RU2745293C1

RU2745293C1 - Method for obtaining crystalline form 8 sophosbuvir (versions)

Info

Publication number: RU2745293C1
Application number: RU2019143968A
Authority: RU
Inventors: Ратмир Ринатович Дашкин; Михаил Валентинович Шишанов; Максим Львович Бурдейный; Павел Алексеевич Флегонтов
Original assignee: Общество С Ограниченной Ответственностью "Технология Лекарств"
Priority date: 2019-12-26
Filing date: 2019-12-26
Publication date: 2021-03-23

Abstract

FIELD: chemistry.

SUBSTANCE: invention relates to variants of a method for producing crystalline form 8 of sofosbuvir. One of the variants of the method includes mashing a mixture of a known form of sofosbuvir, selected from crystalline forms 1, 6, 7, and amorphous form, and an organic solvent in which it is soluble or moderately soluble, selected from isopropanol, ethanol, ethyl acetate, with a precipitating agent, selected from the group consisting of diethyl ether, diisopropyl ether, dimethyl ether, methyl tert-butyl ether, petroleum ether, n-hexane, n-heptane, n-octane and mixtures thereof, the amount of organic solvent in the mixture being from 5 to 60% of the mass of a mixture of a known form of sofosbuvir and an organic solvent. In this case, a mixture of a known form of sofosbuvir and an organic solvent, in which it is soluble or moderately soluble, is obtained by dissolving the known form of sofosbuvir in an amount of organic solvent sufficient to dissolve the form, followed by evaporation of the organic solvent to the specified amount in the mixture of the organic solvent. Another variant of the method includes ultrasonic treatment of a known form of sofosbuvir, selected from crystalline forms 1, 6, 7, α and an amorphous form suspended in an organic solvent, in which it is very little soluble or practically insoluble, selected from the group including n-heptane, n-hexane, n-octane, their isomers or mixtures thereof, petroleum ether. Also, the ultrasound treatment is carried out until the known form of sofosbuvir passes into an amorphous oily state, and then again into a solid crystalline state.

EFFECT: proposed variants of the method make it possible to obtain the crystalline form 8 of sofosbuvir with high yield and purity.

2 cl, 3 dwg, 5 tbl, 12 ex

Description

Область техники, к которой относится изобретениеThe technical field to which the invention relates

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и касается новых способов получения кристаллической формы 8 софосбувира. Предложенные способы получения характеризуется высокими выходами и чистотой полученной формы, а также простотой осуществления для реализации в промышленных масштабах. Полученные по данным способам кристаллическая форма 8 софосбувира может использоваться в качестве противовирусного средства в терапии вирусного гепатита С.The invention relates to the field of chemical and pharmaceutical industry and relates to new methods for obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir. The proposed methods of obtaining are characterized by high yields and purity of the obtained form, as well as ease of implementation for implementation on an industrial scale. The crystalline form 8 of sofosbuvir obtained by these methods can be used as an antiviral agent in the treatment of viral hepatitis C.

Уровень техникиState of the art

Гепатит С представляет собой заболевание печени, вызываемое вирусом гепатита С (HCV): вирус может приводить к развитию как острого, так и хронического гепатита с разной степенью тяжести - от легкой болезни, длящейся несколько недель, до серьезной пожизненной болезни. В РФ, по разным оценкам, доля людей, которые встречались с вирусом гепатита С, составляет от 2 до 4 процентов, а хроническим гепатитом С больны около 3,5 миллиона человек. Примерно у 30% инфицированных вирус исчезает самопроизвольно без какого-либо лечения в течение шести месяцев после заражения. У остальных 70% инфицированных развивается хроническая инфекция, среди пациентов с хронической инфекцией HCV риск развития цирроза печени в течение следующих 20 лет составляет от 15% до 30%.Hepatitis C is a liver disease caused by the hepatitis C virus (HCV): the virus can cause both acute and chronic hepatitis in varying degrees of severity, from a mild illness lasting several weeks to a serious life-long illness. In the Russian Federation, according to various estimates, the proportion of people who have met with the hepatitis C virus is 2 to 4 percent, and about 3.5 million people are sick with chronic hepatitis C. In about 30% of those infected, the virus disappears spontaneously without any treatment within six months of infection. The remaining 70% of those infected develop chronic infection; among patients with chronic HCV infection, the risk of developing cirrhosis over the next 20 years ranges from 15% to 30%.

Заболевание вызывает РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, обнаруженный учеными в 1989 году. Вирус размножается в основном в клетках печени (гепатоцитах). Проникая в них, он использует внутриклеточный механизм репликации (самокопирования генома): каждая вирусная частица производит в день до 50 реплик, которые впоследствии выходят за пределы клетки-хозяина. Основная цель лечение гепатита С - эррадикация вируса (удаление вируса из организма). При невозможности эррадикации целями лечения могут быть: прекращение или замедление воспалительных процессов в печени, предотвращение перехода заболевания в цирроз или рак. Выбор лечения зависит от многих факторов: пола, возраста, вирусной нагрузки, состояния печени, характера течения заболевания (острый, хронический). Если риск развития цирроза высокий, то лечение должно быть назначено как можно скорее. Основным методом лечения гепатита С в настоящее время является противовирусная терапия (ПВТ) с помощью препаратов прямого действия (ПППД), основными мишенями которых являются вирусные белки, необходимые для его размножения (эффективность более 90-95%). ВОЗ рекомендует использовать пангенотипные комбинации ПППД для лечения лиц с хронической HCV-инфекцией в возрасте 18 лет и старше, в частности комбинации софосбувира с велпатасвиром и даклатасвиром в течение 12 недель, для лечения подростков от 12 до 17 лет рекомендуются комбинации софосбувира с ледипасвиром или рибавирином в течение 12 или 24 недель в зависимости от генотипа вируса. Таким образом, применение различных лекарственных комбинаций софосбувира является основой современного подхода к лечению вирусного гепатита С у взрослых и детей старше 12 лет.The disease is caused by an RNA virus from the Flaviviridae family, discovered by scientists in 1989. The virus reproduces mainly in liver cells (hepatocytes). Penetrating into them, it uses the intracellular mechanism of replication (self-copying of the genome): each viral particle produces up to 50 replicas per day, which subsequently leave the host cell. The main goal of hepatitis C treatment is the eradication of the virus (removal of the virus from the body). If eradication is impossible, the goals of treatment can be: cessation or slowdown of inflammatory processes in the liver, prevention of the transition of the disease to cirrhosis or cancer. The choice of treatment depends on many factors: gender, age, viral load, liver condition, the nature of the course of the disease (acute, chronic). If the risk of developing cirrhosis is high, then treatment should be prescribed as soon as possible. The main treatment for hepatitis C is currently antiviral therapy (AVT) with direct-acting drugs (DAAs), the main targets of which are viral proteins necessary for its multiplication (efficiency is more than 90-95%). WHO recommends the use of pangenotypic DAA combinations for the treatment of persons with chronic HCV infection aged 18 years and older, in particular the combination of sofosbuvir with velpatasvir and daclatasvir for 12 weeks, for the treatment of adolescents from 12 to 17 years, combinations of sofosbuvir with ledipasvir or ribavirin are recommended within 12 or 24 weeks, depending on the genotype of the virus. Thus, the use of various medicinal combinations of sofosbuvir is the basis of the modern approach to the treatment of viral hepatitis C in adults and children over 12 years of age.

Софосбувир (изопропил-(2S)-2-[[[(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксипиримидин-1-ил)-4-фторо-3-гидрокси-4-метил-тетрагидрофуран-2-ил]-метокси-фенокси-фосфорил]-амино]пропаноат) (см. WO2008/121634, RU2478104) является пангенотипическим ингибитором РНК-зависимой РНК-полимеразы NS5B HCV, необходимой для репликации вируса. Это нуклеотидное пролекарство, которое подвергается внутриклеточному метаболизму, в процессе которого формируется фармакологически активный аналог - 2'-дезокси-2'-α-фтор-β-С-метилуридин-5'-трифосфат (GS-461203). С помощью NS5B полимеразы GS-461203 может встраиваться в строящуюся цепочку РНК HCV и действовать как обрыватель цепи (Fung Α., et. al., July 2014, Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 58 (7): 3636 - 45).Sofosbuvir (isopropyl- (2S) -2 - [[[(2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2,4-dioxypyrimidin-1-yl) -4-fluoro-3-hydroxy-4-methyl-tetrahydrofuran -2-yl] -methoxy-phenoxy-phosphoryl] -amino] propanoate) (see WO2008 / 121634, RU2478104) is a pangenotypic inhibitor of HCV NS5B RNA-dependent RNA polymerase required for viral replication. This is a nucleotide prodrug that undergoes intracellular metabolism, during which a pharmacologically active analogue is formed - 2'-deoxy-2'-α-fluoro-β-C-methyluridine-5'-triphosphate (GS-461203). With the help of NS5B polymerase, GS-461203 can integrate into the building HCV RNA strand and act as a strand terminator (Fung Α., Et. Al., July 2014, Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 58 (7): 3636-45).

Единственный препарат с МНН софосбувир зарегистрирован в России в марте 2016 года под торговым названием «Совальди» (номер регистрационного удостоверения ЛП-003527; дата выдачи 25.03.2016 года). Ввиду своей высокой эффективности в отношении многих генотипов HCV, сопряженной с низкой частотой возникновения побочных эффектов, препарат пользуется высоким спросом среди конечных потребителей, несмотря на высокую стоимость. Таким образом, существует острая необходимость в разработке и выводе в гражданский оборот воспроизведенных препаратов софосбувира, обладающих фармакологическими и технологическими свойствами, не уступающими оригинальному препарату.The only drug with INN sofosbuvir was registered in Russia in March 2016 under the trade name Sovaldi (registration certificate number LP-003527; date of issue 25.03.2016). Due to its high efficacy against many HCV genotypes, coupled with a low incidence of side effects, the drug is in high demand among end users, despite its high cost. Thus, there is an urgent need for the development and commercialization of generic sofosbuvir drugs with pharmacological and technological properties that are not inferior to the original drug.

