RU2697199C1

RU2697199C1 - Composition for increasing content of highly differentiated cells in breast adenocarcinoma

Info

Publication number: RU2697199C1
Application number: RU2018120812A
Authority: RU
Inventors: Александр Исаевич Аутеншлюс; Сергей Алексеевич Архипов; Елена Семеновна Михайлова; Игорь Олегович Маринкин; Николай Анатольевич Вараксин
Priority date: 2018-06-05
Filing date: 2018-06-05
Publication date: 2019-08-13

Abstract

FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely to oncology, and can be used for increasing content of high-differentiated cells in breast tumour biopsy material. Composition for increasing content of high-differentiated cells in breast tumour biopsy material contains phytohaemagglutinin P (PHA-P) - 1.6–2.4 mcg/ml, phytohemagglutinin M - 1.6–2.4 mcg/ml, concanavalin A - 3.2–4.8 mcg/ml, lipopolysaccharide from Escherichia coli - 1.6–2.4 mcg/ml in ratio (pts.wt) 1/1/2/1 respectively. Tumour is an invasive protocol cancer, which is a histological type of grade II and III adenocarcinoma.EFFECT: using the given invention allows increasing the content of high-differentiated cells in breast adenocarcinoma after the composition effect.1 cl, 3 ex

Description

Изобретение относится к медицине, конкретно - к поиску и разработке средств для повышения дифференцировки опухолевых клеток рака молочной железы и их реверсии в нормальный фенотип, необходимых в дифференцировочной терапии рака молочной железы для снижения степени злокачественности опухоли.The invention relates to medicine, specifically to the search and development of tools to increase the differentiation of tumor cells of breast cancer and their reversion into a normal phenotype, necessary in the differentiation therapy of breast cancer to reduce the degree of malignancy of the tumor.

Изобретение может также быть использовано при изучении процессов и механизмов дифференцировки опухолевых клеток и их реверсии к нормальному фенотипу при раке молочной железы.The invention can also be used to study the processes and mechanisms of differentiation of tumor cells and their reversion to the normal phenotype in breast cancer.

Дифференцировочная терапия, основанная на инициации дифференцировки опухолевых клеток, уже достаточно давно известна в онкологии (Kawamata Н., Tachibana М., Fujimori Т., Imai Y. Differentiation-inducing therapy for solid tumors // Curr. Pharm. Des. - 2006. - Vol. 12. - №3. - P. 379-385). Однако среди известных препаратов с противоопухолевой активностью в настоящее время найдены пока только две группы препаратов, обладающие способностью эффективно повышать дифференцировку некоторых клеток неоплазменного генеза. К ним относятся вещества из группы ретиноидов (витамин А и его аналоги), а также вещества, влияющие на процесс метилирования генов трансформированных клеток (Massard С., Deutsch Е., Soria J.C. Tumor stem cell-targeted treatment: elimination or differentiation // Annals of Oncology.-2006. - Vol.17. - №11. - P. 1620-1624; Sell S. Stem cell origin of cancer and differentiation therapy // Crit. Rev. Oncol. Hematol. - 2004. - Vol. 51. - P. 1-28.). При этом в клинической практике пока применяются только ретиноиды (Hansen L., Sigman С, Andreola F., Ross S., Kelloff G., De Luca L. Retinoids in chemoprevention and differentiation therapy // Carcinogenesis. - 2000. - Vol. 21. - №7. - P. 1271-1279; Tang X.H., Gudas L.J. Retinoids, Retinoic Acid Receptors, and Cancer // Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease.- 2011. - Vol. 6. - P. 345-364.).Differentiation therapy based on the initiation of tumor cell differentiation has long been known in oncology (Kawamata N., Tachibana M., Fujimori T., Imai Y. Differentiation-inducing therapy for solid tumors // Curr. Pharm. Des. - 2006. - Vol. 12. - No. 3. - P. 379-385). However, among the known drugs with antitumor activity, so far only two groups of drugs have been found that have the ability to effectively increase the differentiation of some cells of non-plasma origin. These include substances from the group of retinoids (vitamin A and its analogues), as well as substances that affect the methylation of transformed cell genes (Massard C., Deutsch E., Soria JC Tumor stem cell-targeted treatment: elimination or differentiation // Annals of Oncology.-2006. - Vol.17. - No. 11. - P. 1620-1624; Sell S. Stem cell origin of cancer and differentiation therapy // Crit. Rev. Oncol. Hematol. - 2004. - Vol. 51 . - P. 1-28.). Moreover, in clinical practice so far only retinoids are used (Hansen L., Sigman C, Andreola F., Ross S., Kelloff G., De Luca L. Retinoids in chemoprevention and differentiation therapy // Carcinogenesis. - 2000. - Vol. 21 - No. 7. - P. 1271-1279; Tang XH, Gudas LJ Retinoids, Retinoic Acid Receptors, and Cancer // Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease.- 2011. - Vol. 6. - P. 345-364 .).

В настоящее время имеются убедительные результаты, свидетельствующие об эффективности использования ретиноидов в дифференцировочной терапии и лечении только острого промиелоцитарного лейкоза (Larson R.S., Brown D.C., Sklar L.A. Retinoic acid induces aggregation of the acute promyelocytic leukemia cell line NB-4 by utilization of LFA-1 and ICAM-2 // Blood. - 1997. - Vol.90. - N. 7. - P. 2747-2756; Ohno R., Asou N., Ohnishi K. Treatment of acute promyelocytic leukemia: strategy toward further increase of curerate // Leukemia. - 2003. - Vol.17. - P. 1454-1463.).Currently, there are convincing results indicating the effectiveness of the use of retinoids in differentiation therapy and the treatment of only acute promyelocytic leukemia (Larson RS, Brown DC, Sklar LA Retinoic acid induces aggregation of the acute promyelocytic leukemia cell line NB-4 by utilization of LFA-1 and ICAM-2 // Blood. - 1997. - Vol.90. - N. 7. - P. 2747-2756; Ohno R., Asou N., Ohnishi K. Treatment of acute promyelocytic leukemia: strategy toward further increase of curerate // Leukemia. - 2003. - Vol.17. - P. 1454-1463.).

