RU2743593C1 - Peptide immunogens and vaccine composition against covid-19 with the use of peptide immunogens - Google Patents
Peptide immunogens and vaccine composition against covid-19 with the use of peptide immunogens Download PDFInfo
- Publication number
- RU2743593C1 RU2743593C1 RU2020140743A RU2020140743A RU2743593C1 RU 2743593 C1 RU2743593 C1 RU 2743593C1 RU 2020140743 A RU2020140743 A RU 2020140743A RU 2020140743 A RU2020140743 A RU 2020140743A RU 2743593 C1 RU2743593 C1 RU 2743593C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- protein
- peptide immunogens
- amino acid
- peptide
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 79
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 45
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 41
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims abstract description 46
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 22
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 29
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 claims description 24
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 claims description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 14
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 102000029301 Protein S Human genes 0.000 claims description 6
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 108010066124 Protein S Proteins 0.000 claims description 5
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 abstract description 15
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 abstract description 15
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 abstract description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 8
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 abstract description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 2
- 241000428199 Mustelinae Species 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 22
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 description 19
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 10
- 241000701832 Enterobacteria phage T3 Species 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 8
- 241000127282 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 208000025370 Middle East respiratory syndrome Diseases 0.000 description 5
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 4
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 4
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 description 4
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 244000309467 Human Coronavirus Species 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 3
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 206010003757 Atypical pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 241000008904 Betacoronavirus Species 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 241001461743 Deltacoronavirus Species 0.000 description 2
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000833492 Homo sapiens Jouberin Proteins 0.000 description 2
- 101000651236 Homo sapiens NCK-interacting protein with SH3 domain Proteins 0.000 description 2
- 102100024407 Jouberin Human genes 0.000 description 2
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 2
- 206010056342 Pulmonary mass Diseases 0.000 description 2
- 206010062106 Respiratory tract infection viral Diseases 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 2
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 2
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 2
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 108010028403 hemagglutinin esterase Proteins 0.000 description 2
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 2
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 2
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 2
- FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 FPKVOQKZMBDBKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000004176 Alphacoronavirus Species 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 206010003598 Atelectasis Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102100033620 Calponin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000700112 Chinchilla Species 0.000 description 1
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000702371 Enterobacteria phage f1 Species 0.000 description 1
- 240000001284 Euphorbia milii Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010069767 H1N1 influenza Diseases 0.000 description 1
- 101000945318 Homo sapiens Calponin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000652736 Homo sapiens Transgelin Proteins 0.000 description 1
- 241000711467 Human coronavirus 229E Species 0.000 description 1
- 241001109669 Human coronavirus HKU1 Species 0.000 description 1
- 241000482741 Human coronavirus NL63 Species 0.000 description 1
- 241001428935 Human coronavirus OC43 Species 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- 101150028955 MBP gene Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101150001779 ORF1a gene Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 1
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 1
- 208000007123 Pulmonary Atelectasis Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 229940124680 SARS vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108091005774 SARS-CoV-2 proteins Proteins 0.000 description 1
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 241000711517 Torovirus Species 0.000 description 1
- 241000711508 Turkey coronavirus Species 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002821 alveolar epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000002593 anti-atelectatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000003123 bronchiole Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 101150077538 gor gene Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000002134 immunopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000012768 mass vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 238000010422 painting Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000020029 respiratory tract infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/215—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к разработке профилактических противовирусных препаратов, а именно к получению вакцины против коронавирусной инфекции COVID-19, и может быть использовано для профилактики этого заболевания.The invention relates to the development of preventive antiviral drugs, namely, to obtain a vaccine against coronavirus infection COVID-19, and can be used to prevent this disease.
Общая характеристика коронавирусной инфекции COVID-19General characteristics of coronavirus infection COVID-19
Коронавирус человека был впервые выделен D. Tyrrell и М. Bynoe в 1965 г. от больного острым респираторным заболеванием (ОРВЗ), им удалось культивировать человеческий коронавирус на клетках трахеи [1]. Однако первое упоминание о коронавирусе, выделенном у цыплят больных бронхитом, относится к 1937 г.Human coronavirus was first isolated by D. Tyrrell and M. Bynoe in 1965 from a patient with acute respiratory disease (ARVD), they managed to cultivate human coronavirus on tracheal cells [1]. However, the first mention of coronavirus isolated from chickens with bronchitis dates back to 1937.
Свое название коронавирусы получили в 1968 году благодаря сходству выростов (пепломеры) с corona spinarum - терновым венцом вокруг головы святого на средневековых религиозных картинах [2]. Поскольку многие коронавирусы плохо размножаются в культуре клеток, то долгое время молекулярно-биологические исследования их репликации отставали от аналогичных исследований других вирусов и в течение многих лет впервые обнаруживаемые вирусы относили к группе коронавирусов только по их характерной морфологии [3]. Лишь в 1983 году были установлены характерные биохимические особенности, идентифицированы классы мРНК, их нуклеотидные последовательности, а также структурные белки [4, 5].The coronaviruses got their name in 1968 due to the similarity of outgrowths (peplomers) with corona spinarum - a crown of thorns around the head of a saint in medieval religious paintings [2]. Since many coronaviruses reproduce poorly in cell culture, for a long time molecular biological studies of their replication lagged behind similar studies of other viruses, and for many years, newly detected viruses were attributed to the group of coronaviruses only by their characteristic morphology [3]. Only in 1983 the characteristic biochemical features were established, the classes of mRNA, their nucleotide sequences, as well as structural proteins were identified [4, 5].
После открытия в 1965 году коронавирусы почти не привлекали внимание исследователей, поскольку выделенные штаммы 229Е и ОС43 вызывали относительно легкие заболевания. Врачи лечили их как обычную простуду, пока в Китае в 2002-2003 годах не была зафиксирована вспышка атипичной пневмонии, или тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС, SARS). Заболевание зарегистрировано в 32 странах, наибольшее количество в Китае, Сингапуре, Канаде. Всего заболело 8273 человека, а 775 умерло (летальность 9,6%).After the discovery in 1965, coronaviruses almost did not attract the attention of researchers, since the isolated strains 229E and OC43 caused relatively mild diseases. Doctors treated them like a common cold, until an outbreak of SARS, or severe acute respiratory syndrome (SARS), was recorded in China in 2002-2003. The disease has been reported in 32 countries, the largest number in China, Singapore, Canada. In total, 8273 people fell ill, and 775 died (mortality rate 9.6%).
17 марта 2003 года ВОЗ была объявлена «глобальная тревога» в связи с распространением «атипичной пневмонии». Были привлечены 13 лабораторий из 9 стран для проведения объединенных исследований этого заболевания. В качестве приоритетных задач ставилось определение этиологического агента, и затем на основании этого - разработка диагностических тест систем. В результате тесного сотрудничества ученых из лабораторий разных стран первая часть поставленной задачи была выполнена поразительно быстро. 16 апреля 2003 года ВОЗ было объявлено, что этиологическим агентом "атипичной пневмонии" является новый патоген, вирус SARS, относящийся к семейству коронавирусов, но не родственный ни одному из известных штаммов этого вируса [6]. С тех пор обнаружилось еще два коронавируса, которые тоже вызывают простуду -NL63 и HKU1. В 2012 году - почти через 50 лет после его открытия - был окончательно секвенирован полный геном штамма 229Е.On March 17, 2003, the WHO declared a "global alert" in connection with the spread of "atypical pneumonia". Were involved 13 laboratories from 9 countries to conduct joint research on this disease. The identification of the etiological agent was set as a priority task, and then, based on this, the development of diagnostic test systems. As a result of close collaboration of scientists from laboratories in different countries, the first part of the task was completed amazingly quickly. On April 16, 2003, WHO announced that the etiological agent of "SARS" is a new pathogen, the SARS virus, belonging to the coronavirus family, but not related to any of the known strains of this virus [6]. Since then, two more coronaviruses have been discovered that also cause the common cold - NL63 and HKU1. In 2012 - almost 50 years after its discovery - the complete genome of the 229E strain was finally sequenced.
В 2012 году были зарегистрированы первые случаи заболевания, вызванного коронавирусом. Заболевание в дальнейшем получило название ближневосточного респираторного синдрома (MERS), возбудителем которого являлся коронавирус MERS-CoV [7]. В 2015 году в Южной Корее произошла вспышка ближневосточного респираторного синдрома, в ходе которой заболело 183 человека, умерло 33.In 2012, the first cases of the disease caused by the coronavirus were recorded. The disease was later called the Middle East respiratory syndrome (MERS), the causative agent of which was the MERS-CoV coronavirus [7]. In 2015, South Korea experienced an outbreak of Middle East respiratory syndrome, during which 183 people fell ill and 33 died.
В декабре 2019 года несколько медицинских учреждений в китайском городе Ухань (провинция Хубэй) сообщили о пациентах с пневмонией [8]; клинические проявления напоминали симптомы тяжелого острого респираторного синдрома (SARS), заболевания, появившегося в 2002 году в соседнем районе - провинции Гуандун, вызванного коронавирусом SARS-CoV [9, 10]. 7 января 2020 г. был выделен новый штамм коронавируса, названный SARS-CoV-2, который вызывает коронавирусную болезнь 2019 года COVID-19. Полный геном SARS-CoV-2 уже достаточно изучен, его первая широкая публикация китайскими органами здравоохранения была сделана вскоре после обнаружения вируса, что облегчило процесс диагностики и идентификации возбудителя инфекции.In December 2019, several medical institutions in the Chinese city of Wuhan (Hubei province) reported patients with pneumonia [8]; clinical manifestations resembled those of severe acute respiratory syndrome (SARS), a disease that appeared in 2002 in the neighboring region of Guangdong province, caused by the SARS-CoV coronavirus [9, 10]. On January 7, 2020, a new strain of coronavirus, named SARS-CoV-2, which causes the 2019 coronavirus disease COVID-19, was isolated. The complete genome of SARS-CoV-2 has already been sufficiently studied, its first widespread publication by Chinese health authorities was made shortly after the discovery of the virus, which facilitated the process of diagnosis and identification of the infectious agent.
SARS-CoV-2 - одноцепочечный РНК-содержащий вирус, относится к семейству Coronaviridae, группе 2b бета-коронавирусов, который имеет по меньшей мере 70% сходство в генетической последовательности с SARS-CoV, его размер составляет около 100 нм [11].SARS-CoV-2 is a single-stranded RNA virus, belongs to the Coronaviridae family, group 2b of beta-coronaviruses, which has at least 70% similarity in genetic sequence to SARS-CoV, its size is about 100 nm [11].
Все известные коронавирусы (CoV) делятся на четыре рода, включая α-, β-, γ-, и δ-CoV. Представители первых двух родов способны инфицировать млекопитающих, тогда как γ- и δ-CoV инфицируют преимущественно птиц. Ранее было известно о шести коронавирусах, которые способны инфицировать человека. Это HCoV-229E и HCoV-NL63 (оба α-CoV), HCoV-HKU1 и HCoV-OC43 (оба β-CoV), - они вызывают легкие респираторные симптомы, сходные с простудой [12] Два других β-коронавируса, SARS-CoV и MERS-CoV, приводят к тяжелым и потенциально смертельным инфекциям дыхательных путей человека [13-16]. Несмотря на тщательное изучение коронавирусов после вспышки ТОРС, пока не совсем ясно, почему три из них - SARS-CoV-1, MERS-CoV и SARS-CoV-2 (источник пандемии COVID-19) - вызывают более тяжелые симптомы и приводят к более высокому уровню смертности, в то время как другие известные четыре коронавируса человека гораздо слабее.All known coronaviruses (CoV) are classified into four genera, including α-, β-, γ-, and δ-CoV. Representatives of the first two genera are capable of infecting mammals, while γ- and δ-CoV mainly infect birds. Previously, it was known about six coronaviruses that can infect humans. These are HCoV-229E and HCoV-NL63 (both α-CoV), HCoV-HKU1 and HCoV-OC43 (both β-CoV), which cause mild respiratory symptoms similar to those of a common cold [12] The other two β-coronaviruses, SARS- CoV and MERS-CoV lead to severe and potentially fatal human respiratory tract infections [13-16]. Despite careful study of coronaviruses following the SARS outbreak, it is not yet clear why three of them - SARS-CoV-1, MERS-CoV, and SARS-CoV-2 (the source of the COVID-19 pandemic) - cause more severe symptoms and lead to more high mortality rates, while the other four known human coronaviruses are much weaker.
Классификация инфекционного агентаClassification of an infectious agent
В состав семейства Коронавирусов входят род Коронавирусы и род Торовирусы. Род Коронавирусы объединяет большие, оболочечные, позитивные одноцепочечные РНК-содержащие вирусы, которые вызывают широко распространенные заболевания человека и животных. Его представители могут быть выделены в три серологические подгруппы.The Coronavirus family includes the Coronavirus genus and the Torovirus genus. The genus Coronavirus comprises large, enveloped, positive single-stranded RNA viruses that cause widespread diseases in humans and animals. Its representatives can be divided into three serological subgroups.
