RU2714687C1

RU2714687C1 - Agent having anticonvulsant activity

Info

Publication number: RU2714687C1
Application number: RU2019118088A
Authority: RU
Inventors: Михаил Валерьевич Белоусов; Мехман Сулейманович Юсубов; Артем Михайлович Гурьев; Екатерина Александровна Безверхняя; Татьяна Владимировна Кадырова; Елена Васильевна Ермилова; Николай Иннокентьевич Суслов; Татьяна Николаевна Поветьева; Юлия Владимировна Нестерова; Ольга Геннадьевна Афанасьева; Павел Валерьевич Кульпин; Кирилл Валерьевич Шапошников
Priority date: 2019-06-10
Filing date: 2019-06-10
Publication date: 2020-02-19

Abstract

FIELD: medicine; pharmaceutics.

SUBSTANCE: invention refers to medicine and pharmaceutics. Disclosed is the use of the acetone fraction of the dry chloroform extract from shoots Empetrum nigrum L. as an anticonvulsant. Acetone fraction is obtained by double extraction with boiling chloroform in round bottom flask with reflux ratio at raw material : extractant ratio of 1:10. Combined extracts are evaporated to dryness in a rotary evaporator. Dry chloroform extract is extracted three times with acetone at room temperature and continuously stirring at an extract : extractant ratio is 1:10. Combined acetone extract is evaporated in a rotary evaporator to 1/3 volume and dried by convection.

EFFECT: expressed anticonvulsant activity of the agent comparable to carbamazepine, while increasing life expectancy of experimental animals on models strychnine and corazole convulsions by 54 % and 85 % respectively, survival rate of experimental animals was 20 % in both experiments.

1 cl, 2 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической фармакологии, и может быть использовано в качестве противосудорожного средства в терапии судорожных состояний.The invention relates to medicine, specifically to clinical pharmacology, and can be used as an anticonvulsant in the treatment of convulsive conditions.

Эпилепсия является одним из наиболее распространенных по всему миру хронических неинфекционных заболеваний нервной системы, которое распространено среди детей и подростков, взрослых и пожилых, мужчин и женщин [1]. По аналитическим данным ВОЗ, эпилепсией страдают около 50 млн человек. В 2001 году эксперты ВОЗ указали, что ежегодно по всему миру врачи диагностируют примерно 2,5 млн новых случаев [2]. Несмотря на достижения в терапии судорожных состояний за последние годы, не менее 30-40% больных не добиваются полного прекращения приступов на фоне лечения противоэпилептическими средствами [3].Epilepsy is one of the most common chronic non-infectious diseases of the nervous system worldwide, which is common among children and adolescents, adults and the elderly, men and women [1]. According to WHO analytical data, about 50 million people suffer from epilepsy. In 2001, WHO experts indicated that around the world, doctors diagnose approximately 2.5 million new cases annually [2]. Despite the achievements in the treatment of convulsive conditions in recent years, at least 30-40% of patients do not achieve a complete cessation of seizures during treatment with antiepileptic drugs [3].

Известен широкий спектр синтетических противосудорожных препаратов (вальпроевая кислота, карбамазепин, барбитураты). Вальпроевая кислота является наиболее используемым противоэпилептическим средством [4]. Одним из значительных побочных эффектов антиконвульсантов считается нейротоксичность. Ведущая гипотеза объясняет нейротоксические эффекты данной группы препаратов апоптозом нейронов и дисфункцией выживших нейроклеток. Также установлено, что все антиконвульсанты обладают тератогенным действием, в той или иной степени [5]. Это делает актуальным поиск новых средств, обладающих противосудорожной активностью, но не вызывающих серьезных побочных эффектов. Препараты растительного происхождения могут сыграть важную роль в решении данной проблемы.A wide range of synthetic anticonvulsants is known (valproic acid, carbamazepine, barbiturates). Valproic acid is the most commonly used antiepileptic drug [4]. One of the significant side effects of anticonvulsants is neurotoxicity. The leading hypothesis explains the neurotoxic effects of this group of drugs by apoptosis of neurons and dysfunction of surviving neurocells. It was also found that all anticonvulsants have a teratogenic effect, to one degree or another [5]. This makes the search for new drugs with anticonvulsant activity, but not causing serious side effects, relevant. Herbal preparations can play an important role in solving this problem.

