RU2699519C2 - Method for selection of embryo donor cows in process of embryo transplantation - Google Patents
Method for selection of embryo donor cows in process of embryo transplantation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2699519C2 RU2699519C2 RU2018146103A RU2018146103A RU2699519C2 RU 2699519 C2 RU2699519 C2 RU 2699519C2 RU 2018146103 A RU2018146103 A RU 2018146103A RU 2018146103 A RU2018146103 A RU 2018146103A RU 2699519 C2 RU2699519 C2 RU 2699519C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- response
- ovarian
- embryo
- ovary
- volume
- Prior art date
Links
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 title claims abstract description 85
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 81
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 title claims abstract description 48
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 23
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims abstract description 87
- 230000004044 response Effects 0.000 claims abstract description 72
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 claims abstract description 55
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 46
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 claims abstract description 24
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims abstract description 6
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims abstract description 3
- 210000004246 corpus luteum Anatomy 0.000 claims description 49
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 13
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 17
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 15
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 10
- 206010042573 Superovulation Diseases 0.000 description 9
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- PXGPLTODNUVGFL-BRIYLRKRSA-N (E,Z)-(1R,2R,3R,5S)-7-(3,5-Dihydroxy-2-((3S)-(3-hydroxy-1-octenyl))cyclopentyl)-5-heptenoic acid Chemical compound CCCCC[C@H](O)C=C[C@H]1[C@H](O)C[C@H](O)[C@@H]1CC=CCCCC(O)=O PXGPLTODNUVGFL-BRIYLRKRSA-N 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 7
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 7
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 7
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 7
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 7
- 230000001456 gonadotroph Effects 0.000 description 6
- 244000309465 heifer Species 0.000 description 5
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 5
- 108010060374 FSH Receptors Proteins 0.000 description 4
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 4
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 4
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 101001039035 Homo sapiens Lutropin-choriogonadotropic hormone receptor Proteins 0.000 description 3
- 102100040788 Lutropin-choriogonadotropic hormone receptor Human genes 0.000 description 3
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 3
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 3
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 3
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000000938 luteal effect Effects 0.000 description 3
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 241000338168 Tringa Species 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000000893 inhibin Substances 0.000 description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 2
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 201000004535 ovarian dysfunction Diseases 0.000 description 2
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 2
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 2
- 238000012285 ultrasound imaging Methods 0.000 description 2
- 108010005853 Anti-Mullerian Hormone Proteins 0.000 description 1
- 101000877869 Bos taurus Follicle-stimulating hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000008175 FSH Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- 108010021290 LHRH Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 102100030173 Muellerian-inhibiting factor Human genes 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 206010033266 Ovarian Hyperstimulation Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- 208000005448 Trichomonas Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010044620 Trichomoniasis Diseases 0.000 description 1
- 206010047400 Vibrio infections Diseases 0.000 description 1
- 101150087698 alpha gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000868 anti-mullerian hormone Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000012173 estrus Effects 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000001733 follicular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000013277 forecasting method Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000037120 immobility Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000029849 luteinization Effects 0.000 description 1
- 230000029860 luteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000007257 malfunction Effects 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 102000003998 progesterone receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000468 progesterone receptors Proteins 0.000 description 1
- 229910052705 radium Inorganic materials 0.000 description 1
- HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N radium atom Chemical compound [Ra] HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 210000003905 vulva Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/02—Breeding vertebrates
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Housing For Livestock And Birds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к воспроизводству сельскохозяйственных животных, а именно к области репродукции крупного рогатого скота, и может быть использовано в научной и практической работе по управлению физиологией размножения животных.The invention relates to the reproduction of farm animals, and in particular to the field of reproduction of cattle, and can be used in scientific and practical work on the management of the physiology of animal reproduction.
Применение технологии трансплантации эмбрионов, оцениваемой по наличию рожденных телят, направлено на получение максимально возможного количества зародышей от генетически ценных, высокопродуктивных коров-доноров с целью пересадки эмбрионов телкам-реципиентам, в качестве которых, как правило, используют беспородных и низкопродуктивных животных, не предназначенных для воспроизводства ремонтного молодняка. Данная технология включает в себя поэтапно выполняемый технологический процесс, в котором результативность каждого последующего этапа в значительной мере зависит от эффективности исполнения предыдущего. Рассматривая весь алгоритм процесса данной технологии, стоит подчеркнуть, что начальный этап состоит в отборе коров-доноров эмбрионов с высокой племенной ценностью, а также в отборе коров-реципиентов. Последующие технологические этапы включают проведение стимуляции полиовуляции у доноров и их искусственное осеменение, извлечение эмбрионов у доноров, проведение оценки полученных эмбрионов по качеству, пересадку эмбрионов реципиентам при предварительном проведении синхронизации половых циклов реципиентов и доноров, криоконсервацию эмбрионов (при необходимости). Реализуемый технологический процесс осуществляют с применением комплекса методов и конструктивно-технологических решений.The use of embryo transplant technology, estimated by the presence of born calves, is aimed at obtaining the maximum possible number of embryos from genetically valuable, highly productive donor cows with the aim of transplanting embryos to recipient heifers, which are usually used for outbred and low-productivity animals that are not intended for reproduction of repair young animals. This technology includes a phased process, in which the effectiveness of each subsequent stage largely depends on the efficiency of the previous one. Considering the entire process algorithm of this technology, it is worth emphasizing that the initial stage consists in the selection of donor cows of embryos with high breeding value, as well as in the selection of recipient cows. The subsequent technological steps include stimulation of poliovulation from donors and their artificial insemination, extraction of embryos from donors, assessment of the quality of the obtained embryos, transplantation of embryos to recipients during preliminary synchronization of the sexual cycles of recipients and donors, embryo cryopreservation (if necessary). Implemented technological process is carried out using a set of methods and structural and technological solutions.
Наличие или отсутствие качественных эмбрионов, полученных в процессе проведения технологии трансплантации эмбрионов, во многом предопределяется тем, насколько качественно проведен первый (начальный) этап данного мероприятия, состоящий в отборе коров-доноров эмбрионов. Процесс технологии трансплантации эмбрионов может быть прекращен уже на втором, а также на любом из последующих этапов вплоть до последнего, что значительно усложняет задачу отбора коров-доноров эмбрионов на начальном этапе технологии. Из ветеринарной практики известно, что ответная реакция яичников на экзогенные гонадотропины имеет довольно широкий диапазон значений: число овуляций может составлять от 0 до 50 желтых тел на яичниках (на одну корову). При этом, порядка 30% коров-доноров имеют низкое число овуляций (от 1 до 3-х желтых тел на яичниках, на одну корову) и извлечение эмбрионов становится нецелесообразным, а еще одна треть доноров не реагирует на введенный гонадотропин (число овуляций - 0 желтых тел на яичниках, на одну корову) (Bovine Embryo Transfer and Its Application: Arwiew./ Т. Bekele, E. Mekuriaw, B. Walelegn.// Journal of Health, Medicine and Nursing, 2016. - Vol. 26. - P. 48-60). Стоит отметить, что тот или иной вышеописанный результат ответной реакции яичников на введенные гонадотропины становится очевидным лишь по факту окончания мероприятия по стимуляции полиовуляции. В связи с изложенным, исходное поголовье телок или коров для использования в качестве доноров эмбрионов должно превышать планируемое число доноров в 2-3 раза (Попов Д.В., Бригида А.В., Косовский Г.Ю. Руководство по получению и трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. - М.: КлабПринт, 2017 г., страница 8. Сайт Интернет: http://ceerb.ru/Rukovodstvo.pdf, 2018 г. ), что влечет за собой значительные дополнительные затраты (трудовые, временные, финансовые) не только на проведение стимуляции полиовуляции, но и на содержание поголовья крупного рогатого скота. The presence or absence of high-quality embryos obtained in the process of embryo transplantation technology is largely determined by how well the first (initial) stage of this event was carried out, consisting in the selection of embryo donor cows. The process of technology for embryo transplantation can be stopped already at the second, as well as at any of the subsequent stages up to the last, which greatly complicates the task of selecting donor cows for embryos at the initial stage of technology. It is known from veterinary practice that the response of the ovaries to exogenous gonadotropins has a fairly wide range of values: the number of ovulations can be from 0 to 50 yellow bodies on the ovaries (per cow). At the same time, about 30% of donor cows have a low number of ovulations (from 1 to 3 yellow bodies on the ovaries, per cow) and embryo extraction becomes impractical, and another third of donors do not respond to the injected gonadotropin (the number of ovulations is 0 corpus luteum on the ovaries, per cow) (Bovine Embryo Transfer and Its Application: Arwiew./ T. Bekele, E. Mekuriaw, B. Walelegn.// Journal of Health, Medicine and Nursing, 2016. - Vol. 26. - P. 48-60). It is worth noting that one or the other of the above-described result of the response of the ovaries to the injected gonadotropins becomes apparent only after the end of the event to stimulate polyovulation. In connection with the above, the initial number of heifers or cows for use as embryo donors should exceed the planned number of donors by 2–3 times (Popov D.V., Brigida A.V., Kosovsky G.Yu. Guidelines for the production and transplantation of embryos cattle. - M.: ClubPrint, 2017, page 8. Website: http://ceerb.ru/Rukovodstvo.pdf, 2018), which entails significant additional costs (labor, time, financial ) not only on the stimulation of poliovulation, but also on the content of the livestock of cattle.
