RU2728925C1

RU2728925C1 - Diagnostic technique for congenital viral foetal disease

Info

Publication number: RU2728925C1
Application number: RU2019108627A
Authority: RU
Inventors: Валерий Васильевич Васильев; Александра Александровна Гринева; Наталья Васильевна Рогозина; Галина Михайловна Ушакова; Ригина Анатольевна Иванова; Наталья Викторовна Скрипченко
Priority date: 2019-03-25
Filing date: 2019-03-25
Publication date: 2020-08-03

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely to infectious diseases, and can be used for diagnosing congenital viral foetal disease. That is ensured by measuring the specific IgM and IgG antibodies in blood of the pregnant women, and if the specific IgM value is more than the sensitivity threshold, the viral load is quantitatively determined by the polymerase chain reaction method more than twice. If its value is more than 10⁴ copies in ml of blood serum, ultrasound monitoring of the foetus is performed in a mode of screening with interval of 2 weeks, and if observing the visualized signs of the foetus on the gestation period of 20 weeks and more, a cordocentesis is performed with subsequent sampling of umbilical blood for PCR analysis. If observing visual signs of foetal affection, detection of IgM to viruses in combination with positive results of PCR in blood of pregnant and umbilical blood of foetus for 20 weeks and more, congenital viral foetal disease is diagnosed.

EFFECT: method enables preventing the birth of children with severe organ disturbances and reducing infant mortality from infectious diseases suffered in utero by timely prenatal diagnostics.

1 cl, 2 ex

Description

Данное изобретение относится к области медицины, точнее к инфекционным заболеваниям, и может быть использовано в клинической практике для комплексной диагностики врожденных вирусных инфекций в антенатальном периоде с целью предупреждения развития заболевания плода и новорожденного.This invention relates to the field of medicine, more precisely to infectious diseases, and can be used in clinical practice for the comprehensive diagnosis of congenital viral infections in the antenatal period in order to prevent the development of diseases of the fetus and newborn.

Врожденные инфекции (ВИ) являются актуальной мировой медико-социальной проблемой в виду повсеместного распространения, высокого уровня инвалидизации и перинатальной смертности. Истинная частота ВИ до настоящего времени не установлена, но, по данным ряда авторов, распространенность указанной инфекционной патологии в человеческой популяции может достигать 10% и выше от числа живорожденных детей. В то время как частота выявления ВИ в патологоанатомической практике колеблется от 2 до 65,5%. Разноречивые статистические показатели по ВИ объясняются трудностями этиологической верификации данной патологии во всем мире.Congenital infections (VI) are an urgent global medical and social problem due to the widespread distribution, high level of disability and perinatal mortality. The true frequency of VI has not yet been established, but, according to a number of authors, the prevalence of this infectious pathology in the human population can reach 10% and more of the number of live births. At the same time, the frequency of detection of HI in pathological practice ranges from 2 to 65.5%. The contradictory statistical indicators for VI are explained by the difficulties of etiological verification of this pathology throughout the world.

Основу современной диагностики рисков развития ВИ у женщин и новорожденных составляют различные методы лабораторной идентификации маркеров инфекционных заболеваний (серологические, молекулярные, культуральные). В настоящее время известно около 50 инфекционных агентов, которые могут быть переданы от матери плоду с развитием ВИ, среди которых доминируют вирусные инфекции. Однако в стандарт наблюдения за беременными в РФ не входит обследование на такие распространенные в популяции вирусные инфекции, как: герпесвирусная инфекция 1,2 типа (ВПГ 1,2) и цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ), кроме острого заболевания, сопровождавшегося мононуклеозоподобным синдромом (лимфоаденопатия, длительный субфебрилитет и т.д.), а также парвовирусная инфекция.The basis of modern diagnostics of the risks of developing VI in women and newborns is formed by various methods of laboratory identification of markers of infectious diseases (serological, molecular, cultural). Currently, about 50 infectious agents are known that can be transmitted from the mother to the fetus with the development of HIV, among which viral infections dominate. However, the standard of monitoring pregnant women in the Russian Federation does not include screening for such common viral infections in the population as: herpesvirus type 1.2 (HSV 1.2) and cytomegalovirus infection (CMVI), except for an acute disease accompanied by mononucleosis-like syndrome (lymphadenopathy, prolonged subfebrile condition, etc.), as well as parvovirus infection.

Принимая во внимание широкое распространение врожденных вирусных инфекций, высокий уровень перинатальной смертности, тяжесть прогноза заболеваний, а также учитывая низкую настороженность в отношении вирусных врожденных инфекций, трудность их этиологической диагностики, недостаточный уровень взаимодействия между системой оказания акушерско-гинекологической помощи и службой инфекционистов, можно сделать вывод, что разработка методов комплексной пренатальной диагностики врожденных инфекций является одной из приоритетных задач современной медицины.Taking into account the widespread prevalence of congenital viral infections, the high level of perinatal mortality, the severity of the prognosis of diseases, as well as taking into account the low alertness to viral congenital infections, the difficulty of their etiological diagnosis, the insufficient level of interaction between the obstetric and gynecological care system and the infectious disease service, it can be done the conclusion that the development of methods for complex prenatal diagnosis of congenital infections is one of the priority tasks of modern medicine.

