaaaac agatctgcgg cgagaaaaaa tacattgatt agagaagaac tgccgcaaaa 1260gaagaaaaac agatctgcgg cgagaaaaaa tacattgatt agagaagaac tgccgcaaaa 1260
gatgtacgat gatgaagatt gacgtgacgc tgcttaattt cagcgattca tttgatgcaa 1320gatgtacgat gatgaagatt gacgtgacgc tgcttaattt cagcgattca tttgatgcaa 1320
ttgcaattca tcggctatca tcggcgactc atccgaaatt gttattttca agctttaatg 1380ttgcaattca tcggctatca tcggcgactc atccgaaatt gttatttttca agctttaatg 1380
tcgttttact tacctactac ttctcatgac acgtcgtttc agtccgctat tgccgctggc 1440tcgttttact tacctactac ttctcatgac acgtcgtttc agtccgctat tgccgctggc 1440
gcagcatcaa ataaaagaac acgctaggat agcttgaaaa gggtacaata actagttata 1500gcagcatcaa ataaaagaac acgctaggat agcttgaaaa gggtacaata actagttata 1500
gaagaacatg agccataaca tttggaaaca aaatgagtta gtttgaattt gaaacatcgc 15601560
gctctatgta aaaaaagcaa aaaagaaaag aaaagagtcc taataattaa aaagagaaaa 16201620
taaaaggaat tttcaatggt ccgactgtta caagtagatt tccattttta ggaatctagc 1680taaaaggaat tttcaatggt ccgactgtta caagtagatt tccattttta ggaatctagc 1680
tataacgatg aagacagagt tatcattttg ttccatcaaa tatatgacga tatttatatt 1740tataacgatg aagacagagt tatcattttg ttccatcaaa tatatgacga tatttatatt 1740
taatttcttc aacaacaaat atctcatttg ttggtgccac tttcacatac ttaggacgac 1800taatttcttc aacaacaaat atctcatttg ttggtgccac tttcacatac ttaggacgac 1800
taataattaa ttaaaaagga tttatgtaat aacgcaccat attaacctgt aacaagaaga 1860taataattaa ttaaaaagga tttatgtaat aacgcaccat attaacctgt aacaagaaga 1860
attgaaagta atacaagttt atatatatag caacacattt atcgtgtacg atactttatt 19201920
ccttttatct attcttgaaa aaaagttacc aattcttgag aagaagaaga aatcagaatc 1980ccttttatct attcttgaaa aaaagttacc aattcttgag aagaagaaga aatcagaatc 1980
aagagaagga gagagaaaga t 2001aagagaagga gagagaaaga t 2001
<210> 75<210> 75
<211> 1597<211> 1597
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 75<400> 75
tacaatatct ctctctctac ttctttactc tttctctctc ttccatcttt tacacagaaa 6060
gtaaaaaaca ttctcacacc ttctctccca agtgcgtgcc acgcagacac cattatttgc 120gtaaaaaaca ttctcacacc ttctctccca agtgcgtgcc acgcagacac cattatttgc 120
catgagtagt tagttgctag ttgctactaa ttaagaaaaa tgaattaagt ttttaaaaca 180180 catgagtagt tagttgctag ttgctactaa ttaagaaaaa
aacgttgtct agttatataa tccatgtcca tatacatcta gatatatgac ttagatacca 240aacgttgtct agttataa tccatgtcca tatacatcta gatatatgac ttagatacca 240
atgtttcgac tcttttaggt ctacacgtac gttgcccaaa cttcatattt gagacatctt 300atgtttcgac tcttttaggt ctacacgtac gttgcccaaa cttcatattt gagacatctt 300
tatttatttg tcaacagaaa tattgaaaca tgcatggatc ttgatattct aaaggtgcct 360tatttatttg tcaacagaaa tattgaaaca tgcatggatc ttgatattct aaaggtgcct 360
gaattaaaat agaacgataa cgttttaaaa cctaattccc aatttgtagt ttatatattt 420gaattaaaat agaacgataa cgttttaaaa cctaattccc aatttgtagt ttatatattt 420
cttgtttgat ccatattatt acaagcctat atatagtgta tataaaactc aattaagctt 480cttgtttgat ccatattatt acaagcctat atatagtgta tataaaactc aattaagctt 480
caaaaagtca gaaaactcat caatagctca agttccacta attaatgccc gaatttaaag 540caaaaagtca gaaaactcat caatagctca agttcacta attaatgccc gaatttaaag 540
ttcatctcta tagtttaaaa tttgttcgta gctagatttt gcatcttgga gtggttagtt 600ttcatctcta tagtttaaaa tttgttcgta gctagatttt gcatcttgga gtggttagtt 600
atgtttatta gacacttgga atgcttttga atgtacaatg tccggaaaaa aaaactaata 660atgtttatta gacacttgga atgcttttga atgtacaatg tccggaaaaa aaaactaata 660
ctgaaaaggg gatttgtcca agtggtggta gataggagga ggcgcgtgag attggggaaa 720ctgaaaaggg gatttgtcca agtggtggta gataggagga ggcgcgtgag attggggaaa 720
cattggtttc ttctgcaatg aatgaaacga aagcagctat catcattttc tttttcttac 780cattggtttc ttctgcaatg aatgaaacga aagcagctat catcattttc tttttcttac 780
ttcacaagcc gcagaaaagc ctctcctacc ttaaaatgga catgtacgtg tcgcttttct 840ttcacaagcc gcagaaaagc ctctcctacc ttaaaatgga catgtacgtg tcgcttttct 840
attgcttcct atctattcga caacattgaa gttttgttct attactttcg tattcaattt 900attgcttcct atctattcga caacattgaa gttttgttct attactttcg tattcaattt 900
ttaatttttg tttgagaata ccaattttgt tttggatcta aactcgttct aatgtaaaaa 960ttaatttttg tttgagaata ccaattttgt tttggatcta aactcgttct aatgtaaaaa 960
ataataatca gccgcagtat atcaatatgt tacattgtat ctggacgtgg gatatctgac 1020ataataatca gccgcagtat atcaatatgt tacattgtat ctggacgtgg gatatctgac 1020
catgtctcca tgaatccatg atgattgaca gatttatagg gataagtatc ctggtttagg 10801080
taatccataa gtatttatga atattatgaa aataaatttt gatcagaaag attaattagt 11401140
taagactatg atgtagggta ttttaaaata ttgctaaaaa ttttgcgcgc tttcagtatg 12001200
tatatttatt ttactagttt tcggttgata tatgatttct tgaagtaatt aaggttatta 12601260
gctaaatgga agagaacgtg aggaatataa cacatatgtg atcacatacg aatatatgta 13201320
ggtttaactt aattggttcg ttgattattc tttataaaag tgaaagtaga tttaaatttg 1380ggtttaactt aattggttcg ttgattattc tttataaaag tgaaagtaga tttaaatttg 1380
ttttccaatc ttctatgttt ggccattgtt tgcaagagtt ttgggaatta aagtcttttt 1440ttttccaatc ttctatgttt ggccattgtt tgcaagagtt ttgggaatta aagtcttttt 1440
aggtgagacc aagaagggta aaatatgagt ttttgggtct agaatttata agttaaatag 15001500
tttattctca tttctaatta ttgttgacca aaaaaaaaaa aaactgtttg gttttgaggt 1560tttattctca tttctaatta ttgttgacca aaaaaaaaaa aaactgtttg gttttgaggt 1560
ttaattactt attgtatatg tacactctca atcataa 1597ttaattactt attgtatatg tacactctca atcataa 1597
<210> 76<210> 76
<211> 1552<211> 1552
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 76<400> 76
tttactttca ttcccacgct ctctttaagc acgtgtgata cagtcaccaa ataattggct 60tttactttca ttccccgct ctctttaagc acgtgtgata cagtcaccaa ataattggct 60
cttgtgatac aattaccaat taaacttgta tatatatgtt tatatgttat ttaaaggata 120120
aatttttatt tcgtattact tactttagag ttttcattat agggttatta tttaatttga 180aattttttatt tcgtattact tactttagag ttttcattat agggttatta tttaatttga 180
acatctatgt gtttctcctc aggtagaatt catgtttgtg tatatatggg tgtctactat 240acatctatgt gtttctcctc aggtagaatt catgtttgtg tatatatggg tgtctactat 240
ttatggaata tttatacaaa acatctaaac atatcattgc ttgaaaattc tatgtttata 300ttatggaata tttatacaaa acatctaaac atatcattgc ttgaaaattc tatgtttata 300
tcataatagc aaattgttta tgtttagtta tatataacac aacaatagta ctctaagaaa 360tcataatagc aaattgttta tgtttagtta tatataacac aacaatagta ctctaagaaa 360
aacagcatca tgcacgtttg atggttgact agtaactaga cacacgaggc acaaaggtta 420aacagcatca tgcacgtttg atggttgact agtaactaga cacacgaggc acaaaggtta 420
tcagttgatt aacatgtgta tgtatatacg gtctttcact tatcacatta caaacttgaa 480tcagttgatt aacatgtgta tgtatatacg gtctttcact tatcacatta caaacttgaa 480
agtaaaattt gtttagcgat attaagaaag tttatatata gagacctcgt actagctgga 540agtaaaattt gtttagcgat attaagaaag tttatatata gagacctcgt actagctgga 540
aatgtatatc taaaatgaaa gtacactccc tcttacatac agtttaatat attttcaaca 600aatgtatatc taaaatgaaa gtacactccc tcttacatac agtttaatat attttcaaca 600
taaaacatat gtacatagta ctagcttatt ttttaaccaa aacttttggg tttgatagtt 660taaaacatat gtacatagta ctagcttatt ttttaaccaa aacttttgggg tttgatagtt 660
taacaactcg gtcaagaatc tcatattttc ttacttcaaa taattgccaa tatattctag 720taacaactcg gtcaagaatc tcatattttc ttacttcaaa taattgccaa tatattctag 720
ttctttttgt ttttaaatta tacctggtaa ttttctaacg agagtctcat aattgcaagt 780ttctttttgt tttttaaatta tacctggtaa ttttctaacg agagtctcat aattgcaagt 780
tgtagtagtc ttgcagctgg atatgaagcg cgtgaattaa aactaaataa tacttacaat 840tgtagtagtc ttgcagctgg atatgaagcg cgtgaattaa aactaaataa tacttacaat 840
aaatgaaagc aacgtatcat atcattttct agttgttttc agaagccgca gaaaagcatc 900aaatgaaagc aacgtatcat atcattttct agttgttttc agaagccgca gaaaagcatc 900
ttctacctta aaatgggttt ccatgtgtcg atgccttatt ggatcatact ttcttacttt 960ttctacctta aaatgggttt ccatgtgtcg atgccttatt ggatcatact ttcttacttt 960
ttaattcagt ttaaaataaa ttgaaaaatg agataaacat ttaagtggtt caattatcat 1020ttaattcagt ttaaaataaa ttgaaaaatg agataaacat ttaagtggtt caattatcat 1020
aaaaaacact aaaactgata aaatagccac ataatatagg tcatatcaaa taaatgagaa 10801080
ataatatttg tatgcctaaa tcaagttatc catgtttgaa ggtgtttgca gtgaggtata 1140ataatatttg tatgcctaaa tcaagttatc catgtttgaa ggtgtttgca gtgaggtata 1140
tatgtttttg tctaataaag attacagtta tgattatgta acataaatta gataatattt 1200tatgtttttg tctaataaag attacagtta tgattatgta acataaatta gataatattt 1200
acagctcgcg atacactaca attgaaacgt ggttaattag tgaaactgaa atttgaagaa 1260acagctcgcg atacactaca attgaaacgt ggttaattag tgaaactgaa atttgaagaa 1260
gaggatgaaa tatgaatgat attcgttaaa atgatctctt agattgtata gtcattgtcc 1320gaggatgaaa tatgaatgat attcgttaaa atgatctctt agattgtata gtcattgtcc 1320
cccattgcca aaagatcaac cacttacata aagtaaaacg catctttagt taaaagctaa 1380cccattgcca aaagatcaac cacttacata aagtaaaacg catctttagt taaaagctaa 1380
ccaaaagagt ggaacatatt tatttttgga ttgcatttgc gaatttcatc aatatatggt 1440ccaaaagagt ggaacatatt tatttttgga ttgcatttgc gaatttcatc aatatatggt 1440
tttgttcaat tgggaaattt aaataactcc actaaaatgt acaaagtaat tttttttcga 1500tttgttcaat tgggaaattt aaataactcc actaaaatgt acaaagtaat tttttttcga 1500
caaagaatct atgaagctaa aaaatctacc cataagtcac ttttagcaga aa 1552caaagaatct atgaagctaa aaaatctacc cataagtcac ttttagcaga aa 1552
<210> 77<210> 77
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana
<400> 77<400> 77
catcaatcta tatgttgcat gttgtaaggt cacaacttgg aaccataaaa gaatggtgga 60catcaatcta tatgttgcat gttgtaaggt cacaacttgg aaccataaaa gaatggtgga 60
ggatagcaag tgcgtagaag ataaggatca ttttacatga taatctggat aagacatgcg 120ggatagcaag tgcgtagaag ataaggatca ttttacatga taatctggat aagacatgcg 120
catatacatc aagtttccat caacaagatt tatagtaccc aaaagaaaga aagaaaaaaa 180catatacatc aagtttccat caacaagatt tatagtaccc aaaagaaaga aagaaaaaaa 180
ctaatattcc atcgatctat agaagttgaa caaaataact aaggtaccaa gtgaaatatg 240ctaatattcc atcgatctat agaagttgaa caaaataact aaggtaccaa gtgaaatatg 240
agtcagcaag caaagttaaa aaaaaagttg tgtgagacat atcacatgag taaattaaca 300agtcagcaag caaagttaaa aaaaaagttg tgtgagacat atcacatgag taaattaaca 300
acaaccatca tcatcatgat gtagatagta taagatgcca tgagaagaag tgaggaaaaa 360360
caaattaacc tgacaagaag catcctaaaa aattaacctg tcaaacaatt accaaccttt 420caaattaacc tgacaagaag catcctaaaa aattaacctg tcaaacaatt accaaccttt 420
aaagtgaaaa aaaaagttga aaacactaag gctttgagag cttaaatgtt cataaacaat 480aaagtgaaaa aaaaagttga aaacactaag gctttgagag cttaaatgtt cataaacaat 480
tttccttttt cttgccaaga tcaatctgca atttttgtgt caagcatgta cgagttattg 540ttttccttttt cttgccaaga tcaatctgca atttttgtgt caagcatgta cgagttattg 540
ttataaataa atctagagtc gttatgtgag ttctactgta ttttatgaaa atcgattaac 600tttaaataa atctagagtc gttatgtgag ttctactgta ttttatgaaa atcgattaac 600
tagtaaaata catcagtctt cttaagaaga gaacctaaac acgaaaccct ctaataaatg 660tagtaaaata catcagtctt cttaagaaga gaacctaaac acgaaaccct ctaataaatg 660
ctagattgca tattcttaca catctatatt agtgtcaaaa acatgattgg actgatttta 720ctagattgca tattcttaca catctatatt agtgtcaaaa acatgattgg actgatttta 720
tagtattgaa caagaacgtg actaaatttt cagaaattgg aaagaaaaca aaaacatgat 780tagtattgaa caagaacgtg actaaatttt cagaaattgg aaagaaaaca aaaacatgat 780
