RU2760438C1 - Способ иммуноферментного определения уровня антигенраспознающих рецепторов В-лимфоцитов, представленных мембранными, специфическими к RBD PROTEIN SARS-CoV-2, IgG антителами - Google Patents
Способ иммуноферментного определения уровня антигенраспознающих рецепторов В-лимфоцитов, представленных мембранными, специфическими к RBD PROTEIN SARS-CoV-2, IgG антителами Download PDFInfo
- Publication number
- RU2760438C1 RU2760438C1 RU2021116671A RU2021116671A RU2760438C1 RU 2760438 C1 RU2760438 C1 RU 2760438C1 RU 2021116671 A RU2021116671 A RU 2021116671A RU 2021116671 A RU2021116671 A RU 2021116671A RU 2760438 C1 RU2760438 C1 RU 2760438C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cov
- sars
- igg
- rbd
- antibodies
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
- A61B5/145—Measuring characteristics of blood in vivo, e.g. gas concentration, pH value; Measuring characteristics of body fluids or tissues, e.g. interstitial fluid, cerebral tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/96—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood or serum control standard
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Surgery (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен метод иммуноферментного определения уровня антигенраспознающих рецепторов В-лимфоцитов, представленных мембранными, специфическими к RBD Protein SARS-CoV-2, IgG антителами. Метод включает нанесение в лунки микропланшета соответствующего по структуре эпитопу RBD-белка вируса SARS-CoV-2 рекомбинантного антигена RBD Protein, внесение в лунки микропланшета содержащих известные количества IgG калибровочных образцов, выделение и доведение взвеси лимфоцитов до рабочей концентрации, внесение взвеси лимфоцитов в лунки микропланшета с антигеном, внесение конъюгата IgG-антител, внесение ТМБ-хромогена, проведение цветной реакции, спектрофотометрию оптической плотности, построение калибровочной кривой и определение концентрации специфических к RBD-белку вируса SARS-CoV-2 IgG-антител относительно оптической плотности калибровочных проб в референс-системе. Изобретение обеспечивает возможность выявления у инфицированного человека, перенесшего COVID-19 или вакцинированного, уровень специфических нейтрализующих IgG-антител к RBD-эпитопу коронавируса, потенциально характеризующих активность рецепторов В-лимфоцитов. 4 табл.
Description
Изобретение относится к иммунологии и, в частности, к лабораторной диагностике с использованием генно-инженерных биотехнологий в конструировании тест-системы для оценки активности В-клеточного иммунного ответа у инфицированных SARS-CoV-2 и привитых лиц, c целью характеристики инфекционного процесса у населения, а также для определения эффективности вакцинации и иммунотерапии при получении соответствующих лечебно-профилактических препаратов против SARS-CoV-2.
Распространение среди людей вируса SARS-CoV-2, послужившего причиной инфекционного заболевания под названием СOVID-19, привело к вспышке, носящей характер пандемии, и, в настоящее время, является серьезной проблемой общественного здравоохранения во всем мире. Клинические проявления COVID-19 широко варьируют от бессимптомной инфекции до острой дыхательной недостаточности (9, 16). Летальность составляет около 2,6 - 4%, в связи с чем SARS-CoV-2 включен в перечень заболеваний, представляющих опасность для окружающих (14, 25).
Понятно, что вероятность встречи с SARS-CoV-2 возрастает для каждого человека. Тем не менее, многие люди, неоднократно и длительно контактировавшие с заболевшими COVID-19, не заболевают или у них, зачастую, отсутствуют характерные клинические симптомы. Почему так происходит – один из самых насущных вопросов понимания иммунного ответа на SARS-CoV-2. В имеющихся публикациях о механизмах специфического иммунного ответа на SARS-CoV-2 наиболее подробно описаны варианты протекания инфекционного процесса при COVID-19, механизмы, сроки и вариабельность антителообразования (гуморальный иммунный ответ).
Одним из типичных проявлений заболевания у пациентов с COVID-19, помимо ряда специфических клинических синдромов, была лимфопения, которая сохранялась в течение 4-11 недель и более после выздоровления. Это, по мнению авторов, говорит о том, что инфекция SARS-CoV-2 глубоко влияет на лимфоциты и приводит к их длительным дисфункциям (8, 27). Между тем, лимфоцитам определена решающая роль для устранения инфекции и создания длительного иммунитета (22, 23). Исследования иммунной реакции человека против SARS-COV-2, характеризующие ТОРС-COV-2 антиген-специфические Т - клеточные ответы, неожиданно, показали, что от 20 до 50% людей, которые не подвергались воздействию SARS-CoV-2, имели значительную реактивность Т-клеток, направленную против пептидов, соответствующих последовательностям SARS-CoV-2 (10). Отмечена активация субпопуляций Т - клеток у пациентов при острых COVID-19 (12, 13).
Нет сомнений, что клеточные реакции имеют прямой защитный эффект против тяжелой коронавирусной инфекции, а также поддерживают производство антител (2). Вместе с тем, понимание защитных не только Т-, но и В-клеточных иммунных реакций против SARS-CoV-2, важны для борьбы с вирусом и контроля развития болезни, и их следует учитывать в стратегиях вакцинации. В одной из исследовательских работ было обнаружено, что у погибших пациентов с COVID-19 развивался более быстрый рост анти-S антител по сравнению с пациентами, которые выздоравливали, с последующим ранним снижением В-клеточного иммунитета и нарушением нейтрализующей способности антител (11). Как известно, антигенраспознающие рецепторы В-лимфоцитов (BCR) представляют собой молекулы иммуноглобулинов, имеющих трансмембранные и цитоплазматические сегменты. В процессе иммунного ответа В-лимфоцит получает одновременно два сигнала активации: от антигенраспознающего рецептора при его соединении с антигеном и от связывания его поверхностных костимулирующих молекул с соответствующими лигандами на Т-лимфоцитах (28, 31) При иммунном ответе одновременно с эффекторными клетками образуются В-клетки памяти, не вовлекаемые в текущий иммунный ответ, но формирующие пул защитных клеток при повторной встрече с тем же антигеном и которые уже прошли этап переключения изотипа секретируемых антител и должны обеспечивать более быстрый и эффективный иммунный ответ при повторном контакте с антигеном. Особенностями долгоживущих В-клеток памяти являются: способность быстро отвечать пролиферацией и дифференцировкой в плазматические клетки на повторную встречу с антигеном; способность быстро переключаться с синтеза IgM на синтез IgG и IgA; способность быстро продуцировать и секретировать большое количество специфических антител с выраженными защитными свойствами (28, 31).
