RU2775461C1 - Device for assessing the composition of immunocompetent cells in tumor tissue by spectral fluorescence methods using a photosensitizer based on chlorin e6 - Google Patents

Device for assessing the composition of immunocompetent cells in tumor tissue by spectral fluorescence methods using a photosensitizer based on chlorin e6 Download PDF

Info

Publication number
RU2775461C1
RU2775461C1 RU2021130338A RU2021130338A RU2775461C1 RU 2775461 C1 RU2775461 C1 RU 2775461C1 RU 2021130338 A RU2021130338 A RU 2021130338A RU 2021130338 A RU2021130338 A RU 2021130338A RU 2775461 C1 RU2775461 C1 RU 2775461C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
radiation
fluorescence
laser
output
input
Prior art date
Application number
RU2021130338A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2775461C9 (en
Inventor
Виктор Борисович Лощенко
Анастасия Владимировна Рябова
Владимир Игоревич Макаров
Игорь Дмитриевич Романишкин
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Институт общей физики им. А.М. Прохорова Российской академии наук" (ИОФ РАН)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Институт общей физики им. А.М. Прохорова Российской академии наук" (ИОФ РАН) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Институт общей физики им. А.М. Прохорова Российской академии наук" (ИОФ РАН)
Publication of RU2775461C1 publication Critical patent/RU2775461C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2775461C9 publication Critical patent/RU2775461C9/en

Links

Images

Abstract

FIELD: medical technology.
SUBSTANCE: invention relates to the field of medical technology, and more specifically to laser-spectroscopic technology for monitoring the state of biological tissues. The device contains a pulsed laser that excites the fluorescence of a photosensitizer accumulated in a biological tissue, a system for determining and analyzing the kinetic characteristics of fluorescent radiation and an information display system, a system for receiving fluorescent radiation, which additionally contains a multi-fiber optical probe for delivering exciting laser radiation to the sample under study and transmitting backscattered laser and fluorescent radiation to the input of the fluorescence radiation detection system, the fluorescence radiation detection system, which additionally contains a system of optical filters and a polychromator for spectral decomposition of the registered laser and fluorescence radiation coming through the fiber optic cable to the input of the polychromator, into a spectrally decomposed band at the optical output of the polychromator, an electron-optical converter with a photocathode, a time base system in the direction perpendicular to the spectrally decomposed band of the fluorescent signal, and a luminescent screen at the output, a CCD camera for recording the picture displayed on the luminescent screen at the output of the image intensifier tube, the output of the CCD camera is connected to the input of the system for determining and analyzing the kinetic characteristics of fluorescent radiation, the device additionally contains a block connected in series for summing the exponential characteristic functions of the fluorescence kinetics of chlorin e6 in THP-1 monocytes, macrophages M0, M1, M2 with adjustable weight coefficients and iterative adjustment of the sum to the kinetic characteristics of the photosensitizer radiation by varying the weight coefficients, a block for analyzing and processing the weight coefficients for obtaining from their ratio information on the quantitative content of THP-1 monocytes, macrophages M0, M1, M2, the output of which is connected to the input of the information display unit of a personal computer.
EFFECT: device makes it possible to implement a non-invasive method for assessing the direction of development of the tumor process, to quickly obtain a comprehensive assessment of the state of the tissue during a surgical operation or a session of laser-induced therapy for timely correction of therapeutic or surgical treatment.
1 cl, 1 dwg

Description

Изобретение относится к области медицинской техники, а более конкретно к лазерно-спектроскопической технике для контроля состояния биологических тканей и может быть использовано, в частности, при диагностике и лечении онкологических заболеваний ghb при оценке стадии степени заболевания и вероятном направлении его развития в процессе терапевтического воздействия.The invention relates to the field of medical technology, and more specifically to laser spectroscopic technology for monitoring the state of biological tissues and can be used, in particular, in the diagnosis and treatment of oncological diseases ghb in assessing the stage of the degree of the disease and the likely direction of its development in the process of therapeutic exposure.