Предпринимались попытки включения ретиноидов в схемы лечения нейробластом, рака молочной железы и предстательной железы (Xu W.P., Zhang X., Xie W.F. Differentiation therapy for solid tumors // J. Dig. Dis.- 2014.-Vol.15. - №4. - P. 159-165.). Однако применение ретиноидов при лечении солидных опухолей не дало ожидаемого лечебного эффекта. Так, например, при введении ретиноевой кислоты пациентам с раком молочной железы в комплексную противоопухолевую терапию только у некоторых пациентов (менее 30%), получающих ретиноевую кислоту, было отмечено улучшение некоторых показателей эффективности лечения - снижение частоты послеоперационных рецидивов (Garattini Е., Bolis М., Garattini S.K., Fratelli М., Centritto F., Paroni G., Gianni M., Zanetti A., Pagani A., Fisher J.N., Zambelli A., Terao M. Retinoids and breast cancer: from basic studies to the clinic and back again // Cancer Treat. Rev. - 2014. - Vol. 40. - №6. - P. 739-749; Fettig L.M., McGinn O., Finlay-Schultz J., LaBarbera D.V., Nordeen S.K., Sartorius C.A. Cross talk between progesterone receptors and retinoic acid receptors in regulation of cytokeratin 5-positive breast cancer cells // Oncogene. - 2017. - Vol. 36. - №44. - P. 6074-6084).Attempts have been made to include retinoids in treatment regimens for neuroblastomas, breast and prostate cancers (Xu WP, Zhang X., Xie WF Differentiation therapy for solid tumors // J. Dig. Dis.- 2014.-Vol.15. - No. 4. - P. 159-165.). However, the use of retinoids in the treatment of solid tumors did not give the expected therapeutic effect. So, for example, with the introduction of retinoic acid into patients with breast cancer in complex antitumor therapy only in some patients (less than 30%) receiving retinoic acid, there was an improvement in some indicators of treatment effectiveness - a decrease in the frequency of postoperative relapses (Garattini E., Bolis M ., Garattini SK, Fratelli M., Centritto F., Paroni G., Gianni M., Zanetti A., Pagani A., Fisher JN, Zambelli A., Terao M. Retinoids and breast cancer: from basic studies to the clinic and back again // Cancer Treat. Rev. - 2014. - Vol. 40. - No. 6. - P. 739-749; Fettig LM, McGinn O., Finlay-Schultz J., LaBarbera DV, Nordeen SK, Sartorius CA Cross talk between progesterone receptors and ret inoic acid receptors in regulation of cytokeratin 5-positive breast cancer cells // Oncogene. - 2017. - Vol. 36. - No. 44. - P. 6074-6084).

Известны вещества, в отношении которых была показана их способность повышать степень дифференцировки опухолевых клеток молочной железы и приводить к частичной реверсии их злокачественного фенотипа в относительно нормальный фенотип в следующих экспериментах.Substances are known for which they have been shown to increase the degree of differentiation of breast tumor cells and lead to a partial reversal of their malignant phenotype into a relatively normal phenotype in the following experiments.

1) Культивирование клеток опухоли молочной железы (линии клеток опухоли молочной железы MCF7, Hs578T и MDA-MB-231) в среде, содержащей ингибитор β1-интегрина (AIIB2), митоген-активированную протеинкиназу MAPK (PD98059) и фосфатидилинозитол-3-киназу PI3K (LY294002) (Fei Wang F. et al. Phenotypic Reversion or Death of Cancer Cells by Altering Signaling Pathways in Three-Dimensional Contexts // J. Natl. Cancer Inst. - 2002. - 94(19). - P. 1494-1503) повышало содержание опухолевых клеток с признаками реверсии некоторых цитофизиологических показателей к показателям нормального фенотипа.1) Cultivation of breast tumor cells (MCF7, Hs578T and MDA-MB-231 breast tumor cell lines) in a medium containing a β1 integrin inhibitor (AIIB2), a mitogen-activated MAPK protein kinase (PD98059) and a PI3K phosphatidylinositol-3 kinase (LY294002) (Fei Wang F. et al. Phenotypic Reversion or Death of Cancer Cells by Altering Signaling Pathways in Three-Dimensional Contexts // J. Natl. Cancer Inst. - 2002. - 94 (19). - P. 1494- 1503) increased the content of tumor cells with signs of reversal of some cytophysiological parameters to those of the normal phenotype.

Степень реверсии опухолевых клеток из низкодифференцированных клеток в более дифференцированный фенотип была количественно оценена по показателю инвазии в тесте Бойдена (Boyden) и по формированию колоний (%) in vitro. В сравнительном тесте по показателю инвазии и способности образовывать большие агрегаты из опухолевых клеток, а также способности метастазировать in vivo, к наиболее злокачественной линии была отнесена линия клеток MDA-MB-231.The degree of tumor cell reversion from low-differentiated cells to a more differentiated phenotype was quantified by invasion in the Boyden test and in vitro colony formation (%). In the comparative test, in terms of invasion and the ability to form large aggregates from tumor cells, as well as the ability to metastasize in vivo, the MDA-MB-231 cell line was assigned to the most malignant line.

Линия клеток MDA-MB-231 показала частичную реверсию в высокодифференцированный фенотип при обработке одним из следующих веществ: ингибитором β1-интегрина, MAPK или ингибитором PI3K.The MDA-MB-231 cell line showed partial reversion to a highly differentiated phenotype when treated with one of the following substances: β1 integrin inhibitor, MAPK, or PI3K inhibitor.

Культивирование клеток опухоли молочной железы MDA-MB-231 в среде, содержавшей одновременно ингибитор β1-интегрин (AIIB2) и фосфатидилинозитол-3-киназу PI3K, привело к наиболее выраженной реверсии опухолевых клеток в нормальный фенотип и, соответственно, к увеличению количества клеток с более высокой степенью дифференцировки, чем в контроле, не содержавшем AIIB2 и PI3K.The cultivation of breast tumor cells MDA-MB-231 in a medium containing both a β1-integrin inhibitor (AIIB2) and phosphatidylinositol-3-kinase PI3K led to the most pronounced reversal of tumor cells into a normal phenotype and, accordingly, to an increase in the number of cells with more a higher degree of differentiation than in the control that did not contain AIIB2 and PI3K.

При культивировании клеток MDA-MB-231 в среде, содержавшей ингибитор β1-интегрина (AIIB2) или митоген-активированную протеинкиназу MAPK (PD98059), или фосфатидилинозитол-3-киназу PI3K (LY294002) показатель инвазии в тесте Бойдена (Boyden) снизился на 30-40%, а формирование колоний на 15-20%. При культивировании клеток MDA-MB-231 в среде, содержавшей ингибитор β1-интегрина (AIIB2) и фосфатидилинозитол-3-киназу PI3K (LY294002), через 10 суток культивирования показатель инвазии в тесте Бойдена (Boyden) снизился более чем на 70%, а формирование колоний уменьшилось более чем на 30%.When culturing MDA-MB-231 cells in a medium containing a β1-integrin inhibitor (AIIB2) or mitogen-activated protein kinase MAPK (PD98059), or phosphatidylinositol-3-kinase PI3K (LY294002), the invasion rate in the Boyden test decreased by 30 -40%, and the formation of colonies by 15-20%. When culturing MDA-MB-231 cells in a medium containing a β1-integrin inhibitor (AIIB2) and phosphatidylinositol-3-kinase PI3K (LY294002), after 10 days of cultivation, the invasion rate in the Boyden test decreased by more than 70%, and colony formation decreased by more than 30%.

