RU2725798C1 - Method for identification of blood cells - Google Patents

Method for identification of blood cells Download PDF

Info

Publication number
RU2725798C1
RU2725798C1 RU2019109506A RU2019109506A RU2725798C1 RU 2725798 C1 RU2725798 C1 RU 2725798C1 RU 2019109506 A RU2019109506 A RU 2019109506A RU 2019109506 A RU2019109506 A RU 2019109506A RU 2725798 C1 RU2725798 C1 RU 2725798C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
preparation
cells
microscopy
cell
illuminator
Prior art date
Application number
RU2019109506A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Илья Николаевич Соломадин
Original Assignee
Илья Николаевич Соломадин
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Илья Николаевич Соломадин filed Critical Илья Николаевич Соломадин
Priority to RU2019109506A priority Critical patent/RU2725798C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2725798C1 publication Critical patent/RU2725798C1/en

Links

Images

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483Physical analysis of biological material
    • G01N33/487Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/49Blood
    • GPHYSICS
    • G06COMPUTING; CALCULATING OR COUNTING
    • G06VIMAGE OR VIDEO RECOGNITION OR UNDERSTANDING
    • G06V10/00Arrangements for image or video recognition or understanding
    • G06V10/20Image preprocessing

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Theoretical Computer Science (AREA)
  • Multimedia (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to the field of biotechnology. Disclosed is a method of identifying blood cells. Method involves placing the analysed preparation on an optical surface, illuminating by illuminator, conducting microscopy of the preparation and identifying the cells of the preparation. During the microscopy, the image of the preparation is formed on the receiving area of the electronic image receiver and electric signals are converted from the output of the electronic image receiver to the array of digital image data of the analysed preparation. Microscopy of the preparation is carried out first at the radiation wavelength of illuminator of 240 nm, the cell borders of the preparation are determined, then the preparation microscopy is carried out at the wavelength of the irradiation of illuminator 280 nm and 260 nm, and two cell images are obtained. One of images is subtracted from the other to determine optical density of cells, which correlates with content of proteins and nucleic acids in them.EFFECT: invention provides higher accuracy and efficiency of blood cell identification.1 cl, 5 dwg

Description

Изобретение относится к медицине и биологическим исследованиям, в частности, к лабораторной диагностике и может быть использовано для обнаружения и идентификации клеток крови с использованием мультиспектральной микроскопии.The invention relates to medicine and biological research, in particular, to laboratory diagnostics and can be used to detect and identify blood cells using multispectral microscopy.

Известен способ, примером реализации которого является использование устройства [US 6690466, 02.08.2001г.] включающего предметный столик, осветитель, содержащий несколько источников излучения, и оптическую систему доставки излучения этих источников до оптической поверхности предметного столика, оптическую систему формирования изображения, электронный приемник изображения, расположенный так, что его приемная площадка через оптическую систему формирования изображения оптически сопряжена с оптической поверхностью предметного столика, а также блок управления и обработки изображения, электрически соединенный с электронным приемником изображения и источниками излучения. В качестве осветителя в устройстве использована спектральная проекционная система, а источниками излучения являются светодиоды, способные излучать свет в различных спектральных диапазонах.A known method, an example of which is the use of a device [US 6690466, 08/02/2001] including a stage, a illuminator containing several radiation sources, and an optical system for delivering radiation of these sources to the optical surface of the stage, an optical image forming system, an electronic image receiver located so that its receiving platform through the optical image-forming system is optically coupled to the optical surface of the stage, as well as a control and image processing unit electrically connected to the electronic image receiver and radiation sources. A spectral projection system is used as a illuminator in the device, and the radiation sources are LEDs capable of emitting light in various spectral ranges.

Недостатком этого способа является относительно узкая область применения, не позволяющая, в частности, осуществлять идентификацию клеток крови на основании нативных образцов. The disadvantage of this method is the relatively narrow scope, which does not allow, in particular, to identify blood cells based on native samples.

