RU2750715C1 - Method for determining the genetic predisposition to the development of multidrug-resistant tuberculosis mycobacterium tuberculosis in hiv infection - Google Patents
Method for determining the genetic predisposition to the development of multidrug-resistant tuberculosis mycobacterium tuberculosis in hiv infection Download PDFInfo
- Publication number
- RU2750715C1 RU2750715C1 RU2020142831A RU2020142831A RU2750715C1 RU 2750715 C1 RU2750715 C1 RU 2750715C1 RU 2020142831 A RU2020142831 A RU 2020142831A RU 2020142831 A RU2020142831 A RU 2020142831A RU 2750715 C1 RU2750715 C1 RU 2750715C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nat2
- tuberculosis
- multidrug
- development
- mycobacterium tuberculosis
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6858—Allele-specific amplification
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, фтизиатрии и терапии, и может быть использовано для прогнозирования развития туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis при клиническом течении ВИЧ-инфекции.The invention relates to medicine, namely to infectious diseases, phthisiology and therapy, and can be used to predict the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in the clinical course of HIV infection.
ВИЧ-инфекция остается одной из основных проблем глобального общественного здравоохранения. Напряженность эпидемиологической ситуации по ВИЧ-инфекции проявляется в неуклонном росте числа инфицированных ВИЧ и летальности среди заболевших людей. Прогрессия ВИЧ-ассоциированного иммунодефицита наиболее часто (в 60% случаев) приводит к развитию туберкулеза (ТБ), занимающего лидирующую позицию (в 50% случаев) среди причин смерти больных ВИЧ-инфекцией. Известно, что при туберкулезе у больных ВИЧ-инфекцией (коинфекция ВИЧ/ТБ) часто выявляется устойчивость к антитуберкулезной терапии за счет заражения лекарственно устойчивыми штаммами микобактерий туберкулеза. Множественная лекарственная устойчивость Mycobacterium tuberculosis (резистентность к двум и более препаратам, если ими являются изониазид и рифампицин) ведет к низким показателям излечения ТБ и более высокими показателям летальности в сравнении с пациентами с сохраненной лекарственной чувствительностью Mycobacterium tuberculosis.HIV infection remains a major global public health problem. The tension of the epidemiological situation with regard to HIV infection is manifested in the steady increase in the number of people infected with HIV and mortality among the sick people. The progression of HIV-associated immunodeficiency most often (in 60% of cases) leads to the development of tuberculosis (TB), which occupies a leading position (in 50% of cases) among the causes of death in HIV-infected patients. It is known that with tuberculosis in patients with HIV infection (HIV / TB co-infection), resistance to anti-tuberculosis therapy is often revealed due to infection with drug-resistant strains of mycobacterium tuberculosis. Multidrug resistance of Mycobacterium tuberculosis (resistance to two or more drugs, if they are isoniazid and rifampicin) leads to low TB cure rates and higher mortality rates compared to patients with preserved Mycobacterium tuberculosis drug susceptibility.
Селекция лекарственно-устойчивых мутантных штаммов Mycobacterium tuberculosis обычно наблюдается на ранних этапах лечения, когда при неадекватных режимах терапии мутанты становятся резистентными. Большая часть чувствительных штаммов исчезает, проявляется клиническая лекарственная устойчивость (http://med.by/methods/pdf/28-9902.pdf).The selection of drug-resistant mutant strains of Mycobacterium tuberculosis is usually observed in the early stages of treatment, when mutants become resistant under inadequate treatment regimens. Most of the susceptible strains disappear, clinical drug resistance appears (http://med.by/methods/pdf/28-9902.pdf).
Известно, что механизмы формирования лекарственной устойчивости либо чувствительности к фармакотерапии определяются и скоростью метаболизма в организме используемых лекарственных средств (ЛС). От последней зависит продолжительность и интенсивность фармакологического действия ЛС, т.е. эффективность терапии или отсутствие ожидаемого лечебного эффекта. Метаболизм ЛС осуществляется системой биотрансформации, состоящей из множества ферментов, специфичных для одной из трех фаз работы этой системы. В фазе I ферменты, такие как оксидазы цитохрома Р450, окисляют ЛС. Модифицированные ЛС посредством последующего ферментативного катализа конъюгируются с полярными соединениями в реакциях фазы II. Липофильные соединения превращаются в гидрофильные продукты, которые выводятся из организма в фазе III. Каталитическая активность ферментов обусловливает эффективность метаболизма ЛС. Поскольку многие ферменты являются продуктами экспрессии полиморфных генов, их действие генетически детерминировано, и от генотипа самого больного может зависеть возникновение нежелательной резистентности к назначаемым ЛС, являющимся субстратами метаболизирующих их ферментов.It is known that the mechanisms of the formation of drug resistance or sensitivity to pharmacotherapy are also determined by the metabolic rate in the body of the drugs (MP) used. The latter determines the duration and intensity of the pharmacological action of the drug, i.e. the effectiveness of therapy or the lack of the expected therapeutic effect. The metabolism of drugs is carried out by a biotransformation system, consisting of many enzymes specific to one of the three phases of this system. In phase I, enzymes such as cytochrome P450 oxidases oxidize drugs. The modified drugs are conjugated to polar compounds in phase II reactions by subsequent enzymatic catalysis. Lipophilic compounds are converted to hydrophilic products, which are eliminated from the body in phase III. The catalytic activity of enzymes determines the efficiency of drug metabolism. Since many enzymes are products of expression of polymorphic genes, their action is genetically determined, and the emergence of unwanted resistance to the prescribed drugs, which are substrates of enzymes metabolizing them, may depend on the genotype of the patient himself.
Назначением настоящего изобретения является разработка способа определения генетической предрасположенности к развитию туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis при ВИЧ-инфекции.The purpose of the present invention is to provide a method for determining the genetic predisposition to the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in HIV infection.
Назначение изобретения достигается с помощью способа определения генетической предрасположенности к развитию туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis при ВИЧ-инфекции.The purpose of the invention is achieved using a method for determining a genetic predisposition to the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in HIV infection.
У пациентов с диагнозом ВИЧ-инфекции русской национальности проводят забор образцов венозной крови, выделение геномной ДНК, аллель-специфическую полимеразную цепную реакцию с целью генотипирования по полиморфным локусам NAT2Lys268Arg rs1208, NAT2Argl97Gln G590A rs1799930 и NAT2 Leu161Leu С481Т rs1799929 гена ариламин-ацетилтрансферазы 2 NAT2 и у носителей сочетания генотипов NAT2A803A × NAT2G590G × NAT2C481C прогнозируют развитие туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis с 10,775-кратным риском. Новизна изобретения:In patients diagnosed with HIV infection of Russian nationality, venous blood samples are taken, genomic DNA is isolated, allele-specific polymerase chain reaction for the purpose of genotyping at the polymorphic loci NAT2 Lys268Arg rs1208, NAT2 Argl97Gln G590A rs1799930 and NAT2 Leu481LeSufera rs1799930 and NAT2 Leu481LeSufera rs1799930 and NAT2 Leu481LeSufera and carriers of the combination of genotypes NAT2 A803A × NAT2 G590G × NAT2 C481C predict the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis with a 10.775-fold risk. The novelty of the invention:
1. Впервые изучено распределение частот встречаемости генотипов/аллелей однонуклеотидных полиморфизмов гена ариламин-ацетилтрансферазы 2 NAT2 -NAT2Lys268Arg A803G rs 1208, NAT2Arg197Gln G590A rs1799930 и NAT2Leu161Leu С481Т rs1799929 - у пациентов с клиническим течением коинфекции ВИЧ и туберкулез, резистентных и чувствительных к антитуберкулезной терапии.1. For the first time, the distribution of the frequencies of genotypes / alleles of single nucleotide polymorphisms of the gene arylamine acetyltransferase 2 NAT2-NAT2 Lys268Arg A803G rs 1208, NAT2 Arg197Gln G590A rs1799930 and NAT2 Leu161 rs17 therapy.
