RU2771982C2 - Агент, способствующий ангиогенезу, и методы его использования - Google Patents
Агент, способствующий ангиогенезу, и методы его использования Download PDFInfo
- Publication number
- RU2771982C2 RU2771982C2 RU2019123694A RU2019123694A RU2771982C2 RU 2771982 C2 RU2771982 C2 RU 2771982C2 RU 2019123694 A RU2019123694 A RU 2019123694A RU 2019123694 A RU2019123694 A RU 2019123694A RU 2771982 C2 RU2771982 C2 RU 2771982C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- compound
- subject
- mpa
- influenza
- administering
- Prior art date
Links
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 title claims abstract description 23
- 230000001737 promoting Effects 0.000 title claims description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 213
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 38
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 23
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 claims abstract description 18
- 230000004936 stimulating Effects 0.000 claims abstract description 8
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims description 95
- 208000006572 Human Influenza Diseases 0.000 claims description 80
- 206010022000 Influenza Diseases 0.000 claims description 78
- 210000002889 Endothelial Cells Anatomy 0.000 claims description 47
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 claims description 41
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 36
- 230000001603 reducing Effects 0.000 claims description 34
- -1 thiol compound Chemical class 0.000 claims description 32
- 210000003651 Basophils Anatomy 0.000 claims description 31
- 102000012753 TIE-2 Receptor Human genes 0.000 claims description 30
- 108010090091 TIE-2 Receptor Proteins 0.000 claims description 30
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 30
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 30
- 210000003979 Eosinophils Anatomy 0.000 claims description 29
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 claims description 27
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 27
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 24
- 230000002491 angiogenic Effects 0.000 claims description 23
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 22
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 21
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 19
- 108010072106 tumstatin (74-98) Proteins 0.000 claims description 17
- 230000002757 inflammatory Effects 0.000 claims description 16
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 15
- 230000035699 permeability Effects 0.000 claims description 15
- 200000000019 wound Diseases 0.000 claims description 15
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 claims description 14
- 102100012897 PGF Human genes 0.000 claims description 13
- 101710014083 PGF Proteins 0.000 claims description 13
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 13
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 claims description 12
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 claims description 11
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 claims description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 11
- 230000000699 topical Effects 0.000 claims description 11
- 102100007747 ANGPT2 Human genes 0.000 claims description 10
- 102100015249 VEGFA Human genes 0.000 claims description 10
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 claims description 10
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 10
- 230000002633 protecting Effects 0.000 claims description 10
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 10
- 101710043855 ANGPT2 Proteins 0.000 claims description 9
- 101700025229 Ang2 Proteins 0.000 claims description 9
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims description 8
- 230000003213 activating Effects 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 claims description 8
- 208000006673 Asthma Diseases 0.000 claims description 7
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 claims description 7
- 102100008634 FGF2 Human genes 0.000 claims description 7
- 101700082364 FGF2 Proteins 0.000 claims description 7
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 7
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims description 7
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 claims description 7
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 claims description 7
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 claims description 7
- 230000002829 reduced Effects 0.000 claims description 7
- 208000002780 Macular Degeneration Diseases 0.000 claims description 6
- VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N Oseltamivir Chemical compound CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N 0.000 claims description 6
- 229960003752 Oseltamivir Drugs 0.000 claims description 6
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 claims description 6
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 claims description 6
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N (2R,3R,4S)-4-[(diaminomethylidene)amino]-3-acetamido-2-[(1R,2R)-1,2,3-trihydroxypropyl]-3,4-dihydro-2H-pyran-6-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 claims description 5
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N Amantadine Chemical group C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960003805 Amantadine Drugs 0.000 claims description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 102100019487 CCL11 Human genes 0.000 claims description 5
- 101700074178 CCL11 Proteins 0.000 claims description 5
- 206010011985 Decubitus ulcer Diseases 0.000 claims description 5
- XRQDFNLINLXZLB-CKIKVBCHSA-N Peramivir Chemical compound CCC(CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C(O)=O)C[C@H]1NC(N)=N XRQDFNLINLXZLB-CKIKVBCHSA-N 0.000 claims description 5
- 208000004210 Pressure Ulcer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 claims description 5
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 claims description 5
- 229960000329 Ribavirin Drugs 0.000 claims description 5
- UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N Rimantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- NHKZSTHOYNWEEZ-AFCXAGJDSA-N Taribavirin Chemical compound N1=C(C(=N)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NHKZSTHOYNWEEZ-AFCXAGJDSA-N 0.000 claims description 5
- 229960001028 Zanamivir Drugs 0.000 claims description 5
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 claims description 5
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960001084 peramivir Drugs 0.000 claims description 5
- 229960000888 rimantadine Drugs 0.000 claims description 5
- 229950006081 taribavirin Drugs 0.000 claims description 5
- 102100008428 CCL2 Human genes 0.000 claims description 4
- 101700006000 CCL2 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100016449 CCL5 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 claims description 4
- 206010012601 Diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 4
- 206010056340 Diabetic ulcer Diseases 0.000 claims description 4
- 210000003414 Extremities Anatomy 0.000 claims description 4
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 4
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 4
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 claims description 4
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 claims description 4
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 claims description 4
- 208000004852 Lung Injury Diseases 0.000 claims description 4
- 101710043203 P23p89 Proteins 0.000 claims description 4
- 206010035737 Pneumonia viral Diseases 0.000 claims description 4
- 206010069363 Traumatic lung injury Diseases 0.000 claims description 4
- 108010001801 Tumor Necrosis Factor-alpha Proteins 0.000 claims description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 4
- 208000009421 Viral Pneumonia Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 4
- 231100000515 lung injury Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000026341 positive regulation of angiogenesis Effects 0.000 claims description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 4
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 claims description 3
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 claims description 3
- 210000001218 Blood-Brain Barrier Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004155 Blood-Retinal Barrier Anatomy 0.000 claims description 3
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000010228 Erectile Dysfunction Diseases 0.000 claims description 3
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 claims description 3
- 206010021972 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 3
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims description 3
- 206010023421 Kidney fibrosis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010024324 Leukaemias Diseases 0.000 claims description 3
- 208000001344 Macular Edema Diseases 0.000 claims description 3
- 206010025415 Macular oedema Diseases 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010031264 Osteonecrosis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006551 Parasitic Disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010038436 Renal failure acute Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061481 Renal injury Diseases 0.000 claims description 3
- 208000002847 Surgical Wound Diseases 0.000 claims description 3
- 206010047116 Vascular inflammations Diseases 0.000 claims description 3
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 claims description 3
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 claims description 3
- 230000004378 blood-retinal barrier Effects 0.000 claims description 3
- 201000006474 brain ischemia Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002327 eosinophilic Effects 0.000 claims description 3
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 claims description 3
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 claims description 3
- 201000001881 impotence Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000302 ischemic Effects 0.000 claims description 3
- 200000000010 kidney injury Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010230 macular retinal edema Diseases 0.000 claims description 3
- 238000010606 normalization Methods 0.000 claims description 3
- 230000001172 regenerating Effects 0.000 claims description 3
- 200000000020 tissue injury Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000472 traumatic Effects 0.000 claims description 3
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 201000004810 vascular dementia Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000989 vascularization Effects 0.000 claims description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-M toluene-4-sulfonate Chemical compound CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims 2
- 208000002502 Lymphedema Diseases 0.000 claims 1
- 206010025282 Lymphoedema Diseases 0.000 claims 1
- 210000002826 Placenta Anatomy 0.000 claims 1
- 201000001178 bacterial pneumonia Diseases 0.000 claims 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 claims 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 28
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 27
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 108010092511 vasculotide Proteins 0.000 description 92
- 101710037124 TEK Proteins 0.000 description 85
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 44
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 36
- 230000000865 phosphorylative Effects 0.000 description 36
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 27
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 27
- 206010042566 Superinfection Diseases 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 108091007472 MAP kinase family Proteins 0.000 description 22
- 102000004331 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 22
- 108090000823 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 22
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 22
- 210000003038 Endothelium Anatomy 0.000 description 21
- 230000001965 increased Effects 0.000 description 21
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 21
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 21
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 210000004072 Lung Anatomy 0.000 description 17
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 17
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 17
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Chemical class OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 102100007742 ANGPT1 Human genes 0.000 description 16
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 16
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 15
- 101710040001 ANG Proteins 0.000 description 14
- 210000004924 Lung microvascular endothelial cells Anatomy 0.000 description 14
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 13
- 101710043860 ANGPT1 Proteins 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000001707 glomerular endothelial cell Anatomy 0.000 description 11
- 230000001976 improved Effects 0.000 description 11
- 230000004044 response Effects 0.000 description 11
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 11
- KBNIFDASRCWYGC-GXNXWABVSA-J Evans blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C\1=CC2=C(S([O-])(=O)=O)C=C(S([O-])(=O)=O)C(N)=C2C(=O)C/1=N/NC(C(C)=C1)=CC=C1C1=CC=C(N\N=C/2C(C3=C(N)C(=CC(=C3C=C\2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=O)C(C)=C1 KBNIFDASRCWYGC-GXNXWABVSA-J 0.000 description 10
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 10
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 9
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 9
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 9
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 9
- 230000002685 pulmonary Effects 0.000 description 9
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 description 8
- 101700077933 ARC Proteins 0.000 description 8
- 101700006743 PDE6A Proteins 0.000 description 8
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 8
- 201000005794 allergic hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 8
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 8
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 8
- 125000004191 (C1-C6) alkoxy group Chemical group 0.000 description 7
- 125000000041 C6-C10 aryl group Chemical group 0.000 description 7
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 description 7
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 6
- 229960002433 Cysteine Drugs 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 6
- 125000004450 alkenylene group Chemical group 0.000 description 6
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 6
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 6
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 6
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 6
- 229960000074 biopharmaceuticals Drugs 0.000 description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 6
- 125000004432 carbon atoms Chemical group C* 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 6
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003260 fluorescence intensity Methods 0.000 description 6
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 6
- 230000000275 pharmacokinetic Effects 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 206010059512 Apoptosis Diseases 0.000 description 5
- 206010052737 Atopic disease Diseases 0.000 description 5
- LMFPYMQGMIGMRM-UHFFFAOYSA-N BrN1C(=O)C1=O Chemical compound BrN1C(=O)C1=O LMFPYMQGMIGMRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 5
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 5
- 210000003606 Umbilical Veins Anatomy 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000000840 anti-viral Effects 0.000 description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 5
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 5
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 5
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 5
- 238000011068 load Methods 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 3-mercaptopropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCS DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010048154 Angiopoietin-1 Proteins 0.000 description 4
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 4
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 4
- 101700060512 MMP2 Proteins 0.000 description 4
- 102100014894 MMP2 Human genes 0.000 description 4
- IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N Sodium orthovanadate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[O-][V]([O-])([O-])=O IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 4
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 4
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 4
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 4
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 4
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- 125000003837 (C1-C20) alkyl group Chemical class 0.000 description 3
- JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 3
- IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N Fluorenylmethyloxycarbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003714 Granulocytes Anatomy 0.000 description 3
- KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N His-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 KRBMQYPTDYSENE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- NIKBMHGRNAPJFW-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Arginine Chemical compound NC(=N)NCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 NIKBMHGRNAPJFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003734 Kidney Anatomy 0.000 description 3
- 229940067606 Lecithin Drugs 0.000 description 3
- 238000006957 Michael reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Tris Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 210000003462 Veins Anatomy 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000000172 allergic Effects 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 3
- 230000000111 anti-oxidant Effects 0.000 description 3
- 210000002403 aortic endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000006143 cell culture media Substances 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001808 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 3
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000004528 endothelial cell apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 3
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 3
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 3
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 3
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002609 media Substances 0.000 description 3
- 230000003278 mimic Effects 0.000 description 3
- 230000000051 modifying Effects 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic Effects 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 3
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 3
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 3
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 230000035513 volume of distribution Effects 0.000 description 3
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 3
- 125000006832 (C1-C10) alkylene group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003161 (C1-C6) alkylene group Chemical group 0.000 description 2
- 125000006590 (C2-C6) alkenylene group Chemical group 0.000 description 2
- AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 2H-thiazine Chemical group N1SC=CC=C1 AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010069351 Acute lung injury Diseases 0.000 description 2
- 206010060945 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 2
- 229940095259 Butylated Hydroxytoluene Drugs 0.000 description 2
- 239000004322 Butylated hydroxytoluene Substances 0.000 description 2
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037250 Clearance Effects 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 2
- 210000001126 Granulation Tissue Anatomy 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010048643 Hypereosinophilic syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010022114 Injury Diseases 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 210000000138 Mast Cells Anatomy 0.000 description 2
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 2
- 210000000440 Neutrophils Anatomy 0.000 description 2
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 description 2
- 101710043164 Segment-4 Proteins 0.000 description 2
- 229940076279 Serotonin Drugs 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L Sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N Succinimide Chemical group O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037034 TERMINAL HALF LIFE Effects 0.000 description 2
- 102000004591 Telomerase Human genes 0.000 description 2
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101700038759 VP1 Proteins 0.000 description 2
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M acrylate group Chemical group C(C=C)(=O)[O-] NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001270 agonistic Effects 0.000 description 2
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 2
- 230000035512 clearance Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming Effects 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 230000002951 depilatory Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion media Substances 0.000 description 2
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical group C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 2
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000003511 endothelial Effects 0.000 description 2
- 230000010595 endothelial cell migration Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 101700005460 hemA Proteins 0.000 description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 2
- UFFSXJKVKBQEHC-UHFFFAOYSA-N heptafluorobutyric anhydride Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(=O)OC(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F UFFSXJKVKBQEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulators Drugs 0.000 description 2
- 125000003392 indanyl group Chemical group C1(CCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000116 mitigating Effects 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 2
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 125000004430 oxygen atoms Chemical group O* 0.000 description 2
- 230000036961 partial Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000036231 pharmacokinetics Effects 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 2
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 2
- 201000002793 renal fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising Effects 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- OPINTGHFESTVAX-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Arginine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N OPINTGHFESTVAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N (2S)-2-(9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- NKCXQMYPWXSLIZ-PSRDDEIFSA-N (2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-5-amino-2-[[2-[[(2S)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]propanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-m Chemical compound O=C([C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NKCXQMYPWXSLIZ-PSRDDEIFSA-N 0.000 description 1
- 125000000008 (C1-C10) alkyl group Chemical class 0.000 description 1
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004973 1-butenyl group Chemical group C(=CCC)* 0.000 description 1
- BLMFNYXTSPNJSB-UHFFFAOYSA-N 1-chloro-4-[2-[3-(4-chlorophenyl)prop-1-en-2-ylsulfonyl]prop-2-enyl]benzene Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1CC(=C)S(=O)(=O)C(=C)CC1=CC=C(Cl)C=C1 BLMFNYXTSPNJSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006039 1-hexenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006023 1-pentenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006017 1-propenyl group Chemical group 0.000 description 1
- GWOLZNVIRIHJHB-UHFFFAOYSA-N 11-MERCAPTOUNDECANOIC ACID Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCS GWOLZNVIRIHJHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SDAWVOFJSUUKMR-UHFFFAOYSA-N 12-sulfanyldodecanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCS SDAWVOFJSUUKMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- INOAASCWQMFJQA-UHFFFAOYSA-N 16-sulfanylhexadecanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCS INOAASCWQMFJQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-tribromoethanol Chemical compound OCC(Br)(Br)Br YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004974 2-butenyl group Chemical group C(C=CC)* 0.000 description 1
- 125000006040 2-hexenyl group Chemical group 0.000 description 1
- PMNLUUOXGOOLSP-UHFFFAOYSA-N 2-mercaptopropanoic acid Chemical compound CC(S)C(O)=O PMNLUUOXGOOLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006045 2-methyl-1-pentenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005916 2-methylpentyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005917 3-methylpentyl group Chemical group 0.000 description 1
- DTRIDVOOPAQEEL-UHFFFAOYSA-N 4-sulfanylbutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCS DTRIDVOOPAQEEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMNQZZPAVNBESS-UHFFFAOYSA-N 6-sulfanylhexanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCS CMNQZZPAVNBESS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 7681-57-4 Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FYEMIKRWWMYBFG-UHFFFAOYSA-N 8-sulfanyloctanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCS FYEMIKRWWMYBFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710032514 ACTI Proteins 0.000 description 1
- 102100001249 ALB Human genes 0.000 description 1
- 101710027066 ALB Proteins 0.000 description 1
- 206010000880 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 108010048036 Angiopoietin-2 Proteins 0.000 description 1
- 210000000709 Aorta Anatomy 0.000 description 1
- 210000001367 Arteries Anatomy 0.000 description 1
- YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 206010064097 Avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 B-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 108060001001 BRK1 Proteins 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- JUHORIMYRDESRB-UHFFFAOYSA-N Benzathine Chemical compound C=1C=CC=CC=1CNCCNCC1=CC=CC=C1 JUHORIMYRDESRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007809 Boyden Chamber assay Methods 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N Bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 1
- 125000006374 C2-C10 alkenyl group Chemical class 0.000 description 1
- 125000000882 C2-C6 alkenyl group Chemical class 0.000 description 1
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N Chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004926 Chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- VDANGULDQQJODZ-UHFFFAOYSA-N Chloroprocaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1Cl VDANGULDQQJODZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002023 Chloroprocaine Drugs 0.000 description 1
- 229960001231 Choline Drugs 0.000 description 1
- 206010065854 Chronic eosinophilic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010009137 Chronic sinusitis Diseases 0.000 description 1
- 230000035700 Clearance Rate Effects 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 229940064701 Corticosteroid nasal preparations for topical use Drugs 0.000 description 1
- 229960001334 Corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N Cortisol Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 229960001305 Cysteine Hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- LVNMAAGSAUGNIC-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Histidine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 LVNMAAGSAUGNIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 102100000789 DES Human genes 0.000 description 1
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 1
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N Diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036947 Dissociation constant Effects 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 108010092799 EC 2.7.7.49 Proteins 0.000 description 1
- 102000033147 ERVK-25 Human genes 0.000 description 1
- 210000003989 Endothelium, Vascular Anatomy 0.000 description 1
- 229940088598 Enzyme Drugs 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010014958 Eosinophilic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010064212 Eosinophilic oesophagitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N Ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 229960003699 Evans blue Drugs 0.000 description 1
- 210000001508 Eye Anatomy 0.000 description 1
- 108091006004 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229940093915 Gynecological Organic acids Drugs 0.000 description 1
- 206010018987 Haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 210000002216 Heart Anatomy 0.000 description 1
- 210000002837 Heart Atria Anatomy 0.000 description 1
- 210000001308 Heart Ventricles Anatomy 0.000 description 1
- LNCFUHAPNTYMJB-IUCAKERBSA-N His-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CN=CN1 LNCFUHAPNTYMJB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 208000008454 Hyperhidrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010021113 Hypothermia Diseases 0.000 description 1
- BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N 0.000 description 1
- BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 1
- 102100004459 KLK11 Human genes 0.000 description 1
- 102100011311 KNG1 Human genes 0.000 description 1
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 239000011786 L-ascorbyl-6-palmitate Substances 0.000 description 1
- QAQJMLQRFWZOBN-LAUBAEHRSA-N L-ascorbyl-6-palmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O QAQJMLQRFWZOBN-LAUBAEHRSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 101700072089 LEPR Proteins 0.000 description 1
- 101710002608 LEPROT Proteins 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- 208000009879 Leukemia, Basophilic, Acute Diseases 0.000 description 1
- 208000001513 Leukemia, Eosinophilic, Acute Diseases 0.000 description 1
- 208000008456 Leukemia, Myelogenous, Chronic, BCR-ABL Positive Diseases 0.000 description 1
- 208000007046 Leukemia, Myeloid, Acute Diseases 0.000 description 1
- 208000000214 Leukemia, Myelomonocytic, Chronic Diseases 0.000 description 1
- UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 101700083887 MAPK1 Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N MeOtBu Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N Meglumine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N 0.000 description 1
- 210000004379 Membranes Anatomy 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-XIXRPRMCSA-N Mesotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-XIXRPRMCSA-N 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N Methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001616 Monocytes Anatomy 0.000 description 1
- 210000002464 Muscle, Smooth, Vascular Anatomy 0.000 description 1
- 210000000329 Myocytes, Smooth Muscle Anatomy 0.000 description 1
- 101700070664 NF19 Proteins 0.000 description 1
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000283898 Ovis Species 0.000 description 1
- HVAUUPRFYPCOCA-AREMUKBSSA-O PAF Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOC[C@@H](OC(C)=O)COP(O)(=O)OCC[N+](C)(C)C HVAUUPRFYPCOCA-AREMUKBSSA-O 0.000 description 1
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N PMSF Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005190 Phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N Procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940075579 Propyl Gallate Drugs 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor protein-tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor protein-tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 108010033725 Recombinant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007312 Recombinant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000001533 Respiratory Mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 208000003385 Rhinitis, Allergic, Seasonal Diseases 0.000 description 1
- 229940100996 SODIUM BISULFATE Drugs 0.000 description 1
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 1
- WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfate Chemical compound [Na+].OS([O-])(=O)=O WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940075582 Sorbic Acid Drugs 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229940076185 Staphylococcus aureus Drugs 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 102100016327 TEK Human genes 0.000 description 1
- 101700006198 TERT Proteins 0.000 description 1
- 102100014244 TERT Human genes 0.000 description 1
- 229940061367 Tamiflu Drugs 0.000 description 1
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J Tetrasodium pyrophosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N Thioglycolic acid Chemical class OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N Thr-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- KAFKKRJQHOECGW-JCOFBHIZSA-N Thr-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 KAFKKRJQHOECGW-JCOFBHIZSA-N 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- AOBORMOPSGHCAX-DGHZZKTQSA-N Tocofersolan Chemical compound OCCOC(=O)CCC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C AOBORMOPSGHCAX-DGHZZKTQSA-N 0.000 description 1
- 231100000765 Toxin Toxicity 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)=CNC2=C1 LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- YBRHKUNWEYBZGT-UHFFFAOYSA-N Tryptophyl-Threonine Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C(=O)NC(C(O)C)C(O)=O)=CNC2=C1 YBRHKUNWEYBZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 102000008790 VE-cadherin Human genes 0.000 description 1
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010047461 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Vitamin C Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 description 1
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- QIJRTFXNRTXDIP-JIZZDEOASA-N [(1R)-1-carboxy-2-sulfanylethyl]azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.SC[C@H](N)C(O)=O QIJRTFXNRTXDIP-JIZZDEOASA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- WJGAPUXHSQQWQF-UHFFFAOYSA-L acetate;chloride Chemical compound [Cl-].CC([O-])=O WJGAPUXHSQQWQF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000008043 acidic salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000024126 agglutination involved in conjugation with cellular fusion Effects 0.000 description 1
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002009 allergen Effects 0.000 description 1
- 229940087168 alpha Tocopherol Drugs 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N alpha-Tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 125000002178 anthracenyl group Chemical group C1(=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C12)* 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory Effects 0.000 description 1
- 239000012296 anti-solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant Effects 0.000 description 1
- 229940121357 antivirals Drugs 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 159000000032 aromatic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010385 ascorbyl palmitate Nutrition 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 201000001320 atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atoms Chemical group 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 125000003785 benzimidazolyl group Chemical group N1=C(NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000000499 benzofuranyl group Chemical group O1C(=CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004196 benzothienyl group Chemical group S1C(=CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004541 benzoxazolyl group Chemical group O1C(=NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding Effects 0.000 description 1
- 231100000319 bleeding Toxicity 0.000 description 1
- 230000000903 blocking Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 235000019282 butylated hydroxyanisole Nutrition 0.000 description 1
- 108010018828 cadherin 5 Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000000609 carbazolyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 230000000271 cardiovascular Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CRBHXDCYXIISFC-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CC[O-] CRBHXDCYXIISFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 201000006934 chronic myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 201000010902 chronic myelomonocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed Effects 0.000 description 1
- 230000035618 desquamation Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 150000001991 dicarboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940043237 diethanolamine Drugs 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N dihydrogen sulfide Chemical group S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000000437 effect on angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- 201000000708 eosinophilic esophagitis Diseases 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BLCTWBJQROOONQ-UHFFFAOYSA-N ethenyl prop-2-enoate Chemical compound C=COC(=O)C=C BLCTWBJQROOONQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 125000003983 fluorenyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3CC12)* 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N fluorine atom Chemical compound [F] YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 108010042598 glutamyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic Effects 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatoms Chemical group 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical group 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000002631 hypothermal Effects 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002318 immunoblotting Methods 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired Effects 0.000 description 1
- 125000003454 indenyl group Chemical group C1(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular Effects 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004491 isohexyl group Chemical group C(CCC(C)C)* 0.000 description 1
- 125000000904 isoindolyl group Chemical group C=1(NC=C2C=CC=CC12)* 0.000 description 1
- 125000000555 isopropenyl group Chemical group [H]\C([H])=C(\*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002183 isoquinolinyl group Chemical group C1(=NC=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000001786 isothiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 201000003793 myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 description 1
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004593 naphthyridinyl group Chemical group N1=C(C=CC2=CC=CN=C12)* 0.000 description 1
- WRFPVMFCRNYQNR-UHFFFAOYSA-N o-Tyrosine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1O WRFPVMFCRNYQNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 229940005943 ophthalmologic Antivirals Drugs 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000002971 oxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010149 post-hoc-test Methods 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002335 preservative Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000000770 pro-inflamatory Effects 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated Effects 0.000 description 1
- ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N propyl 3,4,5-trihydroxybenzoate Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000473 propyl gallate Substances 0.000 description 1
- 235000010388 propyl gallate Nutrition 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 1
- 238000001711 protein immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000002106 pulse oximetry Methods 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002294 quinazolinyl group Chemical group N1=C(N=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000002943 quinolinyl group Chemical group N1=C(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 102000027656 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 108091007921 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 230000000268 renotropic Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000979 retarding Effects 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000342 sodium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000013024 sodium fluoride Nutrition 0.000 description 1
- PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M sodium fluoride Inorganic materials [F-].[Na+] PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940001482 sodium sulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- WSWCOQWTEOXDQX-UHFFFAOYSA-N sorbic acid Chemical compound CC=CC=CC(O)=O WSWCOQWTEOXDQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 108060007849 sprT Proteins 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000035900 sweating Effects 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 229960001367 tartaric acid Drugs 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000028016 temperature homeostasis Effects 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000335 thiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 229940026754 topical Antivirals Drugs 0.000 description 1
- 229940083878 topical for treatment of hemorrhoids and anal fissures Corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic Effects 0.000 description 1
- 231100000759 toxicological effect Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 125000001425 triazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229950004616 tribromoethanol Drugs 0.000 description 1
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 1
- 150000003668 tyrosines Chemical class 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 125000004417 unsaturated alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
Images
Abstract
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к новому агенту для стимуляции ангиогенеза у субъекта, и может быть использовано в медицине. Изобретение позволяет получить химическое соединение, представляющее собой тетрамерную форму пептида His-His-His-Arg-His-Ser-Phe, линейно связанного с фрагментами ПЭГ с образованием указанной мультимерной формы. Изобретение может быть использовано в медицинской практике в качестве агента, стимулирующего ангиогенез и способствующего заживлению ран у субъекта. 16 н. и 25 з.п. ф-лы, 8 ил., 20 пр.
