RU2692065C1 - Glutathione-ammonium salts of o,o-diorganyl dithiophosphoric acids, having antioxidant and anticancer activity - Google Patents
Glutathione-ammonium salts of o,o-diorganyl dithiophosphoric acids, having antioxidant and anticancer activity Download PDFInfo
- Publication number
- RU2692065C1 RU2692065C1 RU2018112314A RU2018112314A RU2692065C1 RU 2692065 C1 RU2692065 C1 RU 2692065C1 RU 2018112314 A RU2018112314 A RU 2018112314A RU 2018112314 A RU2018112314 A RU 2018112314A RU 2692065 C1 RU2692065 C1 RU 2692065C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- glutathione
- antioxidant
- ammonium salts
- acids
- derivatives
- Prior art date
Links
- HCJHWWSHIYTGPB-GEMLJDPKSA-N (2s)-2-amino-5-[[(2r)-1-(carboxymethylamino)-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid;azane Chemical class N.OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O HCJHWWSHIYTGPB-GEMLJDPKSA-N 0.000 title claims abstract description 33
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 32
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 title 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 36
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 abstract 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Natural products OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 108
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 45
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 44
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- -1 ester derivatives of glutathione Chemical class 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-WFGJKAKNSA-N acetone d6 Chemical compound [2H]C([2H])([2H])C(=O)C([2H])([2H])[2H] CSCPPACGZOOCGX-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- IRDLUHRVLVEUHA-UHFFFAOYSA-N diethyl dithiophosphate Chemical compound CCOP(S)(=S)OCC IRDLUHRVLVEUHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 4
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000497386 Silveira Species 0.000 description 2
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- SZXCCXFNQHQRGF-UHFFFAOYSA-N di(propan-2-yloxy)-sulfanyl-sulfanylidene-$l^{5}-phosphane Chemical compound CC(C)OP(S)(=S)OC(C)C SZXCCXFNQHQRGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N dithiophosphoric acid Chemical compound OP(O)(S)=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000079 pharmacotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 2
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 2
- REPVLJRCJUVQFA-KZVJFYERSA-N (1r,3s,4s,5s)-4,6,6-trimethylbicyclo[3.1.1]heptan-3-ol Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](C)[C@H]2C(C)(C)[C@@H]1C2 REPVLJRCJUVQFA-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- AOFUBOWZWQFQJU-SNOJBQEQSA-N (2r,3s,4s,5r)-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolane-2,3,4-triol;(2s,3r,4s,5s,6r)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O.OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O AOFUBOWZWQFQJU-SNOJBQEQSA-N 0.000 description 1
- WMYLYYNMCFINGV-GEMLJDPKSA-N (2s)-2-amino-5-[[(2r)-1-(carboxymethylamino)-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid;2-amino-5-[[1-(carboxymethylamino)-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(CS)C(=O)NCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O WMYLYYNMCFINGV-GEMLJDPKSA-N 0.000 description 1
- NOOLISFMXDJSKH-IDKOKCKLSA-N (5s)-5-methyl-2-propan-2-ylcyclohexan-1-ol Chemical compound CC(C)C1CC[C@H](C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-IDKOKCKLSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 231100000491 EC50 Toxicity 0.000 description 1
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-UHFFFAOYSA-N L-Glutathione (reduced) Chemical compound OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 206010029155 Nephropathy toxic Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- XAQHXGSHRMHVMU-UHFFFAOYSA-N [S].[S] Chemical compound [S].[S] XAQHXGSHRMHVMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- ZGUNAGUHMKGQNY-UHFFFAOYSA-N alpha-phenylglycine Chemical group OC(=O)C(N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001760 anti-analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001713 cholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N diphenyl-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1N=[N+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229930003658 monoterpene Natural products 0.000 description 1
- 150000002773 monoterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000002577 monoterpenes Nutrition 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007694 nephrotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 125000000962 organic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 150000002903 organophosphorus compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 238000000711 polarimetry Methods 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000008085 renal dysfunction Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 125000001443 terpenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/06—Tripeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к химии фосфорорганических соединений, а именно, к глутатионаммониевым солям O,O-диорганилдитиофосфорных кислот общей формулы (Iа-д), обладающим антиоксидантной и противоопухолевой активностью.The invention relates to the chemistry of organophosphorus compounds, namely, to the glutathione ammonium salts of O, O-diorganil dithiophosphoric acids of the general formula (Ia-d), which have antioxidant and antitumor activity.
Изобретение может быть использовано в различных областях медицины, ветеринарии и фармацевтики, например, для создания лекарственных средств, используемых для лечения опухолевых, инфекционных и дегенеративных заболеваний.The invention can be used in various fields of medicine, veterinary medicine and pharmaceuticals, for example, to create medicines used to treat tumor, infectious and degenerative diseases.
Из исследованного заявителем уровня техники известно, что глутатион (2-амино-5-{[2-[(карбоксиметил)амино]-1-(меркаптометил)-2-оксоэтил]амино}-5-оксопентаноевая кислота) - представляет собой трипептид гамма-глутамилцистеинилглицин. Значение глутатиона в живых организмах определяется его антиоксидантными свойствами. Глутатион не только защищает клетку от токсичных свободных радикалов, но и определяет окислительно-восстановительные характеристики внутриклеточной среды [Lucente, G. Design and synthesis of glutathione analogues (Разработка и синтез аналогов глутатиона) / G. Lucente, G. Luisi, F. Pinnen // Farmaco. - 1998. - V. 53. - P. 721-735]. [информация общего характера о глутатионе размещена на сайте http://mir-herb.ru/poleznye-stati/glutation-biologicheskaya-rol-polza-dlya-organizma.html].From the prior art studied by the applicant, glutathione (2-amino-5 - {[2 - [(carboxymethyl) amino] -1- (mercaptomethyl) -2-oxoethyl] amino} -5-oxopentanoic acid) is known to be a tripeptide gamma - glutamylcysteinylglycine. The value of glutathione in living organisms is determined by its antioxidant properties. Glutathione not only protects the cell from toxic free radicals, but also determines the redox characteristics of the intracellular environment [Lucente, G. Design and synthesis of glutathione analogues]. G. Lucente, G. Luisi, F. Pinnen / / Farmaco. - 1998. - V. 53. - P. 721-735]. [General information about glutathione is available at http://mir-herb.ru/poleznye-stati/glutation-biologicheskaya-rol-polza-dlya-organizma.html].
Из уровня техники известно, что глутатион защищает клетки и ткани живых организмов от воздействия токсикантов и свободных радикалов [Estrela, J.M. Glutathione in cancer biology and therapy (Глутатион в области биологии и терапии рака) / J.M. Estrela, A. Ortega, Е. Obrador // Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. - 2006. - V. 43. - P. 143-181], и способен оказывать лечебный эффект при почечной дисфункции и нефротоксичности, болезнях Паркинсона и Альцгеймера, заболевании печени и легких, опухолевых болезнях, аллергии и СПИДе [Lomaestro, В.М. Glutathione in health and disease: pharmacotherapeutic issues (Глутатион в области здоровья и болезней: фармакотерапевтические проблемы) // В.М. Lomaestro, М. Malone // Ann. Pharmacother. - 1995. - V. 29. - P. 1263-1273].In the prior art it is known that glutathione protects cells and tissues of living organisms from exposure to toxicants and free radicals [Estrela, J.M. Glutathione in cancer biology and therapy (Glutathione in the field of biology and cancer therapy) / J.M. Estrela, A. Ortega, E. Obrador // Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. - 2006. - V. 43. - P. 143-181], and is able to provide a therapeutic effect in renal dysfunction and nephrotoxicity, Parkinson's and Alzheimer's diseases, liver and lung diseases, neoplastic diseases, allergies and AIDS [Lomaestro, V.M. Glutathione in health and disease: pharmacotherapeutic issues (Glutathione in the field of health and diseases: pharmacotherapeutic problems) // V.M. Lomaestro, M. Malone // Ann. Pharmacother. - 1995. - V. 29. - P. 1263-1273].
