RU2772989C2 - Индуцибельные гены rep aav - Google Patents
Индуцибельные гены rep aav Download PDFInfo
- Publication number
- RU2772989C2 RU2772989C2 RU2020111459A RU2020111459A RU2772989C2 RU 2772989 C2 RU2772989 C2 RU 2772989C2 RU 2020111459 A RU2020111459 A RU 2020111459A RU 2020111459 A RU2020111459 A RU 2020111459A RU 2772989 C2 RU2772989 C2 RU 2772989C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rep
- promoter
- aav
- mutations
- proteins
- Prior art date
Links
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims description 36
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 50
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 50
- 101700006973 Rep68 Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 101700082620 Rep78 Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 26
- 241000432074 Adeno-associated virus Species 0.000 claims abstract description 16
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 158
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 124
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 124
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims description 105
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 claims description 74
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 26
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 20
- 101700006422 Rep40 Proteins 0.000 claims description 13
- 101700003689 Rep52 Proteins 0.000 claims description 13
- 210000000692 cap cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 9
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 claims description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- 230000002378 acidificating Effects 0.000 claims description 2
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011669 selenium Substances 0.000 claims description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 14
- 238000001890 transfection Methods 0.000 abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 102000033243 CDKN2A Human genes 0.000 description 235
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 58
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 56
- 229920001405 Coding region Polymers 0.000 description 54
- 101710037524 ACAA1 Proteins 0.000 description 47
- 102100002325 ACAA1 Human genes 0.000 description 47
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 18
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 108020004412 RNA 3' Polyadenylation Signals Proteins 0.000 description 8
- 229920000320 RNA (poly(A)) Polymers 0.000 description 7
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 7
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 7
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 7
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 6
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 6
- WDVSHHCDHLJJJR-UHFFFAOYSA-N 3,6-diaminoacridine Chemical compound C1=CC(N)=CC2=NC3=CC(N)=CC=C3C=C21 WDVSHHCDHLJJJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 5
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 5
- XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N Doxycycline Chemical compound O.O=C1C2=C(O)C=CC=C2[C@H](C)[C@@H]2C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]1[C@H]2O XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N 0.000 description 4
- 229960003722 Doxycycline Drugs 0.000 description 4
- 229940021015 I.V. solution additive Amino Acids Drugs 0.000 description 4
- 125000000267 glycino group Chemical group [H]N([*])C([H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 239000002609 media Substances 0.000 description 4
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 4
- 229920000978 Start codon Polymers 0.000 description 3
- 102000002142 Trans-Activators Human genes 0.000 description 3
- 108010040939 Trans-Activators Proteins 0.000 description 3
- 229920002969 Transcription factor Polymers 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 3
- 229920001483 poly(ethyl methacrylate) polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 230000001052 transient Effects 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N Ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 229920000258 VA RNA Polymers 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 238000002318 immunoblotting Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 2
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 1
- 208000010370 Adenoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010060931 Adenovirus infection Diseases 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 210000003996 CFU-GM Anatomy 0.000 description 1
- 210000000234 Capsid Anatomy 0.000 description 1
- 102000004040 Capsid Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000004507 Chromosomes, Artificial Anatomy 0.000 description 1
- 108010051219 Cre recombinase Proteins 0.000 description 1
- RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N Guanosine monophosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 229920002459 Intron Polymers 0.000 description 1
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L MgCl2 Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101700080605 NUC1 Proteins 0.000 description 1
- 210000004279 Orbit Anatomy 0.000 description 1
- 108060006943 RdRp Proteins 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Tris Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 229960002648 alanylglutamine Drugs 0.000 description 1
- 210000001776 amniocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- -1 class of aliphatic amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000221 frame shift mutation induction Toxicity 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 1
- 235000013928 guanylic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 101700006494 nucA Proteins 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 102000003995 transcription factors Human genes 0.000 description 1
- 108090000464 transcription factors Proteins 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Images
Abstract
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к клеткам-хозяевам, предназначенным для получения белков Rep аденоассоциированного вируса (AAV) Rep78 и Rep68; к нуклеиновой кислоте, кодирующей белки Rep аденоассоциированного вируса (AAV) Rep78 и Rep68, и экспрессионному вектору, содержащему вышеупомянутую нуклеиновую кислоту, а также к способу продуцирования аденоассоциированного вируса (AAV). Изобретение обеспечивает стабильное получение векторов AAV, которое не требует временной трансфекции или вируса-помощника. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 9 ил., 5 табл., 4 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к клеткам-хозяевам, содержащим нуклеиновую кислоту, кодирующую белки Rep аденоассоциированного вируса (AAV) Rep78 и Rep68, где внутренний промотор p19 AAV инактивирован посредством одной или нескольких мутаций, которые сохраняют функциональность указанных белков Rep78 и Rep68. Кроме того, настоящее изобретение относится к соответствующим нуклеиновым кислотам и векторам, содержащим их, а также к соответствующим способам получения AAV.
Недавно произошел быстрый рост количества испытаний генной терапии и продуктов на основе векторов, происходящих из аденоассоциированного вируса (AAV). Преимуществами векторов AAV в генной терапии являются хороший профиль безопасности, тот факт, что такие векторы не являются патогенными, т.е. не ассоциированы с каким-либо заболеванием, стабильная экспрессия трансгенов и возможность трансдукции делящихся, а также не делящихся клеток.
Продуцирование рекомбинантного AAV требует, среди прочего, экспрессии белков Rep и Cap AAV, обычно кодируемых геномом AAV, для продуцирования рекомбинантного вируса, обеспечиваемого in trans. Кроме того, необходимо использовать гены-помощники, которые могут происходить из отличающихся вирусов-помощников, причем наиболее часто используемыми являются гены вирусов-помощников, взятые из аденовируса (AV), такие как РНК E1A, E1B, E2A, E4orf6 или VA. Более того, необходим вектор для переноса, содержащий представляющий интерес ген (GOI).
Современные системы, продуцирующие AAV, основаны по большей части на следующих технологиях, которые, однако, имеют несколько недостатков. Временная трансфекция генов rep AAV, например, с использованием системы из трех плазмид, содержащей вектор для переноса, содержащий представляющий интерес ген, плазмиду с функциями помощника аденовируса и плазмиду, обеспечивающую функции капсида и репликазы, лишена масштабируемости, надежности, воспроизводимости и вовлекает высокие затраты на ДНК категории GMP. Продуцирующие клеточные линии, которые по большей части основаны на клетках HeLa, все еще нуждаются в инфицировании вирусом-помощником, таким образом, требуя тщательной очистки и дорогостоящего подтверждения отсутствия вирусов-помощников. Индуцибельная экспрессия генов rep AAV посредством встраивания стоп-кассеты в локус rep ниже промотора p19 требует встраивания искусственного интрона, который содержит стоп-сигнал (например, поли(A) SV40), фланкированный двумя участками loxP. Кроме того, клеткам требуется рекомбиназа Cre, которая распознает участки loxP и вырезает стоп-кассету. Она должна быть либо предоставлена в индуцибельной форме, либо посредством модифицированного аденоассоциированного вектора, требующего дорогостоящего подтверждения отсутствия вируса-помощника. Кроме того, опосредуемая Cre рекомбинация часто демонстрирует только низкую эффективность.
Таким образом, современные системы, продуцирующие AAV, ограничены в отношении масштабируемости, надежности, воспроизводимости, простоты применения и стоимости. Таким образом, является в высокой степени желательным стабильное получение векторов AAV, которые не требуют временной трансфекции или вируса-помощника.
Таким образом, технической проблемой, лежащей в основе настоящего изобретения, является предоставление соответствующих клеток-хозяев, нуклеиновых кислот, векторов и способов, обеспечивающих такую систему.
Решение описанной выше технической проблемы достигается посредством вариантов осуществления, охарактеризованных в формуле изобретения.
В частности, в первом аспекте настоящее изобретение относится к клетке-хозяину, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую белки Rep аденоассоциированного вируса (AAV) Rep78 и Rep68, где внутренний промотор p19 AAV инактивирован посредством одной или нескольких мутаций, которые сохраняют функциональность указанных белков Rep78 и Rep68.
В этом контексте стабильные продуцирующие клеточные линии для продуцирования AAV трудно получать, поскольку белки Rep являются токсичными для клеток. Экспрессия белков Rep регулируется E1A, который также необходим для продуцирования AAV. В клеточных линиях, таких как клетки CAP, клетки HEK293 или клетки Per.C6, E1A уже конститутивно экспрессируется. Всего существует четыре белка Rep: два длинных (Rep78, Rep68), которые экспрессируются с промотора p5, и два коротких (Rep52, Rep40), которые экспрессируются с внутреннего промотора p19, расположенного в кодирующей области длинных белков Rep (для схематического изображения см. фиг.1).
Промотор p5 может быть заменен индуцибельным промотором, но не внутренним промотором p19, который является частью кодирующей области Rep78 и Rep68. Таким образом, получение упаковывающих/продуцирующих клеточных линий, основанное на клетках, конститутивно экспрессирующих E1A, является невозможным, поскольку это привело бы к конститутивной экспрессии токсических уровней Rep52 и Rep40. Другим клеточным линиям, не экспрессирующим конститутивно EA1, необходим индуцибельный E1A или предоставление E1A, например, путем инфицирования аденовирусом, что несет в себе недостатки, описанные выше.
Эта проблема преимущественно решается настоящим изобретением, которое основано на инактивации внутреннего промотора p19 AAV посредством мутаций, которые препятствуют конститутивной экспрессии Rep52 и Rep40, одновременно сохраняя функциональность указанных белков Rep78 и Rep68.
Термины "Аденоассоциированный вирус" и "AAV", как используют в рамках изобретения, не ограничиваются конкретными серотипами AAV. В этом контексте следует отметить, что белки Rep AAV являются в высокой степени консервативными среди различных серотипов AAV. В конкретных вариантах осуществления описанные выше термины относятся к аденоассоциированному вирусу серотипа 2 (AAV2).
Термин "сохранять функциональность указанных белков Rep78 и Rep68", как используют в рамках изобретения, относится к тому факту, что мутации в соответствии с настоящим изобретением не снижают функциональную активность указанных белков или снижают указанную активность не более чем на 30%, предпочтительно не более чем на 25%, не более чем на 20%, не более чем на 15%, не более чем на 12,5%, не более чем на 10%, не более чем на 7,5%, не более чем на 5%, не более чем на 4%, не более чем на 3%, не более чем на 2% или не более чем на 1%.
В предпочтительных вариантах осуществления одна или несколько мутаций в соответствии с настоящим изобретением находятся по меньшей мере в одном из регуляторных участков промотора p19, предпочтительно в области SP1 -50 (нуклеотиды 817-829), области TATA -20 (нуклеотиды 843-849) или области TATA -35 (нуклеотиды 830-835). В частности, указанные одна или несколько мутаций могут быть в области SP1 -50, в области TATA -20, в области TATA -35, как в области SP1 -50, так и в области TATA -20, как в области SP1 -50, так и в области TATA -35, как в области TATA -20, так и в области TATA -35, или во всех трех областях, т.е. в области SP1 -50, области TATA -20 и области TATA -35. В частности, в рамках настоящего изобретения было показано, что даже мутация одного нуклеотида в одной из указанных областей преимущественно приводит к значительному снижению экспрессии Rep52 и Rep40.