Известно (Η.М. Mande, 2017, Acta Crystallographica Section A Foundations and Advances. 73. P. 434), что софосбувир проявляет полиморфизм. Сообщается, что софосбувир имеет более чем 15 полиморфов, включая аморфную форму.It is known (Η.M. Mande, 2017, Acta Crystallographica Section A Foundations and Advances. 73. P. 434) that sofosbuvir exhibits polymorphism. Sofosbuvir is reported to have more than 15 polymorphs, including an amorphous form.

Полиморфные формы 1, б, 7 и 8 являются несольватированными формами, тогда как формы 2, 3, 4 и 5 являются нестабильными сольватами хлористого метилена, хлороформа, ацетонитрила и анизола соответственно. Исходя из представленных выше данных очевидно, что для проведения технологического процесса изготовления твердых лекарственных форм подходят исключительно стабильные несольватированные формы софосбувира. Применение формы 1 из-за ее гигроскопичности имеет ряд недостатков, так при повышенной влажности воздуха форма 1 имеет тенденцию к образованию маслянистого материала, следовательно, препараты, содержащие форму 1 требуют мер предосторожности для защиты от влаги, делая тем самым процессы разработки, упаковки и хранения сложными и дорогостоящими. Кроме того, использование кристаллической формы 1 в составе воспроизведенных препаратов затруднено на территории РФ из-за имеющегося патентного ограничения (ЕА26731) до 20.05.2030 года.Polymorphic forms 1, b, 7 and 8 are unsolvated forms, while forms 2, 3, 4 and 5 are unstable solvates of methylene chloride, chloroform, acetonitrile and anisole, respectively. Based on the data presented above, it is obvious that extremely stable unsolvated forms of sofosbuvir are suitable for carrying out the technological process of manufacturing solid dosage forms. The use of Form 1, due to its hygroscopicity, has a number of disadvantages, so at high air humidity, Form 1 tends to form an oily material, therefore, preparations containing Form 1 require precautions to protect against moisture, thereby making the development, packaging and storage processes complex and costly. In addition, the use of crystalline form 1 as part of generic drugs is difficult in the Russian Federation due to the existing patent limitation (EA26731) until 05/20/2030.

На сегодняшний день наиболее технологически подходящей кристаллической формой софосбувира является форма 6 (WO 2011123645), она входит в композицию оригинального препарата «Совальди» (WO 2013082003; ЕА27296). Однако, использование в воспроизведенных препаратах на территории РФ кристаллической формы 6 затруднено из-за имеющегося патентного ограничения (ЕА26341) до 31.03.2031 года, что обуславливает высокую цену препарата в РФ (зарегистрированная цена составляет 126000 рублей за упаковку из 28 таблеток, минимально необходимый 12 недельный курс лечения обойдется примерно в 380000 рублей), в то время как в странах (например, Индия), в которых налажено производство воспроизведенных препаратов стоимость курса приближается к 100$ США (https://undark.org/2018/02/07/hepatitis-c-sub-sofosbuvir-india/). Таким образом, существует острая необходимость в получении патентно чистых форм софосбувира, отличающихся стабильностью, фармакологическими и техническими свойствами, не уступающими форме 6. С этой точки зрения наибольший интерес представляют формы 7 и 8, не имеющие патентной защиты на территории РФ (заявка ЕА201691029 отозвана без возможности восстановления). Данные формы не уступают форме 6, а даже несколько опережают в плане скорости растворения (см. ЕР3524234).To date, the most technologically suitable crystalline form of sofosbuvir is form 6 (WO 2011123645), it is included in the composition of the original drug "Sovaldi" (WO 2013082003; EA27296). However, the use of crystalline form 6 in reproduced drugs on the territory of the Russian Federation is difficult due to the existing patent limitation (EA26341) until 03/31/2031, which causes the high price of the drug in the Russian Federation (the registered price is 126,000 rubles per pack of 28 tablets, the minimum required is 12 a weekly course of treatment will cost about 380,000 rubles), while in countries (for example, India) where the production of generic drugs is established, the cost of the course is close to $ 100 (https://undark.org/2018/02/07/ hepatitis-c-sub-sofosbuvir-india /). Thus, there is an urgent need to obtain patent-pure forms of sofosbuvir, which are characterized by stability, pharmacological and technical properties that are not inferior to form 6.From this point of view, forms 7 and 8, which do not have patent protection in the Russian Federation, are of greatest interest (application EA201691029 was withdrawn without recovery possibilities). These forms are not inferior to form 6, and even slightly ahead in terms of the rate of dissolution (see EP3524234).

В WO 2015099989 в качестве способа получения кристаллической формы 8 раскрывается перекристаллизация софосбуфира из изопропилацетата с добавлением затравочных кристаллов. В тексте патентной заявки нет данных о выходе целевого продукта, полученного описанным методом. Попытка авторов настоящего изобретения воспроизвести экспериментально методики, описанной в WO 2015099989, показала, что образование кристаллов на поверхности затравки идет крайне медленно и с образованием загрязненного продукта (см. Сравнительный пример 1).WO 2015099989 discloses recrystallization of sofosbuphyr from isopropyl acetate with the addition of seed crystals as a method for preparing crystalline form 8. In the text of the patent application there is no data on the yield of the target product obtained by the described method. An attempt by the present inventors to experimentally reproduce the procedure described in WO 2015099989 showed that the formation of crystals on the surface of the seed proceeds extremely slowly and with the formation of a contaminated product (see Comparative Example 1).

Мин и др. (CN 109053840) предлагают в качестве способа получения формы 8 переосаждение софосбувира в кристаллической форме 1 или 6 н-гептаном из этилацетата и изопропилацетата с добавлением затравочных кристаллов, данный метод характеризуется невысоким (от 65,5 до 79,0 %) выходом целевого продукта и длительностью более 24 часов (около 6 часов занимает перемешивание раствора софосбувира с н-гептаном при добавлении затравочных кристаллов и 24 часа продолжается осаждение кристаллов формы 8).Min et al. (CN 109053840) propose as a method of obtaining Form 8 the reprecipitation of sofosbuvir in crystalline form 1 or 6 with n-heptane from ethyl acetate and isopropyl acetate with the addition of seed crystals, this method is characterized by low (from 65.5 to 79.0%) the yield of the target product and a duration of more than 24 hours (about 6 hours is spent mixing the solution of sofosbuvir with n-heptane with the addition of seed crystals and the precipitation of crystals of form 8 continues for 24 hours).

Другой способ получения формы 8 в CN 109053840 представляет собой получение расплава софосбувира нагреванием до 135°С на масляной бане с последующим охлаждением до комнатной температуры. Методика характеризуется высоким выходом целевого продукта (99,3 %), однако, при этом является энергоемкой и не подходящей для масштабного промышленного применения. Кроме того, попытка авторов настоящего изобретения воспроизвести экспериментально способ получения формы 8 софосбувира по вышеописанной методике показала, что полученный продукт имеет темно желтый цвет, что свидетельствует об образовании продуктов осмоления. Из этого следует, что получаемый непосредственно при осуществлении методики продукт не соответствует фармакопейному качеству и требует дополнительной стадии очистки, например, хроматографией. Для воплощения хроматографической очистки требуется перевод вещества в растворенное состояние, которое приведет к потере веществом кристаллической формы (см. Сравнительный пример 2).Another method for preparing Form 8 in CN 109053840 is to prepare a sofosbuvir melt by heating to 135 ° C in an oil bath, followed by cooling to room temperature. The technique is characterized by a high yield of the target product (99.3%), however, at the same time, it is energy-intensive and not suitable for large-scale industrial application. In addition, an attempt by the present inventors to experimentally reproduce the method of obtaining form 8 of sofosbuvir according to the above described method showed that the resulting product has a dark yellow color, which indicates the formation of resin products. It follows from this that the product obtained directly during the implementation of the procedure does not correspond to the pharmacopoeial quality and requires an additional purification step, for example, by chromatography. Chromatographic purification requires dissolution of the substance, which will result in the substance losing its crystalline form (see Comparative Example 2).

Таким образом перед авторами настоящего изобретения стояла задача разработки способа получения формы 8 софосбувира, характеризующегося высоким выходом и чистотой получаемой формы, а также возможностью применения для производства софосбувира в промышленных масштабах.Thus, the authors of the present invention were faced with the task of developing a method for producing form 8 of sofosbuvir, characterized by a high yield and purity of the obtained form, as well as the possibility of using it for the production of sofosbuvir on an industrial scale.

Раскрытие изобретенияDisclosure of invention

Авторами изобретения было неожиданно обнаружено, что кристаллическая форма 8 софосбувира образуется при затирании смеси софосбувира известной формы и органического растворителя, в котором она растворима или умеренно растворима с осаждающим агентом, причем количество в смеси органического растворителя составляет от 5 до 60% от массы смеси.The inventors have surprisingly found that crystalline form 8 of sofosbuvir is formed by mashing a mixture of a known form of sofosbuvir and an organic solvent in which it is soluble or moderately soluble with a precipitating agent, the amount in the organic solvent mixture being from 5 to 60% by weight of the mixture.

В одном варианте изобретения смесь известной формы софосбувира и органического растворителя, в котором она растворима или умеренно растворима, получают растворением известной формы софосбувира в достаточном для растворения формы количестве органического растворителя с последующим упариванием органического растворителя до необходимого количества в смеси органического растворителя.In one embodiment of the invention, a mixture of a known form of sofosbuvir and an organic solvent in which it is soluble or moderately soluble is prepared by dissolving the known form of sofosbuvir in a sufficient amount of an organic solvent to dissolve the form, followed by evaporation of the organic solvent to the required amount in the organic solvent mixture.

