RU2687731C1 - Diagnostic technique in children of asthenic-vegetative syndrome under exposure conditions with aluminum - Google Patents

Diagnostic technique in children of asthenic-vegetative syndrome under exposure conditions with aluminum Download PDF

Info

Publication number
RU2687731C1
RU2687731C1 RU2018124532A RU2018124532A RU2687731C1 RU 2687731 C1 RU2687731 C1 RU 2687731C1 RU 2018124532 A RU2018124532 A RU 2018124532A RU 2018124532 A RU2018124532 A RU 2018124532A RU 2687731 C1 RU2687731 C1 RU 2687731C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
aluminum
gene
urine
glutamate
gria1
Prior art date
Application number
RU2018124532A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Олег Владимирович Долгих
Нина Владимировна Зайцева
Александр Владимирович Кривцов
Дина Гумяровна Дианова
Максим Анатольевич Гусельников
Ирина Владимировна Перминова
Алена Александровна Мазунина
Наталья Алексеевна Никоношина
Татьяна Андреевна Легостаева
Инга Николаевна Аликина
Дмитрий Владимирович Ланин
Original Assignee
Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью filed Critical Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью
Priority to RU2018124532A priority Critical patent/RU2687731C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2687731C1 publication Critical patent/RU2687731C1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: what is presented is a diagnostic technique in children of asthenic-vegetative syndrome under conditions of aluminum exposure. Content of aluminum is determined in urine sample of child. DNA is extracted from buccal epithelium sample. Then, genotyping of polymorphism of genotypes of glutamate ion receptor GRIA1 (rs545098) and glial glutamate transporter gene SLC2A1 (rs841839) is carried out on a detecting polymerizer using real-time polymerase chain reaction. If observing the following conditions simultaneously: availability of variant homozygous or heterozygous genotypes of GRIA1 gene (rs545098) and SLC2A1 gene (rs841839), under the condition of simultaneous detection in the patient of excess content of aluminum in urine in more than 1.3 times as compared to the reference, the presence of asthenic-vegetative syndrome in conditions of aluminum exposure is diagnosed in a child.
EFFECT: invention provides reliable establishment at an early stage of assessing the effect of aluminum on the onset of asthenic-vegetative syndrome by using an aggregate of genetic markers and aluminum content in urine as an informative criterion.
1 cl, 2 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к биологическим исследованиям и медицине, и предназначено для идентификации неблагоприятного воздействия алюминия, поступающего из окружающей среды, в виде нарушений нервной системы (т.е. неблагоприятного воздействия алюминия на модификацию астено-вегетативного синдрома) ребенка, проживающего на территории с повышенным содержанием этого токсиканта в окружающей среде, и может быть использовано для диагностики и прогнозирования токсического действия алюминия на нервную систему.The invention relates to biological research and medicine, and is intended to identify the adverse effects of aluminum coming from the environment, in the form of disorders of the nervous system (i.e., the adverse effects of aluminum on the modification of the astheno-vegetative syndrome) of a child living in an area with a high content of toxicant in the environment, and can be used to diagnose and predict the toxic effect of aluminum on the nervous system.

Изобретение может быть использовано для постановки предварительного диагноза как в специализированных клиниках при обследовании пациентов, так и в обычных учреждениях здравоохранения. Результаты указанных обследований необходимы для разработки индивидуальных программ наблюдения и лечения в зависимости от тяжести нарушения нервной системы ребенка, а, кроме того, могут быть использованы при формировании санитарно-гигиенических мероприятий по предупреждению и устранению воздействия вредных химических веществ, обуславливающих формирование указанной патологии.The invention can be used for making a preliminary diagnosis in specialized clinics when examining patients, and in conventional health care facilities. The results of these examinations are necessary for the development of individual programs of observation and treatment, depending on the severity of the nervous system of the child, and, in addition, can be used in the formation of sanitary and hygienic measures to prevent and eliminate the effects of harmful chemicals that cause the formation of this pathology.

Для задач диагностики нарушений здоровья, в частности, нарушения нервной системы от воздействия алюминия, а также для оценки эффективности профилактики и лечения, актуальным является выделение маркерных показателей астено-вегетативного синдрома, которые можно использовать в качестве дополнительных диагностических показателей, характеризующих ответ организма на специфическое средовое окружение, в частности, алюминия.For the purpose of diagnosing health problems, in particular, disorders of the nervous system from aluminum exposure, as well as to evaluate the effectiveness of prevention and treatment, it is important to identify marker indicators of the astheno-vegetative syndrome that can be used as additional diagnostic indicators characterizing the body’s response to specific environmental factors. environment, in particular, aluminum.

Под термином «астено-вегетативный синдром» понимается функциональное расстройство вегетативной нервной системы, регулирующей нормальную деятельность всех внутренних органов и систем организма (код, согласно Международной классификации болезней 10-го пересмотра - МКБ10: G90.8 «Другие расстройства вегетативной (автономной) нервной системы»). У детей астенические расстройства зачастую характеризуются продолжительным инкубационным периодом и отсутствием каких-либо ярко выраженных клинических признаков на начальных этапах развития болезни. В процессе своего развития патологическое состояние начинает проявляться более интенсивно, проявляется раздражительностью, быстрой утомляемостью, нарушениями сна у ребенка.The term "astheno-vegetative syndrome" means a functional disorder of the autonomic nervous system that regulates the normal activity of all internal organs and body systems (code, according to the International Classification of Diseases of the 10th revision - ICD10: G90.8 "Other disorders of the autonomic (autonomous) nervous system "). In children, asthenic disorders are often characterized by a long incubation period and the absence of any pronounced clinical signs in the initial stages of the disease. In the course of its development, the pathological state begins to manifest itself more intensely, manifested by irritability, fatigue, sleep disorders in a child.

Под термином «модификация астено-вегетативного синдрома» понимается изменение течения данного состояния, характеризующееся наличием отклонений лабораторных показателей, не типичных для клиники изучаемой патологии.The term “modification of the astheno-vegetative syndrome” means the change in the course of a given condition, characterized by the presence of deviations of laboratory parameters that are not typical for the clinic of the pathology under study.

В связи с широчайшим использованием химических технологий в различных производственных циклах и сферах человеческой деятельности пристальное внимание ученых и медиков привлекает проблема выявления пороговых критериев, позволяющих на ранних этапах оценить, что воздействие вредного химического вещества превышает компенсаторные возможности организма и наносит вред здоровью человека. Актуальность исследования неблагоприятного воздействия алюминия особенно обусловлена на территориях, вблизи которых размещены предприятия цветной металлургии.In connection with the widespread use of chemical technologies in various production cycles and spheres of human activity, scientists and doctors are attracted by the problem of identifying threshold criteria that allow us to estimate at an early stage that the impact of a harmful chemical exceeds the body’s compensatory abilities and damages human health. The relevance of the study of the adverse effects of aluminum is particularly due to the territories near which non-ferrous metallurgy enterprises are located.

Токсичность алюминия проявляется во влиянии на обмен веществ, в особенности минеральный, на функцию нервной системы, в способности действовать непосредственно на клетки - их размножение и рост. В основе механизма многих проявлений интоксикации лежит действие алюминия непосредственно на ядерный хроматин, а также косвенно - путем замещения других элементов или изменения активности ряда ферментных систем.The toxicity of aluminum is manifested in the effect on metabolism, especially mineral, on the function of the nervous system, in the ability to act directly on the cells - their reproduction and growth. The mechanism of many manifestations of intoxication is based on the effect of aluminum directly on nuclear chromatin, and also indirectly, by replacing other elements or changing the activity of a number of enzyme systems.

Отсутствие специализированной технологии, ориентирующей врача на выявление случаев функциональных заболеваний центральной нервной системы (ЦНС), связанных с воздействием опасных химических факторов, ограничивает его диагностические возможности, снижает эффективность проводимых лечебных мероприятий и не позволяет в полной мере предупреждать развитие тяжелых и осложненных форм в старших возрастных группах.The lack of specialized technology that orients the doctor to identify cases of functional diseases of the central nervous system (CNS) associated with exposure to hazardous chemical factors, limits its diagnostic capabilities, reduces the effectiveness of therapeutic measures and does not fully prevent the development of severe and complicated forms in older age groups. groups.

Действующие стандарты и протоколы, устанавливающие объем и порядок диагностических мероприятий детям с функциональными заболеваниями ЦНС, не предусматривают проведение химико-аналитических исследований для идентификации токсикантов в биосредах, специальных лабораторных исследований для оценки морфофункционального состояния клеток ЦНС и функциональных исследований для оценки уровня развития когнитивных функций, что исключает возможность формирования доказательной базы развития этой патологии в связи с действием химических факторов.Existing standards and protocols that establish the scope and procedure for diagnostic activities for children with functional diseases of the central nervous system do not provide for chemical and analytical studies to identify toxic substances in biological media, special laboratory studies to assess the morphofunctional state of the central nervous system cells and functional studies to assess the level of cognitive functions that eliminates the possibility of forming an evidence base for the development of this pathology in connection with the action of chemical fact oops.

Например, из информации, размещенной на сайте интернет-ресурсов https://diseases.medelement.com/disease/view/mtm4nzm%253d/fdb8, известно, что для диагностики заболевания по МКБ10: G90.8 «Другие расстройства вегетативной (автономной) нервной системы» проводят следующие основные и дополнительные диагностические мероприятия:For example, from the information posted on the website of the Internet resources https://diseases.medelement.com/disease/view/mtm4nzm%253d/fdb8, it is known that for diagnosing the disease according to ICD10: G90.8 “Other disorders of the vegetative (autonomous) nervous system "conduct the following main and additional diagnostic measures:

основные (обязательные) диагностические обследования, проводимые на амбулаторном уровне:basic (mandatory) diagnostic examinations conducted at the outpatient level:

• измерение артериального давления, частоту сердечных сокращений, частоту дыхания в покое, при физической, умственной и эмоциональной нагрузках;• measurement of blood pressure, heart rate, respiratory rate at rest, during physical, mental and emotional stress;

• клиноортопробу;• clinoroort;

• общий анализ крови (6 параметров);• complete blood count (6 parameters);

• определение натрия, кальция, калия в сыворотке крови;• determination of sodium, calcium, potassium in the serum;

• определение глюкозы в сыворотке крови;• determination of serum glucose;

• общий анализ мочи;• general urine analysis;

• электрокардиографическое исследование (в 12 отведениях);• electrocardiographic examination (12 leads);

Дополнительные (рекомендуемые) диагностические обследования, проводимые на амбулаторном уровне:Additional (recommended) diagnostic examinations conducted at the outpatient level:

• биохимический анализ крови: определение аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), общего билирубина, прямого билирубина, тимоловой пробы, С - реактивного белка.• biochemical blood test: determination of alanine aminotransferase (AlAT), aspartate aminotransferase (AsAT), total bilirubin, direct bilirubin, thymol sample, C - reactive protein.

То есть, действительно, при диагностике функциональных расстройств ЦНС не предусматривается проведение химико-аналитических исследований для идентификации токсикантов в биосредах и специальных лабораторных показателей, отражающих токсическое действие токсичных химических соединений, что делает известный способ не эффективным в условиях воздействия контаминантов из среды обитания окружающей среды.That is, indeed, in the diagnosis of functional disorders of the central nervous system, it is not envisaged to conduct chemical and analytical studies for the identification of toxicants in biological media and special laboratory indicators reflecting the toxic effect of toxic chemical compounds, which makes the known method not effective under the conditions of exposure to contaminants from the environment.

Из уровня техники известны следующие технические решения, релевантные заявляемому изобретению.The prior art is known for the following technical solutions relevant to the claimed invention.

