RU2773747C2 - Stable liquid pharmaceutical composition - Google Patents
Stable liquid pharmaceutical composition Download PDFInfo
- Publication number
- RU2773747C2 RU2773747C2 RU2019136641A RU2019136641A RU2773747C2 RU 2773747 C2 RU2773747 C2 RU 2773747C2 RU 2019136641 A RU2019136641 A RU 2019136641A RU 2019136641 A RU2019136641 A RU 2019136641A RU 2773747 C2 RU2773747 C2 RU 2773747C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- buffer
- phosphate
- antibody
- tocilizumab
- amino acid
- Prior art date
Links
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 26
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 5
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 claims abstract description 91
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 claims abstract description 91
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 88
- 108010078548 tocilizumab Proteins 0.000 claims abstract description 78
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 61
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 37
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims abstract description 35
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 86
- 229960003989 tocilizumab Drugs 0.000 claims description 77
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-Methionine Natural products CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 26
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 25
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 25
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 25
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 18
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 17
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 16
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 15
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 claims description 15
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 14
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 14
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 13
- 230000003078 antioxidant Effects 0.000 claims description 12
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K [O-]P([O-])([O-])=O Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 claims description 5
- 229950008882 Polysorbate Drugs 0.000 claims description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 2
- 230000000087 stabilizing Effects 0.000 claims description 2
- 229940009098 Aspartate Drugs 0.000 claims 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N DL-aspartic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 abstract description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 24
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 21
- XAEBIUSJTBNCTK-JEDNCBNOSA-N (2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoic acid;phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 XAEBIUSJTBNCTK-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 19
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 19
- 229940068968 Polysorbate 80 Drugs 0.000 description 17
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 17
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 17
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 17
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 15
- 229960004452 Methionine Drugs 0.000 description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 12
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 12
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 11
- -1 phosphate amino acid Chemical class 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 9
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 8
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 8
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 8
- 229940021015 I.V. solution additive Amino Acids Drugs 0.000 description 7
- 230000002378 acidificating Effects 0.000 description 7
- 238000002022 differential scanning fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 7
- TYBFYWFTPNZNIS-DKWTVANSSA-N (2S)-2-aminobutanedioic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O TYBFYWFTPNZNIS-DKWTVANSSA-N 0.000 description 5
- YBPUBXQZBUQACE-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;phosphoric acid Chemical compound NCC(O)=O.OP(O)(O)=O YBPUBXQZBUQACE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- PAZSAZYCZWMYHU-UHFFFAOYSA-N butanedioic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CCC(O)=O PAZSAZYCZWMYHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic Effects 0.000 description 5
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- IUSLVWQOFNEVIU-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;butanedioic acid Chemical compound NCC(O)=O.OC(=O)CCC(O)=O IUSLVWQOFNEVIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 4
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 4
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutic aid Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 239000008181 tonicity modifier Substances 0.000 description 4
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 4
- 108010010691 Trastuzumab Proteins 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N Trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 3
- 229940074410 Trehalose Drugs 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004059 degradation Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 3
- 229940119059 Actemra Drugs 0.000 description 2
- 229960001230 Asparagine Drugs 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L MgCl2 Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L Sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Vitamin C Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000008380 degradant Substances 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 229940009662 edetate Drugs 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 2
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 2
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- YUKYSOJQDJMANI-DFWYDOINSA-N (2S)-2-aminopentanedioic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YUKYSOJQDJMANI-DFWYDOINSA-N 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-GSVOUGTGSA-N (R)-monothioglycerol Chemical compound OC[C@@H](O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 7681-57-4 Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N Ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SOIFLUNRINLCBN-UHFFFAOYSA-N Ammonium thiocyanate Chemical compound [NH4+].[S-]C#N SOIFLUNRINLCBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003589 Arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 230000005653 Brownian motion process Effects 0.000 description 1
- 229940043253 Butylated Hydroxyanisole Drugs 0.000 description 1
- 229940095259 Butylated Hydroxytoluene Drugs 0.000 description 1
- 239000004255 Butylated hydroxyanisole Substances 0.000 description 1
- CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N Butylated hydroxyanisole Chemical compound COC1=CC=C(O)C(C(C)(C)C)=C1.COC1=CC=C(O)C=C1C(C)(C)C CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004322 Butylated hydroxytoluene Substances 0.000 description 1
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940044199 Carnosine Drugs 0.000 description 1
- 108010087806 Carnosine Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 229960002433 Cysteine Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QAQJMLQRFWZOBN-LAUBAEHRSA-N L-ascorbyl-6-palmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O QAQJMLQRFWZOBN-LAUBAEHRSA-N 0.000 description 1
- 239000011786 L-ascorbyl-6-palmitate Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001672 Ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229940067082 Pentetate Drugs 0.000 description 1
- 229960000502 Poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 229940075579 Propyl Gallate Drugs 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N Raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- XWGJFPHUCFXLBL-UHFFFAOYSA-M Rongalite Chemical compound [Na+].OCS([O-])=O XWGJFPHUCFXLBL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960005055 SODIUM ASCORBATE Drugs 0.000 description 1
- GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N Sodium sulfide Chemical compound [Na+].[Na+].[S-2] GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M Sodium thiocyanate Chemical compound [Na+].[S-]C#N VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N Thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K Trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L Zinc chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 230000000111 anti-oxidant Effects 0.000 description 1
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010385 ascorbyl palmitate Nutrition 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 238000005537 brownian motion Methods 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 235000019282 butylated hydroxyanisole Nutrition 0.000 description 1
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L cacl2 Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- CQOVPNPJLQNMDC-ZETCQYMHSA-N carnosine zwitterion Chemical compound [NH3+]CCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CNC=N1 CQOVPNPJLQNMDC-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229940023913 cation exchange resins Drugs 0.000 description 1
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 239000001064 degrader Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidates Drugs 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 238000003260 fluorescence intensity Methods 0.000 description 1
- 238000005558 fluorometry Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037240 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- QDHHCQZDFGDHMP-UHFFFAOYSA-N monochloramine Chemical compound ClN QDHHCQZDFGDHMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N propyl 3,4,5-trihydroxybenzoate Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000473 propyl gallate Substances 0.000 description 1
- 235000010388 propyl gallate Nutrition 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940001607 sodium bisulfite Drugs 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960001790 sodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000004296 sodium metabisulphite Substances 0.000 description 1
- 229910052979 sodium sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940079101 sodium sulfide Drugs 0.000 description 1
- 229940001482 sodium sulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 239000011778 trisodium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000019263 trisodium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 108020005087 unfolded proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Область техники, к которой относится изобретениеThe field of technology to which the invention belongs
Настоящее изобретение относится к устойчивому жидкому препарату антитела, причем антитело включено в двойную буферную систему, включающую «фосфатно-аминокислотный буфер».The present invention relates to a stable liquid preparation of antibodies, and the antibody is included in a double buffer system, including "phosphate-amino acid buffer".
Уровень техникиState of the art
Достижения в биотехнологии проложили путь для разработки большого числа антител для терапевтического применения. Однако для любых терапевтических средств на основе антител устойчивость препарата антитела является одним из наиболее важных критериев для уверенности в его безопасности, а также в его эффективном введении.Advances in biotechnology have paved the way for the development of a large number of antibodies for therapeutic use. However, for any antibody-based therapeutic agent, the stability of an antibody preparation is one of the most important criteria for ensuring its safety as well as its effective administration.
Жидкие препараты белков/антител как правило предпочтительны из-за удобства их введения и соответствия при введении со многими коммерчески доступными устройствами. Однако антитела, будучи крупнее и более сложными по сравнению с традиционными «низкомолекулярными» лекарственными средствами, также более неустойчивы в растворе. Антитела более чувствительны к рН, температуре и окислению и могут претерпевать различные ковалентные и нековалентные модификации и/или разрушения в растворе. В частности, разрушение антитела происходит быстрее в жидких препаратах, что ведет к физической и химической нестабильности молекулы. Примеры химической нестабильности включают деамидирование, гидролиз, окисление или изменение дисульфидной связи, в то время как физическая нестабильность может являться результатом денатурации, агрегации, адсорбции или осаждения.Liquid protein/antibody preparations are generally preferred due to their ease of administration and compliance with many commercially available devices when administered. However, antibodies, being larger and more complex than traditional "small molecular weight" drugs, are also more unstable in solution. Antibodies are more sensitive to pH, temperature, and oxidation and can undergo various covalent and non-covalent modifications and/or degradations in solution. In particular, antibody degradation is faster in liquid formulations, leading to physical and chemical instability of the molecule. Examples of chemical instability include deamidation, hydrolysis, oxidation, or disulfide change, while physical instability may result from denaturation, aggregation, adsorption, or precipitation.
Кроме того, жидкие препараты с высокими концентрациями антитела/белка показывают высокую вязкость и повышенную агрегацию в растворе, что влияет на устойчивость и эффективность молекулы. Таким образом, антитела в жидкости/растворе выставляют присущие им вопросы по включению в препараты для терапевтических применений.In addition, liquid formulations with high antibody/protein concentrations show high viscosity and increased aggregation in solution, which affects the stability and potency of the molecule. Thus, antibodies in liquid/solution raise their inherent questions for incorporation into formulations for therapeutic applications.