При этом глутатион обладает недостатками при его использовании по назначению в качестве лекарственного средства, а именно, обладает плохими фармакокинетическими свойствами, к их числу относятся:At the same time, glutathione has disadvantages in its use as prescribed as a medicine, namely, it has poor pharmacokinetic properties, including:
- низкая стабильность, т.е. быстрая деградация в результате химических и ферментативных реакций;- low stability, i.e. rapid degradation due to chemical and enzymatic reactions;
- низкой способностью проникать через биологические барьеры, такие как клеточные мембраны и живые ткани, т.е. обладает плохими транспортными свойствами [Fraternale, A. GSH and analogs in antiviral therapy (GSH и аналоги в противовирусной терапии) // A. Fraternale, M.F. Paoletti, A. Casabianca, L. Nencioni, E. Garaci, A.T. Palamara, M. Magnani // Mol. Aspects Med. - 2009. - V. 30. - P. 99-110].- low ability to penetrate biological barriers, such as cell membranes and living tissues, i.e. possesses poor transport properties [Fraternale, A. GSH and analogs in antiviral therapy (GSH and analogs in antiviral therapy) // A. Fraternale, M.F. Paoletti, A. Casabianca, L. Nencioni, E. Garaci, A.T. Palamara, M. Magnani // Mol. Aspects Med. - 2009. - V. 30. - P. 99-110].
Указанные выше недостатки снижают эффективность использования глутатиона в качестве лекарственного средства при пероральном и парентеральном применении.The above disadvantages reduce the effectiveness of the use of glutathione as a drug for oral and parenteral use.
Из исследованного уровня техники заявителем выявлено, что, в отличие от самого глутатиона его химические производные обладают улучшенными фармакокинетическими свойствами, среди них производные S-ацилглутатиона, используемые против индуцированного амилоидом окислительного стресса и связанной с ним болезни Альцгеймера [A. Pensalfini, С.Cecchi, М. Zampagni, М. Becatti, F. Favilli, P. Paoli, S. Catarzi, S. Bagnoli, B. Nacmias, S. Sorbi, G. Liguri. Protective effect of new S-acylglutathione derivatives against amyloid-induced oxidative stress // Free Rad. Biol. Med. - 2008. - V. 44. - P. 1624-1636; M. Zampagni, D. Wright, R. Cascella, G. 
Химические производные глутатиона обладают противоопухолевой активностью за счет ингибирования свободных радикалов, участвующих в развитии опухолевых заболеваний, инактивации глутатион-зависимых ферментов, отвечающих за повышение устойчивости опухолевых клеток к химиотерапии [Burg, D. Glutathione conjugates and their synthetic derivatives as inhibitors of glutathione-dependent enzymes involved in cancer and drug resistance // D. Burg, G.J. Mulder // Drug Metabol. Rev. - 2002. - V. 34 - P. 821-863].Chemical derivatives of glutathione possess antitumor activity due to inhibition of free radicals involved in the development of tumor diseases, inactivation of glutathione-dependent enzymes responsible for increasing the resistance of tumor cells to chemotherapy [Burg, D. Glutathione conjugates-dependent enzymes involved in cancer and drug resistance // D. Burg, GJ Mulder // Drug Metabol. Rev. - 2002. - V. 34 - p. 821-863].
Из исследованного уровня техники заявителем выявлены технические решения, предназначенные для улучшения фармакокинетических свойств глутатиона и создания на его основе производных глутатиона и лекарственных средств.From the studied prior art, the applicant identified technical solutions designed to improve the pharmacokinetic properties of glutathione and to create on its basis derivatives of glutathione and drugs.
В группе изобретений по патенту US 6627732 «Производные глутатиона и лекарственные средства на его основе» «Glutathione derivatives and their dosage forms», сущностью по первому пункту является состав - S-бензильные и сложноэфирные по фенилглициновому фрагменту производные глутатиона общей формулы 1 и их композиции с фармацевтическими носителями, где А - Н или С1-С20 ацильная группа, R1 -С1-С26 алкильная группа, R2 - Н, С1-С26 алкильная группа или С3-С26 алкильная группа.In the group of inventions according to patent US 6627732 "Glutathione derivatives and drugs based on it""Glutathione transfer and their dosage forms", the essence of the first item is the composition - S-benzyl and ester derivatives of glutathione of general formula 1 according to the phenylglycin fragment and their composition with pharmaceutical carriers, where A is H or C 1 -C 20 acyl group, R 1 -C 1 -C 26 alkyl group, R 2 -H, C 1 -C 26 alkyl group or C 3 -C 26 alkyl group.
Сущностью изобретения являются производные глутатиона и их лекарственные формы, которые обеспечивают эффективную экспрессию промотирующей гематопоэз активности в месте действия костного мозга, когда они вводятся в живой организм с целью стимулирования гемопоэза. При этом происходит увеличение стабильности in vivo, не влияя на биологическую активность гамма-глутамил-S-бензил-цистеинил-R-(-)-фенилглицина общей формулы 1, содержащего длинноцепочечный алкильный или алкениловый эфирный заместители с 12 атомами углерода или более, а также придается структура, которая способна распределяться в костном мозге. Недостатком известного изобретения является наличие неполярных ковалентных связей в эфирных производных глутатиона, что ухудшает их проходимость через биологические мембраны и снижает их биологическую активность.The essence of the invention are derivatives of glutathione and their dosage forms, which ensure the effective expression of hematopoietic promoting activity at the site of the action of the bone marrow, when they are introduced into a living organism in order to stimulate hematopoiesis. An increase in in vivo stability occurs without affecting the biological activity of gamma-glutamyl-S-benzyl-cysteinyl-R - (-) - phenylglycine of general formula 1, containing long-chain alkyl or alkenyl ether substituents with 12 or more carbon atoms or more given a structure that is able to be distributed in the bone marrow. The disadvantage of the known invention is the presence of non-polar covalent bonds in the ether derivatives of glutathione, which affects their permeability through biological membranes and reduces their biological activity.
В изобретении по патенту US 7029695 «Терапевтические композиции, содержащие аналоги глутатиона» «Therapeutic compositions containing glutathione analogs», сущностью является получение диэтиловых эфиров гамма-глютамил-S-бенилцистенил-R-фенилглицина общей формулы 2, обладающих гепатопротекторными свойствами, где R1 и R2 - С1-С25 линейные или разветвленные алкильные группы, R3 - алкильная или бензильная группы.In the invention according to US Patent No. 7029695 “Therapeutic compositions containing glutathione analogs” of “Therapeutic compositions with glutathione analogs”, the essence is the preparation of the diethyl esters of gamma-glutamyl-S-bentilcystic-R-phenylglycine of the general formula 2, having hepatoprotective properties, where R 1 and R 2 - C 1 -C 25 linear or branched alkyl groups, R 3 - alkyl or benzyl groups.
Недостатком известного изобретения является наличие сложноэфирных групп вместо карбоксильных групп, что придает этим соединениям неполярный характер и пониженную проницаемость через биологические мембраны. Кроме того, наличие S-алкильной группы вместо свободной сульфгидрильной группы цистеинового фрагмента, которая могла бы связывать свободные радикалы, делает невозможным использовать эти соединения в качестве противоопухолевых препаратов.The disadvantage of the known invention is the presence of ester groups instead of carboxyl groups, which gives these compounds a non-polar nature and reduced permeability through biological membranes. In addition, the presence of the S-alkyl group instead of the free sulfhydryl group of the cysteine fragment, which could bind free radicals, makes it impossible to use these compounds as antitumor drugs.
Из исследованного уровня техники выявлена группа изобретений, представленная в патенте РФ 2043994 «Глутатионалкиловые эфиры окисленного типа и способ их получения», сущностью которой является глутатионалкиловые эфиры окисленного типа общей формулы 3, где R - низший алкил.From the studied prior art, a group of inventions was presented, presented in RF patent 2043994 “Oxidized Glutathione alkyl esters and method for their preparation”, the essence of which is oxidized type glutathione alkyl esters of the
Эти соединения представляют собой димерные дисульфидные формы моноалкиловых эфиров глутатиона, обладающие гепатопротекторной активностью. Недостатком известного изобретения является наличие в их молекулах дисульфидного мостика сера-сера и отсутствие свободных сульфгидрильных групп, что исключает проявление антиоксидантной активности.These compounds are dimeric disulfide forms of monoalkyl esters of glutathione with hepatoprotective activity. The disadvantage of the known invention is the presence in their molecules of the disulfide bridge sulfur-sulfur and the absence of free sulfhydryl groups, which excludes the manifestation of antioxidant activity.
Из исследованного уровня техники выявлена группа изобретений по патенту US 5646177 «Глутатионовые производные антрациклинов» «Glutathione derivatives of anthracyclines», сущностью которой являются антрациклиновые S-эфиры глутатиона общей формулы 4, которые используются для ингибирования роста болезнетворных микроорганизмов.From the studied prior art, the group of inventions according to the patent US 5646177 "Glutathione derivatives of anthracyclines" "Glutathione of the anthracyclines", the essence of which are the anthracycline S-esters of glutathione of the general formula 4, which are used to inhibit the growth of pathogens.