atatttcaat atctaaattt caccatatat atataaaaag acatagtgca tgtgagacgt 840atatttcaat atctaaattt caccatatat atataaaaag acatagtgca tgtgagacgt 840
aaaaaccttt gtaaataaat tttctcttta aatagtaaat agtaccatat cagattaacc 900aaaaaccttt gtaaataaat tttctcttta aatagtaaat agtaccatat cagattaacc 900
atttcagagt gacataattt gtttgtaacc gtatagatcc gttttatgca ttaaaacgat 960atttcagagt gacataattt gtttgtaacc gtatagatcc gttttatgca ttaaaacgat 960
cgtgaagtag ctgtcatacg aaagaacttg tcggcaagag aagcaaagca taagcagaaa 1020cgtgaagtag ctgtcatacg aaagaacttg tcggcaagag aagcaaagca taagcagaaa 1020
aaaacatatc ttttagaagc ctatcatttt cttactttta ttcacaaaca cacacaatat 10801080
acattataag tgttatctac ataatctaaa cgtgtcaata cctgaaaaaa caacaaaact 1140acattataag tgttatctac ataatctaaa cgtgtcaata cctgaaaaaa caacaaaact 1140
ttatttgcac ttctttcatt tcatgaacaa tacataacca gatattagat aggacttgga 1200ttatttgcac ttctttcatt tcatgaacaa tacataacca gatattagat aggacttgga 1200
cttgtgaata tgctctattt aaggcatctt tataggttat atttagaatc tttttcttat 1260cttgtgaata tgctctattt aaggcatctt tataggttat atttagaatc tttttcttat 1260
ttcttttttg agcatattat taaactatgg actagatctg atgaaagaaa gcaatctatt 1320ttcttttttg agcatattat taaactatgg actagatctg atgaaagaaa gcaatctatt 1320
tatatattat ggtgtaaata ttatctttaa aaaatccaat ggaggagagt gaaagagaaa 13801380
agttgaagca ttttgtttgg actatagaga gagagaaaaa aagatcttaa ctctccttag 1440agttgaagca ttttgtttgg actatagaga gagagaaaaa aagatcttaa ctctccttag 1440
aaaagtacta ggaatcaatt tttattttct gcaaaaacaa aagtgtaaaa gaaaattaat 1500aaaagtacta ggaatcaatt tttattttct gcaaaaacaa aagtgtaaaa gaaaattaat 1500
aataatatat attccctgat gaagtaagac taaaataatg taactacaca aaaatacttt 15601560
ttagaattta taatatttta tattaatttt taaaaaagga aagttgataa gattggatat 16201620
aagtttggaa gcatttattt ggccaagaat ggcttagcat ctctgcaaaa ccaacacaaa 1680aagtttggaa gcatttattt ggccaagaat ggcttagcat ctctgcaaaa ccaacacaaa 1680
gctatattct cttaaaaatc agttcaacaa aagaagaacc tgaacacagt tggcccacca 1740gctatattct cttaaaaatc agttcaacaa aagaagaacc tgaacacagt tggcccacca 1740
ccaccactac cacaatctcc tcctccacca ccaccaccta gtcaccggaa accaattcat 1800ccaccactac cacaatctcc tcctccacca ccaccaccta gtcaccgggaa accaattcat 1800
gccctagatt aagaaccaga atccttttga gacaagatct atatatacac tctacacatt 1860gccctagatt aagaaccaga atccttttga gacaagatct atatatacac tctacacatt 1860
tacttataca ctttatctag atatagatgt gtgtgtgtat aaaggttctt tttcattact 1920tacttataca ctttatctag atatagatgt gtgtgtgtat aaaggttctt tttcattact 1920
tgttggttta gtgataaaaa ggaggagagt tttcagttgg gttttggttt cttggtgaga 1980tgttggttta gtgataaaaa ggaggagagt tttcagttgg gttttggttt cttggtgaga 1980
gaagagagaa aaagagagga t 2001gaagagagaa aaagagagga t 2001
<210> 78<210> 78
<211> 1558<211> 1558
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 78<400> 78
acacgtaaag tggacctaag gatatactta taataaattt ttataattta tatttttttc 6060
catcacatca ctacttatat ctattttttt tctttttatt ctaatctttc tcgtaattaa 120catcacatca ctacttatat ctattttttt tctttttatt ctaatctttc tcgtaattaa 120
aatgtaaaat ttaatgtatg agtaacattg tatattaaat tttaaaagta aattaaaatt 180180
atttttatca gcaaaataaa ttttattaaa cttgggtaaa ggggtgccac aacttatgcc 240atttttatca gcaaaataaa ttttattaaa cttgggtaaa ggggtgccac aacttatgcc 240
catagtatca tgtcattacc ttcagtccta gtaccagatt ttcatatatt ctctaaacat 300catagtatca tgtcattacc ttcagtccta gtaccagatt ttcatatatt ctctaaacat 300
attttcattg tggattcaat catggatcaa ccgttagttg atgttttcgt acttttcgtg 360360
ggagacattc ttcgtatcat aaaacaattt cctttattat cttcttaaac tctgttcttt 420ggagacattc ttcgtatcat aaaacaattt cctttattat cttcttaaac tctgttcttt 420
ttttttaaaa aaaaaaatct gttaaataac tatttttagg agatgaatag taattgaatt 480ttttttaaaa aaaaaaatct gttaaataac tatttttagg agatgaatag taattgaatt 480
acatataatt ataagaaaat gattttacaa ataattacct tgagaacaat gattaagaaa 540acatataatt ataagaaaat gattttacaa ataattacct tgagaacaat gattaagaaa 540
tcgataaata aaaaattagg taagatgcag tagaaacatt aattaaatgt caatatatat 600tcgataaata aaaaattagg taagatgcag tagaaacatt aattaaatgt caatatatat 600
atatactaat ttcttaacaa ttgatcaatc tcaataatac tgtcaaatgt gcatatcaat 660atatactaat ttcttaacaa ttgatcaatc tcaataatac tgtcaaatgt gcatatcaat 660
tggcattaga tggttttagt ttagatagtg atattgagtt ttttttttta tgcaagtgat 720tggcattaga tggttttagt ttagatagtg atattgagtt ttttttttta tgcaagtgat 720
attgagtctg tacatatggc ctctaaaaat aacactcaat gattaacaaa attgtatttt 780attgagtctg tacatatggc ctctaaaaat aacactcaat gattaacaaa attgtatttt 780
actggtgaaa tggaagtatt attattaaat ataatttcag ggtattaaat taagaaaatt 840actggtgaaa tggaagtatt attattaaat ataatttcag ggtattaaat taagaaaatt 840
gttgaattaa gtgactccgt tttatgtcat aaagcactaa taatacatac attaattttt 900gttgaattaa gtgactccgt tttatgtcat aaagcactaa taatacatac attaattttt 900
aatgaataaa ttttacgtct ctagtttaat attaattatg tactaatagt gttaggattg 960aatgaataaa ttttacgtct ctagtttaat attaattatg tactaatagt gttaggattg 960
ctatcaagga gagtctaaat atatcattta aggaaataaa agtacaaagt ttttctggta 1020ctatcaagga gagtctaaat atatcattta aggaaataaa agtacaaagt ttttctggta 1020
aaagatagca tttattatgt caaaaattaa tgaaactcgt ctaattaatg cataatttgt 10801080
taagtgattt aaaatcttta atatggtgta tttaatattt attaactact atccttaatt 1140taagtgattt aaaatcttta atatggtgta tttaatattt attaactact atccttaatt 1140
agcaggacac tacttaacaa gaccgtaata gttcaaaatt acgtcataga aagtttaaag 1200agcaggacac tacttaacaa gaccgtaata gttcaaaatt acgtcataga aagtttaaag 1200
aataatggga gaaatcataa attatgttag gattgatgaa aatatgattg attagaacga 1260aataatggga gaaatcataa attatgttag gattgatgaa aatatgattg attagaacga 1260
agcgaaataa aatttcaagt taatcatcat ttggattttt ttaaaatgca atagaatgat 1320agcgaaataa aatttcaagt taatcatcat ttggattttt ttaaaatgca atagaatgat 1320
aaataatgaa atgaatttca tctcatttca tccaacccta ctcataaaat tatagtatat 1380aaataatgaa atgaatttca tctcatttca tccaacccta ctcataaaat tatagtatat 1380
attacttttt acttgtattc aatcgcaatt ctattctttt taaattaaaa actcagacat 1440attacttttt acttgtattc aatcgcaatt ctattcttttt taaattaaaa actcagacat 1440
aattatcatt tctacgttgc attttttaca aacacgtcta cctacttaat tactcttgca 1500aattatcatt tctacgttgc attttttaca aacacgtcta cctacttaat tactcttgca 1500
gctagcttgt tacttttaac ttataagagt atcaacggaa catgattgct taaatgga 1558gctagcttgt tacttttaac ttataagagt atcaacggaa catgattgct taaatgga 1558
<210> 79<210> 79
<211> 1545<211> 1545
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 79<400> 79
acacgtaaag tggacctaat tttaattaag actaaggata tacttataat aattttttta 6060
taatttatat ttgttttcta tcacatcact ggctttatct atttattttt cttttttatt 120taatttatat ttgttttcta tcacatcact ggctttatct atttattttt cttttttatt 120
ctcatcttta tctaaattaa aatgtaaaat tttatgtatg agtaccatta tcaaattttg 180ctcatcttta tctaaattaa aatgtaaaat tttatgtatg agtaccatta tcaaattttg 180
aaagcaaact aaaattattt ttttatcggc aaaataaaat tattttttta tcggcaaaat 240aaagcaaact aaaattattttttttatcggc aaaataaaat tattttttta tcggcaaaat 240
aaaatttatt aaacttgggt ataggggtat cgcaacctat acacatagta taatgtcagt 300aaaattttatt aaacttgggt ataggggtat cgcaacctat acacatagta taatgtcagt 300
gccttcagtc ctactaccaa attttattct attctataaa catattttca ttgtcgattc 360gccttcagtc ctactaccaa attttattct attctataaa catattttca ttgtcgattc 360
aatctcttta attttatcaa attttcaatt gagttttatc ttcctctcat ccacattttt 420aatctcttta attttatcaa attttcaatt gagttttatc ttcctctcat ccacattttt 420
ttgctggggt taaagagact aaattaatgt tattaatttg aagtataaaa attaactaat 480ttgctggggt taaagagact aaattaatgt tattaatttg aagtataaaa attaactaat 480
tcgttaaatt aattcataag aggaaagtgg gattgcattg gagggtagca agaaagccat 540tcgttaaatt aattcataag aggaaagtgg gattgcattg gagggtagca agaaagccat 540
tgaaagaaaa cgcagcagcg atcatttgta taaagtataa actacttcct acgtactata 600tgaaagaaaa cgcagcagcg atcatttgta taaagtataa actacttcct acgtactata 600
tgtatgaagt gccattctaa catttttttt tcttctaaat tttatattgt gttatagtat 660tgtatgaagt gccattctaa catttttttt tcttctaaat tttatattgt gttatagtat 660
gaaaataaaa attactcact agatttggcc tagtgatggg atttgaatag tttgtacaag 720720
atgaaggttt aaactttgtt gttgacatta tacatagaaa aatacaagaa aaaaattatt 780atgaaggttt aaactttgtt gttgacatta tacatagaaa aatacaagaa aaaaattatt 780
atcatcttaa actctgttct ttaaaaaaaa aacagtagtg ttaaataact gtttttaaga 840atcatcttaa actctgttct ttaaaaaaaa aacagtagtg ttaaataact gtttttaaga 840
gatgaatagt aattacaaat aattataaga aaattatttt actaatcatt actttgagaa 900gatgaatagt aattacaaat aattataaga aaattatttt actaatcatt actttgagaa 900
caatgattaa gaaatcaata aataaaaaat ataaagaaat aactatttaa cttgcgtttc 960caatgattaa gaaatcaata aataaaaaat ataaagaaat aactatttaa cttgcgtttc 960
aatttttttt aagattacaa tattatagtc cgtgaataca cattttcctt ttgtgaataa 1020aatttttttt aagattacaa tattatagtc cgtgaataca cattttcctt ttgtgaataa 1020
aggaagtaaa cattggtagg gaaccaagaa gtctaaagca gtttgcttgt ttgccttaaa 1080aggaagtaaa cattggtagg gaaccaagaa gtctaaagca gtttgcttgt ttgccttaaa 1080
tttttcttta gctcgaaggc atgtgaaatg aatatttcat tgtgagtaat tatgagattt 1140tttttcttta gctcgaaggc atgtgaaatg aatatttcat tgtgagtaat tatgagattt 1140
tcttccaatt aaggcaccaa agatgtaaaa aaatgaaata gtttattttt gtttaatcag 1200tcttccaatt aaggcaccaa agatgtaaaa aaatgaaata gtttattttt gtttaatcag 1200
tattagagtt gcttttaatt tgatttttcc tgactgaatg ctaacaactt ttgctaataa 12601260
tagttttcat atgaattggc gttgaaagtt aaatcttcag atttaattca cgcattatta 1320tagttttcat atgaattggc gttgaaagtt aaatcttcag atttaattca cgcattatta 1320
ttattattat tataagaatt ggattagata aaagaatggt taaatttatt attattttgt 1380ttattattat tataagaatt ggattagata aaagaatggt taaattttatt attattttgt 1380
taggcttata cctttacata taatattatt attaatttgc agtaggaaac aatattctat 1440taggcttata cctttacata taatattatt attaatttgc agtaggaaac aatattctat 1440
aataagaatg attattaaaa tatgaaataa gaacttttca aaatctgaaa ttatgcagcc 1500aataagaatg attattaaaa tatgaaataa gaacttttca aaatctgaaa ttatgcagcc 1500
acgctgggcg agtagtatct cgctgagcaa gcagtgcgca ttaca 1545acgctgggcg agtagtatct cgctgagcaa gcagtgcgca ttaca 1545
<210> 80<210> 80
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 80<400> 80
ttaaatttaa attgacgtgc tgaactgaca tttcgatttc aaattgacca caagaaaaag 60ttaaatttaa attgacgtgc tgaactgaca tttcgatttc aaattgacca caagaaaaag 60
agaacgcgta aacattattc atttatttta tttgttcttt atttatttct tctaaagtac 120agaacgcgta aacattattc atttatttta tttgttcttt atttatttct tctaaagtac 120
ttagactaac taataacgag ttaaatattc ctaaaaaaaa ctaacgagtt aaatagctat 180180
atggttgaag tgatgttaag attttagttg tgggatgatt tgttcttgaa taaaaaatac 240atggttgaag tgatgttaag attttagttg tgggatgatt tgttcttgaa taaaaaatac 240
ttaatgttca ttaagtatct tccataaaaa tatctttttc tcctcttgat ttagttattt 300ttaatgttca ttaagtatct tccataaaaa tatctttttc tcctcttgat ttagttattt 300
attaatatta ttgtgtaagt gtttataagt ttgtgattta tcgtaacttt agaatgaatc 360attaatatta ttgtgtaagt gtttataagt ttgtgattta tcgtaacttt agaatgaatc 360
