RU2712916C1 - Method of anesthesia in balb/c nude mice in surgical interventions - Google Patents

Method of anesthesia in balb/c nude mice in surgical interventions Download PDF

Info

Publication number
RU2712916C1
RU2712916C1 RU2019130699A RU2019130699A RU2712916C1 RU 2712916 C1 RU2712916 C1 RU 2712916C1 RU 2019130699 A RU2019130699 A RU 2019130699A RU 2019130699 A RU2019130699 A RU 2019130699A RU 2712916 C1 RU2712916 C1 RU 2712916C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
anesthesia
balb
nude mice
surgical interventions
dose
Prior art date
Application number
RU2019130699A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Евгений Николаевич Колесников
Екатерина Александровна Лукбанова
Людмила Викторовна Ванжа
Алексей Юрьевич Максимов
Сергей Олегович Кит
Анна Сергеевна Гончарова
Екатерина Владиславовна Заикина
Мария Вадимовна Миндарь
Сергей Юрьевич Ткачев
Дарья Владиславовна Ходакова
Анастасия Владимировна Волкова
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority to RU2019130699A priority Critical patent/RU2712916C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2712916C1 publication Critical patent/RU2712916C1/en

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/395Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/395Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/55131,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P23/00Anaesthetics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely to experimental oncology, and is intended for anesthesia in Balb/c Nude mice in surgical interventions. Method of anesthesia in Balb/c Nude mice in surgical interventions involves xylazine premedication intramuscularly and anesthesia with the help of "Zoletil 100", which is administered intramuscularly. A preparation of xylazine with concentration of 20 mg/ml is introduced in dose of 1.5 ml/kg. In 15 minutes after pre-medication preparation "Zoletil 100" is introduced in the form of aqueous solution with concentration of 22.57 mg/ml in dose of 67.5 mg/kg of body weight of Balb/c Nude mice.
EFFECT: use of the invention provides humane treatment of Balb/c Nude mice in surgical interventions due to optimal depth of anesthesia and minimal toxic effect on the body of mice.
1 cl, 1 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной онкологии, и касается способа проведения наркоза у мышей Balb/c Nude при оперативных вмешательствах.The invention relates to medicine, namely to experimental oncology, and relates to a method for anesthesia in Balb / c Nude mice during surgical interventions.

Эксперименты на животных, контролируемые Правилами надлежащей лабораторной практики и пунктами Хельсинской декларации, являются важной составляющей биомедицинского исследования, без которой невозможно понимание природы и патофизиологии многих заболеваний и развитие стратегий соответствующей терапии (см. Use of Laboratory Animals in Biomedical and Behavioral Research // National Academy of Sciences. - P. 1-2). При использовании мелких грызунов (мышей и крыс) в эксперименте, проведение адекватной анестезии и применение анальгетиков для облегчения боли во время восстановления животного необходимы для минимизации болевого шока, являющегося причиной гибели животных во время хирургических вмешательств (см. Andersen M.L., Winter L.M.F. Animal models in biological and biomedical research - experimental and ethical concerns // An. Acad. Bras. Scienc. - 2017). Выбор анестезии определяется ключевыми факторами: порода, возраст, пол, вес, тип и продолжительность хирургических манипуляций (см. J.G. Vandenbergh Use of House Mice in Biomedical Research // ILAR journal. - 2000.). Несоблюдение указанных пунктов приводит к тяжелым последствиям, вызывая изъязвления на слизистых оболочках, расширение вен нижней трети пищевода, селезенки, кишечника, почек, образование тромбов в крупных сосудах брюшной полости (см. А.В. Смирнова, Л.Д. Лагутина, И.Е. Трубицына, О.С. Васнев, О.Б. Янова Особенности проведения анестезии у крыс при полостных операциях // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2012. - №5. - С. 62-65). Совершенствование дозировки препаратов, применяемых при анестезии, и выбор в пользу сочетанного наркоза позволят снизить риски мучительной гибели животных и свести к минимуму послеоперационные осложнения.Animal experiments, controlled by the Rules of Good Laboratory Practice and the paragraphs of the Helsinki Declaration, are an important component of a biomedical study, without which it is impossible to understand the nature and pathophysiology of many diseases and develop appropriate treatment strategies (see Use of Laboratory Animals in Biomedical and Behavioral Research // National Academy of Sciences. - P. 1-2). When using small rodents (mice and rats) in an experiment, adequate anesthesia and the use of analgesics to relieve pain during animal recovery are necessary to minimize the pain shock that causes animal death during surgery (see Andersen ML, Winter LMF Animal models in biological and biomedical research - experimental and ethical concerns // An. Acad. Bras. Scienc. - 2017). The choice of anesthesia is determined by key factors: breed, age, gender, weight, type and duration of surgical procedures (see J.G. Vandenbergh Use of House Mice in Biomedical Research // ILAR journal. - 2000.). Failure to comply with these points leads to serious consequences, causing ulceration on the mucous membranes, expansion of the veins of the lower third of the esophagus, spleen, intestines, kidneys, blood clots in large vessels of the abdominal cavity (see A.V. Smirnova, L.D. Lagutina, I. E. Trubitsyna, OS Vasnev, OB Yanova Features of anesthesia in rats during abdominal operations // Experimental and clinical gastroenterology. - 2012. - No. 5. - P. 62-65). Improving the dosage of drugs used in anesthesia, and the choice in favor of combined anesthesia will reduce the risk of painful death of animals and minimize postoperative complications.