Цель настоящего изобретения направлена на такие вопросы при разработке устойчивых препаратов антител.The aim of the present invention is to address such questions in the development of resistant antibody preparations.
Сущность изобретенияThe essence of the invention
Настоящее изобретение относится к устойчивому жидкому препарату антител, причем препарат включает двойную буферную систему, включающую в качестве буфера фосфат и аминокислоту.The present invention relates to a stable liquid preparation of antibodies, and the preparation includes a double buffer system, including as a buffer phosphate and amino acid.
Компоненты. Аминокислотный компонент в двойной буферной системе является противоионом к фосфатному компоненту. Указанная «фосфатно-аминокислотная» двойная буферная система создает возможность стабилизации антитела в интервале концентраций от примерно 10 мг/мл до примерно 200 мг/мл. В частности, изобретение относится к устойчивому жидкому препарату в фосфато-аминокислотном буфере, включающему сорбит, поверхностно-активное вещество и, необязательно, аргинин.Components. The amino acid component in the double buffer system is the counterion to the phosphate component. This "phosphate-amino acid" double buffer system allows the stabilization of the antibody in the concentration range from about 10 mg/ml to about 200 mg/ml. In particular, the invention relates to a stable liquid formulation in a phosphate amino acid buffer comprising sorbitol, a surfactant and optionally arginine.
Конкретно, указанный выше препарат по изобретению лишен какого-либо (каких-либо) известного(ых) антиоксиданта(ов). Иными словами, состав препарата по изобретению защищает антитела (например, тоцилизумаб) от окисления даже без использования в композиции какого-либо (каких-либо) известного(ых) антиоксиданта(ов).Specifically, the above formulation of the invention is devoid of any known antioxidant(s). In other words, the composition of the preparation according to the invention protects antibodies (for example, tocilizumab) from oxidation even without the use of any known antioxidant(s) in the composition.
Кроме того, настоящее изобретение относится к устойчивому жидкому препарату антител с низкой вязкостью, причем препарат включает «фосфатно-аминокислотную» буферную систему, и причем вязкость препарата составляет менее 10 сП и предпочтительно менее 5 сП.In addition, the present invention relates to a stable liquid preparation of antibodies with low viscosity, and the preparation includes a "phosphate-amino acid" buffer system, and wherein the viscosity of the preparation is less than 10 cps and preferably less than 5 cps.
Кроме того, антитело в препарате, включенное в «фосфатно-аминокислотную» буферную систему, устойчиво в таких условиях хранения, как 2-8°С в течение по меньшей мере 6 месяцев или при 25°С в течение по меньшей мере 6 месяцев или при 40°С в течение по меньшей мере 2 недель или при 40°С в течение по меньшей мере 4 недель.In addition, the antibody in the preparation, included in the "phosphate-amino acid" buffer system, is stable under storage conditions such as 2-8°C for at least 6 months or at 25°C for at least 6 months or at 40°C for at least 2 weeks or at 40°C for at least 4 weeks.
Содержание агрегатов в композиции антитела, полученной в «фосфатно-аминокислотной» буферной системе, составляет менее 5%, и содержание мономеров составляет по меньшей мере 95% в указанных выше условиях хранения.The content of aggregates in the composition of the antibodies obtained in the "phosphate-amino acid" buffer system is less than 5%, and the content of monomers is at least 95% under the above storage conditions.
Краткое описание чертежейBrief description of the drawings
Фигура I иллюстрирует эксклюзионную хроматографию (данные SEC), влияние различных буферов на содержание HMW и мономера в препаратах тоцилизумаба (230 мг/мл), полученных согласно примеру 1. Фигура I(а) представляет содержание HMW, фигура I(b) представляет содержание мономера.Figure I illustrates size exclusion chromatography (SEC data), effect of different buffers on HMW and monomer content in tocilizumab preparations (230 mg/ml) prepared according to Example 1. Figure I(a) represents HMW content, figure I(b) represents monomer content .
Фигура II иллюстрирует данные ионообменной хроматографии (IEX), влияние различных буферов на содержание главного пика препаратов тоцилизумаба (230 мг/мл), полученных согласно примеру 1.Figure II illustrates ion exchange chromatography (IEX) data, the effect of various buffers on the main peak content of tocilizumab preparations (230 mg/ml) obtained according to example 1.
Фигура III иллюстрирует данные дифференциальной сканирующей флуориметрии (DSF), влияние различных сахаров на устойчивость тоцилизумаба после исследований с замораживанием-оттаиванием.Figure III illustrates differential scanning fluorimetry (DSF) data, the effect of various sugars on tocilizumab stability after freeze-thaw studies.
Фигура IV иллюстрирует данные дифференциального светорассеяния (DLS), влияние различных эксципиентов на устойчивость препаратов тоцилизумаба высокой концентрации, полученных согласно примеру 6.Figure IV illustrates differential light scatter (DLS) data, the effect of various excipients on the stability of high strength tocilizumab formulations prepared according to Example 6.
Подробное описание изобретенияDetailed description of the invention
ОпределенияDefinitions
Термин «антитело» относится к гликопротеину, включающему по меньшей мере две тяжелые (Н) цепи и две легкие (L) цепи, соединенные между собой дисульфидными связями, или его антигенсвязывающей части. Термин «антитело», используемый в настоящем описании, охватывает целые антитела или любой антигенсвязывающий фрагмент (т.е. «антигенсвязывающую часть») или его слитый белок.The term "antibody" refers to a glycoprotein comprising at least two heavy (H) chains and two light (L) chains linked by disulfide bonds, or an antigen-binding portion thereof. The term "antibody" as used herein encompasses whole antibodies or any antigen-binding fragment (i.e., "antigen-binding portion") or fusion protein thereof.
Термин «устойчивый» препарат относится к препарату, в котором антитело сохраняет свою физическую стабильность и/или химическую стабильность и/или биологическую активность после хранения.The term "resistant" drug refers to a drug in which the antibody retains its physical stability and/or chemical stability and/or biological activity after storage.
Термин «антиоксидант», упоминаемый в настоящем описании, включает агент, который ингибирует окисление и, таким образом, используется для предотвращения разрушения препаратов путем окислительного процесса. Такие соединения включают, например и без ограничения, метионин, цистеин, карнозин, аскорбиновую кислоту, аскорбилпальмитат, лимонную кислоту, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, гидрофосфорную кислоту, монотиоглицерин, пропилгаллат, аскорбат натрия, цитрат натрия, сульфид натрия, сульфит натрия, бисульфит натрия, формальдегид-сульфоксилат натрия, тиогликолевую кислоту, метабисульфит натрия, ЭДТК (эдетат), пентетат. Раскрытый препарат по изобретению лишен антиоксиданта, в частности, метионина.The term "antioxidant" as used herein includes an agent that inhibits oxidation and thus is used to prevent degradation of drugs by the oxidative process. Such compounds include, for example and without limitation, methionine, cysteine, carnosine, ascorbic acid, ascorbyl palmitate, citric acid, butylated hydroxyanisole, butylated hydroxytoluene, hydrophosphoric acid, monothioglycerol, propyl gallate, sodium ascorbate, sodium citrate, sodium sulfide, sodium sulfite, sodium bisulfite , sodium formaldehyde sulfoxylate, thioglycolic acid, sodium metabisulphite, EDTA (edetate), pentetate. The disclosed preparation according to the invention is devoid of an antioxidant, in particular methionine.
Исследования устойчивости предоставляют данные о качестве антитела под влиянием различных факторов окружающей среды со временем. В ICH «Q1A: Stability Testing of New Drug Substances and Products» указывается, что данные по ускоренным исследованиям устойчивости можно использовать для оценки влияния кратковременных отклонений в большую или меньшую сторону от условий хранения по инструкции, которые могут иметь место при транспортировке антител.Resistance studies provide data on the quality of an antibody under the influence of various environmental factors over time. The ICH "Q1A: Stability Testing of New Drug Substances and Products" indicates that data from accelerated stability studies can be used to evaluate the impact of short-term deviations above or below the labeled storage conditions that may occur during the transport of antibodies.
Различные аналитические методы доступны для измерения физического и химического разрушения антитела в фармацевтических препаратах. Антитело «сохраняет свою физическую стабильность» в фармацевтическом препарате, если он не показывает признаков агрегации, осаждения и/или денатурации после визуальной проверки цвета и/или прозрачности или при измерениях методами УФ-светорассеяния или эксклюзионной хроматографии. Говорят, что антитело «сохраняет свою химическую стабильность» в фармацевтическом препарате, когда оно не показывает или показывает минимальное образование вариантов продукта, которые могут включать варианты, полученные в результате химической модификации антитела, представляющего интерес, такой как деаминирование, окисление и т.д.. Аналитические методы, такие ионообменная хроматография и гидрофобная ионная хроматография, можно использовать для изучения химических вариантов продукта. Various analytical methods are available to measure the physical and chemical degradation of an antibody in pharmaceuticals. An antibody "retains its physical stability" in a pharmaceutical formulation if it does not show signs of aggregation, precipitation and/or denaturation after visual inspection of color and/or clarity, or when measured by UV light scattering or size exclusion chromatography. An antibody is said to "retain its chemical stability" in a pharmaceutical formulation when it exhibits no or minimal formation of product variants, which may include variants resulting from chemical modification of the antibody of interest, such as deamination, oxidation, etc. Analytical methods such as ion exchange chromatography and hydrophobic ion chromatography can be used to study the chemical variants of a product.