Известен «Способ диагностики внутриутробной инфекции (ВУИ)» (RU №2444293 С1), в котором рекомендовано во втором триместре беременности у женщин из группы риска по внутриутробной инфекции оценивать комплекс показателей, выражаемых в баллах. Преимуществом данного подхода является интегративная ранжированная полуколичественная оценка ряда несвязанных между собой показателей, что позволяет снизить влияние субъективного мнения пользователя на окончательный результат. К недостаткам можно отнести отсутствие связи между собственно диагностированной внутриутробной инфекцией и ее этиологией, что делает невозможным дифференцированные терапевтические подходы.Known "Method for the diagnosis of intrauterine infection (IUI)" (RU # 2444293 C1), which is recommended in the second trimester of pregnancy in women at risk of intrauterine infection to assess the complex of indicators expressed in points. The advantage of this approach is an integrative ranked semi-quantitative assessment of a number of unrelated indicators, which makes it possible to reduce the influence of the user's subjective opinion on the final result. The disadvantages include the lack of connection between the actually diagnosed intrauterine infection and its etiology, which makes it impossible to differentiate therapeutic approaches.

Известен способ выделения среди беременных групп риска развития врожденного токсоплазмоза на основании интегративных данных эпид. анамнеза и первичного определения специфических Ig М и Ig G в первом триместре гестации (Лобзин Ю.В. Токсоплазмоз у беременных / Лобзин Ю.В., Тимченко В.Н., Васильева И.С.// Российский медицинский журнал. - 2001. - №4. - С. 24-27.). Авторы предлагают распределять беременных на 4 группы (инфицированные Т. gondii до беременности; инфицирование во время данной беременности; инфицирование отсутствует; пациенты, которые не могут быть отнесены к первым трем группам на основании однократного обследования).A known method of isolating among pregnant groups at risk of developing congenital toxoplasmosis on the basis of integrative data epid. anamnesis and primary determination of specific Ig M and Ig G in the first trimester of gestation (Lobzin Yu.V. Toxoplasmosis in pregnant women / Lobzin Yu.V., Timchenko V.N., Vasilyeva I.S. // Russian Medical Journal. - 2001. - No. 4. - S. 24-27.). The authors propose to divide pregnant women into 4 groups (those infected with T. gondii before pregnancy; infection during this pregnancy; no infection; patients who cannot be assigned to the first three groups on the basis of a single examination).

К недостаткам описанной методики можно отнести ограниченность ее одной патологией (токсоплазмоз) и необходимость применения высокоспецифичных тест-систем для определения антител, что увеличивает стоимость обследования.The disadvantages of the described technique include its limited one pathology (toxoplasmosis) and the need to use highly specific test systems for the determination of antibodies, which increases the cost of the examination.

Известен метод применения алгоритмов оценки результатов определения специфических антител и авидности Ig G (Савичева A.M. Проблемы диагностики и терапии репродуктивно значимых инфекций / Савичева A.M. // Журнал акушерства и женских болезней. - 2006. - Т. LV, №2. - С. 76-84.). В данном способе наличие в крови специфических IgM при отсутствии IgG отражает начало острой инфекции, что определяет показания к терапии при инвазии токсоплазмами или прерывания беременности при краснухе. Наличие у беременной лишь IgG к антигенам токсоплазмам, вируса краснухи свидетельствует о наличии инфекции, перенесенной до настоящей беременности и, соответственно, об отсутствии необходимости в терапевтических мероприятиях. При этом, по мнению автора, об инфекции, впервые возникшей во время беременности, свидетельствует величина авидности IgG ниже 30%, а об инфекции в относительно далеком прошлом - величина авидности выше 40%. Недостатком этого способа является неизвестная до сегодняшнего дня числовая характеристика динамики авидности специфических антител, определяемая на тест-системах отечественного производства (для обоих заболеваний) и импортных аналогах (для краснухи).A known method of application of algorithms for evaluating the results of determining specific antibodies and avidity of Ig G (Savicheva AM Problems of diagnosis and therapy of reproductively significant infections / Savicheva AM // Journal of obstetrics and women's diseases. - 2006. - T. LV, No. 2. - P. 76- 84.). In this method, the presence of specific IgM in the blood in the absence of IgG reflects the onset of an acute infection, which determines the indications for therapy with Toxoplasma invasion or termination of pregnancy with rubella. The presence of only IgG to the antigens of Toxoplasma, the rubella virus in a pregnant woman indicates the presence of an infection that had been transferred before this pregnancy and, accordingly, there was no need for therapeutic measures. At the same time, according to the author, an infection that first appeared during pregnancy is indicated by an IgG avidity value below 30%, and an infection in the relatively distant past - an avidity value above 40%. The disadvantage of this method is the numerical characteristic of the dynamics of the avidity of specific antibodies, unknown to this day, determined on test systems of domestic production (for both diseases) and imported analogues (for rubella).