2. Установлено, что пациенты с генотипом NAT2Arg197Gln G590G более подвержены к развитию туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis при ВИЧ-инфекции, нежели чувствительности, с 3,63-кратным риском.2. It was found that patients with the NAT2 Arg197Gln G590G genotype are more susceptible to the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in HIV infection than susceptibility, with a 3.63-fold risk.
3. Обнаружено, что носительство сочетания двух генотипов NAT2Lys268Lys А803А × NAT2Arg197Arg G590G усиливает риск формирования туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis до 10,65-кратного.3. It was found that the carriage of a combination of two genotypes NAT2 Lys268Lys А803А × NAT2 Arg197Arg G590G increases the risk of formation of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis up to 10.65-fold.
4. Носительство сочетания трех генотипов NAT2Lys268Lys А803А × NAT2Arg197Arg G590G × NAT2Leu161Leu C481C приводит к максимальному выявленному в данном исследовании риску развития туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis - 10,78-кратному.4. Carriage of a combination of three genotypes NAT2 Lys268Lys А803А × NAT2 Arg197Arg G590G × NAT2 Leu161Leu C481C leads to the maximum identified in this study risk of developing multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis - 10.78-fold.
5. Генотипирование по трем генотипам NAT2Lys268Lys А803А × NAT2Arg197Arg G590G × NAT2Leu161Leu C481C предлагается использовать в клинической практике для прогноза формирования туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis при ВИЧ-инфекции.5. Genotyping for three genotypes NAT2 Lys268Lys А803А × NAT2 Arg197Arg G590G × NAT2 Leu161Leu C481C is proposed to be used in clinical practice to predict the formation of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in HIV infection.
При известном прогнозе ответа пациента на определенную фармакотерапию возможно заблаговременное изменение тактики лечения и избежание формирования побочных реакций, неизбежных при использовании любых ЛС. Новый технический результат изобретения позволяет прогнозировать развитие туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis у больных ВИЧ и корректировать лечебную тактику ведения больных на этапе назначения лекарственных средств. В патентной и научной литературе отсутствуют сведения об аналогичном способе прогнозирования развития туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis у больных ВИЧ.With a known prognosis of the patient's response to a certain pharmacotherapy, it is possible to change the treatment tactics in advance and avoid the formation of adverse reactions that are inevitable when using any drugs. The new technical result of the invention makes it possible to predict the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in HIV patients and to correct the treatment tactics of managing patients at the stage of prescribing drugs. There is no information in the patent and scientific literature about a similar method for predicting the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in HIV patients.
Причиной смерти больных коинфекцией ВИЧ/ТБ становится прогрессирование туберкулеза с полиорганным поражением. Одним из основных препаратов первого ряда для противотуберкулезного лечения является изониазид. Монотерапия туберкулеза изониазидом часто сопровождается развитием устойчивости возбудителя к этому антибиотику. Изониазид активен в отношении вне- и внутриклеточных Mycobacterium tuberculosis. Он метабо-лизируется в печени путем ацетилирования ферментом ариламин-ацетилтрансферазой 2 (NAT2) до неактивных метаболитов, и для реакции ацетилирования характерен полиморфизм ацетилирующего эффекта (Preziosi P. Isoniazid: metabolic aspects and toxicological correlates. Curr. Drug Metab. 2007; 8:839-851. doi:10.2174/138920007782798216).The cause of death of patients with HIV / TB coinfection is the progression of tuberculosis with multiple organ lesions. One of the main first-line drugs for TB treatment is isoniazid. Monotherapy of tuberculosis with isoniazid is often accompanied by the development of resistance of the pathogen to this antibiotic. Isoniazid is active against extra- and intracellular Mycobacterium tuberculosis. It is metabolized in the liver by acetylation by the enzyme arylamine acetyltransferase 2 (NAT2) to inactive metabolites, and the acetylation reaction is characterized by polymorphism of the acetylating effect (Preziosi P. Isoniazid: metabolic aspects and toxicological correlates. Curr. Drug Metab. 2007; 8: 839 -851. Doi: 10.2174 / 138920007782798216).
Способность к ацетилированию можно измерить по реакции человека на лекарства, метаболизируемые ферментом, и теперь известно, что этот фенотип зависит от генотипа индивидуума в единственном кодирующем экзоне гена NAT2. Мутации в гене NAT2 действительно приводят к различным фенотипам ацетилирования, которые объясняют индивидуальные вариации в ответ на введение стандартной дозы лекарственного средства (от отсутствия терапевтической эффективности до побочных реакций на лекарства). В популяциях различают экстенсивных метаболизаторов с повышенной скоростью метаболизма, медленных метаболизаторов со сниженной скоростью биотрансформации и промежуточных метаболизаторов. У медленных метаболизаторов происходит синтез «дефектного» фермента либо отсутствует его продукция, ЛС накапливается в организме в высоких концентрациях, что приводит к появлению выраженных нежелательных лекарственных реакций - вплоть до интоксикации. У «сверхактивных» или «быстрых» метаболизаторов, т.е. лиц с повышенной скоростью биотрансформации ЛС результирующая концентрация ЛС в крови может быть недостаточна для достижения терапевтического эффекта. У пациентов, у которых наблюдается быстрая инактивация, ЛС рекомендуется применять в более высоких дозах.The ability to acetylation can be measured by a person's response to drugs metabolized by the enzyme, and it is now known that this phenotype depends on the genotype of the individual in a single coding exon of the NAT2 gene. Mutations in the NAT2 gene do indeed lead to different phenotypes of acetylation, which explain individual variations in response to administration of a standard dose of a drug (from lack of therapeutic efficacy to adverse drug reactions). In populations, extensive metabolizers with an increased metabolic rate are distinguished, slow metabolizers with a reduced biotransformation rate, and intermediate metabolizers. In slow metabolizers, a "defective" enzyme is synthesized or its production is absent, the drug accumulates in the body in high concentrations, which leads to the appearance of pronounced undesirable drug reactions - up to intoxication. In "overactive" or "fast" metabolizers, i.e. persons with an increased rate of biotransformation of drugs, the resulting concentration of drugs in the blood may be insufficient to achieve a therapeutic effect. In patients who experience rapid inactivation, drugs are recommended to be used in higher doses.
Изоформы синтезированного фермента NAT2 отличаются аминокислотной последовательностью и активностью ацетилирующего эффекта, которая генетически детерминирована. Кодирующий ген NAT2 - локус широкого полиморфизма, который может существовать в более чем 20 аллельных формах.Isoforms of the synthesized NAT2 enzyme differ in amino acid sequence and activity of the acetylating effect, which is genetically determined. The coding gene NAT2 is a broad polymorphism locus that can exist in more than 20 allelic forms.
