RU2773957C2 - Activity modulator - Google Patents
Activity modulator Download PDFInfo
- Publication number
- RU2773957C2 RU2773957C2 RU2020121200A RU2020121200A RU2773957C2 RU 2773957 C2 RU2773957 C2 RU 2773957C2 RU 2020121200 A RU2020121200 A RU 2020121200A RU 2020121200 A RU2020121200 A RU 2020121200A RU 2773957 C2 RU2773957 C2 RU 2773957C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ischemic
- cd300a
- disease
- antibody
- ischemia
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 45
- 230000000051 modifying Effects 0.000 title claims abstract description 40
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 claims abstract description 38
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 34
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 claims abstract description 30
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 claims abstract description 30
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 26
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 claims abstract description 26
- 230000001419 dependent Effects 0.000 claims abstract description 17
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 6
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 claims description 63
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 claims description 63
- 230000000302 ischemic Effects 0.000 claims description 40
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 11
- 230000002253 anti-ischaemic Effects 0.000 claims description 10
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 claims description 9
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 claims description 9
- 208000001083 Kidney Disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000008581 Brain Disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000009856 Lung Disease Diseases 0.000 claims description 5
- 206010050209 Spinal cord ischaemia Diseases 0.000 claims description 5
- 201000002818 limb ischemia Diseases 0.000 claims description 5
- 201000001365 retinal ischemia Diseases 0.000 claims description 5
- 208000003067 Myocardial Ischemia Diseases 0.000 claims 4
- 230000001737 promoting Effects 0.000 claims 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 11
- 230000001404 mediated Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 35
- 230000001640 apoptogenic Effects 0.000 description 18
- UNJJBGNPUUVVFQ-ZJUUUORDSA-N Phosphatidylserine Chemical compound CCCC(=O)O[C@H](COC(=O)CC)COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O UNJJBGNPUUVVFQ-ZJUUUORDSA-N 0.000 description 17
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 15
- 230000000926 neurological Effects 0.000 description 14
- 206010061255 Ischaemia Diseases 0.000 description 10
- 206010063897 Renal ischaemia Diseases 0.000 description 10
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 9
- 206010059512 Apoptosis Diseases 0.000 description 8
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 8
- 208000004981 Coronary Disease Diseases 0.000 description 7
- 206010044390 Transient ischaemic attack Diseases 0.000 description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 7
- 201000010875 transient cerebral ischemia Diseases 0.000 description 7
- 208000010125 Myocardial Infarction Diseases 0.000 description 6
- 230000003472 neutralizing Effects 0.000 description 6
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 201000008739 coronary artery disease Diseases 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 108091008117 polyclonal antibodies Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- KGAGDPCLSPRTNF-RGCQKQKKSA-N (6aS,11bR)-7,11b-dihydro-6H-indeno[2,1-c]chromene-3,4,6a,9,10-pentol;2',4',5',7'-tetrabromo-3',6'-dihydroxyspiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@]2(O)[C@H]1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2.O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C(O)C(Br)=C1OC1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 KGAGDPCLSPRTNF-RGCQKQKKSA-N 0.000 description 4
- 210000004556 Brain Anatomy 0.000 description 4
- 206010008089 Cerebral artery occlusion Diseases 0.000 description 4
- 206010008118 Cerebral infarction Diseases 0.000 description 4
- 229940109239 Creatinine Drugs 0.000 description 4
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 4
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 4
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 3
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 3
- 230000037250 Clearance Effects 0.000 description 3
- 108060004726 MERTK Proteins 0.000 description 3
- 108060008723 TYROBP Proteins 0.000 description 3
- 102100008188 TYROBP Human genes 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 201000006474 brain ischemia Diseases 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000035512 clearance Effects 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 210000001015 Abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 210000004204 Blood Vessels Anatomy 0.000 description 2
- 102100004488 CD300LB Human genes 0.000 description 2
- 101710033669 CD300LB Proteins 0.000 description 2
- 210000003734 Kidney Anatomy 0.000 description 2
- 108010061543 Neutralizing Antibodies Proteins 0.000 description 2
- 210000002254 Renal Artery Anatomy 0.000 description 2
- 206010038436 Renal failure acute Diseases 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000000996 additive Effects 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 230000002146 bilateral Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting Effects 0.000 description 2
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular Effects 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 2
- 235000018343 nutrient deficiency Nutrition 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000000090 phagocyte Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N propylene glycol Chemical group CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 2
- 231100000486 side effect Toxicity 0.000 description 2
- 200000000009 stenosis Diseases 0.000 description 2
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 2
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2R,3R,4S,5R,6S)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2R,3R,4S,5R,6R)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- 102000010400 1-phosphatidylinositol-3-kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040005185 1-phosphatidylinositol-3-kinase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 101700006234 AKT1 Proteins 0.000 description 1
- 206010002383 Angina pectoris Diseases 0.000 description 1
- 206010062599 Arterial occlusive disease Diseases 0.000 description 1
- 206010060965 Arterial stenosis Diseases 0.000 description 1
- 210000001367 Arteries Anatomy 0.000 description 1
- 208000000575 Arteriosclerosis Obliterans Diseases 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 102000023056 CD300 family Human genes 0.000 description 1
- 108091012497 CD300 family Proteins 0.000 description 1
- JHLNERQLKQQLRZ-UHFFFAOYSA-N Calcium silicate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-][Si]([O-])([O-])[O-] JHLNERQLKQQLRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 210000001715 Carotid Arteries Anatomy 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 210000000170 Cell Membrane Anatomy 0.000 description 1
- 206010009895 Colitis ischaemic Diseases 0.000 description 1
- 210000002808 Connective Tissue Anatomy 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N Dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 Dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 210000000416 Exudates and Transudates Anatomy 0.000 description 1
- 230000035693 Fab Effects 0.000 description 1
- 210000003194 Forelimb Anatomy 0.000 description 1
- 206010017711 Gangrene Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 102000015434 Humanized Monoclonal Antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108010064750 Humanized Monoclonal Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 210000004408 Hybridomas Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N Lactose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H]1CO)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 210000000138 Mast Cells Anatomy 0.000 description 1
- 210000003975 Mesenteric Arteries Anatomy 0.000 description 1
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N Methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003657 Middle Cerebral Artery Anatomy 0.000 description 1
- 208000009433 Moyamoya Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000283898 Ovis Species 0.000 description 1
- 101710033203 PTPN6 Proteins 0.000 description 1
- 102100003367 PTPN6 Human genes 0.000 description 1
- 206010062585 Peripheral arterial occlusive disease Diseases 0.000 description 1
- 102000030951 Phosphotransferases Human genes 0.000 description 1
- 108091000081 Phosphotransferases Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene (PE) Substances 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N Propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010038435 Renal failure Diseases 0.000 description 1
- 102000014400 SH2 domains Human genes 0.000 description 1
- 108050003452 SH2 domains Proteins 0.000 description 1
- 241000978776 Senegalia senegal Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 1
- 208000002847 Surgical Wound Diseases 0.000 description 1
- 210000001541 Thymus Gland Anatomy 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 229940116362 Tragacanth Drugs 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H Tricalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000003213 activating Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial Effects 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral Effects 0.000 description 1
- 230000003727 cerebral blood flow Effects 0.000 description 1
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000002592 echocardiography Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- -1 excipients Substances 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular Methods 0.000 description 1
- 201000008222 ischemic colitis Diseases 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 150000008106 phosphatidylserines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000865 phosphorylative Effects 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 230000002335 preservative Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 108091007921 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000027656 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 230000035812 respiration Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229960000103 thrombolytic agents Drugs 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Область техникиTechnical field
[0001] [0001]
Настоящее изобретение относится к модулятору активности, содержащему CD300a-связывающее вещество, и к лекарственному средству против ишемических заболеваний. The present invention relates to an activity modulator containing a CD300a binder and an anti-ischemic drug.
Уровень техникиState of the art
[0002][0002]
Многие люди в Японии страдают ишемическими заболеваниями на фоне старения, европеизации образа жизни и тому подобного, которые являются основными причинами смерти и являются бременем для медицинской экономики. Ишемическая болезнь представляет собой заболевание, вызванное дефицитом кислорода/питательных веществ из-за быстрого снижения кровотока, вызванного временной или постоянной окклюзией или стенозом кровеносных сосудов в органе, таком как сердце или мозг, и примеры типичных ишемических заболеваний включают инфаркт миокарда и церебральный инфаркт.Many people in Japan suffer from coronary diseases due to aging, Westernization of lifestyle and the like, which are the main causes of death and are a burden on the medical economy. Ischemic disease is a disease caused by oxygen/nutrient deficiency due to a rapid decrease in blood flow caused by temporary or permanent occlusion or stenosis of blood vessels in an organ such as the heart or brain, and examples of typical ischemic diseases include myocardial infarction and cerebral infarction.