Известно, что любая первичная опухоль состоит не только из неопластических клеток, но и из поддерживающей стромы, основными элементами которой являются клетки гемопоэтической системы (в особенности нейтрофилы и макрофаги). Изменение фенотипа клеток опухолевого микроокружения дает опухоли возможность роста и инвазии. Макрофаги способны изменять свой фенотип в зависимости от микроокружения и тем самым влиять на развитие опухолевого процесса. Макрофаги способны накапливать фотосенсибилизаторы на основе хлорина е6 в несколько раз больше, чем опухолевые клетки (до 9 раз), что влияет на накопление фотосенсибилизаторов и на время жизни их флуоресценции. Таким образом, в сенсибилизированной фотосенсибилизатором хлорином е6 биологической ткани макрофаги более всего подвержены фотодинамическому воздействию.It is known that any primary tumor consists not only of neoplastic cells, but also of the supporting stroma, the main elements of which are cells of the hematopoietic system (especially neutrophils and macrophages). Changes in the phenotype of cells in the tumor microenvironment enable the tumor to grow and invade. Macrophages are able to change their phenotype depending on the microenvironment and thereby influence the development of the tumor process. Macrophages are able to accumulate photosensitizers based on chlorin e6 several times more than tumor cells (up to 9 times), which affects the accumulation of photosensitizers and the lifetime of their fluorescence. Thus, in the biological tissue sensitized with the photosensitizer chlorin e6, macrophages are most susceptible to photodynamic effects.

Известны устройства, позволяющее измерять время жизни флуоресценции методами коррелированного по времени подсчета одиночных фотонов (TCSPC) или многоканального масштабирования (MCS) от нескольких пикосекунд до нескольких секунд. Системы включают в себя пикосекундные импульсные диодные лазеры, светодиоды или ксеноновые лампы (непрерывные и импульсные) и предназначены для изучения различных образцов и выполнения нескольких приложений, в том числе регистрации: флуоресценции с временным разрешением; синглетного кислорода, ап-конверсной фотолюминесценции, анизотропии флуоресценции (поляризации), и измерений квантового выхода фотолюминесценции [https://www.picoquant.com/products/category/fluorescence-spectrometers/fluotime-300-high-performance-fluorescence-lifetime-spectrometer#papers; https:www.hamamatsu.com/resources/pdf/sys/SHSS0006E_STREAK.pdf]Known devices that allow you to measure the lifetime of fluorescence methods correlated in time single photon counting (TCSPC) or multi-channel scaling (MCS) from several picoseconds to several seconds. The systems include picosecond pulsed diode lasers, LEDs or xenon lamps (CW and pulsed) and are designed to study a variety of samples and perform several applications, including detection of: time-resolved fluorescence; singlet oxygen, up-converse photoluminescence, fluorescence anisotropy (polarization), and photoluminescence quantum yield measurements [https://www.picoquant.com/products/category/fluorescence-spectrometers/fluotime-300-high-performance-fluorescence-lifetime- spectrometer#papers; https:www.hamamatsu.com/resources/pdf/sys/SHSS0006E_STREAK.pdf]

Недостатками данных устройств является ограниченные размеры исследуемого образца и отсутствие возможности интраоперационных измерений из-за используемой геометрии измерений. Известно устройство для флуоресцентной корреляционной спектроскопии времени жизни (Fluorescence Lifetime Correlation Spectroscopy, FLCS), которое использует флуоресцентные методы с временным разрешением для разделения вкладов различных хромофоров. [https://www.picoquant.com/applications/category/life-science/fluorescence-lifetime-correlation-spectroscopy-flcs#description]. Недостатком данного устройства при измерении кинетических характеристик флуоресценции является необходимость использования конфокального микроскопа для проведения измерений времени жизни флуоресценции исследуемого образца/объекта.The disadvantages of these devices are the limited size of the test sample and the lack of intraoperative measurements due to the measurement geometry used. Known device for fluorescence lifetime correlation spectroscopy (Fluorescence Lifetime Correlation Spectroscopy, FLCS), which uses fluorescence methods with time resolution to separate the contributions of different chromophores. [https://www.picoquant.com/applications/category/life-science/fluorescence-lifetime-correlation-spectroscopy-flcs#description]. The disadvantage of this device when measuring the kinetic characteristics of fluorescence is the need to use a confocal microscope to measure the lifetime of the fluorescence of the sample/object.

Известны устройства для разрешенной по времени флуоресцентной микроскопии (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy, FLIM) методами стробирования. Технология FLIM создает изображение на основе различий в скорости затухания возбужденного состояния от флуоресцентного образца. С помощью настраиваемого генератора задержки можно собирать излучение флуоресценции после определенного времени задержки, охватывающих временной диапазон затухания флуоресценции образца.Known devices for time-resolved fluorescence microscopy (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy, FLIM) by gating methods. FLIM technology creates an image based on differences in the decay rate of the excited state from the fluorescent sample. With a tunable delay generator, fluorescence emission can be collected after a specific delay time spanning the decay time range of the sample's fluorescence.