Серотипы и хозяева коронавирусов:Serotypes and hosts of coronaviruses:
Как и другие респираторные вирусные инфекции, возбудитель COVID-19 в основном распространяется воздушно-капельным путем, через аэрозоли, а также через загрязненные предметы и прямой контакт [12, 16].Like other respiratory viral infections, the causative agent of COVID-19 is mainly spread by airborne droplets, aerosols, as well as through contaminated objects and direct contact [12, 16].
Коронавирусы обладают широким тропизмом и могут поражать помимо дыхательных путей печень, почки, кишечник, нервную систему, сердце и глаза [13-15, 17, 18]. Типичная коронавирусная инфекция клинически проявляется гриппоподобным синдромом и/или кишечными расстройствами. При коронавирусной инфекции поражается альвеолярный эпителий. Коронавирусы, обладая способностью к индукции апоптоза, вызывают некроз пораженных тканей, а у пациентов после выздоровления остаются фиброзные рубцы в легких. Коронавирусы, индуцируя слияние клеток, оказывают сильное воздействие на проницаемость клеток, что приводит к нарушению водно-солевого баланса и транспорта белков. Вероятно, в этих условиях развиваются недостаточность сурфактанта (антиателектатический фактор), что приводит к коллапсу альвеол, и легочному дистресс-синдрому. Наиболее опасным свойством коронавирусов является их способность поражать макрофаги. Вероятнее всего, заболевание в особо тяжелой форме развивается на фоне блокирования основных звеньев иммунного ответа [16, 17, 19, 20].Coronaviruses have a wide tropism and can infect, in addition to the respiratory tract, the liver, kidneys, intestines, nervous system, heart and eyes [13-15, 17, 18]. A typical coronavirus infection is clinically manifested by influenza-like syndrome and / or intestinal disorders. With coronavirus infection, the alveolar epithelium is affected. Coronaviruses, having the ability to induce apoptosis, cause necrosis of the affected tissues, and after recovery in patients, fibrous scars remain in the lungs. Coronaviruses, by inducing cell fusion, have a strong effect on cell permeability, which leads to disruption of the water-salt balance and protein transport. Probably, in these conditions, surfactant deficiency (antiatelectatic factor) develops, which leads to collapse of the alveoli, and pulmonary distress syndrome. The most dangerous property of coronaviruses is their ability to infect macrophages. Most likely, the disease in a particularly severe form develops against the background of blocking the main links of the immune response [16, 17, 19, 20].
Коронавирусы домашних и лабораторных животных вызывают инфекционный бронхит птиц, гепатит мышей, пневмонии у крыс, гастроэнтериты и энцефаломиелиты у свиней, часто заканчивающихся у животных смертельным исходом, что приводит к большим экономическим потерям [14].Coronaviruses of domestic and laboratory animals cause infectious bronchitis of birds, hepatitis of mice, pneumonia in rats, gastroenteritis and encephalomyelitis in pigs, often fatal in animals, which leads to large economic losses [14].
Постановлением Главного санитарного врача РФ вирус SARS-CoV-2, как и некоторые другие представители этого семейства (вирусы SARS-CoV, MERS-CoV), отнесен ко II группе патогенности (патогенные биологические агенты, в отношении которых известны случаи летальных исходов заболевания и/или имеются сведения о высоком эпидемическом потенциале). SARS-CoV-2 включен в перечень заболеваний, представляющих опасность для окружающих [18, 21].By the decree of the Chief Sanitary Doctor of the Russian Federation, the SARS-CoV-2 virus, like some other representatives of this family (SARS-CoV, MERS-CoV viruses), is assigned to the II pathogenicity group (pathogenic biological agents for which there are known cases of fatal or there is evidence of a high epidemic potential). SARS-CoV-2 is included in the list of diseases that pose a danger to others [18, 21].
Случаи заболевания COVID-19 зарегистрированы в большинстве стран мира на всех континентах. 30 января ВОЗ признала вспышку нового коронавируса глобальной чрезвычайной ситуацией в области общественного здравоохранения, имеющей международное значение [12-14, 19, 20, 21]. 11 марта 2020 года Президент ВОЗ объявил COVID-19 глобальной пандемией, впервые назвав пандемией инфекционный процесс после пандемии гриппа H1N1 в 2009 году [12, 15, 19, 22].Cases of COVID-19 have been reported in most countries of the world on all continents. On January 30, WHO recognized the outbreak of the novel coronavirus as a global public health emergency of international concern [12-14, 19, 20, 21]. On March 11, 2020, the WHO President declared COVID-19 a global pandemic, first calling the infectious process a pandemic after the H1N1 influenza pandemic in 2009 [12, 15, 19, 22].
Самый надежный способ остановить пандемию - массовая вакцинация. Разработка вакцины является критически важной задачей для системы здравоохранения. Именно поэтому работу по созданию вакцины для профилактики коронавирусной инфекции (COVID-19) ведут более 80 компаний по всему миру. По данным ВОЗ на 9 сентября 2020 года на стадии доклинических исследований находились 145 вакцин, 12 из них разрабатывались с использованием пептидов в качестве действующего начала вакцины. Клинические исследования проводились для 35 вакцин, среди них только одна из них была разработана на пептидной платформе [23].The most reliable way to stop a pandemic is through mass vaccinations. Vaccine development is a critical health system challenge. That is why more than 80 companies around the world are working to create a vaccine for the prevention of coronavirus infection (COVID-19). According to WHO, as of September 9, 2020, 145 vaccines were at the preclinical stage, 12 of which were developed using peptides as the active principle of the vaccine. Clinical studies were carried out for 35 vaccines, among them only one of them was developed on the peptide platform [23].
Известен изолированный полипептид вируса SARS и вакцина для профилактики тяжелого острого респираторного синдрома (SARS) на его основе, содержащая инактивированный вирус SARS, убитый вирус SARS, ослабленный вирус SARS, препарат расщепленного вируса SARS или по крайней мере один очищенный антиген вируса SARS (заявка США №20060257852, МПК С07К 14/165, опубл. 16.11.2006 г.) [24]. Полипептид представляет собой полипептид Spike (S), полипептид Env (Е), полипептид мембраны (М), полипептид гемагглютинин-эстеразы (НЕ), полипептид нуклеокапсида (N), полипептид ORF1a, полипептид ORF1ab, протеолитический фрагмент полипептида ORF1a или протеолитический фрагмент полипептида ORF1ab. Антиген представляет собой очищенный инактивированный антиген вируса SARS в форме вирусоподобной частицы (VLP) и содержит адъювант в виде соли алюминия или MF59. Антигены выбраны из S, Е, N и М. Инактивация антигена включает обработку вируса эффективным количеством одного или нескольких из следующих агентов, выбранных из группы, состоящей из детергентов, формальдегида, формалина, β-проприолактона и УФ-излучения.Known isolated polypeptide of the SARS virus and a vaccine for the prevention of severe acute respiratory syndrome (SARS) based on it, containing inactivated SARS virus, killed SARS virus, weakened SARS virus, split SARS virus preparation or at least one purified SARS virus antigen (US application No. 20060257852, IPC S07K 14/165, publ. 16.11.2006) [24]. The polypeptide is a Spike (S) polypeptide, an Env (E) polypeptide, a membrane (M) polypeptide, a hemagglutinin esterase (HE) polypeptide, a nucleocapsid (N) polypeptide, an ORF1a polypeptide, an ORF1ab polypeptide, an ORF1 proteolytic fragment or an ORF polypeptide, or a proteolytic fragment ORF1 orab polypeptide ... The antigen is a purified inactivated SARS virus antigen in the form of a virus-like particle (VLP) and contains an adjuvant in the form of an aluminum salt or MF59. Antigens are selected from S, E, N, and M. Antigen inactivation comprises treating the virus with an effective amount of one or more of the following agents selected from the group consisting of detergents, formaldehyde, formalin, β-propriolactone and UV radiation.
Наиболее близким аналогом (прототипом) является вакцинная композиция для стимулирования иммунного ответа в отношении MERS-CoV (международная заявка № WO 2015042373, МПК А61К 39/215, опубл. 26.03.2015 г.). Вакцинная композиция содержит (i) эффективное количество наночастиц MERS-CoV, где наночастица содержит по меньшей мере один тример полипептида Spike, и (ii) адъювант на основе сапонина, где адъювант на основе сапонина состоит из Matrix M1. Наночастица содержит по меньшей мере от приблизительно пяти тримеров до приблизительно 30 тримеров полипептида Spike. Концентрация наночастицы составляет по меньшей мере от приблизительно 20 мкг/мл до приблизительно 60 мкг/мл. Авторами была показана иммуногенность вакцинных композиций на основе белка S и наличие вируснейтрализующих антител в сыворотках вакцинированных животных. Полноразмерный белок S представляет широкий набор высокоиммуногенных эпитопов, индуцирующий формирование широкого спектра антител.The closest analogue (prototype) is a vaccine composition for stimulating the immune response against MERS-CoV (international application No. WO 2015042373, IPC A61K 39/215, publ. 03/26/2015). The vaccine composition comprises (i) an effective amount of MERS-CoV nanoparticles, where the nanoparticle contains at least one trimer of Spike polypeptide, and (ii) a saponin-based adjuvant, where the saponin-based adjuvant consists of Matrix M1. The nanoparticle contains at least about five trimers to about 30 trimers of a Spike polypeptide. The nanoparticle concentration is at least about 20 μg / ml to about 60 μg / ml. The authors have shown the immunogenicity of the protein S-based vaccine compositions and the presence of virus-neutralizing antibodies in the sera of vaccinated animals. The full-length protein S represents a wide range of highly immunogenic epitopes that induce the formation of a wide range of antibodies.
Однако в исследованиях выше указанных кандидатных вакцин против коронавирусов (SARS и MERS) был отмечен риск развития антителозависимого усиления (ADE) инфекции [26, 27].However, in studies of the above candidate coronavirus vaccines (SARS and MERS), the risk of developing antibody-dependent enhancement (ADE) infection was noted [26, 27].
Следовательно, разработка вакцины на основе синтетических пептидов, нацеленных на белок S SARS-CoV-2, может дать более безопасную и эффективную вакцину. Также для аналогов и прототипа не показана способность индуцировать иммунный ответ, способный оказывать защитные действия против нового вируса SARS-CoV-2.Therefore, the development of a vaccine based on synthetic peptides targeting the SARS-CoV-2 protein S could provide a safer and more effective vaccine. Also, for analogs and prototype, the ability to induce an immune response capable of exerting protective actions against the new SARS-CoV-2 virus has not been shown.
Техническим результатом изобретения является получение таких пептидных иммуногенов и вакцинных композиций, которые несут минимально необходимые антигенные детерминанты для формирования специфического иммунного ответа у кроликов, хорьков и хомяков и индуцируют протективный иммунитет против Covid-19.The technical result of the invention is to obtain such peptide immunogens and vaccine compositions that carry the minimum necessary antigenic determinants for the formation of a specific immune response in rabbits, ferrets and hamsters and induce protective immunity against Covid-19.
Указанный технический результат достигается тем, что получен первый пептидный иммуноген, используемый в качестве компонента вакцины против коронавирусной инфекции COVID-19, характеризующийся аминокислотной последовательностью CRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGS (SEQ ID NO: 1), содержащей антигенные Т и В-клеточные эпитопы белка S коронавируса SARS Cov-2, которые способны индуцировать образование антител, обладающих антигенспецифической, вируснейтрализующей и протективной активностями.The specified technical result is achieved by the fact that the first peptide immunogen used as a component of the vaccine against coronavirus infection COVID-19, characterized by the amino acid sequence CRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGS (SEQ ID NO: 1), containing antigenic T and B-cell epitopes of the protein S of the SARS Cov- 2, which are capable of inducing the formation of antibodies with antigen-specific, virus-neutralizing and protective activities.
Указанный технический результат достигается тем, что получен второй пептидный иммуноген, используемый в качестве компонента вакцины против коронавирусной инфекции COVID-19, характеризующийся аминокислотной последовательностью CKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIK (SEQ ID NO: 2), содержащей антигенные T и В-клеточные эпитопы белка S коронавируса SARS Cov-2, которые способны индуцировать образование антител, обладающих антигенспецифической, вируснейтрализующей и протективной активностями.The specified technical result is achieved by the fact that a second peptide immunogen used as a component of a vaccine against coronavirus infection COVID-19 is obtained, characterized by the amino acid sequence CKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIK (SEQ ID NO: 2), containing antigenic T and B-cell epitopes of the SARS
Указанный технический результат достигается тем, что получен химерный рекомбинантный белок MBP-6xHis-N_nCoV-2019, включающий N белок коронавируса SARS Cov-2, используемый в качестве белка-носителя в вакцинной композиции против коронавирусной инфекции COVID-19 и характеризующийся аминокислотной последовательностью: 
Указанный технический результат достигается также тем, что получена вакцинная композиция против коронавирусной инфекции COVID-19, характеризующаяся тем, что содержит пептидные иммуногены по пп. 1 и 2, имеющие аминокислотные последовательности (SEQ ID NO: 1), (SEQ ID NO: 2) соответственно и ковалентно связанные в виде конъюгатов с белком-носителем как в смеси, так и по отдельности, причем смесь вышеуказанных конъюгатов пептидных иммуногенов и белка-носителя сорбирована на фармацевтически приемлемый адъювант.The specified technical result is also achieved by the fact that a vaccine composition against coronavirus infection COVID-19 is obtained, characterized in that it contains peptide immunogens according to paragraphs. 1 and 2, having amino acid sequences (SEQ ID NO: 1), (SEQ ID NO: 2), respectively, and covalently linked as conjugates to a carrier protein either in mixture or separately, wherein the mixture of the above conjugates of peptide immunogens and protein the carrier is sorbed onto a pharmaceutically acceptable adjuvant.
