RU2771205C1 - Количественная оценка соотношения hsa-miR-30c-5/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA в плацентарной площадке женщин в день родоразрешения на сроке более 34 недель гестации как способ дифференциальной диагностики синдрома задержки развития плода, преэклампсии и синдрома маловесного к сроку гестации плода - Google Patents

Количественная оценка соотношения hsa-miR-30c-5/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA в плацентарной площадке женщин в день родоразрешения на сроке более 34 недель гестации как способ дифференциальной диагностики синдрома задержки развития плода, преэклампсии и синдрома маловесного к сроку гестации плода Download PDF

Info

Publication number
RU2771205C1
RU2771205C1 RU2021102705A RU2021102705A RU2771205C1 RU 2771205 C1 RU2771205 C1 RU 2771205C1 RU 2021102705 A RU2021102705 A RU 2021102705A RU 2021102705 A RU2021102705 A RU 2021102705A RU 2771205 C1 RU2771205 C1 RU 2771205C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
hsa
mir
log
range
myl6
Prior art date
Application number
RU2021102705A
Other languages
English (en)
Inventor
Анжелика Владимировна Тимофеева
Иван Сергеевич Федоров
Виталий Викторович Чаговец
Наталия Леонидовна Стародубцева
Владимир Евгеньевич Франкевич
Роман Георгиевич Шмаков
Геннадий Тихонович Сухих
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority to RU2021102705A priority Critical patent/RU2771205C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2771205C1 publication Critical patent/RU2771205C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label

Abstract

Изобретение относится к области биомедицины, в частности к акушерству и молекулярной биологии, и предназначено для дифференциальной диагностики синдрома задержки развития плода (СЗРП), преэклампсии (ПЭ) и синдрома маловесного к сроку гестации плода. Осуществляют количественную оценку соотношения hsa-miR-30c-5p/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA в плацентарной площадке женщин в день родоразрешения на сроке более 34 недель гестации. Осуществляют расчет логарифмированных по основанию два значений указанных соотношений. На основании указанного расчета дифференцируют СЗРП, ПЭ и синдром маловесного к сроку гестации плода. Изобретение обеспечивает верификацию диагноза, выставленного по клинико-лабораторным методам исследования, в день родоразрешения для выбора оптимальной тактики ведения матери и ребенка с целью профилактики возможных послеродовых осложнений. 1 ил., 4 табл., 1 пр.