Известны диагностические устройства на основе интегрированных ПЗС-камер, включающих усилитель изображения, ПЗС-матрицу и встроенный генератор задержки. Камеры с самым коротким временем стробирования до 200 пс и шагом задержки 10 пс позволяют использовать FLIM с субнаносекундным разрешением. В сочетании с эндоскопом эти устройства используются для интраоперационной диагностики опухолей головного мозга [Sun Y. Н. et al. Fluorescence lifetime imaging microscopy for brain tumor image-guided surgery //Journal of biomedical optics. - 2010. - T. 15. - №. 5. - C. 056022]. Недостатком этих устройств является отсутствие возможности дифференциации сигнала по длине волны, что не позволяет разделять собственную флуоресценцию тканей и флуоресценцию фотосенсибилизатора, что может привести к получению недостоверных результатов.Known diagnostic devices based on integrated CCD cameras, including an image intensifier, a CCD matrix and a built-in delay generator. Cameras with the fastest gate times of up to 200 ps and a delay step of 10 ps enable sub-nanosecond resolution FLIM. In combination with an endoscope, these devices are used for intraoperative diagnosis of brain tumors [Sun YN et al. Fluorescence lifetime imaging microscopy for brain tumor image-guided surgery //Journal of biomedical optics. - 2010. - T. 15. - no. 5. - C. 056022]. The disadvantage of these devices is the inability to differentiate the signal by wavelength, which does not allow separating the intrinsic fluorescence of tissues and the fluorescence of the photosensitizer, which can lead to unreliable results.

Технической задачей, решаемой данной изобретением, является создание диагностического устройства для оценки состава иммунокомпетентных клеток в опухолевой ткани спектрально-флуоресцентными методами с применением фотосенсибилизатора на основе хлорина е6, позволяющего проводить исследования различных органов и тканей как in vitro, так и in vivo, в том числе интраоперационно, и характеризовать состояния биологических тканей, отличающихся по фенотипу присутствующих в них макрофагов и степени их активности, с учетом различий между моноцитами (ТНР-1), неполяризованными «наивными» макрофагами (М0), провоспалительными макрофагами (M1), противовоспалительными макрофагами (М2), опухолевыми клетками, фибробластами кожи и сосудистой частью стромы опухоли для определения направления развития опухолевого процесса.The technical problem solved by this invention is the creation of a diagnostic device for assessing the composition of immunocompetent cells in the tumor tissue by spectral fluorescence methods using a photosensitizer based on chlorin e6, which makes it possible to study various organs and tissues both in vitro and in vivo, including intraoperatively, and to characterize the states of biological tissues that differ in the phenotype of the macrophages present in them and the degree of their activity, taking into account the differences between monocytes (THP-1), non-polarized "naive" macrophages (M0), pro-inflammatory macrophages (M1), anti-inflammatory macrophages (M2 ), tumor cells, skin fibroblasts and the vascular part of the tumor stroma to determine the direction of development of the tumor process.

