RU2698709C1

RU2698709C1 - Method for differential diagnosis of inflammatory intestinal diseases in children

Info

Publication number: RU2698709C1
Application number: RU2019108483A
Authority: RU
Inventors: Анна Павловна Топтыгина; Елена Леонидовна Семикина; Светлана Валентиновна Петричук
Priority date: 2019-03-25
Filing date: 2019-03-25
Publication date: 2019-08-29

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention relates to diagnostics, namely to a method for differential diagnosis of inflammatory intestinal diseases (IID) in children. Method for differential diagnosis of inflammatory intestinal diseases in children, involves determining the level of anti-GP2 IgA-antibodies and the level of secretory sIgA-antibodies in the co-extract of the patient examined by immunoassay, comparing the obtained GP2 IgA/sIgA ratio with the threshold criterion of 0.784, and the GP2 IgA/sIgA ratio below 0.784 in the patient being diagnosed with an inflammatory bowel disease, and if the calculated GP2 IgA/sIgA ratio is greater than 0.784, the diagnosed inflammatory bowel disease is excluded.

EFFECT: above-described non-invasive method enables facilitating and accelerating the diagnosis process IID and exclude other diagnoses of intestinal diseases in children.

1 cl, 2 dwg, 1 tbl, 1 ex

Description

Изобретение относится к области медицинской иммунологии, а именно к иммунологическим способам дифференциальной диагностики воспалительных заболеваний кишечника (ВЗК).The invention relates to the field of medical immunology, namely to immunological methods for the differential diagnosis of inflammatory bowel disease (IBD).

Изобретение может быть использовано в медицине для различения больных с ВЗК и другой патологией.The invention can be used in medicine to distinguish patients with IBD and other pathologies.

К воспалительным заболеваниям кишечника, согласно МКБ-10, относят болезнь Крона (БК) и язвенный колит (ЯК). Накопление данных об этиологии и патогенезе ВЗК способствовали разработке методов диагностики и лечения, позволивших существенно улучшить качество жизни таких пациентов [1, 2, 3]. Классическим способом диагностики ВЗК является проведение эндоскопии и последующее гистологическое исследование биоптата [4]. Этот метод является инвазивным, а взятие биоптата из воспаленного участка кишки часто сопровождается кровотечением, что потенциально опасно для пациента. Считают, что формирование хронического воспаления при ВЗК опосредуется нарушением нормального иммунного ответа на кишечную микробиоту у генетически предрасположенных индивидуумов [5]. Существует патент на набор синтетических олигонуклеотидов, позволяющих выявлять маркерные участки генов бактерий, ассоциированных с ВЗК [6]. Однако индивидуальный спектр кишечной микрофлоры сильно колеблется, а выявление той или иной микрофлоры не является диагнозом ВЗК. Существует патент на диагностику ВЗК с помощью УЗИ-методов [7]. Однако заявленные признаки являются признаками воспаления в стенке кишки, далеко не все признаки наблюдаются у каждого пациента с ВЗК и не обнаруживаются при других причинах воспаления кишечника. Существует способ диагностики ВЗК с помощью инфракрасной спектроскопии слюны или сыворотки крови, причем диагноз устанавливают на основании вычисления соотношение определенных пиков [8, 9]. Однако непонятно, какова природа этих пиков и что конкретно они характеризуют, поэтому не вполне ясно, насколько специфичен данный метод. Курьезно выглядит способ дифференциальной диагностики ВЗК по рисунку растрескивания пятна высохшей сыворотки крови [10]. Способ, очевидно, ничего не стоит как в смысле материальных затрат, так и научной ценности.According to ICD-10, inflammatory bowel diseases include Crohn's disease (CD) and ulcerative colitis (UC). The accumulation of data on the etiology and pathogenesis of IBD contributed to the development of diagnostic and treatment methods that significantly improved the quality of life of such patients [1, 2, 3]. A classic way to diagnose IBD is to conduct endoscopy and subsequent histological examination of the biopsy specimen [4]. This method is invasive, and taking a biopsy from an inflamed area of the intestine is often accompanied by bleeding, which is potentially dangerous for the patient. It is believed that the formation of chronic inflammation in IBD is mediated by a violation of the normal immune response to intestinal microbiota in genetically predisposed individuals [5]. There is a patent for a set of synthetic oligonucleotides that make it possible to identify marker regions of bacterial genes associated with IBD [6]. However, the individual spectrum of intestinal microflora varies greatly, and the detection of a particular microflora is not a diagnosis of IBD. There is a patent for the diagnosis of IBD using ultrasound methods [7]. However, the claimed signs are signs of inflammation in the intestinal wall, not all signs are observed in each patient with IBD and are not detected for other causes of intestinal inflammation. There is a method for diagnosing IBD using infrared spectroscopy of saliva or blood serum, and the diagnosis is established on the basis of calculating the ratio of certain peaks [8, 9]. However, it is not clear what the nature of these peaks is and what exactly they characterize; therefore, it is not entirely clear how specific this method is. The method of differential diagnosis of IBD according to the pattern of cracking stains of dried blood serum looks curious [10]. The method, obviously, costs nothing, both in terms of material costs and scientific value.

