RU2699798C1 - Method for detecting blood clotting factor deficiency by thromboelastometry - Google Patents

Method for detecting blood clotting factor deficiency by thromboelastometry Download PDF

Info

Publication number
RU2699798C1
RU2699798C1 RU2019115780A RU2019115780A RU2699798C1 RU 2699798 C1 RU2699798 C1 RU 2699798C1 RU 2019115780 A RU2019115780 A RU 2019115780A RU 2019115780 A RU2019115780 A RU 2019115780A RU 2699798 C1 RU2699798 C1 RU 2699798C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
plasma
deficiency
test
blood
intem
Prior art date
Application number
RU2019115780A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Олеся Алексеевна Полеводова
Геннадий Мартинович Галстян
Антонина Евгеньевна Щекина
Елена Владимировна Яковлева
Валерий Григорьевич Савченко
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр гематологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ гематологии" Минздрава России)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр гематологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ гематологии" Минздрава России) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр гематологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ гематологии" Минздрава России)
Priority to RU2019115780A priority Critical patent/RU2699798C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2699798C1 publication Critical patent/RU2699798C1/en

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely to diagnosing hemostasis disorders with detecting deficiency of individual coagulation factors. That is ensured by analyzing whole citrated blood by rotary thromboelastometry (ROTHEM). In case of elongation of the parameter characterizing the beginning of clot formation (CT), additional analyzes are performed. For this purpose two samples are prepared: with the addition of standard plasma to the whole citrated blood and with addition of plasma deficient by the investigated factor of coagulation in ratio 2:1. If CT parameter is normalized in EXTEM and / or INTEM tests in samples with standard plasma and retention of elongated CT parameter in samples with plasma deficient as per the analyzed factor of coagulation, deficiency of any factor of blood coagulation is diagnosed.
EFFECT: invention provides rapid determination of blood coagulation factor deficiency as a cause of hypocoagulation.
1 cl, 16 dwg, 2 tbl, 9 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике нарушений гемостаза, вызванных дефицитом факторов свертывания крови.The invention relates to medicine, namely to the diagnosis of hemostatic disorders caused by a deficiency of blood coagulation factors.

В настоящее время известны различные методы диагностики нарушений гемостаза, вызванных дефицитом факторов свертывания крови (наследственные коагулопатии). Материалом для коагулогических исследований является плазма, содержащая факторы свертывания. Выявление изменений в основных клоттинговых тестах, таких как активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время (ПВ) и других, позволяет заподозрить дефицит различных факторов свертывания крови:Currently, various methods are known for diagnosing hemostasis disorders caused by deficiency of blood coagulation factors (hereditary coagulopathies). The material for coagulological research is a plasma containing coagulation factors. Identification of changes in the main clotting tests, such as activated partial thromboplastin time (APTT), prothrombin time (PV) and others, allows us to suspect a deficiency of various blood coagulation factors:

1. Изолированное удлинение ПВ при нормальных значениях АЧТВ свойственно дефициту фактора VII (FVII).1. An isolated extension of PV at normal APTT values is characteristic of factor VII (FVII) deficiency.

2. Удлинение АЧТВ при нормальных значениях ПВ наблюдается только при дефиците фактора свертывания VIII (FVIII), FIX, FXI, FXII;2. Elongation of APTT at normal values of PV is observed only with a deficiency of coagulation factor VIII (FVIII), FIX, FXI, FXII;

3. Удлинение АЧТВ и ПВ при плазменной концентрации фибриногена более 1 г/л наблюдается при дефиците FV (очень редко FII и FX).3. Elongation of APTT and PV with a plasma fibrinogen concentration of more than 1 g / l is observed with FV deficiency (very rarely FII and FX).

При обнаружении патологических значений АЧТВ и/или ПВ должна проводиться дальнейшая дифференциальная диагностика нарушений гемостаза. Установить точно, активность какого из факторов свертывания снижена в крови больного, позволяет лишь дополнительное обследование. Для этого используются тесты количественного определения факторов свертывания в плазме (З.С. Баркаган, А.П. Момот. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. Москва: НЬЮДИАМЕД, 3е изд, 2008). Возможен дефицит различных факторов свертывания.If pathological values of APTT and / or PV are detected, further differential diagnosis of hemostasis disorders should be carried out. To establish exactly the activity of which of the coagulation factors is reduced in the patient’s blood, only an additional examination allows. For this, tests for the quantitative determination of coagulation factors in plasma are used (ZS Barkagan, AP Momot. Diagnosis and controlled therapy of hemostatic disorders. Moscow: NYUDIAMED, 3rd ed., 2008). There may be a deficiency of various coagulation factors.

Дефицит FVII проявляется геморрагическим синдромом. FVII или проконвертин - прокоагулянт, участвующий в свертывании крови по внешнему пути и активирующий FIX и FXI, входящие во внутренний путь свертывания. Заболевание, возникающее вследствие дефекта синтеза или молекулярных аномалий FVII, называется гипопроконвертинемией, распространенность составляет 1 случай на 500000 населения (Н.И. Зозуля, П.В. Свирин. Диагностика и лечение гемофилии. Национальные клинические рекомендации. Москва: Национальное гематологическое общество, 2014). Спонтанные кровотечения у больных гипопроконвертинемией встречаются редко. Заболевание у мужчин часто протекает бессимптомно, у женщин проявляется обильными менометроррагями. Геморрагический синдром может проявиться при травме или хирургических вмешательствах (А.Н. Мамаев. Коагулопатии. Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2012). Диагностика гипопроконвертинемии основана на результатах определения плазменной активности FVII. Диапазон нормальных значений плазменной активности FVII составляет 70-120%. При гипопроконвертинемиии выраженность клинических проявлений слабо коррелирует с выраженностью дефицита FVII (F.H Herrmann et al. Molecular Biology and Clinical Manifestation of Hereditary Factor VII Deficiency. Seminars in Thrombosis and Hemostasis 2000, 393-400).FVII deficiency is manifested by hemorrhagic syndrome. FVII or proconvertin is a procoagulant involved in blood coagulation along the external pathway and activates FIX and FXI entering the internal coagulation pathway. The disease resulting from a synthesis defect or FVII molecular anomaly is called hypoproconvertinemia, the prevalence is 1 case per 500,000 population (N.I. Zozulya, P.V. Svirin. Diagnosis and treatment of hemophilia. National clinical guidelines. Moscow: National Hematology Society, 2014 ) Spontaneous bleeding in patients with hypoproconvertinemia is rare. The disease in men is often asymptomatic, in women it is manifested by profuse menometerorrhagia. Hemorrhagic syndrome can occur with trauma or surgical interventions (A.N. Mamaev. Coagulopathies. Moscow: GEOTAR-Media, 2012). Diagnosis of hypoproconvertinemia is based on the determination of plasma activity of FVII. The range of normal plasma activity of FVII is 70-120%. With hypoproconvertinemia, the severity of clinical manifestations weakly correlates with the severity of FVII deficiency (F.H Herrmann et al. Molecular Biology and Clinical Manifestation of Hereditary Factor VII Deficiency. Seminars in Thrombosis and Hemostasis 2000, 393-400).

Дефицит FV. Неферментный фактор свертывания FV увеличивает скорость образования тромбина из протромбина. Дефицит FV (болезнь Оврена) проявляется геморрагическим синдромом. Распространенность заболевания 1:1000000. Мужчины и женщины болеют с одинаковой частотой, тип наследования - аутосомно-рецессивный. При выраженном дефиците FV у больных обнаруживают удлинение ПВ и АЧТВ. Удлинение времени в обоих тестах связано с тем, что FV входит в состав протромбиназного комплекса общего пути свертывания, который катализирует превращение тромбина из протромбина. Диапазон нормальных значений плазменной активности FVII составляет 70-120%. Диагноз устанавливается при обнаружении уменьшения плазменной активности FV (А.Н. Мамаев. Коагулопатии. Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2012), (З.С. Баркаган, А.П. Момот. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. Москва: НЬЮДИАМЕД, 3е изд, 2008).Deficiency FV. Non-enzymatic coagulation factor FV increases the rate of thrombin formation from prothrombin. Deficiency of FV (Ovren's disease) is manifested by hemorrhagic syndrome. The prevalence of the disease is 1: 1,000,000. Men and women get sick with the same frequency, the type of inheritance is autosomal recessive. With severe FV deficiency, patients exhibit an elongation of PV and APTT. The lengthening of time in both tests is due to the fact that FV is part of the prothrombinase complex of the common coagulation pathway, which catalyzes the conversion of thrombin from prothrombin. The range of normal plasma activity of FVII is 70-120%. The diagnosis is established when a decrease in plasma activity of FV is detected (A.N. Mamaev. Coagulopathy. Moscow: GEOTAR-Media, 2012), (Z.S. Barkagan, A.P. Momot. Diagnosis and controlled therapy of hemostasis disorders. Moscow: NYUDIAMED, 3rd ed., 2008).

Дефицит FVIII называется гемофилиепй А. Гемофилия А относится к группе наследственных коагулопатий. Встречается, как правило, у лиц мужского пола, поскольку наследование заболевания сцеплено с Х-хромосомой. В Российской Федерации заболеваемость гемофилией составляет 9,1 случай на 100000 населения, всего зарегистрировано 6525 больных гемофилией А Основное проявление гемофилии - кровотечения и кровоизлияния. При гемофилии отмечается увеличение АЧТВ при сохранении других показателей в пределах нормальных значений, снижение активности FVIII в крови. Для тяжелой формы гемофилии А характерно снижение активности FVIII менее 1%, для средней степени тяжести > 1 - ≤5%, для легкой степени тяжести >5% (Н.И. Зозуля, П.В. Свирин. Диагностика и лечение гемофилии. Национальные клинические рекомендации. Москва: Национальное гематологическое общество, 2014).Deficiency of FVIII is called hemophilia A. Hemophilia A belongs to the group of hereditary coagulopathies. It occurs, as a rule, in males, since the inheritance of the disease is linked to the X chromosome. In the Russian Federation, the incidence of hemophilia is 9.1 cases per 100,000 population, a total of 6525 patients with hemophilia A are registered. The main manifestation of hemophilia is bleeding and hemorrhage. With hemophilia, there is an increase in APTT while maintaining other parameters within normal values, and a decrease in FVIII activity in the blood. A severe form of hemophilia A is characterized by a decrease in FVIII activity of less than 1%, for moderate severity> 1 - ≤5%, for mild severity> 5% (N.I. Zozulya, P.V. Svirin. Diagnosis and treatment of hemophilia. National clinical guidelines, Moscow: National Hematological Society, 2014).