SARS-CoV-2, также, как и SARS-CoV и MERS-CoV, представляет собой вирус, относящийся к семейству Coronaviridae и роду бетакороновирусов (16). Изучение коронавируса SARS-CoV, который вызвал всемирную эпидемию в 2002 и 2003 годах, и in vitro исследования связывания вируса SARS-CoV-2 с клеткой показали, что связь с рецептором ангиотензин-превращающего фермента 2 (ACE2), осуществляется через рецептор- связывающий домен (RBD). То есть, RBD является ключевым функциональным компонентом в субъединице S1, который отвечает за связывание SARS-CoV-2 с ACE2 (4, 5, 24, 30). Этот факт предопределяет необходимость разработки вакцин на основе RBD SARS-CoV-2 для профилактики инфекции.
Немногочисленная патентная база, посвященная диагностике COVID-19, касается серодиагностики в иммуноферментном анализе. Современные тест-системы с использованием S-антигенов для серологического обнаружения антител к SARS-CoV-2 характеризуются, как правило, довольно высокой специфичностью. Описаны результаты сравнительных исследований по созданию двух различных версий рекомбинантного спайк-белка SARS-CoV-2, используемых в исследованиях (1). Между тем, вариант коронавируса SARS-CoV-2 с мутацией, затрагивающей рецептор-связывающий (RBM) S-белка и изменяющей его структуру, может уклоняться от иммунного ответа в организме человека, ранее переболевшего COVID-19, и хуже нейтрализуется некоторыми моноклональными антителами. Если согласиться с мнением о том, что RBD более консервативен в мутациях, чем спайковый RBM (6), то определение уровня нейтрализующих антител к RBD-эпитопу вируса SARS-CoV-2 как в сыворотке крови, так и в связи с рецепторами В-клеток будет важным показателем в оценке иммунного статуса и в случаях заражения мутирующим вирусом SARS-CoV-2.
На сегодняшний день абсолютно не исследована роль этого домена в реакции активации специфических поверхностных рецепторов В- лимфоцитов. Отсутствует патентная база, посвященная иммунному ответу к вирусу SARS-CoV-2 популяцией В-клеток.
Аналогов и прототипов предлагаемого изобретения, характеризующего специфичность активации популяции В-лимфоцитов и В-клеток памяти к RBD-эпитопу SARS-CoV-2, обнаружено не было.
Технической проблемой, решаемой настоящим изобретением, является создание метода, который позволяет в иммуноферментном анализе выявлять у инфицированного человека, перенесшего COVID-19 или вакцинированного уровень специфических нейтрализующих IgG-антител к RBD - эпитопу короновируса, потенциально характеризующих активность рецепторов В-лимфоцитов и, в частности, В-клеток памяти. Для решения поставленной технической проблемы и достижения заявленного технического результата предлагаются следующие технические решения.
1. В качестве иммуногена использовали рекомбинантный белок S Protein RBD (ATAGENIX LABORATORIES, кат.№ATMP02479COV), полностью соответствующий RBD-белку вируса SARS-CoV-2, сорбированный в лунки 96-луночного разборного планшета, выполненного из полистирола.
2. Для осуществления метода иммуноферментного выявления IgG-антител, представленных поверхностными рецепторами В-лимфоцитов крови человека, была сформирована тест-система с набором реагентов. Сокращенное наименование тест-системы: «IgG-л-SARS-CoV-2 - RBD-ИФА».
Тест-система и набор реагентов включают сорбент, концентрат конъюгата IgG-антител, референс-систему с калибраторами, градиент фиколл-пак для выделения лимфоцитов из периферической крови, концентрат раствора для разведения образцов взвеси лимфоцитов, раствор для разведения конъюгата, ТМБ-хромоген, концентрат промывочного раствора, стоп-реагент.
Предлагаемый метод определения уровня специфических IgG к RBD-эпитопу вируса SARS-CoV-2, представленных поверхностными рецепторами В-лимфоцитов, включает следующие этапы: внесение в лунки референс-системы калибровочных образцов и в лунки с иммуногеном - анализируемые образцы; перемешивание, инкубирование иммуносорбента с последующей промывкой, добавлением хромогена, остановкой реакции и оценкой оптической плотности.
В качестве анализируемого образца используют взвесь лимфоцитов периферической крови в концентрации 2-3х106/мл.
Для решения заявленной технической проблемы, а именно, осуществления тестирования пациентов, мониторинга лечения больных COVID-19 и поствакцинального периода у привитых и получения максимально адекватного технического результата:
- в состав разработанной тест-системы для осуществления метода иммуноферментного анализа введен рекомбинантный белок RBD Protein, соответствующий по структуре эпитопу RBD-белка вируса SARS-CoV-2, сорбированный в лунках разборного полистиролового планшета, как основы тест-системы;
- использование взвеси лимфоцитов крови в качестве анализируемого образца;
- формирование тест-системы с набором реагентов для осуществления метода иммуноферментного определения уровня антигенраспознающих рецепторов В-лимфоцитов, представленных мембранными, специфическими к RBD Protein SARS-CoV-2, IgG антителами в исследованиях взвеси лимфоцитов крови человека: «IgG-л- SARS-CoV-2 - RBD-ИФА».
- апробация метода в клинических условиях.
Предлагаемый метод и реализующую его тест-систему рекомендуется использовать в клинической лабораторной практике при мониторинге терапии больных COVID-19, динамическом наблюдении за пациентами, прогнозировании тяжести течения заболевания, при мониторинге в поствакцинального периода у привитых.