Наиболее близким по технической сущности к предложенному является способ регистрации изображения с помощью устройства для проведения микроскопии [RU 65495, C12Q 1/00, 05.03.2007г.], содержащего оптический микроскоп с тринокулярным тубусом, предметный столик, широкополосный осветитель, установленную на тринокулярном тубусе цифровую видеокамеру, соединенный с ней компьютер, программный блок управления, и состоящий в том, что исследуемый препарат размещают на оптической поверхности предметного столика, освещают исследуемый препарат излучением осветителя, формируют изображение исследуемого предмета на приемной площадке электронного приемника изображения, преобразуют электрические сигналы с выхода электронного приемника изображения в массив цифровых данных изображения исследуемого препарата с выводом на монитор компьютера, реализация перечисленных выше операцией обеспечивается соответствующим программным обеспечением.The closest in technical essence to the proposed one is a method of recording an image using a microscope device [RU 65495, C12Q 1/00, 03/05/2007] containing an optical microscope with a trinocular tube, a stage, a broadband illuminator mounted on a digital trinocular tube a video camera, a computer connected to it, a program control unit, and consisting in the fact that the test drug is placed on the optical surface of the stage, the test drug is illuminated by illuminator, an image of the test object is formed on the receiving area of the electronic image receiver, electrical signals from the output of the electronic receiver are converted image in the digital image array of the image of the studied drug with output to a computer monitor, the implementation of the above operation is provided by the appropriate software.

Особенностью данного способа является то, что в устройстве используется предметный столик с автоматизированным управлением, цифровая камера с прямым подключением к монитору компьютера, на неимерсионном объективе исследуется окрашенный мазок крови, который разбивают на отдельные поля зрения, вводят их в память управляющего компьютера в виде серии цифровых кадров, которые анализируют, идентифицируют, статистически обрабатывают и сохраняют в базе данных компьютера.A feature of this method is that the device uses a stage with automated control, a digital camera with a direct connection to a computer monitor, and a colored blood smear is examined on a non-immersion lens, which is divided into separate fields of view, and they are entered into the memory of the control computer as a series of digital frames that analyze, identify, statistically process and store in the computer database.

Недостатком наиболее близкого технического решения является относительно узкая область применения, не позволяющая, в частности, осуществлять идентификацию клеток крови на основании нативных образцов. Способ предназначен для исследований только окрашенных мазков крови, что значительно увеличивает время подготовки пробы к анализу, снижает точность идентификации и не позволяет производить счет и анализ значительного количества клеток образца из-за ограниченных возможностей при приготовлении мазков – проб. The disadvantage of the closest technical solution is the relatively narrow scope, which does not allow, in particular, to identify blood cells based on native samples. The method is intended for research only stained blood smears, which significantly increases the time of preparation of the sample for analysis, reduces the accuracy of identification and does not allow counting and analysis of a significant number of sample cells due to limited capabilities in the preparation of smears - samples.

Задачей, которая решается в изобретении, является расширение арсенала технических средств, которые могут быть использованы для идентификации и счета клеток и расширении на этой основе области применения способа путем обеспечения возможности его применения, в том числе, и для нативных образцов.The problem that is solved in the invention is the expansion of the arsenal of technical tools that can be used to identify and count cells and expand on this basis the scope of the method by providing the possibility of its application, including for native samples.

Требуемый технический результат заключается в расширении арсенала технических средств, которые могут быть использованы для идентификации и счета клеток крови и расширении на этой основе области применения способа путем обеспечения возможности его применения для нативных образцов, что повышает точность и оперативность идентификации.The required technical result is to expand the arsenal of technical means that can be used to identify and count blood cells and expand on this basis the scope of the method by providing the possibility of its use for native samples, which increases the accuracy and efficiency of identification.

Поставленная задача решается, а требуемый технический результат достигается тем, что, исследуемый препарат размещают на оптической поверхности предметного столика, освещают его излучением осветителя и проводят микроскопию исследуемого препарата, для чего формируют изображение исследуемого препарата на приемной площадке электронного приемника изображения и преобразуют электрические сигналы с выхода электронного приемника изображения в массив цифровых данных изображения исследуемого препарата, согласно изобретению, микроскопию исследуемого препарата проводят вначале при длине волны излучения осветителя, равной 240 нм, и определяют границы клеток исследуемого препарата, а затем проводят микроскопию исследуемого препарата при длине волны излучения осветителя, равной 280 нм и 260 нм и получают по два изображения клеток, одно из которых в пределах границ клеток вычитают из другого для определения оптической плотности клеток, которое коррелирует с содержанием в них белков и нуклеиновых кислот, и проводят идентификацию клеток исследуемого препарата.The problem is solved, and the required technical result is achieved by the fact that the test drug is placed on the optical surface of the stage, illuminated with radiation from the illuminator and microscopy of the test drug is carried out, for which an image of the test drug is formed on the receiving platform of the electronic image receiver and the electrical signals from the output are converted an electronic image receiver into an array of digital image data of the test drug, according to the invention, the microscopy of the test drug is first carried out at a radiation wavelength of the illuminator equal to 240 nm, and the cell boundaries of the test drug are determined, and then the microscopic study of the test drug at a light wavelength of the illuminant is equal to 280 nm and 260 nm and receive two images of cells, one of which within the boundaries of the cells is subtracted from the other to determine the optical density of cells, which correlates with the content of proteins and nucleic acids in them slot, and carry out the identification of the cells of the test drug.

