RU2735649C1 - Combined coatings based on biologically active rgd-functionalised aminoacid bisphosphonates and peo-sublayer for titanium - Google Patents

Combined coatings based on biologically active rgd-functionalised aminoacid bisphosphonates and peo-sublayer for titanium Download PDF

Info

Publication number
RU2735649C1
RU2735649C1 RU2019131783A RU2019131783A RU2735649C1 RU 2735649 C1 RU2735649 C1 RU 2735649C1 RU 2019131783 A RU2019131783 A RU 2019131783A RU 2019131783 A RU2019131783 A RU 2019131783A RU 2735649 C1 RU2735649 C1 RU 2735649C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
titanium
rgdc
nmr spectrum
peo
functionalised
Prior art date
Application number
RU2019131783A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Людмила Вячеславовна Парфенова
Елена Сергеевна Лукина
Зульфия Рамиловна Галимшина
Гузель Ураловна Гильфанова
Евгений Владимирович Парфенов
Ксения Владимировна Данилко
Вета Робертовна Мукаева
Рузиль Галиевич Фаррахов
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Уфимский федеральный исследовательский центр Российской академии наук
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Уфимский федеральный исследовательский центр Российской академии наук filed Critical Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Уфимский федеральный исследовательский центр Российской академии наук
Priority to RU2019131783A priority Critical patent/RU2735649C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2735649C1 publication Critical patent/RU2735649C1/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/02—Inorganic materials
    • A61L27/04—Metals or alloys
    • A61L27/06—Titanium or titanium alloys
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology.
SUBSTANCE: invention relates to production of combined coatings for titanium based on biologically active RGD-functionalised bisphosphonate derivatives Arg-Gly-Asp-Cys-(RGDC)-substituted ({[(2,5-dioxo-pyrrolidin-1-yl)alkanoyl]amino}-1-hydroxyalkane-1,1-diiyl)bisphosphonic acids and use of said compounds as organic coatings for simulating biological activity of PEO-modified surface of titanium implants. RGD-functionalised bisphosphonate derivatives of Arg-Gly-Asp-Cys-(RGDC)-substituted ({[(2,5-dioxo-pyrrolidin-1-yl)alkanoyl]amino}-1-hydroxyalkane-1,1-diiyl)bisphosphonic acids is applied by physical-chemical adsorption from aqueous solutions with concentration of ~10-3 M/l for 1 hour on titanium (Grade 2) with inorganic oxidised porous sublayer, obtained during plasma-electrolytic oxidation.
EFFECT: technical result is obtaining coatings, improving adhesion and proliferation of mesenchymal stem cells, fibroblasts and osteoblastoid cells.
2 cl, 3 ex, 3 dwg

Description

Изобретение относится к области получения комбинированных покрытий для титана на основе биологически активных RGD-функционализированных бифосфонатных производных Arg-Gly-Asp-Cys-(RGDC)- замещенных ({[(2,5-диоксо-пирролидин-1-ил)алканоил]амино}-1-гидроксиалкан- 1,1- диил)бисфосфоновых кислот общей формулы (1a-h) в сочетании с неорганическим оксидированным пористым подслоем, полученным в ходе плазменно-электролитического оксидирования (ПЭО) металла:The invention relates to the field of producing combined coatings for titanium based on biologically active RGD-functionalized bisphosphonate derivatives Arg-Gly-Asp-Cys- (RGDC) - substituted ({[(2,5-dioxo-pyrrolidin-1-yl) alkanoyl] amino } -1-hydroxyalkane-1,1-diyl) bisphosphonic acids of the general formula (1a-h) in combination with an inorganic oxidized porous sublayer obtained during the plasma electrolytic oxidation (PEO) of the metal:

Figure 00000001
Figure 00000001

Полученные покрытия могут найти применение для создания биологически активных биомиметических поверхностей для металлических имплантатов, улучшающих их остеоинтеграцию ([1] Queffelec С., Petit М., Janvier P., Knight D. A., Bujoli В. Chem. Rev. 2012, 112, 3777-3807; [2] Meyers S.R., Grinstaff M.W. Chem. Rev. 2012, 112, 1615-1632).The resulting coatings can be used to create biologically active biomimetic surfaces for metal implants that improve their osseointegration ([1] Queffelec S., Petit M., Janvier P., Knight DA, Bujoli B. Chem. Rev. 2012, 112, 3777- 3807; [2] Meyers SR, Grinstaff MW Chem. Rev. 2012, 112, 1615-1632).

В работах ([3] Auernheimer J., Zukowski D., Dahmen C., Kantlehner M, Enderle A., Goodman S.L., Kessler H. ChemBioChem. 2005, 6(11), 2034-2040; [4] Mas-Moruno C., Dorfher P.M., Manzenrieder F., Neubauer S., Reuning U., Burgkart R., Kessler H. J. Biomed. Mater. Res. 2013, 101 A, P. 87-97) разработаны покрытия для титановых имплантатов, в которых цикло(-RGDfK-) пептид связан с якорным блоком из четырех фосфонопропионовых кислот через спейсеры, состоящие из одного или трех фрагментов аминогексановых кислот.In works ([3] Auernheimer J., Zukowski D., Dahmen C., Kantlehner M, Enderle A., Goodman SL, Kessler H. ChemBioChem. 2005, 6 (11), 2034-2040; [4] Mas-Moruno C., Dorfher PM, Manzenrieder F., Neubauer S., Reuning U., Burgkart R., Kessler HJ Biomed. Mater. Res. 2013, 101 A, P. 87-97) have developed coatings for titanium implants in which cyclo The (-RGDfK-) peptide is linked to an anchor block of four phosphonopropionic acids through spacers consisting of one or three aminohexanoic acid moieties.

Figure 00000002
Figure 00000002

Вещества наносили на титановые диски (Ti6A14V) путем их вымачивания в буферных растворах с концентрацией действующего вещества 100-0,1 μМ при комнатной температуре в течение ночи. Адгезию клеток оценивали после 1 ч высевания клеток в планшеты с металлическими образцами. Показано увеличение степени адгезии мышиных остеобластов МС3Т3-Е1 на обработанной поверхности титана до 62% [3]. Иммобилизация пептидов на дисках Ti6A14V привела к более высоким значениям клеточной адгезии по сравнению с нефункционализированными образцами, как на механически отрезанных, так и полученных после пескоструйной обработки поверхностях [4]. В качестве недостатков данного метода следует указать многостадийность синтеза целевых соединений (~ 16 стадий), дороговизну цикло(-RGDfK-) пептидов, длительность обработки и возможную относительно более низкую степень химической адгезии полученных фосфонатов к неокисленной поверхности титана.The substances were applied to titanium disks (Ti6A14V) by soaking them in buffer solutions with an active substance concentration of 100-0.1 μM at room temperature overnight. Cell adhesion was assessed after 1 h of plating the cells into plates with metal samples. An increase in the degree of adhesion of mouse osteoblasts MC3T3-E1 on the treated titanium surface up to 62% has been shown [3]. Immobilization of peptides on Ti6A14V discs resulted in higher values of cell adhesion compared to non-functionalized samples, both on mechanically cut and sandblasted surfaces [4]. The disadvantages of this method are the multistage synthesis of the target compounds (~ 16 steps), the high cost of cyclo (-RGDfK-) peptides, the duration of processing, and a possible relatively lower degree of chemical adhesion of the obtained phosphonates to the unoxidized titanium surface.

Известен синтез RGDC- замещенной (6-{[6-(2,5-диоксо-пирролидин-1-ил)гексаноил]амино}-1-гидроксигексан-1,1-диил)бисфосфоновой кислоты (1f) в реакции 4-N-(6-малеоимидогексаноил)аминобутан-1-гидрокси-1,1-бифосфоновой кислоты с RGDC-тетрапептидом в воде при рН=7 ([5] Beuvelot J., et al, 2009, J. Biomed. Mater. Res., 90B, 873-881). Полученное соединение наносили на стерилизованную и окисленную термически (15 ч при 200°С) поверхность титана путем физико-химической адсорбции из растворов (выдержка 3 ч) с концентрацией 10-4 и 10-10 М/л. Фиксация молекул на поверхности происходила путем дегидратации при 50°С, 0,3 мбар в течение 15 часов. Такая обработка поверхности металла улучшала адгезию, степень распределения и минерализацию остеобластоподобных клеток Saos-2.Known synthesis of RGDC-substituted (6 - {[6- (2,5-dioxo-pyrrolidin-1-yl) hexanoyl] amino} -1-hydroxyhexane-1,1-diyl) bisphosphonic acid (1f) in the reaction 4-N - (6-maleoimidohexanoyl) aminobutane-1-hydroxy-1,1-bisphosphonic acid with RGDC-tetrapeptide in water at pH = 7 ([5] Beuvelot J., et al, 2009, J. Biomed. Mater. Res., 90B, 873-881). The resulting compound was applied to a sterilized and thermally oxidized (15 h at 200 ° C) titanium surface by physicochemical adsorption from solutions (holding for 3 h) with a concentration of 10 -4 and 10 -10 M / L. The molecules were fixed on the surface by dehydration at 50 ° C, 0.3 mbar for 15 hours. This metal surface treatment improved the adhesion, distribution and mineralization of the Saos-2 osteoblast-like cells.

Figure 00000003
Figure 00000003

В качестве недостатка данного метода можно отметить длительность обработки поверхности металла при нанесении покрытий.As a disadvantage of this method, it is possible to note the duration of the metal surface treatment during coating.

Наиболее близким к изобретению является способ [Parfenov E.V. et al, Surface & Coatings Technology, 2019, 357, 669-683], в котором RGDC-замещенную (3-{[6-(2,5-диоксо-пирролидин-1-ил)гексаноил]амино}-1-гидроксигексан-1,1-диил)бисфосфоновую кислоту (1d) наносили на поверхность наноструктурированного титана (Grade 4), модифицированную с помощью плазменно-электролитического оксидирования, путем физико-химической адсорбции из растворов с концентрацией 10-3 М/л (время выдержки 3 ч с последующим высушиванием).Closest to the invention is the method [Parfenov EV et al, Surface & Coatings Technology, 2019, 357, 669-683], in which RGDC-substituted (3 - {[6- (2,5-dioxo-pyrrolidin-1-yl ) hexanoyl] amino} -1-hydroxyhexane-1,1-diyl) bisphosphonic acid (1d) was applied to the surface of nanostructured titanium (Grade 4), modified by plasma electrolytic oxidation, by physicochemical adsorption from solutions with a concentration of 10 - 3 M / l (holding time 3 h followed by drying).

Figure 00000004
Figure 00000004

Испытания in vitro, проведенные с использованием фибробластов, показали, что данный вариант комбинированного покрытия обеспечивает усиление пролиферации адгезированых клеток на 45% по сравнению с необработанным наноструктурированным титаном. К недостаткам метода следует отнести меньшую доступность и дороговизну наноструктурированного титана, отсутствие информации по влиянию структуры линкера и аминобифосфоната на жизнедеятельность клеток различной природы, а также содержание в целевых продуктах примеси продуктов трансформации диоксана, образующихся на стадии синтеза прекурсоров - коньюгатов аминобисфосфоновых кислот с малеимидосукцинимидными линкерами.In vitro tests carried out using fibroblasts have shown that this variant of the combined coating provides an increase in the proliferation of adherent cells by 45% compared to untreated nanostructured titanium. The disadvantages of the method include the lower availability and high cost of nanostructured titanium, the lack of information on the effect of the structure of the linker and aminobiphosphonate on the vital activity of cells of various natures, as well as the content in the target products of the impurity of dioxane transformation products formed at the stage of synthesis of precursors - conjugates of aminobisphosphonic linoxycides with maleimide-imidine acids.