Наиболее близким к предлагаемому способу является «Способ прогнозирования риска внутриутробного инфицирования новорожденного» (RU №2518541). Авторы предлагают для прогнозирования риска внутриутробного инфицирования новорожденного определять показатели, характеризующие течение беременности: экстрагенитальная патология матери во время беременности, гинекологические заболевания в анамнезе, инфекционные заболевания, перенесенные матерью во время беременности, данные УЗ-исследования плода в период беременности, полученные показатели оценивают в баллах. Полученные баллы суммируют, определяя тем самым значение индекса риска внутриутробного инфицирования новорожденного (ИРВИ). При величине ИРВИ 1-4 балла определяют низкую степень риска, 5-9 баллов - среднюю, 10-19 баллов - высокую степень риска внутриутробного инфицирования новорожденного. Однако данный способ, несмотря на попытку объединить целый комплекс факторов риска внутриутробного инфицирования, обладает рядом недостатков. Так, по словам авторов, способ позволяет прогнозировать риск развития внутриутробного инфицирования новорожденного, однако все перечисленные критерии оценивают в антенатальном периоде, что свидетельствует скорее о риске инфицирования плода. Как уже упоминалось ранее, в ситуации с новорожденным целесообразнее подтверждать или исключать наличие конкретной врожденной инфекции, а не заниматься оценкой рисков, что неминуемо удлинит сроки диагностического поиска и негативно отразится тем самым на прогнозе заболевания в случае его наличия. В данном способе предпринята попытка комплексной оценки ряда имеющихся клинико-лабораторных и инструментальных данных, характеризующих течение беременности, с определением ранжированных границ групп риска по внутриутробному инфицированию, что в целом повышает объективность восприятия полученных результатов, однако демонстрирует тем самым унифицированный подход к диагностике внутриутробных инфекций, что можно отнести к недостаткам способа, так как в этом случае диагностируется не конкретное инфекционное заболевание, а некий его риск, который сам по себе не позволяет прогнозировать тактику ведения таких пациентов. Кроме того, в описании способа одним из критериев является наличие у беременной инфекционной патологии, относящейся к TORCH-комплексу, а именно: токсоплазмоз, краснуха, цитомегаловирусная инфекция, герпесвирусная инфекция, хламидиоз, микоплазмоз. Однако не указано, какими методами и в какие конкретно сроки проводится обследование, не оговорены показания к диагностике перечисленных инфекций, учитывая, что при скрининговом обследовании беременных в РФ некоторые из перечисленных инфекций не являются обязательными для диагностики. Так в РФ в стандарт наблюдения за беременными не входит обследование на герпетические инфекции (ВПГ 1,2 типа и ЦМВИ), кроме острого заболевания, сопровождавшегося мононуклеозоподобным синдромом - лимфоаденопатия, длительный субфебрилитет и т.д. (Приказ МЗ РФ №572н от 2012 г). Обследование беременных с целью оценки риска врожденной ПВИ федеральными документами не предусмотрено. Таким образом, данный способ не обеспечивает точности диагностики врожденного вирусного инфекционного заболевания (ВИЗ).Closest to the proposed method is "Method for predicting the risk of intrauterine infection in a newborn" (RU # 2518541). The authors propose to predict the risk of intrauterine infection of a newborn to determine indicators characterizing the course of pregnancy: extragenital pathology of the mother during pregnancy, gynecological diseases in history, infectious diseases transferred by the mother during pregnancy, data from ultrasound examination of the fetus during pregnancy, the obtained indicators are evaluated in points ... The scores obtained are summed up, thereby determining the value of the risk index for intrauterine infection of the newborn (IRVI). With an IRVI value of 1-4 points, a low degree of risk is determined, 5-9 points - an average, 10-19 points - a high degree of risk of intrauterine infection of a newborn. However, this method, despite the attempt to combine a whole range of risk factors for intrauterine infection, has a number of disadvantages. So, according to the authors, the method allows predicting the risk of developing intrauterine infection of a newborn, however, all of the above criteria are assessed in the antenatal period, which rather indicates the risk of infection of the fetus. As mentioned earlier, in a situation with a newborn, it is more expedient to confirm or exclude the presence of a specific congenital infection, rather than engage in risk assessment, which will inevitably lengthen the time of the diagnostic search and thereby negatively affect the prognosis of the disease if present. In this method, an attempt is made to comprehensively assess a number of available clinical, laboratory and instrumental data characterizing the course of pregnancy, with the determination of the ranked boundaries of risk groups for intrauterine infection, which generally increases the objectivity of the perception of the results obtained, but thereby demonstrates a unified approach to the diagnosis of intrauterine infections, which can be attributed to the disadvantages of the method, since in this case it is not a specific infectious disease that is diagnosed, but some of its risk, which in itself does not allow predicting the tactics of managing such patients. In addition, in the description of the method, one of the criteria is the presence of an infectious pathology related to the TORCH-complex in a pregnant woman, namely: toxoplasmosis, rubella, cytomegalovirus infection, herpesvirus infection, chlamydia, mycoplasmosis. However, it is not indicated by what methods and in what specific time frame the examination is carried out, the indications for the diagnosis of the listed infections are not specified, given that during the screening examination of pregnant women in the Russian Federation, some of the listed infections are not mandatory for diagnosis. So in the Russian Federation, the standard for monitoring pregnant women does not include screening for herpetic infections (HSV type 1.2 and CMVI), except for an acute illness accompanied by a mononucleosis-like syndrome - lymphadenopathy, prolonged subfebrile condition, etc. (Order of the Ministry of Health of the Russian Federation No. 572n of 2012). Examination of pregnant women to assess the risk of congenital PVI is not provided for by federal documents. Thus, this method does not provide an accurate diagnosis of a congenital viral infectious disease (VIZ).

С целью устранения вышеуказанных недостатков авторы предлагают принципиально новый способ диагностики врожденного вирусного инфекционного заболевания. Технический результат, достигаемый в данном способе, заключается в повышении точности диагностики за счет комплексной оценки факторов риска.In order to eliminate the above disadvantages, the authors propose a fundamentally new method for diagnosing a congenital viral infectious disease. The technical result achieved in this method is to improve the accuracy of diagnostics through a comprehensive assessment of risk factors.