[0003][0003]
Апоптоз является одним из механизмов клеточной смерти, связанной с поддержанием гомеостаза в живом организме, и как известно, он запускается в клетках, подвергшихся воздействию ухудшенной окружающей среды in vivo, например, с дефицитом кислорода/питательных веществ, вызванных ишемической болезнью. Клетки, в которых был индуцирован апоптоз, фагоцитируются путем распознавания фагоцитами, такими как макрофаги, и быстро удаляются.Apoptosis is one of the mechanisms of cell death associated with the maintenance of homeostasis in a living organism and is known to be triggered in cells exposed to a degraded in vivo environment, such as oxygen/nutrient deficiency caused by ischemic disease. Cells in which apoptosis has been induced are phagocytosed by being recognized by phagocytes such as macrophages and rapidly removed.
[0004][0004]
Удаление апоптотических клеток макрофагами или аналогично быстрым фагоцитозом в значительной степени способствует подавлению патологического прогрессирования ишемических заболеваний. Когда в клетках индуцируется апоптоз, привлекаются макрофаги, и апоптотические клетки выводятся из организма (клиренс), что снижает нагрузку на окружающие клетки и ткани. Когда такой клиренс апоптотических клеток не вызывается должным образом, апоптотические клетки и их содержимое накапливаются в окружающей области, вызывая нагрузку на окружающие клетки и ткани и вызывая повреждение окружающих тканей. Таким образом, фагоцитоз апоптотических клеток макрофагами чрезвычайно важен для поддержания гомеостаза живого организма.Removal of apoptotic cells by macrophages or similarly by rapid phagocytosis greatly contributes to the suppression of the pathological progression of ischemic diseases. When apoptosis is induced in cells, macrophages are recruited and apoptotic cells are cleared from the body (clearance), which reduces the burden on surrounding cells and tissues. When such clearance of apoptotic cells is not properly induced, the apoptotic cells and their contents accumulate in the surrounding area, causing stress on the surrounding cells and tissues and causing damage to the surrounding tissues. Thus, phagocytosis of apoptotic cells by macrophages is extremely important for maintaining the homeostasis of a living organism.
[0005][0005]
Известно, что клетки, в которых был индуцирован апоптоз, имеют экспонированный фосфатидилсерин (PS), который представляет собой фосфолипид, присутствующий внутри клеточной мембраны в нормальных клетках, у поверхности клетки. Известно, что этот PS опосредует так называемый сигнал «съешь меня» для фагоцитов, таких как макрофаги, и макрофаги распознают PS на апоптотических клетках, что позволяет им фагоцитировать апоптотические клетки (непатентная литература 1 и 2).Cells in which apoptosis has been induced are known to have exposed phosphatidylserine (PS), which is a phospholipid present inside the cell membrane in normal cells, at the cell surface. This PS is known to mediate the so-called "eat me" signal for phagocytes such as macrophages, and macrophages recognize PS on apoptotic cells, which allows them to phagocytize apoptotic cells (
[0006][0006]
Тирозинкиназа Mer (MerTK), принадлежащая к семейству рецепторных тирозинкиназ, известна как один из факторов, которые получают сигнал «съешь меня» в макрофагах. MerTK усиливает фагоцитоз макрофагами, связываясь с PS на поверхности апоптотической клетки через его лиганды gas6 и белок6. Например, было обнаружено, что макрофаги, полученные от мышей, лишенных MerTK, не могут фагоцитировать апоптотические клетки (непатентная литература 3).Tyrosine kinase Mer (MerTK), belonging to the family of receptor tyrosine kinases, is known as one of the factors that receive the "eat me" signal in macrophages. MerTK enhances macrophage phagocytosis by binding to PS on the apoptotic cell surface through its gas6 ligands and protein6. For example, it has been found that macrophages derived from mice lacking MerTK cannot phagocytize apoptotic cells (non-patent literature 3).
[0007][0007]
Также сообщалось, что CD300b (CLM7/LMIR5), член семейства CD300, являющийся белком семейства рецепторов, распознает PS на поверхности апоптотических клеток в качестве лиганда и модулирует фагоцитоз апоптотических клеток (непатентная литература 4).It has also been reported that CD300b (CLM7/LMIR5), a member of the CD300 family, which is a receptor family protein, recognizes PS on the surface of apoptotic cells as a ligand and modulates phagocytosis of apoptotic cells (Non-Patent Literature 4).
[0008][0008]
С другой стороны, в отношении CD300a, который также является членом семейства рецепторов CD300, авторы настоящего изобретения сообщили, что CD300a связывается с PS в тучных клетках или в им подобных, которые являются клетками иммунной системы, тем самым усиливая трансдукцию иммуносупрессивных сигналов (Патентная литература 1), и что CD300a макрофагов не способствует фагоцитозу, даже когда связан с PS (непатентная литература 5).On the other hand, with respect to CD300a, which is also a member of the CD300 receptor family, the present inventors reported that CD300a binds to PS in mast cells or the like, which are cells of the immune system, thereby enhancing the transduction of immunosuppressive signals (Patent Literature 1 ), and that macrophage CD300a does not promote phagocytosis even when associated with PS (non-patent literature 5).
Список цитированияCitation list
Патентная литератураPatent Literature
[0009][0009]
Патентная литература 1: Международная публикация № WO 2013/077186 Patent Literature 1: International Publication No. WO 2013/077186
Непатентная литератураNon-Patent Literature
[0010][0010]
Непатентная литература 1: V.A.Fadok et al. J Immunol 148, 2207 apr. 1, 1992Non-Patent Literature 1: V.A. Fadok et al. J Immunol 148, 2207 apr. 1, 1992
Непатентная литература 2: J.Savill, I.Dransfield, C.Gregory, C.Haslett, Nat Rev Immunol 2, 965, 2002Non-Patent Literature 2: J. Savill, I. Dransfield, C. Gregory, C. Haslett, Nat Rev Immunol 2, 965, 2002
Непатентная литература 3: Nishi et al. Mol. Cell. Biol. April 2014 vol. 34 no. 8 1512-1520 Non-Patent Literature 3: Nishi et al. Mol. cell. Biol. April 2014 vol. 34 no. 8 1512-1520
Непатентная литература 4: Murakami et al. Cell Death and Differentiation (2014) 21, 1746-1757 Non-Patent Literature 4: Murakami et al. Cell Death and Differentiation (2014) 21, 1746-1757
Непатентная литература 5: Nakahashi-Oda et al. J. Exp. Med., 209, 1493-1503 Non-Patent Literature 5: Nakahashi-Oda et al. J. Exp. Med., 209, 1493-1503
Краткое изложение сущности изобретенияBrief summary of the invention
Техническая задачаTechnical task
[0011][0011]
Настоящее изобретение направлено на выяснение механизма контроля активации CD300b-зависимого фагоцитоза и на обеспечение модулятора активности, который является средством для модулирования активности CD300b-зависимого фагоцитоза, и лекарственного средства для лечения или предотвращения заболевания или состояния, в которых эта активность участвует.The present invention is directed to elucidate the mechanism for controlling the activation of CD300b-dependent phagocytosis and to provide an activity modulator, which is an agent for modulating the activity of CD300b-dependent phagocytosis, and a drug for treating or preventing a disease or condition in which this activity is involved.
Решение задачиThe solution of the problem
[0012][0012]
В результате интенсивных исследований, направленных на выяснение механизма контроля активации CD300b-зависимого фагоцитоза при фагоцитозе макрофагов, авторы настоящего изобретения обнаружили, что CD300a, активированный связыванием с PS, подавляет CD300b-зависимый фагоцитоз в макрофагах.As a result of intensive research aimed at elucidating the mechanism of control of activation of CD300b-dependent phagocytosis in macrophage phagocytosis, the authors of the present invention found that CD300a, activated by binding to PS, suppresses CD300b-dependent phagocytosis in macrophages.
