RU2774370C2 - Selective nutrient medium for isolating malassezia furfur fungi - Google Patents
Selective nutrient medium for isolating malassezia furfur fungi Download PDFInfo
- Publication number
- RU2774370C2 RU2774370C2 RU2020116304A RU2020116304A RU2774370C2 RU 2774370 C2 RU2774370 C2 RU 2774370C2 RU 2020116304 A RU2020116304 A RU 2020116304A RU 2020116304 A RU2020116304 A RU 2020116304A RU 2774370 C2 RU2774370 C2 RU 2774370C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- furfur
- fungi
- nutrient medium
- medium
- fluconazole
- Prior art date
Links
- 241000555688 Malassezia furfur Species 0.000 title claims abstract description 61
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 45
- 229960004884 fluconazole Drugs 0.000 claims abstract description 24
- RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N Fluconazole Chemical compound C1=NC=NN1CC(C=1C(=CC(F)=CC=1)F)(O)CN1C=NC=N1 RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims abstract description 20
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000002609 media Substances 0.000 abstract description 71
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 abstract description 26
- 241000555676 Malassezia Species 0.000 abstract description 19
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 abstract description 8
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 abstract description 8
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 abstract description 8
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N Oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 abstract description 7
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 abstract description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 abstract description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 abstract description 5
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 abstract description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 abstract description 5
- HMFKFHLTUCJZJO-UHFFFAOYSA-N 2-{2-[3,4-bis(2-hydroxyethoxy)oxolan-2-yl]-2-(2-hydroxyethoxy)ethoxy}ethyl dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OCCOCC(OCCO)C1OCC(OCCO)C1OCCO HMFKFHLTUCJZJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 abstract description 4
- 229940045184 Malt extract Drugs 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-UMZBRFQRSA-N 4-[(3R,5S,7R,12S)-3,7,12-trihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoic acid Chemical class C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CCC1(C)C1C2C2CCC(C(CCC(O)=O)C)C2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-UMZBRFQRSA-N 0.000 abstract 1
- 229940093761 Bile Salts Drugs 0.000 abstract 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N Chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 abstract 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 11
- 241000222173 Candida parapsilosis Species 0.000 description 9
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 9
- 241001291474 Malassezia globosa Species 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-YOLKTULGSA-N Maltose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@H]1CO)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-YOLKTULGSA-N 0.000 description 4
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 description 4
- 230000002538 fungal Effects 0.000 description 4
- 201000003928 fungal infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 229940095731 Candida albicans Drugs 0.000 description 3
- 229940055022 Candida parapsilosis Drugs 0.000 description 3
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 3
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N Taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic Effects 0.000 description 3
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 3
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 206010007134 Candida infection Diseases 0.000 description 2
- 206010017523 Fungaemia Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 208000006641 Skin Disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial Effects 0.000 description 2
- 230000001857 anti-mycotic Effects 0.000 description 2
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 231100000533 low birth weight Toxicity 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 235000006180 nutrition needs Nutrition 0.000 description 2
- 235000016236 parenteral nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000009117 preventive therapy Methods 0.000 description 2
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 2-stearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CNGYZEMWVAWWOB-VAWYXSNFSA-N 5-[[4-anilino-6-[bis(2-hydroxyethyl)amino]-1,3,5-triazin-2-yl]amino]-2-[(E)-2-[4-[[4-anilino-6-[bis(2-hydroxyethyl)amino]-1,3,5-triazin-2-yl]amino]-2-sulfophenyl]ethenyl]benzenesulfonic acid Chemical compound N=1C(NC=2C=C(C(\C=C\C=3C(=CC(NC=4N=C(N=C(NC=5C=CC=CC=5)N=4)N(CCO)CCO)=CC=3)S(O)(=O)=O)=CC=2)S(O)(=O)=O)=NC(N(CCO)CCO)=NC=1NC1=CC=CC=C1 CNGYZEMWVAWWOB-VAWYXSNFSA-N 0.000 description 1
- 240000008923 Camelina sativa Species 0.000 description 1
- 229940041514 Candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 241000436311 Candida orthopsilosis Species 0.000 description 1
- 229960005091 Chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- 241001508813 Clavispora lusitaniae Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 229960003624 Creatine Drugs 0.000 description 1
- 229940109239 Creatinine Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000007163 Dermatomycosis Diseases 0.000 description 1
- 206010064687 Device related infection Diseases 0.000 description 1
- 206010016936 Folliculitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241001178059 Malasseziaceae Species 0.000 description 1
- 230000036740 Metabolism Effects 0.000 description 1
- 210000004400 Mucous Membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 241000235343 Saccharomycetales Species 0.000 description 1
- 206010042938 Systemic candida Diseases 0.000 description 1
- 208000007712 Tinea Versicolor Diseases 0.000 description 1
- 206010056131 Tinea versicolour Diseases 0.000 description 1
- 229940045136 Urea Drugs 0.000 description 1
- 229940029983 VITAMINS Drugs 0.000 description 1
- 229940021016 Vitamin IV solution additives Drugs 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungals Drugs 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 200000000017 bloodstream infection Diseases 0.000 description 1
- 238000000339 bright-field microscopy Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 229960000539 carbamide Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 1
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine zwitterion Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 201000004624 dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000406 dermatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000009112 empiric therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000007403 mPCR Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000035786 metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial Effects 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 1
- 201000009179 neonatal candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 201000000508 pityriasis versicolor Diseases 0.000 description 1
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M potassium hydroxide Inorganic materials [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 229920002973 ribosomal RNA Polymers 0.000 description 1
- 238000007480 sanger sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000006163 transport media Substances 0.000 description 1
- 238000005429 turbidity Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamins Natural products 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, клинической микробиологии, в частности к микологии, и может использоваться для выделения дрожжевых грибов вида Malassezia furfur (M.furfur) из клинического материала различных типов, что необходимо для корректной диагностики заболеваний, вызванных M.furfur. Кроме того, изобретение может быть полезно в научно-исследовательских целях при изучении грибов M.furfur.The invention relates to the field of biotechnology, clinical microbiology, in particular to mycology, and can be used to isolate yeast fungi of the species Malassezia furfur (M.furfur) from various types of clinical material, which is necessary for the correct diagnosis of diseases caused by M.furfur. In addition, the invention may be useful for research purposes in the study of mushrooms M.furfur.