Конъюгаты пептидных иммуногенов с белком-носителем взяты в равных соотношениях между собой и белком - носителем. В качестве белка-носителя вакцинная композиция содержит химерный рекомбинантный белок-носитель по п. 3, характеризующийся аминокислотной последовательностью (SEQ ID NO: 3). В качестве адъюванта вакцинная композиция содержит гидроокись алюминия в количестве 0,2-2,0 мг/мл.Conjugates of peptide immunogens with a carrier protein are taken in equal proportions between themselves and the carrier protein. As a carrier protein, the vaccine composition contains a chimeric recombinant carrier protein according to
Изобретение поясняется следующими графическими материалами. На фиг. 1 представлены аминокислотные последовательности двух пептидных иммуногенов. На фиг. 2 приведена аминокислотная последовательность химерного белка «MBP-6xHis-N_nCoV-2019». На фиг. 3 представлена нуклеотидная последовательность гена химерного белка «MBP-6xHis-N_nCoV-2019». На фиг. 4 изображена генетическая и физическая карта рекомбинантной плазмидной ДНК «pMBP-6xHis-N_nCoV-2019». На фиг. 5 представлена электрофореграмма рестрикционного анализа рекомбинантной плазмидной ДНК «pMBP-6xHis-N_nCoV-2019» в 1.5% агарозном геле.The invention is illustrated by the following graphic materials. FIG. 1 shows the amino acid sequences of two peptide immunogens. FIG. 2 shows the amino acid sequence of the chimeric protein "MBP-6xHis-N_nCoV-2019". FIG. 3 shows the nucleotide sequence of the gene for the chimeric protein "MBP-6xHis-N_nCoV-2019". FIG. 4 shows the genetic and physical map of the recombinant plasmid DNA "pMBP-6xHis-N_nCoV-2019". FIG. 5 shows an electrophoretogram of restriction analysis of the recombinant plasmid DNA "pMBP-6xHis-N_nCoV-2019" in 1.5% agarose gel.
Пример 1. Получение и структура пептидных иммуногенов.Example 1. Obtaining and structure of peptide immunogens.
При разработке вакцины, используя литературные данные о Т- и В-клеточных эпитопах белка S нового коронавируса SARS Cov-2, были спроектированы структуры 2 пептидов - аналогов иммуногенных Т и В-клеточных эпитопов белка S нового коронавируса SARS Cov-2, которые затем были синтезированы (фиг. 1). Последовательность этих синтетических пептидов, моделирующих функционально значимые участки белка S нового коронавируса SARS Cov-2, были спроектированы таким образом, чтобы исключить присутствие элементов, ответственных за развитие иммунопатологического состояния, но сохранить способность индуцировать образование защитных антител и обеспечить защиту организма от развития COVID-19. Синтетические пептиды имеют размер от 25 до 32 аминокислотных остатков и аналогичны Т и В-клеточным эпитопам белка S нового коронавируса SARS Cov-2.When developing a vaccine, using the literature data on the T- and B-cell epitopes of the S protein of the new SARS Cov-2 coronavirus, the structures of 2 peptides were designed - analogs of the immunogenic T and B-cell epitopes of the S protein of the new SARS Cov-2 coronavirus, which were then synthesized (Fig. 1). The sequence of these synthetic peptides, simulating functionally significant regions of the S protein of the novel SARS Cov-2 coronavirus, were designed in such a way as to exclude the presence of elements responsible for the development of an immunopathological condition, but retain the ability to induce the formation of protective antibodies and ensure the body's defense against the development of COVID-19. ... The synthetic peptides range in size from 25 to 32 amino acid residues and are similar to the T and B-cell epitopes of the S protein of the novel SARS Cov-2 coronavirus.
Синтез спроектированных аминокислотных последовательностей проводится с использованием стандартного оборудования и методик твердофазного пептидного синтеза и может быть проведен с использованием любых других методик синтеза аминокислотных последовательностей, например, таких как жидкофазный пептидный синтез, синтез с использованием генетически модифицированных микроорганизмов (технологии получения рекомбинантных белков), фрагментирование нативного белка с последующим выделением соответствующих фрагментов.The synthesis of the designed amino acid sequences is carried out using standard equipment and techniques of solid-phase peptide synthesis and can be carried out using any other methods for the synthesis of amino acid sequences, for example, such as liquid-phase peptide synthesis, synthesis using genetically modified microorganisms (technologies for producing recombinant proteins), fragmentation of native protein with subsequent isolation of the corresponding fragments.
Ниже приведены структуры синтезированных пептидов.Below are the structures of the synthesized peptides.
Первый пептид (п. 1): CRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGS (0454-0477), (SEQ ID NO: 1);First peptide (p. 1): CRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGS (0454-0477), (SEQ ID NO: 1);
Второй пептид (п. 2): CKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIK (1179-1209), (SEQ ID NO: 2);Second peptide (item 2): CKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIK (1179-1209), (SEQ ID NO: 2);
Пример 2. Получение химерного рекомбинантного белка-носителя.Example 2. Obtaining a chimeric recombinant carrier protein.
Белок-носитель является продуктом экспрессии гена химерного белка «MBP-6xHis-N_nCoV-2019» в прокариотической системе. Акцепторный плазмидный вектор pMBP-6xHis получен путем направленного клонирования в вектор рТ7 фрагмента гена MBP E.coli, амплифицированного из генома E. coli с использованием специфических олигонуклеотидных праймеров. Клонирование проведено по сайтам узнавания эндонуклеаз рестрикции NdeI-BamHI, где за счет обратного праймера в открытую рамку считывания МВР добавлена нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотный линкер, сайт протеолитического расщепления фактора Ха и 6xHis-метка, необходимая для проведения металл-хелатной аффинной хроматографии. Вектор рТ7 получен посредством направленного клонирования химически синтезированного фрагмента ДНК, кодирующего ген LacI, необходимого для контроля экспрессии за счет включения лактозного оператора LacO в транскрипционную кассету целевого гена, гена гор необходимого для контроля копийности плазмидной ДНК в бактериальной клетке, а также структурных элементов, обеспечивающих экспрессию целевого гена: модифицированного промотора бактериофага Т7 РТ7/O (Т. Giordano et al., 1989 г.), сайт связывания рибосом гена 10 бактериофага Т7 (Olins and Rangwala, 1989 г.) и терминатора транскрипции ДНК-зависимой РНК-полимеразы бактериофага Т7. Плазмидный вектор кодирует ген устойчивости к β-лактамным антибиотикам (β-лактамаза), а также ориджин репликации бактериофага F1.The carrier protein is a product of the expression of the gene for the chimeric protein "MBP-6xHis-N_nCoV-2019" in the prokaryotic system. The acceptor plasmid vector pMBP-6xHis was obtained by directional cloning into the pT7 vector of a fragment of the E. coli MBP gene amplified from the E. coli genome using specific oligonucleotide primers. Cloning was carried out at the recognition sites of restriction endonucleases NdeI-BamHI, where the reverse primer added a nucleotide sequence encoding an amino acid linker, a proteolytic cleavage site for factor Xa, and a 6xHis-tag required for metal chelate affinity chromatography into the MBP open reading frame. The pT7 vector was obtained by directional cloning of a chemically synthesized DNA fragment encoding the LacI gene, which is necessary for expression control due to the inclusion of the lactose operator LacO into the transcriptional cassette of the target gene, the gor gene required to control the copy number of plasmid DNA in a bacterial cell, as well as structural elements that provide expression target gene: modified promoter of bacteriophage T7 PT7 / O (T. Giordano et al., 1989), ribosome binding site of
Экспрессирующий вектор pMBP-6xHis-N_nCoV-2019 получен посредством направленного клонирования ампликона гена N_nCoV-2019 по сайтам узнавания эндонуклеаз рестрикции BamHI и SaiI. Открытая рамка считывания гена химерного белка «MBP-6xHis-N_nCoV-2019» представлена лидирующей последовательностью мальтоза-связывающего белка MBP E. coli, аминокислотного линкера, сайта протеолитического расщепления фактора Ха, 6xHis-метки для проведения металл-хелатной аффинной хроматографии, и последовательностью гена N коронавируса SARS-CoV-2 (nCoV-2019). Нуклеотидная последовательность гена химерного белка «MBP-6xHis-N_nCoV-2019» представлена на фиг. 3, а на фиг. 2 - аминокислотная последовательность химерного белка «MBP-6xHis-N_nCoV-2019». Нуклеотидная вставка в вектор pMBP-6xHis осуществлена таким образом, что ген «MBP-6xHis-N_nCoV-2019» находится под контролем модифицированного промотора бактериофага Т7 РТ7/О, старт-кодон (ATG) расположен на оптимальном расстоянии от сайта связывания рибосом гена 10 бактериофага Т7. Дополнительный лактозный оператор (LacO) позволяет контролировать уровень экспрессии целевого гена при коэкспрессии LacI. Для идентификации клонируемой последовательности используется метод определения первичной последовательности ДНК на автоматическом секвенаторе. Клонируемый фрагмент ДНК фланкирован сайтами рестрикции - BamHI-SalI. Клонируемый фрагмент ДНК содержит открытую рамку считывания гена N коронавируса SARS-CoV-2 (nCoV-2019). Положение клонируемого гена внутри кассеты, а также положение регуляторных элементов отображено на фиг. 4 - физической и генетической карте рекомбинантной плазмидной ДНК «pMBP-6xHis-N_nCoV-2019». Способ введения конструкции в прокариотической системе - трансформация клеток Escherichia coli плазмидой. Селективный маркер - ген устойчивости к β-лактамным антибиотикам (β-лактамаза).The expression vector pMBP-6xHis-N_nCoV-2019 was obtained by directional cloning of the N_nCoV-2019 gene amplicon at the recognition sites of restriction endonucleases BamHI and SaiI. The open reading frame of the gene for the chimeric protein "MBP-6xHis-N_nCoV-2019" is represented by the leading sequence of the E. coli MBP maltose-binding protein, amino acid linker, factor Xa proteolytic cleavage site, 6xHis-tag for metal chelate affinity chromatography, and the gene sequence N coronavirus SARS-CoV-2 (nCoV-2019). The nucleotide sequence of the MBP-6xHis-N_nCoV-2019 chimeric protein gene is shown in FIG. 3, and in FIG. 2 - amino acid sequence of the chimeric protein "MBP-6xHis-N_nCoV-2019". The nucleotide insertion into the vector pMBP-6xHis is carried out in such a way that the MBP-6xHis-N_nCoV-2019 gene is under the control of the modified promoter of the bacteriophage T7 PT7 / O, the start codon (ATG) is located at an optimal distance from the ribosome binding site of
Основные генетические элементы, содержащиеся в структуре плазмидной ДНК:The main genetic elements contained in the structure of plasmid DNA:
РТ7/O promoter - модифицированный промотор бактериофага Т7 РТ7/O (21-64 п.н.)PT7 / O promoter - modified promoter of bacteriophage T7 PT7 / O (21-64 bp)
Lac operator - лактозный оператор (40-64 п.н.)Lac operator - lactose operator (40-64 bp)
RBS [bacteriophage Т7 gene 10] - сайта связывания рибосом гена 10 бактериофага Т7 (79-101 п.н.)RBS [bacteriophage T7 gene 10] - ribosome binding site of
МВР - мальтоза-связывающий белок МВР Е. coli (109-1209 п.н.)MBP - maltose-binding protein MBP E. coli (109-1209 bp)
Factor Ха site - сайт протеолитического расщепления фактора Ха (1258-1269 п.н.)Factor Xa site - site of proteolytic cleavage of factor Xa (1258-1269 bp)
6xHis - 6-гистидиновая аффинная метка (1282-1299 п.н.)6xHis - 6-histidine affinity tag (1282-1299 bp)
N - последовательность гена N коронавируса SARS-CoV-2 (nCoV-2019) (1309-2562 п.н.)N - gene sequence N of coronavirus SARS-CoV-2 (nCoV-2019) (1309-2562 bp)
Т7 terminator - терминатор транскрипции ДНК-зависимой РНК-полимеразы бактериофага Т7 (2653-2700 п.н.)T7 terminator - transcription terminator for DNA-dependent RNA polymerase of bacteriophage T7 (2653-2700 bp)
Ori - ориджин репликации pBR322/pUC (4355-4943 п.н.)Ori - origin of replication pBR322 / pUC (4355-4943 bp)
AmpR - ген β-лактамазы (устойчивость к ампициллину) (3324-4184 п.н.)AmpR - β-lactamase gene (ampicillin resistance) (3324-4184 bp)
LacI - ген репрессора LacI (6376-7455 п.н.)LacI - repressor gene LacI (6376-7455 bp)
Карта (электрофореграмма) рестрикционного анализа рекомбинантной плазмидной ДНК «pMBP-6xHis-N_nCoV-2019» в 1.5% агарозном геле с использованием эндонуклеаз рестрикции XbaI, BglII, XhoI, HindIII, NcoI, AvaII представлена на фиг. 5.A map (electrophoretogram) of restriction analysis of the recombinant plasmid DNA "pMBP-6xHis-N_nCoV-2019" in 1.5% agarose gel using restriction endonucleases XbaI, BglII, XhoI, HindIII, NcoI, AvaII is shown in Fig. five.
