RU2725043C1

RU2725043C1 - Method for retarding aging of women

Info

Publication number: RU2725043C1
Application number: RU2019141864A
Authority: RU
Inventors: Николай Николаевич Рухляда
Original assignee: Николай Николаевич Рухляда
Priority date: 2019-12-13
Filing date: 2019-12-13
Publication date: 2020-06-29

Abstract

FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention relates to medicine and concerns a method for retarding aging of women by sampling ovarian tissue before menopause and tissue reimplantation in the body at menopause, where a portion of the cortical and medullary layers of the ovary is picked up, preserved, not earlier than in 3 years, is unfrozen, a coarse suspension is prepared, and once in 2–4 months in perimenopause subcutaneously is introduced with a menopausal hormonal therapy.EFFECT: invention provides the absence of complications associated with the development of a transplant rejection reaction, as well as the need for immunosuppressive therapy after tissue return.1 cl, 1 ex

Description

Изобретение относится к медицине, в частности, к гинекологии, эндокринологии, геронтологии и может применяться для увеличения продолжительности жизни женщин.The invention relates to medicine, in particular, to gynecology, endocrinology, gerontology and can be used to increase the life expectancy of women.

Известен способ продления жизни женщин путем назначения препаратов или метаболитов эстрадиола, как компонента менопаузальной гормонотерапии [Gouw AM, Efe G, Barakat R, Preecha A, Roles of estrogen receptor-alpha in mediating life span: the hypothalamic deregulation hypothesis // Physiol Genomics. 2017 Feb 1; 49(2):88-95; Taylor HS, Tal A, Pal L, Li F, Black DM // Effects of Oral vs Transdermal Estrogen Therapy on Sexual Function in Early Postmenopause: Ancillary Study of the Kronos Early Estrogen Prevention Study (KEEPS) // JAMA Intern Med. 2017 Oct 1; 177(10): 1471-1479.].A known method of prolonging the lives of women by prescribing drugs or metabolites of estradiol as a component of menopausal hormone therapy [Gouw AM, Efe G, Barakat R, Preecha A, Roles of estrogen receptor-alpha in mediating life span: the hypothalamic deregulation hypothesis // Physiol Genomics. 2017 Feb 1; 49 (2): 88-95; Taylor HS, Tal A, Pal L, Li F, Black DM // Effects of Oral vs Transdermal Estrogen Therapy on Sexual Function in Early Postmenopause: Ancillary Study of the Kronos Early Estrogen Prevention Study (KEEPS) // JAMA Intern Med. 2017 Oct 1; 177 (10): 1471-1479.].

Недостатком этого способа является то, что при данном варианте лечения физиологическое влияние оказывается только на звено эстрадиола, и не принимаются во внимание биологически активные вещества (а их более 100), продуцируемые в яичниках наряду с эстрадиолом. Именно поэтому эффективность эстрогенотерапии низкая. Кроме того, назначение эстрогенсодержащих препаратов категорически противопоказано при ряде состояний, а также может приводить к развитию таких грозных осложнений, как тромбозы.The disadvantage of this method is that with this treatment option, the physiological effect is only on the estradiol unit, and biologically active substances (and there are more than 100) produced in the ovaries along with estradiol are not taken into account. That is why the effectiveness of estrogen therapy is low. In addition, the appointment of estrogen-containing drugs is strictly contraindicated in a number of conditions, and can also lead to the development of such formidable complications as thrombosis.

Ближайшим к заявляемому является способ продления жизни мышей путем аллогенной трансплантации целых яичников от молодых особей к старым [Mason J.В., Cargill S.L., Anderson GB, Carey JR. // Transplantation of young ovaries to old mice increased life span in transplant recipients // J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2009 Dec; 64(12):1207-11].Closest to the claimed is a method of prolonging the life of mice by allogeneic transplantation of whole ovaries from young to old [Mason J. B., Cargill S. L., Anderson GB, Carey JR. // Transplantation of young ovaries to old mice increased life span in transplant recipients // J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2009 Dec; 64 (12): 1207-11].

Недостатком способа, выбранного в качестве прототипа, является то, что ввиду аллогенности трансплантации возникает целый ряд проблем, связанных с реакцией отторжения трансплантата. Более того, производится пересадка яичника целиком, в брюшную полость, что исключает этапность восстановления функции яичников, а также требует выполнения лапаротомии.The disadvantage of the method selected as a prototype is that due to the allogeneity of transplantation, a number of problems arise associated with the transplant rejection reaction. Moreover, the entire ovary is transplanted into the abdominal cavity, which eliminates the staged restoration of ovarian function, and also requires laparotomy.