Грибковые заболевания широко распространены среди иммуносупрессивных пациентов, в особенности у глубоконедоношенных новорожденных с очень низкой (ОНМТ) и экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) при рождении. Тенденции к уменьшению заболеваемости микозами в настоящее время не отмечается [1]. Естественные обитатели кожных покровов, с которыми обычно ассоциированы грибковые заболевания кожи, стали выступать как внутрибольничные возбудители системных микозов [3], [4]. К числу таких возбудителей относят дрожжевые грибы рода Malassezia из семейства Malasseziaceae, ранее известные как Pityrosporum. Большинство видов Malassezia являются диморфными грибами, которые способны существовать в дрожжевой и мицеллярной формах. В культуре in vitro преобладает дрожжевая форма, но у некоторых видов образуются гифы. Грибы рода Malassezia могут расти в аэробных, микроаэрофильных и анаэробных условиях, формировать биопленки на поверхностях различных материалов, что особенно актуально в условиях отделения реанимации и интенсивной терапии, поскольку пребывание в стационарах данного профиля сопряжено с проведением большого количества инвазивных процедур, использованием сосудистых катетеров и искусственных имплантов [5]. Различные виды Malassezia выделяют в составе нормальной микрофлоры человека и некоторых теплокровных животных, но они могут являться и причиной грибковых заболеваний [1], [6]. Такие заболевания кожи, как отрубевидный лишай, фолликулит, себорейный и атонический дерматиты, распространены повсеместно, и ведущая роль в их этиологии принадлежит Malassezia [2].Fungal diseases are widespread among immunosuppressed patients, especially in very preterm infants with very low birth weight (VLBW) and extremely low body weight (ELBW) at birth. There is currently no trend towards a decrease in the incidence of mycoses [1]. Natural inhabitants of the skin, with which fungal skin diseases are usually associated, began to act as nosocomial pathogens of systemic mycoses [3], [4]. These pathogens include yeast fungi of the genus Malassezia from the family Malasseziaceae, formerly known as Pityrosporum. Most Malassezia species are dimorphic fungi that can exist in both yeast and micellar forms. In in vitro culture, the yeast form predominates, but hyphae form in some species. Mushrooms of the genus Malassezia can grow in aerobic, microaerophilic and anaerobic conditions, form biofilms on the surfaces of various materials, which is especially important in the conditions of the intensive care unit and intensive care, since staying in hospitals of this profile is associated with a large number of invasive procedures, the use of vascular catheters and artificial implants [5]. Various species of Malassezia are isolated as part of the normal microflora of humans and some warm-blooded animals, but they can also be the cause of fungal diseases [1], [6]. Skin diseases such as pityriasis versicolor, folliculitis, seborrheic and atonic dermatitis are ubiquitous, and Malassezia plays a leading role in their etiology [2].
В мировой литературе описаны случаи фунгемии, вызванной M.furfur, у пациентов с иммунодефицитом: взрослых и детей [3], [4].The world literature describes cases of fungemia caused by M. furfur in patients with immunodeficiency: adults and children [3], [4].
Основным фактором риска фунгемии, ассоциированной с M.furfur, у иммуносупрессивных пациентов является проведение парентерального питания липидными растворами. Это связано с особенностями метаболизма гриба, для поддержания жизнедеятельности которого необходимы липиды [9], [10]. Наиболее вероятным источником инфицирования центральных венозных катетеров M.furfur является колонизированная кожа [6].The main risk factor for fungemia associated with M. furfur in immunosuppressed patients is parenteral nutrition with lipid solutions. This is due to the peculiarities of the metabolism of the fungus, which requires lipids to maintain its vital activity [9], [10]. The most likely source of M. furfur central venous catheter infection is colonized skin [6].
Роль M.furfur в возникновении гематогенной грибковой инфекции у иммуносупрессивных пациентов, таких как онкологические больные, пациенты хирургического профиля, новорожденные с ОНМТ и ЭНМТ при рождении, остается во многом недооцененной [3], [4].The role of M. furfur in the occurrence of hematogenous fungal infection in immunosuppressed patients, such as cancer patients, surgical patients, newborns with VLBW and ELBW at birth, remains largely underestimated [3], [4].
Колонизация кожи новорожденных M.furfur может происходить уже в родовспомогательном учреждении [8], [11]. Контакт с родителями и медицинским персоналом способствует колонизации и, как следствие, развитию инфекции у детей. В связи с этим актуальным представляется проведение динамического микробиологического контроля за колонизацией M.furfur новорожденных, находящихся на лечении в отделениях хирургии, реанимации и интенсивной терапии. В отделениях хирургии, реанимации и интенсивной терапии новорожденных (ОРИТН) для профилактики генерализованной грибковой инфекции используют антимикотические препараты, в частности флуконазол. Известно, что длительное использование противомикробных препаратов, в том числе противогрибковых, способствует селекции штаммов микроорганизмов с высоким уровнем резистентности. Селекция штаммов с высоким уровнем устойчивости распространяется и на малассезию. Учитывая особенности пациентов отделений реанимации и хирургии новорожденных (незрелость иммунной системы, низкая масса тела, длительное парентеральное питание через ЦВК) велика вероятность колонизации кожных покровов, слизистых оболочек и центральных венозных катетеров дрожжевыми грибами разной природы (грибами родов Candida, Malassezia), часто имеющей смешенный характер. В связи с этим представляется актуальным проведение динамического микробиологического контроля за колонизацией M.furfur новорожденных, особенно своевременная индикация штаммов с высоким уровнем МПК к флуконазолу (мониторинг нарастания резистентности).Colonization of the skin of newborn M. furfur can occur already in the obstetric institution [8], [11]. Contact with parents and medical personnel promotes colonization and, as a result, the development of infection in children. In this regard, dynamic microbiological monitoring of M.furfur colonization of newborns treated in the departments of surgery, resuscitation and intensive care seems to be relevant. In the departments of surgery, resuscitation and intensive care of newborns (NICU), antimycotic drugs, in particular fluconazole, are used to prevent a generalized fungal infection. It is known that long-term use of antimicrobials, including antifungals, promotes the selection of strains of microorganisms with a high level of resistance. The selection of strains with a high level of resistance extends to Malassesia. Given the characteristics of patients in intensive care units and neonatal surgery (immaturity of the immune system, low body weight, long-term parenteral nutrition through the CVC), there is a high probability of colonization of the skin, mucous membranes and central venous catheters by yeast fungi of various nature (fungi of the genera Candida, Malassezia), often with a mixed character. In this regard, it seems relevant to conduct a dynamic microbiological control over the colonization of M. furfur in newborns, especially the timely indication of strains with a high level of MIC to fluconazole (monitoring the increase in resistance).