[0013][0013]
Кроме того, авторы настоящего изобретения предположили, что когда в живом организме возникает ишемия, CD300b-зависимый фагоцитоз подавляется CD300a, и клетки, в которых из-за ишемии индуцируется апоптоз, и их внутриклеточные вещества накапливаются в тканях, что вызывает или усугубляет ишемическое заболевание. Исходя из этого, авторы настоящего изобретения пришли к выводу, что можно подвергать лечению ишемические заболевания, модулируя активность CD300a с использованием антитела против CD300a и контролируя CD300b-зависимый фагоцитоз, и что антитело против CD300a может быть инструментом для лечения ишемических заболеваний, что привело к настоящему изобретению.In addition, the present inventors suggested that when ischemia occurs in a living body, CD300b-dependent phagocytosis is suppressed by CD300a, and cells in which apoptosis is induced due to ischemia and their intracellular substances accumulate in tissues, which causes or exacerbates ischemic disease. Based on this, the present inventors concluded that it is possible to treat coronary diseases by modulating CD300a activity using an anti-CD300a antibody and controlling CD300b-dependent phagocytosis, and that an anti-CD300a antibody can be a tool for the treatment of ischemic diseases, which has led to the present invention.
[0014][0014]
В соответствии с настоящим изобретением, сделанным на основе этих результатов, предложены, например, модуляторы активности и лекарственные средства, представленные в следующих пунктах [1] - [9]. In accordance with the present invention, made on the basis of these results, proposed, for example, activity modulators and drugs presented in the following paragraphs [1] - [9].
[1] Модулятор активности для модуляции CD300b-зависимых сигналов фагоцитоза в макрофаге, содержащий CD300a-связывающее вещество.[1] An activity modulator for modulating CD300b-dependent phagocytosis signals in a macrophage containing a CD300a-binding substance.
[2] Модулятор активности по [1], в котором CD300a-связывающее вещество представляет собой вещество, которое ингибирует активность CD300a в макрофагах.[2] The activity modulator of [1], wherein the CD300a binding agent is a substance that inhibits CD300a activity in macrophages.
[3] Модулятор активности по [1] или [2], в котором CD300a-связывающее вещество представляет собой вещество, которое ингибирует связывание CD300a с фосфатидилсерином.[3] The activity modulator according to [1] or [2], wherein the CD300a binding agent is a substance that inhibits the binding of CD300a to phosphatidylserine.
[4] Модулятор активности по любому из [1] - [3], в котором CD300a-связывающее вещество представляет собой антитело или пептид.[4] The activity modulator according to any one of [1] to [3], wherein the CD300a binding agent is an antibody or a peptide.
[5] Модулятор активности по любому из [1] - [3], в котором CD300a-связывающее вещество представляет собой антитело к CD300a.[5] The activity modulator according to any one of [1] to [3], wherein the CD300a binding agent is an anti-CD300a antibody.
[6] Модулятор активности по [5], в котором антитело к CD300a представляет собой CD300a-нейтрализующее антитело.[6] The activity modulator of [5], wherein the anti-CD300a antibody is a CD300a neutralizing antibody.
[7] Модулятор активности по [5] или [6], в котором антитело к CD300a представляет собой моноклональное антитело к CD300a.[7] The activity modulator according to [5] or [6], wherein the anti-CD300a antibody is an anti-CD300a monoclonal antibody.
[8] Лекарственное средство против ишемических заболеваний, содержащее модулятор активности по любому из [1] - [7].[8] An anti-ischemic drug comprising an activity modulator according to any one of [1] to [7].
[9] Лекарственное средство против ишемических заболеваний по [8], которое представляет собой лекарственное средство для лечения или профилактики одного или более заболеваний, выбранных из ишемической болезни сердца, ишемической болезни мозга, ишемической болезни кишечника, ишемической болезни почек, ишемии конечностей, ишемии сетчатки, ишемической болезни легких и ишемии спинного мозга.[9] The anti-ischemic drug according to [8], which is a drug for the treatment or prevention of one or more diseases selected from coronary heart disease, coronary brain disease, coronary bowel disease, coronary kidney disease, limb ischemia, retinal ischemia , coronary pulmonary disease and spinal cord ischemia.
Полезные эффекты изобретенияUseful effects of the invention
[0015][0015]
Согласно настоящему изобретению могут быть предложены модулятор активности и лекарственное средство против ишемических заболеваний, которое модулирует сигнальную трансдукцию, связанную с CD300b-зависимым фагоцитозом макрофагов.The present invention provides an activity modulator and an anti-ischemic drug that modulates signal transduction associated with CD300b-dependent macrophage phagocytosis.
Краткое описание чертежейBrief description of the drawings
[0016][0016]
[Фигура 1] Фигура 1 демонстрирует результаты анализа проточной цитометрии, полученные в референсном Примере 1. Результаты для группы клеток, обработанных антителом против MerTk+контрольным антителом, обозначены кружками, а результаты для группы клеток, обработанных антителом против MerTk+антителом против CD300a, обозначены квадратами.[Figure 1] Figure 1 shows the results of the flow cytometry analysis obtained in Reference Example 1. The results for the cell group treated with anti-MerTk antibody + control antibody are indicated by circles, and the results for the group of cells treated with anti-MerTk antibody + anti-CD300a antibody are indicated squares.
[Фигура 2] Фигура 2А представляет собой график, показывающий измеренные значения азота мочевины (BUN) и сывороточной концентрации креатинина (Cre) у мышей CD300afl/fl (контрольные мыши) и мышей CD300afl/flLysm-Cre через 24 часа после реперфузионной обработки после выполнения обработки почечной ишемии в референсном Примере 2. Фигура 2В представляет собой график, показывающий процент выживаемости после обработки почечной ишемии/реперфузионноой обработки для каждой мыши.[Figure 2] Figure 2A is a graph showing the measured values of urea nitrogen (BUN) and serum creatinine concentration (Cre) in CD300a fl/fl mice (control mice) and CD300a fl/fl Lysm-Cre mice 24 hours after reperfusion treatment after performing renal ischemia treatment in Reference Example 2. Figure 2B is a graph showing the percent survival after renal ischemia/reperfusion treatment for each mouse.
[Фигура 3] На Фигуре 3 показаны окрашенные изображения окрашивания гематоксилин-эозином в срезах тканей почек мышей CD300afl/fl (контрольные мыши) и CD300afl/flLysm-Cre до обработки почечной ишемии (наивно), а также через 24 часа и 72 часа после обработки почечной ишемии и реперфузионной обработки, и окрашенные изображения окрашивания TUNEL через 24 часа после обработки ишемии и реперфузионной обработки, в эталонном примере 3.[Figure 3] Figure 3 shows stained images of hematoxylin-eosin staining in kidney tissue sections of CD300a fl/fl (control mice) and CD300a fl/fl Lysm-Cre mice before treatment for renal ischemia (naive), as well as after 24 hours and 72 hours after renal ischemia and reperfusion treatments, and TUNEL staining images 24 hours after ischemia and reperfusion treatments, in Reference Example 3.
[Фигура 4] Фигура 4 представляет собой график, показывающий измеренные значения азота мочевины (BUN) и сывороточной концентрации креатинина (Cre) через 24 часа после реперфузионной обработки после выполнения обработки почечной ишемии в Примере 1. Группа введения антитела против CD300a обозначена треугольником, а группа без введения обозначена квадратом.[Figure 4] Figure 4 is a graph showing the measured values of urea nitrogen (BUN) and serum creatinine concentration (Cre) 24 hours after reperfusion treatment after performing renal ischemia treatment in Example 1. The CD300a antibody administration group is indicated by a triangle, and the group without an introduction is indicated by a square.
[Фигура 5] Фигура 5 представляет собой график, представляющий оценку неврологических результатов у мышей CD300afl/flLysm-Cre и мышей CD300afl/fl (контрольных мышей), подвергнутых транзиторной обработке церебральной ишемии в референсном Примере 4.[Figure 5] Figure 5 is a graph representing the evaluation of neurological outcomes in CD300a fl/fl Lysm-Cre mice and CD300a fl/fl mice (control mice) subjected to transient cerebral ischemia treatment in Reference Example 4.
[Фигура 6] Фигура 6 представляет собой график, представляющий оценку неврологических результатов у мышей, подвергнутых транзиторной обработке церебральной ишемии в Примере 2. Группа введения антитела против CD300a обозначена квадратом, а группа без введения обозначена кружком.[Figure 6] Figure 6 is a graph representing an assessment of neurological outcomes in mice subjected to transient cerebral ischemia treatment in Example 2. The anti-CD300a antibody administration group is indicated by a square, and the non-administration group is indicated by a circle.
