RU2705398C1 - Method for prediction of the effectiveness of the agent for increasing the high-differentiated cells in mammary adenocarcinoma and the composition for its implementation - Google Patents
Method for prediction of the effectiveness of the agent for increasing the high-differentiated cells in mammary adenocarcinoma and the composition for its implementation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2705398C1 RU2705398C1 RU2018130033A RU2018130033A RU2705398C1 RU 2705398 C1 RU2705398 C1 RU 2705398C1 RU 2018130033 A RU2018130033 A RU 2018130033A RU 2018130033 A RU2018130033 A RU 2018130033A RU 2705398 C1 RU2705398 C1 RU 2705398C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- composition
- csf
- tnf
- patient
- cells
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, конкретно к онкологии.The invention relates to medicine, specifically to oncology.
Изобретение может быть использовано для подбора больных раком молочной железы с целью повышения эффективности дифференцировочной терапии для снижения степени злокачественности аденокарциномы молочной железы в дооперационный период.The invention can be used to select patients with breast cancer in order to increase the effectiveness of differentiation therapy to reduce the degree of malignancy of breast adenocarcinoma in the preoperative period.
Одним из подходов в лечении злокачественных новообразований является индукционная и неоадъювантная терапия, которые представляют собой первый этап лечения рака различной этиологии. Известная как основная терапия, или терапия первой линии, индукционная и неоадъювантная терапия назначается с целью уменьшения количества раковых клеток и для подготовки больного к хирургическому лечению. Поскольку уменьшение количества малигнизированных клеток в опухоли может быть достигнуто за счет снижения в ней содержания наиболее злокачественных низкодифференцированных клеток и повышения содержания высокодифференцированных клеток, то к вышеуказанному направлению в лечении злокачественных новообразований можно отнести и дифференцировочную терапию. Этот вид лечения злокачественных новообразований основывается на концепции о возможности инициации дифференцировки опухолевых клеток, их реверсии в нормальный фенотип, что снизит степень злокачественности опухоли в предоперационный период (Kawamata Н., Tachibana М., Fujimori Т., Imai Y. Differentiation-inducingtherapyforsolidtumors // Curr. Pharm. Des. - 2006. - Vol.12. - №3. - P. 379-385).One of the approaches in the treatment of malignant neoplasms is induction and neoadjuvant therapy, which represent the first stage of treatment of cancer of various etiologies. Known as primary therapy, or first-line therapy, induction and neoadjuvant therapy is prescribed to reduce the number of cancer cells and to prepare the patient for surgical treatment. Since a decrease in the number of malignant cells in a tumor can be achieved by lowering the content of the most malignant low-differentiated cells and increasing the content of highly differentiated cells, differentiation therapy can also be referred to the above direction in the treatment of malignant neoplasms. This type of treatment for malignant neoplasms is based on the concept of the possibility of initiating the differentiation of tumor cells, their reversion into a normal phenotype, which will reduce the degree of tumor malignancy in the preoperative period (Kawamata N., Tachibana M., Fujimori T., Imai Y. Differentiation-inducingtherapyforsolidtumors // Curr. Pharm. Des. - 2006. - Vol. 12. - No. 3. - P. 379-385).
инкубированной без Композиции, и при величине ИВКСЦ, равной или превышающей 700, прогнозируют повышение относительного содержания высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы данного пациента с помощью Композиции.incubated without the Composition, and with a CPI value of SC equal to or exceeding 700, an increase in the relative content of highly differentiated cells in the patient’s breast adenocarcinoma is predicted using the Composition.
Техническими результатами предлагаемого способа являются следующие:The technical results of the proposed method are as follows:
- способ позволяет прогнозировать эффективность/неэффективность ее применения для повышения относительного содержания высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы пациента с инвазивным протоковым раком;- the method allows to predict the effectiveness / inefficiency of its use to increase the relative content of highly differentiated cells in adenocarcinoma of the mammary gland of a patient with invasive ductal cancer;
- способ позволяет отобрать пациентов с аденокарциномами молочной железы, у которых с вероятностью 1,00 (т.е. у 100% пациентов) можно с помощью данной Композиции повысить относительное содержание высокодифференцированных клеток в опухоли и этим снизить ее злокачественность;- the method allows to select patients with breast adenocarcinomas, with which with a probability of 1.00 (i.e., 100% of patients), using this Composition, it is possible to increase the relative content of highly differentiated cells in the tumor and thereby reduce its malignancy;
- способ позволяет сделать прогноз в отношении каждого пациента,- the method allows to make a forecast for each patient,
- Композиция наряду со свойством стимулировать дифференцировку опухолевых клеток у ряда пациентов с аденокарциномами молочной железы обладает также свойством стимулировать наработку иммунокомпетентными клетками крови данного ряда пациентов цитокинов IL-6, TNF-α и G-CSF в такой определенной мере, что это дает возможность с вероятностью, равной единице, прогнозировать у этих пациентов повышение содержания высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы.- The composition, along with the property of stimulating the differentiation of tumor cells in a number of patients with breast adenocarcinomas, also has the property of stimulating the production of immunocompetent blood cells of this series of patients by the cytokines IL-6, TNF-α and G-CSF to such a certain extent that this makes it possible with probability equal to unity, to predict in these patients an increase in the content of highly differentiated cells in mammary adenocarcinoma.
Перечень фигур иллюстративного материалаList of figures illustrative material
Фиг. 1. ROC-кривая, полученная при ROC-анализе индекса повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток (ИПВД) в биоптате молочной железы в группе пациентов, у которых величина индекса влияния Композиции (ИВКСЦ) на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-FIG. 1. ROC curve obtained by ROC analysis of the index of the increase in the content of highly differentiated tumor cells (IPVD) in the breast biopsy specimen in the group of patients in whom the value of the influence index of the Composition (CPI SC ) on the total production of IL-6, TNF-α and G -
CSF иммунокомпетентными клетками крови составила 700 и более. AUC: 1,0 - отличное качество модели.CSF of immunocompetent blood cells was 700 or more. AUC: 1,0 - excellent quality model.