Недостатками известного изобретения является отсутствие свободной сульфгидрильной группы в соединениях общей формулы 4, необходимость применения многостадийных способов синтеза и очистки целевых продуктов.The disadvantages of the known invention is the absence of a free sulfhydryl group in the compounds of the general formula 4, the need to use multi-stage methods for the synthesis and purification of the target products.
Сопоставительный анализ исследованного заявителем уровня техники позволяет рассматривать вышеуказанные изобретения в качестве аналогов по назначению, при этом заявителем не выявлены технические решения, совпадающие с заявленным техническим решением по составу, вследствие чего заявителем не выбран наиболее близкий аналог, который мог бы быть выбран в качестве прототипа, поскольку сущностью известных, описанных выше изобретений являются ковалентносвязанные производные глутатиона, тогда как сущностью заявленного технического решения являются глутатионаммониевые соли O,O-диорганилдитиофосфорных кислот, т.е. производные глутатиона, обладающие ионной (солевой, нековалентной) структурой.Comparative analysis of the level of technology studied by the applicant allows to consider the above inventions as analogs for the intended purpose, while the applicant has not identified technical solutions that match the claimed technical solution in composition, as a result of which the applicant did not select the closest analogue that could be chosen as a prototype since the essence of the known inventions described above are covalent-bonded glutathione derivatives, whereas the essence of the claimed technical solution is I are the salts glutationammonievye O, O-diorganilditiofosfornyh acids, i.e., glutathione derivatives with ionic (salt, non-covalent) structure.
В патентной и научной литературе заявителем не выявлены сведения о получении и свойствах солевых производных O,O-диорганилдитиофосфорных кислот на основе глутатиона, что позволяет сделать вывод о том, что глутатионаммониевые соли O,O-диорганилдитиофосфорных кислот являются новым классом соединений, обладают высокой биологической и фармакологической активностью.In the patent and scientific literature, the applicant has not identified information on the preparation and properties of salt derivatives of O, O-dianorganidithiophosphoric acids based on glutathione, which allows us to conclude that glutathione ammonium salts of O, O-dorganoldithiophosphoric acids are a new class of compounds that have a high biological and pharmacological activity.
В связи с этим целью и техническим результатом заявленного технического решения являются новые производные глутатиона с O,O-диорганилдитиофосфорными кислотами, обладающие солевой структурой, преодолевающие недостатки ковалентносвязанных аналогов, которые (производные глутатиона) могут быть использованы для получения лекарственных средств, обладающих антиоксидантной и противоопухолевой активностью.In this regard, the purpose and technical result of the claimed technical solution are new derivatives of glutathione with O, O-diorgandithiophosphoric acids, having a salt structure, overcoming the disadvantages of covalent-bonded analogues, which (derivatives of glutathione) can be used to produce drugs with antioxidant and antitumor activity .
Заявленное техническое решение иллюстрируется Фиг. 1 и Фиг. 2.The claimed technical solution is illustrated in FIG. 1 and FIG. 2
На Фиг. 1 представлена Таблица 1, в которой представлены данные об усиленных антиоксидантных свойствах глутатионаммониевых солей O,O-диорганилдитиофосфорных кислот - полумаксимальные эффективные концентрации (ЕС50, μM) глутатиона и глутатионаммониевых солей O,O-диорганилдитиофосфорных кислот по данным DPPH-теста;FIG. 1 presents Table 1, which presents data on the enhanced antioxidant properties of glutathione ammonium salts of O, O-diorganil dithiophosphoric acids — half-maximal effective concentrations (EC 50 , μM) of glutathione and glutathione ammonium salts of O, O-dorganoldithiophosphoric acids according to the DPPH test;
На Фиг. 2 представлена Таблица 2, в которой представлены данные о противоопухолевых свойствах глутатионаммониевых солей O,O-диорганилдитиофосфорных кислот в отношении опухолевых клеток человека и условно нормальных клеток (фибробластов кожи человека) - полумаксимальные ингибирующие концентрации (IC50, μМ) глутатионаммониевых солей O,O-диорганилдитиофосфорных кислот для опухолевых клеток человека (РС-3, MCF-7, MCF-7/Vinb) и условно нормальных клеток (фибробластов кожи человека) (МТТ-тест).FIG. 2 presents Table 2, which presents data on the antitumor properties of glutathione ammonium salts of O, O-diorganide dithiophosphoric acids in relation to human tumor cells and conditionally normal cells (human skin fibroblasts) - half-maximal inhibitory concentrations (IC50, μM) of glutathione ammonium salts, O, dorganodimer acids for human tumor cells (PC-3, MCF-7, MCF-7 / Vinb) and conditionally normal cells (human skin fibroblasts) (MTT test).
Таким образом, сущностью предлагаемого изобретения является получение биологически активных производных глутатиона в виде солей, в которых глутатион преобразуется в аммониевый катион, а анионом является O,O-диорганилдитиофосфат-анион, на основе которых ожидается создание лекарственных средств для лечения опухолевых, инфекционных и дегенеративных заболеваний.Thus, the essence of the invention is to obtain biologically active derivatives of glutathione in the form of salts, in which glutathione is converted into an ammonium cation, and the anion is O, O-diorgandeldithiophosphate anion, on the basis of which the creation of drugs for the treatment of tumor, infectious and degenerative diseases is expected .
O,O-Диорганилдитиофосфорные кислоты содержат различные органильные группы, такие как О-алкильные или О-терпенильные группы, которые усиливают транспорт производных глутатиона через клеточные мембраны. Терпенильные группы наряду с усилением транспорта обладают дополнительными полезными видами фармакологической активности, такими как антиоксидантная, противовоспалительная и обезболивающая активность [
Заявленные производные глутатиона получают одностадийной обработкой глутатиона O,O-диорганилдитиофосфорными кислотами в органическом растворителе в мягких условиях, т.е. при нормальном давлении, умеренном нагревании (например, при 50°С) и коротком времени реакции (например, 1.5-2 ч), что предотвращает нежелательные побочные превращения глутатиона, такие как окисление, полимеризация и рацемизация. Образование глутатионаммониевых солей O,O-диорганилдитиофосфорных кислот происходит путем квартенизации атома азота глутатиона за счет миграции протона сульфгидрильной группы дитиофосфорной кислоты и не сопровождается изменением скелетной структуры глутатиона. Предложенный способ характеризуется высоким выходом целевых продуктов (83-88%). При растворении заявленные производные глутатиона в водных растворах обладают повышенной биологической активностью по сравнению с глутатионом. Полученные по предлагаемому изобретению глутатионаммониевые соли O,O-диорганилдитиофосфорных кислот заявляются в качестве соединений, обладающих антиоксидантной и противоопухолевой активностью.The claimed derivatives of glutathione are obtained by single-stage treatment of glutathione with O, O-dianorganidithiophosphoric acids in an organic solvent under mild conditions, i.e. under normal pressure, moderate heating (for example, at 50 ° C) and a short reaction time (for example, 1.5-2 hours), which prevents undesirable side transformations of glutathione, such as oxidation, polymerization and racemization. The formation of glutathione ammonium salts of O, O-dianorganide dithiophosphoric acids occurs by quartering the nitrogen atom of glutathione due to the migration of the proton of the sulfhydryl group of dithiophosphoric acid and is not accompanied by a change in the skeletal structure of glutathione. The proposed method is characterized by a high yield of the target products (83-88%). When dissolved, the claimed glutathione derivatives in aqueous solutions have an increased biological activity compared to glutathione. Obtained according to the proposed invention, glutathione ammonium salts of O, O-diorgandithiophosphoric acids are claimed as compounds with antioxidant and antitumor activity.