[Фигура 7] Фигура 7А представляет собой график, представляющий оценку неврологических результатов у мышей, подвергнутых транзиторной обработке церебральной ишемии в Примере 3. Группа введения антитела против CD300a обозначена квадратом, а группа без введения обозначена кружком. Фигура 7В представляет собой график, показывающий окрашенные изображения окрашивания гематоксилин-эозином в образце ткани головного мозга мыши с введенными антителами против CD300a или без введения, полученными в Примере 3, и результаты их анализа.[Figure 7] Figure 7A is a graph representing an assessment of neurological outcomes in mice subjected to transient cerebral ischemia treatment in Example 3. The anti-CD300a antibody administration group is indicated by a square, and the non-administration group is indicated by a circle. Figure 7B is a graph showing stained images of hematoxylin-eosin staining in a mouse brain tissue sample with or without administration of anti-CD300a antibodies obtained in Example 3 and the results of their analysis.
[Фигура 8] Фигура 8 представляет собой график, представляющий коэффициент выживаемости модели инфаркта миокарда с использованием мышей CD300afl/flLysm-Cre и мышей дикого типа (C57BL/6J), полученных в Референсном Примере 5.[Figure 8] Figure 8 is a graph showing the survival rate of a myocardial infarction model using CD300a fl/fl Lysm-Cre mice and wild-type mice (C57BL/6J) obtained in Reference Example 5.
Описание вариантов осуществленияDescription of Embodiments
[0017][0017]
Модулятор активности и лекарственное средство против ишемических заболеваний по настоящему изобретению модулирует CD300b-зависимые сигналы фагоцитоза в макрофаге. В частности, модулируя CD300b-зависимую сигнальную трансдукцию фагоцитоза, он участвует в удалении (клиренсе) апоптотических клеток в ишемическом участке путем фагоцитоза.The activity modulator and anti-ischemic drug of the present invention modulates CD300b-dependent phagocytosis signals in macrophage. In particular, by modulating CD300b-dependent signal transduction of phagocytosis, it is involved in the removal (clearance) of apoptotic cells in the ischemic site by phagocytosis.
[0018][0018]
Модулятор активности и лекарственное средство против ишемических заболеваний по настоящему изобретению подробно описаны ниже.The activity modulator and anti-ischemic drug of the present invention are described in detail below.
[0019][0019]
В настоящем описании «ишемия» означает состояние дефицита кислорода в тканях, питательных веществ или тому подобное из-за уменьшения количества артериальной крови, поступающей в ткань, вследствие стеноза или окклюзии кровеносных сосудов, и «ишемический участок» означает участок, где количество артериальной крови уменьшается вследствие ишемии и в результате уменьшается количество питательных веществ, кислорода или тому подобного.In the present description, "ischemia" means a state of deficiency of oxygen in tissues, nutrients, or the like due to a decrease in the amount of arterial blood entering the tissue due to stenosis or occlusion of blood vessels, and "ischemic site" means a site where the amount of arterial blood is reduced due to ischemia and as a result, the amount of nutrients, oxygen or the like is reduced.
[0020][0020]
Когда CD300b на поверхности макрофага активируется с помощью PS на клетках, в которых апоптоз был вызван ишемией, CD300b связывается с адаптерной молекулой DAP12. В результате тирозин, присутствующий в ITAM (иммунорецепторный активирующий мотив на основе тирозина) DAP12, фосфорилируется, что позволяет рекрутировать и активировать киназу семейства Syk, имеющую домен SH2, а активация нижестоящего пути PI3K/Akt позволяет усиливать фагоцитоз макрофагами.When CD300b on the macrophage surface is activated by PS on cells in which apoptosis has been induced by ischemia, CD300b binds to the DAP12 adapter molecule. As a result, the tyrosine present in ITAM (tyrosine-based immunoreceptor activating motif) DAP12 is phosphorylated, which allows the recruitment and activation of the Syk family kinase having an SH2 domain, and activation of the downstream PI3K/Akt pathway allows increased phagocytosis by macrophages.
[0021][0021]
С другой стороны, CD300a рекрутирует тирозин-фосфатазу SHP-1 через последовательность ITIM (иммунорецепторный ингибирующий мотив на основе тирозина) во внутриклеточном домене, связываясь с PS и становясь активированным. В результате CD300b-зависимые сигналы фагоцитоза подавляются путем ингибирования фосфорилирования тирозина, присутствующего в ITAM DAP12.On the other hand, CD300a recruits the tyrosine phosphatase SHP-1 through an ITIM (tyrosine-based immunoreceptor inhibitory motif) sequence in the intracellular domain, binding to PS and becoming activated. As a result, CD300b-dependent phagocytosis signals are suppressed by inhibiting tyrosine phosphorylation present in ITAM DAP12.
[0022] [0022]
<Модулятор активности><Activity Modulator>
«Модулятор активности» по настоящему изобретению содержит CD300a-связывающее вещество и модулирует CD300b-зависимые сигналы фагоцитоза в макрофаге. В частности, модулятор активности по настоящему изобретению способствует CD300b-зависимой трансдукции сигнала фагоцитоза путем связывания CD300a-связывающего вещества, содержащегося в модуляторе активности, с CD300a и путем ингибирования (нейтрализации) связывания CD300a с PS.The "activity modulator" of the present invention contains a CD300a-binding agent and modulates CD300b-dependent phagocytosis signals in a macrophage. In particular, the activity modulator of the present invention promotes CD300b-dependent signal transduction of phagocytosis by binding the CD300a-binding substance contained in the activity modulator to CD300a and by inhibiting (neutralizing) the binding of CD300a to PS.
[0023][0023]
<CD300a-связывающее вещество><CD300a-binder>
Предпочтительно, чтобы CD300a-связывающее вещество представляло собой вещество, которое ингибирует активность CD300a в макрофагах, и, кроме того, предпочтительно, вещество, которое ингибирует связывание CD300a с PS. Вещество, которое ингибирует активность CD300a, конкретно ничем не ограничено, но предпочтительно представляет собой антитело или пептид и более предпочтительно антитело к CD300a.Preferably, the CD300a binding agent is a substance that inhibits the activity of CD300a in macrophages, and further preferably, a substance that inhibits the binding of CD300a to PS. The substance that inhibits CD300a activity is not particularly limited, but is preferably an antibody or peptide, and more preferably an anti-CD300a antibody.
[0024][0024]
<Антитело к CD300a><anti-CD300a>
Антитело к CD300a, используемое в модуляторе активности по настоящему изобретению, представляет собой антитело, которое специфически распознает CD300a в качестве антигена. Антитело к CD300a может представлять собой свободное антитело или может представлять собой антитело, на котором другие необязательные агенты (например, вспомогательные агенты и тому подобное) прямо или косвенно иммобилизованы. Один тип специфического моноклонального антитела или комбинация двух или более моноклональных антител (или поликлональных антител) могут содержаться в модуляторе активности, но с точки зрения специфичности предпочтительно, чтобы содержался один тип моноклонального антитела.The anti-CD300a antibody used in the activity modulator of the present invention is an antibody that specifically recognizes CD300a as an antigen. The anti-CD300a antibody may be a free antibody, or may be an antibody to which other optional agents (eg, adjuvants and the like) are directly or indirectly immobilized. One type of specific monoclonal antibody or a combination of two or more monoclonal antibodies (or polyclonal antibodies) may be contained in the activity modulator, but from a specificity point of view, it is preferable that one type of monoclonal antibody be contained.
[0025][0025]
Антитело к CD300a конкретно ничем не ограничивается, если оно представляет собой антитело, проявляющее эффект по настоящему изобретению, то есть обладает функцией ингибирования или подавления связывания CD300a с PS (функция нейтрализации), и, в частности, предпочтительно выбирать нейтрализующее антитело к CD300a. Нейтрализующее антитело может быть получено известными способами. Когда моноклональное антитело выбрано в качестве антитела против CD300a, то моноклональное антитело к CD300a обычно получают с помощью такой процедуры, как иммунизация с использованием CD300a, получение гибридомы, скрининг, культивирование и сбор. Из них следует выбрать подходящее моноклональное антитело, имеющее подходящую функцию нейтрализации между CD300a и PS и проявляющее эффект по настоящему изобретению.The anti-CD300a antibody is not particularly limited as long as it is an antibody exhibiting the effect of the present invention, that is, it has a function of inhibiting or suppressing the binding of CD300a to PS (neutralizing function), and in particular, it is preferable to select a neutralizing anti-CD300a antibody. Neutralizing antibody can be obtained by known methods. When a monoclonal antibody is selected as an anti-CD300a antibody, the anti-CD300a monoclonal antibody is usually obtained by a procedure such as CD300a immunization, hybridoma production, screening, culture and harvest. Among them, a suitable monoclonal antibody having a suitable function of neutralizing between CD300a and PS and exhibiting the effect of the present invention should be selected.