Это достигается тем, что путем комплексной оценки факторов риска, авторы предлагают последовательно в крови беременных определять величину специфических IgM и IgG антител, затем при значении специфических IgM выше порога чувствительности реакции более чем в два раза количественно определяют вирусные нагрузки методом полимеразной цепной реакции, при значении их более 10⁴ копий в мл сыворотки крови осуществляют УЗИ-мониторинг плода в режиме скрининга с интервалом 2 недели и, при выявлении визуализационных признаков поражения плода, обнаружении IgM к вирусам в сочетании с положительными результатами ПЦР в крови беременной и пуповинной крови плода на сроке 20 недель и более диагностируют врожденное вирусное заболевание плода.This is achieved by the fact that through a comprehensive assessment of risk factors, the authors propose to sequentially determine the value of specific IgM and IgG antibodies in the blood of pregnant women, then, when the value of specific IgM is higher than the sensitivity threshold of the reaction, more than twice the viral load is quantified by the polymerase chain reaction method, with the value their more than 10 ⁴ copies in ml of blood serum carry out ultrasound monitoring of the fetus in the screening mode with an interval of 2 weeks and, if visual signs of fetal damage are detected, IgM to viruses is detected in combination with positive PCR results in the blood of the pregnant and umbilical cord blood of the fetus at a period of 20 weeks or more, a congenital viral disease of the fetus is diagnosed.

При анализе результатов собственных многолетних исследований нами было обнаружено, что оценка риска развития наиболее частных врожденных вирусных инфекционных заболеваний (ЦМВИ, парвовирусная инфекция, инфекция вирусами простого герпеса) в антенатальном периоде и их антенатальная диагностика во многом определяются параметрами отбора беременных для углубленного обследования. Наиболее часто возбудители этих заболеваний передаются от матери плоду в острой инфекции (первичном заражении) во время беременности (частота передачи в этом случае в среднем составляет 50%, при реактивации - в 10-15 раз реже). Этот фактор определяет убеждает нас в целесообразности определения тех групп беременных, которые в первую очередь нуждаются в лабораторном обследовании с целью выявления острых инфекций.When analyzing the results of our own long-term studies, we found that the assessment of the risk of developing the most common congenital viral infectious diseases (CMVI, parvovirus infection, infection with herpes simplex viruses) in the antenatal period and their antenatal diagnosis are largely determined by the selection parameters of pregnant women for in-depth examination. Most often, the causative agents of these diseases are transmitted from the mother to the fetus in an acute infection (primary infection) during pregnancy (the transmission frequency in this case is on average 50%, with reactivation - 10-15 times less often). This factor convinces us of the advisability of identifying those groups of pregnant women who first of all need laboratory examination in order to identify acute infections.

Широкая распространенность латентной формы этих инфекций в популяции, технические трудности в разграничении острой и реактивированной инфекции обусловливают экономическую нецелесообразность тотального лабораторного скрининга беременных. Нами установлено, что с эпидемиологической точки зрения в число беременных, подлежащих лабораторному обследованию, целесообразно включать тех из них, у кого имеются наибольшие шансы первичного заражения: возраст, частота контакта с возможными источниками инфекции с учетом механизмов передачи возбудителей.The widespread prevalence of the latent form of these infections in the population, the technical difficulties in distinguishing between acute and reactivated infections, make it economically inexpedient for total laboratory screening of pregnant women. We have found that, from an epidemiological point of view, it is advisable to include those of them who have the greatest chances of primary infection in the number of pregnant women subject to laboratory examination: age, frequency of contact with possible sources of infection, taking into account the mechanisms of transmission of pathogens.

При обследовании более 1000 беременных нами было обнаружено, что наибольшая частота острой цитомегаловирусной инфекции регистрируется у женщин в возрастной группе до 20-25 лет, что определяется особенностями реализации естественных путей передачи: частый контакт с потенциальными источниками инфекций с воздушно-капельным механизмом передачи в процессе обучения в школе и ВУЗе, начало половой жизни с возрастающей возможностью реализации контактного механизма. Кроме того, в рамках указанного возраста (до 25 лет) у части женщин уже есть дети, которые могут посещать детские образовательные учреждения (а сами женщины - в них работать), что определяет более высокую частоту контакта с детьми дошкольного возраста, которые становятся источниками вирусных инфекций как для своих родителей, так и для персонала детских учреждений.When examining more than 1000 pregnant women, we found that the highest frequency of acute cytomegalovirus infection is recorded in women in the age group up to 20-25 years old, which is determined by the peculiarities of the implementation of natural transmission routes: frequent contact with potential sources of infections with airborne transmission during the learning process at school and university, the onset of sexual activity with an increasing possibility of implementing the contact mechanism. In addition, within the specified age (up to 25 years), some women already have children who can attend children's educational institutions (and women themselves work in them), which determines a higher frequency of contact with preschool children, who become sources of viral infections both for their parents and for the staff of child care facilities.

Нами было доказано, что частота острых вирусных инфекций (частота сероконверсии) в этой возрастной группе беременных (до 25 лет) составляет около 1% в год, в то время как в более старших группах не превышает 0,5%. Этот факт обусловливает необходимость включения возрастного ценза в критерии отбора беременных для обследования на предмет наличия острой вирусной инфекции.We have proved that the frequency of acute viral infections (seroconversion rate) in this age group of pregnant women (up to 25 years old) is about 1% per year, while in the older groups it does not exceed 0.5%. This fact makes it necessary to include the age qualification in the selection criteria for pregnant women for examination for the presence of an acute viral infection.

Кроме того, нами установлено, что частота первичной (острой) вирусной инфекции среди беременных, работающих в детских образовательных учреждениях или имеющих старших детей, посещающих такие учреждения, также существенно выше и составляет до 1,2% в год (у беременных, не соответствующих этим критериям - около 0,4-0,7% в год, р=0,53).In addition, we found that the frequency of primary (acute) viral infection among pregnant women working in children's educational institutions or having older children attending such institutions is also significantly higher and amounts to 1.2% per year (in pregnant women who do not correspond to these criteria - about 0.4-0.7% per year, p = 0.53).

