RU2710263C1 - Method for producing and culturing fibroblast-like cells from a newborn's umbilical cord - Google Patents
Method for producing and culturing fibroblast-like cells from a newborn's umbilical cord Download PDFInfo
- Publication number
- RU2710263C1 RU2710263C1 RU2019129652A RU2019129652A RU2710263C1 RU 2710263 C1 RU2710263 C1 RU 2710263C1 RU 2019129652 A RU2019129652 A RU 2019129652A RU 2019129652 A RU2019129652 A RU 2019129652A RU 2710263 C1 RU2710263 C1 RU 2710263C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- umbilical cord
- tubes
- solution
- temperature
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к технологии выделения, культивирования фибробластоподобных клеток из пуповины.The invention relates to the field of biotechnology, specifically to the technology of isolation, cultivation of fibroblast-like cells from the umbilical cord.
Известен способ получения фибробластов из пуповины новорожденного, полученной при нормальных родах женщин на 39-40 недели гестации [1]. Недостатками способа являются: риск контаминации донорского материала условно-патогенной флорой, которая содержится в родовых путях, сложный технологический процесс по получению суспензии клеток из донорского материала.A known method of producing fibroblasts from the umbilical cord of a newborn, obtained during normal childbirth at 39-40 weeks of gestation [1]. The disadvantages of the method are: the risk of contamination of the donor material with a conditionally pathogenic flora, which is contained in the birth canal, a complex technological process for obtaining a suspension of cells from the donor material.
Известен способ получения фибробластоподобных клеток из пупочного канатика новорожденного, полученного при нормальных родах на 39-40 недели гестации [2]. После отмывки донорского материала от крови и слизи, разрезают пупочный канатик ручным способом на фрагменты, повторно промывают их раствором Хенкса, измельчают фрагменты гомогенизатором до однородной массы; проводят ферментативную обработку, используя 0,075% коллагеназу I типа и коллагеназу IV типа (соотношение концентраций ферментов 1:1 в объемной пропорции 1:5) в течение 8-10 часов при 37° и периодически помешивая содержимое пробирок; пропускают в новую центрифужную пробирку полученный субстрат через двойное сито для клеток; центрифугируют в течение 8 минут при 1000 об./мин; получают осадок фибробластоподобных клеток, который ресуспендируют в культуральной среде с добавлением основного фактора роста фибробластов; подсчитывают общее количество полученных клеток в камере Горяева, вносят клетки в чашки Петри в посевной дозе 8-15×103/см2; при достижении 70-80% конфлюентности монослоя, клетки пересевают, культивируют до 4-6 пассажа, при этом клетки сохраняют свой диплоидный кариотип и высокую пролиферативную активность. Данный способ взят за прототип.There is a method of producing fibroblast-like cells from the umbilical cord of a newborn, obtained during normal delivery at 39-40 weeks of gestation [2]. After washing the donor material from blood and mucus, manually cut the umbilical cord into fragments, rinse them again with Hanks solution, grind the fragments with a homogenizer to a homogeneous mass; carry out enzymatic treatment using 0.075% type I collagenase and type IV collagenase (ratio of enzyme concentrations 1: 1 in a volume ratio of 1: 5) for 8-10 hours at 37 ° and periodically stirring the contents of the tubes; pass the obtained substrate into a new centrifuge tube through a double sieve for cells; centrifuged for 8 minutes at 1000 rpm./min; a pellet of fibroblast-like cells is obtained, which are resuspended in the culture medium with the addition of a basic fibroblast growth factor; calculate the total number of cells obtained in the Goryaev chamber, introduce cells into Petri dishes at a seed dose of 8-15 × 10 3 / cm 2 ; upon reaching 70-80% confluence of the monolayer, the cells are subcultured, cultured until passage 4-6, while the cells retain their diploid karyotype and high proliferative activity. This method is taken as a prototype.
Недостатками прототипа являются: риск контаминации донорского материала условно-патогенной флорой, которая содержится в родовых путях, сложный технологический процесс получения суспензии клеток с использованием ручного труда; применение в процессе обработки пупочного канатика ферментов нескольких типов; недостаточная инактивация ферментов при отмывке; расчет посевной дозы, исходя от общего числа полученных клеток, а не от жизнеспособных.The disadvantages of the prototype are: the risk of contamination of the donor material by conditionally pathogenic flora, which is contained in the birth canal, the complex technological process of obtaining a suspension of cells using manual labor; the use of several types of enzymes in the processing of the umbilical cord; insufficient inactivation of enzymes during washing; calculation of the inoculative dose based on the total number of cells received, and not on viable cells.