Также при таком методе невозможно периодическое обновление трансплантированной ткани, ее дозирование по причине отсутствия этапа консервации.Also, with this method, it is impossible to periodically update the transplanted tissue, its dosing due to the lack of a conservation stage.

Задачей настоящего изобретения является обеспечение возможности замедления старения женщин без использования аллотканей.The objective of the present invention is to provide the possibility of slowing the aging of women without the use of allotissue.

Технический результат поставленной задачи достигается тем, что в способе замедления старения женщин путем забора ткани яичников до наступления менопаузы и реимплантации ткани в организм при наступлении менопаузы, забирают часть кортикального и медуллярного слоев яичника, консервируют, не ранее чем через 3 года размораживают, готовят крупнодисперсную суспензию и раз в 2-4 месяца в перименопаузе вводят ее подкожно вместе с менопаузальной гормональной терапией.The technical result of the task is achieved by the fact that in the method of slowing down the aging of women by taking ovarian tissue before menopause and reimplanting the tissue into the body during menopause, part of the cortical and medullary layers of the ovary is taken, canned, thawed no earlier than 3 years later, a coarse suspension is prepared and every 2-4 months in perimenopause, it is administered subcutaneously along with menopausal hormone therapy.

В заявляемом способе осуществляется аутотрансплантация овариальной ткани. Это исключает возможность развития реакции отторжения "трансплантат-реципиент", а также исключает ряд этических и юридических вопросов, связанных с аллогенной трансплантацией тканей и органов.In the inventive method, autotransplantation of ovarian tissue is carried out. This excludes the possibility of developing a transplant-recipient rejection reaction, and also eliminates a number of ethical and legal issues related to allogeneic transplantation of tissues and organs.

Получение и консервация аутотрансплантатов до наступления менопаузы дает возможность сохранить еще активно функционирующую яичниковую ткань.Obtaining and preserving autografts prior to the onset of menopause makes it possible to preserve the still actively functioning ovarian tissue.

Заготовка и консервация комплекса тканей кортикального и медуллярного слоев обусловлена тем, что именно медуллярный слой отвечает за торможение апоптоза и выживаемость тканей при консервации. Криоконсервация только кортикального слоя, в отличие от комплекса медуллярного-кортикального слоя, характеризуется худшей выживаемостью трансплантатов.The preparation and preservation of the complex of tissues of the cortical and medullary layers is due to the fact that it is the medullary layer that is responsible for the inhibition of apoptosis and tissue survival during conservation. Cryopreservation of only the cortical layer, in contrast to the complex of the medullary-cortical layer, is characterized by poorer graft survival.

Криоконсервация тканей яичника позволяет проводить реимплантацию ("возврат") через неограниченное время, поскольку срок хранения трансплантатов в жидком азоте исчисляется десятками лет. Между забором тканей и их возвратом период времени должен составлять не менее 3 лет, поскольку возврат осуществляется при наступлении менопаузы (1 год отсутствия менструации), а забор надо осуществлять до описанных в способе появления гормональных маркеров перименопаузы (снижение АМГ, рост ФСГ и ЛГ) Однако, оптимальным является начало поэтапной трансплантации в самом начале менопаузы и с началом менопаузальной гормонотерапии.Cryopreservation of ovarian tissue allows reimplantation ("return") after unlimited time, since the shelf life of grafts in liquid nitrogen is tens of years. Between tissue sampling and their return, the period of time should be at least 3 years, since the return is carried out upon the onset of menopause (1 year of absence of menstruation), and sampling must be carried out before the hormonal markers of perimenopause are described in the method (decrease in AMH, FSH and LH growth) However , the optimal is the beginning of phased transplantation at the very beginning of menopause and with the beginning of menopausal hormone therapy.

Для трансплантации (возврата) после разморозки фрагмента производится его механическое измельчение до образования крупнодисперсной суспензии, которая вводится подкожно через толстую иглу. Данный способ трансплантации исключает необходимость выполнения лапаротомии или другого интраабдоминального вмешательства, прост и не требует общей анестезии.For transplantation (return) after defrosting a fragment, it is mechanically crushed to form a coarse suspension, which is injected subcutaneously through a thick needle. This transplantation method eliminates the need for a laparotomy or other intra-abdominal intervention, is simple and does not require general anesthesia.