Фиг. 2. ROC-кривая, полученная при ROC-анализе индекса повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток (ИПВД) в биоптате молочной железы в группе пациентов, у которых величина индекса влияния Композиции (ИВКСЦ) на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF иммунокомпетентными клетками крови составила 300-699. AUC: 0,667 - среднее качество модели.FIG. 2. ROC curve obtained by ROC analysis of the index of the increase in the content of highly differentiated tumor cells (IPVD) in the breast biopsy specimen in the group of patients in whom the value of the influence index of the Composition (CPI SC ) on the total production of IL-6, TNF-α and G -CSF by immunocompetent blood cells was 300-699. AUC: 0.667 - average quality of the model.
Фиг. 3. ROC-кривая, полученная при ROC-анализе индекса повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток (ИПВД) в биоптате молочной железы в группе пациентов, у которых величина индекса влияния Композиции (ИВКСЦ) на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF иммунокомпетентными клетками крови составила 15-299. AUC: 0,536 - неудовлетворительное качество модели.FIG. 3. ROC curve obtained by ROC analysis of the index for increasing the content of highly differentiated tumor cells (IPVD) in a breast biopsy specimen in a group of patients in whom the value of the influence index of the Composition (CPI SC ) on the total production of IL-6, TNF-α and G -CSF by immunocompetent blood cells was 15-299. AUC: 0.536 - unsatisfactory model quality.
Способ прогнозирования эффективности применения вышеуказанного средства для повышения относительного содержания высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы осуществляют следующим образом.A method for predicting the effectiveness of the use of the above means to increase the relative content of highly differentiated cells in breast adenocarcinoma is as follows.
Цельную кровь, в количестве 1 мл, взятую из вены пациента с инвазивным протоковым раком молочной железы, который гистологически характеризуется как аденокарцинома, помещают в стерильный флакон с 4 мл среды DMEM/F12, содержащей Hepes (15 mM), гепарин (2,5 ЕД/мл), гентамицин (100 мкг/мл).Whole blood, 1 ml taken from the vein of a patient with invasive ductal carcinoma of the breast, which is histologically characterized as adenocarcinoma, is placed in a sterile vial with 4 ml of DMEM / F12 medium containing Hepes (15 mM), heparin (2.5 units / ml), gentamicin (100 μg / ml).
Аккуратно перемешивают содержимое флакона, затем из него в стерильных условиях забирают 0,980 мл разбавленной крови и помещают ее в стерильный флакон, содержащий 0,020 мл физиологического раствора с Композицией, включающей фитогемагглютинин Р, фитогемагглютинин М, конканавалин А, липополисахарид (Escherichia coli), взятые в соотношении (мас. ч.) 1:1:2:1 соответственно, достигая их эффективных концентраций.The contents of the vial are gently mixed, then 0.980 ml of diluted blood is taken from it under sterile conditions and placed in a sterile vial containing 0.020 ml of physiological saline with a Composition including phytohemagglutinin P, phytohemagglutinin M, concanavalin A, lipopolysaccharide (Escherichia coli), taken in the ratio (parts by weight) 1: 1: 2: 1, respectively, reaching their effective concentrations.
В качестве эффективных концентраций компонентов Композиции в конечном разведении (в растворе с кровью) могут быть использованы, например, следующие: фитогемагглютинин Р - 1,6-2,4 мкг/мл, фитогемагглютинин М - 1,6-2,4 мкг/мл, конканавалин А - 3,2-4,8 мкг/мл, липополисахарид из Escherichia coli - 1,6-2,4 мкг/мл, т.е. 8-12 мкг Композиции в 1 мл при указанном выше соотношении компонентов в Композиции (мас. ч.).As effective concentrations of the components of the Composition in the final dilution (in solution with blood), for example, the following can be used: phytohemagglutinin P - 1.6-2.4 μg / ml, phytohemagglutinin M - 1.6-2.4 μg / ml Concanavalin A 3.2-4.8 μg / ml; Lipopolysaccharide from Escherichia coli 1.6-2.4 μg / ml, i.e. 8-12 μg of the Composition in 1 ml at the above ratio of components in the Composition (wt. H).
Из того же указанного выше флакона с кровью пациента и питательной средой DMEM/F12, содержащей Hepes, гепарин, гентамицин, снова забирают 0,980 мл разбавленной крови и помещают ее в другой стерильный флакон, содержащий 0,020 мл физиологического раствора.From the same vial containing the patient’s blood and DMEM / F12 culture medium containing Hepes, heparin, gentamicin, 0.980 ml of diluted blood is taken again and placed in another sterile vial containing 0.020 ml of physiological saline.
Содержимое флаконов аккуратно перемешивают и помещают в термостат при 37°С на 24 часа. В течение первого часа инкубации содержимое флаконов аккуратно перемешивают 1 раз.The contents of the vials are gently mixed and placed in a thermostat at 37 ° C for 24 hours. During the first hour of incubation, the contents of the vials are gently mixed 1 time.
После инкубации путем центрифугирования при 3000 об/мин в течение 10 минут осаждают клетки крови и отбирают супернатанты из пробы крови, инкубированной с Композицией (продукция цитокинов под влиянием Композиции), и из пробы крови, инкубированной без Композиции (спонтанная продукция цитокинов), в которых с помощью твердофазного иммуноферментного анализа определяют концентрации цитокинов IL-6, TNF-α и G-CSF (в пг/мл).After incubation by centrifugation at 3000 rpm for 10 minutes, blood cells are precipitated and supernatants are taken from a blood sample incubated with the Composition (production of cytokines under the influence of the Composition) and from a blood sample incubated without the Composition (spontaneous production of cytokines), in which using enzyme-linked immunosorbent assay determine the concentration of cytokines IL-6, TNF-α and G-CSF (in PG / ml).
