RU2697781C2 - Вспомогательный плазмидный лентивирусный экспрессионный вектор для получения высоких титров vpx-содержащих лентивирусных частиц, обеспечивающий эффективное заражение моноцитов и дендритных клеток человека - Google Patents
Вспомогательный плазмидный лентивирусный экспрессионный вектор для получения высоких титров vpx-содержащих лентивирусных частиц, обеспечивающий эффективное заражение моноцитов и дендритных клеток человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2697781C2 RU2697781C2 RU2017146642A RU2017146642A RU2697781C2 RU 2697781 C2 RU2697781 C2 RU 2697781C2 RU 2017146642 A RU2017146642 A RU 2017146642A RU 2017146642 A RU2017146642 A RU 2017146642A RU 2697781 C2 RU2697781 C2 RU 2697781C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vpx
- sequence
- lentiviral
- dendritic cells
- vector
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/867—Retroviral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в терапии онкологических заболеваний. Описан универсальный вспомогательный плазмидный экспрессионный лентивирусный вектор для получения высоких титров вирусных частиц, содержащих ген Vpx, включающий в качестве базовых элементов, обеспечивающих функционирование вектора, последовательность вирион-ассоциированного белка Vpx, содержащую С-концевой HIV-1 gag/pol мотив и FLAG последовательность и объединенную с последовательностью гена трансактиваторного белка Rev через специфическую последовательность Т2А, обеспечивающую расщепление слитых белков во время процесса трансляции мРНК трансгена; в качестве регуляторных элементов- RSVпромотор/энхансер [rous sarcoma virus) и NES (nuclear export signal)- сигнал экспорта из ядра в цитоплазму. 4 ил., 1 табл., 3 пр.
Description
Вспомогательный плазмидный лентивирусный экспрессионный вектор для получения высоких титров Vpx-содержащих вирусных частиц, обеспечивающий эффективное заражение моноцитов и дендритных клеток человека
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в терапии онкологических заболеваний.
Дендритные клетки играют ключевую роль в регуляции приобретенного иммунитета, обеспечивая эффективную защиту организма против множества инфекций и различных патологий. Основная функция дендритных клеток заключается в поглощении чужеродных антигенов, их процессирование и презентация антигенных детерминант эффекторным клеткам иммунной системы. В контексте онкологических заболеваний дендритные клетки являются крайне перспективными терапевтическими агентами, благодаря возможности презентации специфических опухолевых антигенов и активации противоопухолевого ответа в организме пациента.
В виду низкого содержания дендритных клеток в крови человека, стандартная схема приготовления дендритно-клеточных вакцин предполагает дифференцировку моноцитов периферической крови пациента в дендритные клетки под воздействием набора цитокинов. В дальнейшем полученные подобным образом дендритные клетки нагружаются очищенным препаратом специфического опухолевого антигена или тотальным лизатом опухолевых клеток. Наиболее оптимальным способом загрузки опухолевых антигенов является трансдукция дендритных клеток антиген-содержащими вирусными векторами, обеспечивающими высокоэффективную презентацию антигенов молекулами главного комплекса гистосовместимости первого класса (MHCI). Как правило, для трансдукции используют лентивирусные векторы на основе вируса иммунодефицита человека 1 типа HIV1, которые позволяют интегрировать целевую последовательность в геномную ДНК клетки, тем самым обеспечивая постоянный и стабильный уровень экспрессии антигена.
В уровне техники раскрыты различные конструкции лентивирусных векторов.
Известен рекомбинантный лентивирусный вектор, содержащий: (а) экспрессионную кассету, содержащую трансген, расположенный под контролем промотора, который обладает активностью в отношении стимуляции выявляемой транскрипции трансгена в человеческих клетках человека; и (b) центральный полипуриновый тракт (сРРТ), расположенный выше экспрессирующей кассеты. Элементом посттранскрипционной регуляции является элемент посттранскрипционной регуляции вируса гепатита североамериканского лесного сурка (WRPE) или элемент посттранскрипционной регуляции вируса гепатита В (HPRE). Промотор может представлять собой EF1-α. Трансген например представляет собой gp91-phox, gp47-phox, эритропоэтин, интерлейкин, колониестимулирующий фактор, интегрин α11bβ, ген множественной лекарственной резистентности, противовирусный ген, ген, кодирующий фактор свертывания крови VIII, ген, кодирующий фактор свертывания крови IX, Т-клеточный рецептор антигена, В-клеточный рецептор антигена, одноцепочечное антитело (ScFv), TNF, гамма-интерферон, CTLA4, В4, Melana, MAGE, маркерный ген, люциферазу или GFP (патент RU 2305708).