Фрагменты ДНК, полученные после гидролиза рекомбинантной плазмиды «pMBP-6xHis-N_nCoV-2019» эндонуклеазами рестрикции XbaI, BglII, XhoI, HindIII, NcoI, AvaII (1-6 трек, соответственно).DNA fragments obtained after hydrolysis of the recombinant plasmid "pMBP-6xHis-N_nCoV-2019" with restriction endonucleases XbaI, BglII, XhoI, HindIII, NcoI, AvaII (track 1-6, respectively).
Ниже представлены расчетные длины фрагментов ДНК, образующихся после гидролиза соответствующими эндонуклеазами рестрикции:Below are the calculated lengths of DNA fragments formed after hydrolysis with the corresponding restriction endonucleases:
1: pMBP-6xHis-N_nCoV-20191: pMBP-6xHis-N_nCoV-2019
XbaIXbaI
1. 7825 bp1.7825 bp
2: pMBP-6xHis-N_nCoV-20192: pMBP-6xHis-N_nCoV-2019
BglIIBglII
1. 6685 bp1.6685 bp
2. 1140 bp2.1140 bp
3: pMBP-6xHis-N_nCoV-20193: pMBP-6xHis-N_nCoV-2019
XhoIXhoI
1. 7825 bp1.7825 bp
4: pMBP-6xHis-N_nCoV-20194: pMBP-6xHis-N_nCoV-2019
HindIIIHindIII
1. 7825 bp1.7825 bp
5: pMBP-6xHis-N_nCoV-20195: pMBP-6xHis-N_nCoV-2019
NcoINcoI
1. 7825 bp1.7825 bp
6: pMBP-6xHis-N_nCoV-20196: pMBP-6xHis-N_nCoV-2019
AvaIIAvaII
1. 2082 bp1.2082 bp
2. 1746 bp2.1746 bp
3. 1584 bp3.1584 bp
4. 777 bp4.777 bp
5. 509 bp5.509 bp
6. 376 bp6.376 bp
7. 279 bp7.279 bp
8. 222 bp8.222 bp
9. 91 bp9.91 bp
10. 88 bp10.88 bp
11. 42 bp11.42 bp
12. 29 bp12.29 bp
Далее рекомбинантный химерный белок-носитель MBP-6xHis-N_nCoV-2019, нарабатывают в прокариотической системе, биомассу осаждают центрифугированием, ресуспендируют в буфере 50 мМ NaH2PO4, 300 мМ NaCl, 10 мМ имидазол, 0.5 мг/мл лизоцим, рН 8.0 и охлаждают до 2-5°С. Биомассу, полученную с 10 литров питательной среды ресуспендируют в 300 мл буфера. Затем клетки разрушают в ультразвуковом дезинтеграторе до полного осветления суспензии при температуре не выше 40°С. Полученный лизат охлаждают до 2-5°С, центрифугируют при 12000 об/мин в течение 20 минут. К супернатанту добавляют насыщенный раствор сульфата аммония в соотношении 1:1 по объему и перемешивают взбалтыванием, после чего охлаждают при 4-8°С в течении 5-6 часов. Осадок отделяют центрифугированием при 12000 об/мин в течении 20 минут(температура 10°С), который затем растворяют в буфере: 50 мМ NaH2PO4, 300 мМ NaCl, 10 мМ имидазол, рН 8.0 и охлаждают при 4-8°С в течение 1 часа. Объем буфера рассчитывается как половина объема лизата. Полученный раствор центрифугируют при 12000 об/мин в течение 20 минут при температуре 10°С. Супернатант хранят при температуре 4-8°С в течение 5 дней и используют для аффинной хроматографии.Next, the recombinant chimeric carrier protein MBP-6xHis-N_nCoV-2019 is produced in the prokaryotic system, the biomass is precipitated by centrifugation, resuspended in a buffer of 50 mM NaH 2 PO 4 , 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, 0.5 mg / ml lysozyme, pH 8.0 and cooled to 2-5 ° C. The biomass obtained from 10 liters of the culture medium is resuspended in 300 ml of buffer. Then the cells are destroyed in an ultrasonic disintegrator until the suspension is completely clarified at a temperature not exceeding 40 ° C. The resulting lysate is cooled to 2-5 ° C, centrifuged at 12000 rpm for 20 minutes. A saturated solution of ammonium sulfate is added to the supernatant in a ratio of 1: 1 by volume and stirred by vortexing, and then cooled at 4-8 ° C for 5-6 hours. The precipitate is separated by centrifugation at 12000 rpm for 20 minutes (
Для аффинной хроматографии используют сорбент Ni-NTA-Superflow (QIAGEN) или его аналоги. Количество сорбента берется из расчета 100 мл на 1 грамм ожидаемого количества целевого белка. Используется колонка среднего давления с высотой столба не выше 30 см. Сорбент дегазируется, наносится в колонку и уравновешивается буфером: 50 мМ NaH2PO4, 300 мМ NaCl, 10 мМ имидазол, рН 8.0. Осветленный центрифугированием супернатант лизата клеток пропускают через колонку со скоростью 2,5-4 мл/мин. Колонку промывают 5-кратным объемом буфера: 50 мМ NaH2PO4, 300 мМ NaCl, 20 мМ имидазол, рН 8.0, затем 40-кратным объемом буфера: 50 мМ NaH2PO4, 300 мМ NaCl, 30 мМ имидазол, рН 8.0. Элюцию целевого белка проводят буфером: 50 мМ NaH2PO4, 300 мМ NaCl, 300 мМ имидазол, рН 8.0. Элюцию контролируют по оптической плотности на длине волны 280 нм. Собирают одну фракцию первого пика, которую можно хранить до 5 дней при температуре 4-8°С. Полученная фракция содержит целевой продукт - химерный рекомбинантный белок-носитель MBP-6xHis-N_nCoV-2019. Расчетная молекулярная масса химерного рекомбинантного белка-носителя MBP-6xHis-N_nCoV-2019 составляет 89,2 кДа.For affinity chromatography, a Ni-NTA-Superflow sorbent (QIAGEN) or its analogs is used. The amount of sorbent is taken at the rate of 100 ml per 1 gram of the expected amount of the target protein. A medium-pressure column with a column height not higher than 30 cm is used. The sorbent is degassed, applied to the column and equilibrated with a buffer: 50 mM NaH 2 PO 4 , 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0. The cell lysate supernatant clarified by centrifugation is passed through the column at a rate of 2.5-4 ml / min. The column is washed with a 5-fold volume of buffer: 50 mM NaH 2 PO 4 , 300 mM NaCl, 20 mM imidazole, pH 8.0, then with a 40-fold volume of buffer: 50 mM NaH 2 PO 4 , 300 mM NaCl, 30 mM imidazole, pH 8.0 ... Elution of the target protein is carried out with a buffer: 50 mM NaH 2 PO 4 , 300 mM NaCl, 300 mM imidazole, pH 8.0. Elution is monitored by optical density at a wavelength of 280 nm. Collect one fraction of the first peak, which can be stored for up to 5 days at 4-8 ° C. The resulting fraction contains the target product - the chimeric recombinant protein carrier MBP-6xHis-N_nCoV-2019. The calculated molecular weight of the chimeric recombinant protein carrier MBP-6xHis-N_nCoV-2019 is 89.2 kDa.
Поскольку химерный белок-носитель содержит Т-клеточные эпитопы SARS-CoV-2, то он не только повышает стабильность пептидных иммуногенов и участвует в формировании выраженного иммунного ответа, но и стимулирует специфический клеточный иммунный ответ.Since the chimeric carrier protein contains T-cell epitopes of SARS-CoV-2, it not only increases the stability of peptide immunogens and participates in the formation of a pronounced immune response, but also stimulates a specific cellular immune response.
Пример 3. Получение конъюгатов пептидных иммуногенов и белка-носителя, а также вакцинной композиции.Example 3. Obtaining conjugates of peptide immunogens and a carrier protein, as well as a vaccine composition.
После синтеза пептидных иммуногенов осуществляют их конъюгирование с белком-носителем для повышения стабильности и формирования выраженного иммунного ответа.After the synthesis of peptide immunogens, they are conjugated with a carrier protein to increase stability and form a pronounced immune response.
В качестве белка-носителя в вариантах вакцины был использован рекомбинантный химерный белок, содержащий аминокислотную последовательность нуклеопротеина N нового коронавируса SARS-CoV-2, полученный по примеру 2. Кроме того, в качестве белков-носителей могут быть использованы такие белки как БСА (бычий сывороточный альбумин), KLH (keyhole limpet hemocyanin) - гемоцианин, овальбумин (альбумин яичного белка) или другие рекомбинантные белки.A recombinant chimeric protein containing the amino acid sequence of nucleoprotein N of the novel coronavirus SARS-CoV-2 obtained in Example 2 was used as a carrier protein in vaccine variants. In addition, proteins such as BSA (bovine whey) can be used as carrier proteins. albumin), KLH (keyhole limpet hemocyanin) - hemocyanin, ovalbumin (egg white albumin) or other recombinant proteins.
Ковалентная связь между белком-носителем и пептидным иммуногеном может быть создана с использованием различных конъюгирующих агентов, например, таких как ГА (глутаровый альдегид), SMCC (Succinimidyl-4-(N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate), Sulfo-SMCC (Sulfosuccinimidyl-4-(N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate), EDC (1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide), и многие другие.A covalent bond between a carrier protein and a peptide immunogen can be created using various conjugating agents such as GA (glutaraldehyde), SMCC (Succinimidyl-4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate), Sulfo-SMCC ( Sulfosuccinimidyl-4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate), EDC (1-Ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide), and many others.
Конъюгирование пептида с белком-носителем с помощью конъюгирующего агента Sulfo-SMCC проводят следующим образом: 20 мг белка-носителя растворяют в 2 мл дистиллированной воды. Непосредственно перед использованием готовят раствор Sulfo-SMCC с концентрацией 5 мг/мл. Добавляют 2 мл раствора Sulfo-SMCC. Инкубируют при комнатной температуре в течение 60 минут, или при температуре 37°С в течение 30 минут, периодически осторожно перемешивают. Для удаления избытка Sulfo-SMCC колонку 50 мл со смолой Sepharose CL4B уравновешивают 0,01М фосфатно-солевым буферным раствором. Наносят на колонку активированный белок-носитель и собирают первый пик, при этом используют для детекции длину волны 280 нм.The conjugation of the peptide to the carrier protein using the Sulfo-SMCC conjugating agent is carried out as follows: 20 mg of the carrier protein is dissolved in 2 ml of distilled water. Prepare a 5 mg / ml Sulfo-SMCC solution immediately prior to use. Add 2 ml of Sulfo-SMCC solution. Incubate at room temperature for 60 minutes, or at 37 ° C for 30 minutes, gently stir occasionally. To remove excess Sulfo-SMCC, a 50 ml column of Sepharose CL4B resin is equilibrated with 0.01M phosphate buffered saline. The activated carrier protein is loaded onto the column and the first peak is collected using a wavelength of 280 nm for detection.
Далее 20 мг пептида растворяют в 5 мл 0,01 М фосфатно-солевом буферном растворе. Немедленно смешивают пептид и активированный белок-носитель и инкубируют 2 часа при комнатной температуре. Для удаления избытка пептида колонку 50 мл с сорбентом Sepharose CL4B уравновешивают 0,01 М фосфатно-солевым буферным раствором. Наносят на колонку конъюгат пептида с белком-носителем и собирают первый пик, при этом используют для детекции длину волны 280 нм.Next, 20 mg of the peptide is dissolved in 5 ml of 0.01 M phosphate-buffered saline solution. Immediately mix the peptide and the activated carrier protein and incubate for 2 hours at room temperature. To remove excess peptide, a 50 ml column with Sepharose CL4B sorbent is equilibrated with 0.01 M phosphate buffered saline. The peptide-carrier protein conjugate is applied to the column and the first peak is collected using a wavelength of 280 nm for detection.