В научной литературе гликопротеин 2 (GP2) был описан как главный белок зимогеновых гранул поджелудочной железы [11]. Далее было показано, что анти-GP2 IgG- и IgA-антитела обнаруживаются в сыворотке крови больных с БК (чаще) и ЯК [12]. Более того, GP2 был описан как рецептор М-клеток кишечника, осуществляющий контроль микробиоты за счет трансцитоза FimH+ бактерий и запуска иммунного ответа против них [13]. Проведенные исследования на большом количестве пациентов с ВЗК показали, что анти-GP2 IgG- и IgA-антитела в сыворотке крови больных с ВЗК встречаются далеко не у всех пациентов и уровень этих антител очень сильно колеблется от пациента к пациенту [14]. В связи с этим, возлагавшиеся было надежды на этот показатель как на дифференциально-диагностический критерий ВЗК, оказались сильно преувеличенными. Также было показано, что имеющиеся тест-системы для определения анти-GP2 IgG- и IgA-антител методом ИФА в сыворотке крови могут определять эти антитела и в стуле [15] больных ВЗК осложненных формированием свища. Кроме того, было показано, что определение, например, цитокинов в копроэкстрактах больных ВЗК более информативно, чем определение этих же цитокинов в сыворотках крови тех же больных по сравнению с пациентами с дисбиозом кишечника [16]. Однако про- и противовоспалительные цитокины реагируют на любое воспаление, поэтому не могут быть расценены как специфические маркеры именно при ВЗК, тем не менее, примененный подход выглядит вполне перспективным.In the scientific literature, glycoprotein 2 (GP2) has been described as the main protein of the zymogen pancreatic granules [11]. It was further shown that anti-GP2 IgG and IgA antibodies are found in the blood serum of patients with CD (more often) and UC [12]. Moreover, GP2 was described as an intestinal M-cell receptor that controls microbiota by transcytosis of FimH + bacteria and triggers an immune response against them [13]. Studies on a large number of patients with IBD have shown that anti-GP2 IgG and IgA antibodies in the blood serum of patients with IBD are not found in all patients and the level of these antibodies varies greatly from patient to patient [14]. In this regard, the hopes placed on this indicator as a differential diagnostic criterion for IBD were greatly exaggerated. It was also shown that the available test systems for determining anti-GP2 IgG and IgA antibodies by ELISA in blood serum can also detect these antibodies in the stool [15] of patients with IBD complicated by fistula formation. In addition, it was shown that the determination of, for example, cytokines in coproextracts of patients with IBD is more informative than the determination of the same cytokines in the blood serum of the same patients compared with patients with intestinal dysbiosis [16]. However, pro- and anti-inflammatory cytokines respond to any inflammation, therefore, they cannot be regarded as specific markers in IBD, however, the approach used looks quite promising.

Технической проблемой, решаемой изобретением, является разработка неинвазивного способа дифференциальной диагностики воспалительных заболеваний кишечника у детей, позволяющего различить больных с ВЗК и другой патологией.The technical problem solved by the invention is the development of a non-invasive method for the differential diagnosis of inflammatory bowel diseases in children, which makes it possible to distinguish patients with IBD and other pathologies.