Под ответной реакцией яичников на стимуляцию полиовуляции экзогенными гонадотропинами понимают индуцированный физиологический процесс роста и созревания на двух яичниках множества фолликулов, количество которых является учетным показателем яичникового ответа. Однако способы подсчета активированных стимуляцией фолликулов (способы ректопальпаторный и ультразвукового исследования) имеют существенные недостатки. При использовании ректопальпаторного способа, как показывает практика, большая часть фолликулов при их пальпировании разрываются, фолликулярная жидкость вытекает и недозревшие яйцеклетки (ооциты) погибают, что негативно влияет не только на точность подсчета, но на исход мероприятия по стимуляции полиовуляции. УЗИ-сканер дает изображение только в одной плоскости сканирования, где не могут быть отображены все имеющиеся на яичнике фолликулы, а при сканировании в разных проекциях на изображениях могут быть отражены одни и те же фолликулы совместно с теми фолликулами, которые не были запечатлены в других проекциях, что влечет за собой искажение результатов подсчета созревающих фолликулов. В связи с изложенным, ответную реакцию яичников оценивают по иному показателю - по показателю «количество желтых тел», определяемомоу на стадии созревания и овуляции фолликулов. Так как каждый из множества созревших и овулировавших фолликулов (активированных стимуляцией полиовуляции) продуцирует одну яйцеклетку, пригодную для оплодотворения, то количество желтых тел (число овуляций), образованных на месте созревших фолликулов на поверхности яичников, ассоциируют с идентичным количеством созревших и овулировавших фолликулов. Желтые тела отчетливо пальпируются, не повреждаются и сохраняют свою структуру при подсчете ректопальпаторным способомBy the response of the ovaries to stimulation of poliovulation with exogenous gonadotropins is understood the physiological induced process of growth and maturation of two follicles on two ovaries, the number of which is a reference indicator of the ovarian response. However, methods for counting follicle-activated stimulation (rectopalpatory and ultrasound methods) have significant drawbacks. When using the rectal palpation method, as practice shows, the majority of follicles rupture when palpated, follicular fluid flows out and immature eggs (oocytes) die, which negatively affects not only the accuracy of counting, but also the outcome of measures to stimulate polyovulation. An ultrasound scanner gives an image in only one scanning plane, where all the follicles on the ovary cannot be displayed, and when scanning in different projections, the same follicles can be reflected on the images together with those follicles that were not captured in other projections , which entails a distortion of the counting results of ripening follicles. In connection with the foregoing, the response of the ovaries is evaluated according to a different indicator - according to the indicator "number of yellow bodies", determined at the stage of follicular maturation and ovulation. Since each of the many matured and ovulated follicles (activated by stimulation of polyovulation) produces one egg suitable for fertilization, the number of corpus luteum (the number of ovulations) formed at the site of mature follicles on the surface of the ovaries is associated with an identical number of matured and ovulated follicles. The corpus luteum is clearly palpated, not damaged and retains its structure when counted by rectopalpatory method
До настоящего времени нерешенной проблемой при выполнении технологии трансплантации эмбрионов остается отсутствие надежных методов прогнозирования ответной реакции яичников на введение гонадотропинов, что значительно снижает эффективность отбора коров-доноров на начальном этапе данной технологии и негативно влияет на результативность технологии в целом.Until now, the unresolved problem in the implementation of embryo transplantation technology is the lack of reliable methods for predicting the response of the ovaries to the administration of gonadotropins, which significantly reduces the efficiency of selection of donor cows at the initial stage of this technology and negatively affects the effectiveness of the technology as a whole.
В течение десятилетий активно и в различных направлениях ведется поиск эффективных прогностических критериев ответной реакции яичников, с помощью которых можно было бы предсказать результативность мероприятия по стимуляции полиовуляции. Но вследствие того, что качество реакционного ответа яичников имеет многофакторную зависимость (индивидуальные физиологические и анатомические особенности животного, генетическая предрасположенность к низкой суперовуляторной реакции яичников на гонадотропины, передаваемая потомству, гормональный статус, температурные условия содержания, кормовой рацион и др.), проблема разработки методов прогноза в настоящее время остается актуальной (Факторы, влияющие на реакционный ответ яичников коров-доноров эмбрионов при введении экзогенных гонадотропинов/ А.В. Бригида, С.А. Бурсаков, О.А. Скачкова, и др.// Достижения науки и техники АПК, 2018. - Т. 32. №6. - С. 56-63.).For decades, actively and in various directions, a search has been conducted for effective prognostic criteria for the response of the ovaries, with the help of which it would be possible to predict the effectiveness of measures to stimulate poliovulation. But due to the fact that the quality of the ovarian reaction response has a multifactorial dependence (individual physiological and anatomical characteristics of the animal, a genetic predisposition to a low superovulatory reaction of the ovaries to gonadotropins, transmitted to the offspring, hormonal status, temperature conditions, food ration, etc.), the problem of developing methods the prognosis currently remains relevant (Factors affecting the reaction of the ovaries of embryo-donor cows with the introduction of exogenous gonadotropins / A.V. Brigida, S.A. Bursakov, O.A. Skachkov, and others // Achievements of science and technology of the agro-industrial complex, 2018. - V. 32. No. 6. - S. 56-63.).
В качестве предиктора ответной реакции яичников на экзогенные гонадотропины рассматривают, например, показатель концентрации антимюллерова гормона (АМГ) в крови животного, влияющего на результат роста и количества фолликулярных клеток (The BOC-ELISA, a ruminant specific АМН immunoassay, improves the determination of plasma АМН concentration and correlation with embryo production in cattle / N. Arouche, J-Y. Picard, D. Monniaux, etc. // Theriogenology. 2015. Vol. 84. No. 8. Pp. 1397-1404; Regulation of Anti-Mullerian Hormone and its Receptor Expression around Follicle Deviation in Cattle / G.F. Ilha, M.T. Rovani, B.G. Gasperin, etc. // Reproduction in Domestic Animals. 2016. Vol. 51. №2. Pp. 188-194; Relationship between follicle population, АМН concentration and fertility in cattle / P.S. Baruselli, E.O.S. Batista, L.M. Vieira, etc. // Animal Reproduction. 2015. Vol. 12. No. 3. Pp. 487-497). Однако роль АМГ в фолликулогенезе крупного рогатого скота разнообразна и до конца не изучена, отсутствуют точные интервалы в значении уровня АМГ, при которых может быть надежно спрогнозирован уровень реакционного ответа яичников коров на введенные экзогенные гонадотропины.As a predictor of the response of the ovaries to exogenous gonadotropins, consider, for example, an indicator of the concentration of antimuller hormone (AMH) in the blood of an animal that affects the result of growth and the number of follicular cells (The BOC-ELISA, a ruminant specific AMN immunoassay, improves the determination of plasma AMN concentration and correlation with embryo production in cattle / N. Arouche, J.Y. Picard, D. Monniaux, etc. // Theriogenology. 2015. Vol. 84. No. 8. Pp. 1397-1404; Regulation of Anti-Mullerian Hormone and its Receptor Expression around Follicle Deviation in Cattle / GF Ilha, MT Rovani, BG Gasperin, etc. // Reproduction in Domestic Animals. 2016. Vol. 51. No. 2. Pp. 188-194; Relationship between follicle population, AMS concentration and fertility in cattle / P.S. Baruselli, E.O.S. Batista, L.M. Vieira, etc. // Animal Reproduction. 2015. Vol. 12. No. 3. Pp. 487-497). However, the role of AMH in cattle folliculogenesis is diverse and has not been fully studied; there are no exact intervals in the level of AMH at which the level of reaction of bovine ovaries to introduced exogenous gonadotropins can be reliably predicted.