Чистота полученных соединений и полнота протекания реакций подтверждены данными ЯМР 31Р, 1Н, 13С, ИК спектроскопии, масс-спектрометрии электрораспылительной ионизации, поляриметрии и данными элементного анализа.The purity of the compounds obtained and the completeness of the reactions were confirmed by 31 P, 1 H, 13 C NMR, IR spectroscopy, electrospray ionization mass spectrometry, polarimetry and elemental analysis data.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Получение глутатионаммониевой соли O,O-диэтилдитиофосфорной кислоты (Iа)Example 1. Obtaining glutathione ammonium salt of O, O-diethyldithiophosphoric acid (Ia)
К раствору 0.15 г (0.81 ммоль) O,O-диэтилдитиофосфорной кислоты в 10 мл безводного этанола при 20°С при перемешивании в токе сухого аргона прибавляют порциями 0.25 г (0.81 ммоль) глутатиона. Смесь перемешивают в течение 1.5 ч при 50°С. Образовавшийся осадок отфильтровывают. Фильтрат вакуумируют в течение 1 ч при 40°С в вакууме 0.5 мм рт.ст. и при 0.02 мм рт.ст. при 40°С в течение 1 ч. Получено 0.34 г (85%) глутатионаммониевой соли O,O-диэтилдитиофосфорной кислоты (Iа), [α]20 D -4.5° (с 1.1, ацетон). ИК спектр (жидкая пленка, ν, см-1): 3336 о. с. о. ш [ν(NH3 +)], 2978 с, 2937 с [νas,s(CH3, СН2)], 2635 сл [ν(S-H)], 1735 о. с [ν(O=C-O)], 1659 о. с [ν (NHC=O, амид I)], 1536 ср [ν(CNH, амид II)], 1444 ср [δasCH3)], 1388 с [δs(CH3)], 1028 о. с {ν[(P)O-C]}, 936 с [ν(OC-C), О-С], 678 с [ν(P=S)], 572 ср [ν(P-S)]. Спектр ЯМР 1Н (ацетон-d6, δ, м.д., J, Гц): 1.22 д (6Н, СН 3СН2О, 3JHH 7.1), 1.91 м (2Н, С10Н2), 2.22 м (2Н, С10Н2), 2.42 т (2Н, СН2С9 Н 2С=O, 3JHH 7.8), 2.43 т (2Н, СН2С9 Н 2С=O, 3JHH 7.8), 2.87-2.93 м (2Н, HSC2 H 2CH), 2.95 с (2Н, С14 Н 2СООН), 2.96 с (2Н, C14 H 2COOH), 3.74 м (С11 НСН2), 4.14 д. к (4Н, CH3CH 2OP, 3JHH 6.2, 3JPH 14.4), 4.64 м (1H, С3 НСН2). Спектр ЯМР 31Р-{1Н} (этанол), δР, м.д.: 112.0. Найдено, %: С 33.78; Н 6.03; N 8.24; Р 5.91; S 19.78. C14H28N3O8PS3. Вычислено, %: С 34.07; Н 5.72; N 8.51; Р 6.28; S 19.49.To a solution of 0.15 g (0.81 mmol) of O, O-diethyldithiophosphoric acid in 10 ml of anhydrous ethanol at 20 ° C with stirring in a stream of dry argon, 0.25 g (0.81 mmol) of glutathione is added in portions. The mixture is stirred for 1.5 hours at 50 ° C. The precipitate formed is filtered off. The filtrate is vacuumed for 1 h at 40 ° C in a vacuum of 0.5 mm Hg. and at 0.02 mm Hg at 40 ° C for 1 hour. Received 0.34 g (85%) of the glutathione ammonium salt of O, O-diethyldithiophosphoric acid (Ia), [α] 20 D -4.5 ° (s 1.1, acetone). IR spectrum (liquid film, ν, cm -1 ): 3336 o. with. about. ø [ν (NH 3 + )], 2978 s, 2937 s [ν as, s (CH 3 , CH 2 )], 2635 cl [ν (SH)], 1735 o. with [ν (O = CO)], 1659 o. with [ν (NHC = O, amide I)], 1536 sr [ν (CNH, amide II)], 1444 sr [δ as CH 3 )], 1388 s [δ s (CH 3 )], 1028 o. with {ν [(P) OC]}, 936 with [ν (OC-C), O-C], 678 with [ν (P = S)], 572 sr [ν (PS)]. NMR spectrum 1 H (acetone-d 6 , δ, ppm, J, Hz): 1.22 d (6H, C H 3 CH 2 O, 3 J HH 7.1), 1.91 m (2H, C 10 H 2 ) , 2.22 m (2H, C 10 H 2 ), 2.42 t (2H, CH 2 C 9 H 2 C = O, 3 J HH 7.8), 2.43 t (2H, CH 2 C 9 H 2 C = O, 3 J HH 7.8), 2.87-2.93 m (2H, HSC 2 H 2 CH), 2.95 s (2H, C 14 H 2 COOH), 2.96 s (2H, C 14 H 2 COOH), 3.74 m (C 11 H CH 2 ), 4.14 d. To (4H, CH 3 C H 2 OP, 3 J HH 6.2, 3 J PH 14.4), 4.64 m (1H, C 3 H CH 2 ). 31 F NMR {1 H} (ethanol), δ P .: 112.0 ppm. Found,%: C 33.78; H 6.03; N 8.24; R 5.91; S 19.78. C 14 H 28 N 3 O 8 PS 3 . Calculated,%: C, 34.07; H 5.72; N 8.51; R 6.28; S 19.49.
Пример 2. Получение глутатионаммониевой соли O,O-дибутилдитиофосфорной кислоты (16)Example 2. Obtaining glutathione ammonium salt of O, O-dibutyldithiophosphoric acid (16)
К раствору 0.2 г (0.7 ммоль) глутатиона в 5 мл безводного этанола при 20°С при перемешивании в токе сухого аргона прибавляют по каплям 0.16 г (0.7 ммоль) O,O-дибутилдитиофосфорной кислоты. Смесь нагревают в течение 1.5 ч при 50°С, выдерживают 12 ч и фильтруют. Фильтрат выпаривают при 40°С в течение 1 ч в вакууме (0.5 мм рт.ст.) и 1 ч при 0.02 мм рт.ст. В остатке получено 0.3 г (83%) глутатионаммониевой соли O,O-дибутилдитиофосфорной кислоты (Iб), [α]20 D-3.5° (с 1.10, ацетон). ИК спектр (жидкая пленка, ν, см-1): 3333 о. с. о. ш [ν(NH3 +)], 2958 с, 2876 с [νas,s(CH3, СН2)], 2637 сл [ν(S-H)], 1736 с [ν(O=C-O)], 1656 с [ν (NHC=O, амид I)], 1536 с [ν(CNH, амид II)], 1461 ср [δas(CH3)], 1380 ср [δs(CH3)], 1030 ср {ν[(P)O-C]}, 971 с [ν(OC-С), О-С], 677 с [ν(P=S)], 561 ср [ν(P-S)]. Спектр ЯМР 1Н (ацетон-d6, δ, м.д., J, Гц): 0.93 т (12Н, CH 3CH2CH2CH2O, 3JHH 7.4), 1.42 т.к (4Н, СН3СН 2СН2СН2О, 3JHH 7.4), 1.60 т. т (4Н, CH3CH2CH 2CH2O, 3JHH 6.5), 1.91 м (2Н, НСС10 Н 2СН2), 2.22 м (2Н, С10Н2), 2.43 м (2Н, СН2С9 Н 2С=O), 2.89-2.98 м (2Н, HSC2 H 2CH), 2.95 с (2Н, С14 Н 2СООН), 2.96 с (2Н, С14 Н 2СООН), 3.74 м (1Н, С11 НСН2), 4.13 д. к (4Н, СН3СН 2ОР, 3JHH 6.5 Hz, 3JPH 10.9 Hz), 4.64 м (1Н, С3 НСН2). Спектр ЯМР 31Р-{1Н} (этанол), δP, м.д.: 112.2. Масс-спектр электрораспылительной ионизации, ацетон, m/z: 591.0 [М+K+Н]+. Найдено, %: С 32.98; Н 6.87; N 7.87; Р 5.35; S 17.89. C18H36NO8PS3. Вычислено, %: С 33.33; Н 6.60; N 7.64; Р 5.64; S 17.50. М 549.7.To a solution of 0.2 g (0.7 mmol) of glutathione in 5 ml of anhydrous ethanol at 20 ° C with stirring in a stream of dry argon is added dropwise 0.16 g (0.7 mmol) of O, O-dibutyldithiophosphoric acid. The mixture is heated for 1.5 hours at 50 ° C, kept for 12 hours and filtered. The filtrate is evaporated at 40 ° C for 1 h under vacuum (0.5 mm Hg) and 1 h at 0.02 mm Hg. The residue obtained 0.3 g (83%) of glutathione ammonium salt of O, O-dibutyl dithiophosphoric acid (Ib), [α] 20 D –3.5 ° (c 1.10, acetone). IR spectrum (liquid film, ν, cm -1 ): 3333 o. with. about. ø [ν (NH 3 + )], 2958 s, 2876 s [ν as, s (CH 3 , CH 2 )], 2637 cl [ν (SH)], 1736 s [ν (O = CO)], 1656 with [ν (NHC = O, amide I)], 1536 with [ν (CNH, amide II)], 1461 sr [δ as (CH 3 )], 1380 sr [δ s (CH 3 )], 1030 sr { ν [(P) OC]}, 971 s [ν (OC-C), O-C], 677 s [ν (P = S)], 561 sr [ν (PS)]. 1 H NMR spectrum (acetone-d 6 , δ, ppm, J, Hz): 0.93 t (12H, C H 3 CH 2 CH 2 CH 2 O, 3 J HH 7.4), 1.42 tk (4H , CH 3 C H 2 CH 2 CH 2 O, 3 J HH 7.4), 1.60 t. (4H, CH 3 CH 2 C H 2 CH 2 O, 3 J HH 6.5), 1.91 m (2H, HCC 10 N 2 CH 2 ), 2.22 m (2H, C 10 H 2 ), 2.43 m (2H, CH 2 C 9 H 2 C = O), 2.89-2.98 m (2H, HSC 2 H 2 CH), 2.95 s (2H , C 14 H 2 COOH), 2.96 s (2H, C 14 H 2 COOH), 3.74 m (1H, C 11 H CH 2 ), 4.13 dc (4H, CH 3 C H 2 OP, 3 J HH 6.5 Hz, 3 J PH 10.9 Hz), 4.64 m (1H, C 3 H CH 2 ). 31 F NMR {1 H} (ethanol), δ P, ppm .: 112.2. Mass spectrum of electrospray ionization, acetone, m / z: 591.0 [M + K + H] + . Found,%: C 32.98; H 6.87; N 7.87; P 5.35; S 17.89. C 18 H 36 NO 8 PS 3 . Calculated,%: C 33.33; H 6.60; N 7.64; Р 5.64; S 17.50. M 549.7.