Термин «мономер», используемый в настоящем описании, описывает антитела, состоящие из двух легких цепей и двух тяжелых цепей. Содержание мономера в композиции антитела типично анализируют эксклюзионной хроматографией (SEC). По принципу разделения SEC крупные молекулы или молекулы с высокой молекулярной массой (HMW) элюируются первыми, а затем элюируются более мелкие или с меньшей молекулярной массой. В типичном профиле SEC для композиции антитела агрегаты, которые могут включать димеры, полимеры и т.л., элюируются первыми, а затем мономер, и усеченные варианты антитела или деграданты могут элюироваться последними. В некоторых условиях пик агрегатов или пики деградантов могут не элюироваться как базовые отдельные пики, а как выступ или аномально широкие пики. Для того, чтобы сохранить соответствующую активность антитела, в частности, терапевтического антитела, желательно уменьшить образование агрегатов или продуктов разрушения и, следовательно, регулировать содержание мономера на намеченном уровне. Способность ингибировать образование агрегатов и содержание деградантов, измеренное в различные моменты времени во время исследований стабильности, может указывать на пригодность кандидата в препарат для антитела, представляющего интерес. Можно использовать для выполнения SEC колонку TSK-GEL G3000SWXL (7,8 мм × 30 см) от TOSCH на водной ВЭЖХ.The term "monomer" as used herein describes antibodies composed of two light chains and two heavy chains. The monomer content of an antibody composition is typically analyzed by size exclusion chromatography (SEC). In the SEC separation principle, large or high molecular weight (HMW) molecules are eluted first, followed by smaller or lower molecular weight molecules. In a typical SEC profile for an antibody composition, aggregates, which may include dimers, polymers, etc., are eluted first, followed by the monomer, and truncated antibody variants or degradants may be eluted last. Under some conditions, the aggregate peak or the degradant peaks may not elute as basic single peaks but as overhangs or abnormally broad peaks. In order to maintain the appropriate activity of an antibody, in particular a therapeutic antibody, it is desirable to reduce the formation of aggregates or degradation products and therefore control the monomer content at the intended level. The ability to inhibit the formation of aggregates and the content of degraders, measured at different time points during stability studies, may indicate the suitability of the drug candidate for the antibody of interest. A TSK-GEL G3000SWXL (7.8 mm x 30 cm) column from TOSCH on aqueous HPLC can be used to perform SEC.
Термин «главный пик», используемый в настоящем описании, относится к пику, который элюируется в изобилии (главный пик) во время катионообменной хроматографии. Пик, который элюируется во время катионообменной хроматографии раньше, чем главный пик, с зарядом, который является кислотным относительно главного пика, называется пиком кислотного варианта. Пик, который элюируется во время катионообменной хроматографии позднее, чем главный пик, с зарядом, который является щелочным относительно главного пика, называется пиком щелочного варианта. Содержание главного пика можно определить ионообменной хроматографией (IEC). Существуют два доступных типа IEC, а именно, катионо- и анионообменная хроматография. Положительно заряженные молекулы связываются с анионообменными смолами, в то время как отрицательно заряженные молекулы связываются с катионообменными смолами. В типичном катионообменном хроматографическом профиле первыми элюируется кислотные варианты композиции антител, затем главный пик, и после этого последними будут элюироваться щелочные варианты. Кислотные варианты являются результатом таких модификаций антител, как деамидирование аспарагиновых остатков. Щелочные варианты являются результатом неполного удаления С-концевого(ых) лизинового(ых) остатка(ов), неполной циклизации N-концевого глутамина, изомеризации аспарагина и также, особенно, окисления метиониновых остатков, присутствующих в Fc-участке антитела [Chromatographic analysis of the acidic and basic species of recombinant monoclonal antibodies; mAbs; Page number 581; Volume 4; Issue 5]. Как правило, в антителе лизиновый остаток присутствует на С-конце как тяжелой, так и легкой цепи. Молекула антитела, содержащая лизин как в тяжелой, так и легкой цепи, относится к варианту K2, молекула антитела, содержащая лизиновый остаток в любой одной тяжелой или легкой цепи, относится к варианту K1, и молекула антитела, не имеющая такового, является молекулой K0. Фермент карбоксипептидаза B (фермент CP-B) действует на C-концевые лизиновые остатки, присутствующие в вариантах K2 и K1, и превращает их таким образом в молекулы K0. По обстоятельствам случая, можно выполнить анализ IEC для образцов, гидролизованных ферментом карбоксипептидазой B (CP-B). В типичном исследовании стабильности ожидается, что устойчивый препарат во время исследования ведет к снижению образования заряженных вариантов (кислотных и щелочных вариантов) и, следовательно, минимизирует любое уменьшение содержания главного пика.The term "major peak" as used herein refers to a peak that elutes in abundance (major peak) during cation exchange chromatography. The peak that elutes during cation exchange chromatography earlier than the main peak, with a charge that is acidic relative to the main peak, is called an acid variant peak. A peak that elutes later than the main peak during cation exchange chromatography, with a charge that is alkaline relative to the main peak, is called an alkaline variant peak. The content of the main peak can be determined by ion exchange chromatography (IEC). There are two types of IEC available, namely cation and anion exchange chromatography. Positively charged molecules bind to anion exchange resins, while negatively charged molecules bind to cation exchange resins. In a typical cation exchange chromatographic profile, the acidic variants of the antibody composition will elute first, then the main peak, and then the alkaline variants will elute last. Acid variants are the result of antibody modifications such as deamidation of aspartic residues. Alkaline variants are the result of incomplete removal of the C-terminal lysine(s) residue(s), incomplete cyclization of the N-terminal glutamine, isomerization of asparagine, and also, especially, oxidation of methionine residues present in the Fc region of the antibody [Chromatographic analysis of the acidic and basic species of recombinant monoclonal antibodies; mAbs; Page number 581; Volume 4; Issue 5]. Typically, in an antibody, a lysine residue is present at the C-terminus of both the heavy and light chains. An antibody molecule containing a lysine in both the heavy and light chains is a K2 variant, an antibody molecule containing a lysine residue in any one heavy or light chain is a K1 variant, and an antibody molecule lacking one is a K0 molecule. The enzyme carboxypeptidase B (enzyme CP-B) acts on the C-terminal lysine residues present in the K2 and K1 variants and thus converts them into K0 molecules. According to the circumstances of the case, IEC analysis can be performed on samples digested with the enzyme carboxypeptidase B (CP-B). In a typical stability study, it is expected that a stable preparation during the study leads to a reduction in the formation of charged variants (acidic and alkaline variants) and therefore minimizes any decrease in the content of the main peak.
Динамическое светорассеяние (DLS) измеряет флуктуации в интенсивности рассеяния, возникающие от частиц, претерпевающих беспорядочное броуновское движение, в зависимости от времени. Сведения о коэффициенте диффузии и размере частиц можно получить из анализа таких флуктуаций. Конкретнее, метод дает возможность измерить характеристики размера белков в жидкой среде. Величины коэффициента диффузии, полученные этим методом, прямо пропорциональны устойчивости молекулы в данном растворе.Dynamic Light Scattering (DLS) measures fluctuations in scattering intensity from particles undergoing random Brownian motion as a function of time. Information about the diffusion coefficient and particle size can be obtained from the analysis of such fluctuations. More specifically, the method makes it possible to measure the size characteristics of proteins in a liquid medium. The values of the diffusion coefficient obtained by this method are directly proportional to the stability of the molecule in a given solution.
Дифференциальная сканирующая флуориметрия (DSF) дает возможность быстро определить устойчивость белков с высокой производительностью и позволяет непосредственно сравнивать различные белки или один и тот же белок в различных условиях исследования. DSF контролирует термическое развертывание белков в присутствии флуоресцентного красителя и типично выполняется с использованием инструмента ПЦР в реальном времени. Флуоресцентные красители, которые можно использовать для DSF, являются высокофлуоресцентными в неполярной среде, такой как гидрофобные сайты на развернутых белках, в сравнении с водным раствором, где флуоресценция гасится. Интенсивность флуоресценции наносят на график как функцию температуры; это дает сигмоидальную кривую, которую может описать двухшаговым переходом.Differential scanning fluorometry (DSF) provides the ability to quickly determine the stability of proteins with high throughput and allows direct comparison of different proteins or the same protein under different research conditions. DSF controls the thermal unfolding of proteins in the presence of a fluorescent dye and is typically performed using a real-time PCR tool. Fluorescent dyes that can be used for DSF are highly fluorescent in a non-polar environment, such as hydrophobic sites on unfolded proteins, compared to an aqueous solution where the fluorescence is quenched. Fluorescence intensity is plotted as a function of temperature; this gives a sigmoid curve that can be described by a two-step transition.