Для увеличения иммунного ответа используют адъювант. Существует множество известных адъювантов, включая адъювант Фрейнда (CFA or FCA), суспензии гидроксида алюминия, адъювант MF59 и др.An adjuvant is used to increase the immune response. There are many known adjuvants, including Freund's adjuvant (CFA or FCA), aluminum hydroxide suspensions, MF59 adjuvant, and others.
Полученные конъюгаты пептида и белка-носителя сорбируют на гидроксиде алюминия для получения готовой лекарственной формы в конечной концентрации (100-1000) мкг пептида в 1,0 мл препарата.The resulting conjugates of the peptide and the carrier protein are sorbed on aluminum hydroxide to obtain a finished dosage form in a final concentration (100-1000) μg of peptide in 1.0 ml of the preparation.
В качестве примера приведен следующий состав вакцинной композиции.As an example, the following composition of the vaccine composition is given.
Вакцинная композиция: смесь пептидных иммуногенов, имеющих аминокислотные последовательности (SEQ ID NO: 1) и (SEQ ID NO: 2) соответственно и ковалентно связанных в виде конъюгатов с химерным рекомбинантным белком-носителем MBP-6xHis-N_nCoV-2019, взятых в равных соотношениях и сорбированных на фармацевтически приемлемый адъювант гидроокись алюминия в количестве 1,0 мг/мл.Vaccine composition: a mixture of peptide immunogens having amino acid sequences (SEQ ID NO: 1) and (SEQ ID NO: 2), respectively, and covalently linked as conjugates with the chimeric recombinant protein carrier MBP-6xHis-N_nCoV-2019, taken in equal proportions and sorbed on a pharmaceutically acceptable adjuvant aluminum hydroxide in the amount of 1.0 mg / ml.
Пример 4. Исследование иммуногенности пептидных иммуногенов на кроликах.Example 4. Study of the immunogenicity of peptide immunogens in rabbits.
Для получения иммунных сывороток используют лабораторных животных - кроликов породы Шиншилла с массой тела 2000-3000 г. Предварительно перед иммунизацией у кроликов берут пробу крови в объеме 1,0 мл из краевой вены уха и выделяют сыворотку для дальнейшего иммуноферментного анализа. Температура хранения сыворотки от минус 15°С до минус 25°С.To obtain immune sera, laboratory animals are used - Chinchilla rabbits weighing 2000-3000 g. Before immunization, a blood sample in a volume of 1.0 ml is taken from rabbits from the marginal ear vein and serum is isolated for further enzyme immunoassay. Serum storage temperature is from minus 15 ° С to minus 25 ° С.
Каждый из 2 пептидов конъюгируют с белком-носителем гемоцианином и в смеси с неполным адьювантом Фрейнда двукратно с интервалом 7 дней подкожно вводят кроликам. Через 7 суток после второй иммунизации у кроликов берут пробу крови в объеме 1,0 мл из краевой вены уха. Из крови выделяют сыворотку для проведения иммуноферментного анализа. Сыворотки крови кроликов хранят при температуре от минус 15°С до минус 25°С.Each of the 2 peptides is conjugated to a carrier protein hemocyanin and, in a mixture with Freund's incomplete adjuvant, is injected subcutaneously into rabbits twice with an interval of 7 days. 7 days after the second immunization in rabbits take a blood sample in a volume of 1.0 ml from the marginal ear vein. Serum is isolated from the blood for enzyme immunoassay. Rabbit blood sera are stored at temperatures from minus 15 ° C to minus 25 ° C.
Результаты определения титров специфических антител в сыворотках иммунных кроликов к соответствующим пептидам и к рекомбинантному белку S представлены в Таблице 1.The results of determining the titers of specific antibodies in the sera of immune rabbits to the corresponding peptides and to the recombinant protein S are presented in Table 1.
Иммуноферментный анализ для определения титра антител к соответствующим антигенам проводят следующим образом:An enzyme immunoassay to determine the titer of antibodies to the corresponding antigens is carried out as follows:
В 96-ти луночный планшет вносят сорбционный буфер по 150 мкл в лунку. В качестве сорбционного буфера использовать 0,05 М карбонат-бикарбонатный буфер (рН 9,5-9,7) с добавлением соответствующего антигена с концентрацией 1 мкг/мл. Инкубируют 16 часов при комнатной температуре.Sorption buffer is added to a 96-well plate, 150 μl per well. Use 0.05 M carbonate-bicarbonate buffer (pH 9.5-9.7) as a sorption buffer with the addition of the corresponding antigen at a concentration of 1 μg / ml. Incubated for 16 hours at room temperature.
Перед нанесением испытуемых образцов сыворотки промывают иммуносорбент 0,01 М ФСБ-Т (рН 7,3-7,5). Вносят в планшет по 100 мкл разводящего буферного раствора для образца и в ряд «А» вносят образцы сывороток по 100 мкл и титруют с шагом 2. Инкубируют в термошейкере при температуре (37±2)°С, 700 об/мин в течение 45 минут.Before applying the test serum samples, the immunosorbent is washed with 0.01 M PBS-T (pH 7.3-7.5). Add 100 μl of diluting buffer solution for the sample to the plate and add serum samples of 100 μl to row "A" and titrate with
По окончании инкубации содержимое лунок удаляют с помощью вошера и промывают 0,01 М ФСБ-Т. Вносят во все лунки по 100 мкл антивидового конъюгата и инкубируют в термошейкере при температуре (37±2)°С, 700 об/мин в течение 30 минут. По окончании инкубации содержимое лунок удаляют с помощью вошера и промывают 0,01 М ФСБ-Т. Вносят во все лунки по 100 мкл хромогенного субстрата (ТМБ) для окрашивания образовавшихся специфических АГ-АТ комплексов.At the end of the incubation, the contents of the wells are removed using a washer and washed with 0.01 M PBS-T. Add to all wells 100 μl of anti-species conjugate and incubate in a thermal shaker at a temperature of (37 ± 2) ° С, 700 rpm for 30 minutes. At the end of the incubation, the contents of the wells are removed using a washer and washed with 0.01 M PBS-T. Add to all wells 100 μl of chromogenic substrate (TMB) for staining the formed specific AG-AT complexes.
Инкубируют в темноте при комнатной температуре (24±5)°С в течение 20 минут. Вносят во все лунки по 50 мкл СТОП-реагента для прекращения реакции. Результаты ИФА регистрируют с помощью микропланшетного ридера, измеряя оптическую плотность (ОП) на длине волны 450 нм.Incubate in the dark at room temperature (24 ± 5) ° C for 20 minutes. Add 50 μl of STOP reagent to all wells to stop the reaction. ELISA results are recorded using a microplate reader, measuring optical density (OD) at a wavelength of 450 nm.
Титром антител считается максимальное разведение исследуемой сыворотки, при котором оптическая плотность раствора превышает ОПкрит.The antibody titer is the maximum dilution of the test serum, at which the optical density of the solution exceeds the OD crit .
Таким образом, двукратная иммунизация кроликов пептидными иммуногенами индуцирует у кроликов выработку антител к пептидным иммуногенам в диапазоне СГТ от 1:40637 до 1:162550 и к рекомбинантному белку S коронавируса SARS-CoV-2 (nCoV-2019) в диапазоне СГТ от 1:20319 до 1:32254.Thus, double immunization of rabbits with peptide immunogens induces in rabbits the production of antibodies to peptide immunogens in the range of CGT from 1: 40637 to 1: 162550 and to the recombinant protein S of the coronavirus SARS-CoV-2 (nCoV-2019) in the range of CGT from 1: 20319 up to 1: 32254.
Пример 5. Исследование иммуногенности пептидных иммуногенов и вакцинной композиции на мышах.Example 5. Study of the immunogenicity of peptide immunogens and vaccine compositions in mice.
Для получения иммунных сывороток используют лабораторных животных - мышей ICR с массой тела 14-16 г. Предварительно перед иммунизацией у мышей берут пробу крови в объеме 100 мкл из ретроорбитального синуса и выделяют сыворотку для дальнейшего иммуноферментного анализа. Температура хранения сыворотки от минус 15°С до минус 25°С.To obtain immune sera, laboratory animals are used - ICR mice with a body weight of 14-16 g. Before immunization, a blood sample in a volume of 100 μl is taken from the retroorbital sinus from the mice, and the serum is isolated for further enzyme-linked immunosorbent assay. Serum storage temperature is from minus 15 ° С to minus 25 ° С.
Каждый из 2 пептидов, конъюгируют с химерным рекомбинантным белком-носителем MBP-6xHis-N_nCoV-2019 по п. 3. Готовят вакцинную композицию, смешивая пептидные иммуногены в равных количествах в соответствии с п. 4 формулы изобретения. Пептидные иммуногены и вакцинную композицию сорбируют на адьювант гидроокись алюминия. Вакцинируют мышей подкожно двукратно с интервалом 14 дней. Через 14 дней после второй вакцинации из ретроорбитального синуса отбирают кровь в объеме 100 мкл. Из крови выделяют сыворотку для проведения иммуноферментного анализа. Сыворотки крови мышей хранят при температуре от минус 15°С до минус 25°С.Each of the 2 peptides is conjugated to the chimeric recombinant protein carrier MBP-6xHis-N_nCoV-2019 according to
Результаты определения титров специфических антител в сыворотках иммунных мышей к соответствующим пептидным иммуногенам, вакцинной композиции и к рекомбинантному белку S коронавируса представлены в Таблице 2.The results of determining the titers of specific antibodies in the sera of immune mice to the corresponding peptide immunogens, vaccine composition and to the recombinant protein S of the coronavirus are presented in Table 2.
Иммуноферментный анализ для определения титра к соответствующим антигенам проводят аналогично тому, как описано в примере 4.An enzyme-linked immunosorbent assay to determine the titer to the corresponding antigens is performed in the same way as described in example 4.
Таким образом, двукратная иммунизация мышей пептидными иммуногенами и их вакцинными композициями индуцировало у мышей выработку антител к пептидным иммуногенам в диапазоне СГТ от 1:7352 до 1:9701 и к рекомбинантному белку S коронавируса SARS-CoV-2 (nCoV-2019) в диапазоне СГТ от 1:24251 до 1:3676.Thus, double immunization of mice with peptide immunogens and their vaccine compositions induced in mice the production of antibodies to peptide immunogens in the SHT range from 1: 7352 to 1: 9701 and to the recombinant protein S of the SARS-CoV-2 coronavirus (nCoV-2019) in the SHT range from 1: 24251 to 1: 3676.
Пример 6. Протективность вакцинной композиции на основе пептидных иммуногенов на хомяках.Example 6. Protectiveness of a vaccine composition based on peptide immunogens in hamsters.
Исследования протективности вакцинных композиций пептидных иммуногенов проводили после 2-кратной внутримышечной иммунизации хомяков с интервалом 14 суток дозой 200,0 мкг. На 28-е сутки после первой вакцинации хомяки были интраназально заражены новым коронавирусом SARS-CoV-2 штамм nCov/Victoria/1/2020 в дозе 102 ФОЕ. На 2-е, 4-е, 6-е и 8-е сутки после заражения у животных брались носовые смывы, в ОТ-ПЦР определялась вирусная нагрузка. На 8-е сутки животных подвергали эвтаназии, извлекали легкие и вычисляли отношение (индекс) массы легких и массы тела. В таблице 3 приведены результаты измерения.Studies of the protection of vaccine compositions of peptide immunogens were carried out after 2-fold intramuscular immunization of hamsters with a dose of 200.0 μg every 14 days. On the 28th day after the first vaccination, the hamsters were intranasally infected with the new coronavirus SARS-CoV-2 strain nCov / Victoria / 1/2020 at a dose of 10 2 FRU. On the 2nd, 4th, 6th and 8th days after infection, nasal washes were taken from the animals, and the viral load was determined by RT-PCR. On the 8th day, the animals were euthanized, the lungs were removed, and the ratio (index) of lung mass and body weight was calculated. Table 3 shows the measurement results.
При гистологическом исследовании легких хомяков на 8-е сутки после заражения тяжелые патологические изменения наблюдались в плацебо группе животных, где обнаруживалась полная потеря эпителиальной выстилки мелких бронхов и бронхиол, очаги некротизации, плазматическое пропитывание стенок сосудов, значительные по площади зоны ателектаза. Гораздо меньшая степень проявления инфекции наблюдалась у вакцинированных животных, где явления отека и воспалительно-клеточной инфильтрации были локальными, дистрофические изменения эпителия мелких бронхов и кровеносных сосудов микроциркуляторного русла отмечались на относительно небольших участках легочной паренхимы.In a histological study of the lungs of hamsters on the 8th day after infection, severe pathological changes were observed in the placebo group of animals, where there was a complete loss of the epithelial lining of small bronchi and bronchioles, foci of necrotization, plasma impregnation of the vessel walls, significant in the area of the atelectasis zone. A much lesser degree of manifestation of infection was observed in vaccinated animals, where the phenomena of edema and inflammatory cell infiltration were local, dystrophic changes in the epithelium of small bronchi and blood vessels of the microvasculature were observed in relatively small areas of the pulmonary parenchyma.