aaagttctat gatcctaaaa atgtttacac ctagacctag ttgttaaaaa ataaactttc 420aaagttctat gatcctaaaa atgtttacac ctagacctag ttgttaaaaa ataaactttc 420
attaagattc cttgtttact tttaaaaatc gacttttaaa ttttttacac atatttttat 480attaagattc cttgtttact tttaaaaatc gacttttaaa ttttttacac atatttttat 480
gtcatttatt ttaatatcat gtaatacaca ttattaatcc caaattatac tctgtaatta 540gtcatttatt ttaatatcat gtaatacaca ttattaatcc caaattatac tctgtaatta 540
attgtaaaaa atatacaata ttatacatct acaattttgt tcgtagggta ttatatgttt 600attgtaaaaa atatacaata ttatacatct acaattttgt tcgtagggta ttatatgttt 600
atttataaga atttaagttt tatataatat aaaaatgaca aaattacatt ttttttgtct 660660
cccagcttat ttccattttt tctaattttt gtctctcggt aatttaattc agtcctctta 720cccagcttat ttccattttt tctaattttt gtctctcggt aatttaattc agtcctctta 720
ttttataaaa tcctataatg ttagttccca agccacaata cgttgatcgt tcatgtgtca 780ttttataaaa tcctataatg ttagttccca agccacaata cgttgatcgt tcatgtgtca 780
tatctttatt ggatgatgac cgacacatat tatgttttta ttggtcaata aaaataacaa 840tatctttatt ggatgatgac cgacacatat tatgttttta ttggtcaata aaaataacaa 840
tgtatttcat cttttatgca gttgacattc aatcacaaca taacatatga cagaatcatc 900tgtatttcat cttttatgca gttgacattc aatcacaaca taacatatga cagaatcatc 900
atctaataag aatgtgacat ctaacagtca acatcatttg ttaacggtca atatctaaat 960atctaataag aatgtgacat ctaacagtca acatcatttg ttaacggtca atatctaaat 960
gtgacattag aagactaata ttgcacgatt ttacaagata ggaggattaa attcgtgaat 1020gtgacattag aagactaata ttgcacgatt ttacaagata ggaggattaa attcgtgaat 1020
taaattaatg ggggaccaaa tttataattt tccctataaa aatatttata atatcaatca 1080taaattaatg ggggaccaaa tttataattt tccctataaa aatattatata atatcaatca 1080
atttttaaaa aatgtttcaa atatatctcc taaattactt attattataa aaattaaaat 1140atttttaaaa aatgtttcaa atatatctcc taaattactt attattataa aaattaaaat 1140
tctcaccata taataatcta taactacatg agaatataaa attttatatt aaatccaaaa 1200tctcaccata taataatcta taactacatg agaatataaa attttatatt aaatccaaaa 1200
atatcggaaa gaataggggt agttgggtaa atgcatcatg taacatacga gctacctacg 1260atatcggaaa gaataggggt agttgggtaa atgcatcatg taacatacga gctacctacg 1260
actatgaggg ttcacctcgt ttaaggttag ttcctgaatc cgaaacagtg agctgaaaat 1320actatgaggg ttcacctcgt ttaaggttag ttcctgaatc cgaaacagtg agctgaaaat 1320
caagcccgct ccccacttca cctttcgaca cgtggcactg ttgtgacata ttctctccaa 13801380
tcatcgttag tcatcaggga ccctatttag ggcttctccc atttttcttg gaaatttcca 1440tcatcgttag tcatcaggga ccctatttag ggcttctccc atttttcttg gaaatttcca 1440
ttaccaaccc ctccctcctc aatctcctta tgttccttaa tttggtcctt ctttctccac 1500ttaccaaccc ctccctcctc aatctcctta tgttccttaa tttggtcctt ctttctccac 1500
cgtctgattc ttcctacttt tcaatcaacc gcgttcccac cacagtagta tccacattac 1560cgtctgattc ttcctacttt tcaatcaacc gcgttcccac cacagtagta tccacattac 1560
cctgaatttt aatttgagca gtgtttactt ggcccggtaa tcaaagcaca ggacacaggt 1620cctgaatttt aatttgagca gtgtttactt ggcccggtaa tcaaagcaca ggacacaggt 1620
gatttatgaa gcaaattaag ctaagagaaa aagacagcta gagagagaga aagagatatt 1680gatttatgaa gcaaattaag ctaagagaaa aagacagcta gagagagaga aagagatatt 1680
tgattttgga gttagcatcc attaccattc ccatttgacc tgataaggat gcttttaatt 1740tgattttgga gttagcatcc attaccattc ccatttgacc tgataaggat gcttttaatt 1740
tgctgggatt cttaataaca aggtagaata caattaataa tactcgtaca tacctcttag 1800tgctgggatt cttaataaca aggtagaata caattaataa tactcgtaca tacctcttag 1800
tatcacactt tagactttac accatataaa atacatacat gttacagtat atgttatata 1860tatcacactt tagactttac accatataaa atacatacat gttacagtat atgttatata 1860
caaggcctac atatatatta tagagattat atatatatat atatatatat atatattcta 19201920
aattttgtga gtggatatta ttactttgag cgtgagaagg ggaagagtag agagagagag 19801980 aattttgtga gtggatatta
agagagatgg gaaggggaag a 2001aggagatgg gaaggggaag a 2001
<210> 81<210> 81
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 81<400> 81
gagataaatg tggttttgta cctagtcaac ttccgcgtat gatatgagac acgattacat 60gagataaatg tggttttgta cctagtcaac ttccgcgtat gatatgagac acgattacat 60
taagcgtgac atgtacgtat tggaaatgta tgtgtccaag aaaataagga aatataacct 120taagcgtgac atgtacgtat tggaaatgta tgtgtccaag aaaataagga aatataacct 120
caaaaatttg taagagaatg gatttcccat atttgttcaa aagctaagct tacagctttg 180caaaaatttg taagagaatg gatttcccat atttgttcaa aagctaagct tacagctttg 180
ccgtgctatt ctgctattgc acagctatgt atatctatat ccaaatgcga tatatagcaa 240ccgtgctatt ctgctattgc acagctatgt atatctatat ccaaatgcga tatatagcaa 240
aatgaaataa aatttagcaa gattaactta agtataataa catgtttttt tacttttata 300aatgaaataa aatttagcaa gattaactta agtataataa catgtttttt tacttttata 300
taattagaaa ttattttgta cattgattaa taattactta taagtacaga taaaatatac 360360
aaaaatatag atttgaaaag tattttaagt aagtactagt ttatttaata aaaatatgtg 420420
agaagatcca taattacatg agaagagtat ttttcactct caagaaaatg aagagacgga 480agaagatcca taattacatg agaagagtat ttttcactct caagaaaatg aagagacgga 480
cttattaaat agataaataa tttttaatat atctatgttg aatgaacgaa tttagaaaca 540cttattaaat agataaataa tttttaatat atctatgttg aatgaacgaa tttagaaaca 540
cttcttgaat ttattttttt ttaaaaaaga tgcgaatttt ccaaattatt tttccctatt 600600
agaagctatt ttctaaacaa tcttttttac aaacaatttt ttctaataat ctcttgtagt 660agaagctatt ttctaaacaa tcttttttac aaacaatttt ttctaataat ctcttgtagt 660
taagaaaata gttccacatc ctagcgtagg gaaaaggtag ctaagtaggt aggtgctaga 720taagaaaata gttccacatc ctagcgtagg gaaaaggtag ctaagtaggt aggtgctaga 720
aattgtaacc ttcaagatca catcttattt ttcattgtac tgatgagtga tgacaacgtg 780aattgtaacc ttcaagatca catcttattt ttcattgtac tgatgagtga tgacaacgtg 780
agtttcaatt ccaaagataa caactaatat tagggatgtt gacaattata tataaatata 840agtttcaatt ccaaagataa caactaatat tagggatgtt gacaattata tataaatata 840
tatagattca attcatatct acgaaaatta cttatgatat atagcaaggt aattattatt 900tatagattca attcatatct acgaaaatta cttatgatat atagcaaggt aattattatt 900
attaataata tcaagagtat gaagccggat aaatatgctt tttttaaaac cggaggatac 960attaataata tcaagagtat gaagccggat aaatatgctt tttttaaaac cggaggatac 960
tatagtaacc ttcatatata gatctacccc attgccaccc taattaataa tgtgctggaa 1020tatagtaacc ttcatatata gatctacccc attgccaccc taattaataa tgtgctggaa 1020
aatatcttac tagtcacttt caaatttcaa ccaaaaatgt aaatatacat tatttctcct 1080aatatcttac tagtcacttt caaatttcaa ccaaaaatgt aaatatacat tatttctcct 1080
attgattgtt ttcacatcaa gtactaccag ctttccattt aattaccact tactggcaat 1140attgattgtt ttcacatcaa gtactaccag ctttccattt aattaccact tactggcaat 1140
gaaaaaaatc tcatctgtta cttttccaat aattctgcta ttttaacaag tgaagaacaa 1200gaaaaaaatc tcatctgtta cttttccaat aattctgcta ttttaacaag tgaagaacaa 1200
tgcttcaagg tgtggcttca ctaatgaagt tatttatact atagtgaata taagccagtg 12601260
ataaagtgac acgtgtggaa tccattttaa ggtatgtgac gacgttatga tactcttgct 1320ataaagtgac acgtgtggaa tccattttaa ggtatgtgac gacgttatga tactcttgct 1320
gtgcctctct gtagacagta gaaaatgaca cagattttca ctgcaaacag aaaattatag 1380gtgcctctct gtagacagta gaaaatgaca cagattttca ctgcaaacag aaaattatag 1380
gtaacggaga gataggttga aaaaacaagg tcacaagaat aaaaaagttt aacgtaggaa 14401440
aaataatatc atttttgtaa gtaatagtat ctatctatat gacagctgtc actacgcgcc 1500aaataatatc atttttgtaa gtaatagtat ctatctatat gacagctgtc actacgcgcc 1500
agttttctcc cactggagca acgagtgttg agtgtctcac acgcgcctat gttgcgtgtg 1560agttttctcc cactggagca acgagtgttg agtgtctcac acgcgcctat gttgcgtgtg 1560
ggggaggtga ttgtcttcca aaaatacgtt aacatggaaa atcatgggaa agagaaagtt 1620ggggaggtga ttgtcttcca aaaatacgtt aacatggaaa atcatgggaa agagaaagtt 1620
acatgaaact agaaagaact ccaaccctaa gctgcactcc atttttttct ggtggagatg 1680acatgaaact agaaagaact ccaaccctaa gctgcactcc atttttttct ggtggagatg 1680
gaaaatcctg aggataaaaa ggaaacttag aaaagagagt acatatacaa tacaagacaa 1740gaaaatcctg aggataaaaa ggaaacttag aaaagagagt acatatacaa tacaagacaa 1740
cttcacacac acaacacttt cctctctctc tctctctctc tctagggttc cgagtttgaa 1800cttcacacac acaacacttt cctctctctc tctctctctc tctagggttc cgagtttgaa 1800
gttgaaagtg ttgaactatc tctagctagc ttttcacaaa tttggttgca cttgcaactg 1860gttgaaagtg ttgaactatc tctagctagc ttttcacaaa tttggttgca cttgcaactg 1860
aggcaggaaa gaggggcacg agaggaggaa gaggaaagag aagaaaaacc aagaaaagtg 1920aggcaggaaa gaggggcacg agaggaggaa gaggaaagag aagaaaaacc aagaaaagtg 1920
gagaaaggga taggtgttgt acagaaatag aaattaaaat tgagtgaaaa ttaaagagaa 1980gagaaaggga taggtgttgt acagaaatag aaattaaaat tgagtgaaaa ttaaagagaa 1980
gaaggagtga tagggagata t 2001gaaggagtga tagggagata t 2001
<210> 82<210> 82
<211> 1643<211> 1643
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 82<400> 82
taaaaatata tataacatgg ttttaaataa taaaacatta aaataaaata ataacgtatc 60taaaaatata tataacatgg ttttaaataa taaaacatta aaataaaata ataacgtatc 60
aaataaaatc ataaaaatat actaataaat aagtcaactt aatattattt attatatatt 120aaataaaatc ataaaaatat actaataaat aagtcaactt aatattattt attatatatt 120
taaatatata tatatatata tatatatata tatatatata atttttttat ttaaaataaa 180180
aataaaaccg taaacaattt aaattaaaaa aacacaggtt aacaaaacaa aaacaagttt 240240
tccaaatgaa aaaaagcaaa aaaatatttt acgactttaa agtcataaaa taaatttttt 300300
ttttaatgaa atcgtaaata attttataac tttgatttaa agtaaaaaaa aattacgact 360ttttaatgaa atcgtaaata attttataac tttgatttaa agtaaaaaaa aattacgact 360
ttaaaatctt aaaaaaaata aaatttaaac tgaagttgta aataatttta cgacttcaat 420ttaaaatctt aaaaaaaata aaatttaaac tgaagttgta aataatttta cgacttcaat 420
taaaaaaaaa taaaaagtca tatcagatgt tacgactttt gagttagaag tcataacatc 480taaaaaaaaa taaaaagtca tatcagatgt tacgactttt gagttagaag tcataacatc 480
tgttataact tatcccattt tggataattt ttcaaaatat acaccttatt ggaaaattgg 540tgttataact tatcccattt tggataattt ttcaaaatat acaccttatt ggaaaattgg 540
gtaaaatttt acccctaatt gataaaaaag tcaacgatat aatttcccat ttagattcca 600gtaaaatttt acccctaatt gataaaaaag tcaacgatat aatttcccat ttagattcca 600
accattaaca gatttttaat tgatgaatag tataaatttt tatagttgct ccttataaat 660accattaaca gatttttaat tgatgaatag tataaattttt tatagttgct ccttataaat 660
taataacttg aaaaaataat gatatttaat ggaatctgat taaaattttg aaaaacaaaa 720taataacttg aaaaaataat gatatttaat ggaatctgat taaaattttg aaaaacaaaa 720
tataagaact ctgtcaacag cttttaaatt agagatttat cttaaaactc aataaaatta 780tataagaact ctgtcaacag cttttaaatt agagatttat cttaaaactc aataaaatta 780
taatatatgg atcgatctaa attagtaaat tctgaatagt actaatgtaa ccttaatact 840taatatatgg atcgatctaa attagtaaat tctgaatagt actaatgtaa ccttaatact 840
attattatcc atgcctatct gaaagactaa attcccgttt tgcatgctag aaaatgaaag 900attattatcc atgcctatct gaaagactaa attcccgttt tgcatgctag aaaatgaaag 900
ccagtgataa agtgacacgt gggggtccag tttaaggtat ctgacgacgt tcttgcagtg 960ccagtgataa agtgacacgt gggggtccag tttaaggtat ctgacgacgt tcttgcagtg 960
ctctactaac gtgaacacag tggaaaaaaa tgacagaatt ttcttaatat catccacagt 1020ctctactaac gtgaacacag tggaaaaaaa tgacagaatt ttcttaatat catccacagt 1020
taaagacagc tgtctccacg cgcccgtgta ttagaggcgt cccacaagcc aataggttat 1080aataggttat 1080
aatgagcgtg tttcatacgc gctataagtg agaacgggaa aatatttttt gccaaaaata 1140aatgagcgtg tttcatacgc gctataagtg agaacgggaa aatatttttt gccaaaaata 1140