Целью изобретения является создание способа получения и культивирования фибробластоподобных клеток из пуповины новорожденного.The aim of the invention is to provide a method for producing and culturing fibroblast-like cells from the umbilical cord of a newborn.
Эта цель достигается тем, что забор пуповины проводят у здоровых женщин после рождения ребенка путем кесарева сечения, пуповину трижды отмывают стерильным раствором Хенкса с антибиотиком от сгустков крови и слизи, удаляют кровеносные сосуды, оставшуюся ткань измельчают при помощи лабораторного миксера; переносят материал в центрифужные пробирки и заливают 0,2% раствором коллагеназы из гепатопанкреаса краба ООО «БиолоТ» в соотношении 1:1; пробирки помещают в термошейкер при температуре +37°С, скорости вращения 100 об./мин на 16 часов; фильтруют содержимое в новые пробирки через фильтры для клеток с размером пор 70 мкм; вносят в них стерильный 0,02% раствор Версена в соотношении 1:1; центрифугируют пробирки в холодовой центрифуге при температуре +4°С, скорости вращения 1200 об./мин в течение 20 минут; надосадочную жидкость утилизируют; осадок клеток ресуспендируют в полной питательной среде, включающей αМЕМ с глютамином, 10% FBS, 8 мкг/мл гентамицина; подсчитывают количество выделенных жизнеспособных клеток в камере Горяева, используя 0,4% раствор трипанового синего; высевают клетки в дозе 1×105 жизнеспособных кл./см2 в культуральный флакон с аналогичной полной питательной средой; культивирование проводят в CO2-инкубаторе при температуре +37°С, 5% СО2 и постоянной влажности; смену среды проводят каждые 5 суток культивирования, при этом кондиционированную культуральную среду из флакона с клетками полностью отбирают пипеткой; центрифугируют ее в холодовой центрифуге при температуре +4°С, скорости вращения 1500 об./мин в течение 10 минут, после чего возвращают в культуральный флакон и добавляют свежую среду в соотношении 1:1; по достижении 80% конфлюентности клеточного монослоя проводят пересев клеток из расчета 1:2.This goal is achieved by the fact that the umbilical cord is taken in healthy women after giving birth by cesarean section, the umbilical cord is washed three times with sterile Hanks solution with an antibiotic from blood clots and mucus, blood vessels are removed, the remaining tissue is crushed using a laboratory mixer; transfer the material to centrifuge tubes and pour 0.2% solution of collagenase from hepatopancreas crab BioloT LLC in a ratio of 1: 1; the tubes are placed in a thermo-shaker at a temperature of + 37 ° C, a rotation speed of 100 rpm for 16 hours; filter the contents into new tubes through cell filters with a pore size of 70 microns; contribute sterile 0.02% Versen's solution in a ratio of 1: 1; the tubes are centrifuged in a cold centrifuge at a temperature of + 4 ° C, a rotation speed of 1200 rpm for 20 minutes; the supernatant is disposed of; the cell pellet was resuspended in complete culture medium, including αMEM with glutamine, 10% FBS, 8 μg / ml gentamicin; count the number of allocated viable cells in the Goryaev chamber using a 0.4% trypan blue solution; seeded cells at a dose of 1 × 10 5 viable cells / cm 2 in a culture bottle with a similar complete nutrient medium; cultivation is carried out in a CO 2 incubator at a temperature of + 37 ° C, 5% CO 2 and constant humidity; a change of medium is carried out every 5 days of cultivation, while the conditioned culture medium from the bottle with cells is completely taken with a pipette; centrifuge it in a cold centrifuge at a temperature of + 4 ° C, a rotation speed of 1500 rpm for 10 minutes, after which it is returned to the culture bottle and fresh medium is added in a 1: 1 ratio; upon reaching 80% confluence of the cell monolayer, the cells are reseeded at a rate of 1: 2.
