RU2716712C1 - Method for producing native blood serum of animals - Google Patents
Method for producing native blood serum of animals Download PDFInfo
- Publication number
- RU2716712C1 RU2716712C1 RU2019122230A RU2019122230A RU2716712C1 RU 2716712 C1 RU2716712 C1 RU 2716712C1 RU 2019122230 A RU2019122230 A RU 2019122230A RU 2019122230 A RU2019122230 A RU 2019122230A RU 2716712 C1 RU2716712 C1 RU 2716712C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blood
- serum
- clot
- refrigerator
- hours
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к ветеринарной медицине и может быть использовано при производстве нативной сыворотки крови животных для увеличения выхода сыворотки от объема взятой крови.The invention relates to veterinary medicine and can be used in the production of native blood serum of animals to increase the yield of serum from the volume of blood taken.
Известен способ получения сыворотки крови взрослого крупного рогатого скота для культивирования клеток животных и человека, включающий забор крови в стерильные стеклянные 10 или 20 литровые емкости, предварительно смоченные 100-200 мл 5%-ным раствором натрия хлористого, 2-х часовую выдержку взятой крови при комнатной температуре при дальнейшем размещении емкостей с кровью в наклонном положении в холодильной камере на 72 часа при температуре +1…+2°С (Патент РФ №2460786, МПК А61К 33/00, опубликован 27.10.2003).A known method of producing blood serum of adult cattle for culturing animal and human cells, including blood sampling in sterile glass 10 or 20 liter containers, previously moistened with 100-200 ml of 5% sodium chloride solution, 2-hour exposure of the taken blood at room temperature with further placement of blood containers in an inclined position in the refrigerator for 72 hours at a temperature of + 1 ... + 2 ° C (RF Patent No. 2460786, IPC A61K 33/00, published October 27, 2003).
Известен классический способ получения нативной сыворотки крови реконвалесцентов, которую изготавливают областные, межрайонные ветеринарные лаборатории и ветлечебницы, включающий забор крови в емкости с физиологическим раствором (из расчета 50 см3 раствора на 1 л крови), после чего кровь ставят в помещение с температурой +25°С на 5-6 часов, при последующей обводки сгустка фламбированной стеклянной палочкой для отрыва сгустка от стенок емкости и после слива сыворотки проводят ее консервацию. (Наставление по изготовлению и применению сыворотки из крови реконвалесцентов при ящуре: Ветеринарное законодательство, т. 1, под редакцией А.Д. Третьякова 1972. - с. 628-630).There is a classic method of obtaining native blood serum of convalescents, which is produced by regional, inter-district veterinary laboratories and veterinarians, including blood sampling in containers with physiological saline (at the rate of 50 cm 3 solution per 1 liter of blood), after which the blood is placed in a room with a temperature of +25 ° C for 5-6 hours, with the subsequent stroke of the clot flambered with a glass rod to detach the clot from the walls of the container and after draining the serum, it is preserved. (Manual on the manufacture and use of serum from the blood of convalescents in foot and mouth disease: Veterinary law, vol. 1, edited by A.D. Tretyakov 1972. - S. 628-630).
Недостатком данных способов получения сывороток является следующее. На практике выход сыворотки составляет от 25 до 40%, а количество сгустка крови, соответственно 60-75% от объема полученной крови. В то же время в сгустке крови содержится большое количество не извлеченной сыворотки, однако данные способы не учитывают этого обстоятельства, утилизируя сгусток, что приводит к большим потерям нативной сыворотки.The disadvantage of these methods for producing serum is the following. In practice, the serum yield is from 25 to 40%, and the amount of blood clot, respectively, 60-75% of the volume of blood received. At the same time, the blood clot contains a large amount of unrecovered serum, however, these methods do not take this circumstance into account when disposing of the clot, which leads to large losses of native serum.