Description

Изобретение относится к области биомедицины, а именно - к акушерству и молекулярной биологии, к способу дифференцировки патогенетических особенностей синдрома задержки развития плода (СЗРП), преэклампсии (ПЭ) и синдрома маловесного к сроку гестации плода («маловесный плод») в день родоразрешения на сроке более 34 недель гестации по содержанию hsa-miR-30c-5p, hsa-miR-28-3р, hsa-miR-1-3р, hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-185-3р, hsa-miR-654-3р, мРНК YWHAZ, мРНК FGA, мРНК VIM, мРНК ANXA2, мРНК FBN1, мРНК FLNA, двух транскрипционных вариантов мРНК MYL6, включающих транскрипционный вариант 1 и транскрипционный вариант 2, именуемые далее MYL6 tr.v.1 и MYL6 tr.v.2, соответственно, в плацентарной площадке методом количественной ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция, сопряженная с обратной транскрипцией) в реальном времени для последующего расчета логарифмированных по основанию два значений соотношения hsa-miR-30c-5p/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA. Может быть использовано для верификации диагноза, выставленного по клинико-лабораторным методам исследования, в день родоразрешения для выбора оптимальной тактики ведения матери и ребенка с целью профилактики возможных послеродовых осложнений. С целью решения долгосрочных задач может быть использовано для разработки профилактических мер по предотвращению развития СЗРП, ПЭ и синдрома «маловесный плод» на этапе планирования беременности и в течение беременности для снижения риска осложнений у матери и плода в связи с участием указанных молекул в регуляции работы системы гемостаза, иммунной системы и ангиогенеза.
Аномальная плацентация рассматривается как ключевой патогенетический механизм ПЭ и СЗРП [1]. Как следствие, структурные и функциональные дефекты плаценты предрасполагают к возникновению ряда хронических заболеваний у матери и ребенка после родов, являются причиной перинатальной гибели плода и материнской смертности [2-4]. Согласно мировой статистике, ПЭ встречается в 2-8% беременностей и характеризуется гипертонией, протеинурией и/или периферическими отеками с дополнительными признаками полиорганной недостаточности в зависимости от ее формы: легкой, средней и тяжелой [5, 6]. Тип ПЭ с поздним началом с клиническими проявлениями после 34 недели гестации составляет более 80% всех случаев ПЭ и ассоциирован с нормальным или слегка измененным функциональным состоянием спиральных маточных артерий и отсутствием признаков ЗРП. Тип раннего начала ПЭ (клиническое проявление до 34 недели гестации) включает наиболее тяжелые случаи ПЭ (5-20%) и связан с неполной инвазией вневорсинчатых клеток цитотрофобласта спиральных маточных артерий, что приводит к изменению гемодинамики в системе «мать-плод», гипоксическому повреждению плаценты, системному эндотелиозу сосудов матери с развитием полиорганной недостаточности, нарушению кровотока в пуповинных артериях и развитию СЗРП.
Синдром ЗРП встречается в 5-10% беременностей, характеризуется медленным внутриутробным ростом плода с предполагаемой его массой менее 10-го перцентиля для данного срока беременности как и при синдроме «маловесного плода», но в отличие от последнего при СЗРП отмечаются аномальные показатели кровотока в сосудах плода и пуповине [7, 8]. Ранний СЗРП (выявление клинических признаков до 32 недели беременности) отличается от позднего СЗРП (выявление клинических признаков после 32 недели беременности) по тяжести плацентарной дисфункции [9]. СЗРП с поздним началом манифестации клинических признаков характеризуется более благоприятными исходами, однако имеются сложности в дифференциальной диагностике с конституционально маловесными плодами [10].
На сегодняшний день отсутствуют молекулярно-биологические данные для четкого понимания патогенетических различий СЗРП и ПЭ, а значит отсутствуют предпосылки для разработки оптимальной терапевтической профилактики развития данных синдромов и их осложнений. В предварительных исследованиях методами глубокого секвенирования малых РНК и белковой масс-спектрометрии коллективом настоящего изобретения продемонстрированы наибольшие статистически значимые изменения уровня экспрессии микроРНК (мкРНК) и белок-кодирующих генов в плацентарной площадке пациенток с СЗРП в отличие от ПЭ, при которой основные изменения транскриптомного и протеомного профилей происходят в ткани плаценты (Фиг. 1). мкРНК являются малыми некодирующими РНК длиной в среднем около 22 нуклеотидов, которые регулируют функцию кодирующего белок гена путем комплементарного взаимодействия с матричной РНК (мРНК), обусловливающего снижение стабильности мРНК и/или ингибирование трансляции соответствующего белка. Одна и та же мкРНК может участвовать в регуляции сотни