ccttaaccca gtaaagcatg ataaaaagaa acttgtatga aacaggaaac tcggaccaac 1200ccttaaccca gtaaagcatg ataaaaagaa acttgtatga aacaggaaac tcggaccaac 1200
cctagcaaga tgcactccat ttaatggtgg agattggaac aaagagaaaa atagaaaaag 1260cctagcaaga tgcactccat ttaatggtgg agattggaac aaagagaaaa atagaaaaag 1260
aaaaaaagtg aacatctgag gataaaaaag ccaagtttga tagacacaac tgtgttgttg 13201320
ttgttgttga tgatgtttgc tttgttctct ttctctctcc tcaaattttt tcctctctct 1380ttgttgttga tgatgtttgc tttgttctct ttctctctcc tcaaattttt tcctctctct 1380
ctagggttcc aagagtgtct tgaactactc cagaaccctc tcttgttttt cacaaatttg 1440ctagggttcc aagagtgtct tgaactactc cagaaccctc tcttgttttt cacaaatttg 1440
ggtttagtag agtactgacc cagaaaagaa ggttcaacag gtacctaaga gaggggatag 1500ggtttagtag agtactgacc cagaaaagaa ggttcaacag gtacctaaga gaggggatag 1500
aaagaaaaaa atagaaactg tacgtataaa agaagaaaga aacaaagata taaggaaaaa 15601560
gggaaaatat tttgaataag gaagatataa ggcaatatat aaaaatatta gtatttgata 1620gggaaaatat tttgaataag gaagatataa ggcaatatat aaaaatatta gtatttgata 1620
ataattaggt gtagaaatat tat 1643ataattaggt gtagaaatat tat 1643
<210> 83<210> 83
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 83<400> 83
agctgtttca cacaaactat taattactgg ccaggttaat tactcaagaa gtagtaatac 60agctgtttca cacaaactat taattactgg ccaggttaat tactcaagaa gtagtaatac 60
tatcagtatt gatattaggt tatattttcc tattacaagt ttatattgtc ctgtacaact 120tatcagtatt gatattaggt tatattttcc tattacaagt ttatattgtc ctgtacaact 120
ttgtagtttt actaagtttc taaactaagt aaataattac aatataaaaa aatctttaca 180ttgtagtttt actaagtttc taaactaagt aaataattac aatataaaaa aatctttaca 180
ttactccgtc tatcctataa caattattgt cttagaccat tttttataca aataaaaaaa 240ttactccgtc tatcctataa caattattgt cttagaccat tttttataca aataaaaaaa 240
ataaaaaagt ttaattactt atttacttct tatacttttt aaatttatct tttttagttt 300ataaaaaagt ttaattactt atttacttct tatacttttt aaatttatct tttttagttt 300
ctataattag taagtatatt ttttaatcca caaaatatat attttaattt ctaaaatgtt 360360
cctgcagtta actttttttt aactaacaaa gttaaaaaaa ttaacgagat aaataccttt 420cctgcagtta actttttttt aactaacaaa gttaaaaaaa ttaacgagat aaataccttt 420
taggaattaa aatataaatt tgaaggatta aaaaatttat ttattaaatt ttagagacta 480taggaattaa aatataaatt tgaaggatta aaaaatttat ttattaaatt ttagagacta 480
aaaaattcat ttattaatta taagaactaa aaggaataag tttaaaaatt ataagaatta 540aaaaattcat ttattaatta taagaactaa aaggaataag tttaaaaatt ataagaatta 540
aatgggtaat taaaccaaaa aataataaat agataaaata aaataatatt tttataaaat 600600
taatattata taattattaa tttattttta gattttgtag ttgatcgtta atatagccaa 660taatattata taattattaa tttattttta gattttgtag ttgatcgtta atatagccaa 660
cgttcctgct gcaagaagct accccggata ttccgtcccc atctaccaaa acaatcggaa 720cgttcctgct gcaagaagct accccggata ttccgtcccc atctaccaaa acaatcggaa 720
atgtttcaga ttttatagtt gatctcttaa tatataagag atataggtgg aaaattcatt 780atgtttcaga ttttatagtt gatctcttaa tatataagag atataggtgg aaaattcatt 780
aatgttatat taaaaactaa aattacaatt atattaggat aaaaatattt tcttataacg 840aatgttatat taaaaactaa aattacaatt atattaggat aaaaatattt tcttataacg 840
gatgaagtat tgattaatta gaaatttttt atgtatgatg attttgttaa tttttatgat 900900
aattatttta aaatcattta taacagattt ttaattaatc cgtagtataa attttttatg 960aattatttta aaatcattta taacagattt ttaattaatc cgtagtataa attttttatg 960
ctatttgtgt atcgaaatta aactatgtta aattactcct tataatttaa taacttgata 1020ctatttgtgt atcgaaatta aactatgtta aattactcct tataatttaa taacttgata 1020
gaaaaataat gatatttaat gaacagggat ctgattaatt ttttttaaaa aaatataaga 10801080
actctgtcaa ctgcttttaa attagatatt tatcttaaaa ctcaataaaa ttatatgtaa 1140actctgtcaa ctgcttttaa attagatatt tatcttaaaa ctcaataaaa ttatatgtaa 1140
tggatagatc taaattctaa atattaatgt aaccttaata ctattattat ccatgcctat 1200tggatagatc taaattctaa atattaatgt aaccttaata ctattattat ccatgcctat 1200
ctgaaagact aaatttccgt tttgcatgct agaaaatgga agccagtgat aatctgacac 1260ctgaaagact aaatttccgt tttgcatgct agaaaatgga agccagtgat aatctgacac 1260
gtggggtcca gtttaaggta tctgacgacg ttcttgcagt gctctactta cgtgaacaca 1320gtggggtcca gtttaaggta tctgacgacg ttcttgcagt gctctactta cgtgaacaca 1320
gtaaaaaaaa tgacagattt tttcttaaaa gcatccacag ttaaagacag ctgtctccac 13801380
gcgcccgtgt aaaacacgcg accccgcatc aaagagggtt acactccgag tgtgtttctc 14401440
acgctctata agtgcgattg ggtaaatatt tgtttgccaa aaatacctta accgagtaaa 1500acgctctata agtgcgattg ggtaaatatt tgtttgccaa aaatacctta accgagtaaa 1500
gcatgataaa aaaaaacttg tatgaaacag gaaactcaga ccaaccctag taagatgcac 1560gcatgataaa aaaaaacttg tatgaaacag gaaactcaga ccaaccctag taagatgcac 1560
aacattttat ggtggagatt ggaacaaaga gataaaaaga aagagaaaaa aagtgaacat 16201620
ctgaggataa aaaagccaag ttagataaca ggagagatga acacaactgt gttgtagttg 1680ctgaggataa aaaagccaag ttagataaca ggagagatga acacaactgt gttgtagttg 1680
ttgttgttga tgtttgcttt gttctctttc tctctctctc tagggtttca agagtgtttt 1740ttgttgttga tgtttgcttt gttctctttc tctctctctc tagggtttca agagtgtttt 1740
gaactactcc agaaccctct cttgtttttc acaaatttgg gttcagtaga gtactgaccc 1800gaactactcc agaaccctct cttgtttttc acaaatttgg gttcagtaga gtactgaccc 1800
agaaaagaag attcaacagg tacctaagag aaggaaagag ggggatagaa agaaagaaaa 1860agaaaagaag attcaacagg tacctaagag aaggaaagag ggggatagaa agaaagaaaa 1860
agaaatagaa actgcacgta taaaagaaga aagaaagaat caaagaaaat aggaaaaaag 1920agaaatagaa actgcacgta taaaagaaga aagaaagaat caaagaaaat aggaaaaaag 1920
ggcaaatatt ttgtttgaat aagatataag gcaatagtaa tattagtatt gttgataata 1980ggcaaatatt ttgtttgaat aagatataag gcaatagtaa tattagtatt gttgataata 1980
attaggtaga aaaaatatta t 2001attaggtaga aaaaatatta t 2001
<210> 84<210> 84
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 84<400> 84
aataagatga aagttatttt tacgctaaat aagatgaaag aatcttattt ttatgttaaa 6060 aataagatga aagttatttt tacgctaaat aagatgaaag
taagatgaat attttatttt aaagctaaat aagatgaaag tttaagttaa atgagatgaa 120taagatgaat attttatttt aaagctaaat aagatgaaag tttaagttaa atgagatgaa 120
catttaaatt ttaatatata cgacataatc atggcaatac acacaaaaaa aatatttaag 180catttaaatt ttaatatata cgacataatc atggcaatac acacaaaaaa aatatttaag 180
ctaaataaga ggtaattttt atttgtaaga atgaataact aaatcttgta caaaaaaaaa 240ctaaataaga ggtaattttt atttgtaaga atgaataact aaatcttgta caaaaaaaaa 240
aaactaaata aggtgagggt atttttgtaa acaaccaaca acttattctc aaaaaaaata 300aaactaaata aggtgagggt atttttgtaa acaaccaaca acttattctc aaaaaaaata 300
aataataaat attaatttaa atatgacaaa ccaaacaaac aactaatccc tatacaacat 360aataataaat attaatttaa atatgacaaa ccaaacaaac aactaatccc tatacaacat 360
attccagcat aactagtatt caaatcaaac aacccctcta tgaaatccat aagacaagaa 420attccagcat aactagtatt caaatcaaac aacccctcta tgaaatccat aagacaagaa 420
ataaaacaaa attgcaaaac aatcaataga ttaaggtcta ataagacata agtagataag 480ataaaacaaa attgcaaaac aatcaataga ttaaggtcta ataagacata agtagataag 480
tgaatcgttg aagaagacat tgaattttga tatagtacaa ctccatacct ttttatggtt 540tgaatcgttg aagaagacat tgaattttga tatagtacaa ctccatacct ttttatggtt 540
attcatgtta atcttagggt attcgatata actttacaag taaaatctgt aaaagatata 600attcatgtta atcttagggt attcgatata actttacaag taaaatctgt aaaagatata 600
cattattctt atctttattt agaaagatta tttttgattg actctcaaat caaaaatagt 660cattattctt atctttattt agaaagatta tttttgattg actctcaaat caaaaatagt 660
gtaatcgagt atgatttttc aaaaaaacaa aaaaacatca atataacaat atgagcgaaa 720gtaatcgagt atgatttttc aaaaaaacaa aaaaacatca atataacaat atgagcgaaa 720
taaactaagt aataggcatt gtaaaaaagg aagaaaaaga tgcttatgac ttatctccgt 780taaactaagt aataggcatt gtaaaaaagg aagaaaaaga tgcttatgac ttatctccgt 780
tactgaattg gttttcctct tctccctaat aagcaaagag ccaaagacta atattgaaat 840tactgaattg gttttcctct tctccctaat aagcaaagag ccaaagacta atattgaaat 840
gagttatttc ctcatatgat attcgacatt aatcctttca tcatcaatta gttttttcga 900gagttatttc ctcatatgat attcgacatt aatcctttca tcatcaatta gttttttcga 900
atgaagttag actcaaaatc ccttgtgaaa ctttcaaaaa attaggttta tgagttgagt 960atgaagttag actcaaaatc ccttgtgaaa ctttcaaaaa attaggttta tgagttgagt 960
tggtttcaga atgctaaaaa taaaatgcat aatacatata ttgtatccta aatttggctt 1020tggtttcaga atgctaaaaa taaaatgcat aatacatata ttgtatccta aatttggctt 1020
caaattttaa ctttgacctc taactttcat aatgcacaaa caaacacttt gactatctaa 1080caaattttaa ctttgacctc taactttcat aatgcacaaa caaacacttt gactatctaa 1080
ctttcaaata aataaacaca tgagtcttac atgacaaaaa tatacatacg acaccacgta 1140ctttcaaata aataaacaca tgagtcttac atgacaaaaa tatacatacg acaccacgta 1140
ggacgaaaaa tgacatgtaa gacatgtgtg tctatttgtt caattttata caagtttaac 1200ggacgaaaaa tgacatgtaa gacatgtgtg tctatttgtt caattttata caagtttaac 1200
tgtttaagtg tctacttgtg cacacccaaa gtggaagggc ataaatgtta tttgaagtca 1260tgtttaagtgtctacttgtg cacacccaaa gtggaagggc
agttaaagcc atacaaaata aaaattgaat tatgtcttat ttaagatgga taagtagttt 13201320
agctaaataa atttttgtta gtaagttttc catttctata aatttacagt gaagaagtga 1380agctaaataa atttttgtta gtaagttttc catttctata aatttacagt gaagaagtga 1380
gttatttgct tacgcatgat atgtacgtaa tatccactaa tacaccgacg cgtgtccagc 1440gttatttgct tacgcatgat atgtacgtaa tatccactaa tacaccgacg cgtgtccagc 1440
caatttagta cacgcctttg ttctttcact gatggaccgc acaaatgaga agcaaaagct 15001500
ccaacaaact aaccaagcgc gtgtatccca gacaacgaat agttgttgtg cgtgtactcc 1560ccaacaaact aaccaagcgc gtgtatccca gacaacgaat agttgttgtg cgtgtactcc 1560
acgcgcatca acagaagcgt aagactagtc cctataatgc attggctaaa tacatgaaac 1620acgcgcatca acagaagcgt aagactagtc cctataatgc attggctaaa tacatgaaac 1620
ttgaaaaagt agtggaaata agaaccaacc ctaaagctct aaggtatcta aatttggagt 16801680
acctaagcaa atcctaaagt taaaacaatg aatccctaaa gaagatagga agaaatgcca 1740acctaagcaa atcctaaagt taaaacaatg aatccctaaa gaagatagga agaaatgcca 1740
tagataaaaa caacccatgt tcactttttc tctctctaaa cattgaaatt caaccaaaac 1800tagataaaaa caacccatgt tcactttttc tctctctaaa cattgaaatt caaccaaaac 1800
aaaaaacaaa agttgataag aatcctttct ttctttcttt gtgtgtgtgt gtgtctagct 18601860
agggtttgca tttctttcac aattttggtt gtttcagtag gagagaaaag aggatctaag 1920agggtttgca tttctttcac aattttggtt gtttcagtag gagagaaaag aggatctaag 1920
agttagccaa gagaagaaat tagtgagaaa ataaagtaga aaaagatcat cagaggaagg 1980agttagccaa gagaagaaat tagtgagaaa ataaagtaga aaaagatcat cagaggaagg 1980
agggatgggt agaggaagag t 2001agggatgggt aggaagag t 2001
<210> 85<210> 85
<211> 1817<211> 1817
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 85<400> 85
ttacaccccc actaaaaaac ccaaaagtta aaacaaagag catctaacta ttaatatcac 60ttacaccccc actaaaaaac ccaaaagtta aaacaaagag catctaacta ttaatatcac 60
gttagaaacg tgcgatcatg tcatttaaaa gtttatatcg atagagatag tacatttttg 120gttagaaacg tgcgatcatg tcatttaaaa gtttatatcg atagagatag tacatttttg 120
ttatttaatt atagggggaa aaaaacaaat atatctttga attatcatta ataatatgca 180ttatttaatt atagggggaa aaaaacaaat atatctttga attatcatta ataatatgca 180
gatatcttcc gtcatacttt tgggacgata ttggtgtccc caccgtccaa aaactagagc 240gatatcttcc gtcatacttt tgggacgata ttggtgtccc caccgtccaa aaactagagc 240