Полученные данные представляют определенный научный интерес, поскольку указывают на возможность увеличения в популяции низкодифференцированных опухолевых клеток содержания клеток с более высокой степенью дифференцировки после воздействия на них ингибитора β1-интегрина (AIIB2), митоген-активированной протеинкиназы MAPK (PD98059) и фосфатидилинозитол-3-киназы PI3K.The data obtained are of certain scientific interest, since they indicate the possibility of increasing in the population of low-differentiated tumor cells the content of cells with a higher degree of differentiation after exposure to the β1 integrin inhibitor (AIIB2), mitogen-activated MAPK protein kinase (PD98059) and phosphatidylinositol-3-kinase PI3K.

Однако, хорошо известно, что опухоли гетерогенны и включают в свой клеточный состав субпопуляции клеток с различной степенью злокачественности, с различным метастатическим потенциалам, с различными особенностями злокачественного фенотипа и, соответственно, с различной способностью реагировать на те или иные вещества химического или биологического происхождения. Более того, клетки ткани опухоли защищены фиброзной капсулой и находятся среди клеток микроокружения (эндотелиоцитов, фибробластов, макрофагов, дендритных клеток и др.), способных понизить или полностью ингибировать эффект стимуляции дифференцировки опухолевых клеток.However, it is well known that tumors are heterogeneous and include subpopulations of cells with different degrees of malignancy, with different metastatic potentials, with different characteristics of the malignant phenotype and, accordingly, with different ability to react to certain substances of chemical or biological origin. Moreover, tumor tissue cells are protected by a fibrous capsule and are located among microenvironment cells (endotheliocytes, fibroblasts, macrophages, dendritic cells, etc.) that can reduce or completely inhibit the effect of stimulating differentiation of tumor cells.

Несмотря на эти известные факты оценка влияния ингибитора β1-интегрина (AIIB2), митоген-активированной протеинкиназы MAPK (PD98059) и фосфатидилинозитол-3-киназы PI3K на дифференцировку клеток опухоли молочной железы была проведена in vitro на достаточно однородных по своим свойствам опухолевых клетках культуральных линий, что является существенным недостатком такой экспериментальной модели опухолевого процесса.Despite these known facts, the effect of β1-integrin inhibitor (AIIB2), mitogen-activated protein kinase MAPK (PD98059) and phosphatidylinositol-3-kinase PI3K on differentiation of breast tumor cells was evaluated in vitro on tumor cells of culture lines that were quite uniform in their properties , which is a significant drawback of such an experimental model of the tumor process.

К более адекватной биологической модели и методу для изучения влияния каких-либо веществ на гистогенетические процессы, происходящие в солидной опухоли, в том числе на процессы дифференцировки, относится культивирование in vitro фрагментов ткани опухоли. Однако ингибитор β1-интегрина (AIIB2), митоген-активированная протеинкиназа MAPK (PD98059) и фосфатидилинозитол-3-киназа PI3K не были апробированы на такой модели.A more adequate biological model and method for studying the effect of any substances on the histogenetic processes occurring in a solid tumor, including differentiation processes, includes in vitro cultivation of tumor tissue fragments. However, the β1-integrin inhibitor (AIIB2), the mitogen-activated protein kinase MAPK (PD98059), and the phosphatidylinositol-3-kinase PI3K were not tested on such a model.

Все это не позволяет сделать даже приблизительно вероятную оценку эффективности влияния композиции, содержащей ингибитор β1-интегрина, митоген-активированную протеинкиназу MAPK и фосфатидилинозитол-3-киназу на изменение содержание высокодифференцированных опухолевых клеток в молочной железе при их использовании in vivo.All this does not allow even an approximately probable assessment of the effectiveness of the composition containing a β1-integrin inhibitor, mitogen-activated MAPK protein kinase and phosphatidylinositol-3-kinase on the change in the content of highly differentiated tumor cells in the mammary gland when used in vivo.

2) Наиболее близким аналогом к предлагаемому изобретению (по скорости развития эффекта стимуляции дифференцировки опухолевых клеток и относительному повышению содержания в популяции клеток с признаками фенотипически нормальных клеток) является вносимая в среду для культивирования клеток опухоли молочной железы (линии AU-565 and MCF-7) композиция, содержащая микофенольную кислоту (MPA), форбол 12-миристат 13-ацетат (РМА) и ретиноевую кислоту (RA) (Bacus S.S. et al. Differentiation of cultured human breast cancer cells (AU-565 and MCF-7) associated with loss of cell surface HER-2/neu antigen // Mol. Carcinog. - 1990.-3. - P. 350-362).2) The closest analogue to the present invention (in terms of the rate of development of the effect of stimulating differentiation of tumor cells and a relative increase in the content of cells with signs of phenotypically normal cells in the population) is the tumor of the breast tumor introduced into the medium for culturing cells (lines AU-565 and MCF-7) composition containing mycophenolic acid (MPA), phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and retinoic acid (RA) (Bacus SS et al. Differentiation of cultured human breast cancer cells (AU-565 and MCF-7) associated with loss of cell surface HER-2 / neu antigen // Mol. Carcinog. - 1990.-3. - P. 350-362).

Воздействие указанной композиции на опухолевые клетки приводило через 4 дня культивирования к увеличению процента клеток линии AU-565 (до 48% и более), имеющих более зрелый фенотип, т.е. более дифференцированных.The effect of the composition on tumor cells after 4 days of cultivation led to an increase in the percentage of AU-565 line cells (up to 48% or more) having a more mature phenotype, i.e. more differentiated.

Воздействие смеси МРА, РМА и ретиноевой кислоты RA на опухолевые клетки MCF-7 приводило через 4 дня к менее значительному увеличению процента клеток, имеющих более зрелый фенотип, чем при культивировании линии AU-565.The effect of the mixture of MPA, PMA and RA retinoic acid on MCF-7 tumor cells after 4 days resulted in a less significant increase in the percentage of cells having a more mature phenotype than when culturing the AU-565 line.