Известно 95 вариантов (гаплотипов) гена NAT2, отличающихся одним (или более) однонуклеотидным полиморфизмом в 870-Ьр кодирующей области. Именно гаплотипы NAT2 определяют ацетилирующую способность (фенотип) кодируемого фермента. Активность ацетилирования in vivo у гомозиготных субъектов дикого типа значительно выше, чем у гетерозиготных генотипов. Все мутантные аллели показали низкую степень ацетилирования in vivo. Кроме того, отдельные «медленные» генотипы значительно различаются между собой по степени ацетилирования.There are 95 known variants (haplotypes) of the NAT2 gene differing in one (or more) single nucleotide polymorphisms in the 870-bp coding region. It is NAT2 haplotypes that determine the acetylating ability (phenotype) of the encoded enzyme. The in vivo acetylation activity in homozygous wild-type subjects is significantly higher than in heterozygous genotypes. All mutant alleles showed a low degree of acetylation in vivo. In addition, individual "slow" genotypes differ significantly in the degree of acetylation.
Таким образом, тип ацетилирования у человека влияет на продолжительность и интенсивность фармакологического действия ЛС, что может быть связано с развитием резистентности или чувствительности к соответствующим фармакопрепаратам. Тип ацетилирования можно определять генотипированием гена NAT2.Thus, the type of acetylation in humans affects the duration and intensity of the pharmacological action of drugs, which may be associated with the development of resistance or sensitivity to the corresponding pharmacological agents. The type of acetylation can be determined by genotyping the NAT2 gene.
Показано, что полиморфный вариант гена NAT2 (rs1799931) ассоциирован с риском развития туберкулеза и оказывает значимое влияние на эффективность лечения пациентов с широкой лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis (ШЛУ-ТБ) [M.M. Юнусбаева, Л.Я. Бородина, Ф.С. Билалов, Р.А. Шарипов, Т.Р. Насибуллин, Б.Б. Юнусбаев. Эффективность лечения туберкулеза с широкой лекарственной устойчивостью у пациентов с разным генотипом по генам ферментов биотрансформации CYP2B6 и NAT2. Туберкулез и болезни легких. 2020; 98 (6):40-46]. Работы по изучению генетической предрасположенности к развитию туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis при ВИЧ-инфекции не проводились.It has been shown that the polymorphic variant of the NAT2 gene (rs1799931) is associated with the risk of developing tuberculosis and has a significant effect on the effectiveness of treatment of patients with extensively drug-resistant Mycobacterium tuberculosis (XDR-TB) [M.M. Yunusbaeva, L. Ya. Borodin, F.S. Bilalov, R.A. Sharipov, T.R. Nasibullin, B.B. Yunusbaev. Efficiency of treatment of extensively drug-resistant tuberculosis in patients with different genotypes for the genes of biotransformation enzymes CYP2B6 and NAT2. Tuberculosis and lung disease. 2020; 98 (6): 40-46]. Studies on the genetic predisposition to the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in HIV infection have not been carried out.
В связи с вышеизложенным целью настоящей работы явился поиск генотипов гена NAT2, носительство которых может предрасполагать к развитию туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis при ВИЧ-инфекции, и разработка способа определения генетической предрасположенности к развитию туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis при ВИЧ-инфекции.In connection with the above, the purpose of this work was to search for the genotypes of the NAT2 gene, the carriage of which may predispose to the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in HIV infection, and to develop a method for determining the genetic predisposition to the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in HIV infection ...
В исследование включены 70 больных коинфекцией ВИЧ и туберкулез (ВИЧ/ТБ) в возрасте от 24 до 54 (36,17±0,784) лет: - 43 мужчины, 61%, в возрасте от 27 до 49 (35,79±0,833) лет и 27 женщин, 39%, в возрасте от 24 до 54 (36,78±1,557) лет, находившихся на стационарном лечении в ГКУЗ Кемеровской области «Новокузнецком клиническом противотуберкулезном диспансере» г. Новокузнецка в период 2017-2019 гг. Из них МЛУ МБТ (резистентность одновременно к изониазиду и рифампицину) обнаружена у 47 пациентов (у 12 больных с МЛУ МБТ имелась дополнительная резистентность к фторхинолонам) в возрасте от 24 до 54 (35,85±0,982) лет, мужчин - 28 человек (60%), в возрасте от 27 до 48 (35,5±0,985) лет и женщин - 19 (40%) в возрасте от 24 до 54 (36,37±1,981) лет. Фенотипическое определение лекарственной чувствительности (ЛЧ) МБТ к препаратам основного (изониазид, рифампицин, этамбутол, стрептомицин) и резервного (канамицин, офлокса-цин, этионамид, капреомицин, циклосерин и ПАСК) рядов проводилось методом абсолютных концентраций на плотных питательных средах Левенштейна-Йенсена. Генотипическая экспресс-диагностика МЛУ МБТ проводилась с использованием GeneXpert MTB/RIF выявлением в биологическом материале (мокроте) ДНК МБТ и мутации в гене rpoB, ответственной за резистентность к рифампицину (маркер МЛУ). Лекарственная чувствительность к противотуберкулезным препаратам была установлена у 23 больных ВИЧ/ТБ (ЛЧ-ТБ). МЛУ МБТ (резистентность одновременно к изониазиду и рифампицину) была обнаружена у 47 (67,1%) пациентов, а в 12 случаях имелась дополнительная резистентность к фторхинолонам. Дополнительными критериями включения в исследование были проведение противотуберкулезной терапии [Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению туберкулеза у больных ВИЧ-инфекцией, 2015 г. [Federal clinical guidelines for the diagnosis and treatment of tuberculosis in patients with HIV infection, 2015] http://roftb.ru/netcat_files/doks2016/rec2016.pdf] и согласие пациентов на участие в исследовании. Медиана количества CD4-лимфоцитов составила во всей выборке - 177,0 клеток/мкл (диапазон 9,0-1624,0 кле-ток/мкл), у пациентов с МЛУ-ТБ - 189,0 клеток/мкл (диапазон 50,0-1624,0 клеток/мкл), при ЛЧ-ТБ - 157,0 клеток/мкл (диапазон 9,0-930,0 клеток/мкл).The study included 70 patients with HIV coinfection and tuberculosis (HIV / TB) aged 24 to 54 (36.17 ± 0.784) years: - 43 men, 61%, aged 27 to 49 (35.79 ± 0.833) years and 27 women, 39%, aged 24 to 54 (36.78 ± 1.557) years, who were hospitalized at the GKUZ of the Kemerovo region "Novokuznetsk clinical tuberculosis dispensary" in Novokuznetsk in the period 2017-2019. Of these, MDR MBT (resistance to both isoniazid and rifampicin) was found in 47 patients (12 patients with MDR MBT had additional resistance to fluoroquinolones) aged 24 to 54 (35.85 ± 0.982) years, 28 men (60 %), aged from 27 to 48 (35.5 ± 0.985) years and women - 19 (40%) aged from 24 to 54 (36.37 ± 1.981) years. Phenotypic determination of drug susceptibility (DS) of MBT to drugs of the main (isoniazid, rifampicin, ethambutol, streptomycin) and reserve (kanamycin, ofloxacin, ethionamide, capreomycin, cycloserine and PASK) series was carried out by the method of absolute concentrations on solid nutrient media Levenshtein-Jenstein. Genotypic express diagnostics of MDR MBT was carried out using GeneXpert MTB / RIF by detecting MBT DNA in biological material (sputum) and mutations in the rpoB gene responsible for rifampicin resistance (MDR marker). Drug susceptibility to anti-TB drugs was established in 23 HIV / TB (DS-TB) patients. MDR MBT (resistance to both isoniazid and rifampicin) was found in 47 (67.1%) patients, and in 12 cases there was additional resistance to fluoroquinolones. Additional criteria for inclusion in the study were anti-tuberculosis therapy [Federal clinical guidelines for the diagnosis and treatment of tuberculosis in patients with HIV infection, 2015] http: // roftb.ru/netcat_files/doks2016/rec2016.pdf] and patient consent to participate in the study. The median number of CD4-lymphocytes in the entire sample was 177.0 cells / μl (range 9.0-1624.0 cells / μl), in patients with MDR-TB - 189.0 cells / μl (range 50.0 -1624.0 cells / μl), with LS-TB - 157.0 cells / μl (range 9.0-930.0 cells / μl).
