RU2763055C1 - Method for producing spores of microsporidia nosema pyrausta - Google Patents

Method for producing spores of microsporidia nosema pyrausta Download PDF

Info

Publication number
RU2763055C1
RU2763055C1 RU2020140780A RU2020140780A RU2763055C1 RU 2763055 C1 RU2763055 C1 RU 2763055C1 RU 2020140780 A RU2020140780 A RU 2020140780A RU 2020140780 A RU2020140780 A RU 2020140780A RU 2763055 C1 RU2763055 C1 RU 2763055C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
spores
pyrausta
nosema
caterpillars
microsporidia
Prior art date
Application number
RU2020140780A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Юрий Сергеевич Токарев
Юлия Михайловна Малыш
Инна Валентиновна Грушевая
Андрей Николаевич Фролов
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений»
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений» filed Critical Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений»
Priority to RU2020140780A priority Critical patent/RU2763055C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2763055C1 publication Critical patent/RU2763055C1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N3/00—Spore forming or isolating processes

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology.
SUBSTANCE: method for producing spores of microsporidia Nosema pyrausta includes breeding of European corn borer moths of the genus Ostrinia in laboratory conditions, artificial infection of caterpillars in the age II by the group method by adding Nosema pyrausta spores to the feed in the amount of 1*105 spores per caterpillar, and complete consumption of the feed by the caterpillars. The artificially infected caterpillars of the European corn borer moth Ostrinia nubilalis are grown until pupation at a temperature of +24°C for 20 to 30 days on agarised nutritious medium containing corn flour, soybean flour, wheat germ, agar-agar, brewing yeast, ascorbic acid, benzoic acid, a mixture of polyvitamins, kanamycin, nystatin, augmentin, and distilled water in the predetermined ratios of the components. Nosema pyrausta spores are isolated from the moth pupae by homogenising the pupae in distilled water, separating the supernatant liquid by centrifugation, resuspending the sediment in distilled water, producing spores.
EFFECT: invention provides a possibility of increasing the productivity of N. pyrausta microsporidia.
1 cl, 2 tbl, 1 ex

Description

Изобретение относится к биотехнологии и касается производства средств защиты растений, в частности, способа размножения продуцента микробиологических препаратов против опасных сельскохозяйственных вредителей чешуекрылых насекомых-фитофагов.The invention relates to biotechnology and concerns the production of plant protection products, in particular, a method of reproduction of a producer of microbiological preparations against dangerous pests of lepidoptera phytophagous insects.

Микроспоридии известны своей высокой патогенностью для насекомых, и многие виды этих паразитов снижают показатели жизнеспособности, репродуктивной активности и устойчивости к негативным факторам внешней среды и длительное время сохраняются в популяциях насекомых-хозяев благодаря горизонтальной (среди особей одного поколения) и вертикальной (в ряду поколений) передачи за счет разнообразных способов заражения насекомых (Becnel, Andreadis, 1999 [1]). Это позволяет достигать долговременного эффекта на популяции вредителей сельского и лесного хозяйства, таких как капустная белянка Pieris brassicae, луговой мотылек Loxostege stisticalis, непарный шелкопряд Lymantria dispar и др. [2-4]. В частности, виды рода Nosema имеют важное значение в ограничении численности вредных чешуекрылых, среди которых еловая листовертка-почкоед Choristoneura fumiferanae [5-7], а также вредитель сахарного тростника Diatraea saccharalis [8].Microsporidia are known for their high pathogenicity for insects, and many species of these parasites reduce the indicators of viability, reproductive activity and resistance to negative environmental factors and persist for a long time in host populations due to horizontal (among individuals of one generation) and vertical (in a number of generations) transmission due to various methods of insect infection (Becnel, Andreadis, 1999 [1]). This makes it possible to achieve a long-term effect on the populations of pests of agriculture and forestry, such as the cabbage whitelet Pieris brassicae, the meadow moth Loxostege stisticalis, the gypsy moth Lymantria dispar, etc. [2-4]. In particular, the species of the genus Nosema are important in limiting the number of harmful lepidoptera, including the spruce budworm Choristoneura fumiferanae [5-7], as well as the sugarcane pest Diatraea saccharalis [8].