[0026][0026]
Когда в качестве антитела против CD300 выбирают поликлональное антитело, то обычно используемое поликлональное антитело, полученное путем создания участка определенной последовательности, содержащего эпитоп молекулы антигена в качестве иммунизирующего антигена, можно использовать в качестве поликлонального антитела, но не ограничиваясь этим, и, например, в качестве альтернативы (эквивалента) поликлональному антителу может использоваться смесь двух или более моноклональных антител. Тип животного (иммунного животного), продуцирующего антитело, конкретно ничем не ограничен, и, может быть выбран подходящим образом из мышей, крыс, морских свинок, кроликов, коз, овец или тому подобного.When a polyclonal antibody is selected as the anti-CD300 antibody, a commonly used polyclonal antibody obtained by creating a region of a certain sequence containing an epitope of an antigen molecule as an immunizing antigen can be used as a polyclonal antibody, but not limited to, and, for example, as alternatives (equivalents) to a polyclonal antibody, a mixture of two or more monoclonal antibodies can be used. The type of animal (immune animal) producing the antibody is not particularly limited, and may be suitably selected from mice, rats, guinea pigs, rabbits, goats, sheep, or the like.
[0027][0027]
Антитело к CD300a в качестве природного антитела не обязательно должно быть полноразмерным антителом, при условии, что оно представляет собой антитело, обладающее функцией ингибирования или подавления связывания CD300a с PS (функция нейтрализации), и проявляет эффект по настоящему изобретению, и может представлять собой фрагмент антитела или производное. То есть термин «антитело» в настоящем описании включает не только полноразмерные антитела, но также производные фрагментов антител (фрагменты Fab или F(ab')2 и тому подобное), химерные антитела (гуманизированные антитела и тому подобное), полифункциональные антитела и тому подобное.The anti-CD300a antibody as a natural antibody does not need to be a full-length antibody, as long as it is an antibody having a function of inhibiting or suppressing the binding of CD300a to PS (neutralizing function), and exhibits the effect of the present invention, and may be an antibody fragment or derivative. That is, the term "antibody" in the present description includes not only full-length antibodies, but also derivatives of antibody fragments (Fab or F(ab')2 fragments and the like), chimeric antibodies (humanized antibodies and the like), polyfunctional antibodies and the like. .
[0028][0028]
<Пептид><Peptide>
Предпочтительно, чтобы пептид, используемый в качестве CD300a-связывающего вещества в настоящем изобретении, представлял собой пептид, который ингибирует активность CD300a в макрофагах, и, кроме того, предпочтительно, пептид, который ингибирует связывание CD300a с PS. Например, предпочтительно выбирать пептид, который специфически связывается с CD300a, и, в частности, это предпочтительно пептид, который может быть лигандом для CD300a и который ингибирует активность CD300a в макрофагах.Preferably, the peptide used as a CD300a binding agent in the present invention is a peptide that inhibits CD300a activity in macrophages, and further preferably a peptide that inhibits CD300a binding to PS. For example, it is preferred to select a peptide that specifically binds to CD300a, and in particular, it is preferred to be a peptide that can be a ligand for CD300a and that inhibits CD300a activity in macrophages.
[0029][0029]
<Лекарственное средство для ишемических заболеваний><Remedy for coronary disease>
«Лекарственное средство для ишемических заболеваний» по настоящему изобретению содержит модулятор активности в качестве активного ингредиента. CD300b-зависимая сигнальная трансдукция фагоцитоза стимулируется модулятором активности, тем самым быстро удаляя (выводя) апоптотические клетки в ишемическом участке посредством фагоцитоза, что позволяет подавлять накопление апоптотических клеток в ткани и лечить или предотвращать ишемические заболевания.The "drug for ischemic disease" of the present invention contains an activity modulator as an active ingredient. CD300b-dependent signal transduction of phagocytosis is stimulated by the activity modulator, thereby rapidly removing (excreting) apoptotic cells in the ischemic site through phagocytosis, which can suppress the accumulation of apoptotic cells in the tissue and treat or prevent ischemic diseases.
[0030][0030]
«Лечение» включает в себя излечение, а также ослабление (облегчение) заболевания или состояния, а «предотвращение» включает предотвращение возникновения заболевания или состояния, а также предотвращение его рецидива после излечения заболевания или состояния."Treatment" includes curing as well as alleviating (alleviating) a disease or condition, and "prevention" includes preventing the onset of the disease or condition, as well as preventing its recurrence after the disease or condition has been cured.
[0031][0031]
Пациентом, получающим лекарственное средство от ишемических заболеваний по настоящему изобретению, может быть человек или не человек (например, млекопитающие, такие как мыши), но предпочтительно человек, еще более предпочтительно, человек, страдающий от ишемического заболевания или подверженный риску его возникновения. The patient receiving the ischemic drug of the present invention may be human or non-human (eg, mammals such as mice), but preferably a human, even more preferably a human suffering from or at risk of ischemic disease.
[0032][0032]
«Ишемическое заболевание», которое является заболеванием, на которое направлено лекарственное средство для лечения ишемических заболеваний по настоящему изобретению, относится к состоянию, при котором ишемия ткани продолжается из-за артериального стеноза или окклюзии, или к неблагоприятному состоянию, вызванному такой ишемией, независимо от наличия или отсутствия субъективных симптомов. Примеры ишемического заболевания включают, но не ограничиваются ими, ишемические заболевания сердца, такие как стенокардия и инфаркт миокарда, ишемические заболевания головного мозга, такие как инфаркт головного мозга и болезнь мойя-мойя, ишемические заболевания почек, такие как почечная недостаточность, ишемические заболевания кишечника, такие как ишемический колит или окклюзия брыжеечной артерии, ишемия конечностей, такая как гангрена или облитерирующий артериосклероз, ишемия сетчатки, такая как диабетическая ретинопатия, ишемическая болезнь легких, ишемия спинного мозга или состояния с их признаками."Ischemic disease", which is the disease targeted by the ischemic drug of the present invention, refers to a condition in which tissue ischemia continues due to arterial stenosis or occlusion, or an adverse condition caused by such ischemia, regardless of the presence or absence of subjective symptoms. Examples of coronary disease include, but are not limited to, coronary heart disease such as angina pectoris and myocardial infarction, cerebral ischemic disease such as cerebral infarction and moyamoya disease, ischemic kidney disease such as renal failure, coronary bowel disease, such as ischemic colitis or mesenteric artery occlusion, limb ischemia such as gangrene or arteriosclerosis obliterans, retinal ischemia such as diabetic retinopathy, coronary pulmonary disease, spinal cord ischemia or conditions with their features.
[0033][0033]
Место введения лекарственного средства от ишемических заболеваний по настоящему изобретению может быть выбрано в соответствии с заболеванием или состоянием, которое является целью введения, и конкретно ничем не ограничено. Например, его можно вводить системно путем введения в кровь, его можно вводить в подслизистую ткань или соединительную ткань или рядом с ней в участке, где возникает ишемия, или его можно вводить непосредственно в участок, где возникает ишемия. В качестве способа введения возможны как пероральное, так и парентеральное введение, но предпочтительным является парентеральное введение, например, внутривенная инъекция, подкожная инъекция, местная инъекция, внутрицеребровентрикулярное введение и тому подобное, и внутривенная инъекция, то есть системное введение является наиболее предпочтительным.The site of administration of the ischemic drug of the present invention may be selected according to the disease or condition to be administered, and is not specifically limited. For example, it can be administered systemically by injection into the blood, it can be injected into or near the submucosal tissue or connective tissue at the site where ischemia occurs, or it can be administered directly at the site where ischemia occurs. As the administration method, both oral and parenteral administration are possible, but parenteral administration, such as intravenous injection, subcutaneous injection, local injection, intracerebroventricular administration, and the like, is preferred, and intravenous injection, that is, systemic administration is most preferred.
[0034][0034]
Лекарственное средство от ишемических заболеваний по настоящему изобретению можно вводить отдельно или в комбинации с другими лекарственными средствами, такими как тромболитические агенты.The ischemic drug of the present invention may be administered alone or in combination with other drugs such as thrombolytic agents.
[0035][0035]
Доза лекарственного средства для лечения ишемических заболеваний по настоящему изобретению конкретно ничем не ограничена, но предпочтительно является настолько малой, насколько это возможно, в пределах диапазона, необходимого для достижения необходимого терапевтического эффекта, с экономической точки зрения и с точки зрения максимально возможного избежания побочных эффектов. В частности, предпочтительно выбирать ее соответствующим образом в соответствии со степенью заболевания, массой пациента, возрастом и полом, а также увеличивать или уменьшать ее в зависимости от степени улучшения и т. д. Кроме того, частота введения предпочтительна от 1 до нескольких раз в день.The dose of the drug for treating ischemic diseases of the present invention is not particularly limited, but is preferably as small as possible within the range necessary to achieve the desired therapeutic effect from an economic point of view and from the point of view of avoiding side effects as much as possible. In particular, it is preferable to select it appropriately according to the degree of the disease, the patient's weight, age and sex, and to increase or decrease it depending on the degree of improvement, etc. In addition, the frequency of administration is preferably from 1 to several times a day. .