Постановка полимеразной цепной реакции (ПЦР)Polymerase chain reaction (PCR) staging
Для выделения образцов геномной ДНК у каждого больного забирали по 3 мл цельной венозной крови из локтевой вены в стандартные пробирки, содержащие ЭДТА-K3 (IMPROVE, China). ДНК выделяли с помощью коммерческого реагента «ДНК-экспресс-кровь» (НПФ «Литех», Москва). Генотипирование проводили по полиморфным локусам гена N-ацетилтрансферазы2 - NAT2Lys268Arg A803G rs1208, NAT2Arg197GlnG590A rs1799930 и NAT2 Leu161Leu C481T rs1799929 - с помощью коммерческих комплектов реагентов «SNP-экспресс» (НПФ «Литех», Москва).To isolate genomic DNA samples from each patient, 3 ml of whole venous blood was taken from the cubital vein into standard tubes containing EDTA-K3 (IMPROVE, China). DNA was isolated using a commercial reagent "DNA-express-blood" (NPF "Litekh", Moscow). Genotyping was performed at the polymorphic loci of the N-acetyltransferase2 gene - NAT2 Lys268Arg A803G rs1208, NAT2 Arg197GlnG590A rs1799930 and NAT2 Leu161Leu C481T rs1799929 - using commercial kits SNP-express.
Статистический анализ. Статистическая обработка результатов исследования проводилась с использованием программ Microsoft® Excel® версия 14.4.6 (141106), Statistica 6.0, InStatll, SPSS. Относительный риск по конкретному признаку вычисляли как соотношение шансов (OR=odds ratio). Критический уровень значимости (Р) при проверке статистических гипотез принимался равным 0,05.Statistical analysis. Statistical processing of the research results was carried out using Microsoft® Excel® version 14.4.6 (141106), Statistica 6.0, InStatll, SPSS. The relative risk for a specific trait was calculated as the odds ratio (OR = odds ratio). The critical level of significance (P) when testing statistical hypotheses was taken equal to 0.05.
Способ осуществляется следующим образом. У каждого больного ВИЧ/ТБ забирают 3 мл крови из локтевой вены в коммерческие стерильные вакуумные одноразовые пластиковые пробирки, содержащие антикоагулянт ЭДТА-K3 (IMPROVE, China). Проводят центрифугирование при 3000 оборотов/минуту в течение 5 минут. Из клеточного осадка выделяют геномную ДНК. Генотипирование проводят по полиморфным локусам гена N-ацетилтрансферазы2 - NAT2Lys268ArgA803G rs1208, NAT2Arg197Gln G590A rs1799930 и NAT2Leu161Leu С481Т _rs1799929. При сочетании генотипов NAT2Lys268Lys А803А × NAT2Arg197Arg G590G × NAT2Leu161Leu С481С определяют генетическую предрасположенность пациента к развитию туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis при ВИЧ-инфекции с 10,775-кратным риском.The method is carried out as follows. From each HIV / TB patient, 3 ml of blood is taken from the cubital vein into commercial sterile vacuum disposable plastic tubes containing the anticoagulant EDTA-K3 (IMPROVE, China). Centrifugation is carried out at 3000 rpm for 5 minutes. Genomic DNA is isolated from the cell sediment. Genotyping is performed at the polymorphic loci of the N-acetyltransferase2 gene - NAT2 Lys268ArgA803G rs1208, NAT2 Arg197Gln G590A rs1799930 and NAT2 Leu161Leu С481Т _ rs1799929. Combining the genotypes NAT2 Lys268Lys А803А × NAT2 Arg197Arg G590G × NAT2 Leu161Leu С481С determines the patient's genetic predisposition to the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in HIV infection with a 10.775-fold risk.
Результаты. В соответствии с результатами генотипирования обследованных лиц распределение частот генотипов всех тестируемых полиморфных локусов гена NAT2 соответствовало равновесию Харди-Вайнберга (табл. 1), что позволяет экстраполировать полученные данные на популяцию. Отличие от указанного равновесия по локусу NAT2G590A выявлено в когорте пациентов с МЛУ МБТ, что было обусловлено частой встречаемостью генотипа NAT2G592G. Более половины пациентов с МЛУ МБТ (66%) являлись его носителями. Соответственно, риск развития МЛУ МБТ в сравнении с ЛЧ МБТ у пациентов с ВИЧ/ТБ с генотипом NAT2G590G оказался высоким (OR=3,63, р=0,02), а риск развития ЛЧ МБТ - низким (OR=0,27, р=0,02). У гетерозигот NAT2G590A выявлен сниженный риск развития МЛУ МБТ, т.е. гетерозиготный генотип оказался протективным вариантом от МЛУ МБТ (OR=0,28, р=0,03) и располагающим к ЛЧ МБТ (OR=3,57, р=0,03).Results. In accordance with the results of genotyping of the examined individuals, the distribution of genotype frequencies of all tested polymorphic loci of the NAT2 gene corresponded to the Hardy-Weinberg equilibrium (Table 1), which allows extrapolating the obtained data to the population. The difference from the indicated equilibrium at the NAT2 G590A locus was revealed in the cohort of patients with MDR MBT, which was due to the frequent occurrence of the NAT2 G592G genotype. More than half of patients with MDR MBT (66%) were carriers. Accordingly, the risk of MDR MBT development in comparison with MBT LS in patients with HIV / TB with the NAT2 G590G genotype was high (OR = 3.63, p = 0.02), and the risk of MBT LS development was low (OR = 0.27 , p = 0.02). Heterozygotes NAT2 G590A showed a reduced risk of developing MDR MBT, i.e. the heterozygous genotype turned out to be a protective variant against MBT MDR (OR = 0.28, p = 0.03) and disposed to the MBT LS (OR = 3.57, p = 0.03).
По двум другим полиморфизмам NAT2A803G и NAT2C481T отличий в частотах носительства аллелей и генотипов между когортами пациентов с МЛУ МБТ и ЛЧ МБТ не обнаружено.For two other polymorphisms NAT2 A803G and NAT2 C481T, no differences in the frequencies of allele and genotype carriage between the cohorts of patients with MDR MBT and LSM MBT were found.