В еще одном варианте изобретения смесь известной формы софосбувира и органического растворителя, в котором она растворима или умеренно растворима, получают смешением известной формы софосбувира и необходимого количества в смеси органического растворителя с последующим нагреванием на водяной бане до однородного гомогенного состояния.In another embodiment of the invention, a mixture of a known form of sofosbuvir and an organic solvent, in which it is soluble or moderately soluble, is obtained by mixing a known form of sofosbuvir and the required amount in a mixture of an organic solvent, followed by heating in a water bath until a homogeneous homogeneous state.

В предпочтительном варианте изобретения в способе получения кристаллической формы 8 софосбувира используют известную форму софосбувира выбранную из группы, включающей кристаллические формы 1, 6, 7, α, Z1 и аморфную форму.In a preferred embodiment of the invention, a known form of sofosbuvir selected from the group consisting of crystalline forms 1, 6, 7, α, Z1 and amorphous form is used in the method for preparing the crystal form 8 of sofosbuvir.

В более предпочтительном варианте изобретения в качестве органического растворителя, в котором известная форма софосбувира растворима или умеренно растворима, используют C₁-С₆алифатический спирт, С₁-С₆алкиловый эфир С₁-С₆алкиловой кислоты или их смеси. _{In a more preferred embodiment of the invention, a C 1} -C ₆ aliphatic alcohol, a C ₁ -C ₆ alkyl ester of a C ₁ -C ₆ alkyl acid or mixtures thereof are used as the organic solvent in which the known form of sofosbuvir is soluble or moderately soluble.

В наиболее предпочтительном варианте изобретения в качестве органического растворителя, в котором известная форма софосбувира растворима или умеренно растворима, используют растворитель, выбранный из изопропанола, этанола, этилацетата.In the most preferred embodiment of the invention, a solvent selected from isopropanol, ethanol, ethyl acetate is used as the organic solvent in which the known form of sofosbuvir is soluble or moderately soluble.

В еще одном варианте изобретения в качестве осаждающего агента используют органические растворители, в которых софосбувир мало растворим или практически нерастворим, представляющие собой алифатические углеводороды и эфиры, выбранные из группы алифатических углеводородов или эфиров, включающие диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, диметиловый эфир, метилтрет-бутиловый эфир, петролейный эфир, н-гексан, н-гептан, н-октан и их смеси.In another embodiment of the invention, organic solvents are used as a precipitating agent in which sofosbuvir is slightly soluble or practically insoluble, which are aliphatic hydrocarbons and ethers selected from the group of aliphatic hydrocarbons or ethers, including diethyl ether, diisopropyl ether, dimethyl ether, methyl tert-butyl ether, petroleum ether, n-hexane, n-heptane, n-octane and mixtures thereof.

Авторами также было неожиданно обнаружено, что кристаллическая форма 8 образуется при обработке ультразвуком известной формы софосбувира суспендированной в органическом растворителе, в котором она очень мало растворима или практически нерастворима. При этом обработку ультразвуком проводят до тех пор, пока известная форма софосбувира не перейдет в аморфное маслообразное состояние, а затем опять в твердое кристаллическое состояние.We have also surprisingly found that crystalline Form 8 is formed by sonication of a known form of sofosbuvir suspended in an organic solvent in which it is very little soluble or practically insoluble. In this case, ultrasonic treatment is carried out until the known form of sofosbuvir passes into an amorphous oily state, and then again into a solid crystalline state.

В одном варианте изобретения в способе получения кристаллической формы 8 софосбувира используют известную форму софосбувира выбранную из группы, включающей кристаллические формы 1, 6, 7, α, Z1 и аморфную форму.In one embodiment of the invention, a known form of sofosbuvir selected from the group consisting of crystalline forms 1, 6, 7, α, Z1 and amorphous form is used in the method for preparing crystalline form 8 of sofosbuvir.

В предпочтительном варианте изобретения в качестве органического растворителя, в котором известная форма софосбувира мало растворима или практически нерастворима используют неполярные апротонные растворители, выбранные из группы, включающей н-гептан, н-гексан, н-октан, их изомеры или их смеси, петролейный эфир.In a preferred embodiment of the invention, non-polar aprotic solvents selected from the group consisting of n-heptane, n-hexane, n-octane, their isomers or mixtures thereof, petroleum ether are used as the organic solvent in which the known form of sofosbuvir is slightly soluble or practically insoluble.

Краткое описание фигур и чертежейBrief Description of Figures and Drawings

На фигуре 1 представлена порошковая рентгенограмма кристаллической формы софосбувира, полученной согласно WO 2015099989.Figure 1 shows an X-ray powder diffraction pattern of a crystalline form of sofosbuvir obtained according to WO 2015099989.

На фигуре 2 представлена порошковая рентгенограмма формы 8 софосбувира, полученного ультразвуковой обработкой суспензии софосбувира аморфной формы в петролейном эфире.Figure 2 shows an X-ray powder diffraction pattern of form 8 of sofosbuvir obtained by ultrasonic treatment of a suspension of amorphous sofosbuvir in petroleum ether.

На фигуре 3 представлена порошковая рентгенограмма формы 8 софосбувира, полученного затиранием аморфной формы софосбувира в изопропиловом спирте с МТБЭ.Figure 3 shows an X-ray powder diffraction pattern of form 8 of sofosbuvir, obtained by mashing the amorphous form of sofosbuvir in isopropyl alcohol with MTBE.

Осуществление изобретенияImplementation of the invention

Данное изобретение направлено на два способа получения кристаллической формы 8 софосбувира (варианты изобретения).This invention is directed to two methods of obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir (variants of the invention).

Первый из способов получения кристаллической формы 8 софосбувира включает затирание смеси софосбувира известной формы и органического растворителя, в котором она растворима или умеренно растворима с осаждающим агентом, причем количество в смеси органического растворителя составляет от 5 до 60% от массы смеси.The first of the methods for obtaining the crystalline form 8 of sofosbuvir includes mashing a mixture of sofosbuvir of a known form and an organic solvent, in which it is soluble or moderately soluble with a precipitating agent, and the amount in the mixture of the organic solvent is from 5 to 60% by weight of the mixture.

Смесь известной формы софосбувира и органического растворителя, в котором она растворима или умеренно растворима, может быть получена любым подходящим способом, известным в уровне технике.A mixture of a known form of sofosbuvir and an organic solvent in which it is soluble or sparingly soluble can be prepared by any suitable method known in the art.

Предпочтительно, смесь известной формы софосбувира и органического растворителя, в котором она растворима или умеренно растворима, может быть получена смешением подходящих количеств растворителя и формы софосбувира, чтобы в смеси было необходимое для осуществления способа количество органического растворителя. Более предпочтительно, после смешения известной формы софосбувира и органического растворителя их можно нагреть, например, на водяной бане. Еще более предпочтительно, нагрев продолжают до тех пор, пока смешанные известная форма софосбувира и органический растворитель не превратятся в однородную смесь.Preferably, a mixture of a known form of sofosbuvir and an organic solvent, in which it is soluble or moderately soluble, can be prepared by mixing suitable amounts of the solvent and the form of sofosbuvir so that the mixture contains the amount of organic solvent required to carry out the process. More preferably, after mixing the known form of sofosbuvir and the organic solvent, they can be heated, for example, in a water bath. Even more preferably, heating is continued until the mixed known form of sofosbuvir and the organic solvent are uniformly mixed.

Также предпочтительно, смесь известной формы софосбувира и органического растворителя, в котором она растворима или умеренно растворима, может быть получена растворением известной формы софосбувира в достаточном для растворения формы количестве органического растворителя с последующим упариванием органического растворителя до необходимого для осуществления способа количества в смеси органического растворителя. Достаточное для растворения формы софосбувира количество органического растворителя подбирают известными методами, исходя из растворимости соответствующей формы софосбувира в соответствующем органическом растворителе.Also preferably, a mixture of a known form of sofosbuvir and an organic solvent, in which it is soluble or moderately soluble, can be obtained by dissolving the known form of sofosbuvir in an amount of an organic solvent sufficient to dissolve the form, followed by evaporation of the organic solvent to the amount required for carrying out the process in the mixture of an organic solvent. The amount of organic solvent sufficient to dissolve the sofosbuvir form is selected by known methods based on the solubility of the corresponding sofosbuvir form in the corresponding organic solvent.

Для осуществления первого способа получения кристаллической формы 8 софосбувира и достижения заявленных технических результатов (высокие выход и чистота, простота осуществления) необходимо, чтобы количество органического растворителя в смеси органического растворителя и известной формы софосбувира составляло от 5 до 60% от массы смеси, предпочтительно от 9 до 33% от массы смеси, более предпочтительно от 16 до 20% от массы смеси, наиболее предпочтительно примерно 20% от массы смеси.To implement the first method for obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir and achieve the claimed technical results (high yield and purity, ease of implementation), it is necessary that the amount of organic solvent in a mixture of an organic solvent and a known form of sofosbuvir is from 5 to 60% by weight of the mixture, preferably from 9 up to 33% by weight of the mixture, more preferably from 16 to 20% by weight of the mixture, most preferably about 20% by weight of the mixture.