[0036][0036]
Аналогично, количество антитела против CD300a, содержащегося в лекарственном средстве от ишемических заболеваний по настоящему изобретению, может быть выбрано соответствующим образом. Например, предпочтительно вводить от 10 до 100 мг, предпочтительно от 20 до 50 мг на кг человека или животного.Similarly, the amount of the anti-CD300a antibody contained in the ischemic drug of the present invention can be appropriately selected. For example, it is preferable to administer 10 to 100 mg, preferably 20 to 50 mg per kg of human or animal.
[0037][0037]
Форма лекарственного средства от ишемических заболеваний по настоящему изобретению конкретно ничем не ограничена и, например, предпочтительно представляет собой раствор или дисперсию, растворенную или диспергированную в разбавителе, чтобы иметь желаемую вязкость или концентрацию содержащихся компонентов, и может быть стерилизована фильтрацией с помощью фильтра в соответствии с обычным способом или может быть стерилизована путем смешивания бактерицида или тому подобного. Кроме того, она может быть в форме экстемпорального препарата, например, она может быть приготовлена в виде твердого препарата методом лиофлизации или тому подобного и может вводиться после растворения или диспергирования в разбавителе перед использованием.The form of the ischemic drug of the present invention is not particularly limited, and for example, it is preferably a solution or dispersion dissolved or dispersed in a diluent to have a desired viscosity or concentration of constituents, and can be sterilized by filter filtration according to in a conventional manner or may be sterilized by mixing a bactericide or the like. In addition, it may be in the form of an extemporaneous preparation, for example, it may be prepared as a solid preparation by lyophilization or the like, and may be administered after being dissolved or dispersed in a diluent before use.
[0038][0038]
«Лекарственное средство от ишемических заболеваний» по настоящему изобретению может дополнительно содержать фармацевтически приемлемую добавку, если необходимо. Например, оно может содержать разбавитель, носитель или наполнитель.The "drug for coronary disease" of the present invention may further contain a pharmaceutically acceptable additive, if necessary. For example, it may contain a diluent, carrier or excipient.
[0039][0039]
Фармацевтически приемлемая добавка особо ничем не ограничивается, если только она не противоречит объекту настоящего изобретения, и ее примеры включают разбавители, носители, наполнители, стабилизаторы, консерванты, буферы, эмульгаторы, такие как поверхностно-активные вещества, красители, загустители, солюбилизирующие агенты, такие как гликоли, и изотонические агенты, такие как хлорид натрия и глицерин.The pharmaceutically acceptable additive is not particularly limited unless it conflicts with the subject matter of the present invention, and examples thereof include diluents, carriers, excipients, stabilizers, preservatives, buffers, emulsifiers such as surfactants, colorants, thickeners, solubilizing agents such as as glycols, and isotonic agents such as sodium chloride and glycerin.
[0040][0040]
Конкретные примеры добавок включают лактозу, глюкозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмал, гуммиарабик, фосфат кальция, неактивные альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, кристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, водный сироп, воду, воду/этанол, воду/гликоль, воду/полиэтилен, гипертонический солевой раствор, гликоль, пропиленгликоль, метилцеллюлозу, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, жирные вещества, такие как минеральное масло или твердые жиры, или их подходящую смесь.Specific examples of additives include lactose, glucose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, gum arabic, calcium phosphate, inactive alginates, tragacanth, gelatin, calcium silicate, crystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, aqueous syrup, water, water/ethanol, water/glycol , water/polyethylene, hypertonic saline, glycol, propylene glycol, methylcellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, fatty substances such as mineral oil or hard fats, or a suitable mixture thereof.
[0041][0041]
Формы, которые можно вводить парентерально, должны быть стерильными и не содержать физиологически неприемлемых агентов, и должны иметь низкую осмоляльность, чтобы минимизировать раздражение или другие побочные эффекты при введении, и поэтому раствор должен быть предпочтительно изотоническим или слегка гипертоническим, например, гипертонический солевой раствор (физиологический раствор).Forms that can be administered parenterally should be sterile and free from physiologically unacceptable agents, and should have low osmolality to minimize irritation or other side effects upon administration, and therefore the solution should preferably be isotonic or slightly hypertonic, such as hypertonic saline ( saline).
ПримерыExamples
[0042][0042]
Далее подходящие аспекты настоящего изобретения описаны более конкретно на основе примеров, однако настоящее изобретение не ограничивается этими примерами.In the following, suitable aspects of the present invention are described more specifically on the basis of examples, however, the present invention is not limited to these examples.
[0043][0043]
[Референсный Пример 1][Reference Example 1]
Апоптоз вызывали добавлением 10 мкМ дексаметазона к тимоцитам, выделенным из образцов тимуса, собранных у мышей дикого типа (C57BL/6J), и культивированных в течение 12 часов, при этом тимоциты дополнительно метили красителем pHrodo (товарный знак).Apoptosis was induced by adding 10 μM dexamethasone to thymocytes isolated from thymus samples collected from wild-type mice (C57BL/6J) and cultured for 12 hours, while thymocytes were additionally labeled with pHrodo (trademark).
[0044][0044]
В тоже время клетки перитонеального экссудата мышей дикого типа или мышей CD300b KO собирали и культивировали в течение 30 минут для прикрепления макрофагов к культуральной чашке.At the same time, peritoneal exudate cells from wild-type mice or CD300b KO mice were harvested and cultured for 30 minutes to attach macrophages to the culture dish.
[0045][0045]
1,5х106 меченых тимоцитов и 1,5х105 макрофагов культивировали в течение 90 минут в присутствии 20 нг/мл нейтрализующего антитела против MerTk (2B10C42, Biolegend) и антитела против CD300a (TKA139, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) или в присутствии 20 нг/мл антитела против MerTk (2B10C42, Biolegend) и 1 нг/мл контрольного антитела (IC17-мышиный IgG1 sFc, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.). Затем с помощью проточной цитометрии (BD FACSAria (торговая марка), BD Biosciences) подсчитывали общее количество макрофагов, положительных по анти-CD11b-антителу (M1/70, TONBO bioscience) и антителу против F480 (BM8, Biolegend), и количество pHrodo-положительных клеток. После этого рассчитывали отношение последнего к первому, и значение определяли как соотношение макрофагов, имеющих фагоцитированные апоптотические клетки (FlowJo (зарегистрированный товарный знак), FlowJo LLC).1.5x10 6 labeled thymocytes and 1.5x10 5 macrophages were cultured for 90 minutes in the presence of 20 ng/ml neutralizing anti-MerTk antibody (2B10C42, Biolegend) and anti-CD300a antibody (TKA139, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) or in the presence of 20 ng/ml anti-MerTk antibody (2B10C42, Biolegend) and 1 ng/ml control antibody (IC17-mouse IgG1 sFc, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.). The total number of macrophages positive for anti-CD11b antibody (M1/70, TONBO bioscience) and anti-F480 antibody (BM8, Biolegend) and the number of pHrodo- positive cells. Thereafter, the ratio of the latter to the former was calculated, and the value was determined as the ratio of macrophages having phagocytosed apoptotic cells (FlowJo (registered trademark), FlowJo LLC).
[0046][0046]
Результаты представлены на Фигуре 1.The results are presented in Figure 1.
[0047][0047]
Макрофаги, полученные от мышей CD300b KO, имеют значительно более низкую скорость фагоцитоза апоптотических клеток по сравнению с макрофагами WT, независимо от наличия или отсутствия антитела против CD300a.Macrophages derived from CD300b KO mice have a significantly lower rate of phagocytosis of apoptotic cells compared to WT macrophages, regardless of the presence or absence of anti-CD300a antibody.
[0048][0048]
В данном случае, в клетках, в которых CD300a был нейтрализован антителом против CD300a, уровень фагоцитоза апоптотических клеток значительно увеличился в макрофагах WT, однако увеличение скорости фагоцитоза не наблюдалось в макрофагах CD300b KO.Here, in cells in which CD300a was neutralized with an anti-CD300a antibody, the rate of phagocytosis of apoptotic cells was significantly increased in WT macrophages, but no increase in phagocytosis rate was observed in CD300b KO macrophages.