Результаты, представленные в табл. 2, показывают, что сочетание диких (нормальных) аллелей NAT2A803A × NAT2G590G в локусах NAT2A803G и NAT2G590A встречались у трети пациентов с МЛУ МБТ (33%) и всего лишь у 1 из 23 обследованных (4%) больных с ЛЧ МБТ. Выявлен 10,65-кратный риск развития МЛУ МБТ у носителей данного сочетания и, соответственно, очень низкая вероятность развития ЛЧ МБТ. Одновременное носительство дикого генотипа по третьему исследованному локусу NAT2C481T (сочетание генотипов NAT2A803A × NAT2G590G × NAT2C481C) не было обнаружено ни у одного пациента из когорты с ЛЧ МБТ. Поэтому вероятность развития МЛУ МБТ у носителей повысилась до OR=10,78.The results are presented in table. 2, show that the combination of wild (normal) alleles NAT2 A803A × NAT2 G590G in the NAT2 A803G and NAT2 G590A loci were found in a third of patients with MDR MBT (33%) and only in 1 of 23 examined (4%) patients with DCL MBT ... A 10.65-fold risk of developing MDR MBT was revealed in carriers of this combination and, accordingly, a very low probability of developing LSM MBT. Simultaneous carriage of the wild genotype at the third investigated locus NAT2 C481T (combination of genotypes NAT2 A803A × NAT2 G590G × NAT2 C481C ) was not detected in any patient from the cohort with PMT. Therefore, the likelihood of developing MDR MBT in carriers increased to OR = 10.78.
Примечание: здесь и в последующих таблицах представлено число вариантов генотипов/аллелей в абсолютном значении (*) и в % (в круглых скобках); ** критерии соответствия равновесию Харди-ВайнбергаNote: here and in the following tables, the number of variants of genotypes / alleles is presented in absolute value (*) and in% (in parentheses); ** criteria for compliance with the Hardy-Weinberg equilibrium
Таким образом, носительство сочетания генотипов NAT2A803A × NAT2G590G × NAT2C481C с высокой вероятностью предрасполагает к развитию туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis при ВИЧ-инфекции. А вероятность формирования лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis при таком носительстве крайне мала. Полученные данные позволяют предложить в клиническую практику способ прогнозирования развития туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis при ВИЧ-инфекции на основе генотипирования пациентов по трем полиморфным локусам гена NAT2.Thus, the carriage of a combination of genotypes NAT2 A803A × NAT2 G590G × NAT2 C481C with a high probability predisposes to the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in HIV infection. And the likelihood of the formation of drug sensitivity of Mycobacterium tuberculosis with such a carrier is extremely small. The data obtained make it possible to propose for clinical practice a method for predicting the development of multidrug-resistant tuberculosis Mycobacterium tuberculosis in HIV infection based on the genotyping of patients for three polymorphic loci of the NAT2 gene.
Клинический пример №1.Clinical example No. 1.
Пациент Е., 1988 г.р., потребитель инъекционных наркотиков (ПИН) в течение многих лет. ВИЧ-инфекция была выявлена 7 лет назад во время пребывания в МЛС, APT ранее не принимал. ТБ ранее не болел, на учете у фтизиатра не состоял.Patient E., born in 1988, an injecting drug user (IDU) for many years. HIV infection was detected 7 years ago during his stay at the ILC, he had not previously taken APT. I have not had TB before, I was not registered with a phthisiatrician.
Заболел в течение 1 мес. до поступления, когда появились лихорадка до 38-39°С, боли в груди и кашель. Был госпитализирован в терапевтическое отделение общелечебной сети, откуда после выявления кислотоустойчивых микобактерий (КУМ) при микроскопии мазка мокроты (ММ) был направлен и госпитализирован в специализированное учреждение.Sick within 1 month. before admission, when there was a fever up to 38-39 ° C, chest pain and cough. He was hospitalized in the therapeutic department of the general medical network, from where, after detecting acid-fast mycobacteria (AFM) by sputum smear microscopy (MM), he was sent and hospitalized in a specialized institution.
В ГКУЗ КО «Новокузнецкий клинический противотуберкулезный диспансер» был установлен диагноз диссеминированного туберкулеза (ТБ) с бактериовыделением по микроскопии ММ, а при молекулярно-генетическом исследовании мокроты (GeneXpert MTB/RIF) была выявлена ДНК Mycobacterium tuberculosis без обнаружения маркера МЛУ (т.е. без мутации в гене rpoB).In GKUZ KO Novokuznetsk Clinical Tuberculosis Dispensary, a diagnosis of disseminated tuberculosis (TB) with bacterial excretion by MM microscopy was established, and a molecular genetic study of sputum (GeneXpert MTB / RIF) revealed Mycobacterium tuberculosis DNA without detection of an MDR marker (i.e. without mutation in the rpoB gene).
При обследовании по поводу ВИЧ-инфекции было установлено, что количество CD4-лимфоцитов составляло 683 кл./мкл, а вирусная нагрузка (ВН) - 33811 копий РНК ВИЧ в 1 мл.When examining for HIV infection, it was found that the number of CD4 lymphocytes was 683 cells / μl, and the viral load (VL) - 33811 copies of HIV RNA in 1 ml.
Диагноз диссеминированного туберкулеза легких у больного ВИЧ-инфекцией в стадии вторичных заболеваний (4Б) был утвержден Центральной врачебной контрольной комиссией (ЦВКК) 27.11.2017 г.: диссеминированный ТБ легких, фаза распада, МБТ (+), чувствительность к рифампицину по МГМ, IA(+) диспансерного учета.The diagnosis of disseminated pulmonary tuberculosis in a patient with HIV infection at the stage of secondary diseases (4B) was approved by the Central Medical Control Commission (CVCC) on November 27, 2017: disseminated pulmonary TB, disintegration phase, MBT (+), rifampicin sensitivity according to MGM, IA (+) dispensary registration.
Учитывая, что по результатам молекулярно-генетического исследования мокроты не было выявлено маркер МЛУ, пациенту проводилась стандартная терапия по I режиму с применением изониазида, рифампицина, пиразинамида и этамбутола (всего были приняты 83 дозы препаратов), проводилась антимикробная терапия выявленного инфекционного эндокардита.Considering that the results of the molecular genetic study of sputum did not reveal the MDR marker, the patient underwent standard therapy according to regimen I with the use of isoniazid, rifampicin, pyrazinamide and ethambutol (a total of 83 doses of drugs were taken), antimicrobial therapy of the identified infective endocarditis was performed.
В период госпитализации были получены сведения о росте МБТ на плотных питательных средах из мокроты, взятой на исследование при выявлении - в 11.2017 г., а также данные об МЛУ МБТ (устойчивость к рифампицину, изониазиду, этамбутолу; чувствительность к препаратам второго ряда была сохранена).During the period of hospitalization, information was obtained on the growth of MBT on solid nutrient media from sputum taken for research upon detection - in 11.2017, as well as data on MDR MBT (resistance to rifampicin, isoniazid, ethambutol; sensitivity to second-line drugs was preserved) ...