На чертеже представлены:The drawing shows:

на фиг. 1 – функциональная схема устройства для реализации заявленного способа;in FIG. 1 is a functional diagram of a device for implementing the claimed method;

на фиг. 2 – изображение клеток препарата при длине волны излучения осветителя 240нм.in FIG. 2 - image of the cells of the drug at a wavelength of radiation of the illuminator 240 nm.

на фиг. 3 – изображение клеток препарата при длине волны излучения осветителя 260нм. in FIG. 3 - image of the cells of the drug at a wavelength of radiation of the illuminator 260 nm.

на фиг. 4 – изображение клеток препарата при длине волны излучения осветителя 280нм.in FIG. 4 - image of the cells of the drug at a wavelength of radiation of the illuminator 280 nm.

на фиг. 5 – результат послойного вычитания изображений.in FIG. 5 - the result of layer-by-layer subtraction of images.

Устройство для реализации заявленного способа содержит источник 1 монохроматического излучения, фокусирующий и модулирующий блок 2, исследуемый препарат 3, размещенный на оптической поверхности предметного столика, мультиспектральный регистратор 4 с функцией получения электронного изображения клеток, блок 5 идентификации клеток с функцией обработки электронного изображения клеток. A device for implementing the inventive method comprises a monochromatic radiation source 1, a focusing and modulating unit 2, an investigational preparation 3 placed on the optical surface of a stage, a multispectral recorder 4 with a function for obtaining an electronic image of cells, a cell identification unit 5 with a function for processing an electronic image of cells.

Предложенный способ идентификации клеток крови реализуется следующим образом.The proposed method for the identification of blood cells is implemented as follows.

На фиг. 1 представлена функциональная схема устройства для реализации заявленного способа, где источник 1 монохроматического излучения позволяет проводить исследование в диапазоне волн 215 – 900нм. In FIG. 1 is a functional diagram of a device for implementing the inventive method, where a monochromatic radiation source 1 allows investigation in the wavelength range of 215 - 900 nm.

Вначале проводят микроскопию исследуемого препарата 3, размещенного на оптической поверхности предметного столика, при длине волны 240 нм. Это позволяет точно определить границы отдельных клеток, так как все основные составляющие клетки (липиды, белки и нуклеиновые кислоты) имеют значительное поглощение на используемой длине волны. В результате можно наблюдать контрастное изображение клетки целиком (фиг. 2). First, microscopy of the test drug 3 is carried out, placed on the optical surface of the stage, at a wavelength of 240 nm. This allows you to accurately determine the boundaries of individual cells, since all the main constituent cells (lipids, proteins and nucleic acids) have significant absorption at the used wavelength. As a result, a contrast image of the whole cell can be observed (Fig. 2).

Затем получают ряд изображений с изменяющейся яркостью источника монохроматического излучения на длинах волн 280 нм и 260 нм. Так как нуклеиновые кислоты имеют максимум поглощения при 260 нм, а белки при 280 нм., то вычитая одно изображение из другого (или используя нормированные усредненные изображения) находим распределение оптической плотности, которое коррелирует с содержанием белков и нуклеиновых кислот. В результате получаем изображение (фиг. 5), на котором хорошо видно распределение нуклеиновых кислот в клетке и белков. Распределение нуклеиновых кислот в первом приближении соответствует форме ядра клетки, белков – гранулам. По изображению клетки, с хорошо видимым ядром и гранулами легко идентифицировать тип клетки крови. Это позволяет их идентифицировать.Then get a series of images with varying brightness of the source of monochromatic radiation at wavelengths of 280 nm and 260 nm. Since nucleic acids have a maximum absorption at 260 nm, and proteins at 280 nm., Subtracting one image from another (or using normalized averaged images) we find the optical density distribution, which correlates with the content of proteins and nucleic acids. As a result, we obtain an image (Fig. 5), which clearly shows the distribution of nucleic acids in the cell and proteins. The distribution of nucleic acids, to a first approximation, corresponds to the shape of the cell nucleus, and proteins to granules. From the image of the cell, with a clearly visible nucleus and granules, it is easy to identify the type of blood cell. This allows them to be identified.