Поставленная задача решается тем, что устройство для оценки состава иммунокомпетентных клеток в опухолевой ткани спектрально-флуоресцентными методами с применением фотосенсибилизатора на основе хлорина еб, включающее импульсный лазер, возбуждающий флуоресценцию накопившегося в биологической ткани фотосенсибнлизатора, систему определения и анализа кинетических характеристик флуоресцентного излучения и систему отображения информации, систему приема флуоресцентного излучения, которая дополнительно содержит многоволоконный оптический зонд для доставки возбуждающего лазерного излучения к исследуемому образцу и передачи обратно рассеянного лазерного и флуоресцентного излучения на вход системы регистрации излучения флуоресценции, систему регистрации излучения флуоресценции, которая дополнительно содержит систему оптических фильтров и полихроматор для спектрального разложения регистрируемых лазерного и флуоресцентного излучения, поступающих через оптоволоконный кабель на вход полихроматора, в спектрально разложенную полосу на оптическом выходе полихроматора, электронно-оптический преобразователь с фотокатодом, системой временной развертки в направлении, перпендикулярном спектрально разложенной полосе флуоресцентного сигнала, и люминесцентным экраном на выходе, CCD-камеру для регистрации картины, отображаемой на люминесцентным экране на выходе ЭОП, выход CCD-камеры связан со входом системы определения и анализа кинетических характеристик флуоресцентного излучения, устройство дополнительно содержит последовательно соединенные блок для суммирования экспоненциальных характеристических функций кинетики флуоресценции хлорина е6 в моноцитах ТНР-1, макрофагах М0, M1, М2 с регулируемыми весовыми коэффициентами и итерационной подгонки суммы к кинетическим характеристикам излучения фотосенсибилизатора путем вариации весовых коэффициентов, блок анализа и обработки весовых коэффициентов для получения из их соотношения информации о количественном содержании моноцитов ТНР-1, макрофагов М0, M1, М2, выход которого соединен со входом блока отображения информации персонального компьютера.The problem is solved by the fact that a device for assessing the composition of immunocompetent cells in a tumor tissue by spectral fluorescence methods using a photosensitizer based on chlorin eb, including a pulsed laser that excites the fluorescence of a photosensitizer accumulated in a biological tissue, a system for determining and analyzing the kinetic characteristics of fluorescent radiation and a display system information, a system for receiving fluorescent radiation, which additionally contains a multi-fiber optical probe for delivering exciting laser radiation to the test sample and transmitting backscattered laser and fluorescent radiation to the input of the fluorescence radiation detection system, a fluorescence radiation detection system, which additionally contains a system of optical filters and a polychromator for spectral decomposition of the registered laser and fluorescent radiation coming through the fiber optic cable to the input of the polychromator, in a spectrally decomposed band at the optical output of the polychromator, an electron-optical converter with a photocathode, a time base system in the direction perpendicular to the spectrally decomposed band of the fluorescent signal, and a luminescent screen at the output, a CCD camera for recording the picture displayed on the luminescent screen at the output of the image intensifier tube, output The CCD camera is connected to the input of the system for determining and analyzing the kinetic characteristics of fluorescent radiation, the device additionally contains a series-connected block for summing the exponential characteristic functions of the fluorescence kinetics of chlorin e6 in THP-1 monocytes, M0, M1, M2 macrophages with adjustable weight coefficients and iterative adjustment of the sum to the kinetic characteristics of the radiation of the photosensitizer by varying the weight coefficients, the block of analysis and processing of weight coefficients to obtain from their ratio information on the quantitative content of THP-1 monocytes, M0 macrophages , M1, M2, the output of which is connected to the input of the information display unit of the personal computer.

Предлагаемое устройство поясняется Фиг. 1 где:The proposed device is illustrated in Fig. 1 where:

1 - сенсибилизированная биологическая ткань,1 - sensitized biological tissue,

2 - импульсный лазер,2 - pulsed laser,

3 - система приема флуоресцентного излучения,3 - system for receiving fluorescent radiation,

4 - система регистрации флуоресцентного излучения,4 - fluorescent radiation registration system,

5 - система определения и анализа кинетических характеристик флуоресцентного излучения,5 - system for determining and analyzing the kinetic characteristics of fluorescent radiation,

6 - система отображения информации,6 - information display system,

7 - многоволоконный оптический зонд для доставки возбуждающего лазерного излучения импульсного лазера к исследуемому образцу и передачи обратно рассеянного лазерного и флуоресцентного излучения на вход системы регистрации излучения,7 - multifiber optical probe for delivering exciting laser radiation of a pulsed laser to the test sample and transmitting backscattered laser and fluorescent radiation to the input of the radiation detection system,

8 - система оптических фильтров,8 - system of optical filters,

9 - полихроматор для спектрального разложения лазерного и флуоресцентного излучения,9 - polychromator for spectral decomposition of laser and fluorescent radiation,

10 - электронно-оптический преобразователь,10 - electron-optical converter,

11 - CCD-камера,11 - CCD camera,

12 - блок для суммирования экспоненциальных характеристических функций кинетики флуоресценции хлорина е6 в моноцитах ТНР-1, макрофагах М0, M1, М2 с регулируемыми весовыми коэффициентами и итерационной подгонки суммы к кинетическим характеристик излучения фотосенсибилизатора,12 - a block for summing the exponential characteristic functions of the fluorescence kinetics of chlorin e6 in THP-1 monocytes, M0, M1, M2 macrophages with adjustable weight coefficients and iterative adjustment of the sum to the kinetic characteristics of the photosensitizer radiation,

13 - блок анализа и обработки весовых коэффициентов для получения из их соотношения информации о количественном содержании моноцитов ТНР-1, макрофагов М0, M1, М2.13 - block of analysis and processing of weight coefficients to obtain from their ratio information on the quantitative content of THP-1 monocytes, macrophages M0, M1, M2.