Description
Родственные заявки
[0001] В настоящей заявке испрашивается приоритет по заявке США №62/446,030, поданной 13 января 2017 г., полное содержание которой включено в настоящий документ путем ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0002] Изобретение относится к агенту, который обладает улучшенной активностью по сравнению с васкулотидом, и методам использования его. В частности, изобретение относится к способам и применениям стимуляции ангиогенеза для заживления диабетических ран и при других сердечно-сосудистых показаниях к применению, для лечения аллергических заболеваний, астмы и атопического дерматита, а также для лечения гриппа.
Уровень техники
[0003] Было выявлено несколько молекулярных основных факторов для регуляции поддержания сосудистого гомеостаза. Одним из наиболее известных из них является сигнальная ось Tie2/Angiopoietin (Ang). Эта рецепторная система тирозинкиназы (Tie2) и фактора роста белка (Ang) несколько уникальна тем, что два основных фактора роста, Ang1 и Ang2, распространяют анти- или провоспалительные ответы соответственно через один и тот же рецептор, расположенный на эндотелии сосудов. В отличие от большинства рецепторов тирозинкиназ, Tie2 поддерживается в постоянно активном состоянии в нормальных, здоровых эндотелиальных клетках благодаря действиям Ang1. Было обнаружено, что этот рецептор активирует ряд внутриклеточных путей, которые регулируют пролиферацию и выживание эндотелиальных клеток (MAPK и AKT), проницаемость (VE-Cadherin) и межклеточные взаимодействия (ICAM и VCAM), которые во время нормального физиологического состояния слаженно работают для поддержания эндотелиальных клеток в состоянии покоя. Активация этого пути, отмеченная фосфорилированием рецептора Tie2, служит трансдоминантным сигналом; противодействует индуцированию пропотевания жидкости из сосудов вследствие воздействия множества воспалительных факторов, в том числе VEGF, серотонина, брадикинина, гистамина, PAF, тромбина, LPS, септической сыворотки и токсина сибирской язвы (Parikh SM, Virulence 2013). Неоднократно было показано, что быстрое повышение уровня Ang2 приводит к пропотеванию жидкости из сосудов, патологическим проявлениям и смерти после множества различных повреждений. Исследования показали, что именно баланс между уровнями Ang1 и Ang2 циркулирующими в токе крови, определяет основное доминирующее состояние сосудистой активации. Учитывая данный факт, подходы, направленные на модуляцию этого пути, могут иметь терапевтическое применение.
[0004] На сегодняшний день сложная природа Angs мешает их очистке и терапевтическому применению. Таким образом были тщательно изучены альтернативные подходы для модуляции этого пути. К настоящему времени описаны два основных подхода. Первый и гораздо более распространенный подход был сфокусирован на блокировании антагонистического лиганда Ang2. Терапевтические средства в этом классе можно грубо определить как антитела или пептиды, блокирующие Ang2. Второй класс Tie2-направленных модуляторов заимствован из выясненных структурных характеристик Ang1. То есть этот биологически активный Ang1 существует в природе как мультимер, состоящий не менее чем из четырех субъединиц. Предполагается, что субъединицы Ang1 связываются с рецептором Tie2 и при этом образуют кластер смежных рецепторов, эффективное совмещение рецепторов в конфигурацию, которая облегчает трансфосфорилирование. Чтобы имитировать агонистическое действие Ang1 для рецептора Tie2, было разработано несколько больших рекомбинантных белков, которые образуют связь с кластером смежных рецепторов (Zhang et al., 2002; Cho et al., 2004; Han et al., 2016; US Patent No. 8,957,022).
[0005] Васкулотид (также называемый родительским васкулотидом) представляет собой конструктивно разработанное полностью синтетическое соединение, имитирующее действие Ang1. Центральное ядро Vasculotide состоит из низкодисперсного четырехцепочечного полиэтиленгликоля массой 10 кДа. Ковалентное присоединение имеющих высокое сродство Tie2-связывающих пептидов, в частности (-CHHHRHSF-, SEQ ID NO: 6), облегчается посредством реакции активированных малеимидных групп и аминоконцевого цистеина. Эта структура была определена как оптимальная конфигурация для связывания и активации рецептора Tie2. Было показано, что прямая активация Tie2 родительским васкулотидом обеспечивает доминантный сигнал препятствующий пропотеванию жидкости из сосудов в нескольких различных исследованиях in vitro и in vivo, включая доклинические модели аллергии и гриппа (Bourdeau A, et al., BMC Res Notes 2016 and Sugiyama MG, et al., Sci Rep 2015).
[0006] Острое повреждение легких, вызванное гриппом или более тяжелый и связанный с этим диагноз, острый респираторный дистресс-синдром (ALI/ARDS) каждый год приводит к значительным потерям среди населения, непропорционально влияя на молодых и пожилых людей. Частой консервативной особенностью патоген-опосредованного острого респираторного дистресс-синдрома ALI/ARDS является возникновение пропотевания жидкости через сосуды. Терапевтические подходы при лечении ответа на инфекцию инфицированного организма, особенно пропотевания жидкости через сосуды, не должны сопровождаться быстрым развитием резистентности, наблюдаемой у терапевтических средств, специально направленных на постоянно мутирующие патогены. В настоящее время нет терапевтических подходов, одобренных для лечения повреждения легких. Использование агонистов Tie-2, таких как васкулотид, для лечения острого респираторного дистресс-синдрома ALI/ARDS, вызванного гриппом, может обеспечить определенные концептуальные отличия по сравнению с использованием вакцин и/или противовирусных препаратов. Например, современные программы вакцинации против гриппа требуют предварительных знаний о типе штамма, в то время как устойчивость к противовирусным препаратам была хорошо документирована в недавней истории. Кроме того, угроза, исходящая от появляющихся патогенных штаммов или оружия на их основе, потенциально может сделать доступные терапевтические средства совершенно неэффективными. Таким образом, срочно необходимы новые подходы к лечению от патогенов.
Сущность изобретения
[0007] Химический анализ родительского васкулотида показал, что полученный пептидный ПЭГ-конъюгат содержит смесь 5- и 6-членных кольцевых продуктов (Фиг. 1А). Показано, что 5-членное сукцинимидное кольцо является результатом прямого алкилирования малеимида тиольной группой на цистеине, а 6-членное тиазиновое кольцо результатом перегруппировки исходного продукта через свободную аминогруппу на цистеиновом линкере. Эти результаты привели к разработке более простого аналога васкулотида (Mpa-Br), в котором пептид связан с ПЭГ посредством линейного сульфанового фрагмента с образованием активированного тетрамера ПЭГ. В одном случае Mpa-Br получают связыванием пептида T7 с 3-меркаптопропионовой кислотой, ахиральным аналогом цистеина без боковой цепи амина на N-конце, с активированным тетрамером PEG, содержащим бромацетимид (Фиг. 1B). Полученный пептидный ПЭГ-конъюгат дает один продукт, свободный от лабильных кольцевых структур, чувствительных к перегруппировке.
Соответственно, настоящее изобретение относится к соединению формулы (I)
где
n представляет собой целое число в диапазоне от примерно 25 до примерно 100,
каждый X независимо или одновременно представляет собой (C1-C20)алкилен или (C2-C20)алкенилен, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими из следующих соединений: галоген, амино, гидрокси, (C1-C6)алкил, (C1-С6)алкокси, (С6-С10)арил или (С5-С10)гетероарил;
каждый Y независимо или одновременно представляет собой (C1-C20) алкилен или (C2-C20) алкенилен, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими из следующих соединений: галоген, амино, гидрокси, (C1-C6)алкил, (C1-С6)алкокси, (С6-С10)арил или (С5-С10) гетероарил; и
R представляет собой пептид T7 (SEQ ID NO: 1), пептид GA3 (SEQ ID NO: 2), пептид T4 (SEQ ID NO: 3), пептид T6 (SEQ ID NO: 4) и/или пептид T8 (SEQ ID NO: 5) или их ретро-инверсо пептид;
или его фармацевтически приемлемую соль.
[0009] В одном варианте осуществления соединение стимулирует фосфорилирование Tie2; фосфорилирование MAPK, AKT и/или eNOS; стимулирует миграцию эндотелиальных клеток; стимулирует высвобождение MMP2 из эндотелиальных клеток и защиту их от апоптоза, вызванного отменой сыворотки; стимулирует ангиогенный ответ in vivo в анализе Matrigel; стимулирует заживление ран у субъекта при местном применении к ране субъекта; снижает пропотевание жидкости из сосудов; лечит аллергические заболевания и/или лечит грипп.
[0010] В одном варианте осуществления R представляет собой пептид T7, как показано в SEQ ID NO: 1.
[0011] В одном варианте осуществления в настоящем документе предоставлена фармацевтическая композиция, содержащая соединение, раскрытое в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель. В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель подходит для местного введения. В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель подходит для системного введения. В еще одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель подходит для интраназального введения, ингаляции или в качестве компонента перфузата.
[0012] Также здесь предоставлен способ получения соединения формулы (I), раскрытого здесь, включающий
(i) реакцию пептида, который представляет собой пептид T7 (SEQ ID NO: 1), пептид GA3 (SEQ ID NO: 2), пептид T4 (SEQ ID NO: 3), пептид T6 (SEQ ID NO: 4) и/или пептид T8 (SEQ ID NO: 5) или его ретро-инверсо пептид с тиоловым соединением формулы (II)
для получения соединения формулы (III)
(ii) взаимодействие соединения формулы (III) с ПЭГ-тетрамером формулы (IV)
для получения соединения формулы (I),
отличающегося тем, что переменные n, X и Y имеют значения, определенные выше, LG представляет собой подходящую замещаемую группу, а PG представляет собой H или подходящую защитную группу.
[0013] В настоящем документе также предложен способ активации рецептора Tie 2, включающий контактирование рецептора Tie 2 с раскрытым в данном документе соединением так, что рецептор Tie 2 активируется. В одном из вариантов осуществления активация рецептора Tie 2 свидетельствует о фосфорилировании остатков тирозина, таких как тирозин 992 (Y992) у человека и Y990 у мышей, рецептора Tie 2 или фосфорилировании MAPK, AKT или eNOS.
[0014] Еще более важным является способ стимулирования ангиогенеза у субъекта, включающий введение соединения, раскрытого в настоящем документе, субъекту, нуждающемуся в этом.
[0015] В другом варианте осуществления ангиогенез, стимулируемый соединением, характеризуется по меньшей мере одним из следующих свойств:
a) привлечение периваскулярных поддерживающих клеток;
b) непроницаемость сосудов, которые в противном случае были бы проницаемы;
c) четко определенная древовидность; а также
d) ингибирование апоптоза эндотелиальных клеток.
[0016] В другом варианте осуществления способ дополнительно включает в себя введение второго ангиогенного агента одновременно или последовательно. В одном варианте осуществления второй ангиогенный агент представляет собой VEGF. В другом варианте осуществления второй ангиогенный агент выбирают из группы, состоящей из PDGF, G-CSF, рекомбинантного человеческого эритропоэтина, bFGF, ингибитора Ang2 и фактора роста плаценты (PLGF).
[0017] В еще одном дополнительном варианте осуществления изобретения субъект, нуждающийся в лечении, имеет одно из следующих клинических состояний: васкуляризация регенеративных тканей, ишемическая болезнь конечностей, церебральная ишемия, васкулярное воспаление, артериосклероз, аваскулярный некроз, стимуляция роста волос и эректильная дисфункция.
[0018] В настоящем документе также предложен способ снижения проницаемости сосудов в месте пропотевания жидкости, включающий введение соединения, раскрытого в данном документе, в необходимое место субъекту, нуждающемуся в этом. В одном варианте осуществления субъект имеет или имел инсульт, дегенерация желтого пятна, отек желтого пятна, нарушение гематоретинального барьера, нарушение гематоэнцефалического барьера, пропотевание жидкости из сосудов вызванное бактериями или нормализация сосудистой сети опухоли.
[0019] В настоящем документе также представлен способ защиты эндотелиальных клеток, включающий введение соединения, раскрытого в настоящем документе, субъекту, нуждающемуся в этом. В одном варианте осуществления субъект имеет или имел травму почки или фиброз почки, инсульт, сосудистую деменцию, дегенерацию желтого пятна или осложнения диабета. В другом варианте осуществления субъект имеет или имел повреждение легкого.
[0020] Еще более важным является способ стимулирования заживления раны, включающий введение соединения, раскрытого в настоящем документе, в рану субъекта, нуждающемуся в этом. В одном варианте осуществления соединение вводят местно или системно. В одном варианте осуществления рана представляет собой диабетическую язву. В другом варианте осуществления рана представляет собой пролежень, пролежневую язву, хирургический разрез, травматическое повреждение ткани, ожог или кожный трансплантат.
[0021] Кроме того, в настоящем документе представлен способ ингибирования роста клеток CFU-G, включающий введение соединения, раскрытого в данном документе, субъекту, нуждающемуся в этом. В одном варианте осуществления способ предназначен для снижения количества эозинофилов и/или базофилов у субъекта, нуждающегося в этом, для лечения атопического дерматита, астмы или аллергического ринита или для лечения состояния, связанного с эозинофилами и/или базофилами, у субъекта, нуждающегося в этом.
[0022] В одном варианте осуществления состояние, связанное с эозинофилами и/или базофилами, представляет собой лейкоз эозинофильного и/или базофильного происхождения. В другом варианте состояние, связанное с эозинофилами и/или базофилами, представляет собой воспалительное заболевание кишечника. В еще одном варианте состояние, связанное с эозинофилами и/или базофилами, представляет собой паразитарную инфекцию.
[0023] В другом варианте осуществления способ ингибирования размножения клеток CFU-G предназначен для снижения уровней воспалительных цитокинов и/или хемокинов, включающих по меньшей мере один из эотаксинов, IL-17, MIG, IL12/IL23 (p40), IL-9, MIP-1a, MIP-1b, RANTES, TNF-α, IL-1β, IL-5, IL-13 и MCP-1. В одном варианте осуществления воспалительный цитокин и / или хемокин включает эотаксин.
[0024] В другом варианте осуществления способ ингибирует индуцированное гистамином пропотевание жидкости из сосудов.
[0025] Кроме того, в настоящем документе представлен способ лечения субъекта, инфицированного гриппом или бактериальной суперинфекцией, ассоциированной с гриппом, включающий введение соединения, раскрытого в настоящем документе, субъекту, нуждающемуся в этом.
[0026] В одном варианте осуществления способ дополнительно включает введение противовирусного агента одновременно или последовательно. В одном варианте осуществления противовирусный агент представляет собой амантадин, римантадин, занамивир, перамивир, вирамидин, рибавирин или осельтамивир. В другом варианте осуществления субъект является человеком, а грипп является человеческим гриппом.
[0027] В одном варианте осуществления соединение вводят местно, системно, интраназально, путем ингаляции или в виде перфузата.
[0028] Также предоставлена композиция, содержащая (a) соединение, раскрытое в данном документе, и (b) противовирусный агент. Кроме того, в настоящем документе представлена композиция, содержащая (a) соединение, раскрытое в данном описании, и (b) ангиогенный агент.
[0029] Далее предоставлен набор, содержащий (a) соединение, раскрытое в данном документе, (b) второй ангиогенный агент и (c) инструкции по применению набора для активации Tie2 и/или для стимуляции ангиогенеза, как описано в настоящем документе.
[0030] Далее предоставлен набор, содержащий (a) соединение, раскрытое в данном документе, (b) противовирусное средство и (c) инструкции по применению набора для лечения субъекта, инфицированного гриппом, и/или для лечения бактериальной суперинфекции у субъекта, инфицированного гриппом.