Под известной формой софосбувира, которая может использоваться в первом способе получения кристаллической формы 8 софосбувира по настоящему изобретению, понимаются формы софосбувира, которые на сегодняшний день описаны в литературе: WO 2010135569 (кристаллические формы 1, 2, 3, 4, 5, аморфная), WO 2011123645 (кристаллическая форма 6), WO 2015099989 (кристаллическая форма 7), WO 2015126995 (кристаллические формы А, В, С, D, Е), CN 104277088 (кристаллическая форма М), WO 2017158624 (кристаллическая форма М3), WO 2016070569 (кристаллические формы H1, Н2, Н3, Н4), CN 104804054 (кристаллическая форма Н7), WO 2016016327 (кристаллическая форма α), RU2656228 (кристаллическая форма β), WO 2016008461 (кристаллическая форма Ζ1).The known form of sofosbuvir, which can be used in the first method for the preparation of crystalline form 8 of sofosbuvir according to the present invention, refers to the forms of sofosbuvir that are currently described in the literature: WO 2010135569 (crystalline forms 1, 2, 3, 4, 5, amorphous), WO 2011123645 (crystalline form 6), WO 2015099989 (crystalline form 7), WO 2015126995 (crystalline forms A, B, C, D, E), CN 104277088 (crystalline form M), WO 2017158624 (crystalline form M3), WO 2016070569 (crystal forms H1, H2, H3, H4), CN 104804054 (crystal form H7), WO 2016016327 (crystal form α), RU2656228 (crystal form β), WO 2016008461 (crystal form Ζ1).

Наиболее предпочтительными формами софосбувира для осуществления первого способа являются кристаллические формы 1, 6, 7, α, Ζ1 и аморфная форма. Аморфная форма может быть получена известными в WO 2010135569 способами, а также при помощи сублимационной сушки растворов софосбувира. Кристаллическая форма 1 может быть получена известными в WO 2010135569 способами, а также при помощи перекристаллизации кристаллической формы 6 из жидкого галогензамещенного алкана, например, хлористого метилена, хлороформа, 1,1,2,2-тетрахлорэтана и других. Кристаллическая форма 6 может быть получена известными в WO 2011123645 способами. Кристаллическая форма 7 может быть получена известными в WO 2015099989, WO 2015189386, WO 2015191945, WO 2016055576, WO 2016097173 и WO 2016156512 способами. Кристаллическая форма α может быть получена известными в WO 2016016327 способами. Кристаллическая форма Ζ1 может быть получена известными в WO 2016008461 способами.The most preferred forms of sofosbuvir for carrying out the first method are crystalline forms 1, 6, 7, α, Ζ1 and amorphous form. The amorphous form can be obtained by methods known in WO 2010135569, as well as by freeze drying of sofosbuvir solutions. Crystalline form 1 can be obtained by methods known in WO 2010135569, as well as by recrystallization of crystalline form 6 from a liquid halogen-substituted alkane, for example, methylene chloride, chloroform, 1,1,2,2-tetrachloroethane and others. Crystalline Form 6 can be obtained by methods known in WO 2011123645. Crystalline Form 7 can be obtained by methods known in WO 2015099989, WO 2015189386, WO 2015191945, WO 2016055576, WO 2016097173 and WO 2016156512. Crystalline form α can be obtained by methods known in WO 2016016327. Crystalline form Ζ1 can be obtained by methods known in WO 2016008461.

Для осуществления первого способа получения кристаллической формы 8 софосбувира по настоящему изобретению в качестве органического растворителя, в котором известная форма софосбувира растворима или умеренно растворима, используют С₁-С₆алифатические спирты, С₁-С₆алкиловые эфиры С₁-С₆алкиловой кислоты или их смеси. В качестве С₁-С₆алифатических спиртов могут использоваться метанол, этанол, пропанолы, бутанолы, пентанолы, гексанолы, а также их изомеры (например, 2-метилпропанол-1, 2,2-диметилпропанол-1, 2-метилбутанол-1) и их смеси. В качестве С₁-С₆алкиловых эфиров С₁-С₆алкиловой кислоты могут использоваться С₁-С₆алкиловые эфиры муравьиной кислоты, уксусной кислоты, пропионовой кислоты, масляной кислоты, пентановой кислоты, гексановой кислоты, а также их изомеры и смеси. Наиболее предпочтительными С₁-С₆алкиловыми эфирам С₁-С₆алкиловой кислоты являются С₁-С₆алкиловые эфиры уксусной и пропионовой кислот, например, этилацетат, пропилацетат, изопропилацетат, изобутилацетат, этилпропионат, изопропилпропионат.To carry out the first method of obtaining the crystalline form 8 of sofosbuvir according to the present invention, C ₁ -C ₆ aliphatic alcohols, C ₁ -C ₆ alkyl esters of C ₁ -C ₆ alkyl acid are used as an organic solvent in which the known form of sofosbuvir is soluble or moderately soluble. or mixtures thereof. Methanol, ethanol, propanols, butanols, pentanols, hexanols, as well as their isomers (for example, 2-methylpropanol-1, 2,2-dimethylpropanol-1, 2-methylbutanol-1) can be used as C ₁ -C _{6 aliphatic alcohols.} and mixtures thereof. As C ₁ -C ₆ alkyl esters of C ₁ -C ₆ alkyl acid, C ₁ -C ₆ alkyl esters of formic acid, acetic acid, propionic acid, butyric acid, pentanoic acid, hexanoic acid, as well as their isomers and mixtures can be used. The most preferred C ₁ -C ₆ alkyl esters of C ₁ -C ₆ alkyl acid are C ₁ -C ₆ alkyl esters of acetic and propionic acids, for example ethyl acetate, propyl acetate, isopropyl acetate, isobutyl acetate, ethyl propionate, isopropyl propionate.

Для осуществления первого способа получения кристаллической формы 8 софосбувира по настоящему изобретению в качестве осаждающего агента используют органический растворитель, в котором софосбувир мало растворим или практически нерастворим. В качестве такового органического растворителя могут использоваться углеводороды и эфиры (также известны как простые эфиры). В качестве углеводородов могут использоваться любые жидкие алифатические и ароматические углеводороды, предпочтительно выбранные из пентана, гексана, гептана, октана, петролейного эфира, бензола, толуола, этилбензола, кумол, ксилолы (о-, м-, п-) или их изомеров (например, 2-метилпентан, 2,2-диметилгексан и другие) и смесей. Наиболее предпочтительно использовать алифатические углеводороды, выбранные из пентана, гексана, гептана, октана, петролейного эфира или их изомеров (например, 2-метилпентан, 2,2-диметилгексан и другие) и смесей. В качестве эфиров могут использоваться любые жидкие эфиры, предпочтительно, выбранные из диэтилового эфира, диизопропилового эфира, диметилового эфира, метилтретбутилового эфира.To carry out the first method of obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir according to the present invention, an organic solvent is used as a precipitating agent in which sofosbuvir is slightly soluble or practically insoluble. As such organic solvent, hydrocarbons and ethers (also known as ethers) can be used. As hydrocarbons can be used any liquid aliphatic and aromatic hydrocarbons, preferably selected from pentane, hexane, heptane, octane, petroleum ether, benzene, toluene, ethylbenzene, cumene, xylenes (o-, m-, p-) or their isomers (for example , 2-methylpentane, 2,2-dimethylhexane and others) and mixtures. It is most preferable to use aliphatic hydrocarbons selected from pentane, hexane, heptane, octane, petroleum ether or their isomers (for example, 2-methylpentane, 2,2-dimethylhexane and others) and mixtures. As ethers, any liquid ether can be used, preferably selected from diethyl ether, diisopropyl ether, dimethyl ether, methyl tertiary butyl ether.

Кристаллизацию формы 8 софосбувира по первому способу получения проводят при перемешивании, предпочтительно использовать лопастную мешалку или якорную мешалку, которая способствует вращению всех жидкостей, причем диаметр вращения данной мешалки предпочтительно составляет от 2/5 до 4/5 от диаметра используемого реактора. Закристаллизовавшуюся форму 8 софосбувира выделяют общепринятыми методами, например, отделяют от жидкой фазы при помощи фильтрования, при необходимости, сушат, например, в сушильном или вакуумном шкафу, предпочтительно, под вакуумом. Было установлено, что стадия сушки, проводимая в печи или в сушилке с перемешиванием, не изменяет кристаллическую структуру, полученную в результате кристаллизации. Выделенную форму 8 софосбувира при необходимости измельчают и используют для лечения или для получения готовой лекарственной формы (ГЛФ), например, в виде таблетки или капсулы.Crystallization of form 8 of sofosbuvir according to the first production method is carried out with stirring, preferably using a paddle stirrer or an anchor stirrer, which promotes the rotation of all liquids, and the diameter of rotation of this stirrer is preferably from 2/5 to 4/5 of the diameter of the used reactor. The crystallized form 8 of sofosbuvir is isolated by conventional methods, for example, separated from the liquid phase by filtration, if necessary, dried, for example, in a drying or vacuum oven, preferably under vacuum. It has been found that the drying step carried out in an oven or in an agitated dryer does not alter the crystalline structure resulting from crystallization. The isolated form 8 of sofosbuvir, if necessary, is crushed and used for treatment or to obtain a finished dosage form (FP), for example, in the form of a tablet or capsule.

Второй из способов получения кристаллической формы 8 софосбувира включает обработку ультразвуком известной формы софосбувира суспендированной в органическом растворителе, в котором она очень мало растворима или практически нерастворима.The second method of obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir involves sonication of a known form of sofosbuvir suspended in an organic solvent in which it is very little soluble or practically insoluble.

Под известной формой софосбувира, которая может использоваться во втором способе получения кристаллической формы 8 софосбувира по настоящему изобретению, понимаются формы софосбувира, которые на сегодняшний день описаны в литературе: WO 2010135569 (кристаллические формы 1, 2, 3, 4, 5, аморфная), WO 2011123645 (кристаллическая форма 6), WO 2015099989 (кристаллическая форма 7), WO 2015126995 (кристаллические формы А, В, С, D, Е), CN 104277088 (кристаллическая форма М), WO 2017158624 (кристаллическая форма М3), WO 2016070569 (кристаллические формы H1, Н2, Н3, Н4), CN 104804054 (кристаллическая форма Н7), WO 2016016327 (кристаллическая форма α), RU2656228 (кристаллическая форма β), WO 2016008461 (кристаллическая форма Ζ1).The known form of sofosbuvir, which can be used in the second process for the preparation of crystalline form 8 of sofosbuvir according to the present invention, refers to the forms of sofosbuvir that are currently described in the literature: WO 2010135569 (crystalline forms 1, 2, 3, 4, 5, amorphous), WO 2011123645 (crystalline form 6), WO 2015099989 (crystalline form 7), WO 2015126995 (crystalline forms A, B, C, D, E), CN 104277088 (crystalline form M), WO 2017158624 (crystalline form M3), WO 2016070569 (crystal forms H1, H2, H3, H4), CN 104804054 (crystal form H7), WO 2016016327 (crystal form α), RU2656228 (crystal form β), WO 2016008461 (crystal form Ζ1).