Крайне важной является периодичность возврата трансплантируемых тканей. Известно, что трансплантаты яичниковой ткани после криоконсервации, разморозки и трансплантации имеют лимитированную продолжительность жизни в организме. Как правило она ограничена 2-6 месяцами. Следовательно, введение трансплантируемых тканей с интервалом 2-4 месяца подкожно позволяет добиться непрерывного функционирования трансплантата для достаточной гормональной продукции.Extremely important is the frequency of return of transplanted tissues. It is known that ovarian tissue transplants after cryopreservation, thawing and transplantation have a limited life span in the body. As a rule, it is limited to 2-6 months. Therefore, the introduction of transplanted tissues with an interval of 2-4 months subcutaneously allows for the continuous functioning of the graft for sufficient hormonal production.

Сочетание методики трансплантации и менопаузальной гормонотерапии является оптимальным, поскольку наличие функционирующих фрагментов медуллярного вещества увеличивает биодоступность экзогенных производных эстрадиола.The combination of transplantation technique and menopausal hormone therapy is optimal, since the presence of functioning fragments of the medullary substance increases the bioavailability of exogenous derivatives of estradiol.

Сочетание указанных отличий позволяет добиться длительной овариальной функции у женщин в менопаузе, а значит и увеличить продолжительность жизни.The combination of these differences allows you to achieve long-term ovarian function in women during menopause, and therefore increase life expectancy.

Способ осуществляется следующим образом. У женщин до перехода в менопаузу в возрасте 40-45 лет хирургическим путем получают фрагменты яичников (примерно по 25-30% объема каждого) (например, путем лапароскопии). Иссечение фрагментов яичника должно сопровождаться равным удалением кортикального и медуллярного слоев. Предпочтительно клиновидное иссечение.The method is as follows. In women, before going to menopause, aged 40-45 years, ovarian fragments are obtained surgically (approximately 25-30% of each) (for example, by laparoscopy). Excision of ovarian fragments should be accompanied by equal removal of the cortical and medullary layers. Preferably wedge-shaped excision.

Критерием адекватности сроков получения являются ненарушенный регулярный менструальный цикл, уровень антимюллеровского гормона не ниже 1,2 нг/мл, уровень ФСГ не выше 25 мЕд/л.The criterion for the adequacy of the timing of receipt is an undisturbed regular menstrual cycle, the level of anti-Muller hormone is not lower than 1.2 ng / ml, the level of FSH is not higher than 25 mU / l.

Сразу после извлечения фрагментов они делятся на страйпы (полоски) сечением не более 2×2 мм на всю длину препарата (8-10 мм) в стерильных условиях. Данные страйпы помещаются в герметичные капсулы, наполняемые ксеноном до давления 1,5 атм, и подвергаются постепенному охлаждению до 0 градусов Цельсия с темпом 1 градус в минуту, затем после экспозиции при нулевой температуре в течение 60 минут продолжают охлаждение темпом 1 градус в минуту до -20 градусов цельсия. Затем сразу переносят капсулы в жидкий азот, в котором они хранятся неограниченное время.Immediately after extracting the fragments, they are divided into strips (strips) with a section of no more than 2 × 2 mm over the entire length of the preparation (8-10 mm) under sterile conditions. These strips are placed in sealed capsules filled with xenon to a pressure of 1.5 atm, and are subjected to gradual cooling to 0 degrees Celsius at a rate of 1 degree per minute, then after exposure at zero temperature for 60 minutes, cooling continues at a rate of 1 degree per minute to - 20 degrees Celsius. Then the capsules are immediately transferred to liquid nitrogen, in which they are stored for unlimited time.

При наступлении у пациентки периода перименопаузы, когда речь идет о начале менопаузальной гормональной терапии (через 3-5 лет после забора и консервации тканей), наряду с назначение эстрадиол содержащих препаратов, производится периодическое введение пациентке мелкофрагментарной суспензии, приготовленной из размороженных фрагментов яичника, содержащих медуллярное и кортикальное вещества.When the patient begins the period of perimenopause, when it comes to the beginning of menopausal hormone therapy (3-5 years after the collection and preservation of tissues), along with the administration of estradiol-containing preparations, a small-fragment suspension prepared from thawed ovarian fragments containing medullary is periodically administered to the patient and cortical substances.

После разморозки при комнатной температуре, при ее достижении одна или несколько капсул открываются, немедленно в стерильных условиях производится измельчение тканей яичников механическим путем до получения мелкофрагментарной массы, которую можно продавить через иглу шприца с диаметром просвета около 2 мм. Для однократного введения достаточно объема 3-4 кубических миллиметров ткани.After defrosting at room temperature, when it is reached, one or several capsules open, immediately under sterile conditions the ovarian tissue is mechanically crushed to obtain a finely fragmented mass, which can be pressed through a syringe needle with a lumen diameter of about 2 mm. For a single injection, a volume of 3-4 cubic millimeters of tissue is sufficient.