В связи с выявлением МЛУ, врачебной комиссией (ВК) было принято решение о начале терапии по IV режиму химиотерапии (канамицн, лево-флоксацин, протионамид, циклосерин, ПАСК). На фоне проводимой терапии в стационаре состояние пациента было стабилизировано, уменьшились проявления воспалительной интоксикации, было отмечено прекращение бактериовыделения по ММ и частичное рассасывание легочной диссеминации через 4 мес. лечения по IV режиму.In connection with the detection of MDR, the medical commission (VC) decided to start therapy according to the IV chemotherapy regimen (kanamycin, levofloxacin, prothionamide, cycloserine, PASK). Against the background of ongoing therapy in the hospital, the patient's condition was stabilized, the manifestations of inflammatory intoxication decreased, bacterial excretion by MM stopped and partial resorption of pulmonary dissemination after 4 months was noted. treatment according to IV regimen.
В дальнейшем пациент в плановом порядке был выписан на амбулаторный этап лечения, где продолжал противотуберкулезную терапию. В дальнейшем амбулаторно лечился нерегулярно, привлечь для лечения пациента не удалось. Через 7 мес. с момента выявления ТБ (13.08.2020 г.) был констатирован летальный исход в связи с прогрессированием туберкулеза в отсутствие регулярной терапии.Subsequently, the patient was routinely discharged to the outpatient stage of treatment, where he continued anti-tuberculosis therapy. Later, he was treated irregularly on an outpatient basis; it was not possible to attract a patient for treatment. After 7 months. since the detection of TB (13.08.2020), a lethal outcome has been reported due to the progression of tuberculosis in the absence of regular therapy.
Результаты генотипирования по полиморфным локусамGenotyping results for polymorphic loci
NAT2Lys268ArgA803G rs1208, NAT2Arg197GlnG590A rs1799930 и NAT2Leu161LeuC481T rs1799929 (посмертно): выявлено сочетание генотипов NAT2Lys268LysA803A × NAT2Arg197ArgG590G × NAT2Leu161Leu С481С указывающее на 10,775-кратный риск развития множественной лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis.NAT2 Lys268ArgA803G rs1208, NAT2 Arg197GlnG590A rs1799930 and NAT2 Leu161LeuC481T rs1799929 (postmortem): combination of genotypes identified NAT2 Lys268LysA803A × NAT2 Arg197ArgG590G × NAT2 Leu161Leu S481S indicating 10,775-fold risk of development of multidrug resistance Mycobacterium tuberculosis.
Клинический пример №2.Clinical example No. 2.
Пациент К., 1982 г.р., работающий. Ранее туберкулезом не болел. Туберкулез был выявлен впервые в марте 2017 г. при обращении в учреждение общелечебной сети. При обследовании были выявлены признаки туберкулеза легких, что стало основанием для направления пациента в противотуберкулезное учреждение.Patient K., born in 1982, working. Previously, I did not suffer from tuberculosis. Tuberculosis was detected for the first time in March 2017 when contacting an institution of the general medical network. The examination revealed signs of pulmonary tuberculosis, which became the basis for referring the patient to an anti-tuberculosis institution.
В ГКУЗ КО «Новокузнецкий клинический противотуберкулезный диспансер» диагноз инфильтративного туберкулеза верхней доли справа, фаза распада, МБТ (-) у больного ВИЧ-инфекцией в стадии вторичных заболеваний (4Б) был подтвержден клинико-рентгенологически и утвержден Центральной врачебной контрольной комиссией (ЦВКК) 04.03.2017 г., пациент был взят в IA(-) диспансерного фтизиатрического учета.In GKUZ KO "Novokuznetsk clinical anti-tuberculosis dispensary" the diagnosis of infiltrative tuberculosis of the upper lobe on the right, decay phase, MBT (-) in a patient with HIV infection in the stage of secondary diseases (4B) was confirmed clinically and radiologically and approved by the Central Medical Control Commission (CVCC) 04.03 .2017, the patient was taken to the IA (-) TB dispensary registration.
В связи с исходным отсутствием бактериовыделения по мазкам мокроты и отрицательными результатами молекулярно-генетического исследования мокроты (GeneXpert MTB/RIF) (ДНК Mycobacterium tuberculosis не обнаружена) пациенту был назначен I режим химиотерапии ТБ (изониазид, ри-фампицин, пиразинамид и этамбутол). Лечение по I режиму проводилось амбулаторно.Due to the initial absence of bacterial excretion on sputum smears and negative results of a molecular genetic study of sputum (GeneXpert MTB / RIF) (DNA of Mycobacterium tuberculosis was not detected), the patient was assigned to regimen I of TB chemotherapy (isoniazid, rifampicin, pyrazinamide and ethambutol). Treatment according to regimen I was performed on an outpatient basis.
ВИЧ-инфекция была впервые выявлена 1 год назад при плановом обследовании, APT ранее не принимал. В противотуберкулезном диспансере количество CD4-лимфоцитов - 306 клеток/мкл от 14.02.2018 г., вирусная нагрузка (ВН) - 43551 копий РНК ВИЧ в 1 мл.HIV infection was first detected 1 year ago during a routine examination; he had not previously taken APT. In the TB dispensary, the number of CD4-lymphocytes is 306 cells / μl from 02.14.2018, viral load (VL) - 43551 copies of HIV RNA in 1 ml.
Через 2 мес. лечения по I режиму были получены результаты посевов мокроты, взятой при выявлении туберкулеза в марте 2017 г. (рост МБТ 1+) и сведения о наличии МЛУ МБТ (устойчивость к рифампицину, изониазиду и стрептомицину; чувствительность к препаратам второго ряда была сохранена).After 2 months. treatment according to regimen I, the results of sputum cultures taken when tuberculosis was detected in March 2017 (MBT growth 1+) and information on the presence of MDR MBT (resistance to rifampicin, isoniazid and streptomycin; sensitivity to second-line drugs was preserved) were obtained.
Результаты генотипирования по полиморфным локусам NAT2Lys268Arg A803G rs1208, NAT2Arg197Gln G590A rs1799930 и NAT2Leu161Leu С481Т rs1799929: выявлено сочетание генотипов NAT2Lys268Lys А803А × NAT2Arg197Arg G590G × NAT2Leu161Leu С481С, указывающее на 10,775-кратный риск развития множественной лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis.The results of genotyping for polymorphic loci NAT2 Lys268Arg A803G rs1208, NAT2 Arg197Gln G590A rs1799930 and NAT2 Leu161Leu С481Т rs1799929: a combination of genotypes NAT2 Lys268Lys А803А × NAT2 Arg197Ls NAT2 multidrug resistance was revealed .
Выявление МЛУ Mycobacterium tuberculosis стало основанием для назначения лечения по IV режиму (канамицн, левофлоксацин, протионамид, циклосерин, ПАСК) с планируемой длительностью не менее 24 мес, для чего пациент был госпитализирован. В отделении стационара врачом-инфекционистом была начата антиретровирусная терапия.The detection of MDR Mycobacterium tuberculosis became the basis for prescribing treatment according to IV regimen (kanamycin, levofloxacin, prothionamide, cycloserine, PASK) with a planned duration of at least 24 months, for which the patient was hospitalized. An infectious disease doctor started antiretroviral therapy in the hospital department.
На фоне комбинированной терапии (противотуберкулезной и антирет-ровирусной) было достигнуто прекращение бактериовыделения через 1 мес, а полости распада были закрыты через 2 мес. лечения.Against the background of combined therapy (anti-tuberculosis and antiretroviral therapy), bacterial excretion was stopped after 1 month, and the decay cavities were closed after 2 months. treatment.
