RU2715565C1 - Diagnostic technique for hormonal disorders in men - Google Patents

Diagnostic technique for hormonal disorders in men Download PDF

Info

Publication number
RU2715565C1
RU2715565C1 RU2019107079A RU2019107079A RU2715565C1 RU 2715565 C1 RU2715565 C1 RU 2715565C1 RU 2019107079 A RU2019107079 A RU 2019107079A RU 2019107079 A RU2019107079 A RU 2019107079A RU 2715565 C1 RU2715565 C1 RU 2715565C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
men
ejaculate
spp
hormonal
conclusion
Prior art date
Application number
RU2019107079A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Денис Геннадьевич Почерников
Никита Тарасович Постовойтенко
Ирина Сергеевна Галкина
Original Assignee
Денис Геннадьевич Почерников
Общество с ограниченной ответственностью "ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ-ТС"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Денис Геннадьевич Почерников, Общество с ограниченной ответственностью "ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ-ТС" filed Critical Денис Геннадьевич Почерников
Priority to RU2019107079A priority Critical patent/RU2715565C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2715565C1 publication Critical patent/RU2715565C1/en

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G01N33/743—Steroid hormones

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention refers to medicine, particularly to laboratory diagnostics. Disclosed is a method for diagnosing hormonal disorders in men, including hormonal examination for prolactin, oestradiol, testosterone, a free testosterone index and sex hormone binding globulin (SHBG). Male ejaculate is analyzed by RT-PCR using an Androflor test. If observing in ejaculate male with hyperestradiolemia, hyperprolactinaemia or hypotestosteronemia of microorganism Lactobacillus spp. in titre 10 CFU/ml and more conclude a hormonal disorder in a male.EFFECT: invention provides effective diagnosis of hormonal disorders in males.1 cl, 1 dwg, 3 ex

Description

Изобретение относится к медицине, к андрологии, а именно к лабораторной диагностике.The invention relates to medicine, to andrology, namely to laboratory diagnostics.

Уровень техники.The prior art.

Аналогами данного изобретения являются описанные в отечественной и зарубежной литературе методы лабораторного исследования, имеющие своей целью диагностику мужского бесплодия.Analogs of this invention are the methods of laboratory research described in the domestic and foreign literature, aimed at the diagnosis of male infertility.

В настоящее время по данным литературы нет единой точки зрения на состав микрофлоры урогенитального тракта мужчин. В большинстве научных работ приводятся данные микробиологических исследований, результаты которых не в полной мере отражают качественные и количественные особенности микробиоты, в частности не идентифицируются некультивируемые микроорганизмы (факультативно-облигатные микроорганизмы, некоторые виды лактофлоры).Currently, according to the literature there is no single point of view on the composition of the microflora of the urogenital tract of men. Most scientific papers cite data from microbiological studies, the results of which do not fully reflect the qualitative and quantitative features of microbiota, in particular uncultivated microorganisms (facultative obligate microorganisms, some types of lactoflora) are not identified.

Известно, что лактобактерии выявляются в микробиоме эякулята у мужчин, которые проходили обследование с целью прегравидарной подготовки или бесплодия, при этом соблюдали все необходимые условия для исключения транзиторного характера присутствия лактобактерий в эякуляте, поэтому у этих пациентов неправомочно выставлять диагноз по присутствию транзиторной микрофлоры. (Почерников Д.Г., Галкина И.С., Постовойтенко Н.Т., Герасимов A.M. Сравнительный анализ биотопа эякулята и цервикального канала методом ПЦР-РВ с тестами "Андрофлор" и "Фемофлор" в супружеских парах. Вестник РГМУ 2017; (02): 37-41).It is known that lactobacilli are detected in the ejaculate microbiome in men who were examined for pregravid preparation or infertility, while all the necessary conditions were observed to exclude the transient nature of the presence of lactobacilli in the ejaculate, therefore it is unauthorized for these patients to diagnose the presence of transient microflora. (Pochernikov D.G., Galkina I.S., Postovoitenko N.T., Gerasimov AM Comparative analysis of the ejaculate and cervical canal biotope by PCR-RV with Androflor and Femoflor tests in married couples. Vestnik RSMU 2017; ( 02): 37-41).

Не исключена роль Lactobacillus spp.в поддержании воспаления в предстательной железе (Chronic Prostatitis: An Infectious Disease. Curtis Nickel, Infect Urol 13(2):31-38, 2000).The role of Lactobacillus spp. In maintaining inflammation in the prostate gland is not ruled out (Chronic Prostatitis: An Infectious Disease. Curtis Nickel, Infect Urol 13 (2): 31-38, 2000).

По мнению других авторов, лактобактерии входят в состав транзиторной микрофлоры урогенитального тракта мужчин, но у части больных с этим трудно согласится, так как они соблюдают все необходимые условия исключающие транзиторный характер присутствия лактобактерий в эякуляте. (Методическое пособие. Коллектив авторов компании «ДНК-Технология», Москва. «ПЦР в реальном времени: новые возможности технологии в решении репродуктивных проблем»).According to other authors, lactobacilli are part of the transient microflora of the urogenital tract of men, but it is difficult to agree with some patients, since they observe all necessary conditions that exclude the transient nature of the presence of lactobacilli in the ejaculate. (Toolkit. Team of authors of the DNA-Technology company, Moscow. "Real-time PCR: new possibilities of technology in solving reproductive problems").

В доступной нам литературе мы не обнаружили данных о связи присутствия лактобактерий в эякуляте и нарушений гормонального фона у мужчин.In the literature available to us, we did not find data on the relationship of the presence of lactobacilli in the ejaculate and hormonal disorders in men.