Предлагаемое устройство включает в себя импульсный лазер 2, к которому подсоединен входным концом одного из световодов многоволоконный оптический зонд 7 системы приема флуоресцентного излучения 3, дистальный конец зонда подведен к сенсибилизированной биологической ткани 1, систему регистрации флуоресцентного излучения 4, включающую приемные световоды многоволоконного оптического зонда, 7 систему оптических фильтров 8, полихроматор 9 для спектрального разложения лазерного и флуоресцентного излучения, электронно-оптический преобразователь 10, CCD-камеру 11, выход которой связан со входом системы 5 определения и анализа кинетических характеристик флуоресцентного излучения. Информация с выхода системы 5 через последовательно соединенные блок 12 для суммирования экспоненциальных характеристических функций кинетики флуоресценции хлорина е6 в моноцитах ТНР-1, макрофагах М0, M1, М2 с регулируемыми весовыми коэффициентами и итерационной подгонки суммы к кинетическим характеристик излучения фотосенсибилизатора и блок 13 анализа и обработки весовых коэффициентов для получения из их соотношения информации о количественном содержании моноцитов ТНР-1, макрофагов М0, M1, М2 поступает на вход системы отображения информации 6.The proposed device includes a pulsed laser 2, to which a multifiber optical probe 7 of the fluorescent radiation receiving system 3 is connected by the input end of one of the light guides, the distal end of the probe is connected to the sensitized biological tissue 1, a fluorescent radiation detection system 4, including receiving light guides of the multifiber optical probe, 7, a system of optical filters 8, a polychromator 9 for spectral decomposition of laser and fluorescent radiation, an electron-optical converter 10, a CCD camera 11, the output of which is connected to the input of the system 5 for determining and analyzing the kinetic characteristics of fluorescent radiation. Information from the output of system 5 through series-connected block 12 for summing the exponential characteristic functions of the fluorescence kinetics of chlorin e6 in TNP-1 monocytes, macrophages M0, M1, M2 with adjustable weight coefficients and iterative adjustment of the sum to the kinetic characteristics of the photosensitizer radiation and block 13 for analysis and processing weight coefficients to obtain from their ratio information on the quantitative content of THP-1 monocytes, macrophages M0, M1, M2 is fed to the input of the information display system 6.

Устройство для оценки поляризации макрофагов спектрально-флуоресцентными методами с применением фотосенсибилизатора хлорина е6 работает следующим образом.A device for assessing the polarization of macrophages by spectral fluorescence methods using the photosensitizer chlorin e6 works as follows.

Пациенту (или в эксперименте - лабораторному животному) предварительно вводят фотосенсибилизатор на основе хлорина е6. К сенсибилизированным биологическим тканям 1 подводят дистальный конец оптоволоконного многоволоконного зонда 7 системы приема флуоресцентного излучения 3, в одно из волокон которого из импульсного лазера 2 поступает импульсное излучение (длина волны 637 им, длительность импульса 67 пс), возбуждающее фотосенсибилизатор в биологической ткани.The patient (or in the experiment - a laboratory animal) is preliminarily injected with a photosensitizer based on chlorin e6. The distal end of the fiber-optic multifiber probe 7 of the fluorescent radiation receiving system 3 is brought to the sensitized biological tissues 1, one of the fibers of which from the pulsed laser 2 receives pulsed radiation (wavelength 637 nm, pulse duration 67 ps), which excites the photosensitizer in the biological tissue.