Наиболее близким по техническому результату (базовым) является карбамазепин, обладающий противосудорожной активностью, но данный препарат является синтетическим и оказывает ряд побочных эффектов. [5]The closest technical result (basic) is carbamazepine, which has anticonvulsant activity, but this drug is synthetic and has a number of side effects. [5]

Задачей предлагаемого изобретения является расширение арсенала средств, обладающих противосудорожной активностью, из природного сырья, которые в силу своей относительной безопасности могли бы применяться, в том числе, и в педиатрии.The objective of the invention is to expand the arsenal of drugs with anticonvulsant activity from natural raw materials, which, due to their relative safety, could be used, including in pediatrics.

Поставленная задача решается применением ацетоновой фракции из побегов Empetrum nigrum L. в качестве противосудорожного средства.The problem is solved by using the acetone fraction from the shoots of Empetrum nigrum L. as an anticonvulsant.

Впервые показано, что ацетоновая фракция из побегов Empetrum nigrum L. оказывает противосудорожное действие. В проанализированной литературе сведений о противосудорожном действии ацетоновой фракции из Empetrum nigrum L. не обнаружено.It was shown for the first time that the acetone fraction from the shoots of Empetrum nigrum L. exerts an anticonvulsant effect. In the analyzed literature, information on the anticonvulsant effect of the acetone fraction from Empetrum nigrum L. was not found.

Противосудорожное действие ацетоновой фракции из Empetrum nigrum L. явным образом не вытекает из уровня техники в данной области и не является очевидным для специалиста. Экспериментально установлено новое свойство и возможность использования ацетоновой фракции из Empetrum nigrum L. в качестве средства, обладающего противосудорожной активностью.The anticonvulsant effect of the acetone fraction from Empetrum nigrum L. does not explicitly follow from the prior art in this field and is not obvious to a person skilled in the art. A new property and the possibility of using the acetone fraction from Empetrum nigrum L. as an agent with anticonvulsant activity have been experimentally established.

Таким образом, предлагаемое изобретение соответствует критериям патентоспособности «новизна», «изобретательский уровень», «промышленная применимость».Thus, the present invention meets the criteria of patentability "novelty", "inventive step", "industrial applicability".

Изобретение будет понятно из следующего описания.The invention will be clear from the following description.

Ацетоновую фракцию из побегов Empetrum nigrum L. получают:The acetone fraction from the shoots of Empetrum nigrum L. receive:

Измельченное воздушно-сухое сырье Empetrum nigrum L. двукратно экстрагировали кипящим хлороформом в круглодонной колбе с обратным холодильником при соотношении сырье : экстрагент - 1:10. Полученные экстракты горячими фильтровали через тканевой фильтр. Объединенные хлороформные экстракты упаривали досуха в ротационном испарителе при 30С° и скорости вращения 60 rpm. Сухой хлороформный экстракт трехкратно обрабатывали ацетоном при постоянном перемешивании при комнатной температуре. Соотношение экстракт : экстрагент - 1:10. Полученные ацетоновые извлечения из хлороформного экстракта фильтровали под вакуумом в системе Бунзена-Бюхнера, объединяли и упаривали в ротационном испарителе до 1/3 объема при 30С° и скорости вращения 60 rpm. Полученное ацетоновое извлечение высушивали методом конвективной сушки. Выход ацетонового извлечения в пересчете на воздушно-сухое сырье составляет 8-10%.The ground air-dry raw materials of Empetrum nigrum L. were twice extracted with boiling chloroform in a round-bottom flask with a reflux condenser at a ratio of raw materials: extractant of 1:10. The resulting extracts were hot filtered through a fabric filter. The combined chloroform extracts were evaporated to dryness in a rotary evaporator at 30 ° C and a rotation speed of 60 rpm. Dry chloroform extract was treated with acetone three times with constant stirring at room temperature. The ratio of extract: extractant is 1:10. The obtained acetone extracts from the chloroform extract were filtered under vacuum in the Bunsen-Buchner system, combined and evaporated in a rotary evaporator to 1/3 of the volume at 30 ° C and a rotation speed of 60 rpm. The obtained acetone recovery was dried by convective drying. The yield of acetone recovery in terms of air-dry raw materials is 8-10%.