У мужчин, соблюдающих правила подготовки к исследованию эякулята методом ПЦР-РВ с применением теста "Андрофлор" (половой покой или барьерную контрацепцию), выявление в анализе лактобактерий в титре 103 и более служит признаком гормональных нарушений и требует дальнейшего обследования мужчины, даже несмотря на нормальные показатели спермограммы.In men who follow the rules of preparation for ejaculate examination by PCR-RV using the Androflor test (sexual rest or barrier contraception), identification of lactobacilli in the analysis with a titer of 10 3 or more is a sign of hormonal imbalance and requires further examination of the man, even despite normal indicators of spermogram.

Технический результат предлагаемого способа заключается в том, что, информация о идентификации лактобактерий, полученная при исследовании эякулята мужчины методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с использованием теста «Андрофлор» позволяет делать заключение о нарушении гормонального фона у мужчины.The technical result of the proposed method is that, information on the identification of lactobacilli obtained by studying a man’s ejaculate by real-time polymerase chain reaction (PCR-RV) using the Androflor test allows us to conclude that the hormonal background in a man is disturbed.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в разработке способа диагностики нарушении гормонального фона у мужчины, основанного на результатах лабораторного исследования.The essence of the invention lies in the development of a method for diagnosing hormonal imbalance in men, based on the results of a laboratory study.

Мы приводим результаты молекулярно-генетического исследования с применением теста "Андрофлор", эта методика позволяет оценивать все основные группы бактерий, микробиома эякулята, включая лактобактерии.We present the results of a molecular genetic study using the Androflor test, this technique allows you to evaluate all the main groups of bacteria, the ejaculate microbiome, including lactobacilli.

Исследование гормонов по общепринятой методике и анализ эякулята методом ПЦР-РВ с применением теста «Андрофлор» (Липова Е.В., Чекмарев А.С., Болдырева М.Н. Новый метод диагностики инфекционно-воспалительных заболеваний нижних отделов мочеполового тракта у мужчин тест «Андрофлор», «Андрофлор Скрин». М.:, 2017, 48 с.) проводились в лаборатории «Ситилаб»или «Инвитро». В исследовании принимали участие 41 мужчины, которые обратились в урологическую клинику ФГБОУ ВО ИвГМА МЗ РФ г. Иваново с асимптоматическим хроническим простатитом (категориия IV по классификации National Institutes of Health, USA, 1999), бесплодием, или проходящих прегравидарную подготовку. Все пациенты в течение последних четырех недель не получали гормональных и/или антибактериальных препаратов, а также других лекарственных средств, влияющих на микробном эякулята, уровни гормонов ЛГ (5,2±1,4 мМЕ/мл) и ФСГ (4,4±2,2 мМЕ/мл) не выходили за пределы референсных значений. У всех обследованных мужчин в эякуляте идентифицированы лактобактерии, в титре 103 и более (103,0-106,2). При исследовании уровня гормонов у этих пациентов (Фиг. 1) обнаружено повышение пролактина (46%), ГСПГ - глобулин связывающий половые гормоны (39%), эстрадиола (15%) и снижение тестостерона в 29% наблюдений.The study of hormones according to the generally accepted methodology and the analysis of ejaculate by PCR-RV using the Androflor test (Lipova EV, Chekmarev AS, Boldyreva MN A new method for the diagnosis of infectious and inflammatory diseases of the lower urinary tract in men test “Androflor”, “Androflor Screen. M.:, 2017, 48 pp.) Were carried out in the laboratories of CityLab or Invitro. The study involved 41 men who applied to the urological clinic of the Federal State Budget Educational Institution of Higher Education of the Ivgma of the Ministry of Health of the Russian Federation in Ivanovo with asymptomatic chronic prostatitis (category IV according to the classification of National Institutes of Health, USA, 1999), infertility, or undergoing pregravid preparation. Over the past four weeks, all patients did not receive hormonal and / or antibacterial drugs, as well as other drugs that affect microbial ejaculate, levels of LH hormones (5.2 ± 1.4 mIU / ml) and FSH (4.4 ± 2 , 2 mIU / ml) did not go beyond the reference values. In all men examined, lactobacilli were identified in the ejaculate, in a titer of 10 3 or more (10 3.0 -10 6.2 ). When examining the hormone levels in these patients (Fig. 1), an increase in prolactin (46%) was found, SHBG - globulin binding sex hormones (39%), estradiol (15%) and a decrease in testosterone in 29% of cases.

Новизна заявки на изобретение связана с тем, что впервые уточняется роль лактобактерий в качестве маркера гормонального дисбаланса мужчин, делается попытка дать объяснение взаимосвязи состояния микрофлоры урогенитального тракта, включая уровень лактобактерий в эякуляте и гормонального статуса мужчин.The novelty of the application for the invention is due to the fact that for the first time the role of lactobacilli as a marker of hormonal imbalance in men is being clarified, an attempt is made to explain the relationship between the microflora of the urogenital tract, including the level of lactobacilli in the ejaculate and the hormonal status of men.

Клинический пример 1.Clinical example 1.