Нами обнаружено, что при обследовании беременных, имевших в ходе беременности ОРЗ-подобные заболевания, примерно в 2% случаев имевшиеся симптомы были обусловлены именно вирусными инфекциями, возбудители которых способны передаваться от матери плоду (в первую очередь - цитомегаловирус и парвовирус B19V). При этом, с учетом того, что риск тяжелого поражения плода максимален при острой инфекции у беременной в ее первой половине, эта категория беременных также подлежит лабораторному обследованию.We found that when examining pregnant women who had ARI-like diseases during pregnancy, in about 2% of cases, the symptoms were caused by viral infections, the causative agents of which can be transmitted from the mother to the fetus (primarily cytomegalovirus and parvovirus B19V). At the same time, taking into account the fact that the risk of severe fetal damage is maximum in case of acute infection in a pregnant woman in her first half, this category of pregnant women is also subject to laboratory examination.

Исходя из полученных данных мы и рекомендуем, при установлении беременности и принятии беременной решения о ее сохранении, с целью отбора для лабораторного обследования для определения риска врожденных ВИЗ исходить из возраста беременной, наличия (отсутствия) ОРЗ-подобного заболевания в первой половине беременности и наличия (отсутствия) относительно более тесного контакта с основными источниками инфекции (наличие в ближайшем окружении детей, посещающих детские образовательные учреждения, или работа в таких учреждениях самой беременной). Естественно, что чем больше таких факторов риска выявляется у отдельной беременной, тем больше показаний для ее обследования. Однако, учитывая сопоставимость частоты выявления отдельных факторов риска острых вирусных инфекций (в пределах 0,5-1,5%), обнаружение любого из них позволяет включать этих беременных в группу, подлежащую лабораторному обследованию.Based on the data obtained, we recommend that, when establishing pregnancy and making a pregnant woman a decision to preserve it, in order to select for laboratory examination to determine the risk of congenital EIDs, proceed from the age of the pregnant woman, the presence (absence) of an acute respiratory disease-like disease in the first half of pregnancy and the presence ( absence) of relatively closer contact with the main sources of infection (the presence in the immediate environment of children attending children's educational institutions, or work in such institutions of the pregnant woman herself). Naturally, the more such risk factors are detected in an individual pregnant woman, the more indications for her examination. However, given the comparability of the frequency of detection of individual risk factors for acute viral infections (within 0.5-1.5%), the detection of any of them makes it possible to include these pregnant women in the group subject to laboratory examination.

На основании многочисленных собственных исследований, нами было показано, что наиболее доступным, экономически оправданным и, вместе с тем, достаточно информативным методом лабораторного обследования беременных на наличие риска острых инфекционных заболеваний, возбудители которых могут быть переданы плоду, является определение величин специфических IgM и IgG к антигенам вирусов в сыворотке крови методом ИФА. При этом различия в чувствительности и специфичности тест-систем разных производителей или эффективности аппаратуры учета разного происхождения на сегодняшний день не принципиальны.Based on numerous our own studies, we have shown that the most affordable, economically justified and, at the same time, quite informative method of laboratory examination of pregnant women for the presence of the risk of acute infectious diseases, the causative agents of which can be transmitted to the fetus, is to determine the values of specific IgM and IgG to antigens of viruses in blood serum by ELISA. At the same time, differences in the sensitivity and specificity of test systems from different manufacturers or the effectiveness of metering equipment of different origins are not fundamental today.

Мы обнаружили, что выявление специфических IgM величиной выше порога чувствительности реакции более чем в два раза является маркером острой инфекции, либо ее реактивации, либо заражения другим штаммом того же возбудителя. Все три ситуации несут риск передачи возбудителя от матери плоду, поэтому величина специфических IgG, равно как и сам факт их наличия или отсутствия, самостоятельного значения не имеют.We found that the detection of specific IgM with a value higher than the sensitivity threshold of the reaction is more than two times a marker of acute infection, either its reactivation, or infection with another strain of the same pathogen. All three situations carry the risk of transmission of the pathogen from the mother to the fetus, therefore the value of specific IgG, as well as the very fact of their presence or absence, does not have an independent meaning.

Для точной оценки «активности» возбудителей вирусных инфекций нами используется ПЦР в «реальном времени», позволяющая посчитать примерное количество копий ДНК (РНК) микроорганизма в единице объема исследуемого субстрата (вирусная нагрузка, ВН). При этом более высокое количество копий рассматривается как маркер более активной репликации и более активно протекающего инфекционного процесса.For an accurate assessment of the "activity" of pathogens of viral infections, we use real-time PCR, which allows us to calculate the approximate number of copies of DNA (RNA) of a microorganism per unit volume of the studied substrate (viral load, VL). At the same time, a higher number of copies is considered as a marker of a more active replication and a more active infectious process.

Нами впервые показано, что для большинства вирусов, чаще всего являющихся причиной ВИЗ (цитомегаловирус, парвовирус B19V, вирусы простого герпеса, энтеровирусы), критическим порогом является ВН более 10⁴ копий в мл лейкоконцентрата. Именно при такой ВН чаще всего происходит передача вирусов от матери плоду, что позволяет рекомендовать этот маркер в качестве ключевого для дальнейшего отбора беременных с более высокими рисками ВИЗ и их последующего мониторинга.We have shown for the first time that for the majority of viruses that are most often the cause of VIZ (cytomegalovirus, parvovirus B19V, herpes simplex viruses, enteroviruses), the critical threshold is VL more than 10 ⁴ copies per ml of leucoconcentrate. It is with this VL that the transmission of viruses from the mother to the fetus most often occurs, which makes it possible to recommend this marker as a key one for further selection of pregnant women with higher risks of EID and their subsequent monitoring.