Известен способ получения нативной сыворотки использующий сгусток крови в качестве дополнительного источника сыворотки отраженный в патенте №2196591 МПК А61К 33/14 «Препарат и способ профилактики и лечения диареи у телят», включающем забор крови, отслаивание крови на водяной бане при температуре +37…+38°С в течение 30-40 минут или при комнатной температуре в течение 12-15 часов при дальнейшей выдержке субстрата в холодильнике при температуре +4…+5°С до наступления максимальной ретракции, после слива сыворотки сгусток крови подвергали отжатию путем его смешивания с гипохлоритом натрия концентрацией 350-300 мг/л из расчета 300 мл гипохлорита на 1 л сгустка при выдержке субстрата в течение 24 часов в прохладном месте. Объединение всех партий сыворотки, которые были получены методом отсоса (слива) - основная партия и отжатая из сгустков крови с добавлением гипохлорита натрия осуществляли после раздельного центрифугирования и консервирования сывороток. (Патент РФ №2196591 МПК А61К 33/14, А61К 35/16, опубликован 2003.01.20 - прототип).A known method of producing native serum using a blood clot as an additional source of serum is reflected in patent No. 2196591 IPC АКК 33/14 “Drug and method for the prevention and treatment of diarrhea in calves”, including blood sampling, blood exfoliation in a water bath at a temperature of + 37 ... + 38 ° C for 30-40 minutes or at room temperature for 12-15 hours with further exposure of the substrate in the refrigerator at a temperature of + 4 ... + 5 ° C until maximum retraction occurs, after draining the serum, the blood clot was squeezed by mixing it with sodium hypochlorite at a concentration of 350-300 mg / l at the rate of 300 ml of hypochlorite per 1 liter of clot while holding the substrate for 24 hours in a cool place. All batches of serum that were obtained by suction (discharge) were combined — the main batch and squeezed from blood clots with sodium hypochlorite were added after separate centrifugation and preservation of serums. (RF patent No. 2196591 IPC A61K 33/14, A61K 35/16, published 2003.01.20 - prototype).
Недостатком данного способа является то, что он не позволяет получить цельную сыворотку в связи с тем, что во время переработки сгустка вводится большое количество гипохлорита натрия, снижающее активность сыворотки, то есть снижается титр антител.The disadvantage of this method is that it does not allow to obtain whole serum due to the fact that during the processing of the clot, a large amount of sodium hypochlorite is introduced, which reduces the activity of serum, that is, the antibody titer decreases.
Задачей, на решение которой направлено заявленное изобретение, является разработка способа, обеспечивающего получение цельной сыворотки при высоком ее выходе от объема взятой крови.The problem to which the claimed invention is directed is to develop a method for obtaining whole whey with a high yield from the volume of blood taken.
Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения нативной сыворотки крови животных, включающем взятие крови, в емкости, ее отслаивание при температуре +37…+38°С при последующей ретракции сгустка в холодильнике при температуре +4…+6°С, отсос сыворотки и отжатие сгустков крови, центрифугирование, консервирование и объединение сывороток, согласно заявленному изобретению, взятие крови осуществляют после предварительного смачивания стенок емкости гипохлоритом натрия концентрацией 350-300 мг/л из расчета 3,0-3,5 мл гипохлорита натрия на 1 л объема емкости, используемой для взятия крови, а процесс отслаивания проводят в течение 2-3 часов при последующей ретракции сгустка в холодильнике в течение 16-18 часов, при этом перед размещением емкости с кровью в холодильник производят отделение сформировавшегося сгустка путем встряхивания емкости при закрытой крышке, а после отсоса основной партии сыворотки сгусток измельчают до частиц 4-6 см3 и выдерживают в холодильнике при температуре +2…+4°С в течение не менее 24 часов для осуществления ретракции измельченного сгустка и после слива сыворотки ее центрифугируют, консервируют и объединяют с основной партией.The specified technical result is achieved by the fact that in the method of obtaining native blood serum of animals, including taking blood in a container, its exfoliation at a temperature of + 37 ... + 38 ° C with subsequent retraction of a clot in a refrigerator at a temperature of + 4 ... + 6 ° C, suction sera and squeezing of blood clots, centrifugation, preservation and combining of serums, according to the claimed invention, blood sampling is carried out after preliminary wetting the walls of the container with sodium hypochlorite concentration of 350-300 mg / l at the rate of 3.0-3.5 ml hypochlor sodium per 1 liter of the volume of the container used for blood collection, and the exfoliation process is carried out for 2-3 hours, followed by retraction of the clot in the refrigerator for 16-18 hours, and before the blood container is placed in the refrigerator, the formed clot is separated by shaking the container with the lid closed, and after suctioning the main batch of whey, the clot is crushed to particles of 4-6 cm 3 and kept in the refrigerator at a temperature of + 2 ... + 4 ° C for at least 24 hours to effect the retraction of the crushed clot and after draining the whey, it is centrifuged, canned and combined with the main batch.