Микроспоридия Nosema pyrausta - важный фактор динамики численности опасного вредителя кукурузы кукурузного мотылька Ostrinia nubilalis из семейства огневок-травянок Crambidae (Pyraloidea) [9]. Кроме того, данный патоген проявляет высокую биологическую эффективность по отношению к другому представителю указанного семейства особо опасному сельскохозяйственному вредителю луговому мотыльку Loxostege sticticalis, для борьбы с которым был создан высоковирулентный штамм N. pyrausta, депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов ФГБНУ ВИЗР под регистрационным номером М-1 ВИЗР. Для массовой наработки спор этого энтомопатогена используется способ искусственного заражения гусениц типового хозяина кукурузного мотылька, с последующим выращиванием зараженных насекомых в лабораторных условиях и выделением спор из куколок, что позволяет получить около 50 млн спор с одной куколки [10].Microsporidia Nosema pyrausta is an important factor in the dynamics of the abundance of the dangerous maize pest, the corn moth Ostrinia nubilalis, from the Crambidae (Pyraloidea) family of moth grass [9]. In addition, this pathogen exhibits high biological effectiveness in relation to another representative of the specified family, a particularly dangerous agricultural pest, the meadow moth Loxostege sticticalis, for the control of which a highly virulent strain of N. pyrausta was created, deposited in the State Collection of Microorganisms FGBNU VIZR under registration number M-1 VIZR. For the mass production of spores of this entomopathogen, the method of artificial infection of caterpillars of the typical host of the corn moth is used, followed by the cultivation of infected insects in laboratory conditions and the isolation of spores from pupae, which makes it possible to obtain about 50 million spores from one pupa [10].

Для выкармливания насекомых на стадии гусеницы используется стандартный состав искусственной питательной среды (ИПС), включающий кукурузную муку, зародыши пшеницы, пивные дрожжи, комплекс витаминов, агара, антибиотики на 1 л воды [11].To feed insects at the caterpillar stage, a standard composition of an artificial nutrient medium (IPA) is used, which includes corn flour, wheat germ, brewer's yeast, a complex of vitamins, agar, and antibiotics per liter of water [11].

Данный способ разведения насекомых, как наиболее близкий по совокупности существенных признаков, был использован в качестве прототипа. Его основной недостаток - сравнительно низкая продуктивность агента микробиологической защиты растений.This method of breeding insects, as the closest in terms of a set of essential features, was used as a prototype. Its main disadvantage is the relatively low productivity of the microbiological plant protection agent.

Таким образом, технической проблемой, существующей в настоящее время, является низкая продуктивность агента микробиологической защиты растений при разведении зараженных насекомых. Данное изобретение направлено на решение этой проблемы путем создания способа с повышенным выходом спор микроспоридии N. pyrausta в расчете на 1 куколку насекомого-хозяина.Thus, the current technical problem is the low productivity of the microbiological plant protection agent when breeding infected insects. The present invention seeks to solve this problem by providing a method with an increased spore yield of N. pyrausta microsporidia per 1 pupa of the host insect.

Техническим результатом является значительное повышение продуктивности спор микроспоридии.The technical result is a significant increase in the productivity of microsporidia spores.

Технического результата удается достичь путем повышения питательной ценности кормового субстрата за счет частичной замены одного из компонентов, кукурузной муки, на соевую муку, которая характеризуется аминокислотным составом, близким к таковому продуктов животного происхождения [12].The technical result is achieved by increasing the nutritional value of the fodder substrate by partially replacing one of the components, corn flour, with soy flour, which is characterized by an amino acid composition close to that of animal products [12].