Из патента РФ №2449722 известен способ прогноза формирования нарушений вегетативной нервной системы (ВНС) у детей раннего возраста, перенесших церебральную ишемию в периоде новорожденности. Согласно этому способу у детей раннего возраста, перенесших церебральную ишемию в периоде новорожденности, выявляют наиболее информативные параметры и вычисляют прогностический индекс S как сумму этих параметров в баллах: S=П1+П2+П3-0,5хП4+0,6хП5+П6+П7+П8+П9+П10+0,4, где П1 - наличие среднего образования у матери=+0,4; П2 - выкидыши, медицинские аборты в анамнезе=- 1,5; П3 - воспалительные заболевания половых органов=-0,5; П4 - оценка по шкале Апгар на первой минуте; П5 - оценка по шкале Апгар на пятой минуте; П6 - гипоксия=-0,9; П7 -начало грудного вскармливания в родильном зале=+4,6; П8 - наличие двигательных нарушений=-0,7; П9 - наличие гипертензионно-гидроцефального синдрома=-0,7; П10 - нормальная картина нейросонографии=+0,5. Получив значение S менее 0, прогнозируют высокую вероятность развития у ребенка нарушений вегетативной нервной системы в период раннего детского возраста, а при S более 0 делают заключение об отсутствии угрозы развития нарушений вегетативной нервной системы.From the patent of the Russian Federation No. 2449722 a method is known for predicting the formation of disorders of the autonomic nervous system (ANS) in young children who have had cerebral ischemia in the neonatal period. According to this method, in young children who have had cerebral ischemia in the neonatal period, the most informative parameters are identified and the prognostic index S is calculated as the sum of these parameters in points: S = P1 + P2 + P3-0.5xP4 + 0.6xP5 + P6 + P7 + P8 + P9 + P10 + 0.4, where P1 is the presence of a secondary education for the mother = + 0.4; P2 - miscarriages, medical abortions in history = -1.5; P3 - inflammatory diseases of the genital organs = -0.5; P4 - Apgar score on the first minute; P5 - Apgar score on the fifth minute; P6 - hypoxia = -0.9; P7 - the beginning of breastfeeding in the delivery room = + 4.6; P8 - the presence of motor disorders = -0.7; P9 - the presence of hypertension-hydrocephalic syndrome = -0.7; P10 - normal picture of neurosonography = + 0.5. Having received a value of S less than 0, predict a high probability of a child developing disorders of the autonomic nervous system in the period of early childhood, and when S is more than 0 they conclude that there is no threat of the development of disorders of the autonomic nervous system.

Недостатком указанного способа является то, что он позволяет прогнозировать развитие нарушений ВНС в будущем, а не провести оценку нарушений в настоящий момент, и при этом условиями прогноза являются исключительно нарушения вегетативной нервной системы у детей раннего возраста, перенесших церебральную ишемию в периоде новорожденности.The disadvantage of this method is that it allows you to predict the development of ANS disorders in the future, and not to assess violations at the moment, and the forecast conditions are only disorders of the autonomic nervous system in young children who have had cerebral ischemia in the neonatal period.

Известен лабораторный способ диагностики шизотипического расстройства (Патент РФ №2569741). Сущность изобретения заключается в определении количества глутамата в сыворотке крови больных эндогенными психозами. При выявлении в сыворотке крови психических больных количества глутамата выше 20,12 нмоль/мл диагностируют шизотипическое расстройство. Исследование изменений количества глутамата в сыворотке крови больных эндогенными психическими расстройствами было выбрано в известном способе в связи с выявленным дисбалансом деятельности глутаматных и дофаминовых рецепторов, обусловливающей нейротрансмиттерные расстройства при эндогенных психозах. Одна из ведущих гипотез патогенеза шизофрении и пограничных расстройств на сегодняшний день является глутаматная гипотеза. Получены достоверные различия в уровне глутамата в сыворотке крови у больных шизотипическим расстройством личности в отличие от пациентов с другими психическими расстройствами и здоровыми людьми, что позволит проводить известным способом дифференциальную диагностику данного расстройства с другими эндогенными психозами.Known laboratory method for the diagnosis of schizotypal disorder (Patent RF №2569741). The invention consists in determining the amount of glutamate in the serum of patients with endogenous psychosis. When a number of glutamate is detected in the serum of mental patients above 20.12 nmol / ml, a schizotypal disorder is diagnosed. The study of changes in the amount of glutamate in the blood serum of patients with endogenous mental disorders was chosen in a known way in connection with the imbalance in the activity of glutamate and dopamine receptors, which causes neurotransmitter disorders in endogenous psychosis. One of the leading hypotheses of the pathogenesis of schizophrenia and borderline disorders today is the glutamate hypothesis. Significant differences in the level of glutamate in the blood serum were obtained in patients with schizotypal personality disorder, unlike patients with other mental disorders and healthy people, which will allow differential diagnosis of this disorder with other endogenous psychoses in a known manner.

Недостатком указанного способа является то, что способ ориентирован на диагностику состояния психического здоровья, ассоциированного с нарушениями высшей нервной деятельности, а не на диагностику изменений астено-вегетативного синдрома, а также в этом способе не учитывается возможность генетической предрасположенности по критериям полиморфности генов.The disadvantage of this method is that the method is focused on diagnosing the state of mental health associated with disorders of higher nervous activity, and not on diagnosing changes in the astheno-vegetative syndrome, and this method does not take into account the possibility of genetic predisposition according to gene polymorphism criteria.

Из уровня техники известна диссертационная работа «Состояние эфферентного отдела нервной системы, психологического статуса и конституционально-генетические особенности у больных с вегетативными кризами (ВК)», автор: Закирова Д.Д., Казань, 2011 г. (Медицинские Диссертации http://medical-diss.com/medicina/sostoyanie-efferentnogo-otdela-nervnoy-sistemy-psihologicheskogo-statusa-i-konstitutsionalno-geneticheskie-osobennosti-u-#ixzz5BIkC5WjL), в которой указано, что при синдроме вегетативной дисфункции возникают сочетанные изменения в эфферентном звене анимальной нервной системы и психологическом статусе, проявляющиеся в ускорении процессов эфферентации и особом (демонстративном) типе акцентуации личности. Изучался полиморфизм генов: 1) G603A гена транспортера глутамата ЕААТ; 2) rs545098 G/A гена ионотропного рецептора глутамата GLUR 1 (GRIA1); 3) rs9307959 С/Т гена ионотропного рецептора глутамата GLUR 2 (GRIA2); 4) G49S гена бета-адренорецептора ADRB1. Была выявлена достоверная связь генотипов ADRB1 GG, Glurl GG, Glur2 СТ, Glur2 СС, ЕААТ AG, ЕААТ АА, ADRB1 SG с нарушениями вегетативного гомеостаза, влияние генотипов Glur2 и ЕААТ на тяжесть, длительность заболевания и клинические проявления. В группе с гипервентиляционными вегетативными кризами прослежена связь «неблагоприятного» вегетативного гомеостаза с генотипом ADRB1 GG, GLUR2 СС.Полученные данные свидетельствуют о наличии предрасположенности к вегетативными кризам у лиц с определенным генотипом.The prior art dissertation work "The state of the efferent division of the nervous system, psychological status and constitutional genetic features in patients with vegetative crises (VC)", author: Zakirova DD, Kazan, 2011 (Medical Dissertations http: // medical-diss.com/medicina/sostoyanie-efferentnogo-otdela-nervnoy-sistemy-psihologicheskogo-statusa-i-konstitutsionalno-geneticheskie-osobennosti-u-#ixzz5BIkC5WjL), in which it was indicated that it was a veterante mode pattern, which is in the case of the object, it’s not enough, it’s not enough, it’s not enough to be in a position of the object to be in the presence of the object, but it is not enough, but it’s not enough to make it a matter of way to do it.) link of the animal nervous system and psychological status, manifesting I efference acceleration processes and special (demonstrative) type of personality accentuation. The gene polymorphism was studied: 1) G603A of the glutamate transporter gene EAAT; 2) rs545098 G / A of the gene for the ionotropic glutamate receptor GLUR 1 (GRIA1); 3) rs9307959 C / T of the gene for the ionotropic glutamate receptor GLUR 2 (GRIA2); 4) G49S beta-adrenoceptor gene ADRB1. There was a significant association of the ADRB1 GG, Glurl GG, Glur2 CT, Glur2 CC, EAAT AG, EAAT AA, ADRB1 SG genotypes with impaired vegetative homeostasis, the effect of the Glur2 and EAAT genotypes on the severity, duration of the disease and clinical manifestations. In the group with hyperventilation vegetative crises, the association of “unfavorable” vegetative homeostasis with the genotype ADRB1 GG, GLUR2 SS was traced. The data obtained indicate a predisposition to vegetative crises in individuals with a specific genotype.

Недостатком указанного способа является то, что способ позволяет характеризовать исключительно предрасположенность к развитию вегетативных кризов, при этом не оценивается фактическое состояние вегетативной нервной системы по уровню экспрессии самих геноопосредованных белков, например, глутамата.The disadvantage of this method is that the method allows to characterize exclusively the predisposition to the development of vegetative crises, while not assessing the actual state of the vegetative nervous system by the level of expression of the gene-mediated proteins themselves, for example, glutamate.

Известен способ прогнозирования перинатальных гипоксических поражений центральной нервной системы у новорожденных (Патент РФ №2313095). Для прогнозирования данной патологии проводят определение содержания интерлейкина-1β в периферической венозной крови беременной с 35 недели беременности, осложненной гестозом. При его значении, большем 40 пкг/л, прогнозируют перинатальные гипоксические поражения центральной нервной системы у новорожденных.A known method for predicting perinatal hypoxic lesions of the central nervous system in newborns (Patent RF №2313095). To predict this pathology, the content of interleukin-1β in the peripheral venous blood of a pregnant woman from 35 weeks of gestation complicated by gestosis is determined. With its value greater than 40 pg / l, perinatal hypoxic lesions of the central nervous system in newborns are predicted.

Также известен способ прогнозирования перинатальных гипоксических поражений центральной нервной системы у новорожденных (патент РФ №2542463), согласно которому у пациенток с угрожающими преждевременными родами в 22-27 недель гестации в периферической венозной крови определяют содержание sRAGE и при его значении, равном 659,5 пкг/л или менее, прогнозируют развитие перинатального гипоксического поражения центральной нервной системы у новорожденного с точностью 75,6%.Also known is a method for predicting perinatal hypoxic lesions of the central nervous system in newborns (RF patent No. 2542463), according to which patients with threatening preterm labor at 22-27 weeks of gestation in peripheral venous blood determine the sRAGE content and at its value equal to 659.5 pkg / l or less, predict the development of perinatal hypoxic damage to the central nervous system in the newborn with an accuracy of 75.6%.

Недостатком указанных способов является то, что они позволяют прогнозировать исключительно перинатальные гипоксические поражения центральной нервной системы у новорожденных, причем по маркерам периферической венозной крови беременной и без учета состояния полиморфизма генов.The disadvantage of these methods is that they make it possible to predict exclusively the perinatal hypoxic lesions of the central nervous system in newborns, and according to the markers of peripheral venous blood of the pregnant and without taking into account the state of polymorphism of the genes.