Дальнейший анализ формы и распределения ДНК и белков в клетке позволяет определить размеры и формы ядра клетки и с помощью, например, нейросетевых алгоритмов, обученных на образцовых снимках произвести идентификацию того или иного типа клеток.Further analysis of the shape and distribution of DNA and proteins in the cell allows you to determine the size and shape of the cell nucleus and, for example, using neural network algorithms trained on model images to identify one or another type of cell.

Для некоторых иных типов клеток возможно использование дополнительной длины волны для регистрации. Например, для эритроцита это может быть диапазон длин волн 520-550 нм, при которой максимальное поглощение света имеет белок гемоглобин – основной белок в составе эритроцита. For some other types of cells, it is possible to use an additional wavelength for registration. For example, for an erythrocyte this can be a wavelength range of 520-550 nm, in which the hemoglobin protein, the main protein in the erythrocyte, has the maximum light absorption.

Дополнительным эффектом микроскопии в ультрафиолетовом диапазоне волн, помимо возможности идентификации клеток непосредственно в испытываемом образце без предварительной процедуры окрашивания, является значительно более высокое достижимое разрешение изображения. В общем случае для микроскопии проходящего света разрешение двух точек изображения ограничено расстоянием равным половине длины волны света, в котором проводится наблюдение. Так для видимого диапазона волн 400-500нм. Минимально различимые компоненты составляют 200-250нм. Для длины волны 260-280 нм. минимально различимые компоненты составляют уже 130-140нм, что улучшает разрешение микроскопического снимка в 2 раза по сравнению с обычной микроскопией в видимом свете. An additional effect of microscopy in the ultraviolet wavelength range, in addition to the possibility of identifying cells directly in the test sample without a preliminary staining procedure, is a significantly higher achievable image resolution. In the general case, for microscopy of transmitted light, the resolution of two image points is limited by a distance equal to half the wavelength of light in which the observation is carried out. So for the visible wavelength range of 400-500nm. The minimum distinguishable components are 200-250nm. For a wavelength of 260-280 nm. minimally distinguishable components are already 130-140nm, which improves the resolution of a microscopic image by 2 times compared to conventional microscopy in visible light.

Таким образом, благодаря предложенным усовершенствованиям достигается требуемый технический результат, заключающийся в расширении арсенала технических средств, которые могут быть использованы для идентификации и счета клеток и расширении на этой основе области применения способа путем обеспечения возможности его применения для нативных образцов.Thus, thanks to the proposed improvements, the required technical result is achieved, which consists in expanding the arsenal of technical tools that can be used to identify and count cells and expand on this basis the scope of the method by providing the possibility of its application for native samples.

Claims (1)

Способ идентификации клеток крови, заключающийся в том, что, исследуемый препарат размещают на оптической поверхности предметного столика, освещают его излучением осветителя и проводят микроскопию исследуемого препарата, для чего формируют изображение исследуемого препарата на приемной площадке электронного приемника изображения в виде распределения нуклеиновых кислот в клетке и белков, где распределение нуклеиновых кислот соответствует форме ядра клетки, а белков – гранулам, осуществляют по изображению клетки с видимым ядром и гранулами идентификацию типа клетки крови, после чего преобразуют электрические сигналы с выхода электронного приемника изображения в массив цифровых данных изображения исследуемого препарата, отличающийся тем, что, микроскопию исследуемого препарата проводят вначале при длине волны излучения осветителя, равной 240 нм, и определяют границы клеток исследуемого препарата, а затем проводят микроскопию исследуемого препарата при длине волны излучения осветителя, равной 280 нм и 260 нм и получают по два изображения клеток, одно из которых в определенных предварительно границах клеток вычитают из другого для определения оптической плотности клеток, которое коррелирует с содержанием в них белков и нуклеиновых кислот, и проводят идентификацию клеток исследуемого препарата.A method for identifying blood cells, which consists in the fact that the test drug is placed on the optical surface of the stage, illuminated with radiation from the illuminator and microscopy of the test drug is performed, for which an image of the test drug is formed on the receiving area of the electronic image receiver in the form of a distribution of nucleic acids in the cell and proteins, where the distribution of nucleic acids corresponds to the shape of the cell nucleus, and proteins to the granules, the type of blood cell is identified by the image of the cell with the visible nucleus and granules, and then the electrical signals from the output of the electronic image receiver are converted into an array of digital image data of the studied drug, characterized in that, the microscopy of the test drug is carried out first at a radiation wavelength of the illuminator equal to 240 nm, and determine the cell borders of the test drug, and then the microscopy of the test drug is carried out at the radiation wavelength of the illuminator, equal to 280 nm and 260 nm and receive two images of cells, one of which at predetermined cell boundaries is subtracted from the other to determine the optical density of cells, which correlates with the content of proteins and nucleic acids in them, and the cells of the studied preparation are identified.
RU2019109506A 2019-04-01 2019-04-01 Method for identification of blood cells RU2725798C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019109506A RU2725798C1 (en) 2019-04-01 2019-04-01 Method for identification of blood cells