В последнее время уделяется большое внимание разработкам молекулярно-генетических маркеров, обладающих предиктивной способностью и позволяющих эффективно предсказывать уровень полиовуляторной реакции яичников у доноров. Известны исследования по поиску геномных ассоциаций у молочного скота по признакам суперовуляторного ответа. В качестве предикторов суперовуляции сообщалось о генах рецептора фолликулостимулирующего гормона (РФСГ), ингибина альфа (INHA), гена прогестерона (PGR), фактора роста и дифференциации 9 (GDF9), лютеинизирующего гормона/рецептора хориогонадотропина (ЛГХГЧР) и рецептора прогестерона (An Mspl polymorphism in the inhibin alpha gene and its associations with superovulation traits in Chinese Holstein cows / K.Q. Tang, S.J.Li, W.C. Yang, etc. // Molecular Biology Reproduction. 2011. Vol. 38. №1. Pp. 17-21; Polymorphisms of the bovine luteinizing hormone/choriogonadotropin receptor (LHCGR) gene and its association with superovulation traits / W.C. Yang, K.Q. Tang, S.J. Li, etc. // Molecular Biology Reports. 2012. Vol. 39. №3. Pp. 2481-2487; Two novel SNPs of the type I gonadotropin releasing hormone receptor gene and their associations with superovulation traits in Chinese Holstein cows / W.C. Yang, S.J. Li, Y.H. Xie, etc. // Livestock Science. 2011. Vol. 136. Pp. 164-168). Во всех случаях авторы указывают на ассоциации между полиморфизмами в этих генах и различными характеристиками (признаками) суперовуляции (тотальное количество яйцеклеток, количество неоплодотворенных яйцеклеток, количество дегенерированных эмбрионов, количество переносимых эмбрионов). Так, был обнаружен однонуклеотидный полиморфизм (ОНП) в гене рецептора ФСГ (РФСГ), расположенном на хромосоме 11, перспективный для выявления коров-доноров (Identification of single nucleotide polymorphisms in the bovine follicle-stimulating hormone receptor and effects of genotypes on superovulatory response traits / A.T. Cory, C.A. Price, R. Lefebvre, etc. // Animal Genetics. 2013. Vol. 44. №2. Pp. 197-201). Также был обнаружен ОНП G-278A, расположенный в 5'- нетранслируемой области гена РФСГ, служащий маркером суперовуляторного ответа (Polymorphisms in 5' upstream rigion of the FSH receptor gene, and their association with superovulation traits in Chinese Holstein cows / W.C. Yang, S.J. Li, K.Q. Tang, etc. // Animal Reproduction Science. 2010. Vol. 119. №3-4. Pp. 172-177). Эти результаты показали, что ген рецептора ФСГ представляет собой потенциальный маркер реакции на суперовуляцию и может быть использован в качестве предиктора для суперовуляции. Однако вышеперечисленные работы, представляющие интерес для разработки экспресс-тестов, позволяющих предсказать полиовуляторный ответ у коров-доноров еще до момента введения экзогенных гонадотропинов, на данный момент времени находятся на стадии экспериментальных исследований. Кроме того, методы полимеразной цепной реакции (ПЦР), с помощью которых идентифицируют упомянутые маркеры, не являются на сегодняшний день методами, массово применяемыми в животноводческих хозяйствах.Recently, much attention has been paid to the development of molecular genetic markers with predictive ability and allowing to effectively predict the level of poliovulatory ovarian response in donors. Studies are known to search for genomic associations in dairy cattle by signs of a superovulatory response. As predictors of superovulation, follicle-stimulating hormone receptor (RFHH), inhibin alpha (INHA), progesterone gene (PGR), growth factor and differentiation 9 (GDF9), luteinizing hormone / choriogonadotropin receptor (LHHGHR) and progesterone receptor M receptor genes were reported in the inhibin alpha gene and its associations with superovulation traits in Chinese Holstein cows / KQ Tang, SJLi, WC Yang, etc. // Molecular Biology Reproduction. 2011. Vol. 38. No. 1. Pp. 17-21; Polymorphisms of the bovine luteinizing hormone / choriogonadotropin receptor (LHCGR) gene and its association with superovulation traits / WC Yang, KQ Tang, SJ Li, etc. // Molecular Biology Reports. 2012. Vol. 39. No. 3. Pp. 2481-2487; Two novel SNPs of the type I gonadotropin releasing hormone receptor gene and their associations with superovulation traits in Chinese Holstein cows / W.C. Yang, S.J. Li, Y.H. Xie, etc. // Livestock Science. 2011. Vol. 136. Pp. 164-168). In all cases, the authors indicate associations between polymorphisms in these genes and various characteristics (characters) of superovulation (total number of eggs, number of unfertilized eggs, number of degenerated embryos, number of transferred embryos). Thus, a single nucleotide polymorphism (SNP) was found in the FSH receptor gene (RFSG) located on chromosome 11, which is promising for identifying donor cows (Identification of single nucleotide polymorphisms in the bovine follicle-stimulating hormone receptor and effects of genotypes on superovulatory response traits / AT Cory, CA Price, R. Lefebvre, etc. // Animal Genetics. 2013. Vol. 44. No. 2. Pp. 197-201). An SNP G-278A was also found, located in the 5'-untranslated region of the RFHG gene, which serves as a marker of the superovulatory response (Polymorphisms in 5 'upstream rigion of the FSH receptor gene, and their association with superovulation traits in Chinese Holstein cows / WC Yang, SJ Li, KQ Tang, etc. // Animal Reproduction Science. 2010. Vol. 119. No. 3-4. Pp. 172-177). These results showed that the FSH receptor gene is a potential marker of the response to superovulation and can be used as a predictor for superovulation. However, the abovementioned studies, which are of interest for the development of rapid tests to predict the polio-ovulatory response in donor cows even before the introduction of exogenous gonadotropins, are currently at the stage of experimental studies. In addition, the methods of polymerase chain reaction (PCR), with the help of which the mentioned markers are identified, are not currently methods widely used in livestock farms.
Одним из способов, наиболее часто применяемых в производственной практике на технологическом этапе отбора коров-доноров, является способ прогнозирования яичникового ответа на введенные гонадотропины, согласно которому учитывают индивидуальные особенности суперовуляции за счет проведения разовой гормональной обработки животного, отобранного в качестве донора эмбрионов по селекционным признакам и клиническому состоянию здоровья (Попов Д.В., Бригида А.В., Косовский Г.Ю. Руководство по получению и трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота. - М.: КлабПринт, 2017 г., страницы 7-9. Сайт Интернет: http://ceerb.ru/Rukovodstvo.pdf, 2018 г. ). Для проведения разовой гормональной обработки, аналогично общепринятой процедуре стимуляции полиовуляции, животному вводят гонадотропный препарат, после чего стимулируют половую охоту препаратами простогландинового ряда, осеменяют животного и на 7-й день индуцированного полового цикла проводят подсчет количества желтых тел (число овуляций) на поверхности яичников. При диагностированном числе овуляций 4 и более желтых тел на яичниках животное определяют в специализированную группу коров-доноров. Коров с более низким числом овуляций (менее 4-х желтых тел на яичнике) не переводят в группу доноров, так как при таком реакционном ответе ооциты часто неравноценны по качеству (незрелые ооциты, нарушение структуры клеток), что может быть причиной сбоев на этапе оплодотворения. Коров не переводят в группу животных-доноров также при отсутствии реакции яичников на гормональную обработку.One of the methods most often used in industrial practice at the technological stage of donor cow selection is a method for predicting the ovarian response to introduced gonadotropins, according to which individual characteristics of superovulation are taken into account due to a single hormonal treatment of the animal selected as a donor of embryos for selection and clinical health status (Popov D.V., Brigida A.V., Kosovsky G.Yu. Guidelines for the production and transplantation of large horn embryos that cattle. - M.: ClubPrint, 2017, pages 7-9. Website: http://ceerb.ru/Rukovodstvo.pdf, 2018). To carry out a single hormonal treatment, similarly to the generally accepted procedure for stimulating poliovulation, a gonadotropic drug is administered to an animal, after which it is stimulated by sexual preparations of the prostaglandin series, the animal is inseminated, and on the 7th day of the induced sexual cycle, the number of yellow bodies (the number of ovulations) is calculated on the surface of the ovaries. With a diagnosed number of ovulation of 4 or more yellow bodies on the ovaries, the animal is identified in a specialized group of donor cows. Cows with a lower number of ovulation (less than 4 corpus luteum on the ovary) are not transferred to the donor group, since in this reaction the oocytes are often of unequal quality (immature oocytes, cell structure impairment), which may cause malfunctions during the fertilization stage . Cows are not transferred to the group of animal donors also in the absence of an ovarian reaction to hormonal processing.
Недостатком вышеизложенного метода является то, что отбирают коров-доноров на основе прогнозируемого показателя - количества желтых тел на яичниках (число овуляций), определяемого после факта проведения разовой гормональной обработки. Учитывая производственную ветеринарную практику центров, занимающихся получением эмбрионов, где корова-донор подлежит гонадотропной обработке 4-6 раз в год, вышеприведенные прогностические критерии, определяемые на технологическом этапе отбора при проведении разовой гормональной обработки, недостаточно точно отражают репродуктивные возможности коров на момент поочередно проводимых в течение года мероприятий по стимуляции полиовуляции. Функциональное состояние половой системы коровы-донора изменяется после каждой сессии стимуляции полиовуляции и практически не коррелирует с показателями, полученными при проведении предыдущих процедур индуцирования полиовуляции. Каждая инициированная фармакологическим способом полиовуляция донора может привести к такому осложнению как синдром гиперстимуляции яичников, в результате которого образуется большое количество неовулировавших фолликулов, что приводит к образованию поликистозных гинекологических патологий, к изменению в структурах тканей яичников и нарушению их функциональной деятельности. Кроме того, факторами риска, приводящими к снижению или к отсутствию числа овуляций, могут служить производственные условия содержания доноров (алиментарные, экологические, климатические и т.п.), сезон года, физиологические особенности животных, их метаболический и гормональный статус в заданное время.The disadvantage of the above method is that donor cows are selected based on the predicted indicator - the number of yellow bodies on the ovaries (the number of ovulations), determined after the fact of a single hormonal treatment. Considering the production veterinary practice of embryo-receiving centers where the donor cow is subject to gonadotropic treatment 4-6 times a year, the above prognostic criteria, determined at the technological stage of selection during a single hormonal treatment, do not accurately reflect the reproductive capabilities of cows at the time of alternating during the year of activities to stimulate poliovulation. The functional state of the reproductive system of the donor cow changes after each session of stimulation of poliovulation and practically does not correlate with the indices obtained during previous procedures of inducing polyovulation. Each donor poliovulation initiated by the pharmacological method can lead to such a complication as ovarian hyperstimulation syndrome, which results in the formation of a large number of neovulated follicles, which leads to the formation of polycystic gynecological pathologies, to a change in the structures of the ovarian tissues and a violation of their functional activity. In addition, occupational conditions for the maintenance of donors (alimentary, environmental, climatic, etc.), the season of the year, physiological characteristics of animals, their metabolic and hormonal status at a given time can serve as risk factors leading to a decrease or absence of the number of ovulations.