Термин «процент спасения» относится к пропорции концентрации антитела, полученной в буфере в конечном препарате, относительно концентрации антитела в буфере для способа, который предшествует стадии получения препарата. Например, буфер для способа может представлять собой буфер для элюирования или буфер для фильтрации на последующей стадии способа, которая предшествует стадии получения препарата.The term "percent rescue" refers to the proportion of the concentration of antibody obtained in the buffer in the final preparation, relative to the concentration of antibodies in the buffer for the method that precedes the stage of preparation of the drug. For example, the process buffer may be an elution buffer or a filtration buffer in a subsequent process step that precedes the preparation step.
Препарат с высокой концентрацией антител относится к препарату, который дает возможность вводить субъекту более высокую дозу, используя небольшой объем, который равен или меньше, чем объем препарата для стандартного лечения.A drug with a high concentration of antibodies refers to a drug that allows a higher dose to be administered to a subject using a small volume that is equal to or less than the standard treatment volume of the drug.
Фармацевтически приемлемые эксципиенты относятся к добавкам или носителям, которые могут вносить вклад в устойчивость антитела в препарате. Эксципиенты могут охватывать стабилизаторы и модификаторы тоничности. Примеры стабилизаторов и модификаторов тоничности включают, но без ограничения, сахара, полиолы, соли, аминокислоты или поверхностно-активные вещества и их производные и комбинации.Pharmaceutically acceptable excipients refer to additives or carriers that may contribute to the stability of the antibody in the formulation. Excipients may include stabilizers and tonicity modifiers. Examples of stabilizers and tonicity modifiers include, but are not limited to, sugars, polyols, salts, amino acids, or surfactants, and derivatives and combinations thereof.
Сахара и полиолы можно отнести к моносахаридам, дисахаридам и полисахаридам. Примеры сахаров включают, но без ограничения, сахарозу, трегалозу, глюкозу, декстрозу, раффинозу и другие. Кроме того, полиол относится к спирту, содержащему несколько гидроксильных групп. Примеры полиолов включают, но без ограничения, маннит, сорбит и другие.Sugars and polyols can be classified as monosaccharides, disaccharides and polysaccharides. Examples of sugars include, but are not limited to, sucrose, trehalose, glucose, dextrose, raffinose, and others. In addition, a polyol refers to an alcohol containing multiple hydroxyl groups. Examples of polyols include, but are not limited to, mannitol, sorbitol, and others.
Поверхностно-активное вещество относится к фармацевтически приемлемым эксципиентам, используемым для защиты препаратов белка от различных стрессовых условий, подобных перемешиванию, сдвигу, воздействию высокой температуры и т.д. Подходящие поверхностно-активные вещества включают, но без ограничения, эфиры жирных кислот и полиоксиэтиленсорбитана, такие как твин 20™ или твин 80™, сополимер полиоксиэтилен-полиоксипропилен (например, полоксамер, плюроник), додецилсульфат натрия (SDS) и т.п. или их комбинации.Surfactant refers to pharmaceutically acceptable excipients used to protect protein preparations from various stress conditions such as agitation, shear, high temperature, and so on. Suitable surfactants include, but are not limited to, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters such as Tween 20™ or Tween 80™, polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymer (e.g., poloxamer, pluronic), sodium dodecyl sulfate (SDS), and the like. or their combinations.
Соли используют в качестве модификаторов тоничности, и примеры солей включают, но без ограничения, хлорид натрия, хлорид калия, хлорид магния, гидрохлорид аргинина, тиоцианат натрия, тиоцианат аммония, сульфат аммония, хлорид аммония, хлорид кальция, хлорид цинка и/или ацетат натрия.Salts are used as tonicity modifiers, and examples of salts include, but are not limited to, sodium chloride, potassium chloride, magnesium chloride, arginine hydrochloride, sodium thiocyanate, ammonium thiocyanate, ammonium sulfate, ammonium chloride, calcium chloride, zinc chloride, and/or sodium acetate .
Одна или несколько аминокислот также могут являться частью препарата антитела как стабилизаторы и могут быть выбраны из основных аминокислот или гидрофобных аминокислот или их комбинации.One or more amino acids may also be part of the antibody formulation as stabilizers and may be selected from basic amino acids or hydrophobic amino acids, or combinations thereof.
Некоторые специфические аспекты и воплощения изобретения полнее описаны в следующих далее примерах. Однако эти примеры не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения каким-либо образом.Some specific aspects and embodiments of the invention are more fully described in the following examples. However, these examples should not be construed as limiting the scope of the invention in any way.
Подробное описание воплощенийDetailed Description of Embodiments
Настоящее изобретение относится к жидкому препарату антител, включающему двойную буферную систему, включающую фосфат и аминокислоты как компоненты буфера. «Фосфатно-аминокислотная буферная система» подходит для включения антитела в препарат в низкой, а также высокой концентрациях. Кроме того, буферная система дает возможность препарату быть менее вязким даже при высоких концентрациях антитела. Кроме того, раскрытый буфер является выгодным в смысле «более активного восстановления» антитела в отношении «способа получения препарата». Этот способ после очистки антитела включает сначала стадию «замены буфера», на которой буфер со следующей стадии способа заменяют на буфер, который поглощает антитело для включения в препарат. Но эта стадия «замены» часто сопровождается значительной потерей антитела. Однако, когда «следующий буфер» заменяют «фосфатно-аминокислотным» буфером по настоящему изобретению, такая потеря антитела существенно снижается.The present invention relates to a liquid antibody preparation comprising a double buffer system comprising phosphate and amino acids as buffer components. The "Phosphate-Amino Acid Buffer System" is suitable for incorporating the antibody into the formulation at low as well as high concentrations. In addition, the buffer system allows the drug to be less viscous even at high antibody concentrations. In addition, the disclosed buffer is advantageous in terms of "more active recovery" of the antibody in relation to the "production method". This method, after purification of the antibody, first includes a "buffer exchange" step, in which the buffer from the next method step is replaced with a buffer that absorbs the antibody for incorporation into the formulation. But this “replacement” step is often accompanied by a significant loss of the antibody. However, when the "following buffer" is replaced with the "phosphate-amino acid" buffer of the present invention, this antibody loss is significantly reduced.
Воплощение изобретения раскрывает устойчивый препарат антитела, причем препарат включает фосфатно-аминокислотную двойную буферную систему.An embodiment of the invention discloses a stable antibody preparation, the preparation comprising a phosphate-amino acid double buffer system.
В описанном выше воплощении изобретения аминокислотный компонент в указанной буферной системе действует как противоион к фосфатному компоненту буфера.In the embodiment of the invention described above, the amino acid component in said buffer system acts as a counterion to the phosphate component of the buffer.
В другом воплощении изобретения аминокислоту выбирают из группы, включающей основную аминокислоту и гидрофобную аминокислоту.In another embodiment of the invention, the amino acid is selected from the group consisting of a basic amino acid and a hydrophobic amino acid.
В другом воплощении основную аминокислоту выбирают из гистидина, лизина и аргинина; гидрофобная аминокислота может представлять собой глицин или аланин.In another embodiment, the basic amino acid is selected from histidine, lysine and arginine; the hydrophobic amino acid may be glycine or alanine.
В одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый жидкий препарат антитела, причем антитело включают в состав препарата в фосфатно-аминокислотную буферную систему, и причем концентрация антитела колеблется от примерно 10 мг/мл до примерно 200 мг/мл.In one embodiment, the invention provides a stable liquid formulation of an antibody, wherein the antibody is formulated in a phosphate-amino acid buffer system, and wherein the concentration of the antibody ranges from about 10 mg/mL to about 200 mg/mL.
В одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый жидкий препарат с высокой концентрацией антитела, причем антитело включают в препарат в фосфатно-аминокислотной буферной системе, и причем концентрация антитела составляет по меньшей мере 20 мг/мл или по меньшей мере 50 мг/мл или по меньшей мере 100 мг/мл или по меньшей мере 150 мг/мл.In one embodiment, the invention provides a stable liquid formulation with a high concentration of an antibody, wherein the antibody is formulated in a phosphate-amino acid buffer system, and wherein the concentration of the antibody is at least 20 mg/mL, or at least 50 mg/mL, or at least 100 mg/ml or at least 150 mg/ml.
В одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый жидкий препарат антитела низкой вязкости, причем препарат включает фосфатно-аминокислотную буферную систему, и причем вязкость препарата составляет менее 10 сП, предпочтительно менее 5 сП. Препарат может включать фармацевтически приемлемые соли, причем концентрация солей и/или буферирующих агентов составляет менее 100 мМ, предпочтительно менее 50 нМ.In one embodiment, the invention discloses a low viscosity stable liquid antibody preparation, wherein the preparation comprises a phosphate-amino acid buffer system, and wherein the viscosity of the preparation is less than 10 cps, preferably less than 5 cps. The formulation may include pharmaceutically acceptable salts, wherein the concentration of salts and/or buffering agents is less than 100 mM, preferably less than 50 nM.