Известен способ индуцирования иммунного ответа против антигена у субъекта путем введения субъекту, терапевтически эффективного количества дендритной клетки или ее предшественника, который трансдуцируется псевдотипированным лентивирусным вектором, содержащим нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, который экспрессируется в указанной дендритной клетке и представлен на поверхности дендритной клетки, так что после введения субъекту иммунный ответ индуцируется против антигена у субъекта. Описан вектор, который содержит белок оболочки из вируса, отличный от лентивируса, и геном лентивируса, кодирующий продукты гена env и nef; и, по меньшей мере, три вспомогательных белковых генных продукта, например, нефункциональные vif, vpr и vpu (международная заявка WO 0116342 (А1)).
Однако применение лентивирусных векторов для создания дендритно-клеточных вакцин ограничено низкой эффективностью трансдукции дендритных клеток. Низкая эффективность трансдукции обусловлена экспрессией в дендритных клетках белка SAMHD1, специфической фосфогидролазы, которая расщепляет нуклеотиды (dNTPs) до неорганического фосфата и нуклеозида, снижая тем самым пул dNTPs и препятствуя обратной транскрипции вирусного генома. Кроме того, SAMHD1 обладает нуклеазной активностью и приводит к деградации вирусной РНК, снижая вероятность интеграции целевой последовательности до минимума. Для многократного увеличения уровня трансдукции дендритных клеток может быть использован метод создания лентивирусных вирионов, ассоциированных с белком Vpx. Vpx - вирион - ассоциированный белок - характерен для вируса иммунодефицита человека 2 типа (HIV-2) и большинства вирусов иммунодефицита обезьян (SIV), однако отсутствует в HIV-1. Попадая в клетку, Vpx взаимодействует с SAMHD1 и направляет его на путь протеасомной деградации, тем самым позволяя вирусу реплицироваться и встраиваться в геном клетки-хозяина.
В уровне техники имеется ряд решений, где используется последовательность Vpx.
Известна композиция, содержащая псевдотипированные лентивирусные векторные частицы, содержащие (а) белок Vpx или Vpr-белок, который сохраняет активность, ингибирующую SAMHDI, (b) экзогенный полинуклеотид, кодирующий антиген, и (с) множество гликопротеинов оболочки, которые предпочтительно связывают клетки, экспрессирующие DC-SIGN, где ген лентивирусного вектора получен из ВИЧ-1. Ген лентивирусного вектора имеет инактивированный 3'-длинный концевой повтор (LTR) или самоиннактивирующий 3'-длинный концевой повтор (LTR), элемент U3, в котором отсутствует, по меньшей мере, одна из энхансерной последовательности, блок TATA, сайт Spl, сайт NK-kappa В или полипуриновый тракт (РРТ), нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 21, 22 или 23. Дополнительно может содержаться нуклеотидная последовательность, кодирующая дендритную клетку (заявка ЕА 201491813 (А1)).
В качестве наиболее близкого аналога (прототипа) может быть указан лентивирусный вектор который может быть использован для получения вирионов/вирусов, которые проявляют повышенную инфекционность по отношению к макрофагам, полученным из моноцитов (MDM) и дендритным клеткам (MDDC). Лентивирус сконструирован с р6 химерными пакетами gag-pol Vpx и заражает MDDC. (US 9149519 (В2), опубл. 2015-10-06).
Технической задачей изобретения является создание вспомогательного лентивирусного вектора, позволяющего получать вирусные частицы с высоким содержанием молекул белка Vpx.
Задача решается разработанным универсальным плазмидным экспрессионным лентивирусным вектором, кодирующим последовательность гена Vpx, содержащую С-концевой HIV-1 gag/pol мотив и FLAG последовательность, и объединенную с последовательностью гена трансактиваторного белка Rev через специфическую последовательность Т2А, обеспечивающую расщепление слитых белков во время процесса трансляции мРНК трансгена; также включающим ряд регуляторных элементов: RSV промотор/энхансер (rous sarcoma virus), NES (nuclear export signal)-сигнал экспорта из ядра в цитоплазму, MCS (multiple cloning site).
Изобретение иллюстрируют следующие графические материалы:
Фиг. 1. Схема основных элементов коммерческой лентивирусной плазмиды pRSV-Rev.