atatatatcc tttactctaa taagactgaa cagagacacg tgacacaatc atattcattg 300atatatatcc tttactctaa taagactgaa cagagacacg tgacacaatc atattcattg 300
atcatatatt caatatgaaa atgacaagtc ggtggataag attatgacaa ttgtatgtct 360atcatatatt caatatgaaa atgacaagtc ggtggataag
gttagtttaa agggtatata tgttctattt ctgggtggca gggcaccaat atgtcaaaag 420gttagtttaa agggtatata tgttctattt ctgggtggca gggcaccaat atgtcaaaag 420
tatgacgaaa agtatttgct tacgacaaaa acgatacttg ggggttatat ttgtcttttt 480tacgacaaaa acgatacttg ggggttatat ttgtcttttt 480
tcccttaatg gtatcctcaa caattgtcaa gctaataaag cgctacttct aattattcaa 540tcccttaatg gtatcctcaa caattgtcaa gctaataaag cgctacttct aattattcaa 540
atgatcgagt tattttatgt atgttaatat tgcaagcgac ttaatatctc caaacattgt 600atgatcgagt tattttatgt atgttaatat tgcaagcgac ttaatatctc caaacattgt 600
tcgaactcag cacgtacaat tatcaaacca aagagcaaag taggtctcga caaaacgaag 660tcgaactcag cacgtacaat tatcaaacca aagagcaaag taggtctcga caaaacgaag 660
agtatcataa tacctcgttc gttattcttt cctaaaatat aatttttatg ttgaaagtaa 720agtatcataa tacctcgttc gttattcttt cctaaaatat aatttttatg ttgaaagtaa 720
aaaaaattag cataaaaatt aatctattac gactgacgcg ttgttcaaag tcgagagaat 780aaaaaattag cataaaaatt aatctattac gactgacgcg ttgttcaaag tcgagagaat 780
aatttaaagt ggtaggaaat caaaattgat ttgggtattt atttaactca tattataata 840aatttaaagt ggtaggaaat caaaattgat ttgggtattt
ggcttttttt gttttaataa ttcactagga atatattctc tttttcaaga taaattaggt 900ggcttttttt gttttaataa ttcactagga atatattctc ttttttcaaga taaattaggt 900
tttgcaatgc tattatatat aaatagaaac attactagca aattttttga gtgttagaag 960tttgcaatgc tattatatat aaatagaaac attactagca aattttttga gtgttagaag 960
tagtagaaaa ttatttattt aagtaaatgt atagaatttt gaatgatgga gaaatgttga 10201020
aagattatta aactgtgaaa taaaaggatt gtgttggctt attggacggt ttttaattaa 1080aagattatta aactgtgaaa taaaaggatt gtgttggctt attggacggt ttttaattaa 1080
tgaaggaata ttggacggtt gctgattgat gaagacagaa aataatttga acgaaaatga 1140tgaaggaata ttggacggtt gctgattgat gaagacagaa aataatttga acgaaaatga 1140
tgaatattgt gaaaatatct aattatgtca ttttaaggga aaaattaatt tcacttcaaa 12001200
tataattaga gtattattag aattttcttt ttctttctaa ataacacaac aatttccttt 12601260
tgtcaaatca accaagttat tagcatccta tggatcacac ctaacaaatg tacataactt 1320tagcatccta tggatcacac ctaacaaatg tacataactt 1320
cttctattct gatttttatg tctcattttt ctttttagtt attaaaaaaa atatattcag 1380cttctattct gatttttatg tctcattttt ctttttagtt attaaaaaaa atatattcag 1380
ttttatttta tttttaaaat tctcatttca cactttgtaa ttattaatta tttattttaa 1440ttttatttta tttttaaaat tctcatttca cactttgtaa ttattaatta tttttttaa 1440
ttcattatca aattatatcc tataaagtag aactagtgta aaaacaaatt atctttattt 1500ttcattatca aattatatcc tataaagtag aactagtgta aaaacaaatt atctttattt 1500
ttaatcgagt caactcgtcc ttcataccca aaatgtatcc cacactcact ctattaacat 1560ttaatcgagt caactcgtcc ttcataccca aaatgtatcc cacactcact ctattaacat 1560
acagtgagta gtacatgata agtttgttaa ataaatttta taccatcagt acatgcaatt 1620acagtgagta gtacatgata agtttgttaa ataaatttta taccatcagt acatgcaatt 1620
ttatgtcaat aaattacaaa tatagatatt tgtgtagtgc acccttcttt tatagtaata 1680ttatgtcaat aaattacaaa tatagatatt tgtgtagtgc acccttcttt tatagtaata 1680
gatttttaga gttagctagt aagtgtataa tatcccttga tttaataaca attattcact 1740gatttttaga gttagctagt aagtgtataa tatcccttga tttaataaca attattcact 1740
atattatatt gagatgttta tcaatatttt tttactttat aaaattaata aataatttta 1800atattatatt gagatgttta tcaatatttt tttactttat aaaattaata aataatttta 1800
tattaagttt ttaattt 1817tattaagttt ttaattt 1817
<210> 86<210> 86
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 86<400> 86
ttcaagaatt tatgttctta catatttatc tatctatcta tctatctatc tatctatcta 60ttcaagaatt tatgttctta catatttatc tatctatcta tctatctatc tatctatcta 60
tctatctatc tatatatata tatatatata tatatgaagt ctcccactta tcggtaagtg 120tctatctatc tatatatata tatatatata tatatgaagt ctcccactta tcggtaagtg 120
taatttcttt tatttttttt aatctattaa caaattttta aatttttccc tgagccataa 180taatttcttt tatttttttt aatctattaa caaatttttta aatttttccc tgagccataa 180
caattgtata atttaaatat gttctttttc ttacgaaatg tcataacaat tattctcttc 240caattgtata atttaaatat gttctttttc ttacgaaatg tcataacaat tattctcttc 240
tttattttta ttttaatatt gattaaagaa ataataattt attattttct caataattca 300tttattttta ttttaatatt gattaaagaa ataataattt attattttct caataattca 300
tttattagaa attcgtgagt tatgtgataa tgatgaataa tgaaatttat gtcaaaatat 360tttattagaa attcgtgagt tatgtgataa tgatgaataa tgaaatttat gtcaaaatat 360
tattaatatt ttgtataatt attttttcta taatttttag tgtatgaata ttaaaatatt 420420
aataaaggat tatttgcaag ttaataagaa aaagacagct cgtaagggaa gcatcgacac 480aataaaggat tatttgcaag ttaataagaa aaagacagct cgtaagggaa gcatcgacac 480
gttggtaatt aaacactggc gattgtacta ttacgttgat gttcgtgtcc aaaaggtaat 540gttggtaatt aaacactggc gattgtacta ttacgttgat gttcgtgtcc aaaaggtaat 540
acgatgtatc aatgtgaaac attaatttac ccaaaaccac aaaaaggacc tacacttatt 600acgatgtatc aatgtgaaac attaatttac ccaaaaccac aaaaaggacc tacacttatt 600
acatataggg taactccatg tacacctata tatatacata taataataaa ataaataata 660acatataggg taactccatg tacacctata tatatacata taataataaa ataaataata 660
tacattcata aataattgca tatatatgta gagacacact ttttaaggtg tataaaaata 720tacattcata aataattgca tatatatgta gagacacact ttttaaggtg tataaaaata 720
taacttttta gagttcagtt ctcaggtgaa atttattagt atctgctcta tcattattaa 780taacttttta gagttcagtt ctcaggtgaa atttattagt atctgctcta tcattattaa 780
taggtctatg tttgagaact atcaccaagt tgattgggct attttagaag ggtagaggtt 840taggtctatg tttgagaact atcaccaagt tgattgggct attttagaag ggtagaggtt 840
tgacacaaaa gttaatttag ataatatttc taattgatga atataagaaa tatgttttta 900tgacacaaaa gttaatttag ataatatttc taattgatga atataagaaa tatgttttta 900
ttaatcgtac agatacttat agttttactt aattttgcta ttagattgat ttgtacaatt 960ttaatcgtac agatacttat agttttactt aattttgcta ttagattgat ttgtacaatt 960
cgtcttataa gtataaaatt taaaatttgt ataattttat ttttgattat ataaatcaag 1020cgtcttataa gtataaaatt taaaatttgt ataattttat ttttgattat ataaatcaag 1020
aattttatgt atgtttgtcc taactatttg tatataattt ataaaaaaat tgataataaa 10801080
ttgtcttgtt tgtatactga gaaacgaaat atacaaacaa atttctgaaa aaattctgac 1140ttgtcttgtt tgtatactga gaaacgaaat atacaaacaa atttctgaaa aaattctgac 1140
cgtataaata cagaatttat atatatttaa cgtatttata tattcgcaag tgaaacttat 12001200
aagcagacat aaatatgcat accaacataa atatacaaac ctcaatctta atagcaaata 1260aagcagacat aaatatgcat accaacataa atatacaaac ctcaatctta atagcaaata 1260
aatataaata taaaacacaa ttatcgaaac tataagtcta aaatcttaat atatctattt 13201320
tatttgctat tagtaagatc atgaggggga ggcagatgtg agttatgagg attcactagc 1380tatttgctat tagtaagatc atgaggggga ggcagatgtg agttatgagg attcactagc 1380
tttgactaaa ttgttaaata gttaataagt atacgtaaca aatttgtgta cttagtaggc 1440tttgactaaa ttgttaaata gttaataagt atacgtaaca aatttgtgta cttagtaggc 1440
gtttaattat agaacatttt tttaagaaaa taaaaatttc tttatttaag tttttcaaaa 15001500
aaaaaatcat ctcttaaaat ttgtaaaaga attcatattt gacgtgaaaa gattattacg 1560aaaaaatcat ctcttaaaat ttgtaaaaga attcatattt gacgtgaaaa gattattacg 1560
tcatatcagg gaattaaaga ataaccagtt taaattatat tattgtttat ttattgacta 1620tcatatcagg gaattaaaga ataaccagtt taaattatat tattgtttat ttattgacta 1620
gcggatattt atttaattat attctcagta ttattttata tgacatcatt tttttagttg 1680gcggatattt atttaattat attctcagta ttattttata tgacatcatt tttttagttg 1680
atctcaaaaa aatgttacct tacttcacac aaatattcaa gatttatatt aaactacaag 1740atctcaaaaa aatgttacct tacttcacac aaatattcaa gatttatatt aaactacaag 1740
tttccaaaaa ataaaaataa ttcttaaaaa taaaaaatgt gtcacataaa atgaaacata 1800tttccaaaaa ataaaaataa ttcttaaaaa taaaaaatgt gtcacataaa atgaaacata 1800
tatatttaaa catttatatg tgacttatca atttgagttg ggttatatga aagtgacaaa 1860tatatttaaa catttatg tgacttatca atttgagttg ggttatatga aagtgacaaa 1860
cgattagata gggcataaca gtgcttctct ctctttccat taaatttggt agtccacata 1920cgattagata gggcataaca gtgcttctct ctctttccat taaatttggt agtccacata 1920
cagagagagt agaaaaagtg tgttaaccta gagtggaata atagtgtttt tcttgttaga 1980cagagagagt agaaaaagtg tgttaaccta gagtggaata atagtgtttt tcttgttaga 1980
gacaagaaaa gagagaaaaa t 2001gacaagaaaa gagagaaaaa t 2001
<210> 87<210> 87
<211> 1882<211> 1882
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 87<400> 87
gttatggttt tggttctttt ttctgtcctt ttgttcttag ggtaataaat aaatagcttt 60gttatggttt tggttcttttt ttctgtcctt ttgttcttag ggtaataaat aaatagcttt 60
gttgggccat ggggtttcct aatattacaa cattgtatct atttttctta tatctgacgt 120gttgggccat ggggtttcct aatattacaa cattgtatct atttttctta tatctgacgt 120
ataaggtata ataatttcag gataaatttt atcgtgtgtt tagttgaaag cttaggtagt 180ataaggtata ataatttcag gataaatttt atcgtgtgtt tagttgaaag cttaggtagt
tattcttaga ttatttctcc taccccattt atattttaat aacggaatat gttatctcat 240tattcttaga ttatttctcc taccccattt atattttaat aacggaatat gttatctcat 240
atgtatagca aataaaataa taacttattt tgaagtaatt aattaattct gaaataattt 300atgtatagca aataaaataa taacttattt tgaagtaatt aattaattct gaaataattt 300
attcacgatc aaatgatcct tattaatatt actttagacc cttttaaata ttgcattttt 360360
ggtaattctg caaactgctt ttgttatttc ttctgcctgt gtcccttgtc tctctataat 420ggtaattctg caaactgctt ttgttatttc ttctgcctgt gtcccttgtc tctctataat 420
taatatataa gtaaaatgtg ttttgatgtt tagggccaaa aaaagaagac aagtcaatac 480taatatataa gtaaaatgtg ttttgatgtt tagggccaaa aaaagaagac aagtcaatac 480
tattaaccat tattattttt ggtttctcac caactaacct tttaatatca agtttttgcc 540tattaaccat tattattttt ggtttctcac caactaacct tttaatatca agtttttgcc 540
cctattttgg ggtggtattt aatttgtatc aaattacaaa ataaataaaa ggagacataa 600cctattttgg ggtggtattt aatttgtatc aaattacaaa ataaataaaa ggagacataa 600
gtttagaatt ttttttaggt ataagttgtg tagtacctaa tttggaagac ataagttaaa 660660
agaattttga agttagattg atttggaatc aaaattaaaa ttttatttaa ataggtaatt 720agaattttga agttagattg atttggaatc aaaattaaaa ttttttttaa ataggtaatt 720
agattataaa aaataatatt tttattggaa aacaacataa tttgttgaaa actattaaat 780agattataaa aaataatatt tttattggaa aacaacataa tttgttgaaa actattaaat 780
attatgaaaa ttttaattat atatttttat acaatttttt aaatgagtaa atcacgattc 840attatgaaaa ttttaattat atatttttat acaatttttt aaatgagtaa atcacgattc 840
gtaaataaag tatcagaaac gtttgtaatt acattttatt aaaaagtttc caattctcat 900gtaaataaag tatcagaaac gtttgtaatt acattttatt aaaaagtttc caattctcat 900
tattttataa actactaaaa ataaaagttt ttcccacatt tccattttaa tggaaattgt 960tattttataa actactaaaa ataaaagttt ttcccacatt tccattttaa tggaaattgt 960
aagacataat attaaaggtt gtaggtattt gtatccctta ctgggattgg ggagtgtttg 1020aagacataat attaaaggtt gtaggtattt gtatccctta ctgggattgg ggagtgtttg 1020
aaaagacctt tatatggaga tacattatta gccccttata ttggaaatat catatctata 1080aaaagacctt tatatggaga tacattatta gccccttata ttggaaatat catatctata 1080
aaattcaaaa gttaattcat gacgaaaaaa aatatctaaa ttatattaaa gagatcacat 1140aaattcaaaa gttaattcat gacgaaaaaa aatatctaaa ttatattaaa gagatcacat 1140