Больной «С», 34 года, обратился с жалобами на бесплодие. Вышеперечисленные жалобы беспокоят с 2013 года. Дизурии и болей нет. Половые контакты 2-3 раза в неделю, продолжительностью от 5 до 15 мин, эрекция стабильная. Оволосение по мужскому фенотипу. Молочные железы без особенностей. Вес 95 кг, рост 180 см, ИМТ=29,32; талия 106 см. Употребление алкогольных напитков ежедневно, 0,5-1 л пиво. Употребление табачных изделий отрицает. Per rectum: простата эластической консистенции, нормальных размеров, безболезненная, междолевая борозда дифференцируется. При физикальном исследовании: гепатомегалия; безболезненное, пальпируемое образование в придатке правого яичка, 1 см в диаметре - киста. По органам и системам без особенностей.Patient C, 34 years old, complained of infertility. The above complaints have been troubling since 2013. There is no dysuria and pain. Sexual contact 2-3 times a week, lasting from 5 to 15 minutes, the erection is stable. Hairiness according to the male phenotype. The mammary glands are without features. Weight 95 kg, height 180 cm, BMI = 29.32; waist 106 cm. Drinking alcohol daily, 0.5-1 liter beer. Tobacco use denies. Per rectum: prostate of elastic consistency, normal size, painless, interlobar sulcus differentiates. On physical examination: hepatomegaly; a painless, palpable formation in the appendage of the right testicle, 1 cm in diameter - a cyst. By organs and systems without features.

При первичном обследовании:At the initial examination:

1. ПЦР-РВ эякулята с тестом «Андрофлор»: ОБМ - 104,8 1. PCR-RV ejaculate with the Androflor test: OBM - 10 4.8

Lactobacillus spp. - 104,8 (100%); Megasphaera spp./VelionellaLactobacillus spp. - 10 4.8 (100%); Megasphaera spp./Velionella

spp./Dialister spp. - 103,6 (11%); Bacteroidesspp./Dialister spp. - 10 3.6 (11%); Bacteroides

spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp. - 104,5 (75%);spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp. - 10 4.5 (75%);

Anaerococcus spp. - 102,4 (7%); PeptostreptococcusAnaerococcus spp. - 10 2.4 (7%); Peptostreptococcus

spp./Parvimonas spp. - 104,3 (53%) Eubacterium spp. - 104,1 spp./Parvimonas spp. - 10 4.3 (53%) Eubacterium spp. - 10 4.1

(31%). Заключение: Превышение пороговых значений транзиторной микрофлоры. (31%). Conclusion: Exceeding threshold values of transient microflora.

2. Гормональное исследование: пролактин - 5,78 нг/мл; эстрадиол - 60,4 пг/мл; тестостерон 7,75 нг/мл; индекс свободного тестостерона - 56,14%; ГСПГ - 47,9 нмоль/мл; Ингибин В - 62,8 пг/мл. Заключение: Гиперэстрадиолемия.2. Hormone testing: prolactin - 5.78 ng / ml; estradiol - 60.4 pg / ml; testosterone 7.75 ng / ml; free testosterone index - 56.14%; SHBG - 47.9 nmol / ml; Inhibin B - 62.8 pg / ml. Conclusion: Hypestradiolemia.

3. Спермограмма: объем - 5,0 мл; цвет - желтоватый; разжижжение - 25 мин.; вязкость - 1,0 см; Ph - 7,4; сперматозойдов в 1 мл - 5 млн.; прогрессивно-подвижные - 7%; непрогрессивно-подвижные - 5%; неподвижные - 88%; морфологически нормальные - 2%; агрегация - нет; агглютинация - нет; лейкоциты - 10 млн/мл; эритроциты - нет. Заключение: Олигоастенотератозооспермия. Лейкоспермия.3. Spermogram: volume - 5.0 ml; color is yellowish; liquefaction - 25 minutes; viscosity - 1.0 cm; Ph - 7.4; spermatozoa in 1 ml - 5 million; progressively mobile - 7%; non-progressive-mobile - 5%; motionless - 88%; morphologically normal - 2%; aggregation - no; agglutination - no; white blood cells - 10 million / ml; red blood cells - no. Conclusion: Oligoastenoteratozoospermia. Leukospermia.

4. Генетическое исследование - кариотип, AZF: в норме.4. Genetic research - karyotype, AZF: normal.

5. Биохимическое исследование крови: Билирубин общий - 8,9 мкмоль/л; АЛТ - 34,0 Ед/л; ACT - 28,0 Ед/л; ГГТП - 35,0 Ед/л. Заключение: показатели в пределах нормы.5. Biochemical blood test: total bilirubin - 8.9 μmol / l; ALT - 34.0 U / L; ACT - 28.0 U / L; GGTP - 35.0 U / L. Conclusion: indicators within normal limits.

6. Индекс инсулинорезистентности: 3,04. Заключение: повышение уровня.6. Insulin resistance index: 3.04. Conclusion: level up.

7. УЗИ органов мошонки: V правого яичка - 8,5 см3, V левого яичка - 7,8 см3. Киста головки придатка правого яичка 10 мм, левого 5 мм. Гипоплазия яичек. Киста головки придатка яичка с обеих сторон.7. Ultrasound of the scrotum: V of the right testicle - 8.5 cm 3 , V of the left testicle - 7.8 cm 3 . Cyst of the appendage of the right testicle 10 mm, left 5 mm. Testicular hypoplasia. Cyst of the head of the epididymis on both sides.

На основании жалоб, анамнеза, клинического обследования выставлен диагноз: Первичное бесплодие. Олигоастенотератозооспермия.Based on complaints, medical history, clinical examination, the diagnosis was made: Primary infertility. Oligoastenoteratozoospermia.

Лейкоспермия. Гипоплазия яичек. Киста головки придатка яичка с обеих сторон. Инсулинорезистентность. Избыточная масса тела. Пациенту проведен курс лечения антиэстрогенами, метформин.Leukospermia. Testicular hypoplasia. Cyst of the head of the epididymis on both sides. Insulin resistance. Overweight. The patient underwent a course of treatment with antiestrogens, metformin.

При контрольном обследовании:During the control examination:

1. ПЦР-РВ эякулята с тестом «Андрофлор»: ДНК человека - 103,7; ОБМ - отсутствует. Заключение: Нормофлора. Исчезли лактобактерии и другие микроорганизмы.1. PCR-RV of the ejaculate with the Androflor test: human DNA - 10 3.7 ; MBP is missing. Conclusion: Normoflora. Lactobacilli and other microorganisms have disappeared.