Такие введения рекомендуется осуществлять раз в 60-120 суток вместе в проводимой фармакологической менопаузальной гормонотерапией.Such injections are recommended once every 60-120 days together with pharmacological menopausal hormone therapy.

Пример. Пациентка Ф. 45 л. обратилась в клинику НИИ скорой помощи в ноябре 2013 г. для консервации тканей яичника. Отмечала регулярный менструальный цикл, уровень антимюллеровского гормона 1,4 нг/мл, уровень ФСГ 18 мЕд/л. В соответствии с заявляемым способом были выполнены лапароскопия, забор около 20% объема каждого яичника (комплекс медуллярная и кортикальная ткани) и криоконсервация. Через 2,5 года женщина отметила исчезновение менструаций, изменение гормонального фона АМГ 0,4 нг/мл, ФСГ 65 МЕд/л. В ноябре 2016 г. (через 3 года после забора) начата менопаузальная гормонотерапия, а также введение суспензии размораживаемых овариальных тканей в соответствии с заявляемым способом каждые 60-65 суток подкожно. В анализах - через полгода нормализация цифр ФСГ до уровня пременопаузальных (до 20 мЕд/л). Наблюдается 3 года, при дерматологическом и эндокринологическом обследовании отсутствуют признаки старения, связанного с менопаузой (изменения структуры и плотности дермы, сосудистые нарушения, климактерический синдром).Example. Patient F. 45 l. went to the clinic of the Research Institute of Emergency Medicine in November 2013 for the preservation of ovarian tissue. She noted a regular menstrual cycle, the level of anti-Muller hormone 1.4 ng / ml, the level of FSH 18 mU / l. In accordance with the claimed method, laparoscopy, a sampling of about 20% of the volume of each ovary (a complex of medullary and cortical tissues) and cryopreservation were performed. After 2.5 years, the woman noted the disappearance of menstruation, a change in the hormonal background of AMH 0.4 ng / ml, FSH 65 IU / l. In November 2016 (3 years after the fence), menopausal hormone therapy was started, as well as the introduction of a suspension of thawed ovarian tissues in accordance with the claimed method every 60-65 days subcutaneously. In the analyzes, after six months, the FSH numbers normalized to the premenopausal level (up to 20 mU / l). It has been observed for 3 years, with a dermatological and endocrinological examination there are no signs of aging associated with menopause (changes in the structure and density of the dermis, vascular disorders, menopause).

Заявляемый способ является максимально приближенным к физиологическому. Отсутствие необходимости использования аллотканей сразу исключает большое количество осложнений, связанных с развитием реакции отторжения трансплантатов (неэффективность, воспаление, нагноение), а также необходимость иммуносупрессивной терапии после возврата тканей. Отсутствие необходимости пересадки "чужих тканей" также устраняет этические аспекты и юридические вопросы, поскольку такая технология не попадает под законодательные нормы закона о трансплантации тканей. При данном способе нет необходимости HLA типирования тканей и подбора донора. Использование аутотканей и консервация их в том периоде жизни, когда частичный их забор не приводит к развитию физиологических изменений, и возврат в организм в менопаузе, когда введение этих веществ крайне важно для замедления старения является основным преимуществом изобретения.The inventive method is as close to physiological. The absence of the need to use allotissue immediately eliminates a large number of complications associated with the development of the transplant rejection reaction (inefficiency, inflammation, suppuration), as well as the need for immunosuppressive therapy after tissue return. The absence of the need for transplantation of “foreign tissue” also eliminates ethical aspects and legal issues, since such technology does not fall under the legislative norms of the law on tissue transplantation. With this method, there is no need for HLA tissue typing and donor selection. The use of autotissues and their preservation in the period of life when their partial collection does not lead to the development of physiological changes, and return to the body during menopause, when the introduction of these substances is extremely important to slow down aging is the main advantage of the invention.

Claims

A method of slowing down the aging of women by taking ovarian tissue before menopause and reimplanting the tissue into the body during menopause, characterized in that part of the cortical and medullary layers of the ovary is taken, preserved, thawed no earlier than 3 years later, a coarse suspension is prepared and every 2- For 4 months in perimenopause, it is administered subcutaneously along with menopausal hormone therapy.