генов-мишеней, в то время как каждый из структурных генов является мишенью для различных мкРНК [11]. Теоретически, экспрессия 60% генов человека находится под контролем мкРНК [12]. мкРНК участвуют во всех биологических процессах, включая метаболизм, пролиферацию, дифференцировку, подвижность и апоптоз клетки. Аномальная экспрессия мкРНК и, соответственно, их генов-мишеней различных сигнальных путей, участвующих в дифференцировке трофобласта и регуляции маточно-плацентарного кровотока, ассоциирована с ПЭ и СЗРП [13]. В связи с этим, важным показателем нарушенной активности сигнальных путей является соотношение мкРНК и их генов-мишеней в ткани плаценты или плацентарной площадки для дифференциальной диагностики ПЭ, СЗРП и синдрома «маловесного плода».
В качестве прототипа предлагаемого метода взят способ, описанный в [14], согласно которому методом количественной ПЦР в реальном времени возможно определить содержание РНК в ткани или биологической жидкости организма посредством циклической реакции амплификации кДНК, являющейся копией РНК и синтезируемой в ходе реакции обратной транскрипции.
Количественное определение мкРНК или мРНК гена-мишени методом ОТ-ПЦР в реальном времени включает в себя три этапа: 1) синтез кДНК (в ходе сопряженных реакций полиаденилирования и обратной транскрипции мкРНК с олиго(дТ), сцепленного с универсальным праймером; или в ходе обратной транскрипции со случайного шестинуклеотидного праймера); 2) амплификацию последовательности кДНК путем цикличной реакции денатурации ДНК, отжига специфичного для мкРНК или мРНК смыслового и антисмыслового праймера, удлинения праймеров ДНК-полимеразой с одновременной детекцией флуоресценции интеркалирующего в двухцепочечную ДНК красителя SYBR green после каждого цикла реакции; 3) анализ полученных результатов и определение относительного количества кДНК в образце. Количество специфической кДНК в образце зависит от концентрации мкРНК или мРНК в биологическом материале, степени деградации анализируемой РНК, эффективности выделения РНК, реакции обратной транскрипции, которая крайне чувствительна к примесям контаминирующих агентов в образце [15], эффективности ПНР. Для того, чтобы учесть влияние вышеперечисленных факторов на количественную оценку специфической кДНК в каждом из образцов анализируют количество нормировочной эндогенной РНК, уровень экспрессии которой не меняется при развитии исследуемого патологического процесса. Для нормировки количества мкРНК в ткани, используют малую ядрышковую РНК SNORD68; для нормировки количества мРНК используют мРНК генов глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа (GAPDH) и бета-изоформа актина (АСТВ).
Как правило, относительный уровень экспрессии кДНК определяют по уравнению (I): (M0s1/M0s2)=2-ΔΔCt, где M0s1 и M0s2 - исходные количества кДНК в образцах s1 и s2, ΔΔCt=(Cts1-Ctnorm1)-(Cts2-Ctnorm2), Ct - значение цикла амплификации в точке пересечения кинетической кривой накопления продукта амплификации с линией порогового уровня флуоресценции, который определяется автоматически программным обеспечением амплификатора; Cts1 и Cts2 - значение порогового цикла амплификации кДНК анализируемой мкРНК в двух сравниваемых образцах s1 и s2; Ctnorm1 и Ctnorm2 - значение порогового цикла амплификации кДНК нормировочной эндогенной или экзогенной мкРНК в двух сравниваемых образцах s1 и s2. Использование метода ΔΔCt возможно при условии, что эффективности реакций амплификации кДНК анализируемой и нормировочной мкРНК равны и близки к 100%.
Задача, решаемая предложенным изобретением, заключается в создании количественного метода определения маркеров СЗРП, ПЭ и синдрома «маловесный плод» в плацентарной площадке женщин на момент родоразрешения, а именно: соотношение hsa-miR-30c-5p/VIM, hsa-miR-28-3р/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3р/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA. Предложенный метод применим в клинической практике в качестве дополнительного метода анализа с целью уточнения диагноза согласно клинико-инструментальным методам исследования для выбора оптимальной тактики ведения матери и ребенка с целью профилактики возможных послеродовых осложнений.