В этом контексте все положения нуклеотидов, как указано в настоящем описании, относятся к полной геномной последовательности AAV2, доступной под номером доступа GenBank AF043303. Указанное применимо к всем положениям аминокислот. Кроме того, в таблице 1 ниже представлен перечень однонуклеотидной номенклатуры в соответствии с IUPAC.
Таблица 1: Однобуквенная номенклатура нуклеотидов в соответствии с IUPAC.
| Буква | Нуклеотиды |
| W | A; T |
| S | C; G |
| M | A; C |
| K | G; T |
| R | A; G |
| Y | C; T |
| B | C; G; T |
| D | A; G; T |
| H | A; C; T |
| V | A; C; G |
В предпочтительных вариантах осуществления одна или несколько мутаций в соответствии с настоящим изобретением, которые инактивируют внутренний промотор p19, представляют собой молчащие мутации, т.е. мутации, которые не изменяют кодируемую аминокислоту.
Предпочтительно, указанные одна или несколько мутаций включают по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутаций 731C>D, 732A>C, 734A>B, 737T>C, 746A>G, 749C>D, 752G>H, 758G>A, 761G>H, 764G>H, 818G>A, 824G>H, 830T>V, 833T>C, 845T>C, 846T>C, 848A>B или 848A>G, 849A>T, 850G>C и 851C>D.
В случаях, когда указанные одна или несколько мутаций находятся в области SP1 -50 промотора p19, указанные мутации включают по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутаций 818G>A и 824G>H. В случаях, когда одна или несколько мутаций находятся в области TATA -20 промотора p19, указанные мутации включают по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутаций 845T>C, 846T>C, 848A>B или 848A>G и 849A>T. В случаях когда указанные одна или несколько мутаций находятся в области TATA -35 промотора p19, указанные мутации включают по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутаций 830T>V и 833T>C.
В предпочтительных вариантах осуществления указанные одна или несколько мутаций включают 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или все 20 из указанных выше мутаций. Таким образом, клетки-хозяева по настоящему изобретению могут содержать нуклеиновую кислоту, содержащую любую одну, любые две и три, любые четыре, любые пять, любые шесть, любые семь, любые восемь, любые девять, любые десять, любые одиннадцать, любые двенадцать, любые 13, любые 14, любые 15, любые 16, любые 17, любые 18, любые 19 или все 20 из мутаций 731C>D, 732A>C, 734A>B, 737T>C, 746A>G, 749C>D, 752G>H, 758G>A, 761G>H, 764G>H, 818G>A, 824G>H, 830T>V, 833T>C, 845T>C, 846T>C, 848A>B или 848A>G, 849A>T, 850G>C и 851C>D.
Нуклеиновая кислота, используемая в рамках настоящего изобретения, кодирующая белки Rep аденоассоциированного вируса (AAV) Rep78 и Rep68, где внутренний промотор p19 AAV инактивирован молчащими мутациями, предпочтительно представляет собой нуклеиновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 1-8, 11-14 и 34-42. В особенно предпочтительных вариантах осуществления указанная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 1, 6, 8, 13, 14, 34-39, 41 и 42.
В этом контексте "внутренний промотор", как используют в рамках изобретения, указывает на тот факт, что промотор p19 AAV находится в кодирующей последовательности Rep78 и Rep68 и формирует часть указанной кодирующей последовательности. Кроме того, термин "инактивированный" в отношении промотора p19 AAV указывает на тот факт, что посредством внесения молчащих мутаций в промоторную область p19 AAV указанный промотор имеет устраненную или по меньшей мере значительно сниженную (например, сниженную по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере 99%) активность промотора.
Нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 1-8, 11-14 и 34-42 соответствуют промоторной области p19 AAV (нуклеотиды 651-1053 генома AAV2), где присутствуют паттерны мутаций, указанные в таблице 2 ниже.
В предпочтительных вариантах осуществления нуклеиновая кислота, используемая в рамках настоящего изобретения, кодирующая белки Rep аденоассоциированного вируса (AAV) Rep78 и Rep68, где внутренний промотор p19 AAV инактивирован посредством молчащих мутаций, предпочтительно представляет собой нуклеиновую кислоту, содержащую нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 15-22, 25-28 и 43-51. В особенно предпочтительных вариантах осуществления указанная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность согласно SEQ ID NO: 15, 20, 22, 27, 28, 43-48, 50 и 51.
Нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 15-22, 25-28 и 43-51 соответствуют кодирующей области AAV для белков Rep: Rep78, Rep68, Rep52 и Rep40 (нуклеотиды 321-2252 генома AAV2), где промоторная область p19 (нуклеотиды 651-1053 генома AAV2) заменена мутантной промоторной областью p19, содержащей мутации, указанные в таблице 2 ниже.
Таблица 2: Предпочтительные паттерны мутаций промоторной области p19
| SEQ ID NO: | Паттерн мутации | Мутации |
| 1/15 | mut19 | 731C>D; 732A>C; 734A>B; 737T>C; 746A>G; 749C>D; 752G>H; 758G>A; 761G>H; 764G>H; 818G>A; 824G>H; 830T>V; 833T>C; 845T>C; 848A>G; 849A>T; 850G>C; 851C>D |
| 2/16 | mut5 | 845T>C; 848A>G; 849A>T; 850G>C; 851C>D |
| 3/17 | mut1 | 848A>G |
| 4/18 | mut2 | 849A>T; 850G>C |
| 5/19 | mut1-2 | 845T>C |
| 6/20 | mut14 | 731C>D; 732A>C; 734A>B; 737T>C, 746A>G; 749C>D; 752G>H, 758G>A; 761G>H; 764G>H, 818G>A; 824G>H, 830T>V; 833T>C |
| 7/21 | mut10 | 731C>D; 732A>C; 734A>B; 737T>C, 746A>G; 749C>D; 752G>H; 758G>A; 761G>H; 764G>H |
| 8/22 | mut10-2 | 818G>A; 824G>H, 830T>V; 833T>C, 845T>C; 846T>C; 848A>B; 849A>T; 850G>C; 851C>D |
| 11/25 | mut2-3 | 846T>C; 848A>B |
| 12/26 | mut1-3 | 846T>C |
| 13/27 | mut5-2 | 845T>C, 846T>C; 848A>B, 849A>T, 850G>C |
| 14/28 | mut20 | 731C>D; 732A>C; 734A>B; 737T>C, 746A>G; 749C>D; 752G>H, 758G>A; 761G>H; 764G>H, 818G>A; 824G>H, 830T>V; 833T>C, 845T>C, 846T>C; 848A>B, 849A>T, 850G>C, 851C>D |
| 34/43 | L (SP1 -50) |
818G>A; 824G>H |
| 35/44 | M (TATA -20) |
830T>V; 833T>C |
| 36/45 | N (SP1 -50 1) |
818G>A |
| 37/46 | O (SP1 -50 2) |
824G>H |
| 38/47 | P (TATA -20 1) |
830T>V |
| 39/48 | Q (TATA -20 2) |
833T>C |
| 40/49 | R (SP1 -50 и TATA -35) |
818G>A; 824G>H; 830T>V; 833T>C |
| 41/50 | S (SP1 -50 и TATA -20) |
818G>A; 824G>H; 845T>C, 846T>C; 848A>B, 849A>T, 850G>C |
| 42/51 | T (TATA -20 и TATA -35) |
830T>V; 833T>C; 845T>C, 846T>C; 848A>B, 849A>T, 850G>C |
В других предпочтительных вариантах осуществления одна или несколько мутаций в соответствии с настоящим изобретением, которые инактивируют внутренний промотор p19, представляют собой мутации, которые приводят к одной или нескольким консервативным заменам аминокислот, т.е. заменам аминокислоты на отличающуюся аминокислоту со сходными биохимическими свойствами (например, в отношении заряда, гидрофобности или размера). Предпочтительно, указанные одна или несколько аминокислотных замен представляют собой аминокислотные замены, происходящие в пределах класса алифатических аминокислот (Gly, Ala, Val, Leu, Ile), в пределах класса гидроксил- или сера/селен-содержащих аминокислот (Ser, Cys, Sec, Thr, Met), в пределах класса основных аминокислот (His, Lys, Arg) или в пределах класса кислотных аминокислот (Asp, Glu, Asn, Gln).
В конкретных вариантах осуществления указанные одна или несколько аминокислотных замен включают аминокислотные замены Leu176>Ala и/или Ala168>Gly.
В этом отношении нуклеиновая кислота, используемая в рамках настоящего изобретения, кодирующая белки Rep аденоассоциированного вируса (AAV) Rep78 и Rep68, где внутренний промотор p19 AAV инактивирован посредством мутаций, приводящих к консервативным аминокислотным заменам, предпочтительно представляет собой нуклеиновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 9 и 10.
В этом контексте термин "инактивированный" в отношении промотора p19 AAV указывает на тот факт, что посредством внесения мутаций, приводящих к консервативным аминокислотным заменам, в промоторную область p19 AAV указанный промотор имеет устраненную или по меньшей мере значительно сниженную (например, сниженную по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) промоторную активность.
Нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 9 и 10 соответствуют промоторной области p19 AAV (нуклеотиды 651-1053 генома AAV2), где присутствуют паттерны мутаций, указанные в таблице 3 ниже.
В предпочтительных вариантах осуществления нуклеиновая кислота, используемая в рамках настоящего изобретения, кодирующая белки Rep аденоассоциированного вируса (AAV) Rep78 и Rep68, где внутренний промотор p19 AAV инактивирован посредством мутаций, приводящих к консервативным аминокислотным заменам, представляет собой нуклеиновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 23 и 24.
Нуклеотидные последовательности согласно SEQ ID NO: 23 и 24 соответствуют кодирующей области AAV для белков Rep: Rep78, Rep68, Rep52 и Rep40 (нуклеотиды 321-2252 генома AAV2), где промоторная область p19 (нуклеотиды 651-1053 генома AAV2) заменена мутантной промоторной областью p19, содержащей мутации, указанные в таблице 3 ниже.
Таблица 3: Предпочтительные паттерны мутаций промоторной области p19.
| SEQ ID NO: | Паттерн мутаций | Мутации | Конечная аминокислотная замена |
| 9/23 | mut3 | 846T>G, 847T>C, 848A>B | Leu176>Ala |
| 10/24 | mut2-2 | 823C>G, 824G>H | Ala168>Gly |
Нуклеиновая кислота, находящаяся в клетке-хозяине по настоящему изобретению, кроме того, может содержать по меньшей мере один элемент, выбранный из группы, состоящей из индуцибельных промоторов, областей поли(A), селективных маркеров, последовательностей IRES и энхансерных элементов. Подходящие индуцибельные промоторы конкретно не ограничены и известны в данной области, например, Tet-индуцибельные промоторы, такие как промотор TRE3G третьего поколения. Подходящие области поли(A) конкретно не ограничены и известны в данной области, например, область поли(A) SV40. Подходящие селективные маркеры конкретно не ограничены и известны в данной области, например, кассеты устойчивости к антибиотикам, такие как кассеты устойчивости к бластицидину или ампициллину.