На первом этапе исследований определялась оптимальная длительность процесса ретракции при получения основной партии сыворотки (без отжатия сгустка) в сравнительном варианте по заявленному способу и способу по прототипу, при этом по прототипу кровь отслаивали при температуре +37…+38°С в течение 30-40 минут, а по заявленному способу при той же температуре в течение 2-3 часов. Как показали исследования, максимальный выход нативной сыворотки во время ретракции отстоявшегося сгустка в холодильнике при температуре +4…+6°С по заявленному способу наблюдался при длительности процесса ретракции от 16 до 18 часов при количественном выходе нативной сыворотки на уровень 350-355 мл из одного литра исходной крови, в то время как длительность процесса ретракции по прототипу была на уровне 22-24 часов при максимальном выходе сыворотки 317-319 мл. At the first stage of the research, the optimal duration of the retraction process was determined upon receipt of the main batch of serum (without clot squeezing) in the comparative version according to the claimed method and the method according to the prototype, while the prototype blood was exfoliated at a temperature of + 37 ... + 38 ° C for 30-40 minutes, and according to the claimed method at the same temperature for 2-3 hours. As studies have shown, the maximum yield of native serum during retraction of the settled clot in the refrigerator at a temperature of + 4 ... + 6 ° C according to the claimed method was observed with a duration of the retraction process from 16 to 18 hours with a quantitative output of native serum at a level of 350-355 ml from one liter of source blood, while the duration of the retraction process according to the prototype was at the level of 22-24 hours with a maximum serum output of 317-319 ml.
Таким образом, увеличение времени отслаивания сгустка крови до 2-3 часов сокращало не только длительность процесса ретракции сгустка в холодильнике, но и увеличивало выход нативной сыворотки на 10,7%. Результаты исследований представлены в таблице 1.Thus, increasing the time of exfoliation of a blood clot to 2-3 hours reduced not only the duration of the process of retraction of the clot in the refrigerator, but also increased the yield of native serum by 10.7%. The research results are presented in table 1.
На следующем этапе исследований выявлялась оптимальная степень измельчения сгустков крови после окончательной ретракции при получении основной партии сыворотки. Процесс ретракции данных сгустков проводился при предварительно отработанных параметрах процесса, а именно, при выдержке измельченных сгустков в холодильнике при температуре +2…+4°С в течение не менее 24 часов. Для проведения опыта сгустки массой 1 кг измельчали: до гомогенного состояния, до состояния фарша и на частицы размером от 1 до 7 см3 и выдерживали в холодильнике при температуре+2…+4°С в течение 25 часов. Результаты исследований представлены в таблице 2.At the next stage of the research, the optimal degree of grinding of blood clots after the final retraction was revealed upon receipt of the main batch of serum. The process of retraction of these clumps was carried out at previously worked out process parameters, namely, when the crushed clots were kept in the refrigerator at a temperature of + 2 ... + 4 ° С for at least 24 hours. For the experiment, clumps weighing 1 kg were crushed: to a homogeneous state, to a state of mincemeat and to particles ranging in size from 1 to 7 cm 3 and kept in a refrigerator at a temperature of + 2 ... + 4 ° C for 25 hours. The research results are presented in table 2.