Пример 3. Получение глутатионаммониевой соли О.О-диизопропилдитио-фосфорной кислоты (Iв)Example 3. Preparation of glutathione ammonium salt of O.O.-diisopropyl dithio-phosphoric acid (IB)
К раствору 0.2 г (0.65 ммоль) глутатиона в 5 мл безводного этанола при 20°С при перемешивании в токе сухого аргона прибавляют по каплям 0.14 г (0.65 ммоль) O,O-диизопропилдитиофосфорной кислоты. Смесь нагревают 1.5 ч при 50°С. Смесь выдерживают 12 ч и фильтруют. Фильтрат вакуумируют при 40°С 11 ч (0.5 мм рт.ст.) и 1 ч при 0.02 мм рт.ст. В остатке получено 0.3 г (88%) глутатионаммониевой соли O,O-диизопропилдитиофосфорной кислоты (Iв), [α]20 D+0.4° (с 1.10, бензол). ИК спектр (жидкая пленка, ν, см-1): 3318 с [ν(NH3 +)], 2976 о.с, 2935 с [νas,s(СH3, СН2)], 2637 сл [ν(S-Н)], 1735 с [ν(O=C-O)], 1658 с [ν (NHC=O, амид I)], 1538 с [ν (CNH, амид II)], 1413 ср [δas(СН3)], 1383 ср, 1373 ср [δs(CH3)2C гем.], 1040 с {ν[(P)O-C]}, 963 с [ν(OC-C), О-С], 669 с [ν(P=S)], 557 ср [ν(P-S)]. Спектр ЯМР 1Н (ацетон-d6, δ, м.д., J, Гц): 1.26 т [12Н, (СН 3)2СН, 3JHH 6.2], 1.91 м (2Н, С10Н2), 2.22 м (2Н, НСС10 Н 2СН2), 2.43 м (2Н, СН2С9 Н 2С=O), 2.87-2.93 м (2Н, HSC2 H 2CH), 2.97 с (2Н, С14 Н 2СООН), 2.98 с (2Н, С14 Н 2СООН), 3.74 м (1Н, С11 НСН2), 4.13 д. т (2Н, CHOP, 3JHH 6.2, 3JPH 10.9), 4.64 м (1H, C3 HCH2). Спектр ЯМР 31P-{1H} (этанол), δР, м.д.: 108.0. Масс-спектр электрораспылительной ионизации, ацетон, m/z: 565.0 [М+K+Н]+. Найдено, %: С 32.55; Н 5.87; N 8.39; Р 6.19; S 18.76. C16H32N3O8PS3. Вычислено, %: С 36.84; Н 6.18; N 8.06; Р 5.94; S 18.44. М 521.6.To a solution of 0.2 g (0.65 mmol) of glutathione in 5 ml of anhydrous ethanol at 20 ° C with stirring in a stream of dry argon, 0.14 g (0.65 mmol) of O, O-diisopropyl dithiophosphoric acid are added dropwise. The mixture is heated for 1.5 hours at 50 ° C. The mixture was incubated for 12 hours and filtered. The filtrate is evacuated at 40 ° C for 11 h (0.5 mm Hg) and 1 h at 0.02 mm Hg. The residue yielded 0.3 g (88%) of glutathione ammonium salt of O, O-diisopropyl dithiophosphoric acid (Ic), [α] 20 D + 0.4 ° C (s 1.10, benzene). IR spectrum (liquid film, ν, cm -1 ): 3318 s [ν (NH 3 + )], 2976 o.c., 2935 s [ν as, s (СH 3 , СН 2 )], 2637 cl [ν ( S-H)], 1735 s [ν (O = CO)], 1658 s [ν (NHC = O, amide I)], 1538 s [ν (CNH, Amide II)], 1413 sr [δ as (CH 3 )], 1383 sr, 1373 sr [δ s (CH 3 ) 2 C heme.], 1040 s {ν [(P) OC]}, 963 s [ν (OC-C), O-C], 669 with [ν (P = S)], 557 sr [ν (PS)]. NMR spectrum 1 H (acetone-d 6 , δ, ppm, J, Hz): 1.26 t [12H, (C H 3 ) 2 CH, 3 J HH 6.2], 1.91 m (2H, C 10 H 2 ), 2.22 m (2H, HCC 10 H 2 CH 2 ), 2.43 m (2H, CH 2 C 9 H 2 C = O), 2.87-2.93 m (2H, HSC 2 H 2 CH), 2.97 s (2H, C 14 H 2 COOH), 2.98 s (2H, C 14 H 2 COOH), 3.74 m (1H, C 11 H CH 2 ), 4.13 dt (2H, C H OP, 3 J HH 6.2, 3 J PH 10.9), 4.64 m (1H, C 3 H CH 2 ). NMR spectrum 31 P- { 1 H} (ethanol), δ P , ppm: 108.0. Mass spectrum of electrospray ionization, acetone, m / z: 565.0 [M + K + H] + . Found,%: C 32.55; H 5.87; N 8.39; P 6.19; S 18.76. C 16 H 32 N 3 O 8 PS 3 . Calculated,%: C, 36.84; H 6.18; N 8.06; R 5.94; S 18.44. M 521.6.