Задачей изобретения является разработка комбинированных биологически активных покрытий на основе гибридных молекул, полученных путем химической сшивки бифосфонатов аминокислот (β-аланина, γ_аминомасляной и ε-аминокапроновой кислот) с линейным рипептидом RGD - фрагментом белков межклеточного матрикса через линкеры, различающиеся длиной и структурой ((2,5-диоксопирролидин-1-ил)-3-(2,5-диоксопиррол-1-ил)пропаноата (BMPS), (2,5-диоксопирролидин-1-ил) -6- (2,5-диоксопиррол-1-ил)гексаноата (EMCS), (2,5-диоксопирролидин-1-ил) -4- [(2,5-диоксопиррол-1-ил)метил]циклогексанкарбоксилата (SMCC)), в сочетании с неорганическим оксидированным пористым подслоем, полученным в ходе плазменно-электролитического оксидирования металла, а также in vitro исследование адгезии, пролиферативной активности, жизнеспособности мезенхимальных стволовых клеток, фибробластов и остеобластоподобных клеток для выявления наиболее перспективных вариантов создаваемых покрытий.The objective of the invention is the development of combined biologically active coatings based on hybrid molecules obtained by chemical crosslinking of amino acid bisphosphonates (β-alanine, γ _ aminobutyric and ε-aminocaproic acids) with a linear ripeptide RGD - a fragment of intercellular matrix proteins through linkers differing in length and structure ( (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) -3- (2,5-dioxopyrrol-1-yl) propanoate (BMPS), (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) -6- (2,5-dioxopyrrole -1-yl) hexanoate (EMCS), (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) -4- [(2,5-dioxopyrrol-1-yl) methyl] cyclohexanecarboxylate (SMCC)), combined with inorganic oxidized porous sublayer obtained in the course of plasma electrolytic oxidation of metal, as well as in vitro study of adhesion, proliferative activity, viability of mesenchymal stem cells, fibroblasts and osteoblast-like cells to identify the most promising options for the created coatings.

Получение заявленных покрытий осуществляли следующим образом: 1 экв. аминобифосфонатов аминокислот (β-аланина, γ-аминомасляной и ε-аминокапроновой кислот) вовлекали во взаимодействие с 1 экв. N-гидрокисукцинимидомалеоимидных линкеров (BMPS, EMCS, SMCC), предварительно растворенных в ацетоне. Полученные производные после выделения и осушки смешивали с олигопептидом RGDC в соотношении 1:1 в водной среде при рН=7, в результате чего получали соединения 1a-h, структура которых установлена с помощью 1D и 2D спектроскопии ЯМР 1Н, 13C, 31P и MALDI-TOF/TOF спектрометрии. ПЭО покрытие получали на титане (Grade 2) в биполярном импульсном режиме в водном растворе, содержащем Na3PO4⋅12H2O и Са(СН3СОО)2. Образцы Ti с нанесенным ПЭО-покрытием выдерживали в водных растворах 1a-h с концентрацией ~10-3 М/л в течение 1 часа, а затем высушивали.Obtaining the declared coatings was carried out as follows: 1 eq. aminobiphosphonates of amino acids (β-alanine, γ-aminobutyric and ε-aminocaproic acids) were involved in the interaction with 1 equiv. N-hydroxysuccinimide maleimide linkers (BMPS, EMCS, SMCC), previously dissolved in acetone. The resulting derivatives, after isolation and drying, were mixed with the RGDC oligopeptide in a 1: 1 ratio in an aqueous medium at pH = 7, as a result of which compounds 1a-h were obtained, the structure of which was established using 1D and 2D NMR spectroscopy 1 H, 13 C, 31 P and MALDI-TOF / TOF spectrometry. The PEO coating was obtained on titanium (Grade 2) in a bipolar pulse mode in an aqueous solution containing Na 3 PO 4 ⋅12H 2 O and Ca (CH 3 COO) 2 . Samples of Ti coated with PEO-coating were kept in aqueous solutions 1a-h with a concentration of ~ 10 -3 M / L for 1 hour, and then dried.

Figure 00000005
Figure 00000005

Предлагаемый способ обладает следующими преимуществами: 1. Способ обеспечивает получение целевых продуктов - (RGDC)-замещенных ({[(2,5-диоксо-пирролидин-1-ил)алканоил]амино}-1-гидрокси-алкан- 1,1- диил)бисфосфоновых кислот, обладающих большей чистотой в сравнении с известным способом, в котором получаемые продукты содержат побочные продукты трансформации диоксана, используемого на этапе синтеза прекурсоров - коньюгатов аминобисфосфоновых кислот с малеимидосукцинимидными линкерами.The proposed method has the following advantages: 1. The method provides the receipt of target products - (RGDC) -substituted ({[(2,5-dioxo-pyrrolidin-1-yl) alkanoyl] amino} -1-hydroxy-alkane-1,1- diyl) bisphosphonic acids having a higher purity in comparison with the known method, in which the resulting products contain by-products of transformation of dioxane used at the stage of synthesis of precursors - conjugates of aminobisphosphonic acids with maleimidosuccinimide linkers.

2. Полученные соединения могут быть применены к ПЭО-модифицированному титану (Grade 2), когда как в известном способе использован более дорогой и менее доступный наноструктурированный титан.2. The obtained compounds can be applied to PEO-modified titanium (Grade 2), when, as in the known method, a more expensive and less accessible nanostructured titanium is used.

3. Показана перспективность применения новых производных 1a, 1c, 1g, 1h в сочетании с ПЭО - покрытием на Ti марки Grade 2 в качестве покрытий, улучшающих адгезию и пролиферацию фибробластов, мезенхимальных стволовых клеток и остеобластоподобных MG63, тогда как в известном способе показана применимость 1d в сочетании с ПЭО- покрытием на наноструктурированном титане марки Grade 4 с использованием фибробластов в качестве модели.3. It has been shown that the use of new derivatives 1a, 1c, 1g, 1h in combination with PEO-coating on Ti grade Grade 2 as coatings improving the adhesion and proliferation of fibroblasts, mesenchymal stem cells and osteoblast-like MG63 is shown, while the known method shows the applicability of 1d combined with PEO coating on nanostructured titanium Grade 4 using fibroblasts as a model.

Способ поясняется следующими примерами:The method is illustrated by the following examples:

Общая методика синтеза RGD-замещенных бифосфонатов. Бифосфонаты аминокислот (β-аланина, γ-аминомасляной и ε-аминокапроновой кислот) (0.04 ммоль) растворяют в 0.6 мл воды, рН раствора доводят до 8-9 0.1 N раствором NaOH (~ 150 мкл). При хорошем перемешивании к полученному раствору прибавляют эквимольное количество линкера ((2,5-диоксопирролидин-1-ил)-3-(2,5-диоксопиррол-1-ил)пропаноата (BMPS), (2,5-диоксопирролидин-1-ил) -6- (2,5-диоксопиррол-1-ил)гексаноата (EMCS) или (2,5-диоксопирролидин-1-ил) -4 - [(2,5-диоксопиррол-1-ил)метил]циклогексанкарбоксилата (SMCC)) (0.04 ммоль), растворенного в 0.6 мл ацетона. Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре в течение 15-30 мин, затем нейтрализуют до рН=7 0.1 N раствором HCl и концентрируют при пониженном давлении. Получают конъюгаты аминобисфосфоновых кислот с малеимидосукцинимидными линкерами 2a-g в виде белого порошка. Тетрапептид RGDC (0.01 ммоль) растворяют в 1.5 мл бидистиллированной воды, рН доводят до 7 добавлением 0.1 N р-ра NaOH. К раствору добавляют эквивалентное количество соединений 2a-g (0.01 ммоль). Реакционную массу перемешивают в течение 1-2 часов при 38-40°С, затем растворитель упаривают при пониженном давлении.General procedure for the synthesis of RGD-substituted bisphosphonates. Bisphosphonates of amino acids (β-alanine, γ-aminobutyric and ε-aminocaproic acids) (0.04 mmol) are dissolved in 0.6 ml of water, the pH of the solution is adjusted to 8-9 with 0.1 N NaOH solution (~ 150 μl). With good stirring, an equimolar amount of linker ((2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) -3- (2,5-dioxopyrrol-1-yl) propanoate (BMPS), (2,5-dioxopyrrolidine-1- yl) -6- (2,5-dioxopyrrol-1-yl) hexanoate (EMCS) or (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) -4 - [(2,5-dioxopyrrol-1-yl) methyl] cyclohexanecarboxylate (SMCC)) (0.04 mmol) dissolved in 0.6 ml acetone. The reaction mixture is stirred at room temperature for 15-30 minutes, then neutralized to pH = 7 with 0.1 N HCl solution and concentrated under reduced pressure. Conjugates of aminobisphosphonic acids with maleimidosuccinimide linkers 2a-g are obtained as a white powder. The tetrapeptide RGDC (0.01 mmol) is dissolved in 1.5 ml of bidistilled water, the pH is adjusted to 7 by adding 0.1 N NaOH solution. An equivalent amount of compounds 2a-g (0.01 mmol) is added to the solution. The reaction mass is stirred for 1-2 hours at 38-40 ° C, then the solvent is evaporated under reduced pressure.

Пример 1. Синтез соединения 1а.Example 1. Synthesis of compound 1а.

Бифосфонат (3-аланина (9.4 мг, 0.04 ммоль) растворяют в 0.6 мл воды, рН раствора доводят до 8-9 0.1 N раствором NaOH (~ 150 мкл). При хорошем перемешивании к полученному раствору прибавляют 10.7 мг линкера BMPS (0.04 ммоль), растворенного в 0.6 мл ацетона. Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре в течение 15-30 мин, затем нейтрализуют до рН=7 0.1 N раствором HCl и концентрируют при пониженном давлении. Получают конъюгат аминобисфосфоновой кислоты с малеимидосукцинимидным линкером 2а в виде белого порошка. Тетрапептид RGDC (4.5 мг, 0.01 ммоль) растворяют в 1.5 мл бидистиллированной воды, рН доводят до 7 добавлением 0.1 N р-ра NaOH. К раствору добавляют 3.9 мг соединения 2а (0.01 ммоль). Реакционную массу перемешивают в течение 1-2 часов при 38-40°С, затем растворитель упаривают при пониженном давлении. Получают вещество в виде белого порошка с выходом 8.1 мг, 96%.Bisphosphonate (3-alanine (9.4 mg, 0.04 mmol) is dissolved in 0.6 ml of water, the pH of the solution is adjusted to 8-9 with 0.1 N NaOH solution (~ 150 μl). With good stirring, 10.7 mg of the BMPS linker (0.04 mmol) is added to the resulting solution dissolved in 0.6 ml of acetone. The reaction mixture is stirred at room temperature for 15-30 min, then neutralized to pH = 7 with 0.1 N HCl solution and concentrated under reduced pressure. Aminobisphosphonic acid conjugate with maleimidosuccinimide linker 2a is obtained in the form of a white powder. Tetrapeptide RGDC (4.5 mg, 0.01 mmol) is dissolved in 1.5 ml of bidistilled water, the pH is adjusted to 7 by adding 0.1 N NaOH solution. 3.9 mg of compound 2а (0.01 mmol) is added to the solution. The reaction mixture is stirred for 1-2 hours at 38 -40 ° С, then the solvent was evaporated under reduced pressure to obtain a substance in the form of a white powder with a yield of 8.1 mg, 96%.

Пример 2. Синтез соединения 1с.Example 2. Synthesis of compound 1c.

