RU2732010C1 - Способ прогнозирования тяжести течения ВЭБ-ассоциированного инфекционного мононуклеоза - Google Patents
Способ прогнозирования тяжести течения ВЭБ-ассоциированного инфекционного мононуклеоза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2732010C1 RU2732010C1 RU2020110429A RU2020110429A RU2732010C1 RU 2732010 C1 RU2732010 C1 RU 2732010C1 RU 2020110429 A RU2020110429 A RU 2020110429A RU 2020110429 A RU2020110429 A RU 2020110429A RU 2732010 C1 RU2732010 C1 RU 2732010C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ebv
- infectious mononucleosis
- severity
- expression
- patients
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области молекулярной биологии, медицины, в частности к инфекционным болезням. Раскрыт способ прогнозирования тяжести течения ВЭБ-ассоциированного инфекционного мононуклеоза (ИМ), отличающийся тем, что в лейкоцитах периферической крови пациентов с ВЭБ-ассоциированным инфекционным мононуклеозом детектируют экспрессию мРНК FPGS.NM_00018078 и PCNA.NM_002592 и при повышении уровней их экспрессии по сравнению со здоровыми донорами прогнозируют среднетяжелую, а при снижении - тяжелую форму течения заболевания. Изобретение обеспечивает прогнозирование течения ВЭБ-ИМ, что способствует своевременному проведению адекватной противовирусной и иммуномодулирующей терапии. 1 табл., 1 пр.
Description
Способ прогнозирования тяжести течения ВЭБ-ассоциированного инфекционного мононуклеоза
Изобретение относится к области медицины и к инфекционным болезням, касается способа прогнозирования течения инфекционного мононуклеоза, ассоциированного с вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ-ИМ), с помощью молекулярно-генетических маркеров и может быть использовано для оптимизации проводимой терапии.
Инфекционный мононуклеоз - вирусное заболевание, вызываемое представителями семейства Herpesviridae (чаще вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ), цитомегаловирусом (ЦМВ), вирусом герпеса человека 6 типа (ВГЧ6)), характеризующееся лихорадкой, лимфаденопатией, тонзиллитом, гепато - и спленомегалией, заложенностью носа, одутловатостью лица, хрипящим дыханием, голосом с носовым оттенком, высыпаниями на коже, лимфомоноцитозом, появлением атипичных мононуклеаров в периферической крови и др. Возникает как первичная инфекция у иммунокомпетентных и иммуносупрессированных пациентов или как реактивация инфекции у иммуносупрессированных больных. ВЭБ относится к группе гамма-герпесвирусов. Широкий тканевой тропизм, способность к пожизненной персистенции и латенции в организме инфицированного человека являются уникальными биологическими свойствами всех герпесвирусов [D.L Sitki-Green, R.Н. Edwards, М.M.Covington, N. Raab-Traub Biology of Epstein-Barr virus during infectious mononucleosis // J. Infect. Dis.- 2004, V. 189, №3.- P. 483-492.]. ВЭБ преимущественно поражает B-лимфоциты, проникая внутрь клетки через специфический рецептор CD21; вирусная ДНК постоянно присутствует в ядре в виде экстрахромосомной эписомы, вызывая постоянную пролиферацию лимфоцитов и их трансформацию в атипичные мононуклеары [Иванова В.В., Родионова В.В., Железникова Г.Ф. и др. Пролонгированная иммуносупрессия и возможная хронизация инфекции у детей с инфекционным мононуклеозом // Рос. вестн. перинатол. и педиат.- 2003. - №4. - С. 50-59.]. ВЭБ может также инфицировать клетки эпителия носоглотки и желудочно-кишечного тракта, эпителиоциты сосудов, Т-лимфоциты, нейтрофилы, дендритные клетки, которые имеют на своей поверхности рецептор CD21 [Боковой А.Г., Домрачева М.Е. Клиническое значение иммунологических показателей при инфекционном мононуклеозе у детей // Детск. инфекции. - 2006.-№3. - С. 18-23.]. ВЭБ оказывает двоякое действие на программированную гибель клеток (апоптоз): повышая выживаемость В-лимфоцитов, он одновременно вызывает гибель Т-клеток, макрофагов и нейтрофилов, что лежит в основе вирус-опосредованной иммуносупрессии. Кроме регуляции апоптоза и пролиферации инфицированных иммунокомпетентных клеток, ВЭБ способен модулировать иммунные реакции организма за счет экспрессии вирусных белков - аналогов интерлейкинов человека [Л.А. Ходак, О.А. Ржевская Современные особенности инфекционного мононуклеоза // Междунар. мед. журнал. - №2006. - С. 85.].