Существует ряд трудностей, связанных с культивированием M.furfur. В исследовании Ершова П.П. [12] приведены сведения о питательных потребностях грибов рода Malassezia и условиях для их культивирования. Показано, что для роста грибов рода Malassezia необходимо наличие в питательной среде жирных кислот с длиной цепи C12-C24, которые грибы рода Malassezia не способны синтезировать самостоятельно. За исключением потребности в липидах, грибы рода Malassezia не нуждаются в микроэлементах, витаминах, электролитах, не способны ферментировать сахара. В качестве единственного источника азота они используют соли аммония. Также дрожжи успешно ассимилируют мочевину, креатин, креатинин, практически все аминокислоты, за исключением цистеина. У грибов рода Malassezia отсутствует потребность в углеводах, а в качестве единственного источника углерода могут выступать липиды. Для культуральной диагностики грибов рода Malassezia различными авторами предложен ряд питательных сред. Наилучшие ростовые свойства проявила среда Леминга - Нотмана (Leeming & Notman), в состав которой входит бактериологический пептон, глюкоза, дрожжевой экстракт, бычья желчь, глицерол, глицерола моностеарат, твин-60, цельное коровье молоко и агар-агар. Температурный оптимум культивирования посевов составлял 34°С, срок культивирования 14 суток. Многие авторы используют в своих исследованиях для выделения грибов рода Malassezia модифицированную среду Диксона. В состав среды входят мальтозный экстракт, пептон, бычья желчь, Твин-40, глицерин, олеиновая кислота и агар-агар. Температура культивирования - 32-37°С. В настоящее время предложено несколько питательных сред для культивирования грибов рода Malassezia, однако нет единого мнения, какая из них является оптимальной для рутинных диагностических исследований. Немаловажным фактором для повседневной диагностической практики является доступность среды, простота изготовления, стабильность ее состава.There are a number of difficulties associated with the cultivation of M. furfur. In the study of Ershov P.P. [12] provides information on the nutritional needs of fungi of the genus Malassezia and the conditions for their cultivation. It has been shown that the growth of fungi of the genus Malassezia requires the presence in the nutrient medium of fatty acids with a chain length of C12-C24, which fungi of the genus Malassezia are unable to synthesize on their own. With the exception of the need for lipids, the Malassezia genus does not need trace elements, vitamins, electrolytes, and is not capable of fermenting sugars. They use ammonium salts as the sole source of nitrogen. Yeast also successfully assimilate urea, creatine, creatinine, almost all amino acids, with the exception of cysteine. Mushrooms of the genus Malassezia have no need for carbohydrates, and lipids can act as the only source of carbon. For the cultural diagnosis of fungi of the genus Malassezia, various authors have proposed a number of nutrient media. The best growth properties were shown by Leeming & Notman medium, which includes bacteriological peptone, glucose, yeast extract, ox bile, glycerol, glycerol monostearate, tween-60, whole cow's milk and agar-agar. The optimum temperature for the cultivation of crops was 34°C, the cultivation period was 14 days. Many authors use Dixon's modified medium in their studies to isolate fungi of the genus Malassezia. The composition of the medium includes maltose extract, peptone, ox bile, Tween-40, glycerin, oleic acid and agar-agar. The cultivation temperature is 32-37°C. Currently, several nutrient media for the cultivation of fungi of the genus Malassezia have been proposed, but there is no consensus on which of them is optimal for routine diagnostic studies. An important factor for everyday diagnostic practice is the availability of the medium, ease of manufacture, and the stability of its composition.
Из-за особенностей метаболизма (в качестве единственного источника энергии использует липиды) M.furfur не растет на обычных средах для культивирования грибов, так как такие среды не отвечают ее питательным потребностям. В частности, на среде Сабуро M.furfur дает едва заметный рост колоний, что в совокупности с возможным ростом других грибов на этой среде делает выделение M.furfur практически невозможным [13], [14]. Другая широко используемая в клинической микробиологии питательная среда, среда Диксона, подходит для выделения M.furfur, так как отвечает всем потребностям данного гриба [13], [15], но не подавляет рост других дрожжевых грибов.Due to its metabolic nature (using lipids as its sole source of energy), M. furfur does not grow on conventional mushroom culture media, as such media do not meet its nutritional needs. In particular, on the Sabouraud medium, M. furfur gives a barely noticeable growth of colonies, which, together with the possible growth of other fungi on this medium, makes the isolation of M. furfur almost impossible [13], [14]. Another nutrient medium widely used in clinical microbiology, Dixon's medium, is suitable for the isolation of M. furfur, as it meets all the needs of this fungus [13], [15], but does not inhibit the growth of other yeast fungi.
В качестве наиболее близкого аналога принята питательная среда Диксона, содержащая мальтозный экстракт, пептон, бычью желчь, твин-40, глицерин, олеиновую кислоту и агар-агар.Dixon's nutrient medium containing maltose extract, peptone, ox bile, tween-40, glycerin, oleic acid and agar-agar was taken as the closest analogue.
Таким образом, существующие питательные среды для культивирования грибов либо не адаптированы для выделения M.furfur, либо адаптированы, но не являются селективными и не способны подавлять рост других дрожжевых грибов, что затрудняет диагностику микозов. Данные о наличии селективных сред для выделения грибов M.furfur не найдены. В связи с этим является актуальной разработка питательной среды, селективной для выделения грибов вида M.furfur, особенно с высоким уровнем резистентности к флуконазолу.Thus, the existing nutrient media for the cultivation of fungi are either not adapted for the isolation of M. furfur, or adapted, but are not selective and are not able to inhibit the growth of other yeast fungi, which makes it difficult to diagnose mycoses. Data on the presence of selective media for the isolation of M.furfur fungi were not found. In this regard, it is important to develop a nutrient medium that is selective for the isolation of fungi of the M.furfur species, especially those with a high level of resistance to fluconazole.
Технической проблемой, которая решается заявленным изобретением, является создание питательной среды, обеспечивающей эффективное селективное выделение M.furfur из клинического материала различных типов при ингибировании роста других дрожжевых грибов.The technical problem that is solved by the claimed invention is the creation of a nutrient medium that ensures efficient selective isolation of M. furfur from various types of clinical material while inhibiting the growth of other yeast fungi.
Указанная техническая проблема решается следующим образом.This technical problem is solved as follows.