Известен способ диагностики перинатальной патологии центральной нервной системы, ишемически-гипоксического генеза у детей (Заявка РФ №2008108877), включающий забор крови, определение ее параметров и сравнительный анализ с нормами здорового ребенка, при этом забор периферической крови из безымянного пальца производят по стандартной методике, определяют среднее число эритроцитов (RBC), уровень гемоглобина (Нb), гематокрит (НСТ), средний объем эритроцита (HCV), среднее содержание гемоглобина в одном эритроците (МСН) и по совокупному отклонению их от норм судят о степени тяжести заболевания.A known method for the diagnosis of perinatal pathology of the central nervous system, ischemic-hypoxic genesis in children (RF application No. 2008108877), including blood sampling, determination of its parameters and comparative analysis with the norms of a healthy child, while taking peripheral blood from the ring finger is produced according to the standard method, determine the average number of erythrocytes (RBC), hemoglobin level (Hb), hematocrit (NST), average erythrocyte volume (HCV), average hemoglobin content in one erythrocyte (MCH) and by their cumulative deviation from norms judge the severity of the disease.

Из патента РФ №2092157 известен способ диагностики поражения периферической нервной системы вибрационного генеза. Способ позволяет повысить чувствительность и снизить опасность инфицирования обследуемого. Для этого на тыльную поверхность кисти, волярную поверхность плеча и предплечья в их средней трети наносят смесь, состоящую из 9-ти частей хлороформа и 1-й части этанола. Затем измеряют латентный период до появления жжения в точке нанесения смеси и при увеличении латентного периода не менее, чем в двух точках, -на тыльной поверхности кисти свыше двух мин и в области предплечья или плеча свыше 1 мин - относят обследуемого к лицам с поражением периферической нервной системы вибрационного генеза. Однако этот способ предназначен для установления профзаболевания и может быть использован для выявления лиц с поражением периферической нервной системы. Способ неприменим для детей.From the patent of the Russian Federation No. 2092157 a method for diagnosing a lesion of the peripheral nervous system of vibration genesis is known. The method allows to increase the sensitivity and reduce the risk of infection of the subject. To do this, a mixture consisting of 9 parts of chloroform and 1 part of ethanol is applied on the back surface of the hand, the volar surface of the shoulder and forearm in their middle third. Then measure the latent period until a burning sensation appears at the point of application of the mixture and with an increase in the latent period of no less than two points, on the dorsum of the hand for more than two minutes and in the forearm or shoulder for more than 1 minute, refer the subject to persons with peripheral nerve damage vibration genesis system. However, this method is designed to establish occupational disease and can be used to identify individuals with lesions of the peripheral nervous system. The method is not applicable for children.

При этом из уровня техники не были выявлены известные способы оценки нарушений нервной системы, ассоциированных с внешнесредовым воздействием алюминия, поэтому сделать выбор ближайшего аналога к заявляемому объекту не представляется возможным.In this case, the prior art did not reveal known methods for assessing disorders of the nervous system associated with the external environmental effects of aluminum, therefore, it is not possible to make the selection of the closest analogue to the claimed object.

Технический результат, достигаемый предлагаемым изобретением, заключается в обеспечении достоверности установления на ранней стадии оценки влияния алюминия на возникновение астено-вегетативного синдрома, за счет использования в качестве информативного критерия совокупности маркеров, а именно: уровня контаминации алюминием и наличия генетического полиморфизма в отношении генов ионотропного рецептора глутамата GRIA1 rs545098 и гена глиального глутаматного транспортера SLC2A1 rs841839.The technical result achieved by the invention is to ensure the reliability of the establishment at an early stage of assessing the effect of aluminum on the occurrence of the astheno-vegetative syndrome, due to the use of a set of markers as an informative criterion, namely, the level of aluminum contamination and the presence of genetic polymorphism in relation to the ionotropic receptor genes glutamate GRIA1 rs545098 and glial glutamate transporter gene SLC2A1 rs841839.

Поставленный технический результат достигается предлагаемым способом диагностики у детей астено-вегетативного синдрома в условиях экспозиции алюминием, характеризующимся тем, что определяют в пробе мочи ребенка содержание алюминия, также у указанного ребенка отбирают пробу буккального эпителия и осуществляют выделение из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты, затем на детектирующем амплификаторе с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени проводят генотипирование полиморфизма генов ионотропного рецептора глутамата GRIA1 (rs545098) и гена глиального глутаматного транспортера SLC2A1 (rs841839), устанавливая при этом состояние генотипа для каждого из указанных генов: гетерозиготное GA, нормальное гомозиготное GG и вариантное гомозиготное АА для гена GRIA1 (rs545098), гетерозиготное TG, нормальное гомозиготное ТТ и вариантное гомозиготное GG для гена SLC2A1 (rs841839), и при одновременном выполнении следующих условий: наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена ионотропного рецептора глутамата GRIA1 (rs545098) и гена глиального глутаматного транспортера SLC2A1 (rs841839), при условии одновременного обнаружения у пациента превышения содержания алюминия в моче более, чем в 1,3 раза по сравнению с референтным значением содержания алюминия в моче, равным 0,01 мг/дм3, диагностируют у ребенка наличие астено-вегетативного синдрома в условиях экспозиции алюминием.The technical result is achieved by the proposed method of diagnosis in children of asthenic-vegetative syndrome under aluminum exposure conditions, characterized by the fact that they determine the aluminum content in the child's urine sample, also take a sample of the buccal epithelium from the specified child and release deoxyribonucleic acid from the specified sample, then detect using real-time polymerase chain reaction, amplify the genotyping of ionotro genes polymorphism of the glutamate receptor GRIA1 (rs545098) and the glial glutamate transporter gene SLC2A1 (rsash1818), setting the state of the genotype for each of these genes: heterozygous GA, normal homozygous GG, and variant homozygous AA for the GRIA1 gene rs5450, gene, 300, 3094, 586; TT and variant homozygous GG for the SLC2A1 gene (rs841839), and with the simultaneous fulfillment of the following conditions: the presence of the variant homozygous or heterozygous genotypes of the GRIA1 ionotropic glutamate receptor gene and the glial glutamate gene the transporter SLC2A1 (rs841839), provided that the patient simultaneously detects an excess of aluminum in the urine by more than 1.3 times compared to the reference value of the aluminum content in the urine of 0.01 mg / dm 3 , the child is diagnosed with asthenic - vegetative syndrome under aluminum exposure conditions.

Указанный технический результат обеспечивается за счет следующего. GRIA1 (глутамат-ионотропный рецептор АМРА-тип субъединицы 1) представляет собой ген кодирования данного белка. Заболевания, связанные с GRIA1, включают различные гиперкинезы и вегетативные отклонения. Среди элементов его функционала - циркадное 10This technical result is provided by the following. GRIA1 (glutamate-ionotropic AMPA receptor-type subunit 1) is a coding gene for this protein. Diseases associated with GRIA1 include various hyperkinesis and autonomic abnormalities. Among the elements of its functionality - circadian 10

увлечение и метаболизм белков. Нейро-физиологические механизмы, связанные с этим геном, включают связывание домена PDZ и активность канала с экстрацеллюлярным глутаматом. Ионотропный глутаматный рецептор L-глутамат действует как возбуждающий нейротрансмиттер во многих синапсах центральной нервной системы. Связывание L-глутамата возбуждающего нейротрансмиттера индуцирует изменение конформации, приводящее к открытию канала катиона, и тем самым превращает химический сигнал в электрический импульс. Затем рецептор быстро дезактивируется и переходит в переходное неактивное состояние, характеризующееся наличием связанного агониста (GeneCards [Электронный ресурс] // genecards.org: Glutamate Ionotropic Receptor АМРА Type Subunit 1. URL: https://www.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene=GRIA1 (дата обращения 31.05.2018)). Традиционно глутаматные рецепторы подразделяются на ионотропные, связанные с ионными каналами, и метаботропные, индуцирующие изменение метаболических процессов в нейронах через систему вторичных мессенджеров и сопряженные с G-белками. Ионотропные глутаматные рецепторы отвечают за быструю синаптическую передачу. Характерной чертой ионотропных рецепторов NMDA-класса является присущая им функция регуляции проводимости ионных каналов для Са2+. Благодаря этому NMDA-рецепторы играют важную роль в регуляции длительности возбуждающего потенциала, тем самым участвуя в осуществлении когнитивных функций. Ионотропные рецепторы различных классов также подвергаются сложному взаимному влиянию. Быстрый синаптический ответ, опосредуемый каинатными или АМРА-рецепторами, приводит к изменению мембранного потенциала (деполяризации), снятию так называемого "магниевого блока" с NMDA-рецепторов и их активации. Вследствие этого увеличивается проницаемость клеточной мембраны для ионов Са2+, что приводит к запуску различных Са2+-зависимых сигнальных механизмов, в частности, активации ряда протеинкиназ, что, в свою очередь, оказывает влияние на другие классы ионотропных глутаматных рецепторов.protein hobby and metabolism. The neuro-physiological mechanisms associated with this gene include the binding of the PDZ domain and the activity of the channel with extracellular glutamate. Ionotropic glutamate receptor L-glutamate acts as an excitatory neurotransmitter in many synapses of the central nervous system. The binding of the L-glutamate excitatory neurotransmitter induces a change in conformation, leading to the opening of the cation channel, and thereby turns the chemical signal into an electrical impulse. Then, the receptor is quickly deactivated and goes into a transient inactive state characterized by the presence of an associated agonist (GeneCards [Electronic resource] // genecards.org: Glutamate Ionotropic Receptor AMPA Type Subunit 1. URL: https://www.genecards.org/cgi-bin /carddisp.pl?gene=GRIA1 (appeal date 05/31/2018)). Traditionally, glutamate receptors are divided into ionotropic, associated with ion channels, and metabotropic, inducing a change in metabolic processes in neurons through a system of secondary messengers and associated with G-proteins. Ionotropic glutamate receptors are responsible for fast synaptic transmission. A characteristic feature of the ionotropic receptors of the NMDA class is their inherent function of regulating the conductivity of ion channels for Ca 2 +. Due to this, NMDA-receptors play an important role in regulating the duration of excitatory potential, thereby participating in the implementation of cognitive functions. Ionotropic receptors of various classes are also subject to complex mutual influence. Rapid synaptic response mediated by kainate or AMPA receptors leads to changes in membrane potential (depolarization), removal of the so-called "magnesium block" from NMDA receptors and their activation. As a result, the permeability of the cell membrane for Ca 2 + ions increases, which leads to the launch of various Ca 2 + -dependent signaling mechanisms, in particular, activation of a number of protein kinases, which, in turn, affects other classes of ionotropic glutamate receptors.

Глютаматные рецепторы являются преобладающими возбуждающими рецепторами нейротрансмиттеров в мозге млекопитающих и активируются в различных нормальных нейрофизиологических процессах. Эти рецепторы представляют собой гетеромерные белковые комплексы, состоящие из нескольких субъединиц, образованных с образованием лиганд-ионных каналов (ELISA kit - наборы ИФА, антитела, рекомбинантные белки [Электронный ресурс] // http://xn--80aabqbqbnift4db.xn--plai: Glutamate Receptor, Ionotropic, AMPA 4 (GRIA4) (дата обращения 31.05.2018).).Glutamate receptors are the predominant excitatory receptors of neurotransmitters in the mammalian brain and are activated in various normal neurophysiological processes. These receptors are heteromeric protein complexes consisting of several subunits formed to form ligand-ion channels (ELISA kit - ELISA kits, antibodies, recombinant proteins [Electronic resource] // http: //xn--80aabqbqbnift4db.xn--plai : Glutamate Receptor, Ionotropic, AMPA 4 (GRIA4) (appeal date 05/31/2018).).