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019109506A RU2725798C1 (en) 2019-04-01 2019-04-01 Method for identification of blood cells

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2725798C1 true RU2725798C1 (en) 2020-07-06

Family

ID=71510224

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019109506A RU2725798C1 (en) 2019-04-01 2019-04-01 Method for identification of blood cells

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2725798C1 (en)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7945077B2 (en) * 2005-11-30 2011-05-17 Lawrence Livermore National Security, Llc Hyperspectral microscope for in vivo imaging of microstructures and cells in tissues
US20120145926A1 (en) * 2008-02-18 2012-06-14 Visiongate, Inc. 3d imaging of live cells with ultraviolet radiation
RU2488821C1 (en) * 2011-12-21 2013-07-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургский национальный исследовательский университет информационных технологий, механики и оптики" Method for erythrocyte count on blood smear photos (versions)
US9772282B2 (en) * 2015-11-12 2017-09-26 Massachusetts Institute Of Technology System for wide field-of-view, highly oblique illumination microscopy for scatter-based discrimination of cells

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7945077B2 (en) * 2005-11-30 2011-05-17 Lawrence Livermore National Security, Llc Hyperspectral microscope for in vivo imaging of microstructures and cells in tissues
US20120145926A1 (en) * 2008-02-18 2012-06-14 Visiongate, Inc. 3d imaging of live cells with ultraviolet radiation
RU2488821C1 (en) * 2011-12-21 2013-07-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургский национальный исследовательский университет информационных технологий, механики и оптики" Method for erythrocyte count on blood smear photos (versions)
US9772282B2 (en) * 2015-11-12 2017-09-26 Massachusetts Institute Of Technology System for wide field-of-view, highly oblique illumination microscopy for scatter-based discrimination of cells

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ДУБРОВСКИЙ В.А., ТОРБИН С.О. Эффект "высвечивания" лейкоцитов и его применение для идентификации клеток кроки методом цифровой микроскопии // Изв. Сарат. Ун-та. Нов. сер. Сер. Физика. 2017. Т.17, вып.3, стр.191-200. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114062231B (en) Analysis device
US3497690A (en) Method and apparatus for classifying biological cells by measuring the size and fluorescent response thereof
US8143600B2 (en) 3D imaging of live cells with ultraviolet radiation
US9329130B2 (en) Systems and methods for counting cells and biomolecules
US8086016B2 (en) Apparatus, a method and software for analyzing a cell image
US20210217190A1 (en) Analyzer for three-dimensionally analyzing a medical sample by means of a light field camera
WO2015181872A1 (en) Optical analysis device
US9797836B1 (en) Hyperspectral imaging flow cytometer
WO2017193700A1 (en) Imaging device and method for quickly acquiring large-sample three-dimensional structure information and molecular phenotype information
CN109266717A (en) A kind of method and apparatus by single cell analysis detection bacterium drug resistance
EP4073566A1 (en) Artificial generation of color blood smear image
CN111380848A (en) Hyperspectral living body fluorescence molecule imaging system and method
USH1060H (en) Microstructure correlation counter
CN117546007A (en) Information processing device, biological sample observation system, and image generation method
JP2023534366A (en) Method and system for acquisition of fluorescence images of live cell biological samples
US20230062698A1 (en) Method for digitally staining cells
RU2725798C1 (en) Method for identification of blood cells
EP2852820B1 (en) Universal multi-detection system for microplates
WO2023157756A1 (en) Information processing device, biological sample analysis system, and biological sample analysis method
Guo et al. Revealing architectural order with quantitative label-free imaging and deep neural networks
CN212159566U (en) Hyperspectral living body fluorescence molecule imaging system
JP7543048B2 (en) Cell analysis method and system
US11340165B2 (en) Sample observation device and sample observation method
JP2021196182A (en) Analyzer
US20230222753A1 (en) Sample observation device and sample observation method