Известен способ проведения наркоза у экспериментальных животных с помощью препаратов на основе Трибромэианола (R.E. Meyer, R.E. Fish А review of tribromoethanol anesthesia for production of genetically engineered mice and rats // Lab Animal. - 2005. - №34. - P. 47-52). Данный способ обеспечивает миорелаксацию и адекватную анестезию в течение 15-30 минут. Недостатком данного метода является возникновение очагов некротизации мышечной ткани. Кроме того, передозировка препарата вызывает перитонит и мучительную гибель грызунов, что противоречит международным правилам проведения оперативных вмешательств у животных.A known method of anesthesia in experimental animals using drugs based on Tribromeyanol (RE Meyer, RE Fish A review of tribromoethanol anesthesia for production of genetically engineered mice and rats // Lab Animal. - 2005. - No. 34. - P. 47-52 ) This method provides muscle relaxation and adequate anesthesia for 15-30 minutes. The disadvantage of this method is the occurrence of foci of necrotization of muscle tissue. In addition, an overdose of the drug causes peritonitis and excruciating death of rodents, which contradicts the international rules for surgical interventions in animals.

Известен способ наркотизации мышей диэтиловым эфиром с помощью пропитанного ватного тампона путем проведения ингаляции для обеспечения длительной анестезии (K. Otto, A. Thaden The Laboratory Mouse // Chapter 5.4 - Anaesthesia, Analgesia and Euthanasia. - 2012. - P. 739-759). Главным недостатком данного способа является высокая токсичность и канцерогенность диэтилового эфира для человека.A known method of anesthesia of mice with diethyl ether using an impregnated cotton swab by inhalation to ensure long-term anesthesia (K. Otto, A. Thaden The Laboratory Mouse // Chapter 5.4 - Anaesthesia, Analgesia and Euthanasia. - 2012. - P. 739-759) . The main disadvantage of this method is the high toxicity and carcinogenicity of diethyl ether for humans.

Известен способ инъекционной анестезии, предполагающий пероральное, внутривенное и внутримышечное введение барбитуратов (Тиопентал, Пентобарбитал) (S. Gargiulo Mice Anesthesia, Analgesia, and Care, Part I: Anesthetic Considerations in Preclinical Research // ILAR journal. - 2012). Данный способ обеспечивает необходимую для проведения длительных операций глубину наркоза, так как используемые препараты являются производными γ-аминомасляной кислоты, которые ингибируют действие норадреналина и глутамата. Однако, при использовании данного способа возникают многочисленные повреждения тканей печени из-за высокой гепатотоксичности, приводящей к страданиям лабораторных животных и последующей гибели. Еще одним недостатком является недоступность Тиопентала и Пентобарбитала в связи с ограниченным оборотом препаратов барбитурового ряда по всему миру.A known method of injection anesthesia, involving oral, intravenous and intramuscular administration of barbiturates (Thiopental, Pentobarbital) (S. Gargiulo Mice Anesthesia, Analgesia, and Care, Part I: Anesthetic Considerations in Preclinical Research // ILAR journal. - 2012). This method provides the depth of anesthesia necessary for long operations, since the drugs used are derivatives of γ-aminobutyric acid, which inhibit the effects of norepinephrine and glutamate. However, when using this method, numerous liver tissue damage occurs due to high hepatotoxicity, leading to suffering in laboratory animals and subsequent death. Another drawback is the inaccessibility of Thiopental and Pentobarbital due to the limited circulation of barbiturate preparations worldwide.