Предложенный способ определения соотношения hsa-miR-30c-5p/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA в плацентарной площадке женщин методом количественной ОТ-ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени предполагает: 1) биопсию плацентарной площадки во время операции кесарево сечение, содержащей децидуальный слой и прилегающий миометрий толщиной 4 мм, вырезаемой ножницами; 2) выделение суммарной РНК из образцов плацентарной площадки колоночным способом, например, набором miRNeasy Micro Kit (Qiagen, Germany) с последующей дополнительной очисткой набором RNeasy MinElute Cleanup Kit (Qiagen, Germany) в течение 2 часов; 3) определение концентрации РНК, например, набором QubitTM RNA HS Assay Kit (Invitrogen) в флуориметре Qubit fluorometer 3.0 (Life Technologies, Malaysia) в течение 5 минут; 4) определение качества выделенной суммарной РНК, например, набором RNA 6000 Nano Kit (Agilent Technologies, USA) в биоанализаторе Agilent Bioanalyzer 2100 (Agilent, Germany), где показатель целостности РНК (RIN) должен быть равным или более 8, в течение 1 часа; 5) синтез кДНК в ходе реакции обратной транскрипции мкРНК, например, набором mi Script® II RT Kit protocol (Qiagen, Germany) в течение 1 часа 30 минут, и синтез кДНК в ходе реакции обратной транскрипции мРНК, например, с использованием случайных шестинуклеотидных праймеров, буфера MMLV (Promega), дезоксинуклеозидтрифосфатов (Евроген), обратной транскриптазы MMLV (Promega); 6) амплификацию кДНК с помощью ПЦР в реальном времени, например, набором miScript SYBR Green PCR Kit (Qiagen, Germany) с использованием специфичных для мкРНК смысловых праймеров, и, например, набором qPCRmix-HS (SYBR+HighROX, Евроген) с использованием специфичных для мРНК смысловых и антисмысловых праймеров на приборе StepOnePlusTM thermocycler (Applied Biosystems, USA) в течение 3 часов, которая включает детекцию флуоресцентного сигнала с интеркалирующего в двухцепочечный продукт реакции красителя SYBRGreen в режиме реального времени, построение кривых плавления продуктов реакции, обработку данных и их представление в графическом виде с помощью специального программного обеспечения. Применение ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени позволяет уменьшить риск контаминации и автоматизировать процесс диагностики.
Предлагается количественное определение соотношения мкРНК и мРНК ее гена-мишени, образующих девять пар «мкРНК/мРНК»: hsa-miR-30 с-5p/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3р/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3р/FGA в плацентарной площадке в день родоразрешения беременных женщин на сроке более 34 недель при сопоставлении с референсными значениями соотношений мкРНК и мРНК в указанных выше парах в нормальной ткани плацентарной площадки соответствующего срока гестации. Полученные в ходе ПЦР в реальном времени для каждого образца плацентарной площадки значения Ct (мРНК), Ct(ACTB), Ct(мкРНК), Ct(SNORD68) вводят в формулу:
Figure 00000001
Figure 00000002
и сопоставляют с референсным значением для данной пары «мкРНК/мРНК» в нормальном образце плацентарной площадки.
Осуществление Изобретения.
Пример 1.
Материалом исследования являются образцы плацентарных площадок женщин, родоразрешенных на сроке более 34 недель беременности, из группы с СЗРП (возраст 28-34 года, n=13), из группы ПЭ (возраст 35-37 лет года, n=7), из группы «маловесный плод» (возраст 27-35 лет, n=8), из контрольной группы (возраст 32-34 года, n=7). Таблица 1.
Figure 00000003
Figure 00000004
Figure 00000005
Взятие образца биопсийного материала плацентарной площадки у каждой женщины осуществляли во время операции кесарево сечение, содержащего децидуальный слой и прилегающий миометрий толщиной 4 мм, вырезаемого скальпелем или хирургическими ножницами. Перенесенные в пробирки (Eppendorf) образцы мгновенно погружали в жидкий азот и хранили при -80°С до стадии выделения суммарной РНК. Весь биопсийный материал растирали в порошок в парах жидкого азота, и из 20-40 мг ткани выделяли суммарную РНК набором miRNeasy Micro Kit (Qiagen, Germany) с последующей дополнительной очисткой набором RNeasy MinElute Cleanup Kit (Qiagen, Germany). Определяли концентрацию РНК набором Qubit™ RNA HS Assay Kit (Invitrogen) в флуориметре Qubit fluorometer 3.0 (Life Technologies, Malaysia). Качество выделенной РНК определяли по значению показателя целостности РНК (RIN) набором RNA 6000 Nano Kit (Agilent Technologies, USA) в биоанализаторе Agilent Bioanalyzer 2100 (Agilent, Germany). В дальнейший анализ были взяты образцы с показателем RIN≥8.
Для количественного анализа мкРНК 500 нг суммарной РНК, выделенной из плацентарной площадки, конвертируют в кДНК в реакционной смеси (20 мкл), содержащей буфер (1x Hispec buffer), смесь дезоксинуклеотидтрифосфатов (1x Nucleics mix) и обратную транскриптазу (miScript RT) в соответствии с протоколом miScript® II RT Kit (Qiagen, Germany); no окончании реакции объем образца доводят деионизованной водой до 200 мкл. Синтезированную кДНК (2 мкл) используют в качестве матрицы для ПЦР в реальном времени с применением прямого праймера (0,2 мкМ), специфичного для hsa-miR-30c-5p, hsa-miR-28-3р, hsa-miR-1-3р, hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-185-3р, hsa-miR-654-3р, SNORD68 (Таблица 2), и 1x реакционную смесь (SYBR PCR Master Mix) с добавленным 1x универсальным обратным праймером (miScript Universal Primer) из набора miScript SYBR Green PCR Kit (Qiagen, Germany). Протокол амплификации следующий: (1) денатурация ДНК в течение 15 мин при 95°С, (2) 40 циклов амплификации:
денатурация ДНК при 94°С в течение 15 сек, отжиг прямого и обратного праймеров при оптимизированной температуре (Таблица 2) в течение 30 сек, удлинение праймеров при 70°С в течение 30 сек с детекцией флуоресцентного сигнала после каждого цикла реакции, (3) построение кривых плавления продукта ПЦР (нагревание реакционной смеси с 65°С до 95°С с шагом 0,1°С, сопровождающееся детекцией флуоресцентного сигнала на каждом шаге) в амплификаторе StepOnePlus™ thermocycler (Applied Biosystems, USA). Специфичность амплификации проверяют при анализе кривых плавления продукта ПЦР. Относительный уровень экспрессии анализируемых мкРНК (ΔCt1=Ct(MKPHK) - Ct(SNORD68)) вычисляют по разнице пороговых циклов амплификации кДНК, соответствующих hsa-miR-30c-5p, hsa-miR-28-3р, hsa-miR-1-3р, hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-185-3р, hsa-miR-654-3р, и порогового цикла амплификации кДНК, соответствующей нормировочной эндогенной малой ядрышковой РНК SNORD68 в одном и том же образце (Таблица 3).
Figure 00000006
Figure 00000007
Figure 00000008
Figure 00000009
Для количественного анализа мРНК, 500 нг суммарной РНК, выделенной из плацентарной площадки, предварительно инкубируют с случайными шестинуклеотидными праймерами (250 пмоль) в объеме 10 мкл при 70°С в течение 5 минут с последующем синтезом кДНК в реакционной смеси (конечный объем - 25 мкл), содержащей lx MMLV буфер (Promega), 1x смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов (Евроген), 200 единиц обратной транскриптазы MMLV (Promega), при 37°С в течение 60 минут с последующей инкубацией при 95°С в течение 5 минут и добавлением 75 мкл деионизованной воды. Синтезированную кДНК (2 мкл) используют в качестве матрицы для ПЦР в реальном времени с применением смысловых и антисмысловых праймеров (0,2 мкМ), специфичных для VIM, ANXA2, FBN1, MYL6, FLNA, YWHAZ, FGA, АСТВ мРНК (Таблица 2), и1 реакционную смесь (qPCRmix-HS, SYBR+HighROX, Евроген). Протокол амплификации следующий: (1) денатурация ДНК в течение 15 мин при 95°С, (2) 40 циклов амплификации: денатурация ДНК при 94°С в течение 30 сек, отжиг смыслового и антисмыслового праймеров при оптимизированной температуре (Таблица 2) в течение 30 сек, удлинение праймеров при 70°С в течение 40 сек с детекцией флуоресцентного сигнала после каждого цикла реакции, (3) построение кривых плавления продукта ПНР (нагревание реакционной смеси с 65°С до 95°С с шагом 0,1°С, сопровождающееся детекцией флуоресцентного сигнала на каждом шаге) в амплификаторе StepOnePlusTM thermocycler (Applied Biosystems, USA). Специфичность амплификации проверяют при анализе кривых плавления продукта ПЦР. Относительный уровень экспрессии анализируемых мРНК (ΔCt2=Ct(MPHK) - Ct(ACTB)) вычисляют по разнице пороговых циклов амплификации кДНК, соответствующих VIM, ANXA2, FBN1, MYL6, FLNA, YWHAZ, FGA, и порогового цикла амплификации кДНК, соответствующей нормировочной эндогенной мРНК АСТВ, в одном и том же образце (Таблица 3).
В соответствии с формулой (2) определяют соотношение мкРНК и мРНК гена-мишени по разнице ΔCt2 и ΔCt1 в каждом образце, значение которого можно сопоставить с референсными значениями для контрольной группы (Таблица 4). Уникальными парами «мкРНК/мРНК», дифференцирующими один акушерский синдром от другого, являются для СЗРП - hsa-miR-30c-5p/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-30c-5p/FBN1; для ПЭ - hsa-miR-185-3p/FLNA. Общей парой для ПЭ, СЗРП, синдрома «маловесный плод» является hsa-miR-654-3p/FGA, но для синдрома «маловесный плод» и ПЭ характерно более резкое снижение соотношения hsa-miR-654-3р и FGA нежели для СЗРП относительно референсных контрольных значений в плацентарной площадке. Общей для ПЭ и СЗРП парой является hsa-miR-30c-5p/YWHAZ, но для ПЭ характерно более резкое снижение соотношение hsa-miR-30c-5p и YWHAZ нежели для СЗРП относительно референсных контрольных значений в плацентарной площадке.
Figure 00000010
Figure 00000011
Figure 00000012
Диагноз СЗРП при анализе ткани плацентарной площадки методом количественной ПЦР в реальном времени ставят при обнаружении в исследуемом образце соотношения log2(hsa-miR-30c-5p/VIM) в диапазоне (-5.18,-4.32), log2(hsa-miR-28-3p/VIM) в диапазоне (-5.79, -4.22), log2(hsa-miR-1-3p/ANXA2) в диапазоне (-8.25.-5.23), log2(hsa-miR-1-3p/YWHAZ) в диапазоне (-0.55,2.43), log2(hsa-miR-15b-5p/MYL6tr.v.1) в диапазоне (1.53,2.46), log2(hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2) в диапазоне (1.02, 2.5), log2(hsa-miR-30c-5p/FBN1) в диапазоне(-3.7,-2.55), log2(hsa-miR-654-3p/FGA)B диапазоне (-3.93, 0.83), log2(hsa-miR-30c-5p/YWHAZ) в диапазоне (0.89,2.63), log2(hsa-miR-185-3р/FLNA) в диапазоне (-0.91, 1.17).