attttttcta gctatgactg gacatatagt gcgtggataa ttttagtatg aagatctaac 1200attttttcta gctatgactg gacatatagt gcgtggataa ttttagtatg aagatctaac 1200
atcaaaaagc aagaatggga tgaatcgtgt attaatatca tgtaaggagc gaactcataa 1260atcaaaaagc aagaatggga tgaatcgtgt attaatatca tgtaaggagc gaactcataa 1260
gaaaaaaatt gttcagatca tattaaaata tataccaatt cttaaaccat cgagacggag 1320gaaaaaaatt gttcagatca tattaaaata tataccaatt cttaaaccat cgagacggag 1320
acttttcaca aattacatac atactagaca ttataaatat ctttttacat catcaatata 1380acttttcaca aattacatac atactagaca ttataaatat ctttttacat catcaatata 1380
tagtataggt aagtatatct tactacacta tcaatttaaa ttcatcaata attactgaac 1440tagtataggt aagtatatct tactacacta tcaatttaaa ttcatcaata attactgaac 1440
aaataattcg atcgtgaata tcttttacac tgtcaacaca tataattgca agtcgaaaag 15001500
tatttagcaa tcaagggttt tacaagaatt tttggtgcta ataaaatgta taacaacctt 15601560
aaatgttgtt tgtttttcct taaacaagac atagcacact cccccttgat gtatcttttt 16201620
gggacatacc acatgtttct gttacataag ttggatattt tgatattaga tacctaagaa 1680gggacatacc acatgtttct gttacataag ttggatattt tgatattaga tacctaagaa 1680
tgtgtcatca tgttactcca tacatatcaa acaatatttc acttcaattt gaaatattta 1740tgtgtcatca tgttactcca tacatatcaa acaatatttc acttcaattt gaaatattta 1740
aaatcaagat ttgtaatcac ataaactaaa atacgttaac gtaattaatc aatcttgatt 1800aaatcaagat ttgtaatcac ataaactaaa atacgttaac gtaattaatc aatcttgatt 1800
caacacaaat attaatgaga gaaaatattg attcaaaaga taaaagcaca tagtgtatgg 18601860
gaattgatat tcaaatacct aa 1882gaattgatat tcaaatacct aa 1882
<210> 88<210> 88
<211> 1574<211> 1574
<212> ДНК<212> DNA
<213> Solanum lycopersicum<213> Solanum lycopersicum
<400> 88<400> 88
aatgaaaaag aaaaaataaa gcaatagatc ccatcttatt taaaaaggga aatagtacaa 60aatgaaaaag aaaaaataaa gcaatagatc ccatcttatt taaaaaggga aatagtacaa 60
cccacttttt ttttttgtat ttatattttt gattttgttt ctctctattt cattcgtttt 120120
aatttatgtg gggttagtgc gatgtattta tttcaaaaat aataatgtgg gtgaaatagt 180aatttatgtg gggttagtgc gatgtattta tttcaaaaat aataatgtgg gtgaaaatagt 180
gatctttcta ttaaattaga tattttatgt atacattttt tgtcgaatta atataatatt 240gatctttcta ttaaattaga tattttatgt atacattttt tgtcgaatta atataatatt 240
ttctcattaa acttacatgt tccaaaagga tcgaatgatg tacttggttg aattgcgaag 300ttctcattaa acttacatgt tccaaaagga tcgaatgatg tacttggttg aattgcgaag 300
taattttttt tagagaaaca acgatcaatt ctcacttaat ttttttttta tattcacgtt 360taattttttt tagagaaaca acgatcaatt ctcacttaat ttttttttta tattcacgtt 360
ctaaaaatcc taaatctaag aaaaaaatgg gagtaatttg gaacttaaat ctaagacaag 420ctaaaaatcc taaatctaag aaaaaaatgg gagtaatttg gaacttaaat ctaagacaag 420
tcttaattat gtcttgttta gctaattaaa ctatcaaaat aaaaatattt tttatttaaa 480tcttaattat gtcttgttta gctaattaaa ctatcaaaat aaaaatattt tttatttaaa 480
atagtatcca aaaaagaatt acttttggag agtcaatttt tgaatacctt gttaatttga 540atagtatcca aaaaagaatt acttttggag agtcaatttt tgaatacctt gttaatttga 540
taaatatttg tatttatatt ataacaataa tttatacttg aacaaagttt tgaaaatact 600taaatatttg tatttatatt ataacaataa tttatacttg aacaaagttt tgaaaatact 600
ttccattttg ccctactata cgtactactc aaaatattaa aacccatttt tttcttaaaa 660aaaatattaa aacccatttt ttttcttaaaa 660
gtttggccaa aacacttcaa tttcctttaa aagttggcca tactaactac atttaatttg 720gtttggccaa aacacttcaa ttttcctttaa aagttggcca tactaactac atttaatttg 720
tacaaatcaa aattatttta taactcatat cattggcgga acttgacgtg agttgtctaa 780tacaaatcaa aattatttta taactcatat cattggcgga acttgacgtg agttgtctaa 780
aataaacaaa gtttaataaa agtgtataaa ttaaaattac tgttaacttt agaaaaatac 840aataaacaaa gtttaataaa agtgtataaa ttaaaattac tgttaacttt agaaaaatac 840
caatgagttt gacctttttt acaagttgaa caatacaaac tttaatcaat attattaaaa 900caatgagttt gacctttttt acaagttgaa caatacaaac tttaatcaat attattaaaa 900
tatattttca ttttattgat ataagaaatt actacaattt ataatacttt tcctataatt 960tatattttca tttttattgat ataagaaatt actacaattt ataatacttt tcctataatt 960
tcaaattttt aaattttctg aaatattaaa ccaatctaat ctaattcaat ttaatcaaat 1020tcaaattttt aaattttctg aaatattaaa ccaatctaat ctaattcaat ttaatcaaat 1020
taattcatat aaagcaaaat taaataggaa aatattccat atcaaagtga gtagtttctc 1080taattcatat aaagcaaaat taaataggaa aatattccat atcaaagtga gtagtttctc 1080
tattctattt ttatatttca aataggaaaa attcactttt ctataattaa gaataattca 11401140
attttaattc tttccctttt aactcttatg aaataattta taatcacaca actattcaag 12001200
tattatttta caccataaat ttcaaatctt ttcatttttt cttcttaaat attatactaa 1260tattatttta caccataaat ttcaaatctt ttcatttttt cttcttaaat attatactaa 1260
atcaaataat atcatataaa ataaaacata aaaaaatata tattttgaga aattaaaaag 1320atcaaataat atcatataaa ataaaacata aaaaaatata tattttgaga aattaaaaag 1320
aaaataatgt caataatttg tttctttttt tttctcttaa atagagtaca tgaataggat 13801380
agaataggtg tggaaaaagg tgtaaataat aaataaacaa tttaacaagt actatgaaaa 1440agaataggtg tggaaaaagg tgtaaataat aaataaacaa tttaacaagt actatgaaaa 1440
atggtattat aattatttaa aatgaaaacc agatggtatt taagaatgtg ttgtcgagtt 15001500
ttgattggtt gaaaggacaa catagtatgg tactcatttt tgtatggtgg atatataatg 1560ttgattggtt gaaaggacaa catagtatgg tactcatttt tgtatggtgg atatataatg 1560
tctatcacag attt 1574tctatcacag attt 1574
<210> 89<210> 89
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Zea mays<213> Zea mays
<400> 89<400> 89
agtctcttgt tgggctggac gcctccatca aggcgcgagg tcaagggcac agttaaccgt 60agtctcttgt tgggctggac gcctccatca aggcgcgagg tcaagggcac agttaaccgt 60
tgtgctaact ggtggagatc aattccaaca cactggacta gtgctgggac taacttaaaa 120tgtgctaact ggtggagatc aattccaaca cactggacta gtgctgggac taacttaaaa 120
ataggagcct aaagcacggt ccaacaagaa ataaaatagg tcgggctacc acgactcgaa 180ataggagcct aaagcacggt ccaacaagaa ataaaatagg tcgggctacc acgactcgaa 180
ggtgggtcta gacctgacct caagttacgg cctgttgggc ccagcacggc ccacacatat 240ggtgggtcta gacctgacct caagttacgg cctgttgggc ccagcacggc ccacacatat 240
gggtcggttt gggcctacac ggccccaatg aagcctatat tatttaattt ctttagtttc 300gggtcggttt gggcctacac ggccccaatg aagcctatat tatttaattt ctttagtttc 300
gtaaatttat aaactttata ttgttgtgat atttggactt tatgcggtca aatgatgcta 360gtaaatttat aaactttata ttgttgtgat atttggactt tatgcggtca aatgatgcta 360
gcattgttta atattgtggt tgcaatattt ggattttacg aggtttgaat atataggacg 420gcattgttta atattgtggt tgcaatattt ggattttacg aggtttgaat atataggacg 420
agcttggacc ggcacgattc aacaaaagca cggcttgctt tagagtagaa ctgaccattg 480agcttggacc ggcacgattc aacaaaagca cggcttgctt tagagtagaa ctgaccattg 480
tttctacttt tcaggcccta aaagtttttt tttatcttct tagcccgatc ccagcactag 540tttctacttt tcaggccta aaagtttttt tttatcttct tagcccgatc ccagcactag 540
actggactgg actgagacct tgtactttga agtaagatgc atgagttcgt tatgcggatt 600actggactgg actgagacct tgtactttga agtaagatgc atgagttcgt tatgcggatt 600
cgcaaggcgc gcgtacagta cagctcggca cccaacagct agtagtacgc acgttccgtt 660cgcaaggcgc gcgtacagta cagctcggca cccaacagct agtagtacgc acgttccgtt 660
aatccgctgg atggatggat cgatcggaga cggacagggg cggacgcgcg gcaaacgtac 720aatccgctgg atggatggat cgatcggaga cggacagggg cggacgcgcg gcaaacgtac 720
ggtgcagtta ttgtcgtccg ccggatcgat caatcgaccg gcgcggcgga cggatcgaac 780ggtgcagtta ttgtcgtccg ccggatcgat caatcgaccg gcgcggcgga cggatcgaac 780
agtgcccgaa catgcacgtc cgtcccctac gcctgcggcg tgcagcatgc gcgcggatcg 840agtgcccgaa catgcacgtc cgtcccctac gcctgcggcg tgcagcatgc gcgcggatcg 840
tagtccccgg tcgatcggat gcgcgggccg gaccccggcg ctgccgaccg ggaggcggga 900tagtccccgg tcgatcggat gcgcgggccg gaccccggcg ctgccgaccg ggaggcggga 900
gacttggttc gtttcgcacc tgctgccttg tctcgcgctc gcgcggcgcg tcaggggtgg 960gacttggttc gtttcgcacc tgctgccttg tctcgcgctc gcgcggcgcg tcaggggtgg 960
ttggtcgcgt acttgcgttg gctgctgcct gggtggctct ccgcctctcc tggccacggc 1020ttggtcgcgt acttgcgttg gctgctgcct gggtggctct ccgcctctcc tggccacggc 1020
gagactgatg cgcgcgctgg cccagctttg gtcgctgttg cgagctggtc tggacagcga 1080gagactgatg cgcgcgctgg cccagctttg gtcgctgttg cgagctggtc tggacagcga 1080
cccggcccgg ccggccggcc ggccgccgag accgaaagga agcaacgtac aaccagcagg 1140cccggcccgg ccggccggcc ggccgccgag accgaaagga agcaacgtac aaccagcagg 1140
aagcaagggg tgagagagag cgagagagga ggggcgtgca gccgtccggt ccagcaggcg 12001200
acggaatgga ggacacgccg ggcaggtcgc tgtgcgcctg tgcctgcgtg cgcgatcgcg 1260acggaatgga ggacacgccg ggcaggtcgc tgtgcgcctg tgcctgcgtg cgcgatcgcg 1260
agtggccagt caccagcagg ccggccatta aaggagagca cgtgacggcg cgccagtcgc 1320agtggccagt caccagcagg ccggccatta aaggagagca cgtgacggcg cgccagtcgc 1320
ttccttcgct tcgcttgctc gggcgccggc ggggaccacc agggtaaaag ccgagcgcgc 1380ttccttcgct tcgcttgctc gggcgccggc ggggaccacc agggtaaaag ccgagcgcgc 1380
aggacgcgac ggcgacggcg acggcgacgg acgggacggg tcccatgagc ccatcaccac 1440aggacgcgac ggcgacggcg acggcgacgg acgggacggg tcccatgagc ccatcaccac 1440
gagcggcgtg gacgtggagg tggatggaat gaccgatcga ccgatcgatc gcgagtgatg 1500gagcggcgtg gacgtggagg tggatggaat gaccgatcga ccgatcgatc gcgagtgatg 1500
actgatgagt gtggcgtgac tccgatccct gatccctccc catccctagc tttccggcaa 1560actgatgagt gtggcgtgac tccgatccct gatccctccc catccctagc tttccggcaa 1560
cgcgctaccg ggccgggggc ctagggtttc cccccctacg gatgctttgc cggaaacggc 1620cgcgctaccg ggccgggggc ctagggtttc cccccctacg gatgctttgc cggaaacggc 1620
aacctgacgc cgaggcgcgc gcaccacccc tgcgcccacc ggctccttcc ctgcgccgcg 1680aacctgacgc cgaggcgcgc gcaccacccc tgcgcccacc ggctccttcc ctgcgccgcg 1680
ctgatgataa ctcagtccct gcacaggccc cggccccggc cccagcccca ccaccgctac 1740ctgatgataa ctcagtccct gcacaggccc cggccccggc cccagcccca ccaccgctac 1740
tccactaggc cctggttgct agccagctcg cttgcttgct tcgattccta tcctagcccc 1800tccactaggc cctggttgct agccagctcg cttgcttgct tcgattccta tcctagcccc 1800
cgtgccatcg ctttcctctc gttatttagc cctccgttcc cgaccctcat cctccgctcc 1860cgtgccatcg ctttcctctc gttatttagc cctccgttcc cgaccctcat cctccgctcc 1860
agacttccag catctccgct ccggctgcgc tctgccttgc tttcctgcta cctgctctag 1920agacttccag catctccgct ccggctgcgc tctgccttgc tttcctgcta cctgctctag 1920
cgcgagcgag agaggtacgg cggccgatct ggcggcgcag gcggagggct cggccggggc 1980cgcgagcgag agaggtacgg cggccgatct ggcggcgcag gcggagggct cggccggggc 1980
cggcaagtcg gcgccgaaca t 2001cggcaagtcg gcgccgaaca t 2001
<210> 90<210> 90
<211> 1032<211> 1032
<212> ДНК<212> DNA
<213> Zea mays<213> Zea mays
<400> 90<400> 90
acatgaggag tgggttgatt ccactaaaat tgatggaatg aacttattat gcatcaactc 60acatgaggag tgggttgatt ccactaaaat tgatggaatg aacttattat gcatcaactc 60
ataaagcata gagtgattcc acaaaccaaa cacaccatta gtttattgac caacctcagt 120ataaagcata gagtgattcc acaaaccaaa cacaccatta gtttattgac caacctcagt 120
tctttgatat ataaaagttg tttgatccgt gtgcaacaaa tagtttttca ggaatttggg 180tctttgatat ataaaagttg tttgatccgt gtgcaacaaa tagtttttca ggaatttgggg 180
acgtacccca tctcttaaat gtctagactg attggacata ttaatctaat tttagtagct 240acgtacccca tctcttaaat gtctagactg attggacata ttaatctaat tttagtagct 240
aagtattagc tctcaaacac ctcctgggaa tgctgcccta aaaatggaat atcggtacgt 300aagtattagc tctcaaacac ctcctgggaa tgctgcccta aaaatggaat atcggtacgt 300