[0049][0049]
Следовательно, было обнаружено, что фагоцитоз макрофагов, которому способствует CD300b, усиливается антителом против CD300a.Therefore, macrophage phagocytosis promoted by CD300b was found to be enhanced by anti-CD300a antibody.
[0050][0050]
[Референсный Пример 2][Reference Example 2]
Мышь CD300afl/flLysm-Cre, которая является мышью с условным нокаутом по макрофаг-специфичному CD300a, была получена путем скрещивания мыши CD300afl/fl (производимой Центром лабораторных животных Университета Цукубы) с мышью Lysm-Cre (лаборатория Джексона).The CD300a fl/fl Lysm-Cre mouse, which is a macrophage-specific CD300a conditional knockout mouse, was obtained by crossing a CD300a fl/fl mouse (manufactured by the Laboratory Animal Center of the University of Tsukuba) with a Lysm-Cre mouse (Jackson Laboratory).
[0051][0051]
Брюшную полость каждой из мышей CD300afl/fl в возрасте 8-14 недель (контрольных мышей) и мышей CD300afl/flLysm-Cre вскрывали под анестезией, и закрывали с помощью зажимов двустороннюю почечную артерию (обработка для вызова почечной ишемии).The abdomen of each of 8-14 weeks old CD300a fl /fl mice (control mice) and CD300a fl/fl Lysm-Cre mice was opened under anesthesia and the bilateral renal artery was closed with clamps (renal ischemia treatment).
[0052][0052]
После 25 или 35 минут окклюзии зажимы удаляли, чтобы снять окклюзию (реперфузионная обработка), и живот закрывали. After 25 or 35 minutes of occlusion, the clamps were removed to remove the occlusion (reperfusion treatment) and the abdomen was closed.
[0053][0053]
Для каждой мыши измеряли азот мочевины (BUN) и сывороточную концентрацию креатинина (Cre) через 24 часа после реперфузионной обработки. For each mouse, urea nitrogen (BUN) and serum creatinine concentration (Cre) were measured 24 hours after the reperfusion treatment.
[0054][0054]
Кроме того, для мышей, которые были окклюзированы в течение 35 минут и подвергались реперфузионной обработке, также наблюдали выживаемость после обработки. In addition, mice that were occluded for 35 minutes and subjected to reperfusion treatment also observed post-treatment survival.
[0055][0055]
Результаты представлены на Фигуре 2.The results are presented in Figure 2.
[0056][0056]
Эти результаты показывают, что у мышей подавляется острое повреждение почек после обработки почечной ишемии, и степень выживаемости сохраняется у мышей, которые дефицитны по CD300a в макрофагах по сравнению с контрольной группой.These results show that acute kidney injury is suppressed in mice after renal ischemia treatment, and the survival rate is maintained in mice that are CD300a deficient in macrophages compared to the control group.
[0057][0057]
[Референсный Пример 3][Reference Example 3]
Двусторонние почечные артерии каждой из мышей CD300afl/flLysm-Cre и мышей CD300afl/fl (контрольных мышей), полученных тем же способом, что и в референсном Примере 2, закупоривали в течение 30 минут и затем обрабатывали для реперфузии тем же способом, что и в референсном Примере 2. Почки собирали через 24 часа и 72 часа после реперфузионной обработки, и образцы ткани готовили в соответствии с обычным способом с последующим окрашиванием гематоксилин-эозином или окрашиванием TUNEL (Apoptag, Millipore).Bilateral renal arteries of each of CD300a fl/fl Lysm-Cre mice and CD300a fl/fl mice (control mice) obtained in the same way as in Reference Example 2 were plugged for 30 minutes and then treated for reperfusion in the same way, as in Reference Example 2. Kidneys were harvested 24 hours and 72 hours after reperfusion treatment, and tissue samples were prepared according to the usual method followed by hematoxylin-eosin staining or TUNEL staining (Apoptag, Millipore).
[0058][0058]
Результаты представлены на Фигуре 3. Было обнаружено, что у мышей, дефицитных по CD300a в макрофагах, по сравнению с контрольной группой апоптоз в ткани после обработки почечной ишемии был подавлен, и накопление апоптотических клеток в ткани также было подавлено. The results are shown in Figure 3. In macrophage CD300a-deficient mice, compared with the control group, apoptosis in tissue after renal ischemia treatment was found to be suppressed, and accumulation of apoptotic cells in tissue was also suppressed.
[0059][0059]
[Пример 1][Example 1]
Контрольное антитело (IC17-мышиный IgG1 sFc, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) или антитело к CD300a (TKA139, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) вводили внутривенно мышам дикого типа (20 мг/кг) (C57BL /6J). Через 3 часа после введения проводили обработку почечной ишемии с последующей реперфузионной обработкой через 30 минут тем же способом, что и в референсном примере 2, и у каждой измеряли азот мочевины (BUN) и сывороточные концентрации креатинина (Cre) через 24 часа.Control antibody (IC17-mouse IgG1 sFc, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) or anti-CD300a antibody (TKA139, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) was intravenously administered to wild-type mice (20 mg/kg) (C57BL /6J). 3 hours after administration, renal ischemia treatment was performed, followed by
[0060][0060]
Результаты представлены на Фигуре 4. Было обнаружено, что острое повреждение почек после обработки почечной ишемии можно подавить, предварительно вводя мышам антитело к CD300a.The results are shown in Figure 4. It was found that acute kidney injury after treatment of renal ischemia can be suppressed by pretreating mice with an anti-CD300a antibody.
[0061][0061]
[Референсный Пример 4][Reference Example 4]
Для каждой из мышей CD300afl/flLysm-Cre и мышей CD300afl/fl (контрольных мышей), полученных тем же способом, что и в референсном примере 2, модель окклюзии правой средней мозговой артерии (MCAO) получали путем вскрытия шеи под анестезией, и размещения монофиламентного катетера с силиконовым покрытием (Doccol Corporation) путем введения его из сонной артерии для окклюзии правой средней мозговой артерии (обработка для вызова транзиторной церебральной ишемии) (Shichita et al. Nat Med 2016). Через 60 минут после окклюзии катетер удаляли для перфузии мозгового кровотока, и закрывали хирургическую рану. For each of CD300a fl/fl Lysm-Cre mice and CD300a fl/fl mice (control mice) obtained in the same manner as in Reference Example 2, a Right Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) model was obtained by opening the neck under anesthesia, and placement of a silicone-coated monofilament catheter (Doccol Corporation) by insertion from the carotid artery to occlude the right middle cerebral artery (transient cerebral ischemia treatment) (Shichita et al. Nat Med 2016). 60 minutes after occlusion, the catheter was removed to perfuse cerebral blood flow and the surgical wound was closed.
[0062][0062]
После этого мышей наблюдали в течение нескольких дней, и неврологические данные оценивали на основании следующих неврологических показателей со ссылкой на Bederson et al. Stroke 1986.Thereafter, mice were observed for several days, and neurological data were evaluated based on the following neurological parameters with reference to Bederson et al. Stroke 1986.
[0063][0063]
0: нет четких симптомов, 1: сгибание передних конечностей, 2: снижение сопротивления боковому толчку без кружения, 3: Кружение, 4: Принудительное кружение, 5: Почти без движения, 6: Мертво.0: No clear symptoms, 1: Forelimb flexion, 2: Decreased lateral push resistance without circling, 3: Circling, 4: Forced circling, 5: Almost no movement, 6: Dead.
[0064][0064]
Результаты представлены на Фигуре 5. Было обнаружено, что неврологическое повреждение, вызванное церебральной ишемией, было более умеренным у мышей модели MCAO, полученных с использованием мышей, у которых имеется дефицит CD300a в макрофагах, чем у мышей модели MCAO, полученных с использованием контрольных мышей.The results are shown in Figure 5. Cerebral ischemia-induced neurological damage was found to be more moderate in MCAO model mice made using mice that have CD300a deficiency in macrophages than in MCAO model mice made using control mice.
[0065][0065]
[Пример 2][Example 2]
Обработку для вызова транзиторной церебральной ишемии проводили на мышах дикого типа (C57BL/6J) тем же способом, что и в референсном Примере 4. Через 60 минут после обработки внутривенно вводили 20 мг/кг контрольного антитела (IC17-мышиный IgG1 sFc, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) или антитела против CD300a. После этого неврологические данные у каждой мыши были оценены на основе тех же показателей, что и в референсном Примере 4.Treatment to induce transient cerebral ischemia was performed on wild-type mice (C57BL/6J) in the same manner as in reference Example 4. 60 minutes after treatment, 20 mg/kg of control antibody (IC17-mouse IgG1 sFc, Chugai Pharmaceutical Co. ., Ltd.) or anti-CD300a antibodies. Thereafter, the neurological data of each mouse were evaluated based on the same scores as in Reference Example 4.