Фиг. 2. Карта вспомогательного вектора pRSV-Rev-T2A-Vpx, кодирующего белок Vpx.
Фиг. 3. Микрофотография дендритных клеток, зараженных вирусом EF1alpha-tagRFP-NP-puro.
Фиг. 4. Цитометрический анализ количества дендритных клеток, экспрессирующих последовательность гена RFP в составе вируса.
Технический результат, обеспечиваемый изобретением: многократное повышение эффективности трансдукции стабильной экспрессии последовательности целевого антигена в дендритных клетках человека, способных экспрессировать различные генетические конструкции. Изобретение иллюстрируют следующие примеры:
Пример 1. Получение вспомогательного лентивирусного вектора, кодирующего последовательность гена Vpx.
При создании заявленной конструкции производят модификацию коммерческой лентивирусной упаковочной плазмиды pRSV-Rev (Addgene), исходная структура которой приведена на фиг. 1.
Модификация заключается в переклонировании последовательности трансактиваторного белка Rev таким образом, чтобы С-концевой регион данного белка содержал последовательность "self cleaving" Т2А пептида и дополнительный рестрикционный сайт XbaI. Для этого сначала производят амплификацию последовательности Rev с праймерами Rev (прямой праймер) и Rev-T2A (обратный 1]. В качестве матрицы используют коммерческую плазмиду pRSV-Rev. Затем с амплифицированного фрагмента снова производят амплификацию Rev, но в последовательность праймера ранее закладывают последовательности Т2А и сайтов рестрикции XbaI и BglII. Далее производят рестрикцию коммерческой плазмиды pRSV-Rev и конечного амплифицированного фрагмента по сайтам XhoI и BglII. Рестрицированный вектор и фрагмент лигируют.
Последовательность гена Vpx амплифицируют и клонируют по сайтам BglII и XbaI в модифицированную плазмиду pRSV-Rev. Для увеличения эффективности упаковки белка Vpx в капсид вируса в последовательность прямого праймера вводят последовательность HIV-1 gag/pol упаковочного мотива. Кроме того, для идентификации упаковки белка Vpx в капсид лентивирусных частиц, в С-концевую область амплифицированной последовательности Vpx помещают последовательность FLAG эпитопа.
Нуклеотидные последовательности элементов, встроенных в pRSV-Rev:
- Последовательность Т2А пептида 5'-ATGGCCTTACCAGTGACCGCCTTGCTCCTGCCGCTGGCCTTGCTGCTCCACGCCGCCAGGCCG-3' SEQ ID №1
- Последовательность рестрикционного сайта XbaI 5'-TCTAGA-3'
SEQ ID №2
- Последовательность Vpx
SEQ ID №3
- Последовательность FLAG 5'-GACTACAAAGACGATGACGACAAG-3' SEQ ID №4
Нуклеотидную последовательность созданной генетической конструкции верифицируют методом секвенирования по Сэнгеру. Итогом работы стала генетическая конструкция pRSV-Rev-T2A-Vpx, структура которой представлена на фиг. 2.
Пример 2. Структура вспомогательного лентивирусного вектора, кодирующего последовательность гена Vpx.
В состав заявленного вектора входит ряд базовых и регуляторных элементов, обеспечивающих полноценное функционирование вектора:
- RSV промотор/энхансер (rous sarcoma virus) - последовательность, обеспечивающая стабильную экспрессию во многих эукариотических клетках.
- NES (nuclear export signal) - короткая последовательность, способствующая экспорту белка из клеточного ядра в цитоплазму через ядерный поровый комплекс.
- Rev - регуляторная последовательность, обеспечивающая транспортировку молекулы вирусной мРНК из ядра в цитоплазму, где происходит ее экспрессия.
- Т2А - последовательность, обеспечивающая расщепление слитых белков во время процесса трансляции мРНК трансгена. В заявленной генетической конструкции обеспечивает расщепление белков Rev и Vpx.
- HIV-1 gag/pol - последовательность, способствующая интеграции белка в состав вирусной частицы. В описываемой конструкции обеспечивает интеграцию белка Vpx.
- FLAG - последовательность, позволяющая идентифицировать белок, с которым она конъюгирована. В заявленном векторе FLAG слит с Vpx.
- Vpx - вирион - ассоциированный белок, характерный для вируса иммунодефицита человека 2 типа (HIV-2) и большинства вирусов иммунодефицита обезьян (SIV). Направляет белок SAMHD1 на путь протеасомной деградации, повышая таким образом эффективность репликации вирусов в дендритных клетках.