Таким образом, двукратное с интервалом 14 суток введение вакцинных композиций пептидных иммуногенов индуцировало у хомяков выработку антител к антигенам вакцины и цельновирионному антигену коронавируса, статистически значимо снижает индекс массы легкие/тело и обеспечивает защиту животных от развития пневмонии после интраназального заражения коронавирусом SARS-CoV-2.Thus, the administration of vaccine compositions of peptide immunogens twice with an interval of 14 days induced in hamsters the production of antibodies to vaccine antigens and the whole virion antigen of the coronavirus, statistically significantly reduces the lung / body mass index and protects animals from the development of pneumonia after intranasal infection with SARS-CoV-2 coronavirus. ...
Пример 7. Протективность вакцинной композиции на основе пептидных иммуногенов на хорьках.Example 7. Protectiveness of a vaccine composition based on peptide immunogens in ferrets.
Исследования протективности комбинаций пептидных иммуногенов проводили после 2-кратной внутримышечной иммунизации хорьков с интервалом 14 суток дозой 200,0 мкг. На 28-е сутки после первой вакцинации хорьки были интраназально заражены новым коронавирусом SARS-CoV-2 штамм nCov/Victoria/1/2020 в дозе 103 ФОБ. На 2-е, 4-е, 6-е и 8-е сутки после заражения у животных брались носовые смывы, в ОТ-ПЦР определялась вирусная нагрузка. На 8-е сутки животных подвергали эвтаназии, извлекали легкие и вычисляли отношение (индекс) массы легких и массы тела. В таблице 4 приведены результаты измеренияStudies of the protectiveness of combinations of peptide immunogens were carried out after 2-fold intramuscular immunization of ferrets with a dose of 200.0 μg every 14 days. On the 28th day after the first vaccination, the ferrets were intranasally infected with the new coronavirus SARS-CoV-2 strain nCov / Victoria / 1/2020 at a dose of 10 3 FOB. On the 2nd, 4th, 6th and 8th days after infection, nasal washes were taken from the animals, and the viral load was determined by RT-PCR. On the 8th day, the animals were euthanized, the lungs were removed, and the ratio (index) of lung mass and body weight was calculated. Table 4 shows the measurement results
Таким образом, при изучении протективных свойств вакцинной композиции на основе пептидных иммуногенов на хорьках было установлено снижение более чем в 100 раз вирусной нагрузки в группах вакцинированных животных по сравнению с группой плацебо на 6-е сутки после заражения. Вирус элиминировался из верхних дыхательных путей на 4 сут раньше, чем в плацебо группе. Статистически значимо снижает индекс массы легкие/тело, что указывает на защиту легких от тяжелой воспалительной реакции.Thus, when studying the protective properties of the vaccine composition based on peptide immunogens in ferrets, a more than 100-fold decrease in the viral load in the groups of vaccinated animals compared with the placebo group on the 6th day after infection was found. The virus was eliminated from the upper
Источники научно-технической и патентной информацииSources of scientific, technical and patent information
1. Tyrrell D.A.J., Bynoe М.А. Cultivation of novel type of commoncold virus in organ culture. Br. Med. J. - 1965. - №1. - P. 1467-1470.1. Tyrrell D.A.J., Bynoe M.A. Cultivation of novel type of commoncold virus in organ culture. Br. Med. J. - 1965. - No. 1. - P. 1467-1470.
2. Вирусология под редакцией Филдса Б. и Найпа Д. М: Мир, 1989, том 3.2. Virology, edited by Fields B. and Knipe D. M: Mir, 1989,
3. Tyrrell D.A.J., Almeida I.D. Direct electron microscopy of organ cultures for the detection and characterization of viruses // Arch. Gesamte Virus forsch. - 1967. - №22. - P. 417-425.3. Tyrrell D.A.J., Almeida I.D. Direct electron microscopy of organ cultures for the detection and characterization of viruses // Arch. Gesamte Virus forsch. - 1967. - No. 22. - P. 417-425.
4. Siddell S.G., Wege H., ter Meulen V. The biology of coronaviruses // J Gen. Virol. - 1983. - №63. - P. 761-776.4. Siddell S.G., Wege H., ter Meulen V. The biology of coronaviruses // J Gen. Virol. - 1983. - No. 63. - P. 761-776.
5. Sturman L.S., Holmes K.V. The molecular biology of coronaviruses // Adv. Virus Res. №28. - P. 35-112.5. Sturman L.S., Holmes K.V. The molecular biology of coronaviruses // Adv. Virus Res. No. 28. - P. 35-112.
6. Coronavirus never before seen in humans is the cause SARS. 2003. Сайт ВОЗ. http://www.who.int/mediacentre/releases/2003/pr31/en/print.html.6. Coronavirus never before seen in humans is the cause of SARS. 2003. WHO website. http://www.who.int/mediacentre/releases/2003/pr31/en/print.html.
7. Enserink M. SARS: chronology of the epidemic, (англ.) // Science (New York, N.Y.). - 2013. - 15 March (vol. 339, no. 6125). - P. 1266-1271. - doi:10.1126/science.339.6125.1266.7. Enserink M. SARS: chronology of the epidemic, (English) // Science (New York, N.Y.). - 2013 .-- 15 March (vol. 339, no. 6125). - P. 1266-1271. - doi: 10.1126 / science.339.6125.1266.
8. Huang C., Wang Y., Li X. Clinical features of patients infected with 2019 novel coronavirus in Wuhan, China // Lancet. - 2020. - Feb 15;395(10223):497-506. doi: 10.1016/S0140-6736(20)30183-5.8. Huang C., Wang Y., Li X. Clinical features of patients infected with 2019 novel coronavirus in Wuhan, China // Lancet. - 2020. - Feb 15; 395 (10223): 497-506. doi: 10.1016 / S0140-6736 (20) 30183-5.
9. Peiris J.S.M, Guan Y., Yuen K.Y. Severe acute respiratory syndrome // Nat Med. - 2004; 10(suppl 12):S88-S97. DOI: 10,1038 / nml 143.9. Peiris J.S.M, Guan Y., Yuen K.Y. Severe acute respiratory syndrome // Nat Med. - 2004; 10 (suppl 12): S88-S97. Doi: 10.1038 / nml 143.
10. CDC, 2019 Novel Coronavirus, Wuhan, China. CDC. Available at https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/abaut/index.html.; Accessed: January 27, 2020.10.CDC, 2019 Novel Coronavirus, Wuhan, China. CDC. Available at https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/abaut/index.html .; Accessed: January 27, 2020.
11. Hui D.S.I., Azhar E., Madani T.A., Ntoumi F., Kock R., Dar O., et al. The Continuing 2019-nCoV epidemic threat of novel coronaviruses to global health-The latest 2019 novel coronavirus outbreak in Wuhan, China // Int. J. Infect. Dis. - 2020 Jan 14.91:264-266.11. Hui D. S. I., Azhar E., Madani T. A., Ntoumi F., Kock R., Dar O., et al. The Continuing 2019-nCoV epidemic threat of novel coronaviruses to global health-The latest 2019 novel coronavirus outbreak in Wuhan, China // Int. J. Infect. Dis. - 2020 Jan 14.91: 264-266.
12. Larson H.E., Reed S.E., Tyrrell D.A.J. Isolation of rhinoviruses and coronaviruses from 38 coldsin adults // J. Med. Virol. - 1980. - №5. - P. 221-229.12. Larson H.E., Reed S.E., Tyrrell D.A.J. Isolation of rhinoviruses and coronaviruses from 38 coldsin adults // J. Med. Virol. - 1980. - No. 5. - P. 221-229.
13. Yin Y., Wunderink R.G. MERS, SARS and other coronaviruses as causes ofpneumonia//Respirology. - 2018 Feb; 23(2):130-137. doi: 10.1111/resp. 13196. Epub 2017 Oct 20.13. Yin Y., Wunderink R.G. MERS, SARS and other coronaviruses as causes ofpneumonia // Respirology. - 2018 Feb; 23 (2): 130-137. doi: 10.1111 / resp. 13196. Epub 2017 Oct 20.
14. Wege H., Siddell S., ter Meulen V. The biology and pathogenesis of coronaviruses // Curr. Top.Microbiol. Immunol. - 1982. - 99. - P, 165-200.14. Wege H., Siddell S., ter Meulen V. The biology and pathogenesis of coronaviruses // Curr. Top.Microbiol. Immunol. - 1982 .-- 99. - P, 165-200.
15. Risri H., Hovi T. Coronavirus infections of man associated with diseases other than the common cold // J. Med. Virol. - 1980. - №6. - P. 385-399.15. Risri H., Hovi T. Coronavirus infections of man associated with diseases other than the common cold // J. Med. Virol. - 1980. - No. 6. - P. 385-399.
16. Информационный Экспресс-Бюллетень. Коронавирус SARS-возбудитель атипичной пневмонии (временные методические рекомендации). - СПб-Москва, 2003.16. Information Express Bulletin. SARS coronavirus-causative agent of atypical pneumonia (temporary guidelines). - SPb-Moscow, 2003.
17. Грипп и другие респираторные вирусные инфекции: эпидемиология, профилактика, диагностика и терапия // Под редакцией О.И. Киселева, И.Г. Маринича, А.А. Сомининой). - СПб.: «Боргес», 2003.17. Influenza and other respiratory viral infections: epidemiology, prevention, diagnosis and therapy // Edited by O.I. Kiseleva, I. G. Marynich, A.A. Sominina). - SPb .: "Borges", 2003.
18. Постановление Правительства РФ от 01.12.2004 №715.18. Decree of the Government of the Russian Federation dated 01.12.2004 No. 715.
19. World Health Organization. WHO Director-General's opening remarks at the media briefing on COVID-19 - 11 March. Available from URL: https://www.who.int/dg/speeches/detail/who-director-general-s-opening-remarks-at-the-media-briefing-on-covid-19, 11 march 2020 (accessed April 2020).19. World Health Organization. WHO Director-General's opening remarks at the media briefing on COVID-19 - 11 March. Available from URL: https://www.who.int/dg/speeches/detail/who-director-general-s-opening-remarks-at-the-media-briefing-on-covid-19, 11 March 2020 ( accessed April 2020).
20. Callegos A. WHO Declares Public Health Emergency for novel coronavirus // Medscape medical news. Available at https://www. Medscape, com/viewarticle/924596; Accessed: January 31, 2020.20. Callegos A. WHO Declares Public Health Emergency for novel coronavirus // Medscape medical news. Available at https: // www. Medscape, com / viewarticle / 924596; Accessed: January 31, 2020.
21. Ramzy A., McNeil D.G. W.H.O. Declares Global Emergency as Wuhan Coronavirus Spreads // The New York Times. Available at https://nyti.ms/2RER70M; Accessed: January 30, 2020.21. Ramzy A., McNeil D.G. W.H.O. Declares Global Emergency as Wuhan Coronavirus Spreads // The New York Times. Available at https://nyti.ms/2RER70M; Accessed: January 30, 2020.
22. The New York Times. Coronavirus Live Updates: W.H.O. Declares Pandemic as Number of Infected Countries Crows. The New York Times. Available at https://www.nytimes.com/2020/03/11/world/coronavirus-news.html#link-282e5b06. Accessed: March 11, 2020.22. The New York Times. Coronavirus Live Updates: WHO Declares Pandemic as Number of Infected Countries Crows. The Ne w York Times. Available at https://www.nytimes.com/2020/03/11/world/coronavirus-news.html#link-282e5b06. Accessed: March 11, 2020.
23. Сайт ВОЗ https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/novel-coronavirus-landscape-ncov.pdf?sfvrsn=b8e4a30_4&download=true.23. WHO website https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/novel-coronavirus-landscape-ncov.pdf?sfvrsn=b8e4a30_4&download=true.
24. Заявка США №20060257852, МПК С07K 14/165, опубл. 16.11.2006 г. (аналог).24. US application No. 20060257852, IPC S07K 14/165, publ. November 16, 2006 (analogue).
25. WO 2015/042373, A1, Immunogenic middle east respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV) compositions and metods, 2015. (прототип).25. WO 2015/042373, A1, Immunogenic middle east respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV) compositions and metods, 2015. (prototype).
26. Wang, Q. et al. Immunodominant SARS coronavirus epitopes in humans elicited both enhancing and neutralizing effects on infection in non-human primates. // ACS Infect. Dis. 2, 361-376 (2016).26. Wang, Q. et al. Immunodominant SARS coronavirus epitopes in humans elicited both enhancing and neutralizing effects on infection in non-human primates. // ACS Infect. Dis. 2, 361-376 (2016).