Индекс влияния Композиции на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF иммунокомпетентными клетками крови вычисляют по формуле: ИВКСЦ=(AIL-6+ATNF-α+AG-CSF): (БIL-6+БTNF-α+БG-CSF), где AIL-6, ATNF-α, AG-CSF - концентрации (пг/мл) IL-6, TNF-α и G-CSF в пробе с Композицией, БIL-6, БTNF-α, БG-CSF - концентрации IL-6, TNF-α и G-CSF в пробе без Композиции. При величине ИВКСЦ, равной или превышающей 700, прогнозируют повышение относительного содержания высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы данного пациента под влиянием Композиции.The effect index of the Composition on the total production of IL-6, TNF-α and G-CSF by immunocompetent blood cells is calculated by the formula: CPI SC = (A IL-6 + A TNF-α + A G-CSF ): (B IL-6 + B TNF-α + B G-CSF ), where A IL-6 , A TNF-α , A G-CSF are the concentrations (pg / ml) of IL-6, TNF-α and G-CSF in the sample with Composition B IL-6 , B TNF-α , B G-CSF - concentrations of IL-6, TNF-α and G-CSF in the sample without Composition. When the value of the CPI SC equal to or exceeding 700, an increase in the relative content of highly differentiated cells in the mammary adenocarcinoma of this patient is predicted to increase under the influence of the Composition.
Обоснование изобретенияJustification of the invention
Изучение влияния Композиции на дифференцировку опухолевых клеток в биоптатах аденокарциномы молочной железыStudy of the effect of the Composition on the differentiation of tumor cells in biopsy samples of breast adenocarcinoma
В качестве объекта для изучения влияния Композиции на дифференцировку опухолевых клеток служили биоптаты опухолей 45 женщин в возрасте от 43 до 75 лет с инвазивным протоковым раком, являющимся по гистологическому типу аденокарциномой II и III степени злокачественности.As an object for studying the effect of the Composition on the differentiation of tumor cells, tumor biopsy samples of 45 women aged 43 to 75 years with invasive ductal carcinoma, which is a histological type of adenocarcinoma of the II and III degree of malignancy, were used.
Биоптаты были получены методом витальной трепанобиопсии во время предоперационного клинико-лабораторного обследования пациентов.Biopsies were obtained by vital trepanobiopsy during a preoperative clinical and laboratory examination of patients.
Биоптаты каждой больной объемом 8 мм3 помещали в 2 стеклянных флакона.Biopsies of each patient with a volume of 8 mm 3 were placed in 2 glass vials.
Флакон №1 (тест-контроль) содержал: 1 мл стерильной питательной среды DMEM/F12, Hepes (15 mM), гепарин (2,5 ЕД/мл), гентамицин (100 мкг/мл), L-глютамин (0,6 мг/мл) и биоптат аденокарциномы молочной железы одной больной объемом 8 мм3.Bottle No. 1 (test control) contained: 1 ml of sterile growth medium DMEM / F12, Hepes (15 mM), heparin (2.5 U / ml), gentamicin (100 μg / ml), L-glutamine (0.6 mg / ml) and a biopsy of adenocarcinoma of the mammary gland of one patient with a volume of 8 mm 3 .
Флакон №2 (тест на стимуляцию дифференцировки опухолевых клеток Композицией) содержал: 1 мл стерильной питательной среды DMEM/F12, Hepes (15 mM), гепарин (2,5 ЕД/мл), гентамицин (100 мкг/мл), L-глютамин (0,6 мг/мл), биоптат аденокарциномы молочной железы той же больной объемом 8 мм3 и Композицию, включающую фитогемагглютинин Р (РНА-Р), фитогемагглютинин М (РНА-М), конканавалин А (COnA), липополисахарид LPS (Lipopolysaccharide Escherichia coli), взятые в соотношении (мас. ч.) 1:1:2:1 соответственно. В описываемом исследовании использовались следующие концентрации компонентов Композиции в конечном разведении: фитогемагглютинин Р - 2 мкг/мл, фитогемагглютинин М - 2 мкг/мл, конканавалин А - 4 мкг/мл, липополисахарид (Lipopolysaccharide from Escherichia coli) - 2 мкг/мл.Bottle No. 2 (test for stimulating the differentiation of tumor cells by the Composition) contained: 1 ml of sterile growth medium DMEM / F12, Hepes (15 mM), heparin (2.5 U / ml), gentamicin (100 μg / ml), L-glutamine (0.6 mg / ml), biopsy sample of breast adenocarcinoma of the same patient with a volume of 8 mm 3 and a composition comprising phytohemagglutinin P (PHA-P), phytohemagglutinin M (PHA-M), concanavalin A (COnA), lipopolysaccharide LPS (Lipopolysaccharide Escherichia coli), taken in the ratio (wt.h.) 1: 1: 2: 1, respectively. In the described study, the following concentrations of the components of the Composition were used in the final dilution: phytohemagglutinin P - 2 μg / ml, phytohemagglutinin M - 2 μg / ml, concanavalin A - 4 μg / ml, lipopolysaccharide (Lipopolysaccharide from Escherichia coli) - 2 μg / ml.
После инкубирования при 37°С в течение 72 ч биоптаты аденокарцином молочной железы извлекали из флаконов и фиксировали в After incubation at 37 ° C for 72 h, the biopsy samples of mammary adenocarcinomas were removed from the vials and fixed in
растворе 10% нейтрального формалина для дальнейшего патогистологического исследования.a solution of 10% neutral formalin for further histopathological studies.