В состав тест-системы для осуществления предлагаемого метода входят:
- планшет полистироловый 96-луночный, стрипованный, наборный, из прозрачного полимерного материала (фирма GreinerBio-OneGmbH, Германия) готовый к применению. Планшет состоит из:
- двух 8-луночных референс-стрипов, иммобилизованных моноклональными анти-IgG-антителами (МКАТ анти-IgG) (МКАТ-анти-IgG, фирма Полигност, Россия, ТУ 9398-001-11122195-08, РУ № ФСР 2009/05707 от 15.09.2009).
- десяти 8-луночных стрипов, сорбированных рекомбинантным RBD Protein (производства Cloud-CloneCorporation (США).
- калибровочные пробы (КП) (фирма Полигност, Россия), содержащие известные количества IgG в мкг/мл в виде 10-кратных концентратов: 50 (КПА), 20 (КПВ), 10 (КПС), 2 (КПD), 0 (КПЕ), готовые к применению. Концентрация аналита (IgG) в КП определялась производителями (фирма Полигност, Россия) методом двуцентрового ИФА, в котором образцом сравнения служил внутрилабораторный эталон St№2, представляющий собой пул 300 сывороток донорской крови. Содержание аналита в St№2 определялось методом двуцентрового ИФА с применением международного референс образца WHO 67/97 Liquichek ImmunologyControl (Bio-Rad) Level 2, lot 5215.
- конъюгат моноклональных антител против легких и тяжелых полипептидных цепей иммуноглобулинов G человека, меченных пероксидазой хрена (МКАТ- анти-IgG -ПХ), 100-кратный концентрат;
- раствор фиколл-пак (градиент для выделения лимфоцитов, d=1,077);
- промывающий буфер,10-кратный концентрат;
- буфер для промывки и разведения анализируемых образцов, 10-кратный концентрат;
- тетраметилбензидин (ТМБ);
- стоп-реагент;
- липкая пленка в виде отдельных листов для заклейки планшетов;
- трафарет для анализа;
- инструкция по применению.
Тест-система для осуществления метода рассчитана на 90 определений, включая 5 калибровочных проб в дублях. Предназначена для ручной постановки с возможностью как дробного использования планшета (набора), так и использования целого планшета (набора); предназначена для исследований invitro; должна храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре от +2 до +8°С в течение всего срока годности (6 месяцев).
Воспроизведение метода включает следующие этапы:
1. Предварительная подготовка промывающего буфера и буфера для разведения образцов клеток из соответствующих концентратов.
2. Получение образцов взвеси лимфоцитов периферической крови из пробирок с гепарином или ЭДТА, используя градиент плотности фиколл-пак, отмывку выделенных мононуклеаров и доведение взвеси клеток до рабочей концентрации 2-3х106 (12-18 клеток в 1 большом квадрате камеры Горяева).
3. Внесение образцов согласно предлагаемой схеме:
Схема постановки анализа
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
A | КПА | КПА | ||||||||||
B | КПB | КПB | ||||||||||
C | КПC | КПC | ||||||||||
D | КПD | КПD | ||||||||||
E | КПE | КПE | ||||||||||
F | ||||||||||||
G | ||||||||||||
H | ||||||||||||
РЕФЕРЕНС-
СИСТЕМА |
СТРИПЫ, СОРБИРОВАННЫЕ АНТИГЕНОМ: SProteinRBD; |
В лунки референс-стрипов внести по 90 мкл промывающего раствора и по 10 мкл калибровочных проб. В остальные лунки внести по 100 мкл взвеси лимфоцитов периферической крови обследуемых. Планшет заклеивается клейкой пленкой, в течение 10-15 сек. встряхивается легкими постукиваниями по рамке планшета и инкубируется в термостате при температуре (37±2)°С в течение 60 минут. По окончании инкубации лунки планшета промываются 3 раза промывающим буфером. Во все лунки вносится по 100 мкл рабочего разведения конъюгата с последующим инкубированием при тех же условиях; повторное 3-кратное промывание буферным раствором и двукратное промывание дистиллированной водой. В лунки добавляется по 100 мкл раствора хромогена (ТМБ). Иммуносорбент инкубируется в защищенном от света месте при температуре (20±5) °С в течение 7-10 минут. Для остановки цветной реакции в лунки вносится по 50 мкл стоп-реагента. Не позже чем через 15 минут после остановки цветной реакции на фотометре измеряется оптическая плотность при 450 нм.
Для расчета результатов при использовании компьютерного, или встроенного в фотометр, программного обеспечения, в настройках выбрать метод, соответствующий кусочно-линейной аппроксимации. При ручных расчетах для получения стандартной кривой построить калибровочный график, откладывая по оси абсцисс концентрацию IgG в мкг/мл, по оси ординат - оптическую плотность при длине волны 450 нм.
Результаты проведенных нами исследований позволяют предложить следующую интерпретацию получаемых данных:
количество IgG в мкг/мл | интерпретация результатов |
0-10 | Отрицательный результат |
10-20 | Сомнительный результат свидетельствует о низком уровне антител IgG к вирусу. Рекомендуется повторное исследование через 1-2 недели. |
20-50 и выше | Положительный результат выявление положительного результата диктует необходимость динамического наблюдения при оценке степени распространения инфекции, в мониторинге терапии, проводимой у пациентов с COVID-19 и мониторинге эффективности вакцинации вакцинами, содержащими RBD-эпитоп вируса. |
Определение диагностических критериев, диагностического значения и рекомендаций для выполнения определения уровня нейтрализующих IgG к RBD эпитопу вируса SARS-CoV-2, представленных антигенраспознающими рецепторами B-лимфоцитов, проводилось на спектрофотометре "Лазурит" (Dynex, США) с использованием метода и тест-системы для иммуноферментного анализа, входящих в предмет данного изобретения. Сопоставления с другими методами не проводилось в следствии их отсутствия. Аналитические и функциональные характеристики тест-системы для иммуноферментного анализа, входящие в предмет данного изобретения, оценивались согласно перечню руководящих документов (19, 20, 21, 25, 26).
Аналитическая специфичность составила 100% и обусловлена использованием моноклональных антител (МКАТ) в референс-системе, обладающих высокой специфичностью к IgG и не распознающих антитела других классов или альбумина в физиологических концентрациях при таком же разведении, что доказано производителем.