Известен способ проведения наркоза у крыс путем премедикации Ксилазином (Interchemie werken «De Adelaar» B.V, Нидерланды) в дозе 0,05 мл/кг массы тела внутримышечно и введения препарата «Золетил 50» (Virbac, Франция) в дозе 0,5 мг/кг массы тела через 10 минут после премедикации (Пат. №2466753 РФ. Способ проведения наркоза у крыс при многоэтапном эксперименте при моделировании эндометриоза. / Адамян Л.В. Опубл. 03.06.2011 г.). Описанный способ обеспечивает миорелаксацию, седацию и диссоциативную анестезию, так как Ксилазина гидрохлорид является антагонистом центральных альфа-2-адренорецепторов, а Тилетамина гидрохлорид является конкурентным антагонистом, ингибирующим связь N-метил-D-аспартатного рецептора, обеспечивающего передачу сигналов между нейронами спинного и головного мозга, с глутаматом (Д.В. Кадомцев, Е.А. Пасечникова, В.Г. Голубев Золетил-ксилазиновый наркоз в экспериментах у крыс // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2015). Недостатком данного способа является возникновение послеоперационных судорог и повышенной саливации из-за многочисленных повреждений коры поясной извилины и ретроспленальной коры у крыс, приводящих к мучительной гибели животных.A known method of anesthesia in rats by premedication with Xylazine (Interchemie werken "De Adelaar" BV, Netherlands) at a dose of 0.05 ml / kg of body weight intramuscularly and the introduction of the drug "Zoetil 50" (Virbac, France) at a dose of 0.5 mg / kg body weight 10 minutes after premedication (Pat. No. 2466753 of the Russian Federation. The method of anesthesia in rats with a multi-stage experiment when modeling endometriosis. / Adamyan L.V. Publ. 06/03/2011). The described method provides muscle relaxation, sedation and dissociative anesthesia, since Xylazine hydrochloride is an antagonist of central alpha-2-adrenergic receptors, and Tiletamine hydrochloride is a competitive antagonist that inhibits the connection of the N-methyl-D-aspartate receptor, which provides signal transmission between the brain and the neuron between the neurons and the spin , with glutamate (D.V. Kadomtsev, E.A. Pasechnikova, V.G. Golubev Zoetil-xylazine anesthesia in experiments in rats // International Journal of Applied and Basic Research. - 2015). The disadvantage of this method is the occurrence of postoperative seizures and increased salivation due to numerous injuries of the cortex of the cingulate gyrus and retrosplenal cortex in rats, leading to painful death of animals.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является разработка способа проведения наркоза у мышей Balb/c Nude при оперативных вмешательствах, обеспечивающего оптимальную глубину наркоза и минимальное токсическое действие на организм мышей.The technical result of the invention is the development of a method for anesthesia in Balb / c Nude mice during surgical interventions, providing an optimal depth of anesthesia and minimal toxic effect on the body of mice.

Технический результат изобретения достигается тем, что осуществляют проведение наркоза у мышей Balb/c Nude при оперативных вмешательствах, включающий проведение премедикации ксилазином внутримышечно, анестезию при помощи препарата «Золетил 100», который вводится внутримышечно, отличающийся тем, что препарат ксилазина концентрацией 20 мг/мл вводят в дозе 1,5 мл/кг, через 15 минут после премедикации вводят препарат «Золетил 100» в виде водного раствора концентрацией 22,57 мг/мл в дозе 67,5 мг/кг массы тела мышей Balb/c Nude.The technical result of the invention is achieved by the fact that anesthesia is performed in Balb / c Nude mice during surgical interventions, including premedication with xylazine intramuscularly, anesthesia with the drug Zoletil 100, which is administered intramuscularly, characterized in that the xylazine preparation has a concentration of 20 mg / ml administered at a dose of 1.5 ml / kg, 15 minutes after premedication, the drug “Zoetil 100” was administered as an aqueous solution at a concentration of 22.57 mg / ml at a dose of 67.5 mg / kg of body weight of Balb / c Nude mice.

Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.

Премедикацию осуществляют при помощи ксилазина концентрацией 20 мг/мл, который вводится внутримышечно в дозе 1,5 мл/кг. Через 15 минут после премедикации вводят препарат «Золетил 100» внутримышечно в виде водного раствора концентрацией 22,57 мг/мл в дозе 67,5 мг/кг массы тела мышей Balb/c Nude.Premedication is carried out using xylazine at a concentration of 20 mg / ml, which is administered intramuscularly at a dose of 1.5 ml / kg. Fifteen minutes after premedication, Zoetil 100 is administered intramuscularly as an aqueous solution at a concentration of 22.57 mg / ml at a dose of 67.5 mg / kg body weight of Balb / c Nude mice.

Данным способом был проведен наркоз 210 мышам линии Balb/c Nude.In this way, 210 mice of the Balb / c Nude line were anesthetized.

Пример.Example.

Самцу мыши линии Balb/c Nude весом 22 г ввели внутримышечно ксилазин (препарат Ксила) в дозе 0,03 мл. Через 15 минут ввели препарат «Золетил 100» внутримышечно в виде водного раствора концентрацией 22,57 мг/мл в дозе 0,07 мл (1,485 мг сухого препарата «Золетил 100»).A male Balb / c Nude mouse weighing 22 g was injected intramuscularly with xylazine (Xyla preparation) at a dose of 0.03 ml. After 15 minutes, the drug “Zoletil 100” was administered intramuscularly in the form of an aqueous solution with a concentration of 22.57 mg / ml at a dose of 0.07 ml (1.485 mg of the dry preparation “Zoletil 100”).

Технико-экономическая эффективность данного способа заключается в том, что он позволяет обеспечить гуманное обращение с мышами Balb/c Nude при оперативных вмешательствах благодаря применению наркоза на основе двух препаратов: ксилазина и «Золетила 100».The technical and economic effectiveness of this method lies in the fact that it allows for the humane treatment of Balb / c Nude mice during surgical interventions due to the use of anesthesia based on two drugs: xylazine and Zoleta 100.

Claims (1)

Способ проведения наркоза у мышей Balb/c Nude при оперативных вмешательствах, включающий проведение премедикации ксилазином внутримышечно, анестезию при помощи препарата «Золетил 100», который вводится внутримышечно, отличающийся тем, что препарат ксилазина концентрацией 20 мг/мл вводят в дозе 1,5 мл/кг, через 15 минут после премедикации вводят препарат «Золетил 100» в виде водного раствора концентрацией 22,57 мг/мл в дозе 67,5 мг/кг массы тела мышей Balb/c Nude.A method of anesthesia in Balb / c Nude mice during surgical interventions, including premedication with xylazine intramuscularly, anesthesia with the drug “Zoletil 100”, which is administered intramuscularly, characterized in that the drug xylazine concentration of 20 mg / ml is administered at a dose of 1.5 ml / kg, 15 minutes after premedication, the drug “Zoetil 100” is administered in the form of an aqueous solution with a concentration of 22.57 mg / ml at a dose of 67.5 mg / kg of body weight of Balb / c Nude mice.
RU2019130699A 2019-09-26 2019-09-26 Method of anesthesia in balb/c nude mice in surgical interventions RU2712916C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019130699A RU2712916C1 (en) 2019-09-26 2019-09-26 Method of anesthesia in balb/c nude mice in surgical interventions

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019130699A RU2712916C1 (en) 2019-09-26 2019-09-26 Method of anesthesia in balb/c nude mice in surgical interventions

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2712916C1 true RU2712916C1 (en) 2020-02-03