Забор пуповины у обследованных женщин после рождения ребенка путем кесарева сечения проводят для того, чтобы исключить контаминацию донорского материала условно-патогенной флорой, которая содержится в родовых путях. Лабораторный миксер применяют в процессе измельчения донорского материала для того, чтобы исключить трудоемкий ручной процесс по измельчению пуповины. 0,2% коллагеназу из гепатопанкреаса краба ООО «БиолоТ» применяют в процессе ферментативной обработки пуповины потому, что она обладает высокой коллагенолитической активностью (до 750 ЕД/мг по Мандлу) и не уступает по своему действию нескольким ферментам.Umbilical cord sampling in examined women after giving birth by cesarean section is carried out in order to exclude contamination of the donor material by conditionally pathogenic flora, which is found in the birth canal. A laboratory mixer is used in the process of grinding donor material in order to exclude the laborious manual process of grinding the umbilical cord. 0.2% of collagenase from crab hepatopancreas of BioloT LLC is used in the process of enzymatic processing of the umbilical cord because it has high collagenolytic activity (up to 750 U / mg according to Mandl) and is not inferior to several enzymes in its action.
Термошейкер в процессе ферментативной обработки тканей применяют для того, чтобы она проходила при постоянном равномерном перемешивании среды и лучшем взаимодействии тканей с коллагеназой, создавая при этом оптимальные условия для выхода клеток. Кроме того, использование термошейкера исключает ручной труд по перемешиванию среды. Холодовое центрифугирование позволяет поддержтвать заданную температуру и не оказывает повреждающего воздействия на клетки. Подсчет полученных клеток в камере Горяева проводят для того, чтобы рассчитать посевную дозу жизнеспособных клеток для внесения их в культуральный флакон.In the process of enzymatic processing of tissues, a thermal shaker is used to ensure that it passes with constant uniform mixing of the medium and better interaction of tissues with collagenase, while creating optimal conditions for the release of cells. In addition, the use of a thermal shaker eliminates manual labor in mixing the medium. Cold centrifugation allows you to maintain the set temperature and does not have a damaging effect on the cells. Counting the obtained cells in the Goryaev chamber is carried out in order to calculate the seed dose of viable cells for inclusion in the culture vial.
Кондиционированную среду используют при пересевах в процессе культивирования добавляя ее к свежей потому, что она содержит физиологически активные продукты жизнедеятельности культивируемых в ней клеток, данная среда оптимизирует процессы пролиферации клеток на ранних этапах культивирования, обеспечивает накопление клеток в необходимом количестве.The conditioned medium is used for reseeding during the cultivation process, adding it to fresh because it contains physiologically active waste products of the cells cultivated in it, this medium optimizes cell proliferation in the early stages of cultivation, and ensures the accumulation of cells in the required quantity.
Способ осуществляется следующим образом. Забор пуповины проводят у здоровых женщин после рождения ребенка путем кесарева сечения. Пуповину трижды отмывают стерильным раствором Хенкса с антибиотиком от сгустков крови и слизи, удаляют кровеносные сосуды, оставшуюся ткань измельчают на фрагменты при помощи лабораторного миксера. Измельченную ткань переносят в центрифужные пробирки и заливают 0,2% раствором коллагеназы из гепатопанкреаса краба ООО «БиолоТ» в соотношении 1:1. Пробирки помещают в термошейкер при температуре +37°С, скорости вращения 100 об./мин на 16 часов. Фильтруют содержимое в новые пробирки через фильтры для клеток с размером пор 70 мкм. Вносят в них стерильный 0,02% раствор Версена в соотношении 1:1. Центрифугируют пробирки в холодовой центрифуге при температуре +4°С, скорости вращения 1200 об./мин в течение 20 минут. Надосадочную жидкость утилизируют. Осадок клеток ресуспендируют в полной питательной среде, включающей αМЕМ с глютамином, 10% FBS, 8 мкг/мл гентамицина. Подсчитывают количество выделенных жизнеспособных клеток в камере Горяева, используя 0,4% раствор