[0031] Еще более важным является биоматериал, в который включено раскрытое здесь соединение. В одном варианте осуществления биоматериал представляет собой Matrigel, заменитель кожи или сшитый гидрогель гликозаминогликана. В другом варианте осуществления второй агент включен в биоматериал, такой как VEGF, PDGF, G-CSF, рекомбинантный человеческий эритропоэтин, bFGF и фактор роста плаценты (PLGF).
[0032] Другие особенности и преимущества настоящего раскрытия станут очевидными из следующего подробного описания. Следует понимать, однако, что подробное описание и конкретные примеры, хотя и указывают варианты осуществления заявки, даны только в качестве иллюстрации и объем формулы изобретения не должен быть ограничен этими вариантами осуществления, а должен быть представлен в наиболее широкой интерпретация соответствующей описанию в целом.
Краткое описание графических материалов
[0033] Варианты осуществления описаны ниже со ссылкой на графические материалы, на которых:
[0034] На фигуре 1А показана принципиальная схема родительского Васкулотида, полученного путем связывания пептида Т7 с цистеином на N-конце с активированным тетрамером ПЭГ, содержащим Maleimide. Полученный пептидный ПЭГ-конъюгат содержит смесь 5 и 6-членных кольцевых продуктов. Показано, что 5-членное сукцинимидное кольцо является результатом прямого алкилирования малеимида тиольной группой на цистеине, а 6-членное тиазиновое кольцо результатом перегруппировки исходного продукта через свободную аминогруппу на цистеиновом линкере. На фигуре 1В показана принципиальная схема Mpa-Br, полученного в одном варианте путем связывания пептида Т7 с 3-меркаптопропионовой кислотой, ахиральным аналогом цистеина без боковой цепи амина на N-конце, с активированным тетрамером ПЭГ, содержащим бромацетимид.
[0035] На фигуре 2А показано обнаружение связывания родительского васкулотида с гомогенной популяцией рекомбинантных рецепторов Tie2Fc человека в растворе с использованием флуоресцентной спектроскопии триптофана. На фигуре 2C показано обнаружение связывания MPA-Br с популяцией гомогенного рекомбинантного рецептора Tie2Fc человека в растворе с использованием флуоресцентной спектроскопии триптофана. Увеличение интенсивности собственной флуоресценции и результирующие кривые связывания при инкубации человеческого рецептора Tie2Fc с увеличением концентрации лиганда (A, C) (ο) или одного лиганда (□). Образцы возбуждались на длине волны 295 нм. На фигуре 2В показаны кривые насыщения специфически связанного родительского васкулотида с Tie2Fc человека. На фигуре 2D показаны кривые насыщения специфически связанного Mpa-Br с Tie2Fc человека. Для нелинейной регрессии одного сайт-специфического связывания, интенсивность внутренней флуоресценции только родительского васкулотида или только MPABr вычитали из общего связывания. Полученные значения Kd для нормализованного специфического связывания родительского васкулотида и MPA-Br с Tie2Fc человека составляют 102,9 нМ и 2,623 нМ соответственно. На фигуре 2Е показаны кривые связывания родительского васкулотида с человеческим IgGFc. На фигуре 2F показаны кривые связывания MPA-Br с человеческим IgGFc. Не наблюдается насыщения связывания с человеческим IgGFc и родительским васкулотидом или человеческим IgGFc и MPA-Br. На фигуре 2G показана таблица, изображающая константы связывания родительского васкулотида и MPA-Br для различных видов рекомбинантного Tie2FC. Была использована сканирующая флуоресцентная спектроскопия с триптофаном для определения констант связывания родительского васкулотида и MPA-Br для указанных видов рекомбинантного рецептора Tie2Fc.
[0036] На фигуре 3А показан родительский васкулотид и MPA-Br, активирующие рецептор Tie2. Фосфорилированный Tie-2 в клетках HUVEC, обработанных возрастающими дозами родительского васкулотида и MPA-Br. Данные выражены в виде нормализованного среднего ± стандартная ошибка среднего (SEM), однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA), апостериорных множественных сравнений по методу Holm-Sidak по отношению к лечению (NT), *р меньше 0,05, **р меньше 0,01. Для наглядности заштрихованная линия отделяет родительское лечение васкулотидом от лечения MPA-Br. На фигуре 3В показаны родительский васкулотид и MPA-Br, активирующие митоген-активируемую протеинкиназу (MAPK). Фосфорилирование MAPK (Erk2) в клетках HUVEC, обработанных родительским васкулотидом и MPA-Br. Данные выражены в виде нормализованного среднего ± стандартная ошибка среднего (SEM), однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) апостериорных множественных сравнений по методу Holm-Sidak по отношению к отсутствующему лечению (NT), *р меньше 0,05, **р меньше 0,0001.
[0037] На фигуре 4А показан фосфорилированный Tie-2 в клетках HMVECtert (иммортализованных теломеразой), обработанных родительским васкулотидом и MPA-Br в указанных концентрациях (данные выражены как среднее ± SEM, t-критерий Стьюдента, *p меньше 0,05, **p меньше 0,01, лечебная группа в сравнении с группой обработанной эндотелиальной базальной средой (EBM). На фигуре 4В показан фосфорилированный Tie-2 в первичных микрососудистых эндотелиальных клетках легких мыши, обработанных родительским васкулотидом и MPA-Br в указанных концентрациях (данные выражены как среднее ± SEM, однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) апостериорных множественных сравнений по методу Holm-Sidak, *p меньше 0,05, **p меньше 0,01, ***р меньше 0,001, #р равно 0,06 в лечебной группе по сравнению с группой без лечения (NT).
[0038] На фигуре 5А показаны первичные культивируемые эндотелиальные клетки, полученные из гломерул крысы, на фигуре 5В показаны первичные культивируемые эндотелиальные клетки, полученные из аорты собаки, а на фигуре 5С показаны первичные культивируемые эндотелиальные клетки, полученные из гломерул яванского макака. Клетки стимулировали указанными концентрациями MPA-Br (mBr) в течение 15 минут. Фосфорилированный Tie2 количественно определяли с помощью ИФА, и показанные данные представляют относительную активацию Tie2 (pTie2) при нормализации до общих уровней белка Tie2. Человеческий рекомбинантный ангиопоэтин 1 (Ang1) был включен в качестве положительного контроля. Данные выражены в виде среднего значения ± SEM, t-критерий Стьюдента, *р меньше 0,05, **р меньше 0,01, ***р меньше 0,001 в группе лечения по сравнению с группой без лечения (NT). n равно 3 для крысы, n равно 4 для собаки и n равно 3 для яванского макака.
[0039] На фигурах 6A-6I показаны родительские VT и MPA-Br защищающие мышей после заражения гриппом X31 (H3N2). Мыши были интраназально инфицированы 64HAU X31 в день 0. Указанные дозы родительского VT или MPA-Br вводили внутрибрюшинно каждые 24 часа, начиная с 48 часов после заражения, на протяжении всего исследования. Фракцию выживания контролировали ежедневно (Фигура 6А) до 12 дня. Доля начальной массы тела, измеренная через 5 дней (Фигура 6В) и через 6 дней (Фигура 6C) после заражения. Артериальное насыщение кислородом на 5-й день (Фигура 6D) и на 6-й день (Фигура 6E) после заражения. Температура тела измерялась через 5 дней (Фигура 6F) или через шесть дней (Фигура 6G) после заражения. Оценка активности измеряется на 5-й день (Фигура 6H) и на 6-й день (Фигура 6I) после заражения. Статистика выживания была выполнена с помощью анализа Mantel Cox Log Rank, где ***p меньше 0,001. Все остальные статистические показатели были следующими: #p меньше 0,05 в зависимости от PBS гриппа через однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) с последующим ретроспективным анализом Фишера, *p меньше 0,05, **p меньше 0,01, ***p меньше 0,001 и ****p, 0,0001 в зависимости от PBS гриппа через однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) с апостериорным критерием Даннета.
[0040] На фигурах 7 A и B показаны крысы Спрэг-Доули, которым вводили указанные дозы родительского VT или MPA-Br посредством инъекции в хвостовую вену в нулевое время. Плазму собирали в указанные моменты времени для облегчения количественной оценки уровней циркулирующего тестируемого агента с помощью ИФА. Графики изображают потерю циркулирующего MPA-Br (Фигура 7А) и родительского VT (Фигура 7В) от системной циркуляции во времени. В таблицах приведены расчетные значения клиренса, объема распределения и конечного периода полураспада для дозы 120 мкг/кг. Одна часть исследования предусматривала доставку MPA-Br в виде одной дозы каждые 24 часа в течение трех последовательных дней (многодозовая MD 120 мкг/кг).
[0041] На фигуре 8 показано, что самцам мышей FVB с выбритой спиной давали указанные количества родительского васкулотида или MPA-Br (через IP) за один час до введения гистамина подкожно. Голубой краситель Эванса (EB), доставляемый через хвостовую вену, вводили сразу же после воздействия гистамина. Стандартизированные кожные биопсии были взяты у мышей с перфузией сердца через тридцать минут после введения гистамина. Поглощение при 620 нм использовали для расчета количества экстравазации красителя EB для всех групп лечения. Данные выражены в виде среднего количества EB ± SEM, однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) с апостериорным критерием Даннета относительно контроля с носителем PBS, *p меньше 0,05, **p меньше 0,01, ***p меньше 0,001.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[0042] Термин «(C1-Cp)алкил», используемый в данном документе, означает насыщенные алкильные радикалы с прямой и/или разветвленной цепью, содержащие от одного до «р» атомов углерода, и включает (в зависимости от типа р) метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, s-бутил, изобутил, трет-бутил, 2,2-диметилбутил, н-пентил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 4-метилпентил, н-гексил и тому подобное, где переменная p представляет собой целое число, представляющее наибольшее число атомов углерода в алкильном радикале.
[0043] Используемый в данном документе термин «(C2-Cp)алкенил» означает ненасыщенные алкильные фрагменты с прямой и/или разветвленной цепью, содержащие от двух до «p» атомов углерода, и включает в себя, по меньшей мере, одну углерод-углеродную двойную связь и (в зависимости от типа р) этенил, 1-пропенил, изопропенил, 1-бутенил, 2-бутенил, трет-бутенил, 1-пентенил, 2-метил-1-пентенил, 3-метил-1-пентил, 4-метил-1-пентил, 1-гексенил, 2-гексенил и тому подобное, где переменная p представляет собой целое число, представляющее наибольшее число атомов углерода в алкенильном радикале.
[0044] Термин «(C1-Cp)алкокси» означает алкильную группу, как определено выше, с присоединенным к ней атомом кислорода. В контексте данного документа, термин означает насыщенные алкильные радикалы с прямой и/или разветвленной цепью, имеющие присоединенный к ним атом кислорода и содержащие от одного до «р» атомов углерода, и включающие (в зависимости от типа р) метокси, этокси, пропокси, изопропокси , н-бутокси, с-бутокси, изобутокси, т-бутокси, 2,2-диметилбутокси, н-пентокси, 2-метилпентокси, 3-метилпентокси, 4-метилпентокси, н-гексокси и тому подобное, где переменная р представляет собой целое число, представляющее наибольшее число атомов углерода в алкоксирадикале.
[004] Используемый в данном документе термин «арил» относится к циклическим группам, которые содержат, по меньшей мере, одно ароматическое кольцо, например, фенил или несколько конденсированных колец, например, нафтил. В варианте осуществления настоящего раскрытия арильная группа содержит 6, 9 или 10 атомов, в составе таких радикалов как фенил, нафтил, инданил, антраценил, 1,2-дигидронафтил, 1,2,3,4-тетрагидронафтил, флуоренил, инданил, инденил и т.п.
[0046] Используемый в данном документе термин «гетероарил» относится к ароматическим циклическим или полициклическим кольцевым системам, имеющим по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, O и S, и по меньшей мере одно ароматическое кольцо. Примеры гетероарильных групп включают, без ограничения, фурил, тиенил, пиридил, хинолинил, изохинолинил, индолил, изоиндолил, триазолил, пирролил, тетразолил, имидазолил, пиразолил, оксазолил, тиазолил, бензофуранил, бензотиофенил, карбазолил, бензоксазолил, пиримидинил, бензимидазолил, хиноксалинил бензотиазолил, нафтиридинил, изоксазолил, изотиазолил, пуринил и хиназолинил, среди прочих
[0047] Используемый в данном документе термин «галоген» относится к атому галогена и включает фтор (F), хлор (Cl), бром (Br) и йод (I).
[0048] Суффикс «ен», добавленный к любой из вышеуказанных групп, означает, что эта группа двухвалентна, то есть вставлена между двумя другими группами.
[0049] Используемый в данном документе ретро-инверсо пептид относится к пептиду, где d-аминокислоты замещены в обратной последовательности. Топология боковой цепи имитирует исходную молекулу (первичную структуру) и, таким образом, обеспечивает связывание.
Соединения изобретения
[0050] В одном варианте осуществления авторы настоящего изобретения предоставляют класс новых агентов, которые обладают улучшенной активностью по сравнению с васкулотидом (VT), и называют один из новых агентов в примерах как «Mpa-Br».
[0051] Соответственно, настоящее изобретение относится к соединению формулы (I)
где
n представляет собой целое число в диапазоне от примерно 25 до примерно 100,
каждый X независимо или одновременно представляет собой (C1-C20)алкилен или (C2-C20)алкенилен, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими из следующих соединений: галоген, амино, гидрокси, (C1-C6)алкил, (C1-С6)алкокси, (С6-С10)арил или (С5-С10)гетероарил;
каждый Y независимо или одновременно представляет собой (C1-C20) алкилен или (C2-C20) алкенилен, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими из следующих соединений: галоген, амино, гидрокси, (C1-C6)алкил, (C1-С6)алкокси, (С6-С10)арил или (С5-С10) гетероарил; и
R представляет собой пептид T7 (SEQ ID NO: 1), пептид GA3 (SEQ ID NO: 2), пептид T4 (SEQ ID NO: 3), пептид T6 (SEQ ID NO: 4) или пептид T8 ( SEQ ID NO: 5) или его ретро-инверсо пептид;
и/или его фармацевтически приемлемая соль.
[0052] В одном варианте осуществления R представляет собой пептид Т7, причем этот пептид Т7 содержит аминокислотную последовательность: His-His-His-Arg-His-Ser-Phe (SEQ ID NO: 1). В другом варианте осуществления R представляет собой пептид GA3, причем этот пептид GA3 содержит аминокислотную последовательность: Trp-Thr-Ile-Ile-Gln-Arg-Arg-Glu-Asp-Gly-Ser-Val-Asp-Phe-Gln-Arg-Thr-Trp-Lys-Glu-Tyr-Lys (SEQ ID NO: 2). В другом варианте осуществления R представляет собой пептид T4, причем этот пептид T4 содержит аминокислотную последовательность: Asn-Leu-Leu-Met-Ala-Ala-Ser (SEQ ID NO: 3). В еще одном варианте осуществления R представляет собой пептид Т6, причем этот пептид Т6 содержит аминокислотную последовательность: Lys-Leu-Trp-Val-Ile-Pro-Lys (SEQ ID NO: 4). В еще одном варианте осуществления R представляет собой пептид Т8, причем этот пептид Т8 содержит аминокислотную последовательность: His-Pro-Trp-Leu-Thr-Arg-His (SEQ ID NO: 5).
[0053] T4, T6, T7 и T8 представляют собой связывающие Tie 2 пептиды T4, T6, T7 и T8, описанные в Tournaire, R. et al. (2004) EMBO Reports 5:262-267. GA3 также является Tie 2 связывающим пептидом, описанным в Wu, X. et al. (2004) Biochem. Biophys. Res. Commun. 315:1004-1010.
[0054] В одном варианте осуществления n представляет собой целое число от примерно 40 до примерно 70, или от примерно 48 до примерно 65, или примерно 55.
[0055] В другом варианте осуществления X представляет собой независимо или одновременно (C1-C10)алкилен или (C2-C10)алкенилен. В другом варианте осуществления X представляет собой независимо или одновременно (C1-C6)алкилен или (C2-C6)алкенилен. В другом варианте осуществления X представляет собой независимо или одновременно (C1-C3)алкилен. В другом варианте осуществления X представляет собой метилен (-CH2-). В другом варианте осуществления необязательные заместители представляют собой один или несколько галогенов или (С1-С3)алкила или СН3.
[0056] В другом варианте Y независимо или одновременно представляет собой (С1-С10)алкилен или (С2-С10)алкенилен. В другом варианте Y независимо или одновременно представляет собой (С1-С6)алкилен или (С2-С6)алкенилен. В другом варианте осуществления Y представляет собой независимо или одновременно (C1-C3)алкилен. В другом варианте Y является этиленом (-CH2CH2-). В другом варианте Y является производным тиогликолевой кислоты, 2-меркаптопропионовой кислоты, 4-меркаптомасляной кислоты, 6-меркаптогексановой кислоты, 8-меркаптооктановой кислоты, 11-меркаптоундекановой кислоты, 12-меркаптододекановой кислоты или 16-меркаптогексадекановой кислоты.
[0057] В одном варианте осуществления соединение формулы (I) представляет собой соединение,
где
n представляет собой целое число от 50 до 60 или около 55; а также
R представляет собой His-His-His-Arg-His-Ser-Phe (SEQ ID NO: 1);
или его фармацевтически приемлемую соль.
[0058] В другом варианте осуществления фармацевтически приемлемая соль представляет собой кислотно-аддитивную соль, такую как ацетат, трифторацетат или форму соли HCl. В другом варианте осуществления соединение формулы (I) представляет собой соль, которая является ацетатом или гидрохлоридом.
[0059] В других вариантах осуществления настоящее изобретение также включает димеры и тримеры, в дополнение к тетрамерам соединений формулы (I). В одном варианте осуществления изобретение включает димерные, тримерные и тетрамерные соединения, имеющие формулу
где
W представляет собой независимо или одновременно гидроксизамещенный (C1-C20)алкил или гидроксизамещенный (C2-C20)алкенил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими из следующих соединений: галоген, амин, гидрокси, (C1-C6)алкила, (С1-С6)алкокси, (С6-С10)арил или (С5-С10)гетероарил; или же
W является X-S-Y-C(O)-R,
где n, X, Y и R имеют значения, определенные выше.
[0060] В одном варианте осуществления W представляет собой гидроксизамещенный (С1-С10)алкил или гидроксизамещенный (С2-С10)алкенил. В другом варианте осуществления W представляет собой гидроксизамещенный (С1-С6)алкил или гидроксизамещенный (С2-С6)алкенил. В другом варианте осуществления W представляет собой -CH2-OH.
[0061] В одном варианте димер имеет следующую структуру
где W представляет собой независимо или одновременно гидроксизамещенный (C1-C20)алкил или гидроксизамещенный (C2-C20)алкенил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими из следующих соединений: галоген, амино, гидрокси, (C1-C6)алкил, (С1-С6)алкокси, (С6-С10)арил или (С5-С10)гетероарил и
n, X, Y и R соответствуют определению выше.
[0062] В другом варианте тример имеет следующую структуру
где W представляет собой независимо или одновременно гидроксизамещенный (C1-C20)алкил или гидроксизамещенный (C2-C20)алкенил, каждый из которых необязательно замещен одним или несколькими из следующих соединений: галоген, амино, гидрокси, (C1-C6)алкил, (С1-С6)алкокси, (С6-С10)арил или (С5-С10)гетероарил и
n, X, Y и R соответствуют определению выше.
[0063] В другом варианте осуществления тетрамеры представляют собой соединения формулы (I).
[0064] В одном варианте осуществления соединения, раскрытые в данном документе, проявляют активность агониста Tie 2. Эта активность агониста Tie 2 может быть обнаружена с использованием индикаторов активации Tie 2, которые хорошо известны в данной области. Например, раскрытое здесь соединение может стимулировать фосфорилирование Tie 2 (например, фосфорилирование по тирозиновым остаткам, таким как аминокислотный остаток Y992 человеческого Tie 2).
[0065] Соответственно, в варианте осуществления соединение стимулирует фосфорилирование Tie 2.
[0066] Кроме того, раскрытое здесь соединение может стимулировать фосфорилирование молекулы в нисходящем сигнальном пути Tie 2, такое как фосфорилирование MAPK, AKT (например, фосфорилирование по аминокислотному остатку S473 человеческого AKT) и/или eNOS (например, фосфорилирование по аминокислотному остатку S1177 eNOS). Способность соединения стимулировать фосфорилирование определенных белков может быть выявлена с использованием стандартных методик, хорошо известных в данной области, таких как иммуноблотирование клеточных лизатов, обработанных этим соединением.
[0067] Соответственно, в одном варианте осуществления соединение стимулирует фосфорилирование MAPK, AKT и eNOS.
[0068] В другом варианте осуществления соединение, раскрытое в данном документе, оказывает очевидное воздействие на эндотелиальные клетки. Например, раскрытое здесь соединение может оказывать по меньшей мере один эффект из следующих эффектов на эндотелиальные клетки, выбранные из группы: стимуляция миграции эндотелиальных клеток, стимуляция высвобождения MMP2 из эндотелиальных клеток и защита эндотелиальных клеток от апоптоза, вызванного отменой сыворотки. Необязательно, соединение, раскрытое в настоящем документе, оказывает по меньшей мере два из этих эффектов на эндотелиальные клетки или оказывает все три из этих эффектов на эндотелиальные клетки. Способность соединения оказывать любое из этих эффектов на эндотелиальные клетки может быть определена с использованием анализов, известных в данной области, таких как анализ в камере Бойдена для оценки миграции клеток, зимографический анализ для оценки высвобождения MMP2 или гибели клеток, ИФА для оценки апоптоза, вызванного отменой сыворотки.