Заявленное изобретение представляет собой селективную питательную среду для выделения грибов вида M.furfur, готовую к использованию и разлитую в чашки Петри. За основу разработанной среды взята среда Диксона, к которой добавлен антимикотический препарат флуконазол, подавляющий рост большинства дрожжевых грибов, культивируемых на среде, однако данный препарат не ингибирует рост клинических изолятов M.furfur, имеющих на фоне профилактического применения флуконазола высокий уровень минимальной подавляющей концентрации (МПК) к этому препарату. Таким образом, на предлагаемой питательной среде устойчивая к флуконазолу M.furfur успешно культивируется, а другие дрожжевые грибы, чувствительные к флуконазолу, не растут.The claimed invention is a selective nutrient medium for the isolation of mushrooms of the M.furfur species, ready for use and poured into Petri dishes. The developed medium was based on Dixon's medium, to which the antimycotic drug fluconazole was added, which inhibits the growth of most yeasts cultivated on the medium, but this drug does not inhibit the growth of M. furfur clinical isolates, which have a high level of minimum inhibitory concentration (MIC) against the background of prophylactic use of fluconazole ) to this drug. Thus, on the proposed nutrient medium, fluconazole-resistant M.furfur is successfully cultivated, while other fluconazole-sensitive yeasts do not grow.
Для проверки возможности выявления клинических изолятов M.furfur с помощью предлагаемой селективной среды использованы штаммы, выделенные от пациентов ОРИТН и контрольный штамм М. furfur (АТСС 14521), с низким значением МПК к флуконазолу (отрицательный контроль).To test the possibility of detecting clinical isolates of M. furfur using the proposed selective medium, strains isolated from ICU patients and a control strain of M. furfur (ATCC 14521) with a low MIC value for fluconazole (negative control) were used.
На основании собственных данных, полученных при исследовании МПК флуконазола 28 клинических изолятов M.furfur, выделенных у новорожденных (МПК >256 мкг/мл), и данных литературы о резистентности M.furfur [16], а также прочих дрожжевых грибов (минимальная ингибирующая концентрация флуконазола, преимущественно не превышает значения 32 мкг/мл) определена оптимальная концентрация флуконазола, которая подавляет рост большинства дрожжевых грибов и не препятствует росту клинических изолятов М. furfur. Эффективность предлагаемой концентрации флуконазола (32 мг/л) была показана экспериментальным путем при исследовании образцов биоматериала, полученного от новорожденных. Таким образом, предметом изобретения является селективная питательная среда.Based on our own data obtained in the study of fluconazole MICs of 28 clinical isolates of M. furfur isolated from newborns (MIC > 256 μg / ml), and literature data on the resistance of M. furfur [16], as well as other yeast fungi (minimum inhibitory concentration fluconazole, mainly does not exceed 32 μg/ml), the optimal concentration of fluconazole was determined, which inhibits the growth of most yeast fungi and does not prevent the growth of clinical isolates of M. furfur. The effectiveness of the proposed concentration of fluconazole (32 mg/l) was shown experimentally in the study of biomaterial samples obtained from newborns. Thus, the subject of the invention is a selective nutrient medium.
Состав предлагаемой питательной среды:The composition of the proposed nutrient medium:
- экстракт солода - 3,6%;- malt extract - 3.6%;
- пептон - 0,6%;- peptone - 0.6%;
- соли желчных кислот - 2,0%;- salts of bile acids - 2.0%;
- твин 40 - 1,0%;- twin 40 - 1.0%;
- глицерол - 0,2%;- glycerol - 0.2%;
- олеиновая кислота - 0,2%;- oleic acid - 0.2%;
- агар-агар - 1,2%;- agar-agar - 1.2%;
- левомицетин - 0,08%;- chloramphenicol - 0.08%;
- флуконазол - 32 мг/л;- fluconazole - 32 mg/l;
- рН - 5,8-6,1.- pH - 5.8-6.1.
Техническим результатом, достигаемым при использовании заявленного изобретения, является простота и надежность эффективного и селективного выделения дрожжевых грибов вида M.furfur из клинического материала различных типов на фоне ингибирования роста других дрожжевых грибов, что способствует корректной диагностике заболеваний, обусловленных M.furfur.The technical result achieved by using the claimed invention is the simplicity and reliability of efficient and selective isolation of M. furfur yeast fungi from various types of clinical material against the background of growth inhibition of other yeast fungi, which contributes to the correct diagnosis of diseases caused by M. furfur.
Рекомендуемый порядок приготовления среды.Recommended procedure for preparing the medium.
Готовая питательная среда автоклавируется 30 минут при температуре 121°С. Флуконазол добавляется в питательную среду в виде стерильного водного раствора после ее автоклавирования и охлаждения до температуры 55°С. Питательная среда перемешивается и разливается по чашкам Петри диаметром 90 мм, высота слоя среды: 4-5 мм.Ready nutrient medium is autoclaved for 30 minutes at a temperature of 121°C. Fluconazole is added to the nutrient medium in the form of a sterile aqueous solution after it is autoclaved and cooled to a temperature of 55°C. The nutrient medium is mixed and poured into Petri dishes with a diameter of 90 mm, the height of the medium layer: 4-5 mm.
Хранение готовой среды в чашке Петри: 2 месяца при температуре 4-8°С.Storage of the prepared medium in a Petri dish: 2 months at 4-8°C.
Использование изобретения осуществляется следующим образом. The use of the invention is as follows.
На поверхность питательной среды в чашке Петри наносится образец биологического материала, взятый из предполагаемого очага инфекции. Чашку с засеянным биологическим материалом помещают в инкубатор при температуре 37°С на 48 часов. После инкубирования выросшие колонии оценивают визуально. На данной питательной среде колонии M.furfur более крупные, чем на среде Сабуро. Колонии гриба кремового цвета и с поверхности агара снимаются целиком, как капля застывшего воска. После визуального осмотра проводят микроскопическое исследование. К исследуемому образцу выросшей на агаре культуры, нанесенному на предметное стекло, добавляют одну каплю 20% раствора КОН и, если необходимо, 1 каплю раствора калькофлуора белого, покрывают покровным стеклом, слегка фиксируют подогрев на спиртовке или оставляют на воздухе на 30-40 минут. Просматривают препарат сначала методом светлопольной микроскопии, а затем, при необходимости, в ультрафиолетовом свете, используя специально подобранные возбуждающий и барьерный фильтры. Колонии M.furfur состоят из почкующихся дрожжевых клеток эллиптической формы с монополярным почкованием. Истинный мицелий отсутствует. Элементы гриба флуоресцируют желто-зеленым или голубовато-белым светом (в зависимости от сочетания фильтров) на тусклом красноватом фоне. При необходимости для видовой идентификации применяют метод биохимической идентификации с помощью бактериологического анализатора, например, Vitek-2 Compact (BioMerieux, Франция), а также метод секвенирования по Сенгеру видоспецифического участка 26S рРНК.A sample of biological material taken from the alleged source of infection is applied to the surface of the nutrient medium in a Petri dish. The cup with the inoculated biological material is placed in an incubator at a temperature of 37°C for 48 hours. After incubation, the grown colonies are evaluated visually. On this nutrient medium colonies of M. furfur are larger than on Sabouraud's medium. Colonies of the fungus are cream-colored and are removed entirely from the surface of the agar, like a drop of hardened wax. After a visual inspection, a microscopic examination is carried out. One drop of a 20% KOH solution and, if necessary, 1 drop of a white calcofluor solution are added to the test sample grown on agar, applied to a glass slide, covered with a cover slip, slightly heated on a spirit lamp or left in air for 30-40 minutes. The preparation is examined first by bright-field microscopy and then, if necessary, in ultraviolet light, using specially selected excitation and barrier filters. M. furfur colonies consist of elliptical budding yeast cells with monopolar budding. True mycelium is absent. Mushroom elements fluoresce with yellow-green or bluish-white light (depending on the combination of filters) against a dull reddish background. If necessary, for species identification, a biochemical identification method is used using a bacteriological analyzer, for example, Vitek-2 Compact (BioMerieux, France), as well as the Sanger sequencing method of the species-specific 26S rRNA region.