Патогистологическое исследование проводилось на препаратах аденокарциномы молочной железы, окрашенных по стандартной методике гематоксилином и эозином. В опухолевой ткани подсчитывали относительно содержание (%) клеток различной степени дифференцировки: высокодифференцированных (ВД), умереннодифференцированных (УД) и низкодифференцированных (НД). Для этого с помощью морфометрической сетки с 121 рабочими точками-узлами, вставленной в окуляр микроскопа, при увеличении 20×1,5×10=300х определяли количество точек, попавших на высоко-, умеренно- и низкодифференцированные опухолевые клетки. В каждом препарате подсчитывали клетки в 10 полях зрения и для Каждой категории клеток подсчитывали среднее арифметическое значение, выраженное в процентах (Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. - М.: Медицина, 1990. - 381 с.).A histopathological study was performed on preparations of adenocarcinoma of the mammary gland stained with the standard technique of hematoxylin and eosin. In tumor tissue, the content (%) of cells of different degrees of differentiation was calculated relative to: highly differentiated (VD), moderately differentiated (UD) and low differentiated (ND). To do this, using a morphometric grid with 121 working points-nodes inserted into the eyepiece of the microscope, at a magnification of 20 × 1.5 × 10 = 300x, the number of points that fell on highly, moderately, and low-differentiated tumor cells was determined. In each preparation, cells were counted in 10 fields of view and for each category of cells the arithmetic mean value expressed as a percentage was calculated (G. Avtandilov. Medical morphometry. - M .: Medicine, 1990. - 381 p.).
При оценке принадлежности опухолевых клеток к ВД, УД или НД учитывали степень выраженности клеточного полиморфизма, ядерно-цитоплазматическое соотношение, наличие митозов, в том числе патологических, способность к структурообразованию (формированию желез), сохранение функций клеток (слизеобразование). ВД клетки характеризовались приближенной к нормальным клеткам формой, преобладанием цитоплазмы над ядром, способностью строить железы и продуцировать слизь. НД клетки характеризовались неправильной формой, выраженным полиморфизмом, преобладанием ядра над цитоплазмой, отсутствием способности к формированию структур, диффузным ростом, наличием большого количества митозов, в том числе и патологических. УД клетки занимали промежуточное положение между ВД и НД клетками по выраженности вышеуказанных признаков.When assessing the belonging of tumor cells to VD, UD, or ND, the severity of cell polymorphism, the nuclear cytoplasmic ratio, the presence of mitoses, including pathological ones, the ability to structure formation (formation of glands), and the preservation of cell functions (mucus formation) were taken into account. VD cells were characterized by a shape close to normal cells, the prevalence of the cytoplasm over the nucleus, and the ability to build glands and produce mucus. ND cells were characterized by an irregular shape, expressed polymorphism, the predominance of the nucleus over the cytoplasm, the lack of the ability to form structures, diffuse growth, the presence of a large number of mitoses, including pathological ones. UD cells occupied an intermediate position between VD and ND cells in the severity of the above signs.
Индекс повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток (ИПВД) в биоптатах молочной железы для каждого пациента вычисляли по формуле: ИПВД=(ВД:НД)К/(ВД:НД)БК (где (ВД:НД)К - отношение среднего значения (по 10 полям зрения) доли высокодифференцированных клеток (%) к среднему значению доли низкодифференцированных клеток (%) в биоптате аденокарциномы молочной железы после стимуляции Композицией, (ВД:НД)БК - отношение среднего значения доли высокодифференцированных клеток (%) к среднему значению доли низкодифференцированных клеток (%) в биоптате аденокарциномы молочной железы без стимуляции Композицией.The index for increasing the content of highly differentiated tumor cells (IPVD) in breast biopsy samples for each patient was calculated by the formula: IPVD = (VD: ND) K / (VD: ND) BK (where (VD: ND) K is the ratio of the average value (10 field of view) the fraction of highly differentiated cells (%) to the average fraction of low-grade cells (%) in the biopsy of adenocarcinoma of the mammary gland after stimulation by the Composition, (VD: ND) BC - the ratio of the average fraction of highly differentiated cells (%) to the average fraction of low-differentiated cells approx (%) in the biopsy of adenocarcinoma of the mammary gland without stimulation by the Composition.
Определение ИПВД у больных с опухолью молочной железы показало, что из 45 пациентов с инвазивным протоковым раком ИПВД с величиной 1,1 и более (вариабельность 1,1-5,0) (ИПВД≥1,1 свидетельствует о стимуляции дифференцировки и повышении относительного содержания высокодифференцированных клеток в биоптате аденокарциномы молочной железы под влиянием Композиции) отмечался у 20 человек (44,4%), а с величиной менее 1,1-25 человек (55,6%).The determination of IPVD in patients with a breast tumor showed that out of 45 patients with invasive ductal carcinoma, IPVD with a value of 1.1 or more (variability 1.1-5.0) (IPVD≥1.1 indicates differentiation stimulation and an increase in the relative content highly differentiated cells in the biopsy of mammary adenocarcinoma under the influence of the Composition) was observed in 20 people (44.4%), and with a value of less than 1.1-25 people (55.6%).
В группе пациентов с показателем ИПВД 1,1 и более различия между количеством высокодифференцированных опухолевых клеток в биоптатах аденокарциномы молочной железы без стимуляции дифференцировки Композицией и количеством высокодифференцированных опухолевых клеток в биоптатах после стимуляции их Композицией оказались статистически значимы (р=0,004) при оценке с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни.In the group of patients with IPVD of 1.1 or more, the differences between the number of highly differentiated tumor cells in the biopsies of breast adenocarcinoma without stimulation of differentiation by the Composition and the number of highly differentiated tumor cells in the biopsy samples after stimulation by their Composition were statistically significant (p = 0.004) when evaluated using a nonparametric Mann-Whitney test.