2. Гормональное исследование: пролактин - 5,78 нг/мл; эстрадиол - менее 10,0 пг/мл; тестостерон 9,4 нг/мл; индекс свободного тестостерона - 75,92%; ГСПГ - 43,1 нмоль/мл. Заключение: Значения в пределах нормы. Нормализация уровня эстрадиола.2. Hormone testing: prolactin - 5.78 ng / ml; estradiol - less than 10.0 pg / ml; testosterone 9.4 ng / ml; free testosterone index - 75.92%; SHBG - 43.1 nmol / ml. Conclusion: Values are within normal limits. Normalization of estradiol levels.

3. Спермограмма: объем - 5,5 мл; цвет - серовато-белый; разжижжение - 40 мин.; вязкость - 1,0 см; Ph - 7,7; сперматозойдов в 1 мл - 7,1 млн.; прогрессивно-подвижные - 28,2%; непрогрессивно-подвижные - 33,8%; неподвижные - 38%; морфологически нормальные - 3%; агрегация - нет; агглютинация - нет; лейкоциты - 17 млн/мл; эритроциты - нет. Заключение: Олигоастенотератозооспермия. Лейкоспермия.3. Spermogram: volume - 5.5 ml; color - grayish-white; liquefaction - 40 minutes; viscosity - 1.0 cm; Ph - 7.7; spermatozoa in 1 ml - 7.1 million; progressively mobile - 28.2%; non-progressive-mobile - 33.8%; motionless - 38%; morphologically normal - 3%; aggregation - no; agglutination - no; white blood cells - 17 million / ml; red blood cells - no. Conclusion: Oligoastenoteratozoospermia. Leukospermia.

4. Индекс инсулинорезистентности: 2,38. Заключение: Нормальное значение.4. Insulin resistance index: 2.38. Conclusion: Normal value.

Таким образом, наличие в эякуляте лактобактерии в титре 103 и более обусловлено гиперэстрадиолемий и инсулинорезистентностью. После проведенного лечения (антиэстогены, метформин) нормализовался уровень эстрадиола и индекс инсулинорезистентности, что позволило в контрольном анализе эякулята добиться исчезновения лактобактерий. У данной пары наступила беременность.Thus, the presence of lactobacilli in the ejaculate in a titer of 10 3 or more is due to hyperestradiolemia and insulin resistance. After the treatment (antiestogens, metformin), the levels of estradiol and the insulin resistance index returned to normal, which allowed the lactobacilli to disappear in the control analysis of the ejaculate. This couple has become pregnant.

Клинический пример 2.Clinical example 2.

Пациент «П», 42 года, обратился с жалобами на ухудшение эректильной функции, снижение либидо, бесплодие несколько лет. Вышеперечисленные жалобы беспокоят на протяжении 6 месяцев. Лечение не принимал. Дизурии и болей нет. Половые контакты 1-2 раза в неделю, продолжительностью 3-5 мин, эрекция вялая. Оволосение по мужскому фенотипу. Молочные железы без особенностей. Вес 74 кг, рост 173 см, ИМТ=24,73; талия 97 см. Употребление алкогольных напитков и табачных изделий отрицает. В настоящем браке имеет сына 2005 г.р. Per rectum: простата эластической консистенции, нормальных размеров, безболезненна, междолевая борозда дифференцируется. По органам и системам без особенностей. Аритмия, периодически принимает антиаритмики.Patient P, 42 years old, complained of worsening erectile function, decreased libido, and infertility for several years. The above complaints have been troubling for 6 months. I did not take treatment. There is no dysuria and pain. Sexual contact 1-2 times a week, lasting 3-5 minutes, erection is sluggish. Hairiness according to the male phenotype. The mammary glands are without features. Weight 74 kg, height 173 cm, BMI = 24.73; waist 97 cm. The use of alcohol and tobacco denies. In this marriage, has a son born in 2005 Per rectum: prostate of elastic consistency, normal size, painless, interlobar sulcus differentiated. By organs and systems without features. Arrhythmia periodically takes antiarrhythmics.

При первичном обследовании:At the initial examination:

1. ПЦР-РВ эякулята с тестом «Андрофлор»: ОБМ - 106,2 1. PCR-RV ejaculate with Androflor test: OBM - 10 6.2

Lactobacillus spp. - 106,2 (100%); Staphylococcus spp. - 103,4 Lactobacillus spp. - 10 6.2 (100%); Staphylococcus spp. - 10 3.4

(0,2%)); Streptococcus spp. - 104,3 (1,3%); Corynebacterium(0.2%)); Streptococcus spp. - 10 4.3 (1.3%); Corynebacterium

spp. - 104,3 (1,6%); Gardnerella vaginalis - 103,1 (0,1%);spp. - 10 4.3 (1.6%); Gardnerella vaginalis - 10 3.1 (0.1%);

Megasphaera spp./Velionella spp./Dialister spp. - 103,8 (0,4%);Megasphaera spp./Velionella spp./Dialister spp. - 10 3.8 (0.4%);

Sneathia spp./Leptotrichia spp,/Fusobacterium spp. - 103,2 Sneathia spp. / Leptotrichia spp. / Fusobacterium spp. - 10 3.2

(0,1%); Atopobium cluster - 103,6 (0,3%); Bacteroides(0.1%); Atopobium cluster - 10 3.6 (0.3%); Bacteroides

spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp. - 104,5 (2,1%);spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp. - 10 4.5 (2.1%);

Anaerococcus spp. - 103,4 (0,2%); Eubacterium spp. - 104,0 Anaerococcus spp. - 10 3.4 (0.2%); Eubacterium spp. - 10 4.0

(0,6%); Haemophilus spp.- 103,7 (0,4%). Заключение:(0.6%); Haemophilus spp. - 10 3.7 (0.4%). Conclusion:

Превышение пороговых значений транзиторной микрофлоры.Exceeding threshold values of transient microflora.