Таким образом, оптимальной степенью измельчения сгустка, полученного после извлечения основной партии сыворотки следует считать размер частиц сгустка от 4 до 6 см3, что обеспечивает дополнительно от 39,5 до 41,0 мл нативной качественной (без разбавления) сыворотки крови, и составляет 11,3% дополнительно к основной партии, а в целом по сравнению с прототипом превышение выхода сыворотки было на уровне 22,0%.Thus, the optimal degree of grinding of the clot obtained after extraction of the main batch of serum should be considered the particle size of the clot from 4 to 6 cm 3 , which provides an additional 39.5 to 41.0 ml of native quality (without dilution) blood serum, and is 11 , 3% in addition to the main batch, and in general, compared with the prototype, the excess of serum yield was at the level of 22.0%.
Заявленный способ осуществляется следующим образом. Взятие крови производили в 5 литровые емкости после предварительного смачивания внутренних стенок емкости 15 мл гипохлорита натрия концентрацией 350 мг/л, что позволяет свести до минимума риск развития случайно попавшей облигатной микрофлоры при взятии крови в производственных условиях Использование более концентрированного гипохлорита натрия и увеличение вносимого объема приводит к гемолизу эритроцитов, уплотнение сгустка не происходит, он очень рыхлый, полученная сыворотка темно красного цвета, не пригодная для дальнейшего использования. Данный прием позволяет обеспечить антисептику в процессе взятия, отслаивания, а так же легкое последующее отделение сгустка от стенок емкости путем ее встряхивания при закрытой крышке сосуда, не нарушая антисептики субстрата при постановке его в холодильник. Взятую кровь отслаивали, выдерживая в термостате при температуре +37°С в течение 3 часов, и после встряхивания емкости и отделения сгустка от стенок помещали в холодильник с температурой +5°С на 18 часов (до окончательной ретракции), далее производили отсос сыворотки, а сгусток измельчали до размера частиц 4-6 см3 и выдерживали при в холодильнике при температуре +2…+4°С в течение 24 часов. После слива сыворотки ее центрифугировали, консервировали и объединяли с основной партией.The claimed method is as follows. Blood sampling was carried out in 5 liter containers after preliminary wetting of the inner walls of the container with 15 ml of sodium hypochlorite at a concentration of 350 mg / l, which minimizes the risk of developing accidentally bound obligate microflora during blood collection in a production environment. The use of more concentrated sodium hypochlorite and an increase in the volume delivered to hemolysis of red blood cells, clot densification does not occur, it is very friable, the obtained serum is dark red in color, not suitable for further use vania. This technique allows you to provide an antiseptic in the process of taking, peeling, as well as easy subsequent separation of the clot from the walls of the container by shaking it with the lid of the vessel closed, without violating the antiseptics of the substrate when refrigerated. The taken blood was exfoliated, kept in an thermostat at a temperature of + 37 ° C for 3 hours, and after shaking the containers and separating the clot from the walls, they were placed in a refrigerator with a temperature of + 5 ° C for 18 hours (until the final retraction), then the serum was suctioned, and the clot was crushed to a particle size of 4-6 cm 3 and kept under refrigeration at a temperature of + 2 ... + 4 ° C for 24 hours. After draining the serum, it was centrifuged, canned and combined with the main batch.