cggatcggag aaaggttggg gtatcgtggt ccaaagcatg cgaaagcaac ggcgcagggc 360cggatcggag aaaggttggg gtatcgtggt ccaaagcatg cgaaagcaac ggcgcaggggc 360
tggaaacctg agaccaggtg aggtgcacga cgacatgcat atggtttggg ttaggcctag 420tggaaacctg agaccaggtg aggtgcacga cgacatgcat atggtttgggg ttaggcctag 420
gagctggttc tctctccatg catggtcagc tcgccgcttt tgccgccttc gtgtatggct 480gagctggttc tctctccatg catggtcagc tcgccgcttt tgccgccttc gtgtatggct 480
tgccccatgc catgcatcgc gccgtgtaca cttgtggcgt aggggcgggg ccgccgcatc 540tgccccatgc catgcatcgc gccgtgtaca cttgtggcgt aggggcgggg ccgccgcatc 540
ggagcgcccc cgtttcggca cggtcctccc agttttaggg taaacccagc tagggtagtg 600ggagcgcccc cgtttcggca cggtcctccc agttttaggg taaacccagc tagggtagtg 600
ggggtaactg gccagcgcca ctccaaatct accctccttc aatttaaagc tgagaaatac 660ggggtaactg gccagcgcca ctccaaatct accctccttc aatttaaagc tgagaaatac 660
tgtagtatat actagagtag agcgagagaa gggagatgtg gatagatggg tggatgggga 720tgtagtatat actagtag agcgagagaa gggagatgtg gatagatggg tggatgggga 720
cgcgtgaaaa agatgcgaga gagaagagac gaccggacag gcagccacac acagtaacag 780cgcgtgaaaa agatgcgaga gagaagagac gaccggacag gcagccacac acagtaacag 780
tagtgaaccc tgcccctttt cccggtctct ccactgatat tccgctcctg tccctgtcct 840tagtgaaccc tgcccctttt cccggtctct ccactgatat tccgctcctg tccctgtcct 840
ccccggacgg agctaataga gccggctctg ctcatcatta tatcgtcgcg cacaaatgcg 900ccccggacgg agctaataga gccggctctg ctcatcatta tatcgtcgcg cacaaatgcg 900
aagcctagca gcacttgtgt ccggcggcct tgtgttcgtg ggggatgtgt ggcatattag 960aagcctagca gcacttgtgt ccggcggcct tgtgttcgtg ggggatgtgt ggcatattag 960
ctagctgata agcggccggc cgaagagcaa gcgcagtgag aagaagaagc tcggatcgga 1020ctagctgata agcggccggc cgaagagcaa gcgcagtgag aagaagaagc tcggatcgga 1020
ggaggtcggc at 1032ggaggtcggc at 1032
<210> 91<210> 91
<211> 2000<211> 2000
<212> ДНК<212> DNA
<213> Zea mays<213> Zea mays
<400> 91<400> 91
tgtctcgatc tctcctctcc tctcctctcc tcccgttggt gtgactgtag tagatccttt 60tgtctcgatc tctcctctcc tctcctctcc tcccgttggt gtgactgtag tagatccttt 60
gcccgtgtca gaacaagctg ctcctcggac cgggtaatgt taaacatcgg aggagccttt 120120
gcctaggatc cgtaacgggg aggaaagaga aaaaaaacta aggatgatta tggataccgt 180gcctaggatc cgtaacgggg aggaaagaga aaaaaaacta aggatgatta tggataccgt 180
gtaataactg ctaactacag ttagcccatc tcagcggact ctctgcccta tattgtatgt 240gtaataactg ctaactacag ttagcccatc tcagcggact ctctgcccta tattgtatgt 240
cactttctat tataaactac actatacaac ctatgatgta aaataatgtt ttgcacgttc 300cactttctat tataaactac actatacaac ctatgatgta aaataatgtt ttgcacgttc 300
atatataaat cagtcgaaga aagggtgcct cactacaggg aatggtttct attggacacc 360atatataaat cagtcgaaga aagggtgcct cactacaggg aatggtttct attggacacc 360
ttagcattca atcagtcatg tccccccccc ccccaaaaaa aaaatgcacc catccagtcg 420ttagcattca atcagtcatg tcccccccccc ccccaaaaaa aaaatgcacc catccagtcg 420
atttttgtca tatttgaatt cggtggtgct ccatgcacgc gtacctgctt tgaccaattt 480atttttgtca tatttgaatt cggtggtgct ccatgcacgc gtacctgctt tgaccaattt 480
atacgatcaa tatataactt acgttcttac ggttcttaga ctttatgaga ctttgcaagt 540atacgatcaa tatataactt acgttcttac ggttcttaga ctttatgaga ctttgcaagt 540
atgtttggat acaaatcaca ctaatgtgca tctttgtaaa ctaaattctt ttgattaaat 600atgtttggat acaaatcaca ctaatgtgca tctttgtaaa ctaaattctt ttgattaaat 600
ttgtaatttt aaggtttaac ctgtttttgt tgtgtagacg acgttaggca ccgatcgtcg 660ttgtaatttt aaggtttaac ctgtttttgt tgtgtagacg acgttaggca ccgatcgtcg 660
cttcgctata tatctttgtt gtagacgacg ttagactcct agattaaata agcgaaaacc 720cttcgctata tatctttgtt gtagacgacg ttagactcct agattaaata agcgaaaacc 720
gatcgtcgct tcgctatctt tgtttatttg tttgtggctg ctctacgctg aagagcccac 780gatcgtcgct tcgctatctt tgtttatttg tttgtggctg ctctacgctg aagagcccac 780
aggccacagc cccacacgac acgttaggca cccccaccca ccatccgcgc ataatataag 840aggccacagc cccacacgac acgttaggca cccccaccca ccatccgcgc ataatataag 840
ctactgcaaa atatatgccg gcggagcccg agcgagcttt gtacttgctc cgccgtggcc 900ctactgcaaa atatatgccg gcggagcccg agcgagcttt gtacttgctc cgccgtggcc 900
tggctccagg atgctttgga tttcgtgcgg cgccgtacgt ccaggcaaac agacaagtgg 960tggctccagg atgctttgga tttcgtgcgg cgccgtacgt ccaggcaaac agacaagtgg 960
agctgcatgt cctaaaagcc cggcaatcaa acacgctcta gcagcagcat ggatcacaga 1020agctgcatgt cctaaaagcc cggcaatcaa acacgctcta gcagcagcat ggatcacaga 1020
tatcagtcat ggggtggcgc tggcgcgggt gggtggccag gtggaggtgg gtgcatgtcg 1080tatcagtcat ggggtggcgc tggcgcgggt gggtggccag gtggaggtgg gtgcatgtcg 1080
tcgtcgtcgt cccatacaga aattggctca cgtatgtata cgctgcgtac aggcagtagt 1140tcgtcgtcgt cccatacaga aattggctca cgtatgtata cgctgcgtac aggcagtagt 1140
acacaattac tagcaccaat gcaatccaac ggatggatct tcgcacaccc gccacccggt 1200acacaattac tagcaccaat gcaatccaac ggatggatct tcgcacaccc gccacccggt 1200
taaattaagc tactcctacc tctcccagtc tcccttggcc tgcctctata tttttgggca 1260taaattaagc tactcctacc tctcccagtc tcccttggcc tgcctctata tttttggggca 1260
gcctccacca gccgggcgga tggggttgga tcgtcgtatc tgaggcggcg tggtcgtcca 1320gcctccacca gccgggcgga tggggttgga tcgtcgtatc tgaggcggcg tggtcgtcca 1320
aggcgaaagc aacggcgcag ggctgggacc ctagtaggtg catgaggtcg tgcatggcgc 1380aggcgaaagc aacggcgcag ggctgggacc ctagtaggtg catgaggtcg tgcatggcgc 1380
gcgagatgca tggtttgggt taggcctagg aggttctctc tccatggcat gggtagctcg 1440gcgagatgca tggtttgggt taggcctagg aggttctctc tccatggcat gggtagctcg 1440
cgccgcttgg ctgccgttct cgtgtatgcg catgcaccag gcatttgcac cgcgccgtgt 1500cgccgcttgg ctgccgttct cgtgtatgcg catgcaccag gcatttgcac cgcgccgtgt 1500
atatttctgg cgtgggggcc ggcgccgcat tggagctgca gccccgtttc ggcacggaca 1560atatttctgg cgtgggggcc ggcgccgcat tggagctgca gccccgtttc ggcacggaca 1560
cgggacacct cccgttaggg taagcccggg gcagtgggta actgcccagc gccactactc 1620cgggaccct cccgttaggg taagcccggg gcagtgggta actgcccagc gccactactc 1620
cgaatttacc ctccttttat ttttaaagct tgggagaggg gagaatggat ggatggatgg 16801680
atgtagacgc gtgaaaaaga tgcgcgagac cggcagcgtg tgctacaggg gcagccaggc 1740atgtagacgc gtgaaaaaga tgcgcgagac cggcagcgtg tgctacaggg gcagccaggc 1740
acacacacac acagtgaccc tgcccctttt cccggccgtc tcgctctcca ccgatattcc 1800acacacacac acagtgaccc tgcccctttt cccggccgtc tcgctctcca ccgatattcc 1800
gctcctcctg tccagtcctc ctcccccgag ccggctcatt atatcgtccg tcgcgcagca 1860gctcctcctg tccagtcctc ctcccccgag ccggctcatt atatcgtccg tcgcgcagca 1860
caacgcaagt ttgctagcgg ccggatcagc agccacaaaa cgaggagagc aaccacgctg 1920caacgcaagt ttgctagcgg ccggatcagc agccacaaaa cgaggagagc aaccacgctg 1920
cacacagaga cgcccgtgtg tgagatatag agcaagctcg atcgaaggaa ggagggaagc 1980cacacagaga cgcccgtgtg tgagatatag agcaagctcg atcgaaggaa ggagggaagc 1980
tagagatcgt acgtcgccat 2000tagagatcgt acgtcgccat 2000
<210> 92<210> 92
<211> 2001<211> 2001
<212> ДНК<212> DNA
<213> Zea mays<213> Zea mays
<400> 92<400> 92
gtcgaaacgc cgacaatttg ttacacggtt accactgcac agcgagtacg acaacaagcc 60gtcgaaacgc cgacaatttg ttacacggtt accactgcac agcgagtacg acaacaagcc 60
taagatagtc cacttcttcg cattcctata cttctcactg tgatctacgg cactacgaca 120taagatagtc cacttcttcg cattcctata cttctcactg tgatctacgg cactacgaca 120
ctatttcgag gcaaaaacag agggaagatg cctaaccaaa attctaatga agaattacac 180ctatttcgag gcaaaaacag agggaagatg cctaaccaaa attctaatga agaattacac 180
cgtgaatgat ggcggcggtg gacgacggtg gcaatggcaa aaccctaacc ctgcatcatt 240cgtgaatgat ggcggcggtg gacgacggtg gcaatggcaa aaccctaacc ctgcatcatt 240
ttcccttcac ctttctattt tttccacgtg catagcatgg cagtccctcg acaatagaaa 300ttcccttcac ctttctattt tttcccgtg catagcatgg cagtccctcg acaatagaaa 300
cacatgtaag gtttcagtgg atatatccca atcgttgtac ttaagcagca ttcataaggt 360cacatgtaag gtttcagtgg atatatccca atcgttgtac ttaagcagca ttcataaggt 360
gatttagttt ttttccctaa atcttgcaac gtgcataact tcgcgattga aactttaatt 420gatttagttt ttttccctaa atcttgcaac gtgcataact tcgcgattga aactttaatt 420
aatacatgta atcagtcgaa tggaatgcac tggtttttag gcatgtatat gacctcaaat 480aatacatgta atcagtcgaa tggaatgcac tggtttttag gcatgtatat gacctcaaat 480
catccacgca aggaatggat aaaatgacaa atcttcattg tcttcttaaa ttcaggcgat 540catccacgca aggaatggat aaaatgacaa atcttcattg tcttcttaaa ttcaggcgat 540
cttcgtaaaa acagttgatt catataaaaa tagaaaatat atttggagaa attttctgca 600cttcgtaaaa acagttgatt catataaaaa tagaaaatat atttggagaa attttctgca 600
tgtccttgta attttgctta gtaccatatt tatcatcgta aatgttataa tcccttctat 660tgtccttgta attttgctta gtaccatatt tatcatcgta aatgttataa tcccttctat 660
ataccactct gatacaattt cgtacctttt taattatgcc aacgcaagtg ggcgagtgat 720ataccactct gatacaattt cgtacctttt taattatgcc aacgcaagtg ggcgagtgat 720
atagtaggga ctagaatatc tgtgatgata aataatgtac tagacaaaat tacagtagca 780atagtaggga ctagaatatc tgtgatgata aataatgtac tagacaaaat tacagtagca 780
tacatgaaat tgtcccttat atttgccatg cattttttgc tattacatct tagcataata 840tacatgaaat tgtcccttat atttgccatg cattttttgc tattacatct tagcataata 840
atcttggaag cacatcgcat gagttatcga ttcaagttag atatatagat gcatagtaga 900atcttggaag cacatcgcat gagttatcga ttcaagttag atatatagat gcatagtaga 900
caacatttag ttacgcaacg gcatctggtt ccaagaggag ctttgcaaga gatcaattga 960caacatttag ttacgcaacg gcatctggtt ccaagaggag ctttgcaaga gatcaattga 960
atttagggcc tggaatcgtt accaaatcag tgatgattgc cggttgggtt cacatgagca 10201020
gataaaaaaa tggagatgat catcgtcctt tcagaatcgc taacagatat ggaagtgatg 1080gataaaaaaa tggagatgat catcgtcctt tcagaatcgc taacagatat ggaagtgatg 1080
aagtccagga ctccacatga tcttactaca cacatgccag aagtctggaa caagaacatg 11401140
ccggatccct aagcagaaaa cggatcgtat agcggtctcc tttctggaaa aagcgacgca 1200ccggatccct aagcagaaaa cggatcgtat agcggtctcc tttctggaaa aagcgacgca 1200
aaacggatcg atgacctctc tcaccatgtc aacccgtgct gaggagctcc gtcctgtctg 1260aaacggatcg atgacctctc tcaccatgtc aacccgtgct gaggagctcc gtcctgtctg 1260
cacgcactat ggcaatggcg accggcctct tccgagctgc gaatcataac ggcatgtctg 1320cacgcactat ggcaatggcg accggcctct tccgagctgc gaatcataac ggcatgtctg 1320
caagctcgat cgctgcaagc atgccttccc gttggaagga tcgagctgct cgatggagga 1380caagctcgat cgctgcaagc atgccttccc gttggaagga tcgagctgct cgatggagga 1380
aagaggaaag cagcgcgccg cgcatggcta tagcagttgg caggtgaggg cctctagcgg 1440aagaggaaag cagcgcgccg cgcatggcta tagcagttgg caggtgaggg cctctagcgg 1440
caacgggggc ctttgcccaa aatcacggca agccgaggtt ccacctggaa aaatccactc 1500caacggggggc ctttgcccaa aatcacggca agccgaggtt ccacctggaa aaatccactc 1500
cgttgctctc tcccttttct ctctctctag catcgacctg tcgaatcctc actggtctat 1560cgttgctctc tcccttttct ctctctctag catcgacctg tcgaatcctc actggtctat 1560
tcagttcggc aacgaggaga gagatagaca gagagacgga cgggaggctg acacatggcc 1620tcagttcggc aacgaggaga gagatagaca gagagacgga cgggaggctg acacatggcc 1620
ggatattggg gtgcggaatt gaatttggtt aatgcaaaag gtggcgtgtg aggacggacc 1680ggatattggg gtgcggaatt gaatttggtt aatgcaaaag gtggcgtgtg aggacggacc 1680
gacggaggca atcacgagac gggaggggtt ggccttttgc ctctagggtt ccgggtcgcc 1740gacggaggca atcacgagac gggaggggtt ggccttttgc ctctagggtt cggggtcgcc 1740