Диагноз ПЭ при анализе ткани плацентарной площадки методом количественной ПЦР в реальном времени ставят при обнаружении в исследуемом образце соотношения log2(hsa-miR-30c-5p/VIM) в диапазоне (-5.58, -3.34), log2(hsa-miR-28-3p/VIM) в диапазоне (-5.41, -2.67), log2(hsa-miR-1-3p/ANXA2) в диапазоне (-7.28, -4.87), log2(hsa-miR-1-3p/YWHAZ) в диапазоне (-0.04, 2.18), log2(hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1) в диапазоне (2.31, 3.29), log2(hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2) в диапазоне (2.74, 3.29), log2(hsa-miR-30c-5p/FBN1) в диапазоне (-3.55, -1.78), log2(hsa-miR-654-3p/FGA) в диапазоне (-2.88, 0.1), log2(hsa-miR-30c-5p/YWHAZ) в диапазоне (1.55,3.39), log2(hsa-miR-185-3p/FLNA) в диапазоне (-0.66, 0.13).
Диагноз «маловесный плод» при анализе ткани плацентарной площадки методом количественной ПЦР в реальном времени ставят при обнаружении в исследуемом образце соотношения log2(hsa-miR-30c-5p/VIM) в диапазоне (-3.78, -2.87), log2(hsa-miR-28-3p/VIM) в диапазоне (-4.3, -2.61), log2(hsa-miR-1-3p/ANXA2) в диапазоне (-7.4, -5.13), log2(hsa-miR-l-3р/YWHAZ) в диапазоне (0.16, 2.6), log2(hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1) в диапазоне (2.1, 3.06), log2(hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2) в диапазоне (2.19, 2.99), log2(hsa-miR-30c-5p/FBN1) в диапазоне (-1.98, -0.98), log2(hsa-miR-654-3р/FGA) в диапазоне (-2.5, 1.18), log2(hsa-miR-30c-5p/YWHAZ) в диапазоне (3.22, 4), log2(hsa-miR-185-3p/FLNA) в диапазоне (-0.61, 1.18).
Фиг. 1. Диаграммы Венна. Сравнение списков дифференциально экспрессированных мкРНК и белков в образцах плацентарных площадок от женщин с СЗРП и женщин с ПЭ относительно контрольных образцов (К)
Список литературы
1. Brosens, I.; Pijnenborg, R.; Vercruysse, L.; Romero, R. The "Great Obstetrical Syndromes" are associated with disorders of deep placentation. Am. J. Obstet. Gynecol. 2011,204,193-201, doi:10.1016/j.ajog.2010.08.009.
2. Burton, G.J.; Fowden, A.L.; Thornburg, K.L. Placental Origins of Chronic Disease. Physiol. Rev. 2016, 96, 1509-1565, doi:10.1152/physrev.00029.2015.
3. Bassily, E.; Bell, C; Verma, S.; Patel, N.; Patel, A. Significance of Obstetrical History with Future Cardiovascular Disease Risk. Am. J. Med. 2019, 132, 567-571, doi:10.1016/j.amjmed.2018.11.029.
4. Bronson, S.L.; Bale, T.L. The Placenta as a Mediator of Stress Effects on Neurodevelopmental Reprogramming. Neuropsychopharmacol. Off. Publ. Am. Coll. Neuropsychopharmacol. 2016, 41, 207-218, doi: 10.103 8/npp.2015.231.
5. Steegers, E.A.P.; von Dadelszen, P.; Duvekot, J.J.; Pijnenborg, R. Preeclampsia. Lancet (London, England) 2010, 376, 631-644, doi: 10.1016/S0140-6736(10)60279-6.
6. Walker, J.J. Management of Severe Pre-Eclampsia/Eclampsia. In Best Practice in Labour and Delivery; Arulkumaran, S.S., Ed.; Cambridge University Press: Cambridge, 2016; pp.301-311 ISBN 9781107472341.
7. Lausman, A.; McCarthy, F.P.; Walker, M.; Kingdom, J. Screening, diagnosis, and management of intrauterine growth restriction. J. Obstet. Gynaecol. Canada JOGC=
Figure 00000013
Gynecol, du Canada JOGC 2012, 34, 17-28, doi:10.1016/S1701-2163(16)35129-5.
8. Nardozza, L.M.M.; Caetano, A.C.R.; Zamarian, A.C.P.; Mazzola, J.B.; Silva, C.P.; Marcal, V.M.G.; Lobo, T.F.; Peixoto, A.B.; Araujo Junior, E. Fetal growth restriction: current knowledge. Arch. Gynecol. Obstet. 2017, 295, 1061-1077, doi: 10.1007/s00404-017-4341 -9.
9. Schlembach, D. Fetal Growth Restriction - Diagnostic Work-up, Management and Delivery. Geburtshilfe Frauenheilkd. 2020, 80, 1016-1025, doi:10.1055/a-1232-1418.
10. Ульянина E. В., Акопян Г. В., Ахмадеев Н. Р. Комплексный подход в диагностике синдрома задержки развития плода // Практическая медицина. 2018. Т. 16, №6. С.52-55.
11. Gerstein М. Genomics: ENCODE leads the way on big data. Nature. 2012 Sep 13;489(7415):208.
12. Sayed D, Abdellatif M. MicroRNAs in development and disease. Physiol Rev. 2011 Jul;91(3):827-87.
13. Hu XQ, Zhang L. MicroRNAs in Uteroplacental Vascular Dysfunction. Cells.
14. 2019 Oct 29;8(11):1344. doi: 10.3390/cells8111344 14.Saunders NA. Real-time PCR. Methods Mol Biol. 2004;266:191-211.
15. Freeman WM, Walker SJ, Vrana KE. Quantitative RT-PCR: pitfalls and potential. Biotechniques. 1999 Jan;26(l): 112-22, 124-5. Review.
Перечень последовательностей
Figure 00000014
Figure 00000015
Figure 00000016
Figure 00000017
Figure 00000018
Figure 00000019
Figure 00000020
Figure 00000021
Figure 00000022
Figure 00000023
Figure 00000024
Figure 00000025
Figure 00000026