27. Chen, W. H. et al. Optimization of the production process and characterization of the yeast-expressed SARS-CoV recombinant receptor-binding domain (RBD219-N1), a SARS vaccine candidate. // J. Pharm. Sci. 106, 1961-1970 (2017).27. Chen, W. H. et al. Optimization of the production process and characterization of the yeast-expressed SARS-CoV recombinant receptor-binding domain (RBD219-N1), a SARS vaccine candidate. // J. Pharm. Sci. 106, 1961-1970 (2017).
--->--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСЕЙSEQUENCE LIST
<110> Федеральное бюджетное учреждение науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора)<110> Federal Budgetary Institution of Science "State Scientific Center of Virology and Biotechnology" Vector "of the Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Welfare (FBSI SSC VB" Vector "of Rospotrebnadzor)
<120> Пептидные иммуногены и вакцинная композиция против коронавирусной инфекции COVID-19 с использованием пептидных иммуногенов <120> Peptide immunogens and vaccine composition against COVID-19 coronavirus infection using peptide immunogens
<160> Номер SEQ ID NO: 1<160> SEQ ID NO: 1
<210> 4<210> 4
<211> 25<211> 25
<212> peptide<212> peptide
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<223> Искусственно синтезированный пептид <223> Artificially synthesized peptide
<400> 1 Искусственная аминокислотная последовательность<400> 1 Artificial amino acid sequence
CRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSCRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGS
<160> Номер SEQ ID NO: 2<160> SEQ ID NO: 2
<210> 4<210> 4
<211> 32<211> 32
<212> peptide<212> peptide
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<223> Искусственно синтезированный пептид <223> Artificially synthesized peptide
<400> 2 Искусственная аминокислотная последовательность<400> 2 Artificial amino acid sequence
CKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIK CKEIDRLNEVAKNLNESLIDLQELGKYEQYIK
<160> Номер SEQ ID NO: 3<160> SEQ ID NO: 3
<210> 4<210> 4
<211> 817<211> 817
<212> recombinant chimeric protein<212> recombinant chimeric protein
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<223> Искусственно синтезированный рекомбинантный химерный белок <223> Artificially synthesized recombinant chimeric protein
<400> 3 Искусственная аминокислотная последовательность<400> 3 Artificial amino acid sequence
MKIEEGKLVIWINGDKGYNGLAEVGKKFEKDTGIKVTVEHPDKLE 45MKIEEGKLVIWINGDKGYNGLAEVGKKFEKDTGIKVTVEHPDKLE 45
EKFPQVAATGDGPDIIFWAHDRFGGYAQSGLLAEITPDKAFQDKL 90EKFPQVAATGDGPDIIFWAHDRFGGYAQSGLLAEITPDKAFQDKL 90
YPFTWDAVRYNGKLIAYPIAVEALSLIYNKDLLPNPPKTWEEIPA 135YPFTWDAVRYNGKLIAYPIAVEALSLIYNKDLLPNPPKTWEEIPA 135
LDKELKAKGKSALMFNLQEPYFTWPLIAADGGYAFKYENGKYDIK 180LDKELKAKGKSALMFNLQEPYFTWPLIAADGGYAFKYENGKYDIK 180
DVGVDNAGAKAGLTFLVDLIKNKHMNADTDYSIAEAAFNKGETAM 225DVGVDNAGAKAGLTFLVDLIKNKHMNADTDYSIAEAAFNKGETAM 225
TINGPWAWSNIDTSKVNYGVTVLPTFKGQPSKPFVGVLSAGINAA 270TINGPWAWSNIDTSKVNYGVTVLPTFKGQPSKPFVGVLSAGINAA 270
SPNKELAKEFLENYLLTDEGLEAVNKDKPLGAVALKSYEEELAKD 315SPNKELAKEFLENYLLTDEGLEAVNKDKPLGAVALKSYEEELAKD 315
PRIAATMENAQKGEIMPNIPQMSAFWYAVRTAVINAASGRQTVDE 360PRIAATMENAQKGEIMPNIPQMSAFWYAVRTAVINAASGRQTVDE 360
ALKDAQTNSSSNNNNNNNNNNLGIEGRGGSGHHHHHHSGSDNGPQ 405ALKDAQTNSSSNNNNNNNNNNNLGIEGRGGSGHHHHHHSGSDNGPQ 405
NQRNAPRITFGGPSDSTGSNQNGERSGARSKQRRPQGLPNNTASW 450NQRNAPRITFGGPSDSTGSNQNGERSGARSKQRRPQGLPNNTASW 450
FTALTQHGKEDLKFPRGQGVPINTNSSPDDQIGYYRRATRRIRGG 495FTALTQHGKEDLKFPRGQGVPINTNSSPDDQIGYYRRATRRIRGG 495
DGKMKDLSPRWYFYYLGTGPEAGLPYGANKDGIIWVATEGALNTP 540DGKMKDLSPRWYFYYLGTGPEAGLPYGANKDGIIWVATEGALNTP 540
KDHIGTRNPANNAAIVLQLPQGTTLPKGFYAEGSRGGSQASSRSS 585 KDHIGTRNPANNAAIVLQLPQGTTLPKGFYAEGSRGGSQASSRSS 585
SRSRNSSRNSTPGSSRGTSPARMAGNGGDAALALLLLDRLNQLES 630SRSRNSSRNSTPGSSRGTSPARMAGNGGDAALALLLLDRLNQLES 630
KMSGKGQQQQGQTVTKKSAAEASKKPRQKRTATKAYNVTQAFGRR 675KMSGKGQQQQGQTVTKKSAAEASKKPRQKRTATKAYNVTQAFGRR 675
GPEQTQGNFGDQELIRQGTDYKHWPQIAQFAPSASAFFGMSRIGM 720GPEQTQGNFGDQELIRQGTDYKHWPQIAQFAPSASAFFGMSRIGM 720
EVTPSGTWLTYTGAIKLDDKDPNFKDQVILLNKHIDAYKTFPPTE 765EVTPSGTWLTYTGAIKLDDKDPNFKDQVILLNKHIDAYKTFPPTE 765
PKKDKKKKADETQALPQRQKKQQTVTLLPAADLDDLSKQLQQSMS 810PKKDKKKKADETQALPQRQKKQQTVTLLPAADLDDLSKQLQQSMS 810
SADSTQA 817SADSTQA 817
<160> Номер SEQ ID NO: 4<160> SEQ ID NO: 4
<210> 4<210> 4
<211> 2454<211> 2454
<212> recombinant chimeric gen<212> recombinant chimeric gen
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<223> Искусственно синтезированный рекомбинантный химерный ген <223> Artificially synthesized recombinant chimeric gene
<400> 4 Искусственная нуклеотидная последовательность<400> 4 Artificial nucleotide sequence
ATGAAAATCGAAGAAGGTAAACTGGTAATCTGGATTAACGGCGATAAAGG 50ATGAAAATCGAAGAAGGTAAACTGGTAATCTGGATTAACGGCGATAAAGG 50
CTATAACGGTCTCGCTGAAGTCGGTAAGAAATTCGAGAAAGATACCGGAA 100CTATAACGGTCTCGCTGAAGTCGGTAAGAAATTCGAGAAAGATACCGGAA 100
TTAAAGTCACCGTTGAGCATCCGGATAAACTGGAAGAGAAATTCCCACAG 150 TTAAAGTCACCGTTGAGCATCCGGATAAACTGGAAGAGAAATTCCCACAG 150
GTTGCGGCAACTGGCGATGGCCCTGACATTATCTTCTGGGCACACGACCG 200 GTTGCGGCAACTGGCGATGGCCCTGACATTATCTTCTGGGCACACGACCG 200
CTTTGGTGGCTACGCTCAATCTGGCCTGTTGGCTGAAATCACCCCGGACA 250
AAGCGTTCCAGGACAAGCTGTATCCGTTTACCTGGGATGCCGTACGTTAC 300 AAGCGTTCCAGGACAAGCTGTATCCGTTTACCTGGGATGCCGTACGTTAC 300
AACGGCAAGCTGATTGCTTACCCGATCGCTGTTGAAGCGTTATCGCTGAT 350AACGGCAAGCTGATTGCTTACCCGATCGCTGTTGAAGCGTTATCGCTGAT 350
TTATAACAAAGATCTGCTGCCGAACCCGCCAAAAACCTGGGAAGAGATCC 400 TTATAACAAAGATCTGCTGCCGAACCCGCCAAAAACCTGGGAAGAGATCC 400
CGGCGCTGGATAAAGAACTGAAAGCGAAAGGTAAGAGCGCGCTGATGTTC 450CGGCGCTGGATAAAGAACTGAAAGCGAAAGGTAAGAGCGCGCTGATGTTC 450
AACCTGCAAGAACCGTACTTCACCTGGCCGCTGATTGCTGCTGACGGGGG 500
TTATGCGTTCAAGTATGAAAACGGCAAGTACGACATTAAAGACGTGGGCG 550TTATGCGTTCAAGTATGAAAACGGCAAGTACGACATTAAAGACGTGGGCG 550
TGGATAACGCTGGCGCGAAAGCGGGTCTGACCTTCCTGGTTGACCTGATT 600TGGATAACGCTGGCGCGAAAGCGGGTCTGACCTTCCTGGTTGACCTGATT 600
AAAAACAAACACATGAATGCAGACACCGATTACTCCATCGCAGAAGCTGC 650AAAAACAAACACATGAATGCAGACACCGATTACTCCATCGCAGAAGCTGC 650
CTTTAATAAAGGCGAAACAGCGATGACCATCAACGGCCCGTGGGCATGGT 700CTTTAATAAAGGCGAAACAGCGATGACCATCAACGGCCCGTGGGCATGGT 700
CCAACATCGACACCAGCAAAGTGAATTATGGTGTAACGGTACTGCCGACC 750
TTCAAGGGTCAACCATCCAAACCGTTCGTTGGCGTGCTGAGCGCAGGTAT 800 TTCAAGGGTCAACCATCCAAACCGTTCGTTGGCGTGCTGAGCGCAGGTAT 800
TAACGCCGCCAGTCCGAACAAAGAGCTGGCAAAAGAGTTCCTCGAAAACT 850TAACGCCGCCAGTCCGAACAAAGAGCTGGCAAAAGAGTTCCTCGAAAACT 850
ATCTGCTGACTGATGAAGGTCTGGAAGCGGTTAATAAAGACAAACCGCTG 900ATCTGCTGACTGATGAAGGTCTGGAAGCGGTTAATAAAGACAAACCGCTG 900
GGTGCCGTAGCGCTGAAGTCTTACGAGGAAGAGTTGGCGAAAGATCCACG 950GGTGCCGTAGCGCTGAAGTCTTACGAGGAAGAGTTGGCGAAAGATCCACG 950
TATTGCCGCCACCATGGAAAACGCCCAGAAAGGTGAAATCATGCCGAACA 1000
TCCCGCAGATGTCCGCTTTCTGGTATGCCGTGCGTACTGCGGTGATCAAC 1050TCCCGCAGATGTCCGCTTTCTGGTATGCCGTGCGTACTGCGGTGATCAAC 1050
GCCGCCAGCGGTCGTCAGACTGTCGATGAAGCCCTGAAAGACGCGCAGAC 1100GCCGCCAGCGGTCGTCAGACTGTCGATGAAGCCCTGAAAGACGCGCAGAC 1100
TAATTCGAGCTCGAACAACAACAACAATAACAATAACAACAACCTCGGGA 1150TAATTCGAGCTCGAACAACAACAACAATAACAATAACAACAACCTCGGGA 1150
TCGAGGGAAGGGGAGGATCTGGCCACCATCATCATCATCATTCTGGATCC 1200TCGAGGGAAGGGGAGGATCTGGCCACCATCATCATCATCATTCTGGATCC 1200
GATAATGGACCCCAAAATCAGCGAAATGCACCCCGCATTACGTTTGGTGG 1250GATAATGGACCCCAAAATCAGCGAAATGCACCCCGCATTACGTTTGGTGG 1250
ACCCTCAGATTCAACTGGCAGTAACCAGAATGGAGAACGCAGTGGGGCGC 1300ACCCTCAGATTCAACTGGCAGTAACCAGAATGGAGAACGCAGTGGGGCGC 1300
GATCAAAACAACGTCGGCCCCAAGGTTTACCCAATAATACTGCGTCTTGG 1350 GATCAAAACAACGTCGGCCCCAAGGTTTACCCAATAATACTGCGTCTTGG 1350
TTCACCGCTCTCACTCAACATGGCAAGGAAGACCTTAAATTCCCTCGAGG 1400 TTCACCGCTCTCACTCAACATGGCAAGGAAGACCTTAAATTCCCTCGAGG 1400
ACAAGGCGTTCCAATTAACACCAATAGCAGTCCAGATGACCAAATTGGCT 1450 ACAAGGCGTTCCAATTAACACCAATAGCAGTCCAGATGACCAAATTGGCT 1450
ACTACCGAAGAGCTACCAGACGAATTCGTGGTGGTGACGGTAAAATGAAA 1500
GATCTCAGTCCAAGATGGTATTTCTACTACCTAGGAACTGGGCCAGAAGC 1550 GATCTCAGTCCAAGATGGTATTTCTACTACCTAGGAACTGGGCCAGAAGC 1550
TGGACTTCCCTATGGTGCTAACAAAGACGGCATCATATGGGTTGCAACTG 1600TGGACTTCCCTATGGTGCTAACAAAGACGGCATCATATGGGTTGCAACTG 1600
AGGGAGCCTTGAATACACCAAAAGATCACATTGGCACCCGCAATCCTGCT 1650AGGGAGCCTTGAATACACCAAAAGATCACATTGGCACCCGCAATCCTGCT 1650
AACAATGCTGCAATCGTGCTACAACTTCCTCAAGGAACAACATTGCCAAA 1700AACAATGCTGCAATCGTGCTACAACTTCCTCAAGGAACAACATTGCCAAA 1700
AGGCTTCTACGCAGAAGGGAGCAGAGGCGGCAGTCAAGCCTCTTCTCGTT 1750 AGGCTTCTACGCAGAAGGGAGCAGAGGCGGCAGTCAAGCCTCTTCTCGTT 1750
CCTCATCACGTAGTCGCAACAGTTCAAGAAATTCAACTCCAGGCAGCAGT 1800CCTCATCACGTAGTCGCAACAGTTCAAGAAATTCAACTCCAGGCAGCAGT 1800
AGGGGAACTTCTCCTGCTAGAATGGCTGGCAATGGCGGTGATGCTGCTCT 1850AGGGGAACTTCTCCTGCTAGAATGGCTGGCAATGGCGGTGATGCTGCTCT 1850
TGCTTTGCTGCTGCTTGACAGATTGAACCAGCTTGAGAGCAAAATGTCTG 1900 TGCTTTGCTGCTGCTTGACAGATTGAACCAGCTTGAGAGCAAAATGTCTG 1900
GTAAAGGCCAACAACAACAAGGCCAAACTGTCACTAAGAAATCTGCTGCT 1950GTAAAGGCCAACAACAACAAGGCCAAACTGTCACTAAGAAATCTGCTGCT 1950
GAGGCTTCTAAGAAGCCTCGGCAAAAACGTACTGCCACTAAAGCATACAA 2000
TGTAACACAAGCTTTCGGCAGACGTGGTCCAGAACAAACCCAAGGAAATT 2050TGTAACACAAGCTTTCGGCAGACGTGGTCCAGAACAAACCCAAGGAAATT 2050
TTGGGGACCAGGAACTAATCAGACAAGGAACTGATTACAAACATTGGCCG 2100TTGGGGACCAGGAACTAATCAGACAAGGAACTGATTACAAACATTGGCCG 2100
CAAATTGCACAATTTGCCCCCAGCGCTTCAGCGTTCTTCGGAATGTCGCG 2150CAAATTGCACAATTTGCCCCCAGCGCTTCAGCGTTCTTCGGAATGTCGCG 2150
CATTGGCATGGAAGTCACACCTTCGGGAACGTGGTTGACCTACACAGGTG 2200CATTGGCATGGAAGTCACACCTTCGGGAACGTGGTTGACCTACACAGGTG 2200
CCATCAAATTGGATGACAAAGATCCAAATTTCAAAGATCAAGTCATTTTG 2250CCATCAAATTGGATGACAAAGATCCAAATTTCAAAGATCAAGTCATTTTG 2250