Таким образом, технический результат достигается тем, что в способе производства спор микроспоридии Nosema pyrausta для борьбы с многоядными чешуекрылыми вредителями, включающем выращивание искусственно зараженных гусениц кукурузного мотылька Ostrinia nubilalis при температуре +24°С в течение 30 дней на агаризованной питательной среде, содержащей крупяную муку, пшеничные отруби, дрожжевой экстракт и смесь витаминов и антибиотиков, и выделение спор продуцента из окуклившихся насекомых, предлагается в качестве крупяной муки использовать кукурузную и соевую муку в соотношении 1:1.Thus, the technical result is achieved by the fact that in the method for the production of spores of the microsporidia Nosema pyrausta for the control of polyphagous lepidoptera pests, including the cultivation of artificially infected caterpillars of the corn moth Ostrinia nubilalis at a temperature of + 24 ° C for 30 days on agar nutrient medium containing cereal flour , wheat bran, yeast extract and a mixture of vitamins and antibiotics, and the isolation of the producer's spores from pupated insects, it is proposed to use corn and soy flour as cereal flour in a 1: 1 ratio.

Дополнительным отличием способа является то, что состав компонентов агаризованной питательный среду следующий, в масс %:An additional difference of the method is that the composition of the components of the agar nutrient medium is as follows, in wt%:

Кукурузная мукаCorn flour 6,5%6.5% Соевая мукаSoy flour 6,5%6.5% Зародыши пшеницыWheat germ 3,0%3.0% Агар агарAgar agar 1,6%1.6% Пивные дрожжиBrewer's yeast 4,8%4.8% Аскорбиновая кислотаVitamin C 0,5%0.5% Бензойная кислотаBenzoic acid 0,2%0.2% Смесь поливитаминовMultivitamin Blend 0,2%0.2% КанамицинKanamycin 0,01%0.01% НистатинNystatin 0,0111%0.0111% АугментинAugmentin 0,02%0.02% Дистиллированная водаDistilled water остальноеrest

Авторами в результате длительных исследований удалось установить, что насекомые, выкармливаемые на ИПС с добавлением сои (ИПС-соя), быстрее набирают вес, в результате чего образуются более крупные куколки, содержащие в среднем 70 млн спор на куколку. Это позволяет повысить продуктивность спор микроспоридии в среднем на 35%.As a result of long-term studies, the authors found that insects fed on IPA with the addition of soy (IPA-soy) gain weight faster, resulting in the formation of larger pupae containing on average 70 million spores per pupa. This makes it possible to increase the productivity of microsporidia spores by an average of 35%.

Пример 1. Получение биомассы микроспоридии Nosema pyraustaExample 1. Obtaining biomass of microsporidium Nosema pyrausta

Яйца кукурузного мотылька Ostrinia furnacalis из постоянной лабораторной культуры помещали на слой стандартной агаризованной ИПС (таблица 1), разлитой в стеклянные сосуды объемом 0.5 л, которые ставили вверх дном, потому что отродившиеся гусеницы перемещаются вверх из-за отрицательной геотаксической реакции, что позволяет им быстро находить корм.Ostrinia furnacalis corn moth eggs from a permanent laboratory culture were placed on a layer of standard agarized IPA (Table 1), poured into 0.5 L glass vessels, which were placed upside down because hatching caterpillars move upward due to a negative geotactic reaction, which allows them to quickly find food.