Настоящее изобретение также относится к клеткам-хозяевам, содержащим нуклеиновую кислоту, обладающую по меньшей мере 70% идентичностью последовательности с нуклеиновой кислотой, как определено выше, при условии, что присутствуют конкретные мутации, определенные выше. В этом контексте термин "при условии, что присутствуют конкретные мутации, определенные выше" относится к следующим ситуациям (i)-(xxiii):
(i) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 1 или 15, присутствуют мутации 731C>D; 732A>C; 734A>B; 737T>C; 746A>G; 749C>D; 752G>H; 758G>A; 761G>H; 764G>H; 818G>A; 824G>H; 830T>V; 833T>C; 845T>C; 848A>G; 849A>T; 850G>C и 851C>D;
(ii) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 2 или 16, присутствуют мутации 845T>C; 848A>G; 849A>T; 850G>C; и 851C>D;
(iii) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 3 или 17, присутствует 848A>G;
(iv) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 4 или 18, присутствуют мутации 849A>T и 850G>C;
(v) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 5 или 19 присутствует мутация 845T>C;
(vi) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 6 или 20, присутствуют мутации 731C>D; 732A>C; 734A>B; 737T>C, 746A>G; 749C>D; 752G>H, 758G>A; 761G>H; 764G>H, 818G>A; 824G>H, 830T>V и 833T>C;
(vii) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 7 или 21, присутствуют мутации 731C>D; 732A>C; 734A>B; 737T>C, 746A>G; 749C>D; 752G>H; 758G>A; 761G>H и 764G>H;
(viii) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 8 или 22, присутствуют мутации 818G>A; 824G>H, 830T>V; 833T>C, 845T>C; 846T>C; 848A>B; 849A>T; 850G>C и 851C>D;
(ix) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 9 или 23, присутствуют мутации 846T>G, 847T>C и 848A>B;
(x) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 10 или 24, присутствуют мутации 823C>G и 824G>H;
(xi) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 11 или 25, присутствуют мутации 846T>C и 848A>B;
(xii) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 12 или 26, присутствует мутация 846T>C;
(xiii) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 13 или 27, присутствуют мутации 845T>C, 846T>C; 848A>B, 849A>T, и 850G>C;
(xiv) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 14 или 28, присутствуют мутации 731C>D; 732A>C; 734A>B; 737T>C, 746A>G; 749C>D; 752G>H, 758G>A; 761G>H; 764G>H, 818G>A; 824G>H, 830T>V; 833T>C, 845T>C, 846T>C; 848A>B, 849A>T, 850G>C и 851C>D;
(xv) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 34 или 43, присутствуют мутации 818G>A и 824G>H;
(xvi) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 35 или 44, присутствуют мутации 830T>V и 833T>C;
(xvii) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 36 или 45, присутствует мутация 818G>A;
(xviii) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 37 или 46, присутствует мутация 824G>H;
(xix) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 38 или 47, присутствует мутация 830T>V;
(xx) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 39 или 48, присутствует мутация 833T>C;
(xxi) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 40 или 49, присутствуют мутации 818G>A; 824G>H; 830T>V и 833T>C;
(xxii) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 41 или 50, присутствуют мутации 818G>A; 824G>H; 845T>C, 846T>C; 848A>B, 849A>T и 850G>C; и
(xxiii) в нуклеотидных последовательностях, происходящих из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 42 или 51, присутствуют мутации 830T>V, 833T>C, 845T>C, 846T>C; 848A>B, 849A>T и 850G>C.
Предпочтительно указанные нуклеиновые кислоты обладают по меньшей мере 70%, 72%, 74%, 76%, 78%, 80%, 82%, 84%, 86%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,2%, 98,4%, 98,6%, 98,8%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% или 99,9% идентичностью последовательности с нуклеиновой кислотой, как определено выше. В конкретных вариантах осуществления такие нуклеиновые кислоты имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 нуклеотидных делеций, инсерций или замен (обменов).
Соответствующие нуклеиновые кислоты, имеющие определенную идентичность последовательности с нуклеиновой кислотой, как определено выше, или имеющие конкретные делеции, инсерции или замены нуклеотидов относительно нуклеиновой кислоты, как определено выше, не включают никакие нуклеиновые кислоты, имеющие мутацию со сдвигом рамки считывания любого типа, а также нуклеиновые кислоты, кодирующие нефункциональные белки Rep78 и Rep68, т.е. указанные нуклеиновые кислоты все еще кодируют функциональные белки Rep78 и Rep68.
В предпочтительных вариантах осуществления нуклеиновая кислота, находящаяся в клетках-хозяевах по настоящему изобретению, стабильно встроена в геном клетки-хозяина. В других предпочтительных вариантах осуществления нуклеиновая кислота, содержащаяся в клетка-хозяевах по настоящему изобретению, содержится в векторе, т.е. является частью вектора. Указанный вектор предпочтительно представляет собой вектор, выбранный из группы, состоящей из плазмидных векторов, вирусных векторов, космидных векторов и векторов на основе искусственных хромосом. Предпочтительно указанный вектор представляет собой экспрессирующий вектор.
В соответствии с настоящим изобретением внутренний промотор p19 AAV инактивирован путем внесения молчащих мутаций или мутаций, приводящих к консервативным аминокислотным заменам. Таким образом, нуклеиновая кислота, кодирующая Rep78 и Rep68, может быть помещена под контроль индуцибельного промотора, где не происходит конститутивная экспрессия Rep52 и Rep40. Однако поскольку продуцирование AAV требует всех четырех белков Rep, дополнительная нуклеиновая кислота, кодирующая Rep52 и Rep40, может быть помещена под контроль того же промотора, идентичного промотора или отличающегося промотора. Таким образом, в конкретных вариантах осуществления клетка-хозяин по настоящему изобретению, кроме того, содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую белки Rep AAV Rep52 и Rep40 под контролем индуцибельного промотора. Эта нуклеиновая кислота может быть частью вектора, как определено выше, или нуклеиновой кислоты, кодирующей Rep78 и Rep68.
Клетки-хозяева, пригодные в рамках настоящего изобретения, конкретно не ограничены и известны в данной области. Предпочтительно, указанные клетки-хозяева обладают конститутивной экспрессией E1A. В предпочтительных вариантах осуществления указанные клетки-хозяева представляют собой клетки CAP, клетки HEK293 или клетки Per.C6, т.е. происходят из указанных клеточных линий.
Способы получения клеток-хозяев по настоящему изобретению, т.е. способы внесения нуклеиновых кислот по настоящему изобретению в подходящие клетки-хозяева конкретно не ограничены и известны в данной области. Указанное применимо к способам получения нуклеиновых кислот и векторов по настоящему изобретению.
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к нуклеиновым кислотам и векторам, как определено выше.
В третьем аспекте настоящее изобретение относится к способу продуцирования аденоассоциированного вируса (AAV), включающему стадию рекомбинантной экспрессии белков Rep AAV Rep78 и Rep68 в клетке-хозяине в соответствии с настоящим изобретением.
Соответствующие способы получения необходимых нуклеиновых кислот, векторов и/или клеток-хозяев, а также соответствующие способы экспрессии, конкретно не ограничены и известны в данной области.
Предпочтительно, способ по настоящему изобретению, кроме того, включает стадию рекомбинантной экспрессии белков Rep AAV Rep52 и Rep40 в указанных клетках-хозяевах.
Как используют в рамках изобретения, термин "содержащий"/"содержит" прямо включает термины "по существу состоящий из"/"по существу состоит из" и "состоящий из"/"состоит из", т.е. все из указанных терминов являются взаимозаменяемыми друг с другом.
В соответствии с настоящим изобретением предусматриваются клетки-хозяева, которые могут экспрессировать белки Rep AAV Rep78 и Rep68 без конститутивной экспрессии Rep52 и Rep40. Этого достигают путем предоставления нуклеиновых кислот, где внутренняя промоторная область p19 AAV инактивирована путем внесения конкретных мутаций.
Промоторы активируются путем связывания определенных факторов транскрипции и базового транскрипционного комплекса; эти факторы распознают определенные участки связывания в промоторной области, которые ранее были описаны для промотора p19. Внесение мутаций в эти участки связывания препятствуют активации промотора. Поскольку целостность длинных белков Rep должна быть сохранена, выбирают мутации, которые не изменяют нуклеотидную последовательность, а в генетическом коде кодируют ту же аминокислоту и, таким образом, приводят к образованию того же белка (молчащие мутации), или выбирают мутации, которые изменяют нуклеотидную последовательность, чтобы произошли консервативные аминокислотные замены.
После внесения вышеуказанных мутаций является возможным разделение элементов экспрессии для длинных и коротких белков Rep: экспрессирующая кассета для длинных белков Rep содержит мутантный промотор p19 с указанными мутациями. Выделенный элемент экспрессии для коротких белков Rep начинается ниже промотора p19 с инициирующим кодоном. Затем экспрессия обоих элементов может быть помещена под контроль индуцибельного промотора (например, как в случае индуцибельных промоторов Tet). Исходя из этого, можно получать стабильную упаковывающую/продуцирующую клеточную линию.
Клетки-хозяева, нуклеиновые кислоты, векторы и способы по настоящему изобретению представляют собой систему продуцирования AAV, которая преимущественно характеризуется лучшей воспроизводимостью, обеспечивающей неизменное качество, масштабируемость и экономичность, и которая не требует использования вируса-помощника.
На чертежах представлено:
Фиг.1:
Схематичный обзор локуса rep.
Фиг.2:
Схематичный обзор экспрессирующей конструкции для индуцибельных белков Rep.
Фиг.3:
Обзор проанализированных паттернов мутаций с SEQ ID NO: соответствующей кодирующей области белков Rep AAV2 (также см. таблицу 2). Указание на "SEQ-ID" на фиг.3 относится к соответствующим SEQ ID NO.
Фиг.4:
Экспрессия различных белков Rep в клетках CAP при трансфекции различными конструкциями, содержащими молчащие мутации в регуляторных последовательностях промотора p19 (таблица 2), и конструкциями дикого типа (wt). Детекцию уровней белков проводили в клеточных лизатах временно трансфицированных CAP-T-клеток через 72 ч после трансфекции с использованием антитела против репликазы (Progen). В качестве контроля был включен клеточный лизат нетрансфицированных клеток (Bl). Указание на номера "ID" на фиг.4 относится к соответствующим SEQ ID NO.
Фиг.5:
Количественное определение на вестерн-блотах с антителом против Rep. Полосы белка Rep количественно определяли посредством денситометрического анализа с использованием ImageJ. Вычисляли соотношение полос длинного и короткого белка Rep и это значение wt принимали за 1. Все другие величины приводили к wt. Указание на номера "ID" на фиг.5 относится к соответствующим SEQ ID NO.
Фиг.6:
Индуцибельная экспрессия белков Rep в стабильной происходящей из CAP клеточной линии при индукции посредством 1 мкг/мл доксицилина. Детекцию белков Rep проводили посредством иммуноблоттинга с антителом против репликазы (Progen). В качестве контроля загружали клеточный лизат неиндуцированных клеток (-Dox). На уровне ~80 кДа определялась неспецифическая фоновая полоса.
Фиг.7:
Индукция белков Rep добавлением 1 мкг/мл доксицилина в клонах единичных клеток, происходящих из стабильной клеточной линии. Клетки временно трансфицировали необходимыми компонентами для продуцирования rAAV5 и индуцировали 1 мкг/мл доксицилина через 5 ч после трансфекции. Через 72 ч после трансфекции получали клеточные лизаты и проводили детекцию экспрессии белков Rep посредством иммуноблоттинга с антителом против репликазы (Progen). Клоны 5B6 и 2E3 экспрессируют очень низкие уровни длинных белков Rep.
Фиг.8:
Титры вирусов для продуцирования rAAV5 клонами с индуцибельной экспрессией Rep. Измерение количества вирусных геномов/мл проводили посредством кПЦР с комбинацией праймеров/зондов, выявляющих промотор CMV, с использованием линеаризованнной плазмиды для переноса в качестве стандарта. Клоны единичных клеток 5B6 и 2E3 не демонстрируют заметной экспрессии длинных и коротких белков Rep и, таким образом, продуцируют только очень низкие титры rAAV5.