Изучение влияния Композиции на продукцию цитокинов иммунокомпетентными клетками крови пациентов и связи между повышением содержания высокодифференцированных клеток в опухоли и показателями кровиStudy of the effect of the Composition on the production of cytokines by immunocompetent blood cells of patients and the relationship between the increase in the content of highly differentiated cells in the tumor and blood counts
Для того, чтобы разработать способ прогнозирования эффективности применения Композиции для повышения относительного содержания высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы In order to develop a method for predicting the effectiveness of the use of the Composition to increase the relative content of highly differentiated cells in breast adenocarcinoma
того или иного больного, не используя биоптаты и трепанобиопсию, а по показателям его крови (показателям продукции различных цитокинов иммунокомпетентными клетками крови), параллельно изучению влияния Композиции на дифференцировку опухолевых клеток в биоптатах исследовали кровь вышеуказанных 45 пациентов.this or that patient, not using biopsy and trepanobiopsy, but according to his blood parameters (indicators of the production of various cytokines by immunocompetent blood cells), in parallel with studying the effect of the Composition on tumor cell differentiation in biopsies, the blood of the above 45 patients was examined.
Аналогично тому, как в разделе «Способ…. осуществляют следующим образом» описано определение концентрации цитокинов IL-6, TNF-α и G-CSF в супернатанте пробы крови пациента после инкубации их с Композицией и без нее, определяли концентрации цитокинов IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, IL-18, IL-1b, IL-1Ra, TNF-α, IFN-γ, G-CSF, GM-CSF, VEGF-A в супернатантах проб крови пациента после инкубации их с Композицией и без нее.Same as in the section "Method .... carry out as follows "describes the determination of the concentration of cytokines IL-6, TNF-α and G-CSF in the supernatant of a patient’s blood sample after incubation with and without the Composition, the concentrations of cytokines IL-2, IL-6, IL-8, IL- were determined 10, IL-17, IL-18, IL-1b, IL-1Ra, TNF-α, IFN-γ, G-CSF, GM-CSF, VEGF-A in the supernatants of patient blood samples after incubation with and without the Composition .
После этого для каждого цитокина вычисляли индекс влияния Композиции (ИВКЦ) на продукцию данного цитокина иммунокомпетентными клетками крови по формуле: ИВКЦ=АЦ: БЦ, где АЦ - концентрация (пг/мл) цитокина в супернатанте пробы крови пациента, инкубированных с Композицией, а БЦ - концентрация (пг/мл) цитокина в супернатанте пробы крови пациента, инкубированных без Композиции.After that, for each cytokine, the effect index of the Composition (CPI C ) on the production of this cytokine by immunocompetent blood cells was calculated according to the formula: CPI C = A C : B C , where A C is the concentration (pg / ml) of the cytokine in the supernatant of the patient’s blood sample, incubated with the Composition, and B C is the concentration (pg / ml) of the cytokine in the supernatant of a patient’s blood sample incubated without the Composition.
Из таблицы 1 видно, что с величинами ИПВД опухоли коррелировали величины ИВКЦ крови только трех цитокинов: IL-6, G-CSF и VEGF-A.Table 1 shows that with the quantities IPVD tumor correlated VCI value C blood only three cytokines: IL-6, G-CSF and VEGF-A.
Примечание. ИВКЦ - индекс влияния Композиции на продукцию исследуемого цитокина в пробе крови пациента; ИПВД - индекс повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток в биоптате молочной железы того же пациента.Note. CPI C - index of the effect of the Composition on the production of the studied cytokine in the patient's blood sample; IPVD is an index of increasing the content of highly differentiated tumor cells in a breast biopsy of the same patient.
При помощи корреляционного анализа было установлено, что индекс влияния Композиции на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF (ИВКСЦ) иммунокомпектентными клетками крови имеет более значительную корреляционную связь с показателем ИПВД опухоли, чем показатели ИВКЦ каждого отдельного цитокина (IL-6, TNF-α или G-CSF): r=0,42, р=0,003. Суммарный индекс по трем цитокинам ИВКСЦ определяют по формуле: ИВКСЦ=(AIL-6+ATNF-α+AG-CSF): (БIL-6+БTNF-α+БG-CSF), где AIL-6, ATNF-α, AG-CSF - концентрации (пг/мл) IL-6, TNF-α и G-CSF в пробе с Композицией, БIL-6, БTNF-α, БG-CSF - концентрации IL-6, TNF-α и G-CSF в пробе без Композиции.By means of correlation analysis, it was found that the index of the influence compositions on total production IL-6, TNF-α and G-CSF (CPI SO) immunokompektentnymi blood cells has a significant correlation with the indicator IPVD tumor than indices VCI U each cytokine ( IL-6, TNF-α or G-CSF): r = 0.42, p = 0.003. The total index for the three cytokines of CPI SC is determined by the formula: CPI CC = (A IL-6 + A TNF-α + A G-CSF ): (B IL-6 + B TNF-α + B G-CSF ), where A IL-6 , A TNF-α , A G-CSF — concentrations (pg / ml) of IL-6, TNF-α and G-CSF in a sample with Composition B IL-6 , B TNF-α , B G-CSF - concentrations of IL-6, TNF-α and G-CSF in the sample without Composition.