Поставленная задача достигается путем разработки способа дифференциальной диагностики ВЗК у детей на основании оценки относительного уровня анти-GP2 IgA-антител в копроэкстрактах, определяемых методом иммуно-ферментного анализа.The problem is achieved by developing a method for differential diagnosis of IBD in children based on the assessment of the relative level of anti-GP2 IgA antibodies in coproextracts determined by enzyme-linked immunosorbent assay.

Технический результат заключается в том, что заявленный способ дифференциальной диагностики воспалительных заболеваний кишечника у детей, осуществляемый на основании оценки относительного уровня анти-GP2 IgA-антител в копроэкстрактах, позволяет различить больных с ВЗК и другой патологией. Разработанный способ дифференциальной диагностики облегчает и ускоряет процесс постановки диагноза ВЗК, позволяет исключить другие диагнозы кишечных заболеваний. При этом диагностика проводится неинвазивным методом, путем анализа копроэкстракта, тогда как классические методы диагностики подразумевают колоноскопию и биопсию с последующей гистологией. Данный способ позволяет с чувствительностью 97,7% и специфичностью 98,6% выделить группу больных ВЗК.The technical result consists in the fact that the claimed method for differential diagnosis of inflammatory bowel diseases in children, carried out on the basis of an assessment of the relative level of anti-GP2 IgA antibodies in coproextracts, makes it possible to distinguish patients with IBD and other pathologies. The developed method of differential diagnosis facilitates and accelerates the diagnosis of IBD, and eliminates other diagnoses of intestinal diseases. In this case, the diagnosis is carried out by a non-invasive method, by analyzing the coproextract, while classical diagnostic methods involve colonoscopy and biopsy followed by histology. This method allows with a sensitivity of 97.7% and a specificity of 98.6% to distinguish a group of patients with IBD.

Сущность изобретения заключается в следующем:The invention consists in the following:

Для выявления уровней анти-GP2 IgA-антител в копроэкстрактах было обследовано 110 детей (64 мальчика и 46 девочек) в возрасте от 2,6 до 17,9 лет. Согласно установленным диагнозам эти дети были разделены на 3 группы:To identify levels of anti-GP2 IgA antibodies in coproextracts, 110 children (64 boys and 46 girls) aged 2.6 to 17.9 years were examined. According to established diagnoses, these children were divided into 3 groups:

* 36 пациентов с болезнью Крона составили группу 1,* 36 patients with Crohn's disease made up group 1,

* 30 пациентов с язвенным колитом вошли в группу 2,* 30 patients with ulcerative colitis were included in group 2,

* 44 пациента с дисбиозом кишечника были отнесены в контрольную группу 3.* 44 patients with intestinal dysbiosis were assigned to control group 3.

Для получения водно-солевого копроэкстракта один объем фекалий смешивали с 3 объемами забуференного фосфатами физиологического раствора и осаждали центрифугированием в течение 15 мин при 3000 об/мин (разведение составляло 1:4 в контрольной группе), для детей групп 1 и 2 рабочее разведение составляло 1:40. Надосадок использовали для определения уровня антител. Определение уровней анти-GP2 IgA-антител проводили методом иммуноферментного анализа с помощью коммерческих тест-систем (Generic Assays, Dahlewitz/Berlin, Germany), согласно инструкции производителя. Определение уровней секреторных IgA-антител (sIgA) в копроэкстрактах проводили также иммуноферментным методом с помощью коммерческих тест-систем (Вектор-Бест, Россия).To obtain a water-salt coproextract, one volume of feces was mixed with 3 volumes of phosphate-buffered saline and precipitated by centrifugation for 15 min at 3000 rpm (dilution was 1: 4 in the control group), for children of groups 1 and 2, the working dilution was 1 : 40. The supernatant was used to determine the level of antibodies. The determination of anti-GP2 IgA antibody levels was carried out by enzyme-linked immunosorbent assay using commercial test systems (Generic Assays, Dahlewitz / Berlin, Germany), according to the manufacturer's instructions. Determination of the levels of secretory IgA antibodies (sIgA) in coproextracts was also carried out by the enzyme immunoassay using commercial test systems (Vector-Best, Russia).