[0069] Соответственно, в одном варианте осуществления соединение стимулирует миграцию эндотелиальных клеток; стимулирует высвобождение MMP2 из эндотелиальных клеток и/или защиту эндотелиальных клеток от апоптоза, вызванного отменой сыворотки.
[0070] В одном варианте осуществления соединение, раскрытое в данном документе, оказывает очевидное влияние на ангиогенез, что измерено в анализе ангиогенеза in vitro или in vivo. Один такой анализ представляет собой анализ Matrigel in vivo, в котором Matrigel импрегнируют низкой концентрацией фактора роста и вводят подкожно подопытному животному. Через некоторое время (например, 14 дней) тестируемое животное может быть обработано средством, которое облегчает идентификацию и количественную оценку сосудов (например, FITC-лектин), и пробка Matrigel может быть удалена и исследована на ангиогенный ответ.
[0071] Соответственно, в варианте осуществления соединение, раскрытое в данном документе, стимулирует ангиогенный ответ in vivo в анализе с Matrigel.
[0072] В другом варианте осуществления раскрытое здесь соединение может стимулировать заживление раны у субъекта при местном нанесении на рану субъекта. Способность соединения стимулировать заживление ран можно оценить на животной модели, такой как штамм мыши B6.Cg-m (+/+)Lepr(db)/J(db/db), у диабетического штамма мыши нарушено заживление ран. Мыши может быть нанесена рассеченная рана, соединение, включенное в состав для местного применения, можно наносить на рану, и можно оценить заживление раны. В одном варианте осуществления соединения, раскрытые в данном документе, могут ускорять время закрытия раны и/или могут способствовать увеличению отложения коллагена и неоваскуляризации.
[0073] Соответственно, в варианте осуществления соединение стимулирует заживление раны у субъекта при местном нанесении на рану субъекта.
[0074] В одном варианте осуществления количество молекул ПЭГ в соединении, раскрытом в данном документе, необязательно является числом, которое соответствует молекулярной массе менее чем примерно 21500 дальтон в диапазоне молекулярных масс от примерно 8000 дальтон до примерно 21500 дальтон при молекулярной массе около 12500 дальтон, около 15500 дальтон или около 14400 дальтон.
[0075] В настоящем документе также предлагается фармацевтическая композиция, содержащая соединение, раскрытое в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
[0076] Используемый в данном документе термин «фармацевтически приемлемый носитель» включает любые и все растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и замедляющие абсорбцию агенты и тому подобное, которые являются физиологически совместимыми. Необязательно носитель подходит для местного введения или для внутривенного, внутримышечного, подкожного, парентерального, спинального или эпидермального введения (например, путем инъекции или инфузии). В зависимости от пути введения активное соединение может быть покрыто материалом для защиты соединения от действия кислот и других природных условий, которые могут инактивировать соединение.
[0077] Фармацевтически приемлемые носители могут быть выбраны так, чтобы они подходили для желаемого пути введения. Например, в одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель подходит для местного введения. Неограничивающим примером подходящего носителя для местного применения является гель IntraSite (коммерчески доступный от Smith & Nephew). В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель подходит для системного введения. Неограничивающим примером подходящего носителя для системного (например, внутривенного) введения является забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS).
[0078] В еще одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель подходит для интраназального введения. В еще одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель пригоден для ингаляции. В дополнительном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель подходит в качестве компонента перфузата.
[0079] Фармацевтические композиции могут включать одну или несколько фармацевтически приемлемых солей. «Фармацевтически приемлемая соль» относится к соли, которая сохраняет желаемую биологическую активность исходного соединения и не вызывает каких-либо нежелательных токсикологических эффектов (см., Например, Berge, S.M. et al. (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19). Примеры таких солей включают кислые и основные соли. Кислые соли включают в себя соли, полученные из нетоксичных неорганических кислот, таких как соляная, азотная, ортофосфорная, серная, бромистоводородная, йодистоводородная, метафосфорная и тому подобное, а также из нетоксичных органических кислот, таких как алифатические моно- и дикарбоновые кислоты, фенилзамещенные алкановые кислоты, гидроксиалкановые кислоты, ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфокислоты и тому подобное (такие как уксусная кислота). Основные соли включают в себя соли, полученные из щелочноземельных металлов, таких как натрий, калий, магний, кальций и тому подобное, а также из нетоксичных органических аминов, таких как N,N'-дибензилэтилендиамин, N-метилглюкамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, прокаин и тому подобное.
[0080] Фармацевтическая композиция также может включать фармацевтически приемлемый антиоксидант. Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают: (1) водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, гидрохлорид цистеина, бисульфат натрия, метабисульфит натрия, сульфит натрия и т.п.; (2) маслорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол (BHA), бутилированный гидрокситолуол (BHT), лецитин, пропилгаллат, альфа-токоферол и тому подобное; и (3) хелатирующие металлы агенты, такие как лимонная кислота, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и тому подобное.
[0081] Примеры подходящих водных и неводных носителей, которые могут использоваться в фармацевтических композициях, включают воду, этанол, полиолы (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и тому подобное) и их подходящие смеси, растительные масла, такие как оливковое масло, и инъецируемые органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Надлежащая текучесть может поддерживаться, например, путем использования материалов для покрытия, таких как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсий и путем использования поверхностно-активных веществ.
[0082] Эти композиции могут также содержать, например, консерванты, смачивающие агенты, эмульгирующие агенты и/или диспергирующие агенты. Предотвращение присутствия микроорганизмов может быть обеспечено как с помощью процедур стерилизации, так и путем включения различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабена, хлорбутанола, фенолсорбиновой кислоты и тому подобного. Также может быть желательно включить в композиции изотонические агенты, такие как сахара, хлорид натрия и тому подобное. Кроме того, длительное всасывание инъецируемой фармацевтической формы может быть вызвано включением агентов, которые замедляют всасывание, таких как моностеарат алюминия и желатин.
[0083] Терапевтические композиции обычно должны быть стерильными и стабильными в условиях производства и хранения. Стерильные растворы для инъекций могут быть приготовлены путем включения активного соединения в необходимом количестве в подходящем растворителе с одним или несколькими ингредиентами, перечисленными выше, по мере необходимости, с последующей стерилизационной микрофильтрацией. Композиция может быть составлена в виде раствора, микроэмульсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, подходящей для высокой концентрации лекарственного средства. Носителем может быть растворитель или дисперсная среда, содержащая, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и тому подобное) и их подходящие смеси. Надлежащая текучесть может поддерживаться, например, путем использования покрытия, такого как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и путем использования поверхностно-активных веществ. Во многих случаях будет предпочтительно включать в композицию изотонические агенты, например сахара, полиспирты, такие как маннит, сорбит или хлорид натрия.
[0084] Количество активного ингредиента, которое можно комбинировать с материалом носителя для получения единичной дозированной формы, будет варьироваться в зависимости от субъекта, которого лечат, и конкретного способа введения. Количество активного ингредиента, которое можно комбинировать с материалом-носителем для получения единичной дозированной формы, обычно будет таким количеством композиции, которое оказывает терапевтический эффект. Как правило, из ста процентов это количество будет составлять от около 0,01 до около 99 процентов активного ингредиента, предпочтительно от около 0,1 до около 70 процентов, наиболее предпочтительно от около 1 до около 30 процентов активного ингредиента в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.
[0085] Режимы дозировки подбираются так, чтобы обеспечить оптимальный желаемый ответ (например, терапевтический ответ). Например, может быть введена одноразовая доза, несколько разделенных доз могут вводиться с течением времени, или доза может быть пропорционально уменьшена или увеличена, как указано в зависимости от терапевтической ситуации. Парентеральные композиции могут быть выполнены в виде единичной дозированной формы для простоты введения и однородности дозировки. Используемая здесь единичная лекарственная форма относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз для субъектов, подлежащих лечению; каждая единица содержит заданное количество активного соединения, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем. Спецификация для стандартных дозированных форм диктуется и напрямую зависит от (а) уникальных характеристик активного соединения и конкретного терапевтического эффекта, который должен быть достигнут, и (b) ограничений, при приготовлении такого активного соединения в случае индивидуальной чувствительности.
[0086] Для системного введения соединения, раскрытого в настоящем документе, дозировка обычно составляет от 0,00001 до 100 мг/кг и более обычно 0,1-100 мкг/кг массы тела хозяина. Например, дозировки могут составлять 0,1 мкг/кг, 0,5 мкг/кг, 5 мкг/кг, 10 мкг/кг, 30 мкг/кг, массы тела, 0,1 мг/кг массы тела, 0,3 мг/кг массы тела, 0,5 мг/кг массы тела или 1 мг/кг массы тела. Для местного введения примерные дозировочные концентрации составляют от примерно 1 нг/мл до примерно 10 нг/мл.
[0087] Фактические уровни дозировки активных ингредиентов в фармацевтических композициях можно варьировать, чтобы получить количество активного ингредиента, которое эффективно для достижения желаемого терапевтического ответа для конкретного пациента, композиции и способа введения, без токсического эффекта для пациента. Выбранный уровень дозировки будет зависеть от множества фармакокинетических факторов, включая активность конкретных используемых композиций или их сложного эфира, соли или амида, пути введения, времени введения, скорости выведения конкретного используемого соединения, продолжительности лечения, приема других лекарств, соединений и/или материалов, используемых в сочетании с конкретными применяемыми композициями, возраста, пола, веса, состояния, общего состояния здоровья и предыдущей истории болезни пациента, которого лечат, и подобных факторов, хорошо известных в медицине. Специалист в данной области сможет определить такие количества на основе таких факторов, как размер субъекта, серьезность симптомов субъекта и определенных условий или выбранного способа введения.
Способы изготовления
[0088] Также в настоящем документе предлагается способ получения соединения формулы (I), раскрытого в данном документе, включающий
(i) реакцию пептида, который представляет собой пептид T7 (SEQ ID NO: 1), пептид GA3 (SEQ ID NO: 2), пептид T4 (SEQ ID NO: 3), пептид T6 (SEQ ID NO: 4) и/или пептид T8 (SEQ ID NO: 5) или его ретро-инверсо пептид с тиоловым соединением формулы (II)
получение соединения формулы (III) или его соли
(ii) взаимодействие соединения формулы (III) с ПЭГ-тетрамером формулы (IV)
получение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли;
отличающегося тем, что переменные n, X и Y имеют значения, определенные выше, LG представляет собой подходящую замещаемую группу, а PG представляет собой H или подходящую защитную группу.
[0089] В одном варианте осуществления подходящей замещаемой группой является галоген, тозилат или мезилат. В дополнительном варианте осуществления замещаемая группа представляет собой бром.
[0090] В одном варианте осуществления подходящей защитной группой является тритил.
[0091] В одном варианте осуществления соединение формулы (III) представляет собой кислую соль, такую как трифторацетат, ацетат или гидрохлорид.
[0092] В некоторых вариантах осуществления пептид (R) сначала связывают с полистирольной смолой. В другом варианте осуществления пептид, связанный с полистирольной смолой, подвергают взаимодействию с тиоловым соединением формулы (II). В дополнительном варианте осуществления соединение формулы (III) связывают с полистирольной смолой, которая отщепляется перед реакцией с соединением формулы (IV).
[0093] В одном варианте осуществления реакцию между соединением формулы (III) и соединением формулы (IV) проводят при рН от примерно 5 до примерно 8, или от примерно 6 до примерно 8, или от примерно 6 до примерно 7, или 6.5.
[0094] В других вариантах осуществления тиоловые соединения формулы (III) используются в качестве нуклеофилов в реакции Майкла с тетрамерными молекулами ПЭГ, как описано выше, и дополнительно содержат ненасыщенные фрагменты. Например, соединения формулы (III) реагируют с такими тетрамерными молекулами ПЭГ
где
Т представляет собой ненасыщенный фрагмент, такой как акрилатный фрагмент или винилсульфоновый фрагмент.
[0095] В другом варианте осуществления акрилатный фрагмент представляет собой
[0096] В другом варианте осуществления винилсульфоновая часть представляет собой
[0097] В одном варианте осуществления тиольный фрагмент в соединении формулы (III) действует как нуклеофил в реакции Майкла с образованием дополнительных соединений, описанных в данном изобретении, таких как
где R и Y описаны выше.
Методы и способы применения
Активация Tie2 и стимуляция ангиогенеза
[0098] Другой аспект относится к способам использования и применениям соединений, раскрытых в данном документе. Как обсуждено здесь, соединения, раскрытые в этом документе, могут быть использованы для активации рецептора Tie 2, либо in vitro, либо in vivo. Таким образом, в варианте осуществления предложен способ активации рецептора Tie-2, включающий контактирование рецептора Tie-2 с раскрытым здесь соединением, таким образом, что рецептор Tie-2 активируется. Также представлено применение соединения, раскрытого в настоящем документе, для активации рецептора Tie 2. Кроме того, предложено применение соединения, раскрытого здесь, для приготовления лекарственного средства для активации рецептора Tie 2. Еще более подробно представлено соединение, раскрытое в данном документе, для активации рецептора Tie 2.
[0099] Активация рецептора Tie 2 может быть подтверждена любым из многочисленных возможных индикаторов активации Tie 2, хорошо известных в данной области, включая, но не ограничиваясь, различными анализами in vitro и in vivo. В одном варианте осуществления, например, активация рецептора Tie 2 подтверждается фосфорилированием остатков тирозина рецептора Tie 2, например, тирозина 992 (Y992) человеческого Tie 2. В другом варианте осуществления, например, активация рецептора Tie 2 подтверждается фосфорилированием MAPK, AKT или eNOS.
[00100] Поскольку было показано, что соединения, раскрытые в данном документе, обладают повышенной величиной ответа и более широким диапазоном доз, чем васкулотид, который, как было показано, обладает ангиогенной активностью (например, см. фигуры 3А, В, 4А, В, 5А-С и 8А), также предоставлен способ стимуляции ангиогенеза у субъекта, включающий введение соединения, раскрытого в настоящем документе, субъекту, нуждающемуся в этом. Также представлено применение соединения, раскрытого в настоящем документе, для стимуляции ангиогенеза у субъекта, нуждающегося в этом. Кроме того, предложено применение соединения, раскрытого здесь, для приготовления лекарственного средства для стимуляции ангиогенеза у субъекта, нуждающегося в этом. Еще более важным является раскрытое в настоящем описании соединение применяемое для стимуляции ангиогенеза у субъекта, нуждающегося в этом.
[00101] В одном варианте осуществления ангиогенез, стимулируемый соединением, характеризуется по меньшей мере одним из следующих свойств:
a) привлечение периваскулярных поддерживающих клеток;
b) непроницаемость сосудов, которые в противном случае были бы проницаемы;
c) четко определенная древовидность; а также
d) ингибирование апоптоза эндотелиальных клеток.
[00102] Привлечение периваскулярных поддерживающих клеток можно продемонстрировать путем обнаружения маркера клеток гладких мышц, например, путем иммуноокрашивания с использованием антител к актину 1 гладких мышц (Sma 1), NG2 или десмину. Сосудистая проницаемость может быть оценена с использованием анализов проницаемости сосудов, общепринятых в данной области, включая анализы in vitro и/или in vivo. Неограничивающим примером анализа проницаемости сосудов in vivo является анализ Майлза с использованием голубого красителя Эванса или FITC альбумина. Используемое здесь определение «непроницаемые» сосуды следует применять, если степень сосудистой проницаемости меньше, чем степень проницаемости сосудов, рост которых стимулировался применением VEGF или другими медиаторами сосудистого воспаления, такими как серотонин или гистамин. Четко определенную древовидность можно продемонстрировать, например, путем визуализации новообразованных сосудов и подсчета количества сосудов и количества узлов в конкретном поле изображения. Четко определенная древовидность обозначена, например, значительным и организованным ветвлением сосудов, таким как ангиогенез, при котором отношение количества сосудов к количеству узлов составляет 1,0:0,5, необязательно 1,0:0,7 или даже 1,0:1,0. Кроме того, динамику потока в новых сосудах можно оценить с помощью микродопплеросонографии.
[00103] При способе стимуляции ангиогенеза сайт может связываться с соединением, раскрытым в данном документе, одиночно или же, сайт может связываться с одним или несколькими дополнительными ангиогенными агентами. Таким образом, в другом варианте осуществления способ ангиогенеза дополнительно включает взаимодействие сайта субъекта со вторым ангиогенным агентом. Неограничивающие примеры дополнительных ангиогенных агентов, которые можно использовать в комбинации с раскрытым здесь соединением, включают в себя VEGF, PDGF, G-CSF, рекомбинантный человеческий эритропоэтин, bFGF и фактор роста плаценты (PLGF). Соответственно, в одном варианте осуществления второй ангиогенный агент представляет собой VEGF. В другом варианте осуществления второй ангиогенный агент выбирают из следующей группы: PDGF, G-CSF, рекомбинантный человеческий эритропоэтин, bFGF, ингибитор Ang2 и фактор роста плаценты (PLGF).
[00104] Учитывая способность раскрытых здесь соединений стимулировать ангиогенез, раскрытые здесь соединения можно использовать в различных клинических ситуациях, в которых желательно стимулирование ангиогенеза. Неограничивающие примеры таких ситуаций включают в себя васкуляризацию регенеративных тканей, ишемическую болезнь конечностей, церебральную ишемию, состояния сосудистого воспаления, включая атеросклероз, аваскулярный некроз, стимуляцию роста волос и эректильную дисфункцию.
[00105] В настоящем документе также предложен способ снижения проницаемости сосудов в месте пропотевания жидкости, включающий введение соединения, раскрытого в данном документе, в необходимое место субъекту, нуждающемуся в этом. Также представлено применение соединения, раскрытого в настоящем документе, для уменьшения сосудистой проницаемости в месте пропотевания жидкости из сосудов у субъекта, нуждающегося в этом. Кроме того, предложено применение соединения, раскрытого здесь, для приготовления лекарственного средства для снижения сосудистой проницаемости в месте пропотевания жидкости из сосудов у субъекта, нуждающегося в этом. Кроме того, предложено соединение, раскрытое в настоящем документе, применяемое для уменьшения сосудистой проницаемости в месте пропотевания жидкости из сосудов у субъекта, нуждающегося в этом.
[00106] В одном варианте осуществления у субъекта есть или имелся инсульт, дегенерация желтого пятна, отек желтого пятна, нарушение гематоретинального барьера, нарушение гематоэнцефалического барьера, пропотевание жидкости из сосудов вызванное бактериями или необходимость в нормализации сосудистой сети опухоли.
[00107] Ранее было показано, что васкулотид оказывает защитное действие на эндотелиальные клетки, например, путем ингибирования апоптоза эндотелиальных клеток. Сообщалось, что способность агониста Tie 2 защищать эндотелиальные клетки в почечной сосудистой сети уменьшает фиброз почки на экспериментальной модели (Kim, W. et al. (2006) J. Am. Soc. Nephrol. 17:2474-2483). Было показано, что MPA-Br индуцирует фосфорилирование Tie2 в HUVEC, HMVEC и в первичных эндотелиальных клетках крыс, собак и яванского макака. В последнее время Thamm K et al., 2016, показали, что VT облегчает острое повреждение почек после трансплантации (у мышей). Это также привело к уменьшению фиброза почек, связанного с трансплантацией, у тех мышей, которые получали VT. Rubig E et al, 2016, показали, что VT снижает степень острого повреждения почек после ишемии-реперфузии. Снижение травм было отмечено увеличением выживаемости, улучшением кровотока в поврежденных почках и уменьшением пропотевания жидкости из сосудов.
[00108] Соответственно, в настоящем документе представлен способ защиты эндотелиальных клеток, включающий введение соединения, раскрытого в данном документе, субъекту, нуждающемуся в этом. Также представлено применение раскрытого здесь соединения для защиты эндотелиальных клеток у субъекта, нуждающегося в этом. Кроме того, предложено применение соединения, раскрытого здесь, для приготовления лекарственного средства защищающего эндотелиальные клетки субъекта, нуждающегося в этом. Еще более важным является раскрытое здесь соединение для защиты эндотелиальных клеток субъекта, нуждающегося в этом.
[00109] Такой способ применения можно использовать в различных клинических ситуациях, неограничивающие примеры которых включают в себя повреждение легких, повреждение почек, фиброз почек, инсульт, сосудистую деменцию, дегенерацию желтого пятна и диабетические осложнения (например, в почках, глазах, коже и/или конечностях).
[00110] Еще более важным является способ стимулирования заживления раны, включающий введение соединения, раскрытого в настоящем документе, в рану субъекту, нуждающемуся в этом. Также представлено применение раскрытого здесь соединения для стимуляции заживления раны у субъекта, нуждающегося в этом. Кроме того, предложено применение соединения, раскрытого здесь, для приготовления лекарственного средства стимулирующего заживление раны у субъекта, нуждающегося в этом. Еще более важным является раскрытое в настоящем описании соединение для применения в стимуляции заживления раны у субъекта, нуждающегося в этом.
[00111] Стимуляция заживления раны может быть подтверждена, например, ускоренным временем закрытия раны по сравнению с заживлением раны в отсутствие соединения, увеличением грануляционной ткани в месте раны по сравнению с грануляционной тканью при отсутствии лечения и/или повышенной неоваскуляризацией раны по сравнению со случаем без лечения.