Излучение флуоресценции, возбуждаемой излучением импульсного лазера 2, собирают на входе дистальных концов оптических волокон многоволоконного оптического зонда 7 системы приема флуоресцентного излучения 3. Из противоположных концов оптических волокон это излучение поступает в систему регистрации флуоресцентного излучения 4 сначала в систему оптических фильтров 8, затем в полихроматор 9 для разложения лазерного и флуоресцентного излучения в спектрально-разложенную (разрешенную) полосу. Система оптических фильтров снижает интенсивность рассеянного назад лазерного излучения от 3 до 6 порядков, но не снижает интенсивности флуоресценции хлорина е6. Изображение спектрально-разложенной полосы поступает на фотокатод электронно-оптического преобразователя 10. В электронно-оптическом преобразователе осуществляется быстрая развертка изображения спектрально-разложенной полосы в направлении, перпендикулярном изображению полосы. Двумерная картина распределения электронов в электронно-оптическом преобразователе несет информацию о кинетических характеристиках каждого из участков спектра, эта картина в электронно-оптическом преобразователе усиливается. При попадании электронов на люминесцентный экран электронно-оптического преобразователя на его выходном экране формируется двумерная люминесцентная картина, пространственное распределение интенсивности в которой соответствует распределению сигнала флуоресценции фотосенсибилизатора в конкретной точке биологической ткани по спектру и времени (локальная кинетическая характеристика). Эта картина считывается CCD-камерой 11, информация с которой поступает на вход системы 5 определения и анализа кинетических характеристик флуоресцентного излучения фотосенсибилизатора в конкретной точке биологической ткани.The fluorescence radiation excited by the radiation of a pulsed laser 2 is collected at the input of the distal ends of the optical fibers of the multifiber optical probe 7 of the fluorescent radiation reception system 3. From the opposite ends of the optical fibers, this radiation enters the fluorescence radiation detection system 4, first into the optical filter system 8, then into the polychromator 9 for decomposing laser and fluorescent radiation into a spectrally decomposed (resolved) band. The system of optical filters reduces the intensity of backscattered laser radiation from 3 to 6 orders of magnitude, but does not reduce the fluorescence intensity of chlorin e6. The image of the spectrally decomposed band is fed to the photocathode of the electron-optical converter 10. In the electron-optical converter, the image of the spectrally decomposed band is rapidly scanned in the direction perpendicular to the image of the band. The two-dimensional picture of the distribution of electrons in the electron-optical converter carries information about the kinetic characteristics of each of the parts of the spectrum, this picture is enhanced in the electron-optical converter. When electrons hit the luminescent screen of the electron-optical converter, a two-dimensional luminescent pattern is formed on its output screen, the spatial intensity distribution in which corresponds to the distribution of the photosensitizer fluorescence signal at a specific point of the biological tissue over the spectrum and time (local kinetic characteristic). This picture is read by the CCD camera 11, the information from which is fed to the input of the system 5 for determining and analyzing the kinetic characteristics of the fluorescent radiation of the photosensitizer at a specific point in the biological tissue.

Авторами экспериментально установлены эталонные времена жизни флуоресценции хлорина е6 в моноцитах ТНР-1, макрофагах М0, M1, М2. Полученные из конкретной точки биологической ткани данные о кинетических характеристиках излучения фотосенсибилизатора поступают в блок 12 для суммирования экспоненциальных характеристических функций кинетики флуоресценции хлорина е6 в моноцитах ТНР-1, макрофагах М0, M1, М2 с регулируемыми весовыми коэффициентами и итерационной подгонки суммы к кинетическим характеристикам излучения фотосенсибилизатора. Соотношение весовых коэффициентов кинетик является оценкой количественного содержания моноцитов ТНР-1, макрофагов М0, M1, М2.The authors experimentally established the reference lifetimes of chlorin e6 fluorescence in THP-1 monocytes, M0, M1, and M2 macrophages. The data on the kinetic characteristics of the photosensitizer radiation obtained from a specific point of the biological tissue are sent to block 12 for summing the exponential characteristic functions of the fluorescence kinetics of chlorin e6 in THP-1 monocytes, macrophages M0, M1, M2 with adjustable weight coefficients and iterative adjustment of the sum to the kinetic characteristics of the photosensitizer radiation . The ratio of the weight coefficients of the kinetics is an assessment of the quantitative content of THP-1 monocytes, macrophages M0, M1, M2.

Таким образом, устройство для оценки состава иммунокомпетентных клеток в опухолевой ткани спектрально-флуоресцентными методами с применением фотосенсибилизатора хлорина е6 позволяет реализовать неинвазивный способ оценки направления развития опухолевого процесса. Данное устройство позволяет быстро получить комплексную оценку состояния ткани во время проведения хирургической операции или сеанса лазерно-индуцированной терапии для своевременной коррекции терапевтического или хирургического лечения.Thus, a device for assessing the composition of immunocompetent cells in tumor tissue by spectral fluorescence methods using the chlorin e6 photosensitizer makes it possible to implement a non-invasive method for assessing the direction of development of the tumor process. This device allows you to quickly obtain a comprehensive assessment of the state of the tissue during a surgical operation or a session of laser-induced therapy for the timely correction of therapeutic or surgical treatment.