Ген SLC2A1(GLUT) кодирует крупный транспортер глюкозы в гематоэнцефалическом барьере млекопитающих. Закодированный белок находится в основном в клеточной мембране и на поверхности клетки, где он также может функционировать как рецептор для вируса лейкоза Т-клеток человека (HTLV) I и П. Мутации этого гена были обнаружены в семействе с пароксизмальной дискинезией. SLC2A1 (Solute Carrier Family 2 Member 1) представляет собой ген, кодирующий белок. Заболевания, связанные с SLC2A1, включают в себя неврологические дефекты и синдром дефицита глют-1. Среди путей реализации его эффектов: перенос глюкозы и других Сахаров, желчных солей и органических кислот, ионов металлов и аминных соединений и метаболизм гликозаминогликана. Механизмы, связанные с этим геном, включают связывание с белком и трансмембранную активность транспортера (GeneCards [Электронный ресурс] // genecards.org: Solute Carrier Family 2 Member 1. URL: https://www.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene=SLC2Al (дата обращения 31.05.2018)).The SLC2A1 (GLUT) gene encodes a large glucose transporter in the blood-brain barrier of mammals. The encoded protein is found mainly in the cell membrane and on the cell surface, where it can also function as a receptor for the human T-cell leukemia virus (HTLV) I and P. Mutations of this gene have been found in a family with paroxysmal dyskinesia. SLC2A1 (Solute Carrier Family 2 Member 1) is a gene encoding a protein. Diseases associated with SLC2A1 include neurological defects and glute deficiency syndrome-1. Among the ways to realize its effects: the transfer of glucose and other sugars, bile salts and organic acids, metal ions and amine compounds and the metabolism of glycosaminoglycans. The mechanisms associated with this gene include protein binding and transporter transmembrane activity (GeneCards [Electronic resource] // genecards.org: Solute Carrier Family 2 Member 1. URL: https://www.genecards.org/cgi-bin/ carddisp.pl?gene=SLC2Al (appeal date 05/31/2018)).

Ген SLC2A1 определяет экспрессию белка, называемого белком-транспортером глюкозы типа 1 (GLUT1). Белок GLUT1 встроен во внешнюю мембрану, окружающую клетки, где он транспортирует простой сахар, называемый глюкозой, в клетки из крови или из других клеток для использования в качестве топлива. Белок GLUT1 перемещает глюкозу между клетками в головном мозге, называемых глиальными клетками, которые защищают и поддерживают нервные клетки (нейроны). Имеются сообщения о более, чем о 150 мутациях гена SLC2A1 у людей с синдромом дефицита GLUT1. Это расстройство приводит к различным неврологическим симптомам, которые могут включать неврологические расстройства (астению), задержку развития, умственную инвалидность, проблемы с движением (кинезы). Мутации, которые вызывают синдром дефицита GLUT1, уменьшают или устраняют функцию белка GLUT1. Наличие менее функционального белка GLUT1 снижает количество глюкозы, доступной клеткам мозга, что влияет на развитие и функцию мозга (Genetics Home Reference [Электронный ресурс] // ghr.nlm.nih.gov: SLC2A1 gene. URL: https://ghr.nlm.nih.gov/gene/SLC2Al (дата обращения 31.05.2018)).The SLC2A1 gene determines the expression of a protein called the glucose transporter protein type 1 (GLUT1). GLUT1 protein is embedded in the outer membrane surrounding the cells, where it transports simple sugars, called glucose, into cells from the blood or from other cells for use as fuel. GLUT1 protein moves glucose between cells in the brain, called glial cells, that protect and support nerve cells (neurons). More than 150 mutations of the SLC2A1 gene have been reported in people with GLUT1 deficiency syndrome. This disorder leads to various neurological symptoms, which may include neurological disorders (asthenia), developmental delay, mental disability, problems with movement (kinesis). Mutations that cause GLUT1 deficiency reduce or eliminate the function of GLUT1 protein. The presence of a less functional GLUT1 protein reduces the amount of glucose available to brain cells, which affects brain development and function (Genetics Home Reference [Electronic resource] // ghr.nlm.nih.gov: SLC2A1 gene. URL: https: //ghr.nlm .nih.gov / gene / SLC2Al (appeal date 05/31/2018)).

Поиск биологических генетических маркеров и разработка методов, позволяющих идентифицировать патологию нервной системы у детей на ранних этапах ее возникновения, является одной из важнейших задач фундаментальной медицины на современном этапе (Иванова С.А. и др., 2013; Craig-Schapiro R., Fagan А. М., 2009). Генетические биомаркеры -это индикаторные показатели, объективно измеряемые и оцениваемые, которые могут служить предикторами нормальных и патофизиологических процессов. Они позволяют проводить анализ и прогнозировать предполагаемый механизм возникновения и развития патологических состояний (Craig-Schapiro R., Fagan А. М., 2009; Grandjean P., Budtz-Jorgensen Е., 2010).The search for biological genetic markers and the development of methods to identify the pathology of the nervous system in children at the early stages of its occurrence is one of the most important tasks of basic medicine at the present stage (Ivanova S.А. and others, 2013; Craig-Schapiro R., Fagan A.M., 2009). Genetic biomarkers are indicator indicators that are objectively measured and evaluated, which can serve as predictors of normal and pathophysiological processes. They allow to analyze and predict the supposed mechanism of the occurrence and development of pathological conditions (Craig-Schapiro R., Fagan A. М., 2009; Grandjean P., Budtz-Jorgensen E., 2010).

Алюминий относится к нейротропным и иммунотоксичным элементам [Hartwell, B.L., Pember, F.R. The presence of aluminum as a reason for the difference in the effect of so-called acid soil on barley and rye // Soil Sci., 1998, vol. 6, p. 259-281]. Алюминий кумулируется и подавляет функцию макрофагов, Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов. При этом он вызывает не только супрессию клеточных реакций, но и митогенный эффект лимфоцитов [Golub M.S., Takeuchi Р.Т., Gershvin M.E., Yoshida S.H. Influence of dietary aluminum on cytokine production by mitogen-stimulated spleen cells from Swiss Webster mice // Immunofarmacology and Immunotoxicology. - 1993. - vol. 15, №5. - P. 605.]. Предполагают, что алюминий может быть одной из причин старческого клеточного иммунодефицита [Цидильковская, Э.С., Автореф. дис.… канд. биол.наук, Москва, 2005, 129 с]. Кроме того, алюминий может вызывать аллергию, что обусловлено супрессивным влиянием этого микроэлемента на мутаген-опосредованный иммунный ответ [Караулов А.В. Вторичные иммунодефицитные состояния: молекулярно-биохимические механизмы развития и методы коррекции // Аллергия, астма и клиническая иммунология - 2000. - №1. - С. 24-25.] В то же время алюминий способствует обострению целого ряда аутоиммунных заболеваний в пожилом и старческом возрасте. Считается, что соединения алюминия проникают при контактном воздействии через кожу и оказывают системное воздействие на иммунную систему, не вызывая развития контактного дерматита [Литовская А.В., Егорова И.В. Состояние иммунной системы работающих в условиях влияния биологического, химического и физического факторов // Медицина труда и промышленная экология. - 2000. - №2. С. 8-11].Aluminum refers to neurotropic and immunotoxic elements [Hartwell, B.L., Pember, F.R. Soil barley and rye / soil // Soil Sci., 1998, vol. 6, p. 259-281]. Aluminum cumulates and inhibits the function of macrophages, T-lymphocytes and B-lymphocytes. At the same time, it causes not only suppression of cellular reactions, but also the mitogenic effect of lymphocytes [Golub M.S., Takeuchi R.T., Gershvin M.E., Yoshida S.H. Influence of dietary aluminum by cytokine production by mitogen-stimulated spleen cells from Swiss mice // Immunofarmacology and Immunotoxicology. - 1993. - vol. 15, №5. - P. 605.]. It is believed that aluminum may be one of the causes of senile cellular immunodeficiency [Tsidilkovskaya, ES, Author. dis ... Cand. Biological Sciences, Moscow, 2005, 129 p.]. In addition, aluminum can cause allergies, due to the suppressive effect of this trace element on the mutagen-mediated immune response [A. Karaulov. Secondary immunodeficiency states: molecular-biochemical mechanisms of development and methods of correction // Allergy, Asthma and Clinical Immunology - 2000. - №1. - p. 24-25.] At the same time, aluminum contributes to the exacerbation of a number of autoimmune diseases in the elderly and senile age. It is believed that aluminum compounds penetrate through contact through the skin and have a systemic effect on the immune system without causing the development of contact dermatitis [Litovskaya AV, Egorova I.V. The state of the immune system working under the influence of biological, chemical and physical factors // Occupational Medicine and Industrial Ecology. - 2000. - №2. Pp. 8-11].

Алюминиевые соединения дали отрицательные результаты в большинстве краткосрочных мутагенных анализов. Было показано, что еще в 1976 году алюминий (Al2(SO4)3) уменьшает синтез ДНК, не влияя на точность репликации (Sirover & Loeb, 1976). При концентрациях от 20 мкМ до 150 мМ поддерживалась точность синтеза ДНК in vitro. Было показано, что в клеточной линии крысиного остеобласта, UMR 106, синтез ДНК, определяемый включением 3Н-тимидина, снижается в отсутствие увеличения синтеза белка, как определено введением 3Н-лейцина при воздействии 30 мкМ алюминия (Blair et Al., 1989). Концентрации алюминия от 0,01 мМ до 0,1 М, как и АlСl3, не показали возможности индуцировать депуринизацию ДНК, измеряемую высвобождением аденина или гуанина в ДНК теленка-тимуса (Schaaper et al., 1987). ДНК теленка-тимуса использовали Ahmad et al. (1996) для изучения изменений связывания ДНК АlСl3 (0,6-25 мМ).Aluminum compounds gave negative results in most short-term mutagenic analyzes. It was shown that as early as 1976, aluminum (Al 2 (SO 4 ) 3 ) reduces DNA synthesis without affecting the accuracy of replication (Sirover & Loeb, 1976). At concentrations from 20 μM to 150 mM, the accuracy of in vitro DNA synthesis was maintained. In the rat osteoblast cell line, UMR 106, DNA synthesis, determined by the inclusion of 3H-thymidine, was shown to decrease in the absence of an increase in protein synthesis, as determined by the administration of 3H-leucine when exposed to 30 μM aluminum (Blair et Al., 1989). Aluminum concentrations from 0.01 mM to 0.1 M, like AlCl 3 , did not show the ability to induce DNA depurination, as measured by the release of adenine or guanine in calf-thymus DNA (Schaaper et al., 1987). Thymus calf DNA used by Ahmad et al. (1996) to study changes in the binding of AlCl 3 (0.6-25 mM).

В настоящее время установлена связь между алюминием и следующими заболеваниями: болезнью Альцгеймера, рака молочной железы, деменцией, аутизмом, болезнью Паркинсона. Алюминий является сильнейшим нейротоксином. Ученые считают, что свободный ион алюминия, Al (3+), обладает высокой биологической реактивностью и уникальными возможностями, чтобы нанести ущерб нейронам человека.Currently, a link has been established between aluminum and the following diseases: Alzheimer's disease, breast cancer, dementia, autism, Parkinson's disease. Aluminum is the strongest neurotoxin. Scientists believe that free aluminum ion, Al (3+), has high biological reactivity and unique capabilities to damage human neurons.

Особенно склонны к негативному воздействию алюминия дети и пожилые люди. У детей избыток алюминия вызывает повышенную возбудимость, нарушения моторных реакций, анемию, головные боли, заболевание почек, печени, колиты. Гиперактивность, повышенная возбудимость, агрессивность подростков, нарушения памяти и трудности в учебе, могут быть результатом даже небольшого повышения количества ионов алюминия в организме. Алюминий также оказывает общее отравляющее и засоряющее действие на организм человека. Токсичность алюминия проявляется во влиянии на обмен веществ, в особенности минеральный, на функцию нервной системы, в способности действовать непосредственно на клетки - их размножение и рост.Children and the elderly are especially prone to the negative effects of aluminum. In children, an excess of aluminum causes increased irritability, impaired motor reactions, anemia, headaches, kidney disease, liver disease, colitis. Hyperactivity, irritability, aggressiveness of adolescents, memory impairment and learning difficulties can be the result of even a small increase in the amount of aluminum ions in the body. Aluminum also has a general poisoning and clogging effect on the human body. The toxicity of aluminum is manifested in the effect on metabolism, especially mineral, on the function of the nervous system, in the ability to act directly on the cells - their reproduction and growth.