Достижение указанного технического результата подтверждается следующими примерами.The achievement of the specified technical result is confirmed by the following examples.
ПРИМЕР 1EXAMPLE 1
Проверка ростовых свойств питательной среды на контрольных штаммах М. furfur (АТСС 14521), Candida albicans (АТСС 10231), Candidaparapsilosis (АТСС 22019) и клинических изолятах М. furfur, Malassezia globosa.Checking the growth properties of the nutrient medium on control strains of M. furfur (ATCC 14521), Candida albicans (ATCC 10231), Candidaparapsilosis (ATCC 22019) and clinical isolates of M. furfur, Malassezia globosa.
Исследования проводили при концентрации флуконазола в готовой питательной среде 32 мг/л. Флуконазол разводили в диметилсульфоксиде, ранее речь шла о водном растворе. Готовили 600 мл среды. Для эксперимента использовали суспензии исследуемых штаммов грибов в физиологическом растворе (инокулюм) с конечной концентрацией 106 КОЕ/мл.The studies were carried out at a concentration of fluconazole in the prepared nutrient medium of 32 mg/l. Fluconazole was diluted in dimethyl sulfoxide, previously it was an aqueous solution. Prepared 600 ml of medium. Suspensions of the fungal strains under study in physiological saline (inoculum) with a final concentration of 106 CFU/ml were used for the experiment.
Проводили посевы штаммов как указано в таблице 1 Проверка ростовых свойств питательной среды с использованием контрольных штаммов дрожжевых грибов (M.furfur (АТСС 14521), Candida albicans (АТСС 10231), Candida parapsilosis (АТСС 22019)) и клинических изолятов M.furfur, Malassezia globosaThe strains were inoculated as indicated in Table 1. Checking the growth properties of the nutrient medium using control yeast strains (M. furfur (ATCC 14521), Candida albicans (ATCC 10231), Candida parapsilosis (ATCC 22019)) and clinical isolates of M. furfur, Malassezia globosa
Методика посева:Seeding method:
- для каждого штамма в стерильном физиологическом растворе готовили суспензию мутностью 0,5 по стандарту МакФарланда, соответствующую концентрации дрожжей 106 КОЕ/мл;- for each strain in sterile saline, a suspension was prepared with a turbidity of 0.5 according to the McFarland standard, corresponding to a yeast concentration of 10 6 CFU/ml;
- посев проводили путем переноса 0,5-1 мл суспензии в чашку Петри, равномерно распределяли по поверхности агара и удаляли избыток суспензии;- sowing was carried out by transferring 0.5-1 ml of the suspension into a Petri dish, evenly distributed over the surface of the agar and removing the excess of the suspension;
- инкубировали культуры в аэробных условиях в термостате при температуре 35±2°С, в течение 48 часов;- cultures were incubated under aerobic conditions in a thermostat at a temperature of 35±2°C for 48 hours;
- визуально оценивали рост штаммов грибов на питательной среде;- visually assessed the growth of fungal strains on a nutrient medium;
- параллельно была высеяна смесь штаммов: M.furfur клинический изолят №82, Candida albicans (С.albicans) (АТСС 10231) и Candida parapsilosis (С.parapsilosis) (АТСС 22019) в разведении 106 КОЕ/мл стандартной пластиковой петлей.- in parallel, a mixture of strains was sown: M. furfur clinical isolate No. 82, Candida albicans (C. albicans) (ATCC 10231) and Candida parapsilosis (C. parapsilosis) (ATCC 22019) at a dilution of 10 6 CFU / ml with a standard plastic loop.
Среда является эффективной, если она способна ингибировать рост контрольных штаммов С.albicans (АТСС 10231) и С.parapsilosis (АТСС 22019), а также способна обеспечивать появление видимого невооруженным глазом роста колоний M.furfur.The medium is effective if it is capable of inhibiting the growth of control strains of C. albicans (ATCC 10231) and C. parapsilosis (ATCC 22019) and is also capable of producing M. furfur colony growth visible to the naked eye.
Результаты эксперимента представлены в таблице № 2 Результаты оценки ростовых свойств питательной среды с использованием контрольных штаммов дрожжевых грибов (M.furfur (АТСС 14521), С.albicans (АТСС 10231), С.parapsilosis (АТСС 22019) и клинических изолятов M.furfur и Malassezia globosa.The results of the experiment are presented in Table No. 2. The results of evaluating the growth properties of the nutrient medium using control yeast strains (M. furfur (ATCC 14521), C. albicans (ATCC 10231), C. parapsilosis (ATCC 22019) and clinical isolates of M. furfur and Malassezia globosa.