Исследование противосудорожной активности ацетоновой фракции, полученной из Empetrum nigrum L. выполнены на аутбредных мышах-самцах линии CD1 массой 25-27 г. Животные получены из отдела экспериментальных биологических моделей НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга. Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (г. Страсбург, 1986). Эвтаназию производили, соблюдая "Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных", утвержденных МЗ России.A study of the anticonvulsant activity of the acetone fraction obtained from Empetrum nigrum L. was performed on male CD1 outbred mice of a weight of 25-27 g. Animals were obtained from the Department of Experimental Biological Models of the NIIIFiRM them. E.D. Goldberg. The animals were kept in accordance with the rules adopted by the European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for experimental and scientific purposes (Strasbourg, 1986). Euthanasia was performed in compliance with the "Rules for the Work Using Experimental Animals" approved by the Ministry of Health of Russia.

Исследования проводили в соответствии с "Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств". Препаратом сравнения являлся карбамазепин [6].The studies were carried out in accordance with the "Guidelines for conducting preclinical studies of drugs." The comparison drug was carbamazepine [6].

Ацетоновая фракция, полученная по вышеописанной методике, в дозе 150 мг/кг и препарат сравнения карбамазепин в дозе 100 мг/кг вводили животным курсом ежедневно в течение пяти дней однократно через зонд в желудок в виде эмульсии и суспензии (карбамазепин) в воде очищенной за 2 часа до тестирования. Животные в группе контроля получали эквивалентное количество воды очищенной. Обработку результатов проводили методом вариационной статистики с использованием t критерия Стьюдента и непараметрического U критерия Вилкоксона-Манна-Уитни с помощью пакета программ Statistica 6.0. Значимость различий считали достоверной при Pt, Pu0,05.The acetone fraction obtained according to the above method, at a dose of 150 mg / kg and the comparison drug carbamazepine at a dose of 100 mg / kg, were injected in an animal course daily for five days once through a tube into the stomach in the form of an emulsion and suspension (carbamazepine) in purified water for 2 hours before testing. Animals in the control group received an equivalent amount of purified water. The results were processed by the method of variation statistics using t-student test and nonparametric U-test Wilcoxon-Mann-Whitney using the software package Statistica 6.0. The significance of the differences was considered significant at Pt, Pu0.05.

Пример 1. Определение противосудорожной активности на модели стрихниновых судорогExample 1. Determination of anticonvulsant activity on the model of strychnine seizures

Определяли противосудорожное действие на модели судорог, вызванных стрихнином при его подкожном введении в область шейного отдела спины в дозе 1,5 мг/кг. Животные наблюдались в течение 30 минут после инъекции стрихнина. В качестве критерия оценки противосудорожного действия вещества использовали его способность увеличивать продолжительность жизни опытных животных, а также процент выживаемости экспериментальных животных [6].The anticonvulsant effect was determined on the model of seizures caused by strychnine when it was subcutaneously introduced into the cervical region of the back at a dose of 1.5 mg / kg. Animals were observed for 30 minutes after strychnine injection. As a criterion for evaluating the anticonvulsant effect of the substance, its ability to increase the life expectancy of experimental animals, as well as the percentage of survival of experimental animals, was used [6].