Фиг.9:
(A и B): Экспрессия различных белков Rep в клетках CAP при трансфекции различными конструкциями, содержащими мутации в регуляторных последовательностях промотора p19 (таблица 3), приводящими к консервативным аминокислотным заменам, и конструкцией дикого типа (wt). Определение уровней белков в клеточных лизатах временно трансфицированных клеток CAP-T проводили через 72 ч после трансфекции с использованием антитела против репликазы (Progen). В качестве контроля включали клеточный лизат нетрансфицированных клеток (Bl).
(C): Продуцирование вируса при трансфекции клеток CAP следующей комбинацией конструкций: pStbl-Rep-p19mut-ID 47, 48 или 37 или wt, pStbl-TRE3G-Rep50/42, pCMV-Tet3G, pHelper, pStbl-CMV-Cap5, pAAV-GFP. Определение количества вирусных геномов/мл проводили посредством кПЦР с комбинацией праймер/зонд, определяющей поли-A SV40, с использованием линеаризованной плазмиды для переноса в качестве стандарта.
Указание на номера "ID" на фиг.9 относится к соответствующим SEQ ID NO.
Настоящее изобретение далее проиллюстрировано с использованием следующих примеров, но оно не ограничивается ими.
Примеры
Методики экспериментов:
Клонирование экспрессирующих конструкций.
Синтез локуса rep AAV2 с участками рестрикции HpaI на каждом конце и регуляторными участками в промоторе p19. Геномная последовательность AAV2 была взята из GenBank: AF043303 (нуклеотиды 162-2332). Последовательность синтетического локуса представлена в SEQ ID NO: 29.
Конструировали различные конструкции для промоторной области p19 (нуклеотиды 651-1053 генома AAV2), содержавшие различные количества молчащих мутаций в регуляторных последовательностях (таблица 2), и получали их путем синтеза.
Соответствующие экспрессирующие конструкции получали стандартными способами клонирования и подтверждали секвенированием. Компоненты конечных экспрессирующих конструкций pStbl-bsd-Rep, pStbl-bsd-Rep-p19mut-SEQ ID NO: 1-14, 34-42 представляли собой промотор p5, локус Rep, содержавший либо мутантный промотор p19, либо промотор p19 wt, поли(A) SV40, кассету для селекции с бластицидином под контролем промотора Ubc человека, энхансерный элемент для стабильной транскрипции встроенных ORF, ori pUC для увеличения в количестве в E. coli, и кассету устойчивости к ампициллину для селекции в E. coli.
Конструкцию, помещающую белки Rep по контроль Tet-индуцируемого промотора третьего поколения (промотор TRE3G) (фиг.2), получали стандартными способами клонирования и подтверждали секвенированием. Конечная последовательность этой конструкции pStbl-bsd-TRE3G-Rep52/40-IRES-Rep78/68, начиная с промотора TRE3G до поли(A) SV40, представлена в SEQ ID NO: 30. Компонентами pStbl-bsd-TRE3G-Rep52/40-IRES-Rep78/68 являются промотор TRE3G, локус Rep, начинающийся с инициирующего кодона коротких белков Rep, последовательность IRES ECMV, локус Rep, содержащий мутантный промотор p19, начинающийся с инициирующего кодона длинных белков Rep, поли(A) SV40, кассета для селекции с бластицидином под контролем промотора Ubc человека и энхансерный элемент для стабильной транскрипции встроенных ORF.
Клеточная культура
Клетки CAP стандартным образом культивировали в бессывороточной среде PEM с определенным химическим составом (Thermo Fisher Scientific), дополненной 4 мМ L-аланил-L-глутамином (Biochrom, Germany) во вращающихся флаконах (125 мл; Corning) на вращающем инкубаторе при 185 об/мин (орбита 5 см), 5% CO2 и 37°C.
В ходе стандартного культивирования клетки разбавляли свежей средой до плотности жизнеспособных клеток 1×106 клеток/мл каждые 72-96 ч. Плотность жизнеспособных клеток и жизнеспособность определяли по исключению трипанового синего с использованием устройства для подсчета клеток CEDEX XS (Innovatis, Roche Applied Science). Стабильную клеточную линию, экспрессирующую активатор Tet-on-3G, культивировали в присутствии 25 мкг/мл G418; при нуклеофекции с pStbl-bsd-TRE3G-Rep50/42-IRES-Rep78/68 добавляли 5 мкг/мл бластицидина.
Временная трансфекция и вестерн-блоттинг для тестирования на экспрессию белка Rep.
Временную трансфекцию проводили с использованием PEImax (PolySciences) в среде FreeStyle 293 (Thermo Fisher Scientific). Через 5 ч после трансфекции клетки подпитывали полной средой PEM (Thermo Fisher Scientific). Обзор полученных совокупностей клеток после временной трансфекции приведен в таблице 4, ниже.
Анализ посредством вестерн-блоттинга проводили с использованием клеточных лизатов 1×105 трансфицированных клеток с использованием антитела мыши против репликазы (Progen, Germany) и меченного пероксидазой хрена антитела против антител мыши (Cell Signaling). Детекцию белков проводили с использованием набора Pierce ECL WB Substrate Kit с использованием детектора хемилюминесценции (INTAS).
Нуклеофекция и получение стабильных совокупностей клеток.
Стабильные совокупности клеток получали с использованием Lonza’s Nucleofector в соответствии с инструкциями изготовителя. Стабильную клеточную линию CAP, экспрессирующую трансактиватор Tet-on-3G третьего поколения, использовали для нуклеофекции с индуцибельной конструкцией, экспрессирующей Rep. Для каждой реакции нуклеофекции 1×107 собирали центрифугированием (150×g, 5 мин). Клетки ресуспендировали в 100 мкл раствора Complete nucleofector solution V (Lonza) и смешивали с 5 мкг линеаризованного экспрессирующего вектора. Суспензию ДНК/клетки переносили в кювету и проводили нуклеофекцию с использованием программы X001. Трансфицированные клетки переносили в 12,5 мл среды для роста и культивировали, как описано выше, при 37°C, 5% CO2 при 185 об/мин.
Для получения стабильных совокупностей клеток клетки осаждали центрифугированием и ресуспендировали в селективной среде (см. таблицу 4) через 72-96 ч после трансфекции с последующим культивированием в инкубаторе со вращением, как описано выше.
Таблица 4: Полученные совокупности клеток с временной экспрессией CAP-T и стабильные совокупности клеток CAP с соответствующими экспрессирующими векторами и средами.
| Клеточная линия | Плазмида | Селективная среда |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep wt | временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 15 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 16 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 17 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 18 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 19 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut ID 20 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 21 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 22 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 25 | временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 26 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 27 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 28 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 43 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 44 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 45 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 46 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 47 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 48 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 49 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 50 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 51 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 23 | Временная |
| CAP-T | pStbl-bsd-Rep p19mut-ID 24 | Временная |
| CAP-Tet-on-3G | pStbl-bsd-TRE3G-Rep50/42-IRES-Rep78/68 | PEM+4 мМ Gln+5 мкг/мл бластицидина+25 мкг/мл G418 |
Указание на номера "ID" в приведенной выше таблице 4 относится к соответствующим SEQ ID NO.
Индукция и временная трансфекция для тестирования продуцирования AAV.
Для тестирования продуцирования AAV стабильными клонами единичных клеток с индуцибельной экспрессией Rep проводили временные трансфекции, как описано выше. Следующие три конструкции использовали для обеспечения дополнительных компонентов для продуцирования rAAV5 в соотношении 1:1:0,5 (pAAV-GFP:pHelper:pStbl-CMV-Cap5). Через 5 ч после трансфекции добавляли доксицилин (Clontech) до конечной концентрации 1 мкг/мл для индукции экспрессии белков Rep.
Через 72 ч после трансфекции суспензию клеток собирали. Клетки лизировали добавлением 0,5% Triton-X и инкубацией в течение 30 мин при 37°C и 1300 об/мин. После центрифугирования, супернатанты разбавляли в 10 раз буфером (50 мМ Tris/HCl, pH 8,0; 2 мМ MgCl2) и инкубировали с 125 Е/мл бензоназы (Merck Millipore) в течение 2 ч при 37°C. Для инактивации бензоназы использовали добавление 2 мМ EDTA и инкубацию при 70°C в течение 10 мин. Вирусную ДНК очищали с использованием набора Pure Link Viral RNA/ДНК mini kit (Thermo Fisher Scientific) в соответствии с инструкциями изготовителя.
кПЦР для определения титра вируса
Для определения титра вируса использовали следующую комбинацию праймера/зонда с двойным мечением (заказанного у MWG, Eurofins; таблица 5), направленных против промотора CMV или поли A SV40:
Таблица 5: Комбинация праймер/зонд, использованная для определения титра вируса
| Праймер/зонд | Последовательность |
| CMV Primer for (SEQ ID NO: 31) |
5'-AAATGGCCCGCCTGGCATTATG-3' |
| CMV Primer rev (SEQ ID NO: 32) |
5'-AAACCGCTATCCACGCCCATTG-3' |
| CMV Probe (SEQ ID NO: 33) |
ROX-5'-ACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATC-3'-BHQ2 |
| SV40 PolyA fw (SEQ ID NO: 52) |
5'-AGCAATAGCATCACAAATTTCACAA-3' |
| SV40 PolyA rev (SEQ ID NO: 53) |
5'-CCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTT-3' |
| SV40 PolyA Probe (SEQ ID NO: 54) |
FAM-5'-AGC ATT TTT TTC ACT GCA TTC TAG TTG TGG TTT GTC-3'-BHQ1 |
В качестве стандарта использовали линеаризованную плазмиду трансгена с определенным количеством копий. Реакция кПЦР включала следующие компоненты: 2× основная смесь Brilliant Multiplex qPCR Master Mix (Agilent), свободная от нуклеаз H2O (Thermo Fisher Scientific), смесь праймеров/зондов и образец/стандарт. кПЦР проводили на Agilent Mx3005P в соответствии с инструкциями изготовителя.
Пример 1:
Эффекты молчащих мутаций на экспрессию белков REP.
Введение:
Клетки CAP представляют собой происходящие из амниоцитов суспензионные клетки, иммортализованные посредством стабильной трансфекции конструкцией, кодирующей E1A/E1B.
Белки Rep AAV кодируются геномом AAV. Всего существует четыре белка Rep: Rep78 и Rep68 (экспрессируемых с промотора p5); а также Rep52 и Rep40 (экспрессируемых с промотора p19, расположенного в кодирующей области длинных белков Rep). Эти белки опосредуют репликацию и упаковывание генома AAV. Однако указанные белки являются токсичными для клеток при стабильной экспрессии.
Для инактивации внутреннего промотора p19 путем внесения молчащих мутаций были идентифицированы регуляторные элементы промотора p19 и в нуклеотидную последовательность этих регуляторных элементов были вставлены различные молчащие мутации, не влияющие на конечную белковую последовательность.