При сопоставлении величин ИПВД (индекс повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток в биоптатах опухоли молочной железы) и ИВКСЦ (индекс влияния Композиции на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF иммунокомпетентными клетками крови), полученных для каждого пациента, оказалось, что у всех пациентов с ИПВД равном или превышающем 1,1, т.е. у всех пациентов, у которых имело место повышение в биоптате опухоли относительного содержания высокодифференцированных клеток под влиянием Композиции, ИВКСЦ был равным или превышал 700 (табл. 2).When comparing the values of IPVD (an index of increasing the content of highly differentiated tumor cells in breast tumor biopsy samples) and CPI SC (index of the effect of the Composition on the total production of IL-6, TNF-α and G-CSF by immunocompetent blood cells) obtained for each patient, it turned out that in all patients with IPVD equal to or greater than 1.1, i.e. in all patients in whom there was an increase in the tumor biopsy of the relative content of highly differentiated cells under the influence of the Composition, the CPI of the SC was equal to or exceeded 700 (Table 2).
Из таблицы 2 видно, что у всех пациентов (100%), у который ИВКСЦ был равным или превышал 700, наблюдалось повышение относительного содержания высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы, т.е. ИПВД был равным или превышал 1,1.Table 2 shows that in all patients (100%), in which the CPI of the SC was equal to or exceeded 700, an increase in the relative content of highly differentiated cells in mammary adenocarcinoma was observed, i.e. IPVD was equal to or exceeded 1.1.
При этом было установлено, что в группе пациентов с показателем ИПВД 1,1 и более различия между количеством высокодифференцированных опухолевых клеток без стимуляции Композицией и количеством высокодифференцированных опухолевых клеток после стимуляции Композицией были статистически значимы (р=0,004) при оценке с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни.At the same time, it was found that in the group of patients with an IPVD of 1.1 or more, the differences between the number of highly differentiated tumor cells without stimulation by the Composition and the number of highly differentiated tumor cells after stimulation by the Composition were statistically significant (p = 0.004) when evaluated using the non-parametric Mann test Whitney.
Описанные выше результаты позволили заключить, что у пациента с величиной ИВКСЦ, равной или превышающей 700, будет иметь место повышение дифференцировки опухолевых клеток в аденокарциноме подвлиянием Композиции.The results described above allowed us to conclude that in a patient with a CPI value of SC equal to or greater than 700, there will be an increase in the differentiation of tumor cells in adenocarcinoma by the influence of the Composition.
Полученные результаты позволяют перейти от показателя ИПВД (индекса повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток), полученного при исследовании биоптатов аденокарциномы молочной железы, к показателю ИВКСЦ (индекс влияния Композиции на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF), полученному малоинвазивным методом (осуществляется только забор 1 мл крови).The results obtained make it possible to switch from the IPVD index (an index of an increase in the content of highly differentiated tumor cells) obtained in the study of breast adenocarcinoma biopsy samples to the CPI SC (index of the effect of the Composition on the total production of IL-6, TNF-α and G-CSF) obtained by minimally invasive method (only 1 ml of blood is taken).
Предлагаемый способ даст возможность выделить группу пациентов с аденокарциномой молочной железы, у которых применение Композиции повысит относительное содержание высокодифференцированных опухолевых клеток в аденокарциноме молочной железы, что приведет к снижению степени злокачественности опухоли.The proposed method will make it possible to distinguish a group of patients with breast adenocarcinoma in which the use of the Composition will increase the relative content of highly differentiated tumor cells in breast adenocarcinoma, which will lead to a decrease in the degree of tumor malignancy.
Для получения числового выражения клинической значимости и эффективности предлагаемого способа использовали ROC-анализ с определением показателя AUC (AreaUnderCurve), который рассчитывали при помощи метода трапеций. О качестве способа судили по экспертной шкале для значений AUC, согласно которой значение AUC, равное 0,9-1,0 свидетельствует об отличном качестве модели, 0,8-0,9 - об очень хорошем качестве модели, 0,7-0,8 - о хорошем качестве модели, 0,6-0,7 - среднем качестве модели, 0,5-0,6 - неудовлетворительном качестве.To obtain a numerical expression of the clinical significance and effectiveness of the proposed method, we used ROC analysis with the determination of the AUC indicator (AreaUnderCurve), which was calculated using the trapezoid method. The quality of the method was judged by an expert scale for AUC values, according to which an AUC value of 0.9-1.0 indicates excellent model quality, 0.8-0.9 - very good model quality, 0.7-0, 8 - about the good quality of the model, 0.6-0.7 - the average quality of the model, 0.5-0.6 - unsatisfactory quality.
В результате ROC-анализа величин индекса повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток (ИПВД) в биоптате молочной железы в группе пациентов, у которых величина индекса влияния Композиции (ИВКСЦ) на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF иммунокомпетентными клетками крови составляла 700 и более, было получено значение AUC равное 1,0 (фиг. 1). Это указывает на отличное качество предложенного способа для оценки эффективности прогнозирования при величине ИВКСЦ у пациента равной 700 и более.As a result of the ROC analysis of the values of the index of the increase in the content of highly differentiated tumor cells (IPVD) in the breast biopsy in a group of patients in whom the value of the influence of the Composition (CPI SC ) on the total production of IL-6, TNF-α and G-CSF by immunocompetent blood cells was 700 or more, an AUC value of 1.0 was obtained (FIG. 1). This indicates the excellent quality of the proposed method for evaluating the effectiveness of forecasting with a CPI SC value of 700 for a patient or more.
В результате ROC-анализа величин индекса повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток (ИПВД) в биоптате молочной железы в группе пациентов, у которых величина индекса влияния As a result of the ROC analysis of the index values for the increase in the content of highly differentiated tumor cells (IPVD) in the breast biopsy specimen in the group of patients with the influence index
Композиции (ИВКСЦ) на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF иммунокомпетентными клетками крови находилась в пределах 300-699, было получено значение AUC: 0,667 (фиг. 2). Это указывает на среднее качество модели для оценки эффективности прогнозирования, если значения ИВКСЦ будут находиться в интервале 300-699.Compositions (CPI SC ) for the total production of IL-6, TNF-α and G-CSF by immunocompetent blood cells were in the range of 300-699, and AUC value of 0.667 was obtained (Fig. 2). This indicates the average quality of the model for assessing the effectiveness of forecasting if the CPI values of the SC are in the range of 300-699.