[00112] В одном варианте осуществления способ или применение стимулирующего заживления раны используют при лечении диабетической язвы.
[00113] В других вариантах осуществления способ использования для стимулирования заживления раны можно применить в различных клинических ситуациях, связанных с ранами, включая, но не ограничиваясь следующими ситуациями - диабетическая язва, пролежневая язва, хирургические разрезы, травматические повреждения тканей, ожоги и кожные трансплантаты.
Состояния, связанные с эозинофилами и/или базофилами
[00114] MPA-Br представляет собой соединение с улучшенным связыванием мишени и фармакокинетикой по сравнению с васкулотидом, которое, как ранее было показано, ингибирует рост CFU-G клеток.
[00115] Соответственно, в настоящем документе представлен способ ингибирования роста CFU-G клеток, включающий введение соединения, раскрытого в данном документе, субъекту, нуждающемуся в этом. Изобретение также обеспечивает применение раскрытого здесь соединения для ингибирования роста CFU-G клеток в животном организме или в клетке при необходимости. Также представлено применение соединения, раскрытого в настоящем описании, для приготовления лекарственного средства для ингибирования роста CFU-G клеток в животном организме или в клетке при необходимости. Кроме того, предложено соединение, раскрытое в настоящем документе, для применения в ингибировании роста CFU-G клеток в животном организме или в клетке при необходимости.
[00116] Используемый в данном документе термин «CFU-G» относится к колониеобразующим элементарным гранулоцитарным клеткам, которые представляют собой тип кроветворных клеток, продуцирующих гранулоциты, такие как эозинофилы, базофилы и нейтрофилы. «Ингибирование роста» в контексте настоящего описания относится к снижению количества колониеобразующих гранулоцитов минимум на 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 или более процентов в сравнении с необработанной контрольной пробой.
[00117] MPA-Br представляет собой соединение с улучшенным связыванием и фармакокинетикой по сравнению с васкулотидом, которое, как было ранее показано, приводит к снижению аллергического эффекта в циркулирующих эозинофилах и базофилах без более общей иммуносупрессии Т-клеток, В-клеток, моноцитов или нейтрофилов. Соответственно, настоящее изобретение также обеспечивает способ восстановления эозинофилов и/или базофилов в животном организме или в клетке при необходимости, включающий введение соединения, раскрытого в данном документе. Изобретение также обеспечивает применение раскрытого здесь соединения для восстановления эозинофилов и/или базофилов в животном организме или в клетке при необходимости. Также представлено применение соединения, раскрытого в данном описании, для приготовления лекарственного средства уменьшающего количество эозинофилов и/или базофилов в животном организме или в клетке при необходимости. Далее представлено соединение, раскрытое в настоящем документе, для применяемое для снижения количества эозинофилов и/или базофилов в животном организме или в клетке при необходимости.
[00118] Используемая здесь фраза «снижение количества эозинофилов и/или базофилов» относится к сокращению количества циркулирующих эозинофилов и/или базофилов, как минимум на 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 или 80 процентов в сравнении с количеством циркулирующих эозинофилов и/или базофилов в контрольной пробе. Кроме того, уменьшение количества базофилов приводит к уменьшению количества лаброцитов, таким образом, уменьшение количества базофилов ведет к сокращению количества лаброцитов.
[00119] Эозинофилы и базофилы участвуют в аллергическом ответе. Кроме того, MPA-Br, как было показано в настоящем документе, ослабляет пропотевание жидкости из сосудов после воздействия гистамина на кожу.
[00120] Соответственно, настоящее изобретение также представляет способ лечения аллергического заболевания или реакции в животном организме или клетке, нуждающейся в этом, включающий введение соединения, раскрытого в данном документе. Изобретение также обеспечивает применение соединения, раскрытого в данном описании, для лечения аллергического заболевания или реакции у животного или клетки, нуждающейся в этом. Также предложено применение соединения, раскрытого здесь, для приготовления лекарственного средства для лечения аллергического заболевания или реакции у животного или клетки, нуждающейся в этом. Кроме того, предложено соединение, раскрытое в данном описании, для применения при лечении аллергического заболевания или реакции у животного или клетки, нуждающейся в этом.
[00121] Используемый в данном документе термин «терапия или лечение» означает подход, позволяющий получить полезные или желаемые результаты, включая клинические результаты. Полезные или желательные клинические результаты могут включать, но не ограничиваются такими как, ослабление или улучшение одного или нескольких симптомов или состояний, уменьшение степени заболевания, стабилизированное (то есть не ухудшающееся) состояние заболевания, предотвращение распространения заболевания, задержка или замедление развития заболевания, улучшение или временное смягчение болезненного состояния и ремиссия (частичная или полная), определяемая или не обнаруживаемая.
[00122] В одном варианте осуществления аллергическое заболевание или ответ представляет собой атопическое заболевание. Используемый в данном документе термин «атопическое заболевание» относится к аллергической чувствительности, затрагивающей части тела, не находящиеся в непосредственном контакте с аллергеном, и определяется увеличением уровня IgE в сыворотке животного. В одном варианте осуществления атопическим заболеванием является атопический дерматит/экзема, астма, конъюнктивит, хронический синусит, эозинофильный эзофагит, пищевая аллергия или аллергический ринит/сенная лихорадка. Астму, аллергический ринит и атопический дерматит обычно называют атопической триадой, в которой во многих случаях атопический дерматит проявляется первым (Eichenfield et al., 2003) и обычно сопровождается развитием астмы и/или аллергического ринита. Соответственно, в одном варианте осуществления атопическое заболевание представляет собой атопический дерматит. В другом варианте осуществления атопическим заболеванием является астма.
[00123] В другом варианте осуществления настоящее изобретение также представляет способ лечения состояния, связанного с эозинофилами и/или базофилами в животном организме или клетке, нуждающейся в этом, включающий введение соединения, раскрытого в данном документе. Изобретение также представляет применение раскрытого здесь соединения для лечения состояния, связанного с эозинофилами и/или базофилами, в животном организме или клетке, нуждающейся в этом. Также представлено применение соединения, раскрытого в данном документе, для приготовления лекарственного средства для лечения состояния, связанного с эозинофилами и/или базофилами, в животном организме или клетке, нуждающейся в этом. Кроме того, соединение, раскрытое в настоящем документе, предложено для использования при лечении состояния, связанного с эозинофилами и/или базофилами, у животного или клетки, нуждающейся в этом. В одном варианте осуществления состояние, связанное с эозинофилами и/или базофилами, представляет собой миелодиспластический синдром. В другом варианте осуществления состояние, связанное с эозинофилами и/или базофилами, представляет собой лейкоз эозинофильного и/или базофильного происхождения, такой как хронический миелоидный лейкоз, острый миелоидный лейкоз, хронический эозинофильный лейкоз, острый эозинофильный лейкоз, хронический миеломоноцитарный лейкоз с эозинофильным лейкозом и острый базофильный лейкоз. В другом варианте состояние, связанное с эозинофилами и/или базофилами, представляет собой воспалительное заболевание кишечника. В еще одном варианте состояние, связанное с эозинофилами и/или базофилами, представляет собой паразитарную инфекцию. В еще одном варианте состояние, связанное с эозинофилами и/или базофилами, представляет собой идиопатический гиперэозинофильный синдром (HES).
[00124] Настоящее изобретение также относится к способу снижения уровней воспалительных цитокинов и/или хемокинов в животном организме или клетке, нуждающейся в этом, включающему введение соединения, раскрытого здесь. Изобретение также обеспечивает применение соединения, раскрытого в данном документе, для снижения уровней воспалительных цитокинов и/или хемокинов в животном организме или клетке, нуждающейся в этом. Также представлено применение соединения, раскрытого в данном описании, для приготовления лекарственного средства, снижающего уровень воспалительных цитокинов и/или хемокинов в животном организме или клетке, нуждающейся в этом. Кроме того, соединение, раскрытое в данном документе, предложено для применения при снижении уровней воспалительных цитокинов и/или хемокинов в животном организме или клетке, нуждающейся в этом. В одном варианте осуществления уровни воспалительного цитокина и/или хемокина представляют собой уровни воспалительного цитокина и/или хемокина в сыворотке. В одном варианте осуществления воспалительные цитокины и/или хемокины содержат по меньшей мере один эотаксин из: IL-17, MIG, IL12/IL23 (p40), IL-9, MIP-1a, MIP-1b, RANTES, TNF-α, IL-1β, IL-5, IL-13 и MCP-1. В другом варианте осуществления воспалительные цитокины и хемокины включают в себя IL-17, MIG, IL12/IL23 (p40), IL-9, MIP-1a, MIP-1b, RANTES, TNF-α, IL-1β, IL-5, IL-13 и MCP-1. В еще одном варианте осуществления воспалительные цитокины и/или хемокины содержат эотаксин. Такие способы и применения используют в терапии при лечении заболеваний и состояний, связанных с повышенной концентрацией воспалительных цитокинов и/или хемокинов.
[00125] В одном варианте осуществления способы и применения дополнительно включают введение или применение иммуномодулятора или кортикостероида в комбинации с соединением, раскрытым в данном документе.
Грипп
[00126] Показано, что MPA-Br, как и Vasculotide, усиливает клинические проявления и увеличивает смертность при гриппе у мышей, но проявляет эффективность при более низких дозировках.
[00127] Соответственно, в данном документе представлен способ лечения субъекта, инфицированного гриппом, включающий введение соединения, раскрытого в настоящем документе, субъекту, нуждающемуся в этом. Также представлено применение соединения, раскрытого в настоящем документе, для лечения субъекта, инфицированного гриппом. Кроме того, предложено применение соединения, раскрытого здесь, для приготовления лекарственного средства для лечения субъекта, инфицированного гриппом. Еще более важным является раскрытое здесь соединение для применения при лечении субъекта, инфицированного гриппом.
[00128] Настоящее изобретение также обеспечивает способ уменьшения пропотевания жидкости из клетки или легочного эндотелия в животном организме, при инфицировании гриппом, включающий введение соединения, раскрытого в данном документе. Изобретение также обеспечивает применение раскрытого здесь соединения для уменьшения пропотевания жидкости из клетки или легочного эндотелия в животном организме, при инфицировании гриппом, Также представлено применение соединения, раскрытого в настоящем документе, для приготовления лекарственного средства уменьшающего пропотевание жидкости из клетки или легочного эндотелия в животном организме, при инфицировании гриппом. Кроме того, предложено соединение, раскрытое в настоящем документе, применяющееся для уменьшения пропотевания жидкости из клетки или легочного эндотелия в животном организме, при инфицировании гриппом,
[00129] Используемый в данном документе термин «грипп» относится к инфекционному заболеванию, вызываемому РНК-вирусами семейства Orthomyxoviridae. Термин грипп также относится к первичной вирусной пневмонии. В одном варианте осуществления грипп представляет собой заболевание, вызываемое вирусом гриппа человека. Вирусы человеческого гриппа можно отличить от вирусов птичьего гриппа (например, птичьего гриппа H5N1) по отсутствию определенных основных аминокислот в их молекулах гемагглютинина; это ограничивает расщепление трипсиноподобными протеазами, которые содержатся в дыхательных путях. Таким образом, человеческий грипп в первую очередь поражает респираторный эпителий, приводя к его повреждению, апоптозу и десквамации (Kuiken and Taubenberger, 2008). Напротив, вирусы птичьего гриппа могут размножаться вне дыхательных путей и атаковать эндотелиальные клетки. Вирусы человеческого гриппа также можно отличить от вирусов птичьего гриппа на том основании, что вирусы человеческого гриппа могут распространяться от человека к человеку, а вирусы птичьего гриппа не могут распространяться от человека к человеку. Неограничивающие примеры вирусов человеческого гриппа включают следующее: H1N1, H3N2, H2N2 и H1N2.
[00130] Используемый в данном документе термин «пропотевание жидкости из легочного эндотелия» означает потерю целостности барьера или повышенную проницаемость микрососудистого эндотелия легкого. Термин «уменьшение пропотевания жидкости из легочного эндотелия» относится к уменьшению пропотевания жидкости из легочного эндотелия минимум на 5, 10, 15, 25, 50, 75 или 100% по сравнению с контролем, который не подвергался лечению, описанными здесь способами и применениями. В одном варианте осуществления пропотевание жидкости из легочного эндотелия измеряется по трансэндотелиальному электрическому сопротивлению (TEER) или флуоресценции меченного флуоресцеином соединения, такого как декстран. Термин «уменьшение пропотевания жидкости из легочного эндотелия» так же означает снижение проницаемости микрососудистого эндотелия легких минимум на 5, 10, 15, 25, 50, 75 или 100% по сравнению с контролем, который не подвергался лечению, описанными здесь способами и методами.
[00131] Низкодозовая инфекция гриппа предрасполагает эндотелий легкого к повышенному пропотеванию жидкости при последующем воздействии бактерий, явление, известное как праймирование, и ранее было показано, что Васкулотид способен устранить повышенное пропотевание жидкости, вызванное праймированием. Ожидается, что MPA-Br, который обладает улучшенным связыванием рецептора Tie 2 и более низкой дозировкой, необходимой в условиях мышиной модели гриппа, обеспечит аналогичную или улучшенную активность при тех же или более низких дозировках.
[00132] Соответственно, настоящее изобретение также представляет способ лечения бактериальной суперинфекции, связанной с гриппом, у животного или клетки, нуждающейся в этом, включающий введение соединения, раскрытого в данном документе. Изобретение также обеспечивает применение соединения, раскрытого в данном документе, для лечения бактериальной суперинфекции, связанной с гриппом, у животного или клетки, нуждающейся в этом. Также предложено применение соединения, раскрытого в настоящем описании, для приготовления лекарственного средства для лечения бактериальной суперинфекции, связанной с гриппом, у животного или нуждающейся в этом клетки. Кроме того, предложено соединение, раскрытое в данном описании, для применения при лечении бактериальной суперинфекции, связанной с гриппом, у животного или нуждающейся в этом клетки.
[00133] Настоящее изобретение также обеспечивает способ увеличения выживаемости и/или снижения смертности у животного или клетки с бактериальной суперинфекцией, связанной с гриппом, включающий введение соединения, раскрытого в данном документе. Изобретение также обеспечивает использование раскрытого здесь соединения для увеличения выживаемости и/или снижения смертности у животного или клетки с бактериальной суперинфекцией, связанной с гриппом. Также представлено применение соединения, раскрытого в настоящем описании, для приготовления лекарственного средства для увеличения выживаемости и/или снижения смертности у животного или клетки с бактериальной суперинфекцией, связанной с гриппом. Кроме того, представлено соединение, раскрытое в настоящем документе, для применения с целью увеличения выживаемости и/или снижения смертности у животного или клетки с бактериальной суперинфекцией, связанной с гриппом.
[00134] Настоящее изобретение также представляет способ уменьшения пропотевания жидкости из клетки или эндотелия легких у животного с бактериальной суперинфекцией, связанной с гриппом, включающий введение соединения, раскрытого в данном документе. Изобретение также обеспечивает использование раскрытого здесь соединения для уменьшения пропотевания жидкости из клетки или эндотелия легких у животного с бактериальной суперинфекцией, связанной с гриппом. Также представлено применение соединения, раскрытого в настоящем описании, для приготовления лекарственного средства чтобы уменьшить пропотевание жидкости из клетки или эндотелия легких у животного с бактериальной суперинфекцией, связанной с гриппом. Кроме того, предложено соединение, раскрытое в настоящем документе, для применения с целью уменьшения пропотевания жидкости из клетки или эндотелия легких у животного с бактериальной суперинфекцией, связанной с гриппом.
[00135] Используемый в данном документе термин «бактериальная суперинфекция» относится к бактериальной инфекции, которая возникает вторично или обычно после первичной инфекции гриппа, включая инфекцию гриппом в низких дозах. Бактериальная суперинфекция также может быть определена как пневмония, возникающая одновременно или после инфицирования гриппом. В одном варианте осуществления бактерией, вызывающей бактериальную суперинфекцию, является грамположительная бактерия, такая как Staphylococcus aureus (S. aureus) или Staphylococcus pneumonia (S. pneumonia). Без подкрепления какой-либо теорией, считается, что грипп праймирует эндотелий легкого, что делает его более подверженным к пропотеванию жидкости, когда возникает вторичная бактериальная инфекция. В результате бактериальные суперинфекции могут вызывать тяжелые повреждения легких после обычных инфекций гриппа.
[00136] Используемое здесь выражение «бактериальная суперинфекция, связанная с гриппом» в одном варианте осуществления относится к бактериальной суперинфекции, которая происходит одновременно или параллельно с инфекцией гриппа. В другом варианте осуществления выражение «бактериальная суперинфекция, связанная с гриппом» относится к бактериальной суперинфекции, которая возникает после или следует за инфицированием гриппом.
[00137] Современное лечение антивирусными агентами не так эффективно, поскольку проходит некоторое время между первыми проявлениями инфекции и лечением, это является проблемой, поскольку пациенты не всегда проходят терапию сразу после появления симптомов. В отличие от снижающейся эффективности противовирусного лечения, ранее было продемонстрировано, что васкулотид эффективен, даже если вводится с задержкой, а MPA-Br также показал эффективность, когда введение было отложено на 48 часов после заражения.
[00138] Соответственно, в варианте осуществления соединение, раскрытое в данном документе, используется или вводится не ранее чем или примерно через 24 часа после заражения. В другом варианте осуществления соединение, раскрытое в данном документе, используется или вводится не ранее чем или примерно через 48 часа после заражения. В еще одном варианте осуществления соединение, раскрытое в данном документе, используется или вводится не ранее чем или примерно через 72 часа после заражения.
[00139] Ранее было показано, что лечение васкулотидом не снижает эффективность противовирусного лечения и увеличивает выживаемость на мышиной модели первичной вирусной пневмонии и острого повреждения легких, вызванного гриппом. Ожидается, что MPA-Br будет иметь аналогичную или лучшую активность при тех же или более низких дозировках. Соответственно, настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения животного или клетки, инфицированной гриппом, включающий введение (а) соединения, раскрытого в настоящем документе, и (b) противовирусного агента животному или клетке, нуждающимся в этом. Изобретение также обеспечивает использование (а) соединения, раскрытого в данном документе, и (b) противовирусного агента для лечения животного или клетки, инфицированной гриппом. Также предоставлено применение (а) соединения, раскрытого в настоящем документе, и (b) противовирусного агента при приготовлении лекарственного средства для лечения животного или клетки, инфицированной гриппом. Кроме того, представлено (а) соединение, раскрытое в данном документе, и (b) противовирусный агент, применяемый при лечении животного или клетки, зараженной гриппом.
[00140] Настоящее раскрытие также представляет способ увеличения выживаемости и/или снижения смертности у животного или клетки, инфицированной гриппом, включающий введение (а) соединения, раскрытого в настоящем документе, и (b) противовирусного агента. Изобретение также обеспечивает использование (а) соединения, раскрытого в данном документе, и (b) противовирусного агента для увеличения выживаемости и/или снижения смертности у животного или клетки, зараженной гриппом. Также предусмотрено использование (а) соединения, раскрытого в данном документе, и (b) противовирусного агента при приготовлении лекарственного средства для увеличения выживаемости и/или снижения смертности у животного или клетки, зараженной гриппом. Кроме того, представлены (а) соединение, раскрытое в данном документе, и (b) противовирусный агент, применяемые для увеличения выживаемости и/или снижения смертности у животного или клетки, зараженной гриппом.
[00141] Настоящее изобретение также относится к способу снижения пропотевания жидкости из клетки или эндотелия легких у животного, инфицированного гриппом, включающему введение (а) соединения, раскрытого здесь, и (b) противовирусного агента. Изобретение также обеспечивает использование (а) соединения, раскрытого в данном документе, и (b) противовирусного агента для уменьшения пропотевания жидкости из клетки или эндотелия легких у животного, зараженного гриппом. Также предусмотрено использование (а) соединения, раскрытого в данном документе, и (b) противовирусного агента при приготовлении лекарственного средства, уменьшающего пропотевание жидкости из клетки или эндотелия легких животного, инфицированного гриппом. Кроме того, представлено (а) соединение, раскрытое в данном документе, и (b) противовирусный агент применяемый для уменьшения пропотевания жидкости из клетки или эндотелия легких животного, инфицированного гриппом.
[00142] Используемый в данном документе термин «противовирусный агент» применяется к лекарственному средству, используемому для лечения вирусных инфекций, вызванных вирусами гриппа. В одном варианте осуществления противовирусный агент представляет собой агент, который подавляет способность вируса размножаться. Примеры противовирусных агентов включают, но не ограничиваются такими: амантадин, римантадин, занамивир, перамивир, вирамидин, рибавирин и осельтамивир (также известный как Тамифлю®).
[00143] Используемый в данном документе термин «терапия или лечение» означает подход, позволяющий получить полезные или желаемые результаты, включая клинические результаты. Полезные или желательные клинические результаты могут включать, но не ограничиваются такими как, ослабление или улучшение одного или нескольких симптомов или состояний, уменьшение степени заболевания, стабилизированное (то есть не ухудшающееся) состояние заболевания, предотвращение распространения заболевания, задержка или замедление развития заболевания, улучшение или временное смягчение болезненного состояния и ремиссия (частичная или полная), определяемая или не обнаруживаемая. Используемый в данном документе термин «терапия или лечение» также включает предотвращение или замедление бактериальной суперинфекции, вследствие вирусной инфекции гриппа. Примеры положительных результатов лечения гриппа включают увеличение выживаемости, снижение смертности, уменьшение пропотевания жидкости из эндотелия легких, уменьшение потери веса и/или предотвращение гипотермии и улучшение оксигенации артерий.