Однако, композиция аналога, как и предыдущие, не была апробирована на тканях опухолей молочной железы, что в значительной степени снижает практическую значимость работы.However, the analogue composition, like the previous ones, was not tested on the tissues of breast tumors, which significantly reduces the practical significance of the work.

Все вышесказанное обусловливает актуальность поиска веществ или композиций (из химических веществ и продуктов биологического происхождения), способных стимулировать процесс дифференцировки клеток злокачественных опухолей и, как следствие, увеличивать в опухоли содержание высокодифференцированных клеток.All of the above determines the relevance of the search for substances or compositions (from chemicals and products of biological origin) that can stimulate the process of differentiation of malignant tumor cells and, as a result, increase the content of highly differentiated cells in the tumor.

В описываемой ниже предлагаемой композиции используют фитогемагглютинин Р, фитогемагглютинин М, конканавалин А, липополисахарид из Escherichia coli. Из уровня техники о них известно, в частности, следующее.In the proposed composition described below, phytohemagglutinin P, phytohemagglutinin M, concanavalin A, and a lipopolysaccharide from Escherichia coli are used. The prior art knows about them, in particular, the following.

Фитогемагглютинин Р (РНА-Р) - лектин, выделенный из красной фасоли Phaseolus vulgaris, используется в иммунологических исследованиях в качестве митогена лимфоцитов. Показано, что фитогемагглютинин Р индуцирует митотическую и пролиферативную активность преимущественно Т-лимфоцитов и в меньшей степени - В-лимфоцитов (Movafagh A., Ghanati К., Amani D., Mahdavi S.M., Hashemi М., Abdolahi D.Z., Darvish H., Gholami M., HaghNejad L., Mosammami S., Safari S., Darehgazani R., Rahimi M., Naini N.S., M.G. Motlagh, Zamani M. The structure Biology and Application of Phytohemagglutinin (PHA) in Phytomedicine: With special up-to-date references to lectins // Journal of Paramedical Sciences (JPS). - 2013.- Vol. 4. - Suppl. 2008-4978.). Показано, что фитогемагглютинин P стимулирует in vitro продукцию лимфоцитами цитокинов IL-4, IL-6, IL-8, G-CSF, IFN-γ и TNF-α (Закиров Р.Ш., Акулова C.C., Филянская Е.Г., Семикина Е.Л., Маянский Н.А. Синтез цитокинов лимфоцитами in vitro у детей в ремиссии ювенильного идиопатического артрита на фоне терапии генно-инженерными биологическими препаратами Клиническая медицина.-2016. - Т. 8. - №2.- С. 46-52).Phytohemagglutinin P (PHA-P) - a lectin isolated from red bean Phaseolus vulgaris, is used in immunological studies as a mitogen of lymphocytes. Phytohemagglutinin P was shown to induce mitotic and proliferative activity of predominantly T-lymphocytes and, to a lesser extent, B-lymphocytes (Movafagh A., Ghanati K., Amani D., Mahdavi SM, Hashemi M., Abdolahi DZ, Darvish H., Gholami M., Hagh Nejad L., Mosammami S., Safari S., Darehgazani R., Rahimi M., Naini NS, MG Motlagh, Zamani M. The structure Biology and Application of Phytohemagglutinin (PHA) in Phytomedicine: With special up-to -date references to lectins // Journal of Paramedical Sciences (JPS) .- 2013 .- Vol. 4.- Suppl. 2008-4978.). It was shown that phytohemagglutinin P stimulates in vitro lymphocyte production of the cytokines IL-4, IL-6, IL-8, G-CSF, IFN-γ and TNF-α (Zakirov R.Sh., Akulova CC, Filyanskaya E.G., Semikina E.L., Mayansky N.A. In vitro synthesis of cytokines by lymphocytes in children in remission of juvenile idiopathic arthritis during therapy with genetically engineered biological drugs Clinical Medicine.-2016. - T. 8. - No. 2.- P. 46 -52).

Каких-либо данных о влиянии фитогемагглютинина Р на дифференцировку опухолевых клеток и на повышение содержания высокодифференцированных клеток в опухоли молочной железы нет.There are no data on the effect of phytohemagglutinin P on the differentiation of tumor cells and on the increase in the content of highly differentiated cells in a breast tumor.

Фитогемагглютинин М (РНА-М) - мукопротеиновая очищенная форма фитогемагглютинина, выделенного из красной фасоли Phaseolus vulgaris при помощи хроматографической технологии. РНА-Р состоит из двух тесно связанных белков. Один из них, называемый ФГА-L (PHA-L), способен агрегировать лейкоциты крови, другой - ФГА-Е (РНА-Е) - способен агрегировать эритроциты крови. Каждый из белков содержит пять изолектинов, которые являются полимерами из четырех мономеров, удерживающихся нековалентными связями. Показано, что фитогемагглютинин М индуцирует митотическую и пролиферативную активность лимфоцитов (Sharon N., Lis Н. History of lectins: from hemagglutinins to biological recognition molecules. - Glycobiology. - 2004. - Vol. 14. - P. 53-62; Movafagh A.1, Heydary H., Mortazavi-Tabatabaei S.A., Azargashb E. The significance application of indigenous Phytohemagglutinin (PHA) mitogen on metaphase and cell culture procedure // Iran J. Pharm. Res. - 2011. - Vol. - 10. - N. 4. - P. 895-903.).Phytohemagglutinin M (RNA-M) is a purified mucoprotein form of phytohemagglutinin isolated from red beans Phaseolus vulgaris using chromatographic technology. PHA-P consists of two closely related proteins. One of them, called PHA-L (PHA-L), is able to aggregate white blood cells, the other - PHA-E (PHA-E) - is able to aggregate red blood cells. Each of the proteins contains five isolectins, which are polymers of four monomers held by non-covalent bonds. It was shown that phytohemagglutinin M induces mitotic and proliferative activity of lymphocytes (Sharon N., Lis N. History of lectins: from hemagglutinins to biological recognition molecules. - Glycobiology. - 2004. - Vol. 14. - P. 53-62; Movafagh A .1, Heydary H., Mortazavi-Tabatabaei SA, Azargashb E. The significance application of indigenous Phytohemagglutinin (PHA) mitogen on metaphase and cell culture procedure // Iran J. Pharm. Res. - 2011. - Vol. - 10. - N. 4. - P. 895-903.).

Какие-либо данные о влиянии фитогемагглютинин М на дифференцировку опухолевых клеток и на повышение содержания высокодифференцированных клеток в опухоли молочной железы отсутствуют.There are no data on the effect of phytohemagglutinin M on the differentiation of tumor cells and on the increase in the content of highly differentiated cells in a breast tumor.