2. Гормональное исследование: пролактин - 22,5 нг/мл; эстрадиол - 46,0 пг/мл; тестостерон 9,59 нг/мл; индекс свободного тестостерона - 65,77%; ГСПГ - 50,6 нмоль/мл; ТТГ - 1,250 мкМЕ/мл. Заключение: Гиперэстрадиолемия, гиперпролактинемия.2. Hormonal research: prolactin - 22.5 ng / ml; estradiol - 46.0 pg / ml; testosterone 9.59 ng / ml; free testosterone index - 65.77%; SHBG - 50.6 nmol / ml; TSH - 1.250 μMU / ml. Conclusion: Hypestradiolemia, hyperprolactinemia.

3. Спермограмма: объем - 1,8 мл; цвет - сероватый; разжижжение - 40 мин.; вязкость - 0,3 см; Ph - 7,8; сперматозойдов в 1 мл - 0 млн.; прогрессивно-подвижные - 0%; непрогрессивно-подвижные - 0%; неподвижные - 0%; морфологически нормальные - 0%; агрегация - нет; агглютинация - нет; лейкоциты - 1,2 млн/мл; эритроциты - нет. Заключение: Азооспермия. Лейкоспермия.3. Spermogram: volume - 1.8 ml; color is grayish; liquefaction - 40 minutes; viscosity - 0.3 cm; Ph - 7.8; spermatozoa in 1 ml - 0 million; progressively mobile - 0%; non-progressive-mobile - 0%; motionless - 0%; morphologically normal - 0%; aggregation - no; agglutination - no; white blood cells - 1.2 million / ml; red blood cells - no. Conclusion: Azoospermia. Leukospermia.

4. Биохимическое исследование крови: Билирубин общий - 11,1 мкмоль/л; АЛТ - 18,4 Ед/л; ACT - 22,9 Ед/л; ГГТП -21,0 Ед/л. Заключение: показатели в пределах нормы.4. Biochemical blood test: total bilirubin - 11.1 μmol / l; ALT - 18.4 U / L; ACT - 22.9 U / L; GGTP -21.0 U / l. Conclusion: indicators within normal limits.

5. Магнитно-резонансная томография гипофиза с контрастным усилением. Заключение: МРТ-признаки микроаденомы гипофиза. Консультирован эндокринологом, назначено лечение.5. Magnetic resonance imaging of the pituitary gland with contrast enhancement. Conclusion: MRI signs of the pituitary microadenoma. Consulted by an endocrinologist, treatment prescribed.

6. УЗИ op-нов мошонки: V правого яичка 10,5 см3, V левого яичка 8 см3. Киста придатка правого яичка 8 м. Вены лозовидного сплетения диаметром: справа до 1,5 мм; слева до 1,9 мм. Патологическая извитость и варикозное расширение вен слева. На высоте пробы Вальсальвы патологические рефлюксы выявлены слева; диаметр вен слева стоя до 2,9 см. Заключение: Гипоплазия обоих яичек. Субклиническое варикоцеле слева.6. Ultrasound of op-scrotum: V of the right testicle 10.5 cm 3 , V of the left testicle 8 cm 3 . Cyst of the appendage of the right testicle 8 m. Veins of the plexus plexus diameter: up to 1.5 mm on the right; left up to 1.9 mm. Pathological tortuosity and varicose veins on the left. At the height of the Valsalva test, pathological refluxes were identified on the left; the diameter of the veins on the left standing up to 2.9 cm. Conclusion: Hypoplasia of both testicles. Subclinical varicocele on the left.

7. ТРУЗИ: V - 28 см3. Наличие периуретрального фиброза, очаговой кальцификации. Заключение: Эхо-признаки хронического простатита.7. TRANSPORT: V - 28 cm 3 . The presence of periurethral fibrosis, focal calcification. Conclusion: Echo-signs of chronic prostatitis.

8. Бактериологическое исследование спермы: Staphylococcus saprophyticus 103 КОЕ/мл.8. Bacteriological examination of sperm: Staphylococcus saprophyticus 10 3 CFU / ml.

На основании жалоб, анамнеза, клинического обследования выставлен диагноз: Микроаденома гипофиза, пролактинсекретирующая. Хронический простатит категории IV. Эректильная дисфункция. Бесплодие. Гипоплазия яичек. Киста придатка правого яичка. Субклиническое варикоцеле слева.Based on complaints, medical history, clinical examination, the diagnosis was made: Pituitary microadenoma, prolactin-secreting. Chronic prostatitis category IV. Erectile disfunction. Infertility. Testicular hypoplasia. Cyst of the appendage of the right testicle. Subclinical varicocele on the left.

Пациенту проведен курс лечения препаратом каберголин.The patient underwent a course of treatment with cabergoline.