Известен экспресс-метод отбора коров для получения эмбрионов, согласно которому прогнозируют наличие ответной реакции яичников на введенные гонадотропины с возможностью оценки вариабельности яичникового ответа (прототип - Прогнозирование эмбриопродуктивности коров-доноров на основании эхографической характеристики яичников/ А.В. Бригида, В.И. Сорокин, С.Н. Ковальчук, и др.// Сельскохозяйтсвенная биология, 2018. Т. 53. №4. - С. 753-761.). В соответствии со способом, у коровы-донора проводят эндоректальное исследование яичников и желтых тел с использованием УЗИ-сканера. Затем проводят постпроцессинговую морфометрию полученных эхографических изображений путем обработки с использованием графического редактора ImageJ (National Institute of Health, США). Определяют длину, ширину и площадь яичников и желтых тел в качестве параметров их функциональной активности. Показатели рассчитывают с учетом длины прямого отрезка, ломаной линии, длины окружности неправильной формы, площади геометрической фигуры, угла проекции двух отрезков. Схематично отображают проекции структур на эхограмме. Определяют площадь яичника, а также площадь желтого тела по формуле для эллипсоида: S=πRr, где R и r - соответственно большая и малая полуоси. Затем проводят вычисление соотношения площади желтого тела к площади яичника в процентном выражении, по показателю которого прогнозируют ответную реакцию яичников на введенные гонадотропные препараты. При значении соотношения 30,2±2,56% прогнозируют количество желтых тел на яичнике 1,8±0,18 шт., при 42,1±2,95% - 5,7±1,24 шт. желтых тел на яичнике, при 57,1±3,01% - 11,6±1,26 шт. желтых тел на яичнике. Предлагаемые критерии используют при отборе животных в группу потенциальных доноров эмбрионов.The express method for selecting cows for producing embryos is known, according to which a response of the ovaries to introduced gonadotropins is predicted with the possibility of assessing the variability of the ovarian response (prototype - Prediction of embryo productivity of donor cows based on the echographic characteristics of the ovaries / A.V. Brigida, V.I. Sorokin, S.N. Kovalchuk, et al. // Agricultural Biology, 2018.V. 53. No. 4. - S. 753-761.). In accordance with the method, an endorectal examination of the ovaries and corpus luteum is performed on the donor cow using an ultrasound scanner. Then, post-processing morphometry of the obtained echographic images is carried out by processing using the ImageJ graphic editor (National Institute of Health, USA). The length, width and area of the ovaries and corpus luteum are determined as parameters of their functional activity. The indicators are calculated taking into account the length of the straight segment, the broken line, the circumference of the irregular shape, the area of the geometric figure, the projection angle of the two segments. Projections of structures on an echogram are schematically displayed. The ovarian area, as well as the area of the corpus luteum, is determined by the formula for the ellipsoid: S = πRr, where R and r are the major and minor semiaxes, respectively. Then, the ratio of the area of the corpus luteum to the area of the ovary is calculated in percentage terms, in terms of which the response of the ovaries to the administered gonadotropic drugs is predicted. With a ratio of 30.2 ± 2.56%, the number of corpus luteum on the ovary is predicted to be 1.8 ± 0.18 units, while 42.1 ± 2.95% - 5.7 ± 1.24 units. corpus luteum on the ovary, with 57.1 ± 3.01% - 11.6 ± 1.26 pcs. corpus luteum on the ovary. The proposed criteria are used in the selection of animals in the group of potential donors of embryos.
Недостатком прототипа является то, что в нем представлена только небольшая часть значений предикторного критерия ответной реакции яичников на введенные гонадотропные препараты, используемого на этапе отбора коров-доноров. Предикторным критерием, согласно способу по прототипу, является расчетный показатель отношения площади желтого тела к площади яичника в процентном выражении, которому соответствует определенное значение количества желтых тел на яичниках. При этом, отсутствуют точные диапазоны значений предикторного критерия, в пределах которых можно было бы более точно определять прогнозируемое количество желтых тел на яичнике, и соответственно, более точно выявлять животных, проявляющих положительную полиовуляторную реакцию на введенные гонадотропины.The disadvantage of the prototype is that it presents only a small part of the values of the predictor criterion for the response of the ovaries to the introduced gonadotropic drugs used at the stage of selection of donor cows. A predictor criterion, according to the prototype method, is a calculated indicator of the ratio of the area of the yellow body to the area of the ovary in percentage terms, which corresponds to a certain value of the number of yellow bodies on the ovaries. At the same time, there are no exact ranges of values of the predictor criterion within which it would be possible to more accurately determine the predicted number of corpus luteum on the ovary and, accordingly, to more accurately identify animals exhibiting a positive polio-ovulatory reaction to the administered gonadotropins.
Техническим результатом изобретения является повышение точности отбора животных, проявляющих положительную полиовуляторную реакцию на введенные гонадотропины.The technical result of the invention is to improve the accuracy of selection of animals exhibiting a positive polio-ovulatory reaction to the introduced gonadotropins.
Технический результат достигается тем, что способ отбора коров-доноров эмбрионов в процессе проведения технологии трансплантации эмбрионов включает проведение прогнозирования ответной реакции яичников коровы-донора эмбрионов на стимуляцию полиовуляции экзогенными гонадотропинами, причем, прогнозируют ответную реакцию яичников путем проведения у коровы-донора эндоректального исследования яичника и желтого тела с использованием метода ультразвуковой эхографии и проведения морфометрических измерений параметров яичника и желтого тела, в котором согласно изобретению, морфометрически измеряют объем желтого тела и объем яичника, выполняют расчет отношения объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении, по показателю которого прогнозируют ответную реакцию яичников в соответствии с со следующими предикторными критериями, где при значении отношения 30% и менее прогнозируют вариабельность яичникового ответа в диапазоне от 0 до 2 желтых тел, что является прогностической вероятностью отрицательной или низкой ответной реакции яичников, при значении отношения от 31 до 40% прогнозируют вариабельность яичникового ответа в диапазоне от 3 до 9 желтых тел, что является прогностической вероятностью средней ответной реакции яичников, при значении отношения от 41 до 50% прогнозируют вариабельность яичникового ответа в диапазоне от 10 до 23 желтых тел, что является прогностической вероятностью высокой ответной реакции яичников, при значении отношения более 50% прогнозируют вариабельность яичникового ответа 0 желтых тел, что является прогностической вероятностью отрицательной ответной реакции яичников, связанной с наличием овариальной патологии, и при значении отношения от 30% до 50%, соответствующего диапазону желтых тел от 3 до 23 шт, животное отбирают для участия в процессе проведения технологии трансплантации эмбрионов.The technical result is achieved by the fact that the method for selecting embryo donor cows in the process of embryo transplantation technology involves predicting the response of the ovaries of the donor cow to the stimulation of polyovulation by exogenous gonadotropins, moreover, the ovary response is predicted by conducting endorectal examination of the ovary in the donor cow and the corpus luteum using the method of ultrasonic ultrasound imaging and morphometric measurements of the parameters of the ovary and yellow body, in which according to the invention, the volume of the corpus luteum and the volume of the ovary are measured morphometrically, the ratio of the volume of the corpus luteum to the volume of the ovary is calculated in percentage terms, according to which the response of the ovaries is predicted in accordance with the following predictor criteria, where at a ratio value of 30% and less predict the variability of the ovarian response in the range from 0 to 2 corpus luteum, which is the prognostic probability of a negative or low ovarian response, when the ratio I from 31 to 40% predict the variability of the ovarian response in the range from 3 to 9 corpus lutes, which is the prognostic probability of the average response of the ovaries, with a ratio of 41 to 50% predict variability of the ovarian response in the range from 10 to 23 corpus lutes, which is the prognostic probability of a high ovarian response, with a ratio of more than 50%, the variability of the ovarian response of 0 corpus luteum is predicted, which is the prognostic probability of a negative ovarian response associated with associated with the presence of ovarian pathology, and with a ratio of 30% to 50% corresponding to a range of yellow bodies from 3 to 23 pieces, the animal is selected to participate in the process of embryo transplantation technology.