Анти-GP2 IgA антитела были обнаружены у всех обследованных детей независимо от диагноза (Фигура 1). Однако, количество sIgA в копроэкстрактах больных с ВЗК и дисбиозом кишечника различалось. Соотношение GP2-IgA/sIgA у пациентов с ВЗК оказалось значительно ниже, чем у детей с дисбиозом (Фигура 2). Для детей с БК этот показатель составил 0,326, для детей с ЯК - 0,327, а для детей с дисбиозом кишечника - 2,332. Очевидно, что по исследуемому критерию нет различий между детьми с БК и ЯК, но они значительно отличаются от детей, не имеющих диагноза ВЗК (р<0,001). В связи с этим, группы 1 и 2 были объединены в одну группу ВЗК для дальнейшего анализа. Для выяснения информативности предложенного критерия относительного количества GP2-IgA/sIgA в копроэкстрактах больных с ВЗК по сравнению с больными с дисбиозами, был проведен ROC-анализ полученных данных. Была продемонстрирована высокая вероятность правильного выделения группы больных ВЗК, площадь под ROC кривой (AUC) составила 0,998 (0,993-1,002) (р<0,05). Далее был произведен расчет для определения уровня порогового значения (cut-off) относительного уровня GP2-IgA/sIgA. Был получен уровень cut-off=0,784 (показан жирной черной линией на фигуре 2), который с чувствительностью 97,7% и специфичностью 98,6% позволяет выделить группу больных ВЗК.Anti-GP2 IgA antibodies were detected in all examined children regardless of diagnosis (Figure 1). However, the number of sIgA in coproextracts of patients with IBD and intestinal dysbiosis was different. The GP2-IgA / sIgA ratio in patients with IBD was significantly lower than in children with dysbiosis (Figure 2). For children with CD, this indicator was 0.326, for children with UC - 0.327, and for children with intestinal dysbiosis - 2.332. Obviously, according to the studied criterion, there are no differences between children with CD and UC, but they differ significantly from children without a diagnosis of IBD (p <0.001). In this regard, groups 1 and 2 were combined into one IBD group for further analysis. To clarify the information content of the proposed criterion for the relative amount of GP2-IgA / sIgA in coproextracts of patients with IBD compared with patients with dysbiosis, a ROC analysis of the data was performed. A high probability of the correct selection of a group of patients with IBD was demonstrated, the area under the ROC curve (AUC) was 0.998 (0.993-1.002) (p <0.05). Next, a calculation was made to determine the cut-off level of the relative GP2-IgA / sIgA level. A cut-off level of 0.784 was obtained (shown by a bold black line in Figure 2), which with a sensitivity of 97.7% and a specificity of 98.6% made it possible to isolate a group of patients with IBD.

Осуществление способа изобретения поясняется на следующем примере.The implementation of the method of the invention is illustrated by the following example.

Пример.Example.

В качестве примера в Таблице 1 приведены рассчитанные показатели GP2-IgA/sIgA в копроэкстрактах детей с неизвестным анамнезом, проходивших обследование в отделении детской гастроэнтерологии. Используя значения порогового критерия (0,784), находим, что обследованные дети №7, 8 и 10 имеют значения расчетного показателя GP2-IgA/sIgA ниже порогового критерия, что должно быть расценено как ВЗК. Дети под №1, 2, 3, 4, 6 и 9 имеют значения расчетного показателя GP2-IgA/sIgA, который существенно выше порогового критерия, что должно быть расценено как отсутствие ВЗК. Ребенок под №5 имеет значение расчетного показателя близкое (0,809), но все-таки чуть выше, чем пороговый критерий (0,784), что должно быть расценено как сомнительный результат.As an example, Table 1 shows the calculated parameters of GP2-IgA / sIgA in coproextracts of children with an unknown history who were examined in the department of pediatric gastroenterology. Using the values of the threshold criterion (0.784), we find that the examined children No. 7, 8 and 10 have values of the estimated GP2-IgA / sIgA below the threshold criterion, which should be regarded as IBD. Children # 1, 2, 3, 4, 6, and 9 have a calculated GP2-IgA / sIgA value that is significantly higher than the threshold criterion, which should be regarded as the absence of IBD. The child under No. 5 has a calculated indicator value close to (0.809), but still slightly higher than the threshold criterion (0.784), which should be regarded as a dubious result.