В любом из вышеуказанных воплощений антитело, включенное в препарат в фосфатно-аминокислотном буфере, остается устойчивым по меньшей мере в одном из условий хранения, таких как при 2-8°С в течение по меньшей мере 6 месяцев или при 25°С в течение по меньшей мере 6 месяцев или при 40°С в течение по меньшей мере 2 недель или при 40°С в течение по меньшей мере 4 недель.In any of the above embodiments, the antibody formulated in phosphate-amino acid buffer remains stable under at least one of the storage conditions, such as at 2-8°C for at least 6 months or at 25°C for up to at least 6 months or at 40°C for at least 2 weeks or at 40°C for at least 4 weeks.
В одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый жидкий препарат антитела, причем препарат включает фосфатно-аминокислотную двойную буферную систему, причем препарат лишен антиоксиданта(ов).In one embodiment, the invention discloses a stable liquid antibody preparation, wherein the preparation comprises a phosphate-amino acid double buffer system, wherein the preparation is devoid of antioxidant(s).
В любом из вышеуказанных воплощений изобретения антитело является терапевтическим антителом.In any of the above embodiments of the invention, the antibody is a therapeutic antibody.
В вышеуказанном воплощении терапевтическое антитело представляет собой анти-ILR6 антитело или анти-HER2 антитело.In the above embodiment, the therapeutic antibody is an anti-ILR6 antibody or an anti-HER2 antibody.
В одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый фармацевтический препарат анти-ILR6 антитела в фосфатно-аминокислотном буфере, включающий сорбит и поверхностно-активное вещество.In one embodiment, the invention provides a stable pharmaceutical formulation of an anti-ILR6 antibody in phosphate amino acid buffer comprising sorbitol and a surfactant.
В вышеуказанном воплощении анти-ILR6 антитело лишено антиоксиданта(ов).In the above embodiment, the anti-ILR6 antibody is devoid of antioxidant(s).
В одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый фармацевтический препарат анти-ILR6 антитела в фосфатно-аминокислотном буфере, включающий сорбит и поверхностно-активное вещество, и причем препарат лишен антиоксиданта(ов).In one embodiment, the invention provides a stable pharmaceutical preparation of an anti-ILR6 antibody in phosphate-amino acid buffer, comprising sorbitol and a surfactant, and wherein the preparation is devoid of antioxidant(s).
В еще одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый фармацевтический препарат анти-ILR6 антитела в фосфатно-аминокислотном буфере, включающий сорбит, поверхностно-активное вещество и аргинин, причем препарат лишен какого(их)-либо антиоксиданта(ов).In yet another embodiment, the invention discloses a stable pharmaceutical preparation of an anti-ILR6 antibody in phosphate amino acid buffer, comprising sorbitol, a surfactant and arginine, and the preparation is devoid of any antioxidant(s).
В любом из вышеуказанных воплощений указанный антиоксидант представляет собой метионин.In any of the above embodiments, said antioxidant is methionine.
В одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый жидкий препарат тоцилизумаба, причем препарат включает фосфатно-аминокислотную буферную систему. Указанный фосфатно-аминокислотный буфер представляет собой предпочтительно фосфатно-гистидиновый, фосфатно-глициновый или фосфатно-аспартатный буфер.In one embodiment, the invention discloses a stable liquid formulation of tocilizumab, the formulation comprising a phosphate amino acid buffer system. Said phosphate-amino acid buffer is preferably a phosphate-histidine, phosphate-glycine or phosphate-aspartate buffer.
В одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый жидкий препарат тоцилизумаба, причем антитело включено в состав в фосфатно-аминокислотной буферной системе, и причем концентрация антитела колеблется от примерно 20 мг/мл до примерно 180 мг/мл.In one embodiment, the invention provides a stable liquid formulation of tocilizumab wherein the antibody is formulated in a phosphate amino acid buffer system and wherein the concentration of the antibody ranges from about 20 mg/mL to about 180 mg/mL.
В вышеуказанных воплощениях тоцилизумаб, включенный в препарат в фосфатно-аминокислотном буфере, остается устойчивым по меньшей мере в одном из условий хранения, таких как при 2-8°С в течение по меньшей мере 6 месяцев или при 25°С в течение по меньшей мере 6 месяцев или при 40°С в течение по меньшей мере 2 недель или при 40°С в течение по меньшей мере 4 недель.In the above embodiments, tocilizumab formulated in a phosphate amino acid buffer remains stable under at least one of the storage conditions, such as at 2-8°C for at least 6 months or at 25°C for at least 6 months or at 40°C for at least 2 weeks or at 40°C for at least 4 weeks.
В другом воплощении изобретение раскрывает устойчивый жидкий препарат тоцилизумаба, включающий фосфатно-аминокислотную буферную систему, причем препарат сохраняет по меньшей мере 95% содержания мономера в композиции антитела по меньшей мере в одном из условий хранения, таких как при 2-8°С в течение по меньшей мере 6 месяцев или при 25°С в течение по меньшей мере 6 месяцев или при 40°С в течение по меньшей мере 2 недель или при 40°С в течение по меньшей мере 4 недель.In another embodiment, the invention provides a stable liquid formulation of tocilizumab comprising a phosphate-amino acid buffer system, wherein the formulation retains at least 95% of the monomer content of the antibody composition under at least one storage condition such as at 2-8°C for up to at least 6 months or at 25°C for at least 6 months or at 40°C for at least 2 weeks or at 40°C for at least 4 weeks.
В еще одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый жидкий препарат тоцилизумаба, включающий фосфатно-аминокислотную буферную систему, причем препарат содержит менее 5% агрегатов в композиции антитела по меньшей мере в одном из условий хранения, таких как при 2-8°С в течение по меньшей мере 6 месяцев или при 25°С в течение по меньшей мере 6 месяцев или при 40°С в течение по меньшей мере 2 недель или при 40°С в течение по меньшей мере 4 недель.In yet another embodiment, the invention discloses a stable liquid formulation of tocilizumab comprising a phosphate-amino acid buffer system, wherein the formulation contains less than 5% aggregates in an antibody composition under at least one storage condition such as at 2-8°C for at least 6 months or at 25°C for at least 6 months or at 40°C for at least 2 weeks or at 40°C for at least 4 weeks.
В другом воплощении изобретение раскрывает устойчивый жидкий препарат тоцилизумаба, включающий фосфатно-аминокислотную буферную систему, причем препарат сохраняет по меньшей мере примерно 50% тоцилизумаба в содержании главного пика в одном из условий хранения, таких как при 2-8°С в течение по меньшей мере 3 месяцев или при 25°С в течение по меньшей мере 3 месяцев или при 40°С в течение по меньшей мере 2 недель или при 40°С в течение по меньшей мере 4 недель.In another embodiment, the invention provides a stable liquid formulation of tocilizumab comprising a phosphate-amino acid buffer system, wherein the formulation retains at least about 50% of tocilizumab in main peak content under one of the storage conditions, such as at 2-8°C for at least 3 months or at 25°C for at least 3 months or at 40°C for at least 2 weeks or at 40°C for at least 4 weeks.
В вышеуказанном воплощении изобретения устойчивый препарат тоцилизумаба в фосфатно-аминокислотном буфере включает менее 10% щелочных вариантов антитела в препарате в одном из условий хранения, таких как при 2-8°С в течение по меньшей мере 3 месяцев или при 25°С в течение по меньшей мере 3 месяцев или при 40°С в течение по меньшей мере 2 недель или при 40°С в течение по меньшей мере 4 недель. Щелочные варианты антитела являются результатом неполного удаления С-концевого(ых) лизинового(ых) остатка(ов), неполной циклизации N-концевого глутамина, изомеризации аспарагина и, также важно, окисления метиониновых остатков, присутствующих в Fc-участке антитела.In the above embodiment of the invention, the stable formulation of tocilizumab in phosphate-amino acid buffer contains less than 10% of the alkaline variants of the antibody in the formulation under one of the storage conditions, such as at 2-8°C for at least 3 months or at 25°C for up to at least 3 months or at 40°C for at least 2 weeks or at 40°C for at least 4 weeks. Alkaline variants of an antibody result from incomplete removal of the C-terminal lysine(s) residue(s), incomplete cyclization of the N-terminal glutamine, isomerization of asparagine, and, also importantly, oxidation of methionine residues present in the Fc region of the antibody.
В одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый жидкий препарат тоцилизумаба, включающий фосфатно-гистидиновый буфер, сорбит и поверхностно-активное вещество.In one embodiment, the invention discloses a stable liquid formulation of tocilizumab comprising a phosphate-histidine buffer, sorbitol, and a surfactant.
В одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый жидкий препарат тоцилизумаба, включающий фосфатно-гистидиновый буфер, сорбит, поверхностно-активное вещество и аргинин, причем препарат лишен метионина.In one embodiment, the invention discloses a stable liquid formulation of tocilizumab comprising a phosphate-histidine buffer, sorbitol, a surfactant and arginine, wherein the formulation is devoid of methionine.
В вышеуказанных воплощениях антитело устойчиво даже после нескольких циклов замораживания-оттаивания. Сорбит, присутствующий в препарате, защищает/стабилизирует антитело при стрессовых условиях замораживания-оттаивания.In the above embodiments, the antibody is stable even after several freeze-thaw cycles. The sorbitol present in the formulation protects/stabilizes the antibody under freeze-thaw stress conditions.