Из таблицы № 2 следует, что через 48 часов культивирования на испытуемой среде выросли все десять (100,0%) клинических изолятов M.furfur. Исключение составил контрольный штамм M.furfur (АТСС 14521). Malassezia globosa (M.globosa) и дрожжевые грибы рода Candida: С.albicans (АТСС 10231) и С.parapsilosis (АТСС 22019) на предлагаемой питательной среде не выросли. Отсутствие роста контрольного штамма M.furfur (АТСС 14521) можно объяснить его чувствительностью к флуконазолу (в ходе исследования установлено, что МПК штамма составляет 2 мкг/мл). Указанный штамм может использоваться как отрицательный контроль для предлагаемой среды и для оценки ее стабильности. Таким образом, эксперимент продемонстрировал ингибирующий эффект питательной среды с концентрацией флуконазола 32 мг/л в отношении M.globosa и наиболее частых возбудителей кандидозной инфекции, а также подтвердил высокую эффективность ее использования для селективного выделения клинических изолятов M.furfur.From Table 2 it follows that after 48 hours of cultivation on the test medium, all ten (100.0%) clinical isolates of M. furfur grew. The exception was the control strain M.furfur (ATCC 14521). Malassezia globosa (M.globosa) and yeast fungi of the genus Candida: C.albicans (ATCC 10231) and C.parapsilosis (ATCC 22019) did not grow on the proposed nutrient medium. The lack of growth of the control strain M. furfur (ATCC 14521) can be explained by its sensitivity to fluconazole (during the study it was found that the MIC of the strain is 2 μg/ml). This strain can be used as a negative control for the proposed environment and to assess its stability. Thus, the experiment demonstrated the inhibitory effect of a nutrient medium with a fluconazole concentration of 32 mg/l against M. globosa and the most common pathogens of Candida infection, and also confirmed the high efficiency of its use for the selective isolation of clinical isolates of M. furfur.
ПРИМЕР 2EXAMPLE 2
Эксперимент по использованию опытной серии питательной среды в клинических исследованиях.An experiment on the use of an experimental series of nutrient medium in clinical studies.
Исследования проводились на базе лаборатории микробиологии Отдела микробиологии, клинической фармакологии и эпидемиологии Федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный медицинский исследовательский Центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России). Использовалась первая опытная серия среды, произведенная автоматизированным способом в ООО «Центральная фабрика готовых сред» (ЦФГС, г. Москва). Дата производства 29.05.2019 года, объем производства 6 литров. Методика. Образцы биоматериала (пробы), полученные от пациентов, высевались на приготовленную модифицированную среду по прописи Диксона, в лаборатории ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России (далее лабораторная среда mDixon) и параллельно на заявленную селективную питательную среду. Проба представляла собой образцы биоматериала, взятые хлопковым микробиологическим тампоном в транспортную среду AMIES (COPAN, Италия). Высев на питательные среды в чашках Петри проводился методом секторного посева. Результаты представлены в таблице 3 Сравнительные данные по частоте выделения M.furfur и дрожжевых грибов рода Candida из образцов клинического материала на лабораторной среде mDixon и опытной серии селективной питательной среды.The studies were carried out on the basis of the microbiology laboratory of the Department of Microbiology, Clinical Pharmacology and Epidemiology of the Federal State Budgetary Institution “National Medical Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology named after Academician V.I. Kulakov” of the Ministry of Health of the Russian Federation (FGBU “NMIC AGP named after V.I. Kulakov” of the Ministry of Health of Russia). We used the first experimental batch of the medium produced by an automated method at the Central Factory of Ready-Made Media LLC (TsFGS, Moscow). Production date 05/29/2019, production volume 6 liters. Methodology. Biomaterial samples (samples) obtained from patients were inoculated on a prepared modified medium according to Dixon's prescription, in the laboratory of the N.N. IN AND. Kulakov" of the Ministry of Health of Russia (hereinafter referred to as the mDixon laboratory medium) and in parallel to the declared selective nutrient medium. The sample consisted of biomaterial samples taken with a cotton microbiological swab into the AMIES transport medium (COPAN, Italy). Sowing on nutrient media in Petri dishes was carried out using the sector seeding method. The results are presented in Table 3. Comparative data on the frequency of isolation of M. furfur and yeast fungi of the genus Candida from samples of clinical material on the mDixon laboratory medium and an experimental series of selective nutrient medium.
При проведении эксперимента исследован биоматериал, полученный от 235 пациентов отделений реанимации и хирургии новорожденных. Суммарно М. furfur обнаружена у 23 детей. На лабораторной среде mDixon у 22 пациентов выделена только M.furfur и у 16 пациентов - различные виды грибов рода Candida (C.orthopsilosis, С.albicans, C.glabrata, C.lusitaniae). При параллельном посеве биоматериала на предлагаемую селективную питательную среду у 21 пациента выделена M.furfur, а дрожжевые грибы рода Candida не обнаружены. Совпадение результатов по выделению M.furfur на обеих питательных средах отмечено у 20 пациентов (86,9 %). Эффективность лабораторной среды mDixon при выделении М. furfur составила 95,6%, а предлагаемой селективной питательной среды - 91,3 %. В 3-х случаях несовпадения высеваемости M.furfur отмечена крайне низкая степень обсемененности биоматериала этим микроорганизмом (выделено по 2 колонии), что допускает погрешность при прямом посеве тампоном без предварительного использования среды накопления. Ингибиция грибов рода Candida на испытуемой среде отмечена в 100,0 % случаев. Данный эксперимент позволяет сделать вывод об эффективности предлагаемой питательной среды для обнаружения M.furfur, в том числе в биоматериале, колонизированном различными видами грибов рода Candida.During the experiment, the biomaterial obtained from 235 patients of intensive care units and neonatal surgery was studied. In total, M. furfur was found in 23 children. On the mDixon laboratory medium, only M.furfur was isolated in 22 patients and various types of fungi of the genus Candida (C.orthopsilosis, C.albicans, C.glabrata, C.lusitaniae) were isolated in 16 patients. With parallel inoculation of the biomaterial on the proposed selective nutrient medium, M. furfur was isolated in 21 patients, and yeast fungi of the genus Candida were not detected. The coincidence of the results on the isolation of M.furfur on both nutrient media was noted in 20 patients (86.9%). The effectiveness of the mDixon laboratory medium in isolating M. furfur was 95.6%, and the proposed selective nutrient medium was 91.3%. In 3 cases of discrepancy between the inoculation of M.furfur, an extremely low degree of contamination of the biomaterial with this microorganism was noted (2 colonies were isolated), which allows for an error during direct inoculation with a swab without prior use of the accumulation medium. Inhibition of fungi of the genus Candida on the test medium was noted in 100.0% of cases. This experiment allows us to conclude that the proposed nutrient medium is effective for the detection of M.furfur, including in biomaterial colonized by various species of fungi of the genus Candida.
ПРИМЕР 3 EXAMPLE 3
Эксперимент по изучению стабильности 2-х опытных серий питательной среды.An experiment to study the stability of 2 experimental series of nutrient medium.