Наиболее предпочтительными формами софосбувира для осуществления второго способа являются кристаллические формы 1, 6, 7, α, Ζ1 и аморфная форма. Аморфная форма может быть получена известными в WO 2010135569 способами, а также при помощи сублимационной сушки растворов софосбувира. Кристаллическая форма 1 может быть получена известными в WO 2010135569 способами, а также при помощи перекристаллизации кристаллической формы 6 из жидкого хлорзамещенного алкана, например, хлористого метилена, хлороформа, 1,1,2,2-тетрахлорэтана и других. Кристаллическая форма 6 может быть получена известными в WO 2011123645 способами. Кристаллическая форма 7 может быть получена известными в WO 2015099989, WO 2015189386, WO 2015191945, WO 2016055576, WO 2016097173 и WO 2016156512 способами. Кристаллическая форма α может быть получена известными в WO 2016016327 способами. Кристаллическая форма Ζ1 может быть получена известными в WO 2016008461 способами.The most preferred forms of sofosbuvir for carrying out the second method are crystalline forms 1, 6, 7, α, Ζ1 and amorphous form. The amorphous form can be obtained by methods known in WO 2010135569, as well as by freeze drying of sofosbuvir solutions. Crystalline form 1 can be obtained by methods known in WO 2010135569, as well as by recrystallization of crystalline form 6 from a liquid chlorine-substituted alkane, for example, methylene chloride, chloroform, 1,1,2,2-tetrachloroethane and others. Crystalline Form 6 can be obtained by methods known in WO 2011123645. Crystalline Form 7 can be obtained by methods known in WO 2015099989, WO 2015189386, WO 2015191945, WO 2016055576, WO 2016097173 and WO 2016156512. Crystalline form α can be obtained by methods known in WO 2016016327. Crystalline form Ζ1 can be obtained by methods known in WO 2016008461.

Для осуществления второго способа получения кристаллической формы 8 софосбувира по настоящему изобретению в качестве осаждающего агента используют органический растворитель, в котором софосбувир мало растворим или практически нерастворим. В качестве такового органического растворителя могут использоваться углеводороды и эфиры (также известны как простые эфиры). В качестве углеводородов могут использоваться любые жидкие алифатические и ароматические углеводороды, предпочтительно выбранные из пентана, гексана, гептана, октана, петролейного эфира, бензола, толуола, этилбензола, кумол, ксилолы (о-, м-, п-) или их изомеров (например, 2-метилпентан, 2,2-диметилгексан и другие) и смесей. Наиболее предпочтительно использовать алифатические углеводороды, выбранные из пентана, гексана, гептана, октана, петролейного эфира или их изомеров (например, 2-метилпентан, 2,2-диметилгексан и другие) и смесей. В качестве эфиров могут использоваться любые жидкие эфиры, предпочтительно, выбранные из диэтилового эфира, диизопропилового эфира, диметилового эфира, метилтретбутилового эфира.To carry out the second method of obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir according to the present invention, an organic solvent is used as a precipitating agent in which sofosbuvir is slightly soluble or practically insoluble. As such organic solvent, hydrocarbons and ethers (also known as ethers) can be used. As hydrocarbons can be used any liquid aliphatic and aromatic hydrocarbons, preferably selected from pentane, hexane, heptane, octane, petroleum ether, benzene, toluene, ethylbenzene, cumene, xylenes (o-, m-, p-) or their isomers (for example , 2-methylpentane, 2,2-dimethylhexane and others) and mixtures. It is most preferable to use aliphatic hydrocarbons selected from pentane, hexane, heptane, octane, petroleum ether or their isomers (for example, 2-methylpentane, 2,2-dimethylhexane and others) and mixtures. As ethers, any liquid ether can be used, preferably selected from diethyl ether, diisopropyl ether, dimethyl ether, methyl tertiary butyl ether.

Для осуществления второго способа получения кристаллической формы 8 софосбувира по настоящему изобретению при обработке суспензии известной формы софосбувира в органическом растворителе, в котором она очень мало растворима или практически нерастворима, могут быть использованы любые подходящие лабораторные или промышленные ультразвуковые ванны, работающие с частотой от 22 до 60 кГц. В наиболее предпочтительном варианте исполнения используются ультразвуковые ванны, работающие с частотой от 35 до 44 кГц.To carry out the second method of obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir according to the present invention by treating a suspension of a known form of sofosbuvir in an organic solvent in which it is very slightly soluble or practically insoluble, any suitable laboratory or industrial ultrasonic bath can be used, operating at a frequency of 22 to 60 kHz. In the most preferred embodiment, ultrasonic baths are used, operating at a frequency of 35 to 44 kHz.

Образовавшуюся по второму способу форму 8 софосбувира выделяют общепринятыми методами, например, отделяют от жидкой фазы при помощи фильтрования, при необходимости, сушат, например, в сушильном или вакуумном шкафу, предпочтительно, под вакуумом. Было установлено, что стадия сушки, проводимая в печи или в сушилке с перемешиванием, не изменяет кристаллическую структуру, полученную в результате кристаллизации. Выделенную форму 8 софосбувира при необходимости измельчают и используют для лечения или для получения готовой лекарственной формы (ГЛФ), например, в виде таблетки или капсулы.Form 8 of sofosbuvir formed by the second method is isolated by conventional methods, for example, separated from the liquid phase by filtration, if necessary, dried, for example, in a drying or vacuum oven, preferably under vacuum. It has been found that the drying step carried out in an oven or in an agitated dryer does not alter the crystalline structure resulting from crystallization. The isolated form 8 of sofosbuvir, if necessary, is crushed and used for treatment or to obtain a finished dosage form (FP), for example, in the form of a tablet or capsule.

При получении ГЛФ в виде таблеток или желатиновых капсул кристаллическую форму 8 софосбувира, полученную по любому из двух способов настоящего изобретения, смешивают с фармацевтическими носителями, такими как желатины, крахмалы, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза, производные винилпирролидона, стеариновая кислота и стеараты, тальк, кремния диоксид и другими. Кроме того, ГЛФ могут иметь пролонгированное или замедленное действие и, таким образом, непрерывно высвобождать определенное количество активного ингредиента.When receiving GDF in the form of tablets or gelatin capsules, the crystalline form 8 of sofosbuvir, obtained by any of the two methods of the present invention, is mixed with pharmaceutical carriers such as gelatins, starches, lactose, microcrystalline cellulose, vinylpyrrolidone derivatives, stearic acid and stearates, talc, silicon dioxide and others. In addition, GDF can have a prolonged or delayed action and thus continuously release a certain amount of the active ingredient.

Кристаллическая форма 8 софосбувира, полученная по любому из двух способов настоящего изобретения, а также содержащие ее ГЛФ, может применяться в способах лечения пациентов, инфицированных вирусом гепатита С генотипа 1 (включая 1а и 1b), генотипа 2, генотипа 3, генотипа 4, генотипа 5 и генотипа 6, предпочтительно в комбинации с другими средствами, включающими, но не ограниченными следующими: интерфероны, рибавирин, ингибиторы NS5A, ингибиторы NS5B, ингибиторы протеазы, ингибиторы альфа-глюкозидазы, гепатопротекторы, агонисты TLR-7, ингибиторы циклофиллина, ингибиторы IRES HCV и другие агенты против HCV.Crystalline form 8 of sofosbuvir obtained by any of the two methods of the present invention, as well as HDF containing it, can be used in methods of treating patients infected with hepatitis C virus genotype 1 (including 1a and 1b), genotype 2, genotype 3, genotype 4, genotype 5 and genotype 6, preferably in combination with other agents, including but not limited to: interferons, ribavirin, NS5A inhibitors, NS5B inhibitors, protease inhibitors, alpha-glucosidase inhibitors, hepatoprotectors, TLR-7 agonists, cyclophyllin inhibitors, HCV IRES inhibitors and other anti-HCV agents.

ПримерыExamples of

Представленные ниже примеры иллюстрируют (без ограничения объема притязаний) наиболее предпочтительные варианты осуществления изобретения, а именно подтверждают возможность получения заявляемой формы 8 софосбувира и достижение заявленных преимуществ способа получения.The examples below illustrate (without limiting the scope of claims) the most preferred embodiments of the invention, namely, they confirm the possibility of obtaining the claimed form 8 of sofosbuvir and the achievement of the claimed advantages of the method of obtaining.

МетодыMethods

Дифрактограммы (РФА) регистрировали на приборе D2 PHASER фирмы Bruker, излучение Cu-Κα, фильтр - Ni, с графитовым монохроматором

Режим трубки (Cu) 10 мА, 30 кВ. Диапазон значений угла 2Θ - от 2 до 40°, шаг 0.025°, щель 0.6 мм, выдержка в точке - 500 мсек, дискриминатор по энергиям - 0.17-0.23 кэВ.Diffraction patterns (XRD) were recorded on a Bruker D2 PHASER, Cu-Κα radiation, Ni filter, with a graphite monochromator

Tube mode (Cu) 10 mA, 30 kV. The range of values of the angle 2Θ is from 2 to 40 °, the step is 0.025 °, the slit is 0.6 mm, the exposure at the point is 500 msec, the energy discriminator is 0.17-0.23 keV.