Способ отбора коров-доноров эмбрионов в процессе проведения технологии трансплантации эмбрионов (далее - способ прогнозирования, патентуемый способ) предназначен для применения у коров, предварительно отобранных в группу доноров эмбрионов по ветеринарным, зоотехническим и селекционным характеристикам. Предикторным критерием ответной реакции яичников, согласно патентуемому способу, является расчетный показатель (отношение объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении), коррелирующий с определенным значением количества желтых тел на яичнике (таблица 1).The method for selecting embryo donor cows in the process of embryo transplantation technology (hereinafter referred to as the prediction method, patented method) is intended for use in cows previously selected as embryo donor groups according to veterinary, zootechnical and breeding characteristics. A predictor of the response of the ovaries, according to the patented method, is the calculated indicator (the ratio of the volume of the corpus luteum to the volume of the ovary in percentage terms), which correlates with a certain value of the number of corpus luteum on the ovary (table 1).
Способ отбора коров-доноров эмбрионов может быть применим как на технологическом этапе отбора коров при формировании группы коров-доноров, так и в день проведения планируемого мероприятия по стимуляции полиовуляции (до начала введения гонадотропных препаратов), которую проводят, как правило, на 10-й день полового цикла. При этом, выбор 10-го дня полового цикла для цели проведения стимуляции полиовуляции обусловлен тем, что, у телки или коровы, отобранной в качестве донора эмбрионов, в соответствии с общепринятой методикой выявляют признаки половой охоты (естественная охота или вызванная искусственно посредством введения животному гормональных препаратов). День проявления признаков половой охоты (рефлекс неподвижности, течка, набухание вульвы и т.д.), которая длится у самок крупного рогатого скота, в среднем, 12-24 часа (примечание: в данный период времени животное не подлежит осеменению), регистрируют как условно нулевой день полового цикла у донора, с которого начинают отсчет дней этого полового цикла. С 9-го по 12-й день полового цикла (лютеиновая фаза, фаза желтого тела) проводят стимуляцию полиовуляции у доноров. При этом, 10-й день полового цикла является оптимальным днем для начала работ по стимуляции полиовуляции у доноров, так как на 11-й полового цикла при отсутствии оплодотворения начинается процесс лютеолиза (рассасывание желтого тела). При применении патентуемого способа непосредственно до начала стимуляции полиовуляции (до момента введения препаратов, содержащих гонадотропины) должен быть обеспечен период времени, предшествующий началу стимуляции полиовуляции и достаточный для проведения способа прогнозирования, на реализацию которого необходимо, в среднем, 10-30 минут.The method of selection of embryo donor cows can be applied both at the technological stage of cow selection when forming a group of donor cows, and on the day of the planned event for stimulation of poliovulation (before the introduction of gonadotropic drugs), which is carried out, as a rule, on the 10th sexual cycle day. At the same time, the choice of the 10th day of the sexual cycle for the purpose of stimulating poliovulation is due to the fact that, in a heifer or a cow selected as an embryo donor, signs of sexual hunting (natural hunting or artificially induced by the introduction of hormonal drugs). The day of manifestation of signs of sexual hunting (reflex of immobility, estrus, swelling of the vulva, etc.), which lasts in females of cattle, on average, 12-24 hours (note: during this period of time, the animal is not subject to insemination), register as conditionally zero day of the sexual cycle at the donor, from which the days of this sexual cycle begin to count. From the 9th to the 12th day of the sexual cycle (luteal phase, corpus luteum phase), polyovulation is stimulated in donors. At the same time, the 10th day of the sexual cycle is the best day to begin work on stimulating poliovulation in donors, since the luteolysis process (resorption of the corpus luteum) begins on the 11th sexual cycle in the absence of fertilization. When applying the patented method, immediately before the start of stimulation of polyovulation (before the introduction of drugs containing gonadotropins), a period of time prior to the beginning of stimulation of polyovulation and sufficient for carrying out the forecasting method, which takes about 10-30 minutes, on average, should be provided.
Патентуемый способ осуществляют следующим образом. У коровы-донора проводят прогнозирование ответной реакции яичников коровы-донора эмбрионов на стимуляцию полиовуляции экзогенными гонадотропинами. Для этого проводят эндоректальное исследование яичника с желтым телом посредством метода ультразвуковой эхографии с использованием УЗИ-сканера (примечание: до начала стимуляции поливуляции желтое тело присутствует только на одном из двух яичников). Затем при помощи графического редактора (программа, позволяющая обрабатывать и редактировать цифровые изображения на компьютере, например, ImageJ, AutoCAD) проводят постпроцессинговую морфометрию полученного ультразвукового изображения, на котором схематично отображают проекции структур желтого тела и яичника и определяют их объемы с помощью функции обвода или эллипса, которая позволяет вычислять объем в одной плоскости сканирования. Затем проводят вычисление отношения объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении (расчетный показатель), по показателю которого осуществляют индивидуальную оценку вариабельности яичникового ответа. Для этого расчетный показатель, полученный индивидуально у каждого животного, сопоставляют с значениями в таблице 1 (первый столбец) и подбирают соответствующий ему прогнозируемый диапазон количества желтых тел (второй столбец). При значении расчетного показателя от 30% до 50%, соответствующего диапазону желтых тел от 3 до 23 шт, животное отбирают для участия в процессе проведения технологии трансплантации эмбрионов.The patented method is as follows. In a donor cow, a prediction is made of the response of the ovaries of the donor cow to the stimulation of poliovulation by exogenous gonadotropins. To do this, an endorectal examination of the ovary with the corpus luteum is performed using the method of ultrasound echography using an ultrasound scanner (note: prior to stimulation of polyvulation, the corpus luteum is present on only one of the two ovaries). Then, using a graphical editor (a program that allows you to process and edit digital images on a computer, for example, ImageJ, AutoCAD), post-processing morphometry of the obtained ultrasound image is performed, on which projections of the structures of the corpus luteum and ovary are schematically displayed and their volumes are determined using the bypass or ellipse function , which allows you to calculate the volume in one scan plane. Then, the ratio of the volume of the corpus luteum to the volume of the ovary is calculated in percentage terms (calculated indicator), according to the indicator of which an individual assessment of the variability of the ovarian response is carried out. To do this, the calculated indicator obtained individually from each animal is compared with the values in table 1 (first column) and the corresponding predicted range of the number of yellow bodies (second column) is selected. If the value of the calculated indicator is from 30% to 50%, corresponding to the range of yellow bodies from 3 to 23 pieces, the animal is selected to participate in the process of embryo transplantation technology.
Предикторными критериями, отраженными в прогностической таблице (таблица 1), на основании которых проводят отбор коров-доноров, являются следующие показатели: при значении расчетного показателя 30% и менее прогнозируют вариабельность яичникового ответа в диапазоне от 0 до 2 желтых тел, что является прогностической вероятностью отрицательной или низкой ответной реакции яичников, при значении расчетного показателя от 31 до 40% прогнозируют вариабельность яичникового ответа в диапазоне от 3 до 9 желтых тел, что является прогностической вероятностью средней ответной реакции яичников, при значении расчетного показателя от 41 до 50% прогнозируют вариабельность яичникового ответа в диапазоне от 10 до 23 желтых тел, что является прогностической вероятностью высокой ответной реакции яичников, при значении расчетного показателя более 50% прогнозируют вариабельность яичникового ответа 0 желтых тел, что является прогностической вероятностью отрицательной ответной реакции яичников, связанной с наличием овариальной патологии.The predictor criteria reflected in the prognostic table (table 1), on the basis of which donor cows are selected, are the following indicators: if the calculated indicator is 30% or less, the variability of the ovarian response in the range from 0 to 2 corpus luteum is predicted, which is a predictive probability a negative or low response of the ovaries, with a value of the calculated indicator from 31 to 40%, the variability of the ovarian response in the range from 3 to 9 corpus luteum is predicted, which is a predictive probability the average response of the ovaries, with a value of the calculated indicator from 41 to 50% predict the variability of the ovarian response in the range from 10 to 23 yellow bodies, which is the prognostic probability of a high response of the ovaries, with a value of the calculated indicator of more than 50% predict the variability of the ovarian response 0 yellow bodies, which is the prognostic probability of a negative ovarian response associated with the presence of ovarian pathology.