В качестве критерия нарушений физиологической функции вегетативной нервной системы в условиях контаминации алюминием рекомендуется использовать наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена ионотропного рецептора глутамата GRIA1 (rs545098) и гена глиального глутаматного транспортера SLC2A1 (rs841839), фенотипирующих глутамат и характеризующих нарушения нервной регуляции и развитие астено-вегетативного синдрома.It is recommended to use the presence of variant homozygous or heterozygous genotypes of the GRIA1 ionotropic glutamate receptor gene (rs545098) and the glial glutamate transporter gene SLC2A1 (rs841839), which are used for the violation of the autonomic nervous system of the vegetative nervous system, and use the presence of the glial glutamate transporter gene SLC2A1 (rs841839) and the glioGlular glutamate transporter gene SLC2A1 (rs841839), and will be using the glial glutamate glutamate transporter gene SLC2A1 (rs841839); vegetative syndrome.

Реализующим процесс вегетативных нарушений служит экспозиция алюминия, превышающая референтную концентрацию его содержания в моче (референтный уровень алюминия в моче 0,01 мг/л).The process of vegetative disturbances is the exposure of aluminum, which exceeds the reference concentration of its content in the urine (the reference level of aluminum in the urine is 0.01 mg / l).

Благодаря тому, что в заявляемом способе в качестве диагностических критериев предлагается использовать именно полиморфизм гена GRIA1 (rs545098) и гена SLC2A1 (rs841839), обеспечивается точность исследования, т.к. у ребенка учитывается детерминация вероятных нарушений вегетативной нервной системы (а именно, по снижению экспрессии глутамата), а также предрасположенность к нарушению функции переноса глюкозы в клетки глии, что усугубляет нарушения вегетативной регуляции. А избыточные концентрации алюминия в биосредах реализуют (инициируют) имеющийся дефект (полиморфизм) нейрорегуляторных генов. По этим показателям можно судить о генетически детерминированном характере функциональных нарушений нервной системы и разрабатывать индивидуальные программы диагностики и коррекции.Due to the fact that it is proposed to use the polymorphism of the GRIA1 gene (rs545098) and the SLC2A1 gene (rs841839) as the diagnostic criteria in the claimed method, the accuracy of the study is ensured, since the child takes into account the determination of probable disorders of the autonomic nervous system (namely, to reduce the expression of glutamate), as well as the susceptibility to dysfunction of glucose transfer to glial cells, which exacerbates the disturbance of autonomic regulation. And excessive concentrations of aluminum in biological media realize (initiate) the existing defect (polymorphism) of neuroregulatory genes. These indicators can be used to judge the genetically determined nature of the functional disorders of the nervous system and to develop individual diagnostic and correction programs.

Благодаря использованию в качестве исследуемого материала проб буккального эпителия, крови и мочи, а также стандартных методик изучения иммунологических и генетических параметров, обеспечивается простота, надежность и доступность исследований, а также получение результатов нужной информативности.Due to the use of buccal epithelium, blood and urine samples as well as standard materials for studying immunological and genetic parameters, the simplicity, reliability and accessibility of research, as well as obtaining the necessary information content, are provided.

Установление содержания химического контаминанта - алюминия, именно в моче обусловлено тем, что моча является средой преимущественной элиминации из организма данного элемента, имеющего реферируемые уровни в данной биологической среде.The determination of the content of the chemical contaminant - aluminum, namely in the urine is due to the fact that urine is the medium of preferential elimination from the body of this element, which has reference levels in this biological medium.

Благодаря использованию в качестве исследуемого материала буккального эпителия (пробы биологического материала со слизистой щеки), обеспечивается простота и надежность исследований, а также получение нужной информативности в плане выделения из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) и посредством полимеразной цепной реакции (ПНР) проведения генотипирования полиморфизма указанных генов: гена GRIA1 (rs545098) и гена SLC2A1 (rs841839). При этом устанавливается для каждого гена одно из следующих его состояний: гетерозиготное, или нормальное гомозиготное, или вариантное гомозиготное.Thanks to the use of buccal epithelium as a test material (a sample of biological material from the cheek mucosa), simplicity and reliability of research is provided, as well as obtaining the necessary informativeness in terms of isolating deoxyribonucleic acid (DNA) from the specified sample and carrying out the polymorphism of polymorphism by means of polymerase chain reaction (NDP) these genes: the GRIA1 gene (rs545098) and the SLC2A1 gene (rs841839). At the same time one of the following states is established for each gene: heterozygous, or normal homozygous, or variant homozygous.

У гена GRIA1 (rs545098) 2 аллеля (1 пара аллелей) G и A (G - дикий или нормальный, А - мутантный или вариантный), причем полиморфные генотипы - GA (гетерозиготный) или АА (вариантный гомозиготный).GRIA1 (rs545098) has 2 alleles (1 pair of alleles) G and A (G is wild or normal, A is mutant or variant), and the polymorphic genotypes are GA (heterozygous) or AA (variant homozygous).

У гена SLC2A1 (rs841839) 2 аллеля (1 пара аллелей), Т и G (Т - дикий или нормальный, G - мутантный или вариантный), причем полиморфные генотипы - TG (гетерозиготный) или GG (вариантный гомозиготный).The SLC2A1 (rs841839) gene has 2 alleles (1 pair of alleles), T and G (T is wild or normal, G is mutant or variant), with TG (heterozygous) or GG (variant homozygous) polymorphic genotypes.

Таким образом, при оценке влияния алюминия на нарушение состояния вегетативной нервной системы в предлагаемом способе рекомендуется использовать следующие критерии: наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена GPJA1 (rs545098) и наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена SLC2A1 (rs841839), а также превышение концентрации алюминия в моче более, чем в 1,3 раза, по отношению к фоновому уровню.Thus, when assessing the effect of aluminum on the disruption of the state of the vegetative nervous system in the proposed method, it is recommended to use the following criteria: the presence of variant homozygous or heterozygous genotypes of the GPJA1 gene (rs545098) and the presence of variant homozygous or heterozygous genotypes of the SLC2A1 gene (rs841839), as well as excess in the urine more than 1.3 times, relative to the background level.

Именно благодаря расширению информационных показателей, связанных с полиморфными вариантами генов, тропных к вегетативной нервной системе, и одновременно с количеством химического токсиканта - алюминия в моче, и будет обеспечена точность оценки модифицирующего влияния алюминия на возникновение астено-вегетативного синдрома.It is thanks to the expansion of information indicators related to polymorphic variants of genes tropic to the vegetative nervous system, and simultaneously with the amount of chemical toxicant - aluminum in the urine, that the accuracy of estimating the modifying effect of aluminum on the occurrence of astheno-vegetative syndrome will be ensured.

Исходя из вышеизложенного, можно сделать вывод, что поставленный технический результат обеспечивается за счет совокупности операций предлагаемого способа, их последовательности и режимов его реализации.Based on the foregoing, it can be concluded that the technical result is achieved due to the combination of operations of the proposed method, their sequence and modes of its implementation.

Предлагаемый способ реализуется следующим образом.The proposed method is implemented as follows.

1. Выбирают территорию экологического риска, характеризующуюся наличием химических токсикантов, обусловленных экологической средой обитания. Исследования были проведены на территории Иркутской области, характеризующейся наличием предприятия цветной металлургии, выбрасывающего в атмосферный воздух отходы с высоким содержанием алюминия. Качество атмосферного воздуха селитебной застройки, расположенной в зоне влияния алюминиевого производства, характеризуется постоянным присутствием алюминия на уровне 0,1-0,5 ПДКс.с.1. Choose an area of environmental risk, characterized by the presence of chemical toxicants, due to the ecological habitat. The studies were conducted on the territory of the Irkutsk Region, which is characterized by the presence of a non-ferrous metallurgy enterprise, which throws waste with a high aluminum content into the air. The atmospheric air quality of residential buildings located in the zone of influence of aluminum production is characterized by the constant presence of aluminum at a level of 0.1-0.5 MPC.s.

2. На указанной территории производят отбор группы детей одной этнической популяции. Затем производят отбор пробы крови у обследуемого ребенка в специальные пробирки с антикоагулянтом ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) (0,05М раствор ЭДТА в соотношении 500 мкл крови на 50 мкл антикоагулянта) - для определения содержания глутамата.2. In this territory, a group of children from a single ethnic population is selected. Then a blood sample is taken from the examined child in special tubes with EDTA anticoagulant (ethylenediaminetetraacetic acid) (0.05 M EDTA solution in a ratio of 500 μl blood per 50 μl anticoagulant) - to determine the glutamate content.

Содержание алюминия в моче определяют по Методике масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой «Методы контроля. Химические факторы. Определение содержания химических элементов в диагностируемых биосубстратах, препаратах и биологически активных добавках методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной аргоновой плазмой», изложенной в МУК 4.1.1483-03, с использованием масс-спектрометра с индуктивно связанной плазмой Agilent 7500сх с октопольной реакционной/столкновительной ячейкой (USA). В качестве референтного значения содержания алюминия в моче был принят показатель равный 0,01 мг/дм3. (верхняя граница референтных пределов 6,5±3,5 мкг/л по Н. Тиц, 2003, с. 21).The aluminum content in the urine is determined by the Method of mass spectrometry with inductively coupled plasma "control Methods. Chemical factors. Determination of the content of chemical elements in diagnosable biosubstrates, preparations and biologically active additives by mass spectrometry with inductively coupled argon plasma ", described in the MUK 4.1.1483-03, using an Agilent 7500cx mass-coupled plasma spectrometer with an octopole reaction / collision cell (USA). The reference value of the aluminum content in the urine was taken as an indicator equal to 0.01 mg / dm 3 . (upper limit of reference limits 6.5 ± 3.5 μg / l according to N. Tits, 2003, p. 21).

Содержание глутамата в крови определяют по методике, изложенной в инструкции «Иммуноферментный набор для количественного in vitro определения глутамата в образцах ЭДТА сыворотки или плазмы крови» («Sigma», США, Кат №К7731). В качестве физиологического диапазона содержания глутамата был принят диапазон равный 83,24-131,24 мкмоль/дм3. (Н. Тиц, 2003).The content of glutamate in the blood is determined by the method described in the instructions “Immunoassay kit for the quantitative in vitro determination of glutamate in serum or plasma EDTA samples” (Sigma, USA, Cat No. K7731). The range equal to 83.24-131.24 μmol / dm 3 was adopted as the physiological range of glutamate content. (N. Tits, 2003).

3. Также у указанного ребенка отбирают пробу буккального эпителия (в виде мазка со слизистой оболочки щеки), причем забор осуществляют сухими стерильными зондами с ватными тампонами вращательными движениями без травматизации после предварительного полоскания полости рта водой. После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную пробирку типа «Эппендорф» с 500 мкл транспортной среды (стерильный 0,9%-ный раствор NaCl). Конец зонда отламывают или отрезают, с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.3. Also, a sample of the buccal epithelium (in the form of a swab from the buccal mucosa) is taken from this child, and the sampling is performed with dry sterile probes with cotton swabs with rotational movements without trauma after rinsing the mouth cavity with water. After the material is collected, a tampon (a working part of a probe with a cotton swab) is placed in a sterile Eppendorf tube with 500 μl of transport medium (sterile 0.9% NaCl solution). The end of the probe is broken off or cut off, with the expectation that it will allow to tightly close the cap of the tube. The tube with the solution and the working part of the probe is closed.