Family

ID=69625098

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019130699A RU2712916C1 (en) 2019-09-26 2019-09-26 Method of anesthesia in balb/c nude mice in surgical interventions

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2712916C1 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2466753C1 (en) * 2011-06-03 2012-11-20 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный медико-стоматологический университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Method for anaesthetisation in rats at staged experiment in simulated endometriosis
CN105943578A (en) * 2016-06-16 2016-09-21 吉林农业科技学院 Compound anesthetic for intramuscular injection of deer and preparation method thereof
RU2668201C1 (en) * 2017-12-08 2018-09-26 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Башкирский государственный аграрный университет" Method for mimicking acute destructive pancreatitis in pigs

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2466753C1 (en) * 2011-06-03 2012-11-20 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный медико-стоматологический университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Method for anaesthetisation in rats at staged experiment in simulated endometriosis
CN105943578A (en) * 2016-06-16 2016-09-21 吉林农业科技学院 Compound anesthetic for intramuscular injection of deer and preparation method thereof
RU2668201C1 (en) * 2017-12-08 2018-09-26 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Башкирский государственный аграрный университет" Method for mimicking acute destructive pancreatitis in pigs

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ASTASHEV ME et al. Anesthesia effects on the low frequency blood flow oscillations in mouse skin. Skin Res Technol., 2019 Jan, 25(1), p.40-46. *
ASTASHEV ME et al. Anesthesia effects on the low frequency blood flow oscillations in mouse skin. Skin Res Technol., 2019 Jan, 25(1), p.40-46. КАДОМЦЕВ Д.В. и др. Золетил-ксилазиновый наркоз в экспериментах у крыс. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований, 2015, N 5, с.56-57. *
КАДОМЦЕВ Д.В. и др. Золетил-ксилазиновый наркоз в экспериментах у крыс. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований, 2015, N 5, с.56-57. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lin et al. Farm animal anesthesia: cattle, small ruminants, camelids, and pigs
BR112019020294A2 (en) THERAPEUTIC MEDICINE FOR FIBROTIC DISEASE
Mama et al. Therapeutic developments in equine pain management
Lin Pain management for farm animals
KR20210108979A (en) Perineural administration of resiniferatoxin to treat maladaptive pain
BR112020003349A2 (en) compositions and methods to modulate hair growth
RU2712916C1 (en) Method of anesthesia in balb/c nude mice in surgical interventions
Zhang et al. Comparison of the effects of nefopam and tramadol on postoperative analgesia in dogs undergoing ovariohysterectomy.
Vergneau-Grosset et al. Fish sedation and anesthesia
BRPI0902699A2 (en) Chemical Method for Sexual Sterilization and Libido Elimination in Male Mammals
Rigotti et al. Anaesthesia for paediatric and geriatric patients
Wright et al. Pharmacokinetics of single-dose subcutaneous meloxicam injections in black-tailed prairie dogs (Cynomys ludovicianus)
Hajighahramani et al. Evaluation of several drug combinations for intraperitoneal anaesthesia in adult male rats.
Machin Wildlife analgesia
TWI707678B (en) Pyrazoline-derived compound and its use in a weekly dosage regime against inflammation and pain derived from degenerative joint disease in mammals
Chaudhary et al. Evaluation of sevoflurane and isoflurane as maintenance agent in buffaloes after glycopyrrolate-xylazine-butorphanol-propofol anaesthesia
Hedenqvist Laboratory animal analgesia, anesthesia, and euthanasia
Manvelyan et al. Analgesic activity of new derivatives of quinazolinone-4
JP6100510B2 (en) Anti-cold medicine
Beths TIVA/TCI in veterinary practice
Kilic et al. Cardiopulmonary effects of propofol com-pared with those of a medetomidine-ketamine combination in the common buzzards (Buteo buteo)
US20190046475A1 (en) Oral veterinary composition with gabapentin
Blaze et al. Veterinary Anesthesia Drug Quick Reference-E-Book: Veterinary Anesthesia Drug Quick Reference-E-Book
Fekry et al. Assessment of a multimodal analgesia protocol in goats undergoing claw amputation
Valverde Treatment of acute and chronic pain in ruminants