Конканавалин А (ConA) - лектин, выделяемый из канавалии мечевидной Canavalia ensiformis. При рН >7 ConA представляет собой тетрамер, каждая из субъединиц которого имеет мол. массу 25,5 кДа и который, согласно кристаллографическим данным, состоит из двух β-структурных слоев, ориентированных перпендикулярно друг к другу (Liener I., Sharon N., Goldstein I. The Lectins: Properties, Functions, and Applications in Biology and Medicine. - Academic Press, London. - 1986. - 600 p.). В растворе тетрамерный ConA (в концентрации около 1 мкг/мл, но не выше 10 мкг/мл) обладает митогенной активностью по отношению к Т-лимфоцитам, а если молекулы ConA предварительно сшить друг с другом (с помощью антител к ConA или за счет присоединения к грануле сефарозы), то ConA начинает также стимулировать и В-клетки. На моделях in vitro показано, что ConA способен индуцировать аутофагию и апоптоз опухолевых клеток (Chang С.Р., Yang М.С., Liu H.S., Lin Y.S., Lei H.Y. Concanavalin A induces autophagy in hepatoma cells and has a therapeutic effect in a murine in situ hepatoma model // Hepatology. - 2007. - Vol. 45. - №2. - P. 286-296; Shi Z., Chen J., Li C.Y., An N., Wang Z.J., Yang S.L., Huang K.F., Bao J.K. Antitumor effects of concanavalin A and Sophora flavescens lectin in vitro and in vivo // Acta Pharmacol. Sin.- 2014. - Vol. - №. - P. - 248-256).Concanavalin A (ConA) is a lectin secreted from the xiphoid canavaly Canavalia ensiformis. At pH> 7, ConA is a tetramer, each of whose subunits has a mole. mass of 25.5 kDa and which, according to crystallographic data, consists of two β-structural layers oriented perpendicular to each other (Liener I., Sharon N., Goldstein I. The Lectins: Properties, Functions, and Applications in Biology and Medicine - Academic Press, London. - 1986. - 600 p.). In solution, tetrameric ConA (at a concentration of about 1 μg / ml, but not higher than 10 μg / ml) has mitogenic activity against T-lymphocytes, and if ConA molecules are pre-crosslinked with each other (using antibodies to ConA or by attaching to the Sepharose granule), ConA also begins to stimulate B cells. In vitro models have shown that ConA is able to induce autophagy and apoptosis of tumor cells (Chang C.P., Yang M.S., Liu HS, Lin YS, Lei HY Concanavalin A induces autophagy in hepatoma cells and has a therapeutic effect in a murine in situ hepatoma model // Hepatology. - 2007. - Vol. 45. - No. 2. - P. 286-296; Shi Z., Chen J., Li CY, An N., Wang ZJ, Yang SL, Huang KF, Bao JK Antitumor effects of concanavalin A and Sophora flavescens lectin in vitro and in vivo // Acta Pharmacol. Sin.- 2014. - Vol. - No. - P. - 248-256).

Какие-либо данные о влиянии ConA на дифференцировку опухолевых клеток и на повышение содержания высокодифференцированных клеток в опухоли молочной железы не известны.Any data on the effect of ConA on the differentiation of tumor cells and on the increase in the content of highly differentiated cells in a breast tumor is not known.

Липополисахариды (LPS) являются характерными компонентами клеточной стенки грамотрицательных бактерий. Липополисахарид, полученный из Escherichia coli, используют для стимуляции клеток иммунной системы, чаще всего для стимуляции клеток макрофагальной системы - моноцитов и макрофагов (Fang Н., Pengal R., Cao X., Ganesan L., Wewers М., Marsh С, Tridandapani S. Lipopolysaccharide-induced macrophage inflammatory response is regulated by SHIP // J. Immunol. - 2004. - Vol. 173. - №1. - P. 360-366.). На моделях in vitro и экспериментальных животных показано, что LPS способны индуцировать некробиоз и апоптоз опухолевых клеток (Fried S., Tosun S., Troost G., Keil S., Zaenker K., Dittmar T. Lipopolysaccharide (LPS) promotes apoptosis in human breast epithelial breast cancer hybrids, but not in parental cells // PLOS ONE. - 2016. - DOI: 10.1371).Lipopolysaccharides (LPS) are characteristic components of the cell wall of gram-negative bacteria. The lipopolysaccharide obtained from Escherichia coli is used to stimulate the cells of the immune system, most often to stimulate the cells of the macrophage system - monocytes and macrophages (Fang N., Pengal R., Cao X., Ganesan L., Wewers M., Marsh C, Tridandapani S. Lipopolysaccharide-induced macrophage inflammatory response is regulated by SHIP // J. Immunol. - 2004. - Vol. 173. - No. 1. - P. 360-366.). In vitro and experimental animals have shown that LPS can induce necrobiosis and apoptosis of tumor cells (Fried S., Tosun S., Troost G., Keil S., Zaenker K., Dittmar T. Lipopolysaccharide (LPS) promotes apoptosis in human breast epithelial breast cancer hybrids, but not in parental cells // PLOS ONE. - 2016 .-- DOI: 10.1371).

Какие-либо сведения о влиянии LPS из Escherichia coli на дифференцировку опухолевых клеток и на повышение содержания высокодифференцированных клеток в опухоли молочной железы не найдены.No information was found on the effect of LPS from Escherichia coli on the differentiation of tumor cells and on the increase in the content of highly differentiated cells in breast tumors.