Мы впервые показали, что при выявлении специфических IgM величиной выше порога чувствительности реакции более чем в два раза и выявление признаков высокой репликации вируса (ВН более 10⁴ копий в мл лейкоконцентрата) в крови у беременной с целью сохранения беременности и рождения здорового ребенка, необходимо проведение УЗИ-мониторинга плода в режиме скрининга с интервалом 2 недели для выявления возможных признаков патологии.We first showed that the detection of specific IgM value above the reaction threshold of sensitivity by more than two times, and the identification of signs of high viral replication (BH more April ¹⁰ copies per mL leukoconcentrate) in the blood of a pregnant woman in order to maintain the pregnancy and birth of a healthy baby, you need to conduct Ultrasound monitoring of the fetus in a screening mode with an interval of 2 weeks to identify possible signs of pathology.

Нами показано, что обнаружение визуализационных признаков патологии развития плода в антенатальном периоде является поводом к выполнению кордоцентеза в сроке гестации 20 недель и более с исследованием пуповинной крови методом ПЦР методикой качественного определения (без учета ВН).We have shown that the detection of visualization signs of fetal developmental pathology in the antenatal period is a reason to perform cordocentesis at a gestational age of 20 weeks or more with the study of umbilical cord blood by PCR using a qualitative determination method (excluding VL).

По выявленным нами данных диагностика врожденного вирусного заболевания плода осуществляется при наличии визуализационных признаков поражения плода, обнаружении IgM к вирусам в сочетании с положительными результатами ПЦР в крови беременной и пуповинной крови плода на сроке 20 недель и более.According to the data we have identified, the diagnosis of congenital viral disease of the fetus is carried out in the presence of visualization signs of fetal damage, detection of IgM to viruses in combination with positive PCR results in the blood of the pregnant and umbilical cord blood of the fetus for a period of 20 weeks or more.

В доступной нам литературе подобных способов диагностики врожденного вирусного заболевания плода не обнаружено, а совокупность предложенных признаков, неочевидность, новизна, эффективность и изобретательский уровень позволяет нам представить способ, как заявочный материал на изобретение. Объектом исследования стали более 1000 беременных.In the literature available to us, no such methods for diagnosing a congenital viral disease of the fetus have been found, and the combination of the proposed features, non-obviousness, novelty, efficiency and inventive step allows us to present the method as a patent application material. More than 1000 pregnant women were examined.

Способ реализуется следующим образом: последовательное применение отбора беременных для выявления группы максимального риска врожденных вирусных инфекционных заболеваний и их обследования. Определяют женщин группы высокого риска врожденных ВИЗ, исходя из возраста беременной, наличия (отсутствия) ОРЗ-подобного заболевания во время беременности и наличия (отсутствия) относительно более тесного контакта с основными источниками инфекции (наличие в ближайшем окружении детей, посещающих детские образовательные. К группе высокого риска по развитию ВИЗ относят беременных в возрасте до 25 лет, перенесших ОРЗ-подобное заболевание во время беременности, имеющих старших детей, посещающих детские образовательные учреждения.The method is implemented as follows: sequential use of selection of pregnant women to identify the group of maximum risk of congenital viral infectious diseases and their examination. Women of the high-risk group of congenital EIDs are determined, based on the age of the pregnant woman, the presence (absence) of an ARI-like disease during pregnancy and the presence (absence) of relatively closer contact with the main sources of infection (the presence in the immediate environment of children attending children's educational. high risk for the development of EID include pregnant women under the age of 25 who have suffered an acute respiratory disease-like disease during pregnancy, have older children attending children's educational institutions.

При первичной постановке на учет у беременной, относящейся к группе высокого риска по ВИЗ, в венозной крови методом ИФА определяют специфические иммуноглобулины классов М (с расчетом коэффициента) и G (количественно) к вирусам простого герпеса 1/2 типов, цитомегаловирусу, парвовирусу B19V. При выявлении специфических IgM величиной выше порога чувствительности реакции более чем в два раза (независимо от величины IgG), беременную относят к группе максимального риска развития врожденного ВИЗ.During the initial registration in a pregnant woman belonging to a high-risk group for VIZ, specific immunoglobulins of classes M (with the calculation of the coefficient) and G (quantitatively) to herpes simplex viruses of 1/2 types, cytomegalovirus, parvovirus B19V are determined in the venous blood by the ELISA method. If specific IgM is detected with a value higher than the sensitivity threshold of the reaction by more than two times (regardless of the IgG value), the pregnant woman is referred to the group of maximum risk of developing congenital VIZ.

Вирусные нагрузки в сыворотке крови беременной определяют количественно в полимеразной цепной реакции (ПЦР) с применением наборов реагентов для амплификации и/или обратной транскрипции и амплификации ДНК вирусов простого герпеса 1/2 типов, цитомегаловируса, парвовируса B19V.Viral loads in the blood serum of a pregnant woman are quantified in polymerase chain reaction (PCR) using reagent kits for amplification and / or reverse transcription and DNA amplification of herpes simplex viruses 1/2 types, cytomegalovirus, parvovirus B19V.

При величине вирусной нагрузки более 10⁴ копий в мл осуществляют УЗИ-мониторинг плода в режиме скрининга с интервалом 2 недели.With a viral load of more than 10 ⁴ copies per ml, ultrasound monitoring of the fetus is carried out in the screening mode with an interval of 2 weeks.