Использование заявленного способа получения нативной сыворотки крови животных позволяет получить цельную (не разбавленную) сыворотку при высоком ее выходе от объема взятой крови.Using the claimed method of obtaining native blood serum of animals allows you to get whole (not diluted) serum with a high output from the volume of blood taken.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019122230A RU2716712C1 (en) | 2019-07-11 | 2019-07-11 | Method for producing native blood serum of animals |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019122230A RU2716712C1 (en) | 2019-07-11 | 2019-07-11 | Method for producing native blood serum of animals |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2716712C1 true RU2716712C1 (en) | 2020-03-16 |
Family
ID=69898278
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019122230A RU2716712C1 (en) | 2019-07-11 | 2019-07-11 | Method for producing native blood serum of animals |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2716712C1 (en) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1742323A1 (en) * | 1990-07-09 | 1992-06-23 | Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Экспериментальной Ветеринарии Им.Я.Р.Коваленко | Method of preparing calf blood serum for cells and viruses cultivation |
RU2125454C1 (en) * | 1996-10-18 | 1999-01-27 | Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт | Method of preparing concentrated blood serum |
RU2196591C1 (en) * | 2001-06-25 | 2003-01-20 | Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства | Preparation and method for prophylaxis and treatment of diarrhea in calves |
RU2460786C1 (en) * | 2011-04-19 | 2012-09-10 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных" (ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Method for preparing blood serum of grown cattle for animal and human cell culture |
-
2019
- 2019-07-11 RU RU2019122230A patent/RU2716712C1/en active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU1742323A1 (en) * | 1990-07-09 | 1992-06-23 | Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Экспериментальной Ветеринарии Им.Я.Р.Коваленко | Method of preparing calf blood serum for cells and viruses cultivation |
RU2125454C1 (en) * | 1996-10-18 | 1999-01-27 | Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт | Method of preparing concentrated blood serum |
RU2196591C1 (en) * | 2001-06-25 | 2003-01-20 | Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства | Preparation and method for prophylaxis and treatment of diarrhea in calves |
RU2460786C1 (en) * | 2011-04-19 | 2012-09-10 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных" (ФГУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Method for preparing blood serum of grown cattle for animal and human cell culture |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Scheller et al. | Use of osmium tetroxide staining with microcomputerized tomography to visualize and quantify bone marrow adipose tissue in vivo | |
US3318774A (en) | Treatment of osseous and other tissue | |
CN104711221B (en) | Isolating immune cells and the method for extracting PRP are automated from adult peripheral blood | |
CN109929799A (en) | Human umbilical cord mesenchymal stem cells excretion body and its preparation method and application | |
CN108719274A (en) | A kind of tissue preserration liquid | |
CN107022525A (en) | NK cell culture processes for oncotherapy | |
RU2716712C1 (en) | Method for producing native blood serum of animals | |
CN116904394A (en) | Preparation method and application of anti-inflammatory mesenchymal stem cell-derived exosome | |
CN109913416A (en) | Protectant preparation method after a kind of umbilical cord blood hematopoietic stem cell recovery for freezing | |
TW200423951A (en) | Method of preparing anti-angiogenic drug from cartilage and chondrocytes and methods of use | |
WO2017195225A1 (en) | Method for extracting and separating stem cells derived from adipose tissue for aesthetic treatments | |
US4888172A (en) | Pharmaceutical for treating tumors and methods for making it | |
US20170095593A1 (en) | Adipose-derived stem cell product | |
CN1298709A (en) | Process for preparing polypeptide-nucleic acid nutritive liquid of sheep placenta | |
CN115399312A (en) | Preparation method of exosome normal-temperature storage protective agent in mesenchymal stem cell supernatant | |
US20210147806A1 (en) | Apparatus and method for harvesting and preparing viable stem cells | |
CN115927173A (en) | Hypoxia mesenchymal stem cell exosome and application thereof | |
CN111621471B (en) | Extraction method and application of soft tissue extracellular vesicles | |
CN115404209A (en) | Bone marrow mesenchymal stem cell extracellular vesicle and acquisition and application thereof | |
Wankhade et al. | Metabolism and immune status during transition period influences the lactation performance in Zebu (Bos indicus) cows | |
CN110269243A (en) | A kind of dedicated raising bone density nutritional preparation of spacefarer | |
CN1795204A (en) | Method for the extraction of deer antler | |
RU2686073C1 (en) | Method for production of tissue powder of plant origin | |
CN107937334A (en) | A kind of cell factor extract and its application | |
Juma et al. | Cocunut Water And OPTIXcell For Alpine Goat Semen Extension: Comparative Evaluation Of Pot-extension Semen Parameter With And Without Seminal Plasma |