Последующий анализ диагнозов у обследованных детей, поставленных в соответствии с существующими медицинскими стандартами показал, что у ребенка №7 - БК, у ребенка №8 - ЯК, у ребенка №10 - БК, то есть они были правильно отнесены в группу ВЗК согласно предложенному критерию. У ребенка №1 - гепатит, у ребенка №2 - дисбиоз кишечника, ребенок №3 - оказался здоровым, проходившим диспансеризацию, у ребенка №4 - нарушение моторики кишечника, у ребенка №6 - цирроз печени и у ребенка №9 - гликогеновая болезнь.Subsequent analysis of the diagnoses of the examined children, made in accordance with existing medical standards, showed that the child No. 7 had CD, the child No. 8 had UC, the child No. 10 had CD, that is, they were correctly assigned to the IBD group according to the proposed criterion . In child No. 1, hepatitis, in child No. 2, intestinal dysbiosis, child No. 3, turned out to be healthy undergoing medical examination, in child No. 4, impaired intestinal motility, in child No. 6, cirrhosis of the liver, and in child No. 9, glycogen disease.

Можно заключить, что в этой группе были как здоровые дети, так и дети, страдающие различной патологией желудочно-кишечного тракта, но в ней не оказалось ни одного больного ВЗК, что и следовало из уровня предложенного критерия. Ребенок №5, имевший уровень критерия лишь немного выше порогового значения и расцененный как сомнительный, тем не менее, оказался с диагнозом периодическая болезнь (то есть не ВЗК), а значит, даже небольшое превышение критерия отношения GP2-IgA/sIgA в копроэкстракте позволяет исключить диагноз ВЗК.It can be concluded that in this group there were both healthy children and children suffering from various pathologies of the gastrointestinal tract, but not a single patient with IBD appeared in it, which follows from the level of the proposed criterion. Child No. 5, who had a criterion level only slightly higher than the threshold value and regarded as doubtful, nevertheless, was diagnosed with a periodic illness (that is, not IBD), which means that even a slight excess of the criterion for the ratio GP2-IgA / sIgA in the coproextract allows to exclude diagnosis of IBD.

Таким образом, используя пороговый критерий для отношения GP2-IgA/sIgA в копроэкстракте, удалось правильно отделить детей, страдающих ВЗК, от группы здоровых и детей с иной патологией желудочно-кишечного тракта. При этом определение отношения GP2-IgA/sIgA в копроэкстрактах является неинвазивным и легко воспроизводимым методом. Нам не удалось получить значимых различий между детьми с различными нозологическими формами ВЗК. С другой стороны, предложенный критерий позволяет отдифференцировать пациентов с ВЗК от другой патологии желудочно-кишечного тракта. Ранняя постановка диагноза позволяет раньше начать лечение и получить лучшие результаты от терапии этой тяжелой патологии.Thus, using the threshold criterion for the GP2-IgA / sIgA ratio in the coproextract, it was possible to correctly separate children suffering from IBD from a group of healthy and children with a different pathology of the gastrointestinal tract. Moreover, the determination of the ratio GP2-IgA / sIgA in coproextracts is a non-invasive and easily reproducible method. We were not able to obtain significant differences between children with different nosological forms of IBD. On the other hand, the proposed criterion makes it possible to differentiate patients with IBD from another pathology of the gastrointestinal tract. An early diagnosis allows you to start treatment earlier and get better results from the treatment of this severe pathology.

ЛИТЕРАТУРАLITERATURE

1. С.Abraham, J. Н. Cho, Inflammatory Bowel Disease The New England Journal of Medicine 2009; 361:2066-2078.1. C. Abraham, J. N. Cho, Inflammatory Bowel Disease The New England Journal of Medicine 2009; 361: 2066-2078.