Дефицит FIX называется гемофилиепй В. Гемофилия В (наследственный дефицит FIX) является сцепленные с полом заболеванием, встречается с частотой 1 на 30000 населения. Доля их от общего числа больных гемофилией составляет 20-25% (Soucie, Evatt, and Jackson. Occurrence of hemophilia in the United States. The Hemophilia Surveillance System Project Investigators. Am J Hematol 1998, 59(4):288-94). Клинические проявления заболевания: гемартрозы, гематомы, посттравматические и постоперационные кровотечения. Лабораторная диагностика гемофилии В основана на выявлении удлинения АЧТВ, снижения активности FIX в плазме. Диапазон нормальных значений плазменной активности FVII составляет 50-120%. Для тяжелой формы гемофилии В характерно снижение активности FIX менее 1%, для средней степени тяжести > 1 - ≤5%, для легкой степени тяжести >5% (Н.И. Зозуля, П.В. Свирин. Диагностика и лечение гемофилии. Национальные клинические рекомендации. Москва: Национальное гематологическое общество, 2014).FIX deficiency is called hemophilia B. Hemophilia B (hereditary FIX deficiency) is a sex-linked disease that occurs with a frequency of 1 in 30,000 people. Their share in the total number of hemophilia patients is 20–25% (Soucie, Evatt, and Jackson. Occurrence of hemophilia in the United States. The Hemophilia Surveillance System Project Investigators. Am J Hematol 1998, 59 (4): 288-94). Clinical manifestations of the disease: hemarthrosis, hematomas, post-traumatic and postoperative bleeding. Laboratory diagnosis of hemophilia B is based on the detection of lengthening of APTT, a decrease in plasma FIX activity. The range of normal plasma activity of FVII is 50-120%. A severe form of hemophilia B is characterized by a decrease in FIX activity of less than 1%, for moderate severity> 1 - ≤5%, for mild severity> 5% (N.I. Zozulya, P.V. Svirin. Diagnosis and treatment of hemophilia. National clinical guidelines, Moscow: National Hematological Society, 2014).

Дефицит FIX называется гемофилиепй С. FXI (фактор Розенталя) учувствует в активации основного профермента внутреннего теназного комплекса. Заболеваемость гемофилией С составляет 1 на 1000000. Наследуется аутосомно, встречается как у мужчин, так и у женщин. Геморрагический синдром редко возникает спонтанно, как правило, - после хирургических манипуляций, травм. Диапазон нормальных значений плазменной активности FXI составляет 70-120%. Диагноз устанавливается на основании удлинения АЧТВ и сниженной плазменной активности FXI (А.Н. Мамаев. Коагулопатии. Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2012).FIX deficiency is called hemophilia C. FXI (Rosenthal factor) is involved in the activation of the main proenzyme of the internal tenase complex. The incidence of hemophilia C is 1 in 1,000,000. It is inherited autosomally, occurs in both men and women. Hemorrhagic syndrome rarely occurs spontaneously, as a rule, after surgical procedures, injuries. The range of normal plasma activity of FXI is 70-120%. The diagnosis is made on the basis of lengthening of the APTT and decreased plasma activity of FXI (A.N. Mamaev. Coagulopathy. Moscow: GEOTAR-Media, 2012).

Дефицит FXII или болезнь Хагемана относится к группе редких коагулопатий, частота составляет 1 на 1000000 населения. Болезнь Хагемана рассматривается как протромботическое состояние, ввиду того, что FXII учувствует в процессах фибринолиза. Геморрагические проявления при дефиците FXII случаются редко, обычно при инвазивных вмешательствах или операциях. Нарушения гемостаза обнаруживают случайно при предоперационном скрининге. Диапазон нормальных значений плазменной активности FXI составляет 70-120%. В коагулограмме выявляют удлинение АЧТВ, сниженную активность FXII (А.Н. Мамаев. Коагулопатии. Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2012).Deficiency of FXII or Hageman's disease belongs to the group of rare coagulopathies, the frequency is 1 per 1,000,000 of the population. Hageman's disease is considered as a prothrombotic condition, due to the fact that FXII is involved in the processes of fibrinolysis. Hemorrhagic manifestations with FXII deficiency are rare, usually with invasive procedures or surgeries. Hemostasis disorders are detected by chance during preoperative screening. The range of normal plasma activity of FXI is 70-120%. In the coagulogram, an APTT elongation, decreased FXII activity are detected (A.N. Mamaev. Coagulopathies. Moscow: GEOTAR-Media, 2012).

В основу методов определения активности факторов свертывания крови положено проведение теста ПВ (FII, FV, FVII, FX) и/или АЧТВ (FVIII, FIX, FXI, FXII) в разбавленном исследуемом образце. При этом снижение активности факторов свертывания компенсируют внесением в инкубационную среду субстратной плазмы, не содержащей соответствующего фактора, но имеющей полноценную активность других факторов свертывания. Таким образом, активность анализируемых факторов в исследуемом образце оказывается единственной неизвестной величиной, определяющей скорость процесса свертывания. Количественное определение активности факторов проводят по калибровочному графику разведений плазмы-калибратора с аттестованной активностью соответствующего фактора.The methods for determining the activity of blood coagulation factors are based on the test PV (FII, FV, FVII, FX) and / or APTT (FVIII, FIX, FXI, FXII) in a diluted test sample. Moreover, the decrease in the activity of coagulation factors is compensated by the introduction of a substrate plasma in the incubation medium that does not contain the corresponding factor, but has the full activity of other coagulation factors. Thus, the activity of the analyzed factors in the test sample is the only unknown value that determines the speed of the coagulation process. Quantitative determination of the activity of factors is carried out according to the calibration schedule of dilutions of the plasma calibrator with the certified activity of the corresponding factor.

Наиболее распространенным способом определения дефицита факторов свертывания является одностадийный клоттинговый метод исследования с использованием субстратных (дефицитных) образцов плазмы, лишенных одного из факторов свертывания крови (R.D Langdell, R.H Wagner, K.М Brinkhous. Effect of antihemophilic factor on one-stage clotting tests; a presumptive test for hemophilia and a simple one-stage antihemophilic factor assy procedure. The Journal of Laboratory and Clinical Medicine 1953, 637-47). Принцип метода заключается в определении промежутка времени после добавления стартового реактива, запускающего каскад свертывания плазмы по внутреннему или внешнему пути, в смесь субстратной (дефицитной) плазмы, в которой отсутствует исследуемый фактор, и исследуемой плазмы больного (под ред. Меньшикова В.В. Методики клинических лабораторных исследований. Справочное пособие. Москва: Лабора, Том 1, 2008). Степень коррекции зависит от активности исследуемого фактора свертывания, поскольку активность других факторов свертывания в этой системе в норме. Активность дефицитного фактора в исследуемой плазме определяют по кривой разведения. При проведении этого анализа необходимо соблюдать требования по приготовлению реагентов: разведение, прогревание, построение калибровочного графика. Правильность построения калибровочного графика для определения активности отдельных факторов оценивают с помощью международных стандартов. Качественным критерием наборов с субстратной плазмой являются очень низкая или неопределяемая активность одного из факторов свертывания крови (менее 1%), нормальная активность других факторов, наличие в наборе калибраторов с дробным содержанием фактора, чтобы можно было построить калибровочную кривую как в зоне с нормальным, так и патологическим содержанием фактора свертывания. Метод применяется для диагностики врожденных и приобретенных дефицитов различных факторов свертывания. Основными ограничениями метода определения активности факторов свертывания одностадийным методом является его чувствительность к присутствию в образце крови гепарина или непрямых антикоагулянтов, волчаночного антикоагулянта. Для его выполнения необходимы специальные реактивы: АЧТВ-реагент (суспензия каолина или эллаговой кислоты, кефалин, фосфолипиды), имидазоловый буфер, раствор хлорида кальция, лиофилизированная контрольная плазма с аттестованной активностью исследуемого фактора и лиофилизированная субстратная плазма, не содержащая исследуемый фактор (дефицитная плазма). Дефицитная плазма может быть получена путем иммуносорбции отдельных факторов с добавлением других факторов, а также от доноров, больных с недостаточностью одного из факторов свертывания. Кроме того, не любая комбинация дефицитной плазмы и тест-наборов на ПВ или АЧТВ дают схожие результаты, поэтому следует пользоваться рекомендациями фирм-производителей дефицитных плазм и тест-наборов. Качество дефицитной плазмы и чувствительность реагентов имеют значение при определении дефицита факторов свертывания крови.The most common method for determining the deficiency of coagulation factors is a one-stage clotting test method using substrate (deficient) plasma samples lacking one of the blood coagulation factors (RD Langdell, RH Wagner, K. M Brinkhous. Effect of antihemophilic factor on one-stage clotting tests; a presumptive test for hemophilia and a simple one-stage antihemophilic factor assy procedure. The Journal of Laboratory and Clinical Medicine 1953, 637-47). The principle of the method is to determine the period of time after adding the starting reagent, which starts the cascade of plasma coagulation along the internal or external path, to a mixture of substrate (deficient) plasma, in which there is no studied factor, and the patient’s studied plasma (edited by V. V. Menshikov. clinical laboratory research. A reference manual. Moscow: Lab, Volume 1, 2008). The degree of correction depends on the activity of the coagulation factor under study, since the activity of other coagulation factors in this system is normal. The activity of a deficient factor in the studied plasma is determined by the dilution curve. When conducting this analysis, it is necessary to comply with the requirements for the preparation of reagents: dilution, heating, construction of a calibration schedule. The correctness of constructing a calibration graph to determine the activity of individual factors is evaluated using international standards. A qualitative criterion for substrate plasma kits is the very low or undetectable activity of one of the coagulation factors (less than 1%), normal activity of other factors, the presence of calibrators with a fractional factor content in the set so that it is possible to construct a calibration curve in both the normal and and pathological coagulation factor content. The method is used to diagnose congenital and acquired deficiencies of various coagulation factors. The main limitations of the method for determining the activity of coagulation factors by a single-stage method is its sensitivity to the presence of heparin or indirect anticoagulants, lupus anticoagulant in the blood sample. To perform it, special reagents are required: APTT reagent (suspension of kaolin or ellagic acid, cephalin, phospholipids), imidazole buffer, calcium chloride solution, lyophilized control plasma with certified activity of the studied factor and lyophilized substrate plasma that does not contain the studied factor (deficient) (deficient) . Deficit plasma can be obtained by immunosorption of individual factors with the addition of other factors, as well as from donors, patients with a deficiency of one of the coagulation factors. In addition, not every combination of deficient plasma and test kits for PV or APTT give similar results, so you should use the recommendations of manufacturers of deficient plasma and test kits. The quality of deficient plasma and the sensitivity of reagents are important in determining the deficiency of coagulation factors.