В результате ROC-анализа величин индекса повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток (ИПВД) в биоптате молочной железы в группе пациентов, у которых величина индекса влияния Композиции (ИВКСЦ) на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF иммунокомпетентными клетками крови находилась в пределах 15-299, было получено значение AUC: 0,536 (фиг. 3). Это указывает на неудовлетворительное качество модели для оценки эффективности прогнозирования, если значения ИВКСЦ будут находиться в интервале 15-299.As a result of the ROC analysis of the values of the index of the increase in the content of highly differentiated tumor cells (IPVD) in the breast biopsy in a group of patients in whom the value of the influence of the Composition (CPI SC ) on the total production of IL-6, TNF-α and G-CSF by immunocompetent blood cells was in the range of 15-299, an AUC value of 0.536 was obtained (FIG. 3). This indicates the unsatisfactory quality of the model for assessing the effectiveness of forecasting if the values of the CPI of the SC are in the range 15-299.
Таким образом, предлагаемый способ прогнозирования эффективности применения Композиции для повышения относительного содержания высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы у пациентов с инвазивным протоковым раком при величине индекса влияния Композиции (ИВКСЦ) на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF иммунокомпетентными клетками крови, равном 700 и более, показал отличное качество (AUC=1,0).Thus, the proposed method for predicting the effectiveness of the use of the Composition to increase the relative content of highly differentiated cells in breast adenocarcinoma in patients with invasive ductal carcinoma with a value of the influence index of the Composition (CPI SC ) on the total production of IL-6, TNF-α and G-CSF by immunocompetent cells blood, equal to 700 or more, showed excellent quality (AUC = 1.0).
Клинические примерыClinical examples
1. Больная Ш-ва, 75 лет, диагноз - инвазивный протоковый рак молочной железы.1. Patient Sh-va, 75 years old, diagnosed with invasive ductal breast cancer.
Величина индекса влияния Композиции (ИВКСЦ) на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF иммунокомпетентными клетками периферической крови составила 848,1.The value of the influence index of the Composition (CPI SC ) on the total production of IL-6, TNF-α and G-CSF by immunocompetent peripheral blood cells was 848.1.
Заключение - применение вышеописанной Композиции повысит относительное содержание высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы данной больной.Conclusion - the use of the above Composition will increase the relative content of highly differentiated cells in the adenocarcinoma of the mammary gland of this patient.
При исследовании биоптата данной пациентки величина ИПВД составила 5,00. Прогноз оказался правильным.When examining the biopsy of this patient, the IPVD value was 5.00. The forecast turned out to be correct.
2. Больная Г-р, 68 лет, диагноз - инвазивный протоковый рак молочной железы.2. Patient Mr., 68 years old, diagnosed with invasive ductal breast cancer.
Величина индекса влияния Композиции (ИВКСЦ) на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF иммунокомпетентными клетками периферической крови составила 726,9.The value of the Composition Influence Index (CPI SC ) on the total production of IL-6, TNF-α and G-CSF by immunocompetent peripheral blood cells was 726.9.
Заключение - применение вышеописанной Композиции повысит относительное содержание высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы данной больной.Conclusion - the use of the above Composition will increase the relative content of highly differentiated cells in the adenocarcinoma of the mammary gland of this patient.
При исследовании биоптата данной пациентки величина ИПВД составила 1,63. Прогноз оказался правильным.When examining the biopsy of this patient, the IPVD value was 1.63. The forecast turned out to be correct.
3. Больная П-о, 75 лет, диагноз - инвазивный протоковый рак молочной железы.3. Patient P-o, 75 years old, diagnosed with invasive ductal breast cancer.
Величина индекса влияния Композиции (ИВКСЦ) на суммарную продукцию IL-6, TNF-α и G-CSF иммунокомпетентными клетками периферической крови составила 48,2.The value of the index of the influence of the Composition (CPI SC ) on the total production of IL-6, TNF-α and G-CSF by immunocompetent peripheral blood cells was 48.2.
Заключение - применение вышеописанной Композиции не повысит относительное содержание высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы данной больной.Conclusion - the use of the above Composition will not increase the relative content of highly differentiated cells in the adenocarcinoma of the mammary gland of this patient.