трипанового синего. Высевают клетки в дозе 1×105 жизнеспособных кл./см2 в культуральный флакон с аналогичной полной питательной средой. Культивирование проводят в СО2-инкубаторе при температуре +37°С, 5% СО2 и постоянной влажности. Смену среды проводят каждые 5 суток культивирования, при этом кондиционированную культуральную среду из флакона с клетками полностью отбирают пипеткой. Эту среду центрифугируют в холодовой центрифуге при температуре +4°С, скорости вращения 1500 об./мин в течение 10 минут, после чего возвращают в культуральный флакон и добавляют свежую аналогичную среду в соотношении 1:1. По достижении 80% конфлюентности клеточного монослоя проводят пересев клеток из расчета 1:2.The method is as follows. The umbilical cord is taken in healthy women after giving birth by cesarean section. The umbilical cord is washed three times with a sterile Hanks solution with an antibiotic from blood clots and mucus, blood vessels are removed, the remaining tissue is crushed into fragments using a laboratory mixer. The crushed tissue is transferred to centrifuge tubes and poured with a 0.2% solution of collagenase from hepatopancreas crab of BioloT LLC in a ratio of 1: 1. The tubes are placed in a thermo-shaker at a temperature of + 37 ° C, a rotation speed of 100 rpm for 16 hours. Filter the contents into new tubes through cell filters with a pore size of 70 μm. A sterile 0.02% Versen solution in a ratio of 1: 1 is introduced into them. The tubes are centrifuged in a cold centrifuge at a temperature of + 4 ° C and a rotation speed of 1200 rpm for 20 minutes. The supernatant is disposed of. The cell pellet was resuspended in complete culture medium, including αMEM with glutamine, 10% FBS, 8 μg / ml gentamicin. Count the number of allocated viable cells in the Goryaev chamber using a 0.4% trypan blue solution. Sow cells at a dose of 1 × 105 viable cells / cm2 in a culture vial with a similar complete nutrient medium. Cultivation is carried out in a CO 2 incubator at a temperature of + 37 ° C, 5% CO 2 and constant humidity. A change of medium is carried out every 5 days of cultivation, while the conditioned culture medium from the vial with cells is completely removed with a pipette. This medium is centrifuged in a cold centrifuge at a temperature of + 4 ° C, a rotation speed of 1500 rpm for 10 minutes, after which it is returned to the culture bottle and fresh fresh similar medium is added in a 1: 1 ratio. Upon reaching 80% confluence of the cell monolayer, the cells are reseeded at a rate of 1: 2.
Способ иллюстрируется клиническим примером. У здоровых женщин после рождения детей путем кесарева сечения забирали фрагменты пуповин (7-10 см). Получение и культивирование фибробластоподобных клеток из донорского материала было выполнено по разработанному способу. Характеристика полученных линий фибробластоподобных клеток приведена в таблице 1. Клеток имели высокий индекс адгезии (88±0,2% - 90,5±0,5%), относительно одинаковый индекс пролиферации (1,5±0,3), процент жизнеспособных клеток в культуре был от 89,5 до 97,8%. Клетки использовали для создания клеточно-тканевых трансплантатов.The method is illustrated by a clinical example. In healthy women, umbilical cord fragments (7-10 cm) were taken after cesarean section after giving birth. Obtaining and culturing fibroblast-like cells from donor material was performed according to the developed method. The characteristics of the obtained fibroblast-like cell lines are shown in Table 1. The cells had a high adhesion index (88 ± 0.2% - 90.5 ± 0.5%), a relatively similar proliferation index (1.5 ± 0.3), and the percentage of viable cells in the culture was from 89.5 to 97.8%. Cells were used to create cell-tissue transplants.
Способ получения и культивирования фибробластоподобных клеток из пуповины новорожденных может использоваться в специализированных лабораториях культур клеток для получении клеточных продуктов для регенераторной медицины:, в исследовательских целях для тестирования in vitro.The method of obtaining and culturing fibroblast-like cells from the umbilical cord of newborns can be used in specialized laboratory cell cultures to obtain cell products for regenerative medicine: for research purposes for in vitro testing.