Известен также двухстадийный клоттинговый метод определения активности факторов свертывания крови. Этот коагулогический метод является модификацией теста образования тромбопластина по Biggs (Rosemary Biggs, J. Eveling, G. Richards. The Assay of Antihaemophilic-Globulin Activity. British Journal of Haematology 1955, 1:20-34). На первой стадии формируется реакционная смесь, содержащая избыток компонентов, требуемых для образования протромбиназного комплекса (FXa, FVa, фосфолипидов, ионов кальция). На второй стадии регистрируют скорость реакции, которая зависит от количества образовавшегося активированного фактора свертывания. По результатам измерения времени образования сгустка определяют коагулогическую активность фактора свертывания в анализируемой плазме. Двухстадийный клоттинговый метод не требует использования субстратной дефицитной плазмы и не зависит от наличия активированного фактора свертывания в исследуемом образце (А.Л. Берковский и др. Внутренний путь свертывания крови. Методы исследования. Методическое руководство. Москва, 2013). Основным недостатком метода является ограничение его широкого применения ввиду использования сложной стандартизации применяемых реагентов, что возможно только в специализированных лабораториях.Also known is a two-stage clotting method for determining the activity of blood coagulation factors. This coagulological method is a modification of the Biggs thromboplastin test (Rosemary Biggs, J. Eveling, G. Richards. The Assay of Antihaemophilic-Globulin Activity. British Journal of Haematology 1955, 1: 20-34). At the first stage, a reaction mixture is formed containing an excess of the components required for the formation of the prothrombinase complex (FXa, FVa, phospholipids, calcium ions). In the second stage, the reaction rate is recorded, which depends on the amount of activated coagulation factor formed. According to the results of measuring the time of clot formation, the coagulological activity of coagulation factor in the analyzed plasma is determined. The two-stage clotting method does not require the use of substrate deficient plasma and does not depend on the presence of an activated coagulation factor in the test sample (A.L. Berkovsky et al. Internal blood coagulation pathway. Research methods. Methodological guide. Moscow, 2013). The main disadvantage of the method is the limitation of its widespread use due to the use of complex standardization of the reagents used, which is possible only in specialized laboratories.

Известен также хромогенный метод определения активности факторов свертывания крови (M.J Seghatchian and М. Miller-Andersson. A colorimetric evaluation of factor VIII:C potency. Medical Laboratory Sciences 1978, 347-54). Возможно проведение хромогенного метода 2 способами: по кинетике образования хромогена под действием активированного фактора или по конечной точке накопления хромогена за определенное время инкубации. Синтетический субстрат представляет собой молекулу, которая распознается и разрезается сериновой протеиназой. Этот разрез ведет к отщеплению от субстрата сигнальной молекулы, метки. Метка либо изменяет оптическую плотность раствора (хромогенный, т.е. окрашивающий субстрат), либо способна флуоресцировать при освещении (флуорогенный субстрат). Субстрат можно добавлять в исследуемую плазму и записывать сигнал, получающийся при свертывании. К преимуществам хромогенного метода по сравнению с одностадийным методом является его резистентность к волчаночному антикоагулянту, гепарину или другим антикоагулянтам (например, ингибиторам тромбина) (под ред. Меньшикова В.В. Методики клинических лабораторных исследований. Справочное пособие. Москва, Набора, Том 1, 2008). Ограничением метода является использование специального оборудования (центрифуга, фотометры). В настоящее время проводятся попытки стандартизации как коагуляционных, так и хромогенных методов определения активности факторов свертывания. До введения стандартизации рекомендуется метод с хромогенными субстратами использовать только как ориентировочный и предпочтительно для оценки концентратов факторов свертывания, а не с диагностическими целями (В.В. Долгов, П.В. Свирин. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза. ООО издательство «Триада», Тверь, 2005).A chromogenic method is also known for determining the activity of blood coagulation factors (M.J Seghatchian and M. Miller-Andersson. A colorimetric evaluation of factor VIII: C potency. Medical Laboratory Sciences 1978, 347-54). It is possible to carry out the chromogenic method in 2 ways: by the kinetics of the formation of chromogen under the action of an activated factor or by the endpoint of the accumulation of chromogen for a certain incubation time. A synthetic substrate is a molecule that is recognized and cleaved by a serine proteinase. This incision leads to cleavage of the signal molecule, label, from the substrate. The label either changes the optical density of the solution (chromogenic, i.e. staining substrate), or is capable of fluorescing under illumination (fluorogenic substrate). The substrate can be added to the studied plasma and record the signal resulting from coagulation. The advantages of the chromogenic method compared to the one-stage method are its resistance to lupus anticoagulant, heparin or other anticoagulants (for example, thrombin inhibitors) (under the editorship of VV Menshikov, Methods of clinical laboratory research. Reference manual. Moscow, Set, Volume 1, 2008). The limitation of the method is the use of special equipment (centrifuge, photometers). Currently, attempts are being made to standardize both coagulation and chromogenic methods for determining the activity of coagulation factors. Prior to the introduction of standardization, it is recommended that the method with chromogenic substrates be used only as an indicative one and preferably for assessing coagulation factor concentrates, and not for diagnostic purposes (V.V. Dolgov, P.V. Svirin. Laboratory diagnosis of hemostasis disorders. Triada Publishing House, Tver , 2005).

Во всех методах расчет активности факторов свертывания производят, сравнивая активность тестируемого образца с активностью Международного стандарта NIBSC или вторичного стандартного образца фактора свертывания, откалиброванного относительно международного стандарта в международных единицах активности (ME). Эквивалентность международного стандарта в ME устанавливается ВОЗ. За 1 ME (100%) принимают активность фактора свертывания в 1,0 мл свежей нормальной пулированной плазме крови от 300 доноров. Активность фактора выражается в МЕ/мл, МЕ/флакон, МЕ/мг белка и в %.In all methods, the activity of coagulation factors is calculated by comparing the activity of the test sample with the activity of the International Standard NIBSC or a secondary standard sample of coagulation factor calibrated against the international standard in international units of activity (ME). The equivalence of the international standard in ME is established by WHO. For 1 ME (100%) take the activity of coagulation factor in 1.0 ml of fresh normal pooled blood plasma from 300 donors. Factor activity is expressed in IU / ml, IU / vial, IU / mg protein and in%.

Таким образом, все имеющиеся в настоящее время методы определения дефицита факторов свертывания являются трудоемкими, требующими специального оборудования, выполняются врачами-лаборантами, специалистами в области гемостаза и применяется только в узкоспециализированных стационарах. Во многих стационарах нет условий, оборудования и специалистов для проведения подобных исследований. В результате при выявлении нарушений в системе гемостаза отменяются либо откладываются инвазивные вмешательства, а лечение проводится без установленного диагноза и может оказаться неэффективным. В то же время, согласно приказу Министерства здравоохранения РФ от 15 ноября 2012 г. №919н "Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи взрослому населению по профилю «анестезиология и реаниматология" в стандарт оснащения отделения анестезиологии-реанимации с палатами реанимации и интенсивной терапии входит тромбоэластограф или тромбоэластометр.Thus, all currently available methods for determining the deficiency of coagulation factors are laborious, requiring special equipment, are performed by laboratory assistants, specialists in the field of hemostasis and are used only in highly specialized hospitals. In many hospitals there are no conditions, equipment and specialists for conducting such studies. As a result, when violations in the hemostatic system are detected, invasive interventions are canceled or postponed, and treatment is carried out without a diagnosis and may be ineffective. At the same time, according to the order of the Ministry of Health of the Russian Federation dated November 15, 2012 No. 919n "On approval of the Procedure for providing medical care to adults in the profile of" anesthesiology and intensive care ", the standard equipment of the department of anesthesiology and intensive care with resuscitation and intensive care units includes thromboelastograph or thromboelastometer.

Белорусские исследователи (А.Ф. Минов, A.M. Дзядзько, О.О. Руммо. Тромбоэластометрические критерии коррекции нарушений гемостаза при трансплантации печени. Анестезиология И Реаниматология 2006, 35-41) изучили параметры тромбоэластометрии во время операции трансплантации печени, при которых отмечались изменения в крови содержания факторов свертывания (фибриногена, FII, FV, FVII, FVIII, FIX, FX, FXI, FXII). Авторы отметили, что наибольшей диагностической эффективностью обладали следующие параметры: время начало образования сгустка (СТ) в тесте внешнего пути > 80 (ЕХТЕМст > 80 с) и время начало образования сгустка (СТ) в тесте внутреннего пути > 240 с (INTEMct > 240 с). Чувствительность изменения ЕХТЕМст составила всего 19%, т.е. по данным тромбоэластометрии восполнение дефицита факторов будет проводиться лишь в 19% случаев, когда имеются показания согласно общепринятым рекомендациям (Международное нормализованное отношение (MHO) > 2,0). Чувствительность изменения INTEMCT > составила 51%. Однако в данном исследовании авторы не пытались по изменениям тромбоэластометрических параметров дифференцировать дефицит отдельных факторов крови, а лишь оценивали их изменения в совокупности. Авторы не представили алгоритм, позволивший бы выявить дефицит какого фактора вызывал изменения тромбоэластометрии. Кроме того, в этом исследовании дефицит факторов был невыраженный, минимально факторы снижались через 15 минут после реперфузии (медианы FII 44%, FV 17%, FVII 29%, FIX 59%, FX 39%, FXI 56%, FXII 66%), что значительно больше, чем у больных с врожденным дефицитом, чем можно объяснить низкую чувствительность тестов.Belarusian researchers (AF Minov, AM Dzyadzko, OO Rummo. Thromboelastometric criteria for correcting hemostasis disorders during liver transplantation. Anesthesiology and Resuscitation 2006, 35-41) studied the parameters of thromboelastometry during liver transplantation, in which there were changes in blood content of coagulation factors (fibrinogen, FII, FV, FVII, FVIII, FIX, FX, FXI, FXII). The authors noted that the following diagnostic parameters had the greatest diagnostic efficiency: the time onset of clot formation (CT) in the external path test> 80 (EXTEMst> 80 s) and the time onset of clot formation (CT) in the internal path test> 240 s (INTEMct> 240 s ) The sensitivity of the change in EXTEMst was only 19%, i.e. according to thromboelastometry, the deficit will be filled only in 19% of cases when there are indications according to generally accepted recommendations (International Normalized Ratio (MHO)> 2.0). The sensitivity of the INTEM CT > change was 51%. However, in this study, the authors did not try to differentiate the deficit of individual blood factors by changes in thromboelastometric parameters, but only evaluated their changes in aggregate. The authors did not present an algorithm that would allow to identify a deficiency of which factor caused changes in thromboelastometry. In addition, in this study, the deficit of factors was not pronounced, minimally factors decreased 15 minutes after reperfusion (medians FII 44%, FV 17%, FVII 29%, FIX 59%, FX 39%, FXI 56%, FXII 66%). which is significantly more than in patients with congenital deficiency, which can explain the low sensitivity of the tests.