Claims (1)

  1. Способ дифференциальной диагностики синдрома задержки развития плода (СЗРП), преэклампсии (ПЭ) и синдрома маловесного к сроку гестации плода, включающий количественную оценку соотношения hsa-miR-30c-5p/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA в плацентарной площадке женщин в день родоразрешения на сроке более 34 недель гестации, характеризующийся тем, что методом количественной ПЦР в реальном времени в образце плацентарной площадки определяют содержание hsa-miR-30c-5p, hsa-miR-28-3р, hsa-miR-1-3р, hsa-miR-15b-5p, hsa-miR-185-3р, hsa-miR-654-3р, мРНК YWHAZ, мРНК FGA, мРНК VIM, мРНК ANXA2, мРНК FBN1, мРНК FLNA, двух транскрипционных вариантов мРНК MYL6, включающих транскрипционный вариант 1 и транскрипционный вариант 2, именуемые далее MYL6 tr.v.1 и MYL6 tr.v.2, соответственно, для последующего расчета логарифмированных по основанию два значений соотношения hsa-miR-30c-5p/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA, и при значениях log2(hsa-miR-30c-5p/VIM) в диапазоне (-5.18, -4.32), log2(hsa-miR-28-3p/VIM) в диапазоне (-5.79, -4.22), log2(hsa-miR-1-3p/ANXA2) в диапазоне (-8.25, -5.23), log2(hsa-miR-1-3p/YWHAZ) в диапазоне (-0.55, 2.43), log2(hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1) в диапазоне (1.53, 2.46), log2(hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2) в диапазоне (1.02, 2.5), log2(hsa-miR-30c-5p/FBN1) в диапазоне (-3.7, -2.55), log2(hsa-miR-654-3p/FGA) в диапазоне (-3.93, 0.83), log2(hsa-miR-30c-5p/YWHAZ) в диапазоне (0.89, 2.63), log2(hsa-miR-185-3p/FLNA) в диапазоне (-0.91, 1.17) у женщины диагностируют СЗРП, и при значениях log2(hsa-miR-30c-5p/VIM) в диапазоне (-5.58, -3.34), log2(hsa-miR-28-3p/VIM) в диапазоне (-5.41, -2.67), log2(hsa-miR-1-3p/ANXA2) в диапазоне (-7.28, -4.87), log2(hsa-miR-1-3p/YWHAZ) в диапазоне (-0.04, 2.18), log2(hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1) в диапазоне (2.31, 3.29), log2(hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2) в диапазоне (2.74, 3.29), log2(hsa-miR-30c-5p/FBN1) в диапазоне (-3.55, -1.78), log2(hsa-miR-654-3p/FGA) в диапазоне (-2.88, 0.1), log2(hsa-miR-30c-5p/YWHAZ) в диапазоне (1.55, 3.39), log2(hsa-miR-185-3р/FLNA) в диапазоне (-0.66, 0.13) у женщины диагностируют ПЭ, и при значениях log2(hsa-miR-30c-5p/VIM) в диапазоне (-3.78, -2.87), log2(hsa-miR-28-3p/VIM) в диапазоне (-4.3, -2.61), log2(hsa-miR-1-3p/ANXA2) в диапазоне (-7.4, -5.13), log2(hsa-miR-1-3p/YWHAZ) в диапазоне (0.16, 2.6), log2(hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1) в диапазоне (2.1, 3.06), log2(hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2) в диапазоне (2.19, 2.99), log2(hsa-miR-30c-5p/FBN1) в диапазоне (-1.98, -0.98), log2(hsa-miR-654-3p/FGA) в диапазоне (-2.5, 1.18), log2(hsa-miR-30c-5p/YWHAZ) в диапазоне (3.22, 4), log2(hsa-miR-185-3p/FLNA) в диапазоне (-0.61, 1.18) у женщины диагностируют синдром маловесного плода.
RU2021102705A 2021-02-05 2021-02-05 Количественная оценка соотношения hsa-miR-30c-5/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA в плацентарной площадке женщин в день родоразрешения на сроке более 34 недель гестации как способ дифференциальной диагностики синдрома задержки развития плода, преэклампсии и синдрома маловесного к сроку гестации плода RU2771205C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2021102705A RU2771205C1 (ru) 2021-02-05 2021-02-05 Количественная оценка соотношения hsa-miR-30c-5/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA в плацентарной площадке женщин в день родоразрешения на сроке более 34 недель гестации как способ дифференциальной диагностики синдрома задержки развития плода, преэклампсии и синдрома маловесного к сроку гестации плода