Основной целью терапии является не только купирование симптомов, но и перевод острой инфекции в латентную стадию и тем самым снижение риска развития хронической ВЭБ-инфекции и ассоциированных с нею лимфопролиферативных, онкологических и аутоиммунных заболеваний.
Подход к проведению противовирусной и иммуномодулирующей терапии должен учитывать тяжесть течения ИМ. Так, при легком течении не проводится противовирусная и иммунотропная терапия, при среднетяжелом течении (с тенденцией к затяжному течению и осложнениям) показана этиотропная терапия, больным с тяжелым течением рекомендуются глюкокортикостероиды. Применение иммуномодуляторов при тяжелом течении ВЭБ-ИМ следует считать нецелесообразным, так как их действие является неспецифичным, мало прогнозируемым и при развитии иммунопатологического гиперпролиферативного процесса может привести к непредсказуемым последствиям [Ю.Г. Притулина, В.В. Кунина, А.А. Монастырский, Т.Н. Малюткина, В.В. Малиновская, А.Н. Шувалов Новые подходы к терапии инфекционного мононуклеоза// Лечащий врач. - 2019. -№9. - С. 57-59.].
До настоящего времени нет четких критериев, позволяющих прогнозировать тяжесть течения ВЭБ-ИМ.
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является разработка способа прогнозирования тяжести течения ВЭБ-ИМ с применением молекулярно-генетических маркеров.
Технический результат, достигаемый изобретением, заключается в повышении точности прогнозирования тяжелого течения ВЭБ-ИМ, что способствует своевременному проведению адекватной противовирусной и иммуномодулирующей терапии.
Технический результат достигается тем, что в лейкоцитах периферической крови пациентов с ВЭБ-ИМ детектируют экспрессию мРНК FPGS.NM_00018078 и PCNA.NM_002592 и при повышении уровня их экспрессии по сравнению со здоровыми донорами прогнозируют среднетяжелую, а при снижении уровня экспрессии - тяжелую форму течения заболевания.
Молекулярно-генетические маркеры для прогнозирования тяжести течения ВЭБ-ИМ представляют собой матричные РНК (мРНК), продукты которых регулируют апоптоз, пролиферацию и дифференцировку иммунокомпетентных клеток.
мРНК гена FPGS (folylpolyglutamate synthase) кодирует фермент фолилполиглутаматсинтетазы, играющий центральную роль в установлении и поддержании цитозольной и митохондриальной концентрации фолилполиглутамата. Фермент необходим для регуляции гомеостаза фолата и выживания пролиферирующих клеток [Rosowsky A: Chemistry and biological activity of antifolates // Prog. Med. Chem.-1989, 26: 1- P. 252.]. Предположительно FPGS участвует в онкогенезе; снижение уровней его экспрессии наблюдали в опухолевых клеточных линиях, резистентных к антифолатам [Liani, Е. et al. Loss of folylpoly-gamma-glutamate synthetase activity is a dominant mechanism of resistance to polyglutamylation-dependent novel antifolates in multiple human leukemia sublines // Int. J. Cancer. - 2005. 103. - P 587-599.].