Технический результат заявленного изобретения достигается тем, что дефицит того или иного фактора свертывания диагностируется посредством исследования цельной крови с помощью ротационной тромбоэластометрии (РОТЭМ). На первом этапе выполняют два стандартных теста, позволяющих выявить гипокоагуляцию по внешнему (тест ЕХТЕМ) или внутреннему (тест INTEM) пути свертывания, в которых оценивается параметр СТ, характеризующий начало образования сгустка и позволяющий оценить суммарную активность факторов свертывания. Тесты выполняются согласно рекомендациям производителя на приборе РОТЭМ (ROTEM delta, "Pentapharm GmbH", Германия). Кривые реакции и параметры каждого образца сравнивают с эталонными результатами здоровых людей, описанные для тестов РОТЭМ (Thomas Lang et al. Multi-centre investigation on reference ranges for ROTEM thromboelastometry. Blood Coagulation & Fibrinolysis: An International Journal in Haemostasis and Thrombosis 2005, 301-10). При проведении анализа используется автоматическое пипетирование цельной цитратной крови в комбинации с различными специфическими реагентами: реагент ех-ТЕМ содержит тканевой фактор и используется для постановки теста ЕХТЕМ; реагент in-TEM содержит эллаговую кислоту и используется для постановки теста INTEM; реагент fib-TEM содержит блокатор рецепторов тромбоцитов цитохалазин D, в комбинации с реагентом ех-ТЕМ используется для постановки теста FIBTEM; hep-TEM содержит гепариназу, в комбинации с реагентом in-TEM используется для постановки теста INTEM.The technical result of the claimed invention is achieved in that a deficiency of a coagulation factor is diagnosed by examining whole blood using rotational thromboelastometry (ROTEM). At the first stage, two standard tests are performed to detect hypocoagulation by the external (EXTEM test) or internal (INTEM test) coagulation pathway, in which the CT parameter is evaluated, which characterizes the onset of clot formation and allows one to evaluate the total activity of coagulation factors. Tests are performed according to the manufacturer's recommendations on a ROTEM device (ROTEM delta, "Pentapharm GmbH", Germany). The response curves and parameters of each sample are compared with the reference results of healthy people described for the RTEM tests (Thomas Lang et al. Multi-center investigation on reference ranges for ROTEM thromboelastometry. Blood Coagulation & Fibrinolysis: An International Journal in Haemostasis and Thrombosis 2005, 301- 10). During the analysis, automatic pipetting of whole citrate blood is used in combination with various specific reagents: the ex-TEM reagent contains tissue factor and is used to set up the EXTEM test; the in-TEM reagent contains ellagic acid and is used for the INTEM test; fib-TEM reagent contains a platelet receptor blocker cytochalazine D; in combination with ex-TEM reagent it is used for the FIBTEM test; hep-TEM contains heparinase and, in combination with the in-TEM reagent, is used for the INTEM test.

Объемы используемых реагентов и исследуемых образцов крови:Volumes of reagents and blood samples used:

- в тесте ЕХТЕМ: 20 мкл СаCl2 0,2М + 20 мкл реагента ех-ТЕМ+ 300 мкл цитратной крови;- in the EXTEM test: 20 μl of CaCl 2 0.2 M + 20 μl of ex-TEM reagent + 300 μl of citrated blood;

- в тесте INTEM: 20 мкл СаCl2 0,2М + 20 мкл реагента in-TEM + 300 мкл цитратной крови;- in the INTEM test: 20 μl of CaCl 2 0.2 M + 20 μl of in-TEM reagent + 300 μl of citrated blood;

- в тесте FIBTEM: 20 мкл реагента ех-ТЕМ + 20 мкл реагента fib-TEM + 300 мкл цитратной крови;- in the FIBTEM test: 20 μl ex-TEM reagent + 20 μl fib-TEM reagent + 300 μl citrated blood;

- в тесте НЕРТЕМ: 20 мкл реагента in-TEM + 20 мкл реагента hep-TEM + 300 мкл цитратной крови.- in the NERTEM test: 20 μl of in-TEM reagent + 20 μl of hep-TEM reagent + 300 μl of citrated blood.

Для исключения гипокоагуляции в тесте ЕХТЕМ, вызванной гипофибриногенемией, выполняется тест FIBTEM. Значения показателя FIBTEMMCF ≥ 8 мм позволяют исключить дефицит фибриногена (фактора свертывания FI) как причину гипокоагуляции. Для исключения гипокоагуляции в тесте INTEM, вызванной гепарином, выполняется тест НЕРТЕМ. Отсутствие укорочения интервала СТ в тесте НЕРТЕМ по сравнению с тестом INTEM свидетельствует, что гипокоагуляция вызвана дефицитом факторов свертывания крови, а не действием гепарина. Дальнейшие исследования направлены на выявление дефицита факторов свертывания крови. Принцип выявления дефицита отдельных факторов свертывания одинаков: в две пробирки вносят по 2 части цельной цитратной исследуемой крови, затем в одну из них вносят 1 часть стандартной плазмы (((Standard human plasma», SIEMENS Healthcare, Германия), в другую - 1 часть дефицитной плазмы (((Coagulation Factor Deficient Plasma», SIEMENS Healthcare, Германия), в которой отсутствует тот или иной исследуемый фактор свертывания крови. На фигуре 1 представлена схема выполнения исследования.To exclude hypocoagulation in the EXTEM test caused by hypofibrinogenemia, the FIBTEM test is performed. FIBTEM MCF values ≥ 8 mm exclude fibrinogen deficiency (coagulation factor FI) as a cause of hypocoagulation. To exclude hypocoagulation in the INTEM test caused by heparin, the NERTEM test is performed. The absence of a shortening of the CT interval in the NERTEM test compared to the INTEM test indicates that hypocoagulation is caused by a deficiency of blood coagulation factors, and not by the action of heparin. Further research is aimed at identifying a deficiency of coagulation factors. The principle of identifying the deficit of individual coagulation factors is the same: 2 parts of whole citrated test blood are added to two tubes, then 1 part of standard plasma (((Standard human plasma ”, SIEMENS Healthcare, Germany) is added to one of them, and 1 part of the deficient one to the other plasma (((Coagulation Factor Deficient Plasma ", SIEMENS Healthcare, Germany), in which there is no particular coagulation factor to be studied. Figure 1 shows a diagram of a study.

Использование тестов ЕХТЕМ или INTEM, или обоих вместе зависит от участия фактора свертывания крови в коагуляционном каскаде, что видно из алгоритма диагностики на фигуре 2.The use of EXTEM or INTEM tests, or both together, depends on the participation of the coagulation factor in the coagulation cascade, which can be seen from the diagnostic algorithm in figure 2.

Поскольку в цельной крови примерно половину составляет плазма, добавление такого же количества стандартной плазмы, содержащий все факторы свертывания крови, компенсирует дефицит факторов и приводит к нормализации измененного показателя СТ, в пробе же с дефицитной плазмой показатель СТ останется удлиненным.Since plasma is approximately half in whole blood, the addition of the same amount of standard plasma containing all coagulation factors compensates for the deficiency of factors and normalizes the altered CT index, while in a sample with deficient plasma the CT index will remain elongated.

Сущность изобретения. Задачей настоящего изобретения является определение сниженной активности факторов свертывания в цельной крови с помощью ротационной тромбоэластометрии по удлинению времени начала образования сгустка крови (интервал СТ) в тестах ЕХТЕМ и/или INTEM. Особенностью метода является использование в тестах ротационной тромбоэластометрии стандартной плазмы и плазмы, дефицитной по одному из факторов свертывания, по предложенному алгоритму, для выявления компенсации гипокоагуляции при добавлении стандартной плазмы и сохранении гипокоагуляции при добавлении дефицитной по изучаемому фактору плазмы.SUMMARY OF THE INVENTION The objective of the present invention is to determine the reduced activity of coagulation factors in whole blood using rotational thromboelastometry to lengthen the time of onset of blood clot formation (CT interval) in the tests of EXTEM and / or INTEM. A feature of the method is the use of standard plasma and plasma deficient in one of the coagulation factors in tests of rotational thromboelastometry according to the proposed algorithm to detect hypocoagulation compensation when standard plasma is added and to maintain hypocoagulation when adding a plasma deficient in the studied factor.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом: кровь больного для исследования набирают в пробирку, содержащую 3,2% раствор трехзамещенного двухводного цитрата натрия в соотношении 1:9 (1 часть раствора цитрата, 9 частей крови). Исследование выполняется на приборе РОТЭМ (ROTEM, «Pentapharm GmbH», Германия). Используют четыре канала тромбоэластометра. На первом канале тромбоэластометра в кювету вносят 20 мкл СаCl2 0,2М и 20 мкл реагента ех-ТЕМ, содержащего тканевой фактор и гепариназу, и 300 мкл исследуемой цитратной крови. На втором канале тромбоэластометра в кювету вносят 20 мкл СаCl2 0,2М и 20 мкл реагента in-TEM, содержащего эллаговую кислоту, и 300 мкл цитратной крови. На третьем канале в кювету для тромбоэластометрии вносят 20 мкл реагента in-TEM, 20 мкл реагента hep-TEM, содержащего гепариназу, и 300 мкл исследуемой цитратной крови. На четвертом канале в кювету для тромбоэластометрии вносят 20 мкл реагента ех-ТЕМ + 20 мкл реагента fib-TEM + 300 мкл цитратной крови. Нормальные значения тесте FIBTEMMCF (> 9 мм) и отсутствие укорочения НЕРТЕМCT по сравнению INTEMCT позволяют исключить гипофибриногенемию и действие гепарина как причины гипокоагуляции. Дальнейшие исследования направлены на выявление дефицита отдельных факторов свертывания крови.The proposed method is as follows: the patient’s blood is collected in a test tube containing a 3.2% solution of trisubstituted two-water sodium citrate in a ratio of 1: 9 (1 part citrate solution, 9 parts of blood). The study is performed on a ROTEM instrument (ROTEM, Pentapharm GmbH, Germany). Four channels of a thromboelastometer are used. On the first channel of the thromboelastometer, 20 μl of CaCl 2 0.2 M and 20 μl of ex-TEM reagent containing tissue factor and heparinase and 300 μl of the studied citrate blood are added to the cuvette. On the second channel of the thromboelastometer, 20 μl of CaCl 2 0.2 M and 20 μl of in-TEM reagent containing ellagic acid and 300 μl of citrated blood are added to the cuvette. On the third channel, 20 μl of in-TEM reagent, 20 μl of hep-TEM reagent containing heparinase, and 300 μl of the studied citrate blood are added to the thromboelastometry cuvette. On the fourth channel, 20 μl of ex-TEM reagent + 20 μl fib-TEM reagent + 300 μl of citrated blood are added to the thromboelastometry cuvette. Normal values of the FIBTEM MCF test (> 9 mm) and the absence of shortening of NERTEM CT compared to INTEM CT make it possible to exclude hypofibrinogenemia and the action of heparin as the causes of hypocoagulation. Further research is aimed at identifying a deficiency of certain coagulation factors.