Результаты:
Экспрессию длинных и коротких белков Rep успешно разделяли путем внесения молчащих мутаций в регуляторные последовательности промотора p19. Большинство версий с мутациями продемонстрировали значительно сниженную экспрессию коротких белков Rep. Снижение экспрессии коротких белков Rep было заметно уже при внесении одной мутации, и становилось более выраженным при внесении вплоть до 20 мутаций (фиг.4, фиг.5). Разделение 5'- и 3'-мотивов показали, что особенно важными для активации внутреннего промотора p19 являются 3'-мотивы рядом с промотором (SP1 -50; TATA -35, TATA -20). Внесение мутации только в мотив TATA -20 привело к значительному, но не полному снижению экспрессии коротких белков rep, что указывает на то, что SP1 -50 и TATA -35 также являются важными для активации экспрессии, что далее подтверждается тем фактом, что мутация где-либо за исключением TATA -20 также приводила к заметному снижению экспрессии коротких белков rep. Более близкое изучение единичных мотивов, особенно мотива SP1 -50 и точнее мутации 824G>H, обеспечивало очень заметное снижение экспрессии коротких белков rep. Кроме того, мутация TATA -20 значительно снижала экспрессию коротких белков rep. Для TATA -35, только комбинация различных мутаций в мотиве приводила к очень заметному снижению, причем мутация 848A>G имела наибольший эффект на экспрессию.
Для получения стабильной клеточной линии с индуцибельной экспрессией белков Rep гены для длинных белков Rep, содержащие молчащие мутации, и гены для коротких белков Rep разделяли и каждый из них помещали под контроль индуцибельного промотора. Для дальнейших экспериментов была выбрана конструкция p19mut с 19 мутациями.
Пример 2:
Получение стабильных клонов CAP с индуцибельной экспрессией белков Rep AAV2.
Введение:
Для получения индуцибельной экспрессирующей кассеты для белков Rep AAV2 был выбран вариант p19mut с 19 молчащими мутациями.
Tet-индуцируемые промоторы третьего поколения (промотор TRE3G) использовали для регуляции экспрессии белков Rep путем добавления доксицилина (для обзора конструкции см. фиг.2). Клетки CAP, экспрессирующие трансактиватор Tet-on-3G, предварительно получали путем нуклеофекции и селекции с 25 мкг/мл G418. Конструкцию pStbl-bsd-TRE3G-Rep52/40-IRES-Rep78/68 вводили путем нуклеофекции в эту стабильную совокупность клеток и подвергали селекции с 5 мкг/мл бластицидина. Проводили клонирование единичных клеток с использованием лимитирующих разведений и клоны подвергали скринингу вестерн-блоттингом на белки Rep.
Результаты:
Стабильную совокупность клеток CAP, содержавших трансактиватор Tet-on-3G и pStbl-bsd-TRE3G-Rep52/40-IRES-Rep78/68, анализировали с использованием вестерн-блоттинга в отношении экспрессии различных белков rep до и после индукции доксициклином (фиг.6). Без индукции доксициклином нельзя было выявить сигнал, специфический для белков Rep, в то время как при индукции доксициклином экспрессировались как длинные, так и короткие белки Rep.
Из стабильной совокупности клеток получали колонии единичных клеток посредством лимитирующего разведения. Клоны, происходящие из единичных клеток, анализировали в отношении экспрессии белков Rep после индукции доксициклином. Из 5 клонов 3 клона экспрессировали как длинные, так и короткие белки Rep в ожидаемом соотношении, в то время как 2 из клонов имели сниженные уровни длинных белков Rep (фиг.7).
Данные демонстрируют, что с использованием конструкций rep с молчащими мутациями в промоторе p19 можно получать клональные клеточные популяции с индуцибельной экспрессией как длинных, так и коротких белков Rep. Такие клоны могут служить в качестве основы для получения упаковывающих/продуцирующих клеточных линий.
Пример 3:
Продуцирование AAV в стабильных клонах CAP с индуцибельной экспрессией белков Rep AAV2.
Введение:
Чтобы доказать, что клеточные линии с индуцибельным Rep способны продуцировать векторы AAV, недостающие компоненты для продуцирования AAV временно вводили в клетки 5 различных клонов: капсидные белки из AAV5, клонированные под контролем промотора CMV в вектор pStbl, дополнительная РНК генов-помощников E2A, E4orf6, VA, а также вектор для переноса с представляющим интерес геном (GOI): pAAV-GFP.
Результаты:
С использованием клонов единичных клеток стабильной клеточной линии, экспрессирующей индуцибельный Rep, продуцирование AAV можно было продемонстрировать при трансфекции клеток недостающими необходимыми компонентами и индукции доксицилином (фиг.8). Два клона с наиболее низкими уровнями длинных белков Rep также продемонстрировали более низкие титры AAV, как и ожидалось. Этот доказывает, что этот подход приводит к продуцированию вирусных векторов и что теперь является возможным получение упаковывающей клеточной линии с высокой продукцией AAV.
Пример 4:
Продуцирование AAV с использованием белков Rep с консервативной аминокислотной заменой
Для инактивации внутреннего промотора p19 путем внесения мутаций в промоторные области, приводящих к консервативным аминокислотным заменам, были идентифицированы регуляторные элементы промотора p19. Три отдельных мутации, 846T>G, 847T>C, 848A>B, встраивали в нуклеотидную последовательность области TATA -20, что приводило к консервативной замене Leu176>Ala (ID23). Две отдельных мутации, 823C>G, 824G>H, встраивали в нуклеотидную последовательность области SP1 -50, что приводило к консервативной замене Ala168>Gly (ID24). Различные конструкции временно вводили в клетки CAP-T и уровень экспрессии длинных и коротких белков Rep анализировали и сравнивали с wt и mut-20 (ID28) (фиг.9 A, B).
Для подтверждения функциональности длинных белков rep с консервативными аминокислотными заменами в области TATA -20 или SP1 -50, AAV продуцировали путем внесения следующей комбинации конструкций временно в клетки CAP-T: конструкция, кодирующая длинные белки Rep, либо pStbl-Rep-p19mut-ID23, либо -ID24, либо -mut20, либо -wt, вместе с конструкцией, кодирующей короткие белки Rep (pStbl-TRE3G-Rep50/42), pCMV-Tet3G и дополнительные гены-помощники: РНК E2A, E4orf6, VA, а также вектор для переноса с представляющим интерес геном (GOI), pAAV-GFP (фиг. 9C).
Результаты:
Анализ с использованием вестерн-блоттинга продемонстрировал, что экспрессия длинных и коротких белков Rep была успешным образом разделена путем внесения различных мутаций в регуляторные последовательности промотора p19, что приводило к консервативным заменам либо в области SP1 -50, либо в области TATA -20.
Как описано выше, мутация в области SP1 -50 имела более выраженный эффект, чем внесенные мутации в TATA -20 боксе, подтверждая важную роль SP1 -50 (фиг.9 A, B).
Важно, что функциональность длинных белков Rep, содержащих замену Leu176>Ala (ID23) или Ala168>Gly (ID24), можно было доказать путем продуцирования частиц AAV посредством временного продуцирования. Титр частиц AAV, продуцированных с помощью белков Rep, содержащих консервативную аминокислотную замену, находится в том же диапазоне, что и для контроля в виде wt или mut-20, с небольшим снижением титра AAV в образце ID24 (фиг.9C).
Настоящее изобретение относится к следующим нуклеотидным последовательностям.
SEQ ID NO: 1
Мутантная промоторная область mut19 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGAC DC G B AA C GGCGCCGG G GG D GG H AACAA A GT H GT H GATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGAC V AA C ATGGAACAGTA C TT GT CDGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 2
Мутантная промоторная область mut5 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTA C TT GT CDGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 3
Мутантная промоторная область mut1 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTATTT G AGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 4
Мутантная промоторная область mut2 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTATTTA T CCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 5
Мутантная промоторная область mut1-2 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTA C TTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 6
Мутантная промоторная область mut14 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGAC DC G B AA C GGCGCCGG G GG D GG H AACAA A GT H GT H GATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGAC V AA C ATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 7
Мутантная промоторная область mut10 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGAC DC G B AA C GGCGCCGG G GG D GG H AACAA A GT H GT H GATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 8
Мутантная промоторная область mut10-2 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGAC V AA C ATGGAACAGTA CC T BT CDGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 9
Мутантная промоторная область mut3 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTAT GCB AGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 10
Мутантная промоторная область mut2-2 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGG GH TGGACTAATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 11
Мутантная промоторная область mut2-3 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTAT C T B AGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 12
Мутантная промоторная область mut1-3 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTAT C TAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 13
Мутантная промоторная область mut5-2 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTA CC T BT CCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 14
Мутантная промоторная область mut20 p19 AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGAC DC G B AA C GGCGCCGG G GG D GG H AACAA A GT H GT H GATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGAC V AA C ATGGAACAGTA CC T BT CDGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 15
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut19 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGAC DC G B AA C GGCGCCGG G GG D GG H AACAA A GT H GT H GATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGAC V AA C ATGGAACAGTA C TT GT CDGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 16
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut5 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTA C TT GT CDGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 17
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut1 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутация в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTATTT G AGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 18
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut2 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутация в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTATTTA T CCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 19
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut1-2 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутация в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTA C TTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 20
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut14 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутация в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGAC DC G B AA C GGCGCCGG G GG D GG H AACAA A GT H GT H GATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGAC V AA C ATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 21
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut10 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутация в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGAC DC G B AA C GGCGCCGG G GG D GG H AACAA A GT H GT H GATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 22
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut10-2 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутация в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGAC V AA C ATGGAACAGTA CC T BT CDGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 23
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut3 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутация в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTAT GCB AGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 24
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut2-2 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутация в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGG GH TGGACTAATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 25
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut2-3 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутация в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTAT C T B AGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 26
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut1-3 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутация в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTAT C TAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 27