Показано, что смесь ФГА (РНА-Р и РНА-М), конканавалина А (ConA) и липополисахарида (LPS) из Escherichia coli обладает свойством поликлонального активатора и способна стимулировать in vitro продукцию различных цитокинов (IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, IL-18, IL-1β, IL-1Ra, TNF-α, IFN-γ, G-CSF, GM-CSF, VEGF-A) иммунокомпетентными клетками крови, а также клетками культуры ткани опухоли молочной железы. Однако точная идентификации клеток-продуцентов тех или иных цитокинов (клетками опухоли или ее микроокружения, в том числе иммунокомпетентными клетками, инфильтрирующими ткань опухоли) не была проведена (Архипов С.А., Михайлова Е.С., Кунц Т.А., Карпухина К.В., Могильная Е.Д., Соловьев К.А., Вараксин Н.А., Аутеншлюс А.И. Цитокинпродуцирующий резерв иммунокомпетентных клеток крови и инвазивного протокового рака молочной железы, его взаимосвязь с патогистологическими и иммуногистохимическими параметрами злокачественного новообразования // Медицинская иммунология.- 2016. -Т.18. - №5. - С. 459-468; Кунц Т.А., Карпухина К.В., Михайлова Е.С., Маринкин И.О., Вараксин Н.А., Аутеншлюс А.И., Ляхович В.В. Влияние поликлональных активаторов на продукцию цитокинов клетками крови и злокачественных новообразований молочной железы // Доклады Академии наук. - 2016. - Т. 466. - №1. - С. 117-119.).It was shown that a mixture of PHA (RNA-P and RNA-M), concanavalin A (ConA) and lipopolysaccharide (LPS) from Escherichia coli has the property of a polyclonal activator and is able to stimulate in vitro production of various cytokines (IL-2, IL-6, IL -8, IL-10, IL-17, IL-18, IL-1β, IL-1Ra, TNF-α, IFN-γ, G-CSF, GM-CSF, VEGF-A) immunocompetent blood cells, as well as cells Breast tumor tissue culture. However, accurate identification of producer cells of certain cytokines (tumor cells or its microenvironment, including immunocompetent cells that infiltrate the tumor tissue) was not carried out (Arkhipov S.A., Mikhailova E.S., Kunts T.A., Karpukhina K.V., Mogilnaya E.D., Soloviev K.A., Varaksin N.A., Autenshlyus A.I. A cytokine-producing reserve of immunocompetent blood cells and invasive ductal breast cancer, its relationship with histopathological and immunohistochemical parameters of malignant neoplasm / / Copper Inskaya immunology. - 2016. -T.18. - No. 5. - S. 459-468; Kunts T.A., Karpukhina K.V., Mikhailova E.S., Marinkin I.O., Varaksin N.A. ., Autenshlus A.I., Lyakhovich VV Influence of polyclonal activators on the production of cytokines by blood cells and malignant neoplasms of the mammary gland // Reports of the Academy of Sciences. - 2016. - T. 466. - No. 1. - P. 117-119 .).

Исследование влияния смеси ФГА (РНА-Р и РНА-М), конканавалина А (ConA) и LPS (любого происхождения) на дифференцировку клеток солидных опухолей не проводилось. Поэтому способность данной смеси стимулировать дифференцировку опухолевых клеток молочной железы и повышать в ней количество высокодифференцированных клеток не известна из уровня техники и для специалиста явным образом из него не следует.A study of the effect of a mixture of PHA (RNA-R and RNA-M), concanavalin A (ConA) and LPS (of any origin) on the differentiation of cells of solid tumors was not conducted. Therefore, the ability of this mixture to stimulate the differentiation of breast tumor cells and increase the number of highly differentiated cells in it is not known from the prior art and should not be explicitly understood by a specialist.

Раскрытие изобретенияDisclosure of invention

Задачей заявляемого изобретения является создание композиции (средства) для повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток в аденокарциноме молочной железы.The task of the invention is the creation of a composition (agent) to increase the content of highly differentiated tumor cells in adenocarcinoma of the mammary gland.

Заявляемая композиция для повышения содержания высокодифференцированных клеток в аденокарциноме молочной железы содержит: фитогемагглютинин Р (РНА-Р), фитогемагглютинин М (РНА-М), конканавалин А (ConA), липополисахарид (LPS, Lipopolysaccharide from Escherichia coli) в эффективной концентрации в соотношении (мас. ч.) 1/1/2/1 соответственно.The inventive composition for increasing the content of highly differentiated cells in breast adenocarcinoma contains: phytohemagglutinin P (PHA-P), phytohemagglutinin M (PHA-M), concanavalin A (ConA), lipopolysaccharide (LPS, Lipopolysaccharide from Escherichia coli) in an effective concentration ratio parts by weight) 1/1/2/1, respectively.

В качестве эффективной концентрации может быть использована, в частности, следующая: фитогемагглютинин Р - 1,6-2,4 мкг/мл, фитогемагглютинин М - 1,6-2,4 мкг/мл, конканавалин А - 3,2-4,8 мкг/мл, липополисахарид (Lipopolysaccharide from Escherichia coli) - 1,6-2,4 мкг/мл.As an effective concentration, in particular, the following can be used: phytohemagglutinin P - 1.6-2.4 μg / ml, phytohemagglutinin M - 1.6-2.4 μg / ml, concanavalin A - 3.2-4, 8 μg / ml, lipopolysaccharide (Lipopolysaccharide from Escherichia coli) - 1.6-2.4 μg / ml.

Технические результаты изобретения заключаются в следующем:The technical results of the invention are as follows:

- реализации назначения;- implementation of the purpose;

- более вероятной эффективности in vivo предлагаемой композиции по сравнению с описанными выше аналогами. В аналогах показано действие композиций на культуру опухолевых клеток. В описываемых ниже экспериментах с предлагаемой композиций показано ее действие на биоптат опухоли молочной железы, где клетки ткани опухоли более гетерогенны, защищены фиброзной капсулой и находятся среди клеток микроокружения, способных понизить или почти полностью ингибировать все эффекты стимуляции дифференцировки опухолевых клеток, выявляемые в культурах опухолевых клеток молочной железы. При этом в наших экспериментах в тех биоптатах аденокарциномы молочной железы, где количество высокодифференцированных опухолевых клеток возрастает, оно в среднем возрастает на 75,0%;- more likely in vivo efficacy of the proposed composition compared with the above analogues. The analogues show the effect of the compositions on the culture of tumor cells. In the experiments described below with the proposed compositions, its effect on the breast tumor biopsy is shown, where the tumor tissue cells are more heterogeneous, protected by a fibrous capsule and are among the microenvironment cells that can reduce or almost completely inhibit all the effects of tumor cell differentiation detected in tumor cell cultures. the mammary gland. Moreover, in our experiments in those biopsy samples of breast adenocarcinoma, where the number of highly differentiated tumor cells increases, it increases on average by 75.0%;

- более высоких показателях эффективности предлагаемой композиции по сравнению с наиболее близким аналогом. Если содержание высокодифференцированных клеток в аналоге возросло до 48% и более для линии клеток AU-565 через 96 часов культивирования, то предлагаемая композиция повышала содержание высокодифференцированных опухолевых клеток в среднем на 75% через 72 часа культивирования.- higher performance indicators of the proposed composition compared with the closest analogue. If the content of highly differentiated cells in the analogue increased to 48% or more for the AU-565 cell line after 96 hours of cultivation, the proposed composition increased the content of highly differentiated tumor cells by an average of 75% after 72 hours of cultivation.