Бифосфонат γ-аминомасляной кислоты (10 мг, 0.04 ммоль) растворяют в 0.6 мл воды, рН раствора доводят до 8-9 0.1 N раствором NaOH (~ 150 мкл). При хорошем перемешивании к полученному раствору прибавляют 10.7 мг линкера BMPS (0.04 ммоль), растворенного в 0.6 мл ацетона. Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре в течение 15-30 мин, затем нейтрализуют до рН=7 0.1 N раствором HCl и концентрируют при пониженном давлении. Получают конъюгат аминобисфосфоновой кислоты с малеимидосукцинимидным линкером 2с в виде белого порошка. Тетрапептид RGDC (4.5 мг, 0.01 ммоль) растворяют в 1.5 мл бидистиллированной воды, рН доводят до 7 добавлением 0.1 N р-ра NaOH. К раствору добавляют 4 мг соединения 2с (0.01 ммоль). Реакционную массу перемешивают в течение 1-2 часов при 38-40°С, затем растворитель упаривают при пониженном давлении. Получают вещество в виде белого порошка с выходом 8.3 мг, 97%.Γ-Aminobutyric acid bisphosphonate (10 mg, 0.04 mmol) is dissolved in 0.6 ml of water, the pH of the solution is adjusted to 8-9 with 0.1 N NaOH solution (~ 150 μl). With good stirring, 10.7 mg of BMPS linker (0.04 mmol), dissolved in 0.6 ml of acetone, is added to the resulting solution. The reaction mixture is stirred at room temperature for 15-30 minutes, then neutralized to pH = 7 with 0.1 N HCl solution and concentrated under reduced pressure. A conjugate of aminobisphosphonic acid with maleimidosuccinimide linker 2c is obtained in the form of a white powder. The tetrapeptide RGDC (4.5 mg, 0.01 mmol) is dissolved in 1.5 ml of bidistilled water, the pH is adjusted to 7 by adding 0.1 N NaOH solution. To the solution was added 4 mg of compound 2с (0.01 mmol). The reaction mass is stirred for 1-2 hours at 38-40 ° C, then the solvent is evaporated under reduced pressure. The substance was obtained in the form of a white powder with a yield of 8.3 mg, 97%.

Пример 3. Синтез соединения 1h.Example 3. Synthesis of compound 1h.

Бифосфонат ε-аминокапроновой кислоты (11.1 мг, 0.04 ммоль) растворяют в 0.6 мл воды, рН раствора доводят до 8-9 0.1 N раствором NaOH (~ 150 мкл). При хорошем перемешивании к полученному раствору прибавляют 13.4 мг линкера SMCC (, 0.04 ммоль), растворенного в 0.6 мл ацетона. Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре в течение 15-30 мин, затем нейтрализуют до рН=7 0.1 N раствором HCl и концентрируют при пониженном давлении. Получают конъюгат аминобисфосфоновой кислоты с малеимидосукцинимидным линкером 2h в виде белого порошка. Тетрапептид RGDC (4.5 мг, 0.01 ммоль) растворяют в 1.5 мл бидистиллированной воды, рН доводят до 7 добавлением 0.1 N р-ра NaOH. К раствору добавляют 5.0 мг соединения 2h (0.01 ммоль). Реакционную массу перемешивают в течение 1-2 часов при 38-40°С, затем растворитель упаривают при пониженном давлении. Получают вещество в виде белого порошка с выходом 9.3 мг, 98%. Спектральные характеристики 2a-g, 1a-g.Bisphosphonate of ε-aminocaproic acid (11.1 mg, 0.04 mmol) is dissolved in 0.6 ml of water, the pH of the solution is adjusted to 8-9 with 0.1 N NaOH solution (~ 150 μl). With good stirring, 13.4 mg of the SMCC linker (, 0.04 mmol), dissolved in 0.6 ml of acetone, are added to the resulting solution. The reaction mixture is stirred at room temperature for 15-30 minutes, then neutralized to pH = 7 with 0.1 N HCl solution and concentrated under reduced pressure. A conjugate of aminobisphosphonic acid with maleimidosuccinimide linker 2h is obtained in the form of a white powder. The tetrapeptide RGDC (4.5 mg, 0.01 mmol) is dissolved in 1.5 ml of bidistilled water, the pH is adjusted to 7 by adding 0.1 N NaOH solution. Compound 2h (5.0 mg) (0.01 mmol) was added to the solution. The reaction mass is stirred for 1-2 hours at 38-40 ° C, then the solvent is evaporated under reduced pressure. The substance was obtained in the form of a white powder with a yield of 9.3 mg, 98%. Spectral characteristics 2a-g, 1a-g.

Соединение 2а (BMPS-β). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 1.93-2.09 (м, 2Н, С2Н2), 2.42 (т, 3J=6.5 Гц, 2Н, С5Н2), 3.35 (т, 3J=7.8 Гц, 2Н, C3H2), 3.71 (т, 3J=6.0 Гц, 2Н, С6Н2), 6.78 (с, НС=СН). Спектр ЯМР 13С (D2O): 32.61 (С2), 34.37 (С6), 34.77 (С5), 35.57 (т, 3JC-P=7.8 Гц, С6), 72.87 (т, 1JC-P=133.7 Гц, С1), 134.43 (C8), 172.65 (С4), 173.01 (С7). Спектр ЯМР 31Р (D2O): 17.68. Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z 446.093 [M+Na+K]+, 468.063 [M+2Na+K]+, расч. для C10H16N2O10P2 386.189.Compound 2а (BMPS-β). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 1.93-2.09 (m, 2H, C 2 H 2 ), 2.42 (t, 3 J = 6.5 Hz, 2H, C 5 H 2 ), 3.35 (t, 3 J = 7.8 Hz, 2H, C 3 H 2 ), 3.71 (t, 3 J = 6.0 Hz, 2H, C 6 H 2 ), 6.78 (s, HC = CH). 13 С NMR spectrum (D 2 O): 32.61 (С 2 ), 34.37 (С 6 ), 34.77 (С 5 ), 35.57 (t, 3 J CP = 7.8 Hz, С 6 ), 72.87 (t, 1 J CP = 133.7 Hz, C 1 ), 134.43 (C 8 ), 172.65 (C 4 ), 173.01 (C 7 ). 31 P NMR spectrum (D 2 O): 17.68. Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z 446.093 [M + Na + K] + , 468.063 [M + 2Na + K] + , calc. for C 10 H 16 N 2 O 10 P 2 386.189.

Соединение 2b (EMCS-β). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 1.13-1.24 (м, 2Н, С7Н2), 1.43-1.57 (м, 4Н, С6Н2, С8Н2), 1.98-2.13 (м, 2Н, С2Н2), 2.14 (т, 3J=7.4 Гц, 2Н, С5Н2), 3.35-3.44 (м, 2Н, С3Н2), 3.42 (т, 3J=7.0 Гц, 2Н, С9Н2), 6.75 (с, 2Н, НС=СН). Спектр ЯМР 13С (D2O): 24.81 (С6), 25.41 (С7), 27.28 (С8), 32.76 (С2), 35.49 (С3), 35.74 (С5), 37.43 (С9), 72.93 (С1), 134.27 (С11), 173.42 (С10), 176.46 (С4). Спектр ЯМР 31Р (D2O): 17.74. Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z 428.086 [М]+, расч. для C13H22N2O10P2 428.269.Compound 2b (EMCS-β). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 1.13-1.24 (m, 2H, C 7 H 2 ), 1.43-1.57 (m, 4H, C 6 H 2 , C 8 H 2 ), 1.98-2.13 (m, 2H , C 2 H 2 ), 2.14 (t, 3 J = 7.4 Hz, 2H, C 5 H 2 ), 3.35-3.44 (m, 2H, C 3 H 2 ), 3.42 (t, 3 J = 7.0 Hz, 2H , C 9 H 2 ), 6.75 (s, 2H, HC = CH). 13 С NMR spectrum (D 2 O): 24.81 (С 6 ), 25.41 (С 7 ), 27.28 (С 8 ), 32.76 (С 2 ), 35.49 (С 3 ), 35.74 (С 5 ), 37.43 (С 9 ), 72.93 (C 1 ), 134.27 (C 11 ), 173.42 (C 10 ), 176.46 (C 4 ). 31 P NMR spectrum (D 2 O): 17.74. Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z 428.086 [М] + , calc. for C 13 H 22 N 2 O 10 P 2 428.269.

Соединение 2с (BMPS-γ). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 1.63-1.76 (м, 2Н, С3Н2), 1.77-1.89 (м, 2Н, С2Н2), 2.42 (т, 3J=6.4 Гц, 2Н, С6Н2), 3.06 (т, 3J=6.8 Гц, 2Н, С4Н2), 3.71 (т, 3J=6.6 Гц, 2Н, С7Н2), 6.78 (с, НС=СН). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.18 (т, 3JC-P=6.8 Гц, С3), 31.03 (С2), 34.46 (С6), 34.70 (С7), 40.14 (С4), 73.78 (т, 1JC-P=134.8 Гц, С1), 134.47 (С9), 172.66 (С8), 173.37 (С5). Спектр ЯМР 31Р (D2O): 18.20. Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z 400.080 [М]+, расч. для C11H18N2O10P2 400.215.Compound 2c (BMPS-γ). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 1.63-1.76 (m, 2H, C 3 H 2 ), 1.77-1.89 (m, 2H, C 2 H 2 ), 2.42 (t, 3 J = 6.4 Hz, 2H, C 6 H 2 ), 3.06 (t, 3 J = 6.8 Hz, 2H, C 4 H 2 ), 3.71 (t, 3 J = 6.6 Hz, 2H, C 7 H 2 ), 6.78 (s, HC = CH) ... 13 С NMR spectrum (D 2 O): 23.18 (t, 3 J CP = 6.8 Hz, С 3 ), 31.03 (С 2 ), 34.46 (С 6 ), 34.70 (С 7 ), 40.14 (С 4 ), 73.78 (t, 1 J CP = 134.8 Hz, С 1 ), 134.47 (С 9 ), 172.66 (С 8 ), 173.37 (С 5 ). 31 P NMR spectrum (D 2 O): 18.20. Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z 400.080 [М] + , calc. for C 11 H 18 N 2 O 10 P 2 400.215.

Соединение 2d (EMCS-γ). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 1.12-1.28 (м, 2Н, С8Н2), 1.41-1.58 (м, 4Н, С7Н2, С9Н2), 1.66-1.80 (м, 2Н, С3Н2), 1.80-1.95 (м, 2Н, С2Н2), 2.14 (т, 3J=7.5 Гц, 2Н, С6Н2), 3.11 (т, 3J=6.8 Гц, 2Н, С4Н2), 3.42 (т, 3J=6.9 Гц, 2Н, С10Н2), 6.76 (с, 2Н, НС=СН). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.36 (С3), 24.87 (С7), 25.26 (С8), 27.43 (С9), 31.06 (С2), 35.61 (С6), 37.34 (С10), 39.98 (С4), 73.81 (т, 1JC-P=134.1 Гц, С1), 134.26 (С12), 173.41 (С11), 176.80 (С5). Спектр ЯМР 31Р (D2O): 18.21. Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z 440.322 [М-2Н]+, расч. для C14H24N2O10P2 442.295.Compound 2d (EMCS-γ). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 1.12-1.28 (m, 2H, C 8 H 2 ), 1.41-1.58 (m, 4H, C 7 H 2 , C 9 H 2 ), 1.66-1.80 (m, 2H , C 3 H 2 ), 1.80-1.95 (m, 2H, C 2 H 2 ), 2.14 (t, 3 J = 7.5 Hz, 2H, C 6 H 2 ), 3.11 (t, 3 J = 6.8 Hz, 2H , C 4 H 2 ), 3.42 (t, 3 J = 6.9 Hz, 2H, C 10 H 2 ), 6.76 (s, 2H, HC = CH). 13 С NMR spectrum (D 2 O): 23.36 (С 3 ), 24.87 (С 7 ), 25.26 (С 8 ), 27.43 (С 9 ), 31.06 (С 2 ), 35.61 (С 6 ), 37.34 (С 10 ), 39.98 (C 4 ), 73.81 (t, 1 J CP = 134.1 Hz, C 1 ), 134.26 (C 12 ), 173.41 (C 11 ), 176.80 (C 5 ). 31 P NMR spectrum (D 2 O): 18.21. Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z 440.322 [М-2Н] + , calc. for C 14 H 24 N 2 O 10 P 2 442.295.