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut5-2 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутация в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTA CC T BT CCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 28
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью mut20 p19
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутация в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGAC DC G B AA C GGCGCCGG G GG D GG H AACAA A GT H GT H GATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGAC V AA C ATGGAACAGTA CC T BT CDGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 29
Синтетический локус rep AAV2
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: участки рестрикции HpaI
GTTAACTGACGTGAATTACGTCATAGGGTTAGGGAGGTCCTGTATTAGAGGTCACGTGAGTGTTTTGCGACATTTTGCGACACCATGTGGTCACGCTGGGTATTTAAGCCCGAGTGAGCACGCAGGGTCTCCATTTTGAAGCGGGAGGTTTGAACGCGCAGCCGCCATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGAAGGAATAAGACAGTGGTGGAAGCTCAAACCTGGCCCACCACCACCAAAGCCCGCAGAGCGGCATAAGGACGACAGCAGGGGTTAAC
SEQ ID NO: 30
Конструкция для индуцибельной экспрессии белков Rep AAV2
GTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATGAAGAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATGCAGACTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATAAGGAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATGACCAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATCTACAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATATCCAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATAAGCTTTAGGCGTGTACGGTGGGCGCCTATAAAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCGCCTGGAGCAATTCCACAACACTTTTGTCTTATACCAACTTTCCGTACCACTTCCTACCCTCGTAAAGTCGACACCGGGGCCCAGATCTATCGATCGGCCGGATAACGCCACCATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGAGATAACTGAGGGATAGAATTCCGCCCCCCCCCCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTTTCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGAGCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGAAGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGGAACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAAAGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTCCTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGATCTGGGGCCTCGGTGCACATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCCCGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATAGTTATCGCCGCCATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACACGGAACGGCGCCGGGGGAGGCAACAAAGTCGTCGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAATGGGCTTGGACCAACATGGAACAGTACTTGTCGGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGAGTTATCATTTAAATGGCGCGCCCACGTGGGTACCGCGGCCGCGGGGATCCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGAATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGGGGAGGTGTGGGAGGTTTTTTCGGATCCTCTAGAGTCGACCTGCAGGCA
SEQ ID NO: 31
Прямой праймер CMV
AAATGGCCCGCCTGGCATTATG
SEQ ID NO: 32
Обратный праймер CMV
AAACCGCTATCCACGCCCATTG
SEQ ID NO: 33
Зонд CMV
ACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATC
SEQ ID NO: 34
Мутантная промоторная область p19 AAV2 L (SP1 -50)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGACTAATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 35
Мутантная промоторная область p19 AAV2 M (TATA -20)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGAC V AA C ATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 36
Мутантная промоторная область p19 AAV2 N (SP1 -50 1)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 37
Мутантная промоторная область p19 AAV2 O (SP1 -50 2)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGC H TGGACTAATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 38
Мутантная промоторная область p19 AAV2 P (TATA -20 1)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGAC V AATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 39
Мутантная промоторная область p19 AAV2 Q (TATA -20 2)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAA C ATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 40
Мутантная промоторная область p19 AAV2 R (SP1 -50 & TATA -35)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGAC V AA C ATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 41
Мутантная промоторная область p19 AAV2 S (SP1 -50 & TATA -20)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGACTAATATGGAACAGTA CC T BT CDGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 42
Мутантная промоторная область p19 AAV2 T (TATA -20 & TATA -35)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
CAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGAC V AA C ATGGAACAGTA CC T BT CDGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGG
SEQ ID NO: 43
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью p19 L (SP-1)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGACTAATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 44
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью p19 M (TATA -20)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGAC V AA C ATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 45
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью p19 N (SP1 -50 1)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGCGTGGACTAATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 46
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью p19 O (SP1 -50 2)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGC H TGGACTAATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 47
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью p19 P (TATA -20 1)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGAC V AATATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 48
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью p19 Q (TATA -20 2)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGACTAA C ATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 49
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью p19 R (SP1 -50 & TATA -35)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGAC V AA C ATGGAACAGTATTTAAGCGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 50
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью p19 S (SP1 -50 & TATA -20)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCA A TGGGC H TGGACTAATATGGAACAGTA CC T BT CDGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 51
Кодирующая область белков Rep AAV2 с мутантной промоторной областью p19 T (TATA -20 & TATA -35)
полужирный шрифт: регуляторный участки в промоторе p19
подчеркивание: мутации в промоторной области p19
ATGCCGGGGTTTTACGAGATTGTGATTAAGGTCCCCAGCGACCTTGACGAGCATCTGCCCGGCATTTCTGACAGCTTTGTGAACTGGGTGGCCGAGAAGGAATGGGAGTTGCCGCCAGATTCTGACATGGATCTGAATCTGATTGAGCAGGCACCCCTGACCGTGGCCGAGAAGCTGCAGCGCGACTTTCTGACGGAATGGCGCCGTGTGAGTAAGGCCCCGGAGGCCCTTTTCTTTGTGCAATTTGAGAAGGGAGAGAGCTACTTCCACATGCACGTGCTCGTGGAAACCACCGGGGTGAAATCCATGGTTTTGGGACGTTTCCTGAGTCAGATTCGCGAAAAACTGATTCAGAGAATTTACCGCGGGATCGAGCCGACTTTGCCAAACTGGTTCGCGGTCACAAAGACCAGAAATGGCGCCGGAGGCGGGAACAAGGTGGTGGATGAGTGCTACATCCCCAATTACTTGCTCCCCAAAACCCAGCCTGAGCTCCAGTGGGCGTGGAC V AA C ATGGAACAGTA CC T BT CDGCCTGTTTGAATCTCACGGAGCGTAAACGGTTGGTGGCGCAGCATCTGACGCACGTGTCGCAGACGCAGGAGCAGAACAAAGAGAATCAGAATCCCAATTCTGATGCGCCGGTGATCAGATCAAAAACTTCAGCCAGGTACATGGAGCTGGTCGGGTGGCTCGTGGACAAGGGGATTACCTCGGAGAAGCAGTGGATCCAGGAGGACCAGGCCTCATACATCTCCTTCAATGCGGCCTCCAACTCGCGGTCCCAAATCAAGGCTGCCTTGGACAATGCGGGAAAGATTATGAGCCTGACTAAAACCGCCCCCGACTACCTGGTGGGCCAGCAGCCCGTGGAGGACATTTCCAGCAATCGGATTTATAAAATTTTGGAACTAAACGGGTACGATCCCCAATATGCGGCTTCCGTCTTTCTGGGATGGGCCACGAAAAAGTTCGGCAAGAGGAACACCATCTGGCTGTTTGGGCCTGCAACTACCGGGAAGACCAACATCGCGGAGGCCATAGCCCACACTGTGCCCTTCTACGGGTGCGTAAACTGGACCAATGAGAACTTTCCCTTCAACGACTGTGTCGACAAGATGGTGATCTGGTGGGAGGAGGGGAAGATGACCGCCAAGGTCGTGGAGTCGGCCAAAGCCATTCTCGGAGGAAGCAAGGTGCGCGTGGACCAGAAATGCAAGTCCTCGGCCCAGATAGACCCGACTCCCGTGATCGTCACCTCCAACACCAACATGTGCGCCGTGATTGACGGGAACTCAACGACCTTCGAACACCAGCAGCCGTTGCAAGACCGGATGTTCAAATTTGAACTCACCCGCCGTCTGGATCATGACTTTGGGAAGGTCACCAAGCAGGAAGTCAAAGACTTTTTCCGGTGGGCAAAGGATCACGTGGTTGAGGTGGAGCATGAATTCTACGTCAAAAAGGGTGGAGCCAAGAAAAGACCCGCCCCCAGTGACGCAGATATAAGTGAGCCCAAACGGGTGCGCGAGTCAGTTGCGCAGCCATCGACGTCAGACGCGGAAGCTTCGATCAACTACGCAGACAGGTACCAAAACAAATGTTCTCGTCACGTGGGCATGAATCTGATGCTGTTTCCCTGCAGACAATGCGAGAGAATGAATCAGAATTCAAATATCTGCTTCACTCACGGACAGAAAGACTGTTTAGAGTGCTTTCCCGTGTCAGAATCTCAACCCGTTTCTGTCGTCAAAAAGGCGTATCAGAAACTGTGCTACATTCATCATATCATGGGAAAGGTGCCAGACGCTTGCACTGCCTGCGATCTGGTCAATGTGGATTTGGATGACTGCATCTTTGAACAATAAATGATTTAAATCAGGTATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACACTCTCTCTGA
SEQ ID NO: 52
Прямой праймер для полиA SV40
AGCAATAGCATCACAAATTTCACAA
SEQ ID NO: 53
Обратный праймер для полиA SV40
CCAGACATGATAAGATACATTGATGAGTT
SEQ ID NO: 54
Зонд для полиA SV40
AGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTC
--->
Список последовательностей
<110> CEVEC Pharmaceuticals GmbH
<120> Индуцибельные гены Rep AAV
<130> C 4767WO - kl
<150> EP 17 001 562.2
<151> 2017-09-19
<160> 54
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область mut19 p19 AAV
<400> 1
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac dcgbaacggc gccgggggbg ghaacaaagt hgthgatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccaatg ggchtggacv 180
aacatggaac agtacttgtc dgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 2
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область mut5-1 p19 AAV
<400> 2
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact 180
aatatggaac agtacttgtc dgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 3
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область mut1-1 p19 AAV
<400> 3
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact 180
aatatggaac agtatttgag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 4
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область mut2-1 p19 AAV
<400> 4
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact 180
aatatggaac agtatttatc cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 5
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область mut1-2 p19 AAV
<400> 5
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact 180
aatatggaac agtacttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 6
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область mut14 p19 AAV
<400> 6
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac dcgbaacggc gccgggggbg ghaacaaagt hgthgatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccaatg ggchtggacv 180
aacatggaac agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 7
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область mut10-1 p19 AAV
<400> 7
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac acggaacggc gccgggggag gcaacaaagt cgtcgatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact 180
aatatggaac agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 8
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область mut10-2 p19 AAV
<400> 8
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccaatg ggchtggacv 180
aacatggaac agtacctbtc dgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 9
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область mut3 p19 AAV
<400> 9
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact 180
aatatggaac agtatgcbag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 10
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область p19 AAV
<400> 10
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggghtggact 180
aatatggaac agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 11
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область p19 AAV
<400> 11
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact 180
aatatggaac agtatctbag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 12
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область mut1-3 p19 AAV
<400> 12
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact 180
aatatggaac agtatctaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 13
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область mut5-2 p19 AAV
<400> 13
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact 180
aatatggaac agtacctbtc cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 14
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область mut20 p19 AAV
<400> 14
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac dcgbaacggc gccgggggbg ghaacaaagt hgthgatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccaatg ggchtggacv 180
aacatggaac agtacctbtc dgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 15
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut19
<400> 15
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac dcgbaacggc 420