Удлинение только ЕХТЕМCT выявляется при дефиците FVIIOnly EXTEM CT elongation is detected in FVII deficiency

Для подтверждения дефицита FVII на одном канале тромбоэластометра выполняется тест ЕХТЕМ из пробирки, содержащей смесь 2 частей цельной цитратной исследуемой крови и 1 части стандартной плазмы, а на другом канале выполняется тест ЕХТЕМ из пробирки, содержащей смесь 2 частей цельной цитратной исследуемой крови и 1 части плазмы, дефицитной по FVII. При дефиците FVII в тесте, выполненном со смесью крови с дефицитной плазмой, сохранится удлинение ЕХТЕМCT, а в тесте со смесью крови со стандартной плазмой произойдет нормализация ЕХТЕМCT.To confirm FVII deficiency, an EXTEM test from a test tube containing a mixture of 2 parts of whole citrated test blood and 1 part of a standard plasma is performed on one channel of a thromboelastometer, and an EXTEM test from a test tube containing a mixture of 2 parts of whole citrate test blood and 1 part of a plasma is performed on another channel deficient in FVII. With FVII deficiency, an EXTEM CT extension will remain in a test performed with a blood-deficient plasma mixture, and an EXTEM CT normalization will occur in a test with a blood mixture with standard plasma.

Одновременное удлинение ЕХТЕМCT и INTEMCT выявляется при дефиците FVThe simultaneous lengthening of EXTEM CT and INTEM CT is detected in cases of FV deficiency

Для доказательства дефицита FV выполняются тесты ЕХТЕМ и INTEM с дефицитной по FV и стандартной плазмой. Для этого на двух каналах тромбоэластометра выполняются тесты ЕХТЕМ и INTEM из пробирки, содержащей смесь 2 частей цельной цитратной исследуемой крови и 1 части стандартной плазмы, а на других двух каналах выполняются тесты ЕХТЕМ и INTEM из пробирки, содержащей смесь 2 частей цельной цитратной исследуемой крови и 1 части плазмы, дефицитной по FV. При дефиците FV в тестах ЕХТЕМ и INTEM, выполненных со смесью крови с дефицитной плазмой, сохранится удлинение ЕХТЕМCT, и INTEMCT, а в тестах ЕХТЕМ и INTEM, выполненных со смесью исследуемой крови со стандартной плазмой, произойдет нормализация ЕХТЕМCT и INTEMCT.To prove FV deficiency, EXTEM and INTEM tests with FV deficiency and standard plasma are performed. To do this, EXTEM and INTEM tests are performed on two channels of a thromboelastometer from a test tube containing a mixture of 2 parts of whole citrated test blood and 1 part of standard plasma, and on the other two channels EXTEM and INTEM tests are performed from a test tube containing a mixture of 2 parts of whole citrated test blood and 1 part of plasma deficient in FV. With FV deficiency, the EXTEM and INTEM tests performed with a blood-deficient plasma mixture will prolong the EXTEM CT and INTEM CT , while the EXTEM and INTEM tests performed with a mixture of the test blood with standard plasma will normalize EXTEM CT and INTEM CT .

Удлинение только INTEMCT возникает при дефиците FVIII, FIX, FXI и FXII.Elongation of INTEM CT alone occurs with deficiency of FVIII, FIX, FXI, and FXII.

Для доказательства дефицита FVIII выполняется тест INTEM с дефицитной по FVIII и стандартной плазмой. Для подтверждения дефицита FVIII на одном канале тромбоэластометра выполняется тест INTEM из пробирки, содержащей смесь 2 частей цельной цитратной исследуемой крови и 1 части стандартной плазмы, а на другом канале выполняется тест INTEM из пробирки, содержащей смесь 2 частей цельной цитратной исследуемой крови и 1 части плазмы, дефицитной по FVIII. При дефиците FVIII в тесте INTEM, выполненном со смесью крови с дефицитной плазмой, сохранится удлинение INTEMCT, а в тесте INTEM, выполненном со смесью исследуемой крови со стандартной плазмой, произойдет нормализация INTEMCT.To prove FVIII deficiency, an INTEM test with FVIII deficiency and standard plasma is performed. To confirm FVIII deficiency, on one channel of a thromboelastometer, an INTEM test is performed from a test tube containing a mixture of 2 parts of whole citrate test blood and 1 part of standard plasma, and on the other channel, an INTEM test is taken from a test tube containing a mixture of 2 parts of whole citrate test blood and 1 part of plasma deficient in FVIII. With an FVIII deficiency, the INTEM CT test performed with a plasma-deficient blood mixture will retain the INTEM CT elongation, while the INTEM test performed with a test blood mixture with a standard plasma will normalize INTEM CT .

Для доказательства дефицита FIX выполняется тест INTEM с дефицитной по FIX и стандартной плазмой. Для подтверждения дефицита FIX на одном канале тромбоэластометра выполняется тест INTEM из пробирки, содержащей смесь 2 частей цельной цитратной исследуемой крови и 1 части стандартной плазмы, а на другом канале выполняется тест INTEM из пробирки, содержащей смесь 2 частей цельной цитратной исследуемой крови и 1 части плазмы, дефицитной по FIX. При дефиците FIX в тесте INTEM, выполненном со смесью крови с дефицитной плазмой, сохранится удлинение INTEMCT, а в тесте INTEM, выполненном со смесью исследуемой крови со стандартной плазмой, произойдет нормализация INTEMCT.To prove FIX deficiency, an INTEM test with FIX deficiency and standard plasma is performed. To confirm FIX deficiency, on one channel of a thromboelastometer, an INTEM test is performed from a test tube containing a mixture of 2 parts of whole citrate test blood and 1 part of standard plasma, and on the other channel, an INTEM test is taken from a test tube containing a mixture of 2 parts of whole citrate test blood and 1 part of plasma FIX deficient. With a FIX deficiency, the INTEM CT test performed with a plasma-deficient blood mixture will retain the INTEM CT elongation, and the INTEM test performed with a test blood mixture with standard plasma will normalize INTEM CT .

Для доказательства дефицита FXI выполняется тест INTEM с дефицитной по FXI и стандартной плазмой. Для подтверждения дефицита FXI на одном канале тромбоэластометра выполняется тест INTEM из пробирки, содержащей смесь 2 частей цельной цитратной исследуемой крови и 1 части стандартной плазмы, а на другом канале выполняется тест INTEM из пробирки, содержащей смесь 2 частей цельной цитратной исследуемой крови и 1 части плазмы, дефицитной по FXI. При дефиците FXI в тесте INTEM, выполненном со смесью крови с дефицитной плазмой, сохранится удлинение INTEMCT, а в тесте INTEM, выполненном со смесью исследуемой крови со стандартной плазмой, произойдет нормализация INTEMCT To prove FXI deficiency, an INTEM test with FXI deficiency and standard plasma is performed. To confirm FXI deficiency, on one channel of a thromboelastometer, an INTEM test is performed from a test tube containing a mixture of 2 parts of whole citrated test blood and 1 part of standard plasma, and on the other channel, an INTEM test is taken from a test tube containing a mixture of 2 parts of whole citrate test blood and 1 part of plasma deficient in FXI. With FXI deficiency, the INTEM CT test performed with a plasma-deficient blood mixture will retain the INTEM CT elongation, and the INTEM test performed with the test blood mixture with standard plasma will normalize the INTEM CT

Для доказательства дефицита FXII выполняется тест INTEM с дефицитной по FXII и стандартной плазмой. Для подтверждения дефицита FXII на одном канале тромбоэластометра выполняется тест INTEM из пробирки, содержащей смесь 2 частей цельной цитратной исследуемой крови и 1 части стандартной плазмы, а на другом канале выполняется тест INTEM из пробирки, содержащей смесь 2 частей цельной цитратной исследуемой крови и 1 части плазмы, дефицитной по FXII. В тесте INTEM, выполненном со смесью крови с дефицитной плазмой, сохранится удлинение INTEMCT, а в тесте INTEM, выполненном со смесью исследуемой крови со стандартной плазмой, произойдет нормализация INTEMCT. To prove FXII deficiency, an INTEM test with FXII deficiency and standard plasma is performed. To confirm FXII deficiency, on one channel of a thromboelastometer, an INTEM test is performed from a test tube containing a mixture of 2 parts of whole citrated test blood and 1 part of standard plasma, and on the other channel, an INTEM test is taken from a test tube containing a mixture of 2 parts of whole citrate test blood and 1 part of plasma deficient in FXII. In an INTEM test performed with a plasma-deficient blood mixture, the INTEM CT elongation will remain, while in an INTEM test performed with a test blood mixture with a standard plasma, INTEM CT will normalize .

Преимущества метода заключается в том, что дефицит факторов свертывания крови диагностируется с помощью РОТЭМ без изменения технологии выполнения метода, вся пробоподготовка (внесение субстратной и дефицитных плазм) проводится на преаналитическом этапе. Метод РОТЭМ позволяет заподозрить и быстро диагностировать наследственную коагулопатию, вызванную дефицитом факторов свертывания крови. Выявление дефицита факторов свертывания с помощью метода РОТЭМ, позволяет, зная какие изменения параметра РОТЭМ обуславливает этот дефицит факторов крови, проводить оценку эффективности гемостатической терапии у больных с врожденным дефицитом факторов свертывания крови, не измеряя при этом их активность в плазме крови. При этом ставится цель, поддерживать соответствующие параметры РОТЭМ на нормальных или близких к нормальным значениям, что облегчает и делает доступным контроль за гемостатической терапией у данной категории больных.The advantages of the method are that a deficiency of blood coagulation factors is diagnosed using RTEM without changing the technology for performing the method, all sample preparation (introducing substrate and deficient plasmas) is carried out at the preanalytical stage. The ROTEM method allows you to suspect and quickly diagnose hereditary coagulopathy caused by a deficiency of blood coagulation factors. Identification of coagulation factor deficiency using the ROTEM method, knowing what changes in the ROTEM parameter causes this deficiency of blood factors, assess the effectiveness of hemostatic therapy in patients with congenital deficiency of blood coagulation factors without measuring their activity in blood plasma. In this case, the goal is to maintain the corresponding parameters of RTEM at normal or close to normal values, which facilitates and makes available control of hemostatic therapy in this category of patients.