Соединение 2е (BMPS-ε). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 1.11-1.22 (м, 2Н, С4Н2), 1.32-1.43 (м, 2Н, С5Н2), 1.42-1.56 (м, 2Н, С3Н2), 1.76-1.91 (м, 2Н, С2Н2), 2.41 (т, 3J=6.0 Гц, 2Н, C8H2), 3.04 (т, 3J=6.8 Гц, 2Н, С6Н2), 3.71 (т, 3J=6.4 Гц, 2Н, С9Н2), 6.82 (с, 2Н, С11Н2). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.23 (т, 3JC-P=5.8 Гц, С3), 27.00 (С4), 27.97 (С5), 33.56 (С2), 34.55 (С9), 34.83 (C8), 39.41 (С6), 74.18 (с, 1JC-P=134.5 Гц, С1), 134.53 (С11), 172.60 (С10), 173.21 (С7). Спектр ЯМР 31P (D2O): 18.50. Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z 428.086 [М]+, расч. для C13H22N2O10P2 442.295.Compound 2e (BMPS-ε). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 1.11-1.22 (m, 2H, C 4 H 2 ), 1.32-1.43 (m, 2H, C 5 H 2 ), 1.42-1.56 (m, 2H, C 3 H 2 ), 1.76-1.91 (m, 2H, C 2 H 2 ), 2.41 (t, 3 J = 6.0 Hz, 2H, C 8 H 2 ), 3.04 (t, 3 J = 6.8 Hz, 2H, C 6 H 2 ), 3.71 (t, 3 J = 6.4 Hz, 2H, C 9 H 2 ), 6.82 (s, 2H, C 11 H 2 ). 13 С NMR spectrum (D 2 O): 23.23 (t, 3 J CP = 5.8 Hz, С 3 ), 27.00 (С 4 ), 27.97 (С 5 ), 33.56 (С 2 ), 34.55 (С 9 ), 34.83 (C 8 ), 39.41 (C 6 ), 74.18 (s, 1 J CP = 134.5 Hz, C 1 ), 134.53 (C 11 ), 172.60 (C 10 ), 173.21 (C 7 ). NMR 31 P (D 2 O): 18.50. Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z 428.086 [М] + , calc. for C 13 H 22 N 2 O 10 P 2 442.295.

Соединение 2f (EMCS-ε). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 1.13-1.21 (м, 2Н, С10Н2), 1.20-1.31 (м, 2Н, С4Н2), 1.38-1.52 (м, 2Н, С5Н2), 1.44-1.57 (м, 6Н, С3Н2, С9Н2, С11Н2), 1.78-1.92 (м, 2Н, С2Н2), 2.13 (т, 3J=7.2 Гц, 2Н, С8Н2), 3.09 (т, 3J=6.7 Гц, 2Н, С6Н2), 3.42 (т, 3J=6.8 Гц, 2Н, С12Н2), 6.76 (с, 2Н, С14Н2). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.23 (т, 3JC-P=6.0 Гц, C3), 24.90 (С9), 25.33 (С10), 26.92 (С4), 27.26 (С11), 28.12 (С5), 33.55 (С2), 35.57 (С8), 37.46 (С12), 39.29 (С6), 74.21 (т, 1JC-P=133.6 Гц, С1), 134.27 (С14), 173.41(С13), 176.66 (С7). Спектр ЯМР 31Р (D2O): 18.52. Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z: 470.391 [М]+, расч. для C16H28N2O10P2 470.348.Compound 2f (EMCS-ε). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 1.13-1.21 (m, 2H, C 10 H 2 ), 1.20-1.31 (m, 2H, C 4 H 2 ), 1.38-1.52 (m, 2H, C 5 H 2 ), 1.44-1.57 (m, 6H, C 3 H 2 , C 9 H 2 , C 11 H 2 ), 1.78-1.92 (m, 2H, C 2 H 2 ), 2.13 (t, 3 J = 7.2 Hz, 2H, C 8 H 2 ), 3.09 (t, 3 J = 6.7 Hz, 2H, C 6 H 2 ), 3.42 (t, 3 J = 6.8 Hz, 2H, C 12 H 2 ), 6.76 (s, 2H, C 14 H 2 ). 13 С NMR spectrum (D 2 O): 23.23 (t, 3 J CP = 6.0 Hz, C 3 ), 24.90 (С 9 ), 25.33 (С 10 ), 26.92 (С 4 ), 27.26 (С 11 ), 28.12 (C 5 ), 33.55 (C 2 ), 35.57 (C 8 ), 37.46 (C 12 ), 39.29 (C 6 ), 74.21 (t, 1 J CP = 133.6 Hz, C 1 ), 134.27 (C 14 ), 173.41 (C 13 ), 176.66 (C 7 ). 31 P NMR spectrum (D 2 O): 18.52. Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z: 470.391 [М] + , calc. for C 16 H 28 N 2 O 10 P 2 470.348.

Соединение 2g (SMCC-γ). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 0.86-1.00, 1.60-1.71 (м, 4Н, С8Н2), 1.16-1.34, 1.71-1.81 (м, 4Н, С7Н2), 1.48-1.65 (м, 1Н, С9Н), 1.64-1.78 (м, 2Н, С3Н2), 1.80-1.92 (м, 2Н, С2Н2), 2.06-2.16 (м, 1Н, С6Н), 3.10 (т, 3J=6.7 Гц, 2Н, С4Н2), 3.28 (д, 3J=7.0 Гц, 2Н, С10Н2), 6.75 (с, 2Н, СН=СН). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.46 (т, 3JC-P=6.2 Гц, С3), 28.33 (С7), 29.14 (С8), 31.15 (С2), 36.05 (С9), 39.95 (С4), 43.47 (С10), 44.86 (С6), 73.83 (т, 1JC-P=132.3, С1), 134.17 (С12), 173.58 (С11), 179.68 (С5). Спектр ЯМР 31Р (D2O): 18.25.Compound 2g (SMCC-γ). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 0.86-1.00, 1.60-1.71 (m, 4H, C 8 H 2 ), 1.16-1.34, 1.71-1.81 (m, 4H, C 7 H 2 ), 1.48-1.65 ( m, 1H, C 9 H), 1.64-1.78 (m, 2H, C 3 H 2 ), 1.80-1.92 (m, 2H, C 2 H 2 ), 2.06-2.16 (m, 1H, C 6 H), 3.10 (t, 3 J = 6.7 Hz, 2H, C 4 H 2 ), 3.28 (d, 3 J = 7.0 Hz, 2H, C 10 H 2 ), 6.75 (s, 2H, CH = CH). 13 C NMR spectrum (D 2 O): 23.46 (t, 3 J CP = 6.2 Hz, C 3 ), 28.33 (C 7 ), 29.14 (C 8 ), 31.15 (C 2 ), 36.05 (C 9 ), 39.95 (C 4 ), 43.47 (C 10 ), 44.86 (C 6 ), 73.83 (t, 1 J CP = 132.3, C 1 ), 134.17 (C 12 ), 173.58 (C 11 ), 179.68 (C 5 ). 31 P NMR spectrum (D 2 O): 18.25.

Соединение 2h (SMCC-ε). Спектр ЯМР 1H (D2O): 0.86-1.00, 1.61-1.70 (м, 4Н, С10Н2), 1.20-1.30 (м, 2Н, С4Н2), 1.23-1.34, 1.70-1.80 (м, 2Н, С9Н2), 1.38-1.52 (м, 2Н, С5Н2), 1.44-1.56 (м, 2Н, С3Н2), 1.48-1.64 (м, 1Н, С8Н), 1.77-1.90 (м, 2Н, С2Н2), 2.04-2.16 (м, 1Н, С8Н), 3.09 (т, 3J=6.8 Гц, 2Н, С6Н2), 3.28 (д, 3J=7.3 Гц, 2Н, С12Н2), 6.75 (с, 2Н, СН=СН). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.40 (т, 3JC-P=5.8 Гц, С3), 26.90 (С4), 28.20 (С9), 28.34 (С5), 29.14 (С10), 33.73 (С2), 36.04 (С11), 39.18 (С6), 43.46 (С12), 44.78 (С8), 74.26 (т, 1JC-P=131.3 Гц, С1), 134.18 (С14), 173.58 (С13), 179.56 (С7). Спектр ЯМР 31Р (D2O) 18.60. Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z: 499.066 [М+3Н]+, расч. для C18H30N2O10P2 496.137.Compound 2h (SMCC-ε). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 0.86-1.00, 1.61-1.70 (m, 4H, C 10 H 2 ), 1.20-1.30 (m, 2H, C 4 H 2 ), 1.23-1.34, 1.70-1.80 ( m, 2H, C 9 H 2 ), 1.38-1.52 (m, 2H, C 5 H 2 ), 1.44-1.56 (m, 2H, C 3 H 2 ), 1.48-1.64 (m, 1H, C 8 H) , 1.77-1.90 (m, 2H, C 2 H 2 ), 2.04-2.16 (m, 1H, C 8 H), 3.09 (t, 3 J = 6.8 Hz, 2H, C 6 H 2 ), 3.28 (d, 3 J = 7.3 Hz, 2H, C 12 H 2 ), 6.75 (s, 2H, CH = CH). 13 C NMR spectrum (D 2 O): 23.40 (t, 3 J CP = 5.8 Hz, C 3 ), 26.90 (C 4 ), 28.20 (C 9 ), 28.34 (C 5 ), 29.14 (C 10 ), 33.73 (C 2 ), 36.04 (C 11 ), 39.18 (C 6 ), 43.46 (C 12 ), 44.78 (C 8 ), 74.26 (t, 1 J CP = 131.3 Hz, C 1 ), 134.18 (C 14 ), 173.58 (C 13 ), 179.56 (C 7 ). 31 P NMR spectrum (D 2 O) 18.60. Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z: 499.066 [М + 3Н] + , calc. for C 18 H 30 N 2 O 10 P 2 496.137.

Соединение 1a (RGDC-BMPS-β). Спектр ЯМР 1H (D2O): 1.55-1.68 (м, 2Н, С23Н2), 1.74-1.84 (м, 2Н, С22Н2), 1.96-2.10 (м, 2Н, С2Н2), 2.38-2.45 (м, 2Н, С5Н2), 2.52 (дд, 3J=8.4 Гц, 2J=16.0 Гц, 1Н, С16НН), 2.66 (дд, 3J=4.9 Гц, 2J=16.0 Гц, 1Н, C16HH), 2.94 (дд, 3J=8.5 Гц, 2J=14.0 Гц, 2Н, С11Н2), 3.11-3.20 (м, 3Н, С24Н2, C11HH), 3.31-3.43 (м, 2Н, С3Н2), 3.70 (т, 3J=7.0 Гц, 2Н, С6Н2), 3.70-3.80 (м, 1H, С21Н), 3.87 (д, 1Н, 2J=16.9 Гц, C19HH), 4.02 (д, 2J=16.9 Гц, 1Н, С19НН), 4.40 (дд, 3J=4.1 Гц, 3J=8.5 Гц, 1Н, С12Н), 4.58-4.70 (м, 1Н, С15Н). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.77 (C23), 29.49 (С22), 32.97 (С2), 34.79 (С5), 35.84 (С6), 36.07 (С3), 38.21 (С16), 39.95 (С11), 40.59 (С24), 42.48 (19), 51.39 (С15), 53.20 (С21), 54.39 (С12), 156.76 (С25), 170.81 (C18), 172.54 (С14), 172.64 (С4), 173.82 (С20), 176.43 (С13), 178.03 (С17), 178.91 (С7, С10). Спектр ЯМР 31Р (D2O): 17.93. Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z 836.169 [M+H], расч. для C25H43N9O17P2S 835.671.Compound 1a (RGDC-BMPS-β). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 1.55-1.68 (m, 2H, C 23 H 2 ), 1.74-1.84 (m, 2H, C 22 H 2 ), 1.96-2.10 (m, 2H, C 2 H 2 ), 2.38-2.45 (m, 2H, C 5 H 2 ), 2.52 (dd, 3 J = 8.4 Hz, 2 J = 16.0 Hz, 1H, C 16 HH), 2.66 (dd, 3 J = 4.9 Hz, 2 J = 16.0 Hz, 1H, C 16 HH), 2.94 (dd, 3 J = 8.5 Hz, 2 J = 14.0 Hz, 2H, C 11 H 2 ), 3.11-3.20 (m, 3H, C 24 H 2 , C 11 HH), 3.31-3.43 (m, 2H, C 3 H 2 ), 3.70 (t, 3 J = 7.0 Hz, 2H, C 6 H 2 ), 3.70-3.80 (m, 1H, C 21 H), 3.87 (d, 1H, 2 J = 16.9 Hz, C 19 HH), 4.02 (d, 2 J = 16.9 Hz, 1H, C 19 HH), 4.40 (dd, 3 J = 4.1 Hz, 3 J = 8.5 Hz, 1H , C 12 H), 4.58-4.70 (m, 1H, C 15 H). 13 C NMR spectrum (D 2 O): 23.77 (C 23 ), 29.49 (C 22 ), 32.97 (C 2 ), 34.79 (C 5 ), 35.84 (C 6 ), 36.07 (C 3 ), 38.21 (C 16 ), 39.95 (C 11 ), 40.59 (C 24 ), 42.48 ( 19 ), 51.39 (C 15 ), 53.20 (C 21 ), 54.39 (C 12 ), 156.76 (C 25 ), 170.81 (C 18 ), 172.54 (C 14 ), 172.64 (C 4 ), 173.82 (C 20 ), 176.43 (C 13 ), 178.03 (C 17 ), 178.91 (C 7 , C 10 ). 31 P NMR spectrum (D 2 O): 17.93. Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z 836.169 [M + H], calc. for C 25 H 43 N 9 O 17 P 2 S 835.671.