gccgggggbg ghaacaaagt hgthgatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccaatg ggchtggacv aacatggaac agtacttgtc dgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 16
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut5-1
<400> 16
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aatatggaac agtacttgtc dgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 17
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut1-1
<400> 17
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aatatggaac agtatttgag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 18
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut2-1
<400> 18
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aatatggaac agtatttatc cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 19
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut1-2
<400> 19
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aatatggaac agtacttaag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 20
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut14
<400> 20
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac dcgbaacggc 420
gccgggggbg ghaacaaagt hgthgatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccaatg ggchtggacv aacatggaac agtatttaag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 21
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut10-1
<400> 21
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac acggaacggc 420
gccgggggag gcaacaaagt cgtcgatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aatatggaac agtatttaag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 22
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut10-2
<400> 22
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccaatg ggchtggacv aacatggaac agtacctbtc dgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 23
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut3
<400> 23
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aatatggaac agtatgcbag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 24
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut2-2
<400> 24
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggghtggact aatatggaac agtatttaag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 25
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut2-3
<400> 25
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aatatggaac agtatctbag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 26
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut1-3
<400> 26
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aatatggaac agtatctaag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 27
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut5-2
<400> 27
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aatatggaac agtacctbtc cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 28
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19
mut20
<400> 28
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac dcgbaacggc 420
gccgggggbg ghaacaaagt hgthgatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccaatg ggchtggacv aacatggaac agtacctbtc dgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 29
<211> 2184
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический локус rep AAV2
<400> 29
gttaactgac gtgaattacg tcatagggtt agggaggtcc tgtattagag gtcacgtgag 60
tgttttgcga cattttgcga caccatgtgg tcacgctggg tatttaagcc cgagtgagca 120
cgcagggtct ccattttgaa gcgggaggtt tgaacgcgca gccgccatgc cggggtttta 180
cgagattgtg attaaggtcc ccagcgacct tgacgagcat ctgcccggca tttctgacag 240
ctttgtgaac tgggtggccg agaaggaatg ggagttgccg ccagattctg acatggatct 300
gaatctgatt gagcaggcac ccctgaccgt ggccgagaag ctgcagcgcg actttctgac 360
ggaatggcgc cgtgtgagta aggccccgga ggcccttttc tttgtgcaat ttgagaaggg 420
agagagctac ttccacatgc acgtgctcgt ggaaaccacc ggggtgaaat ccatggtttt 480
gggacgtttc ctgagtcaga ttcgcgaaaa actgattcag agaatttacc gcgggatcga 540
gccgactttg ccaaactggt tcgcggtcac aaagaccaga aatggcgccg gaggcgggaa 600
caaggtggtg gatgagtgct acatccccaa ttacttgctc cccaaaaccc agcctgagct 660
ccagtgggcg tggactaata tggaacagta tttaagcgcc tgtttgaatc tcacggagcg 720
taaacggttg gtggcgcagc atctgacgca cgtgtcgcag acgcaggagc agaacaaaga 780
gaatcagaat cccaattctg atgcgccggt gatcagatca aaaacttcag ccaggtacat 840
ggagctggtc gggtggctcg tggacaaggg gattacctcg gagaagcagt ggatccagga 900
ggaccaggcc tcatacatct ccttcaatgc ggcctccaac tcgcggtccc aaatcaaggc 960
tgccttggac aatgcgggaa agattatgag cctgactaaa accgcccccg actacctggt 1020
gggccagcag cccgtggagg acatttccag caatcggatt tataaaattt tggaactaaa 1080
cgggtacgat ccccaatatg cggcttccgt ctttctggga tgggccacga aaaagttcgg 1140
caagaggaac accatctggc tgtttgggcc tgcaactacc gggaagacca acatcgcgga 1200
ggccatagcc cacactgtgc ccttctacgg gtgcgtaaac tggaccaatg agaactttcc 1260
cttcaacgac tgtgtcgaca agatggtgat ctggtgggag gaggggaaga tgaccgccaa 1320
ggtcgtggag tcggccaaag ccattctcgg aggaagcaag gtgcgcgtgg accagaaatg 1380
caagtcctcg gcccagatag acccgactcc cgtgatcgtc acctccaaca ccaacatgtg 1440
cgccgtgatt gacgggaact caacgacctt cgaacaccag cagccgttgc aagaccggat 1500
gttcaaattt gaactcaccc gccgtctgga tcatgacttt gggaaggtca ccaagcagga 1560
agtcaaagac tttttccggt gggcaaagga tcacgtggtt gaggtggagc atgaattcta 1620
cgtcaaaaag ggtggagcca agaaaagacc cgcccccagt gacgcagata taagtgagcc 1680
caaacgggtg cgcgagtcag ttgcgcagcc atcgacgtca gacgcggaag cttcgatcaa 1740
ctacgcagac aggtaccaaa acaaatgttc tcgtcacgtg ggcatgaatc tgatgctgtt 1800
tccctgcaga caatgcgaga gaatgaatca gaattcaaat atctgcttca ctcacggaca 1860
gaaagactgt ttagagtgct ttcccgtgtc agaatctcaa cccgtttctg tcgtcaaaaa 1920
ggcgtatcag aaactgtgct acattcatca tatcatggga aaggtgccag acgcttgcac 1980
tgcctgcgat ctggtcaatg tggatttgga tgactgcatc tttgaacaat aaatgattta 2040
aatcaggtat ggctgccgat ggttatcttc cagattggct cgaggacact ctctctgaag 2100
gaataagaca gtggtggaag ctcaaacctg gcccaccacc accaaagccc gcagagcggc 2160
ataaggacga cagcaggggt taac 2184
<210> 30
<211> 4485
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Индуцибельная экспрессирующая конструкция для белков Rep AAV2
<400> 30
gtttactccc tatcagtgat agagaacgta tgaagagttt actccctatc agtgatagag 60
aacgtatgca gactttactc cctatcagtg atagagaacg tataaggagt ttactcccta 120
tcagtgatag agaacgtatg accagtttac tccctatcag tgatagagaa cgtatctaca 180
gtttactccc tatcagtgat agagaacgta tatccagttt actccctatc agtgatagag 240
aacgtataag ctttaggcgt gtacggtggg cgcctataaa agcagagctc gtttagtgaa 300
ccgtcagatc gcctggagca attccacaac acttttgtct tataccaact ttccgtacca 360
cttcctaccc tcgtaaagtc gacaccgggg cccagatcta tcgatcggcc ggataacgcc 420
accatggagc tggtcgggtg gctcgtggac aaggggatta cctcggagaa gcagtggatc 480
caggaggacc aggcctcata catctccttc aatgcggcct ccaactcgcg gtcccaaatc 540
aaggctgcct tggacaatgc gggaaagatt atgagcctga ctaaaaccgc ccccgactac 600
ctggtgggcc agcagcccgt ggaggacatt tccagcaatc ggatttataa aattttggaa 660
ctaaacgggt acgatcccca atatgcggct tccgtctttc tgggatgggc cacgaaaaag 720
ttcggcaaga ggaacaccat ctggctgttt gggcctgcaa ctaccgggaa gaccaacatc 780
gcggaggcca tagcccacac tgtgcccttc tacgggtgcg taaactggac caatgagaac 840
tttcccttca acgactgtgt cgacaagatg gtgatctggt gggaggaggg gaagatgacc 900
gccaaggtcg tggagtcggc caaagccatt ctcggaggaa gcaaggtgcg cgtggaccag 960
aaatgcaagt cctcggccca gatagacccg actcccgtga tcgtcacctc caacaccaac 1020
atgtgcgccg tgattgacgg gaactcaacg accttcgaac accagcagcc gttgcaagac 1080
cggatgttca aatttgaact cacccgccgt ctggatcatg actttgggaa ggtcaccaag 1140
caggaagtca aagacttttt ccggtgggca aaggatcacg tggttgaggt ggagcatgaa 1200
ttctacgtca aaaagggtgg agccaagaaa agacccgccc ccagtgacgc agatataagt 1260
gagcccaaac gggtgcgcga gtcagttgcg cagccatcga cgtcagacgc ggaagcttcg 1320
atcaactacg cagacaggta ccaaaacaaa tgttctcgtc acgtgggcat gaatctgatg 1380
ctgtttccct gcagacaatg cgagagaatg aatcagaatt caaatatctg cttcactcac 1440
ggacagaaag actgtttaga gtgctttccc gtgtcagaat ctcaacccgt ttctgtcgtc 1500
aaaaaggcgt atcagaaact gtgctacatt catcatatca tgggaaaggt gccagacgct 1560
tgcactgcct gcgatctggt caatgtggat ttggatgact gcatctttga acaataaatg 1620
atttaaatca ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acactctctc 1680
tgagataact gagggataga attccgcccc ccccccctaa cgttactggc cgaagccgct 1740
tggaataagg ccggtgtgcg tttgtctata tgttattttc caccatattg ccgtcttttg 1800
gcaatgtgag ggcccggaaa cctggccctg tcttcttgac gagcattcct aggggtcttt 1860
cccctctcgc caaaggaatg caaggtctgt tgaatgtcgt gaaggaagca gttcctctgg 1920
aagcttcttg aagacaaaca acgtctgtag cgaccctttg caggcagcgg aaccccccac 1980
ctggcgacag gtgcctctgc ggccaaaagc cacgtgtata agatacacct gcaaaggcgg 2040
cacaacccca gtgccacgtt gtgagttgga tagttgtgga aagagtcaaa tggctctcct 2100
caagcgtatt caacaagggg ctgaaggatg cccagaaggt accccattgt atgggatctg 2160
atctggggcc tcggtgcaca tgctttacat gtgtttagtc gaggttaaaa aaacgtctag 2220
gccccccgaa ccacggggac gtggttttcc tttgaaaaac acgatgataa tagttatcgc 2280
cgccatgccg gggttttacg agattgtgat taaggtcccc agcgaccttg acgagcatct 2340
gcccggcatt tctgacagct ttgtgaactg ggtggccgag aaggaatggg agttgccgcc 2400
agattctgac atggatctga atctgattga gcaggcaccc ctgaccgtgg ccgagaagct 2460
gcagcgcgac tttctgacgg aatggcgccg tgtgagtaag gccccggagg cccttttctt 2520
tgtgcaattt gagaagggag agagctactt ccacatgcac gtgctcgtgg aaaccaccgg 2580
ggtgaaatcc atggttttgg gacgtttcct gagtcagatt cgcgaaaaac tgattcagag 2640
aatttaccgc gggatcgagc cgactttgcc aaactggttc gcggtcacaa agacacggaa 2700
cggcgccggg ggaggcaaca aagtcgtcga tgagtgctac atccccaatt acttgctccc 2760
caaaacccag cctgagctcc aatgggcttg gaccaacatg gaacagtact tgtcggcctg 2820
tttgaatctc acggagcgta aacggttggt ggcgcagcat ctgacgcacg tgtcgcagac 2880
gcaggagcag aacaaagaga atcagaatcc caattctgat gcgccggtga tcagatcaaa 2940
aacttcagcc aggtacatgg agctggtcgg gtggctcgtg gacaagggga ttacctcgga 3000
gaagcagtgg atccaggagg accaggcctc atacatctcc ttcaatgcgg cctccaactc 3060
gcggtcccaa atcaaggctg ccttggacaa tgcgggaaag attatgagcc tgactaaaac 3120
cgcccccgac tacctggtgg gccagcagcc cgtggaggac atttccagca atcggattta 3180
taaaattttg gaactaaacg ggtacgatcc ccaatatgcg gcttccgtct ttctgggatg 3240
ggccacgaaa aagttcggca agaggaacac catctggctg tttgggcctg caactaccgg 3300
gaagaccaac atcgcggagg ccatagccca cactgtgccc ttctacgggt gcgtaaactg 3360
gaccaatgag aactttccct tcaacgactg tgtcgacaag atggtgatct ggtgggagga 3420
ggggaagatg accgccaagg tcgtggagtc ggccaaagcc attctcggag gaagcaaggt 3480
gcgcgtggac cagaaatgca agtcctcggc ccagatagac ccgactcccg tgatcgtcac 3540
ctccaacacc aacatgtgcg ccgtgattga cgggaactca acgaccttcg aacaccagca 3600
gccgttgcaa gaccggatgt tcaaatttga actcacccgc cgtctggatc atgactttgg 3660
gaaggtcacc aagcaggaag tcaaagactt tttccggtgg gcaaaggatc acgtggttga 3720
ggtggagcat gaattctacg tcaaaaaggg tggagccaag aaaagacccg cccccagtga 3780
cgcagatata agtgagccca aacgggtgcg cgagtcagtt gcgcagccat cgacgtcaga 3840
cgcggaagct tcgatcaact acgcagacag gtaccaaaac aaatgttctc gtcacgtggg 3900
catgaatctg atgctgtttc cctgcagaca atgcgagaga atgaatcaga attcaaatat 3960
ctgcttcact cacggacaga aagactgttt agagtgcttt cccgtgtcag aatctcaacc 4020
cgtttctgtc gtcaaaaagg cgtatcagaa actgtgctac attcatcata tcatgggaaa 4080
ggtgccagac gcttgcactg cctgcgatct ggtcaatgtg gatttggatg actgcatctt 4140
tgaacaataa atgatttaaa tcaggtatgg ctgccgatgg ttatcttcca gattggctcg 4200
aggacactct ctctgagtta tcatttaaat ggcgcgccca cgtgggtacc gcggccgcgg 4260
ggatccagac atgataagat acattgatga gtttggacaa accacaacta gaatgcagtg 4320
aaaaaaatgc tttatttgtg aaatttgtga tgctattgct ttatttgtaa ccattataag 4380
ctgcaataaa caagttaaca acaacaattg cattcatttt atgtttcagg ttcaggggga 4440
ggtgtgggag gttttttcgg atcctctaga gtcgacctgc aggca 4485
<210> 31
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> прямой праймер CMV
<400> 31
aaatggcccg cctggcatta tg 22
<210> 32
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> обратный праймер CMV
<400> 32
aaaccgctat ccacgcccat tg 22
<210> 33
<211> 38
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Зонд CMV
<400> 33
acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatc 38
<210> 34
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область p19 AAV L (SP1 -50)
<400> 34
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccaatg ggchtggact 180
aatatggaac agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 35
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область p19 AAV M (TATA -20)
<400> 35
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggacv 180
aacatggaac agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 36
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область p19 AAV N (SP1 -50 1)
<400> 36
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccaatg ggcgtggact 180
aatatggaac agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 37
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область p19 AAV O (SP1 -50 2)
<400> 37
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggchtggact 180
aatatggaac agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 38
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область p19 AAV P (TATA -20 1)
<400> 38
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggacv 180