При контрольном обследовании:During the control examination:

1. ПЦР-РВ эякулята с тестом «Андрофлор»: ОБМ - 104,3 1. PCR-RV ejaculate with the Androflor test: OBM - 10 4.3

Corynebacterium spp. - 103,8 (21%); BacteroidesCorynebacterium spp. - 10 3.8 (21%); Bacteroides

spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp. - 104,2 (40%);spp./Porphyromonas spp./Prevotella spp. - 10 4.2 (40%);

Anaerococcus spp. - 103,3 (11%); Eubacterium spp. - 103,4 Anaerococcus spp. - 10 3.3 (11%); Eubacterium spp. - 10 3.4

(15%); Haemophilus spp. - 103,8 (23%). Заключение: Дисбиоз с(fifteen%); Haemophilus spp. - 10 3.8 (23%). Conclusion: Dysbiosis with

преобладанием условно-патогенных анаэробныхthe prevalence of opportunistic anaerobic

микроорганизмов. Исчезли лактобактерии.microorganisms. Lactobacillus has disappeared.

2. Гормональное исследование: пролактин - 11,9 нг/мл; эстрадиол - 39,1 пг/мл; тестостерон 7,45 нг/мл; индекс свободного тестостерона - 33,98%; ГСПГ - 76,08 нмоль/мл. Заключение: Нормализация уровня пролактина.2. Hormone testing: prolactin - 11.9 ng / ml; estradiol - 39.1 pg / ml; testosterone 7.45 ng / ml; free testosterone index - 33.98%; SHBG - 76.08 nmol / ml. Conclusion: Normalization of prolactin levels.

3. Спермограмма: объем - 1,6 мл; цвет - сероватый;3. Spermogram: volume - 1.6 ml; color is grayish;

разжижжение - 40 мин.; вязкость - 0,2 см; Ph - 7,8;liquefaction - 40 minutes; viscosity - 0.2 cm; Ph - 7.8;

сперматозойдов в 1 мл - 0 млн.; прогрессивно-подвижные - 0%;spermatozoa in 1 ml - 0 million; progressively mobile - 0%;

непрогрессивно-подвижные - 0%; неподвижные - 0%;non-progressive-mobile - 0%; motionless - 0%;

морфологически нормальные - 0%; агрегация - нет;morphologically normal - 0%; aggregation - no;

агглютинация - нет; лейкоциты - 1,8 млн/мл; эритроциты - нет.agglutination - no; white blood cells - 1.8 million / ml; red blood cells - no.

Заключение: Азооспермия. Лейкоспермия.Conclusion: Azoospermia. Leukospermia.

Таким образом, наличие в эякуляте лактобактерий в титре 103 и более связано с гиперпролактинемией, после проведенного лечения препаратом каберголин и нормализации уровня пролактина в контрольном анализе эякулята отсутствуют лактобактерии. Данному пациенту планируется биопсия яичек.Thus, the presence in the ejaculate of lactobacilli in a titer of 10 3 or more is associated with hyperprolactinemia, after treatment with cabergoline and normalization of the level of prolactin in the control analysis of the ejaculate there are no lactobacilli. A testicular biopsy is planned for this patient.

Клинический пример 3.Clinical example 3.

Больной «В», 40 лет, обратился с жалобами на бесплодие. Вышеперечисленные жалобы беспокоят с 2008 года. Данный брак второй. В первом браке имеет сына (2002 г.р.). У супруги привычное невынашивание беременности (2014, 2015, 2016 года). Дизурии и болей нет. Половые контакты 2-3 раза в неделю, продолжительностью 15-25 мин. Эрекция стабильная. Оволосение по мужскому фенотипу. Молочные железы без особенностей. Вес 94 кг, рост 175 см, ИМТ=30,69; талия 100 см. Употребление алкогольных напитков 1 раз в месяц, 250 мл водка. Употребление табачных изделий отрицает. Per rectum: простата эластической консистенции, нормальных размеров, безболезненна, междолевая борозда дифференцируется. По органам и системам без особенностей.Patient B, aged 40, complained of infertility. The above complaints have been troubling since 2008. This marriage is the second. In his first marriage he has a son (born 2002). The wife has the usual miscarriage (2014, 2015, 2016). There is no dysuria and pain. Sexual contact 2-3 times a week, lasting 15-25 minutes. The erection is stable. Hairiness according to the male phenotype. The mammary glands are without features. Weight 94 kg, height 175 cm, BMI = 30.69; waist 100 cm. Drinking alcohol once a month, 250 ml vodka. Tobacco use denies. Per rectum: prostate of elastic consistency, normal size, painless, interlobar sulcus differentiated. By organs and systems without features.

При первичном обследовании:At the initial examination:

1. ПЦР-РВ эякулята с тестом «Андрофлор»: ОБМ - 103,6 1. PCR-RV ejaculate with the Androflor test: OBM - 10 3.6

Lactobacillus spp. - 103,4; Streptococcus - 103,1. Заключение: нормофлора.Lactobacillus spp. - 10 3.4 ; Streptococcus - 10 3.1 . Conclusion: normoflora.

2. Гормональное исследование: пролактин - 149 мЕд/л;2. Hormonal research: prolactin - 149 mU / l;

эстрадиол - 43 пмоль/л; тестостерон 11,06 нмоль/л;estradiol - 43 pmol / l; testosterone 11.06 nmol / l;

свободный тестостерон - 51,2%; ГСПГ - 21,6 нмоль/л; ЛГ -free testosterone - 51.2%; SHBG - 21.6 nmol / l; LH -

1,44 мМЕд/мл; ФСГ - 2,0 мМЕд/мл. Заключение:1.44 mIU / ml; FSH - 2.0 mIU / ml. Conclusion:

Гипотестостеронемия. Нормогонадотропный гипогонадизм.Hypotestosterone. Normogonadotropic hypogonadism.