В вышеуказанном воплощении концентрация тоцилизумаба, стабилизированного сорбитом в фосфатно-гистидиновом буфере, колеблется от примерно 20 мг/мл до примерно 200 мг/мл.In the above embodiment, the concentration of tocilizumab stabilized with sorbitol in phosphate-histidine buffer ranges from about 20 mg/ml to about 200 mg/ml.
В одном воплощении изобретение раскрывает устойчивый жидкий препарат тоцилизумаба, причем препарат включает фосфатно-аминокислотную буферную систему.In one embodiment, the invention discloses a stable liquid formulation of tocilizumab, the formulation comprising a phosphate amino acid buffer system.
Кроме того, в любом из вышеуказанных воплощений препарат может включать фармацевтически приемлемые эксципиенты, такие как сахара, полиолы, поверхностно-активные вещества, соли, аминокислоты и их комбинации и производные. Предпочтительно полиол представляет собой сорбит.In addition, in any of the above embodiments, the formulation may include pharmaceutically acceptable excipients such as sugars, polyols, surfactants, salts, amino acids, and combinations and derivatives thereof. Preferably the polyol is sorbitol.
ПРИМЕРЫEXAMPLES
Тоцилизумаб, подходящий для хранения в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, получают стандартными способами, известными в уровне технике. Например, тоцилизумаб получают рекомбинантной экспрессией генов легкой и тяжелой цепей иммуноглобулина в клетке-хозяине млекопитающего, такой как клетки яичников китайского хомячка. Далее экспрессированный тоцилизумаб собирают, и неочищенный продукт подвергают стандартным последующим стадиям способа, которые включают очистку, фильтрацию и, необязательно, стадии разбавления или концентрирования. Например, неочищенный продукт тоцилизумаба можно очистить с использованием стандартных хроматографических методов, таких как аффинная хроматография, ионообменная хроматография и их комбинации. Раствор очищенного тоцилизумаба можно дополнительно подвергнуть одной или нескольким стадиям фильтрации, и полученный раствор подвергают последующим исследованиям препарата.Tocilizumab suitable for storage in the pharmaceutical composition of the present invention is prepared by standard methods known in the art. For example, tocilizumab is produced by recombinant expression of immunoglobulin light and heavy chain genes in a mammalian host cell, such as Chinese hamster ovary cells. The expressed tocilizumab is then collected and the crude product is subjected to standard subsequent process steps which include purification, filtration and optional dilution or concentration steps. For example, the crude tocilizumab product can be purified using standard chromatographic techniques such as affinity chromatography, ion exchange chromatography, and combinations thereof. The purified tocilizumab solution can be further subjected to one or more filtration steps, and the resulting solution is subjected to subsequent formulation studies.
Пример 1. Одинарный буфер против фосфатно-аминокислотного буфераExample 1 Single Buffer vs Phosphate Amino Acid Buffer
Тоцилизумабу (в концентрации 35 мг/мл), полученному на конечной стадии последующего процесса, заменяют буфер и концентрируют до 230 мг/мл в одинарных буферах, а также в двойном буфере, таком как фосфатно-аминокислотный буфер. Состав буферных композиций приводен в таблице 1. После концентрирования тоцилизумаба в различных буферах до 230 мг/мл образцы проверяют на высокомолекулярные (HMW) частицы и содержание мономера с использованием эксклюзионной хроматографии [результаты приведены на фиг. I, (a) и (b)]. Также проверяют содержание главного пика с использованием ионообменной хроматографии [результаты приведены на фигуре II].Tocilizumab (at a concentration of 35 mg/ml), obtained at the final stage of the subsequent process, is replaced with a buffer and concentrated to 230 mg/ml in single buffers, as well as in a double buffer, such as a phosphate-amino acid buffer. The composition of the buffer formulations is shown in Table 1. After concentrating tocilizumab in various buffers to 230 mg/mL, the samples are tested for high molecular weight (HMW) particles and monomer content using size exclusion chromatography [results are shown in FIG. I, (a) and (b)]. Also check the content of the main peak using ion-exchange chromatography [the results are shown in figure II].
Таблица 1. Композиции буферов, используемых в примере 1Table 1. Buffer Compositions Used in Example 1
Пример 2. Препараты с высокой концентрацией тоцилизумаба (180 мг/мл) в двойной буферной системе на фосфатно-аминокислотной основеExample 2 Preparations with high concentration of tocilizumab (180 mg/ml) in a double buffered phosphate-amino acid system
Для того, чтобы получить устойчивый жидкий высококонцентрированный препарат тоцилизумаба, как часть эксперимента, получают различные комбинации двойных буферов на «фосфатно-аминокислотной основе» в концентрациях 20 мМ. Тоцилизумабу (в концентрации 30,02 мг/мл), полученному на конечной стадии последующего процесса, заменяют буфер на различные фосфатно-аминокислотные буферы (перечисленные в таблице 2) и концентрируют до 180 мг/мл в указанных двойных буферах. Композицию буфера для тоцилизумаба, замененного на гистидиновый буфер, сохраняют как контроль, так как одобренные и продаваемые препараты со 180 мг/мл тоцилизумаба Actemra® или RoActemra® являются препаратами в гистидиновом буфере. Кроме того, один из двойных буферов поддерживается как буфер на «нефосфатно-аминокислотной» основе, который служит в качестве отрицательного контроля.In order to obtain a stable liquid high concentration formulation of tocilizumab, as part of the experiment, various combinations of double buffers on a "phosphate-amino acid basis" were prepared at concentrations of 20 mM. Tocilizumab (at a concentration of 30.02 mg/ml), obtained at the final stage of the subsequent process, replace the buffer with various phosphate-amino acid buffers (listed in table 2) and concentrate to 180 mg/ml in the indicated double buffers. The buffer composition for tocilizumab changed to histidine buffer is retained as a control, since the approved and marketed formulations with 180 mg/ml tocilizumab Actemra® or RoActemra® are histidine buffered formulations. In addition, one of the double buffers is maintained as a "non-phosphate amino acid" buffer, which serves as a negative control.
Вычисляют процент спасения тоцилизумаба в различных буферах (после замены буфера и концентрирования), и детали этого приводятся в таблице 2.The percent rescue of tocilizumab in different buffers (after buffer exchange and concentration) is calculated and the details of this are given in Table 2.
Таблица 2. Процент восстановления тоцилизумаба в препаратах со 180 мг/мл, полученных согласно примеру 2Table 2. Percent recovery of tocilizumab in preparations with 180 mg/ml obtained according to example 2
Вязкость всех препаратов с двойным буфером на «фосфатно-аминокислотной» основе измеряют и следят, чтобы она была ниже 5 сП.The viscosity of all double-buffered "phosphate-amino acid" formulations is measured and monitored to be below 5 cP.
Пример 3. Измерения растворимости тоцилизумаба с использованипм динамического светорассеяния (DLS)Example 3 Tocilizumab Solubility Measurements Using Dynamic Light Scattering (DLS)
Для того, чтобы понять картину растворимости тоцилизумаба в различных буферных основах, в образце тоцилизумаба (в концентрации 30,02 мг/мл) с последней стадии способа заменяют буфер на различные буферные композиции, перечисленные в таблице 3, и концентрируют до 140-180 мг/мл. Затем тоцилизумаб в высоких концентрациях серийно разводят до более низких концентраций. Затем образцы подвергают DLS для измерения коэффициента диффузии, который является показателем растворимости тоцилизумаба. Результаты представлены в таблице 3.In order to understand the solubility pattern of tocilizumab in various buffer bases, in the sample of tocilizumab (at a concentration of 30.02 mg / ml) from the last stage of the method, the buffer is replaced with various buffer compositions listed in table 3, and concentrated to 140-180 mg / ml. Tocilizumab at high concentrations is then serially diluted to lower concentrations. The samples are then subjected to DLS to measure the diffusion coefficient, which is an indication of the solubility of tocilizumab. The results are presented in table 3.
Таблица 3. Результаты DLS препаратов тоцилизумаба (140-180 мг/мл) согласно примеру 3Table 3. DLS results of tocilizumab preparations (140-180 mg/ml) according to example 3
(контроль)Histidine buffer
(control)
Пример 4. Ускоренные исследования стабильностиExample 4 Accelerated Stability Studies
В образце тоцилизумаба (в концентрации 30,02 мг/мл) с нижней стадии способа заменяют буфер на различные буферные композиции, перечисленные в таблице 3, и концентрируют до 180 мг/мл. Затем эти образцы подвергают ускоренным исследованиям стабильности, в которых препараты тоцилизумаба в соответствующих буферных средах хранят при 40°С в течение 2 недель. После хранения образцы анализируют на высокомолекулярные (HMW) частицы и содержание мономера [результаты приводятся в таблице 4] с использованием эксклюзионной хроматографии (SEC). И анализируют кислые частицы и содержание главного пика образцов [результаты приведены в таблице 5] с использованием ионообменной хроматографии (IEX).The tocilizumab sample (at a concentration of 30.02 mg/mL) from the bottom of the process was buffer exchanged with the various buffer formulations listed in Table 3 and concentrated to 180 mg/mL. These samples are then subjected to accelerated stability studies in which tocilizumab formulations in appropriate buffered media are stored at 40° C. for 2 weeks. After storage, the samples are analyzed for high molecular weight (HMW) particles and monomer content [results are shown in Table 4] using Size Exclusion Chromatography (SEC). And analyze the acidic particles and the content of the main peak of the samples [the results are shown in table 5] using ion exchange chromatography (IEX).