Диапазон определяемых концентраций специфических IgG набора «IgG-л-SARS-CoV-2-RBD-ИФА» составил 2-50 мкг/мл.
Аналитическая чувствительность составила не более2 мкг/мл.
Коэффициент вариации (КВ) внутри- и межсерийной воспроизводи-мости не превышает 8%.
Биологический референтный интервал для значений концентрации IgG-антител к RBD-белку SARS-CoV-2, связанных со специфическими поверхностными рецепторами В-лимфоцитов, составил от 0 до10 мкг/мл.
Диагностическая эффективность теста, по результатам сравнительных иследований с образцами взвеси лимфоцитов периферической крови от пациентов с острой респираторной вирусной инфекцией (ОРВИ), цитомегаловирусом, бактериальной пневмонией и бронхитом, вызванными Mycoplasma pneumoniae составила 100%. Перекрестных реакций не обнаружено.
Клиническая апробация метода осуществлялась согласно этическим стандартам в соответствии с Хельсинской декларацией 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ № 266 от 19.06.2003 г. От всех участников исследований получено информированное письменное согласие. В исследовании приняли участие 78 человек, сотрудников медицинских организаций и членов их семей. Из них 24 человека (30,7%) перенесли COVID-19, что было ранее подтверждено ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ ПЦР) и наличием клинических симптомов. Клинический диагноз был им поставлен согласно критериям Всемирной организации здравоохранения (17).
6 человек (7,7%) отмечали близкий контакт с людьми с инфекцией SARS-CoV-2 и отсутствие признаков заболевания; 4 человека (5,1%) были в динамическом наблюдении после вакцинации. Группа из 15 (19,2%) обследуемых отмечала наличие признаков ОРВИ, при этом результаты ПЦР на SARS-CoV-2 были отрицательными. Контрольную группу составили 29 человек (37,2%), отрицающих заболевание и контакты с заболевшими COVID-19. На момент сбора образцов все переболевшие и контактировавшие с ними не имели симптомов, указывающих на COVID-19, и положительных результатов ОТ ПЦР в течение как минимум 15дней.
В группе переболевших наиболее частыми симптомами (84,6%) были существенное повышение температуры, одышка, утомляемость (79,9%), кашель (72,4%) и миалгия (71,5%). Практически все отмечали кратковремен-ную (до 5 суток) или более длительную (до трех недель) аносмию и дисгевзию.
Был проведен сравнительный анализ уровней нейтрализующих IgG-антител, связанных с поверхностными рецепторами В-клеток между рекомбинантными Strimer и RBD-белками и между вируснейтрализующими IgG к этим эпитопам в сыворотке крови. С этой целью мы подготовили аналогичную тест-систему, где иммуносорбентом был рекомбинантный Strimer Рrotein этой же фирмы. Содержание этих показателей оценивали в мкг/мл.
У 7 из 15 обследованных лиц (46,7%), которые перенесли респираторную инфекцию в эпидемический период, но при обследовании методом ОТ ПЦР Covid-19 не был подтвержден, обнаруживались высокие значения IgG к RBD-белкам как в сыворотке, так и в связи с рецепторами мембран В-лимфо-цитов (таблица 1). Оценка содержания IgG-антител к RBD Protein, ассоциированных с рецепторами В-клеток, показала, что в группе не болевших, тем не менее, определяются эти показатели. Однако их количество было низким (Ме=7 мкг/мл), даже у лиц, имевших высокое содержание сывороточных IgG к RBD Protein. Интересно, что наиболее высокое их значение обнаружено у лиц перенесших респираторную инфекцию при неподтвержденном Covid-19.
У лиц, перенесших Covid-19, выявлялись две категории результатов. У 6 человек из 15 (40%) было низкое содержание IgG-антител, ассоциированных с рецепторами В-лимфоцитов. У остальных их количество было достаточно высоким. Мы предположили, что эти различия могут быть объяснены применением глюкокортикостероидов (как в виде инъекций, так и в виде ингаляций) в лечении этих 6 обследуемых, что могло обусловить умеренную иммуносупрессию иммунного ответа. Полученные данные согласуются с наблюдениями исследователей, обследовавших работников медицинской организации и выявивших наличие положительного иммунного ответа при отсутствии симптомов Covid-19. У некоторых, серонегативных по IgG к RBD-белку, медработников был положительный ПЦР-тест на SARS-CoV-2. При этом уровни IgG к нуклеокапсиду и IgG к спайк-белку изменялись взаимосвязанно [15]. Дальнейшими исследованиями обнаружено (табл.2), что у переболевших Cоvid-19 через 2 месяца после болезни уровень нейтрализующих IgG к RBD-белку составлял 82,7% от величины антител к S trimer Рrotein, а через 6 месяцев - 67,8%. Кроме того, величина IgG-антител к этим эпитопам вируса через 6 месяцев от начала заболевания выросла в 1,9 и 1,8 раз соответственно.
Интересен тот факт, что у 4 переболевших величина антител к RBD-белку была на 8,7% выше, чем к белку S trimer и это превышение сохранилось и через 6 месяцев, хотя, из-за малой численности группы, показатели были не достоверны. В других группах достоверность была отмечена (р˂0,05).Таким же значимым было увеличение уровня IgG-антител и к Strimer, и к RBD-белкам через 6 месяцев от начала заболевания. Не менее интересны показатели величины IgG-антител в контрольной группе. У 16 из 29 человек (55,2%), отрицающих контакты и какие-либо клинические признаки вирусных заболеваний за весь период пандемии, обнаружены IgG антитела, ассоциированные с рецепторами В-лимфоцитов, и к Strimer, и к RBD-белкам вируса Sars-Cov-2. Этот факт позволил нам предположить наличие естественной ответной иммунной реакции на небольшие дозы вирусной нагрузки.