Информационные источникиInformation sources
1. Патент RU 22308957. от 27.10.2007 «Способ получения препарата для мезотерапии и препарат, полученный этим способом» Ярыгин К.Н.1. Patent RU 22308957. dated 10.27.2007 “A method for producing a drug for mesotherapy and a drug obtained in this way” K. Yarygin
2. Патент RU 2384618 от 27.03.2008 «Способ получения фибробластоподобных клеток из пупочного канатика новорожденного» Сабурина И.Н, Исаев А.А., Киселев С.Л., Лагарькова М.А., Кошелева Н.В., Мелихова B.C., Приходько А.В.2. Patent RU 2384618 dated 03/27/2008 "A method for producing fibroblast-like cells from the umbilical cord of a newborn" Saburina I.N., Isaev A.A., Kiselev S.L., Lagarkova M.A., Kosheleva N.V., Melikhova BC , Prikhodko A.V.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019129652A RU2710263C1 (en) | 2019-09-19 | 2019-09-19 | Method for producing and culturing fibroblast-like cells from a newborn's umbilical cord |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019129652A RU2710263C1 (en) | 2019-09-19 | 2019-09-19 | Method for producing and culturing fibroblast-like cells from a newborn's umbilical cord |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2710263C1 true RU2710263C1 (en) | 2019-12-25 |
Family
ID=69023010
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019129652A RU2710263C1 (en) | 2019-09-19 | 2019-09-19 | Method for producing and culturing fibroblast-like cells from a newborn's umbilical cord |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2710263C1 (en) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006019357A1 (en) * | 2004-08-16 | 2006-02-23 | Cellresearch Corporation Pte Ltd | Isolation of stem/progenitor cells from amniotic membrane of umbilical cord. |
RU2384618C2 (en) * | 2008-03-27 | 2010-03-20 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Лаборатория Клеточных Технологий" | Method for making fibroblast-like cells of umbilical cord of newborn |
RU2674344C2 (en) * | 2016-12-16 | 2018-12-07 | ФГБУ "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И.Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for obtaining biosafe culture of mesenchymal stem cells from gelatin of wharton of human umbilical cord |
-
2019
- 2019-09-19 RU RU2019129652A patent/RU2710263C1/en active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006019357A1 (en) * | 2004-08-16 | 2006-02-23 | Cellresearch Corporation Pte Ltd | Isolation of stem/progenitor cells from amniotic membrane of umbilical cord. |
RU2384618C2 (en) * | 2008-03-27 | 2010-03-20 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Лаборатория Клеточных Технологий" | Method for making fibroblast-like cells of umbilical cord of newborn |
RU2674344C2 (en) * | 2016-12-16 | 2018-12-07 | ФГБУ "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И.Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for obtaining biosafe culture of mesenchymal stem cells from gelatin of wharton of human umbilical cord |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
АРУТЮНЯН И.В. и др., Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки пупочного канатика: биологические свойства и клиническое применение, Гены и клетки, 2015, Т. 10, N 2, C.30-38. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110551684B (en) | Preparation method of human umbilical cord mesenchymal stem cells | |
US6875605B1 (en) | Modular cell culture bioreactor and associated methods | |
CN105062959A (en) | Isolated culture method of human amnia mesenchymal stem cells | |
JP7563976B2 (en) | Method for producing dental pulp-derived cells | |
CN103396990A (en) | Method for preparing mesenchymal stem cells | |
CN102127522A (en) | Human umbilical mesenchymal stem cell and preparation method thereof | |
CN105420179A (en) | Method for simultaneously extracting epithelial cells and mesenchymal stem cells from umbilical cord and placenta amnion tissues | |
CN109893541B (en) | Application of exosome derived from menstrual blood stem cells in preparation of medicine for treating intrauterine adhesion | |
CN101285053A (en) | Process for coculturing cord blood hematopoietic stem cells and mesenchymal stem cells in dynamic suspending condition | |
CN104651305A (en) | Method for acquiring bioactive proteins by utilizing umbilical cord mesenchymal stem cells | |
Scibona et al. | Expansion processes for cell-based therapies | |
CN112608896A (en) | NK cell culture method and application thereof | |
CN114209814B (en) | Application of TNFSF15 protein in promoting differentiation of bone marrow stem cells into macrophages and expansion | |
CN108949682A (en) | A kind of preparation, culture and the purification process of dental pulp mescenchymal stem cell | |
CN107446891B (en) | A method of expanding human umbilical cord's blood candidate stem cell using itself umbilical cord mesenchymal stem cells as stroma cell | |
RU2710263C1 (en) | Method for producing and culturing fibroblast-like cells from a newborn's umbilical cord | |
CN103305453A (en) | Microcarrier culture system of umbilical cord mesenchymal stem cells | |
US9206389B2 (en) | Culture for expanding stem cells ex-vivo | |
CN106190969A (en) | A kind of preparation method of decidua mescenchymal stem cell | |
RU2645255C1 (en) | Method for obtaining of biosafe culture of mesenchimal stem cells from human chorionic villae | |
RU2726554C1 (en) | Method for producing and culturing fibroblast-like cells from milk tooth pulp | |
CN117157389A (en) | Preparation method and application of mesenchymal stem cells of hair follicle | |
CN111733161B (en) | Application of circ6148 and recombinant vector thereof in promoting angiogenesis | |
CN110468100A (en) | The osteogenic induction method of culture medium and mesenchymal stem cell | |
CN116396930B (en) | Mesenchymal stem cell serum-free medium and application thereof |