Группы гусениц II возраста в количестве 25 особей через 1-3 дня после линьки отсаживали на сложенный в несколько слоев отрезок листа офисной бумаги в герметично закрытую емкость на 2 часа без корма. Споры микроспоридии N. pyrausta в количестве 2.5×106 смешивали с порцией ИПС массой 0.5 г и прилепляли на дно стеклянного сосуда банки объемом 0.5 л. В банку с кормом, содержащим споры, пересаживали ранее отсаженных гусениц, банку накрывали слоем плотной ткани, фиксировали резинкой и переворачивали вверх дном. После полного потребления корма со спорами гусениц пересаживали в банки со стандартной ИПС или с ИПС-соя (Таблица 2) и содержали при температуре +24°С и фотопериоде 18С:6Т в течение 20-30 дней до окукливания. Выживших куколок отбирали через 3-5 дней после окукливания, и хранили в холодильнике в течение 5-10 дней. Куколок индивидуально помещали в пластиковую пробирку Эппендорфа объемом 1.5 мл, добавляли 100 мкл дистиллированной воды и гомогенизировали пластиковым пестиком в течение 30 сек. Пробирки центрифугировали при 4000 g в течение 5 мин. Надосадочную жидкость декантировали, осадок ресуспендировали в 1 мл дистиллированной воды и подсчитывали концентрацию спор в камере Горяева. Данным методом получали от 23 до 80 млн спор на куколку, в среднем 52.0±3.51 млн (количество проанализированных насекомых N=20), при выкармливании гусениц на стандартной ИПС; и от 19 до 128 млн спор на куколку, в среднем 69.9±6.79 млн спор (N=19). Выявленные различия в споропродуктивности микроспоридии при выкармливании насекомого-хозяина на ИПС различного состава статистически достоверны на 5%-ном уровне значимости.Groups of 2nd instar caterpillars in the amount of 25 individuals 1-3 days after molting were placed on a piece of office paper folded in several layers in a hermetically sealed container for 2 hours without food. Spores of microsporidia N. pyrausta in an amount of 2.5 × 10 6 were mixed with a 0.5 g portion of IPA and glued to the bottom of a glass vessel with a 0.5 L jar. The previously planted caterpillars were transplanted into a jar with food containing spores, the jar was covered with a layer of dense cloth, fixed with an elastic band, and turned upside down. After complete consumption of the food with spores, the caterpillars were transplanted into cans with standard IPA or with IPA soybeans (Table 2) and kept at a temperature of + 24 ° C and a photoperiod of 18C: 6T for 20-30 days until pupation. Surviving pupae were collected 3-5 days after pupation and kept in a refrigerator for 5-10 days. Pupae were individually placed in a 1.5 ml plastic Eppendorf tube, 100 μL of distilled water was added, and homogenized with a plastic pestle for 30 sec. The tubes were centrifuged at 4000 g for 5 min. The supernatant was decanted, the precipitate was resuspended in 1 ml of distilled water, and the concentration of spores was calculated in the Goryaev chamber. This method was used to obtain from 23 to 80 million spores per pupa, on average 52.0 ± 3.51 million (the number of analyzed insects N = 20), while feeding the caterpillars on standard IPS; and from 19 to 128 million spores per pupa, on average 69.9 ± 6.79 million spores (N = 19). The revealed differences in the spore productivity of microsporidia during feeding of the host insect on PSI of various composition are statistically significant at the 5% significance level.

Figure 00000001
Figure 00000001

Figure 00000002
Figure 00000002

Таким образом, при использовании предлагаемого способа размножения микроспоридии N. pyrausta достигается высокая споропродуктивность паразита, значительно превышающая таковую при использовании аналога, в частности, способа выращивания зараженных гусениц на стандартной ИПС (Таблица 2, строка 1). Продуктивность N. pyrausta, выраженная как количество спор, образующихся на 1 куколку насекомого-хозяина, при выращивании насекомых на ИПС с добавлением сои выше на 35% по сравнению со стандартной ИПС. Данный способ может быть рекомендован для производства спор микроспоридии, перспективной для защиты сельскохозяйственных культур от многоядных чешуекрылых вредителей семейства Crambidae.Thus, when using the proposed method of reproduction of N. pyrausta microsporidia, a high spore productivity of the parasite is achieved, significantly exceeding that when using an analogue, in particular, a method of growing infected caterpillars on a standard IPA (Table 2, line 1). The productivity of N. pyrausta, expressed as the number of spores formed per 1 pupa of the host insect, when insects are grown on IPA with the addition of soybeans is 35% higher than that of standard IPA. This method can be recommended for the production of microsporidia spores, promising for the protection of crops from the polyphagous lepidoptera pests of the Crambidae family.