Чистоту полученных образцов контролировали методом ВЭЖХ. Хроматограммы регистрировали на приборе Shimadzu LC-20A Prominence.The purity of the obtained samples was monitored by HPLC. Chromatograms were recorded on a Shimadzu LC-20A Prominence instrument.

Хроматографические условия:Chromatographic conditions:

• Колонка: 250x 4,6 мм, заполненная окстадецилсилильным силикагелем для хроматографии с размером частиц 5 мкм (ProjectSil Target);• Column: 250x 4.6 mm, packed with okstadecylsilyl silica gel for chromatography with a particle size of 5 μm (ProjectSil Target);

• Подвижная фаза А: 0,05%-ный раствор Н₃РО₄;• Mobile phase A: 0.05% solution of H ₃ PO ₄ ;

• Подвижная фаза В: ацетонитрил: метанол (80:20);• Mobile phase B: acetonitrile: methanol (80:20);

• Скорость потока: 1,35 мл/мин;• Flow rate: 1.35 ml / min;

• Температура колонки: 35°С;• Column temperature: 35 ° С;

• Детектор: спектрофотометрический, 210 нм;• Detector: spectrophotometric, 210 nm;

• Объем вводимой пробы: 10 мкл;• The volume of the injected sample: 10 µl;

• Время хроматографирования: 65 мин;• Chromatography time: 65 min;

• Режим элюирования: градиентный• Elution mode: gradient

Ультразвуковая ванна, используемая при получении кристаллической формы 8, имеет рабочую частоту 37 кГц. Модель Elmasonic S30H. При проведении опытов температура ванны поддерживалась в диапазоне 25-30°С.The ultrasonic bath used to obtain crystalline form 8 has an operating frequency of 37 kHz. Elmasonic S30H. During the experiments, the bath temperature was maintained in the range of 25-30 ° C.

Сублимационная сушка проводилась на приборе Labconco 4.5 Freezone Benchtop Freeze Dryer при поддержании вакуума 0.2-0.1 мбар.Freeze drying was carried out on a Labconco 4.5 Freezone Benchtop Freeze Dryer while maintaining a vacuum of 0.2-0.1 mbar.

Сравнительный пример 1. Получение кристаллической формы 8 софосбувира согласно WO 2015099989.Comparative example 1 Preparation of crystalline form 8 of sofosbuvir according to WO 2015099989.

Раствор софосбувира в изопропилацетате (20 об./масс) нагревали до примерно 68°С и перемешивали в течение 1 часа. После осветления фильтрованием фильтрат охлаждали до температуры примерно 40°С и добавляли затравку формы 8. Смесь охлаждали до примерно 20°С без перемешивания. Авторами изобретения было отмечено, что рост кристаллов на поверхности затравки идет крайне медленно. Спустя 2 дня после проведения эксперимента, было обнаружено образование ромбических кристаллов. Данные кристаллы в реакционном сосуде были оставлены в морозильной камере (около -15°С), однако спустя 1 неделю после инициации дальнейшей кристаллизации не было обнаружено. При оставлении реакционной массы в контакте с окружающей средой, часть растворителя испарилась, в результате чего был получен твердый продукт, который, согласно визуальному исследованию был неоднороден: помимо изначальных кристаллов ромбической формы на дне колбы был налет игольчатого кристаллического порошка, который в большей степени можно отнести к смеси нескольких форм из-за большой неоднородности. Согласно полученной дифрактограмме образца (фигура 1) он представляет собой смесь 7 и 8 кристаллических форм софосбувира.A solution of sofosbuvir in isopropyl acetate (20 v / w) was heated to about 68 ° C and stirred for 1 hour. After clarification by filtration, the filtrate was cooled to about 40 ° C and seeded with Form 8. The mixture was cooled to about 20 ° C without stirring. The inventors noted that the growth of crystals on the surface of the seed is extremely slow. 2 days after the experiment, the formation of rhombic crystals was observed. These crystals in the reaction vessel were left in the freezer (about -15 ° C), but no further crystallization was found 1 week after initiation. When the reaction mixture was left in contact with the environment, part of the solvent evaporated, resulting in a solid product, which, according to visual examination, was inhomogeneous: in addition to the initial rhombic crystals on the bottom of the flask, there was a coating of needle-like crystalline powder, which can be largely attributed to to a mixture of several forms due to the large heterogeneity. According to the obtained diffraction pattern of the sample (figure 1), it is a mixture of 7 and 8 crystalline forms of sofosbuvir.

Сравнительный пример 2. Получение кристаллической формы 8 софосбувира согласно CN 109053840.Comparative example 2 Preparation of crystalline form 8 of sofosbuvir according to CN 109053840.

Навеску софосбувира кристаллической формы 1 (1 грамм) поместили в трехгорлую колбу, образец нагревали на масляной бане до 95°С, после того как происходило частичное расплавление материала температуру непрерывно повышали до 135°С до полного расплавления софосбувира. Далее температуру понижали до 130°С и выдерживали при этой температуре 40 минут. По истечении времени массу охлаждали до комнатной температуры. Полученное соединение имело темно желтый цвет, что свидетельствует о наличии продуктов осмоления. Выход составил 0,99 г (99%), чистота (ВЭЖХ) - 93.3%.A weighed portion of crystalline form 1 sofosbuvir (1 gram) was placed in a three-necked flask, the sample was heated in an oil bath to 95 ° C, after the material was partially melted, the temperature was continuously increased to 135 ° C until the sofosbuvir was completely melted. Then the temperature was lowered to 130 ° C and kept at this temperature for 40 minutes. After a lapse of time, the mass was cooled to room temperature. The resulting compound had a dark yellow color, which indicates the presence of resinification products. The yield was 0.99 g (99%), the purity (HPLC) was 93.3%.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.45°, 9.11°, 14.06°, 15.53°, 15.88°, 16.96°, 17.43°, 18.02°, 19.70°, 20.12°, 25.60° 2θ.The following peaks were obtained on the diffractogram of the sample: 8.45 °, 9.11 °, 14.06 °, 15.53 °, 15.88 °, 16.96 °, 17.43 °, 18.02 °, 19.70 °, 20.12 °, 25.60 ° 2θ.

Пример 1. Получение кристаллической формы 8 софосбувира затиранием формы 6 в изопропиловом спирте с МТБЭ.Example 1. Obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir by rubbing form 6 in isopropyl alcohol with MTBE.

Навеску софосбувира 6 формы (0.500 г, 0,944 ммоль) (Nantong Chanyoo Pharmatech Co., Ltd) помещали в круглодонную колбу объемом 25 мл, снабженную магнитным перемешивающим устройством и обратным холодильником (контроль температуры осуществляется с помощью термопары, помещенной в реакционную массу). К навеске добавляли 4 мл изопропилового спирта (ХЧ), реакционную массу нагревали при перемешивании до 40-45°С, после полного растворения осадка реакционную массу охлаждали до комнатной температуры. Затем часть растворителя упаривали с применением роторно-пленочного испарителя (РПИ) до остаточной массовой доли спирта (0.25, 0.125, 0.045 г изопропанола для 0.5 г софосбувира соответственно) в реакционной массе. К осадку добавляли МТБЭ в количестве согласно выполняемому опыту (5, 10, 15 мл соответственно). Маслянистые жидкости затирались магнитным якорем в течение 3 ч (для 1/10 масс, доли спирта затирка проводится в течение 4-5 ч). Выпавший осадок фильтровали и промывали 5 мл МТБЭ и сушили в вакуумном шкафу (0,07-0,08 МПа) при 25°С. Выход согласно таблице 4.A weighed portion of sofosbuvir 6 form (0.500 g, 0.944 mmol) (Nantong Chanyoo Pharmatech Co., Ltd) was placed in a 25 ml round-bottom flask equipped with a magnetic stirrer and a reflux condenser (temperature control was carried out using a thermocouple placed in the reaction mass). 4 ml of isopropyl alcohol (reagent grade) was added to the weighed portion, the reaction mass was heated with stirring to 40-45 ° C, after complete dissolution of the precipitate, the reaction mass was cooled to room temperature. Then part of the solvent was evaporated using a rotary film evaporator (RPI) to the residual mass fraction of alcohol (0.25, 0.125, 0.045 g of isopropanol for 0.5 g of sofosbuvir, respectively) in the reaction mixture. MTBE was added to the sediment in an amount according to the experiment performed (5, 10, 15 ml, respectively). Oily liquids were rubbed with a magnetic anchor for 3 hours (for 1/10 mass, the grout is carried out for 4-5 hours). The precipitate that formed was filtered and washed with 5 ml of MTBE and dried in a vacuum oven (0.07-0.08 MPa) at 25 ° C. Output according to table 4.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.55°, 9.24°, 14.17°, 15.59°, 15.98°, 17.13°, 17.48°, 18.05°, 19.80°, 20.26°, 25.61° 2θ.The following peaks were obtained on the diffractogram of the sample: 8.55 °, 9.24 °, 14.17 °, 15.59 °, 15.98 °, 17.13 °, 17.48 °, 18.05 °, 19.80 °, 20.26 °, 25.61 ° 2θ.

Пример 2. Получение кристаллической формы 8 софосбувира из формы 6 ультразвуковой обработкой суспензии в петролейном эфире.Example 2. Obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir from form 6 by ultrasonic treatment of a suspension in petroleum ether.