В таблице 3 указаны значения нейтрализующих IgG у 4 испытуемых перед прививкой вакциной Спутник V. Для более полной картины провели дополнительные исследования с величиной коэффициента позитивности (КП) с использованием наборов реагентов для иммуноферментного выявления иммуноглобулинов класса G к SARS-COV-2 "SARS-COV-2-IgG-ИФА-БЕСТ", где иммуносорбентом служил рекомбинантный Strimer Protein.У одного из обследуемых значения IgG-антител, ассоциированных с рецепторами В-лимфоцитов достоверно отличались от показателей других обследуемых (р˂0,05). Вероятно, определенный иммунный ответ на вирус Sars-Cov-2 был сформирован в отсутствии клинических проявлений. Это согласуется с данными рядоа авторов, предполагающих возможность бессимптомно перенесённого заболевания, что диктует необходимость определять долю бессимптомных инфекций путем скрингингового обследования населения (7, 29). Однако, по нашему мнению, скрининговых обследований с использованием только ОТ ПЦР и серологических тестов явно не достаточно. Необходимо в комплекс тестов вводить анализ оценки клеточного ответа и, в частности, В-клеточного, на антигены вируса.
При индивидуальном анализе изменений показателей уровня вируснейтрализующих IgG через 21 день после прививки (таблица 4) прослеживается четкий иммунный ответ в виде увеличения уровня сывороточных IgG, зафиксированных и предлагаемой тест-системой и регистрируемый коэффициентом позитивности (КП) тест-системой Вектор-Бест. Наиболее значимы изменения в показателях вируснейтрализующих антител у "бессимптомного" испытуемого, где величина IgG к RBD Рrotein несколько выше, чем к Strimer Рrotein.Это согласуется с мнением авторов, пришедших к выводу, что ответ В-клеток памяти на SARS-CoV-2 развивается между 1,3 и 6,2 месяцами после заражения и согласуется с персистенцией антигена, зафиксированного в кишечнике у 50% "бессимптомных" пациентов (3). В нашем наблюдении катализатором значительного роста антител послужила, видимо, вакцина.
По нашим данным ответ В-клеток памяти против RBD белка вируса SARS-CoV-2 развивается в течение первых 6 месяцев после заражения или вакцинации, и это подтверждается авторами, изучающими активацию иммунного ответа В-клетками памяти с накоплением соматических мутаций Ig и выработкой антител с повышенной нейтрализующей широтой и эффективностью, изучающих этот феномен у пациентов, у которых SARS-CoV-2 обнаруживался в эпителии тонкой кишки (3).
Таким образом, у лиц, перенесших Covid-19, и у вакцинированных, выраженность иммунного ответа может сильно варьировать, что подтверждает необходимость динамических тестирований. Несомненно, определение уровня IgG-антител, обладающих вируснейтрализующей активностью, препятствующей связыванию гликопротеина RBD вируса SARS-CoV-2 с рецептором клеток человека АСЕ2 и ассоциированных с поверхностными рецепторами В-лимфоцитов может пролить свет на готовность активированных В- клеток к быстрому и эффективному ответу на повторную встречу с вирусом и, конкретно, к его наиболее иммуногенныму эпитопу.
Апробация заявляемого метода и реализующей его тест-системы в клинических условия показала, что она способна выявлять вируснейтрализующие IgG к RBD-эпитопу SARS-CoV-2, представленные антигенраспознающими рецепторами В-клеток как у больных COVID-19, так и у вакцинированных в сроки, соответствующие данным, представленным в современной литературе. Метод проявил высокую чувствительность и может использоваться для оценки активации В-клеточного иммунного ответа, как в процессе заражения, так и в процессе вакцинации. Чувствительная и специфичная идентификация IgG-антител к RBD-эпитопу коронавируса SARS-Cov-2 может быть включена в перечень методов для скрининга широких групп населения, поскольку достаточно дешева, экономична по времени и не требует дорогостоящего оборудования и реактивов. Метод позволяет детально характеризовать вируснейтрализующий иммунный ответ В-клеток на SARS-CoV-2 как качественным, так и количественным образом, быть одним из критериев выздоровления и оценки воздействия вакцинации. Предлагаемый метод и тест-система «IgG-л-SARS-CoV-2 - RBD-ИФА» согласуются с временными методическими рекомендациям МЗ РФ по профилактике, диагностике и лечению новой коронавирусной инфекции (COVID-19) (18), где при оценке напряженности поствакцинального иммунитета методом ИФА рекомендуется определение антител к RBD -домену вируса.
В наборе реагентов «IgG-л-SARS-CoV-2 - RBD-ИФА», предлагаемого для осуществления заявляемого метода, используется рекомбинантный RBD-protein, полностью соответствующий RBD-эритопу вируса SARS-COVE-2 и позволяет выявлять иммуноглобулины класса G, представленные поверхностными рецепторами В-клеток, к RBD-эпитопу вируса, поэтому данный набор подходит и для включения в оценку поствакцинального иммунного ответа, полученного иммунизацией вакцинным препаратом на основе RBD-домена Spike.
Метод иллюстрируется следующими таблицами:
Таблица 1.
Уровень специфического IgG к RBD-Protein SARS-CoV-2 в сыворотке крови и ассоциированных с рецепторами В-лимфоцитов [Mе(Q 25-75%)]
Группа не болевших n=13 |
Группа перенесших респираторное заболевание n=7 |
Группа перенесших Covid-19 n=15 |
|
Уровень IgGкRBD-Protein (мкг/мл) в сыворотке крови | 21,1 (2,9 – 35,5) | 63,7 (53,4 – 77,5) | 29,5 (19,2 – 67,9) |
Уровень IgGкRBD-Protein (мкг/мл) связанных с рецепторами В- лимфоцитов | 3,42 (1,96 – 13,3) | 40,0 (27,1 – 112,3) | 13,9 (3,0 – 30,8) |
Таблица 2
Показатели уровня нейтрализующих IgG к RBD-и Strimer-протеинам SARS-CoV-2 ассоциированных с рецепторами В-лимфоцитов (в мкг/мл)
контроль n = 13 |
контроль n = 16 |
переболевшие через 2 мес n = 20 |
переболевшие через 6 мес n = 20 |
переболевшие через 2 мес n = 4 |
переболевшие через 6 мес n = 4 |
|
S trimer | 3,48±1,08 Ме=2,1 (1,6 – 3,4) |
19,55±1,24 Ме=19,3 (15,9 – 23,8) |
31,6±2,3 *Ме=31,6 (24,9 – 37,2) |
61,02±3,9 *Ме=58,4 (52,7 – 71,2) |
27,54±1,36 *Ме=28,2 (25,8 – 29,3) |
63,47±7,4 *Ме=65,0 (53,0 – 73,9) |
RBD | 3,42±0,73 Ме=2,2 (1,5 – 4,1) |
15,91±8,09 *Ме=17,1 (11,6 – 20,1) | 27,42±1,31 *Ме=26,4 (22,5 – 33,9) |
50,42±3,5 *Ме=49,7 (36,9 – 60,0) |
38,33±5,8 *Ме=40,0 (28,6 – 48,0) |
74,91±9,6 Ме= 75,0 (57,3 – 92,5) |
Таблица 3
Показатели уровня нейтрализующих антител у 4 человек перед прививкой вакциной Спутник V.