Пример 4. Получение глутатионаммониевой соли O,O-ди-(-)-(1R,2S,5R)-2-изо-пропил-5-метилциклогекс-1-илдитиофосфорной кислоты (Iг)Example 4. Obtaining glutathione ammonium salt of O, O-di - (-) - (1R, 2S, 5R) -2-iso-propyl-5-methylcyclohex-1-yldithiophosphoric acid (Ig)
К раствору 0.2 г (0.65 ммоль) глутатиона в 10 мл безводного этанола при 20°С при перемешивании в токе сухого аргона прибавляют по каплям 0.26 г (0.64 ммоль) O,O-ди-(-)-(1R,2S,5R)-2-изопропил-5-метилциклогекс-1-илдитиофосфорной кислоты, полученной из (S)-(-)-ментола. Смесь нагревают 2 ч при 20°С, выдерживают 12 ч и фильтруют. Фильтрат вакуумируют при 40°С 1 ч (0.5 мм рт.ст.) и 1 ч при 0.02 мм рт.ст. В остатке получено 0.4 г (87%) глутатионаммониевой соли O,O-ди-(-)-(1R,2S,5R)-2-изопропил-5-метилциклогекс-1-илдитиофосфорной кислоты (Iг), [α]20 D+25.5° (с 0.99, этанол). ИК спектр (жидкая пленка, ν, см-1): 3355 с [ν(NH3 +)], 2955 о. с, 2930 с, 2870 с [νas,s(CH3, СН2)], 2600 сл [ν(S-H)], 1730 с [ν(O=C-O)], 1653 с [ν (NHC=O, амид I)], 1538 с [ν (CNH, амид II)], 1454 с [δas(CH3)], 1387 ср, 1370 ср [δs(CH3)2C гем.], 1044 с {ν[(P)O-C]}, 959 с [ν(OC-С), О-С], 670 с [ν(P=S)], 550 ср [ν(P-S)]. Спектр ЯМР 1Н (ацетон-d6, 5, м.д., J, Гц): 0.66 д (6Н, С10' Н 3СН, 3JHH 6.9); 0.75 д [12Н, (С8',9' H 3)2СН, 3JHH 6.6]; 0.76 д [12Н, (С8',9' Н 3)2СН, 3JHH 6.1]; 0.99 м (2Н, С2'Н); 1.26 м [2Н, (СН3)2С7' Н]; 1.42 м (2Н, СН3С5' Н); 1-52 м (4Н, С3'Н2); 2.14 д.т (2Н, НСС10Н2СН2, 3JHH 7.1 Hz, 3JHH 6.9), 3.19 м (2Н, HSC2 H 2CH), 3.42 с (2Н, С14 Н 2СООН), 3.60 м (1Н, С11 НСН2), 3.99 м (2Н, РОС1Н), 4.34 м (1H, С3 НСН2). Спектр ЯМР 31Р-{1Н} (этанол), δP, м.д.: 105.8. Найдено, %: С 50.76; Н 8.23; N 6.16; Р 4.65; S 13.76. C30H56N3O8PS3. Вычислено, %: С 50.47; Н 7.91; N 5.89; Р 4.34; S 13.47.0.26 g (0.64 mmol) O, O-di - (-) - (1R, 2S, 5R) are added dropwise to a solution of 0.2 g (0.65 mmol) of glutathione in 10 ml of anhydrous ethanol at 20 ° C with stirring in a stream of dry argon. -2-Isopropyl-5-methylcyclohex-1-yldithiophosphoric acid obtained from (S) - (-) - menthol. The mixture is heated for 2 hours at 20 ° C, kept for 12 hours and filtered. The filtrate is evacuated at 40 ° C for 1 h (0.5 mm Hg) and 1 h at 0.02 mm Hg. The residue obtained 0.4 g (87%) of the glutathione ammonium salt of O, O-di - (-) - (1R, 2S, 5R) -2-isopropyl-5-methylcyclohex-1-yldithiophosphoric acid (Ig), [α] 20 D + 25.5 ° (from 0.99, ethanol). IR spectrum (liquid film, ν, cm -1 ): 3355 s [ν (NH 3 + )], 2955 o. s, 2930 s, 2870 s [ν as, s (CH 3 , CH 2 )], 2600 cl [ν (SH)], 1730 s [ν (O = CO)], 1653 s [ν (NHC = O, amide I)], 1538 s [ν (CNH, amide II)], 1454 s [δ as (CH 3 )], 1387 sr, 1370 sr [δ s (CH 3 ) 2 C ha.], 1044 s {ν [(P) OC]}, 959 s [ν (OC-C), O-C], 670 s [ν (P = S)], 550 sr [ν (PS)]. NMR spectrum 1 H (acetone-d 6, 5, ppm, J, Hz): 0.66 d (6H, C 10 ' H 3 CH, 3 J HH 6.9); 0.75 d [12H, (C 8 ', 9' H 3 ) 2 CH, 3 J HH 6.6]; 0.76 d [12H, (C 8 ', 9' H 3 ) 2 CH, 3 J HH 6.1]; 0.99 m (2H, C 2 ' H); 1.26 m [2H, (CH 3 ) 2 C 7 ' H ]; 1.42 m (2H, CH 3 C 5 ' H ); 1-52 m (4H, C 3 ' H 2 ); 2.14 dt (2H, HCC 10 H 2 CH 2 , 3 J HH 7.1 Hz, 3 J HH 6.9), 3.19 m (2H, HSC 2 H 2 CH), 3.42 s (2H, C 14 H 2 COOH), 3.60 m (1H, C 11 H CH 2 ), 3.99 m (2H, ROS 1 H), 4.34 m (1H, C 3 H CH 2 ). 31 F NMR {1 H} (ethanol), δ P, ppm .: 105.8. Found,%: C 50.76; H 8.23; N 6.16; R 4.65; S 13.76. C 30 H 56 N 3 O 8 PS 3 . Calculated,%: C 50.47; H 7.91; N 5.89; R 4.34; S 13.47.
Пример 5. Получение глутатионаммониевой соли O,O-ди(1S,2S,3S,5R)-(+)-2,6,6-триметилбицикло[3.1.1]гепт-3-илдитиофосфорной кислоты (Iд)Example 5. Obtaining glutathione ammonium salt of O, O-di (1S, 2S, 3S, 5R) - (+) - 2,6,6-trimethylbicyclo [3.1.1] hept-3-yldithiophosphoric acid (Id)
К раствору 0.2 г (0.65 ммоль) глутатиона в 10 мл безводного этанола при 20°С при перемешивании в токе сухого аргона прибавляют по каплям 0.26 г (0.65 ммоль) O,O-ди(1S,2S,3S,5R)-(+)-2,6,6-триметилбицикло[3.1.1]гепт-3-илдитиофосфорной кислоты, полученной из (1S,2S,3S,5R)-(+)-изопинокамфеола. Смесь нагревают 1.5 ч при 50°С, выдерживают 12 ч и фильтруют. Фильтрат вакуумируют при 40°С 1 ч (0.5 мм рт. ст.) и 1 ч при 0.02 мм рт.ст. В остатке получено 0.4 г (87%) глутатионаммониевой соли O,O-ди(1S,2S,3S,5R)-(+)-2,6,6-триметилбицикло[3.1.1]гепт-3-илдитиофосфорной кислоты (Iд).To a solution of 0.2 g (0.65 mmol) of glutathione in 10 ml of anhydrous ethanol at 20 ° C with stirring in a stream of dry argon is added dropwise 0.26 g (0.65 mmol) O, O-di (1S, 2S, 3S, 5R) - (+ ) -2,6,6-trimethylbicyclo [3.1.1] hept-3-yldithiophosphoric acid obtained from (1S, 2S, 3S, 5R) - (+) - isopinocampheol. The mixture is heated for 1.5 hours at 50 ° C, kept for 12 hours and filtered. The filtrate is evacuated at 40 ° C for 1 h (0.5 mm Hg) and 1 h at 0.02 mm Hg. The residue yielded 0.4 g (87%) of the glutathione ammonium salt O, O-di (1S, 2S, 3S, 5R) - (+) - 2,6,6-trimethylbicyclo [3.1.1] hept-3-yldithiophosphoric acid (Id ).
Синтезированные глутатионаммониевые соли O,O-диорганилдитиофосфорных кислот прошли испытания на антиоксидантную и противоопухолевую активность.Synthesized glutathione ammonium salts of O, O-diorgandeltidiophosphoric acids were tested for antioxidant and antitumor activity.
Пример 6. Антиоксидантные свойства глутатионаммониевых солей О,О-диорганилдитиофосфорных кислотExample 6. Antioxidant properties of glutathione ammonium salts of O, O-diorganiditiophosphoric acids
Антиоксидантные свойства глутатиона и глутатионаммониевых солей O,O-диорганилдитиофосфорных кислот (Ia-д) оценивали по их способности связывать хромогенный DPPH-радикал (2,2-дифенил-1-пикрилгидразил). Исходный раствор DPPH растворяют в метаноле в концентрации 4 мМ. Реакционный раствор содержит DPPH в конечной концентрации 250 мкМ и исследуемое соединение в серийных разведениях в диапазоне концентраций от 60 нМ до 2.5 мМ в фосфатно-солевом буфере (ФСБ). Смесь выдерживают в течение 60 мин при 20°С. Оптическое поглощение раствора измеряли на 96-луночном планшете при длине волны 515 нм на микропланшетном анализаторе Infinite М200 PRO (TECAN). Антиоксидантную способность соединений определяли по уменьшению величины оптического поглощения. Для этого строили сигмоидальные зависимости оптического поглощения от концентрации соединения относительно контрольного раствора без антиоксиданта (100%) и вычисляли полумаксимальные эффективные (ингибирующие) концентрации (ЕС50) с использованием программного обеспечения OriginPro 8.0 (Таблица 1 на Фиг. 1).The antioxidant properties of glutathione and glutathione ammonium salts of O, O-diorgandithiophosphoric acids (Ia-d) were evaluated by their ability to bind the chromogenic DPPH radical (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl). The initial solution of DPPH is dissolved in methanol at a concentration of 4 mm. The reaction solution contains DPPH at a final concentration of 250 μM and the test compound in serial dilutions in the concentration range from 60 nM to 2.5 mM in phosphate-buffered saline (PBS). The mixture was incubated for 60 min at 20 ° C. Optical absorption of the solution was measured on a 96-well plate at a wavelength of 515 nm on an Infinite M200 PRO microplate analyzer (TECAN). The antioxidant capacity of the compounds was determined by reducing the amount of optical absorption. To do this, sigmoid dependences of optical absorption on the concentration of the compound relative to the control solution without antioxidant (100%) were built and the half-maximal effective (inhibitory) concentrations (EC 50 ) were calculated using the OriginPro 8.0 software (Table 1 in Fig. 1).