мРНК гена PCNA (proliferating cell nuclear antigen) кодирует белок, участвующий в регуляции гликолиза [S.N. Naryzhny, Н. Lee Proliferating cell nuclear antigen in the cytoplasm interacts with components of glycolysis and cancer // FEBS Lett. - 2010. №584. - P. 4292-4298.], синтеза ДНК и ее репарации, сборке хроматина и множества других процессов, сопровождающих деление клеток и апоптоз [V. Witko-Sarsat, J. Mocek, D. Bouayad, N. Tamassia et al. Proliferating cell nuclear antigen acts as a cytoplasmic platform controlling human neutrophil survival // J. Exp. Med. - 2010. 207(12). -P. 2631-2645.]. PCNA участвует в регуляции функций NK-клеток [В. Rosental, М. Brusilovsky, U. Hadad, D.Oz, et al. proliferating cell nuclear antigen is a novel inhibitory ligand for the natural cytotoxicity receptor NKp44 // J. Immunol. -2011.187(11). - P. 5693-5702.] и может служить маркером для определения степени агрессии опухолевого процесса, в частности, при раке желудка [В.Л. Чанг, А.А. Иванникова, И.В. Булычева, Н.А. Огнеруб Роль пролиферирующего ядерного антигена и р53 в опухолевом процессе при раке желудка // Вестник ТГУ. - 2015. - Т. 29, вып. 1. - С. 140-142.].
Сущность способа поясняется примером.
Пример. В исследование вошли дети и подростки в возрасте 6-17 лет с диагнозом «ВЭБ-инфекционный мононуклеоз». С помощью коммерческих тест-систем «ВектоВЭБ-VCA-IgM», «ВектоВЭБ-VCA-IgG», «ВектоННV-6-IgG», «ВектоЦМВ-IgM», «ВектоЦМВ-IgG» производства «Вектор-Бест» (Россия) в образцах сыворотки крови пациентов определяли наличие специфических антител к ВЭБ, ВГЧ6 и ЦМВ; с применением коммерческого набора для ПЦР в реальном времени «АмплиСенс EBV/CMV/HHV6-скрин-FL» (ЦНИИЭ, Россия) - наличие ДНК вирусов. На основании результатов тестирования отбирали пациентов с ВЭБ-ИМ, образцы сыворотки крови которых содержали антитела и ДНК к ВЭБ, но не к двум другим герпесвирусам (группа ВЭБ-ИМ, n=27, средний возраст 12 лет). Контроль составили образцы периферической крови, полученные от практически здоровых доноров сопоставимого возраста и пола (группа НОРМ, n=50, средний возраст 11 лет).
Определение уровня экспрессии маркерных мРНК. Анализ относительных уровней экспрессии мРНК FPGS.NM_00018078 и PCNA.NM_002592 провели с помощью технологии биочипов. В качестве материала использовали лейкоцитарную фракцию периферической крови, выделенную с применением раствора «Гемолитик» (ЦНИИЭ, Россия). Пул тотальной РНК выделяли с помощью набора «МАГНО-сорб» (ЦНИИЭ, Россия) и концентрировали смесью фенола и хлороформа в соотношении 1:1. Обратную транскрипцию тотальной РНК и амплификацию кДНК проводили с применением набора «Mint cDNA synthesis kit» («Евроген», Россия), при этом 3'-олиго-Т-праймер заменяли на содержащий Т7 промотор-олиго-Т-праймер («ДНК-синтез», Россия). Полученную кДНК транскрибировали с использованием Т7 РНК-полимеразы («Thermo Scientific)), ЕС), при этом добавляли биотинилированные УТФ («ДНК-синтез», Россия). Полученную меченую РНК гибридизовали на ДНК-биочип собственного дизайна, выполненный на базовой платформе «CustomArray Inc.» (США), содержащий набор зондов к детектируемым мРНК и генам, селекцию которых осуществляли согласно описанному ранее алгоритму [Солнцев Л.А., Старикова В.Д., Сахарнов Н.А., Князев Д.И., Уткин О.В. Стратегия подбора зондов для изучения совокупности мРНК участников рецептор-опосредованного сигналинга апоптоза // Молекулярная биология.- 2015. -Т. 49, №3.- С. 515-524.]. Считывание сигнала гибридизации целевой РНК на соответствующий зонд биочипа производили амперометрическим способом с применением устройства и программного обеспечения «ElectraSense» («CustomArray Inc.», США). Полученный сигнал рассматривали как относительный уровень экспрессии гена или транскрипта.