3. Спермограмма: объем - 2,5 мл; цвет - желтоватый;3. Spermogram: volume - 2.5 ml; color is yellowish;

разжижжение - 30 мин.; вязкость - 6,0 см; Ph - 7,7;liquefaction - 30 min .; viscosity - 6.0 cm; Ph - 7.7;

сперматозойдов в 1 мл - 30 млн.; прогрессивно-подвижныеspermatozoa in 1 ml - 30 million; progressively mobile

- 33,3%; непрогрессивно-подвижные - 17%; неподвижные - - 33.3%; non-progressive-mobile - 17%; motionless -

49,7%; морфологически нормальные - 3%; агрегация - нет;49.7%; morphologically normal - 3%; aggregation - no;

агглютинация - нет; лейкоциты - менее 1 млн/мл;agglutination - no; white blood cells - less than 1 million / ml;

эритроциты - нет. Заключение: Тератозооспермия.red blood cells - no. Conclusion: Teratozoospermia.

4. УЗИ op-нов мошонки: V правого яичка 12,2 см3, V левого4. Ultrasound of op-scrotum: V of the right testicle 12.2 cm 3 , V of the left

яичка 11,4 см3. Вены лозовидного сплетения диаметром:testicles 11.4 cm 3 . Veins of the plexus plexus diameter:

справа до 1,7 мм; слева до 2,8 мм. Патологическаяright up to 1.7 mm; left up to 2.8 mm. Pathological

извитость и варикозное расширение вен слева. На высотеtortuosity and varicose veins on the left. On high

пробы Вальсальвы патологические рефлюксы выявленыValsalva tests revealed pathological refluxes

слева; диаметр вен слева до 3,3 см. Заключение:left; vein diameter on the left up to 3.3 cm. Conclusion:

Варикоцеле слева.Varicocele on the left.

На основании жалоб, анамнеза, клинического обследования выставлен диагноз: Вторичное бесплодие. Нормогонадотропный гипогонадизм. Варикоцеле слева. Ожирение I степени.Based on complaints, medical history, clinical examination, the diagnosis was made: Secondary infertility. Normogonadotropic hypogonadism. Varicocele on the left. Obesity I degree.

Пациенту проведен курс лечения венотониками + антиэстрогены (клостилбегит).The patient underwent treatment with venotonics + antiestrogens (clostilbegit).

При контрольном обследовании:During the control examination:

1. ПЦР-РВ эякулята с тестом «Андрофлор»: ДНК человека - 103,1; ОБМ - отсутствует. Заключение: Нормофлора. Исчезли лактобактерии.1. PCR-RV of the ejaculate with the Androflor test: human DNA - 10 3.1 ; MBP is missing. Conclusion: Normoflora. Lactobacillus has disappeared.

2. Гормональное исследование: пролактин - 5,78 нг/мл; эстрадиол - 119 пмоль/л; тестостерон 19,74 нмоль/л; индекс свободного тестостерона - 91,4%; ГСПГ - 21,6 нмоль/л; ЛГ - 4,40 мМЕд/мл; ФСГ - 2,77 мМЕд/мл. Заключение: значения в пределах нормы.2. Hormone testing: prolactin - 5.78 ng / ml; estradiol - 119 pmol / l; testosterone 19.74 nmol / l; free testosterone index - 91.4%; SHBG - 21.6 nmol / l; LH - 4.40 mIU / ml; FSH - 2.77 mIU / ml. Conclusion: values are within normal limits.

3. Спермограмма: объем - 2,5 мл; цвет - желтоватый; разжижжение - 25 мин.; вязкость - 2,0 см; Ph - 7,8; сперматозойдов в 1 мл - 21,5 млн.; прогрессивно-подвижные - 17,2%; непрогрессивно-подвижные - 15,4%; неподвижные - 67,4%; морфологически нормальные - 1%; агрегация - нет; агглютинация - нет; лейкоциты - менее 1 млн/мл; эритроциты - нет. Заключение: Астенотератозооспермия.3. Spermogram: volume - 2.5 ml; color is yellowish; liquefaction - 25 minutes; viscosity - 2.0 cm; Ph - 7.8; spermatozoa in 1 ml - 21.5 million; progressively mobile - 17.2%; non-progressive-moving - 15.4%; motionless - 67.4%; morphologically normal - 1%; aggregation - no; agglutination - no; white blood cells - less than 1 million / ml; red blood cells - no. Conclusion: Asthenoteratozoospermia.

Таким образом, наличие в эякуляте микроорганизма лактобактерий в титре 103 и более связано с низким уровнем тестостерона, после проведенного лечения антиэстрогенами и нормализации уровня тестостерона, когда в контрольном анализе эякулята отсутствуют лактобактерии.Thus, the presence in the ejaculate of a microorganism of lactobacilli in a titer of 10 3 or more is associated with a low level of testosterone, after treatment with antiestrogens and normalization of the level of testosterone, when there are no lactobacilli in the control analysis of the ejaculate.

Claims (1)

Способ диагностики нарушений гормонального статуса у мужчин, включающий гормональное исследование на пролактин, эстрадиол, тестостерон, индекс свободного тестостерона и глобулин, связывающий половые гормоны (ГСПГ), характеризующийся тем, что проводят исследование эякулята мужчин методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с использованием теста «Андрофлор» и при идентификации в эякуляте мужчин с гиперэстрадиолемией, гиперпролактинемией или гипотестостеронемией микроорганизма Lactobacillus spp. в титре 103 КОЕ/мл и более делают заключение о нарушении гормонального фона у мужчины.A method for diagnosing hormonal status disorders in men, including a hormone test for prolactin, estradiol, testosterone, the free testosterone index and sex hormone binding globulin (SHBG), characterized in that they carry out a real-time polymerase chain reaction study of men’s ejaculate (PCR) PB) using the Androflor test and for identification in men who have hyperestradiolemia, hyperprolactinemia or hypotestosteronemia of the microorganism Lactobacillus spp. in a titer of 10 3 CFU / ml or more, a conclusion is drawn about a hormonal imbalance in a man.
RU2019107079A 2019-03-12 2019-03-12 Diagnostic technique for hormonal disorders in men RU2715565C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019107079A RU2715565C1 (en) 2019-03-12 2019-03-12 Diagnostic technique for hormonal disorders in men