Список литературы:Bibliography:

1. Becnel J.J., Andreadis T.G. Microspridia in insects. In: The Microsporidia and Microsporidiosis (Eds. M. Wittner and L. M. Weiss). ASM Press, Washington D. 1999. P. 447-501.1. Becnel J.J., Andreadis T.G. Microspridia in insects. In: The Microsporidia and Microsporidiosis (Eds. M. Wittner and L. M. Weiss). ASM Press, Washington D. 1999. P. 447-501.

2. Токарев Ю.С., Малыш Ю.М., Дубинина Ε.В., Алексеев А.Н., Фролов Α.Η., Исси И.В. Значение микроспоридий для микробиологического контроля численности вредных членистоногих. Защита и карантин растений. 2007. V. 12. Р. 14-16.2. Tokarev Yu.S., Malysh Yu.M., Dubinina Ε.V., Alekseev A.N., Frolov Α.Η., Issi I.V. The value of microsporidia for microbiological control of the number of harmful arthropods. Plant protection and quarantine. 2007. V. 12. P. 14-16.

3. Фролов А.Н., Малыш Ю.М., Токарев Ю.С.Особенности биологии и прогнозирования динамики численности лугового мотылька Pyrausta sticticalis L. (Lepidoptera, Pyraustidae) в период низкой его численности в Краснодарском крае. Энтомологическое обозрение. 2008. V. 87(2). Р. 291-302.3. Frolov AN, Malysh Yu.M., Tokarev Yu.S. Peculiarities of biology and forecasting of the abundance dynamics of the meadow moth Pyrausta sticticalis L. (Lepidoptera, Pyraustidae) during the period of its low abundance in the Krasnodar Territory. Entomological Review. 2008. V. 87 (2). R. 291-302.

4. Solter L.F., Maddox J.V., McManus M.L. Host specificity of microsporidia (Protista: Microspora) from European populations of Lymantria dispar (Lepidoptera: Lymantriidae) to indigenous North American Lepidoptera. Journal of Invertebrate Pathology. 1997. V. 69. P. 135-150.4. Solter L.F., Maddox J.V., McManus M.L. Host specificity of microsporidia (Protista: Microspora) from European populations of Lymantria dispar (Lepidoptera: Lymantriidae) to indigenous North American Lepidoptera. Journal of Invertebrate Pathology. 1997. V. 69. P. 135-150.

5. Franz J.M., Huger A.M. Microsporidia causing the collapse of an outbreak of the green tortrix Tortrix viridana L. in Germany. Proc. Int. Colloq. Insect Pathol. 4th College Park, MD, 1971. P. 48-53.5. Franz J.M., Huger A.M. Microsporidia causing the collapse of an outbreak of the green tortrix Tortrix viridana L. in Germany. Proc. Int. Colloq. Insect Pathol. 4th College Park, MD, 1971. P. 48-53.

6. Wilson G.G. Incidence of microsporidia in a field population of a spruce budworm. Can For Serv. Bi-monthly Res. Notes. 1973. V. 29. P. 35-60.6. Wilson G.G. Incidence of microsporidia in a field population of a spruce budworm. Can For Serv. Bi-monthly Res. Notes. 1973. V. 29. P. 35-60.

7. Lipa J.J. Microsporidians parasitizing the green tortrix in Poland and their role in the collapse of the tortrix outbreak in Puszcza Niepolomicka during 1970-1974. Acta Protozoologica. 1976. V. 15. P. 529-536.7. Lipa J.J. Microsporidians parasitizing the green tortrix in Poland and their role in the collapse of the tortrix outbreak in Puszcza Niepolomicka during 1970-1974. Acta Protozoologica. 1976. V. 15. P. 529-536.

8. Simoes R.A., Feliciano J.R., Solter L.F., Delalibera I.Jr. Impacts of Nosema sp.(Microsporidia: Nosematidae) on the sugarcane borer, Diatraea saccharalis (Lepidoptera: Crambidae). J. Invertebr. Pathol. 2015. V. 129. P. 7-12.8. Simoes R.A., Feliciano J.R., Solter L.F., Delalibera I. Jr. Impacts of Nosema sp. (Microsporidia: Nosematidae) on the sugarcane borer, Diatraea saccharalis (Lepidoptera: Crambidae). J. Invertebr. Pathol. 2015. V. 129. P. 7-12.