Таблица 4. Данные SEC препаратов тоцилизумаба (180 мг/мл), полученных согласно примеру 4 и хранившихся при 40°С в течение 2 недельTable 4. SEC data of preparations of tocilizumab (180 mg/ml) obtained according to example 4 and stored at 40°C for 2 weeks
Таблица 5. Данные IEX препаратов тоцилизумаба (180 мг/мл), полученных согласно примеру 4 и хранившихся при 40°С в течение 2 недельTable 5. IEX data of tocilizumab preparations (180 mg/ml) obtained according to example 4 and stored at 40°C for 2 weeks
Пример 5. Выбор соответствующего сахара для стабилизации тоцилизумаба с использованием сканирующей флуориметрииExample 5 Selection of Appropriate Sugar for Tocilizumab Stabilization Using Scanning Fluorimetry
Для того, чтобы представлять природу термического разворачивания тоцилизумаба с использованием DSF, получают препараты тоцилизумаба (20 мг/мл) в среде гистидин-фосфатного буфера и добавляют различные сахара. После этого все образцы подвергают нескольким (по меньшей мере 3) циклам замораживания-оттаивания, замораживая образцы до -80°С с использованием морозильника и оттаивая при комнатной температуре. Образцы анализируют с использованием DSF. Результаты представлены на фигуре 3.In order to represent the nature of the thermal unfolding of tocilizumab using DSF, tocilizumab preparations (20 mg/ml) are prepared in a histidine phosphate buffer medium and various sugars are added. After that, all samples are subjected to several (at least 3) cycles of freeze-thaw, freezing the samples to -80°C using a freezer and thawing at room temperature. Samples are analyzed using DSF. The results are presented in figure 3.
Пример 6. Препараты тоцилизумаба (180 мг/мл) в двойной буферной системе на фосфатно-аминокислотной основе, включающие различные эксципиентыExample 6 Tocilizumab formulations (180 mg/mL) in phosphate-amino acid double buffered system comprising various excipients
Как часть эксперимента, для оценки роли различных эксципиентов в стабилизации тоцилизумаба в высокой концентрации, тоцилизумаб, который получают на последней хроматографической стадии, концентрируют до 180 мг/мл в среде фосфатно-гистидинового буфера. После этого добавляют различные эксципиенты, такие как полиол (сорбит), аминокислоты (метионин/аргинин), модификатор тоничности (хлорид натрия) и поверхностно-активное вещество (полисорбат 80) в различных концентрациях и различных комбинациях. Состав препаратов приводятся в таблице 6. Одобренный FDA подкожный препарат тоцилизумаба, содержащий гистидиновый буфер, аргинин, метионин и полисорбат, используют в последующем эксперименте как эталон. После этого все образцы подвергают ускоренным исследованиям стабильности при 25°С в течение 6 месяцев и 40°С в течение 4 недель. Образцы периодически извлекают в различные моменты времени и анализируют на изменение рН [результаты приводятся в таблице 7], проверяют визуально [результаты приводятся в таблице 8], анализируют на содержание мономера, HMW и содержание LMW [результаты приводятся в таблице 9 а-с] с использованием анализа SEC. И также образцы испытывают в исследованиях стабильности в реальном времени при 2-8°С.As part of the experiment, to evaluate the role of various excipients in stabilizing high concentration tocilizumab, tocilizumab, which is obtained in the last chromatographic step, is concentrated to 180 mg/ml in a phosphate-histidine buffer medium. Thereafter, various excipients such as polyol (sorbitol), amino acids (methionine/arginine), tonicity modifier (sodium chloride) and surfactant (polysorbate 80) are added in various concentrations and various combinations. The formulation formulations are shown in Table 6. An FDA-approved subcutaneous formulation of tocilizumab containing histidine buffer, arginine, methionine, and polysorbate was used as a reference in the subsequent experiment. After that, all samples are subjected to accelerated stability studies at 25°C for 6 months and 40°C for 4 weeks. Samples are periodically removed at various time points and analyzed for pH change [results are shown in Table 7], visually checked [results are shown in Table 8], analyzed for monomer content, HMW and LMW content [results are shown in Table 9 a-c] c using SEC analysis. And also samples are tested in stability studies in real time at 2-8°C.
Кроме того, указанные образцы также проверяют на коллоидную стабильность с использованием DLS [результаты приведены на фигуре 4].In addition, these samples are also tested for colloidal stability using DLS [the results are shown in figure 4].
Таблица 6. Препараты тоцилизумаба (180 мг/мл), полученные согласно примеру 6Table 6. Preparations of tocilizumab (180 mg/ml), obtained according to example 6
Таблица 7. Изменение рН препаратов тоцилизумаба, полученных согласно примеру 6, при 2-8°СTable 7. Change in pH of tocilizumab preparations obtained according to example 6 at 2-8°C
T- показывает время, M- месяцы и Н- неделиT- shows time, M- months and H- weeks
Таблица 8. Визуальная проверка препаратов тоцилизумаба, полученных согласно примеру 6, при 2-8°С, 25°С и 40°СTable 8. Visual inspection of tocilizumab preparations obtained according to example 6 at 2-8°C, 25°C and 40°C
T- показывает время, M- месяцы и Н- неделиT- shows time, M- months and H- weeks
Таблица 9а. Данные SEC препаратов тоцилизумаба, полученных согласно примеру 6, при 2-8°СTable 9a. SEC data of tocilizumab preparations obtained according to example 6 at 2-8°C
T- показывает время, M- месяцы и Н- неделиT- shows time, M- months and H- weeks
Таблица 9b. Данные SEC препаратов тоцилизумаба, полученных согласно примеру 6, при 25°СTable 9b. SEC data of tocilizumab preparations obtained according to example 6 at 25°C
T- показывает время, M- месяцы и Н- неделиT- shows time, M- months and H- weeks
Таблица 9с. Данные SEC препаратов тоцилизумаба, полученных согласно примеру 6, при 40°СTable 9c. SEC data of tocilizumab preparations obtained according to example 6 at 40°C
T- показывает время, M- месяцы и Н- неделиT- shows time, M- months and H- weeks
Пример 7. Стабильные препараты тоцилизумаба (180 мг/мл), лишенные антиоксидантовExample 7 Stable formulations of tocilizumab (180 mg/ml) lacking antioxidants
Вообще, окисление, конкретно окисление метиониновых остатков, генерирует щелочные варианты, элюируемые во время хроматографии IEX как щелочной пик (т.е., позднее главного пика). Из описанного выше эксперимента видно, что препараты тоцилизумаба, содержащие сорбит и аргинин, наиболее устойчивы по сравнению с препаратами, которые не содержат аргинин. Кроме того, различные концентрации сорбита и аргинина, содержащихся в препаратах тоцилизумаба без какого-либо антиоксиданта (метионина), оценивают на образование щелочных частиц. Состав препаратов приведен в таблице 10. Все образцы подвергают исследованиям стабильности при 2-8°С, 25°С и 40°С. Образцы периодически извлекают в различные моменты времени и анализируют на содержание кислых, щелочных частиц и главного пика с использованием хроматографии IEX [результаты приведены в таблице 11 а-с].In general, oxidation, specifically oxidation of methionine residues, generates alkaline variants eluting during IEX chromatography as an alkaline peak (ie, later than the main peak). From the experiment described above, it can be seen that tocilizumab preparations containing sorbitol and arginine are the most stable compared to preparations that do not contain arginine. In addition, different concentrations of sorbitol and arginine contained in tocilizumab preparations without any antioxidant (methionine) were evaluated for the formation of alkaline particles. The composition of the preparations is shown in table 10. All samples are subjected to stability studies at 2-8°C, 25°C and 40°C. Samples are removed periodically at various time points and analyzed for acidic, alkaline and main peak content using IEX chromatography [results are shown in Table 11 a-c].