Для оценки стабильности предлагаемой селективной питательной среды исследованы 2 опытные партии, длительность хранения которых составила соответственно 2 и 6 месяцев со дня приготовления. Проверены ростовые качества и селективность питательной среды с помощью штаммов дрожжевых грибов M.furfur, M.globosa, контрольных штаммов С.albicans (АТСС 10231) и С.parapsilosis (АТСС 22019) (таблица 1). Результаты оценки стабильности испытуемой селективной питательной среды в зависимости от длительности хранения представлены в таблице 4 Результаты оценки стабильности испытуемой селективной питательной среды в зависимости от длительности хранения.To assess the stability of the proposed selective nutrient medium, 2 experimental batches were studied, the storage duration of which was 2 and 6 months, respectively, from the date of preparation. The growth qualities and selectivity of the nutrient medium were tested using yeast strains M. furfur, M. globosa, control strains of C. albicans (ATCC 10231) and C. parapsilosis (ATCC 22019) (table 1). The results of the assessment of the stability of the tested selective nutrient medium, depending on the duration of storage are presented in table 4. The results of the assessment of the stability of the tested selective nutrient medium, depending on the duration of storage.
Результаты эксперимента показали, что ростовые качества обеих партий питательной среды даже по истечении обозначенного при изготовлении срока годности (2 месяца) сохраняются на высоком уровне, так же, как и ингибирующий эффект (за счет стабильности флуконазола) в отношении штаммов M.globosa, контрольного штамма М. furfur (АТСС 14521) и контрольных штаммов С.albicans (АТСС 10231) и С.parapsilosis (АТСС 22019). При этом сохраняется селективность для выделения клинических штаммов M.furfur с высоким уровнем МПК к флуконазолу (>32 мкг/мл), формирующимся при применении этого антимикотика для профилактики грибковой инфекции у новорожденных.The results of the experiment showed that the growth qualities of both batches of the nutrient medium, even after the expiration date indicated during manufacture (2 months), remain at a high level, as well as the inhibitory effect (due to the stability of fluconazole) against M.globosa strains, the control strain M. furfur (ATCC 14521) and control strains of C. albicans (ATCC 10231) and C. parapsilosis (ATCC 22019). At the same time, selectivity is maintained for the isolation of clinical strains of M. furfur with a high level of MIC to fluconazole (> 32 μg / ml), which is formed when this antimycotic is used to prevent fungal infection in newborns.
Источники информацииSources of information
1. Острейков И.Ф., Мельникова Н.И., Бабаев Б.Д., Штатнов М.К. Грибковая инфекция у детей с хирургической патологией в ОИТ. Анестезиология и реаниматология. 2017; т. 62(4). С. 310-315.1. Ostreikov I.F., Melnikova N.I., Babaev B.D., Shtatnov M.K. Fungal infection in children with surgical pathology in the ICU. Anesthesiology and resuscitation. 2017; v. 62(4). pp. 310-315.
2. Bell SG. Micafungin. Neonatal Network. 2011. V. 30(5). P. 329-333.2. Bell SG. Micafungin. neonatal network. 2011. V. 30(5). P. 329-333.
3. Антонов А.Г., Никитина И.В., Митрохин С.Д. Клинические рекомендации по профилактике и лечению грибковых инфекций у новорожденных в условиях отделения реанимации и интенсивной терапии. Неонатология. 2013; № 2, с. 80-88.3. Antonov A.G., Nikitina I.V., Mitrokhin S.D. Clinical guidelines for the prevention and treatment of fungal infections in newborns in the intensive care unit and intensive care. Neonatology. 2013; No. 2, p. 80-88.
4. Ostrosky-Zeichner L, Sable С, Sobel J, et al. Multicenter retrospective development and validation of a clinical prediction rule for nosocomial invasive candidiasis in the intensive care setting. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2007. V. 26. P. 271-276.4. Ostrosky-Zeichner L, Sable C, Sobel J, et al. Multicenter retrospective development and validation of a clinical prediction rule for nosocomial invasive candidiasis in the intensive care setting. Eur. J.Clin. microbiol. Infect. Dis. 2007. V. 26. P. 271-276.
5. Lucignano B, Ranno S, Liesenfeld O, et al. Multiplex PCR allows rapid and accurate diagnosis of bloodstream infections in newborns and children with suspected sepsis. Journal of Clinical Microbiology; 2011. V. 49(6). P. 2252-2258.5. Lucignano B, Ranno S, Liesenfeld O, et al. Multiplex PCR allows rapid and accurate diagnosis of bloodstream infections in newborns and children with suspected sepsis. Journal of Clinical Microbiology; 2011. V. 49(6). P. 2252-2258.
6. Barton M. Invasive candidiasis in low birth weight preterm infants: risk factors, clinical course and outcome in a prospective multicenter study of cases and their matched controls. BMC Infect. Dis. 2014. V. 14. P. 327.6. Barton M. Invasive candidiasis in low birth weight preterm infants: risk factors, clinical course and outcome in a prospective multicenter study of cases and their matched controls. BMC Infect. Dis. 2014. V. 14. P. 327.
7. Greenberg RG, Benjamin DK. Neonatal candidiasis: diagnosis, prevention, and treatment. J. Infect. 2014. V. 69. P. 19-22.7. Greenberg RG, Benjamin DK. Neonatal candidiasis: diagnosis, prevention, and treatment. J. Infect. 2014. V. 69. P. 19-22.
8. Любасовская Л.А., Припутневич Т.В., Анкирская А.С, и др. Особенности микробной колонизации новорожденных в отделении реанимации и интенсивной терапии. Рос. вестн. перинатологии и педиатрии. 2013. № 3. С. 87-91.8. Lyubasovskaya L.A., Priputnevich T.V., Ankirskaya A.S., et al. Features of microbial colonization of newborns in the intensive care unit. Ros. vestn. perinatology and pediatrics. 2013. No. 3. S. 87-91.
9. Aliaga S., Clark R., Laughon M. et al. Changes in the incidence of candidiasis in neonatal intensive care units. Pediatrics. 2014. V. 133(2). P. 236-242.9. Aliaga S., Clark R., Laughon M. et al. Changes in the incidence of candidiasis in neonatal intensive care units. Pediatrics. 2014. V. 133(2). P. 236-242.
10. Веселов А.В. Эмпирическая, превентивная и профилактическая терапия инвазивных микозов: современное состояние. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2009. Т. 11(4). С. 286-304.10. Veselov A.V. Empiric, preventive and prophylactic therapy of invasive mycoses: state of the art. Clinical microbiology and antimicrobial chemotherapy. 2009. Vol. 11(4). pp. 286-304.