Примеры осуществления способа. Пример 1. Диагностика дефицита FVIIExamples of the method. Example 1. Diagnosis of FVII deficiency

Больной О., 28 лет, страдает гипопроконвертинемией. Заболевание протекает с геморрагическим синдромом в виде желудочно-кишечных и носовых кровотечений. Основные показатели системы гемостаза: АЧТВ 31 с, протромбин по Квику 14,5 %, MHO 4,6, фибриноген 2,3 г/л, плазменная активность FVII 1,7%. В тесте INTEM не выявлено отклонений от нормы, в тесте ЕХТЕМ выявлено удлинение ЕХТЕМCT до 809 с (норма до 79 с). На фигуре 3 представлены показатели тромбоэластометрии у больной гипопроконвертинемией: удлинение ЕХТЕМCT, нормальные INTEMCT FIBTEMMCF. В тесте FIBTEM показатель MCF был в пределах нормы (12 мм), что исключило гипофибриногенемию как причину гипокоагуляции. В тесте ЕХТЕМ, выполненном со смесью цельной цитратной крови со стандартной плазмой, ЕХТЕМCT стал 75 с, а в тесте ЕХТЕМ, выполненном со смесью цельной цитратной крови с плазмой, дефицитной по FVII, ЕХТЕМCT остался удлиненным до 490 с (норма до 240 с)., что свидетельствует об изолированном дефиците FVII. На фигуре 4 представлен тест ЕХТЕМ при постановке со смесью цельной крови больного с дефицитом FVII со стандартной плазмой и смесью цельной крови больного с дефицитом FVII и плазмой, дефицитной по FVII. Происходит нормализация СТ в смеси со стандартной плазмой и сохраняется гипокоагуляция в смеси с дефицитной плазмой (фигура 4).Patient O., 28 years old, suffers from hypoproconvertinemia. The disease proceeds with hemorrhagic syndrome in the form of gastrointestinal and nosebleeds. The main indicators of the hemostasis system are: APTT 31 s, prothrombin according to Quick 14.5%, MHO 4.6, fibrinogen 2.3 g / l, plasma activity FVII 1.7%. In the INTEM test, no deviations from the norm were detected; in the EXTEM test, an extension of EXTEM CT to 809 s was detected (normal to 79 s). The figure 3 presents the indicators of thromboelastometry in a patient with hypoproconvertinemia: lengthening EXTEM CT, normal INTEM CT FIBTEM MCF . In the FIBTEM test, the MCF was within normal limits (12 mm), which excluded hypofibrinogenemia as the cause of hypocoagulation. In the EXTEM test, performed with a mixture of whole citrate blood with standard plasma, EXTEM CT became 75 s, and in the EXTEM test, performed with a mixture of whole citrate blood with plasma deficient in FVII, EXTEM CT remained elongated to 490 s (normal up to 240 s )., which indicates an isolated deficiency of FVII. The figure 4 presents the test EXTEM when staged with a mixture of whole blood of a patient with FVII deficiency with standard plasma and a mixture of whole blood of a patient with FVII deficiency and plasma deficient in FVII. CT normalizes in a mixture with standard plasma and hypocoagulation persists in a mixture with deficient plasma (Figure 4).

Пример 2. Оценка эффективности гемостатической терапии у больной гипопроконвертинемиейExample 2. Evaluation of the effectiveness of hemostatic therapy in a patient with hypoproconvertinemia

У больных гипопроконвертинемией СТ в ЕХТЕМ отражает активность FVII. Тромбоэластометрию использовали для контроля за гемостатической терапией рекомбинантным активированным FVII (rFVIIa) во время оперативных вмешательств. Лабораторные тесты (АЧТВ, ПВ, плазменная активность FVII) у больных гипопроконвертинемией не коррелируют с гемостатическим эффектом rFVIIa (U. Martinowitz, М. Michaelson. Guidelines for the Use of Recombinant Activated Factor VII (rFVIIa) in Uncontrolled Bleeding: A Report by the Israeli Multidisciplinary rFVIIa Task Force. Journal of Thrombosis and Haemostasis 2005, 640-48).In patients with hypoproconvertinemia, CT in EXTEM reflects the activity of FVII. Thromboelastometry was used to monitor hemostatic therapy with recombinant activated FVII (rFVIIa) during surgery. Laboratory tests (APTT, PV, FVII plasma activity) in patients with hypoproconvertinemia do not correlate with the hemostatic effect of rFVIIa (U. Martinowitz, M. Michaelson. Guidelines for the Use of Recombinant Activated Factor VII (rFVIIa) in Uncontrolled Bleeding: A Report by the Israeli Multidisciplinary rFVIIa Task Force Journal of Thrombosis and Haemostasis 2005, 640-48).

Больной О, 28 лет, страдающей гипопроконвертинемией, было выполнено лапароскопическое удаление кисты яичника. До и после оперативного вмешательства выполнялись коагулогические исследования, измерялась плазменная активность FVII, выполнялась тромбоэластометрия. Результаты исследований в динамике представлены в таблице 1. Как видно из табл. 1., до введения rFVIIa отмечалось выраженное удлинение ЕХТЕМCT, до 405 с (норма до 79 с). После введения rFVIIa у больной уменьшился ЕХТЕМCT с 405 с до 71 с, т.е. до нормы и лишь через 12 ч возникли показания к повторному введению rFVIIa (удлинение ЕХТЕМCT, до 116 с), хотя активность FVII в плазме была при этом 39%, а MHO 1,23.Patient O, 28 years old, suffering from hypoproconvertinemia, was performed laparoscopic removal of the ovarian cyst. Before and after surgery, coagulological studies were performed, the plasma activity of FVII was measured, and thromboelastometry was performed. The research results in dynamics are presented in table 1. As can be seen from the table. 1., before the introduction of rFVIIa, a marked elongation of EXTEM CT was observed, up to 405 s (normal up to 79 s). After rFVIIa administration, EXTEM CT decreased from 405 s to 71 s in the patient, i.e. to normal and only after 12 h there were indications for the repeated administration of rFVIIa (prolongation of EXTEM CT , up to 116 s), although the plasma FVII activity was 39%, and the MHO was 1.23.

Таким образом, использование РОТЭМ позволило контролировать у больной гемостаз во время операции и в послеоперационном периоде и принять решение о повторном введении rFVIIa.Thus, the use of ROTEM made it possible to control hemostasis in the patient during the operation and in the postoperative period and decide on the repeated administration of rFVIIa.

Figure 00000001
Figure 00000001

Figure 00000002
Figure 00000002

Пример 3. Диагностика дефицита FVExample 3. Diagnosis of FV deficiency

Больная Д., 18 лет, врожденный дефицит FV у нее был выявлен в возрасте 7 лет. Геморрагический синдром проявлялся маточными кровотечениями (плазменная активность FV 0,5%, АЧТВ 200 с, протромбин по Квику 10,7%). В тесте ЕХТЕМ выявлено удлинение СТ до 1953 с (норма до 79 с), в тесте INTEM - удлинение СТ до 1415 с (норма до 240 с). Показатель FIBTEMMCF = 17 мм позволил исключить дефицит фибриногена. Сохраняющееся удлинение СТ до 1069 с в тесте НЕРТЕМ позволило исключить действие гепарина как причины гипокоагуляции. На фигуре 5 представлены показатели тромбоэластометрии у больной с дефицитом FV: удлинение ЕХТЕМCT и INTEMCT, нормальный FIBTEMMCF, отсутствует нормализация СТ в тесте НЕРТЕМ.Patient D., 18 years old, had a congenital deficiency of FV at the age of 7 years. Hemorrhagic syndrome was manifested by uterine bleeding (plasma activity FV 0.5%, APTT 200 s, prothrombin according to Quick 10.7%). In the EXTEM test, CT elongation to 1953 s was detected (normal to 79 s), in the INTEM test, CT elongation to 1415 s (normal to 240 s). FIBTEM MCF = 17 mm eliminated fibrinogen deficiency. The continued CT lengthening up to 1069 s in the NERTEM test made it possible to exclude the action of heparin as the cause of hypocoagulation. The figure 5 presents the indicators of thromboelastometry in a patient with FV deficiency: lengthening EXTEM CT and INTEM CT , normal FIBTEM MCF , there is no normalization of ST in the NERTEM test.

При выполнении тестов со смесью цельной цитратной крови со стандартной плазмой, ЕХТЕМCT стал 79 с, INTEMCT - 202 с, т.е. нормализовались. При выполнении тестов со смесью цельной цитратной крови с плазмой, дефицитной по FV, сохранилось патологическое удлинение ЕХТЕМCT до 475 с и INTEMCT до 1060 с, что подтвердило дефицит FV. На фигуре 6 видно, что ЕХТЕМ и INTEM при постановке тестов смеси цельной крови больной с врожденным дефицитом FV со стандартной плазмой и смеси цельной крови больной с врожденным дефицитом FV и плазмой, дефицитной по FV. Происходит нормализация СТ в смеси со стандартной плазмой и сохраняется гипокоагуляция в смеси с дефицитной плазмой.When performing tests with a mixture of whole citrate blood with standard plasma, EXTEM CT became 79 s, INTEM CT - 202 s, i.e. normalized. When performing tests with a mixture of whole citrate blood with plasma deficient in FV, the pathological lengthening of EXTEM CT to 475 s and INTEM CT to 1060 s was preserved, which confirmed the deficiency of FV. Figure 6 shows that EXTEM and INTEM when setting up tests of a mixture of the whole blood of a patient with congenital deficiency of FV with standard plasma and a mixture of the whole blood of a patient with congenital deficiency of FV and plasma deficient in FV. Normalization of CT occurs in a mixture with standard plasma and hypocoagulation persists in a mixture with a deficient plasma.

Пример 4. Оценка эффективности гемостатической терапии у больной с дефицитом FVExample 4. Evaluation of the effectiveness of hemostatic therapy in a patient with FV deficiency

Больной И-вой, 21 года, с врожденным дефицитом FV (плазменная активность FV 0,5%) была выполнена имплантация венозной порт-системы. Коррекция гипокоагуляции проводилась трансфузией свежезамороженной плазмы и концентратом тромбоцитов, поскольку FV содержится в плазме и альфа-гранулах тромбоцитов (Gavva Chakri et al. Transfusion Management of Factor V Deficiency: Three Case Reports and Review of the Literature. Transfusion 2016, 1745-49). В таблице 2 представлены основные коагулогические показатели и результаты тромбоэластометрии до и после заместительных трансфузий. Особенностью данного клинического примера являлось то, что у больной в анамнезе были эпизоды венозных тромбозов после лечения свежезамороженной плазмой. Поэтому основной задачей лечения было компенсировать гипокоагуляцию таким образом, чтобы избежать гиперкоагуляции, сохраняя умеренную гипокоагуляцию, которая позволила бы выполнить оперативное вмешательство (табл. 2).Patient I-howl, 21 years old, with congenital deficiency of FV (plasma activity of FV 0.5%), implantation of a venous port system was performed. Correction of hypocoagulation was carried out by transfusion of freshly frozen plasma and platelet concentrate, since FV is contained in plasma and alpha granules of platelets (Gavva Chakri et al. Transfusion Management of Factor V Deficiency: Three Case Reports and Review of the Literature. Transfusion 2016, 1745-49). Table 2 presents the main coagulological indicators and the results of thromboelastometry before and after replacement transfusions. A feature of this clinical example was that the patient had a history of venous thrombosis after treatment with freshly frozen plasma. Therefore, the main objective of the treatment was to compensate for hypocoagulation in such a way as to avoid hypercoagulation, while maintaining moderate hypocoagulation, which would allow performing surgery (Table 2).