[00144] Используемый в данном документе термин «увеличение выживаемости» означает увеличение продолжительности жизни животного после заражения гриппом и/или бактериальной суперинфекцией, связанной с гриппом. В одном варианте осуществления термин «увеличение выживаемости» означает увеличение как минимум на 5, 10, 25, 50, 75, 100, 200% времени выживания животного после заражения гриппом по сравнению с животным, которое не лечили описанными здесь способами и методами.
[00145] Используемый в данном документе термин «снижение смертности» означает снижение уровня смертности животного или клетки при гриппе и/или бактериальной суперинфекции, связанной с гриппом, по сравнению с животным, которое не лечили описанными здесь способами и методами. В одном варианте осуществления уровень смертности уменьшается по меньшей мере на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95% по сравнению с животным, которое не лечили описанными здесь способами и методами.
[00146] Термин «введение» включает в себя введение агентов, описанных здесь, животному или клетке in vitro или in vivo.
[00147] Используемый в данном документе термин «субъект» или «животное» включает в себя всех представителей животного мира, в том числе людей.
[00148] Термин «клетка» означает одну клетку, а также множество или популяцию клеток. Введение в клетку означает введение in vitro (или ex vivo), а также in vivo.
[00149] Раскрытое здесь соединение может быть введено любым подходящим способом, включая местно, системно, перорально, интраназально или ингаляцией.
[00150] Противовирусный агент также можно вводить любым подходящим способом, включая, без ограничения, местно, системно, перорально, интраназально или путем ингаляции.
[00151] Раскрытое здесь соединение и противовирусный агент можно вводить параллельно (одновременно). В другом варианте осуществления соединение, раскрытое в данном описании, и противовирусный агент могут вводиться последовательно. Раскрытое здесь соединение может быть введено ранее противовирусного средства или противовирусное средство может быть введено до раскрытого здесь соединения. В одном варианте осуществления соединение, раскрытое в данном документе, используется или вводится через или не ранее чем 24 часа после противовирусного агента. В другом варианте осуществления соединение, раскрытое в данном документе, используется или вводится через или не ранее чем 48 часов после противовирусного агента. В еще одном варианте осуществления соединение, раскрытое в данном документе, используется или вводится через или не ранее чем 72 часа после противовирусного агента.
[00152] Введение «эффективного количества» агентов, описанных здесь, определяется как эффективное количество, в дозировках и в периодах времени, необходимых для достижения желаемого результата. Эффективное количество соединения, раскрытого в данном документе, может варьироваться в зависимости от таких факторов, как стадия заболевания, возраст, пол и вес животного. Эффективное количество противовирусного агента также может варьироваться в зависимости от таких факторов, как стадия заболевания, возраст, пол и вес животного.
[00153] Режимы дозирования могут быть скорректированы для обеспечения оптимального терапевтического ответа. Например, несколько разделенных доз можно вводить ежедневно или дозу можно пропорционально уменьшать, как указано в зависимости от терапевтической ситуации. Способ введения (например, in vivo путем инъекции или местного применения или ex vivo в культуре) также влияет на режим дозирования.
[00154] Способы и применения, описанные здесь, включают введение или применение соединения, раскрытого в данном документе, отдельно или как часть фармацевтической композиции, содержащей соединение, здесь раскрытое.
[00155] В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция, содержащая соединение, раскрытое в настоящем документе, для использования способами, описанными в настоящем документе, дополнительно содержит противовирусный агент и/или второй ангиогенный агент, раскрытый в данном документе. Необязательно, композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.
[00156] Такие фармацевтические композиции могут быть использованы для внутриочагового, внутривенного, местного, ректального, парентерального, локального, ингаляционного, интраназального или подкожного, внутрикожного, внутримышечного, интратекального, трансперитонеального, перорального и внутримозгового применения. Композиция может быть в жидкой, твердой или полутвердой форме, например пилюли, таблетки, кремы, желатиновые капсулы, капсулы, суппозитории, мягкие желатиновые капсулы, гели, мембраны, тубулы, растворы или суспензии. Композиция также может быть в форме перфузата.
[00157] Фармацевтические композиции, как таковые, могут быть получены известными способами получения фармацевтически приемлемых композиций, которые можно вводить пациентам, и таким образом, чтобы эффективное количество активного вещества было объединено с фармацевтически приемлемым носителем. Подходящие носители описаны, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences (Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., USA 2003 - 20th Edition) и в Фармакопее США: Национальный формуляр (USP 24 NF19) опубликован в 1999 году.
[00158] Исходя из этого, фармацевтические композиции для применения описанными здесь способами и/или методами включают, но не исключительно, активное соединение или вещество в сочетании с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями и содержатся в изо-осмотическим растворах, забуференных до подходящего pH как у физиологических жидкостей. Фармацевтические композиции могут дополнительно содержать другие агенты, такие как кортикостероиды и иммуномодуляторы.
[00159] Также представлена композиция, содержащая (а) соединение, раскрытое здесь, и (b) противовирусный агент и/или второй ангиогенный агент, раскрытый здесь. Необязательно, композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.
[00160] Кроме того, предложен набор, содержащий (а) соединение, раскрытое здесь, и (b) второй ангиогенный агент, раскрытый здесь. В одном варианте осуществления набор дополнительно содержит контейнер. В другом варианте осуществления набор содержит инструкции по применению для стимуляции ангиогенеза у животного или клетки, нуждающейся в этом, и/или для осуществления способов и применений, описанных здесь.
[00161] Кроме того, представлен набор, включающий (а) соединение, раскрытое в данном документе, и (b) противовирусный агент, как описано в настоящем документе. В одном варианте осуществления набор дополнительно содержит контейнер. В другом варианте осуществления набор содержит инструкции по применению для лечения гриппа у животного или нуждающейся в этом клетки и/или для увеличения выживаемости и/или снижения смертности у животного инфицированного гриппом. В других вариантах осуществления набор содержит инструкции по применению для лечения бактериальной суперинфекции, связанной с гриппом, у животного или нуждающейся в этом клетки. В других вариантах осуществления набор предоставляет инструкции по применению для уменьшения пропотевания жидкости из эндотелия легких у животного, инфицированного гриппом.
[00162] Соединение, раскрытое в настоящем документе, и противовирусный агент или второй ангиогенный агент из набора на могут быть использованы одновременно или последовательно. Соединение, раскрытое в данном документе, может быть использовано перед раскрытым в данном документе противовирусным/вторым ангиогенным средством или противовирусное/второе ангиогенное средство может быть использовано до применения соединения, раскрытого в данном документе.
Биоматериалы
[00163] Раскрытые здесь соединения также могут быть включены в биоматериал, который затем может быть имплантирован в локализацию субъекту, чтобы тем самым обеспечить эффекты данных соединений в этой локализации. Биоматериалы, имеющие матричную или каркасную структуру, пригодны для использования. Соединение может быть включено в состав как отдельно, так и в комбинации с одним или несколькими дополнительными агентами, такими как VEGF, PDGF, G-CSF, рекомбинантный человеческий эритропоэтин, bFGF и фактор роста плаценты (PLGF). Неограничивающие примеры подходящих биоматериалов включают в себя Matrigel, кожные заменители и сшитые гликозаминогликановые гидрогели (например, как описано в Riley, C.M. et al. (2006) J. Biomaterials 27:5935-5943). Соответственно, другой аспект относится к композиции биоматериала, в которую включено раскрытое здесь соединение, отдельно или в комбинации с одним или несколькими дополнительными агентами. Упакованный материал, который содержит биоматериал, также включен в состав. Упакованный материал может быть маркирован соответственно использованному биоматериалу.
[00164] Вышеупомянутое изобретение в общем описывается настоящей заявкой. Более полное понимание может быть получено путем ссылки на следующие конкретные примеры. Эти примеры описаны исключительно с целью иллюстрации и не направлены на ограничение области применения данной заявки. Изменения в форме и замене эквивалентов предусматриваются в зависимости от обстоятельств или целесообразности. Несмотря на то, что здесь использовались конкретные термины, они приведены в описательном смысле, не предназначены для ограничения.
[00165] Следующие, неограничивающие примеры, иллюстрируют настоящее раскрытие:
ПРИМЕРЫ
Результаты
Обнаружение родительского васкулотида и MPA-Br, связанного с гомогенной видоспецифической популяцией рекомбинантных рецепторов с использованием флуоресцентной спектроскопии триптофана.
[00166] Аминокислоты триптофан, тирозин и фенилаланин проявляют собственные флуоресцентные свойства при возбуждении на длине волны 280 нм и, в частности, для триптофана при 295 нм. Этот спектр излучения сильно зависит от структурной конформации белка и его растворителя. Что касается структурной конформации, изменения в спектре, которые происходят вследствие связывания лиганда с его рецептором, были использованы в качестве внутреннего маркера для характеристики дозозависимого связывания. С этой целью для характеристики кинетики связывания были использованы собственные флуоресцентные свойства видоспецифичных белков Tie2Fc и изменения спектров излучения в присутствии родительского васкулотида или MPA-Br.
[00167] Дозозависимое увеличение интенсивности собственной флуоресценции наблюдалось при выдерживании в термостате рекомбинантного человеческого рецептора Tie2Fc и лигандов родительского васкулотида или MPA-Br (Фигура 2А, С). В обоих случаях интенсивность флуоресценции носила насыщаемый характер. Специфический сигнал был получен путем вычитания интенсивности флуоресценции, генерируемой одним лигандом из интенсивности рецепторного и лигандного комплекса. Результирующее Kd для нормализованного специфического связывания родительского васкулотида и MPA-Br с Tie2Fc человека составляет 102,9 нМ и 2,623 нМ с использованием нелинейной регрессии одного сайта-специфического связывания (Фигура 2B, D). Идентичные исследования были выполнены для родительского васкулотида и MPA-Br с рекомбинантным мышиным Tie2Fc и только MPA-Br с рекомбинантной Tie2Fc крысы и яванского макака (сырые данные не показаны). Определенные константы диссоциации (Kd) подробно приведены на Фигуре 2G.
[00168] Учитывая, что рекомбинантный рецептор Tie2 представляет собой слитый белок человеческого IgG Fc, была определена способность рекомбинантного человеческого IgG Fc связываться с родительским васкулотидом или MPA-Br. Примечательно, что никакого дозозависимого увеличения интенсивности флуоресценции не наблюдалось ни для одного лиганда (Фигура 2E, F).
Родительский васкулотид и MPA-Br вызывают фосфорилирование Tie2 и MAPK в HUVEC.
[00169] Потенциал активации Tie2 родительского васкулотида и MPA-Br оценивали в эндотелиальных клетках пупочной вены человека (HUVEC). Человеческие эндотелиальные клетки пупочной вены, обработанные различными дозами обоих лигандов, показали увеличение активации Tie2 и нисходящей сигнальной молекулы, MAPK (Фигура 3A, B). В целом, MPA-Br проявлял повышенную величину ответа и более широкий диапазон доз, начиная с более низких концентраций, чем родительский васкулотид; значительно активирует Tie2 в дозах от 10 до 100 нг, по сравнению только с одним значимым ответом при 1000 нг/мл для родительского васкулотида. Обработка родительским васкулотидом и MPA-Br показала характерный колоколообразный ответ на дозу для рецептора Tie2. Этот тип реакции на дозу ранее был отмечен для Tie2-лигандов и, по-видимому, является общим признаком, связанным с активацией этой рецепторной тирозинкиназы (Brkovic A, et al., 2007, Sturn DH, et al., 2005, Murdoch C, et al., 2007, Gruber BL et al., 1995 г. и Maliba R, et al., 2008 г.). Стимуляция человеческих эндотелиальных клеток пупочной вены либо родительским васкулотидом либо MPA-Br приводила к последующей активации митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK). Человеческий рекомбинантный Ang1 использовали в качестве положительного контроля для исследований активации Tie2 и MAPK.
Родительский васкулотид и MPA-Br индуцируют фосфорилирование Tie2 в HMVECtert.
[00170] Исследования активации Tie2, подобные тем, которые подробно описаны выше для человеческих эндотелиальных клеток пупочной вены (HUVEC), были завершены на эндотелиальных клетках микрососудов человека (кожного происхождения), иммортализованных теломеразой (HMVECtert). Хорошо известно, что эндотелиальные клетки из разных сосудистых русел или относительные калибры сосудов ведут себя по-разному, и такие исследования, в которых использовались клетки микрососудистого эндотелия человека (HMVECtert), облегчали сравнение в человеческих эндотелиальных клетках различного происхождения. Стимуляция HMVECtert указанными концентрациями родительского васкулотида или MPA-Br приводила к дозозависимой активации рецептора Tie2 (Фигура 3А). Опять же, дозозависимый эффект был колоколообразный, с MPA-Br, проявляющим статистически значимую агонистическую активность в концентрациях от 0,2 нг/мл до 10 нг/мл. Активация после стимуляции родительским васкулотидом проявлялась в пять раз более высокой концентрацией и варьировала от 1 нг/мл до 100 нг/мл. Относительная величина активации Tie2 была выше для MPA-Br (примерно 3,3 раза) по сравнению с родительским васкулотидом (примерно 2,6 раза) или рекомбинантным Ang1 человека (800 нг/мл). Повышенная агонистическая активность MPA-Br по сравнению с родительским васкулотидом как в HUVEC, так и в HMVECtert может быть функцией улучшенных свойств связывания, показанных для человеческого рецептора Tie2 (см. фигура 2G).
Родительский васкулотид и MPA-Br индуцируют фосфорилирование Tie2 в микрососудистых эндотелиальных клетках легких мыши (MLMVEC).
[00171] В нескольких доклинических исследованиях эффективности, подробно описанных здесь, мышей использовали в качестве тестируемого вида. Таким образом, для более конкретной оценки агонистической удельной активности Tie2 родительского васкулотида и MPA-Br была использована система культивирования клеток in vitro с использованием первичных эндотелиальных клеток легкого мыши (MLMVEC). Родительский васкулотид и MPA-Br продемонстрировали специфические для концентрации дозозависимый эффект в форме колокола. Опосредованная MPA-Br активация Tie2 была очевидна при концентрациях от 10 нг/мл до 5000 нг/мл, в то время как родительский васкулотид способствовал активации Tie2 при концентрациях от 100 нг/мл до 5000 нг/мл. Относительные величины индукции для рецептора Tie2 не различались для родительского васкулотида и MPA-Br, хотя статистически значимая активация Tie2 происходила при концентрации MPA-Br в 10 раз ниже, чем в случае родительского васкулотида.
Родительский васкулотид и MPA-Br индуцируют фосфорилирование Tie2 в первичных эндотелиальных клетках у крысы, собаки и яванского макака.
[00172] Первичные клеточные культуры клубочковых эндотелиальных клеток, эндотелиальных клеток аорты собак и клубочковых эндотелиальных клеток яванского макака стимулировали различными концентрациями MPA-Br. Во всех случаях анализы этих клеточных культур показали MPA-Br-зависимое увеличение активации Tie2. Дозозависимый эффект имел характерную форму колокола, отмеченную в исследованиях эндотелиальных клеток человека и мыши, со статистически значимым увеличением фосфорилирования Tie2-рецептора в пределах от 0,2 нг/мл до 50 нг/мл. Во всех случаях человеческий рекомбинантный Ang1 обеспечивал значительное увеличение исходного фосфорилирования Tie2 (по сравнению с отсутствием лечения (NT)).
Родительский васкулотид и MPA-Br снижают заболеваемость и смертность после воздействия гриппа X31 (H3N2)
[00173] У мышей C57Bl/6J, инфицированных вирусом гриппа (H3N2, 64HAU/мышь), развилась потеря веса (Фигура 6B, C), и он начал погибать через 5-7 дней после заражения. Эффективность родительского васкулотида, вводимого в дозе 100 нг/мышь/день, была предварительно исследована (Sugiyama MG et al., 2015) и была признана неэффективной для повышения выживаемости после заражения мышей C57Bl/6J гриппом X31. Введение родительского васкулотида (500 нг, внутрибрюшинно ежедневно - ранее определенное как оптимальное) или MPA-Br (31,25 нг или 200 нг, внутрибрюшинно ежедневно) значительно улучшало общую выживаемость инфицированных мышей (р меньше 0,001) (Фигура 6А). Кроме того, родительский васкулотид и MPA-Br значительно улучшали оксигенацию легких (SpO2), терморегуляцию и оценку активности Фигура 6 D-I). Было несколько измерений, в которых MPA-Br демонстрировал превосходство над родительским васкулотидом. Эти примеры, в частности, включают защиту от истощения (день 6, MPA-Br 200 нг/день, Фигура 6C) и оксигенацию артерий (день 6, MPA-Br 200 нг/день, Фигура 6E). MPA-Br, введенный в количестве 31,25 нг/мышь/день, представляет собой снижение дозы в 16 раз. Во всех конечных этапах исследования MPA-Br, введенный в дозе 31,25 нг/мышь/день, показал себя на том уровне или лучше чем родительский васкулотид. Это также имело место для MPA-Br 200 нг/мышь/день; снижение дозы в 2,5 раза по сравнению с родительским васкулотидом.
Фармакокинетический анализ родительского васкулотида и MPA-Br у самцов крыс Спрег-Доули
[00174] Указанные количества (мкг/кг) родительского васкулотида и MPA-Br вводили внутривенно путем болюсной инъекции самцам крыс линии Спрег-Доули. Были проведены серийные, рассчитанные по времени заборы крови и подготовлены препараты плазмы для проведения запатентованных иммуноферментных анализов, специально разработанных для количественного определения родительского васкулотида или MPA-Br. Оценка количества тестируемого агента во времени способствовала расчету фармакокинетических (ФК) показателей, включая объем распределения, клиренс и конечный период полураспада (Фигура 7A, B). Доза 120 мкг/кг обеспечила наибольшую чувствительность обнаружения в этих исследованиях и поэтому представленные измерения фармакокинетических показателей относятся к этому конкретному уровню дозы. Родительский васкулотид (Фигура 7В) и MPA-Br (Фигура 7А) демонстрировали аналогичный объем распределения и скорости клиренса, однако MPA-Br циркулировал заметно дольше, чем родительский васкулотид (t1/2 68 мин против 34 мин). Фармакокинетические показатели MPA-Br оценивали в многодозовом (MD) внутривенном введении в дозе 120 мкг/кг один раз каждые 24 часа в течение трех последовательных дней. Этот конкретный подход к дозированию не отличался от разовой дозы 120 мкг/кг внутривенно, что свидетельствует об отсутствии накопления лекарственного средства при ежедневном приеме.
Родительский васкулотид и MPA-Br снижают пропотевание жидкости из сосудов после кожного воздействия гистамина
[00175] Предыдущие исследования подчеркивали обязательную роль Tie2 в противодействии индукции пропотевания жидкости из сосудов после воздействия гистамина. В частности, мыши, которые имеют генетически дефицитный ангиопоэтин 2, естественный антагонист Tie2, при стимуляции гистамином совершенно не показали пропотевание жидкости из сосудов (Benest AV et al., Plos One, 2013). Таким образом, введение специфического агониста Tie2, как родительский васкулотид и MPA-Br было предположено для ингибирования индуцированного гистамином пропотевания жидкости из сосудов. У самцов мышей FVB, которым давали профилактическую дозу родительского васкулотида или MPA-Br за один час до применения кожного гистамина, наблюдалось значительно меньшее пропотевание жидкости из сосудов, чем у мышей, получавших носитель (инертное вещество) по оценке путем экстравазации индикаторного голубого красителя Эванса (Фигура 8А). Примечательно, что лечение родительским васкулотидом, в оптимальной дозе 500 нг/мышь, показало меньшую эффективность при уменьшении вызванного гистамином пропотевания жидкости из сосудов, чем MPA-Br в равной дозе, или в 4 раза меньше (125 нг/мышь).
Способы и материалы
Получение тетрамерного связывающего пептида Tie 2 (T7) с помощью линкера 3-меркаптопропионовой кислоты (Mpa), обеспечивающего аналог васкулотида Mpa-Br.
[00176] Обзор: Производственный процесс получения Mpa-Br требовал нескольких этапов. На первом этапе пептид Т7 и пептид, полученный из 3-меркаптопропионовой кислоты (Мра), получали с использованием методов твердофазного синтеза пептидов (FMOC). Это позволило получить Mpa-His-His-His-Arg-His-Ser-Phe-OH, который включает пептид T7 с 3-меркаптопропионильным линкером на N-конце (SEQ ID NO: 7). За этим последовало расщепление и снятие защиты, очистка с помощью ОФ-ВЭЖХ и лиофильная сушка посредством лиофилизации конечного продукта для выделения пептида Mpa-T7 в виде соли TFA. На второй стадии проводили конъюгацию Mpa-пептида с (бромацетимидом)4-PEG10K с последующим двумя уровнями очистки конъюгата PEG. Первая стадия очистки включает хроматографию ОФ-ВЭЖХ с получением соли TFA, конъюгата Mpa-Br. Этот продукт может быть выделен на данной стадии посредством лиофилизации или противоионом TFA, непосредственно замененного на ацетат в солевой форме, посредством ионообменной хроматографии без выделения промежуточного соединения соли TFA. Этот исходный продукт лиофилизировали, чтобы выделить ацетат Mpa-Br в виде легко сыпучего твердого вещества.