После 8 мес. интенсивной фазы терапии по IV режиму пациент был выписан на амбулаторный этап для проведения поддерживающей фазы с общей длительностью всего курса лечения не менее 24 мес После 24 мес.регулярного лечения курс признан эффективным с констатацией клинического излечения туберкулеза у пациента с ВИЧ-инфекцией.After 8 months. In the intensive phase of therapy according to the IV regimen, the patient was discharged for the outpatient phase for the maintenance phase with a total duration of the entire course of treatment of at least 24 months. After 24 months of regular treatment, the course was recognized as effective, with a statement of clinical cure of tuberculosis in a patient with HIV infection.
Клинический пример №3.Clinical example No. 3.
Пациентка X., 1993 г. р., выявлена в январе 2017 г. при обращении в общелечебную сеть с жалобами на лихорадку до 38°С в течение недели. После отсутствия клинико-рентгенологического эффекта на фоне курса неспецифической антимикробной терапии по поводу предполагаемой внебольничной пневмонии была направлена в ГКУЗ КО «Новокузнецкий клинический противотуберкулезный диспансер» с связи с высоковероятным туберкулезом. Ранее туберкулезом не болела, на фтизиатрическом учете не состояла.Patient X., born in 1993, was identified in January 2017 when she applied to the general medical network with complaints of fever up to 38 ° C for a week. After the absence of clinical and radiological effect against the background of a course of nonspecific antimicrobial therapy for suspected community-acquired pneumonia, she was sent to the Novokuznetsk Clinical Anti-Tuberculosis Dispensary due to a highly probable tuberculosis. Previously, she did not suffer from tuberculosis, she was not registered with phthisiology.
При поступлении в стационар НКПТД было выявлено бактериовыделение по микроскопии мазка мокроты (КУМ 1+), а при фибробронхоскопии были обнаружены признаки инфильтративного туберкулеза среднедолевого бронха с признаками стеноза.Upon admission to the NKPTD hospital, bacterial excretion was detected by sputum smear microscopy (AFM 1+), and fibrobronchoscopy revealed signs of infiltrative tuberculosis of the middle lobe bronchus with signs of stenosis.
По совокупности полученных данных было подтверждено наличие инфильтративного туберкулеза правого легкого, инфильтративного туберкулеза ср/долевого бронха, МБТ(+); диагноз был утвержден Центральной врачебной контрольной комиссией (ЦВКК) 23.01.2017 г., пациентка взята в 1А(+) группу диспансерного фтизиатрического учета.On the basis of the data obtained, the presence of infiltrative tuberculosis of the right lung, infiltrative tuberculosis of the middle / lobar bronchus, MBT (+) was confirmed; the diagnosis was approved by the Central Medical Control Commission (CVCC) on January 23, 2017, the patient was admitted to the 1A (+) group of dispensary phthisiology registration.
В связи с исходным отсутствием возможности проведения молекулярно-генетического исследования мокроты (GeneXpert MTB/RIF) для экспресс-диагностики МЛУ-ТБ, больной X. проводилась терапия с применением стандартного I режима химиотерапии ТБ (изониазид, рифампицин, пиразинамид и этамбутол).Due to the initial lack of the possibility of conducting a molecular genetic study of sputum (GeneXpert MTB / RIF) for the rapid diagnosis of MDR-TB, patient X. was treated with the standard I regimen of TB chemotherapy (isoniazid, rifampicin, pyrazinamide and ethambutol).
Результаты генотипирования по полиморфным локусам NAT2Lys268Arg A803G rs1208, NAT2Arg197Gln G590A rs1799930 и NAT2Leu161Leu С481Т rs1799929: выявлено сочетание генотипов NAT2Lys268Lys А803А × NAT2Arg197Arg G590G × NAT2Leu161Leu С481С указывающее на 10,775-кратный риск развития множественной лекарственной устойчивости Mycobacterium tuberculosis.Results Genotyping of polymorphic loci NAT2 Lys268Arg A803G rs1208, NAT2 Arg197Gln G590A rs1799930 and NAT2 Leu161Leu S481T rs1799929: combination of genotypes identified NAT2 Lys268Lys A803A × NAT2 Arg197Arg G590G × NAT2 Leu161Leu S481S indicating 10,775-fold risk of development of multidrug resistance Mycobacterium tuberculosis.
К моменту приема 95 доз противотуберкулезных препаратов были получены сведения о росте культуры Mycobacterium tuberculosis из мокроты, взятой при выявлении в январе 2017 г. (рост МБТ 1+). Тестирование выделенной культуры МБТ на лекарственную чувствительность показало наличие первичной МЛУ МБТ (устойчивость к рифампицину, изониазиду, этамбуто-лу и стрептомицину), чувствительность к препаратам второго ряда была сохранена.By the time of taking 95 doses of anti-tuberculosis drugs, information was obtained on the growth of a culture of Mycobacterium tuberculosis from sputum taken upon detection in January 2017 (MBT growth 1+). Testing of the isolated MBT culture for drug susceptibility showed the presence of primary MDR MBT (resistance to rifampicin, isoniazid, ethambutol and streptomycin), sensitivity to second-line drugs was preserved.
Выявление МЛУ Mycobacterium tuberculosis стало основанием для назначения лечения по IV режиму (канамицн, левофлоксацин, протионамид, циклосерин, ПАСК) с планируемой длительностью терапии не менее 24 мес.The detection of MDR Mycobacterium tuberculosis became the basis for prescribing treatment according to IV regimen (kanamycin, levofloxacin, prothionamide, cycloserine, PASK) with a planned duration of therapy of at least 24 months.
На фоне лечения к декабрю 2017 г. сформировались множественные туберкуломы, по поводу которых планировалось выполнение хирургическое вмешательства.Against the background of treatment, by December 2017, multiple tuberculomas had formed, for which surgical intervention was planned.
Исследование крови на антитела к ВИЧ методом ИФА было отрицательным дважды в период госпитализации (январь и апрель 2017 г.). ВИЧ-инфекция была впервые диагностирована в декабре 2017 г. (половой путь заражения в период лечения туберкулеза). При выявлении ВИЧ-инфекции количество CD4-лимфоцитов составило 957 клеток/мкл от января 2018 г., вирусная нагрузка (ВН) - 23405 копий РНК ВИЧ в 1 мл. От антиретровирсной терапии пациентка уклонялась.The blood test for antibodies to HIV by ELISA was negative twice during the period of hospitalization (January and April 2017). HIV infection was first diagnosed in December 2017 (sexual transmission during tuberculosis treatment). When HIV infection was detected, the number of CD4 lymphocytes was 957 cells / μl from January 2018, viral load (VL) - 23405 copies of HIV RNA in 1 ml. The patient avoided antiretroviral therapy.
В дальнейшем на фоне лечения по IV режиму лучевая картина соответствовала наличию множественных конгломератных туберкулом в ф. распада, диссеминации и частичного уплотнения. Было достигнуто прекращение бактериовыделения по ММ и посевам мокроты. Распространенность легочного поражения не позволяла провести хирургическое лечение торакального ТБ при ВИЧ-инфекции в отсутствие APT.Subsequently, against the background of treatment according to the IV regimen, the radiation pattern corresponded to the presence of multiple conglomerate tubercles in f. decay, dissemination and partial compaction. Cessation of bacterial excretion by MM and sputum cultures was achieved. The prevalence of pulmonary disease did not allow for surgical treatment of thoracic TB in HIV infection in the absence of APT.