Для разработки прогноза ответной реакции яичников коров-доноров эмбрионов на стимуляцию полиовуляции экзогенными гонадотропинами, на основании которого осуществляют отбор коров-доноров эмбрионов, провели исследование, результаты которого отображены в таблице 2. Исследовали 100 коров мясного и молочного направлений продуктивности, которые были отобраны в группу доноров эмбрионов по следующим ветеринарным, зоотехническим и селекционным характеристикам: без признаков нарушения обмена веществ (ожирение, дистрофия и т.д.), наличие данных о происхождении не менее чем по трем рядам предков, крепкая конституция, оценка экстерьера не менее 8 баллов, живая масса не ниже стандарта породы, в возрасте 3-6-ти отелов, легкие отелы и неосложненное течение послеродового периода. Все коровы прошли обследование на инфекционные заболевания (бруцеллез, туберкулез, вирусные респираторные заболевания, лейкоз, трихомоноз, вибриоз, ящур и др.). В рамках данного исследования у каждой из коров-доноров до начала стимуляции полиовуляции (до момента введения гонадотропинов) был проведено на 10-й день полового цикла эндоректальное исследование яичников и желтых тел с использованием метода ультразвуковой эхографии. Использовали УЗИ-сканер Tringa Linear («ESA OTES р.А», Италия) с линейными датчиками (рабочая частота - 7,5 МГц). Фиксировали черно-белые ультразвуковые изображения репродуктивных органов. Провели постпроцессинговую обработку с использованием графического редактора ImageJ (National Institute of Health, США) и морфометрически измерили объем желтого тела и объем яичника. У каждой коровы-донора определили расчетный показатель путем вычисления отношения объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении. Для лучшей градации всех остальных результатов проведенного исследования значения расчетного показателя в таблице 2 изложили в диапазонах с шагом в 10% (столбец 1). В рамках этих диапазонов отразили общее количество коров, у которых было получено соответствующее значение их индивидуального расчетного показателя (столбец 2). Кроме того, для этих животных (сгруппированных в рамках указанных диапазонов) приведены результаты ректогенитального обследования методом эхографической визуализации в режиме реального времени и эндоректальной пальпации репродуктивных органов (столбец 3). Далее, непосредственно после окончания проведения метода ультразвуковой эхографии были начаты работы по стимуляции полиовуляции с введением препарата «ФСГ-супер», содержащего ФСГ/ЛГ(1000 - 1500 ед. ФСГ/1 ед. ЛГ) гормональной активностью 1000 ME в соответствии с инструкцией по применению (Инструкция к препарату «ФСГ-супер», производитель ООО «Агробиомед», г. Боровск, Россия, сайт http://www. vettorg.net/pharmacy/62/81/, 2018 г. ). Был применен классический протокол с 8-кратным введением в организм коровы-донора «ФСГ-супер» каждые 12 часов в течение 4-х дней. При этом, на 3-й день от начала введения ФСГ/ЛГ, животным был введен в соответствии с инструкцией по применению препарат простогландинового ряда F2α «Эстрофан» для вызывания (индуцирования) у животных половой охоты (Инструкция к препарату «Эстрофан», производитель АО «Биовета», Чешская Республика, сайт Интернет: http://www.veterinarka.ru/vetmedicaments/estrofan.html, 2018 г. ). После введения препарата «Эстрофан» половая охота у всех животных исследуемой группы наступила через 48-72 часов, в результате чего синхронно овулировали множество выросших и созревших фолликулов и на их месте образовались желтые тела, которые отчетливо пальпировались ректальным способом. На седьмой день индуцированного полового цикла у животных был проведен подсчет образовавшихся желтых тел ректопальпаторным способом. Количество желтых тел на яичниках в диапазоне их значений отражено в таблице 2 (столбец 4).To develop a prognosis of the response of the ovaries of embryo donor cows to stimulation of polyovulation with exogenous gonadotropins, on the basis of which embryo donor cows are selected, a study was carried out, the results of which are shown in Table 2. 100 cows of meat and dairy production directions that were selected in the group were examined. embryo donors according to the following veterinary, zootechnical and breeding characteristics: without signs of metabolic disorders (obesity, dystrophy, etc.), the availability of data on origin in at least three rows of ancestors, a strong constitution, an exterior rating of at least 8 points, live weight not lower than the breed standard, aged 3-6 calving, light calving and uncomplicated postpartum period. All cows were screened for infectious diseases (brucellosis, tuberculosis, viral respiratory diseases, leukemia, trichomoniasis, vibriosis, foot and mouth disease, etc.). In the framework of this study, before donation of gonadotropins was initiated in each of the donor cows, endorectal examination of the ovaries and corpus luteum was performed on the 10th day of the sexual cycle using the ultrasound echography method. We used a Tringa Linear ultrasound scanner (ESA OTES p. A, Italy) with linear sensors (operating frequency - 7.5 MHz). Black and white ultrasound images of the reproductive organs were recorded. Postprocessing was performed using the ImageJ graphics editor (National Institute of Health, USA) and the corpus luteum and ovarian volume were measured morphometrically. For each cow donor, a calculated indicator was determined by calculating the ratio of the volume of the corpus luteum to the volume of the ovary in percentage terms. For a better gradation of all other results of the study, the values of the calculated indicator in table 2 were set out in the ranges with a step of 10% (column 1). Within these ranges, the total number of cows was reflected, from which the corresponding value of their individual calculated indicator was obtained (column 2). In addition, for these animals (grouped within the indicated ranges), the results of rectogenital examination by real-time echographic imaging and endorectal palpation of the reproductive organs are presented (column 3). Further, immediately after the end of the ultrasound echography method, work began on stimulation of poliovulation with the introduction of the FSH-super preparation containing FSH / LH (1000 - 1500 units of FSH / 1 unit of LH) with a hormonal activity of 1000 ME in accordance with the instructions for application (Instruction for the preparation “FSH-super”, manufacturer of LLC “Agrobiomed”, Borovsk, Russia, website http://www.tttt.net.net/pharmacy/62/81/, 2018). The classic protocol was applied with 8-fold administration of the FSH-super donor cow every 12 hours for 4 days. At the same time, on the 3rd day from the start of the administration of FSH / LH, the animals were administered, according to the instructions for use, the prostaglandin series drug F2α “Estrofan” for inducing (inducing) sexually hunting animals (Instructions for the drug “Estrofan”, manufacturer AO Bioveta, Czech Republic, Internet site: http://www.veterinarka.ru/vetmedicaments/estrofan.html, 2018). After the administration of the Estrofan preparation, sexual hunting in all animals of the studied group occurred after 48-72 hours, as a result of which many follicles that grew and matured ovulated simultaneously and yellow bodies formed in their place, which were distinctly palpated by rectal method. On the seventh day of the induced reproductive cycle in animals, the formed corpus luteum was counted by a rectopalpatory method. The number of corpus luteum on the ovaries in the range of their values is shown in table 2 (column 4).
На основании данных таблицы 2 была проанализирована корреляционная зависимость значений расчетного показателя (отношение объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении) и значений количества желтых тел (число овуляций), подсчитанных после проведения стимуляции полиовуляции. Как видно из таблицы 2, снижение значений расчетного показателя (отношение объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении) 30% и менее свидетельствует об уменьшении доли желтого тела в яичнике у тех коров-доноров, у которых была отмечена гипофункция яичников и отсутствовал множественный рост фолликулов. Значение расчетного показателя (отношение объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении) в диапазоне от 31 до 50% свидетельствует о полноценно протекающем половом цикле и нормальной функциональной работе яичников с множественным ростом и созреванием фолликулов (от 3-х до 23 и более желтых тел на яичниках). Повышение значений расчетного показателя (отношение объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении) более 50% свидетельствует об увеличении доли желтого тела в яичнике у тех коров-доноров, у которых были отмечены лютеальные кисты с изменениями структуры яичников и отсутствовал множественный рост фолликулов. Известно, что наличие лютеальных кист способствует развитию патологических процессов не только в яичниках, но и в эндометрии матки животного. У таких животных из-за повышенного уровня прогестерона, выделяемого желтым телом, экзогенный фолликулостимулирующий гормон не может поддерживать рост примордиальных фолликулов, которые впоследствии подвергаются атрезии, что влечет отсутствие множественного роста фолликулов и их полиовуляции.Based on the data in Table 2, the correlation dependence of the calculated indicator values (ratio of the corpus luteum to ovarian volume in percentage terms) and the values of the number of corpus lutes (number of ovulations) calculated after the stimulation of polyovulation was analyzed. As can be seen from table 2, a decrease in the values of the calculated indicator (the ratio of the volume of the yellow body to the volume of the ovary in percentage terms) of 30% or less indicates a decrease in the proportion of the yellow body in the ovary in those donor cows in which ovarian hypofunction was noted and there was no multiple growth follicles. The value of the calculated indicator (the ratio of the volume of the yellow body to the volume of the ovary in percentage terms) in the range from 31 to 50% indicates a fully ongoing sexual cycle and normal functional work of the ovaries with multiple growth and maturation of follicles (from 3 to 23 or more yellow bodies on the ovaries). An increase in the values of the calculated indicator (the ratio of the volume of the yellow body to the volume of the ovary in percentage terms) more than 50% indicates an increase in the proportion of the yellow body in the ovary in those donor cows in which luteal cysts with changes in the structure of the ovaries were noted and there was no multiple growth of follicles. It is known that the presence of luteal cysts contributes to the development of pathological processes not only in the ovaries, but also in the endometrium of the uterus of the animal. In such animals, due to the increased level of progesterone secreted by the corpus luteum, exogenous follicle-stimulating hormone cannot support the growth of primordial follicles, which subsequently undergo atresia, which entails the absence of multiple growth of follicles and their polyovulation.