Провели сравнение уровней экспрессии мРНК FPGS.NM_00018078 и PCNA.NM_002592 у пациентов с ВЭБ-ИМ и здоровых доноров. В 18 образцах периферической крови пациентов с ВЭБ-ИМ выявили снижение уровней экспрессии исследованных мРНК, а в 9 - повышение уровней экспрессии. В первом случае прогнозировали тяжелое течения ВЭБ-ИМ, а во втором случае - среднетяжелое течение ВЭБ-ИМ. Прогноз подтвердили результатами лабораторных исследований крови: повышение уровня трансаминаз АсАт и АлАт (в 3-6 раза в 1-ой группе и в 1-3 раза во 2-ой группе по сравнению с донорами), содержание в крови атипичных мононуклеарных клеток (более 20% в 1-ой группе и 10-20% - во 2-ой группе), и клиническими признаками: размер поднижнечелюстных, околоушных и заднешейных лимфатических узлов (2,6-6,0 см в 1-ой группе и 1,5-2,5 см - во 2-ой группе). Результаты представлены в таблице.
Выявлено, что у пациентов с ВЭБ-ИМ уровни экспрессии мРНК FPGS.NM_00018078 и PCNA.NM_002592 изменялись по сравнению со здоровыми донорами, причем у пациентов с ВЭБ-ИМ паттерны экспрессии мРНК FPGS.NM_00018078 и PCNA.NM_002592 различались в зависимости от тяжести течения заболевания. У пациентов с тяжелым течением заболевания наблюдали снижение уровня экспрессии исследованных мРНК по сравнению с донорами, у пациентов со среднетяжелым течением -повышение.
Проведенные исследования показали, что паттерны изменения уровней экспрессии мРНК FPGS.NM_00018078 и PCNA.NM_002592 могут служить прогностическим признаком тяжести течения ВЭБ-ИМ.
Claims (1)
- Способ прогнозирования тяжести течения ВЭБ-ассоциированного инфекционного мононуклеоза, отличающийся тем, что в лейкоцитах периферической крови пациентов с ВЭБ-ассоциированным инфекционным мононуклеозом детектируют экспрессию мРНК FPGS.NM_00018078 и PCNA.NM_002592 и при повышении уровней их экспрессии по сравнению со здоровыми донорами прогнозируют среднетяжелую, а при снижении - тяжелую форму течения заболевания.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2020110429A RU2732010C1 (ru) | 2020-03-11 | 2020-03-11 | Способ прогнозирования тяжести течения ВЭБ-ассоциированного инфекционного мононуклеоза |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2020110429A RU2732010C1 (ru) | 2020-03-11 | 2020-03-11 | Способ прогнозирования тяжести течения ВЭБ-ассоциированного инфекционного мононуклеоза |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2732010C1 true RU2732010C1 (ru) | 2020-09-10 |
Family
ID=72421872
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2020110429A RU2732010C1 (ru) | 2020-03-11 | 2020-03-11 | Способ прогнозирования тяжести течения ВЭБ-ассоциированного инфекционного мононуклеоза |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2732010C1 (ru) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE69530380T2 (de) * | 1994-03-14 | 2003-11-27 | Biomerieux, Marcy-L'etoile | Retropeptide, antikörper dagegen und deren verwendungen in der impfung und in vitro diagnostik |
RU2471196C1 (ru) * | 2011-11-02 | 2012-12-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздравсоцразвития России) | Способ диагностики формы тяжести вызванного вирусом эпштейна-барр острого инфекционного мононуклеоза у детей |
RU2639596C1 (ru) * | 2017-02-07 | 2017-12-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ определения у взрослых степени тяжести инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна - Барр |
-
2020
- 2020-03-11 RU RU2020110429A patent/RU2732010C1/ru active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE69530380T2 (de) * | 1994-03-14 | 2003-11-27 | Biomerieux, Marcy-L'etoile | Retropeptide, antikörper dagegen und deren verwendungen in der impfung und in vitro diagnostik |
RU2471196C1 (ru) * | 2011-11-02 | 2012-12-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздравсоцразвития России) | Способ диагностики формы тяжести вызванного вирусом эпштейна-барр острого инфекционного мононуклеоза у детей |
RU2639596C1 (ru) * | 2017-02-07 | 2017-12-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ определения у взрослых степени тяжести инфекционного мононуклеоза, вызванного вирусом Эпштейна - Барр |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Rosowsky A. Chemistry and biological activity of antifolates // Prog. Med. Chem., 26:1, 1989, P. 252. * |