Пример 3. Анализ эффективности наработки вирусных частиц в дендритных клетках человека, трансфицированных лентивирусом, содержащим белок Vpx.
Для анализа эффективности трансдукции дендритных клеток Vpx-содержащим вирусом клеточная линия НЕК293Т котрансфецируют лентивирусным вектором pLenti-EF1alpha-tagRFP-NP-puro и упаковочными вспомогательными плазмидами pVSV-G, pMDLg/pRRE, pRSV-Rev-T2A-Vpx. В результате получают лентивирусный препарат, содержащий белок Vpx, инфекционный титр которого оценивался путем подсчета количества инфицированных (трансдуцированных) вирусным вектором клеток в популяции при использовании фиксированного объема вирусного препарата. Для сравнительной оценки получают вирусные частицы, в составе которых Vpx отсутствует. Содержание белка Vpx в составе вирионов верифицируют методом вестерн-блота окраской на FLAG пептид, который слит с С-концевым доменом Vpx.
Дендритные клетки, полученные в результате дифференцировки моноцитов, разделяют на 2 группы и инфицируют Vpx+ (содержащими Vpx) или Vpx- (не содержащими Vpx) вирусными частицами. Анализ экспрессии флуоресцентного белка RFP (red fluorescent protein) в составе вирусной кассеты проводят через 48 часов после инфекции методом проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии (фиг. 3, 4). В результате инфекции, 42,5% популяции дендритных клеток, зараженных Vpx+ лентивирусными частицами, экспрессировали флуоресцентный белок RFP (фиг. 4), в то время как для Vpx- дендритных клеток процент трансдукции составил всего 0.6. БОльшая эффективность трансдукции целевой клеточной культуры, выражающаяся в большем проценте трансдуцированных клеток, указывает на повышенный инфекционный титр лентивирусного препарата (при прочих равных условиях).
Полученные результаты свидетельствуют о высокой эффективности трансдукции дендритных клеток вирусными частицами, содержащими в своем составе Vpx белок, интегрированный в генетический материал вируса при помощи разработанного вспомогательного лентивирусного вектора pRSV-Rev-T2A-Vpx. Данный вектор может использоваться для получения дендритных клеток, способных экспрессировать различные генетические конструкции, что является важным условием для усиления иммунотерапевтического потенциала дендритно-клеточных вакцин.
Claims (1)
- Вспомогательный плазмидный лентивирусный экспрессионный вектор, предназначенный для эффективного заражения моноцитов и дендритных клеток человека, кодирующий последовательность гена Vpx, включающий в качестве базовых элементов, обеспечивающих функционирование вектора, последовательность вирион-ассоциированного белка Vpx, содержащую С-концевой HIV-1 gag/pol мотив и FLAG последовательность и объединенный с последовательностью гена трансактиваторного белка Rev через специфическую последовательность Т2А, обеспечивающую расщепление слитых белков во время процесса трансляции мРНК трансгена; в качестве регуляторных элементов - RSV промотор/энхансер (rous sarcoma virus) и NES (nuclear export signal) - сигнал экспорта из ядра в цитоплазму.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017146642A RU2697781C2 (ru) | 2017-12-28 | 2017-12-28 | Вспомогательный плазмидный лентивирусный экспрессионный вектор для получения высоких титров vpx-содержащих лентивирусных частиц, обеспечивающий эффективное заражение моноцитов и дендритных клеток человека |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017146642A RU2697781C2 (ru) | 2017-12-28 | 2017-12-28 | Вспомогательный плазмидный лентивирусный экспрессионный вектор для получения высоких титров vpx-содержащих лентивирусных частиц, обеспечивающий эффективное заражение моноцитов и дендритных клеток человека |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2017146642A RU2017146642A (ru) | 2019-06-28 |
RU2017146642A3 RU2017146642A3 (ru) | 2019-07-17 |
RU2697781C2 true RU2697781C2 (ru) | 2019-08-19 |
Family
ID=67209747
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017146642A RU2697781C2 (ru) | 2017-12-28 | 2017-12-28 | Вспомогательный плазмидный лентивирусный экспрессионный вектор для получения высоких титров vpx-содержащих лентивирусных частиц, обеспечивающий эффективное заражение моноцитов и дендритных клеток человека |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2697781C2 (ru) |
-
2017
- 2017-12-28 RU RU2017146642A patent/RU2697781C2/ru active