Далее производят выделение ДНК из пробы. Для этого пробы в количестве 100 мкл лизируют 300 мкл лизирующего раствора, представляющего собой 0,5%-ный раствор саркозила и протеиназы К (20 мг/мл) в ацетатном буфере (рН 7,5). Затем добавляют сорбент (каолин) и последовательными процедурами промывки отмывают фосфатно-солевым буфером (рН 7,2) пробы от белков и смесью изопропиловый спирт: ацетон от липидов. Нуклеиновые кислоты остаются при этом на сорбенте. Далее адсорбированные на сорбенте ДНК из пробы экстрагируют ТЕ-буфером, представляющим собой смесь 10 мМ трис-HCl и 1 мМ ЭДТА (рН 8,0). Экстракт подвергают центрифугированию. После центрифугирования пробирки надосадочная жидкость содержит очищенную ДНК.Next, produce DNA extraction from the sample. To do this, samples in an amount of 100 μl are lysed with 300 μl of a lysis solution, which is a 0.5% solution of sarcosyl and proteinase K (20 mg / ml) in acetate buffer (pH 7.5). Then add the sorbent (kaolin) and successive washing procedures washed with phosphate-saline buffer (pH 7.2) of the sample from proteins and a mixture of isopropyl alcohol: acetone from lipids. Nucleic acids remain on the sorbent. Next, the DNA adsorbed on the sorbent is extracted from the sample with TE buffer, which is a mixture of 10 mM Tris-HCl and 1 mM EDTA (pH 8.0). The extract is subjected to centrifugation. After centrifuging the tube, the supernatant contains purified DNA.

Полученный материал готов к постановке полимеразной цепной реакции (ПЦР). Полимеразную цепную реакцию проводят на детектирующем амплификаторе с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» с использованием готовых наборов праймеров и зондов производства ЗАО «Синтол», Россия, в котором в качестве праймеров использовались участки ДНК: гена GRIA1 (rs545098)H гена SLC2A1 (rs841839).The resulting material is ready for the formulation of polymerase chain reaction (PCR). Polymerase chain reaction is carried out on a detecting amplifier with hybridization-fluorescence detection in “real time” mode using ready-made sets of primers and probes produced by Syntol, Russia, in which DNA segments were used as the primers: GRIA1 (rs545098) gene H of the SLC2A1 gene (rs841839).

Проводят реакцию амплификации, это достигается тем, что для исследования аллельного состояния каждого гена у отдельного человека готовят свою реакционную смесь. В каждую пробирку вносят 0,1 мкл готовой смеси праймеров (принятый в генетике термин, обозначающий конечные нуклеотиды с меткой, ограничивающие (отрезающие) амплифицируемую цепочку нуклеотидов гена) и зондов для выбранных генов: гена GRIA1 (rs545098) и гена SLC2A1 (rs841839) (использованы Наборы реагентов для определения полиморфизма G/A гена GRIA1 (rs545098) и полиморфизма T/G гена SLC2A1 (rs841839) ЗАО «Синтол», Россия). В каждую пробирку добавляют остальные компоненты необходимые для осуществления ПЦР: нуклеотиды (дезоксинуклеозидтрифосфаты: по 10 мМ дАТФ, дТТФ, дГТФ, дЦТФ), буфера (100 мМ трис-НС1-буфера, 500 мМ КСl, 40 мМ MgCl2) и Tag F-полимеразы. Вносят пробу в количестве 10 мкл. Таким образом, общий объем реакционной смеси составляет 25 мкл. Каждая пробирка плотно закрывается пробкой и устанавливается в амплификатор.Amplification reaction is carried out, this is achieved by preparing a reaction mixture for an individual to study the allelic state of each gene. Each tube contains 0.1 µl of the prepared mixture of primers (genetically accepted term denoting the final labeled nucleotides, which limit (cut) the amplified chain of nucleotides of the gene) and probes for the selected genes: the GRIA1 gene (rs545098) and the SLC2A1 gene (rs841839) () Reagent kits were used to determine the G / A polymorphism of the GRIA1 gene (rs545098) and the T / G polymorphism of the SLC2A1 gene (rs841839) of Sintol CJSC, Russia). The remaining components necessary for PCR are added to each tube: nucleotides (deoxynucleoside triphosphates: 10 mM dATP, dTTP, dGTP, dCTP), buffer (100 mM Tris-HCl buffer, 500 mM KCl, 40 mM MgCl 2 ) and Tag F- polymerase. Bring sample in an amount of 10 μl. Thus, the total volume of the reaction mixture is 25 μl. Each test tube is tightly closed with a stopper and installed in the amplifier.

При проведении ПЦР амплификацию и детекцию проводят на детектирующем амплификаторе CFX96 фирмы Bio-Rad.When PCR is performed, amplification and detection is performed on a CF -96 CF-96 amplification detector from Bio-Rad.

Используется универсальная программа амплификации, подобранная производителем реактивов. Она включает в себя несколько этапов: 1 этап -активация TaqF-полимеразы (режим «горячего старта») продолжается 15 мин при 95°С; 2 этап - установочные циклы амплификации без измерения флуоресценции (5 циклов); 3 этап - рабочие циклы амплификации с измерением флюоресценции (40 циклов).A universal amplification program selected by the reagent manufacturer is used. It includes several stages: Stage 1 - activation of TaqF polymerase (“hot start” mode) lasts 15 minutes at 95 ° C; Stage 2 - installation cycles amplification without measuring fluorescence (5 cycles); Stage 3 - amplification cycles with fluorescence measurement (40 cycles).

Каждый цикл амплификации включает в себя денатурацию ДНК (5 с при 95°С), отжиг праймеров (20 с при 60°С) и саму реакцию полимеризации ДНК (15 с при 72°С).Each amplification cycle includes DNA denaturation (5 s at 95 ° C), primer annealing (20 s at 60 ° C) and the DNA polymerization reaction itself (15 s at 72 ° C).

Регистрация сигнала флюоресценции, возникающего при накоплении продуктов амплификации участков ДНК проводится в режиме «реального времени» после стадии отжига праймеров для выбранных генов по каналу VIC - для детекции одного из аллельных вариантов генов, и по каналу FAM - для альтернативного варианта.The registration of the fluorescence signal arising from the accumulation of amplification products of DNA sites is carried out in the “real time” mode after the primer annealing stage for the selected genes via the VIC channel - to detect one of the allelic variants of the genes, and the FAM channel - for the alternative.

Результаты интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флюоресценции с установленной на заданном уровне пороговой линией, что соответствует наличию (или отсутствию) значения порогового цикла (N) в соответствующей графе в таблице результатов, отображаемой в программном обеспечении для амплификатора CFX96.The results are interpreted based on the presence (or absence) of the intersection of the fluorescence curve with a threshold line set at a given level, which corresponds to the presence (or absence) of the threshold cycle value (N) in the corresponding column in the results table displayed in the software for the CFX96 amplificator.

По соотношению пороговых циклов, полученных по двум каналам детекции, определяют состояние гена GRIA1 в исследуемом участке ДНК G/A (rs545098), а также гена SLC2A1 в исследуемом участке ДНК T/G (rs841839) (метод аллельной дискриминации). Возможных вариантов состояния гена было два: гомозиготное - в случае, когда одно из значений порогового цикла не определяется (ниже пороговой линии) и гетерозиготное - в случае, когда получено два значения пороговых циклов и по этим каналам получены параболические кривые флюоресценции. В зависимости от того, накопление какого продукта амплификации происходит в реакции, устанавливается гетерозиготное, или нормальное гомозиготное, или вариантное гомозиготное состояние гена GRIA1 (гз545098)и гена SLC2A1 (rs841839).The ratio of threshold cycles obtained via two detection channels determines the state of the GRIA1 gene in the G / A DNA region (rs545098), as well as the SLC2A1 gene in the T / G DNA region (rs841839) (allelic discrimination method). There were two possible variants of the state of the gene: homozygous — in the case when one of the threshold cycle values is not determined (below the threshold line) and heterozygous — in the case when two threshold cycles values are obtained and parabolic fluorescence curves are obtained through these channels. Depending on what accumulation of the amplification product occurs in the reaction, a heterozygous, or normal homozygous, or variant homozygous state of the GRIA1 gene (gs545098) and the SLC2A1 gene (rs841839) is established.

4. И при одновременном выполнении следующих условий:4. And with the simultaneous fulfillment of the following conditions:

- наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена ионотропного рецептора глутамата GRIA1 frs545098) и наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена глиального глутаматного транспортера SLC2A1 (rs841839),- the presence of a variant homozygous or heterozygous genotype of the ionotropic glutamate receptor gene GRIA1 frs545098) and the presence of a variant homozygous or heterozygous genotype of the glial glutamate transporter gene SLC2A1 (rs841839),

- при превышении концентрации алюминия в моче выше фонового уровня более, чем в 1,3 раза,- if the concentration of aluminum in the urine is higher than the background level by more than 1.3 times,

диагностируют у ребенка наличие астено-вегетативного синдрома в условиях экспозиции алюминием.A child is diagnosed with the presence of astheno-vegetative syndrome under aluminum exposure conditions.

При проведении испытаний по реализации предлагаемого способа выполнено обследование детского населения, проживающего в условиях влияния выбросов отходов комбината цветной металлургии.When conducting tests on the implementation of the proposed method, the survey of the children's population living in the influence of emissions from the non-ferrous metallurgy plant was performed.

Группу наблюдения составили 57 детей, страдающих астено-вегетативным синдромом. Клинические признаки, характеризующие данное состояние: головная боль, головокружение, постоянная усталость, бессонница, слабость, депрессия; усиленное потоотделение, диспепсические явления (тошнота), подавленность, учащенное сердцебиение (Кильдиярова P.P. Нарушения адаптации детей к школе: лечение и профилактика. Пособие для врачей. - М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2016 - 40 с. ISBN 978-5-8948-1974-7).The observation group consisted of 57 children suffering from asthenic-vegetative syndrome. Clinical signs characterizing this condition: headache, dizziness, constant fatigue, insomnia, weakness, depression; increased sweating, dyspeptic symptoms (nausea), depression, rapid heartbeat (Kildiyarova PP Disorders in adapting children to school: treatment and prevention. Manual for doctors. - Moscow: Medical Information Agency, 2016 - 40 p. ISBN 978-5 -8948-1974-7).

Группа контроля - 24 ребенка, не имеющие патологии нервной системы.The control group - 24 children without pathology of the nervous system.

Группа наблюдения и группа контроля были сопоставимы по полу, возрасту, соматической заболеваемости. Результаты обследования детей из указанных групп, приведены в таблице 1.The observation group and the control group were comparable by sex, age, somatic morbidity. The results of the examination of children from these groups are shown in table 1.

В качестве маркера, доказывающего, что у ребенка возник астено-вегетативный синдром под влиянием алюминия, использовали уровень глутамата в крови ребенка.The level of glutamate in the child’s blood was used as a marker proving that the child had asthenic-vegetative syndrome under the influence of aluminum.

Глутамат, представляет собой основной возбуждающий нейротрансмиттер в нервной системе позвоночных, что подтверждается многочисленными клиническими и экспериментальными данными. Нейромедиаторные свойства глутамата ассоциированы с патологическими состояниями, характеризующими воспалительные процессы в ЦНС, в частности, ишемии головного мозга, рассеянному склерозу, болезни Альцгеймера и другими.Glutamate is a major excitatory neurotransmitter in the vertebrate nervous system, as evidenced by numerous clinical and experimental data. The neurotransmitter properties of glutamate are associated with pathological conditions characterizing inflammatory processes in the central nervous system, in particular, cerebral ischemia, multiple sclerosis, Alzheimer's disease and others.