Таким образом, на основании результатов исследования, отраженных в таблице 2, показано, что доля желтого тела в объеме яичнике помогает узнать, насколько эффективно работает репродуктивная система, отвечая на экзогенные гонадотропные препараты. На основании результатов таблицы 2 была составлена вышеприведенная прогностическая таблица (таблица 1), при помощи которой обеспечивается индивидуальная оценка вариабельности яичникового ответа за счет сопоставления вычисленного расчетного показателя (отношение объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении) с прогнозируемым диапазоном количества желтых тел (число овуляций). Также на основании результатов таблицы 2 выявлен диапазон значений расчетного показателя (от 31 до 50%), в рамках которого животное отбирают для участия в процессе проведения технологии трансплантации эмбрионов.Thus, based on the results of the study, shown in table 2, it is shown that the proportion of the corpus luteum in the volume of the ovary helps to find out how effectively the reproductive system responds to exogenous gonadotropic drugs. Based on the results of table 2, the above prognostic table was compiled (table 1), which provides an individual assessment of the variability of the ovarian response by comparing the calculated calculated indicator (ratio of the volume of the yellow body to the volume of the ovary in percentage terms) with the predicted range of the number of yellow bodies (number ovulation). Also, based on the results of Table 2, a range of values of the calculated indicator (from 31 to 50%) was revealed, within which the animal was selected to participate in the process of embryo transplantation technology.
Работоспособность патентуемого способа подтверждается следующими примерами.The performance of the patented method is confirmed by the following examples.
Пример 1. Корова №42361, порода черно-пестрая (молочное направление продуктивности), возраст 5 лет, была отобрана в качестве донора эмбрионов по ветеринарным, зоотехническим и селекционным характеристикам. Для уточнения отбора был проведен патентуемый способ. У коровы-донора провели прогнозирование ответной реакции яичников коровы-донора эмбрионов на стимуляцию полиовуляции экзогенными гонадотропинами. Для этого у коровы-донора провели эндоректальное исследование яичников и желтых тел с использованием метода ультразвуковой эхографии. Использовали УЗИ-сканер Tringa Linear («ESA OTES р.А», Италия) с линейными датчиками (рабочая частота - 7,5 МГц), фиксировали черно-белые ультразвуковые изображения репродуктивных органов. Провели постпроцессинговую обработку данных изображений с использованием графического редактора ImageJ (National Institute of Health, США), морфометрически измерили объем желтого тела и объем яичника. На основании полученных данных вычислили расчетный показатель (отношение объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении), который составил 37,9%. Согласно прогностической таблице (таблица 1), данный показатель соответствовал прогнозируемому диапазону количества желтых тел на яичниках, составляющему 3-9 шт., что является прогностической вероятностью средней ответной реакции яичников. В силу того, что расчетный показатель у данного животного соответствовал диапазону 31 до 50%, животное было отобрано для участия в процессе проведения технологии трансплантации эмбрионов, а именно, для участия животного в мероприятии по стимуляции полиовуляции. Непосредственно после завершения патентуемого способа провели процедуру стимуляции полиовуляции по классическому протоколу 8-кратного введения препарата «ФСГ-супер» каждые 12 часов в течение 4-х дней (Инструкция к препарату «ФСГ-супер», производитель ООО «Агробиомед», г. Боровск, Россия, сайт Интернет: http://www.vettorg.net/pharmacy/62/81/, 2018 г. ). В препарате «ФСГ-супер» соотношение ФСГ к лютеинизирующему гормону (ЛГ) составляло 1000 - 1500 ед. ФСГ/1 ед. ЛГ, гормональная активность - 1000 ME. На 3-й день от начала введения ФСГ/ЛГ животным для вызывания (индуцирования) половой охоты был введен в соответствии с инструкцией по применению препарат простогландинового рада F2α «Эстрофан» (Инструкция к препарату «Эстрофан», производитель АО «Биовета», Чешская Республика, сайт Интернет: http://www.veterinarka.ru/vetmedicaments/estrofan.html, 2018 г. ). После введения препарата «Эстрофан» половая охота наступила через 48 часов, в результате чего синхронно овулировали множество выросших и созревших фолликулов и на их месте образовались желтые тела, которые отчетливо пальпировались ректальным способом. У животного провели подсчет образовавшихся желтых тел, количество которых у данной коровы составило 7 штук (два на левом яичнике, пять - на правом). Таким образом, подтверждена высокая точность способа отбора коров-доноров эмбрионов, осуществленного до начала стимуляции полиовуляцииExample 1. Cow No. 42361, a black-motley breed (milk production direction), age 5 years old, was selected as an embryo donor for veterinary, zootechnical and breeding characteristics. A patented method was carried out to clarify the selection. In the donor cow, a prediction was made of the response of the ovaries of the donor cow to the stimulation of poliovulation by exogenous gonadotropins. For this, an donor cow underwent endorectal examination of the ovaries and corpus luteum using the method of ultrasonic ultrasound imaging. We used a Tringa Linear ultrasound scanner (ESA OTES p. A, Italy) with linear sensors (operating frequency - 7.5 MHz), recorded black and white ultrasound images of reproductive organs. We performed post-processing processing of image data using the ImageJ graphics editor (National Institute of Health, USA), measured corpus luteum volume and ovarian volume morphometrically. Based on the data obtained, a calculated indicator was calculated (the ratio of the volume of the corpus luteum to the volume of the ovary in percentage terms), which amounted to 37.9%. According to the prognostic table (table 1), this indicator corresponded to the predicted range of the number of corpus luteum on the ovaries, amounting to 3-9 pieces, which is the prognostic probability of the average response of the ovaries. Due to the fact that the calculated indicator for this animal corresponded to a range of 31 to 50%, the animal was selected to participate in the process of embryo transplantation technology, namely, for the participation of the animal in the event to stimulate polyovulation. Immediately after the completion of the patented method, a polyovulation stimulation procedure was carried out according to the classical protocol of 8-fold administration of the FSH-super preparation every 12 hours for 4 days (Instructions for the FSH-super preparation, manufacturer of LLC Agrobiomed, Borovsk , Russia, Internet site: http://www.vettorg.net/pharmacy/62/81/, 2018). In the FSH-super preparation, the ratio of FSH to luteinizing hormone (LH) was 1000 - 1500 units. FSH / 1 unit LH, hormonal activity - 1000 ME. On the 3rd day from the beginning of the administration of FSH / LH, the animals for inducing sexual hunting were introduced in accordance with the instructions for use with the preparation of prostaglandin radium F2α Estrofan (Instructions for the drug Estrofan, manufactured by JSC Bioveta, Czech Republic , Internet site: http://www.veterinarka.ru/vetmedicaments/estrofan.html, 2018). After the administration of the Estrofan preparation, sexual hunting occurred after 48 hours, as a result of which many grown and mature follicles ovulated simultaneously and yellow bodies formed in their place, which were distinctly palpated by rectal method. An animal was counted for the formation of yellow bodies, the number of which in this cow was 7 pieces (two on the left ovary, five on the right). Thus, the high accuracy of the method for selection of embryo donor cows, carried out prior to the initiation of polyovulation, was confirmed.
Пример 2. Корова-донор №36724 казахская белоголовая порода (мясное направление продуктивности), возраст 8 лет, была отобрана в состав коров-доноров эмбрионов по ветеринарным, зоотехническим и селекционным характеристикам. Для уточнения отбора был проведен патентуемый способ аналогично примеру 1. Расчетный показатель (отношение объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении) составил 42,4%, что являлось прогностической вероятностью высокой ответной реакции яичников. и соответствовало диапазону 31 до 50%, в результате чего животное было отобрано для участия в процессе проведения технологии трансплантации эмбрионов, а именно, для участия животного в мероприятии по стимуляции полиовуляции. Провели стимуляцию полиовуляции аналогично примеру 1, после завершения которой путем ректопальпаторного исследования у животного провели подсчет образовавшихся желтых тел, количество которых у данной коровы их количество составило 19 штук (12 на левом яичнике, 7 - на правом). Таким образом, подтверждена высокая точность способа отбора коров-доноров эмбрионов, осуществленного до начала стимуляции полиовуляции.Example 2. Cow-donor No. 36424 Kazakh white-headed breed (meat direction of productivity), age 8 years old, was selected as a part of embryo donor cows for veterinary, zootechnical and breeding characteristics. To clarify the selection, a patented method was carried out analogously to example 1. The calculated indicator (ratio of the corpus luteum to ovarian volume in percentage terms) was 42.4%, which was a predictive probability of a high ovarian response. and corresponded to a range of 31 to 50%, as a result of which the animal was selected to participate in the process of embryo transplantation technology, namely, for the participation of the animal in the event to stimulate poliovulation. Polyovulation was stimulated analogously to example 1, after which, by rectopalpatory research in an animal, the formed yellow bodies were counted, the number of which in this cow was 19 (12 on the left ovary, 7 on the right). Thus, the high accuracy of the method for selection of embryo donor cows, carried out prior to the initiation of polyovulation, was confirmed.