Навеску софосбувира 6 формы (0.500 г, 0,944 ммоль) (Nantong Chanyoo Pharmatech Co., Ltd) помещали в круглодонную колбу объемом 25 мл. К навеске добавляли 5 мл петролейного эфира, реакционную массу подвергали УЗ-облучению, через еще 15 минут вносились дополнительно 5 мл петролейного эфира, через 5 минут в реакционной массе на дне колбы образовывалось масло, которое при продолжении облучения еще в течение 20 минут переходило в состояние твердого вещества. Выпавший осадок фильтровали и промывали 10 мл МТБЭ и сушили в вакуумном шкафу (0,07-0,08 МПа) при 25°С. Выход составил 0.46 г (92%), чистота (ВЭЖХ) - 99.8%.A weighed portion of sofosbuvir 6 form (0.500 g, 0.944 mmol) (Nantong Chanyoo Pharmatech Co., Ltd) was placed in a 25 ml round bottom flask. 5 ml of petroleum ether was added to the weighed portion, the reaction mass was subjected to ultrasonic irradiation, after another 15 minutes, an additional 5 ml of petroleum ether was added, after 5 minutes an oil formed in the reaction mass at the bottom of the flask, which, with continued irradiation for another 20 minutes, passed into the state solid matter. The precipitate that formed was filtered and washed with 10 ml of MTBE and dried in a vacuum oven (0.07-0.08 MPa) at 25 ° C. The yield was 0.46 g (92%), the purity (HPLC) was 99.8%.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.59°, 9.22°, 14.19°, 15.58°, 16.08°, 17.0°, 17.54°, 18.13°, 19.79°, 20.23°, 25.60° 2θ.The following peaks were obtained on the diffractogram of the sample: 8.59 °, 9.22 °, 14.19 °, 15.58 °, 16.08 °, 17.0 °, 17.54 °, 18.13 °, 19.79 °, 20.23 °, 25.60 ° 2θ.

Пример 3. Получение кристаллической формы 8 софосбувира из формы 1 ультразвуковой обработкой суспензии в петролейном эфире.Example 3. Obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir from form 1 by ultrasonic treatment of a suspension in petroleum ether.

Форма 1 софосбувира была получена при перекристаллизации формы 6 (Nantong Chanyoo Pharmatech Co., Ltd) из хлористого метилена.Form 1 of sofosbuvir was obtained by recrystallization of Form 6 (Nantong Chanyoo Pharmatech Co., Ltd) from methylene chloride.

Навеску софосбувира 1 формы (0.250 г, 0,472 ммоль) помещают в круглодонную колбу объемом 10 мл. К навеске добавляют 5 мл петролейного эфира, реакционную массу подвергают УЗ-облучению, за 20 минут осадок не растворяется, переходит в аморфное состояние и потом кристаллизуется в течение следующих 20 минут. Выпавший осадок фильтруют и промывают 10 мл МТБЭ и сушат в вакуумном шкафу (0,07-0,08 МПа) при 25°С. Выход составляет 0.241 г (96.5%), чистота (ВЭЖХ) - 99.9%.A portion of sofosbuvir 1 form (0.250 g, 0.472 mmol) is placed in a 10 ml round-bottom flask. 5 ml of petroleum ether is added to the sample, the reaction mass is subjected to ultrasonic irradiation, the precipitate does not dissolve in 20 minutes, becomes amorphous and then crystallizes over the next 20 minutes. The precipitate that formed is filtered and washed with 10 ml of MTBE and dried in a vacuum oven (0.07-0.08 MPa) at 25 ° C. The yield is 0.241 g (96.5%), the purity (HPLC) is 99.9%.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.61°, 9.28°, 14.20°, 15.63°, 16.01°, 17.10°, 17.56°, 18.15°, 19.84°, 20.13°, 25.61° 2**Θ.The following peaks were obtained on the diffractogram of the sample: 8.61 °, 9.28 °, 14.20 °, 15.63 °, 16.01 °, 17.10 °, 17.56 °, 18.15 °, 19.84 °, 20.13 °, 25.61 ° 2 ** Θ.

Пример 4. Получение кристаллической формы 8 софосбувира затиранием формы 1 в изопропиловом спирте с МТБЭ.Example 4. Obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir by mashing of form 1 in isopropyl alcohol with MTBE.

Навеску софосбувира 1 формы (0.250 г, 0,472 ммоль) помещали в круглодонную колбу объемом 10 мл, снабженную магнитным перемешивающим устройством и обратным холодильником. К навеске добавляли 2 мл изопропилового спирта (ХЧ), реакционную массу нагревали при перемешивании до 40-45°С, после полного растворения осадка реакционную массу охлаждали до комнатной температуры. Затем часть растворителя упаривали с применением РПИ до остаточного количества спирта 40% от массы смеси. К осадку добавляли МТБЭ в количестве 5 мл. Маслянистые жидкости затирались магнитным якорем в течение 3 ч. Выпавший осадок фильтровали и промывали 5 мл МТБЭ и сушили в вакуумном шкафу (0,07-0,08 МПа) при 25°С. Выход составил 0.217 г (86.8%), чистота (ВЭЖХ) - 99.8%.A weighed portion of form 1 sofosbuvir (0.250 g, 0.472 mmol) was placed in a 10 ml round bottom flask equipped with a magnetic stirrer and a reflux condenser. To the sample was added 2 ml of isopropyl alcohol (reagent grade), the reaction mixture was heated with stirring to 40-45 ° C, after complete dissolution of the precipitate, the reaction mixture was cooled to room temperature. Then part of the solvent was evaporated using RPI to a residual amount of alcohol of 40% by weight of the mixture. MTBE was added to the precipitate in an amount of 5 ml. Oily liquids were rubbed with a magnetic anchor for 3 hours. The precipitate was filtered and washed with 5 ml of MTBE and dried in a vacuum oven (0.07-0.08 MPa) at 25 ° C. The yield was 0.217 g (86.8%), the purity (HPLC) was 99.8%.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.58°, 9.24°, 14.23°, 15.60°, 16.11°, 17.17°, 17.52°, 18.10°, 19.82°, 20.22°, 25.61° 2θ.The following peaks were obtained on the diffractogram of the sample: 8.58 °, 9.24 °, 14.23 °, 15.60 °, 16.11 °, 17.17 °, 17.52 °, 18.10 °, 19.82 °, 20.22 °, 25.61 ° 2θ.

Пример 5. Получение кристаллической формы 8 софосбувира затиранием аморфной формы в изопропиловом спирте с МТБЭ.Example 5. Obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir by mashing the amorphous form in isopropyl alcohol with MTBE.

Аморфная форма софосбувира была получена сублимационной сушкой раствора софосбувира в смеси ацетонитрила с метанолом и водой, полученного при разделывании реакционной смеси после химического синтеза софосбувира.The amorphous form of sofosbuvir was obtained by freeze-drying a solution of sofosbuvir in a mixture of acetonitrile with methanol and water, obtained by separating the reaction mixture after the chemical synthesis of sofosbuvir.

Кристаллическую форму 8 получали согласно примеру 4, использовав вместо формы 1 аморфную форму. Выход составил 0.218 г (87.2%), чистота (ВЭЖХ) - 99.8%.Crystalline Form 8 was prepared according to Example 4, using amorphous form instead of Form 1. The yield was 0.218 g (87.2%), the purity (HPLC) was 99.8%.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.62°, 9.19°, 14.26°, 15.64°, 16.02°, 16.98°, 17.50°, 18.12°, 19.88°, 20.26°, 25.62° 2θ.The following peaks were obtained on the diffractogram of the sample: 8.62 °, 9.19 °, 14.26 °, 15.64 °, 16.02 °, 16.98 °, 17.50 °, 18.12 °, 19.88 °, 20.26 °, 25.62 ° 2θ.

Пример 6. Получение кристаллической формы 8 софосбувира из аморфной формы ультразвуковой обработкой суспензии в петролейном эфире.Example 6. Obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir from amorphous form by ultrasonic treatment of a suspension in petroleum ether.

Форму 8 получали согласно примеру 3, использовав вместо формы 1 аморфную форму. Выход составляет 0.242 г (96.8%), чистота (ВЭЖХ) - 99.8%.Form 8 was prepared according to example 3, using an amorphous form instead of form 1. The yield is 0.242 g (96.8%), the purity (HPLC) is 99.8%.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.57°, 9.25°, 14.16°, 15.59°, 15.98°, 17.07°, 17.52°, 18.12°, 19.81°, 20.12°, 25.61° 2θ (фигура 2).The following peaks were obtained on the diffractogram of the sample: 8.57 °, 9.25 °, 14.16 °, 15.59 °, 15.98 °, 17.07 °, 17.52 °, 18.12 °, 19.81 °, 20.12 °, 25.61 ° 2θ (Figure 2).

Пример 7. Получение кристаллической формы 8 софосбувира из формы 1 ультразвуковой обработкой суспензии в н-гексане.Example 7. Obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir from form 1 by ultrasonic treatment of a suspension in n-hexane.

Форму 8 получали согласно примеру 3, использовав вместо петролейного эфира н-гексан. Выход составляет 0.239 г (95.6%), чистота (ВЭЖХ) - 99.9%.Form 8 was prepared according to example 3 using n-hexane instead of petroleum ether. The yield is 0.239 g (95.6%), the purity (HPLC) is 99.9%.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.62°, 9.29°, 14.18°, 15.60°, 16.11°, 17,10°, 17.54°, 18.10°, 19.78°, 20.22°, 25.59° 2θ.The following peaks were obtained on the diffractogram of the sample: 8.62 °, 9.29 °, 14.18 °, 15.60 °, 16.11 °, 17.10 °, 17.54 °, 18.10 °, 19.78 °, 20.22 °, 25.59 ° 2θ.

Пример 8. Получение кристаллической формы 8 софосбувира затиранием аморфной формы в изопропиловом спирте с МТБЭ.Example 8. Obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir by mashing the amorphous form in isopropyl alcohol with MTBE.

Аморфная форма софосбувира была получена сублимационной сушкой раствора формы 6 софосбувира (Nantong Chanyoo Pharmatech Co., Ltd) в смеси ацетонитрила с водой.An amorphous form of sofosbuvir was obtained by freeze-drying a solution of form 6 of sofosbuvir (Nantong Chanyoo Pharmatech Co., Ltd) in a mixture of acetonitrile and water.