2. Elgbratt K., Kurlberg G., Hahn-Zohric M. et al. Rapid migration of thymic emigrants to the colonic mucosa in ulcerative colitis patients // Clin Exp Immunol - Nov 2010. - Vol. 162, №2. - P. 325-336.2. Elgbratt K., Kurlberg G., Hahn-Zohric M. et al. Rapid migration of thymic emigrants to the colonic mucosa in ulcerative colitis patients // Clin Exp Immunol - Nov 2010. - Vol. 162, No. 2. - P. 325-336.

3. Lierop P.P., Samson J.N., Escher J.C. et al. Role of the innate immune system in the pathogenesis of inflammatory bowel disease // J Pediatr Gastroenterol Nutr - 2009. - Vol. 48, №2. - P. 142-151.3. Lierop P.P., Samson J.N., Escher J.C. et al. Role of the innate immune system in the pathogenesis of inflammatory bowel disease // J Pediatr Gastroenterol Nutr - 2009. - Vol. 48, No. 2. - P. 142-151.

4. Патент 2125264 Российской Федерации МПК G01N 33/48. Способ диагностики болезни Крона у детей. / Фадеев М.Ю., Смирнов В.П., Потехин П.П.; патентообладатель Нижегородский медицинский базовый колледж. (RU) №97102090/14, заявл. 10.02.1997, опубл. 20.01.1999.4. Patent 2125264 of the Russian Federation IPC G01N 33/48. A method for diagnosing Crohn's disease in children. / Fadeev M.Yu., Smirnov V.P., Potekhin P.P .; patent holder Nizhny Novgorod Medical Basic College. (RU) No. 97102090/14, claimed 02/10/1997, publ. 01/20/1999.

5. Шумилов П.В. Нерешенные вопросы патогенеза воспалительных заболеваний кишечника у детей. Роль пристеночной микрофлоры кишечника // Педиатрическая фармакология. - 2010. - Т. 7. - №5. - С. 54-58.5. Shumilov P.V. Unresolved issues of the pathogenesis of inflammatory bowel disease in children. The role of parietal microflora of the intestine // Pediatric pharmacology. - 2010. - T. 7. - No. 5. - S. 54-58.

6. Патент 2601132 Российской Федерации МПК C12Q 1/68. Набор синтетических олигонуклеотидов для диагностики болезни Крона и неспецифического язвенного колита путем выявления маркерных участков бактериальной ДНК методом полимеразной цепной реакции / Алексеев Д.Г., Павленко А.В., Каныгина А.В.; патентообладатель Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Московский физико-технический институт (государственный университет)» (МФТИ) (RU) №2015151029/10, заявл. 27.11.2015 опубл. 27.10.2016 Бюл. №306. Patent 2601132 of the Russian Federation IPC C12Q 1/68. A set of synthetic oligonucleotides for the diagnosis of Crohn's disease and ulcerative colitis by identifying marker sections of bacterial DNA by polymerase chain reaction / Alekseev DG, Pavlenko AV, Kanygina AV; patent holder Federal State Autonomous Educational Institution of Higher Education "Moscow Institute of Physics and Technology (State University)" (MIPT) (RU) No. 2015151029/10, 11/27/2015 publ. 10/27/2016 Bull. Number 30

7. Патент 2556573 Российской Федерации МПК А61В 8/08, А61В 8/06. Способ дифференциальной диагностики хронических воспалительных заболеваний кишечника у детей. / Пыков М.И., Колисниченко М.М., Горячева О.А.; патентообладатель Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования «Российская медицинская академия постдипломного образования» МЗ РФ (ГБОУ ДПО РМАПО Минздрава России) (RU) №2014125632/14, заявл. 25.06.2014, опубл. 10.07.2015 Бюл №197. Patent 2556573 of the Russian Federation IPC А61В 8/08, А61В 8/06. A method for the differential diagnosis of chronic inflammatory bowel diseases in children. / Pykov M.I., Kolisnichenko M.M., Goryacheva O.A .; patent holder State budgetary educational institution of further professional education “Russian Medical Academy of Postgraduate Education” of the Ministry of Health of the Russian Federation (GBOU DPO RMAPO of the Ministry of Health of Russia) (RU) No. 2014125632/14, declared 06/25/2014, publ. 07/10/2015 Bull №19