Пример 3. Телка симментальской породы №36724 (мясо-молочное направление продуктивности), возраст 13 месяцев, была отобрана в состав коров-доноров эмбрионов по ветеринарным, зоотехническим и селекционным характеристикам. Для уточнения отбора был проведен патентуемый способ аналогично примеру 1. Расчетный показатель (отношение объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении), вычисленный в результате проведения патентуемого способа, составил 26,4%. что являлось прогностической вероятностью отрицательной или низкой ответной реакции яичников и не соответствовало диапазону 31 до 50%. В результате животное не было отобрано для участия в процессе проведения технологии трансплантации эмбрионов. Однако для цели подтверждения результатов прогноза животному провели стимуляцию полиовуляции аналогично примеру 1 непосредственно после проведения патентуемого способа. После завершения процедуры стимуляции полиовуляции при ректопальпаторном исследовании было определено, что у данной телки отсутствовал полиовуляторный ответ яичников на введенные гонадотропины (количество желтых тел составило 0 штук), была отмечена гипофункция яичников. Таким образом, была подтверждена высокая точность способа отбора коров-доноров эмбрионов, осуществленного до начала стимуляции полиовуляции.Example 3. Heifer Simmental breed No. 36424 (meat and dairy direction of productivity), age 13 months, was selected as a part of embryo donor cows for veterinary, zootechnical and breeding characteristics. To clarify the selection, a patentable method was carried out analogously to example 1. The calculated indicator (the ratio of the corpus luteum to ovarian volume in percentage terms) calculated as a result of the patented method was 26.4%. which was a prognostic probability of a negative or low ovarian response and did not correspond to a range of 31 to 50%. As a result, the animal was not selected to participate in the process of embryo transplantation technology. However, for the purpose of confirming the results of the prediction, the animals were stimulated with polyovulation as in Example 1 immediately after the patented method. After completion of the polyovulation stimulation procedure during a rectopalpal study, it was determined that this heifer did not have a polyovulatory response of the ovaries to the injected gonadotropins (the number of yellow bodies was 0 pieces), ovarian hypofunction was noted. Thus, the high accuracy of the method for selection of embryo donor cows, carried out prior to the initiation of polyovulation, was confirmed.
Пример 4. Корова-донор №15560 голштинской породы (молочное направление продуктивности), возраст 4 года, была отобрана в состав коров-доноров эмбрионов по ветеринарным, зоотехническим и селекционным характеристикам. Для уточнения отбора был проведен патентуемый способ аналогично примеру 1. Расчетный показатель (отношение объема желтого тела к объему яичника в процентном выражении), вычисленный в результате проведения патентуемого способа, составил 55,8%. что являлось прогностической вероятностью отрицательной ответной реакции яичников, связанной с наличием овариальной патологии, и не соответствовало диапазону 31 до 50%. В результате животное не было отобрано для участия в процессе проведения технологии трансплантации эмбрионов. Однако для цели подтверждения результатов прогноза животному провели стимуляцию полиовуляции аналогично примеру 1 непосредственно после проведения патентуемого способа. После завершения процедуры стимуляции полиовуляции при ректопальпаторном исследовании была диагностирована лютеальная киста, что подтвердило адекватность результата, спрогнозированного при помощи патентуемого способа, осуществленного до начала стимуляции полиовуляции.Example 4. A donor cow No. 15560 of the Holstein breed (milk production direction), age 4 years old, was selected as a part of embryo donor cows for veterinary, zootechnical and breeding characteristics. To clarify the selection, a patentable method was carried out analogously to example 1. The calculated indicator (the ratio of the volume of the corpus luteum to the volume of the ovary in percentage terms) calculated as a result of the patented method was 55.8%. which was the prognostic probability of a negative ovarian response associated with the presence of ovarian pathology, and did not correspond to a range of 31 to 50%. As a result, the animal was not selected to participate in the process of embryo transplantation technology. However, for the purpose of confirming the results of the prediction, the animals were stimulated with polyovulation as in Example 1 immediately after the patented method. After completion of the polyovulation stimulation procedure, a luteal cyst was diagnosed during rectopalpal examination, which confirmed the adequacy of the result predicted by the patented method, which was carried out before the beginning of the polyovulation stimulation.
Способ отбора коров-доноров эмбрионов в процессе проведения технологии трансплантации эмбрионов достаточно прост и доступен для производственной практики животноводческих хозяйств. Он дает возможность своевременно скорректировать тактику ведения процесса технологии трансплантации как до начала начала протокола овариальной стимуляции экзогенными гонадотропинами, так и на этапе формирования группы коров-доноров эмбрионов.The method for selecting embryo donor cows during the process of embryo transplantation technology is quite simple and available for livestock production practice. It makes it possible to timely correct the tactics of conducting the process of transplantation technology both before the start of the ovarian stimulation protocol by exogenous gonadotropins and at the stage of formation of a group of embryo donor cows.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018146103A RU2699519C2 (en) | 2018-12-25 | 2018-12-25 | Method for selection of embryo donor cows in process of embryo transplantation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018146103A RU2699519C2 (en) | 2018-12-25 | 2018-12-25 | Method for selection of embryo donor cows in process of embryo transplantation |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018146103A RU2018146103A (en) | 2019-02-15 |
| RU2018146103A3 RU2018146103A3 (en) | 2019-08-01 |
| RU2699519C2 true RU2699519C2 (en) | 2019-09-05 |
Family
ID=65442343
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018146103A RU2699519C2 (en) | 2018-12-25 | 2018-12-25 | Method for selection of embryo donor cows in process of embryo transplantation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2699519C2 (en) |
-
2018
- 2018-12-25 RU RU2018146103A patent/RU2699519C2/en active
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| БРИГИДА А.В. и др. Прогнозирование эмбриопродуктивности коров-доноров на основании эхографической характеристики яичников, Сельскохозяйственная биология, том 53, N4, с. 753-761. * |
| БРИГИДА А.В. и др. Прогнозирование эмбриопродуктивности коров-доноров на основании эхографической характеристики яичников, Сельскохозяйственная биология, том 53, N4, с. 753-761. ХЕТАГУРОВА Б.Т. Сравнительная оценка гормональной индукции полиовуляции коров-доноров разных пород, автореферат диссертации, Нальчик, 2014. * |
| ХЕТАГУРОВА Б.Т. Сравнительная оценка гормональной индукции полиовуляции коров-доноров разных пород, авто диссертации, Нальчик, 2014. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2018146103A3 (en) | 2019-08-01 |
| RU2018146103A (en) | 2019-02-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Giorgione et al. | Congenital heart defects in IVF/ICSI pregnancy: systematic review and meta‐analysis | |
| Patterson et al. | Gilt management for fertility and longevity | |
| US11653635B2 (en) | Methods for increasing genetic progress in a line or breed of swine using sex-selected sperm cells | |
| Daly et al. | Towards improving the outcomes of assisted reproductive technologies of cattle and sheep, with particular focus on recipient management | |
| McNeel et al. | Beef heifers with diminished numbers of antral follicles have decreased uterine protein concentrations | |
| Khan et al. | Towards improving the outcomes of multiple ovulation and embryo transfer in sheep, with particular focus on donor superovulation | |
| Fernandes Júnior et al. | Sustainable intensification of beef production in the tropics: The role of genetically improving sexual precocity of heifers | |
| Wathes | Developmental programming of fertility in cattle—is it a cause for concern? | |
| Gonella-Diaza et al. | Corpus luteum diameter and embryo developmental stage are associated with pregnancy rate: data analysis from 17,521 embryo transfers from a commercial in vitro bovine embryo production program | |
| Yama et al. | In vivo follicular and uterine arterial indices as an indicator of successful hormonal stimulation for inactive ovaries in repeat-breeder crossbred dairy cows using a short-term progesterone-based programme | |
| Joonè et al. | Dizygotic monochorionic canine fetuses with blood chimaerism and suspected freemartinism | |
| RU2699519C2 (en) | Method for selection of embryo donor cows in process of embryo transplantation | |
| RU2699318C2 (en) | Method for prediction of ovarian response of embryo donor cows to stimulation of polyovulation by exogenous gonadotrophins | |
| Abdalla et al. | Evaluating sire effects on cow fertility: Timed AI and repeat-breeder dairy cows | |
| Kelly et al. | Sex of co-twin affects the in vitro developmental competence of oocytes derived from 6-to 8-week-old lambs | |
| RU2703104C2 (en) | Method for prediction of embryo engraftment in a recipient cow during embryo transplantation technology | |
| RU2703943C2 (en) | Method of selection of recipient cows in embryo transplantation technology | |
| López-Gatius et al. | Clinical management of pregnancy-related problems between days 28 and 60 in the dairy cow | |
| Glover et al. | Male fertility and Infertility | |
| Rodrigues | Historical context of cattle embryo transfer technique in Brazil | |
| EP2968421A1 (en) | Methods for use of sex sorted semen to improve genetic management in swine | |
| Teixeira et al. | The use of real-time ultrasonography to select embryo donors participating in a transgenesis goat programme | |
| Heras-Molina et al. | Reproductive Efficiency in Dairy Cows: Change in Trends! | |
| Ooi et al. | Identification of genetic variants linking dairy fertility and milk production traits. | |
| Sharma | The effects of uterine environment upon embryonic, fetal, neonatal and post-natal development and glucose metabolism in sheep: a thesis presented in partial fulfilment of the requirements for the degree of Doctor of Philosophy in Veterinary Science at Massey University, Palmerston North, New Zealand |