9. Lewis L.C., Brack D.J., Prasifka J.R., Raun E.S. Nosema pyrausta: its biology, history, and potential role in a landscape of transgenic insecticidal crops. Biological Control. 2009. V 48(3). P. 223-231.9. Lewis L.C., Brack D.J., Prasifka J.R., Raun E.S. Nosema pyrausta: its biology, history, and potential role in a landscape of transgenic insecticidal crops. Biological Control. 2009. V 48 (3). P. 223-231.

10. Токарев Ю.С, Малыш Ю.М., Конончук А.Г., Грушевая И.В., Берим Μ.Η., Фролов А.Н. Штамм микроспоридии Nosema pyrausta для борьбы с луговым мотыльком Loxostege sticticalis. Патент РФ 2705003. 2019.10. Tokarev Yu.S., Malysh Yu.M., Kononchuk A.G., Grushevaya I.V., Berim Μ.Η., Frolov A.N. Microsporidia strain Nosema pyrausta for control of the meadow moth Loxostege sticticalis. RF patent 2705003.2019.

11. Frolov A.N., Berim Μ.Ν., Grushevaya I.V. Rearing of trilobed male uncus Ostrinia species in laboratory for experimental purposes. Plant Protection News. 2019. V. 3. P. 58-62.11. Frolov A.N., Berim Μ.Ν., Grushevaya I.V. Rearing of trilobed male uncus Ostrinia species in laboratory for experimental purposes. Plant Protection News. 2019. V. 3. P. 58-62.

12. Петибская B.C. Соя: химический состав и использование. Майкоп.2012. 432 с.12. Petibskaya B.C. Soybeans: Chemical Composition and Uses. Maykop. 2012. 432 p.

Claims (2)

Способ производства спор микроспоридии Nosema pyrausta, включающий разведение стеблевых мотыльков рода Ostrinia в лабораторных условиях, искусственное заражение групповым методом гусениц II возраста путем добавления в корм спор Nosema pyrausta в количестве 1*105 спор на гусеницу, полное потребление корма гусеницами, выращивание до окукливания искусственно зараженных гусениц кукурузного мотылька Ostrinia nubilalis при температуре +24°С в течение 20-30 дней на агаризованной питательной среде, выделение спор Nosema pyrausta из куколок мотылька путем гомогенизации куколок в дистиллированной воде, отделение надосадочной жидкости центрифугированием, ресуспендирование осадка в дистиллированной воде с получением спор , при этом в качестве агаризованной питательной среды используют среду, имеющую следующий состав компонентов, масс%:A method for the production of spores of microsporidia Nosema pyrausta , including the cultivation of stem moths of the genus Ostrinia in laboratory conditions, artificial infection by the group method of caterpillars II of age by adding spores Nosema pyrausta to the feed in an amount of 1 * 10 5 spores per caterpillar, complete feed consumption by caterpillars, artificial cultivation before pupation infected caterpillars of the corn moth Ostrinia nubilalis at + 24 ° C for 20-30 days on agar nutrient medium, isolation of Nosema pyrausta spores from moth pupae by homogenization of pupae in distilled water, separation of the supernatant fluid by centrifugation, resuspension of the sediment in distilled water to obtain , while the agar nutrient medium is used as a medium having the following composition of components, wt%: кукурузная мукаcorn flour 6,5 %6.5% соевая мукаsoy flour 6,5 %6.5% зародыши пшеницыwheat germ 3,0 %3.0% агар-агарagar-agar 1, 6 %sixteen % пивные дрожжиBrewer's yeast 4,8 %4.8% аскорбиновая кислотаvitamin C 0,5 %0.5% бензойная кислотаbenzoic acid 0,2 %0.2% смесь поливитаминовmultivitamin blend 0.2 %0.2% канамицинkanamycin 0.01 %0.01% нистатинnystatin 0.0111 %0.0111% аугментинaugmentin 0.02 %0.02% дистиллированная водаdistilled water остальноеrest
RU2020140780A 2020-12-10 2020-12-10 Method for producing spores of microsporidia nosema pyrausta RU2763055C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020140780A RU2763055C1 (en) 2020-12-10 2020-12-10 Method for producing spores of microsporidia nosema pyrausta