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019107079A RU2715565C1 (en) 2019-03-12 2019-03-12 Diagnostic technique for hormonal disorders in men

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2715565C1 true RU2715565C1 (en) 2020-03-02

Family

ID=69768198

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019107079A RU2715565C1 (en) 2019-03-12 2019-03-12 Diagnostic technique for hormonal disorders in men

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2715565C1 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020061869A1 (en) * 1998-11-24 2002-05-23 Lichten Edward M. Free insulin testosterone test
RU2603059C2 (en) * 2011-02-25 2016-11-20 ОЮ ТЕРВИСЛИКУ ПИИМА БИОТЕХНОЛООГИАТЕ АРЕНДУСКЕСКУС (Био-компетенс Сентр Оф Хеалси Дэйри Продуктс) Isolated strains of lactobacillus plantarum dsm mcc1 23881 and lactobacillus gasseri mcc2 dsm 23882 microorganisms, and use thereof

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020061869A1 (en) * 1998-11-24 2002-05-23 Lichten Edward M. Free insulin testosterone test
RU2603059C2 (en) * 2011-02-25 2016-11-20 ОЮ ТЕРВИСЛИКУ ПИИМА БИОТЕХНОЛООГИАТЕ АРЕНДУСКЕСКУС (Био-компетенс Сентр Оф Хеалси Дэйри Продуктс) Isolated strains of lactobacillus plantarum dsm mcc1 23881 and lactobacillus gasseri mcc2 dsm 23882 microorganisms, and use thereof

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BOWIE W.R. et al. Bacteriology of the urethra in normal men and men with nongonococcal urethritis. J Clin Microbiol. 1977 Nov; 6(5): 482-488. *
ПОЧЕРНИКОВ Д.Г. и др. Сравнительный анализ биотопа эякулята и цервикального канала методом ПЦР-РВ с тестами "Андрофлор" и "Фемофлор" в супружеских парах. Вестник РГМУ. 2017; 2: 37-41. *
САФРОНЕНКО А.В. и др. Особенности микроэлементного и гормонального статуса у мужчин репродуктивного возраста из бесплодных супружеских пар. Acta Biomedica Scientifica. 2010; N 6-2: 52-56. *
САФРОНЕНКО А.В. и др. Особенности микроэлементного и гормонального статуса у мужчин репродуктивного возраста из бесплодных супружеских пар. Acta Biomedica Scientifica. 2010; N 6-2: 52-56. ПОЧЕРНИКОВ Д.Г. и др. Сравнительный анализ биотопа эякулята и цервикального канала методом ПЦР-РВ с тестами "Андрофлор" и "Фемофлор" в супружеских парах. Вестник РГМУ. 2017; 2: 37-41. BOWIE W.R. et al. Bacteriology of the urethra in normal men and men with nongonococcal urethritis. J Clin Microbiol. 1977 Nov; 6(5): 482-488. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Fehér et al. A review of main controversial aspects of acute testicular torsion
Rowe et al. WHO manual for the standardized investigation and diagnosis of the infertile male
Hassan Infertility profile, psychological ramifications and reproductive tract infection among infertile women, in northern Upper Egypt
Medani et al. Surgical management of symptomatic Tarlov cysts: cyst fenestration and nerve root imbrication—a single institutional experience
Mustafa et al. Study On Some Physiological, Biochemical And Hormonal Parameters Of Seminal Fluid Of Infertile Men
Haydar et al. A study of bacterial Vaginosis and associated risk factors among married women in Zakho city, Kurdistan region, Iraq
Gates et al. Management of the undescended testis in children: an American pediatric surgical association outcomes and evidence based practice committee systematic review
RU2715565C1 (en) Diagnostic technique for hormonal disorders in men
Serefoglu Post-orgasmic Illness Syndrome: where are we?
Jarow Diagnostic approach to the infertile male patient
Lee et al. The effect of an infertility diagnosis on treatment-related stresses
Htaik et al. Systematic review and meta-analysis of the association between Mycoplasma genitalium and Pelvic inflammatory disease (PID)
Daneshfar et al. Comparison of sexual function in infertile women with polycystic ovary syndrome and endometriosis: a cross-sectional study
Harms et al. Perceptions and patterns of reproductive tract infections in a young rural population in North-West Namibia
Pandiyan et al. A clinical approach to male infertility
Jain et al. A rare consequence of chronic graft versus host disease-Peyronie's disease
Gupta et al. A Prospective Study on Profile of Gynaecological Problems in Adolescent Girls at a Tertiary Care Centre
Sumdaengrit et al. Quality of life in Thai women after hysterectomy
Kovachev Contraception and risk of bacterial vaginosis
de Camargo et al. Prevalence and factors associated with bacterial vaginosis in women in Brazil: a systematic review
Shandily et al. Menstrual Cycle Problems
Dabian et al. Sexual Dysfunction in Infertile Women With PCOS Undergoing Fertility Treatment
Salsalina Yuniarty et al. The Relationship between Health Workers’ Support and Frequency of Visual Inspection with Acetic Acid for Cervical Cancer Early Detection among Childbearing Age Women at Pasir Mulya Health Center
Keshavarz et al. Comparison of Midwifery Consultation and Fluoxetine on IVF Outcomes in Depressed Infertile Women: A Clinical Trial Research Study
Ramejo et al. Frequency of common organisms causing vaginal discharge in sexually active women in reproductive age group.

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20210313