В случае выявления, по данным ультразвукового исследования беременной, визуализационных признаков поражения плода на сроке гестации 20 недель и более выполняют кордоцентез с последующим забором пуповинной крови плода на исследование методом ПЦР методикой качественного определения ДНК вирусов простого герпеса 1/2 типов, цитомегаловируса, парвовируса B19V.In case of detection, according to the ultrasound examination of a pregnant woman, visual signs of fetal damage at a gestation period of 20 weeks or more, cordocentesis is performed, followed by taking the fetal cord blood for a PCR study by the method of qualitative determination of DNA of herpes simplex viruses of 1/2 types, cytomegalovirus, parvovirus B19V.

Диагностика врожденного вирусного заболевания плода осуществляется при выявлении визуализационных признаков поражения плода, обнаружении IgM к вирусам в сочетании с положительными результатами ПЦР в крови беременной и пуповинной крови плода на сроке 20 недель и более.Diagnosis of a congenital viral disease of the fetus is carried out when visualization signs of fetal damage are detected, IgM to viruses are detected in combination with positive PCR results in the blood of the pregnant woman and the umbilical cord blood of the fetus for a period of 20 weeks or more.

Врожденное вирусное инфекционное заболевание плода диагностируют при наличии визуализационных признаков поражения плода, обнаружении IgM в венозной крови беременной в отсутствии или наличии IgG в сочетании с положительными результатами ПЦР в крови беременной и в пуповинной крови.Congenital viral infectious disease of the fetus is diagnosed in the presence of visual signs of fetal damage, detection of IgM in the venous blood of a pregnant woman in the absence or presence of IgG in combination with positive PCR results in the blood of the pregnant woman and in the umbilical cord blood.

Эффективность предполагаемого способа диагностики врожденного вирусного заболевания плода может быть подтверждена конкретными клиническими примерами.The effectiveness of the proposed method for diagnosing a congenital viral disease of the fetus can be confirmed by specific clinical examples.

Пример 1.Example 1.

Первородящая молодая (25 лет) беременная Е. Из анамнеза известно, что антител к ЦМВИ не выявлено. На сроке 18-20 недель беременности женщина перенесла ОРВИ, после которого была повторно обследована: обнаружены антитела IgM и IgG к ЦМВ, выделена ДНК ЦМВ в сыворотке крови (10⁶ копий/мл). На II УЗ-скрининге на сроке беременности 20 недель 4 дня впервые за время наблюдения диагностировали патологию развития плода в виде долихоцефалической деформации головы, повышения эхогенности перивентрикулярных зон белого вещества головного мозга с очагом окостенения в периорбитальной зоне, гиперэхогенного кишечника, асцита.Primiparous young (25 years old) pregnant E. From the anamnesis it is known that antibodies to CMVI were not detected. At 18-20 weeks of pregnancy, the woman suffered an acute respiratory viral infection, after which she was re-examined: IgM and IgG antibodies to CMV were detected, CMV DNA was isolated in the blood serum (10 ⁶ copies / ml). On II ultrasound screening at 20 weeks 4 days of pregnancy, for the first time during the observation period, fetal development pathology was diagnosed in the form of dolichocephalic deformity of the head, increased echogenicity of the periventricular zones of the white matter of the brain with a focus of ossification in the periorbital zone, hyperechoic intestine, ascites.

Пациентка была экстренно госпитализирована на 21-ой неделе беременности. С диагностической целью был проведен трансабдоминальный кордрцентез с забором пуповинной крови плода для исследования. Вирусологическое исследование методом ПЦР выявило наличие ДНК ЦМВ в пуповинной крови плода. По совокупности данных, была диагностирована врожденная цитомегаловирусная инфекция плода.The patient was urgently hospitalized at the 21st week of pregnancy. For diagnostic purposes, a transabdominal cordcentesis was performed with fetal umbilical cord blood sampling for research. Virological study by PCR method revealed the presence of CMV DNA in the umbilical cord blood of the fetus. On the basis of the data set, congenital cytomegalovirus infection of the fetus was diagnosed.

В данном примере продемонстрирован случай впервые выявленной острой ЦМВИ у молодой беременной женщины из группы риска развития ВИЗ, которая, была своевременно последовательна обследована на ЦМВИ после перенесенной ОРВИ во II триместре, что позволило своевременно выявить патологию развитию плода, по данным УЗИ и провести вирусологическое исследование плода, подтвердившее внутриутробную цитомегаловирусную инфекцию в антенатальном периоде.This example demonstrates a case of newly diagnosed acute CMVI in a young pregnant woman at risk of developing VIZ, who was promptly and sequentially examined for CMVI after an acute respiratory viral infection in the second trimester, which made it possible to timely identify pathology of fetal development, according to ultrasound data and conduct a virological study of the fetus , which confirmed intrauterine cytomegalovirus infection in the antenatal period.

Пример 2.Example 2.