IgG в сыворотке Тест-система Вектор-Бест КП (коэфф. позитивности) |
IgG в сыворотке крови предлагаемая тест-система (мкг/мл) |
IgG, ассоциированные с рецепторами В-клеток предлагаемая тест-система (мкг/мл) |
|||
Strimer | RBD | Strimer | RBD | ||
Е.В., 65 л | не обнаруж | 1,35 | 1,08 | 1,5 | 1,94 |
А.Р., 52 г. | не обнаруж | 1,07 | 5,66 | 9,8 | 6,4 |
В.А., 68 л. | не обнаруж | 1,8 | 2,1 | 3,2 | 2,4 |
В.Г., 69 л. | не обнаруж | 13,4 * | 8,7 * | 28,75 * | 31,32 * |
* - достоверность отличий от аналогичных показателей других обследуемых (р<0,05)
Таблица 4.
Показатели уровня нейтрализующих антител у 4 человек через 21 день после прививки вакциной Спутник V.
IgG в сыворотке Тест-система Вектор-Бест КП (коэфф. позитивности) |
IgG в сыворотке крови предлагаемая тест-система (мкг/мл) |
IgG, ассоциированные с рецепторами В-клеток предлагаемая тест-система (мкг/мл) |
|||
Strimer | RBD | Strimer | RBD | ||
Е.В., 65 л | 12,4 | 21,59 | 17,97 | 28,99 | 22,78 |
А.Р., 52 г. | 12,4 | 38,0 | 20,42 | 38,32 | 23,19 |
В.А., 68 л. | 12,5 | 41,52 | 24,12 | 38,4 | 24,7 |
В.Г., 69 л. | 12,7 | 85,43 * | 64,47 * | 90,3 * | 95,7 * |
* - достоверность отличий от аналогичных показателей других обследуемых (р<0,05)
Литература
1. Amanat F., Stadlbauer D., Strohmeier S., et all // Aserological assay to detect SARS-CoV-2 seroconversion in humans // https: //doi.org/ 10.1101/ 2020.03.17. 20037713.med Rxiv preprint 2. - 2020.
2. Channappanavar R, Fett C, Zhao J, Meyerholz DK, Perlman S. // Virus-specific memory CD8 T cells provide substantial protection from lethal severe acute respiratory syndrome coronavirus infection. JVirol.2014;88(19):11034-44.
3.ChristianGaebler, ZijunWang, Julio C. C.Lorenzi, FraukeMuecksch.//Evolution of Antibody Immunityto SARS-CoV-2 //Naturedoi: 10.1038/s41586-021-03207-w .
4. Du L. // The spike protein of SARS-CoV - a target for vaccine and therapeuticdevelopment //Nat Rev Microbiol,2009. Vol. 7, N 3. - P. 226-236.
5. Du L. MERS-CoV spike protein: a key target for antivirals // Expert Opin TherTargets,2017. - Vol. 21, N 2. - P. 131-143.
6. Emma C. Thomson, et al. // Thecirculating SARS-CoV-2 spike variant N439K maintains fitness while evading antibody-mediated immunity. // BioRxiv, 2020, DOI: 10. 1101/ 2020. 11.04.355842.
7. https://www.nature.com/articles/s41591-020-0965-6 - ref-CR12Gudbjartsson, DF, etal. Распространение SARS-CoV-2 среди населения Исландии. N. Engl. J. Med. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2006100(2020).
8. Grifoni , Вайскопф D , Рамирес С.И. , и др. Мишени Т-клеточного ответа на коронавирус SARS-CoV-2 у людей с заболеванием COVID-19 и у людей, не подвергшихся воздействию. Ячейка 2020.
9. JiangS.//AnemergingcoronaviruscausingpneumoniaoutbreakinWuhan, China: callingfordevelopingtherapeuticandprophylacticstrategies //EmergMicrobesInfect, 2020. - Vol. 9, N 1. - P. 275-277.
10. J. Braun et al.// Presence of SARS-CoV-2 reactive T cells in COVID-19 patients and healthy donors. medRxiv2020.2004.2017.20061440 [Preprint]. 22 April 2020; Y. Pengetal., bioRxiv 2020.06.05.134551 (2020).
11. LiuL., WeiQ., LinQ.Anti-spike IgG causes severe a cutelung in jurybyskewing macrophage responses duringacute SARS-CoV infection // JCIInsight, 2019. - Vol. 4, N 4. - e123158.
12. L. Rodriguez et al.// Systems-level immunomonitoring from acute to recovery phase of severe COVID-19. medRxiv 2020.2006.2003.20121582 [Preprint]. 7 June 2020.
13. Liu J.et al.// EBioMedicine 55, 102763 (2020). D. Mathew et al., Science eabc8511 (2020).
14. Ramzy A., McNeil D.G. // W.H.O. Declares Global Emergency as Wuhan Coronavirus Spreads // The New York Times. Availableathttps://nyti.ms/2RER70M; Accessed: January 30, 2020.
15. Sheila F. Lumley, B.M., B.Ch., et al. for the Oxford University Hospitals Staff Testing Group.//Antibody Status and Incidence of SARS-CoV-2 Infection in Health Care Workers.NEnglJMed December 23, 2020. doi:10.1056/NEJMoa2034545.