Claims (1)

Устройство для оценки состава иммунокомпетентных клеток в опухолевой ткани спектрально-флуоресцентными методами с применением фотосенсибилизатора на основе хлорина е6, включающее импульсный лазер, возбуждающий флуоресценцию накопившегося в биологической ткани фотосенсибилизатора, систему определения и анализа кинетических характеристик флуоресцентного излучения и систему отображения информации, систему приема флуоресцентного излучения, которая дополнительно содержит многоволоконный оптический зонд для доставки возбуждающего лазерного излучения к исследуемому образцу и передачи обратно рассеянного лазерного и флуоресцентного излучения на вход системы регистрации излучения флуоресценции, систему регистрации излучения флуоресценции, которая дополнительно содержит систему оптических фильтров и полихроматор для спектрального разложения регистрируемых лазерного и флуоресцентного излучения, поступающих через оптоволоконный кабель на вход полихроматора, в спектрально разложенную полосу на оптическом выходе полихроматора, электронно-оптический преобразователь с фотокатодом, системой временной развертки в направлении, перпендикулярном спектрально разложенной полосе флуоресцентного сигнала, и люминесцентным экраном на выходе, CCD-камеру для регистрации картины, отображаемой на люминесцентном экране на выходе ЭОП, выход CCD-камеры связан с входом системы определения и анализа кинетических характеристик флуоресцентного излучения, устройство дополнительно содержит последовательно соединенные блок для суммирования экспоненциальных характеристических функций кинетики флуоресценции хлорина е6 в моноцитах ТНР-1, макрофагах М0, M1, М2 с регулируемыми весовыми коэффициентами и итерационной подгонки суммы к кинетическим характеристикам излучения фотосенсибилизатора путем вариации весовых коэффициентов, блок анализа и обработки весовых коэффициентов для получения из их соотношения информации о количественном содержании моноцитов ТНР-1, макрофагов М0, M1, М2, выход которого соединен с входом блока отображения информации персонального компьютера.A device for assessing the composition of immunocompetent cells in tumor tissue by spectral fluorescence methods using a photosensitizer based on chlorin e6, including a pulsed laser that excites fluorescence of the photosensitizer accumulated in biological tissue, a system for determining and analyzing the kinetic characteristics of fluorescent radiation and an information display system, a system for receiving fluorescent radiation , which additionally contains a multi-fiber optical probe for delivering exciting laser radiation to the sample under study and transmitting backscattered laser and fluorescent radiation to the input of the fluorescence radiation detection system, a fluorescence radiation detection system, which additionally contains a system of optical filters and a polychromator for spectral decomposition of the registered laser and fluorescence radiation coming through a fiber optic cable to the input of the polychromator, into the spectrally decomposed band at the opto output of the polychromator, an image intensifier tube with a photocathode, a time base system in the direction perpendicular to the spectrally decomposed band of the fluorescent signal, and a luminescent screen at the output, a CCD camera for recording the pattern displayed on the luminescent screen at the output of the image intensifier tube, the output of the CCD camera is connected with the input of the system for determining and analyzing the kinetic characteristics of fluorescent radiation, the device additionally contains a series-connected block for summing the exponential characteristic functions of the fluorescence kinetics of chlorin e6 in THP-1 monocytes, macrophages M0, M1, M2 with adjustable weight coefficients and iterative adjustment of the sum to the kinetic characteristics of radiation photosensitizer by varying weight coefficients, a block for analyzing and processing weight coefficients to obtain from their ratio information on the quantitative content of THP-1 monocytes, macrophages M0, M1, M2, the output of which is connected to the input home of the personal computer information display unit.
RU2021130338A 2021-06-01 Device for assessing the composition of immunocompetent cells in tumor tissue by spectral fluorescence methods using a photosensitizer based on chlorin e6 RU2775461C9 (en)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2775461C1 true RU2775461C1 (en) 2022-07-01
RU2775461C9 RU2775461C9 (en) 2022-10-05

Family

ID=

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014055960A1 (en) * 2012-10-05 2014-04-10 Genelux Corporation Energy absorbing-based diagnostic and therapeutic methods employing nucleic acid molecules encoding chromophore-producing enzymes
RU2641519C1 (en) * 2017-03-29 2018-01-17 Общество с ограниченной ответственностью "Медицинские видеосистемы" (ООО "МедВис") Method of quantitative estimation of photosensitizer concentration on video image in real time when conducting fluorescent research
US20200340999A1 (en) * 2015-08-28 2020-10-29 Captl Llc Multi-spectral microparticle-fluorescence photon cytometry
RU2743993C1 (en) * 2019-10-08 2021-03-01 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский университет ИТМО" (Университет ИТМО) Complex for the detection and targeted destruction of cells
RU203175U1 (en) * 2020-06-19 2021-03-24 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки федеральный исследовательский центр "Институт общей физики им. А.М. Прохорова Российской академии наук"(ИОФ РАН) VIDEO FLUORESCENCE DEVICE FOR ANALYSIS OF THE INTRATUAL DISTRIBUTION OF PHOTOSENSIBILIZERS OF THE FAR RED AND NEXT INFRARED RANGE OF MALIGNANT NAVIGATIONS OF THE HEAD AND NECK