8. Патент 2366956 Российской Федерации МПК G01N 33/52 Способ дифференциальной диагностики неспецифического язвенного колита и болезни Крона у детей. / Федулова Э.Н., Гордецов А.С., Тутина О.А., Лебедев А.В.; патентообладатель Федеральное государственное учреждение «Нижегородский НИИ детской гастроэнтерологии Росмедтехнологий» (RU) №2007126007/15, заявл. 09.07.2007, опубл. 20.01.2009 Бюл. №2.8. Patent 2366956 of the Russian Federation IPC G01N 33/52 Method for differential diagnosis of ulcerative colitis and Crohn’s disease in children. / Fedulova E.N., Gordetsov A.S., Tutina O.A., Lebedev A.V .; patent holder Federal State Institution "Nizhny Novgorod Research Institute of Pediatric Gastroenterology of Rosmedtehnologii" (RU) No. 2007126007/15, decl. 07/09/2007, publ. 01/20/2009 Bull. No. 2.

9. Патент 2558067 Российской Федерации МПК G01N 33/487 Способ дифференциальной диагностики неспецифического язвенного колита и болезни Крона у детей. / Федулова Э.Н., Гордецов А.С., Красникова О.В., Тутина О.А.; патентообладатели: Федеральное государственное бюджетное учреждение «Нижегородский научно-исследовательский институт детской гастроэнтерологии» МЗ РФ (ФГБУ «ННИИДГ» Минздрава России (RU), Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Нижегородская государственная медицинская академия» МЗ РФ (ГБОУ ВПО НижГМА Минздрава России) (RU) №2014128388/15, заявл. 10.07.2014, опубл. 27.05.2015 Бюл. №21.9. Patent 2558067 of the Russian Federation IPC G01N 33/487 Method for differential diagnosis of ulcerative colitis and Crohn’s disease in children. / Fedulova E.N., Gordetsov A.S., Krasnikova O.V., Tutina O.A .; patent holders: Federal State Budget Institution “Nizhny Novgorod Research Institute of Pediatric Gastroenterology” of the Ministry of Health of the Russian Federation (FSBI NNIIDG) of the Ministry of Health of the Russian Federation (RU), State Budgetary Educational Institution of Higher Professional Education “Nizhny Novgorod State Medical Academy” of the Ministry of Health of the Russian Federation (GBOU VPO Nizhny State Medical Academy of the Russian Ministry of Health) (RU) No. 2014128388/15, claimed on 07/10/2014, published on 05.27.2015 Bul.

10. Патент 2251694 Российской Федерации МПК G01N 33/49 Способ дифференциальной диагностики язвенного колита и болезни Крона. / Шатохина С.Н., Мишуровская Т.С., Цоденков Г.В., Шабалин В.Н.; патентообладатель Российский НИИ геронтолгии Минздрава РФ (RU) №2003112588/15, заявл. 30.04.2003, опубл. 27.10.2004 Бюл. №30.10. Patent 2251694 of the Russian Federation IPC G01N 33/49 Method for the differential diagnosis of ulcerative colitis and Crohn's disease. / Shatokhina S.N., Mishurovskaya T.S., Tsodenkov G.V., Shabalin V.N .; patent holder of the Russian Research Institute of Gerontology of the Ministry of Health of the Russian Federation (RU) No. 2003112588/15, 04/30/2003, publ. 10/27/2004 Bull. No. 30.

11. Roggenbuck D., Hausdorf G., Martinez-Gamboa L., Reinhold D.,

Jungblut P.R., Porstmann Т., Laass M.W., Henker j.,

et al. Identification of GP2, the major zymogen granule membrane glycoprotein, as the autoantigen of pancreatic antibodies in Crohn's disease. Gut 2009.58: 1620-1628.11. Roggenbuck D., Hausdorf G., Martinez-Gamboa L., Reinhold D.,

Jungblut PR, Porstmann T., Laass MW, Henker j.,

et al. Identification of GP2, the major zymogen granule membrane glycoprotein, as the autoantigen of pancreatic antibodies in Crohn's disease. Gut 2009.58: 1620-1628.