16. ZhouP. // Apneumoniaoutbreakassociatedwithanewcoronavirusofprobablebatorigin // Nature, 2020. - Vol. 579, N 7798. - P. 270-273.
17. Всемирная организация здравоохранения. Определения случаев для эпиднадзора за тяжелым острым респираторным синдромом (SARS). Доступно по адресу: http://www.who.int/csr/sars/casedefinition/en. Accessed: 6 июня 2003.
18. Временные методические рекомендации МЗ РФ- " Профилактика, диагностика и лечение новой короновирусной инфекции (COVID-19)", Версия 9 (26.10.2020).
19. ГОСТ Р 51088-2013, "Медицинские изделия для диагностики ин витро. Реагенты, наборы реагентов, тест-системы, контрольные материалы, питательные среды. Требования к изделиям и поддерживающей документации".
20. ГОСТ Р 51352-2013, "Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методы испытаний".
21. ГОСТ Р ИСО 23640-2015, " Изделия медицинские для диагностики invitro. Оценка стабильности реагентов для диагностики invitro".
22. Кори Л., Фауси А.С., etal. //Стратегический подход к исследованиям и разработкам вакцины против COVID-19. Наука 2020; 368 ( 6494 ): 948 - 50 ).
23. Лесли М.// Т-клетки, обнаруженные у пациентов с коронавирусом, служат хорошим предзнаменованием для длительного иммунитета. Наука 2020; 368 (6493) 809 – 10.
24. П. Прабакаран, Дж. Ган, Ю. Фэн, З. Чжу, В. Чоудри, X. Сяо, X. Джи,Д.С. Димитров. // Структура рецептор-связывающего домена коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома в комплексе с нейтрализующим антителом . J. Biol. Chem. 281 , 15829 -15836 ( 2006 ). DOI : 10.1074 / jbc.M600697200 pmid: 16597622.
25. Постановление Правительства РФ от 01.12.2004 №715.
26. Решение Совета Евразийской экономической комиссии от 10.11.2017 N 106 "О Требованиях к внедрению, поддержанию и оценке системы менеджмента качества медицинских изделий в зависимости от потенциального риска их применения. Требования к внедрению, поддержанию и оценке системы менеджмента качества медицинских изделий в зависимости от потенциального риска их применения, Приложение N 5. Требования к содержанию технического файла на медицинское изделие для диагностики invitro, раздел VIII. Деятельность по верификации и валидации".
27. Хуанг С , Ван У , Ли Х , и др. Клинические особенности пациентов, инфицированных новым коронавирусом 2019 г., в Ухане, Китай . Ланцет 2020 ; 395 ( 10223 ): 497 - 506 .
28. Хаитов P.M., Ярилин А.А., Пинегин Б.В., Иммунология : атлас. — М .: ГЭОТАР-Медиа, 2011, с 187-191.
29. Цюань-Синь Лун ,Сяо-ЦзюньТан ,Цю-Линь Ши ,Цинь Ли ,Хай-Цзюнь Дэн ,еtall // Клинико-иммунологическая оценка бессимптомных инфекций SARS-CoV-2, Природа Медицина, объем 26, страницы 1200–1204 ( 2020 ).
30. Ю. Юань , Д. Цао , Ю. Чжан etall. // Крио-ЭМ структуры МЭРС-CoV и SARS-CoV Spike гликопротеинов раскрывают динамические рецепторы связывающих доменов . Nat. Commun. 8, 15092 ( 2017 ). DOI : 10.1038.
31. Ярилин А.А., Иммунология, 2010, стр.36-44; стр. 242; разд. 3.1.3, 3.6.2.2).
Claims (1)
- Способ иммуноферментного определения уровня антигенраспознающих рецепторов В-лимфоцитов, представленных мембранными, специфическими к RBD Protein SARS-CoV-2, IgG антителами, осуществляемый с помощью тест-системы, набора реагентов и включающий нанесение в лунки микропланшета рекомбинантного антигена RBD Protein, соответствующего по структуре эпитопу RBD-белка вируса SARS-CoV-2, внесение в лунки микропланшета референс-системы калибровочных образцов, содержащих известные количества IgG в мкг/мл, выделение взвеси лимфоцитов периферической крови с помощью градиента фиколл-пак, отмывки лимфоцитов и доведение взвеси лимфоцитов до рабочей концентрации с последующим внесением в лунки микропланшета с антигеном, инкубирование, промывку, внесение конъюгата IgG-антител, промывку, внесение ТМБ-хромогена, проведение цветной реакции, внесение в лунки микропланшета стоп-реагента для остановки цветной реакции, спектрофотометрию оптической плотности при 450 нм, построение калибровочной кривой и определение концентрации специфических к RBD-белку вируса SARS-CoV-2IgG-антител, представленных поверхностными рецепторами В-клеток, относительно оптической плотности калибровочных проб в референс-системе.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2021116671A RU2760438C1 (ru) | 2021-06-09 | 2021-06-09 | Способ иммуноферментного определения уровня антигенраспознающих рецепторов В-лимфоцитов, представленных мембранными, специфическими к RBD PROTEIN SARS-CoV-2, IgG антителами |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2021116671A RU2760438C1 (ru) | 2021-06-09 | 2021-06-09 | Способ иммуноферментного определения уровня антигенраспознающих рецепторов В-лимфоцитов, представленных мембранными, специфическими к RBD PROTEIN SARS-CoV-2, IgG антителами |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2760438C1 true RU2760438C1 (ru) | 2021-11-25 |
Family
ID=78719433
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2021116671A RU2760438C1 (ru) | 2021-06-09 | 2021-06-09 | Способ иммуноферментного определения уровня антигенраспознающих рецепторов В-лимфоцитов, представленных мембранными, специфическими к RBD PROTEIN SARS-CoV-2, IgG антителами |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2760438C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2781235C1 (ru) * | 2022-05-30 | 2022-10-07 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Импульс Жизни" | Способ определения наличия реакции Т-клеток в крови человека на присутствие антигенов SARS-CoV2 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2746815C1 (ru) * | 2020-12-24 | 2021-04-21 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) | Способ выявления антител - иммуноглобулинов класса g в сыворотке крови к возбудителям тяжелых острых респираторных вирусных инфекций, включая sars-cov-2, с одновременным прогнозом тяжести протекания коронавирусной инфекции covid-19, на гидрогелевом биочипе |