По данным DPPH-теста глутатионаммониевые соли O,O-диорганилдитиофосфорных кислот (Iа-д) обладают более низкими значениями ЕС50 - от 18 до 186 мкМ по сравнению с глутатионом (ЕС50 248 мкМ). Это показывает, что заявленные производные глутатиона обладают значительно более высокой антиоксидантной способностью, проявляющейся в связывании свободных радикалов.According to the DPPH test data, the glutathione ammonium salts of O, O-diorganide dithiophosphoric acids (Ia-d) have lower EC 50 values — from 18 to 186 μM compared to glutathione (EU 50 248 μM). This shows that the claimed glutathione derivatives have a significantly higher antioxidant capacity, manifested in the binding of free radicals.
Пример 7. Противоопухолевые свойства глутатионаммониевых солей O,O-диорганилдитиофосфорных кислотExample 7. Antitumor properties of glutathione ammonium salts of O, O-diorganolditiofosforny acids
Цитотоксичность глутатиона и глутатионаммониевых солей O,O-диорганилдитиофосфорных кислот (Ia-д) для различных клеток человека исследовали с помощью стандартного МТТ-теста. Опухолевые клетки человека (рака груди MCF-7, рака простаты РС-3, устойчивые к винбластину клетки рака груди MCF-7/Vinb), а также условно нормальные фибробласты кожи человека культивируют в питательной среде DMEM в стандартных асептических условиях в 96-ти луночном планшете. Стерильные серийно разбавленные растворы соединений (60 нМ - 2.5 мМ) вносят в питательную среду к клеткам, которые далее культивируют в течение 72 ч.The cytotoxicity of glutathione and glutathione ammonium salts of O, O-diorganildithiophosphoric acids (Ia-d) for various human cells was investigated using the standard MTT test. Human tumor cells (MCF-7 breast cancer, PC-3 prostate cancer, vinblastine-resistant breast cancer cells MCF-7 / Vinb), as well as conditionally normal human skin fibroblasts are cultured in DMEM culture medium under standard aseptic conditions in 96 well the tablet. Sterile serially diluted solutions of the compounds (60 nM - 2.5 mM) are introduced into the nutrient medium to the cells, which are further cultured for 72 hours.
Жизнеспособность клеток выявляют следующим образом:Cell viability is detected as follows:
- добавляют 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолийбромид - реагент МТТ (0.5 мг/мл) в течение 3 ч;- add 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide - MTT reagent (0.5 mg / ml) for 3 hours;
- растворяют образующийся продукт в ДМСО;- dissolve the resulting product in DMSO;
- детектируют оптическое поглощение раствора на микропланшетном анализаторе Infinite М200 PRO (Tecan) при длине волны 555 нм.- detect the optical absorption of the solution on a microplate analyzer Infinite M200 PRO (Tecan) at a wavelength of 555 nm.
Жизнеспособность клеток рассчитывают относительно контрольных клеток, выращенных без испытуемых соединений (жизнеспособность 100%). Влияние соединений на жизнеспособность клеток оценивали по величине полумаксимальной ингибирующей концентрации на пролиферацию клеток (IC50) (Таблица 2 на Фиг. 2).Cell viability is calculated relative to control cells grown without test compounds (100% viability). The effect of compounds on cell viability was estimated by the magnitude of the half-maximal inhibitory concentration on cell proliferation (IC 50 ) (Table 2 in FIG. 2).
Установлено, что глутатион не понижает, а наоборот, значительно повышает жизнеспособность опухолевых клеток в широком диапазоне концентраций, например, для клеток MCF-7 до 20%, для клеток РС-3 до 40%, а для резистентных клеток MCF-7/Vinb на 60-100%. Это показывает, что немодифицированный глутатион ускоряет рост опухолей и поэтому не может быть использован при онкологических заболеваниях.It has been established that glutathione does not lower, but on the contrary, significantly increases the viability of tumor cells in a wide range of concentrations, for example, for MCF-7 cells up to 20%, for PC-3 cells up to 40%, and for resistant MCF-7 / Vinb cells 60-100%. This shows that unmodified glutathione accelerates the growth of tumors and therefore cannot be used for oncological diseases.
В отличие от этого, глутатионаммониевые соли O,O-диорганилдитиофосфорных кислот существенно ингибируют жизнеспособность опухолевых клеток. Значения IC50 соединений (Iа), (Iб) и (Iв), в которых O,O-диорганилдитиофосфорные кислоты содержат О-алкильные заместители, для опухолевых клеток MCF-7, РС-3 и MCF-7/Vinb составили от 508 до 72 мкМ. В тех же условиях, значения IC50 соединений (Iг) и (Iд), имеющих О-терпенильные заместители, были еще ниже и составили от 30 до 1 мкМ.In contrast, glutathione ammonium salts of O, O-diorganide dithiophosphoric acids significantly inhibit the viability of tumor cells. The IC 50 values of compounds (Ia), (Ib) and (Ib), in which O, O-diorgandithiophosphoric acids contain O-alkyl substituents, for MCF-7, PC-3 and MCF-7 / Vinb tumor cells ranged from 508 to 72 μM. Under the same conditions, the IC 50 values of compounds (Ig) and (Id) having O-terpene substituents were even lower and ranged from 30 to 1 μM.
Таким образом, модификация глутатиона O,O-диорганилдитиофосфорными кислотами придает значительную противоопухолевую активность, которая особенно выражена при использовании глутатионаммониевых солей O,O-диорганилдитиофосфорных кислот, содержащих О-терпенильные заместители. Наблюдаемая противоопухолевая активность разработанных дитиофосфорильных производных глутатиона объясняется их повышенным проникновением через клеточные мембраны и накоплением внутри опухолевых клеток.Thus, the modification of glutathione with O, O-diorgandithiophosphoric acids imparts significant antitumor activity, which is especially pronounced when using glutathione ammonium salts of O, O-diorgoldithiothiophosphoric acids containing O-terpenyl substituents. The observed antitumor activity of the developed dithiophosphoryl derivatives of glutathione is due to their increased penetration through cell membranes and accumulation inside tumor cells.
Наибольший эффект проявляет глутатионаммониевая соль дитиофосфорной кислоты (Iг), содержащий (S)-(-)-ментильный заместитель, в отношении опухолевых клеток рака груди, устойчивых к противоопухолевому препарату винбластину (IC50 1 мкМ).The greatest effect is shown by the glutathione ammonium salt of dithiophosphoric acid (Ig), containing (S) - (-) - menthyl substituent, in relation to tumor cells of breast cancer resistant to the antineoplastic drug vinblastine (IC 50 1 μM).
При этом разработанные глутатионаммониевые соли O,O-диорганилдитиофосфорных кислот обладают значительно меньшей цитотоксической активностью (т.е. большими значениями IC50) в отношении фибробластов кожи человека (Фиг. 2), являющихся моделью нормальных клеток. Это показывает, что заявленные соединения обладают избирательным цитотоксическим действием для опухолевых клеток и относительной безопасностью для нормальных клеток, благодаря избирательному накоплению и нарушению окислительно-восстановительного метаболизма в опухолевых клетках.At the same time, the developed glutathione ammonium salts of O, O-diorganide dithiophosphoric acids have a significantly lower cytotoxic activity (ie, large IC 50 values) in relation to human skin fibroblasts (Fig. 2), which is a model of normal cells. This shows that the claimed compounds have a selective cytotoxic effect for tumor cells and relative safety for normal cells, due to selective accumulation and disturbance of redox metabolism in tumor cells.