Figure 00000003
Figure 00000003

Как видно из таблицы 2, до операции отмечалось выраженное удлинение ЕХТЕМCT, до 484 с (норма до 79 с). После трансфузии плазмы и концентрата тромбоцитов у больной уменьшился ЕХТЕМCT 116 с, активность FV в плазме была при этом 19,5%, MHO 1,58. Использование РОТЭМ позволило контролировать у больной гемостаз во время операции, избежав тромботических осложнений.As can be seen from table 2, before the operation, a marked elongation of EXTEM CT was noted, up to 484 s (normal up to 79 s). After transfusion of plasma and platelet concentrate in the patient, EXTEM CT 116 s decreased, the FV activity in plasma was 19.5%, MHO 1.58. The use of ROTEM allowed the patient to control hemostasis during surgery, avoiding thrombotic complications.

Пример 5. Диагностика дефицита FVIIIExample 5. Diagnosis of deficiency FVIII

Больному А, 32 лет, диагноз гемофилия А был установлен в детском возрасте. В анамнезе отмечались рецидивирующие гемартрозы, кровотечения после экстракции зубов. Плазменная активность FVIII составляла 0,7-1,5%. При настоящем обследовании на фоне профилактической гемостатической терапии в коагулограмме: АЧТВ 57 с, протромбин по Квику 110%, фибриноген 2,4 г/л, активность FVIII 11%. При обследовании в соответствии с алгоритмом диагностики дефицита факторов свертывания с помощью РОТЭМ (фиг. 2), в тесте ЕХТЕМ не выявлено отклонений от нормы, в тесте INTEM выявлено удлинение СТ до 872 с (норма 240 с) (фиг 7). На фигуре 7 представлены показатели тромбоэластометрии больного гемофилией А (дефицит FVIII): удлинение INTEMCT, нормальный ЕХТЕМCT, отсутствует нормализация СТ в тесте НЕРТЕМ. Сохранение гипокоагуляции в тесте НЕРТЕМ исключило влияние гепарина (фигура 7). При выполнении теста INTEM со стандартной плазмой и плазмой, дефицитной по FVIII, выявлено укорочение INTEMCT до 232 сек в пробе со стандартной плазмой и сохранение удлинения INTEMCT до 1929 с в пробе с плазмой, дефицитной по FVIII (фигура 8), что подтверждает дефицит FVIII. Дальнейшее увеличение INTEMCT в пробе с дефицитной плазмой можно объяснить дилюцией и уменьшением концентрации FVIII. На фигуре 8 представлен тест INTEM при постановке тестов смеси цельной крови больного гемофилией А со стандартной плазмой и смеси цельной крови больного гемофилией А и плазмой, дефицитной по FVIII. Происходит нормализация СТ в смеси со стандартной плазмой и сохраняется гипокоагуляция в смеси с дефицитной плазмой.Patient A, 32 years old, was diagnosed with hemophilia A in childhood. A history of recurrent hemarthrosis, bleeding after tooth extraction. Plasma activity of FVIII was 0.7-1.5%. In this examination, against the background of prophylactic hemostatic therapy in a coagulogram: APTT 57 s, prothrombin according to Quick 110%, fibrinogen 2.4 g / l, FVIII activity 11%. When examining in accordance with the algorithm for diagnosing deficiency of coagulation factors using ROTEM (Fig. 2), no deviations from the norm were detected in the EXTEM test, in the INTEM test an extension of CT to 872 s was detected (normal 240 s) (Fig. 7). The figure 7 presents the indicators of thromboelastometry of a patient with hemophilia A (FVIII deficiency): extension of INTEM CT , normal EXTEM CT , CT normalization is absent in the NERTEM test. Preservation of hypocoagulation in the NERTEM test ruled out the effect of heparin (Figure 7). When performing the INTEM test with standard plasma and plasma deficient in FVIII, a shortening of INTEM CT to 232 seconds was detected in the sample with standard plasma and the extension of INTEM CT to 1929 s in the sample with plasma deficient in FVIII was preserved (figure 8), which confirms the deficit FVIII. A further increase in INTEM CT in a plasma-deficient sample can be explained by dilution and a decrease in FVIII concentration. The figure 8 presents the INTEM test when setting tests of a mixture of whole blood of a patient with hemophilia A with standard plasma and a mixture of whole blood of a patient with hemophilia A and plasma deficient in FVIII. Normalization of CT occurs in a mixture with standard plasma and hypocoagulation persists in a mixture with a deficient plasma.

Пример 6. Диагностика дефицита FIXExample 6. Diagnosis of FIX deficiency

У больного И., 15 лет, с рождения возникали спонтанные внутримышечные гематомы, носовые кровотечения, гемартрозы обоих коленных суставов. Диагностирована гемофилия В, тяжелая форма (FIX < 1%). При настоящем обследовании АЧТВ 151с, протромбин по Квику 71%, фибриноген 2,9 г/л, плазменная активность FIX 0,5%. При обследовании, в соответствии с алгоритмом диагностики дефицита факторов свертывания (фигура 2), в тесте ЕХТЕМ не выявлено отклонений от нормы, выявлено удлинение INTEMCT до 505 с (норма до 240 с). На фигуре 9 представлены показатели тромбоэластометрии у больного гемофилией В (дефицит FIX): удлинение INTEMCT, нормальный ЕХТЕМCT. С помощью теста НЕРТЕМ было исключено действие гепарина. При исследовании цельной крови со стандартной плазмой INTEMCT - 185 с, в тесте с дефицитной плазмой INTEMCT - 485 сек (фигура 10), что подтверждает диагноз гемофилии В. На фигуре 10 показан INTEM при постановке тестов смеси цельной крови больного гемофилией В со стандартной плазмой и смеси цельной крови больного гемофилией В и плазмой, дефицитной по FIX. Происходит нормализация СТ в смеси со стандартной плазмой и сохраняется гипокоагуляция в смеси с дефицитной плазмой.Patient I., aged 15, had spontaneous intramuscular hematomas, nosebleeds, and hemarthrosis of both knee joints since birth. Hemophilia B was diagnosed, severe (FIX <1%). In the current examination, APTT 151s, prothrombin according to Quick, 71%, fibrinogen 2.9 g / l, plasma FIX activity 0.5%. During the examination, in accordance with the algorithm for the diagnosis of coagulation factor deficiency (Figure 2), no deviations from the norm were detected in the EXTEM test, an INTEM CT elongation of up to 505 s was detected (normal to 240 s). The figure 9 presents the indicators of thromboelastometry in a patient with hemophilia B (FIX deficiency): extension of INTEM CT , normal EXTEM CT. Using the NERTEM test, heparin was excluded. In the study of whole blood with standard plasma INTEM CT - 185 s, in the test with a deficient plasma INTEM CT - 485 seconds (figure 10), which confirms the diagnosis of hemophilia B. Figure 10 shows INTEM when staging a mixture of the whole blood of a patient with hemophilia B with standard plasma and a mixture of whole blood of a patient with hemophilia B and plasma deficient in FIX. Normalization of CT occurs in a mixture with standard plasma and hypocoagulation persists in a mixture with a deficient plasma.

Пример 7. Диагностика дефицита фактора свертывания XIExample 7. Diagnosis of coagulation factor deficiency XI

Больная К., 44 лет, страдает гемофилией С. Жалоб на спонтанную кровоточивость не предъявляла, считала себя здоровой. Диагноз был установлен при обследовании перед хирургическим вмешательством: АЧТВ удлинено до 90 сек, протромбин по Квику 92%, фибриноген 3,3 г/л, активность FXI составила 0,7%. При обследовании в соответствии с алгоритмом диагностики дефицита факторов свертывания (фигура 2) в тесте ЕХТЕМ не выявлено отклонений от нормы, выявлено удлинение INTEMCT до 472 сек (норма до 240 сек). На фигуре 11 представлены показатели тромбоэластометрии у больной гемофилией С (дефицит FXI): удлинение INTEMCT, нормальный ЕХТЕМCT. С помощью теста НЕРТЕМ было исключено действие гепарина. При исследовании цельной крови больной со стандартной плазмой ЕМТЕМCT составил 203 с, в то время как в тесте с дефицитной плазмой INTEMCT - 637 с (фигура 12), что подтвердило наличие дефицита FXI как причины гипокоагуляции. На фигуре 12 INTEM при постановке тестов смеси цельной крови больной гемофилией С со стандартной плазмой и смеси цельной крови больной гемофилией С и плазмой, дефицитной по FXI. Происходит нормализация СТ в смеси со стандартной плазмой и сохраняется гипокоагуляция в смеси с дефицитной плазмой.Patient K., 44 years old, suffers from hemophilia C. She had no complaints about spontaneous bleeding, she considered herself healthy. The diagnosis was made during the examination before surgery: APTT was extended to 90 seconds, prothrombin according to Quick was 92%, fibrinogen was 3.3 g / l, FXI activity was 0.7%. When examining in accordance with the algorithm for the diagnosis of coagulation factor deficiency (Figure 2), no deviations from the norm were detected in the EXTEM test, an INTEM CT elongation of up to 472 seconds was detected (normal to 240 seconds). The figure 11 presents the indicators of thromboelastometry in a patient with hemophilia C (FXI deficiency): extension of INTEM CT , normal EXTEM CT. Using the NERTEM test, heparin was excluded. In the study of whole blood, the patient with standard plasma EMTEM CT was 203 s, while in the test with deficient plasma INTEM CT it was 637 s (Figure 12), which confirmed the presence of FXI deficiency as the cause of hypocoagulation. In figure 12, INTEM when setting tests for a mixture of whole blood of a patient with hemophilia C with standard plasma and a mixture of whole blood of a patient with hemophilia C and plasma deficient in FXI. Normalization of CT occurs in a mixture with standard plasma and hypocoagulation persists in a mixture with a deficient plasma.