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020140780A RU2763055C1 (en) 2020-12-10 2020-12-10 Method for producing spores of microsporidia nosema pyrausta

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2763055C1 true RU2763055C1 (en) 2021-12-27

Family

ID=80039081

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020140780A RU2763055C1 (en) 2020-12-10 2020-12-10 Method for producing spores of microsporidia nosema pyrausta

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2763055C1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115147837A (en) * 2022-08-16 2022-10-04 河北省农林科学院植物保护研究所 Athetis lepigone breeding method and system based on optical image recognition
RU2781982C1 (en) * 2022-03-11 2022-10-21 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений" Method for mass production of microsporidia spores nosema pyrausta

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2049395C1 (en) * 1991-07-08 1995-12-10 Институт Защиты Растений Украинской Академии Аграрных Наук Method of preparing microsporidium spores
RU2705003C1 (en) * 2018-12-14 2019-11-01 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений" Microsporidia strain nosema pyrausta for combating meadow moth loxostege sticticalis

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2049395C1 (en) * 1991-07-08 1995-12-10 Институт Защиты Растений Украинской Академии Аграрных Наук Method of preparing microsporidium spores
RU2705003C1 (en) * 2018-12-14 2019-11-01 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений" Microsporidia strain nosema pyrausta for combating meadow moth loxostege sticticalis

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
. КРЮКОВ В.Ю., Адаптации энтомопатогенных аскомицетов (Ascomycota, Hypocreales) к насекомым хозяевам и факторам среды в условиях континентального климата Западной Сибири и Казахстана, дисс. на соискание уч. степ. ДБН, 2014, Новосибирск, с. 125-129. *
FROLOV r A.N., et.al., Rearing of trilobed male uncus Ostrinia species in laboratory for experimental purposes. Plant Protection News. 2019. V. 3. P. 58-62. *
FROLOV r A.N., et.al., Rearing of trilobed male uncus Ostrinia species in laboratory for experimental purposes. Plant Protection News. 2019. V. 3. P. 58-62. . *
АФАНАСЬЕВА Т.Г., Маркетинговый анализ фармацевтического рынка витаминов. Учебно- методическое пособие для вузов. Воронеж, 2008, с. 4-11. *
АФАНАСЬЕВА Т.Г., Маркетинговый анализ фармацевтического рынка витаминов. Учебно- методическое пособие для вузов. Воронеж, 2008, с. 4-11. УФИМЦЕВ К.Г., Действие экдистероидов растения Serratula coronanata L. на развитие и поведение личинок некоторых видов насекомых - фитофагов, Автореф. дисс. на соискание уч. степ. КБН, Сыктывкар, 2004, с. 9-21.. ДЕВЯТКИН А.М. и др. Сельскохозяйственная энтомология. Электронный курс лекций., 2012, Краснодар, с,31-98. *
ГРУШЕВСКАЯ И.П. Факторы многолетней динамики численности кукурузного мотылька в Краснодарском Крае в связи с разработкой мониторинга и прогноза размножения вредителя, Дисс. на соискание уч. степ. КБН, 2018, Санкт - Петербург, с. 72-74. *
ДЕВЯТКИН А.М. и др. Сельскохозяйственная энтомология. Электронный курс лекций., 2012, Краснодар, с,31-98. *
КРЮКОВ В.Ю., Адаптации энтомопатогенных аскомицетов (Ascomycota, Hypocreales) к насекомым хозяевам и факторам среды в условиях континентального климата Западной Сибири и Казахстана, дисс. на соискание уч. степ. ДБН, 2014, Новосибирск, с. 125-129. ГРУШЕВСКАЯ И.П. Факторы многолетней динамики численности кукурузного мотылька в Краснодарском Крае в связи с разработкой мониторинга и прогноза размножения вредителя, Дисс. на соискание уч. степ. КБН, 2018, Санкт - Петербург, с. 72-74. *
УФИМЦЕВ К.Г., Действие экдистероидов растения Serratula coronanata L. на развитие и поведение личинок некоторых видов насекомых - фитофагов, Автореф. дисс. на соискание уч. степ. КБН, Сыктывкар, 2004, с. 9-21.. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2781982C1 (en) * 2022-03-11 2022-10-21 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений" Method for mass production of microsporidia spores nosema pyrausta
CN115147837A (en) * 2022-08-16 2022-10-04 河北省农林科学院植物保护研究所 Athetis lepigone breeding method and system based on optical image recognition
CN115147837B (en) * 2022-08-16 2023-10-27 河北省农林科学院植物保护研究所 Athetis lepigone feeding method and system based on optical image recognition