Соединение 1b (RGDC-EMCS-β). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 1.15-1.30 (м, 2Н, С7Н2), 1.43-1.53 (м, 4Н, С6Н2, С8Н2), 1.55-1.63 (м, 2Н, С26Н2), 1.60-1.76 (м, 2Н, С25Н2), 1.98-2.03 (м, 2Н, С2Н2), 2.05-2.25 (м, 2Н, С5Н2), 2.53 (дд, 3J=8.3 Гц, 2J=15.9 Гц, 1H, C19HH), 2.66 (дд, 3J=4.9 Гц, 2J=15.9 Гц, 1Н, С19НН), 2.93 (дд, 3J=8.6 Гц, 2J=14.0 Гц, 1Н, С14НН), 3.17 (дд, 3J=4.1 Гц, 2J=14.0 Гц, 1Н, C14HH), 3.11-3.18 (м, 2Н, С27Н2), 3.36-3.46 (м, 4Н, С3Н2, С9Н2), 3.47-3.57 (м, 1Н, С24Н), 3.86 (д, 2J=16.8 Гц, 1Н, С22НН), 4.00 (д, 2J=16.8 Гц, 1Н, C22HH), 4.40 (дд, 3J=4.1 Гц, 3J=8.6 Гц, 1Н, С15Н), 4.58-4.76 (м, 1Н, C18H). Спектр ЯМР 13С (D2O): 24.00 (С26), 25.55 (С7), 25.83 (С6), 26.78 (С8), 30.72 (С25), 33.66 (С2), 35.64 (С5), 35.88 (С3), 38.23 (С19), 39.11 (С9), 39.79 (С14), 40.76 (С27), 42.45 (С22), 51.37 (С18), 53.84 (С24), 54.34 (С15), 156.75 (С28), 170.02 (С22), 172.59 (С17), 176.46 (С4, С16, С23), 178.03 (С20), 179.50 (С10, С13). Спектр ЯМР 31P(D2O): 17.95.Compound 1b (RGDC-EMCS-β). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 1.15-1.30 (m, 2H, C 7 H 2 ), 1.43-1.53 (m, 4H, C 6 H 2 , C 8 H 2 ), 1.55-1.63 (m, 2H , C 26 H 2 ), 1.60-1.76 (m, 2H, C 25 H 2 ), 1.98-2.03 (m, 2H, C 2 H 2 ), 2.05-2.25 (m, 2H, C 5 H 2 ), 2.53 (dd, 3 J = 8.3 Hz, 2 J = 15.9 Hz, 1H, C 19 HH), 2.66 (dd, 3 J = 4.9 Hz, 2 J = 15.9 Hz, 1H, C 19 HH), 2.93 (dd, 3 J = 8.6 Hz, 2 J = 14.0 Hz, 1H, C 14 HH), 3.17 (dd, 3 J = 4.1 Hz, 2 J = 14.0 Hz, 1H, C 14 HH), 3.11-3.18 (m, 2H, C 27 H 2 ), 3.36-3.46 (m, 4H, C 3 H 2 , C 9 H 2 ), 3.47-3.57 (m, 1H, C 24 H), 3.86 (d, 2 J = 16.8 Hz, 1H, C 22 HH), 4.00 (d, 2 J = 16.8 Hz, 1H, C 22 HH), 4.40 (dd, 3 J = 4.1 Hz, 3 J = 8.6 Hz, 1H, C 15 H), 4.58-4.76 (m, 1H, C 18 H). 13 C NMR spectrum (D 2 O): 24.00 (C 26 ), 25.55 (C 7 ), 25.83 (C 6 ), 26.78 (C 8 ), 30.72 (C 25 ), 33.66 (C 2 ), 35.64 (C 5 ), 35.88 (C 3 ), 38.23 (C 19 ), 39.11 (C 9 ), 39.79 (C 14 ), 40.76 (C 27 ), 42.45 (C 22 ), 51.37 (C 18 ), 53.84 (C 24 ), 54.34 (C 15 ), 156.75 (C 28 ), 170.02 (C 22 ), 172.59 (C 17 ), 176.46 (C 4 , C 16 , C 23 ), 178.03 (C 20 ), 179.50 (C 10 , C 13 ) ... 31 P NMR spectrum (D 2 O): 17.95.

Соединение 1c (RGDC-BMPS-γ). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 1.58-1.70 (м, 2Н, С24Н2), 1.66-1.77 (м, 2Н, С3Н2), 1.80-1.91 (м, 2Н, С2Н2), 1.85-1.94 (м, 2Н, С23Н2), 2.40-2.46 (м, 2Н, С6Н2), 2.62-2.84 (м, 2Н, С17Н2), 2.98 (дд, 3J=8.3 Гц, 2J=14.0 Гц, 1Н, C12HH), 3.01-3.12 (м, 2Н, С4Н2), 3.10-3.20 (м, 1Н, С12НН), 3.14-3.20 (м, 2Н, С25Н2), 3.68-3.75 (м, 2Н, С7Н2), 3.85-3.97 (м, 1Н, С20НН), 3.98-4.08 (м, 2Н, С20НН), 3.99-4.09 (м, 1Н, С22Н), 4.39-4.46 (м, 1Н, С13Н), 4.66-4.73 (м, 1Н, С16Н). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.22 (С3), 23.46 (С24), 27.84 (С23), 31.01 (С2), 33.62 (С6), 35.82 (С7), 36.60 (С17), 40.14 (С12), 40.32 (С4, С25), 42.31 (С20), 50.53 (С16), 52.82 (С22), 54.21 (С13), 156.76 (С26), 169.98 (С19), 172.01 (С15, С21), 172.89 (С5), 175.97 (С14), 176.14 (С18), 178.31 (C8, С11). Спектр ЯМР 31Р (D2O): 18.17. Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z 849.15 [М]+, расч. для C26H45N9O17P2S 849.698.Compound 1c (RGDC-BMPS-γ). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 1.58-1.70 (m, 2H, C 24 H 2 ), 1.66-1.77 (m, 2H, C 3 H 2 ), 1.80-1.91 (m, 2H, C 2 H 2 ), 1.85-1.94 (m, 2H, C 23 H 2 ), 2.40-2.46 (m, 2H, C 6 H 2 ), 2.62-2.84 (m, 2H, C 17 H 2 ), 2.98 (dd, 3 J = 8.3 Hz, 2 J = 14.0 Hz, 1H, C 12 HH), 3.01-3.12 (m, 2H, C 4 H 2 ), 3.10-3.20 (m, 1H, C 12 HH), 3.14-3.20 (m, 2H, C 25 H 2 ), 3.68-3.75 (m, 2H, C 7 H 2 ), 3.85-3.97 (m, 1H, C 20 HH), 3.98-4.08 (m, 2H, C 20 HH), 3.99- 4.09 (m, 1H, C 22 H), 4.39-4.46 (m, 1H, C 13 H), 4.66-4.73 (m, 1H, C 16 H). 13 C NMR spectrum (D 2 O): 23.22 (C 3 ), 23.46 (C 24 ), 27.84 (C 23 ), 31.01 (C 2 ), 33.62 (C 6 ), 35.82 (C 7 ), 36.60 (C 17 ), 40.14 (C 12 ), 40.32 (C 4 , C 25 ), 42.31 (C 20 ), 50.53 (C 16 ), 52.82 (C 22 ), 54.21 (C 13 ), 156.76 (C 26 ), 169.98 (C 19 ), 172.01 (C 15 , C 21 ), 172.89 (C 5 ), 175.97 (C 14 ), 176.14 (C 18 ), 178.31 (C 8 , C 11 ). 31 P NMR spectrum (D 2 O): 18.17. Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z 849.15 [М] + , calc. for C 26 H 45 N 9 O 17 P 2 S 849.698.

Соединение 1d (RGDC-EMCS-γ). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 1.16-1.31 (м, 2Н, С8Н2), 1.38-1.55 (м, 4Н, С7Н2, С9Н2), 1.53-1.67 (м, 2Н, С27Н2), 1.61-1.77 (м, 2Н, С2бН2), 1.66-1.77 (м, 2Н, С3Н2), 1.77-1.90 (м, 2Н, С2Н2), 2.05-2.20 (м, 2Н, С6Н2), 2.52 (дд, 3J=8.4 Гц, 2J=16.2 Гц, 1Н, С20НН), 2.65 (дд, 3J=4.8 Гц, 2J=16.2 Гц, 1Н, С20НН), 2.93 (дд, 3J=8.5 Гц, 2J=14.0 Гц, 1Н, C15HH), 3.16 (дд, 3J=4.0 Гц, 2J=14.0 Гц, 1Н, С15НН), 3.08-3.15 (м, 2Н, С4Н2), 3.10-3.18 (м, 2Н, С28Н2), 3.42 (т, 3J=7.0 Гц, 2Н, С10Н2), 3.54 (т, 3J=6.1 Гц, 1Н, С25Н), 3.86 (д, 3J=16.8 Гц, 1Н, C23HH), 4.01 (д, 3J=16.8 Гц, 1Н, C23HH), 4.40 (дд, 3J=4.0 Гц, 3J=8.5 Гц, 1Н, С16Н), 4.59-1.68 (м, 1Н, С19Н). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.73 (С3), 23.98 (С27), 25.45 (С8), 25.67 (С7), 27.73 (С9), 30.53 (С26), 31.48 (С2), 35.70 (С6), 38.20 (С20), 38.72 (С10), 39.75 (С4), 39.82 (С15), 40.71 (С28), 42.45 (С23), 51.37 (С19), 53.79 (С25), 54.32 (С16), 156.75 (С29), 170.95 (С22), 172.61 (С18), 175.85 (С17), 176.44 (С24), 176.96 (С5), 178.01 (С21). Спектр ЯМР 31Р (D2O): 18.24. Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z 910.533 [M-4H+Na]+, 926.498 [М-4Н+K]+, расч. для C29H51N9O17P2S 891.778.Compound 1d (RGDC-EMCS-γ). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 1.16-1.31 (m, 2H, C 8 H 2 ), 1.38-1.55 (m, 4H, C 7 H 2 , C 9 H 2 ), 1.53-1.67 (m, 2H , C 27 H 2 ), 1.61-1.77 (m, 2H, C 2b H 2 ), 1.66-1.77 (m, 2H, C 3 H 2 ), 1.77-1.90 (m, 2H, C 2 H 2 ), 2.05 -2.20 (m, 2H, C 6 H 2 ), 2.52 (dd, 3 J = 8.4 Hz, 2 J = 16.2 Hz, 1H, C 20 HH), 2.65 (dd, 3 J = 4.8 Hz, 2 J = 16.2 Hz, 1H, C 20 HH), 2.93 (dd, 3 J = 8.5 Hz, 2 J = 14.0 Hz, 1H, C 15 HH), 3.16 (dd, 3 J = 4.0 Hz, 2 J = 14.0 Hz, 1H, C 15 HH), 3.08-3.15 (m, 2H, C 4 H 2 ), 3.10-3.18 (m, 2H, C 28 H 2 ), 3.42 (t, 3 J = 7.0 Hz, 2H, C 10 H 2 ) , 3.54 (t, 3 J = 6.1 Hz, 1H, C 25 H), 3.86 (d, 3 J = 16.8 Hz, 1H, C 23 HH), 4.01 (d, 3 J = 16.8 Hz, 1H, C 23 HH ), 4.40 (dd, 3 J = 4.0 Hz, 3 J = 8.5 Hz, 1H, C 16 H), 4.59-1.68 (m, 1H, C 19 H). 13 C NMR spectrum (D 2 O): 23.73 (C 3 ), 23.98 (C 27 ), 25.45 (C 8 ), 25.67 (C 7 ), 27.73 (C 9 ), 30.53 (C 26 ), 31.48 (C 2 ), 35.70 (C 6 ), 38.20 (C 20 ), 38.72 (C 10 ), 39.75 (C 4 ), 39.82 (C 15 ), 40.71 (C 28 ), 42.45 (C 23 ), 51.37 (C 19 ), 53.79 (C 25 ), 54.32 (C 16 ), 156.75 (C 29 ), 170.95 (C 22 ), 172.61 (C 18 ), 175.85 (C 17 ), 176.44 (C 24 ), 176.96 (C 5 ), 178.01 ( C 21 ). 31 P NMR spectrum (D 2 O): 18.24. Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z 910.533 [M-4H + Na] + , 926.498 [M-4H + K] + , calc. for C 29 H 51 N 9 O 17 P 2 S 891.778.