Rosowsky A. Chemistry and biological activity of antifolates // Prog. Med. Chem., 26:1, 1989, P. 252. Witko-Sarsat V. et al. Proliferating cell nuclear antigen acts as a cytoplasmic platform controlling human neutrophil survival // J. Exp. Med., 207(12), 2010, P. 2631-2645. * |
Witko-Sarsat V. et al. Proliferating cell nuclear antigen acts as a cytoplasmic platform controlling human neutrophil survival // J. Exp. Med., 207(12), 2010, P. 2631-2645. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Chang et al. | Microarray analysis identifies interferon-inducible genes and Stat-1 as major transcriptional targets of human papillomavirus type 31 | |
Bruns et al. | LGP2 synergy with MDA5 in RLR-mediated RNA recognition and antiviral signaling | |
Miller et al. | Human cytomegalovirus inhibits IFN-α-stimulated antiviral and immunoregulatory responses by blocking multiple levels of IFN-α signal transduction | |
Kis et al. | STAT6 signaling pathway activated by the cytokines IL-4 and IL-13 induces expression of the Epstein-Barr virus–encoded protein LMP-1 in absence of EBNA-2: Implications for the type II EBV latent gene expression in Hodgkin lymphoma | |
Ghafouri-Fard et al. | A review on the role of chemokines in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus | |
Munoz-Erazo et al. | Microarray analysis of gene expression in West Nile virus–infected human retinal pigment epithelium | |
Yue et al. | Downregulation of lncRNA ITSN1-2 correlates with decreased disease risk and activity of rheumatoid arthritis (RA), and reduces RA fibroblast-like synoviocytes proliferation and inflammation via inhibiting NOD2/RIP2 signaling pathway | |
Lares et al. | The human cytomegalovirus US27 gene product enhances cell proliferation and alters cellular gene expression | |
Hui-hui et al. | Recombinant HCMV UL128 expression and functional identification of PBMC-attracting activity in vitro | |
Young et al. | Modulation of the host environment by human cytomegalovirus with viral interleukin 10 in peripheral blood | |
Takei et al. | Decreased expression of signaling lymphocytic-activation molecule-associated protein (SAP) transcripts in T cells from patients with rheumatoid arthritis | |
Shen et al. | Human cytomegalovirus primase UL70 specifically interacts with cellular factor Snapin | |
Harvey et al. | Adenovirus-directed ocular innate immunity: the role of conjunctival defensin-like chemokines (IP-10, I-TAC) and phagocytic human defensin-α | |
De Falco et al. | Bovine Delta papillomavirus E5 oncoprotein interacts with TRIM25 and hampers antiviral innate immune response mediated by RIG-i-like receptors | |
Deng et al. | ALKBH5 expression could affect the function of T cells in systemic lupus erythematosus patients: a case-control study | |
RU2732010C1 (ru) | Способ прогнозирования тяжести течения ВЭБ-ассоциированного инфекционного мононуклеоза | |
Zhu et al. | Bone morphogenetic protein 1 targeting COL1A1 and COL1A2 to regulate the epithelial-mesenchymal transition process of colon cancer SW620 cells | |
Ji et al. | Hsa_circ_0008301 as a potential biomarker of disease activity for primary Sjogren's syndrome: Increased expression in peripheral blood of patients with primary Sjogren's syndrome | |
Prochnau et al. | Human cytomegalovirus induces MMP-1 and MMP-3 expression in aortic smooth muscle cells | |
Ding et al. | Expression of long non‑coding RNA NONHSAT227927. 1 and its effect on the JAK2/STAT3 signaling pathway and inflammation in patients with ankylosing spondylitis | |
EP3359690A1 (en) | METHODS AND KITS FOR PREDICTION AND DIAGNOSIS OF HUMAN CYTOMEGALOVIRUS CONGENITAL (hCMV) TRANSMISSION | |
Hoshida et al. | Regulation of gene expression in mouse trophoblast cells by interferon-gamma | |
Li et al. | Interaction between Ras and Bcl2L12 in B cells suppresses IL-10 expression | |
Fang et al. | Reactivation of Epstein-Barr virus in SFTSV infected patients | |
Luganini et al. | New cell‐based indicator assays for the detection of human cytomegalovirus infection and screening of inhibitors of viral immediate‐early 2 protein activity |