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Thomas D. Norton and Elizabeth A. Miller, Recent Advances in Lentiviral vaccines for Hiv-1 infection.Frontiers in Immunology, Volume 7, Article 243, 21 June 2016.doi: 10.3389/fimmu.2016.00243. Сорокин А.В. и др. Ядерно-цитоплазматический транспорт белков. Успехи биологической химии, т.47, 2007, с.89-128. * |
Thomas D. Norton and Elizabeth A. Miller, Recent Advances in Lentiviral vaccines for Hiv-1 infection.Frontiers in Immunology, Volume 7, Article 243, 21 June 2016.doi: 10.3389/fimmu.2016.00243. Сорокин А.В. и др. Ядерно-цитоплазматический транспорт белков. Успехи биологической химии, т.47, 2007, с.89-128. Trichas G. et al. Use of the viral 2A peptide for bicistronic expression in transgenic mice.BMC Biology, 15 September 2008.doi:10.1186/1741-7007-6-40. Иванов А.С. и др. Технологии белковой интерактомики.; НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН, 2011 г. (поступила в редакцию 08.06.2010 г.). * |
Trichas G. et al. Use of the viral 2A peptide for bicistronic expression in transgenic mice.BMC Biology, 15 September 2008.doi:10.1186/1741-7007-6-40. Иванов А.С. и др. Технологии белковой интерактомики.; НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН, 2011 г. (поступила в редакцию 08.06.2010 г.). * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2017146642A (ru) | 2019-06-28 |
RU2017146642A3 (ru) | 2019-07-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Sakuma et al. | Lentiviral vectors: basic to translational | |
Mangeot et al. | Development of minimal lentivirus vectors derived from simian immunodeficiency virus (SIVmac251) and their use for gene transfer into human dendritic cells | |
Merten et al. | Large-scale manufacture and characterization of a lentiviral vector produced for clinical ex vivo gene therapy application | |
Pluta et al. | Use of HIV as a gene transfer vector | |
EP2405945A2 (en) | Non-integrating retroviral vector vaccines | |
US20170362607A1 (en) | Use of non-subtype b gag proteins for lentiviral packaging | |
Ku et al. | Use of lentiviral vectors in vaccination | |
Heinkelein et al. | Efficient intracellular retrotransposition of an exogenous primate retrovirus genome | |
Titti et al. | Live attenuated simian immunodeficiency virus prevents super-infection by cloned SIVmac251 in cynomolgus monkeys. | |
Suzuki et al. | Gene regulatable lentiviral vector system | |
AU2021232603A1 (en) | On demand expression of exogenous factors in lymphocytes to treat HIV | |
Sakkhachornphop et al. | Zinc finger protein designed to target 2-long terminal repeat junctions interferes with human immunodeficiency virus integration | |
Johnson et al. | HIV-based lentiviral vectors: Origin and sequence differences | |
Jung et al. | Preclinical assessment of mutant human TRIM5α as an anti-HIV-1 transgene | |
Mühlebach et al. | Stable transduction of primary human monocytes by simian lentiviral vector PBj | |
US20150182617A1 (en) | Glycoproteins for pseudotyping lentivectors | |
Tareen et al. | A rev-independent gag/pol eliminates detectable psi-gag recombination in lentiviral vectors | |
Buffa et al. | A single administration of lentiviral vectors expressing either full-length human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) HXB2 Rev/Env or codon-optimized HIV-1JR-FL gp120 generates durable immune responses in mice | |
Schüle et al. | Restriction of HIV-1 replication in monocytes is abolished by Vpx of SIVsmmPBj | |
RU2697781C2 (ru) | Вспомогательный плазмидный лентивирусный экспрессионный вектор для получения высоких титров vpx-содержащих лентивирусных частиц, обеспечивающий эффективное заражение моноцитов и дендритных клеток человека | |
Barker et al. | Vectors derived from the human immunodeficiency virus, HIV-1 | |
Garg et al. | Conditional cytotoxic anti-HIV gene therapy for selectable cell modification | |
Poluri et al. | Genetic therapy for HIV/AIDS | |
Kloke et al. | Functional HIV‐2‐and SIVsmmPBj‐derived lentiviral vectors generated by a novel polymerase chain reaction‐based approach | |
Corre et al. | “RCL-pooling assay”: a simplified method for the detection of replication-competent lentiviruses in vector batches using sequential pooling |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20210628 Effective date: 20210628 |