Повторнородящая женщина (беременность 2-я), 24 год. Первая беременность закончилась рождением здоровой девочки; на момент настоящей беременности девочке исполнилось 4 года.. На сроке 13 недель женщина перенесла ОРВИ с лихорадкой до 39°С, выраженным ознобом без катарального синдрома. Через 10 дней от начала заболевания (на 15-й неделе беременности) у женщины появилась сыпь на щеках, груди, предплечьях, голенях. На 17-ой недели беременности пациентка была проконсультирована инфекционистом, при обследовании выявлено: ДНК ПВВ19 (+) методом ПЦР в крови, IgM (+) IgG (+) к ПВ в крови методом ИФА. По совокупности данных у пациентки диагностировали острую парвовирусную инфекцию, был рекомендован УЗИ-мониторинг плода. На сроке 20 недель беременности, по данным УЗ-исследования плода (II скрининг), впервые была определена патология развития плода - неиммунный отек плода (асцит). На 22-й неделе беременности проведено дополнительное УЗИ плода с доплерометрией, подтвержден неимунный отек плода, впервые выявлены признаки тяжелой анемии у плода. По результатам обследования беременная была госпитализирована в отделение патологии беременности родильного дома. На сроке 22 4/7 недель беременности пациентке был проведен трансабдоминальный кордоцентез с забором пуповинной крови плода на исследование. При вирусологическом исследовании в пуповинной крови плода методом ПЦР выявлена ДНК ПВВ19. Анализ пуповинной крови плода подтвердил наличие у него анемии (гематокрит - 16%). По совокупности данных, была диагностирована врожденная парвовирусная инфекция плода.Multiparous woman (2nd pregnancy), 24 years old. The first pregnancy ended with the birth of a healthy girl; at the time of this pregnancy, the girl was 4 years old. At 13 weeks, the woman had an acute respiratory viral infection with fever up to 39 ° C, pronounced chills without catarrhal syndrome. After 10 days from the onset of the disease (at the 15th week of pregnancy), the woman developed a rash on her cheeks, chest, forearms, and legs. At the 17th week of pregnancy, the patient was consulted by an infectious disease specialist, the examination revealed: PVV19 (+) DNA by PCR in the blood, IgM (+) IgG (+) to PV in the blood by ELISA. Based on the data set, the patient was diagnosed with acute parvovirus infection, and fetal ultrasound monitoring was recommended. At 20 weeks of gestation, according to the ultrasound examination of the fetus (II screening), the pathology of fetal development was determined for the first time - non-immune fetal edema (ascites). At the 22nd week of pregnancy, an additional ultrasound scan of the fetus with dopplerometry was performed, non-immune edema of the fetus was confirmed, signs of severe anemia in the fetus were first revealed. Based on the examination results, the pregnant woman was admitted to the pregnancy pathology department of the maternity hospital. At 22 4/7 weeks of pregnancy, the patient underwent transabdominal cordocentesis with fetal cord blood sampling for examination. A virological study in the umbilical cord blood of the fetus by PCR revealed PVV19 DNA. The analysis of the fetal cord blood confirmed the presence of anemia (hematocrit - 16%). On the basis of the data set, congenital parvovirus infection of the fetus was diagnosed.

Данный случай демонстрирует пример острой парвовирусной инфекции у женщины из группы риска по развитию ВИЗ, которая привела к инфекционному поражению плода с развитием симтомакомплекса врожденной парвовирусной В19 - инфекции, которую благодаря комплексной оценке факторов риска удалось подтвердить антенатальном периоде.This case demonstrates an example of acute parvovirus infection in a woman at risk for the development of EID, which led to an infectious lesion of the fetus with the development of a symptom complex of congenital parvovirus B19, an infection that, thanks to a comprehensive assessment of risk factors, was confirmed in the antenatal period.

В заключение следует отметить, что по экспертным данным экономический ущерб от врожденных инфекций в РФ может ежегодно составлять до 10 млрд. рублей. Реализация современного способа комплексной диагностики врожденных инфекций вирусной этиологии позволит значительно сократить финансовые затраты государства, предотвратив рождение детей с тяжелыми органными нарушениями, снизить уровень младенческой смертности от инфекционных заболеваний, перенесенных внутриутробно. Кроме того, своевременная пренатальная диагностика ВИЗ открывает новые терапевтические возможности с использованием современных высокотехнологических методов медицинской помощи, способствуя тем самым улучшению исходов ВУИ и, как следствие, оздоровлению нации в целом. Полученный успешный опыт совместной работы акушерско-гинекологической помощи и инфекционной службы в этой области является перспективным и может служить основой для внесения ряда изменений в порядок оказания медицинской помощи по данному профилю, способствуя тем самым модернизации научных представлений в области инфекционных заболеваний матери, плода и ребенка.In conclusion, it should be noted that according to expert data, the economic damage from congenital infections in the Russian Federation can amount to up to 10 billion rubles annually. Implementation of a modern method of complex diagnostics of congenital infections of viral etiology will significantly reduce the financial costs of the state, prevent the birth of children with severe organ disorders, and reduce the level of infant mortality from infectious diseases transferred in utero. In addition, the timely prenatal diagnosis of IUI opens up new therapeutic opportunities using modern high-tech methods of medical care, thereby contributing to the improvement of IUI outcomes and, as a consequence, the health of the nation as a whole. The successful experience gained in the joint work of obstetric and gynecological care and the infectious disease service in this area is promising and can serve as the basis for a number of changes in the procedure for providing medical care in this profile, thereby contributing to the modernization of scientific concepts in the field of infectious diseases of the mother, fetus and child.

Claims

A method for diagnosing a viral disease of the fetus, including a comprehensive assessment of risk factors in pregnant women who have had ARVI, the determination of specific IgM and IgG antibodies in the blood of a pregnant woman, an ultrasound examination of the fetus, characterized in that the value of specific IgM and IgG antibodies is consistently determined in the blood of pregnant women, and the value of specific IgM above the sensitivity threshold of the reaction more than twice quantifies the viral load by the polymerase chain reaction method, if its value is more than 10 ⁴ copies in ml of blood serum, ultrasound monitoring of the fetus is carried out in the screening mode with an interval of 2 weeks, and when visual signs are detected fetal lesions at a gestational age of 20 weeks or more, cordocentesis is performed, followed by sampling of umbilical cord blood for examination by the PCR method, and when visualization signs of fetal damage are detected, IgM to viruses is detected in combination with positive PCR results in the blood of pregnant and umbilical cord blood of the fetus at 20 weeks l and more diagnose a congenital viral disease of the fetus.