Таблица 10. Препараты тоцилизумаба (180 мг/мл), полученные согласно примеру 7Table 10. Tocilizumab preparations (180 mg/ml) obtained according to example 7
Таблица 11а. Данные IEX препаратов тоцилизумаба, полученных согласно примеру 7, при 2-8°СTable 11a. IEX data of tocilizumab preparations obtained according to example 7 at 2-8°C
T- показывает время, M- месяцы и Н- неделиT- shows time, M- months and H- weeks
Таблица 11b. Данные IEX препаратов тоцилизумаба, полученных согласно примеру 7, при 25°СTable 11b. IEX data of tocilizumab formulations prepared according to example 7 at 25°C
T- показывает время, M- месяцы и Н- неделиT- shows time, M- months and H- weeks
Таблица 11с. Данные IEX препаратов тоцилизумаба, полученных согласно примеру 7, при 40°СTable 11c. IEX data of tocilizumab formulations prepared according to Example 7 at 40°C
T- показывает время, M- месяцы и Н- неделиT- shows time, M- months and H- weeks
Пример 8. Препараты тоцилизумаба (20 мг/мл) в двойной буферной системе на фосфатно-аминокислотной основе, включающие различные эксципиентыExample 8 Tocilizumab (20 mg/mL) formulations in phosphate-amino acid double buffered system comprising various excipients
Как часть экспериментального решения, для получения препаратов с низкой концентрацией тоцилизумаба (20 мг/мл) получают различные «фосфатно-аминокислотные» буферы в концентрации 20 мМ, к которым добавляют различные эксципиенты, такие как сахара/полиолы и поверхностно-активные вещества. Необязательно, в некоторые «фосфатно-аминокислотные» буферные комбинации добавляют соль, а именно, хлорид натрия. Буфер для тоцилизумаба (в концентрации 30,02 мг/мл), полученного на конечной нижней стадии способа, заменяют различными двойными буферными системами, включающими фосфатно-аминокислотные буферы и фармацевтически приемлемые эксципиенты [состав приводится в таблице 12]. Затем образцы разводят/доводят в соответствующей буферной среде, содержащей эксципиенты, до достижения концентрации тоцилизумаба 20 мг/мл. В качестве эталона используют тоцилизумаб, включенный в буферную композицию, содержащей фосфатный буфер, сахарозу и полисорбат 80, поскольку одобренный препарат с дозировкой 20 мг/мл Actemra® или Roactemra® представлен в этой буферной композиции.As part of the experimental solution, to prepare preparations with low concentration of tocilizumab (20 mg/ml), various "phosphate-amino acid" buffers are prepared at a concentration of 20 mM, to which various excipients are added, such as sugars/polyols and surfactants. Optionally, a salt, namely sodium chloride, is added to some "phosphate-amino acid" buffer combinations. The buffer for tocilizumab (at a concentration of 30.02 mg/ml) obtained at the final lower stage of the method is replaced with various double buffer systems, including phosphate-amino acid buffers and pharmaceutically acceptable excipients [the composition is given in table 12]. Samples are then diluted/adjusted in an appropriate buffer medium containing excipients to achieve a tocilizumab concentration of 20 mg/mL. Tocilizumab included in a buffer composition containing phosphate buffer, sucrose and polysorbate 80 is used as a reference, since the approved drug at a dosage of 20 mg/ml Actemra® or Roactemra® is presented in this buffer composition.
Таблица 12. Тоцилизумаб (20 мг/мл), включенный в различные двойные буферные комбинации согласно примеру 8Table 12. Tocilizumab (20 mg/ml) included in various double buffer combinations according to example 8
Препараты тоцилизумаба, упомянутые в таблице 6, подвергают ускоренному испытанию на стабильность в условиях 40°С в течение 4 недель. Затем препараты анализируют на содержание высокомолекулярных частиц и мономера с использованием эксклюзионной хроматографии (SEC), а результаты представлены в таблице 13. Процентное содержание кислых частиц и главного пика анализируют с использованием ионообменной хроматографии (IEX), а результаты представлены в таблице 14.The tocilizumab preparations mentioned in Table 6 were subjected to an accelerated stability test at 40° C. for 4 weeks. The formulations are then analyzed for high molecular weight and monomer content using Size Exclusion Chromatography (SEC) and the results are presented in Table 13. The percentage of acidic species and main peak are analyzed using Ion Exchange Chromatography (IEX) and the results are presented in Table 14.
Таблица 13. Данные SEC препаратов тоцилизумаба (20 мг/мл), полученных согласно примеру 8 и хранившихся при 40°С в течение 4 недельTable 13. SEC data of preparations of tocilizumab (20 mg/ml) obtained according to example 8 and stored at 40°C for 4 weeks
Таблица 14. Данные IEX препаратов тоцилизумаба (20 мг/мл), полученных согласно примеру 8 и хранившихся при 40°С в течение 4 недельTable 14. IEX data of tocilizumab preparations (20 mg/ml) obtained according to example 8 and stored at 40°C for 4 weeks
Препараты тоцилизумаба, составленные согласно таблице 12, подвергают ускоренным исследованиям стабильности и проверяют визуально [результаты приведены в таблице 15].Tocilizumab formulations formulated according to Table 12 were subjected to accelerated stability studies and visually inspected [results are shown in Table 15].
Таблица 15. Результаты визуальной проверки препаратов тоцилизумаба (20 мг/мл), полученных согласно примеру 8Table 15. Results of visual inspection of preparations of tocilizumab (20 mg/ml) obtained according to example 8
Пример 9. Другие антитела, включенные в среду фосфатно-аминокислотного двойного буфераExample 9 Other Antibodies Included in Phosphate-Amino Acid Double Buffer Medium
Трастузумаб (Tmab), 21 мг/мл, включают в одинарный, а также двойной буфер. Состав препарата приведен в таблице 16.Trastuzumab (Tmab), 21 mg/ml, is included in single as well as double buffer. The composition of the drug is shown in table 16.
Таблица 16. Композиция трстузумаба в одинарном буфере и двойном буфереTable 16. Composition of trstuzumab in single buffer and double buffer
Описанные выше образцы подвергают ускоренным исследованиям стабильности, выдерживая указанные образцы при 37°С в течение 4 недель. Кроме того, образцы испытывают на изменение рН (результаты приведены в таблице 17).The samples described above are subjected to accelerated stability studies by keeping these samples at 37°C for 4 weeks. In addition, the samples are tested for changes in pH (the results are shown in table 17).
Таблица 17. Измерения рН при 37°С препаратов T-mab, полученных согласно примеру 7Table 17. pH measurements at 37°C of T-mab preparations obtained according to example 7
Claims (9)
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IN201741013746 | 2017-04-18 | ||
| IN201741013746 | 2017-04-18 | ||
| PCT/IN2018/050230 WO2018193471A1 (en) | 2017-04-18 | 2018-04-18 | Stable liquid pharmaceutical composition |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019136641A RU2019136641A (en) | 2021-05-18 |
| RU2019136641A3 RU2019136641A3 (en) | 2021-07-19 |
| RU2773747C2 true RU2773747C2 (en) | 2022-06-09 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012064627A2 (en) * | 2010-11-08 | 2012-05-18 | Genentech, Inc. | Subcutaneously administered anti-il-6 receptor antibody |
| WO2014066468A1 (en) * | 2012-10-25 | 2014-05-01 | Medimmune, Llc | Stable, low viscosity antibody formulation |
| WO2015190378A1 (en) * | 2014-06-10 | 2015-12-17 | Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａファルマ株式会社 | Stable aqueous adalimumab preparation |
| RU2589691C2 (en) * | 2014-06-16 | 2016-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Промоген-МАТ" | Stable composition of antibody specifically bound with her2 receptors and preparation method thereof |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012064627A2 (en) * | 2010-11-08 | 2012-05-18 | Genentech, Inc. | Subcutaneously administered anti-il-6 receptor antibody |
| WO2014066468A1 (en) * | 2012-10-25 | 2014-05-01 | Medimmune, Llc | Stable, low viscosity antibody formulation |
| WO2015190378A1 (en) * | 2014-06-10 | 2015-12-17 | Ｍｅｉｊｉ Ｓｅｉｋａファルマ株式会社 | Stable aqueous adalimumab preparation |
| RU2589691C2 (en) * | 2014-06-16 | 2016-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Промоген-МАТ" | Stable composition of antibody specifically bound with her2 receptors and preparation method thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11639391B2 (en) | Stable liquid pharmaceutical composition | |
| US11278624B2 (en) | Formulations | |
| US20150329628A1 (en) | Liquid formulations for an anti-tnf alpha antibody | |
| RU2736830C2 (en) | Stable pharmaceutical composition | |
| EP3618840B1 (en) | Stable insulin formulations | |
| EP3057616B1 (en) | Buffer formulations for enhanced antibody stability | |
| EP2946767A1 (en) | Liquid pharmaceutical composition | |
| US20160106844A1 (en) | Alternative formulations for tnfr: fc fusion polypeptides | |
| US20210401982A1 (en) | Stable formulations of therapeutic antibody | |
| RU2773747C2 (en) | Stable liquid pharmaceutical composition | |
| US20210147555A1 (en) | Antibody formulation | |
| EP3434283A1 (en) | Medicinal composition comprising peg anti-human ngf antibody fab' fragment | |
| AU2022271025A1 (en) | A method of improving stability of an antibody formulation | |
| US20230340131A1 (en) | Stable aqueous high concentration formulation of integrin antibody | |
| CN114746439A (en) | Stable formulations of integrin antibodies | |
| JP2022531331A (en) | Anti-IL-6 antibody preparation | |
| US20210179690A1 (en) | Ctla4-ig fusion protein formulation | |
| US20240052030A1 (en) | Novel formulations for antibodies | |
| WO2023031969A1 (en) | A method of improving stability of immune check point inhibitors | |
| US11583584B1 (en) | Stable protein compositions and methods of their use | |
| WO2024023843A1 (en) | A pharmaceutical formulation of a therapeuticantibody and preparations thereof | |
| CA3220545A1 (en) | Formulations of anti-pd1 antibodies | |
| CN117797264A (en) | Surfactant for macromolecule therapeutic preparation | |
| WO2023037383A1 (en) | Formulations of immune check point inhibitors | |
| CN112243379A (en) | Stable antibody formulations |