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014055960A1 (en) * 2012-10-05 2014-04-10 Genelux Corporation Energy absorbing-based diagnostic and therapeutic methods employing nucleic acid molecules encoding chromophore-producing enzymes
US20200340999A1 (en) * 2015-08-28 2020-10-29 Captl Llc Multi-spectral microparticle-fluorescence photon cytometry
RU2641519C1 (en) * 2017-03-29 2018-01-17 Общество с ограниченной ответственностью "Медицинские видеосистемы" (ООО "МедВис") Method of quantitative estimation of photosensitizer concentration on video image in real time when conducting fluorescent research
RU2743993C1 (en) * 2019-10-08 2021-03-01 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский университет ИТМО" (Университет ИТМО) Complex for the detection and targeted destruction of cells
RU203175U1 (en) * 2020-06-19 2021-03-24 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки федеральный исследовательский центр "Институт общей физики им. А.М. Прохорова Российской академии наук"(ИОФ РАН) VIDEO FLUORESCENCE DEVICE FOR ANALYSIS OF THE INTRATUAL DISTRIBUTION OF PHOTOSENSIBILIZERS OF THE FAR RED AND NEXT INFRARED RANGE OF MALIGNANT NAVIGATIONS OF THE HEAD AND NECK

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Маклыгина Ю. С. Разработка спектрально-флуоресцентных методов диагностики и терапии глубокозалегающих опухолей мозга. Дисс. на соиск. уч. ст. кандидата физико-математических наук. М., 2019. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8068898B2 (en) Fluorescence lifetime spectrometer (FLS) and methods of detecting diseased tissues
Marcu Fluorescence lifetime techniques in medical applications
Mahadevan‐Jansen et al. Development of a fiber optic probe to measure NIR Raman spectra of cervical tissue in vivo
US4930516A (en) Method for detecting cancerous tissue using visible native luminescence
RU2288636C2 (en) Method and systems for detecting parameters and mapping of tissue lesions
US6922583B1 (en) Method for measuring tissue morphology
US6219566B1 (en) Method of measuring concentration of luminescent materials in turbid media
JP4870356B2 (en) Use of high wave number Raman spectroscopy to measure tissue
Crow et al. Optical diagnostics in urology: current applications and future prospects.
US5687730A (en) Apparatus for detecting the presence of abnormal tissue within a target tissue beneath the skin of a patient
EP0310662A1 (en) Photocharacterization and treatment of normal, abnormal and ectopic endometrium
JP5437864B2 (en) Operating method of pH measuring device, operating method of detecting device, operating method of biological material analyzing device, and each device
Schulmerich et al. Transcutaneous Raman spectroscopy of bone tissue using a non-confocal fiber optic array probe
Hibst et al. New approach on fluorescence spectroscopy for caries detection
US20110224512A1 (en) INTRACELLULAR pH IMAGING METHOD AND APPARATUS USING FLURESCENCE LIFETIME
RU2775461C1 (en) Device for assessing the composition of immunocompetent cells in tumor tissue by spectral fluorescence methods using a photosensitizer based on chlorin e6
RU2775461C9 (en) Device for assessing the composition of immunocompetent cells in tumor tissue by spectral fluorescence methods using a photosensitizer based on chlorin e6
Müller et al. A reflectance spectrofluorimeter for real-time spectral diagnosis of disease
Schulmerich et al. Transcutaneous Raman spectroscopy of bone global sampling and ring/disk fiber optic probes
Popenda et al. Fluorescence lifetime measurements with all-fiber optical setup for non-invasive in-vivo diagnostics
EP2228003A1 (en) Multifunctional endoscopic device and methods employing said device
Fitzmaurice et al. Raman spectroscopy: development of clinical applications for breast cancer diagnosis
RU2088156C1 (en) Automation device for setting oncological diagnoses
König New developments in multimodal clinical multiphoton tomography
Katika et al. In vivo time-resolved autofluorescence measurements on human skin