11. Бережнова И.А. Инфекционные болезни: учеб. пособие. - М.: РИОР. 2007. - 319 с.11. Berezhnova I.A. Infectious diseases: textbook. allowance. - M.: RIOR. 2007. - 319 p.
12. Ершов П.П. Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных. Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук. Москва - 2008. (https://myzooplanet.ru/zabolevaniy-jivotnyih-lechenie/etiologicheskaya-znachimost-drojjevyih-gribov.html).12. Ershov P.P. Etiological significance of yeast fungi of the genus Malassezia in skin diseases of animals. Dissertation for the degree of candidate of veterinary sciences. Moscow - 2008. (https://myzooplanet.ru/zabolevaniy-jivotnyih-lechenie/etiologicheskaya-znachimost-drojjevyih-gribov.html).
13. Богданова Т.В., Елинов Н.П. Морфолого-физиологические характеристики дрожжевых организмов - Malassezia species (Malassez, 1874) Baillon, 1889 (обзор). Проблемы медицинской микологии. 2011. Т. 13(1). С. 3-13.13. Bogdanova T.V., Elinov N.P. Morphological and physiological characteristics of yeast organisms - Malassezia species (Malassez, 1874) Baillon, 1889 (review). Problems of medical mycology. 2011. Vol. 13(1). pp. 3-13.
14. Овчинников Р.С., Маноян М.Г., Ершов П.П., Гайнуллина А.Г. Грибы рода Malassezia в заболеваниях животных. Микология. Vetpharma. 2013. Т. 1. С. 30-36.14. Ovchinnikov R.S., Manoyan M.G., Ershov P.P., Gainullina A.G. Fungi of the genus Malassezia in animal diseases. Mycology. Vetpharma. 2013. T. 1. S. 30-36.
15. 
16. Cafarchia C., Iatta R., Immediate D., Puttilli M.R. and Otranto D. Azole susceptibility of Malassezia pachydermatis and Malassezia furfur and tentative epidemiological cutoff values. Medical Mycology. 2015, 53, 743-748.16. Cafarchia C., Iatta R., Immediate D., Puttilli M.R. and Otranto D. Azole susceptibility of Malassezia pachydermatis and Malassezia furfur and tentative epidemiological cutoff values. medical mycology. 2015, 53, 743-748.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020116304A RU2774370C2 (en) | 2020-04-29 | Selective nutrient medium for isolating malassezia furfur fungi |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020116304A RU2774370C2 (en) | 2020-04-29 | Selective nutrient medium for isolating malassezia furfur fungi |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020116304A3 RU2020116304A3 (en) | 2021-10-29 |
| RU2020116304A RU2020116304A (en) | 2021-10-29 |
| RU2774370C2 true RU2774370C2 (en) | 2022-06-20 |
Family
ID=
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| БОГДАНОВА Т.В., ЕЛИНОВ Н.П. Морфолого-физиологические характеристики дрожжевых организмов - Malassezia species (Malassez, 1874) Baillon, 1889 (обзор). Проблемы медицинской микологии, 2011, т. 13, N 1, с. 3-13. ASIA PROHIC, TAMARA JOVOVIC SADIKOVIC et.al. Distribution of Malassezia species in patients with different dermatological disorders and healthy indiduals, Acta Dermatovenerol Croat, 2016, v. 24(4), p. 274-281. БАЧУРОВСКАЯ Н.С., ГРУДИНИН Д.А. и др. Современные проблемы биологии грибов рода Malassezia. Вестник ОГУ, 2007, N 12, с. 8-17. АРЗУМАНЯН В.Г. Синтетические среды для культивирования липофильных дрожжей Malassezia spp. Вестник Ростовской Академии Наук, 1999, N 11, с. 54-56. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ayhan et al. | Colonization of neonate skin by Malassezia species: relationship with neonatal cephalic pustulosis | |
| Marcon et al. | In vitro activity of systemic antifungal agents against Malassezia furfur | |
| Lee et al. | First case of catheter-related Malassezia pachydermatis fungemia in an adult | |
| Saadatzadeh et al. | Production of the mycelial phase of Malassezia in vitro | |
| Andrews et al. | The yeast connection: is Candida linked to breastfeeding associated pain? | |
| Balamuth et al. | Simple, Standardized Culture Medium for Physiological Studies on Entamoeba histolytica. | |
| Reinhardt et al. | Intravenous catheter-associated fungemia due to Candida rugosa | |
| RU2774370C2 (en) | Selective nutrient medium for isolating malassezia furfur fungi | |
| RU2756696C1 (en) | Selective nutritional medium for isolation of mushrooms of malassezia furfur species | |
| CN101732732B (en) | Bovine type tuberculin standard substance and preparation method thereof | |
| Bump et al. | Routine identification of yeasts with the aid of molybdate-agar medium | |
| Al-Zuhairi | Isolation and identification of pathogenic fungi from diabetic patients in Diyala | |
| Sasongkowati et al. | Peanut Sucrose for Modifications Medium on Growing of Candida Albicans and Tinea Versicolor. | |
| Shankar et al. | Study of Co-existence of Fungal infection in Diabetic Foot ulcers in Delhi Population | |
| Al-Ani et al. | Isolation and identification of candida albicans from children patient with candidiasis from Ramadi city, Iraq | |
| Priyadharshini | Study on Distribution of Malassezia Species in Patients with Pityriasis Versicolor in a Tertiary Care Hospital | |
| RU2704278C1 (en) | Nutrient medium for producing yeast cells of histoplasma capsulatum dimorphic fungus | |
| Sharanya et al. | Prevalance of Dermatophytes in Tertiary Care Hospital | |
| Corper | A tissue substrate microculture for tubercle bacilli | |
| RU2601123C1 (en) | STRAIN OF Candida albicans varietas stellatoidea FOR PRODUCING DIAGNOSTIC ALLERGEN | |
| Ajah et al. | Isolation and identification of Candida species from oral and vaginal and determination of virulence factor. | |
| Helal et al. | The study of fungal infections and diabetic foot ulcer in Iraqi patients | |
| Bakiyeva et al. | DEVELOPMENT OF A METHOD FOR MANUFACTURING AND OBTAINING HYPERIMMUNE SERUM AGAINST STREPTOCOCCOSIS IN FARM ANIMALS | |
| Abd Mallick et al. | Successful treatment of human eumycetomas caused by Aspergillus species with voriconazole | |
| CN106119164A (en) | A kind of method of synthetic medium separation and Culture avain tuberculosis mycobacteria |