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2021102705A RU2771205C1 (ru) 2021-02-05 2021-02-05 Количественная оценка соотношения hsa-miR-30c-5/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA в плацентарной площадке женщин в день родоразрешения на сроке более 34 недель гестации как способ дифференциальной диагностики синдрома задержки развития плода, преэклампсии и синдрома маловесного к сроку гестации плода

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2771205C1 true RU2771205C1 (ru) 2022-04-28

Family

ID=81458850

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2021102705A RU2771205C1 (ru) 2021-02-05 2021-02-05 Количественная оценка соотношения hsa-miR-30c-5/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA в плацентарной площадке женщин в день родоразрешения на сроке более 34 недель гестации как способ дифференциальной диагностики синдрома задержки развития плода, преэклампсии и синдрома маловесного к сроку гестации плода

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2771205C1 (ru)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2595884C1 (ru) * 2015-08-05 2016-08-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ выбора тактики ведения беременных с плацентарной недостаточностью и синдромом задержки роста плода /сзрп/

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2595884C1 (ru) * 2015-08-05 2016-08-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ выбора тактики ведения беременных с плацентарной недостаточностью и синдромом задержки роста плода /сзрп/

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LAUSMAN A. et al. Screening, diagnosis, and management of intrauterine growth restriction. J. Obstet. Gynaecol. Canada. 2012 Jan; 34(1): 17-28. SAUNDERS N.A. Real-time PCR. Methods Mol Biol. 2004; 266: 191-211. *
ЮДИЦКИЙ А.Д. Клинико-метаболические исходы у недоношенных детей, рожденных малыми к сроку гестации. Дисс. канд. мед. наук. Ижевск, 2019, 181 c.. *
ЮДИЦКИЙ А.Д. Клинико-метаболические исходы у недоношенных детей, рожденных малыми к сроку гестации. Дисс. канд. мед. наук. Ижевск, 2019, 181 c.. LAUSMAN A. et al. Screening, diagnosis, and management of intrauterine growth restriction. J. Obstet. Gynaecol. Canada. 2012 Jan; 34(1): 17-28. SAUNDERS N.A. Real-time PCR. Methods Mol Biol. 2004; 266: 191-211. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10731218B2 (en) Methods employing circulating DNA and miRNA as biomarkers for female infertility
Hromadnikova et al. Absolute and relative quantification of placenta-specific microRNAs in maternal circulation with placental insufficiency–related complications
Zhao et al. Diagnostic potential for miRNAs as biomarkers for pregnancy-specific diseases
Sekizawa et al. Cell-free fetal DNA in the plasma of pregnant women with severe fetal growth restriction
Kotlabova et al. Placental-specific microRNA in maternal circulation–identification of appropriate pregnancy-associated microRNAs with diagnostic potential
Centlow et al. Placental expression profiling in preeclampsia: local overproduction of hemoglobin may drive pathological changes
Cui et al. Spermatozoa micro ribonucleic acid–34c level is correlated with intracytoplasmic sperm injection outcomes
EP2646554B1 (en) Prediction of spontaneous preterm birth by measuring cell free nucleic acids in maternal blood
US20200270690A1 (en) Serum/plasma LncRNA marker composition associated with auxiliary diagnosis of intrahepatic cholestasis of pregnancy and application thereof
US20110183338A1 (en) Two stage enrichment of cell-free fetal dna in maternal plasma
Hromadnikova Extracellular nucleic acids in maternal circulation as potential biomarkers for placental insufficiency
GB2614979A (en) Methods and systems for determining a pregnancy-related state of a subject
CN112469836A (zh) 子宫内膜的miRNA容受性分析
US10184150B2 (en) Free nucleic acids and miRNA as non-invasive method for determining embryo quality
US11149315B2 (en) Method for predicting cervical shortening and preterm birth
El-Shorafa et al. Dysregulation of micro-RNA contributes to the risk of unexplained recurrent pregnancy loss
RU2771205C1 (ru) Количественная оценка соотношения hsa-miR-30c-5/VIM, hsa-miR-28-3p/VIM, hsa-miR-1-3p/ANXA2, hsa-miR-30c-5p/FBN1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.1, hsa-miR-15b-5p/MYL6 tr.v.2, hsa-miR-185-3p/FLNA, hsa-miR-1-3p/YWHAZ, hsa-miR-30c-5p/YWHAZ и hsa-miR-654-3p/FGA в плацентарной площадке женщин в день родоразрешения на сроке более 34 недель гестации как способ дифференциальной диагностики синдрома задержки развития плода, преэклампсии и синдрома маловесного к сроку гестации плода
RU2592204C1 (ru) Способ раннего прогнозирования невынашивания беременности
Monfared et al. Determination and comparison miR 5a in the serum between women with GDM, non-pregnant type diabetes, healthy pregnant and control group
Barrios-Hernández et al. Analysis of the endometrial transcriptome at the time of implantation in women receiving a single post-ovulatory dose of levonorgestrel or mifepristone
Abd El Gayed et al. Biochemical study on long non coding RNA gene expression in women having preeclampsia
RU2775433C1 (ru) Способ прогнозирования риска развития преэклампсии на основе молекулярно-генетического анализа
EP4183888A1 (en) Mirna signature for identification of the receptive endometrium
Amor Impact of Tobacco smoking on sperm nuclear proteins genes: H2BFWT, TNP1, TNP2, PRM1, and PRM2 and its influence on male infertility
Ashour et al. Estimation of Keratins K5/K14 and miRNA-21 Levels in Keratinocytes of Psoriasis Vulgaris Lesions