Глутаматергические механизмы передачи представлены примерно в 40% нейронов ЦНС. В реализации действия глутамата участвуют различные классы глутаматных рецепторов, различающихся по своей структуре и функции. В результате глутамат, в дополнение к классической нейротрансмиттерной функции, выступает как регулятор множества процессов, протекающих в нервной системе на разных этапах ее развития, начиная с регуляции пролиферации эмбриональных клеток-предшественников и процессов нейрональной дифференцировки вплоть до формирования различных форм синаптической пластичности, лежащих в основе когнитивных функций. В процессе развития ЦНС стимуляция глутаматных рецепторов модулирует процессы миграции нейронов, обеспечивает их выживаемость и формирование нейрональных сетей.Glutamatergic transmission mechanisms are represented in approximately 40% of the CNS neurons. Different classes of glutamate receptors, differing in their structure and function, are involved in the implementation of the action of glutamate. As a result, glutamate, in addition to the classical neurotransmitter function, acts as a regulator of a variety of processes occurring in the nervous system at different stages of its development, starting with regulation of the proliferation of embryonic precursor cells and processes of neuronal differentiation until the formation of various forms of synaptic plasticity underlying the cognitive functions. In the process of development of the central nervous system, stimulation of glutamate receptors modulates the migration of neurons, ensures their survival and the formation of neural networks.

Подтверждающим фактором эндотелиальных нарушений служит изменение содержания в крови ребенка самого глутамата (истощение, т.е. снижение концентрации глутамата в крови по сравнению с нижней границей нормы), что характеризует возникновение функциональных изменений вегетативной нервной системы и проявление астено-вегетативного синдрома.The confirming factor of endothelial disorders is the change in the blood content of the child glutamate itself (exhaustion, that is, a decrease in the concentration of glutamate in the blood compared to the lower limit of the norm), which characterizes the occurrence of functional changes in the autonomic nervous system and the manifestation of the astheno-vegetative syndrome.

Данные, приведенные в таблице 1, показывают, что при сочетании вариантного (гетерозиготное или патологическое гомозиготное состояние генотипа) аллеля гена GRIA1 (rs545098) и вариантного (гетерозиготное или патологическое гомозиготное состояние генотипа) аллеля гена SLC2A1 (rs841839), при одновременном превышении концентрации виновного фактора экспозиции (алюминия) выше референтной концентрации в моче более, чем в 1,3 раза (референтная - 0,01 мг/л), наблюдается понижение содержание глутамата в сыворотке крови у ребенка ниже физиологического уровня (опыты 1-3, 5, 8, 11). То есть при этом фиксируется реализация алюминием негативной генетической программы у ребенка.The data in Table 1 shows that when a combination of the variant (heterozygous or pathological homozygous state of the genotype) allele of the GRIA1 gene (rs545098) and the variant (heterozygous or pathological homozygous state of the genotype) of the allele of the SLC2A1 gene (rs841839) of the SLC2A1 gene (rs841839), has been used by the hrnosygote or the homozygous state of the genotype) Exposure (aluminum) is higher than the reference concentration in the urine by more than 1.3 times (the reference concentration is 0.01 mg / l), there is a decrease in the glutamate content in the blood serum of the child below the physiological level (experiments 1-3 , 5, 8, 11). That is, when this is fixed, the aluminum realization of a negative genetic program in a child.

Тогда как при допустимом (на уровне фоновой концентрации) содержании алюминия в моче (опыты 12-15), даже в условиях наследования вариантного генотипа предлагаемых генов (опыт 14), указанный показатель глутамата находится в пределах физиологической нормы.Whereas with an acceptable (at the level of background concentration) content of aluminum in the urine (experiments 12-15), even under conditions of inheritance of the variant genotype of the proposed genes (experiment 14), this indicator of glutamate is within the physiological norm.

И, наоборот, в случае превышения содержания алюминия в моче по сравнению с референтным уровнем, но при отсутствии полиморфных изменений указанных генов (опыты 6,7,9), содержание глутамата в крови также находится в пределах физиологической нормы.Conversely, in the case of an excess of aluminum in the urine compared to the reference level, but in the absence of polymorphic changes of these genes (experiments 6,7,9), the content of glutamate in the blood is also within the physiological norm.

Кроме того, данные таблицы 1 показывают, что даже в случае превышения содержания алюминия в моче по сравнению с референтным уровнем, но при отсутствии полиморфных изменений только в одном или только в другом указанных генах (опыты 4,10), содержание глутамата в крови также находится в пределах физиологической нормы.In addition, the data in Table 1 shows that even if the aluminum content in the urine is higher than the reference level, but in the absence of polymorphic changes in only one or only in the other specified genes (experiments 4, 10), the glutamate content in the blood is also found within the physiological norm.

Это указывает на то, что только одновременное превышение содержания алюминия в моче по отношению к референтному уровню, наличие одновременно полиморфных генотипов и у гена GRIA1 (rs545098) и у гена SLC2A1 (rs841839), характеризуется проявлением негативных эффектов в виде отклонения от нормы содержания глутамата в крови, и таким образом подтверждает точность и достоверность предлагаемого способа.This indicates that only the simultaneous excess of the aluminum content in urine with respect to the reference level, the presence of both polymorphic genotypes in both the GRIA1 gene (rs545098) and the SLC2A1 gene (rs841839), is characterized by the manifestation of negative effects in the form of a deviation from the normal glutamate content in blood, and thus confirms the accuracy and reliability of the proposed method.

Для иллюстрации реализации предлагаемого способа приведены два примера по конкретным пациентам одного возраста и этнической принадлежности из группы пациентов с повышенным содержанием алюминия в моче и наличием полиморфности генотипа (гетерозиготного и вариантного гомозиготного генотипа) гена GRIA1 (rs545098) и одновременно гена SLC2A1 (rs841839); и из группы пациентов с повышенным содержанием алюминия в моче и отсутствием полиморфности генотипов гена GR1A1 (rs545098) и гена SLC2A1 (rs841839).To illustrate the implementation of the proposed method, two examples are given for specific patients of the same age and ethnicity from a group of patients with a high aluminum content in the urine and the presence of polymorphism of the genotype (heterozygous and variant homozygous genotype) of the GRIA1 gene (rs545098) and at the same time the SLC2A1 gene (rs841839); and from the group of patients with an increased aluminum content in the urine and the lack of polymorphism of the genotypes of the GR1A1 gene (rs545098) and the SLC2A1 gene (rs841839).

Пример 1. Пациент, 7 лет, русский, страдающий астено-невротическим синдромом. Определяется уровень алюминия в моче выше фонового уровня - 0,0204 мг/дм3.Example 1. Patient, 7 years old, Russian, suffering from astheno-neurotic syndrome. Is determined by the level of aluminum in the urine above the background level - 0,0204 mg / DM 3 .

Определено наличие у ребенка вариантного гомозиготного генотипа гена GRIA1 (rs545098) - АА и наличие гетерозиготного генотипа гена SLC2A1 (rs841839) - TG. Содержание глутамата в крови - медиатора нервной регуляции - 64,6 мкмоль/дм3, т.е. ниже нижней границы нормы (83,2-131,4 мкмоль/дм3) в 1,29 раза. Таким образом, установлены низкие содержания глутамата на фоне повышенных по отношению к фоновому уровню значений содержания алюминия в моче, а также наличие вариантного гомозиготного полиморфизма гена GRIA1 (rs545098) и гетерозиготного полиморфизма гена SLC2A1 (rs841839), кодирующих белки, ответственные за глутаматную нервную регуляцию, что указывает на реализацию нарушений нервной регуляции у данного пациента, инициированной действием алюминия.The presence of a variant homozygous genotype of the gene GRIA1 (rs545098) - AA and the presence of a heterozygous genotype of the gene SLC2A1 (rs841839) - TG were determined in the child. The blood glutamate content - a mediator of the nervous regulation - 64.6 μmol / dm 3 , i.e. below the lower limit of the norm (83.2-131.4 μmol / dm 3 ) 1.29 times. Thus, low glutamate levels were found against the background of elevated aluminum levels in the urine with respect to the background level, as well as the presence of variant homozygous polymorphism of the GRIA1 gene (rs545098) and heterozygous polymorphism of the SLC2A1 gene (rs841839), which encode proteins responsible for glutamate nervous regulation which indicates the implementation of disorders of the nervous regulation in this patient, initiated by the action of aluminum.

Пример 2. Пациент, 7 лет, русский, здоров, не имеет патологии нервной системы. Определяется в моче уровень алюминия, который более, чем на 10%, выше фонового уровня - 0,011 мг/дм. Отсутствуют полиморфные (вариантные) аллели гена GRIA1 (rs545098) и гена SLC2A1 (rs841839). Содержание глутамата - нейромедиатора - 86.7 мкмоль/дм, т.е. в диапазоне нормы (83,2-131,4 мкмоль/дм). Таким образом, отсутствии полиморфизма генов GRIA1 (rs545098) и гена SLC2A1 (rs841839) на фоне повышенного по отношению к фоновому уровню содержания алюминия в моче, не приводит к развитию негативных эффектов в виде отклонения от нормы глутамата, то есть в отсутствии негативной генетической программы только лишь превышение референтной концентрации алюминия в моче не формирует развитие нарушений нервной регуляции и не формирует состояние астено-невротического синдрома у данного пациента.Example 2. Patient, 7 years old, Russian, healthy, has no pathology of the nervous system. The level of aluminum in the urine is determined, which is more than 10% higher than the background level - 0.011 mg / dm. There are no polymorphic (variant) alleles of the GRIA1 gene (rs545098) and the SLC2A1 gene (rs841839). The glutamate - neurotransmitter content is 86.7 µmol / dm, i.e. in the normal range (83.2-131.4 µmol / dm). Thus, the absence of the polymorphism of the GRIA1 genes (rs545098) and the SLC2A1 gene (rs841839) against the background of elevated levels of aluminum in the urine does not lead to the development of negative effects in the form of a deviation from the glutamate norm only an excess of the reference concentration of aluminum in the urine does not form the development of disorders of the nervous regulation and does not form the state of the astheno-neurotic syndrome in this patient.

Таким образом, приведенные данные показывают, что при реализации предлагаемого способа с использованием предлагаемых критериев по содержанию алюминия в моче и вариантов гетерозиготного и вариантного гомозиготного генотипов генов GRIA1 (rs545098) и SLC2A1 (rs841839) обеспечивается его назначение.Thus, the data show that when implementing the proposed method using the proposed criteria for aluminum content in urine and variants of heterozygous and variant homozygous genotypes of GRIA1 (rs545098) and SLC2A1 (rs841839) genes, its purpose is ensured.

Таким образом, реализация способа оценки модификации течения астено-вегетативного синдрома в условиях экспозиции алюминием, позволяет предложить систему критериев возникновения и течения данной патологии у детей, включающую: полиморфные изменения генов: гена глутаматного рецептора GRIA (AMPA) rs545098 и гена переносчика глюкозы (глутаматного транспортера) SLC2A1(GLUT) rs841839; и повышение содержания алюминия в моче по сравнению с референтным уровнем в 1,3 раза, которые в совокупности позволяют определить состояние неврологического процесса, наличие интоксикации и оптимизировать мероприятия по коррекции данного состояния.Thus, the implementation of the method for evaluating the modification of the course of the astheno-vegetative syndrome under aluminum exposure conditions allows us to propose a system of criteria for the occurrence and course of this pathology in children, including: polymorphic changes of the genes: the glutamate receptor gene GRIA (AMPA) rs545098 and the glucose carrier gene (glutamate transporter ) SLC2A1 (GLUT) rs841839; and an increase in the aluminum content in the urine compared to the reference level by 1.3 times, which together allow us to determine the state of the neurological process, the presence of intoxication and to optimize measures for the correction of this state.