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ayudya et al. Insecticidal activity of culture filtrates from liquid medium of Beauveria bassiana isolates from South Sumatra (Indonesia) wetland soil against larvae of Spodoptera litura
WO2006121350A1 (en) Entomopathogenic fungi and uses thereof
Behle et al. Evaluation of Metarhizium brunneum F52 (Hypocreales: Clavicipitaceae) for control of Japanese beetle larvae in turfgrass
Gustianingtyas et al. The endophytic fungi from South Sumatra (Indonesia) and their pathogenecity against the new invasive fall armyworm, Spodoptera frugiperda
NO832466L (en) PROCEDURE FOR PREPARING PURE MUTANTS WITH INSECTICID EFFECT
Iwanicki et al. Modified Adamek's medium renders high yields of Metarhizium robertsii blastospores that are desiccation tolerant and infective to cattle-tick larvae
Augustine et al. Biology of pulse beetle, Callosobruchus chinensis (Linnaeus) on cowpea variety DC-15
RU2763055C1 (en) Method for producing spores of microsporidia nosema pyrausta
Goettel Pathogenesis of the hyphomycete Tolypocladium cylindrosporum in the mosquito Aedes aegypti
CN105274008A (en) Paecilomyces lilacinus PlTS01 strain and application thereof in bemisia tabaci control
CN117965322A (en) Metarhizium anisopliae Mrztsl2308 emulsion suspension for preventing and treating prodenia litura as well as preparation method and application thereof
CN1319458C (en) Prodn. and use of novel fungitype insecticide
JP4792685B2 (en) An entomopathogenic fungus with a broad host range
CN110669675B (en) Metarhizium anisopliae MANGS71814 and application thereof in control of potato tuber moth
JP2842580B2 (en) Nematode culture method
Deka et al. Biocontrol prospects of entomopathogenic fungi for management of mustard aphid (Lipaphis erysimi Kalt.) on rapeseed-mustard
Al-alawi et al. Selection of Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin isolates for management of Myzus persicae (Sultzar)(Hom.: Aphidae) based on virulence and growth related characteristics
CN115197855A (en) Beauveria bassiana, beauveria bassiana and Spodoptera frugiperda egg parasitic wasp combination and application thereof
JP4501426B2 (en) Insecticidal fungi
RU2781982C1 (en) Method for mass production of microsporidia spores nosema pyrausta
Sepe et al. INFECTIVITY OF BEAUVERIA BASSIANA (BALSAMO) AGAINST TRIBOLIUM CASTANEUM (COLEOPTERA: TENEBRIONIDAE)
US20040151699A1 (en) Bactericidal, bacteriostatic and fungicidal composition, comprising two or more live species of trichoderma and its preparation procedure, and a composition based on latex for a pruning cicatrizing that includes a latex base and a composition of two or more live species of trichoderma
Oulebsir-MohandKaci et al. Isolation of entomopathogenic microorganisms from soil: study of the pathogenicity of an Aspergillus strain and its toxins against Galleria mellonella
CN117660202B (en) Aspergillus peak Aspergillus nomius and application thereof
CN117925420B (en) Metarhizium anisopliae Mryscm strain 2308 and culture method and application thereof