aatatggaac agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 39
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область p19 AAV Q (TATA -20 2)
<400> 39
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact 180
aacatggaac agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 40
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область p19 AAV R (SP1 -50 и TATA -35)
<400> 40
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccaatg ggchtggacv 180
aacatggaac agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 41
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область p19 AAV S (SP1 -50 и TATA -20)
<400> 41
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccaatg ggchtggact 180
aatatggaac agtacctbtc dgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 42
<211> 403
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Мутантная промоторная область p19 AAV T (TATA -20 и TATA -35)
<400> 42
cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac 60
tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag 120
tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggacv 180
aacatggaac agtacctbtc dgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg 240
cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat 300
tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg 360
ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag cagtggatcc agg 403
<210> 43
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19 L
(SP1 -50)
<400> 43
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccaatg ggchtggact aatatggaac agtatttaag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 44
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19 M
(TATA -20)
<400> 44
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggacv aacatggaac agtatttaag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 45
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19 N
(SP1 -50 1)
<400> 45
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccaatg ggcgtggact aatatggaac agtatttaag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 46
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19 O
(SP1 -50 2)
<400> 46
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggchtggact aatatggaac agtatttaag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 47
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19 P
(TATA -20 1)
<400> 47
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggacv aatatggaac agtatttaag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 48
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19 Q
(TATA -20 2)
<400> 48
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aacatggaac agtatttaag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 49
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19 R
(SP1 -50 и TATA -35)
<400> 49
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccaatg ggchtggacv aacatggaac agtatttaag cgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 50
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAV с мутантной промоторной областью p19 S
(SP1 -50 и TATA -20)
<400> 50
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccaatg ggchtggact aatatggaac agtacctbtc dgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 51
<211> 1932
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Кодирующая область белков Rep AAR с мутантной промоторной областью p19 T
(TATA -20 и TATA -35)
<400> 51
atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg accttgacga gcatctgccc 60
ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg aatgggagtt gccgccagat 120
tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga gaagctgcag 180
cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc cggaggccct tttctttgtg 240
caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc tcgtggaaac caccggggtg 300
aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg aaaaactgat tcagagaatt 360
taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg tcacaaagac cagaaatggc 420
gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc ccaattactt gctccccaaa 480
acccagcctg agctccagtg ggcgtggacv aacatggaac agtacctbtc dgcctgtttg 540
aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600
gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc cggtgatcag atcaaaaact 660
tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca aggggattac ctcggagaag 720
cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca atgcggcctc caactcgcgg 780
tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta tgagcctgac taaaaccgcc 840
cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt ccagcaatcg gatttataaa 900
attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt ccgtctttct gggatgggcc 960
acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg ggcctgcaac taccgggaag 1020
accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct acgggtgcgt aaactggacc 1080
aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggg 1140
aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc tcggaggaag caaggtgcgc 1200
gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga ctcccgtgat cgtcacctcc 1260
aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga ccttcgaaca ccagcagccg 1320
ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc acccgccgtc tggatcatga ctttgggaag 1380
gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa aggatcacgt ggttgaggtg 1440
gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa gacccgcccc cagtgacgca 1500
gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560
gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 1620
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 1680
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 1740
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 1800
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctttgaa 1860
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga 1920
cactctctct ga 1932
<210> 52
<211> 25
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Прямой праймер поли A SV40
<400> 52
agcaatagca tcacaaattt cacaa 25
<210> 53
<211> 29
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Обратный праймер поли A SV40
<400> 53
ccagacatga taagatacat tgatgagtt 29
<210> 54
<211> 36
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Зонд поли A SV40
<400> 54
agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg tttgtc 36
<---
Claims (13)
1. Клетка-хозяин для получения белков Rep аденоассоциированного вируса (AAV) Rep78 и Rep68, содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую белки Rep аденоассоциированного вируса (AAV) Rep78 и Rep68, где внутренний промотор p19 AAV инактивирован посредством одной или нескольких мутаций, которые сохраняют функциональность указанных белков Rep78 и Rep68, где указанная нуклеиновая кислота содержит по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 1-28, 34-51.
2. Клетка-хозяин по п. 1, где указанные одна или несколько мутаций находятся по меньшей мере в одной из области SP1 -50, области TATA -20 и области TATA -35 промотора p19.
3. Клетка-хозяин по п. 1 или 2, где указанные одна или несколько мутаций представляют собой молчащие мутации.
4. Клетка-хозяин по любому из пп. 1-3, где указанные одна или несколько мутаций включают по меньшей мере одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из мутаций 731C>D, 732A>C, 734A>B, 737T>C, 746A>G, 749C>D, 752G>H, 758G>A, 761G>H, 764G>H, 818G>A, 824G>H, 830T>V, 833T>C, 845T>C, 846T>C, 8484A>B, 848A>G, 849A>T, 850G>C и 851C>D.
5. Клетка-хозяин по п. 1 или 2, где указанные одна или несколько мутаций представляют собой мутации, которые приводят к одной или нескольким консервативным аминокислотным заменам.
6. Клетка-хозяин по п. 5, где указанные одна или несколько аминокислотных замен представляют собой аминокислотные замены в пределах класса алифатических аминокислот Gly, Ala, Val, Leu, Ile, в пределах класса гидроксил- или сера/селен-содержащих аминокислот Ser, Cys, Sec, Thr, Met, в пределах класса основных аминокислот His, Lys, Arg, или в пределах класса кислотных аминокислот Asp, Glu, Asn, Gln.
7. Клетка-хозяин для получения белков Rep аденоассоциированного вируса (AAV) Rep78 и Rep68, содержащая нуклеиновую кислоту, содержащую по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 1-28, 34-51, при условии, что присутствуют конкретные мутации, определенные в пп. 1-6.
8. Клетка-хозяин по любому из пп. 1-7, где указанная нуклеиновая кислота стабильно встроена в геном клетки-хозяина или содержится в векторе.
9. Клетка-хозяин по любому из пп. 1-8, дополнительно содержащая нуклеиновую кислоту, кодирующую белки Rep AAV Rep52 и Rep40, под контролем индуцибельного промотора.
10. Клетка-хозяин по любому из пп. 1-9, выбранная из группы, состоящей из клеток CAP, клеток HEK293 и клеток Per.C6.
11. Нуклеиновая кислота, кодирующая белки Rep аденоассоциированного вируса (AAV) Rep78 и Rep68, где нуклеиновая кислота содержит по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей согласно SEQ ID NO: 1-28, 34-51, или нуклеотидную последовательность, обладающую по меньшей мере 95% идентичностью указанным последовательностям при условии, что присутствуют конкретные мутации, определенные в пп. 1-6.
12. Экспрессионный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п. 11.
13. Способ продуцирования аденоассоциированного вируса (AAV), включающий стадию рекомбинантной экспрессии белков Rep AAV Rep78 и Rep68 в клетке-хозяине по любому из пп. 1-10.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP17001562.2 | 2017-09-19 | ||
| EP17001562.2A EP3456822A1 (en) | 2017-09-19 | 2017-09-19 | Inducible aav rep genes |
| PCT/EP2018/075158 WO2019057691A1 (en) | 2017-09-19 | 2018-09-18 | INDAVTIBLE AAV GEN GENES |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020111459A RU2020111459A (ru) | 2021-10-20 |
| RU2020111459A3 RU2020111459A3 (ru) | 2021-11-29 |
| RU2772989C2 true RU2772989C2 (ru) | 2022-05-30 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003104392A3 (en) * | 2001-12-18 | 2004-08-05 | Univ North Carolina | IMPROVED REAGENTS AND METHODS FOR PRODUCING PARVOVIRUSES |
| RU2457252C2 (ru) * | 2006-06-21 | 2012-07-27 | Амстердам Молекьюла Терапьютикс (Амт) Ип Б.В. | AAV ВЕКТОРЫ С УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫМИ Rep-КОДИРУЮЩИМИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЯМИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫМИ В СИСТЕМАХ ПРОДУКЦИИ НА ОСНОВЕ КЛЕТОК НАСЕКОМЫХ |
| US20140242671A1 (en) * | 2011-10-28 | 2014-08-28 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Cell Line for Production of Adeno-associated Virus |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003104392A3 (en) * | 2001-12-18 | 2004-08-05 | Univ North Carolina | IMPROVED REAGENTS AND METHODS FOR PRODUCING PARVOVIRUSES |
| RU2457252C2 (ru) * | 2006-06-21 | 2012-07-27 | Амстердам Молекьюла Терапьютикс (Амт) Ип Б.В. | AAV ВЕКТОРЫ С УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫМИ Rep-КОДИРУЮЩИМИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЯМИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫМИ В СИСТЕМАХ ПРОДУКЦИИ НА ОСНОВЕ КЛЕТОК НАСЕКОМЫХ |
| US20140242671A1 (en) * | 2011-10-28 | 2014-08-28 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Cell Line for Production of Adeno-associated Virus |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| LACKNER D.F. et al., Studies of the mechanism of transactivation of the adeno-associated virus p19 promoter by Rep protein. J Virol. 2002, Vol. 76, No 16, pp. 8225-8235. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11060070B2 (en) | Mutated rep encoding sequences for use in AAV production | |
| Mietzsch et al. | OneBac: platform for scalable and high-titer production of adeno-associated virus serotype 1–12 vectors for gene therapy | |
| KR101990068B1 (ko) | 렌티바이러스 벡터의 안정한 제조 | |
| US20230348936A1 (en) | Inducible AAV REP genes | |
| JP7081767B2 (ja) | アデノ随伴ウイルス（ａａｖ）キャプシドタンパク質の変異体 | |
| WO2011122950A1 (en) | Monomeric duplex aav vectors | |
| AU5544499A (en) | Use of suppressor trna's to regulate cytotoxicity during the production of recombinant gene products | |
| RU2772989C2 (ru) | Индуцибельные гены rep aav | |
| US20220064668A1 (en) | Modified adeno-associated viral vectors for use in genetic engineering | |
| JP2024501223A (ja) | 低レベルのｖａ－ｒｎａを有する産生細胞 | |
| Jalsic | Generation of cumate/coumermycin inducible HEK293-SF AAV packaging cell lines | |
| Kligman | Establishing a stable cell-line for producing Adeno-Associated Virus using CRISPR-Cas9 | |
| WO2011112090A2 (en) | Method for identifying variant rep protein encoding nucleic acids | |
| WO2024068990A1 (en) | A chimeric helper nucleic acid molecule comprising helper elements from three distinct helper viruses | |
| by Internal | Block to the Production of Full-Length B19 |