Воздействие смеси МРА, РМА и ретиноевой кислоты RA на другую линию опухолевых клеток (MCF-7) приводило через 4 дня к менее значительному увеличению процента клеток, имеющих более зрелый фенотип, чем при культивировании линии AU-565.The effect of a mixture of MPA, PMA and RA retinoic acid on another tumor cell line (MCF-7) after 4 days resulted in a less significant increase in the percentage of cells having a more mature phenotype than when culturing the AU-565 line.

Это означает, что показатель эффективности смеси МРА, РМА и ретиноевой кислоты RA по результатам анализа ее влияния на дифференцировку опухолевых клеток линии MCF-7 и линии AU-565 в среднем был значительно меньше полученного в наших экспериментах величины (75%).This means that the efficiency indicator of the mixture of MPA, PMA and retinoic acid RA according to the results of analysis of its effect on the differentiation of tumor cells of the MCF-7 line and AU-565 line was on average significantly less than the value obtained in our experiments (75%).

Доказательная базаEvidence base

В качестве объекта для оценки влияния заявляемой композиции на повышение содержания высокодифференцированных опухолевых клеток в аденокарциноме молочной железы служили биоптаты опухолей молочной железы 32-х женщин в возрасте от 43 до 75 лет с инвазивным протоковым раком, являющимся по гистологическому типу аденокарциномой II и III степени злокачественности.As an object for assessing the effect of the claimed composition on increasing the content of highly differentiated tumor cells in breast adenocarcinoma, biopsy samples of breast tumors of 32 women aged 43 to 75 years with invasive ductal carcinoma, which is a histological type of adenocarcinoma of the II and III degree of malignancy, were used.

Биоптаты аденокарциномы молочной железы одной больной объемом 8 мм³, полученные методом витальной трепанобиопсии, помещали в два стеклянных флакона.Biopsies of breast adenocarcinoma of one patient with a volume of 8 mm ³ obtained by vital trepanobiopsy were placed in two glass vials.

Флакон №1 (тест-контроль) содержал: 1 мл стерильной питательной среды DMEM/F12, Hepes (15 mM), гепарин (2,5 ЕД/мл), гентамицин (100 мкг/мл), L-глютамин (0,6 мг/мл) и биоптат аденокарциномы молочной железы одной больной объемом 8 мм³.Bottle No. 1 (test control) contained: 1 ml of sterile growth medium DMEM / F12, Hepes (15 mM), heparin (2.5 U / ml), gentamicin (100 μg / ml), L-glutamine (0.6 mg / ml) and a biopsy of adenocarcinoma of the mammary gland of one patient with a volume of 8 mm ³ .

Флакон №2 (тест на стимуляцию дифференцировки опухолевых клеток предлагаемой композицией) содержал: 1 мл стерильной питательной среды DMEM/F12, Hepes (15 mM), гепарин (2,5 ЕД/мл), гентамицин (100 мкг/мл), L-глютамин (0,6 мг/мл) и биоптат аденокарциномы молочной железы одной больной объемом 8 мм³ а также заявляемую композицию: фитогемагглютинин Р (РНА-Р) - 1,6-2,4 мкг/мл (0,16-0,24 мкг на 1 мг веса ткани аденокарциномы молочной железы), фитогемагглютинин М (РНА-М) - 1,6-2,4 мкг/мл (0,16-0,24 мкг на 1 мг веса ткани аденокарциномы молочной железы), конканавалин А (ConA) - 3,2-4,8 мкг/мл (0,32-0,48 мкг на 1 мг веса ткани аденокарциномы молочной железы), липополисахарид (LPS, Lipopolysaccharide from Escherichia coli) - 1,6-2,4 мкг/мл (0,16-0,24 мкг на 1 мг веса ткани аденокарциномы молочной железы).Bottle No. 2 (test for stimulating the differentiation of tumor cells by the proposed composition) contained: 1 ml of sterile nutrient medium DMEM / F12, Hepes (15 mM), heparin (2.5 U / ml), gentamicin (100 μg / ml), L- glutamine (0.6 mg / ml) and a biopsy sample of breast adenocarcinoma of one patient with a volume of 8 mm ³ and the claimed composition: phytohemagglutinin P (PHA-P) - 1.6-2.4 μg / ml (0.16-0, 24 μg per 1 mg of breast adenocarcinoma tissue weight), phytohemagglutinin M (RNA-M) - 1.6-2.4 μg / ml (0.16-0.24 μg per 1 mg of breast adenocarcinoma tissue weight), concanavalin A (ConA) - 3.2-4.8 μg / ml (0.32-0.48 m kg per 1 mg of breast adenocarcinoma tissue weight), lipopolysaccharide (LPS, Lipopolysaccharide from Escherichia coli) - 1.6-2.4 μg / ml (0.16-0.24 μg per 1 mg of breast adenocarcinoma tissue weight).

После инкубирования при 37°С в течение 72 ч биоптаты аденокарцином молочной железы извлекали из флаконов и фиксировали в растворе 10% нейтрального формалина для дальнейшего патогистологического исследования.After incubation at 37 ° C for 72 h, mammary adenocarcinoma biopsy samples were removed from the vials and fixed in a solution of 10% neutral formalin for further histological examination.

Патогистологическое исследование проводилось на препаратах аденокарциномы молочной железы, окрашенных по стандартной методике гематоксилином и эозином.A histopathological study was performed on preparations of adenocarcinoma of the mammary gland stained with the standard technique of hematoxylin and eosin.

В опухолевой ткани подсчитывали относительное содержание (%) клеток различной степени дифференцировки: высокодифференцированных (ВД), умереннодифференцированных (УД) и низкодифференцированных (НД). Для этого с помощью морфометрической сетки с 121 рабочими точками-узлами, вставленной в окуляр микроскопа, при увеличении 20×1,5×10=300х определяли количество точек, попавших на высоко-, умеренно- и низкодифференцированные опухолевые клетки. В каждом препарате подсчитывали клетки в 10 полях зрения и для каждой категории клеток подсчитывали среднее арифметическое значение, выраженное в процентах (Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия - М.: Медицина, 1990. - 381 с.).In tumor tissue, the relative content (%) of cells of different degrees of differentiation was calculated: highly differentiated (VD), moderately differentiated (UD) and low differentiated (ND). To do this, using a morphometric grid with 121 working points-nodes inserted into the eyepiece of the microscope, at a magnification of 20 × 1.5 × 10 = 300x, the number of points that fell on highly, moderately, and low-differentiated tumor cells was determined. In each preparation, cells were counted in 10 fields of view and the arithmetic mean value expressed as a percentage was calculated for each category of cells (Avtandilov G.G. Medical morphometry - M .: Medicine, 1990. - 381 p.).