Соединение 1e (RGDC-BMPS-ε). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 1.18-1.32 (м, 2Н, С4Н2), 1.38-1.46 (м, 2Н, С5Н2), 1.46-1.58 (м, 2Н, С3Н2), 1.57-1.72 (м, 2Н, С26Н2), 1.80-1.93 (м, 2Н, С2Н2), 1.84-1.96 (м, 2Н, C25H2), 2.42 (т, 3J=6.7 Гц, 2Н, C8H2), 2.72-2.89 (м, 2Н, С19Н2), 2.94-3.02 (м, 1Н, C14HH), 3.00-3.10 (м, 2Н, С6Н2), 3.10-3.20 (м, 1Н, С14НН), 3.14-3.20 (м, 2Н, С27Н2), 3.67-3.75 (м, 2Н, С9Н2), 3.87-4.09 (м, 2Н, С22Н2), 3.98-4.08 (м, 1Н, С24Н), 4.40-4.51 (м, 1Н, С15Н), 4.65-4.77 (м, 1Н, C18H). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.19 (С3), 23.42 (С26), 26.99 (С4), 27.89 (С5, С25), 33.58 (С2), 33.71 (С8), 35.75 (С9), 35.93 (С19), 39.50 (С6, С14), 40.35 (С27), 42.29 (С22), 50.32 (С18), 52.81 (С24), 53.88 (С15), 156.76 (С28), 170.08 (С23), 170.74 (С21), 171.93 (С17), 172.75 (С7), 174.32 (С16), 174.80 (С20), 177.71 (С10, С13). Спектр ЯМР 31Р (D2O): 18.65. Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z 879.242 [М+2Н]+, расч. для C28H49N9O17P2S 877.751.Compound 1e (RGDC-BMPS-ε). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 1.18-1.32 (m, 2H, C 4 H 2 ), 1.38-1.46 (m, 2H, C 5 H 2 ), 1.46-1.58 (m, 2H, C 3 H 2 ), 1.57-1.72 (m, 2H, C 26 H 2 ), 1.80-1.93 (m, 2H, C 2 H 2 ), 1.84-1.96 (m, 2H, C 25 H 2 ), 2.42 (t, 3 J = 6.7 Hz, 2H, C 8 H 2 ), 2.72-2.89 (m, 2H, C 19 H 2 ), 2.94-3.02 (m, 1H, C 14 HH), 3.00-3.10 (m, 2H, C 6 H 2 ), 3.10-3.20 (m, 1H, C 14 HH), 3.14-3.20 (m, 2H, C 27 H 2 ), 3.67-3.75 (m, 2H, C 9 H 2 ), 3.87-4.09 (m, 2H, C 22 H 2 ), 3.98-4.08 (m, 1H, C 24 H), 4.40-4.51 (m, 1H, C 15 H), 4.65-4.77 (m, 1H, C 18 H). 13 C NMR spectrum (D 2 O): 23.19 (C 3 ), 23.42 (C 26 ), 26.99 (C 4 ), 27.89 (C 5 , C 25 ), 33.58 (C 2 ), 33.71 (C 8 ), 35.75 (C 9 ), 35.93 (C 19 ), 39.50 (C 6 , C 14 ), 40.35 (C 27 ), 42.29 (C 22 ), 50.32 (C 18 ), 52.81 (C 24 ), 53.88 (C 15 ), 156.76 (C 28 ), 170.08 (C 23 ), 170.74 (C 21 ), 171.93 (C 17 ), 172.75 (C 7 ), 174.32 (C 16 ), 174.80 (C 20 ), 177.71 (C 10 , C 13 ) ... 31 P NMR spectrum (D 2 O): 18.65. Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z 879.242 [М + 2Н] + , calc. for C 28 H 49 N 9 O 17 P 2 S 877.751.

Соединение 1f (RGDC-EMCS-ε). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 1.15-1.30 (м, 4Н, С4Н2, С10Н2), 1.41-1.53 (м, 2Н, С5Н2), 1.42-1.50 (м, 2Н, С3Н2), 1.45-1.61 (м, 4Н, С9Н2, С11Н2), 1.54-1.65 (м, 2Н, С29Н2), 1.64-1.74 (м, 2Н, С28Н2), 1.74-1.90 (м, 2Н, С2Н2), 2.13 (т, 3J=7.4 Гц, 2Н, С8Н2), 2.48-2.72 (м, 2Н, С22Н2), 2.88-2.99 (м, 1Н, С17НН), 3.12-3.29 (м, 1Н, С17Н), 3.06-3.17 (м, 2Н, С6Н2), 3.10-3.18 (м, 2Н, С30Н2), 3.42 (т, 3J=7.10 Гц, 2Н, С12Н2), 3.45-3.52 (м, 1Н, С27Н), 3.82-3.92(м, 1Н, C25HH), 3.93-4.04 (м, 1Н, С25НН), 4.40 (дд, 3J=4.0 Гц, 3J=8.6 Гц, 1Н, С18Н), 4.56-4.72 (м, 1Н, С21Н). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.55 (т, 3JC-P=6.0 Гц, С3), 24.03 (С29), 25.48 (С9), 26.15 (С70), 26.36 (С4, С11), 30.89 (С28), 33.97 (С2), 35.61 (С8), 38.23 (С22), 38.94 (С72), 39.40 (С6, С17), 40.72 (С30), 42.40 (С25), 51.43 (С21), 53.93 (С27), 54.64 (С18), 74.37 (С1), 156.74 (С31), 171.03 (С24), 172.61 (С20), 177.92 (С23), 176.46 (С19), 176.56 (С7, С26), 180.08 (С13, С16). Спектр ЯМР 31Р (D2O): 18.71. Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z 920.398 [М+Н]+, расч. для C31H55N9O17P2S 919.831.Compound 1f (RGDC-EMCS-ε). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 1.15-1.30 (m, 4H, C 4 H 2 , C 10 H 2 ), 1.41-1.53 (m, 2H, C 5 H 2 ), 1.42-1.50 (m, 2H , C 3 H 2 ), 1.45-1.61 (m, 4H, C 9 H 2 , C 11 H 2 ), 1.54-1.65 (m, 2H, C 29 H 2 ), 1.64-1.74 (m, 2H, C 28 H 2 ), 1.74-1.90 (m, 2H, C 2 H 2 ), 2.13 (t, 3 J = 7.4 Hz, 2H, C 8 H 2 ), 2.48-2.72 (m, 2H, C 22 H 2 ), 2.88-2.99 (m, 1H, C 17 HH), 3.12-3.29 (m, 1H, C 17 H), 3.06-3.17 (m, 2H, C 6 H 2 ), 3.10-3.18 (m, 2H, C 30 H 2 ), 3.42 (t, 3 J = 7.10 Hz, 2H, C 12 H 2 ), 3.45-3.52 (m, 1H, C 27 H), 3.82-3.92 (m, 1H, C 25 HH), 3.93- 4.04 (m, 1H, C 25 HH), 4.40 (dd, 3 J = 4.0 Hz, 3 J = 8.6 Hz, 1H, C 18 H), 4.56-4.72 (m, 1H, C 21 H). 13 C NMR spectrum (D 2 O): 23.55 (t, 3 J CP = 6.0 Hz, C 3 ), 24.03 (C 29 ), 25.48 (C 9 ), 26.15 (C 70 ), 26.36 (C 4 , C 11 ), 30.89 (C 28 ), 33.97 (C 2 ), 35.61 (C 8 ), 38.23 (C 22 ), 38.94 (C 72 ), 39.40 (C 6 , C 17 ), 40.72 (C 30 ), 42.40 (C 25 ), 51.43 (C 21 ), 53.93 (C 27 ), 54.64 (C 18 ), 74.37 (C 1 ), 156.74 (C 31 ), 171.03 (C 24 ), 172.61 (C 20 ), 177.92 (C 23 ) , 176.46 (C 19 ), 176.56 (C 7 , C 26 ), 180.08 (C 13 , C 16 ). 31 P NMR spectrum (D 2 O): 18.71. Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z 920.398 [М + Н] + , calc. for C 31 H 55 N 9 O 17 P 2 S 919.831.