После 24 мес.консервативного противотуберкулезного лечения по IV режиму было констатировано завершение основного курса лечения, пациентка была переведена для наблюдения в группу хронического течения ТБ (II А(-)).After 24 months of conservative anti-tuberculosis treatment according to the IV regimen, the completion of the main course of treatment was ascertained, the patient was transferred for observation to the group of chronic TB (II A (-)).
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020142831A RU2750715C1 (en) | 2020-12-23 | 2020-12-23 | Method for determining the genetic predisposition to the development of multidrug-resistant tuberculosis mycobacterium tuberculosis in hiv infection |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020142831A RU2750715C1 (en) | 2020-12-23 | 2020-12-23 | Method for determining the genetic predisposition to the development of multidrug-resistant tuberculosis mycobacterium tuberculosis in hiv infection |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2750715C1 true RU2750715C1 (en) | 2021-07-01 |
Family
ID=76820122
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020142831A RU2750715C1 (en) | 2020-12-23 | 2020-12-23 | Method for determining the genetic predisposition to the development of multidrug-resistant tuberculosis mycobacterium tuberculosis in hiv infection |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2750715C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2806911C1 (en) * | 2023-03-30 | 2023-11-08 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | METHOD FOR GENOTYPING POLYMORPHIC LOCUS rs6702742 (A>G) OF SERBP1 GENE IN HUMANS BY REAL-TIME PCR USING ALLELE-SPECIFIC FLUORESCENT PROBES |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014139330A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Diagcor Bioscience Incorporation Limited | Rapid genotyping analysis and kits thereof |
| CN106119363A (en) * | 2016-07-01 | 2016-11-16 | 中国人民解放军第三〇九医院 | SNP combination, detection method and test kit for the detection of antituberculotics hepatic injury susceptible genotype |
| RU2710266C1 (en) * | 2019-09-26 | 2019-12-25 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования "Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России) | Method for prediction of lethal outcome in clinical course of coinfection of hiv and tuberculosis, accompanied by multiple drug-resistant mycobacterium tuberculosis |
-
2020
- 2020-12-23 RU RU2020142831A patent/RU2750715C1/en active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014139330A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Diagcor Bioscience Incorporation Limited | Rapid genotyping analysis and kits thereof |
| CN106119363A (en) * | 2016-07-01 | 2016-11-16 | 中国人民解放军第三〇九医院 | SNP combination, detection method and test kit for the detection of antituberculotics hepatic injury susceptible genotype |
| RU2710266C1 (en) * | 2019-09-26 | 2019-12-25 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования "Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России) | Method for prediction of lethal outcome in clinical course of coinfection of hiv and tuberculosis, accompanied by multiple drug-resistant mycobacterium tuberculosis |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| МАЛЬЦЕВА Н.В. и др. Полиморфизм NAT2Lys268Arg(A803G) и общий IgE в прогнозе клинического течения коинфекции ВИЧ-туберкулёз. Фармакогенетика и фармакогеномика. 2019. 2: 23-24. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2806911C1 (en) * | 2023-03-30 | 2023-11-08 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | METHOD FOR GENOTYPING POLYMORPHIC LOCUS rs6702742 (A>G) OF SERBP1 GENE IN HUMANS BY REAL-TIME PCR USING ALLELE-SPECIFIC FLUORESCENT PROBES |
| RU2808842C1 (en) * | 2023-10-16 | 2023-12-05 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | METHOD OF GENOTYPING rs10104 (A>G) POLYMORPHIC LOCUS OF C19orf53 GENE IN HUMANS BY REAL-TIME PCR USING ALLELE-SPECIFIC FLUORESCENT PROBES |
| RU2819930C1 (en) * | 2023-12-26 | 2024-05-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | METHOD FOR GENOTYPING POLYMORPHIC LOCUS rs10832676 (A>G) OF C11orf58 GENE IN HUMANS BY REAL-TIME PCR USING ALLELE-SPECIFIC FLUORESCENT PROBES |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liu et al. | VDR and NRAMP1 gene polymorphisms in susceptibility to pulmonary tuberculosis among the Chinese Han population: a case-control study | |
| Saravanan et al. | Review on emergence of drug-resistant tuberculosis (MDR & XDR-TB) and its molecular diagnosis in Ethiopia | |
| Trépo et al. | Common genetic variation in alcohol-related hepatocellular carcinoma: a case-control genome-wide association study | |
| Abe et al. | NRAMP1 polymorphisms, susceptibility and clinical features of tuberculosis | |
| Simms et al. | KCNN4Gene Variant Is Associated With Ileal Crohn's Disease in the Australian and New Zealand Population | |
| Mendoza et al. | High prevalence of viable Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis in Crohn’s disease | |
| Gawrońska-Szklarz et al. | Effects of CYP2C19, MDR1, and interleukin 1-B gene variants on the eradication rate of Helicobacter pylori infection by triple therapy with pantoprazole, amoxicillin, and metronidazole | |
| Stahl et al. | Collagenous colitis is associated with HLA signature and shares genetic risks with other immune-mediated diseases | |
| Bamoulid et al. | IL-6 promoter polymorphism− 174 is associated with new-onset diabetes after transplantation | |
| CN111471758A (en) | Application of product for detecting gene locus mutation in preparation of product for evaluating metabolic condition of patient taking tacrolimus | |
| Liu et al. | Association of CYBB polymorphisms with tuberculosis susceptibility in the Chinese Han population | |
| CN111662975A (en) | Application of product for detecting gene locus mutation in preparation of product for predicting or evaluating metabolic condition of patient taking tacrolimus | |
| MX2007008159A (en) | Biomarkers for identifying efficacy of tegaserod in patients with chronic constipation. | |
| RU2750715C1 (en) | Method for determining the genetic predisposition to the development of multidrug-resistant tuberculosis mycobacterium tuberculosis in hiv infection | |
| Liu et al. | Significance of LncRNA CASC8 genetic polymorphisms on the tuberculosis susceptibility in Chinese population | |
| Makiishi et al. | C-106T polymorphism of AKR1B1 is associated with diabetic nephropathy and erythrocyte aldose reductase content in Japanese subjects with type 2 diabetes mellitus | |
| WO2006117945A1 (en) | Method for detecting lipid metabolism disorder, and diagnostic agent for use therein | |
| CN113136387B (en) | Early-onset coronary heart disease related gene and detection reagent and application thereof | |
| Sheneef et al. | Pentraxin 3 genetic variants and the risk of active pulmonary tuberculosis | |
| Zhao et al. | Contribution of CD14-159C/T polymorphism to tuberculosis susceptibility: a meta-analysis | |
| Yu et al. | Focus on FOCIS: the continuing diagnostic challenge of autosomal recessive chronic granulomatous disease | |
| Ha et al. | Detecting Donor-Derived DNA by Real-Time PCR in Recipients Suspected of Graft-Versus-Host-Diseases After Liver Transplantation: A Case Series and Literature Review | |
| Adriaanse et al. | Human leukocyte antigen typing using buccal swabs as accurate and non‐invasive substitute for venipuncture in children at risk for celiac disease | |
| JP2007222134A (en) | Method for detecting genetic risk of hypertension | |
| JP5489146B2 (en) | Genetic risk detection method for obesity |