caccacctta ccggaaatgg caatgcggga cgcgccccaa tcactcacca caccacccct 1800caccacctta ccggaaatgg caatgcggga cgcgccccaa tcactcacca caccacccct 1800
ttcttctcgc ccttttaacc caatcgtctc tccaccaccc aactcctcct gcctgtgctc 1860ttcttctcgc cctttttaacc caatcgtctc tccaccaccc aactcctcct gcctgtgctc 1860
tcctcctttt tctccactcc gcttttgctt ggttccatcg ggccggagag gagaagctag 1920tcctcctttt tctccactcc gcttttgctt ggttccatcg ggccggagag gagaagctag 1920
ctaactagca gcagctctgt tggtgtgtgt gtgtgtggag ggtagctgca gctggggcta 1980ctaactagca gcagctctgt tggtgtgtgt gtgtgtggag ggtagctgca gctggggcta 1980
gctggaaagg tcgggagcca t 2001gctggaaagg tcgggagcca t 2001
<210> 93<210> 93
<211> 668<211> 668
<212> ДНК<212> DNA
<213> Zea mays<213> Zea mays
<400> 93<400> 93
atcgaagata gggttgctcg aaacaaaaaa aaaatctgca gccgcagact gtatgcccta 60atcgaagata gggttgctcg aaacaaaaaa aaaatctgca gccgcagact gtatgcccta 60
cgctattttg ccgtaggaga gttggaacct ttgatgtagc gtttgtacta ctcggggtac 120cgctattttg ccgtaggaga gttggaacct ttgatgtagc gtttgtacta ctcggggtac 120
gctatccact atttggttga ggtatggtgg gaaagaaatg ataaaatata tggttgttgg 180gctatccact atttggttga ggtatggtgg gaaagaaatg ataaaatata tggttgttgg 180
tgtagagttg atatatgaaa taaatatgac tgcagatgat tattgtgata tatggtaaat 240tgtagagttg atatatgaaa taaatatgac tgcagatgat tattgtgata tatggtaaat 240
acttttgatg ataaaaataa aatatttttt tagagtagta cggatagcct tatcgaccta 300acttttgatg ataaaaataa aatatttttt tagagtagta cggatagcct tatcgaccta 300
tgtacctggc agcgctgtga tccatcagct agcgaccaat cactcgccca ccacggcatc 360tgtacctggc agcgctgtga tccatcagct agcgaccaat cactcgccca ccacggcatc 360
gccaggagct gttgcttttt gcgagctgca tggtgggggc ctccatcgaa ggcgagggga 420gccaggagct gttgcttttt gcgagctgca tggtggggggc ctccatcgaa ggcgagggga 420
cggggcagag cgccctgatc gacgcgtgat aaccgattga tgtgccccca gttcgcccgt 480cggggcagag cgccctgatc gacgcgtgat aaccgattga tgtgccccca gttcgcccgt 480
accagcgcgc gccccctcgg cctcgtcctg cgtccgcctg cgtgctggtg cggcgcgctc 540accagcgcgc gccccctcgg cctcgtcctg cgtccgcctg cgtgctggtg cggcgcgctc 540
gcgctggcgg acgtccagac cgcaataatc tcgcggcctc gcgcgaggag gaccgaggac 600gcgctggcgg acgtccagac cgcaataatc tcgcggcctc gcgcgaggag gaccgaggac 600
aggaggtgcg atgcgatgca ataaaggttg ccgtacgcga gtgagtcgga cagagagaga 660aggaggtgcg atgcgatgca ataaaggttg ccgtacgcga gtgagtcggga cagagagaga 660
gagagaga 668gagagaga 668
<210> 94<210> 94
<211> 718<211> 718
<212> ДНК<212> DNA
<213> Zea mays<213> Zea mays
<400> 94<400> 94
ttatttggtg cttcaccgcc ggagccaggc tagctataca ctttgtagtt gtttgtaggg 60ttatttggtg cttcaccgcc ggagccaggc tagctataca ctttgtagtt gtttgtaggg 60
gtatatagga gcagtatcta cagtagcagc actcttcacc ggtccagcta gtaaatgcgg 120gtatatagga gcagtatcta cagtagcagc actcttcacc ggtccagcta gtaaatgcgg 120
tatctgtcgt ctgtcgagct aacctatcat atcagcgcca tgcgccccgg ccggtcgtaa 180tatctgtcgt ctgtcgagct aacctatcat atcagcgcca tgcgccccgg ccggtcgtaa 180
cctagctagg agtagctagc taggactagc tagctaggag cctaagcgcc cagcccagtg 240cctagctagg agtagctagc taggactagc tagctaggag cctaagcgcc cagcccagtg 240
ggtggtagcc taccaagggt gaggaagagg agctgagcta ggaccgcgag gcgagcgaga 300ggtggtagcc taccaagggt gaggaagagg agctgagcta ggaccgcgag gcgagcgaga 300
tccaatctgc accccacgaa cgaaaagatt cttccccgcc ggcgtcgctc tctcatccgt 360tccaatctgc accccacgaa cgaaaagatt cttccccgcc ggcgtcgctc tctcatccgt 360
cgacgtctcg ctccttcctt cctctctctc tctctctctc tctctctctc tctctctctc 420cgacgtctcg ctccttcctt cctctctctc tctctctctc tctctctctc tctctctctc 420
tttctctctc tcagccagca gcaagcatat agcccagcac caccacatgc ccaagggccc 480tttctctctc tcagccagca gcaagcatat agcccagcac caccacatgc ccaagggccc 480
tccctctccc tcgtcgtcgg gccaattgag tgtgagagct cgaaaaaacc caggggatcg 540tccctctccc tcgtcgtcgg gccaattgag tgtgagagct cgaaaaaacc caggggatcg 540
gccggaccag cagcgagcga gcgcgagctc tgcgtgcgtg tgtgtgtctg cgcgctagat 600gccggaccag cagcgagcga gcgcgagctc tgcgtgcgtg tgtgtgtctg cgcgctagat 600
tagatcacct ccatcgtcaa taattgcagg cagatccata tagtctgctg gtggcgagac 660tagatcacct ccatcgtcaa taattgcagg cagatccata tagtctgctg gtggcgagac 660
aaagcaacgg atcgtcgtcg atccggagag cggaaagcgc gcagatcgcg gcggccat 718aaagcaacgg atcgtcgtcg atccggagag cggaaagcgc gcagatcgcg gcggccat 718
<210> 95<210> 95
<211> 21<211> 21
<212> РНК<212> RNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 95<400> 95
agaaucuuga ugaugcugca u 21agaaucuuga ugaugcugca u 21
<210> 96<210> 96
<211> 21<211> 21
<212> РНК<212> RNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 96<400> 96
ggaaucuuga ugaugcugca g 21ggaaucuuga ugaugcugca g 21
<210> 97<210> 97
<211> 21<211> 21
<212> РНК<212> RNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 97<400> 97
ugaaucuuga ugaugcugca u 21ugaaucuuga ugaugcugca u 21
<210> 98<210> 98
<211> 21<211> 21
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Искусственная последовательность<223> Artificial sequence
<400> 98<400> 98
atgcagcatc atcaagattc t 21atgcagcatc atcaagattc t 21
<210> 99<210> 99
<211> 21<211> 21
<212> РНК<212> RNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 99<400> 99
augcagcauc aucaagauuc u 21augcagcauc aucaagauuc u 21
<210> 100<210> 100
<211> 21<211> 21
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Искусственная последовательность<223> Artificial sequence
<400> 100<400> 100
ctgcagcatc atcaagattc c 21ctgcagcatc atcaagattc c 21
<210> 101<210> 101
<211> 21<211> 21
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Искусственная последовательность<223> Artificial sequence
<400> 101<400> 101
atgcagcatc atcaagattc a 21atgcagcatc atcaagattc a 21
<210> 102<210> 102
<211> 328<211> 328
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Искусственная последовательность<223> Artificial sequence
<400> 102<400> 102
ggcagagccg tgcccgtctc atcccctgcc cgtgcaagca gctaggtagg acgatttgag 60ggcagagccg tgcccgtctc atcccctgcc cgtgcaagca gctaggtagg acgatttgag 60
cgtggtgtta ggccgaaccg ctgaaggaag attgctccac tgttgactgc atttgggcta 120cgtggtgtta ggccgaaccg ctgaaggaag attgctccac tgttgactgc atttgggcta 120
ggtgcatcgg gataaatgta ttgcttatat tcagcaatat aatgttcatc ccgatatgcc 180ggtgcatcgg gataaatgta ttgcttatat tcagcaatat aatgttcatc ccgatatgcc 180
tagcccaaat atagtcgata gtggaagaac ggtaacatat gtggtttgca gcaggtgagc 240tagcccaaat atagtcgata gtggaagaac ggtaacatat gtggtttgca gcaggtgagc 240
aggatgggtg tggatgattg aatatctctg ttcagtgttt tcatcatctg actgaacact 300aggatgggtg tggatgattg aatatctctg ttcagtgttt tcatcatctg actgaacact 300
gaatcagctt gctgacgtta gaggttag 328gaatcagctt gctgacgtta gaggttag 328
<210> 103<210> 103
<211> 21<211> 21
<212> РНК<212> RNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 103<400> 103
ugacagaaga gagugagcac a 21ugacagaaga gagugagcac a 21
<210> 104<210> 104
<211> 21<211> 21
<212> РНК<212> RNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 104<400> 104
uugacagaag auagagagca c 21uugacagaag auagagagca c 21
<210> 105<210> 105
<211> 21<211> 21
<212> РНК<212> RNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 105<400> 105
ugacagaaga gagugagcac u 21ugacagaaga gagugagcac u 21
<210> 106<210> 106
<211> 21<211> 21
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Искусственная последовательность<223> Artificial sequence
<400> 106<400> 106
gtgctcactc tcttctgtca a 21gtgctcactc tcttctgtca a 21
<210> 107<210> 107
<211> 21<211> 21
<212> РНК<212> RNA
<213> Glycine max<213> Glycine max
<400> 107<400> 107
gugcucacuc ucuucuguca a 21gugcucacuc ucuucuguca a 21
<210> 108<210> 108
<211> 21<211> 21
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Искусственная последовательность<223> Artificial sequence
<400> 108<400> 108
tgtgctcact ctcttctgtc a 21tgtgctcact ctcttctgtc a 21
<210> 109<210> 109
<211> 21<211> 21
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Искусственная последовательность<223> Artificial sequence
<400> 109<400> 109
gtgctctctc tcttctgtca a 21gtgctctctc tcttctgtca a 21
<210> 110<210> 110
<211> 21<211> 21
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Искусственная последовательность<223> Artificial sequence
<400> 110<400> 110
agtgctcact ctcttctgtc a 21agtgctcact ctcttctgtc a 21
<---<---
Claims (29)
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662410355P | 2016-10-19 | 2016-10-19 | |
US62/410,355 | 2016-10-19 | ||
US201662411408P | 2016-10-21 | 2016-10-21 | |
US62/411,408 | 2016-10-21 | ||
PCT/US2017/057202 WO2018075649A1 (en) | 2016-10-19 | 2017-10-18 | Compositions and methods for altering flowering and plant architecture to improve yield potential |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2019115133A RU2019115133A (en) | 2020-11-24 |
RU2019115133A3 RU2019115133A3 (en) | 2021-05-21 |
RU2775653C2 true RU2775653C2 (en) | 2022-07-06 |
Family
ID=
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2456278C2 (en) * | 2006-06-19 | 2012-07-20 | Такеда Фармасьютикал Компани Лимитед | Tricyclic compound and its pharmaceutical application |
KR101315345B1 (en) * | 2011-12-16 | 2013-10-08 | 서울대학교산학협력단 | Flowering gene XsFTs from Cocklebur and the uses thereof |
US20140020128A1 (en) * | 2012-07-13 | 2014-01-16 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Molecular markers for various traits in wheat and methods of use |
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2456278C2 (en) * | 2006-06-19 | 2012-07-20 | Такеда Фармасьютикал Компани Лимитед | Tricyclic compound and its pharmaceutical application |
KR101315345B1 (en) * | 2011-12-16 | 2013-10-08 | 서울대학교산학협력단 | Flowering gene XsFTs from Cocklebur and the uses thereof |
US20140020128A1 (en) * | 2012-07-13 | 2014-01-16 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Molecular markers for various traits in wheat and methods of use |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2021225224B2 (en) | Plant regulatory elements and uses thereof | |
KR102243727B1 (en) | Engineered transgene integration platform (etip) for gene targeting and trait stacking | |
AU2022200638B2 (en) | Compositions and methods for altering flowering and plant architecture to improve yield potential | |
CN115175556B (en) | Novel genetic loci associated with soybean rust resistance | |
CN113365493A (en) | Tomato plants resistant to tomato brown-wrinkle fruit virus | |
CN114514321A (en) | Regulating sugar and amino acid content in plants (SULTR3) | |
RU2775653C2 (en) | Compositions and methods for changing flowering and architecture of plants for improvement of potential yield | |
RU2826107C1 (en) | Modulating content of sugars and amino acids in plant (sultr3) | |
RU2817119C2 (en) | Tomato plants resistant to tomato brown rugose fruit virus | |
RU2820183C2 (en) | Resistance to pod cracking in plants of brassica genus | |
CN115135142A (en) | Method for controlling grain size and grain weight |