Пример 8. Диагностика дефицита FXIIExample 8. Diagnosis of FXII deficiency

Больная Д, 47 лет, страдает болезнью Хагемана. Заболевание впервые диагностировано в возрасте 37 лет, когда накануне оперативного вмешательства было выявлено удлинение АЧТВ до 86 с, активность FXII составляла менее 1%. В соответствии с алгоритмом диагностики дефицита факторов свертывания (фигура 2) в тесте ЕХТЕМ не выявлено отклонений от нормы, выявлено удлинение INTEMCT до 1681 с (норма до 240 с). На фигуре 13 представлены показатели тромбоэластометрии у больной болезнью Хагемана (дефицит FXII) с: удлинение INTEMCT, нормальный ЕХТЕМCT. С помощью теста НЕРТЕМ было исключено действие гепарина. При исследовании цельной крови больной со стандартной плазмой INTEMCT нормализовался - 243 с, в то время как в тесте с плазмой, дефицитной по FXII, INTEMCT остался удлиненным - 694 с (фигура 14), что подтверждает дефицит FXII. На фигуре 14 INTEM при постановке тестов смеси цельной крови больной с дефицитом FXII со стандартной плазмой и смеси цельной крови больной с дефицитом FXII и плазмой, дефицитной по FXII. Происходит нормализация СТ в смеси со стандартной плазмой и сохраняется гипокоагуляция в смеси с дефицитной плазмой.Patient D, 47 years old, suffers from Hageman's disease. The disease was diagnosed for the first time at the age of 37 when, on the eve of surgery, an APTT extension of 86 s was detected, FXII activity was less than 1%. In accordance with the algorithm for diagnosing deficiency of coagulation factors (Figure 2), no deviations from the norm were detected in the EXTEM test, an extension of INTEM CT to 1681 s (normal to 240 s) was detected. The figure 13 presents the indicators of thromboelastometry in a patient with Hageman's disease (FXII deficiency) with: extension of INTEM CT , normal EXTEM CT. Using the NERTEM test, heparin was excluded. When examining whole blood, a patient with standard plasma INTEM CT returned to normal - 243 s, while in the test with plasma deficient in FXII, INTEM CT remained elongated - 694 s (Figure 14), which confirms the deficiency of FXII. In the figure 14 INTEM when staging tests of a mixture of a whole blood of a patient with FXII deficiency with standard plasma and a mixture of a whole blood of a patient with FXII deficiency and plasma deficient in FXII. Normalization of CT occurs in a mixture with standard plasma and hypocoagulation persists in a mixture with a deficient plasma.

Пример 9. Оценка эффективности гемостатической терапии у больного с врожденным дефицит FXIIExample 9. Evaluation of the effectiveness of hemostatic therapy in a patient with congenital FXII deficiency

Больному В, 54 лет, с диагнозом болезнь Хагемана, выполнено эндопротезирование коленного сустава. До операции в коагулограмме: АЧТВ 164 сек, концентрация фибриногена 3,8 г/л; протромбин по Квику 90 %, MHO 1.06; плазменная активность FXII 1%. При исследовании методом РОТЭМ цельной крови удлинение INTEMCT 933 сек (фиг. 15). После гемостатической терапии СЗП в коагулограмме АЧТВ сократилось до 45 сек. При исследовании методом РОТЭМ после терапии СЗП уменьшился до нормальных значений INTEMCT 193 сек (фиг. 16). В послеоперационном периоде каких-либо геморрагических и тромботических осложнений не наблюдалось.Patient B, 54 years old, with a diagnosis of Hageman's disease, underwent knee replacement. Before surgery, in a coagulogram: APTT 164 sec, fibrinogen concentration 3.8 g / l; prothrombin according to Quick 90%, MHO 1.06; plasma activity of FXII 1%. When examining the whole blood with the ROTEM method, the INTEM CT elongation was 933 sec (Fig. 15). After hemostatic therapy, FFP in the coagulogram of APTT was reduced to 45 seconds. In the study using the RTEM method after treatment, FFP decreased to normal INTEM CT values of 193 sec (Fig. 16). In the postoperative period, no hemorrhagic and thrombotic complications were observed.

Таким образом, тромбоэластометрия, выполненная со стандартной плазмой и плазмой, дефицитной по различным факторам свертывания крови, отразила дефицит отдельных исследуемых факторов свертывания крови, что говорит о высокой точности заявленного метода.Thus, thromboelastometry performed with standard plasma and plasma deficient in various coagulation factors reflected the deficiency of individual studied coagulation factors, which indicates the high accuracy of the claimed method.

Claims (1)

Способ выявления дефицита отдельных факторов свертывания крови, заключающийся в том, что при постановке теста ротационной тромбоэластометрии (РОТЭМ) и выявлении удлинения параметра, характеризующего время начала образования сгустка (СТ) в тестах внутреннего и внешнего пути свертывания крови (ЕХТЕМ и/или INTEM) с цельной цитратной кровью, выполняются дополнительно две пробы с добавлением к цельной цитратной крови в соотношении 2:1 либо стандартной плазмы, либо плазмы, дефицитной по исследуемому фактору свертывания, в случае нормализации параметра СТ в тестах ЕХТЕМ и/или INTEM в пробах со стандартной плазмой и сохранении удлиненного параметра СТ в пробах с плазмой, дефицитной по исследуемому фактору свертывания, диагностируется дефицит того или иного фактора свертывания крови.A method for detecting a deficiency of certain factors of blood coagulation, namely, when setting up a test of rotational thromboelastometry (ROTEM) and identifying an elongation of a parameter characterizing the time of onset of clot formation (CT) in tests of the internal and external blood coagulation pathways (EXTEM and / or INTEM) with whole citrate blood, two additional tests are performed with addition to whole citrate blood in a 2: 1 ratio of either standard plasma or plasma deficient in the coagulation factor under study, in the case of normalization of pairs CT meter in tests of EXTEM and / or INTEM in samples with standard plasma and preservation of the elongated parameter CT in samples with plasma deficient in the studied coagulation factor, a deficiency of one or another coagulation factor is diagnosed.
RU2019115780A 2019-05-22 2019-05-22 Method for detecting blood clotting factor deficiency by thromboelastometry RU2699798C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019115780A RU2699798C1 (en) 2019-05-22 2019-05-22 Method for detecting blood clotting factor deficiency by thromboelastometry

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019115780A RU2699798C1 (en) 2019-05-22 2019-05-22 Method for detecting blood clotting factor deficiency by thromboelastometry

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2699798C1 true RU2699798C1 (en) 2019-09-11

Family

ID=67989473

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019115780A RU2699798C1 (en) 2019-05-22 2019-05-22 Method for detecting blood clotting factor deficiency by thromboelastometry

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2699798C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2786591C2 (en) * 2020-10-05 2022-12-22 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ивановский государственный химико-технологический университет" Method for determining blood plasma coagulation indicators - thrombin activity, plasma recalcification time and plasma tolerance to heparin

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2129282C1 (en) * 1996-08-05 1999-04-20 Алтайский государственный медицинский университет Method of determining thrombophilia caused by resistance of v factor to activated protein c
RU2683933C2 (en) * 2012-09-28 2019-04-03 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Method for evaluating reaction of blood coagulation

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2129282C1 (en) * 1996-08-05 1999-04-20 Алтайский государственный медицинский университет Method of determining thrombophilia caused by resistance of v factor to activated protein c
RU2683933C2 (en) * 2012-09-28 2019-04-03 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Method for evaluating reaction of blood coagulation

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ОФС.1.8.2.0003.15 Определение активности факторов свертывания крови, МЗ РФ, 2015, стр. 1-20, найдено 06.08.2019 в Интернете [on line] на сайте https://pharmacopoeia.ru/ofs-1-8-2-0003-15-opredelenie-aktivnosti-faktorov-svertyvaniya-krovi/. ГАЛСТЯН Г.М. Нарушения гемостаза, обусловленные дефицитом витамин К-зависимых факторов свертывания крови - патогенез, способы коррекции и рекомендации по лечению, Гематол. и трансфузиол., 2012, 57, 2, стр. 7-21, найдено 06.08.2019 в Интернете [on line] на сайте https://cyberleninka.ru/article/v/narusheniya-gemostaza-obuslovlennye-defitsitom-vitamin-k-zavisimyh-faktorov-svertyvaniya-krovi-patogenez-sposoby-korrektsii-i. LAURIDSEN S.V. et al. Coagulation Profile after Spontaneous Intracerebral Hemorrhage: A Cohort Study (Article), J. of Stroke and Cerebrovascular Dis., 2018, 27, 11, pp. 2951-2961, найдено 06.08.2019 в Интернете [on line] на сайте https://www.researchgate.net/publication/326701139_Coagulation_Profile_after_Spontaneous_Intracerebral_Hemor *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2786591C2 (en) * 2020-10-05 2022-12-22 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ивановский государственный химико-технологический университет" Method for determining blood plasma coagulation indicators - thrombin activity, plasma recalcification time and plasma tolerance to heparin

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mackie et al. Guidelines on the laboratory aspects of assays used in haemostasis and thrombosis.
Huissoud et al. Coagulation assessment by rotation thrombelastometry in normal pregnancy
EP2235542B1 (en) Diagnostic in vitro method for assessing von willebrand disease and increased bleeding risk associated with von willebrand disease and acquired or congenital disorders of platelet function
US20130065260A1 (en) Compositions, Methods and Uses for Simultaneous Assay of Thrombin and Plasmin Generation
Mijovski Advances in monitoring anticoagulant therapy
Thomas et al. Bleeding of unknown cause and unclassified bleeding disorders; diagnosis, pathophysiology and management
Duncan et al. One-stage factor VIII assays
Elbaz et al. An illustrated review of bleeding assessment tools and common coagulation tests
US5766869A (en) Factor V ratio blood test for susceptibility to thromboembolism
Stegnar Thrombophilia screening–at the right time, for the right patient, with a good reason
Rodgers et al. Chromogenic factor VIII assays for improved diagnosis of hemophilia A
Kumano et al. Lupus anticoagulant mixing tests for multiple reagents are more sensitive if interpreted with a mixing test‐specific cut‐off than index of circulating anticoagulant
Kitchen et al. Laboratory tests of hemostasis
Boknäs et al. Associations between hemostatic markers and mortality in COVID-19–Compounding effects of D-dimer, antithrombin and PAP complex
Vucelic et al. Comparison of standard fibrinogen measurement methods with fibrin clot firmness assessed by thromboelastometry in patients with cirrhosis
Odegard et al. Evaluation of the coagulation system in children with two-ventricle congenital heart disease
Chantarangkul et al. Evaluation of a fully automated centrifugal analyzer for performance of hemostasis tests.
RU2699798C1 (en) Method for detecting blood clotting factor deficiency by thromboelastometry
Mackie et al. Lupus anticoagulant measurement
Okabayashi et al. A comparative study of point-of-care prothrombin time in cardiopulmonary bypass surgery
Ma et al. Evaluation of the bleeding patient
Othman et al. Laboratory Testing of Hemostasis in Pregnancy: A Brief Overview
Sharma et al. An approach to a patient with Bleeding Disorder
Kato et al. Differences in the Composition of Activated Partial Thromboplastin Time (APTT) Reagents Affect Clot Waveform Analysis
US20220252624A1 (en) Method for determining the risk of a thromboembolic event