Предлагаемый способ идентификации нарушения состояния здоровья у детей, характеризующееся развитием астено-вегетативного синдрома в условиях экспозиции алюминием, позволяет установить наличие ранних проявлений нарушений нервной регуляции.The proposed method for the identification of health disorders in children, characterized by the development of astheno-vegetative syndrome under aluminum exposure conditions, allows to establish the presence of early manifestations of disorders of the nervous regulation.

Figure 00000001
Figure 00000001

Примечание: Зависимость уровня глутамата (мкмоль/дм3) от концентрации алюминия в моче (мг/л) достоверна (R2=0,64-0.82; р<0,05), где R2 - коэффициент детерминации; р – вероятностьNote: The dependence of the glutamate level (μmol / dm 3 ) on the concentration of aluminum in the urine (mg / l) is reliable (R 2 = 0.64-0.82; p <0.05), where R 2 is the coefficient of determination; p - probability

Figure 00000002
Figure 00000002

Claims (1)

Способ диагностики у детей астено-вегетативного синдрома в условиях экспозиции алюминием, характеризующийся тем, что определяют в пробе мочи ребенка содержание алюминия, также у указанного ребенка отбирают пробу буккального эпителия и осуществляют выделение из указанной пробы дезоксирибонуклеиновой кислоты, затем на детектирующем амплификаторе с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени проводят генотипирование полиморфизма генов ионотропного рецептора глутамата GRIA1 (rs545098) и гена глиального глутаматного транспортера SLC2A1 (rs841839), устанавливая при этом состояние генотипа для каждого из указанных генов: гетерозиготное GA, нормальное гомозиготное GG, вариантное гомозиготное АА для гена GRIA1 (rs545098); гетерозиготное TG, нормальное гомозиготное ТТ, вариантное гомозиготное GG для гена SLC2A1 (rs841839), и при одновременном выполнении следующих условий: наличие вариантного гомозиготного или гетерозиготного генотипов гена ионотропного рецептора глутамата GRIA1 (rs545098) и гена глиального глутаматного транспортера SLC2A1 (rs841839), при условии одновременного обнаружения у пациента превышения содержания алюминия в моче более чем в 1,3 раза по сравнению с референтным значением содержания алюминия в моче, равным 0,01 мг/дм3, диагностируют у ребенка наличие астено-вегетативного синдрома в условиях экспозиции алюминием.A method for diagnosing children with asthenic-vegetative syndrome under aluminum exposure conditions, characterized by determining the aluminum content in a child's urine sample, also taking a sample of a buccal epithelium from a specified child and extracting deoxyribonucleic acid from a specified sample, then using a polymerase chain detector real-time reactions carry out the genotyping of the polymorphism of the GRIA1 ionotropic glutamate receptor genes (rs545098) and the glial glutamate gene of SLC2A1 transporter (rs841839), while establishing the state of the genotype for each of said genes, heterozygous GA, normal homozygous GG, AA homozygous for the variant GRIA1 gene (rs545098); heterozygous TG, normal homozygous TT, variant homozygous GG for the SLC2A1 gene (rs841839), and with the simultaneous fulfillment of the following conditions: the presence of variant homozygous or heterozygous genotypes of the GRIA1 ionotropic glutamate receptor gene (rs545098) and isnta, and is the same, and in the same isg and has, and in the same isg and has, and in the same, and in the same, and in the same, and after the hogozygous of simultaneously detecting the patient exceeding the aluminum content in the urine of more than 1.3 times compared with the reference value of aluminum content in the urine of 0.01 mg / dm 3, in a child diagnosed presence asteno egetativnogo syndrome aluminum exposure conditions.
RU2018124532A 2018-07-04 2018-07-04 Diagnostic technique in children of asthenic-vegetative syndrome under exposure conditions with aluminum RU2687731C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018124532A RU2687731C1 (en) 2018-07-04 2018-07-04 Diagnostic technique in children of asthenic-vegetative syndrome under exposure conditions with aluminum

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018124532A RU2687731C1 (en) 2018-07-04 2018-07-04 Diagnostic technique in children of asthenic-vegetative syndrome under exposure conditions with aluminum

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2687731C1 true RU2687731C1 (en) 2019-05-17

Family

ID=66579077

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018124532A RU2687731C1 (en) 2018-07-04 2018-07-04 Diagnostic technique in children of asthenic-vegetative syndrome under exposure conditions with aluminum

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2687731C1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2724881C1 (en) * 2019-11-22 2020-06-26 Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью Method for estimating a developmental prediction in children diagnosed with allergic rhinitis, accompanying comorbid pathology in the form of a vegetative nervous system disorder in conditions of multi-component contamination of atmospheric air with suspended substances, metals and formaldehyde in the territory where the children live
RU2771853C1 (en) * 2021-10-19 2022-05-12 Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью Method for assessing the probability of formation of disorders of the autonomic nervous system in schoolchildren associated with the combined complex effects of such environmental factors as manganese, lead and formaldehyde, the modern educational process, nutrition and lifestyle

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1291124A1 (en) * 1984-06-01 1987-02-23 Оренбургский Государственный Медицинский Институт Method of diagnosis of intoxication of organism with sulfur-containing substances

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1291124A1 (en) * 1984-06-01 1987-02-23 Оренбургский Государственный Медицинский Институт Method of diagnosis of intoxication of organism with sulfur-containing substances

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DALVIE S. Genetic Analysis of Bipolar Disorder and Alcohol Use Disorder. Thesis Presented for the Degree of doctor of philosophy. Cape Town, 2015, 293 c. [Найдено 22.02.2019] [онлайн]. Найдено из Интернета: URL: https://open.uct.ac.za/bitstream/handle/11427/16560/thesis_hsf_2015_dalvie_shareefa.pdf?sequence=1I. *
БУБНОВА О.А. и др. Особенности полиморфизма генов фолатного цикла у женщин с нарушениями репродуктивной функции, проживающих в условиях аэрогенного воздействия фенолов. Фундаментальные и прикладные аспекты анализа риска здоровью населения: материалы Всероссийской научно-практической интернет-конференции молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора / Под ред. проф. А.Ю. Поповой, акад. РАН Н.В. Зайцевой. - Пермь: Книжный формат, 2016; стр.195-200. *
БУБНОВА О.А. и др. Особенности полиморфизма генов фолатного цикла у женщин с нарушениями репродуктивной функции, проживающих в условиях аэрогенного воздействия фенолов. Фундаментальные и прикладные аспекты анализа риска здоровью населения: материалы Всероссийской научно-практической интернет-конференции молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора / Под ред. проф. А.Ю. Поповой, акад. РАН Н.В. Зайцевой. - Пермь: Книжный формат, 2016; стр.195-200. DALVIE S. Genetic Analysis of Bipolar Disorder and Alcohol Use Disorder. Thesis Presented for the Degree of doctor of philosophy. Cape Town, 2015, 293 c. [Найдено 22.02.2019] [онлайн]. Найдено из Интернета: URL: https://open.uct.ac.za/bitstream/handle/11427/16560/thesis_hsf_2015_dalvie_shareefa.pdf?sequence=1I. *
ШУГАЛЕЙ И.В. и др. Некоторые аспекты влияния алюминия и его соединений на живые организмы. Экологическая химия. 2012; 21(3): 172-186. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2724881C1 (en) * 2019-11-22 2020-06-26 Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью Method for estimating a developmental prediction in children diagnosed with allergic rhinitis, accompanying comorbid pathology in the form of a vegetative nervous system disorder in conditions of multi-component contamination of atmospheric air with suspended substances, metals and formaldehyde in the territory where the children live
RU2771853C1 (en) * 2021-10-19 2022-05-12 Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью Method for assessing the probability of formation of disorders of the autonomic nervous system in schoolchildren associated with the combined complex effects of such environmental factors as manganese, lead and formaldehyde, the modern educational process, nutrition and lifestyle
RU2811523C1 (en) * 2023-05-11 2024-01-15 Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью Method of diagnosing fatigue syndrome after viral illness in children 4-7 years old under conditions of aluminum contamination

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20190264283A1 (en) URINE EXOSOME mRNAS AND METHODS OF USING SAME TO DETECT DIABETIC NEPHROPATHY
Lam et al. Epigenetic changes in T-cell and monocyte signatures and production of neurotoxic cytokines in ALS patients
KR20080016789A (en) Identification of molecular diagnostic markers for endometriosis in blood lymphocytes
JP2005312435A (en) Method for evaluating depression
JP6707181B2 (en) Kits or packages for identifying pregnant women at risk of preterm birth and use of such kits or packages
CA2943109A1 (en) Molecule associated with onset of gout, and method and kit for evaluating diathesis of uric acid-related disease and inflammation-related diseases, and inspection object and drug
RU2619872C1 (en) Method for estimation of individual risk of excessive body and obesity development in children consuming drinking water with increased chloroform and tetrachloromethane content
RU2687731C1 (en) Diagnostic technique in children of asthenic-vegetative syndrome under exposure conditions with aluminum
ES2942628T3 (en) Method to determine the risk of Alzheimer&#39;s disease
RU2700565C1 (en) Method for determining predisposition to developing obesity in children in conditions of excessive contamination with aluminum
JP2009131247A (en) Method for acquiring data for determining morbid risk of encephalitis or encephalopathy and its utilization and method for acquiring data for determining transition risk of febrile convulsion to epilepsy and its utilization
Tani et al. Polymorphism analysis of the upstream region of the human N-methyl-D-aspartate receptor subunit NR1 gene (GRIN1): implications for schizophrenia
Kumar et al. Tumor necrosis factor-alpha (− 308G/A,+ 488G/A,− 857C/T and-1031 T/C) gene polymorphisms and risk of ischemic stroke in north Indian population: A hospital based case–control study
RU2766728C1 (en) Method for determining predisposition to dysfunction of the autonomic nervous system in females associated with excessive contamination with hexane
JP6715526B2 (en) Stress biomarker
WO2006126706A1 (en) Prophylactic/therapeutic agent for psychotic disorder such as bipolar mood disorder and schizophrenia, screening method for the same, and method for determination of risk for the development of the disease
US7604945B2 (en) Single nucleotide polymorphisms in protein-tyrosine phosphatase receptor-type delta for the diagnosis of susceptibility to asthma
RU2719411C1 (en) Method for determining predisposition to reproductive disorders in females in conditions of excessive phenol contamination
KR101866484B1 (en) OPA1 as a causative gene of optic atrophy or sensorimotor neuropathy and method for diagnosing the disease using the same
RU2793062C1 (en) Method for establishing a predisposition in the formation of polar stress syndrome in students aged 7-13 years living in the polar regions
RU2811523C1 (en) Method of diagnosing fatigue syndrome after viral illness in children 4-7 years old under conditions of aluminum contamination
RU2766732C1 (en) Method for determining predisposition to developing hypertensive type vegetovascular dystonia in males, realized by excessive contamination with hexane
RU2773830C1 (en) Method for diagnosing disorders of the autonomic nervous system in girls of preschool age associated with excessive contamination of biological media in children with manganese
RU2764355C1 (en) Method for predicting neurological recovery from the 14th to the 90th days of ischemic stroke of the brain
WO2024085246A1 (en) Kit and method for determining presence or absence of affection of dementia

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200705