При оценке принадлежности опухолевых клеток к ВД, УД или НД элементам учитывали степень выраженности клеточного полиморфизма, ядерно-цитоплазматичсское соотношение, наличие митозов, в том числе патологических, способность к структурообразованию (формированию желез), сохранение функций клеток (слизеобразование). ВД клетки характеризовались приближенной к нормальным клеткам формой, преобладанием цитоплазмы над ядром, способностью строить железы и продуцировать слизь. НД клетки характеризовались неправильной формой, выраженным полиморфизмом, преобладанием ядра над цитоплазмой, отсутствием способности к формированию структур, диффузным ростом, наличием большого количества митозов, в том числе и патологических. УД клетки занимали промежуточное положение между ВД и НД клетками по выраженности вышеуказанных признаков.When assessing the belonging of tumor cells to VD, UD or ND elements, the severity of cell polymorphism, the nuclear cytoplasmic ratio, the presence of mitoses, including pathological ones, the ability to structure formation (formation of glands), and the preservation of cell functions (mucus formation) were taken into account. VD cells were characterized by a shape close to normal cells, the prevalence of the cytoplasm over the nucleus, and the ability to build glands and produce mucus. ND cells were characterized by an irregular shape, expressed polymorphism, the predominance of the nucleus over the cytoplasm, the lack of the ability to form structures, diffuse growth, the presence of a large number of mitoses, including pathological ones. UD cells occupied an intermediate position between VD and ND cells in the severity of the above signs.

Индекс повышения содержания высокодифференцированных опухолевых клеток (ИПВД) в биоптатах молочной железы для каждого пациента вычисляли по формуле: ИПВД=(ВД:НД)_С/(ВД:НД)_БС, где (ВД:НД)_С - отношение среднего значения (по 10 полям зрения) доли высокодифференцированных клеток (%) к среднему значению доли низкодифференцированных клеток (%) в биоптате аденокарциномы молочной железы после стимуляции заявленной композицией, (ВД:НД)_БС - отношение среднего значения доли высокодифференцированных клеток (%) к среднему значению доли низкодифференцированных клеток (%) в биоптате аденокарциномы молочной железы без стимуляции заявленной композицией.The index for increasing the content of highly differentiated tumor cells (IPVD) in breast biopsy specimens for each patient was calculated by the formula: IPVD = (VD: ND) _C / (VD: ND) _BS , where (VD: ND) _C is the average ratio (10 fields of view) the proportion of highly differentiated cells (%) to the average proportion of poorly differentiated cells (%) in mammary adenocarcinoma biopsy after stimulation of the claimed composition (HP: LP) _BS - the mean ratio of the proportion of highly differentiated cells (%) to the average share nizkodifferentsir Baths cells (%) in mammary adenocarcinoma biopsy without stimulation claimed composition.

Определение ИПВД в биоптатах аденокарцином молочной железы показало, что ИПВД, равный 1,1 и более (вариабельность 1,1-5,0) отмечался у 18 человек из 32, что составляет 56,25%. В среднем количество высокодифференцированных опухолевых клеток в биоптатах аденокарциномы молочной железы у данных больных после инкубации в среде, содержащей композицию, возрастает на 75%.The determination of IPVD in biopsies of mammary adenocarcinomas showed that IPVD equal to 1.1 or more (variability of 1.1-5.0) was observed in 18 out of 32 people, which is 56.25%. On average, the number of highly differentiated tumor cells in the biopsy samples of breast adenocarcinoma in these patients after incubation in a medium containing the composition increases by 75%.

В группе пациентов с показателем ИПВД 1,1 и более различия между количеством высокодифференцированных опухолевых клеток в биоптатах, не подвергавшихся воздействию предлагаемой композицией, и количеством высокодифференцированных опухолевых клеток в биоптатах, подвергшихся воздействию предлагаемой композицией, оказались статистически значимыми (р=0,0009) при оценке с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни.In the group of patients with an IPVD of 1.1 or more, the differences between the number of highly differentiated tumor cells in biopsies not exposed to the proposed composition and the number of highly differentiated tumor cells in biopsies exposed to the proposed composition were statistically significant (p = 0,0009) when evaluation using the nonparametric Mann-Whitney test.

Сущность изобретения поясняется примерами.The invention is illustrated by examples.

1. Больная Ш-ва, 75 лет, диагноз - инвазивный протоковый рак молочной железы. ИПВД=5,00. После инкубации биоптата аденокарциномы молочной железы в течение 3 сут в среде, содержащей композицию, содержание высокодифференцированных клеток в биоптате аденокарциномы молочной железы возросло в 5 раз.1. Patient Sh-va, 75 years old, diagnosed with invasive ductal breast cancer. IPVD = 5.00. After incubation of the biopsy sample of breast adenocarcinoma for 3 days in the medium containing the composition, the content of highly differentiated cells in the biopsy sample of breast adenocarcinoma increased 5 times.

2. Больная К-на, 58 лет, диагноз - инвазивный протоковый рак молочной железы. ИПВД=1,27. После инкубации биоптата аденокарциномы молочной железы в течение 3 сут в среде, содержащей композицию, содержание высокодифференцированных клеток в биоптате аденокарциномы молочной железы возросло в 1,27 раза.2. Patient K., 58 years old, diagnosed with invasive ductal breast cancer. IPVD = 1.27. After incubation of the biopsy sample of breast adenocarcinoma for 3 days in a medium containing the composition, the content of highly differentiated cells in the biopsy of breast adenocarcinoma increased 1.27 times.

3. Больная Б-ва, 72 года, диагноз - инвазивный протоковый рак молочной железы. ИПВД=2,08. После инкубации биоптата аденокарциномы молочной железы в течение 3 сут в среде, содержащей композицию, содержание высокодифференцированных клеток в биоптате аденокарциномы молочной железы возросло в 2,08 раза.3. Patient B-va, 72 years old, diagnosed with invasive ductal breast cancer. IPVD = 2.08. After incubation of the biopsy sample of breast adenocarcinoma for 3 days in the medium containing the composition, the content of highly differentiated cells in the biopsy of breast adenocarcinoma increased 2.08 times.

Claims

A composition for increasing the content of highly differentiated cells in a breast tumor biopsy specimen, characterized in that the tumor is an invasive ductal carcinoma, which is a histological type of grade II and III malignant adenocarcinoma, and the composition contains phytohemagglutinin P (RNA-P) - 1.6-2, 4 μg / ml, phytohemagglutinin M - 1.6-2.4 μg / ml, concanavalin A - 3.2-4.8 μg / ml, lipopolysaccharide from Escherichia coli - 1.6-2.4 μg / ml in the ratio (parts by weight) 1/1/2/1, respectively.