Производство Mpa T7-Пептида
[00177] Шаг 1: Синтез на смоле
[00178] Пептидную последовательность Т7 синтезировали на полистирольной смоле Wang (начальная функционализация 1,2 ммоль/г) с вводом смолы 40 г, используя пептидный синтезатор CS Bio. Смолу Wang загружали с Fmoc-Phe-OH, используя 8 экв. аминокислоты и 4 экв. DIC в ДМФА на 4 часа. Тест загрузки Fmoc показал, что загрузка 0,8 ммоль/г была достигнута, что соответствует синтезу в масштабе 45,4 ммоль. Все аминокислоты были поочередно пришиты, используя реагент DIC/Oxyma (3 экв., 136,2 ммоль), 0,5 М Ac2O/DMF использовали для защиты и 20% пиперидин/DMF для снятия защиты Fmoc. Пробное расщепление было выполнено после завершения пептидной последовательности Т7, и анализ ОФ-ВЭЖХ показал, что последовательность была успешно синтезирована с чистотой 77,5%.
[00179] Связывание Mpa (Sigma-Aldrich, США) со связанным со смолой пептидом T7 осуществляли используя 3 экв. Trt-Mpa-OH в присутствии 3 экв. DIC/Oxyma в DMF в течение 4 часов. После промывки смолы (от DMF, МеОН и МТВЕ) и сушки в течение ночи в вакуумном эксикаторе было получено 124,5 г конечной смолы (масса сорбированного вещества 84,5 г), что соответствует выходу синтеза 89,1%. Пробный анализ расщепления показал, что черновой пептид Mpa-T7 был получен с чистотой 78,5%. Анализ МС-ИЭР подтвердил, что Mpa-пептид образовался (наблюдаемое значение МС = 1044,4).
[00180] Шаг 2: Расщепление и снятие защиты
[00181] Связанный со смолой пептид Mpa-T7 обрабатывали раствором для расщепления следующего состава - TFA/TIS/вода/EDT (92,5: 2,5: 2,5: 2,5), в течение 3 часов. Пептид осаждали антирастворителем (iPr2O) и отделяли фильтрованием, получая сырой продукт. Связанный со смолой пептид Mpa-T7 расщепляли с получением 31,5 г сырого пептида, что соответствует общему выходу 38% и выходу 91,8%. Анализ неочищенного продукта с помощью ОФ-ВЭЖХ показал, что чистота неочищенного продукта составляла 70,5%.
[00182] Шаг 3: Очистка
[00183] Неочищенный пептид Mpa-T7 (24 г) разбавляли буфером A (15 мМ TEAP) и очищали с помощью ОФ-ВЭЖХ на колонке Luna C18(3) PREP 250×50 мм Phenomenex с градиентом 5-10% буфера B (20%). MeCN/вода) и скоростью потока 88 мл/мин. Пул продуктов очищенных от TEAP объединяли и разводили в соотношении 1 к 5 0,5% раствора TFA/вода. Половину раствора пептида загружали обратно в колонку для очистки и продукт сначала промывали на колонке с элюированием раствором водой/MeCN (10%), содержащим 0,5% TFA, перед тем как буфер B заменяли 0,1% TFA в MeCN и продукт элюировали, применяя градиент 20-60% B. Эту стадию повторяли с оставшимся раствором пептида, объединяли продукты и лиофилизировали с получением 11,4 г пептида Mpa-T7 в виде соли TFA, что соответствует общему выходу 43,7% на стадии загрузки смолы. Окончательный анализ показал содержание пептида 61% и чистоту ОФ-ВЭЖХ 96,2 %, что соответствует 6,7 г чистого пептида (выход 25,8%).
Производство Mpa-Br конъюгата
[00184] Шаг 1: Конъюгация
[00185] Реакцию конъюгации проводили путем растворения соли TFA пептида Mpa-T7 (2 ммоль) и (бромацетимида)4-PEG10K (JenKem, США, 0,48 ммоль) в буферном растворе дигидрофосфата натрия (100 мМ, рН 8) содержащем 0,13 М NaCl (120 мл). pH реакционного раствора был равен 6,5 и реакционную смесь перемешивали при 30°C в течение 22 часов. Ход реакции контролировали с помощью ОФ-ВЭЖХ и проводили до превращения приблизительно 58% 4-замещенного тетрамера бромацетимида в полностью конъюгированный продукт. По завершении реакции сырая смесь содержала порядка 30% 3-замещенных и примерно 7% 2-замещенных промежуточных продуктов. Было получено небольшое количество 1-замещенного продукта.
[00186] Шаг 2: Очистка соли Mpa-Br TFA
[00187] Реакционную смесь разбавляли буфером A (вода + 0,1% TFA) в соотношении 1:1 и проводили очистку, собирая фракции по 10 мл, используя колонку Luna C18(3) PREP 250×30 мм с градиентом 10-75% буфера B (MeCN:вода - 60:40 + 0,1% TFA) и скорости потока 42 мл/мин. Продукт, выделенный лиофилизацией на этой стадии, дает соль TFA Mpa-Br с выходом около 45% и чистотой более 99% с помощью ОФ-ВЭЖХ.
[00188] Шаг 3: Mpa-Br противоионный обмен
Конъюгат Mpa-Br с противоионом TFA представляет из себя аморфный материал с воскообразной/тягучей консистенцией. Для того чтобы определить физические характеристики, солевой обмен осуществляли непосредственно из очищенных ОФ-ВЭЖХ фракций соли Mpa-Br TFA, полученных, как описано в шаге 2. Перед лиофилизацией фракции объединяли (примерно 500 мл) и разбавляли водой в соотношении 1:1, раствор загружали в колонку ОФ-ВЭЖХ и отбирали, используя процесс ацетатного обмена в колонке Luna C18(3) PREP 250×30 мм с скоростью потока 42 мл/мин, собирая фракции по 10 мл после следующих этапов: выход колонки на равновесие (0,5М NH4OAc, содержащим 1% АсОН), загрузка образца с последующим процессом обмена (0,5М NH4OAc, содержащим 1% АсОН), стадия удаления ацетата аммония (1% АсОН, буфер А и MeCN, буфер В, 10% B) и процесс элюирования (1% AcOH, буфер A и MeCN, буфер B, 10-50% B). Продукты объединяли и лиофилизировали с получением ацетатной соли Mpa-Br в виде свободно сыпучего кристаллического твердого вещества. Анализ показал 100%-ную чистоту с помощью ОФ-ВЭЖХ, соответствующую полностью замещенному пептидному конъюгату Mpa-Br с общим выходом 42,1%. Анализ конъюгата на остаточный бром (Br) с помощью ионной хроматографии подтвердил содержание брома менее 0,1%, что указывает на полное замещение 4-замещенного бромацетимид-ПЭГ тетрамера. Дополнительный анализ ацетатной соли Mpa-Br также проведенный с помощью ИХ, показал, что чистота ацетатной соли Mpa-Br составляет 90,0%.
Флюоресцентная спектроскопия триптофана:
[00189] Взаимодействие лиганда и рецептора. 2-кратную концентрацию каждого лиганда (родительский васкулотид и MPA-Br) готовили в объеме 25 мкл и смешивали с 25 мкл 2-кратной концентраций Tie2Fc-рецептора для получения 1-кратной концентрации лиганда и рецептора в конечном объеме 50 мкл. Концентрации лиганда должны быть достаточно высокими, чтобы достичь насыщения связывания рецептора. Образцы анализировали при температуре окружающей среды с помощью спектрофотометра SpectraMaxM2, установлена длина волны возбуждения 295 нм, начало эмиссии наблюдалось при длине волны 360 нм, а окончание при длине волны 450 нм с установленным интервалом считывания 10 нм и автоматическим микшированием в течение 5 секунд перед считыванием. Данные были скомпилированы с использованием SoftMax и проанализированы с использованием Prism.
[00190] Рецепторы и лиганды. Рекомбинантные рецепторы были приобретены у R&D Systems (рекомбинантный Tie-2Fc человека, R&D Systems), рекомбинантный Tie-2Fc мыши у R&D Systems, рекомбинантный Tie2-FC крысы у R&D Systems и рекомбинантный Tie2-FC яванского макака у SinoBiological. Лиганды были изготовлены компанией Bachem (родительский васкулотид и MPA-Br). Негативный контроль IgG-FC был проведен R&D Systems. Оба рецептора и лиганды были ресуспендированы в фосфатно-солевом буфере Дульбекко (DPBS, GE Life Sciences-HyClone).
Фосфорилирование Tie2 HUVEC:
[00191] Эндотелиальные клетки пупочной вены человека (HUVEC) высевали на 100-миллиметровые планшеты для тканевых культур в полную базальную питательную среду для выращивания эндотелиальных клеток (EBM)(Lonza) с добавлением «одиночных квот EGM» (Lonza) в атмосфере 20% O2, 5% CO2 при температуре 37°C в камере влажности, в соответствии с рекомендациями производителя. Клетки, которые достигли 90% слияния, стимулировали в течение 15 минут с указанными концентрациями родительского васкулотида, MPA-Br или ангиопоэтина-1 (R&D Systems) в полной питательной среде EBM. После 15-минутной стимуляции клетки помещали на лед и дважды промывали в ледяном фосфатно-солевом буфере (PBS). Клеточные лизаты готовили для использования в буфере для лизиса IC12 (1% NP-40, 20 мМ Tris (рН 8,0), 137 мМ NaCl, 10% глицерин, 2 мМ ЭДТА, 1 мМ активированный ортованадат натрия). Набор для концентрации белка (с помощью BCA) использовали для измерения концентрации белка в каждом лизате в соответствии с инструкциями производителя (Thermo Scientific). Образцы подвергали анализу ИФА, в котором измеряли уровни фосфорилированного Tie2 и общего Tie2 в соответствии с протоколом производителя. Белок весом 20 мкг или 5 мкг из каждого образца загружали в двух экземплярах для отсчетов фосфорилированного Tie2 и общего Tie2 соответственно. Соотношения фосфорилированный Tie2:общий Tie2 были определены для каждого образца. Уровень фосфорилирования Tie2 для всех групп лечения затем нормализовали до уровня группы без лечения (только NT, полная EBM) в каждом эксперименте.
MAPK фосфорилирование HUVEC:
[00192] HUVEC культивировали, как указано выше. Лизаты готовили в (1 мМ ЭДТА, 0,5% Triton Х-100, 6М мочевина, 5 мМ NaF, 100 мМ PMSF, 25 мМ пирофосфат натрия, 1 мМ ортованадат натрия, рН 7,2-7,4, 1x cOmplete™ mini EDTA свободный от ингибитора протеазы). Набор для определения концентрации белка (с помощью BCA) использовали для измерения концентрации белка в каждом лизате в соответствии с инструкциями производителя (Thermo Scientific). Проводили ИФА образцов, который показывал уровни фосфорилированной MAPK и общей MAPK в соответствии с протоколом производителя (R&D Systems). 20 мкг или 10 мкг белка из каждого образца загружали в двух экземплярах для измерений фосфорилированной MAPK и общей MAPK соответственно. Соотношения фосфорилированная MAPK:общая MAPK, были определены для каждого образца. Уровень фосфорилирования MAPK для всех групп лечения затем нормализовали до уровня группы без лечения (NT, только EBM) в каждом эксперименте.
Фосфорилирование Tie2 HMVECtert:
[00193] Микрососудистые эндотелиальные клетки человека (кожного происхождения), иммортализованные обратной транскриптазой/каталитической субъединицей теломеразы человека (tert), Shao и Guo (2004) высевали на 100-миллиметровые планшеты для тканевых культур в полную питательную среду для выращивания эндотелиальных клеток (EBM-2)(Lonza) и культивировали в атмосфере 20% O2, 5% CO2 при температуре 37°C во влажной камере. Среда для выращивания состояла из EBM-2, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой, 1X pen/strep, 1 мкг/мл гидрокортизона и 100 нг/мл EGF. Клетки, которые достигли 90% слияния, стимулировали в течение 15 минут с указанными концентрациями родительского васкулотида, MPA-Br или ангиопоэтина-1 в плотной питательной среде EBM-2. После 15-минутной стимуляции клетки помещали на лед и дважды промывали в ледяном фосфатно-солевом буфере (PBS). Клеточные лизаты готовили для использования в буфере для лизиса IC12 (1% NP-40, 20 мМ Tris (рН 8,0), 137 мМ NaCl, 10% глицерин, 2 мМ ЭДТА, 1 мМ активированный ортованадат натрия). Набор для определения концентрации белка (с помощью BCA) использовали для измерения концентрации белка в каждом лизате. Образцы подвергали ИФА, измеряя pYTie2 и общую концентрацию Tie2. 20 мкг белка из каждого образца загружали в каждую лунку, каждый образец тестировали в двух экземплярах. Относительные соотношения pTie2 к общему количеству Tie2 были определены для каждого образца. Уровень фосфорилирования Tie-2 в каждой группе, получавшей лечение, был нормализован относительно группы, получавшей EBM, в каждом эксперименте.
Фосфорилирование Tie2 первичных эндотелиальных клеток легкого мыши
[00194] Первичные эндотелиальные клетки легкого мыши (Cell Biologics) высевали на 100-миллиметровые планшеты для тканевых культур в полную питательную среду для выращивания эндотелиальных клеток (EBM)(Lonza) с добавлением «единичных квот EGM» (Lonza). Клетки, которые достигли 90% слияния, стимулировали в течение 15 минут с указанными концентрациями родительского васкулотида, MPA-Br или ангиопоэтина-1 (R&D Systems) в полной питательной среде EBM. После 15-минутной стимуляции клетки помещали на лед и дважды промывали в ледяном фосфатно-солевом буфере (PBS). Клеточные лизаты готовили для использования в буфере для лизиса IC12 (1% NP-40, 20 мМ Tris (рН 8,0), 137 мМ NaCl, 10% глицерин, 2 мМ ЭДТА, 1 мМ активированный ортованадат натрия). Набор для концентрации белка (с помощью BCA) использовали для измерения концентрации белка в каждом лизате в соответствии с инструкциями производителя (Thermo Scientific). Проводили ИФА образцов, который показывал уровни фосфорилированной Tie2 и общей Tie2 в соответствии с протоколом производителя (Tie2 мыши, R&D Systems). Белок весом 50 мкг или 5 мкг из каждого образца загружали в трех экземплярах для отсчетов фосфорилированного Tie2 и общего Tie2 соответственно. Соотношения фосфорилированный Tie2:общий Tie2 были определены для каждого образца. Уровень фосфорилирования Tie2 для всех групп лечения затем нормализовали до уровня группы без лечения (NT, только полная EBM) в каждом эксперименте.
Фосфорилирование Tie2 первичных гломерулярных эндотелиальных клеток крысы
[00195] Первичные гломерулярные эндотелиальные клетки крысы (Cell Biologics) выращивали в полной питательной среде для выращивания эндотелиальных клеток крысы /w набор (Cell Biologics) в камере увлажнения с 20% O2, 5% CO2 при температуре 37°C и разделяли в соотношении 1:3 после достижения слияния 80-90%. Чтобы исследовать активацию Tie2 MPA-Br в клубочковых эндотелиальных клетках почек крыс, стимулировали 95-100% сливающихся клеток, указанными концентрациями тестируемого агента в содержащей сыворотку среде, в течение 15 минут. Человеческий Ang-1 (R&D Systems) использовали в качестве положительного контроля. Клеточные лизаты собирали с использованием буфера для лизиса IC12 (подробно описано выше), рекомендованного в наборе ИФА для фосфо-Tie-2 человека (R&D Systems), фосфорилированный тирозин Tie2 и общий Tie2 измеряли с использованием ИФА (наборы ИФА для фосфо-Tie2 человека и общего Tie2 человека, R&D Systems) с заменой захватывающего антитела, подтвержденного для крысиного Tie2. Мышиное антитело к Tie2 (BD Pharmingen™) и кроличьи поликлональные антитела TEK (MyBioSource) использовали в качестве захватывающего антитела в pTie2 и в общем анализе Tie2 ИФА соответственно. Уровень фосфорилирования Tie2 для всех групп лечения затем нормализовали до уровня группы без лечения (NT, полная питательная среда для выращивания эндотелиальных клеток крысы) в каждом эксперименте.
Tie2 фосфорилирование первичных эндотелиальных клеток аорты собаки:
[00196] Первичные эндотелиальные клетки аорты собаки (Cell Biologics) выращивали в полной питательной среде для выращивания эндотелиальных клеток собаки /w набор (Cell Biologics) в камере увлажнения с 20% O2, 5% CO2 при температуре 37°C и разделяли в соотношении 1:3 после достижения слияния 80-90%. Исследования активации Tie2, выполненные на первичных гломерулярных эндотелиальных клетках яванского макака, проводили в соответствии с подходами, подробно описанными выше для исследований первичных гломерулярных эндотелиальных клеток крыс.
Фосфорилирование Tie2 первичных гломерулярных эндотелиальных клеток яванского макака:
[00197] Первичные гломерулярные эндотелиальные клетки яванского макака (Cell Biologics) культивировали в соответствии с данными, представленными выше для HMVECtert. Исследования активации Tie2, выполненные на первичных гломерулярных эндотелиальных клетках яванского макака, проводили в соответствии с подходами, подробно описанными выше для исследований первичных гломерулярных эндотелиальных клеток крыс.
Кожная провокационная проба с гистамином:
[00198] Самцов FVB мышей 10-недельного возраста закупали в Jackson Laboratories. Мышей содержали в виварии на стандартном цикле свет : темнота и давали свободный доступ к еде и воде. В день 0 мышей анестезировали изофлураном и всю дорсальную область брили электробритвой. Остаточные волосы были удалены с помощью крема для депиляции. Остатки крема удаляли стерильной марлей и водой. В день 4 мыши получали либо контрольный носитель (стерильный PBS), родительский васкулотид, либо MPA-Br в виде 200-мкл внутрибрюшинной инъекции. Через один час после введения мышам PBS/родительского Vasculotide/MPA-Br их анестезировали изофлураном, после чего 100 мкл 1% голубого красителя Эванса (содержащегося в стерильном PBS) вводили внутривенно через хвостовую вену. Сразу же после введения голубого красителя Эванса и еще под наркозом делали одну инъекцию PBS (дорсальную, внутрикожную, 50 мкл) и три одинаково расположенные инъекции гистамина (дорсальная, внутрикожная, 1,25 мкг, содержащиеся в 50 мкл). Как только внутрикожные инъекции были завершены, мышей вывели из наркоза и поместили обратно в их клетки на 25 минут.
[00199] Трансперфузия сердца
После 25 минут воздействия гистамина мышей помещали под наркоз соответствующим объемом 2,5% авертина (100 мкл/10 г. массы тела посредством внутрибрюшинной инъекции). После того, как была достигнута стадия глубокой анестезии, мышей закрепили в положении лежа на спине, грудную клетку открыли хирургическим путем, обнажили сердце и в левый желудочек установили катетер, заканчивающийся иглой 23 размера. Как только катетер был надежно закреплен, был произведен разрез в правом предсердии и через катетер под давлением 100 мм рт. ст. ввели 25 мл холодного PBS для вымывания всего внутрисосудистого голубого красителя Эванса. После того, как мышь эффективно перфузировали, спинную кожу удаляли хирургическим путем. Четыре 12-миллиметровых биоптата кожи (1PBS, 3 гистамина) были собраны у каждой мыши по стандартизированной методике. Во всех случаях PBS биопсия, служила в качестве исходного контроля для данной мыши.
[00200] Количественная оценка экстравазации голубого красителя Эванса. Биоптаты кожи помещали в маркированные пробирки, а затем в печь с температурой 60°C на 16 часов для удаления всей влаги. Биоптаты высушенной кожи взвешивали, помещали в пробирки, содержащие 1,5 мл формамида, затем помещали в водяную баню с температурой 60°C на 72 часа. Через 72 часа пробирки центрифугировали при относительной центробежной силе (RCF) 500 и 100 мкл образца удаляли на 96-луночный планшет с плоским дном для микротитрования и проведении анализа при длине волны 620 и 405 нм. Стандартная кривая концентрации голубого красителя Эванса, охватывающая высокие и низкие экспериментальные данные, была построена таким образом, чтобы можно было рассчитать величину экстравазации голубого красителя Эванса (мкг/г кожи).
Исследование гриппа:
[00201] Экспериментальный дизайн. Были приобретены мыши C57BL/6J четырнадцати недельного возраста (Jackson Laboratories). Мышей содержали в виварии на стандартном цикле свет : темнота и давали свободный доступ к еде и воде. Во всех экспериментах мышей седатировали 5%-ным изофлюраном и интраназально инфицировали вирусом гриппа (см. Раздел «Вирус» ниже), разведенным в PBS до конечного объема 80 мкл. После заражения мышей разделили на контрольные и лечебные группы, соответствующие по весу; в каждой группе экспериментального лечения использовали десять мышей, их инфицировали 64 гемоагглютинирующими единицами (HAU) вируса гриппа, что к 7 дню привело к 100% смертности. Следующие группы были исследованы: мыши, которые получали только вирус гриппа (Flu), инфицированные мыши, которые также получали родительский васкулотид (500 нг в 0,1 мл PBS путем внутрибрюшинной инъекции) или MPA-Br (200 нг или 31,25 нг в 0,1 мл PBS путем внутрибрюшинной инъекции). Терапия родительским васкулотидом или MPA-Br начиналась через 48 часов после заражения и проводилась один раз каждые 24 часа на протяжении всего исследования. Контрольные мыши (грипп) получали ежедневную внутрибрюшинную инъекцию 0,1 мл PBS, начиная с 48 часов после заражения, на протяжении всего исследования.