Соединение 1g (RGDC-SMCC-γ). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 0.83-0.99 (м, 2Н, С8НН), 1.19-1.30 (м, 2Н, C7HH), 1.37-1.50 (м, 1Н, С9Н), 1.52-1.65 (м, 2Н, С27Н2), 1.55-1.72 (м, 2Н, С26Н2), 1.67-1.77 (м, 2Н, С3Н2), 1.68-1.77 (м, 2Н, C8HH), 1.77-1.85 (м, 2Н, C7HH), 1.78-1.87 (м, 2Н, С2Н2), 1.96-2.06 (м, 1Н, С6Н), 2.53 (дд, 3J=8.2 Гц, 2J=16.0 Гц, 1Н, С22НН), 2.66 (дд, 3J=4.8 Гц, 2J=16.0 Гц, 1Н, С22НН), 2.99-3.05 (м, 2Н, С10Н2), 2.93 (дд, 3J=8.6 Гц, 2J=14.0 Гц, 1Н, С15НН), 3.17 (дд, 3J=4.1 Гц, 2J=14.0 Гц, 1Н, С15НН), 3.08-3.12 (м, 2Н, С4Н2), 3.11-3.16 (м, 2Н, С28Н2), 3.41 (т, 3J=6.0 Гц, 1Н, С25Н), 3.85 (д, 2J=16.8 Гц, 1Н, C23HH), 4.00 (д, 2J=16.8 Гц, 1H, C23HH), 4.40 (дд, 3J=4.1 Гц, 3J=8.6 Гц, 1Н, С16Н), 4.63 (дд, 3J=4.8 Гц, 3J=8.2 Гц, 1H, С19Н). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.86 (С3), 24.13 (С27), 29.25 (С7), 29.53 (С8), 29.56 (С2), 31.25 (С26), 36.71 (С9), 38.27 (С20), 39.71 (С15), 40.17 (С4), 40.83 (С28), 42.45 (С23), 45.41 (С10), 46.98 (С6), 51.36 (С19), 54.06 (С25), 54.32 (С16), 156.74 (С29), 171.11 (С22), 172.63 (С18), 176.49 (С17), 177.91 (С21), 178.01 (С24). Масс-спектр MALDI-TOF/TOF m/z 941.786 [M+H+Na]+, расч. для C31H53N9O17P2S 917.275.Compound 1g (RGDC-SMCC-γ). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 0.83-0.99 (m, 2H, C 8 HH), 1.19-1.30 (m, 2H, C 7 HH), 1.37-1.50 (m, 1H, C 9 H), 1.52 -1.65 (m, 2H, C 27 H 2 ), 1.55-1.72 (m, 2H, C 26 H 2 ), 1.67-1.77 (m, 2H, C 3 H 2 ), 1.68-1.77 (m, 2H, C 8 HH), 1.77-1.85 (m, 2H, C 7 HH), 1.78-1.87 (m, 2H, C 2 H 2 ), 1.96-2.06 (m, 1H, C 6 H), 2.53 (dd, 3 J = 8.2 Hz, 2 J = 16.0 Hz, 1Н, С 22 НН), 2.66 (dd, 3 J = 4.8 Hz, 2 J = 16.0 Hz, 1Н, С 22 НН), 2.99-3.05 (m, 2Н, С 10 Н 2 ), 2.93 (dd, 3 J = 8.6 Hz, 2 J = 14.0 Hz, 1Н, С 15 НН), 3.17 (dd, 3 J = 4.1 Hz, 2 J = 14.0 Hz, 1Н, С 15 НН), 3.08-3.12 (m, 2H, C 4 H 2 ), 3.11-3.16 (m, 2H, C 28 H 2 ), 3.41 (t, 3 J = 6.0 Hz, 1H, C 25 H), 3.85 (d, 2 J = 16.8 Hz, 1H, C 23 HH), 4.00 (d, 2 J = 16.8 Hz, 1H, C 23 HH), 4.40 (dd, 3 J = 4.1 Hz, 3 J = 8.6 Hz, 1H, C 16 H ), 4.63 (dd, 3 J = 4.8 Hz, 3 J = 8.2 Hz, 1H, C 19 H). 13 C NMR spectrum (D 2 O): 23.86 (C 3 ), 24.13 (C 27 ), 29.25 (C 7 ), 29.53 (C 8 ), 29.56 (C 2 ), 31.25 (C 26 ), 36.71 (C 9 ), 38.27 (C 20 ), 39.71 (C 15 ), 40.17 (C 4 ), 40.83 (C 28 ), 42.45 (C 23 ), 45.41 (C 10 ), 46.98 (C 6 ), 51.36 (C 19 ), 54.06 (C 25 ), 54.32 (C 16 ), 156.74 (C 29 ), 171.11 (C 22 ), 172.63 (C 18 ), 176.49 (C 17 ), 177.91 (C 21 ), 178.01 (C 24 ). Mass spectrum MALDI-TOF / TOF m / z 941.786 [M + H + Na] + , calc. for C 31 H 53 N 9 O 17 P 2 S 917.275.

Соединение 1h (RGDC-SMCC-ε). Спектр ЯМР 1Н (D2O): 0.84-1.00 (м, 2Н, С10НН), 1.18-1.32 (м, 2Н, С9НН), 1.20-1.30 (м, 2Н, С4Н2), 1.37-1.52 (м, 1H, С11Н), 1.41-1.52 (м, 2Н, С5Н2), 1.48-1.56 (м, 2Н, С3Н2), 1.55-1.66 (м, 2Н, С29Н2), 1.66-1.80 (м, 2Н, C10HH), 1.66-1.82 (м, 2Н, С28Н2), 1.79-1.85 (м, 2Н, C9HH), 1.77-1.87 (м, 2Н, С2Н2), 1.96-2.06 (м, 1Н, С8Н), 2.53 (дд, 3J=8.4 Гц, 2J=16.0 Гц, 1Н, C22HH), 2.67 (дд, 3J=5.0 Гц, 2J=16.0 Гц, 1Н, C22HH), 2.99-3.05 (м, 2Н, С12Н2), 2.94 (дд, 3J=8.5 Гц, 2J=14.0 Гц, Ш, С17НН), 3.18 (дд, 3J=4.1 Гц, 2J=14.0 Гц, 1Н, С17НН), 3.10 (т, 3J=6.7 Гц, 2Н, С6Н2), 3.13-3.19 (м, 2Н, С30Н2), 3.58-3.66 (м, 1Н, С27Н), 3.87 (д, 2J=16.9 Гц, 1Н, С25НН), 4.02 (д, 2J=16.9 Гц, 1Н, С25НН), 4.41 (дд, 3J=4.1 Гц, 3J=8.5 Гц, 1Н, C18H), 4.64 (дд, 3J=50 Гц, 3J=8.4 Гц, 1Н, С21Н). Спектр ЯМР 13С (D2O): 23.61 (С3), 23.92 (С29), 27.01 (С4), 28.29 (С5), 29.26 (С9), 29.54 (С10), 30.19 (C28), 34.22 (С2), 36.77 (С11), 38.25 (С22), 39.26 (С6), 39.86 (С17), 40.69 (С30), 42.48 (С25), 45.45 (С12), 46.92 (С8), 51.38 (С21), 53.67 (С27), 54.36 (С18), 156.75 (С31), 172.59 (С20), 175.44 (С26), 176.46 (С19), 178.03 (С23), 179.85 (С7). Спектр ЯМР 31Р (D2O): 18.77.Compound 1h (RGDC-SMCC-ε). 1 H NMR spectrum (D 2 O): 0.84-1.00 (m, 2H, C 10 HH), 1.18-1.32 (m, 2H, C 9 HH), 1.20-1.30 (m, 2H, C 4 H 2 ), 1.37-1.52 (m, 1H, C 11 H), 1.41-1.52 (m, 2H, C 5 H 2 ), 1.48-1.56 (m, 2H, C 3 H 2 ), 1.55-1.66 (m, 2H, C 29 H 2 ), 1.66-1.80 (m, 2H, C 10 HH), 1.66-1.82 (m, 2H, C 28 H 2 ), 1.79-1.85 (m, 2H, C 9 HH), 1.77-1.87 (m , 2H, C 2 H 2 ), 1.96-2.06 (m, 1H, C 8 H), 2.53 (dd, 3 J = 8.4 Hz, 2 J = 16.0 Hz, 1H, C 22 HH), 2.67 (dd, 3 J = 5.0 Hz, 2 J = 16.0 Hz, 1H, C 22 HH), 2.99-3.05 (m, 2H, C 12 H 2 ), 2.94 (dd, 3 J = 8.5 Hz, 2 J = 14.0 Hz, W, С 17 НН), 3.18 (dd, 3 J = 4.1 Hz, 2 J = 14.0 Hz, 1Н, С 17 НН), 3.10 (t, 3 J = 6.7 Hz, 2Н, С 6 Н 2 ), 3.13-3.19 ( m, 2H, C 30 H 2 ), 3.58-3.66 (m, 1H, C 27 H), 3.87 (d, 2 J = 16.9 Hz, 1H, C 25 HH), 4.02 (d, 2 J = 16.9 Hz, 1Н, С 25 НН), 4.41 (dd, 3 J = 4.1 Hz, 3 J = 8.5 Hz, 1Н, C 18 H), 4.64 (dd, 3 J = 50 Hz, 3 J = 8.4 Hz, 1Н, С 21 H). 13 C NMR spectrum (D 2 O): 23.61 (C 3 ), 23.92 (C 29 ), 27.01 (C 4 ), 28.29 (C 5 ), 29.26 (C 9 ), 29.54 (C 10 ), 30.19 (C 28 ), 34.22 (C 2 ), 36.77 (C 11 ), 38.25 (C 22 ), 39.26 (C 6 ), 39.86 (C 17 ), 40.69 (C 30 ), 42.48 (C 25 ), 45.45 (C 12 ), 46.92 (C 8 ), 51.38 (C 21 ), 53.67 (C 27 ), 54.36 (C 18 ), 156.75 (C 31 ), 172.59 (C 20 ), 175.44 (C 26 ), 176.46 (C 19 ), 178.03 ( C 23 ), 179.85 (C 7 ). 31 P NMR spectrum (D 2 O): 18.77.

Получение покрытия методом плазменно-электролитического оксидирования (ПЭО). ПЭО покрытие получали на титане (Grade 2) в биполярном импульсном режиме в водном растворе, содержащем 20 г/л Na3PO4⋅12H2O и 25 г/л Са(СН3СОО)2 при температуре 20°С. Длительность обработки составляла 10 минут. Амплитуда положительного импульса напряжения составляла 470 В, отрицательного 40 В, частота 300 Гц. Длительность положительного импульса составляла 1,7 мс, отрицательного 0,87. Импульсы разделялись паузами в 0,38 мс. Образцы перед покрытием полировались до шероховатости Ra<0,15 мкм и промывались в изопропиловом спирте в ультразвуковой ванне в течение 3 минут. Полученное оксидное покрытие имеет толщину 20-30 мкм, пористость 8-10% и шероховатость поверхности Ra 0,8-1,2 мкм.Preparation of a coating by plasma electrolytic oxidation (PEO). The PEO coating was obtained on titanium (Grade 2) in a bipolar pulse mode in an aqueous solution containing 20 g / L Na 3 PO 4 ⋅12H 2 O and 25 g / L Ca (CH 3 COO) 2 at a temperature of 20 ° C. The processing time was 10 minutes. The amplitude of the positive voltage pulse was 470 V, negative 40 V, the frequency was 300 Hz. The duration of the positive pulse was 1.7 ms, the negative one was 0.87. The pulses were separated by pauses of 0.38 ms. Before coating, the samples were polished to a roughness Ra <0.15 μm and washed in isopropyl alcohol in an ultrasonic bath for 3 minutes. The resulting oxide coating has a thickness of 20-30 microns, a porosity of 8-10% and a surface roughness of Ra 0.8-1.2 microns.

Исследование биологической активности соединений. Образцы Ti с ПЭО покрытием подвергали ультразвуковой обработке в течение 10 мин в 95% этаноле и промывали деионизированной водой, сушили на воздухе и стерилизовали автоклавированием при 134°С. Для нанесения органического покрытия образцы помещали в чашку Петри с 10 М раствором RGD-производного, который предварительно стерилизовали пропусканием через фильтр СА 0,22 мкм. Через 1 час образцы высушивали на воздухе. Затем образцы помещали в 24-луночный планшет с обработанной для адгезии клеток поверхностью (SPL) для культивирования клеток. Фибробласты (ФЛЭЧ-104) из легких эмбриона человека, и МСК из жировой ткани человека (Биолот) и остеобластоподобные клетки остеосаркомы человека MG63 (ЦКП "Коллекция культур клеток позвоночных») культивировали в модифицированной среде Дульбекко (DMEM) (Sigma), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) (Biowest), в культуральных флаконах 25 см (SPL) в увлажненной атмосфере 5% СО2. Среда менялась два раза в неделю. После достижения монослоя клетки отделяли с использованием раствора трипсина/Версена 1:1(Биолот) и подсчитывали с использованием автоматического счетчика клеток ТС20 (BioRad). В каждую лунку планшета с образцами помещали 16-10 клеток в 0,8 мл культуральной среды. Клетки в лунках с образцами Ti без органического покрытия обрабатывали как отрицательные контрольные (NC). Лунки планшета без образцов использовали в качестве положительного контроля. Планшеты для культивирования инкубировали в течение 7 суток в стандартных условиях (37°С, 5% СО2).Study of the biological activity of compounds. The PEO coated Ti samples were sonicated for 10 min in 95% ethanol and washed with deionized water, dried in air, and sterilized by autoclaving at 134 ° C. To apply an organic coating, the samples were placed in a Petri dish with a 10 M solution of the RGD derivative, which was pre-sterilized by passing through a 0.22 μm CA filter. After 1 hour, the samples were dried in air. Samples were then plated in a 24-well cell adhesion treated surface (SPL) plate for cell culture. Fibroblasts (FLECH-104) from human embryonic lungs, and MSCs from human adipose tissue (Biolot) and osteoblast-like cells of human osteosarcoma MG63 (Center for Collective Use Vertebrate Cell Cultures) were cultured in modified Dulbecco's medium (DMEM) (Sigma) containing 10% fetal bovine serum (FBS) (Biowest), in 25 cm culture flasks (SPL) in a humidified atmosphere of 5% CO 2. The medium was changed twice a week. After reaching the monolayer, the cells were separated using a trypsin / Versene solution 1: 1 (Biolot) and counted using a TC20 automatic cell counter (BioRad). 16-10 cells in 0.8 ml culture medium were placed in each well of the sample plate. Cells in the wells with Ti samples without organic coating were treated as negative controls (NC). no samples were used as a positive control The culture plates were incubated for 7 days under standard conditions (37 ° C, 5% CO 2 ).