CTGAATAAGCATATTGACGCATACAAAACATTCCCACCAACAGAGCCTAA 2300CTGAATAAGCATATTGACGCATACAAAACATTCCCACCAACAGAGCCTAA 2300
AAAGGACAAAAAGAAGAAGGCTGATGAAACTCAAGCCTTACCGCAGAGAC 2350AAAGGACAAAAAGAAGAAGGCTGATGAAACTCAAGCCTTACCGCAGAGAC 2350
AGAAGAAACAGCAAACTGTGACTCTTCTTCCTGCTGCAGATTTGGATGAT 2400AGAAGAAACAGCAAACTGTGACTCTTCTTCCTGCTGCAGATTTGGATGAT 2400
TTCTCCAAACAATTGCAACAATCCATGAGCAGTGCTGACTCAACTCAGGC 2450TTCTCCAAACAATTGCAACAATCCATGAGCAGTGCTGACTCAACTCAGGC 2450
CTAA 2454 CTAA 2454
<---<---
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020140743A RU2743593C1 (en) | 2020-12-09 | 2020-12-09 | Peptide immunogens and vaccine composition against covid-19 with the use of peptide immunogens |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020140743A RU2743593C1 (en) | 2020-12-09 | 2020-12-09 | Peptide immunogens and vaccine composition against covid-19 with the use of peptide immunogens |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2743593C1 true RU2743593C1 (en) | 2021-02-20 |
Family
ID=74665987
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020140743A RU2743593C1 (en) | 2020-12-09 | 2020-12-09 | Peptide immunogens and vaccine composition against covid-19 with the use of peptide immunogens |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2743593C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2744444C1 (en) * | 2021-02-21 | 2021-03-09 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Use of agent for induction of specific immunity against severe acute respiratory syndrome sars-cov-2 for population revaccination (versions) |
| RU2744442C1 (en) * | 2021-02-21 | 2021-03-09 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Use of agent for induction of specific immunity against severe acute respiratory syndrome sars-cov-2 for population revaccination in people over 60 and/or with chronic diseases (versions) |
| CN114853854A (en) * | 2021-05-18 | 2022-08-05 | 深圳市因诺转化医学研究院 | T cell epitope polypeptide LPYPDPSRIL derived from SARS-CoV-2 encoding protein and application thereof |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2378015C2 (en) * | 2008-04-02 | 2010-01-10 | Равшан Иноятович Атауллаханов | Conjugate for immunisation and vaccination and method for improving immunogenicity |
| RU2488407C2 (en) * | 2005-12-29 | 2013-07-27 | Берингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. | Polyvalent immunogenic compositions pcv2 and methods for producing such compositions |
| RU2689671C2 (en) * | 2012-07-10 | 2019-05-28 | Хипра Сьентифик, С.Л.У. | Mutant mycoplasma hyopneumoniae strains |
| CN111458504A (en) * | 2020-03-12 | 2020-07-28 | 中科欧蒙未一(北京)医学技术有限公司 | Kit for detecting IgG antibody against novel coronavirus SARS-COV-2 in sample |
| CN111533790A (en) * | 2020-05-09 | 2020-08-14 | 中山大学 | Mosaic strategy-based coronavirus antigen construction method and application thereof |
| CN111647053A (en) * | 2020-04-16 | 2020-09-11 | 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所 | Polypeptide and application thereof in novel coronavirus detection and antibody or vaccine screening |
| CN111848753A (en) * | 2020-07-20 | 2020-10-30 | 中国科学院过程工程研究所 | Novel coronavirus epitope and application thereof |
| RU2738081C1 (en) * | 2020-10-14 | 2020-12-07 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Peptide immunogens and a vaccine composition against coronavirus infection covid-19 using peptide immunogens |
-
2020
- 2020-12-09 RU RU2020140743A patent/RU2743593C1/en active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2488407C2 (en) * | 2005-12-29 | 2013-07-27 | Берингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. | Polyvalent immunogenic compositions pcv2 and methods for producing such compositions |
| RU2378015C2 (en) * | 2008-04-02 | 2010-01-10 | Равшан Иноятович Атауллаханов | Conjugate for immunisation and vaccination and method for improving immunogenicity |
| RU2689671C2 (en) * | 2012-07-10 | 2019-05-28 | Хипра Сьентифик, С.Л.У. | Mutant mycoplasma hyopneumoniae strains |
| CN111458504A (en) * | 2020-03-12 | 2020-07-28 | 中科欧蒙未一(北京)医学技术有限公司 | Kit for detecting IgG antibody against novel coronavirus SARS-COV-2 in sample |
| CN111647053A (en) * | 2020-04-16 | 2020-09-11 | 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所 | Polypeptide and application thereof in novel coronavirus detection and antibody or vaccine screening |
| CN111533790A (en) * | 2020-05-09 | 2020-08-14 | 中山大学 | Mosaic strategy-based coronavirus antigen construction method and application thereof |
| CN111848753A (en) * | 2020-07-20 | 2020-10-30 | 中国科学院过程工程研究所 | Novel coronavirus epitope and application thereof |
| RU2738081C1 (en) * | 2020-10-14 | 2020-12-07 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Peptide immunogens and a vaccine composition against coronavirus infection covid-19 using peptide immunogens |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2744444C1 (en) * | 2021-02-21 | 2021-03-09 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Use of agent for induction of specific immunity against severe acute respiratory syndrome sars-cov-2 for population revaccination (versions) |
| RU2744442C1 (en) * | 2021-02-21 | 2021-03-09 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Use of agent for induction of specific immunity against severe acute respiratory syndrome sars-cov-2 for population revaccination in people over 60 and/or with chronic diseases (versions) |
| WO2022177465A1 (en) * | 2021-02-21 | 2022-08-25 | Federal State Budgetary Institution "National Research Center For Epidemiology And Microbiology Named After The Honorary Academician N.F. Gamaleya" Of The Ministry Of Health Of The Russian Federation | The use of the agent for inducing immunity to sars-cov-2 |
| WO2022177466A1 (en) * | 2021-02-21 | 2022-08-25 | Federal State Budgetary Institution "National Research Center For Epidemiology And Microbiology Named After The Honorary Academician N.F. Gamaleya" Of The Ministry Of Health Of The Russian Federation | The use of the agent for inducing immunity to sars-cov-2 |
| CN114853854A (en) * | 2021-05-18 | 2022-08-05 | 深圳市因诺转化医学研究院 | T cell epitope polypeptide LPYPDPSRIL derived from SARS-CoV-2 encoding protein and application thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2738081C1 (en) | Peptide immunogens and a vaccine composition against coronavirus infection covid-19 using peptide immunogens | |
| RU2743593C1 (en) | Peptide immunogens and vaccine composition against covid-19 with the use of peptide immunogens | |
| US11590220B2 (en) | Antigens of β-coronaviruses, preparation methods and uses thereof | |
| US11324836B2 (en) | Modified virus-like particles of CMV | |
| Schwegmann-Weßels et al. | Sialic acids as receptor determinants for coronaviruses | |
| RU2743595C1 (en) | Vaccine composition against covid-19 | |
| CN101098710A (en) | Sars vaccines and methods to produce highly potent antibodies | |
| JP6692853B2 (en) | A conformationally specific viral immunogen | |
| JP2008505050A (en) | SARS coronavirus S protein and use thereof | |
| CN112043825A (en) | Subunit vaccine for preventing novel coronavirus infection based on novel coronavirus spike protein S1 region | |
| JP2024512575A (en) | Attenuated reovirus-based vaccine composition and its uses | |
| KR20040104936A (en) | Cell Surface Expression Vector of SARS Virus Antigen and Microorganisms Transformed Thereby | |
| CN114437185A (en) | Coronavirus trimer subunit vaccine and application thereof | |
| Tripet et al. | Template-based coiled-coil antigens elicit neutralizing antibodies to the SARS-coronavirus | |
| RU2743594C1 (en) | Peptide immunogens used as components of vaccine composition against covid-19 | |
| Katsura et al. | Novel bovine viral diarrhea virus (BVDV) virus-like particle vaccine candidates presenting the E2 protein using the SpyTag/SpyCatcher system induce a robust neutralizing antibody response in mice | |
| US7151163B2 (en) | Antiviral agents for the treatment, control and prevention of infections by coronaviruses | |
| CN114057850B (en) | Polypeptide and immunogenic conjugate for preventing novel coronavirus COVID-19 and application thereof | |
| EA040140B1 (en) | PEPTIDE IMMUNOGENS AND VACCINE COMPOSITION AGAINST CORONAVIRUS INFECTION COVID-19 USING PEPTIDE IMMUNOGENS | |
| EA040096B1 (en) | CHIMERIC RECOMBINANT CARRIER PROTEIN MBP-6XHIS-N_NCOV-2019 AND VACCINE COMPOSITION AGAINST CORONAVIRUS INFECTION COVID-19 USING CHIMERIC RECOMBINANT CARRIER PROTEIN | |
| KR20230135598A (en) | Stable coronavirus proteins and vaccine compositions thereof | |
| KR102711723B1 (en) | Vaccine composition based on attenuated reovirus and Use thereof | |
| KR101557191B1 (en) | Monovalent or supplementary influenza vaccine having broad protective activity | |
| CN114057846B (en) | Polypeptide and immunogenic conjugate for preventing novel coronavirus infection COVID-19 and application thereof | |
| CN114057847B (en) | Polypeptide and immunogenic conjugate for preventing novel coronavirus COVID-19 and application thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QZ41 | Official registration of changes to a registered agreement (patent) |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20210128 Effective date: 20210901 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20211118 Effective date: 20211118 |