Навеску софосбувира аморфной формы (0.750 г, 1,416 ммоль) помещали в круглодонную колбу объемом 25 мл, снабженную магнитным перемешивающим устройством и обратным холодильником (контроль температуры осуществляется с помощью термопары, помещенной в реакционную массу). К навеске добавляли 7 мл изопропилового спирта (ХЧ), реакционную массу нагревали при перемешивании до 40-45°С, после полного растворения осадка реакционную массу охлаждали до комнатной температуры. Затем часть растворителя упаривали с применением роторно-пленочного испарителя (РПИ) до остаточной массовой доли спирта (1.125, 0.15, 0.04 г изопропанола для 0.75 г софосбувира соответственно) в реакционной массе. К осадку добавляли МТБЭ в количестве согласно выполняемому опыту (7.5,15, 22.5 мл соответственно). Маслянистые жидкости затирались магнитным якорем в течение 2-3 ч (для 1/19 масс. доли спирта затирка проводится в течение 5 ч). Выпавший осадок фильтровали и промывали 5 мл МТБЭ и сушили в вакуумном шкафу (0,07-0,08 МПа) при 25°С. Выход согласно таблице 5.A weighed portion of amorphous sofosbuvir (0.750 g, 1.416 mmol) was placed in a 25 ml round-bottom flask equipped with a magnetic stirrer and a reflux condenser (temperature control is carried out using a thermocouple placed in the reaction mixture). 7 ml of isopropyl alcohol (reagent grade) was added to the weighed portion, the reaction mass was heated with stirring to 40-45 ° C, after complete dissolution of the precipitate, the reaction mass was cooled to room temperature. Then part of the solvent was evaporated using a rotary film evaporator (RPI) to the residual mass fraction of alcohol (1.125, 0.15, 0.04 g of isopropanol for 0.75 g of sofosbuvir, respectively) in the reaction mixture. MTBE was added to the sediment in an amount according to the experiment performed (7.5, 15, 22.5 ml, respectively). Oily liquids were rubbed with a magnetic anchor for 2-3 hours (for 1/19 mass fraction of alcohol, grouting is carried out for 5 hours). The precipitate that formed was filtered and washed with 5 ml of MTBE and dried in a vacuum oven (0.07-0.08 MPa) at 25 ° C. Output according to table 5.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.56°, 9.24°, 14.16°, 15.59°, 15.98°, 17.07°, 17.52°, 18.12°, 19.81°, 20.12°, 25.60° 2θ (фигура 3).The diffractogram of the sample obtained the following peaks: 8.56 °, 9.24 °, 14.16 °, 15.59 °, 15.98 °, 17.07 °, 17.52 °, 18.12 °, 19.81 °, 20.12 °, 25.60 ° 2θ (Figure 3).

Пример 9. Получение кристаллической формы 8 софосбувира затиранием формы α в этиловом спирте с н-гептаном.Example 9. Obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir by mashing the form α in ethyl alcohol with n-heptane.

Кристаллическая форма α софосбувира была получена перекристаллизацией формы 6 (Nantong Chanyoo Pharmatech Co., Ltd) из метилэтилкетона.Crystalline form α of sofosbuvir was obtained by recrystallization of Form 6 (Nantong Chanyoo Pharmatech Co., Ltd) from methyl ethyl ketone.

Кристаллическую форму 8 получали согласно примеру 4, использовав вместо формы 1 форму α, этиловый спирт вместо изопропилового и н-гептан вместо МТБЭ. Выход составил 0.221 г (88.4%), чистота (ВЭЖХ) - 99.8%.Crystalline Form 8 was prepared according to Example 4, using Form α instead of Form 1, ethyl alcohol instead of isopropyl alcohol and n-heptane instead of MTBE. The yield was 0.221 g (88.4%), the purity (HPLC) was 99.8%.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.59°, 9.17°, 14.22°, 15.64°, 16.12°, 16.98°, 17.52°, 18.12°, 19.75°, 20.23°, 25.60° 2θ.The following peaks were obtained on the diffractogram of the sample: 8.59 °, 9.17 °, 14.22 °, 15.64 °, 16.12 °, 16.98 °, 17.52 °, 18.12 °, 19.75 °, 20.23 °, 25.60 ° 2θ.

Пример 10. Получение кристаллической формы 8 софосбувира затиранием формы α в изопропиловом спирте с н-гексаном.Example 10. Obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir by mashing the form α in isopropyl alcohol with n-hexane.

Кристаллическую форму 8 получали согласно примеру 4, использовав вместо формы 1 форму α и н-гексан вместо МТБЭ. Выход составил 0.219 г (87.6%), чистота (ВЭЖХ) - 99.9%.Crystalline Form 8 was prepared according to Example 4 using Form α instead of Form 1 and n-hexane instead of MTBE. The yield was 0.219 g (87.6%), the purity (HPLC) was 99.9%.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.58°, 9.24°, 14.23°, 15.60°, 16.12°, 16.98°, 17.52°, 18.12°, 19.79°, 20.23°, 25.60° 2θ.The following peaks were obtained on the diffractogram of the sample: 8.58 °, 9.24 °, 14.23 °, 15.60 °, 16.12 °, 16.98 °, 17.52 °, 18.12 °, 19.79 °, 20.23 °, 25.60 ° 2θ.

Пример 11. Получение кристаллической формы 8 софосбувира затиранием аморфной формы в этилацетате с МТБЭ.Example 11. Obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir by mashing the amorphous form in ethyl acetate with MTBE.

Кристаллическую форму 8 получали согласно примеру 4, использовав вместо формы 1 аморфную форму и этилацетат вместо изопропилового спирта. Выход составил 0.216 г (86.4%), чистота (ВЭЖХ) - 99.8%.Crystalline Form 8 was prepared according to Example 4, using amorphous form instead of Form 1 and ethyl acetate instead of isopropyl alcohol. The yield was 0.216 g (86.4%), the purity (HPLC) was 99.8%.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.61°, 9.17°, 14.21°, 15.69°, 16.10°, 16.94°, 17.59°, 18.14°, 19.80°, 20.31°, 25.66° 2θ.The following peaks were obtained on the diffractogram of the sample: 8.61 °, 9.17 °, 14.21 °, 15.69 °, 16.10 °, 16.94 °, 17.59 °, 18.14 °, 19.80 °, 20.31 °, 25.66 ° 2θ.

Пример 12. Получение кристаллической формы 8 софосбувира затиранием аморфной формы в этиловом спирте с МТБЭ.Example 12. Obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir by mashing the amorphous form in ethyl alcohol with MTBE.

Навеску софосбувира аморфной формы (1.000 г, 1,888 ммоль) помещали в круглодонную колбу объемом 10 мл, снабженную магнитным перемешивающим устройством и обратным холодильником. К навеске добавляли 1,27 мл (1 г) этилового спирта (ХЧ), реакционную массу нагревали при перемешивании до 50-55°С, после гомогенизации реакционной массы ее охлаждали до комнатной температуры. Затем к смеси добавляли 6 мл МТБЭ и маслянистые жидкости затирались магнитным якорем в течение 3,5 ч. Выпавший осадок фильтровали и промывали 5 мл МТБЭ и сушили в вакуумном шкафу (0,07-0,08 МПа) при 25°С. Выход составил 0.221 г (88.4%), чистота (ВЭЖХ) - 99.8%.A weighed portion of amorphous sofosbuvir (1.000 g, 1.888 mmol) was placed in a 10 ml round-bottom flask equipped with a magnetic stirrer and a reflux condenser. To the weighed portion was added 1.27 ml (1 g) of ethyl alcohol (reagent grade), the reaction mixture was heated with stirring to 50-55 ° C, after homogenization of the reaction mixture, it was cooled to room temperature. Then 6 ml of MTBE was added to the mixture and the oily liquids were rubbed with a magnetic anchor for 3.5 hours. The precipitate that formed was filtered and washed with 5 ml of MTBE and dried in a vacuum oven (0.07-0.08 MPa) at 25 ° C. The yield was 0.221 g (88.4%), the purity (HPLC) was 99.8%.

На дифрактограмме образца получены следующие пики: 8.58°, 9.14°, 14.2°, 15.61°, 16.07°, 17.0°, 17.54°, 18.19°, 19.79°, 20.22°, 25.54° 2θ.The following peaks were obtained on the diffractogram of the sample: 8.58 °, 9.14 °, 14.2 °, 15.61 °, 16.07 °, 17.0 °, 17.54 °, 18.19 °, 19.79 °, 20.22 °, 25.54 ° 2θ.

Claims

1. A method of obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir, including mashing a mixture of a known form of sofosbuvir, selected from crystalline forms 1, 6, 7, α and amorphous form, and an organic solvent in which it is soluble or moderately soluble, selected from isopropanol, ethanol, ethyl acetate , with a precipitating agent selected from the group consisting of diethyl ether, diisopropyl ether, dimethyl ether, methyl tert-butyl ether, petroleum ether, n-hexane, n-heptane, n-octane and mixtures thereof, the amount of organic solvent in the mixture being from 5 to 60% by weight of a mixture of a known form of sofosbuvir and an organic solvent, characterized in that a mixture of a known form of sofosbuvir and an organic solvent, in which it is soluble or moderately soluble, is obtained by dissolving the known form of sofosbuvir in an amount of organic solvent sufficient to dissolve the form, followed by evaporation organic solvent to the specified amount in a mixture of organic natural solvent.

2. A method of obtaining crystalline form 8 of sofosbuvir, including ultrasonic treatment of a known form of sofosbuvir, selected from crystalline forms 1, 6, 7, α and amorphous form, suspended in an organic solvent, in which it is very little soluble or practically insoluble, selected from the group, including n-heptane, n-hexane, n-octane, their isomers or their mixtures, petroleum ether, characterized in that the sonication is carried out until the known form of sofosbuvir passes into an amorphous oily state, and then again into a solid crystalline state.