В результате проведенного исследования было показано, что ацетоновая фракция из побегов Empetrum nigrum L. проявляет выраженное противосудорожное действие, при этом увеличивая продолжительность жизни животных на 54% по сравнению с контролем. Выживаемость животных составила 20% (табл. 1).As a result of the study, it was shown that the acetone fraction from the shoots of Empetrum nigrum L. exhibits a pronounced anticonvulsant effect, while increasing the life expectancy of animals by 54% compared with the control. The survival rate of animals was 20% (table. 1).

Пример 2. Определение противосудорожной активности на модели коразоловых судорог Определяли противосудорожное действие на модели судорог, вызванных коразолом при его подкожном введении в область шейного отдела спины в дозе 150 мг/кг. Регистрацию судорог осуществляли в течение 30 минут. Критерием оценки противосудорожного действия вещества использовали его способность увеличивать продолжительность жизни опытных животных [6].Example 2. Determination of anticonvulsant activity on the model of corazole convulsions. The anticonvulsant effect on the model of convulsions caused by corazole when it was subcutaneously introduced into the cervical back at a dose of 150 mg / kg was determined. Seizures were recorded within 30 minutes. The criterion for evaluating the anticonvulsant effect of the substance was its ability to increase the life expectancy of experimental animals [6].

В результате проведенного исследования было показано, что ацетоновая фракция из побегов Empetrum nigrum L. проявляет выраженное противосудорожное действие, при этом увеличивая продолжительность жизни животных на 85% по сравнению с контролем. Выживаемость животных составила 20% (табл. 2).As a result of the study, it was shown that the acetone fraction from the shoots of Empetrum nigrum L. exhibits a pronounced anticonvulsant effect, while increasing the life expectancy of animals by 85% compared with the control. The survival rate of animals was 20% (table. 2).

Источники информации, принятые во внимание при составлении описанияSources of information taken into account when compiling the description

1. Авакян Г.Г. и др. Новые подходы в лечении эпилепсии // Анналы клинической и экспериментальной неврологии. - 2017. - Т. 11. - №. 3. С.15-22.1. Avakyan G.G. et al. New approaches in the treatment of epilepsy // Annals of clinical and experimental neurology. - 2017. - T. 11. - No. 3. S.15-22.

2. Kwan P., Brodie М. J. Refractory epilepsy: mechanisms and solutions // Expert review of neurotherapeutics. - 2006. - T. 6. - №. 3. - C. 397-406.2. Kwan P., Brodie M. J. Refractory epilepsy: mechanisms and solutions // Expert review of neurotherapeutics. - 2006. - T. 6. - No. 3 .-- C. 397-406.

3. Вельдяксова E.Д., Якунина А.В., Писарь А.А. Современные возможности персонализированного назначения противоэпилептических препаратов // Здоровье и образование в XXI веке. - 2017. - Т. 19. - №. 4. С. 56-61.3. Veldyaksova E. D., Yakunina A. V., Pisar A. A. Modern possibilities of personalized prescription of antiepileptic drugs // Health and education in the XXI century. - 2017. - T. 19. - No. 4.P. 56-61.

4. Постников С.С. и др. Нейротоксичность лекарств // Качественная клиническая практика. - 2017. - №. 4. С. 68-72.4. Postnikov S.S. et al. Neurotoxicity of drugs // Qualitative clinical practice. - 2017. - No. 4.P. 68-72.

5. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под ред. А.Н. Миронова. - М, 2012. - Часть первая. - 944 с. 235-240.5. Guidelines for preclinical studies of drugs / Ed. A.N. Mironova. - M, 2012. - Part one. - 944 p. 235-240.

Claims

The use of the acetone fraction of dry chloroform extract from the shoots of Empetrum nigrum L. as an anticonvulsant.