[0066][0066]
Результаты представлены на Фигуре 6. Было обнаружено, что неврологическое повреждение, вызванное обработкой для вызова транзиторной церебральной ишемии, было относительно менее выраженным в группе мышей, которым вводили антитело к CD300a, чем в группе мышей, получавших контрольное антитело. Это говорит о том, что неврологическое повреждение, вызванное церебральной ишемией, такой как инфаркт мозга, может быть предотвращено антителом против CD300a.The results are shown in Figure 6. It was found that neurological damage caused by treatment to induce transient cerebral ischemia was relatively less pronounced in the group of mice that were injected with the anti-CD300a antibody than in the group of mice that received the control antibody. This suggests that neurological damage caused by cerebral ischemia, such as cerebral infarction, can be prevented by anti-CD300a antibody.
[0067][0067]
[Пример 3][Example 3]
Обработку для вызова транзиторной церебральной ишемии проводили на мышах дикого типа (C57BL/6J) тем же способом, что и в референсном Примере 4. Через 3 часа после обработки отбирали мышей с вышеупомянутым неврологическим показателем 3 (кружение), и каждой из них внутривенно вводили 20 мг/кг контрольного антитела или антитела против CD300a, затем неврологические данные оценивали на основании неврологических показателей, приведенных в референсном Примере 4.Treatment to induce transient cerebral ischemia was performed on wild-type (C57BL/6J) mice in the same manner as in Reference Example 4. 3 hours after treatment, mice with the above neurological score of 3 (circling) were selected, and each of them was intravenously injected with 20 mg/kg of control antibody or anti-CD300a antibody, then neurological data were evaluated based on the neurological parameters shown in Reference Example 4.
[0068][0068]
На 5 день после введения антитела против CD300a мышей умерщвляли, собирали головной мозг для приготовления образца ткани головного мозга, который подвергали окрашиванию гематоксилин-эозином и наблюдали с помощью оптического микроскопа (keyence) для измерения площади области инфаркта. On
[0069][0069]
Результаты представлены на Фигуре 7. В группе мышей, которым вводили антитело к CD300a, неврологический показатель значительно улучшился по сравнению с группой мышей, которым вводили контрольное антитело, и результаты окрашивания также показали, что площадь области инфаркта была значительно уже.The results are shown in Figure 7. In the group of mice injected with the anti-CD300a antibody, the neurological score improved significantly compared to the group of mice injected with the control antibody, and the staining results also showed that the area of the infarct area was significantly narrower.
[0070][0070]
Это говорит о том, что неврологическое повреждение, вызванное церебральной ишемией, такой как инфаркт мозга, можно подвергать лечению с помощью антитела против CD300a. This suggests that neurological damage caused by cerebral ischemia, such as cerebral infarction, can be treated with an anti-CD300a antibody.
[0071][0071]
[Референсный Пример 5][Reference Example 5]
Для каждой из мышей CD300afl/flLysm-Cre и мышей дикого типа (C57BL/6J), полученных тем же способом, что и в референсном Примере 2, торакотомию выполняли с помощью искусственного дыхания после общей анестезии, и левую переднюю нисходящую артерию лигировали с помощью нити 6-0 Proline (зарегистрированная торговая марка) для создания модели инфаркта миокарда (Mahmoud et al. Nat Prot 2014). Спустя одну неделю после операции, гнезда инфаркта были подтверждены с помощью эха-Доплера, и для мышей, у которых было подтверждено гнездо инфаркта, наблюдали процент выживаемости.For each of CD300a fl/fl Lysm-Cre mice and wild-type (C57BL/6J) mice obtained in the same manner as in Reference Example 2, thoracotomy was performed with artificial respiration after general anesthesia, and the left anterior descending artery was ligated to using 6-0 Proline suture (registered trademark) to create a model of myocardial infarction (Mahmoud et al. Nat Prot 2014). One week after surgery, the infarct nests were confirmed by Doppler echo, and the percentage of survival was observed for mice in which the infarct nest was confirmed.
[0072][0072]
Результаты представлены на Фигуре 8. Было обнаружено, что выживаемость была значительно выше у мышей с моделью инфаркта миокарда, полученных с использованием мышей, дефицитных по CD300a в макрофагах, чем у мышей с моделью инфаркта миокарда, полученных с использованием контрольных мышей.The results are shown in Figure 8. Survival was found to be significantly higher in myocardial infarction model mice generated using macrophage CD300a deficient mice than in myocardial infarction model mice generated using control mice.
Claims (8)
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017229958 | 2017-11-30 | ||
| JP2017-229958 | 2017-11-30 | ||
| PCT/JP2018/043862 WO2019107445A1 (en) | 2017-11-30 | 2018-11-28 | Activity modulator |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020121200A3 RU2020121200A3 (en) | 2021-12-30 |
| RU2020121200A RU2020121200A (en) | 2021-12-30 |
| RU2773957C2 true RU2773957C2 (en) | 2022-06-14 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013077186A1 (en) * | 2011-11-21 | 2013-05-30 | 国立大学法人筑波大学 | Activity modulator, medicinal agent comprising same, use of cd300a gene-deficient mouse, and anti-cd300a antibody |
| RU2576036C2 (en) * | 2010-03-17 | 2016-02-27 | Тайвекс Терапьютикс Корпорейшн | Modulators of hec1 activity and methods therefor |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2576036C2 (en) * | 2010-03-17 | 2016-02-27 | Тайвекс Терапьютикс Корпорейшн | Modulators of hec1 activity and methods therefor |
| WO2013077186A1 (en) * | 2011-11-21 | 2013-05-30 | 国立大学法人筑波大学 | Activity modulator, medicinal agent comprising same, use of cd300a gene-deficient mouse, and anti-cd300a antibody |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| LANKRY, D., et al., "The interaction between CD300a and phosphatidylserine inhibits tumor cell killing by NK cells", Eur. J. Immunol., 2013, Vol. 43, p. 2151-2161. * |
| W0 201525956 А1, 26.02.2015. SHIMHADRI, V. R., et al., "Human CD300a binds to phosphatidylethanolamine and phosphatidylserine, and modulates the phagocytosis of dead cells", Blood, 2012, Vol.119, No. 12, p. 2799-2809, Abstract, 2805 —2807;. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2013189470A (en) | Complement inhibition for improved nerve regeneration | |
| Lei et al. | Growth factors outside the PDGF family drive experimental PVR | |
| KR101956585B1 (en) | Combination therapy using immunoglobulin and c1-inhibitor | |
| EA017945B1 (en) | Compositions and methods for the treatment and prevention of fibrotic, inflammatory and neovascularization conditions of the eye of an animal | |
| WO2012174055A1 (en) | Wound healing using complement inhibitors | |
| RU2672341C2 (en) | Use of peptide for treatment of cardiovascular diseases | |
| JP2019507137A (en) | Anti-c-MET antibody and use thereof | |
| JP2011529922A (en) | Method for treating reperfusion injury | |
| Xiaohong et al. | CFLAR is a critical regulator of cerebral ischaemia-reperfusion injury through regulating inflammation and endoplasmic reticulum (ER) stress | |
| PT1737490E (en) | Methods of treating atherosclerosis | |
| US20220340659A1 (en) | Activity Modulator | |
| TWI798320B (en) | Therapeutic agent for nervous system disease | |
| RU2773957C2 (en) | Activity modulator | |
| US20220088015A1 (en) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of age-related cardiometabolic diseases | |
| CA2304956C (en) | Pharmaceutical composition for preventing or treating ischemic diseases | |
| TWI842689B (en) | Activity regulator | |
| US20240050529A1 (en) | Modulating lymphatic vessels in neurological disease | |
| JP2015030715A (en) | Pharmaceutical composition for therapy of pneumonia and the like | |
| BR112020000115A2 (en) | pharmaceutically acceptable salts of polypeptides and use thereof | |
| US11634496B2 (en) | C-MET agonistic antibody and use thereof | |
| US20170333478A1 (en) | Use of z-butylidenephthalide in activating autoimmune system | |
| WO2023222051A1 (en) | Use of mif and ripk1 in perioperative ischemic brain injuries | |
| WO2018137701A1 (en) | Pharmaceutical composition targeting cxcr7 and method | |
| KR20230063006A (en) | Peptides inhibiting activity of CDK9 and uses thereof | |
| Hossain-Ibrahim | Studies on axonal regeneration in the CNS and peripheral nerves |