12. Roggenbuck D., Reinhold D., Wex T., Goihl A., von Arnim U., Mafertheiner P.,

Porstmann Т., Porstmann S., Liedvogel В., et al. Autoantibodies to GP2, the major zymogen granule membrane glycoprotein, are new markers in Crohn's disease. Clin. Chim. Acta 2011. 412: 718-724.12. Roggenbuck D., Reinhold D., Wex T., Goihl A., von Arnim U., Mafertheiner P.,

Porstmann T., Porstmann S., Liedvogel B., et al. Autoantibodies to GP2, the major zymogen granule membrane glycoprotein, are new markers in Crohn's disease. Clin. Chim. Acta 2011.412: 718-724.

13. Hase K., Kawano K., Nochi Т., Pontes G.S., Fukuda S., Ebisawa M. et al. Uptake through glycoprotein 2 of FimH+ bacteria by M-cells initiates mucosal immune response, Nature 2009 462: 226-230.13. Hase K., Kawano K., Nochi T., Pontes G.S., Fukuda S., Ebisawa M. et al. Uptake through glycoprotein 2 of FimH + bacteria by M-cells initiates mucosal immune response, Nature 2009 462: 226-230.

14. P. Pavlidis, O. Romanidou, D. Roggenbuck, M.G. Mytilinaiou, F. Al-Sulttan, C. Liaskos, D.S. Smyk, A.L. Koutsoumpas, E.I. Rigopoulou, K. Conrad, A. Forbes, D.P. Bogdanos Ileal Inflammation May Trigger the Development of GP2-Specific Pancreatic Autoantibodies in Patients with Crohn's Disease. Clin Dev Immunol. 2012; 2012: 640835. doi: 10.1155/2012/64083514. P. Pavlidis, O. Romanidou, D. Roggenbuck, M.G. Mytilinaiou, F. Al-Sulttan, C. Liaskos, D.S. Smyk, A.L. Koutsoumpas, E.I. Rigopoulou, K. Conrad, A. Forbes, D.P. Bogdanos Ileal Inflammation May Trigger the Development of GP2-Specific Pancreatic Autoantibodies in Patients with Crohn's Disease. Clin Dev Immunol. 2012; 2012: 640835. doi: 10.1155 / 2012/640835

15. Werner L, Sturm A, Roggenbuck D, Yahav L, Zion T, Meirowithz E, Ofer A, Guzner-Gur H, Tulchinsky H, Dotan I. Antibodies against glycoprotein 2 are novel markers of intestinal inflammation in patients with an ileal pouch. J Crohns Colitis. 2013 Dec; 7(11):e522-32. doi: 10.1016/j.crohns.2013.03.009.15. Werner L, Sturm A, Roggenbuck D, Yahav L, Zion T, Meirowithz E, Ofer A, Guzner-Gur H, Tulchinsky H, Dotan I. Antibodies against glycoprotein 2 are novel markers of intestinal inflammation in patients with an ileal pouch . J Crohns Colitis. 2013 Dec; 7 (11): e522-32. doi: 10.1016 / j.crohns.2013.03.03.009.

16. Топтыгина А.П., Семикина Е.Л., Бобылева Г.В., Мирошкина Л.В., Петричук С.В. Цитокиновый профиль у детей с воспалительными заболеваниями кишечника. Биохимия, 2014, том 79, №12, с. 1673-1679.16. Toptygina A.P., Semikina E.L., Bobyleva G.V., Miroshkina L.V., Petrichuk S.V. Cytokine profile in children with inflammatory bowel disease. Biochemistry, 2014, Volume 79, No. 12, p. 1673-1679.

Claims

A method for differential diagnosis of inflammatory bowel diseases in children, which involves determining the level of anti-GP2 IgA antibodies and the level of secretory sIgA antibodies in a coproextract of the subject using enzyme immunoassay, comparing the obtained value of the ratio GP2 IgA / sIgA with a threshold criterion of 0784, characterized in that that if the GP2 IgA / sIgA ratio is below 0.784, the subject is diagnosed with inflammatory bowel disease, and if the calculated value of the GP2 IgA / sIgA ratio is above 0.784, then make a diagnosis of inflammatory bowel disease.