При исследовании биоптата данной пациентки величина ИПВД составила 0,78. Прогноз оказался правильным. пациентов повышение содержания высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы.When examining the biopsy of this patient, the IPVD value was 0.78. The forecast turned out to be correct. patients increased content of highly differentiated cells in mammary adenocarcinoma.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018130033A RU2705398C1 (en) | 2018-08-17 | 2018-08-17 | Method for prediction of the effectiveness of the agent for increasing the high-differentiated cells in mammary adenocarcinoma and the composition for its implementation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018130033A RU2705398C1 (en) | 2018-08-17 | 2018-08-17 | Method for prediction of the effectiveness of the agent for increasing the high-differentiated cells in mammary adenocarcinoma and the composition for its implementation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2705398C1 true RU2705398C1 (en) | 2019-11-07 |
Family
ID=68500767
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018130033A RU2705398C1 (en) | 2018-08-17 | 2018-08-17 | Method for prediction of the effectiveness of the agent for increasing the high-differentiated cells in mammary adenocarcinoma and the composition for its implementation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2705398C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011003905A1 (en) * | 2009-07-10 | 2011-01-13 | Transgene Sa | Biomarker for selecting patients and related methods |
| RU2469651C2 (en) * | 2011-03-16 | 2012-12-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГБУ РНИОИ Минздравсоцразвития России) | Method for prediction of effectiveness of neoadjuvant chemotherapy in breast cancer patients |
-
2018
- 2018-08-17 RU RU2018130033A patent/RU2705398C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011003905A1 (en) * | 2009-07-10 | 2011-01-13 | Transgene Sa | Biomarker for selecting patients and related methods |
| RU2469651C2 (en) * | 2011-03-16 | 2012-12-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГБУ РНИОИ Минздравсоцразвития России) | Method for prediction of effectiveness of neoadjuvant chemotherapy in breast cancer patients |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| BACUS S.S. et al. Differentiation of cultured human breast cancer cells (AU-565 and MCF-7) associated with loss of cell surface HER-2/neu antigen // Mol. Carcinog. - 1990. - 3. - P. 350-362. * |
| АРХИПОВ С.А. и др. Цитокинпродуцирующий резерв иммунокомпетентных клеток крови и инвазивного протокового рака молочной железы, его взаимосвязь с патогистологическими и иммуногистохимическими параметрами злокачественного новообразования // Медицинская иммунология. - 2016. - Т.18. - N5. - С. 459-468. * |
| КУНЦ Т.А. и др. Cравнительная оценка продукции цитокинов иммунокомпетентными клетками крови и опухоли в различных возрастных группах больных инвазивным протоковым раком молочной железы // Медицинская иммунология. - 2017. - Т.19. - N5. - С. 567-576. * |
| КУНЦ Т.А. и др. Cравнительная оценка продукции цитокинов иммунокомпетентными клетками крови и опухоли в различных возрастных группах больных инвазивным протоковым раком молочной железы // Медицинская иммунология. - 2017. - Т.19. - N5. - С. 567-576. АРХИПОВ С.А. и др. Цитокинпродуцирующий резерв иммунокомпетентных клеток крови и инвазивного протокового рака молочной железы, его взаимосвязь с патогистологическими и иммуногистохимическими параметрами злокачественного новообразования // Медицинская иммунология. - 2016. - Т.18. - N5. - С. 459-468. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wang et al. | Mast cells expressing interleukin 17 in the muscularis propria predict a favorable prognosis in esophageal squamous cell carcinoma | |
| Damsgaard et al. | Mast cells and atopic dermatitis. Stereological quantification of mast cells in atopic dermatitis and normal human skin | |
| Moubayed et al. | Psoriasin (S100A7) is significantly up-regulated in human epithelial skin tumours | |
| Hoppe et al. | Oral pathogens change proliferation properties of oral tumor cells by affecting gene expression of human defensins | |
| Song et al. | NLRP3 is expressed in human dental pulp cells and tissues | |
| Yellapa et al. | Association of interleukin 16 with the development of ovarian tumor and tumor-associated neoangiogenesis in laying hen model of spontaneous ovarian cancer | |
| Ngernyuang et al. | Chitinase 3 like 1 is associated with tumor angiogenesis in cervical cancer | |
| Oliveira et al. | Toll-like receptors (TLR) 2 and 4 expression of keratinocytes from patients with localized and disseminated dermatophytosis | |
| Lekander et al. | Social support and immune status during and after chemotherapy for breast cancer | |
| Fraga et al. | Immunohistochemical profile of HIF-1α, VEGF-A, VEGFR2 and MMP9 proteins in tegumentary leishmaniasis | |
| Alsaegh et al. | p63 expression and its relation to epithelial cells proliferation in dentigerous cyst, odontogenic keratocyst, and ameloblastoma | |
| Hou et al. | Autophagy in fibroblasts induced by cigarette smoke extract promotes invasion in lung cancer cells | |
| Wang et al. | Exosomes play an important role in the progression of plasma cell mastitis via the PI3K-Akt-mTOR signaling pathway | |
| RU2705398C1 (en) | Method for prediction of the effectiveness of the agent for increasing the high-differentiated cells in mammary adenocarcinoma and the composition for its implementation | |
| Chuang et al. | 2, 4-dimethoxy-6-methylbenzene-1, 3-diol, a benzenoid from Antrodia cinnamomea, Mitigates Psoriasiform inflammation by suppressing MAPK/NF-κB phosphorylation and GDAP1L1/Drp1 translocation | |
| Srivastava et al. | Dendritic cells sub-sets are associated with inflammatory cytokine production in progressive vitiligo disease | |
| Abbas et al. | Fat grafts augmented with vitamin E improve volume retention and radiation-induced fibrosis | |
| CN112138146A (en) | Application of MANF protein | |
| KR20140092798A (en) | Biomarker composition for predicting progress from colorectal adenoma to carcinoma of human patients and biokit for dyagnosis thereof comprising the same | |
| Kim et al. | Expression of Bcl‐2 in olfactory neuroblastoma and its association with chemotherapy and survival | |
| Li et al. | Effect of procyanidins from Pinus koraiensis bark on growth inhibition and expression of PCNA and TNF-[alpha][alpha] in mice with U14 cervical cancer | |
| RU2526796C2 (en) | Method for prediction of clinical effectiveness of patients with non-hodgkin lymphomas with bone marrow involvement | |
| YEŞİL ÇINKIR et al. | The Prognostic Effects of Temporal Muscle Thickness and Inflammatory-Nutritional Parameters on Survival in Lung Cancer Patients with Brain Metastasis. | |
| Kobayashi et al. | Biological behavior of human dental pulp cells in response to carious stimuli analyzed by PCNA immunostaining and AgNOR staining | |
| Niu et al. | Expression of P16 protein and Bcl-2 protein in malignant eyelid tumors |