[00202] Вирус. Вирус A гриппа HKx31 (H3N2) был первоначально получен от доктора Tania Watts и размножен в соответствии с Szretter, K.J., Balish, A.L. & Katz, J.M., 2006. Титр вируса из культурального супернатанта определяли, выполняя стандартный налетообразующий анализ в клетках MDCK (клетки Мадни-Дарби почек собаки) или путем измерения агглютинации эритроцитов овцы (единицы гемагглютинина, HAU).
[00203] Пульсоксиметрические измерения. Насыщение артериальной крови кислородом измеряли с помощью устройства и программного обеспечения Mouse Ox Plus (Starr Life Sciences, Oakmont, PA) у бодрствующих (не анестезированных) мышей с использованием зажимов с маленьким воротником для C57BL/6J. У мышей C57BL/6J химический депиляционный крем использовали для удаления волос вокруг основания шеи за несколько дней до заражения. Для измерений SO2 мышам позволяли привыкнуть к зажиму воротника в течение нескольких минут в их клетке перед записью максимального измерения SO2.
Правила оценки активности
[00204] Мышей наблюдали два раза в день, взвешивали один раз в день и присваивали им балл активности от 1 до 5. Чтобы получить оценку 5, мышь должна проявлять нормальное активное и любопытное поведение. Она движется вдоль границы клетки и становится на решетку. Для присвоения оценки 4 мышь должна быть не так активна. Она не встает так часто и предпочитает оставаться в углах клетки. При значении 3 мышь менее активна и когда она часто останавливается и садится при движении. Она остается в углу гнезда. При значении 2 мышь перемещается только при касании и только на короткое расстояние. Она старается прятаться в углу гнезда. Наконец, при значении 1 мышь агонирует. Оценки активности 5-3 считаются приемлемыми. Мыши, имеющие показатель активности 2, тщательно контролировались, и если их активность снижалась ниже 2 баллов, ими жертвовали. Кроме того, мышей, которые испытывают потерю веса более чем на 30%, независимо от приемлемого в других отношениях показателя активности, подвергали эвтаназии.
[00205] Общие методики реакции Майкла
[00206] Активированный тетрамер PEG (такой как винилсульфон или акрилат) (117-118 мг, 1 экв.) и Mpa-пептид (100 мг, 1,5 экв.) добавляли в 50 миллилитровую круглодонную колбу, защищенную от света, и PBS (pH 6,5*, 20 мл) добавляли до конечной концентрации пептида 5 мг/мл. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре, рН проверяли, используя рН-метр и ход реакции контролировали с помощью ВЭЖХ через различные промежутки времени. Реакционную смесь подкисляли до рН 3,5 перед очисткой, используя следующие стадии:
Шаг 1 Flash LC:
Градиентный профиль: 10-100 % B за 63 минуты
Элюенты: Элюент А = 0,1% TFA в воде
Элюент B = 0,1% TFA в 60% ацетонитрила, 40% воды
Обнаружение: УФ (λ = 210 нм / 254 нм)
Температура колонки: КТ
Скорость потока: 40 мл/мин
Шаг 2: препаративная ВЭЖХ:
Градиентный профиль: 45-100% B за 77 минуты
Элюенты: Элюент А = 0,1% HFBA в 3% ацетонитриле в воде
Элюент B = 0,1% HFBA в 60% ацетонитрила, 40% воды
Обнаружение: УФ (λ = 210 нм)
Температура колонки: КТ
Скорость потока: 30 мл/мин
Шаг 3: препаративная ВЭЖХ:
Градиентный профиль: 40-100 % B за 84 минуты
Элюенты: Элюент А = 0,1% TFA в воде
Элюент B = 0,1% TFA в 60% ацетонитрила, 40% воды.
Выход конъюгата винилсульфон-ПЭГ составляет 48 мг, а конъюгата акрилат-ПЭГ - 15,2 мг, оба в виде солей TFA.
Хотя настоящее изобретение было описано со ссылкой на то, что в настоящее время считается примерами, следует понимать, что изобретение не ограничивается раскрытыми примерами. Напротив, изобретение предназначено для охвата различных модификаций и эквивалентных устройств, включенных в сущность и объем прилагаемой формулы изобретения.
Все публикации, патенты и патентные заявки включены в настоящий документ посредством ссылки во всей их полноте в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация, патент или патентная заявка были специально и индивидуально указаны для включения в качестве ссылки во всей своей полноте.
ЛИТЕРАТУРА
Berge SM, Bighley LD, Monkhouse DC, "Pharmaceutical salts" J Pharm Sci. 1977 Jan; 66(1):1-19.
Bourdeau A, Van Slyke P, Kim H, Cruz M, Smith T, Dumont DJ, "Vasculotide, an Angiopoietin-1 mimetic, ameliorates several features of experimental atopic dermatitis-like disease" BMC Res Notes. 2016 May 28; 9:289.
Brkovic A, Pelletier M, Girard D, Sirois MG, "Angiopoietin chemotactic activities on neutrophils are regulated by PI-3K activation" J Leukoc Biol. 2007 Apr; 81(4):1093-101.
Cho CH, Kammerer RA, Lee HJ, Steinmetz MO, Ryu YS, Lee SH, Yasunaga K, Kim KT, Kim I, Choi HH, Kim W, Kim SH, Park SK, Lee GM, Koh GY, "COMP-Ang1: a designed angiopoietin-1 variant with nonleaky angiogenic activity" Proc Natl Acad Sci U S A. 2004 Apr 13; 101(15): 5547-52.
Eichenfield LF, Hanifin JM, Beck LA, Lemanske RF Jr, Sampson HA, Weiss ST, Leung DY, "Atopic dermatitis and asthma: parallels in the evolution of treatment" Pediatrics. 2003 Mar; 111(3): 608-16.
Gruber BL, Marchese MJ, Kew R, "Angiogenic factors stimulate mast-cell migration" Blood. 1995 Oct 1; 86(7): 2488-93.
Kim W, Moon SO, Lee SY, Jang KY, Cho CH, Koh GY, Choi KS, Yoon KH, Sung MJ, Kim DH, Lee S, Kang KP, Park SK, "COMP-angiopoietin-1 ameliorates renal fibrosis in a unilateral ureteral obstruction model" J Am Soc Nephrol. 2006 Sep; 17(9): 2474-83.
Kuiken T, Taubenberger JK, "Pathology of human influenza revisited" Vaccine. 2008 Sep 12; 26 Suppl 4:D59-66.
Maliba R, Brkovic A, Neagoe PE, Villeneuve LR, Sirois MG, "Angiopoietin-mediated endothelial P-selectin translocation: cell signaling mechanisms" J Leukoc Biol. 2008 Feb; 83(2): 352-60.
Murdoch C, Tazzyman S, Webster S, Lewis CE, "Expression of Tie-2 by human monocytes and their responses to angiopoietin-2" J Immunol. 2007 Jun 1; 178(11): 7405-11.
Parikh SM, "Dysregulation of the angiopoietin-Tie-2 axis in sepsis and ARDS" Virulence. 2013 Aug 15; 4(6): 517-24.
Riley CM, Fuegy PW, Firpo MA, Shu XZ, Prestwich GD, Peattie RA "Stimulation of in vivo angiogenesis using dual growth factor-loaded crosslinked glycosaminoglycan hydrogels" Biomaterials. 2006 Dec; 27(35): 5935-43.
Stypmann J, Van Slyke P, Dumont DJ, Spieker T, Buscher K, Reuter S, Goerge T, "The Synthetic Tie2 Agonist Peptide Vasculotide Protects Renal Vascular Barrier Function In Experimental Acute Kidney Injury" Sci Rep. 2016 Feb 25; 6:22111.
Shao R, Guo X, "Human microvascular endothelial cells immortalized with human telomerase catalytic protein: a model for the study of in vitro angiogenesis" Biochem Biophys Res Commun. 2004 Sep 3; 321(4):788-94.
Sturn DH, Feistritzer C, Mosheimer BA, Djanani A, Bijuklic K, Patsch JR, Wiedermann CJ, "Angiopoietin affects neutrophil migration" Microcirculation. 2005 Jul-Aug; 12(5):393-403.
Sugiyama MG, Armstrong SM, Wang C, Hwang D, Leong-Poi H, Advani A, Advani S, Zhang H, Szaszi K, Tabuchi A, Kuebler WM, Van Slyke P, Dumont DJ, Lee WL, " The Tie2-agonist Vasculotide rescues mice from influenza virus infection" Sci Rep. 2015 Jun 5; 5:11030.
Szretter KJ, Balish AL, Katz JM, "Influenza: propagation, quantification, and storage" Curr Protoc Microbiol. 2006 Dec; Chapter 15: Unit 15G.1.
Thamm K, Njau F, Van Slyke P, Dumont DJ, Park JK, Haller H, David S, "Pharmacological Tie2 activation in kidney transplantation" World J Transplant. 2016 Sep 24; 6(3):573-82.
Tournaire R, Simon MP, le Noble F, Eichmann A, England P, , "A short synthetic peptide inhibits signal transduction, migration and angiogenesis mediated by Tie2 receptor" EMBO Rep. 2004 Mar; 5(3): 262-7.
Van Slyke P, Alami J, Martin D, Kuliszewski M, Leong-Poi H, Sefton MV, Dumont D "Acceleration of diabetic wound healing by an angiopoietin peptide mimetic" Tissue Eng Part A. 2009 Jun; 15(6): 1269-80.
Wu X, Zhao R, Li Z, Yao M, Wang H, Han J, Qu S, Chen X, Qian L, Sun Y, Xu Y, Gu J, "A novel small peptide as a targeting ligand for receptor tyrosine kinase Tie2" Biochem Biophys Res Commun. 2004 Mar 19; 315(4): 1004-10.
Zhang ZG, Zhang L, Croll SD, Chopp M, "Angiopoietin-1 reduces cerebral blood vessel leakage and ischemic lesion volume after focal cerebral embolic ischemia in mice" Neuroscience. 2002; 113(3): 683-7.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Vasomune Therapeutics Inc.
Sunnybrook Research Institute
АГЕНТ, СПОСОБСТВУЮЩИЙ АНГИОГЕНЕЗУ И МЕТОДЫ ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ
<130> 23632-P52201PC00
<150> 62/446 030
<151> 13.01.2017
<160> 7
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 1
His His His Arg His Ser Phe
1 5
<210> 2
<211> 22
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 2
Trp Thr Ile Ile Gln Arg Arg Glu Asp Gly Ser Val Asp Phe Gln Arg
1 5 10 15
Thr Trp Lys Glu Tyr Lys
20
<210> 3
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 3
Asn Leu Leu Met Ala Ala Ser
1 5
<210> 4
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 4
Lys Leu Trp Val Ile Pro Lys
1 5
<210> 5
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 5
His Pro Trp Leu Thr Arg His
1 5
<210> 6
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<400> 6
Cys His His His Arg His Ser Phe
1 5
<210> 7
<211> 7
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический пептид
<220>
<221> ПРОЧНЫЙ_ПРИЗНАК
N-конец имеет МрА
<400> 7
His His His Arg His Ser Phe
1 5
<---
Claims (54)
1. Соединение формулы (I):
где
n представляет собой целое число от 50 до 60 или около 55; а также
R представляет собой His-His-His-Arg-His-Ser-Phe (SEQ ID NO: 1);
или его фармацевтически приемлемая соль, предназначенное для активации рецептора Tie 2 и/или стимуляции ангиогенеза.
2. Фармацевтическая композиция для активации рецептора Tie 2 и/или стимуляции ангиогенеза, содержащая эффективное количество соединения по п. 1.
3. Фармацевтическая композиция по п. 2, которая содержит фармацевтически приемлемый носитель, пригодный для ингаляции и/или местного, системного, перорального, интраназального или парентерального введения.
4. Способ получения соединения по п. 1, включающий
(i) реакцию пептида, который представляет собой пептид T7, состоящий из SEQ ID NO: 1, с тиоловым соединением формулы (II)
получение соединения формулы (III) или его соли
(ii) взаимодействие соединения формулы (III) с ПЭГ-тетрамером формулы (IV)
с получением указанного соединения или его фармацевтически приемлемой соли;
где переменные n, X и Y соответствуют указанным в п. 1, LG представляет собой подходящую замещаемую группу, выбранную из галогена, тозилата или мезилата, а PG представляют собой H или подходящую защитную группу, такую как тритил.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что подходящая заменяемая группа представляет собой галоген.
6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что галоген представляет собой бром.
7. Способ по п. 5, отличающийся тем, что PG означает тритил.
8. Способ активации рецептора Tie 2 у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту соединения по п. 1 или фармацевтической композиции по п. 2 или 3.
9. Способ местной стимуляции ангиогенеза у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту соединения по п. 1 или фармацевтической композиции по п. 2 или 3.
10. Способ по п. 9, отличающееся тем, что соединение формулируют для ингаляции и/или местного, системного, перорального, интраназального или парентерального введения.
11. Способ по п. 9 или 10, дополнительно включающее введение субъекту второго ангиогенного агента.
12. Способ по п. 11, где вторым ангиогенным агентом является фактор роста сосудистого эндотелия (VEGF).
13. Способ по п. 11, где второй ангиогенный агент выбран из группы, состоящей из PDGF, G-CSF, рекомбинантного человеческого эритропоэтина, bFGF, ингибитора Ang2 и фактора роста плаценты (PLGF).
14. Способ по любому из пп. 9-13, отличающееся тем, что ангиогенез стимулируют в клинической ситуации, выбранной из группы, состоящей из васкуляризации регенеративных тканей, ишемической болезни конечностей, церебральной ишемии, состояния сосудистого воспаления, артериосклероза, аваскулярного некроза, стимуляции роста волос и эректильной дисфункции.
15. Способ уменьшения проницаемости сосудов в месте пропотевания жидкости из сосудов у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту соединения по п. 1 или фармацевтической композиции по п. 2 или 3.
16. Способ по п. 15, где проницаемость сосудов снижается в клинической ситуации, выбранной из группы, состоящей из инсульта, макулярной дегенерации, макулярного отека, лимфатического отека, разрушения гематоретинального барьера, разрушения гематоэнцефалического барьера, пропотевания жидкости из сосудов, вызванного бактериями, и нормализации сосудистой сети опухоли.
17. Способ защиты эндотелиальных клеток у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту соединения по п. 1 или фармацевтической композиции по п. 2 или 3.
18. Способ по п. 17, где эндотелиальные клетки защищены в клинической ситуации, выбранной из группы, состоящей из повреждения почек, такого как острое повреждение почек, фиброза почек, инсульта, дегенерации желтого пятна, сосудистой деменции и осложнений диабета.
19. Способ по п. 17, где эндотелиальные клетки защищены в клинической ситуации повреждения легких.
20. Способ стимуляции заживления раны у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту соединения по п. 1 или фармацевтической композиции по п. 2 или 3.
21. Способ по п. 20, где соединение формулируют для ингаляции и/или местного, системного, перорального, интраназального или парентерального введения.
22. Способ по п. 20 или 21, где рана представляет собой диабетическую язву.
23. Способ по п. 20 или 21, где рана выбрана из группы, состоящей из пролежня, пролежневой язвы, хирургического разреза, травматического повреждения ткани, ожога и кожного трансплантата.
24. Способ ингибирования размножения клеток CFU-G у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту соединения по п. 1 или фармацевтической композиции по п. 2 или 3.
25. Способ по п. 24, где CFU-G клетки представляют собой эозинофилы и/или базофилы.
26. Способ лечения состояния, связанного с эозинофилами и базофилами, у субъекта, нуждающегося в этом, где указанное состояние выбрано из атопического дерматита, астмы и аллергического ринита, включающий введение субъекту соединения по п. 1 или фармацевтической композиции по п. 2 или 3.
27. Способ лечения состояния, связанного с эозинофилами и базофилами, у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту соединения по п. 1 или фармацевтической композиции по п. 2 или 3.
28. Способ по п. 27, отличающееся тем, что состояние, связанное с эозинофилами и базофилами, выбрано из лейкоза эозинофильного и базофильного происхождения, воспалительного заболевания кишечника и паразитарной инфекции.
29. Способ снижения уровней одного или более воспалительных цитокинов и хемокинов у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту соединения по п. 1 или фармацевтической композиции по п. 2 или 3, где один или более воспалительных цитокинов и хемокинов выбирают из эотаксина, IL-17, MIG, IL12/IL23 (p40), IL-9, MIP-1a, MIP-1b, RANTES, TNF-α, IL-1β, IL-5, IL-13 и MCP-1.
30. Способ по п. 29, где воспалительный цитокин и хемокин представляет собой эотаксин.
31. Способ по любому из пп. 24-30, где соединение вводят местно, системно, интраназально или ингаляционно.
32. Способ по любому из пп. 8-31, где субъект является человеком.
33. Способ лечения животного, инфицированного пневмонией, где пневмония выбрана из первичной вирусной пневмонии и бактериальной пневмонии, которая возникает одновременно с инфекцией гриппа или после нее, включающий введение субъекту соединения по п. 1 или фармацевтической композиции по п. 2 или 3.
34. Способ по п. 33, где противовирусный агент вводят животному одновременно или последовательно с указанным соединением.
35. Способ по п. 34, где противовирусный агент представляет собой амантадин, римантадин, занамивир, перамивир, вирамидин, рибавирин или осельтамивир.
36. Способ по любому из пп. 33-35, где животное является человеком, а грипп является человеческим гриппом.
37. Композиция для лечения первичной вирусной пневмонии, содержащая (а) соединение по п. 1 и (b) противовирусный агент.
38. Набор для лечения гриппа, содержащий (а) соединение по п. 1, (b) противовирусный агент и (с) инструкции по применению набора для лечения животного или клетки, инфицированной гриппом.
39. Композиция по п. 37, где противовирусный агент представляет собой амантадин, римантадин, занамивир, перамивир, вирамидин, рибавирин или осельтамивир.
40. Набор по п. 38, где противовирусный агент представляет собой амантадин, римантадин, занамивир, перамивир, вирамидин, рибавирин или осельтамивир.
41. Биоматериал, полученный смешиванием коммерческого Matrigel или сшитого гидрогель гликозаминогликана с соединением по п. 1 и дополнительным вторым биологически активным соединением, выбранным из группы, состоящей из VEGF, PDGF, G-CSF, рекомбинантного человеческого эритропоэтина, bFGF, ингибитора Ang2 и фактора роста плаценты (PLGF), для имплантации субъекту для стимуляции ангиогенеза у субъекта.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762446030P | 2017-01-13 | 2017-01-13 | |
US62/446,030 | 2017-01-13 | ||
PCT/CA2018/050022 WO2018129618A1 (en) | 2017-01-13 | 2018-01-11 | An agent for promoting angiogenesis and methods and uses thereof |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2019123694A RU2019123694A (ru) | 2021-02-15 |
RU2019123694A3 RU2019123694A3 (ru) | 2021-06-30 |
RU2771982C2 true RU2771982C2 (ru) | 2022-05-16 |
Family
ID=
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008049227A1 (en) * | 2006-10-27 | 2008-05-02 | Sunnybrook Health Sciences Center | Multimeric tie 2 agonists and uses thereof in stimulating angiogenesis |
RU2349347C2 (ru) * | 2004-02-17 | 2009-03-20 | Эдванст Протеин Системз Лимитед | Повязки на рану, содержащие белковый полимер и полифункциональный спейсер |
WO2014165963A1 (en) * | 2013-04-11 | 2014-10-16 | Sunnybrook Research Institute | Methods, uses and compositions of tie2 agonists |
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2349347C2 (ru) * | 2004-02-17 | 2009-03-20 | Эдванст Протеин Системз Лимитед | Повязки на рану, содержащие белковый полимер и полифункциональный спейсер |
WO2008049227A1 (en) * | 2006-10-27 | 2008-05-02 | Sunnybrook Health Sciences Center | Multimeric tie 2 agonists and uses thereof in stimulating angiogenesis |
WO2014165963A1 (en) * | 2013-04-11 | 2014-10-16 | Sunnybrook Research Institute | Methods, uses and compositions of tie2 agonists |
Non-Patent Citations (1)
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9938320B2 (en) | Peptides for promoting angiogenesis and use thereof | |
JP7126270B2 (ja) | Npraアゴニスト、組成物およびその使用 | |
US20220372095A1 (en) | An agent for promoting angiogenesis and methods and uses thereof | |
JP2021176875A (ja) | ポリエチレングリコール(peg)−インターロイキン11(il−11)コンジュゲートを生成するための反応中間体、および、peg−il−11コンジュゲートを精製する方法 | |
RU2771982C2 (ru) | Агент, способствующий ангиогенезу, и методы его использования | |
US20240083962A1 (en) | Agent for promoting angiogenesis and methods and uses thereof | |
AU2021251096B2 (en) | Coronavirus therapeutics and treatment methods | |
US9249185B2 (en) | Peptides for promoting angiogenesis and an use thereof | |
WO2022054825A1 (ja) | ウイルス性感染症を有する対象における症状又は障害を予防又は治療するための医薬 | |
Zayas Arrabal | Effects of Kv1. 3 inhibition in type 2 diabetes-induced cardiac electrical remodeling. | |
KR20160127017A (ko) | 폐내 염증의 완화 |