Пролиферативную активность клеток определяли с помощью набора EZ4U (Biomedica), модификации теста МТТ, который оценивает метаболическую активность клеток, коррелирующую с количеством живых клеток клеток. Три образца каждого типа переносили после инкубации в другой 24-луночный планшет с 0,8 мл свежей среды DMEM. Затем к каждой лунке добавляли 80 мкл активированного раствора EZ4U и инкубировали при 37°С, 5% СО2 в течение 3,5 часов. После чего образцы извлекали и измеряли оптическое поглощение раствора с использованием микропланшетного ридера (Spark 10М, Tecan) при длине волны 450 нм с референсной длиной волны 620 нм. Вычисляли среднее значение и стандартное отклонение для оптической плотности относительно отрицательного контроля в %.Cell proliferative activity was determined using the EZ4U kit (Biomedica), a modification of the MTT test, which assesses the metabolic activity of cells, which correlates with the number of living cells in cells. Three samples of each type were transferred after incubation to another 24-well plate with 0.8 ml of fresh DMEM medium. Then, 80 μl of activated EZ4U solution was added to each well and incubated at 37 ° C, 5% CO 2 for 3.5 hours. Then the samples were removed and the optical absorption of the solution was measured using a microplate reader (Spark 10M, Tecan) at a wavelength of 450 nm with a reference wavelength of 620 nm. The mean and standard deviation of absorbance relative to the negative control was calculated in%.

Результаты in vitro исследования представлены на рис. 1-3. Значительное снижение адгезии и пролиферации мезенхимальных стволовых клеток наблюдалось при использовании длинноцепочечных производных, содержащих EMCS-линкер (1b,d,f), а также RGDC-BMPS-ε (производного бифосфоната аминокапроновой кислоты) (1е), тогда как SMCC-связанные продукты (1g,h) приводили к росту клеток на поверхности до 20% (рис. 1).The results of the in vitro study are shown in Fig. 1-3. A significant decrease in the adhesion and proliferation of mesenchymal stem cells was observed when using long-chain derivatives containing an EMCS linker (1b, d, f), as well as RGDC-BMPS-ε (a derivative of aminocaproic acid bisphosphonate) (1e), while SMCC-related products ( 1g, h) led to the growth of cells on the surface up to 20% (Fig. 1).

Значительное (на уровне 30%) увеличение степени пролиферации фибробластов наблюдалось в случае использования органических покрытий RGDC-BMPS-β (1а) и RGDC-BMPS-γ (1с) (рис. 2).A significant (at the level of 30%) increase in the degree of fibroblast proliferation was observed in the case of using organic coatings RGDC-BMPS-β (1a) and RGDC-BMPS-γ (1c) (Fig. 2).

Образец с нанесенным органическим покрытием на основе бифосфоната β-аланина с коротким BMPS- линкером и RGD (1а) также показал наилучшую адгезию остеобластоподобных клеток MG-63 через 7 дней, по сравнению с другими образцами (рис. 3). Производные, содержащие EMCS-линкер, RGDC-EMCS-β (1b) и RGDC-EMCS-γ (1d), приводили к снижению степени адгезии и пролиферации данного сорта клеток на поверхности.The sample coated with an organic coating based on β-alanine bisphosphonate with a short BMPS linker and RGD (1a) also showed the best adhesion of MG-63 osteoblast-like cells after 7 days compared to other samples (Fig. 3). Derivatives containing the EMCS-linker, RGDC-EMCS-β (1b) and RGDC-EMCS-γ (1d), led to a decrease in the degree of adhesion and proliferation of this cell type on the surface.

На основании исследования можно заключить, что RGD-функционализированные гибридные молекулы 1a, 1c, 1g, 1h могут быть перспективны в качестве органического покрытия для моделирования биологической активности ПЭО- модифицированной поверхности титановых имплантатов.Based on the study, it can be concluded that RGD-functionalized hybrid molecules 1a, 1c, 1g, 1h can be promising as an organic coating for modeling the biological activity of the PEO-modified surface of titanium implants.

Claims (4)

1. Способ получения Arg-Gly-Asp-Cys-(RGDC)-замещенных ({[(2,5-диоксо-пирролидин-1-ил)алканоил]амино}-1-гидроксиалкан-1,1-диил)бисфосфоновых кислот (1a-h):1. A method of obtaining Arg-Gly-Asp-Cys- (RGDC) -substituted ({[(2,5-dioxo-pyrrolidin-1-yl) alkanoyl] amino} -1-hydroxyalkane-1,1-diyl) bisphosphonic acids (1a-h):
Figure 00000006
Figure 00000006
 которые наносят путем физико-химической адсорбции из водных растворов с концентрацией ~10-3 М/л в течение 1 часа на титан (Grade 2) с неорганическим оксидированным пористым подслоем, полученным в ходе плазменно-электролитического оксидирования.which are applied by physical and chemical adsorption from aqueous solutions with a concentration of ~ 10 -3 M / l for 1 hour on titanium (Grade 2) with an inorganic oxidized porous sublayer obtained during plasma electrolytic oxidation. 2. Применение соединений 1a, 1c, 1g или 1h, полученных по п. 1, в качестве органических покрытий для моделирования биологической активности ПЭО-модифицированной поверхности титановых имплантатов, увеличивающих адгезию и пролиферацию мезенхимальных стволовых клеток, фибробластов и остеобластоподобных клеток MG-63.2. Use of compounds 1a, 1c, 1g or 1h, obtained according to claim 1, as organic coatings for modeling the biological activity of PEO-modified surfaces of titanium implants, which increase the adhesion and proliferation of mesenchymal stem cells, fibroblasts and MG-63 osteoblast-like cells.
RU2019131783A 2019-10-08 2019-10-08 Combined coatings based on biologically active rgd-functionalised aminoacid bisphosphonates and peo-sublayer for titanium RU2735649C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019131783A RU2735649C1 (en) 2019-10-08 2019-10-08 Combined coatings based on biologically active rgd-functionalised aminoacid bisphosphonates and peo-sublayer for titanium

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019131783A RU2735649C1 (en) 2019-10-08 2019-10-08 Combined coatings based on biologically active rgd-functionalised aminoacid bisphosphonates and peo-sublayer for titanium

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2735649C1 true RU2735649C1 (en) 2020-11-05

Family

ID=73398159

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019131783A RU2735649C1 (en) 2019-10-08 2019-10-08 Combined coatings based on biologically active rgd-functionalised aminoacid bisphosphonates and peo-sublayer for titanium

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2735649C1 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050147645A1 (en) * 1998-07-24 2005-07-07 Budny John A. Composition and method for bone regeneration
RU2519736C2 (en) * 2008-10-23 2014-06-20 Стеба Биотек С.А. Rgd-containing peptidomimetics and their application

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050147645A1 (en) * 1998-07-24 2005-07-07 Budny John A. Composition and method for bone regeneration
RU2519736C2 (en) * 2008-10-23 2014-06-20 Стеба Биотек С.А. Rgd-containing peptidomimetics and their application

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BEUVELOT J. et al, In vitro kinetic study of growth and miniralization of osteoblast-like cells (Sаos-2) on titanium surface coated with a RGD functionalized bisphosphonate. Journal Biomedical Materials Research, 2009, v. 90(2), p.873-881. *
PARFENOV E.V. et al., Surface functionalization via PEO peptide for nanostructured titanium implants and their in vitro assessment, Surface & Coating Technology, 25.10.2018, v. 357, p. 669-683. *
PARFENOV E.V. et al., Surface functionalization via PEO peptide for nanostructured titanium implants and their in vitro assessment, Surface & Coating Technology, 25.10.2018, v. 357, p. 669-683. BEUVELOT J. et al, In vitro kinetic study of growth and miniralization of osteoblast-like cells (Sаos-2) on titanium surface coated with a RGD functionalized bisphosphonate. Journal Biomedical Materials Research, 2009, v. 90(2), p.873-881. ХЛУСОВ И.А. и др., Модификация результатов биоинженерии костной ткани in vivo RGD пептидами, нанесенными на наноструктурированные кальцийфосфатные покрытия, Гений Ортопедии, 2009, номер 4, с. 25-30. *
ХЛУСОВ И.А. и др., Модификация результатов биоинженерии костной ткани in vivo RGD пептидами, нанесенными на наноструктурированные кальцийфосфатные покрытия, Гений Ортопедии, 2009, номер 4, с. 25-30. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Parfenov et al. Surface functionalization via PEO coating and RGD peptide for nanostructured titanium implants and their in vitro assessment
Hélary et al. A new approach to graft bioactive polymer on titanium implants: Improvement of MG 63 cell differentiation onto this coating
Phadke et al. Templated mineralization of synthetic hydrogels for bone-like composite materials: Role of matrix hydrophobicity
Anderson et al. Osteogenic differentiation of human mesenchymal stem cells directed by extracellular matrix-mimicking ligands in a biomimetic self-assembled peptide amphiphile nanomatrix
CA2509634C (en) Biocompatible hydrogel bone-like composites
Polini et al. Stable biofunctionalization of hydroxyapatite (HA) surfaces by HA-binding/osteogenic modular peptides for inducing osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells
Wang et al. In vitro culture and directed osteogenic differentiation of human pluripotent stem cells on peptides-decorated two-dimensional microenvironment
Negroiu et al. Biocompatibility evaluation of a novel hydroxyapatite-polymer coating for medical implants (in vitro tests)
US20140330392A1 (en) Scaffolds for tissues and uses thereof
Pawlik et al. Surface modification of nanoporous anodic titanium dioxide layers for drug delivery systems and enhanced SAOS-2 cell response
Liu et al. Phosphorylated chitosan hydrogels inducing osteogenic differentiation of osteoblasts via JNK and p38 signaling pathways
Park et al. Hydroxyapatite nanorod-modified sand blasted titanium disk for endosseous dental implant applications
RU2735649C1 (en) Combined coatings based on biologically active rgd-functionalised aminoacid bisphosphonates and peo-sublayer for titanium
US11364105B2 (en) Scaffolds for neural tissue and uses thereof
AU2002359715A8 (en) Implant coatings
Beuvelot et al. In vitro kinetic study of growth and mineralization of osteoblast‐like cells (Saos‐2) on titanium surface coated with a RGD functionalized bisphosphonate
CN110804104B (en) Cell membrane bionic surface modified bacterial cellulose and preparation method and application thereof
Fan et al. Surface properties of octacalcium phosphate nanocrystals are crucial for their bioactivities
Raptopoulos et al. Implant surface physicochemistry affects keratinocyte hemidesmosome formation
Amirabad et al. Preparation and characterization of TiO2‐coated polymerization of methyl methacrylate (PMMA) for biomedical applications: In vitro study
Wu et al. Photothermal extracellular matrix based nanocomposite films and their effect on the osteogenic differentiation of BMSCs
Jarolimova et al. Mesenchymal stem cell interaction with Ti 6 Al 4 V alloy pre-exposed to simulated body fluid
JP7102004B2 (en) Method for producing osteoblast mass using human iPS cells
JP6874953B2 (en) Method for Producing Human Dental Epithelial Cells and Human Dental Mesenchymal Cells from Human iPS Cells
Kuvyrkou et al. The influence of the morphology of titania and hydroxyapatite on the proliferation and osteogenic differentiation of human mesenchymal stem cells