Заявленное техническое решение позволяет достигнуть поставленные цели и заявленный технический результат, а именно - получить новые глутатионаммониевые соли O,O-диорганилдитиофосфорных кислот, характеризующиеся следующими преимущественными характеристиками:The claimed technical solution allows to achieve the goals and the stated technical result, namely, to obtain new glutathione ammonium salts of O, O-diorgandeldithiophosphoric acids, characterized by the following preferential characteristics:
- нековалентной ионной структурой, не изменяющей скелетную структуру глутатиона, и тем самым уменьшающей вероятность возникновения побочных эффектов при применении заявленных производных глутатиона;- non-covalent ionic structure that does not alter the skeletal structure of glutathione, and thereby reduces the likelihood of side effects when using the claimed derivatives of glutathione;
- простым одностадийным способом получения заявленных производных глутатиона в мягких условиях с высокими выходами целевых продуктов;- simple one-step method of obtaining the stated derivatives of glutathione under mild conditions with high yields of the target products;
- повышенной антиоксидантной активностью заявленных производных глутатиона по сравнению с самим глутатионом;- increased antioxidant activity of the claimed derivatives of glutathione compared with glutathione itself;
- избирательной цитотоксической активностью заявленных производных глутатиона в отношении опухолевых клеток, в том числе, резистентных к известным цитостатикам.- selective cytotoxic activity of the claimed glutathione derivatives in relation to tumor cells, including those resistant to known cytostatics.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «новизна», предъявляемое к изобретениям, т.к. из исследованного уровня техники не выявлены технические решения, обладающие заявленной совокупностью признаков и полученными техническими результатами.The claimed technical solution meets the criterion of "novelty", presented to inventions, because from the studied level of technology not identified technical solutions that have the stated set of features and the obtained technical results.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемое к изобретениям, так как не является очевидным для специалистов в данной области науки и техники, а в существующем уровне техники специалистам не были известны биологически активные глутатионаммониевые соли O,O-диорганилдитиофосфорных кислот.The claimed technical solution meets the criterion of "inventive step", presented to the inventions, as it is not obvious to specialists in this field of science and technology, and in the existing level of technology, the specialists did not know biologically active glutathione ammonium salts of O, O-diorgandithiophosphoric acids.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», предъявляемое к изобретениям, т.к. заявленное техническое решение может быть реализовано в специализированных химических и фармацевтических предприятиях с применением известных материалов и технологического оборудования.The claimed technical solution meets the criterion of "industrial applicability" imposed on inventions, because The claimed technical solution can be implemented in specialized chemical and pharmaceutical enterprises using known materials and process equipment.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018112314A RU2692065C1 (en) | 2018-04-05 | 2018-04-05 | Glutathione-ammonium salts of o,o-diorganyl dithiophosphoric acids, having antioxidant and anticancer activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018112314A RU2692065C1 (en) | 2018-04-05 | 2018-04-05 | Glutathione-ammonium salts of o,o-diorganyl dithiophosphoric acids, having antioxidant and anticancer activity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2692065C1 true RU2692065C1 (en) | 2019-06-20 |
Family
ID=66947664
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018112314A RU2692065C1 (en) | 2018-04-05 | 2018-04-05 | Glutathione-ammonium salts of o,o-diorganyl dithiophosphoric acids, having antioxidant and anticancer activity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2692065C1 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2043994C1 (en) * | 1990-12-28 | 1995-09-20 | Сендзю Фармасьютикал Ко., Лтд. | Glutathio alkyl esters of oxidizing type and method for their production |
| US5646177A (en) * | 1994-05-02 | 1997-07-08 | Board Of Regents Of The University Of Colorado | Glutathione derivatives of anthracyclines |
| US6627732B1 (en) * | 1998-04-16 | 2003-09-30 | Teijin Limited | Glutathione derivatives and their dosage forms |
| US7029695B2 (en) * | 2001-07-10 | 2006-04-18 | Telik, Inc. | Therapeutic compositions containing glutathione analogs |
-
2018
- 2018-04-05 RU RU2018112314A patent/RU2692065C1/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2043994C1 (en) * | 1990-12-28 | 1995-09-20 | Сендзю Фармасьютикал Ко., Лтд. | Glutathio alkyl esters of oxidizing type and method for their production |
| US5646177A (en) * | 1994-05-02 | 1997-07-08 | Board Of Regents Of The University Of Colorado | Glutathione derivatives of anthracyclines |
| US6627732B1 (en) * | 1998-04-16 | 2003-09-30 | Teijin Limited | Glutathione derivatives and their dosage forms |
| US7029695B2 (en) * | 2001-07-10 | 2006-04-18 | Telik, Inc. | Therapeutic compositions containing glutathione analogs |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Gino Lucente et al. Il Farmaco, 1998, 53(12), 721-735. E. Gonzalez-Burgos et al. Current Medicinal Chemistry, 2012, 19(31), 5319-5341. * |
| Rezeda A.Akhmadishina et al. Peptides, Vol. 99, 01.2018, 179-188. * |
| Rezeda A.Akhmadishina et al. Peptides, Vol. 99, 01.2018, 179-188. Gino Lucente et al. Il Farmaco, 1998, 53(12), 721-735. E. Gonzalez-Burgos et al. Current Medicinal Chemistry, 2012, 19(31), 5319-5341. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rubbiani et al. | TrxR inhibition and antiproliferative activities of structurally diverse gold N-heterocyclic carbene complexes | |
| US9421237B2 (en) | Tripeptide boronic acid or boronic ester, preparative method and use thereof | |
| Altaf et al. | Synthesis, X-ray structures, spectroscopic analysis and anticancer activity of novel gold (I) carbene complexes | |
| Khan et al. | Gold (I), silver (I) and copper (I) complexes of 2, 4, 6-trimethylphenyl-3-benzoylthiourea; synthesis and biological applications | |
| WO2012123076A1 (en) | Ferrocene-based compounds and their use as ros regulating prodrugs | |
| AU2007300782B2 (en) | Triphenylphosphonium thionitrite nitric oxide donors | |
| JP5819523B2 (en) | Camptothecin derivatives and methods for producing the same, pharmaceutical compositions and uses thereof | |
| Akhmadishina et al. | Glutathione salts of O, O-diorganyl dithiophosphoric acids: Synthesis and study as redox modulating and antiproliferative compounds | |
| Liu et al. | Synthesis, anticancer activity and toxicity of a water-soluble 4S, 5S-derivative of heptaplatin, cis-{Pt (II)[(4S, 5S)-4, 5-bis (aminomethyl)-2-isopropyl-1, 3-dioxolane]·(3-hydroxyl-cyclobutane-1, 1-dicarboxylate)} | |
| RU2692065C1 (en) | Glutathione-ammonium salts of o,o-diorganyl dithiophosphoric acids, having antioxidant and anticancer activity | |
| WO2007076323A2 (en) | Compounds for delivering amino acids or peptides with antioxidant activity into mitochondria and use thereof | |
| WO2007066557A1 (en) | Phosphine transition metal complex, method for producing same and antitumor agent containing same | |
| Ņikitjuka et al. | Asparagusic Acid–A Unique Approach toward Effective Cellular Uptake of Therapeutics: Application, Biological Targets, and Chemical Properties | |
| CN105131039B (en) | A kind of camptothecin phosphatide cpd, its pharmaceutical composition and application | |
| CN106995449A (en) | Podophyllotoxin vitamin A acid heterocomplex synthetic method and applied to prevention, treatment tumour medicine | |
| Chen et al. | Enhanced anti-cancer efficacy to cancer cells by a novel monofunctional mononuclear platinum (ii) complex containing a mixed S, N, S-donor ligand | |
| Ginzinger et al. | Water‐Soluble Cationic Derivatives of Indirubin, the Active Anticancer Component from Indigo naturalis | |
| EP2235022B1 (en) | Dimeric derivatives of artemisinin and application in anticancer therapy | |
| KR102482090B1 (en) | Vitamin C-platinum complex, intermediate thereof, preparation method thereof, drug composition and use thereof | |
| CN109705187B (en) | Tripterine derivative and preparation method and application thereof | |
| WO2009002203A1 (en) | Polyfunctional fullerene c60 aminoacid derivatives | |
| RU2665922C1 (en) | Phosphonium salts based on betulinic acid, with cytotoxic activity related to prostatic acinous carcinoma | |
| CN109206389A (en) | Isoalantolactone derivative, medical composition and its use | |
| FR2668152A1 (en) | N, O SPIROCYCLIC DERIVATIVES OF CYCLOTRIPHOSPHAZENES, THEIR PREPARATION AND THEIR THERAPEUTIC USE. | |
| Borse et al. | Dipeptide Conjugates: An Important Class of Therapeutic Agents |