RU2748540C1 (ru) * | 2021-02-08 | 2021-05-26 | Автономная некоммерческая образовательная организация высшего образования "Сколковский институт науки и технологий" | Способ детектирования вируса SARS-CoV-2 методом масс-спектрометрии |
-
2021
- 2021-06-09 RU RU2021116671A patent/RU2760438C1/ru active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2746815C1 (ru) * | 2020-12-24 | 2021-04-21 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) | Способ выявления антител - иммуноглобулинов класса g в сыворотке крови к возбудителям тяжелых острых респираторных вирусных инфекций, включая sars-cov-2, с одновременным прогнозом тяжести протекания коронавирусной инфекции covid-19, на гидрогелевом биочипе |
RU2748540C1 (ru) * | 2021-02-08 | 2021-05-26 | Автономная некоммерческая образовательная организация высшего образования "Сколковский институт науки и технологий" | Способ детектирования вируса SARS-CoV-2 методом масс-спектрометрии |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
GOEL R.R. et al, Distinct antibody and memory B cell responses in SARS-CoV-2 naïve and recovered individuals following mRNA vaccination // Sci. Immunol., 15.04.2021, pp.1-20. JUNO J.A. et al, Humoral and circulating follicular helper T cell responses in recovered patients with COVID-19 // Nature Medicine, VOL 26, September 2020, pp.1428-1434. VOLPATTI L.R. et al, Polymersomes decorated with SARS-CoV-2 spike protein receptor binding domain elicit robust humoral and cellular immunity // bioRxiv, version posted 8.04.2021, pp.1-37. * |
GOEL R.R. et al, Distinct antibody and memory B cell responses in SARS-CoV-2 naïve and recovered individuals following mRNA vaccination // Sci. Immunol., 15.04.2021, pp.1-20. * |
JUNO J.A. et al, Humoral and circulating follicular helper T cell responses in recovered patients with COVID-19 // Nature Medicine, VOL 26, September 2020, pp.1428-1434. * |
VOLPATTI L.R. et al, Polymersomes decorated with SARS-CoV-2 spike protein receptor binding domain elicit robust humoral and cellular immunity // bioRxiv, version posted 8.04.2021, pp.1-37. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2781235C1 (ru) * | 2022-05-30 | 2022-10-07 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Импульс Жизни" | Способ определения наличия реакции Т-клеток в крови человека на присутствие антигенов SARS-CoV2 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Gimenez et al. | SARS‐CoV‐2‐reactive interferon‐γ‐producing CD8+ T cells in patients hospitalized with coronavirus disease 2019 | |
Mazzoni et al. | Cell‐mediated and humoral adaptive immune responses to SARS‐CoV‐2 are lower in asymptomatic than symptomatic COVID‐19 patients | |
Heide et al. | Broadly directed SARS-CoV-2-specific CD4+ T cell response includes frequently detected peptide specificities within the membrane and nucleoprotein in patients with acute and resolved COVID-19 | |
da Silva et al. | Advances and challenges in paracoccidioidomycosis serology caused by Paracoccidioides species complex: an update | |
Koerber et al. | Dynamics of spike-and nucleocapsid specific immunity during long-term follow-up and vaccination of SARS-CoV-2 convalescents | |
Demaret et al. | Severe SARS‐CoV‐2 patients develop a higher specific T‐cell response | |
Latner et al. | Enzyme-linked immunospot assay detection of mumps-specific antibody-secreting B cells as an alternative method of laboratory diagnosis | |
Urra et al. | The antibody response to the glycan α‐Gal correlates with COVID‐19 disease symptoms | |
Kaaijk et al. | Children and adults with mild COVID-19: dynamics of the memory T cell response up to 10 months | |
Khaki et al. | Evaluation of viral antibodies in Iranian multiple sclerosis patients | |
Vaisman-Mentesh et al. | SARS-CoV-2 specific memory B cells frequency in recovered patient remains stable while antibodies decay over time | |
US8771967B2 (en) | Immunomodulation of functional T cell assays for diagnosis of infectious or autoimmune disorders | |
Hornsleth et al. | Detection of respiratory syncytial virus in nasopharyngeal secretions by ELISA: comparison with fluorescent antibody technique | |
Rathinam et al. | Immunological tests and their interpretation in uveitis | |
Alcaide et al. | A longitudinal analysis of SARS-CoV-2 antibody responses among people with HIV | |
Selvavinayagam et al. | Factors associated with the decay of anti-SARS-CoV-2 S1 IgG antibodies among recipients of an adenoviral vector-based AZD1222 and a whole-virion inactivated BBV152 vaccine | |
RU2760438C1 (ru) | Способ иммуноферментного определения уровня антигенраспознающих рецепторов В-лимфоцитов, представленных мембранными, специфическими к RBD PROTEIN SARS-CoV-2, IgG антителами | |
CN106939035A (zh) | 一种结核分枝杆菌t细胞抗原表位多肽及其应用 | |
Eickhoff et al. | Identification of immunodominant T cell epitopes induced by natural Zika virus infection | |
Silva et al. | SARS-CoV-2 recombinant proteins stimulate distinct cellular and humoral immune response profiles in samples from COVID-19 convalescent patients | |
Han et al. | Ex vivo peptide-MHC II tetramer analysis reveals distinct end-differentiation patterns of human pertussis-specific CD4+ T cells following clinical infection | |
KR102132964B1 (ko) | 쯔쯔가무시균 유래 엑소좀을 이용한 쯔쯔가무시병의 진단방법 | |
Costa et al. | Humoral and cellular immune responses to CoronaVac assessed up to one year after vaccination | |
Rodrigo et al. | An “In-House” ELISA for SARS-CoV-2 RBD uncovers elevated immune response at higher altitudes | |
Lopez-Gomez et al. | Approaches to evaluate the specific immune responses to SARS-CoV-2 |